SK6799A3 - Immunological process for detecting antibodies directed towards tissue transglutaminase (ttg), use of ttg for diagnostic purposes and therapy control, and oral pharmaceutical agent containing ttg - Google Patents
Immunological process for detecting antibodies directed towards tissue transglutaminase (ttg), use of ttg for diagnostic purposes and therapy control, and oral pharmaceutical agent containing ttg Download PDFInfo
- Publication number
- SK6799A3 SK6799A3 SK67-99A SK6799A SK6799A3 SK 6799 A3 SK6799 A3 SK 6799A3 SK 6799 A SK6799 A SK 6799A SK 6799 A3 SK6799 A3 SK 6799A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- ttg
- antibodies
- sprue
- containing compounds
- detection
- Prior art date
Links
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 102100038095 Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase 2 Human genes 0.000 title claims description 21
- 108700039882 Protein Glutamine gamma Glutamyltransferase 2 Proteins 0.000 title claims description 17
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 title description 4
- 230000037189 immune system physiology Effects 0.000 title 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 18
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 16
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 15
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000036046 immunoreaction Effects 0.000 claims abstract 3
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 claims description 59
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 29
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 19
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 13
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 239000008203 oral pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 claims 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 25
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 25
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 24
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 23
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 19
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 17
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 17
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 17
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 15
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 15
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 15
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 15
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 12
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 10
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 9
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 8
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 7
- 108010061711 Gliadin Proteins 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 7
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 6
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 6
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 235000006171 gluten free diet Nutrition 0.000 description 6
- 235000020884 gluten-free diet Nutrition 0.000 description 6
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 208000007924 IgA Deficiency Diseases 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 5
- 206010039915 Selective IgA immunodeficiency Diseases 0.000 description 5
- 108060008539 Transglutaminase Proteins 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 5
- 201000007156 immunoglobulin alpha deficiency Diseases 0.000 description 5
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 208000029138 selective IgA deficiency disease Diseases 0.000 description 5
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 5
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 4
- 101000666171 Homo sapiens Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase 2 Proteins 0.000 description 4
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 4
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 4
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 4
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 4
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 description 4
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 4
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 102000003601 transglutaminase Human genes 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 3
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 3
- 206010003827 Autoimmune hepatitis Diseases 0.000 description 3
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 3
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 3
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 206010025476 Malabsorption Diseases 0.000 description 3
- 208000004155 Malabsorption Syndromes Diseases 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 3
- 241000218657 Picea Species 0.000 description 3
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 3
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 3
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 3
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 3
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 3
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000020192 tolerance induction in gut-associated lymphoid tissue Effects 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JYCQQPHGFMYQCF-UHFFFAOYSA-N 4-tert-Octylphenol monoethoxylate Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=C(OCCO)C=C1 JYCQQPHGFMYQCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- 108010071289 Factor XIII Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 2
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 2
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 2
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 2
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N Pyrrolidine Chemical compound C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 2
- 244000082988 Secale cereale Species 0.000 description 2
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 2
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 238000007818 agglutination assay Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 2
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 2
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 2
- 229940012444 factor xiii Drugs 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- -1 for example Proteins 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 238000012818 gel-diffusion assay Methods 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 210000005024 intraepithelial lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000000867 larynx Anatomy 0.000 description 2
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 2
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000003345 scintillation counting Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- JGVWCANSWKRBCS-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine thiocyanate Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=C(SC#N)C=C1C(O)=O JGVWCANSWKRBCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 2
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 2
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241001432959 Chernes Species 0.000 description 1
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 1
- 206010011968 Decreased immune responsiveness Diseases 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010048768 Dermatosis Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010454 Experimental Liver Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108050001049 Extracellular proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 102000000802 Galectin 3 Human genes 0.000 description 1
- 108010001517 Galectin 3 Proteins 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 206010022704 Intestinal T-cell lymphomas Diseases 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 206010029719 Nonspecific reaction Diseases 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 102000009890 Osteonectin Human genes 0.000 description 1
- 108010077077 Osteonectin Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 108010050808 Procollagen Proteins 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 208000024799 Thyroid disease Diseases 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 229930003270 Vitamin B Natural products 0.000 description 1
- 201000000839 Vitamin K Deficiency Bleeding Diseases 0.000 description 1
- 206010047634 Vitamin K deficiency Diseases 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- QPMSXSBEVQLBIL-CZRHPSIPSA-N ac1mix0p Chemical compound C1=CC=C2N(C[C@H](C)CN(C)C)C3=CC(OC)=CC=C3SC2=C1.O([C@H]1[C@]2(OC)C=CC34C[C@@H]2[C@](C)(O)CCC)C2=C5[C@]41CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C2O QPMSXSBEVQLBIL-CZRHPSIPSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000012072 active phase Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 229960002648 alanylglutamine Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 238000010420 art technique Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- GNNALEGJVYVIIH-UHFFFAOYSA-N benzene-1,2-diamine;hydrochloride Chemical compound Cl.NC1=CC=CC=C1N GNNALEGJVYVIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000002925 chemical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 230000002183 duodenal effect Effects 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 235000006694 eating habits Nutrition 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 210000004177 elastic tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 108010003914 endoproteinase Asp-N Proteins 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000011152 fibreglass Substances 0.000 description 1
- 108060002894 fibrillar collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000013373 fibrillar collagen Human genes 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 210000003953 foreskin Anatomy 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 239000010439 graphite Substances 0.000 description 1
- 229910002804 graphite Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 239000012133 immunoprecipitate Substances 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 239000012073 inactive phase Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 206010023841 laryngeal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 235000004213 low-fat Nutrition 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001466 metabolic labeling Methods 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 108700005457 microfibrillar Proteins 0.000 description 1
- 102000035118 modified proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005573 modified proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 210000000282 nail Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 208000018066 neoplasm of oropharynx Diseases 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 108010008217 nidogen Proteins 0.000 description 1
- JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N nitro blue tetrazolium(2+) Chemical compound COC1=CC(C=2C=C(OC)C(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 230000037311 normal skin Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003300 oropharynx Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 239000011241 protective layer Substances 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000014680 small intestine neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000003997 social interaction Effects 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035408 type 1 diabetes mellitus 1 Diseases 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 description 1
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 description 1
- 208000016794 vitamin K deficiency hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1025—Acyltransferases (2.3)
- C12N9/104—Aminoacyltransferases (2.3.2)
- C12N9/1044—Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase (2.3.2.13), i.e. transglutaminase or factor XIII
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4713—Autoimmune diseases, e.g. Insulin-dependent diabetes mellitus, multiple sclerosis, rheumathoid arthritis, systemic lupus erythematosus; Autoantigens
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/564—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for pre-existing immune complex or autoimmune disease, i.e. systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, rheumatoid factors or complement components C1-C9
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Rehabilitation Therapy (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
Description
Oblasť techniky
Predkladaný vynález sa týka spôsobu na detekciu protilátok v telesných kvapalinách pomocou imunitnej reakcie s tkanivovou transglutaminázou /tGT/, jej antigénňymi štruktúrami, imunoreaktívnymi sekvenciami alebo ich analógami a zo zlúčeninami obsahujúcimi tGT, jej antigénnymi štruktúrami imunoreaktívnej sekvencie alebo ich analógami. Spôsob sa môže použiť v diagnostike a pri kontrole terapie ochorení spjených s imunitnou reakciou proti tTG, zlúčeninám obsahujúcim tTG a jej antigénnym štruktúram, imunoreaktívnym sekvenciám alebo ich analógom. Preto je vynález tiež zameraný na použitie tT a vyššie uvedených substancií v diagnostike a kontrole terapie, výhodne v diagnostike a kontrole terapie chronických zápalových ochorení alebo autoimunitných ochorení a výhodne v diagnostike a kontrole terapie sprue alebo celiakie. Vynález sa tiež týka orálneho farmaceutického prostriedku, ktorý obsahuje tTG, zlúčeniny obsahujúce tTG a antigénne štruktúry, imunoreaktívne sekvencie alebo ich analógy ako aktívne zložky a ktorý môže byť použitý na liečbu ochorení spojených s imunitnou reakciou proti týmto substanciám, pretože orálne podanie vyššie uvedených zlúčenín vyvoláva imunitnú toleranciu.
Predkladaný vynález je založený na objave, že tkanivová transglutamináza /tTG,EC 2.3.2.13/ je autoantigén pri sprue alebo celiakii.
Na základe vyššie uvedeného objavu bola vyvinutá imunologická metóda podlá predkladaného vynálezu na detekciu protilátok proti tTG a zlúčenín obsahujúcich tTG.
Doterajší stav techniky
Celiakia je ochorenie sliznice tenkého čreva, ktorého prvé prejavy sú obyčajne počas pozdného detského a kojeneckého veku. Ak sa zodpovedajúci klinický obraz neobjaví pred dospelosťou, tak sa toto ochorenie volá netropická sprue. Preto oba tieto termíny označujú rovnaké ochorenie. Sprue doprevádza zápalové zmeny na sliznici a celková malabsorpcia,ktorá vzniká v dôsledku týchto zmien. Vo väčšine prípadov je prítomná morfologická a klinická odpoveď na liečbu bezlepkovou diétou.
Dobre známym patogénnym faktorom sú glutény z pšenice, jačmeňa, raže a v určitom rozsahu aj prosa, pokial glutény z rastlín s nižším stupňom fylogenetickej príbuznosti, ako je kukurica, ryža a sója, sú nepatogénne. U týchto gluténov je úloha patogénneho činidla pripísaná prolamínom rozpustným v alkoholoch, hlavne oč-gliadínu.
Preto sa sprue vyskytuje hlavne v krajinách, v ktorých sa pšenica používa ako hlavný zdroj potravy /Európa, USA, Austrália/ a jej incidenciou je napríklad 0,14/1000 novorodených detí v Dánsku, 0,7/1000 v Španielsku, 1/100 v Taliansku, 0,45/1000 v Nemecku a 2,42/1000 vo Švédsku.
No novšie výskumy ukázali, že subklinické príznaky, t.j. morfologické zmeny bez masívnych príznakov sú častejšie,ako sa dosial predpokladalo. Tak ukázala štúdia, urobená v Taliansku v roku 1994 incidenciu 3,28/1000 medzi detmi školského veku. Riziko latentnej sprue je u ďalších detí týchto pacientov až 50 %.
Predominantne latentná sprue je často doprevádzaná polymorfnou dermatózou, t.j. dermatisis herpetiformis, pri ktorej sú pozorované charakteristické subepidermálne malé pluzgieriky s granulárnymi depozitami IgA vo vrcholoch dermálnych papíl. Biopsie tenkého čreva ukazujú nepravidelnú, viac alebo menej poškodenú sliznicu.
Iné dobre určené asociácie sú medzi sprue a inzulín-dependentným diabetes mellitus, ochoreniami štítnej žľazy a selektívnej IgA d.ef iciencie.
Okrem mnohých ďalších sprievodných klinických príznakov sprue, ako je anémia, ktorá bola okrem iného prisúdená malabsorpcii vitamínu B^2 a deficiencie vitamínu K, ktorá je dôvodom na vyššiu krvácavost, má zvláštny význam značne zvýšené riziko na gastrointestinálne maligné nádory. Až u 15% pacientov so sprue sa obyčajne vo veku nad 50 rokov vyvinie neoplastické ochorenie a približne v 50 % sa jedná o črevné T-bunečné lymfómy a v ďalších 25 % sa jedná o tumory hrtana, orofaryngu a tenkého čreva.
Terapia sprue zahŕňa celoživotné dodržiavanie bezlepkovej diéty, pri ktorej musia byt vylúčené nielen výrobky obsahujúce glutén z pšenice, ale tiež z jačmeňa, žita a prosa. Pre pacientov toto predstavuje ťažké obmedzenie ako diétnych zvykov, tak sociálnych interakcií.
Ak je diagnóza a terapia sprue urobená včas, potom má dobrú prognózu. Na raz vzniknuté komplikácie nie sú často kompletne reverzibilné. Naopak,u nerozpoznaného a neliečeného ochorenia môže dôjsť v dôsledku malabsorpcie k vzniku závažných príznakov. Nakoniec je tu zvýšené riziko vzniku črevných lymfómov a iných malignít gastrointestinálneho traktu.
V súčasnosti predstavuje biopsia tenkého čreva najlepší štandard v diagnostike sprue a pri sledovaní pri bezlepkovej diéte, ale stále dôležitejšími sa stávajú neinvazívne diagnostické metódy založené na imunologických markeroch. Pretožé v 'sére pacientov trpiacich sprue sú prítomné ’ ’ I protilátky triedy IgA a IgG, ktoré sú namierené proti gliadínu a proti autoantigénu endomýzia, čo je špecifické pojivové tkanivo , ktoré okrem iného obsahuje kolagény I, III a V, elastické vlákna, nekolagénne proteíny ako je fibronektín a proteoglykány, môže byť sérum testované na IgG a IgA protilátky proti gliadínu pomocou ELISA a na IgG a IgA protilátky proti endomýsiu pomocou nepriamej fluorescencie. Pokial protilátky proti gliadímu nie sú dostatočne špecifické pre sprue, vysoká senzivita a špecificita /97- 100%/ je popísaná pre IgA Ab proti endomýsiu. No pre detekciu pomocou imunofluorescencie sú potrebné vzorky z pažeráka primátov. V súčasnej dobe sa robia pokusy o detekciu protilátok proti endomýsiu z pupočníkového materiálu.
V roku 1984 opísali Maury a Teppo /ancent 1984, 20: 892
-894/ 90 kDa glykoproteín bohatý na mannózu/20 %obsahu cukru/ ako zložku normálnej kože a sliznice tenkého čreva.Boli schopní identifikovať cirkulujúce IgG imunikomplexy schopné detekovať uvedený proteín u 10 z 20 pacientov s celiakiou a u 7 z 12 pacientov postihnutých herpetiformnou dermatitídou /ochorením, ktoré je považované za epidermálny príznak celiakie/. Opísaný kDa glykoproteín je charakterizovaný tým, že má 90 % obsah mannózy, kým tTG je neglykosylovaný aj napriek prítomnosti 6 glykosilačných miest /Ichinose et al., J. Biol. Chern., 1990, 265: 13411- 13414/.
V roku 1986 vyšetrovali Maury et al., /vidí Gut, 1986, 27: 147 - 152/ uvedené protilátky ELISA testom so sérom pacintov postihnutých celiakiou a kontrolným sérom. Sérum od pacientov s celiakiou vykazovalo signifikantne vyššie hladiny protilátok /p-< 0,001/ ako kontrolné sérum. Uvedené zvýšené hladiny poklesli na normálne hodnoty po bezlepkovej diéte. Nepreukázala sa žiadna korelácia s anti-retikulinovými protilátkami.
Pri včasnej diagnostike a prísnom dodržiavaní bezlepkovej diéty môže byť ochorenie udržiavané v remisii a tak môže yť tiež zvýšené riziko malignít u pacientov udržiavané v normálnych hodnotách. Preto existuje značná potreba vývoja vhodného detekčného testu pre sprue. Pretože skupina jedincov s latentnou sprue tiež patrí do skupiny s vysokým rizikom,mali by byť všetci rizikoví jedinci /hlavne vzdialení príbuzní/ a nakoniec, všetky školopovinné deti, ako sa teraz uvažuje v Taliansku, vyšetrovaní pomocou senzitívneho, špecifického, lahko zrealizovatelného a lacného testu.
No doteraz zlyhali skríningové programy v dôsledku nasledujúcich problémov:
invázivné biopsie z duodena u bezpríznakových oôb sú neprijateľné a nadmerne nákladné,
-ELISA detekcia pomocou protilátok proti gliadínu je sotva použiteľná pre jej nízku špecificitu, imunofluorescenčná detekcia protilátok proti endomýziu triedy IgA, ktorá je urobená na pažeráku primátov, je tiež nákladná ako normálna skríningová metóda. Okrem toho, hodnotenie je subjektívne a neumožňuje identifikáciu pacientov so sprue majúcich deficienciu IgA /2 % pacientov/.
Preto doteraz neexistuje neinvázivný, špecifický, kvantitatívny, rýchly, ľahký a lacný prijateľný detekčný test pre sprue/celiakiu a na kontrolu liečby týchto ochorení.
Podstata vynálezu
Tento problém je vyriešený v predkladanom vynáleze. Na základe prekvapivého zistenia, že tkanivová transglutamináza /tTG, EC 2.3.2.13/ je autoantigénom pri sprue, bola vyvinutá imunologická technika podľa nároku 1 až 6 na detekciu protilátok proti tTG a zlúčeninám obsahujúcich tTG z telesných kvapalín, hlavne zo séra, kde táto metóda umožňuje nielen diagnostiku sprue alebo celiakie, ale tiež ochorení doprevádzaných imunitnou reakciou proti tTG, zlúčeninám obsahujúcich tTG, jeho antigénne štruktúry, imunoreaktívne sekvencie alebo analógy.
Tkanivová transglutamináza patrí do triedy transglutamináz. TG /EC 2.3.2.13/ sú enzýmy, katalyzujúce prenos acylovej skupiny závislý na Ca2+, T-karboxamidových skupín peptidovou väzbou viazaných glutamínových zvyškov, ktoré pôsobia ako donory acylovej skupiny. Primárne proteínové lyžínové zvyšky pôsobia ako akceptory acylovej skupiny,takže prenosom vzniká ^-(T— glutamyl) lyzínová väzba. Substrátová špecificita TG s ohľadom na donory acylovej skupiny je veľmi vysoká /v závislosti od amínokyselinovej sekvencie/, pokiaľ existuje výnimočne veľké spektrum akceptorov /Folk J.E., Annu.Rev.Biochem.,1980, 49: 517-531/. Tvorené kovalentné peptidové väzby sú vysoko stabilné a rezistentné na proteázy, čo vedie k zvýšenej rezistencii skrížené viazaných proteínov na chemické, enzymatické alebo fyzikálne vplyvy.
Taktiež rozšírený výskyt rôznych TG v rôznych orgánoch, tkanivách a plazme a intersticiálnej tekutine koreluj'e s výskytom transglutamizami modifikovaných proteínov v krvných zrazeninách, bunečných membránach, rohovatejúcej vrstve epidermis, vlasoch, nechtoch a extracelulárnej matrix /Greenberg C.S.et al., FASEB J. 1991, 5: 3071 - 3077/.
Opísané transglutaminzy môžu byť rozdelené podľa ich fyzikálnych vlastbostí, ich lokalizácie v tele a podľa ich primárnej štruktúry.
Tkanivová TG /tTG/ je tiež označovaná ako bunečná, erytrocytárna, endoteliálna, cytopiazmatická, pečeňová alebo typ II TG, a to je monomer majúci molekulovú hmotbosť 75 - 85 kDa.
Kompletná amínokyselinová sekvencia obsahujúca 687 zvyškov bola odvodená z cDNA. Na proteínovej úrovni tu existuje 84% homológie medzi ľudským enzýmom a enzýmom myších makrofágov a 81 % homológie medzi ľudským enzýmom a enzýmom morčiat. často nemá výmena nukleotidov, medzi týmito druhmi žiaden vplyv na amínokyselinovú sekvenciu. Aktívne centrum je vysoko konzervované, s vyznačenou homológiou proteínu medzi tromi druhmi /49 z 51 zvyškov je identických / a s vysokým stupňom homológie proteínu /75%/ s a-podjednotkou faktoru XIII /vid’ Gentile V.et al., J Biol. Chem., 1991, 266: 478 483, Greenberg C.S. et. al., FASEB J. 1991, 5: 3071 - 3077/.
Tu nie je prítomný ani signálny peptid, ani glykosilácia a aj napriek prítomnosti mnohých cysteínových zvyškov tu nie sú disulfidové mostíky. Pomocou fluorescenčnej hybridizácie bol gén pre ľudskú transglutaminázu lokalizovaný na chromozóm 20ql2 /Gentile, V.et al., Genomics, 1994, 20:295 - 297/. Hoci mechanizmus uvoľňovania enzýmu stále nie jé známy, existuje jasný dúkaz, že tTG so svojím intracelulárnym výskytom má významnú funkciu v extracelulárnej matrix /EMC/. Okrem toho, nie je pravdepodobné, že by intracelulárna koncentrácia Ca2+, potrebná pre aktivitu tTG sa dosiahla za fyziologických podmienok, pokiaľ dostatočne vysoké koncentrácie Ca 2+sa vyskytujú extracelulárne /Gentile V. et al., J.Celí. Biol., 1992, 119: 463 - 474/.
/
Niekoľko výskumov určilo asociáciu tTG s fibronektínomproteínom ECM. Okrem fibronektínu môžu byť molekly ECM ako je nidogén, N-termálny peptid prokolagénu III, kolagén V a XI, osteonektín, čo je glykoproteín asociovaný s mikrofibrilami, drmatan-sulfátový proteoglykán s vysokou molekulovou hmotnosťou a galectín 3 lektín, identifikované ako špecifické substráty pre tTG.
Dôkazy o významnej úlohe tTG pri hojení fán boli tiež získané z imunifluorescenčných štúdií na kultivovaných WI38 bunkách /pľúcne embryonálne fibroblasty/, ktoré nevykazujú extracelulárnu tTG aktivitu za normálnych podmienok, ale existuje u nich extracelulárna depozícia enzýmu pri arteficiálnej tvorbe rán. Pravdepodobne pasívnym uvoľnením enzýmu z poranených buniek nasleduje nekovalentná väzba na ECM, hlavne na fibronektín a fibrilárne kolagény a enzým je aktívny počas niekoľkých hodín /Upchurch, H.F.et al., J Čelí Physiol. 1991, 149: 375 - 382/. V krysom modeli, tiež po tvorbe poranení bolo detekované 5 denné zvýšenie aktivity tTG /Bowness, J.M.et al., Biochem. Biophys. Acta, 1988, 967: 234 - 240/. Tiež pri inkubácii lyzátu ľudských erytrocytov s plazmou môže byť detekovaná silná afinita uvoľnenej tTG k fibronektínu /Loraud,L. et al., Proc. Natl. Acad. Sci.,USA 1988, 85: 1057 - 1059/. Všetky objavy ukazujú, že väzba tTG na ECM má centrálnu úlohu v skorej fáze hojenia rán a hlavne, že spôsobuje stabilizáciu fibrínu spolu s faktorom XIII, čo tvorí ochrannú vrstvu a stabilný adhézivný substrát okolo poškodených buniek prostredníctom skríženej väzby extracelulárnych proteínov. Doteraz nebol pri stavovcoch detekovaný žiaden enzým schopný štiepenia tTG katalyzovaných, enormne stabilných skrížených väzieb.
Na základe zistení, že tTG je autoantigénom pri sprue, je vynález tiež obsahuj úcich tTG, zameraný na použitie tTG, zlúčenín jeho antigénne štruktúry, imunologické sekvencie a analógy pri diagnostike a kontrole terapie ochorení, spojených s imunologickou reakciou proti uvedeným zlúčeninám. Konkrétne môžu byť týmto spôsobom diagnostikované akútne zápalové ochorenia ako je pneumónia, glomerulone fritída, vírusová hepatitída alebo chronické zápalové ochorenia ako je Crohnova choroba, Colitis ulcerosa alebo autoimunitné ochorenia ako je autoimunitná hepatitída , Sjogrenov syndróm, Wegenerova granulomatóza, reumatoidná artritída, idiopatická orgánová fibróza, ako je napríklad plúcna fibróza. Hlavne je výhodný detekčný test pre diagnostiku a kontrolu terapie sprue. Pretože tento test môže byť urobený rýchlo a lacno, umožňuje vyšetrovanie populácie na prítomnosť protilátok proti tTG.
tTG použitý podlá predkladaného vynálezu môže byť zvieracieho, syntetického alebo rekombinantného pôvodu a to isté platí pre zlúčeniny obsahujúce tTG, ktoré môžu byť naviac kombinovaného pôvodu /napríklad · zvierací tTG spolu so syntetickým peptidom/. Podlá predkladaného vynálezu sú zlúčeniny obsahujúce tTG chemické zlúčeniny tTG alebo jeho analógov s proteínmi. Podlá predkladaného vynálezu sú tTG analógy alebo analógy týchto zlúčenín obsahujúcich tTG všetky antigénne štruktúry, ktoré reagujú s protilátkami proti tTG alebo zlúčeninám obsahujúcich tTG, napríklad syntetické peptidy. Imunoreaktívne sekvencie sú fragmenty tTG alebo zlúčenín obsahujúcich tTG, ktoré sú vyrobené proteolýzou syntézou alebo genetickým spracovaním, rovnako ako varianty získané výmenou aminokyselín.
Imunologická detekcia podlá predkladaného vynálezu je urobená podlá dobre známych techník. Tak môže byť pre detekciu protilátok u pacienta použitá akákolvek priama /napríklad za použitia senzorového čipu/ alebo nepriama technika.
Pri priamych technikách je väzba detekovanej protilátky na antigén určená prostredníctvom zmeny fyzikálnych alebo chemických vlastností, takže nie sú potrebné následné kroky detekcie, využívajúce značené väzbové druhy protilátok.
’ 1.
Podlá predkladaého vynálezu je výhodné detekovať protilátky proti tTG pomocou imunotestu, výhodne imunotestu na pevnej fáze s priamym alebo nepriamym naviazaním reakčného činidla na lahko detekovateínú označenú substanciu. Výhodnejšie môže byť detekcia urobená s použitím ELISA alebo RIA alebo imunofluorescenčného testu. Techniky použité pri takýchto metódach detekcie sú odborníkom v odbore dobre známe.
V ELISA je napríklad antigén, v tomto prípde tTG, naviazaný priamo alebo nepriamo na nosič ako je napríklad I I * polystyrén. Po inkubácii s detekovanou protilátkou, napríklad zo séra pacientov, sú protilátky naviazané na antigén detekované priamo alebo nepriamo pomocou substancií s naviazaným enzýmom. Týmito substanciami môžu byť protilátky, fragmenty protilátok alebo vysokoafinitné ligandy, ako je avidín, ktorý sa viaže na biotínovú značku. Ako enzýmy možno použiť napríklad peroxidázu, alkalickú fosfatázu, Ä -galaktosidázu, ureázu alebo glukózaoxidázu. Naviazané enzýmy a tak aj naviazané protilátky, môžu byť kvantifikované, napríklad pomocou pridania chromogénneho substrátu.
V RIA je antigén, napríklad tTG, naviazaný podobne priamo alebo nepriamo na nosič, ako je napríklad polystyrén. Po inkubácii s detekovanou protilátkou, napríklad zo séra pacientov, sú protilátky naviazané na antigén, detekované pomocou rádioaktívne označených substancií, napríklad substancií označených I125. Týmito substanciami môžu byt protilátky, fragmenty protilátok alebo vysokoafinitné ligandy, ako je avidín, ktorý sa viaže na biotínovú značku. Naviazaná rádioaktivita môže byť kvantifikovaná pomocou vhodného meracieho prístroja.
V imunofluorescenčnom teste sú protilátky naviazané na antigén detekované podlá rovnakého princípu pomocou fluorescenčného činidla označených substancií, napríklad substancií označených fluoresceín-izotiokyanatánom /FITC/. Týmito substanciami môžu byť protilátky, fragmenty protilátok alebo vysokoafinitné ligandy, ako je avidín, ktorý sa viaže na biotínovú značku. Množstvo naviazaného fluorescenčného farbiva je potom kvantifikované pomocou vhodného meracieho prístroja.
I
Podlá predkladaného vynálezu je tiež možno detekovať protilátky u pacienta v aglutinačnom teste alebo v teste gélovej difúzie. Tieto detekčné testy sú tiež odborníkom v odbore dobre známe. Tak v teste gélovej difúzie je roztok antigénu alebo protilátok, napríklad umiestnený do tesne sosediacich jamôk agaru alebo agarozových platní. V tomto prípade môže byť roztok antigénu napríklad roztok tTG a roztok protilátky môže byť napríklad krvné sérum. Keď substancie difundujú preč zo svojich jamiek, tvoria sa koncentračné gradienty od jemiek. Ak prekrývajúce sa koncentrácie protilátky a antigénu v géli spadajú do špecifických pomerov a roztok protilátky obsahuje protilátku proti antigénu, potom sa v géli tvoria detekovatelné zrazeniny.
V aglutinačnom teste sú častice nesúce antigén /napríklad tTG/, vyrobené napríklad z latexu alebo polystyrénu, krížene viazané s protilátkami, napríklad zo séra. Tvorené agregáty môžu byť detekované napríklad pomocou turbidimetrickej analýzy.
Podľa predkladaného vynálezu je hlavne výhodné realizovanie detekcie v sére pacientov so sprue pomocou IgA-špecifickej alebo IgG špecifickej ELISA. Bolo zistené, že novo vyvinutá detekcia IgA protilátok v sére pacientov so sprue pomocou ELISA založenej na tTG sa výnimočne dobre hodí na diagnostiku a kontrolu terapie sprue vdtaka svojej vysokej senzitivite a špecificite. Táto skutočnosť je tiež jasná pri sledovaní liečených pacientov /pokles titru počas terapie/. Porovnávanie dát z ELISA podľa predkladaného vynálezu s imunofluorescenčným hodnotením tretích osôb /detekcia IgA anti-endomýzium/ vykazuje dobrú, konformitu. Nezhody sa vyskytujú hlavne pri nízkom titre protilátok, no sú dôsledkom toho, že nepriama fluorecsencia bola doposiaľ považovaná za vrcholný štandard. Okrm iného je toto spôsobené subjektivitou hodnotenia a nešpecifickými súbežnými reakciami, ktoré sa vyskytujú pri tejto skoršej v odbore známej techniky.
Zodpovedajúca detekcia založená na protilátkach iných tried, napríklad IgG protilátkach, je vhodná na identifikáciu sprue u pacientov s deficitom IgA a na vyšetrovanie iných ochorení spojených s imunitnou reakciou proti tTG.
Iné vylepšenie tejto detekčnej techniky je dosiahnuté pri použití prečistenej tTG od morčiat, ľudskej tTG, sekvencií alebo analógov získaných proteolýzou alebo genetickým spracovaním, rovnako ako pri použití syntetických imunogénnych tTG peptidov v testovacom systéme. ELISA na diagnostiku a sledovanie iných ochorení spojených s imunitnou reakciou proti tTG bude opísaný v príklade 3.3.
Vynález je tiež zameraný na orálny farmaceutický prostriedok podľa nároku 10 na liečbu ochorení spojených s imunitnou reakciou proti tTG, zlúčenimám obsahujúcim tTG, jeho antigénnym štruktúram, imunoreaktívnym sekvenciám alebo analógom. Výhodne je prostriedok na orálne podanie tableta alebo kapsula, kedy je orálna tolerancia vytvorená podávaním tTG, zlúčenín obsahujúcich tTG alebo jeho antigénnych štruktúr, imunoreaktívnych sekvencií alebo analógov. Na jednej strane je uvedená orálna tolerancia dosiahnutá orálnym podávaním autoantigénu a na druhej strane tu existuje takzvaný príbuzný efekt: ak je autoantigén indukujúci ochorenie neznámy, potom môže byt v niektorých prípadoch v orálnej terapii použitý iný antigén kontaktujúci imunitný systém v'Cieľovom orgáne. Tento antigén je potota schopný lokálnej stimulácie supresorových T buniek špecifických pre antigén, čo vedie k potlačeniu systémovej imunitnej odpovede. Len vyššie dávky antigénu indukujú anergiu autoreaktívnych T buniek.
Orálna tolerancia je praktický spôsob na liečbu rôznych autoimunitných ochorení.
Farmaceutické činidlo podľa predkladaného vynálezu je výhodne použité pri liečbe sprue, ale môže sa tiež použiť pre iné chronické zápalové črevné ochorenia a autoimunitnú hepatitídu.
Podľa predkladaného vynálezu sú tTG zlúčeniny, obsahujúce tTG, jeho antigénne štruktúry, imunoreaktívne sekvncie alebo analógy v dávke 0,01 - 100 mg/kg telesnej hmotnosti.
I
Farmaceutické činidlá podľa predkladaného vynálezu môžu prípadne obsahovať farmaceutický prijateľné pomocné činidlá, ako sú plnidlá, klzné činidlá, činidlá podporujúce rozpadavosť, pojivá alebo činidlá upravujúce uvoľňovanie, ako používané vo farmácii. Pomer farmaceutických činidiel môže byť rôzny, podľa vybraného obsahu činidla a v každom prípade je od 0,1 % do 20 % su bežne pomocných aktívneho hmotnosti.
Konkrétne, výhody doiahnuté pomocou predkladaného vynálezu je možno pozorovať v detekčnom teste pre sprue a na kontrolu terapie sprue, kde tento test je neinvázivný, vysoko
I * špecifický a je zameraný priamo na činidlo spojené s ochorením. Ďalej je hlavná výhoda tohto vyvinutého testu je tá, že je rýchly, ľahký a lacný, rovnako ako to, že existuje možnosť štandardizácie medzi rôznymi laboratóriami. Preto test umožňuje účinné vyšetrovanie populácie na prítomnosť protilátok proti tTG.
Také potenciálne kvantitatívne hodnotenie je pre objektivitu dát získaných v teste, lepšie v porovnaní s hodnotením pomocou imunofluorescencie, ktoré obsahuje subjektívnu zložku. Okrem toho, imunofluorescenčné hodnotenie je, hlavne pri nízkych titroch, ovplyvnené nežiadúcim spôsobom nešpecifickými súbežnými reakciami. Pri použití špecifického autoantigénu v teste môžu byť v najvyššej možnej miere eliminované nešpecifické reakcie na materiáli, získanom z pažeráka primátov alebo pupočníka.
Pretože test je použiteľný na triedu IgA protilátok, rovnako ako na iné triedy protilátok, sú tiež identifikovaní pacienti s deficitom IgA. Detekcia založená na protilátkach proti tTG je tiež vhodná na identifikáciu, vyšetrovanie a kontrolu terapie iných ochorení spojených s imunitnou reakciou proti tTG.
Tiež je možné - dôsledkom identifikácie tTG ako autoantigénu pri sprue - použiť tento autoantigén alebo jeho imunoreaktívne epitopy /sekvencie, analógy alebo syntetické peptidy produkované proteolýzou alebo genetickým spracovaním/ v orálnej terapii sprue a iných ochorení spojených s imunitnou reakciou proti tTG.
Príklady realizácie vynálezu
Príklad 1 - Izolácia a charakterizácia autoantigénu
1.1. Imunofluorescenia, APAAP farbenie
Farbenie bolo robené na rôznych bunečných líniách fixovaných v 100 % metanoeu počas 2 minút pri - 20 °c.
Pri imunofluorescentnej detekcii boli prípravky inkubované so sérom od pacientov so sprue a s kontrolným sérom v príslušnom poradí, boli premyté a urobila sa detekcia pomocou TRITC-značenej králičej protilátky proti ľudskému IgA /Schuppan et al.,J.Biol.Chem. 1990, 265: 8823 - 32/.
Značenie APAAP bolo urobené po inkubácii buniek so sérom od pacientov so sprue, po premytí a následnej detekcii pomocou APAAP komplexu /Cordell, J.L.et.al., J.Histochem. Cytochem. 1984, 32: 219 - 229/.
V týchto testoch vykazujú HT1080 /bunky ľudského fibrosarkomu/, WI138 /ľudské pľúcne embryonálne fibroplasty/, Hepl a Hep2 /bunky hepatocelulárneho karciómu/ rovnaké pozitívne cytopiazmatické signály zo sérami od pacientov, pokiaľ normálne séra alebo séra dopredu ošetrené ľudským IgA nevykazujú žiadne označenie. Ľudské fibroplasty predkožky, ľudské radbomyosarkomové bunky /RD/ krysie Ito/krysí Morris hepatómovej a psej MDCK bunky vykazovali len veľmi slabé až negatívne reakcie.
1.2. Metabolické značenie buniek a imunoprecipitácia > autoantigénu
Charakterizácia a izolácia autoantigénu bola urobená pomocou HT10780 buniek.
Bunky boli kultivované s L-alanyl-L-glutamínom, 10 % fetálnym teľacím sérom /FCS, Gibco/, 100 U/ml penicilínu a 100 Aig/ml streptomycínu /Seromed/ v Dulbecco modifikovanom Eagle médiu /DMEM, Gibco/ pri 37°C a 8 % C02· Pre metabolické značenie boli bunky prenesené na kultivačné platne o priemere 5 cm a po dosiahnutí asi 90 % konfluencie boli uchovávané v médiu bez metionínu a FCS a potom bolo médium nahradené 3 ml média bez FCS, ktoré obsahovalo 35S-metionín /0,2 mCi. Expre3^s35S/ NEN-Dupont/. Po 16 - 20 hodinách inkubácie bol odstránený supernatant. Bunky boli premyté fosfátovým pufrom /PBS, Seromed/ a potom boli lyzované v 3 ml lyzačného pufru /50 mM tris-HCl, 150 mM NaCl, 0,5 % Tritón X-100, 0,5 %IGEPAL CA-630 neionického detergenčného činidla /Sigma/, CompleteR inhibítora proteas /Boehringer/ , pH 7,5/. Potom bola urobená imunoprecipitácia pomocou CNBr-aktivovanej Separoza 4B /Pharmacia/ako v médiu, tak v lyzáte buniek.
Aktivácia a väzba na Separózu bola urobená podlá návodu výrobcu. Po napučaní a premytí v 1 mM HC1, pH 2,5 bola Separóza aktivovaná CNBr inkubovaná s králičou protilátkou proti ľudskému IgA /Dianova, 2,4 mg protilátky na ml Separózy/ v 0,1 M NaHCO3 0,5 M NaCl, pH 8,3 pri 4° C cez noc. Nenaviazané protilátky boli odstránené premytím vo väzobnom pufri a neobsadené väzobné miesta boli nasýtené pridaním 1 M etanolamínu, pH 9,0, pri izbovej teplote, 2 hodiny. Potom bola Separóza premytá 3x striedavo /každý raz lOx objemom/ 0,1 M octanom sodným, 0,5 M NaCl, pH 4,0 a 0,1 M Tris-HCl, 0,5 M NaCl, pH 8,0 a potom nasledovala inkubácia Separózy so r sérami od pacientov so sprue a od zdravých osôb, vo väzobnom pufri /50 mM Tris- HC1, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2 1 mM MgCl2, pH 8,0 / pri teplote 4°C cez noc. Nadbytok sérových protilátok bol odstránený trojitým premytím väzobným pufrom.
Každý raz bol 1 ml HT1080 média alebo lyzátu buniek /približne 5 x 104 buniek/ metabolický značených buniek inkubovaný s 50 /11 C14B Separózy /Pharmacia/ počas 30 minút pri izbovej teplote, na odstránenie nešpecifický sa viažúcich proteínov. Po centrifugácii /10000 x g, 5 minút, 4° C / bol každý spernatant inkubovaný za trepania pri 4° C cez noc s 50 /ul Separózy, na ktorú boli dopredu naviazané IgA od pacientov a kontrolných osôb.
Pelety separózy boli potom premyté každý premývacieho pufru /10 mM Tris-HCl, 1 % /Sigma/, 0,5 % deoxycholátu sodného, 0,1 raz 3 x 1 ml IGEPAL CA-630 % laryl síranu sodného. Complete1* /Boehringer/ pH 8,0 / a potom 1 ml 10 mM Tris-HCl pH 8,0. Potom boli pelety umiestnené do SDS testovacieho pufru, boli inkubovaná počas 5 minút pri 95 °C za redukčných alebo neredukčných podmienok, bola urobená separácia na 10 - 12,5 % SDS polyakrylamidovom géli /Lammli. U.K., Náture 1970, 227: 680 - 685/ a bola urobená detekcia pomocou autorádiografie /obr. 1/.
V ďalšom vyšetrovaní bolo zistené, že proteín s vysokou molekulovou hmotnosťou naviazaný v médiu je fibronektín, ktorý okrem iného je nešpecifický naviazaný na Separózu.
No s bunkami asociovaný proteín o hmotnosti 80 kDa môže byť vyzrážaný týmto spôsobom zo všetkých 30 doteraz použitých sér od pacientov so sprue, no nemôže byť vyzrážaný z 15 kontrolných sér, včítane normálnych sér, sér od pacientov s Colitis ulcerosa a Sjorgenovým syndrómom. Z tejto skutočnosti
I bol vyvodený záver, že tento proteín predstavuje základný autoantigén pri sprue.
Pomocou proteínového farbenia gélov pmocou dusičnanu strieborného /Henkenshoven, J. et al., Electroforesis 1985, 6: 103 - 112/ , bol tenký proteínový prúžik priradený k autorádiograficky viditelnému 85 kDa prúžiku.
1.3. Izolácia a prečistenie 85 kDA autoantigénu
Na izoláciu väčšieho množstva autoantigénu bolo kultivované celkom 65 kultivačných platní /každá 175 cm2/ s HT1080 bunkami. Krátku dobu pred dosiahnutím konfluencie bolo médium nahradené médiom bez FCS a potom nasledovala inkubácia počas ďalších 16 - 20 hodín v C02 inkubátore. Lýza a imunoprecipitácia, v príslušnom poradí, boli urobené technikami opísanými vyššie. Sepharosová peleta bola inkubovaná v celkovo 4,5 ml SDS testovacieho pufru s 2 % DL-ditiotreitolom /Sigma / ppčas 5 minút pri 95 °C. na oddelenie naviazaných proteínov a potom bola vyšetrovaná v analytickom SDS polyakrylamidovom géli.
Na ďalšie prečistenie autoantigénu bola imunozrazenina separovaná pomocou vylučovacej elektroforézy nasledujúcim spôsobom, pri použití Prep Celí /Model 491 BIO-RAD /: 4,5 ml proteínovej zmesi bolo umiestnené na vrchol okrúhleho gélu /vonkajší priemer : 3 cm/ ktorý sa skladal z 6,5 cm separačného gélu / 8 % polyakrylamid, pH 8,8 / a 1,5 cm odberového gélu /4 % polyakrylamid, pH 6,8 / a bola urobená separácia pomocou elektroforézy. Jednotlivé proteíny boli odoberané vo vymývacom pufre /25 mM Tris-HCl, 0,1 M glycín, 0,01 % SDS, pH 8,3 / ako frakcia po 1,2 ml /0,8 ml/min/.'
Eluované frakcie boli vyšetrované obsahujúce požadovaný proteín v SDS-PAGE a frakcie boli kombinované a koncentrovali sa na celkový objem približne 1 ml pomocou ultrafiltrácie /Amicon Centriprep-50, pri 1000 x g /.
1.4. Trávenie autoantigénu proteázou
Z niekoľkých testovaných proteáz bola určená endoproteináza Asp-N /sekvenčnej čistoty,Boehringer Mannheim / ako vhodná proteáza pre fragmentáciu, pretože umožňuje významným spôsobom reprodukovatelný charakter štiepenia s relatívne dobre separovateínými fragmentárni. Koncentrácia enzým/substrát bola upravená na 1 : 100 a trávenie bolo urobené počas 30 minút pri 37 °C.
1.5. Prenos na PDVF membránu
Po trávení prečisteného antigénu boli peptidové fragmenty separované na preparatívnom 10% Tricine géli /Schagger, H.et al., Anál.Biochem.1987, 166: 368 - 379/, /obr. 2/ a boli prenesené pri 4°C na PVDF membránu /polyvinylidendifluorid, Immobilon ™ , Millipore/ semi-suchou fastbolť1 technikou pri použití elektródových platní obsahujúcich grafit /Fastblot B32/33, Biometra/. Na anódovú dosku boli umiestnené nasledujúce vrstvy: 1/ filtračný papier namočený v anódovom pufri 1 /300 mM Tris-HCl, 20% metanol, pH 10,4/, 2/ filtračný papier namočený v anódovom pufri 2/30 mM tris-HCl, 20 % metanol, pH 10,4/,3/ PVDF membrána aktivovaná v metanole a uvedená do rovnováhy v anódovom pufri 2, 4 / Tricine gél, 5/ dva filtračné papiere namočené v katódovom pufri /25 mM Tris-HCl, 40 mM kyselina -amíno-n-kaprónová, 20 % metanol, pH 9,4/,6/ katódová doska. Prenos bol urobený počas 35 minút pri 180 mA.
Potom bola PVDF membrána farbená v 0,1 % Coomassie Blue Serva R-250, 50 % metanolu počas 5 minút, bola odfarbená 50 % metanolom, 10% kyselinou octovou, bola dôkladne premytá destilovanou vodou a bola sušená vzduchom. Charakteristické prúžiky tráveného autoantigénu o 10 kDa, 16 kDa a 25 kDa boli starostlivo vystrihnuté a bolo urobené prvé sekvencovanie na N konci.
1.6. Edmanova degradácia /Podľa Edman a Henschen: Needleman, S.B., Protein Sequence Determination, Springer Verlag, Berlín, 1975, 232 279/.
Sekvencovanie za použitia Applied Biosystems 4778Sequenator viedlo k zisku troch amínokyselinových sekvencií, ktoré boli porovnávané so Swiss Prot 31 databázou /pomocou PC/GENES, IntelliGenetics/. Z tohto porovnávania mohlo byt s minimálnym nesúladom urobené priradenie troch fragmentov k ľudskej tkanivovej transglutamináze /tTG, EC 2.3.2.13,proteín glutamín 7^glutamyltransferáza/. Dôkazy sú uvedené pomocou jednopísmenného kódu; X znamená neidentifikované:
t- Transglutamináza: 28 - REKLWRRGQPWF kDa fragment : REKLWRRGQPF /S/ t-Transglutamináza: 581 - DLYLENPEIKIRILG kDa fragment : DLYLENPEIXIXILG t-Transglutamináza: 438 -DITHTYKYPE kDa fragment : DITLTYQYP /V/
Žiadna nejednoznačná sekvencia nemohla byt priradená k 25 kDa fragmentu, pretože tento fragment bol peptidovou zmesou.
Príklad 2- Potvrdenie tkanivovej transglutaminázy /tTG/ ako autoantigénu pri sprue
2.1. Imunoprecipitácia morčacej tTG
Pretože je komerčne dostupná a má homológiu sekvencie /? 80%/ s ľudskou tTG , bola tTG z pečene morčiat /Sigma/ najskôr separovaná gélovou elektrofoézou, na overenie jej čistoty. Okrem dfalších niekolko iných proteínov predstavuje tTG, približne s 50%, jeden z hlavných prúžikov.
Hoci sa ľudská tTG majúca 687 aminokyselín líši od morčacieho proteínu majúceho 690 aminokyselín len mierne, vykazujú tieto dva proteiny značne odlišné migračné charakteristiky v SDS polyakrylamidovom géli. Pokiaľ proteín zvieracieho pôvodu sa objaví v 75 - 80 kDa, ako sa očakáva, ľudský proteín má významne pomalšiu migráciu zodpovedajúcu molekulovej hmotnosti 85 kDa, ako je opísané v literatúre /Gentile,V. et al., J.Biol.Chem. 1991, 266: 487 - 483/, aj napriek zjavne chýbajúcej N-glykosylácii.
Reaktivita ľudskej autoprotilátky zo séra pacientov so sprue z morčacej tTG bola testovaná v imunoprecipitačnom teste. V tomto teste sa 4 ^ig tTG /Sigma/ v 500 zil lyzačného pufru a 0,5 % hovädzí sérový albumín mixovali pri 4°C cez noc s IgA od pacientov so sprue naviazaným na 4B Separózu, premyli sa, uviedli sa do varu v SDS testovacom pufri za redukčných podmienok a separovali sa na 10 % polyakrylamidovom géli /cf., 4.1.2./ Tu sa vyskytovalo špecifické vyzrážanie očakávaného prúžika /m.h. 80 kDa/, ale žiadne vyzrážanie kontaminujúcich zložiek.
2.2. Potvrdenie tTG ako autoantigénu vo Wester blot teste
Po separácii 2 ug morčacej tTG na SDS géli a po prenose do nitrocelulózy bola škvrna blokovaná v PVS, 2 %nízkotučnom odstredenom mliečnom prášku, 0,3 % Tween 20, pH 7,3, pri 4 °c cez noc. Potom nasledovala 1 hodinová inkubácia so sérom od pacientov so sprue /1/200/ v rovnakom pufri, tri kroky premytia a jednohodinová inkubácia s králičími protilátkami proti ľudskému IgA s naviazanou alkalickou fosfatázou / 1/500 /. Škvrny boli premyté v PBS a vyvíjali sa Nitro Blue Tetrazolium a 5-bróm-4-chlór-3-indolyfosfátu ako substrátu /Blake,M.S- et al., Anál.Biochem. 1984, 136: 175 - 179/.
- 80 kDa prúžik dával jednoznačne pozitívny signál so sérom od pacientov so sprue, čo je ďalším dôkazom, že sérum pacientov so sprue obsahuje protilátky triedy IgA proti tTG, pokiaľ kontrolne séra nedávali žiaden . signál.
2.3. Potvrdenie tTG ako endomyziálneho autoantigénu pomocou nepriamej fluorescencie
Tkanivové rezy z pažeráka od primátov /Euroimmun, Germany/ boli použité v nepriamej detekcii IgA protilátok proti endomýziu v sére od pacientov so sprue a pri preukázaní ich inhibície tTG. Po pre-inkubácii 10 /ul séra od pacientov riedeného 1/320 v PBS s 0,5 alebo 10 yug tTG od morčiat /Sigma/ a 10 /ig BSA /Sigma/ počas 1 hodiny pri teplote miestnosti bola ich inkubácia s uvedenými rezmi hrtana urobená počas 1 hodiny pri teplote miestnosti v zvlhčenej atmosfére. Sérum od pacientov so sprue / 1/320 / a sérum od zdravých jedincov / 1/50 / bolo použité ako pozitívna a negatívna kontrola,v príslušnom poradí. Po trojitom premytí rezov v PBS/0,2 % BSA a sušenie vzduchom bola urobená detekcia autoantigénu ľudskému IgA /Dianova/, 1 hodiny pri teplote odstránený destilovanou
TRITC-značenou králičou protilátkou proti ktorá bola riedená 1/50 v PBS, počas miestnosti. Nadbytok premytím PBS/0,2 % postupným vodou.
protilátky BSA, PBS bol pacientov triedy IgA, vykazovalo jasné kde toto farbenie farbenie bolo inhibované
ECM
Sérum od prot i1átkami pridaním stúpajúcich koncentrácií tTG, ale nie pre-inkubáciou s BSA. Kontroly využívajúce séra od zdravých jedincov nevykazovali akékoľvek farbenie rezov pažeráka.
Príklad 3 - Vývoj ELISA špecifického pre sprue s IgA protilátkami pre diagnostiku a sledovanie sprue * ’ r ' l/ig morčacej transglutaminázy /Sigma T-5398/ a 100 /ul PBS bolo pipetou vnesené do každej jamky polystyrénových mikroplatní /Greiner Labortechnik, 96 jamiek/ a bola urobená inkubácia počas 2 hodín pri 37 °C za mierneho rotačného pohybu. Nenaviazaná tTG bola odstránená premytím v PBS / 3 x 200 yúl / a volné väzobné miesta v jamkách boli blokované 1% hovädzím sérovým albumínom /Sigma / v 250 /11 PBS pri 4° C cez noc. Po premytí PBS /0,1 % Tween 20 / 3 x 200 yul / boli jamky inkubované s postupnými riedeniami séra v PBS / 0,1 % Tween / 100/ul / počas hodiny pri teplote miestonsti za mierneho rotačného pohybu, boli premyté PBS /0,1 % Tween 20 / 3 x 200 /ul / a potom bola urobená inkubácia králičou protilátkou proti ludskému IgA konjugovanou s peroxidázou /Dianova / 1/400 v 100 /11 PBS/Tween 20/ počas 1 hodiny pri teplote miestonsti. Po premytí PBS / 3-krát/ bola urobená minútová inkubácia pri teplote miestnosti v tme, pomocou 200 /ul 0,1 M citrátového pufru, 17,6 mM H2O2, 5,5 mM o-fenyléndiamínhydrochloridu /Sigma/, pH 4,2 a následná detekcia vytvoreného zafarbenia v ELISA čítači / MRX, Dynatech, Laboratories / pri 450 nm.
sér od pacientov so sprue bolo testované pred a po liečbe bezlepkovou diétou, t.j. v aktívnej a neaktívnej fáze ochorenia. Bolo zistené, že test je vysoko senzitívny, s dobrou koreláciou Terapeutický úspech odrazil v znížení s hodnotami aktívnej fáze sprue. ako výsledok dodržiavania diéty sa IgA protilátok proti tTG. Vysoká senzitivita bola jasná pri nízkej extincii / základnej hladiny/ kontrolných sér od zdravých jedincov, od pacientov s colitis ulcerosa, pečeňovou cirhózou, rôznymi nádormi, Sjorgenovým syndrómom atď. /obr. 3/.
3.2. Vývoj ELISA diagnostiku protilátkami využívajúceho protilátky iných tried na ' ‘1 a sledovanie sprue, napríklad
IgG % pacientov so sprue má deficit IgA, boli senzitivitu a špecificitu IgG protilátok test
3.1., len peroxidázou ľudskému IgG zodpovedali bezlepkovej protilátok.
bol urobený rovnakým spôsobom ako v proti ľudskému bola nahradená
Pretože asi 2 séra testované na proti tTG. ELISA protilátka /Dianova/ /Dianova /. S prihliadnutím hodnoty od pacientov so diéte hodnotám získaným
IgA s naviazanou protilátkou proti na ich senzitivitu sprue pred a po pri použití IgA z kontrolných sér vykazovali mierne zvýšené
Niektoré hodnoty, čo zodpovedá zisteniam získaným skôr, že špecificita protilátok proti endomýziu je redukovaná v nepriamej imunofluorescencii triedy IgG /obr. 4 /.
3.3. Vývoj ELISA testu pre diagnostiku a sledovanie iných ochorení spojených s imunitnou reakciou proti tTG, napríklad protilátkami triedy IgG
ELISA test bol urobený rovnakým spôsobom ako v 3.2.
pacientov s chronickými zápalovými alebo ochoreniami /Colitis ulcerosa /C.U./, Crohnova autoimunitná hepatitída / vykazovala mierne zvýšené hodnoty.
Séra od autoimunitnými , choroba, akútna až stredne
Tak je pomocou IgG špecifického ELISA testu na autoprotilátky proti tTG možná diagnostika a kontrola terapie u pacientov trpiacich chorobami spojenými s imunitnou reakciou proti tTG.
* I ·
Príklad 4 - Nová funkcia tkanivovej transglutaminázy /tTG/ v skríženej väzbe gliadínu
Hoci je pre reakcie katalyzovenej tTG dostupné široké spektrum akceptorov acylovej skupiny, len niekoľko molekúl môže pôsobiť ako donor acylovej skupiny. V in vitro pokuse môže byť stanovená tTG sprostredkovaná inkorporácia rádioaktívne označeného putresceínu do gliadínu a tak funkcia gliadínu ako donorového substrátu tTG. V 160 )ul pufri /0,1 M Tris-HCl, 150 mM NaCl,5mM CaCl2 pH 7,5 / boli 1 yug substrátu /gliadínu alebo kontrolných proteínov ako je albumín, / 2 /j C i /3H/-putresceínu a 1 jug tTG / z morčiat, Sigma/ inkubované počas ,2 hodín pri 37. °C. Reakcia bola ukončená pridaním 100 ul 50% kyseliny trichlórovej /TCA/ a proteíny boli zrážané pri 4 °C cez noc.Po centrifugácii boli pelety premyté 10 % TCA, boli rozpustené v SDS testovacom pufre a buď boli separované v SDS-PAGE, alebo boli použité pri scintilačnom odčítaní. Pokiaľ žiadna inkorporácia putresceínu nemohla byť určená pri kontrolách, vykazoval gliadín jasnú inkorporáciu /3H/-putresceínu ako pri scintilačnom odčítaní, tak v ► SDS-PAE, čo je dôkazom, že gliadín je výborným substrátom pre tTG.
Skratky:
Ab : protilátka
APAAP: alkalická fosfatáza anti-alkalická fosfatáza
BSA: hovädzí sérový albumín cm: centimeter
DMEM: Dulbeccovo modifikované Eagle médium
EC: enzýmové spracovanie
ELISA: enzýmovo viazaný imunosorbentný test
ECM: extracelulárny matrix
FCS: fetálne telacie sérum h: hodina h2°2: Peroxid vodíka
HLA: ludské lymfocytárne antigény
IEL: intraepitelové lymfocyty
Ig: imunoglobulín kDa: kilodalton · 1
M: mol mA: mi1iampér
MHC: hlavný histokompatibilný komplex min: minúta mM: milimól
Mr: relatívna molekulová hmotnosť ug: mikrogram ul: mikroliter
PAGE: polyakrylamidová élová elektrofosforéza
PBS: fosfátový pufer
PLA2: fosfolipáza A2
PVDF: polyvinylidendifluorid
SDS: dodecyl síran sodný
TCA: kyselina trichlóroctová
TGF: transformujúci rastový faktor
Tris: Tris/hydroxymetyl/amínometán tTG: tkanivová transglutamináza
Claims (10)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Spôsob pre imunologickú vyznačujúci sa tý identifikáciu celiakie, m, že anti-tTG protilátky v telesných kvapalinách sú detekované imunoreakciou s tkanivovou transglutaminázou /tTG/, so zlúčeninami obsahujúcimi tTG, s jej antigénnymi štruktúrami, jej imunoreaktívnymi sekvenciami alebo analógami.
- 2. Spôsob podlá nároku 1, tým, že sú detekované ľudské vyznačujúci sa IgA alebo IgG protilátky.
- 3. Spôsob podľa nároku 1 alebo 2 vyznačujúci sa t ý m, že tTG alebo zlúčeniny obsahujúce tTG sú ľudského, zvieracieho, syntetického alebo' ŕekombinantného pôvodu.
- 4. Spôsob podľa akéhokoľvek z nárokov 1 až 3 vyznačujúci sa tým, že detekcia je urobená pomocou známeho imunotestu, výhodne s priamym alebo nepriamym naviazaním jedného reaktantu na dobre detekovateľnú značiacu substanciu.
- 5. Spôsob podľa nároku 4,vyznačujúci sa tým, že detekcia je urobená na pevnej fáze.
- 6. Spôsob podľa nároku 4, vyznačujúci sa tým, že detekcia je urobená pomocou ELISA, RIA alebo imumofluorescenčného testu.
- 7.Použitie tTG, zlúčenín obsahujúcich tTG, ich antigénnych štruktúr, ich imunoreaktívnych sekvencií alebo analógov v diagnostike a kontrole terapie autoimunitných ochorení.
- 8. Použitie podlá nároku 8 pre diagnostiku a kontrolu terapie celiakie.
- 9. Orálny farmaceutický prostriedok obsahujúci tTG, zlúčeniny obsahujúce tTG, jej anigénne štruktúry, jej imunoreaktívne sekvencie alebo analógy a volitelne farmaceutický prijatelné pmocné činidlo na liečbu celiakie.' * i • » » t 1 1
- 10. Použitie zlúčenín obsahujúcich tTG, ich antigénnych štruktúr, ich imunoreaktívnych sekvencií alebo analógov na výrobu orálnych farmaceutických prostriedkov na liečbu celiakie.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19630557A DE19630557C2 (de) | 1996-07-18 | 1996-07-18 | Verfahren zum Nachweis von Antikörpern aus Körperflüssigkeiten durch eine Immunreaktion mit Gewebe-Transglutaminase (tTG) sowie die Verwendung von tTG in Diagnose und Therapie |
| PCT/EP1997/003740 WO1998003872A2 (de) | 1996-07-18 | 1997-07-14 | IMMUNOLOGISCHES NACHWEISVERFAHREN VON ANTIKÖRPERN, DIE GEGEN GEWEBE-TRANSGLUTAMINASE (tTG) GERICHTET SIND, VERWENDUNG VON tTG ZUR DIAGNOSE UND THERAPIEKONTROLLE SOWIE ORALES PHARMAZEUTISCHES MITTEL ENTHALTEND tTG |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK6799A3 true SK6799A3 (en) | 2000-05-16 |
| SK284410B6 SK284410B6 (sk) | 2005-03-04 |
Family
ID=7801172
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK67-99A SK284410B6 (sk) | 1996-07-18 | 1997-07-14 | Spôsob in vitro diagnostiky a kontroly liečenia sprue alebo celiakie a orálny farmaceutický prostriedok na liečenie týchto chorôb |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6319726B1 (sk) |
| EP (1) | EP0912898B1 (sk) |
| CN (1) | CN1138146C (sk) |
| AT (1) | ATE210296T1 (sk) |
| AU (1) | AU718797B2 (sk) |
| BR (1) | BR9710500B1 (sk) |
| CA (1) | CA2260769C (sk) |
| CZ (1) | CZ291662B6 (sk) |
| DE (2) | DE19630557C2 (sk) |
| DK (1) | DK0912898T3 (sk) |
| ES (1) | ES2131038T3 (sk) |
| GR (1) | GR990300020T1 (sk) |
| HK (1) | HK1021025A1 (sk) |
| HU (1) | HU228479B1 (sk) |
| IL (1) | IL128042A (sk) |
| NO (1) | NO321466B1 (sk) |
| NZ (1) | NZ333744A (sk) |
| PL (1) | PL189091B1 (sk) |
| PT (1) | PT912898E (sk) |
| SI (1) | SI9720044B (sk) |
| SK (1) | SK284410B6 (sk) |
| WO (1) | WO1998003872A2 (sk) |
Families Citing this family (38)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999056698A2 (en) * | 1998-05-06 | 1999-11-11 | Københavns Universitet | Treatment of celiac disease |
| WO2001001133A2 (en) * | 1999-06-28 | 2001-01-04 | Immundiagnostik Ag | Diagnosis of gluten sensitive enteropathy and other autoimmunopathies |
| US6703208B1 (en) | 1999-10-20 | 2004-03-09 | Immco Diagnostics | Immunological assay for detection of antibodies in celiac disease |
| WO2001029090A1 (en) * | 1999-10-20 | 2001-04-26 | Immco Diagnostics | Immunological assay for detection of antibodies in celiac disease |
| CU22968A1 (es) * | 2000-06-07 | 2004-07-14 | Ct Ingenieria Genetica Biotech | Procedimiento para la detección de anticuerpos anti transglutaminasa con utilidad en el diagnóstico de la enfermedad celíaca |
| GB0103024D0 (en) * | 2001-02-07 | 2001-03-21 | Rsr Ltd | Assay for Autoantibodies to tissue transglutaminase |
| FI20010868A0 (fi) | 2001-04-25 | 2001-04-25 | Markku Maeki | Menetelmä ja välineet gluteenin indusoimien tautien havaitsemiseksi |
| KR100488131B1 (ko) * | 2001-07-07 | 2005-05-06 | (주)푸드바이오테크 | 알레르기 진단용 단백질 칩과 알레르기 유발원의 검출방법 및 알레르기 유발 항체의 검출 방법 |
| GB0117870D0 (en) * | 2001-07-21 | 2001-09-12 | Univ Nottingham Trent | Method of diagnosis and kit of parts therefor |
| ES2361993T5 (es) * | 2002-02-14 | 2014-12-09 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Tratamiento con enzimas de productos alimenticios para celiaquía |
| US7320788B2 (en) * | 2002-02-14 | 2008-01-22 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Enzyme treatment of foodstuffs for Celiac Sprue |
| US8143210B2 (en) * | 2002-02-14 | 2012-03-27 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Enzyme treatment of foodstuffs for celiac sprue |
| US7202216B2 (en) * | 2002-05-14 | 2007-04-10 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Drug therapy for celiac sprue |
| AU2003234597A1 (en) * | 2002-05-14 | 2003-12-02 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Drug therapy for celiac sprue |
| US7462688B2 (en) * | 2002-05-14 | 2008-12-09 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Peptides for diagnostic and therapeutic methods for celiac sprue |
| US7265093B2 (en) * | 2002-05-14 | 2007-09-04 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Drug therapy for Celiac Sprue |
| EP1563300B1 (en) | 2002-11-20 | 2012-04-18 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Diagnostic method for celiac sprue |
| US7579313B2 (en) | 2003-11-18 | 2009-08-25 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Transglutaminase inhibitors and methods of use thereof |
| US7534426B2 (en) * | 2004-04-26 | 2009-05-19 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Glutenase enzyme assays |
| US7563864B2 (en) * | 2004-04-26 | 2009-07-21 | Celiac Sprue Research Foundation | Prolyl endopeptidase mediated destruction of T cell epitopes in whole gluten |
| US7628985B2 (en) * | 2004-04-26 | 2009-12-08 | The Board Of Regents Of The Leland Stanford Junior University | Therapeutic enzyme formulations and uses thereof in celiac sprue and/or dermatitis herpetoformis |
| US20080038760A1 (en) * | 2004-06-08 | 2008-02-14 | Method For Decting Anti-Transglutaminase Antibodies | Method for Detecting Anti-Transglutaminase Antibodies |
| US20090305303A1 (en) * | 2006-07-25 | 2009-12-10 | Cecile Besson Duvanel | immunochromatography device for the diagnosis of diseases in a sample |
| AU2008209176B2 (en) * | 2007-01-26 | 2013-01-31 | Ga Generic Assays Gmbh | Method for assaying antibodies in body fluids by immune reaction with glycoprotein 2 (GP2) from zymogenic granules of the pancreas for the differential diagnosis of inflammatory intestinal diseases and chronic pancreatitis |
| BRPI0808987A2 (pt) * | 2007-03-16 | 2014-09-09 | Univ Leland Stanford Junior | Terapia combinatória de enzima para digestão de glúten dietético |
| ATE511651T1 (de) | 2007-04-06 | 2011-06-15 | Zedira Gmbh | Transglutaminase 6 als diagnostischer indikator für autoimmunerkrankungen |
| HU0900199D0 (en) * | 2009-04-01 | 2009-06-29 | Debreceni Egyetem | Diagnosis of gluten-induced autoimmune diseases |
| FR2949782B1 (fr) * | 2009-09-04 | 2015-10-16 | Isp Investments Inc | Peptide activateur de la transglutaminase et composition cosmetique ou pharmaceutique le contenant. |
| WO2013119845A1 (en) | 2012-02-07 | 2013-08-15 | Vibrant Holdings, Llc | Substrates, peptide arrays, and methods |
| EP2839290B1 (de) | 2012-04-17 | 2019-03-06 | Aeneas GmbH & Co. KG | Verfahren zur präsymptomatischen diagnostik von zöliakie und glutensensitivität |
| DE102012007510A1 (de) | 2012-04-17 | 2013-10-17 | Aesku.Diagnostics GmbH & Co. KG | Verfahren zur Präsymptomatischen Diagnostik von Zöliakie und Glutensensitivität |
| US10006909B2 (en) | 2012-09-28 | 2018-06-26 | Vibrant Holdings, Llc | Methods, systems, and arrays for biomolecular analysis |
| US10286376B2 (en) | 2012-11-14 | 2019-05-14 | Vibrant Holdings, Llc | Substrates, systems, and methods for array synthesis and biomolecular analysis |
| CA2923379C (en) | 2013-02-15 | 2023-01-03 | Vibrant Holdings, Llc | Methods and compositions for amplified electrochemiluminescence detection |
| CN104090102B (zh) * | 2014-06-13 | 2016-08-17 | 江南大学 | 冷冻鱼糜中微生物谷氨酰胺转胺酶elisa检测方法 |
| CA2960655C (en) * | 2014-09-10 | 2024-03-19 | Vibrant Holdings, Llc | Peptide microarrays and novel biomarkers for celiac disease |
| US10538808B2 (en) | 2017-05-26 | 2020-01-21 | Vibrant Holdings, Llc | Photoactive compounds and methods for biomolecule detection and sequencing |
| CN110055235A (zh) * | 2019-05-14 | 2019-07-26 | 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 | 用于转谷氨酰胺酶抗体检测的抗原及其制备方法、试剂盒及检测方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL155894B1 (en) * | 1987-12-23 | 1992-01-31 | Przed Zagraniczne W Polsce Pla | Test for assessing gluten-dependent enteropathies |
| DE3829524A1 (de) * | 1988-08-31 | 1990-03-01 | Behringwerke Ag | Verwendung von transglutaminasen als immunsuppressiva |
| DE19520480C2 (de) | 1995-06-03 | 1997-04-30 | Univ Leipzig | Immunochemisches Testmaterial und Enzymimmunoassay zur Diagnostik von Zöliakie und verwandten Eiweißintoleranzen |
| US5716794A (en) * | 1996-03-29 | 1998-02-10 | Xybernaut Corporation | Celiac antigen |
-
1996
- 1996-07-18 DE DE19630557A patent/DE19630557C2/de not_active Revoked
-
1997
- 1997-07-14 DE DE59705683T patent/DE59705683D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-14 PL PL97331203A patent/PL189091B1/pl unknown
- 1997-07-14 IL IL128042A patent/IL128042A/en not_active IP Right Cessation
- 1997-07-14 BR BRPI9710500-7A patent/BR9710500B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1997-07-14 WO PCT/EP1997/003740 patent/WO1998003872A2/de active IP Right Grant
- 1997-07-14 NZ NZ333744A patent/NZ333744A/xx not_active IP Right Cessation
- 1997-07-14 PT PT97939994T patent/PT912898E/pt unknown
- 1997-07-14 CA CA002260769A patent/CA2260769C/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-14 AT AT97939994T patent/ATE210296T1/de active
- 1997-07-14 AU AU42011/97A patent/AU718797B2/en not_active Expired
- 1997-07-14 CN CNB971965269A patent/CN1138146C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-14 SI SI9720044A patent/SI9720044B/sl unknown
- 1997-07-14 EP EP97939994A patent/EP0912898B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-14 DK DK97939994T patent/DK0912898T3/da active
- 1997-07-14 HU HU0202779A patent/HU228479B1/hu unknown
- 1997-07-14 ES ES97939994T patent/ES2131038T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-14 SK SK67-99A patent/SK284410B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1997-07-14 CZ CZ1999117A patent/CZ291662B6/cs not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-01-01 GR GR990300020T patent/GR990300020T1/el unknown
- 1999-01-13 US US09/229,716 patent/US6319726B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-01-15 NO NO19990190A patent/NO321466B1/no not_active IP Right Cessation
- 1999-12-22 HK HK99106049A patent/HK1021025A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-08-08 US US09/925,076 patent/US20020076834A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SK6799A3 (en) | Immunological process for detecting antibodies directed towards tissue transglutaminase (ttg), use of ttg for diagnostic purposes and therapy control, and oral pharmaceutical agent containing ttg | |
| Sárdy et al. | Epidermal transglutaminase (TGase 3) is the autoantigen of dermatitis herpetiformis | |
| Esposito et al. | Anti-tissue transglutaminase antibodies from coeliac patients inhibit transglutaminase activity both in vitro and in situ | |
| EP2395100B1 (en) | Novel diagnostic marker for type 1 diabetes mellitus | |
| Babazono et al. | Altered expression and subcellular localization of diacylglycerol-sensitive protein kinase C isoforms in diabetic rat glomerular cells. | |
| US9334487B2 (en) | Methods for diagnosing rheumatoid arthritis | |
| Oberauer et al. | EGFL6 is increasingly expressed in human obesity and promotes proliferation of adipose tissue-derived stromal vascular cells | |
| US20120083423A1 (en) | Biomarkers, Methods and Kits for the Diagnosis of Rheumatoid Arthritis | |
| Preisz et al. | Immunoglobulin, complement and epidermal transglutaminase deposition in the cutaneous vessels in dermatitis herpetiformis | |
| EP2161284A1 (en) | Citrulinated fibrin-filaggrin chimeric polypeptide capable of detecting the antibodies generated in rheumatoid arthritis | |
| Leung et al. | Osteopontin fragments with intact thrombin-sensitive site circulate in cervical cancer patients | |
| Karska et al. | Calreticulin-the potential autoantigen in celiac disease | |
| WO2023109384A1 (zh) | 去唾液酸糖蛋白受体片段sH2a作为标志物的应用 | |
| Van De Water et al. | The role of T cells in primary biliary cirrhosis | |
| Iismaa | The prostate-specific protein, transglutaminase 4 (TG4), is an autoantigen associated with male subfertility | |
| Pelli et al. | Argininosuccinate lyase: a new autoantigen in liver disease | |
| Eydoux et al. | Human pancreatic lipase-related protein 2: tissular localization along the digestive tract and quantification in pancreatic juice using a specific ELISA | |
| US8808980B2 (en) | Stabilized open form transglutaminase as a diagnostic indictor for autoimmune diseases | |
| EP2757373A1 (en) | Method for measuring anti-wt1 antibody | |
| Mamone et al. | Immunogenic peptides can be detected in whole gluten by transamidating highly susceptible glutamine residues: implication in the search for gluten-free cereals | |
| US6703208B1 (en) | Immunological assay for detection of antibodies in celiac disease | |
| US11340235B2 (en) | GP2 isoforms and their use in autoantibody capture | |
| WO2001029090A1 (en) | Immunological assay for detection of antibodies in celiac disease | |
| WO2019015814A1 (en) | USE OF CHITINASE-3 PROTEIN-1 (CHI3L1) AS AUTO-ANTIGEN IN AUTOIMMUNE DISORDERS OF THE DIGESTIVE SYSTEM |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK4A | Patent expired |
Expiry date: 20170714 |