JPS6366117A - リポソ−ムおよびその製法 - Google Patents

リポソ−ムおよびその製法

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JPS6366117A
JPS6366117A JP61210529A JP21052986A JPS6366117A JP S6366117 A JPS6366117 A JP S6366117A JP 61210529 A JP61210529 A JP 61210529A JP 21052986 A JP21052986 A JP 21052986A JP S6366117 A JPS6366117 A JP S6366117A
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JP
Japan
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aqueous solution
liposome
hemoglobin
liposomes
suspension
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Pending
Application number
JP61210529A
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English (en)
Inventor
Kazuhiko Suzuki
鈴木　一比好
Yuji Miyauchi
宮内　雄二
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Terumo Corp
Original Assignee
Terumo Corp
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Publication date
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Pending legal-status Critical Current

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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1277—Processes for preparing; Proliposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes

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  • Health & Medical Sciences (AREA)
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  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １０発明の背景 ［技術分野］ 本発明は新規なリポソームおよびその製法に関するもの
である。
さらに詳しくは、本発明は高粘度の水溶液を内部に取り
込んでなるリポソームおよびその製法に関する。リポソ
ーム（ｌ　ｉｐｏｓｏｍｅ　）は脂質２分子膜からなる
閉鎖小胞体である。生体膜は脂質の２分子構造をとって
いるといわれており、従ってリポソームは生体膜のモデ
ル膜としてその物理化学的性質の研究に広く用いられて
いる。また、リポソームは内部の水層や膜内に種々の物
質を取り込むことができ、細胞と融合したり、細胞に取
り込まれたりするので生体内へ物質を送り込むキャリヤ
ーとして利用される。リポソームを利用した研究は生物
学、医学、薬学など広範な分野にわたっており、酸素や
制ガン剤を運ぶキャリＶ−としての利用、免疫学分野で
の利用、細胞どの相互作用、ドラッグデリバリ−システ
ムとしての利用等が研究されている。
［先行技術およびその問題点］ リポソームは上述したように極めて広範な利用分野を有
するが、従来のリポソームの製法では、高粘度の水溶液
を内部に取り込んだリポソームを得ることは不可能であ
った。従来のリポソームの製法としてはいわゆる薄膜法
、界面活性剤除去法および逆相法等が知られている。薄
膜法は容器の内面にリポソーム形成脂質の薄膜をつくり
、そこへ取り込ませたい物質を溶解させた水溶液を加え
、振盪するかまたは超音波処理してリポソームをつくる
方法である。界面活性剤除去法は取り込ませたい物質を
溶解させた水溶液にリポソーム形成脂質と界面活性剤を
溶解させて混合ミセルをつくり、次いで透析により界面
活性剤を除去しリポソームをつくる方法である。逆相法
は、リポソーム形成脂質を溶かした有機溶媒溶液に取り
込ませたい物質を溶解させた水溶液を加えてＷ１０型エ
マルジョンを作成し、次いで有機溶媒をエバポレーショ
ンで除去してリポソームをつくる方法である。これらの
従来法によれば、内部に取り込ませる水溶液が低粘度で
ある場合にはリポソームが生成するが１０ＣＰ　（４℃
）以上の高粘度になると極端に収率が悪くなるとともに
所望のリポソームが得られないことがあり、リポソーム
利用上大きな制約となっていた。例えば、人工赤血球と
してヘモグロビン水溶液を含有するリポソームが知られ
ているが粘度の制約のため、ヘモグロビン濃度を天然の
それである３５％（Ｗ／Ｗ）にまで高めることができず
、せいぜい１５％程度であり、酸素運搬能の低いものし
か得られていない。
■０発明の目的 従って本発明は、内部に高粘度の水溶液を取り込んでな
るリポソームを提供することを目的とする。
さらに本発明は上記リポソームの製造方法を提供するこ
とを目的とする。
■８発明の詳細な説明 本発明は、内部に高粘度の水溶液を取り込んでなるリポ
ソームからなる。
−３一 本発明におけるリポソーム膜形成脂質には特に制限はな
く、リポソームを形成するものであれば天然または合成
の脂質が使用可能である。特にリン脂質が好適に使用さ
れ、その例として、レシチン、ホスファデジルエタノー
ルアミン、ホスファデシン酸、ホスファチジルセリン、
ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロ
ール、スフィンゴミエリン、カルシオリビンおよびこれ
らを常法に従って水素添加したものがあげられ、これら
を組合せて用いることもできる。さらにリポソーム膜の
構成成分には所望によりステロール等の膜構造強化剤や
電荷付与物質（例えばステアリン酸、オレイン酸、リノ
ール酸、リルン酸、ホスファチジン酸、ホスファチジル
グリセロール等）の崩壊時間調節剤を添加することがで
きる。
リポソームの内部に取り込まれる高粘度水溶液には特に
制限はなく、任意の種類の化学物質の水溶液が使用され
うる。化学物質の例としては、前述したヘモグロビンの
他、β−グルクロンダーゼ、ヘキソサミンダーゼ、アミ
ノグルコシダーゼ等の高分子化合物があげられる。
水溶液の粘度は、リポソームの用途に応じて溶質の種類
および粘度が決定され、それに従って決定される。本発
明においては１０ｃＰ〜７０ＣＰ　（４℃）の範囲の粘
度を有する水溶液が使用される。１０ｃＰ（４℃）以下
の粘度の水溶液も本発明の方法において使用可能である
が、これらは従来の製法においても使用することができ
るし、そのような水溶液を含有するリポソームは公知で
ある。水溶液が１０ｃＰ　（４℃）以上の粘度を有する
と本発明の方法によってもリポソームを生成することは
困難である。人工赤血球を作製する場合には、ヘモグロ
ビン濃度３０〜７０％（Ｗ／Ｗ）の水溶液を使用するの
が好ましく、この場合の粘度は１０〜７０ｃＰ　（４℃
）である。
本発明のリポソームは、リポソーム膜形成脂質を有機溶
媒に溶解し、該溶液から溶媒を留去し、残留物に高粘度
の水溶液を加え、振盪させるかまたは超音波処理するこ
とにより均一な懸濁液とし、次いでこの懸濁液を高圧吐
出処理することによつて製造される。
上記方法において、均一な懸濁液を調製するまでの工程
は前述した薄膜法として知られるリポソームの製造方法
と同じであり、それ自体公知の方法に従って実施される
。有機溶媒はリポソームの用途によって適宜選択される
が、通常クロロホルム、エタノール等が用いられる。
懸濁液を高圧吐出処理する工程は、高圧吐出型乳化機、
好ましくはフレンチプレスを用いて懸濁液を１００〜２
０００、好ましくは５００〜１７００ｋｇ／ｃｍ２の圧
力で細隙から１〜数回吐出させることによって実施され
る。その際懸濁液中の粒子が機器壁に高エネルギーで衝
突し、この衝突によりリポソームが形成されると考えら
れ、高圧で吐出されるほどリポソームの粒径は小さくな
る。かくして得られるリポソーム液は常法に従って洗浄
され、超遠心処理等によって採取される。
次に実施例を示して本発明をさらに具体的に説明する。
実施例 赤血球膜除去ヘモグロビンのリポソームによるマイクロ
カプセル化 （１）赤血球膜除去ヘモグロビンの調製抗凝固剤入りの
採血バッグを用いて牛の静脈より１５００ｍの全面を採
取する。全面を３０００ｒｐｍ　、　２０ｎ＋ｉｎ遠心
処理を行ない、上層の血漿、血小板、白血球を取り除き
、生理食塩水を用いて、赤血球沈殿層を再懸濁させ、再
度３０００ｒｐｍ　、　２０ｍ１ｎ遠心処理を行なう。
以下、同様の操作を行ない、血漿、血小板、白血球を取
り除いた洗浄赤血球４００ｄを得る。次に洗浄赤血球の
容量に対して２倍容量８００−の蒸留水を添加して赤血
球を溶面させる。次にＩＮ　　ＨＣＩＩ溶液でｐＨ５，
８５に調製した後、１７００Ｏｒｐｍ、　３０ｍ１ｎ遠
心処理を行なう。上澄を０．２２μｍのメンブランフィ
ルタ−で濾過して赤血球膜を除去したヘモグロビン９９
０ｄを得る。ヘモグロビン濃度は６．３％であった。こ
のヘモグロビン溶液を分両分子猪５万の膜を使用して限
外濾過によりヘモグロビン濃度３０％まで濃縮して、３
０％ｍｍの赤血球膜除去ヘモグロビン１８０　ｍを得る
。この時の３０％濃度ヘモグロビンの粘度は１２．８ｃ
ｐ（４℃）であった。
（２）　　リポソーム形成脂質の調製 精製ホスファチジルコリン７．３７６ｇ、コレスチール
３．７１２ｇ、ステアリン酸０．３９０ｇ、ビタミンＥ
　０．３１７ｇをクロロホルムに溶解する。該脂質溶液
をナスフラスコに入れ、エバポレーションを行ないクロ
ロホルムを除去しナスフラスコの底に脂質膜を形成させ
る。
（３）フレンチプレスによるヘモグロビン含有リポソー
ム作成 ビタミンＣを０．６５８（Ｊ添加したヘモグロビン濃度
３０％の赤血球膜除去ヘモグロビン１８０ｄを該脂質膜
に添加して振盪または超音波により、均一な懸濁液とす
る。この原料溶液をフレンチプレスを用いて１７００に
’Ｊ　／　ｃｍ　２の圧力で２回処理する。
（４）ヘモグロビン含有リポソームの精製フレンチプレ
ス処理後の液をビタミンＣを添加した生理食塩水（ビタ
ミンＣ濃度は３．６６１ｆｆｇ／ｄ）で５倍に希釈した
後、５００００ｐｐｍ、　３０ｍ１ｎで超遠心を行ない
上層の余剰ヘモグロビンおよび余剰脂質を取り除く。該
ビタミンＣ添加生理食塩水でヘモグロビン含有リポソー
ムの沈殿を懸濁さけ、Ｍｌｆ５００００ｒｐｍ、　３０
ｍ１ｎで超遠心を行なう。以下同様の操作を行なってヘ
モグロビン含有リポソームのみを回収する。最終的に生
理食塩水に再懸濁して人工赤血球として用いる。粒径は
１５０ｒｕｎ（米国コールタ−社Ｃｏｕｌｔｅｒ”　Ｎ
ａｎｏ　−５ｉｚｅｒ　”にて測定）であった。
図から明らかなように、５４０　ｎＩｎ、　５７８　ｔ
ｗにヘモグロビンの特異吸収を示し、ヘモグロビンが変
性されずにマイクロカプセル化されている。
■０発明の具体的作用効果 本発明によれば、内部に高粘度の水溶液を取り込んだリ
ポソームが提供される。従って高分子化合物を高濃度に
溶解した水溶液を含有づ−るリポソームを作製すること
ができ、リポソームのＪ：す広範な利用が可能となる。
従って本発明によれば例えばヘモグロビン濃度３０〜７
０％（Ｗ／Ｗ）の水溶液（１０〜７０ＣＰ　（４℃））
を含有するりボソームを調製することができ、このもの
は従来の人工赤血球に比較してへ七グロビン溌度が高い
ので酸素運搬能が優れている。
【図面の簡単な説明】

Claims (5)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）内部に１０〜７０ｃＰ（４℃）の水溶液を取り込
    んでなるリポソーム。
  2. （２）水溶液がヘモグロビン水溶液である特許請求の範
    囲第１項のリポソーム。
  3. （３）リポソーム膜形成脂質を有機溶媒に溶解し、該溶
    液から溶媒を留去し、残留物に１０〜７０ｃＰ（４℃）
    の水溶液を加え、振盪させるかまたは超音波処理するこ
    とにより均一な懸濁液とし、次いでこの懸濁液を高圧吐
    出処理することを特徴とするリポソームの製法。
  4. （４）懸濁液が、１００〜２０００ｋｇ／ｃｍ＾２の圧
    力で細隙から吐出される特許請求の範囲第３項のリポソ
    ームの製法。
  5. （５）フレンチプレスを使用して高圧吐出処理する特許
    請求の範囲第３項または第４項のリポソームの製法。
JP61210529A 1986-09-09 1986-09-09 リポソ−ムおよびその製法 Pending JPS6366117A (ja)

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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5912465A (en) * 1995-09-05 1999-06-15 Canon Kabushiki Kaisha Photoelectric converter
US20140212477A1 (en) * 2011-09-28 2014-07-31 Terumo Kabushiki Kaisha Hemoglobin-containing liposome and method for producing same

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US5912465A (en) * 1995-09-05 1999-06-15 Canon Kabushiki Kaisha Photoelectric converter
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