SK83099A3

SK83099A3 - Steroids substituted in position 11, method of preparation, application as medicines and pharmaceutical compositions containing them

Info

Publication number: SK83099A3
Application number: SK830-99A
Authority: SK
Inventors: Yamina Bouali; Francois Nique; Jean-Georges Teutsch; De Velde Patrick Van
Original assignee: Hoechst Marion Roussel Inc
Priority date: 1996-12-23
Filing date: 1997-12-22
Publication date: 2000-01-18
Also published as: US6207657B1; US20020198374A1; UA54483C2; JP2001507010A; EP0946585A1; DK0946585T3; FR2757519B1; US6541464B2; BR9714433A; HRP970711A2; JP4376319B2; NO993125L; WO1998028324A1; AU726350B2; US6482813B1; HRP970711B1; AP9901567A0; EP0946585B1; NO993125D0; AU5667898A

Description

Steroidy substituované v polohe 11, spôsob ich prípravy, ich použitia ako liečiv a farmaceutické kompozície, ktoré ich obsahujú

Oblasť techniky

Predložený vynález sa týka steroidných zlúčenín substituovaných v polohe 11, spôsobu ich prípravy, ich použitia ako liečiv a farmaceutických kompozícií, ktoré ich obsahujú.

Doterajší stav techniky

Osteoporóza je patologický jav, ktorý je charakterizovaný kvantitatívnou a kvalitatívnou redukciou kostnej hmoty, čo vedie k vertebrálnym alebo periférnym zlomeninám spontánne alebo vplyvom minimálnych tráum. Hoci má táto choroba veľa faktorov v svojom pôvode, menopauza u žien tvorí dominujúci faktor pri úbytku kosti alebo osteopénii.

Táto osteopénia sa manifestuje rednutím a premenou architektúry pórovitej kosti následkom čoho vzrastá lomivosť skeletu a riziko zlomenín. Kostné úbytky vzrastajú značne po menopauze vplyvom potlačenia funkcie vaječníkov a dosahujú 3 až 5 % za rok pred spomalením po dosiahnutí veku 65 rokov.

Pre terapeutické účely môže byť postmenopauzná hormonálna deficiencia kompenzovaná nahradzovacou hormonálnou terapiou, kde estrogén hrá hlavnú úlohu pri zachovávaní kostnej hmoty. Ale dlhodobá estrogenoterapia je niekedy sprevádzaná nežiadúcimi účinkami na genitálne ústrojenstvo (endometriálna hyperplázia, tumory prsníka apod.), ktoré tvoria hlavnú nevýhodu a obmedzujú jej použitie.

Je preto vhodné nájsť zlúčeniny iné ako estradiol, ktoré majú disociovanú estrogénnu aktivitu, totiž estrogénnu aktivitu na kostnej úrovni, pričom nemajú žiadnu alebo len malú endometriálnu hyperplaznú aktivitu a prsníkovú tumorovú proliferačnú aktivitu.

Patentová prihláška FR 2640977 A (29. júl 1990) opisuje steroidy, ktoré majú antiestrogénnu a/alebo estrogénnu aktivitu. Tieto molekuly sa líšia od molekúl v našej prihláške vynálezu v tom, že sú substituované alkinylovou skupinou alebo nie sú substituované v polohe 17 alfa.

Publikácia Steroids (Lu Jin et al., zv. 60, č. 8, august 1995, 512-518) tiež zverejňuje analóg nesubstituovaný v polohe 17 alfa (RU39411), ktorý má zmiešanú estrogénnu/ antiestrogénnu aktivitu, inhibuje rast MCF-7 prsníkových tumorových buniek a je preto užitočný pri liečbe rakoviny prsníka.

Podstata vynálezu

Predmetom vynálezu sú zlúčeniny všeobecného vzorca I (θΗ₂)_ηI

v ktorom n je celé číslo rovné 2 alebo 3, buď R¹ a R² identické alebo rozdielne, predstavujú atóm vodíka alebo alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka, alebo R¹ a R² tvoria spoločne s atómom dusíka, ku ktorému sú viazané, aromatický alebo nearomatický, nasýtený alebo nenasýtený, monocyklický alebo polycyklický heterocyklus s 5 až 15 členami, prípadne obsahujúci 1 až 3 ďalšie heteroatómy zvolené z kyslíka, síry a dusíka, substituovaný alebo nesubstituovaný,

X predstavuje prípadne esterifikovanú hydroxylovú skupinu a

Y predstavuje alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka, substituovanú alebo nesubstituovanú, rovnako ako ich adičné soli s farmaceutický akceptovateInými kyselinami.

Alkylovou skupinou obsahujúcou 1 až 4 atómy uhlíka sa rozumie metyl, etyl, propyl, izopropyl, n-butyl, izobutyl, terc.butyl.

Keď Y predstavuje substituovanú alkylovú skupinu, je táto alkylová skupina najmä substituovaná jedným alebo viacerými halogénovými atómami.

Výhodne Y môže predstavovať trifluórmetylovú skupinu.

Keď R¹ a R² tvoria spoločne s atómom dusíka, ku ktorému sú viazané, heterocyklus, je to najmä mono alebo bicyklický nasýtený heterocyklus, prípadne obsahujúci ďalší heteroatóm vybraný z kyslíka a dusíka, ako sú heterocykly vybrané z: pyrolyl, imidazolyl, indolyl, pyridyl, pyrazinyl, pirimidinyl, pyridazinyl, tiazolyl, oxazolyl, furazonyl, pyrazolinyl, tiazolinyl a osobitne nasledujúce nasýtené heterocykly:

Keď je tento heterocyklus substituovaný, je to najmä alkylovou skupinou obsahujúcou 1 až 4 atómy uhlíka v úrovni atómu dusíka.

Keď X je prípadne esterifikovaná hydroxylová skupina, rozumie sa OCO-alkj skupina, v ktorej alk₁ je alkylová skupina obsahujúca 1 až 8 atómov uhlíka a výhodne -OCOMe alebo -OCOEt skupina.

Pri adičných soliach s farmaceutický akceptovateľnými kyselinami sa adičnou soľou rozumie soľ vytvorená s anorganickou alebo organickou kyselinou alebo amínom. Môžu to byt nasledujúce kyseliny: chlorovodíková, bromovodíková, dusičná, sírová, fosforečná, octová, mravčia, propiónová, benzoová, jablčná, fumarová, jantárová, vínna, citrónová, štaveľová, glyoxylová, aspartová, alkánsulfónová, ako je metán alebo etánsulfónová, arylsulfónová ako je benzén alebo paratoluénsulfónová alebo arylkarboxylové kyseliny.

Osobitne sú predmetom vynálezu zlúčeniny vzorca I, ktorý je hore uvedený, v ktorom n sa rovná 2, rovnako ako ich adičné soli s farmaceutický akceptovateľnými kyselinami.

Osobitne sú predmetom vynálezu zlúčeniny vzorca I, ktorý je hore uvedený, v ktorom n sa rovná 2, buď R¹ a R² identické alebo rozdielne predstavujú alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka, alebo R¹ a R² tvoria spoločne s atómom dusíka, ku ktorému sú viazané piperidino, pyrolidino, alebo 2-azabicyklo(2,2,1)hept-2-yl skupinu,

X predstavuje hydroxylovú skupinu a

Y predstavuje metylovú alebo etylovú skupinu.

Osobitne sú predmetom vynálezu zlúčeniny vzorca I, rovnako ako ich adičné soli s farmaceutický akceptovateľnými kyselinami, ktorých názvy sú nasledujúce:

11β—[4—[2—(1-piperidinyl)etoxy]fenyl]-19-nor-17a-pregna1,3,5(10)trién-3,17p-diol,

17a-metyl-lip-[4-[2-(1-piperidinyl)etoxy J fenyl]-estra1,3,5(10)trién-3,173-diol,

17a-metyl-lip-[4-[2-(dietylamino)etoxy]fenyl]-estra-1,3,5(10)-3,17p-diol,

17a-metyl-lip- [ 4- [ 2- (1-pyrolidinyl) etoxy ] f enyl ] -estra-1,3,5(10)trién-3,17p-diol,

17a-metyl-lip- [ 4- [ 2- (2-azabicyklo (2,2,1) hept-2-yl) etoxy ] f enyl ] estra-1,3,5-(10)trién-3,17p-diol, líp-[4-[2-(2-azabicyklo(2,2,1)hept-2-yl)etoxy]fenyl]-19-nor17a-pregna-l,3,5-(10)trién-3,17p-diol a

17a- (trif luórmetyl-lip- [ 4- [ 2- (1-piperidinyl) etoxy ] f enyl ] estra-1,3,5-(10)trién-3,17p-diol.

Predmetom vynálezu je tiež spôsob prípravy zlúčenín všeobecného vzorca I, uvedeného hore, ktorý sa vyznačuje tým, že zlúčenina všeobecného vzorca II

(Pn₂)_nI

v ktorom n, R¹ a R² majú skôr uvedený význam, sa podrobí pôsobeniu organokovovej zlúčeniny obsahujúcej 1 až 4 atómy uhlíka tak, že sa vytvorí zlúčenina vzorca I, v ktorej X je hydroxylová skupina a Y je alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, a táto zlúčenina vzorca I sa podrobí, keď je to potrebné, esterifikačnej reakcii 17-OH a/alebo salifikačnej reakcii.

Pôsobenie organokovu na 17-ketoskupinu zaisťuje prístup k produktom vzorca I, kde X je hydroxylová skupina a Y je alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka.

Organokovová zlúčenina odvodená od alkylovej skupiny obsahujúcej 1 až 4 atómy uhlíka sa vyberie zo zlúčenín horčíka vzorca Y-MgHal a lítiových zlúčenín vzorca Y-Li, v ktorých Y má skôr uvedený význam a Hal predstavuje atóm halogénu.

Výhodne sa reakcia uskutočňuje v prítomnosti chloridu ceritého. Pri výhodnom postupe realizácie spôsobu Hal predstavuje atóm chlóru, brómu alebo jódu, výhodne brómu.

Na získanie zlúčenín vzorca I, v ktorých X je hydroxylová skupina a Ya je CF₃ skupina, sa reakcia vykonáva pôsobením CF₃SiMe₃ na 17-keto a potom nasleduje pôsobenie deprotekčného prostriedku ako je tetrabutylamóniumfluorid.

Vynález sa tiež týka spôsobu prípravy zlúčenín všeobecného vzorca I uvedeného skôr, s Y predstavujúcim alkylovú skupinu obsahujúcu od 2 do 4 atómov uhlíka, ktorý je vyznačený tým, že zlúčenina všeobecného vzorca III

v ktorom n, R¹ a R² majú skôr uvedené významy a v ktorom Y' predstavuje alkenylovú alebo alkinylovú skupinu obsahujúcu 2 až 4 atómy uhlíka, sa podrobí pôsobeniu redukčného prostriedku dvojnej väzby alebo trojnej väzby tak, že sa získajú zlúčeniny vzorca I, v ktorých X je hydroxylová skupina a Y je alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, pričom táto zlúčenina vzorca I sa podrobí, keď je to potrebné, esterifikačnej reakcii 17-OH a/alebo salifikačnej reakcii.

Reakcia úplnej redukcie sa vykonáva pôsobením vodíka v prítomnosti katalyzátoru ako je paládium na uhlíku alebo ródiového katalyzátoru ako je Wilkinsonova reagencia.

Esterifikačné a salifikačné reakcie sa uskutočňujú obvyklými spôsobmi známymi odborníkom v odbore.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I rovnako ako ich farmaceutický akceptovateľné adičné soli s kyselinami majú estrogénnu aktivitu, antiestrogénnu aktivitu a antiproliferačnú aktivitu.

Na tomto základe môžu byť zlúčeniny vzorca I použité pri liečbe porúch spojených s hypofolikulinizmom, napríklad amenorhea, dismenorhea, opakované potraty, postmenštruačné poruchy, pri liečbe určitých, od estrogénu závislých stavov, ako sú adenómy alebo karcinómy prostaty, karcinómy prsníka i

a ich metastázy alebo pri liečbe benigných tumorov prsníka, ako antiuterotrofikum, rovnako ako pri nahradzovacej terapii v menopauze alebo perimenopauze.

Symptómy a dôsledky spojené s menopauzou sú presnejšie: návaly horúca, potenie, atrofia a suchosť vagíny, urinárne symptómy a dlhodobo pokles kostnej hmoty a zvýšené riziko zlomenín, rovnako ako strata kardiovaskulárnej ochrany poskytovanej estrogénmi.

I

Osobitne zlúčeniny vzorca I rovnako ako ich farmaceutický akceptovateľné adičné soli s kyselinami môžu byť tiež použité pri prevencii alebo liečbe osteoporózy.

Zlúčeniny vzorca I rovnako ako ich farmaceutický akceptovateľné adičné soli s kyselinami môžu byť tiež použité pri prevencii alebo liečbe osteoporózy u ľudí.

Môžu byť tiež použité pri prevencii alebo liečbe sekundárnej osteoporózy (napríklad s kortizónmi spojenej osteoporózy, spojenej s imobilizáciou).

Zlúčeniny vzorca I rovnako ako ich farmaceutický akceptovatelné adičné soli s kyselinami majú najmä disociovanú estrogénnu aktivitu.

Disociovaná estrogénna aktivita znamená estrogénnu aktivitu v kosti, ktorá vykazuje len minimálnu aktivitu v uteru a tak nevedie k endometriálnej proliferácii (aktivitu dostatočne nízku oproti aktivite estradiolu).

Ďalej zlúčeniny podlá vynálezu poskytujú nasledujúce výhody:

Vykazujú antiestrogénnu aktivitu v prsníku. Na rozdiel od estradiolu nestimulujú rast prsníkových tumorových buniek a môžu dokonca inhibovať ich rast. Zlúčeniny podlá vynálezu sú preto osobitne výhodné na liečbu menopauzy u žien pri riziku rakoviny prsníka (rodinná dispozícia), ktoré sú preto vylúčené z nahradzovacej terapie estradiolom. Môžu byť tiež použité pri liečbe rakovín prsníka.

Vedú k zníženiu hladiny sérového cholesterolu na hladinu ekvivalentnú hladine vyvolanej estradiolom. Takto posilňujú kardiovaskulárnu ochranu.

Konečne zlúčeniny podlá vynálezu nevykazujú estrogénnu aktivitu v uteru a tak sa nevyžaduje, aby boli podávané v spojení s progestomimetickou zlúčeninou.

Vynález sa preto týka zlúčenín všeobecného vzorca I rovnako ako ich farmaceutický akceptovateľných adičných solí s kyselinami, ako liečiv.

Vynález sa týka osobitne zlúčenín všeobecného vzorca I rovnako ako ich farmaceutický akceptovateIných adičných solí s kyselinami, ako liečiv určených na prevenciu alebo liečbu osteoporózy, ktoré vykazujú malú alebo žiadnu estrogénnu aktivitu na uterus.

Konečne sa vynález týka najmä zlúčenín všeobecného vzorca I rovnako ako ich farmaceutický akceptovatelných adičných solí s kyselinami, ako liečiv určených na prevenciu alebo liečbu osteoporózy u žien s rizikom prsníkových tumorov.

Vynález pokrýva farmaceutické zmesi obsahujúce ako aktívny základ aspoň jedno hore uvedené liečivo.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I, rovnako ako ich farmaceutický akceptovateíné adičné soli s kyselinami, sa podávajú alimentárnou cestou alebo parenterálne alebo lokálne, napríklad perkutánne. Môžu byť podávané vo forme prostých alebo potiahnutých tabliet, toboliek, granúl, čapíkov, pesarov, injektovatelných prípravkov, mastí, krémov, gélov, mikroguliek, implantátov, intravaginálnych krúžkov, náplastí, sprejov, ktoré sa pripravujú obvyklými spôsobmi.

Účinný princíp alebo princípy v nich môžu byt začlenené spolu s excipientmi zvyčajne používanými v týchto farmaceutických kompozíciách, ako je talk, arabská guma, laktóza, škrob, stearan horečnatý, kakaové maslo, vodné alebo nevodné vehikuly, mastné látky živočíšneho alebo rastlinného pôvodu, parafínické deriváty, glykoly, rôzne namáčacie dispergačné alebo emulgačné prostriedky a konzervačné látky.

Požadované dávkovanie sa mení podía poruchy, ktorá má byť liečená a spôsobu podávania, napríklad sa môže meniť od 0,5 do 100 mg na deň a dospelú osobu, keď sa podáva orálne.

Zlúčeniny všeobecného vzorca II a III sú známe zlúčeniny, ktoré sú opísané v nasledujúcich patentoch: EP—B—0097572, FR-B-2640977,EP-B-305942.

Príklady rozpracovania vynálezu

Ďalej uvedené príklady ilustrujú vynález bez jeho obmedzenia.

Príklad 1

17a-metyl-lip-[4-[2-(1-piperidinyl)etoxy]fenyl]-estral,3,5(10)trién-3,17p-diol

Dehydratuje sa 1,056 g CeCl₃.7H₂O pri zníženom tlaku pri 140’C, potom sa pridá v inertnej atmosfére a pri teplote miestnosti 10,6 ml tetrahydrofuránu (THF), potom po miešaní počas 2 hodín sa pridá pri -70’C 89 ml éterického roztoku metyllítia 1,6M a mieša sa počas 30 minút pri -75’C. Potom sa do tejto suspenzie pridá 268 mg 3-hydroxy-lip-[4-[2-(lpiperidinyl)etoxy]fenyl]-estra-1,3,5(10)trién-17-onu v roztoku v 3 ml THF/siliporit a mieša sa pri tejto teplote počas 1 hodiny.

Po pridaní 15 ml nasýteného roztoku chloridu amónneho a 20 ml etylacetátu sa zmes sfiltruje, premyje, vysuší a odparí pri zníženom tlaku, čím sa získa 277 mg očakávaného surového produktu. Tento produkt sa vyčistí chromatografiou na stĺpci silikagélu, eluuje zmesou metylénchlorid 90/metanol 10/hydroxid amónny 0,5. Získa sa 232 mg produktu, ktorý sa prekryštalizuje v zmesi dichlórmetán/ izopropyléter, čím sa získa 180 mg očakávaného čistého produktu.

t.t. = 155’C

IR (CHC1₃)

-OH: 3602 cm¹ + celková absorpcia aromáty: 1610 cm”¹, 1580 cm“¹, 1512 cm'

NMR (CDC1₃)

0,51	(s)	Me 18
1,29	(s)	Me v 17
3,98	(m)	O-CH₂“CH₂-N, CH-Ph (H_i;l)
6,41		H₂/ H₄ kruh A, H‘₃, H'₅ fenylu v 11
6,78	(d)	kruhu A
6,94		H'2r H'₆ fenylu v 11.

Príklad 2

11β—[4—[2—(1-piperidinyl)etoxy]fenyl]-19-nor-17a-pregna1,3,5(10)trién-3,17fl-diol

Pod inertnou atmosférou sa do roztoku 192 mg 11β[4-[2-(1-piperidinyl)etoxy]fenyl]-19-nor-17a-pŕegna-l,3,5(10)trién-20-in-3,17β-άΐο1η v 16 ml etanolu pridá 20 mg paládia na aktivovanom uhlíku (9,5 %) a mieša sa pod tlakom 1660 mbar vodíka počas 1 hodiny 45 minút. Suspenzia sa sfiltruje a odparí pri zníženom tlaku. Získa sa 193 mg surového produktu, ktorý sa vyčistí chromatografiou na viazanom stĺpci silikagélu (Lichrosorb RP18), eluuje sa zmesou metanol 90/ voda 10. Získa sa 137 mg produktu, ktorý sa prekryštalizuje v zmesi dichlórmetán/izopropyléter, čím sa získa 114 g čistého produktu, ktorý bol očakávaný.

t.t. = 231°C

IR (CHC1₃) -OH: aromáty:

3600

1610 cm”¹ + celková absorpcia

1581

1512

NMR (CDCI3 + 2 kvapky C₅D₅N)

0,47	(s)	Me 18
1,01	(t)	ch₂ch₃
2,47		-CH₂-N-CH₂- (piperidín)
2,71		o-ch₂-ch₂-n
3,99	(m)	O-CH₂-CH₂-N, CH-Ph (H_1;l
6,48	(dd)	^H2
6,59		H'₃, H'g, (fenyl v 11)
6,63	(d)	H₄ (kruh A)
6,80	(d)	H! (kruh A)
6,96		H'₂, H'g, fenylu v 11
9,94		3-OH.

Príklad 3

11β- [ 4- [ 2- (2-azabicyklo( 2,2,1 )hept-2-yl ] etoxy ] f enyl ] -17ametyl-estra-1,3,5(10)trién-3,17β-άίο1

Pracuje sa ako v príklade 1 pri použití na začiatku 3,70 g CeCl₃.7H₂O a 37 ml tetrahydrofuránu v 6,7 ml éterického roztoku metyllítia (1,6 M). Do získanej suspenzie ochladenej na -78’C sa pomaly pridá 966 mg lip-[4-[2-[2-azabicyklo(2,2,1 )hept-2-yl ] etoxy ] f enyl ] -3-hydroxyestra-l ,3,5(10) trién17-onu v roztoku 8 ml tetrahydrofuránu, mieša sa počas 45 minút a pokračuje syntéza ako v príklade 1. Získa sa 874 mg surového produktu. Po chromatografii na silikagéli (elučné činidlo: CH₂C1₂ NH₄OH 90-10-0,7 AcOEt-TEA 88-12) sa získa 442 mg očakávaného produktu,.

t.t. = 163-164’C

IR (CHC1₃) -OH: 3602 cm^-1 + celková absorpcia aromáty: 1610 cm¹, 1581 cm”¹, 1512 cm”¹

NMR (CDC1₃)

0,51 (s) Me v 18

1,29 (s) Me v 17

3,85 až 4,05 O-CH₂-CH₂-N, CH-Ph (Η_χι)

I

5,41 H₂, H₄, kruh A

6,77 Η_χ z kruhu A

6,46-6,95 H z fenylu v 11.

Príprava 11β-[4-[2-[2-azabicyklo(2,2,l)hept-2-yl]etoxy]fenyl]-

3-hydroxyestra-l,3,5(10)trién-17-onu použitého ako štartovacia zlúčenina z príkladu 3

Zmieša sa 1,1 g 3-hydroxy-lip-[4-(jódetoxy)fenyl]estra-l,3,5(10)trién-17-on v roztoku v 20 ml tetrahydrofuránu a 1,03 g 2-azabicyklo[2,2,l]heptán a mieša sa počas 1,5 hodiny pri teplote refluxu pod atmosférou dusíka. Odparí sa tetrahydrofurán, zvyšok sa vyzdvihne v etylacetáte, pridá sa voda, extrahuje sa etylacetátom, vysuší, odparí sa rozpúšťadlo a po chromatografii cez silikagél (elučné činidlo CH₂C1₂“CH₃OH-NH₄OH 90-10-0,5) sa získa 0,97 g očakávaného produktu.

Rf = 0,27.

Príklad 4

17a-metyl-lip-[4-[2-(1-pyrolidinyl)etoxy]fenyl]estra-1,3,5(.10) trién-3,17β-άίο1

Pracuje sa ako v príklade 1 pri použití na začiatku 3,24 g CeCl₃.7H₂O, 30 ml tetrahydrofuránu, 5,85 ml metyllítia, potom 850 mg 3-hydroxy-lip-[4-[2-(l-pyrolidinyl)etoxy]fenyl]estra-l,3,5-(10)trién-17-onu v roztoku 8,5 ml tetrahydrofuránu. Po chromatografii cez silikagél (elučné činidlo: CH₂C1₂~ CH₃0H-NH₄0H 92-8-1,5) sa získa 615 mg očakávaného produktu, t.t. = 155-157’C

IR (CHC1₃)

-OH: aromáty:	3603 cm”¹ + celková absorpcia 1610 cm¹, 1581 cm¹, 1512 cm¹
NMR (CDC1₃	)
0,51 (s)	Me v 18
1,29 (s)	Me v 17
3,99	O-CH₂-CH₂-H, CH-Ph (H_1]L)
6,38 (dd)	H₂ kruh A
6,40	H₄ kruh A
6,77 (d)	kruh A
6,49-6,95	H z fenylu v 11.
Príprava 3	-hydroxy-ΙΙβ-[ 4- [ 2- (1-pyrolidinyl) etoxy ] fenyl ]

estra-l,3,5(10)trién-17-onu použitého ako východisková zlúčenina z príkladu 4

Pracuje sa ako pri príprave východiskového produktu z príkladu 3 pri použití 1,1 g jódsteroidového derivátu v ml tetrahydrofuránu a 1 ml pyrolidínu. Získa sa 864 mg očakávaného produktu po chromatografii na silikagéli (elučné Činidlo: CH₂C1₂-CH₃OH-NH₄OH 92-8-0,2). Rf = 0,29.

Príklad 5

11β- [ 4- [ 2- (diéty lamino) etoxy ] fenyl ] -17a-metyl-estra-l ,3,5(10)trién-3,17β-άίο1

Pracuje sa ako v príklade 1 pri použití na začiatku

3,62 g CeCl₃.7H₂O, 36 ml tetrahydrofuránu a 6,5 ml metyllítia, v étete (1,6 ml) potom 898 mg 3-hydroxy-lip-[4-[2-(dietylamino)etoxy]fenyl]-estra-l,3,5-(10)trién-17-onu v roztoku v 9 ml tetrahydrofuránu. Po chromatografii cez silikagél (elučné činidlo: CH₂C1₂-CH₃OH-NH₄OH 92-8-0,5) sa získa 686 mg očakávaného produktu.

t.t. = 159-160’C

IR (CHC1₃)

-OH: 3602 cm“¹ + celková absorpcia aromáty: , 1610 cm^-1, 1581 cm“¹, 1512 cm”¹ (F)

NMR i	(cdci₃)
0,47	(s)	Me	18
1,05	(t)	-Ν-	(ch₂-ch₃)₂
1,28	(s)	Me	V 18
2,65	(m)	-N	-(ch₂-ch₃)₂
3,95	(t)	0-	(ch₂-ch₂-n
6,31	(d)	^H4	kruh A
6,38	(dd)	^H2	kruh A
6,80	(d)	^H1	kruh A
6,56	a 6,93	H	z fenylu v 11

Príprava 3-hydroxy-11β-[4-[2-(diétylamino)etoxy]fenyl]estra-1,3,5(10)trién-17-onu

Pracuje sa ako pri príprave východiskového produktu pre príklad 3 pri použití 1,1 g jódsteroidového derivátu v 20 ml tetrahydrofuránu a 2 ml dietylamínu. Získa sa 898 mg očakávaného produktu po chromatografii na silikagéli (elučné Činidlo: CH₂C1₂-CH₃OH-NH₄OH 92-8-0,2). Rf = 0,24.

Príklad 6

17a-(trifluórmetyl)-11β-[4-[2-(1-piperidinyl)etoxy]fenyl]estra-1,3,5(10)trién-3,17β-άίο1

Počas dvoch hodín pri 120’C za tlaku 10 až 2 mbar sa zahrieva 83 mg tetrabutylamónium (Me₄NH.4H₂O), potom sa nechá schladnúť na teplotu miestnosti pod inertnou atmosférou. Pridá sa 237 mg 3-hydroxy-l^-[ 4-[ 2-(1-piperidinyl)etoxy]fenyl]-estra-l,3,5(10)trién-17-onu v roztoku v 3 ml tetrahydrofuránu, ochladí sa na 4 * C a pridá sa 0,3 ml tri metyl(trifluórmetyl)silánu, potom sa mieša 2 hodiny pri tejto teplote. Pridajú sa 4 ml tetrahydrofuránu, mieša sa počas 3,5 hodiny pri teplote miestnosti, pridá sa voda, extrahuje sa metylénchloridom, premyje vodou, vysušia a odparia sa rozpúšťadla pri zníženom tlaku. Zvyšok sa chromatografuje cez silikagél (elučné činidlo: CH₂Cl₂“MeOH-NH₄OH

9-10-0,1) a získa sa 127 mg očakávaného produktu.

IR (CHC1₃)

-OH: 3598 cm^-1 + celková absorpcia aromáty: 1610 cm”¹, 1580 cm“¹, 1512 cm“¹

NMR (CDC1₃)

0,56 (s) Me18

4,00 (m) O-CH₂-CH₂N, CH-Ph (Η_χι)

6,37 (dd) H₂ kruhA

6,41-6,93 H'₂, H'₃ (fenyl v 11)

6,41 (d) H₄ kruhA

6,77 (d) Η_χ kruhA.

Farmakologické testy

1) Účinok na proliferáciu prsníkových buniek

Proliferačná aktivita molekúl sa skúma v porovnaní s proliferačnou aktivitou estradiolu na ľudské prsníkové bunky MCF-7 v kultúre.

Na demonštráciu agonistického účinku estradiolu a/alebo testovaných molekúl sa kultivačné médium pre udržovanie buniek (bohatých na rastové faktory a na steroidy) nahradí ochudzeným médiom, postrádajúcim medzi inými steroidy (DMEM doplnené 5 % desteroidizovaného séra a bez fenolovej červene). Bunky podstupujú toto ochudzenie 2 dni pred zahájením testu.

Po siedmich dňoch kultivácie v prítomnosti produktov, ktoré sa skúmajú sa proliferácia buniek vyhodnotí skúškou DNA. V každom teste sa účinok estradiolu pri 10”¹⁰ M (bunkový rast v prítomnosti estradiolu mínus bunkový rast v prítomnosti rozpúšťadla) určí 100% agonistická aktivita. Aktivita molekúl sa vyhodnotí v porovnaní s týmto vnútorným štandardom. Molekuly zaisťujúce bunkový rast identický bunkovému rastu zistenému so samotným rozpúšťadlom sú vyhodnotené ako inaktívne, tie, ktoré poskytujú bunkový rast menší ako bunkový rast získaný s rozpúšťadlom, sú vyhodnotené ako inhibičné”.

	^E2	príklad 1
aktivita	agonistická	inaktívna

2) Zlúčeniny podía vynálezu sú testované na určenie ich účinku na kostnú hmotu a na aktivitu tvorby a resorpcie na modele samíc potkanov ovariektomizovaných vo veku 3 mesiacov. Zvieratá dostávajú preventívne ošetrenie.

Zvieratá:

druh kmeň pohlavie hmotnosť počet zvierat/skupina potkan Spargue-Dawley samica

250 g až 280 g

Produkty:

- testovaný produkt: produkt z príkladu 1

- vehikulá: kukuričný olej, metylcelulóza 0,5 %

- dávky: jedna dávka na testovaný produkt (0,3 mg/kg/deň)

- počet podaní: raz/deň, 5 dní/týždeň počas 4 týždňov

- spôsob podania: orálne pre produkty

- objemy: 5 ml/kg (p.o.)

- čas medzi poslednou injekciou a usmrtením: 24 hodín

- počet podaní: 20

- referenčný produkt:

17p-estradiol sa podáva subkutánne v dávke 0,1 mg/kg/deň v roztoku v zmesi oleja z kukuričných klíčkov - benzylalkoholu (99:1, obj/obj) v objeme 0,2 ml/kg.

Experimentálny postup

Zvieratá

Štúdia sa uskutočňuje na samiciach potkanov, ktoré sú ovariekomizované vo veku 3 mesiacov. Zvieratá sú udržiavané v klimatizovanej miestnosti (teplota 20’C ± 2C) so skupinami po 4 v boxoch. Zvieratá dostávajú ad libitum, demineralizovanú vodu a lisovanú potravu (pelety: A04CR-10 UAR).

Chirurgia

Samice potkanov vo veku 3 mesiacov, ktoré vážia asi 250 g sa ovariektomizujú pri anestézii pomocou Imalgenu 1000, v dávke 100 mg/kg intraperitoneálne (i.p.) a v objeme 1 ml/kg. Dostávajú tiež Nembutal (3 mg/kg i.p. v objeme 0,3 ml/kg).

Po laterálnej inscisii sa rozrežú vrstvy kože a svalu. Excisia každého vaječníku sa vykoná po podviazaní vaj íčkovodu.

I

SHAM kontrolné potkany sa anestetizujú za rovnakých podmienok. Po incisii vrstiev kože a svalu sa každý vaječník obnaží a potom sa nahradí in situ.

Ošetrenie

Účinky produktov sa určujú pri preventívnom ošetrení. Podávajú sa ihneď po ovariektómii. Zvieratá sa rozdelia do skupín po 8.

Skupina 1: SHAM kontrolní potkania dostávajúci vehikulum alebo vehikulá

Skupina 2: OVX kontrolní potkania dostávajúci vehikulum alebo vehikulá

Skupiny X: OVX potkania dostávajúci príslušné stanovené dávky produktu alebo produktov, ktoré majú byť testované.

Vzorky krvi

Na konci 4 týždňa (trvania štúdie) sa zvieratá usmrtia gilotínou. Sérá združené po odstredení sa uskladnia pri teplote -20“C. Tuková bilancia sa vyhotoví zo sérových skúšok celkového cholesterolu, triglyceridov a fosfolipidov v 500 mikrolitrovom alikvóte séra.

Pokles úrovne sérového cholesterolu sa vyjadrí percentuálne vo vzťahu k úrovni zistenej pre ovariektomizované zvieratá dostávajúce iba rozpúšťadlo.

Vzorky orgánov

Po usmrtení zvierat sa odstránia nasledujúce orgány:

- genitálny trakt

Odstránia sa maternice. Tie sa zvážia. Vzrast hmotnosti sa vyjadrí percentuálne k hmotnosti maternice ovariektomizovaných zvierat, ktoré dostávali len rozpúšťadlo.

- kosť

Kostná hmota (BMD čiže Bone Minerál Density) sa merí dvojnásobne energetickou X lúčovou dvojfotónovou absorpciometriou (DEXA). Merania sa vykonávajú na kostiach po excisii a po odstránení všetkých mäkkých tkanív. BMD sa merí po celej kosti a na metafýznej oblasti pri proximálnom konci láve j tíbie. Táto zóna sa definuje ako oblasť, ktorá je najbohatšia, pokial ide o hubovitú kosť a preto je najcitlivejšia voči zmenám v objeme kosti a kostnej minerálnej hustoty.

Výsledky sa vyjadria percentuálne pri použití vzorca:

BMD testovaného produktu - BMD OVX

----------------------------------------------- , ₁₀₀

BMD SHAM - BMD OVX

	DÁVKA	OS TÍBIE	UTERUS	CHOLEST.
	mg/kg	hustota %	hmotnosť %	%
E2	0,1 sc	105	359	- 35
Príkl. 1	0,3 po	75	76	- 43
OVX		0
SHAM		100

Závery

Zlúčeniny podľa vynálezu poskytujú účinnú kostnú _tochranu (=75% ), pričom vykazujú minimálnu uterotrofnú aktivitu v porovnaní s aktivitou vyvolanou estradiolom. Navyše sa získa významný pokles celkovej úrovne cholesterolu.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Zlúčeniny všeobecného vzorca I (I) v ktorom n buď R¹ a alebo R¹ je celé číslo rovné
2 alebo 3,

R² identické alebo rozdielne, predstavujú atóm vodíka alebo alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka, a R² tvoria spoločne s atómom dusíka, ku ktorému sú viazané, aromatický alebo nearomatický, nasýtený alebo nenasýtený, monocyklický alebo polycyklický heterocyklus s 5 až 15 členami, prípadne obsahujúci 1 až 3 ďalšie heteroatómy zvolené z kyslíka, síry a dusíka, substituovaný alebo nesubstituovaný,

X predstavuje prípadne esterifikovanú hydroxylovú skupinu a

Y predstavuje alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka, substituovanú alebo nesubstituovanú, rovnako ako ich adičné soli s farmaceutický akceptovateľnými > kyselinami.

* 2. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1, kde n sa rovná 2, rovnako ako ich farmaceutický akceptovateľné adičné soli s kyselinami.
3. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1 alebo 2, kde n sa rovná 2, buď R¹ a R², ktoré môžu byť identické alebo rozdielne predstavujú alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až
4 atómy uhlíka, alebo R¹ a R² tvoria spoločne s atómom dusíka, ku ktorému sú viazané piperidino, pyrolidino, alebo 2-azabicyklo(2,2,1)hept-2-yl skupinu,

X predstavuje hydroxylovú skupinu a

Y predstavuje metylovú alebo etylovú skupinu, rovnako ako ich farmaceutický akceptovateľné adičné soli s kyselinami.

* 4. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3, rovnako ako ich farmaceutický akcepto- ' vateľné adičné soli s kyselinami, ktorými sú

11β- [ 4- [ 2- (1-piperidinyl) etoxy ] fenyl ] -19-nor-17a-pregna1,3,5(10)trién-3,17p-diol,

17a-metyl-lip- [ 4- [ 2- (1-piperidinyl) etoxy ] fenyl ] -estra1,3,5(10)trién-3,17 β-diol,

17a-metyl-lip- [ 4- [ 2- (dietylamino) etoxy ] f enyl ] -estra-1,3,5(10)-3,17β—diol,

17a-metyl-lip-[4-[2-(1-pyrolidinyl)etoxy]fenyl]-estra-1,3,5(10)trién-3,17β-άίο1,

17a-metyl-l^- [ 4- [ 2- (2-azabicyklo (2,2,1) hept-2-yl) etoxy ] fenyl ] estra-1,3,5-(10)trién-3,17β-άΐο1,

11β-[4-[2—(2-azabicyklo(2,2,1)hept-2-yl)etoxy]fenyl]-19-nor17a-pregna-l,3,5-(10)trién-3,17β-άΐο1,

17α-(trifluórmetyl-ΙΙβ-[4-[2-(1-piperidinyl)etoxy]fenyl]estra-1,3,5-(10)trién-3,17β-άίο1.
5. Spôsob prípravy zlúčenín všeobecného vzorca I podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že zlúčenina všeobecného vzorca II v ktorom n, R¹ a R² majú význam definovaný v nároku 1, sa podrobí pôsobeniu organokovovej zlúčeniny odvodenej od alkylovej skupiny, obsahujúcej 1 až 4 atómy uhlíka tak, že sa vytvoria zlúčeniny vzorca I, kde X je hydroxylová skupina a Y je alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, táto zlúčenina vzorca I sa podrobí, kedf je to potrebné, esterifikačnej reakcii 17-OH a/alebo salifikačnej reakcii.
6. Spôsob prípravy zlúčenín všeobecného vzorca I podľa nároku 1 s Y predstavujúcim alkylovú skupinu obsahujúcu 2 až 4 atómy uhlíka, vyznačujúci sa tým, že zlúčenina všeobecného vzorca III n ktorom n, R¹ a R² majú skôr uvedené významy a v ktorom Y' predstavuje alkenylovú alebo alkinylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka, sa podrobí pôsobeniu redukčného prostriedku dvojnej väzby alebo trojnej väzby aby sa získali zlúčeniny vzorca I, v ktorom X je hydroxylová skupina a Y je alkylová skupina obsahujúca 2 až 4 atómy uhlíka, pričom táto zlúčenina vzorca I sa podrobí, keď je to potrebné, esterifikačnej reakcii 17-OH a/alebo salifikačnej reakcii.

I
7. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1 ako liečivá.
8. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nárokov 2, 3 alebo 4 ako liečivá.
9. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1 ako liečivá pre hormonálnu nahradzovaciu terapiu pri menopa uze alebo perimenopauze, osobitne na prevenciu alebo liečbu osteoporózy, ktoré vykazujú slabú alebo žiadnu estrogénnu aktivitu pokial ide o uterus.
10. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podlá nároku 1 ako liečivá pre hormonálnu nahradzovaciu terapiu pri menopauze alebo perimenopauze, osobitne na prevenciu alebo liečbu osteoporózy u žien pri riziku prsníkových tumorov.
11. Farmaceutické kompozície, vyznačuj úce sa t ý m, že obsahujú liečivá definované v ktoromkolvek z nárokov 7 až 10.