DK157060B - Fremgangsmaade til fremstilling af en liposomsuspension, der indeholder et laegemiddel - Google Patents

Description

DK 157060 B

Den foreliggende opfindelse angâr en fremgangsmâde til fremstilling af en 1iposomsuspension, der indeholder et lægemiddel, som kan være doxorubicin-hydrochlorid, aminosi-dinsulfat eller 5-fluor-uracil.

5 Fremgangsmâden if0lge opfindelsen er ejendommelig ved, at man a) fremstiller en liposomsuspension ved opl0snng af lipid-bestanddele i et opl0sningsmiddel, tilsætter en vandig op-l0sning af lægemidlet og emulgerer ved indblæsning af en 10 indifferent gas, indtil opl0snîngsmidlet er fjernet fuld-stændigt ved fordampning, b) renser liposomsuspensionen ved behandling deraf med en polymer ionbytterharpiks eller en polymer adsorberende har-piks og eventuelt 15 c) stabiliserer den rensede suspension ved frystet0rring.

Liposomer er pharmaceutiske saitunensætninger, hvori lægemidlet enten er dispergeret eller i anden form forekommer som smâ kugler, der bestâr af vandige koncentriske lag, der hæfter til lipide (hydrophobe) lag; lægemidlet kan forekomme 20 bâde i det vandige lag og i lipidlaget (indvendigt eller udvendigt) eller hvorsomhelst i det dishomogene, i reglen som liposomsuspension kendte System.

Det hydrophobe lag indeholder i reglen, men ikke udelukkende, phospholipider sâsom lecithin og sphingomyelin, 25 steroider sâsom cholestérol, flere eller færre ionogene overfladeaktive stoffer sâsom dicetylphosphat, stearylamin eller phosphatidinsyre og/eller et andet materiale af hydro-phob karakter. Liposomernes diameter ligger i reglen mellem 15 nm og 5 jum.

30 Fremgangsmâden til fremstilling heraf foregâr i reglen pâ kendt mâde og omfatter to hovedtrin: 1) Fremstilling af liposomerne, hvor de lipide eller lipophile komponenter oploses i et egnet oplosningsmiddel, som derefter i reglen i vakuum afdampes til torhed.

35 Det vandige lag, der indeholder lægemidlet, sættes til kolben, der indeholder remanensen som et tyndt lag, og 2

DK 157060B

det hele underkastes derefter i et tidsrum pâ fra 10 sekun-der til nogle timer emulgering ved indblæsning af en indifferent gas. Det herved fremkomne inhomogene lag, i régien kaldet liposomsuspension, skal renses for fysisk ikke-bundet 5 lægemiddel.

2) Fraskillelse af liposomerne fra fysisk ikke-bundet lægemiddel: denne fremgangsmâde sker sædvanligvis ved elue-ring pâ en chromatografisk kolonne under anvendelse af har-pikser, der udelukkende har funktion som molekylarsigte, 10 sâsom "Sepharose"® 2B, 4B eller 6B og lignende.

Liposomerne udvindes ferst, medens det frie lægemiddel holdes tilbage af harpiksen.

Derefter felger en ultracentrifugeringsbehandling ved 100.000 g og derefter vaskes der, stadig ved hjælp af 15 ultracentrifugering med pufret oplosning. En anden metode, der kan anvendes, er dialyse.

Den foreliggende opfindelse angâr sâledes en særegen fremgangsmâde til rensning af det uhomogene, som liposomsuspension kendte lag sâvel ved hjælp af flydende som faste, 20 syntetiske eller organiske, reaktionsdygtige polymère, der kan anvendes som ionbyttere, sâsom polystyren, -divinylben-zen, -acryl- eller -methacrylsyre, der er kendte ionbytter-harpikser.

Den nojagtige mængde af en eller flere af de oven-25 nævnte harpikser indfores direkte i kolben, der indeholder liposomsuspensionen, der skal renses, hvorpâ der rystes i 10-60 minutter. Efter filtrering gennem et sinterglasfilter, der indeholder ionbytterharpiksen med absorberet fysisk ikke-bundet lægemiddel, fâs den rene liposomsuspension, der 30 kan frysetorres. Denne fremgangsmâde til rensning af liposomsuspensionen med ionbytterharpikser har den store fordel, at stærkt koncentrerede liposomsuspensioner (indtil 5 mg/ml doxorubicin*HCl) kan bibeholdes, hvilket ikke er tilfældet med chromatografi pâ en molekylær-sigtekolonne (maks, 0,3 35 mg/ml). Den sâledes opnâede liposomsuspension er meget stabil og har ingen tendens til sedimentering, sâledes som det er

DK 157060B

3 tilfældet med suspensioner, der fâs ved ultracentrifugering.

Det samme résultat opnâs, nâr man i stedet for ion-bytterharpikser anvendes polymère og copolymere uden nogen specifik kemisk funktion, der i reglen, men ikke udelukkende 5 reagerer pâ grund af Van der Waals-kræfter og i reglen er kendt soin adsorberende harpikser. Disse harpikser kan som f0lge af polaritetsforskellen mellem de hydrophobe stoffer, der danner liposomovertrækkene, og lægemidleme af mere eller mindre hydrophil natur anvendes ved rensningen af 10 liposomsuspensioner.

Den endelige kemiske stabilisering opnâs ved fryse-t0rring af liposomsuspensionen.

Eksempel 1 15 1,5 g sojalecithin, 0,4 g cholestérol og 0,3 g dice- tylphosphat oploses i CH2CI2, og til denne oplesning sættes en vandig opl0sning af aminosidinsulfat i 0,02 molær phos-phatpuffer ved 6,5 i en koncentration pâ 3 mg/ml.

Begge faser emulgeres ved indblæsning af nitrogen 20 ved stuetemperatur, indtil methylenchloridet er helt fjemet.

Suspensionen stabiliseres i 4 timer ved stuetemperatur, hvorpâ der i kolben hældes en mængde harpiks, der svarer til 5 g t0rharpiks, som fâs i handelen under betegnelsen "IRC-SO"®, en polymer kornformig harpiks, fra firmaet Rohm 25 og Haas.

Efter 1 times rÿsten filtreres liposomsuspensionen gennem en glasfritte for at fjerne harpiksen, der tilbage-holder det fysisk ikke-bundne lægemiddel. Derefter stabiliseres liposomsuspensionen ved hjælp af frysetorring.

30

Eksempel 2 3,22 g lecithin, 1,13 g cholestérol, 0,956 g dicetyl-phosphat og 16 mg vitamin E-acetat oploses i en lille mængde methylenchlorid. 448 mg doxorubicin-hydrochlorid og 7,77 g 35 lactose opl0ses i en pufferoplosning med pH = 5,6 (0,066 M natriumphosphat, 0,0388 M NaCl og 0,1 mM EDTA-dinatriumsalt).

DK 157060 B

4

Den organisée og den vandige opl0sning blandes ved rystning.

Derpâ bobles nitrogen igennem ved stuetemperatur, indtil methylenchloridet er helt fjernet. Suspensionen underkastes derefter lydbehandling ved, at den anbringes i en lydbehand-5 lingssonde, hvorpâ der i kolben hældes 80 g (vâd) ionbytter-harpiks "IRC-SO"®, en polymer kornformig harpiks, der fâs fra Rohm og Haas.

Efter 1 times rystning fjernes harpiksen ved filtre-ring, og liposomsuspensionen filtreres igen gennem et mem-10 branfilter med en poresitet pâ 3 μη. Liposomsuspensionen fordeles derpâ i hætteglas, anbringes i et frysetorringsap-parat og underkastes frysetorring.

Claims (1)

1. DK 157060B Patentkrav . Fremgangsmâde til fremstilling af en liposomsuspen-sion, der indeholder et lægemiddel, som kan være doxorubicin-hydrochlorid, aminosidinsulfat eller 5-fluor-uracil, k e n-5 detegnet ved, at man a) fremstiller en liposomsuspension ved opl0snng af lipid-bestanddele i et opl0sningsmiddel/ tilsaetter en vandig op-l0sning af lægemidlet og emulgerer ved indblæsning af en indifferent gasf indtil opl0sningsmidlet er fjernet fuld- 10 stændigt ved fordampning, b) renser liposomsuspensionen ved behandling deraf med en polymer ionbytterharpiks eller en polymer adsorberende har-piks og eventuelt c) stabiliserer dën rensede suspension ved frystetorring.