SK51098A3 - Device and apparatus for the simultaneous detection of multiple analytes - Google Patents
Device and apparatus for the simultaneous detection of multiple analytes Download PDFInfo
- Publication number
- SK51098A3 SK51098A3 SK510-98A SK51098A SK51098A3 SK 51098 A3 SK51098 A3 SK 51098A3 SK 51098 A SK51098 A SK 51098A SK 51098 A3 SK51098 A3 SK 51098A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- substrate
- ligands
- organosilane
- sample
- analyte
- Prior art date
Links
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title description 21
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 88
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 58
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 30
- 150000001282 organosilanes Chemical class 0.000 claims abstract description 21
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims abstract description 13
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims abstract description 13
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims abstract description 13
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims abstract description 7
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims abstract description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 3
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- 239000010703 silicon Substances 0.000 claims abstract description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract 2
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 47
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 claims description 32
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 31
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 20
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 19
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 17
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 13
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 13
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 12
- 239000004816 latex Substances 0.000 claims description 9
- 229920000126 latex Polymers 0.000 claims description 9
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 claims description 8
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 claims description 7
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 claims description 7
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 7
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229910010293 ceramic material Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 5
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims description 4
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 4
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 claims description 4
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000004065 semiconductor Substances 0.000 claims description 4
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 claims description 2
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 claims description 2
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 claims description 2
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 2
- 238000000151 deposition Methods 0.000 claims 2
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 claims 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 claims 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 abstract description 29
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 28
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 8
- BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N Silane Chemical compound [SiH4] BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 6
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 abstract description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000007815 allergy Effects 0.000 abstract description 2
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 abstract 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 abstract 1
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 23
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 20
- FDDDEECHVMSUSB-UHFFFAOYSA-N sulfanilamide Chemical compound NC1=CC=C(S(N)(=O)=O)C=C1 FDDDEECHVMSUSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 18
- 102000003946 Prolactin Human genes 0.000 description 10
- 108010057464 Prolactin Proteins 0.000 description 10
- 229940097325 prolactin Drugs 0.000 description 10
- -1 p-chlorosulphonylphenyl Chemical group 0.000 description 9
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 8
- 150000003456 sulfonamides Chemical class 0.000 description 8
- WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N (3-aminopropyl)triethoxysilane Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)CCCN WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 7
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 6
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 6
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 5
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 5
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical group O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PJSFRIWCGOHTNF-UHFFFAOYSA-N Sulphormetoxin Chemical compound COC1=NC=NC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=C1OC PJSFRIWCGOHTNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 229920002120 photoresistant polymer Polymers 0.000 description 4
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 4
- GECHUMIMRBOMGK-UHFFFAOYSA-N sulfapyridine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC=N1 GECHUMIMRBOMGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960002211 sulfapyridine Drugs 0.000 description 4
- UVGHPGOONBRLCX-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-[5-(2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl)pentanoylamino]hexanoate Chemical compound S1CC2NC(=O)NC2C1CCCCC(=O)NCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O UVGHPGOONBRLCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 3
- 208000033962 Fontaine progeroid syndrome Diseases 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 239000012965 benzophenone Substances 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 3
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 description 2
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 2
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012351 Integrated analysis Methods 0.000 description 2
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 2
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 2
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 2
- 239000003263 anabolic agent Substances 0.000 description 2
- 229940070021 anabolic steroids Drugs 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- RWCCWEUUXYIKHB-UHFFFAOYSA-N benzophenone Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)C1=CC=CC=C1 RWCCWEUUXYIKHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000008366 benzophenones Chemical class 0.000 description 2
- 229940125388 beta agonist Drugs 0.000 description 2
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 238000002038 chemiluminescence detection Methods 0.000 description 2
- KRVSOGSZCMJSLX-UHFFFAOYSA-L chromic acid Substances O[Cr](O)(=O)=O KRVSOGSZCMJSLX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 125000003700 epoxy group Chemical group 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- AWJWCTOOIBYHON-UHFFFAOYSA-N furo[3,4-b]pyrazine-5,7-dione Chemical compound C1=CN=C2C(=O)OC(=O)C2=N1 AWJWCTOOIBYHON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 238000002161 passivation Methods 0.000 description 2
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000206 photolithography Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 description 2
- 230000000552 rheumatic effect Effects 0.000 description 2
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 201000009032 substance abuse Diseases 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 2
- 238000012876 topography Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- AQLJVWUFPCUVLO-UHFFFAOYSA-N urea hydrogen peroxide Chemical compound OO.NC(N)=O AQLJVWUFPCUVLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CSFLLVUCUISNAZ-UHFFFAOYSA-N (dimethoxyamino)oxymethane Chemical compound CON(OC)OC CSFLLVUCUISNAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GFNDFCFPJQPVQL-UHFFFAOYSA-N 1,12-diisocyanatododecane Chemical compound O=C=NCCCCCCCCCCCCN=C=O GFNDFCFPJQPVQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SWJPEBQEEAHIGZ-UHFFFAOYSA-N 1,4-dibromobenzene Chemical compound BrC1=CC=C(Br)C=C1 SWJPEBQEEAHIGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFMWZTSOMGDDJU-UHFFFAOYSA-N 1,4-diiodobenzene Chemical compound IC1=CC=C(I)C=C1 LFMWZTSOMGDDJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GVJXGCIPWAVXJP-UHFFFAOYSA-N 2,5-dioxo-1-oxoniopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound ON1C(=O)CC(S(O)(=O)=O)C1=O GVJXGCIPWAVXJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PFDBEACWLCHWRZ-UHFFFAOYSA-N 2-(4-bromophenyl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)C(C)C1=CC=C(Br)C=C1 PFDBEACWLCHWRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QOWSWEBLNVACCL-UHFFFAOYSA-N 4-Bromophenyl acetate Chemical compound OC(=O)CC1=CC=C(Br)C=C1 QOWSWEBLNVACCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PQXPAFTXDVNANI-UHFFFAOYSA-N 4-azidobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1 PQXPAFTXDVNANI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZRYZBQLXDKPBDU-UHFFFAOYSA-N 4-bromobenzaldehyde Chemical compound BrC1=CC=C(C=O)C=C1 ZRYZBQLXDKPBDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TUXYZHVUPGXXQG-UHFFFAOYSA-N 4-bromobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(Br)C=C1 TUXYZHVUPGXXQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006283 4-chlorobenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1Cl)C([H])([H])* 0.000 description 1
- BRLRJZRHRJEWJY-VCOUNFBDSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-n-[3-[3-(4-azido-2-nitroanilino)propyl-methylamino]propyl]pentanamide Chemical compound C([C@H]1[C@H]2NC(=O)N[C@H]2CS1)CCCC(=O)NCCCN(C)CCCNC1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1[N+]([O-])=O BRLRJZRHRJEWJY-VCOUNFBDSA-N 0.000 description 1
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 101100341170 Caenorhabditis elegans irg-7 gene Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000003846 Carbonic anhydrases Human genes 0.000 description 1
- 108090000209 Carbonic anhydrases Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BVTJGGGYKAMDBN-UHFFFAOYSA-N Dioxetane Chemical compound C1COO1 BVTJGGGYKAMDBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000030914 Fatty Acid-Binding Human genes 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000007390 Glycogen Phosphorylase Human genes 0.000 description 1
- 108010046163 Glycogen Phosphorylase Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 208000019695 Migraine disease Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- YGYAWVDWMABLBF-UHFFFAOYSA-N Phosgene Chemical compound ClC(Cl)=O YGYAWVDWMABLBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010034960 Photophobia Diseases 0.000 description 1
- 229920002556 Polyethylene Glycol 300 Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 102000013394 Troponin I Human genes 0.000 description 1
- 108010065729 Troponin I Proteins 0.000 description 1
- 102000004987 Troponin T Human genes 0.000 description 1
- 108090001108 Troponin T Proteins 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GKXVJHDEWHKBFH-UHFFFAOYSA-N [2-(aminomethyl)phenyl]methanamine Chemical compound NCC1=CC=CC=C1CN GKXVJHDEWHKBFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000004026 adhesive bonding Methods 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002876 beta blocker Substances 0.000 description 1
- 229940097320 beta blocking agent Drugs 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 1
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 1
- 125000004057 biotinyl group Chemical class [H]N1C(=O)N([H])[C@]2([H])[C@@]([H])(SC([H])([H])[C@]12[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 238000007707 calorimetry Methods 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 239000005081 chemiluminescent agent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000001427 coherent effect Effects 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000011243 crosslinked material Substances 0.000 description 1
- MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N cyanuric chloride Chemical compound ClC1=NC(Cl)=NC(Cl)=N1 MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- FFYPMLJYZAEMQB-UHFFFAOYSA-N diethyl pyrocarbonate Chemical compound CCOC(=O)OC(=O)OCC FFYPMLJYZAEMQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002050 diffraction method Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- LIKFHECYJZWXFJ-UHFFFAOYSA-N dimethyldichlorosilane Chemical compound C[Si](C)(Cl)Cl LIKFHECYJZWXFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JMLPVHXESHXUSV-UHFFFAOYSA-N dodecane-1,1-diamine Chemical compound CCCCCCCCCCCC(N)N JMLPVHXESHXUSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003640 drug residue Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 229920006332 epoxy adhesive Polymers 0.000 description 1
- 125000001301 ethoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])O* 0.000 description 1
- RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N ethyl chloroformate Chemical compound CCOC(Cl)=O RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 108091022862 fatty acid binding Proteins 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical group O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001030 gas--liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 231100001261 hazardous Toxicity 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000005661 hydrophobic surface Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- LFKYBJLFJOOKAE-UHFFFAOYSA-N imidazol-2-ylidenemethanone Chemical compound O=C=C1N=CC=N1 LFKYBJLFJOOKAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 208000021267 infertility disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 1
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 208000013469 light sensitivity Diseases 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000001592 luteinising effect Effects 0.000 description 1
- JMZFEHDNIAQMNB-UHFFFAOYSA-N m-aminophenylboronic acid Chemical compound NC1=CC=CC(B(O)O)=C1 JMZFEHDNIAQMNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 206010027599 migraine Diseases 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- NWLSIXHRLQYIAE-UHFFFAOYSA-N oxiran-2-ylmethoxysilicon Chemical compound [Si]OCC1CO1 NWLSIXHRLQYIAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003854 p-chlorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C([H])C([H])=C1Cl 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 150000002960 penicillins Chemical class 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000005498 polishing Methods 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012048 reactive intermediate Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 238000002444 silanisation Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 231100000736 substance abuse Toxicity 0.000 description 1
- 208000011117 substance-related disease Diseases 0.000 description 1
- XOXHILFPRYWFOD-UHFFFAOYSA-N sulfachloropyridazine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)NC1=CC=C(Cl)N=N1 XOXHILFPRYWFOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002597 sulfamerazine Drugs 0.000 description 1
- QPPBRPIAZZHUNT-UHFFFAOYSA-N sulfamerazine Chemical compound CC1=CC=NC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=N1 QPPBRPIAZZHUNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005158 sulfamethizole Drugs 0.000 description 1
- VACCAVUAMIDAGB-UHFFFAOYSA-N sulfamethizole Chemical compound S1C(C)=NN=C1NS(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=C1 VACCAVUAMIDAGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VLYWMPOKSSWJAL-UHFFFAOYSA-N sulfamethoxypyridazine Chemical compound N1=NC(OC)=CC=C1NS(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=C1 VLYWMPOKSSWJAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004936 sulfamethoxypyridazine Drugs 0.000 description 1
- 229960001544 sulfathiazole Drugs 0.000 description 1
- JNMRHUJNCSQMMB-UHFFFAOYSA-N sulfathiazole Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)NC1=NC=CS1 JNMRHUJNCSQMMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 229940040944 tetracyclines Drugs 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- ZWZVWGITAAIFPS-UHFFFAOYSA-N thiophosgene Chemical compound ClC(Cl)=S ZWZVWGITAAIFPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005490 tosylate group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004506 ultrasonic cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/551—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being inorganic
- G01N33/552—Glass or silica
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S977/00—Nanotechnology
- Y10S977/902—Specified use of nanostructure
- Y10S977/904—Specified use of nanostructure for medical, immunological, body treatment, or diagnosis
- Y10S977/924—Specified use of nanostructure for medical, immunological, body treatment, or diagnosis using nanostructure as support of dna analysis
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/24—Nuclear magnetic resonance, electron spin resonance or other spin effects or mass spectrometry
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Measurement Of The Respiration, Hearing Ability, Form, And Blood Characteristics Of Living Organisms (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Description
Zariadenie a prístroj pre súčasnú detekciu viacnásobných analytov
Oblasť techniky
Vynález sa týka zariadenia a prístroja pre súčasnú detekciu viacnásobných analytov.
DoterajSi stav techniky
Tradične sa analyty s rôznou štruktúrou analyzovali pomocou prostriedkov zvláštnych metód, napríklad skúškou enzýmov na imunitu kvapalnou chromatografiou s veľkým výkonom, plynovou chromatografiou, enzymatickými metódami a kalorimetriou. Tieto uvedené metódy predstavujú predovšetkým metódy pre jeden analyt a metódy pre jednu skúšku.
Automatizácia analytických metód sa obecne zamerala na dávkové analyzátory a analyzátory s náhodným prístupom, kde sa viacnásobná analýza jednotlivých testovaných vzoriek uskutočňuje pomocou sekvenčných individuálnych testovacích metód. Tieto metódy si nutne vyžadujú niekoľkonásobné balíky testovacieho vybavenia. Okrem toho, analýza vyžaduje použitie niekoľkých typov vybavenia, napríklad klinických chemických analyzátorov, HPLC, GCMS, automatizovaných prístrojov pre skúšanie imunity enzýmov alebo prístrojov k absorpcii atómov.
Multianalytný systém by mal zahrňovať prostriedky pre súčasnú analýzu niekoľko analytov v skúšobnej vzorke. Analýza by mala poskytovať výsledky, ktoré by identifikovali jednotlivé analyty a umožňovali kvantifikáciu jednotlivých analytov v skúšobnej vzorke. Metódy analýzy viacnásobných analytov sa nárokujú veľmi Často, ale dané kritériá nie sú často splnené. V multianalytnom systéme zahrňuje typická
-2podkladová vrstva (substrát) množstvo individuálnych miest reakcie na test, každej z nich s rôznou väzbou ligandu. Testovacia vzorka kontaktuje každú reakčnú zónu, čím sa pre identifikáciu prítomného analytu zavádza istý rozsah detekčných techník. Dôležité je, že používané detekčné metódy umožňujú kvantifikáciu každého analytu.
Pre vytvorenie multianalytného zoskupenia priestorové odlišných oblastí biologicky aktívnych ligandov na substráte, sa obvykle používa fotolitografická technika. Substrát sa pokryje fotograficky labilným spojovacím materiálom. Podľa doterajšej teórie by tento spojovací materiál mal byť, po ožiarení svetlom vhodnej vlnovej dĺžky, reaktívny len na väzobné ligandy. Priestorové rozloženie sa dosahuje umiestnením fyzickej masky (obvykle vyrobenej z chrómu) na podkladovú vrstvu. Vzorka vytvorená otvormi v maske určujú vzorku väzobných oblastí na substráte.
Pre znehybnenie každého biologického ligandu je stanovený obecný postup: ožiarenie prvých miest, inkubácia ožiarenej podkladovej vrstvy s prvým ligandom, ktorý sa má znehybniť, umývanie za účelom odstránenia ligandov s voľnou väzbou, blokovanie nereagujúcich miest aktivovaných v kroku ožarovania, ožarovanie oblastí, v ktorých sa má znehybniť druhý biologický ligand, a to v krokoch opakovaných rovnako ako u prvého ligandu. Priestorové rozmiestnenie je dané ovládaním miesta rozhrania ožiarenia, a to buď to ovládaním miesta ožiarenia, pomocou prostriedkov zdroja koherentných UV lúčov laseru, alebo pomocou fyzických masiek a zdroja nekohorentného žiarenia. Tento spôsob znehybňovania množstva biologických ligandov je príliš náročný na čas. Ďalšou nevýhodou fotolitografického postupu je nutnosť použiť nákladné fyzické masky alebo zdroje laserových lúčov. Okrem toho tu existuje mnoho nešpecifických väzieb.
Napríklad použitie arylazidov, fluoro-arylazidov a benzofenónov bolo spojené s vysokým stupňom nešpecifických
-3väzieb. Vysoká nešpecifická väzba mala za následok vysoké pozadie kvantitatívneho rozboru, čo významne zredukovalo dynamický rozsah multianalytného rozboru. Vznik nešpecifických väzieb je zapríčinený pasívnou absorpciou molekúl do neaktivovaného fotolabilného povrchu spojovacieho materiálu prostredníctvom iontových interakcií, Van der Waalsových síl atď.
WO-A-95116204 popisuje použitie fotolitografie k obmedzeniu problému spojeného s vysoko nešpecifickými väzbami. U tohto postupu bol povrchovou väzobnou molekulou avidin a fotolabilnou molekulou bol fotobiotin alebo jeho derivát.
Nakoľko sa nárokuje redukovaná nešpecifická väzba, vyžaduje táto technika, pri realizácii jednotlivých už popísaných sekvencií, príliš mnoho času. Znehybnenie dvadsiatych samostatných biologických ligandov vyžaduje celkove 80 krokov pri predpokladanej základnej, požiadavke na ožarovanie, viazanie, blokovanie a umývanie každého samostatného znehybňovaného ligandu.
Priestorové rozmiestnenie sa takisto dosiahlo pasívnou adsorpciou. Napríklad U.S. A-5432099 uvádza postup viazania, pri ktorom sa ligand viaže k povrchu podkladového materiálu pomocou kombinácie iónových interakcií, hydrofóbnych interakcií a Van der Waalsových síl. Procesy pasívnej adsorpcie sú závislé na zmenách pH, teplote, iónovej pevnosti a na použitom podkladovom materiáli, čo zneul'ahčuje riadenie procesu viazania. Hlavným nedostatkom tohto postupu je citlivosť na pomer slabo znehybnených ligandov, ktoré sa mali disorbovať počas umývacieho procesu alebo inkubačného kroku biologickej skúšky, čo má za následok malú presnosť v rámci skúšky a medzi skúškami.
Materiálom s krížovou väzbou, uvádzaným v mnoho publikáciách, je glutaraldehyd. Tento materiál má mnoho nevýhod vrátane tendencie proteínov sa krížové viazať, čo
-4pravdepodobne zmení funkciu proteínu. Ďalšou nevýhodou je to, že spojovacia procedúra by mala zahrňovať redukčný krok, čo vyžaduje značné množstvo času a je takisto veľmi hazardným krokom napríklad vtedy, ak sa použije ako redukčná látka sodium kyanonborohydrid. Používali sa takisto heterobifunkčné väzebné materiály, ale v mnoho prípadoch to znamenalo použiť pre väzbu na proteín voľné sulphydrylové skupiny. Vyžaduje to uskutočniť, pred procesom znehybnenia, modifikáciu proteínu.
Pri multianalytnom rozbore je žiadúce poskytnúť ako kvalitatívne, tak i kvantitatívne výsledky. Multianalytné rozbory boli k dispozícii napríklad pre antibiotika. Tieto rozbory sú založené na rozbor mikróbovej pasivácie, keď prítomné antibiotikum vo vzorke bráni bakteriálnemu rastu a tvorí zónu čistenia, ktorá zodpovedá koncentrácii antibiotík prítomných vo vzorke. Tento spôsob však nedokáže identifikovať identitu antibiotika, alebo presné určenie jeho koncentrácie. Spôsoby mikróbovej pasivácie sú takisto veľmi pomalé a celý proces trvá i niekoľko dní.
Spôsoby chemického sledovania, napríklad vysoko účinná kvapalná chromatografia, alebo hmotová spektrometria plynovéj/kvapalnej chromatografie (GCMS/LCMS) sa snaží poskytnúť extrémy štrukturálnej rôznosti/polarity každej skupiny antibiotík, napríklad penicilínu, sulphonamidov, amidoglykocidov, tetracyklínov atď. Okrem toho chromatografické metódy vyžadujú rozsiahlu prípravu vzorky, tak aby pomer signál/hluk bol taký, aby sa dosiahlo potrebného detekčného limitu.
Dostupné zariadenia pre multianalyty zahrňujú Triage (viď Cliniqal Chemistry 38(9):1678-1684 (1992)) a Advisor (viď Clinical Chemistry 39(9):1899-1903 (1993)). Tieto zariadenia sú vhodné len pre kvalitatívnu analýzu.
Zariadenie Triage slúži pre súčasnú detekciu panelu siedmych látok obsiahnutých v ľudskom moči. Každé zariadenie
-5je schopné analyzovať len jednu vzorku v moči. Na konci procedúry, obsluha vizuálne preskúmaná každú testovaciu zónu vzorky látky na prítomnosť červeného prúžku. Každý krok uskutočňujúceho rozboru musí obsluha uskutočňovať ručne. K dispozícii nie je trvalá kópia výsledku rozboru.
Zariadenie Advisor je, pokiaľ ide o použitie, podobné zariadeniu Triage. Zariadenie Advisor snímkuje pät rôznych tried zneužívaných látok. Prístroj pracuje na princípoch rozboru aglutinácie a používa pre každú látku jeden kanál. Všetky kroky rozboru uskutočňuje obsluha. Negatívne vzorky majú aglutinované (vyzrážané) častice, zatiaľ čo pozitívne vzorky látok poskytujú neagregované častice vzoriek.
Väčšina biosenzorových zariadení v mikrouskutočnení, pre biologické aplikácie, používajú ako podkladový materiál silikón. Iné používajú sklo alebo kremičité podkladové materiály. Silikón má veľmi usporiadanú kryštalografickú s dobre definovanými kryštálovými rovinami, silikónového podkladového materiálu je ideálna pre vývoj testovacieho zariadenia pre multianalyty.
Tmavé podkladové materiály, napríklad silikóny, pôsobia tzv. jav čierneho telesa. V prípade detekcie pomocou fluorescencie, pri ktorej je použitím svetla konkrétnej vlnovej dĺžky vybudený fluorofor, môže tmavý podkladový materiál absorbovať vybudenú svetelnú energiu, čo môže spôsobiť zníženie emisie svetla z fluoroforu.
štruktúru
Jednotnosť vlastnosť
Podstata vynálezu
Podľa tohto vynálezu zahrňuje zariadenie určené pre rozbor multianalytov podkladový materiál a mnohonásobné nespojité reakčné miesta, kde každé miesto je nositeľom ligandu kovalentne spojeného
- substrátom a v ktorých je s podkladovým materiálom substrát medzi reakčnými
-6miestami, pokiaľ ide o analyty, inertný. Tento vynález tak poskytuje polovodičové multianalytné zariadenie, ktoré vykazuje malú alebo nešpecifickú väzbu.
Zariadenie podľa tohto vynálezu sa môže pripraviť aktiváciou povrchu vhodné substráty a aplikáciou zoskupenia ligandov nespojitých miestach povrchu. Pokiaľ sa to bude požadovať môžu sa ostatné aktívne oblasti blokovať. Ligandy sa môžu aplikovať vo vodnom systéme, pričom sa dáva prednosť tomu, aby ostatné oblasti boli hydrofóbne. Ligandy sa môžu na podkladovú vrstvu viazať spojovacieho prvku, najmä sa dáva prednosť tomu aby aktivovaný povrch úspešne reagoval s organosilanom, bifunkčným spojovacím prvkom a ligandom.
Ako súčasť tohto vynálezu sa použili bifunkčné krížové spojovacie prvky, ktoré by poskytovali vysoko efektívne spojovacie, chemické látky medzi organosilany kovalentne znehybnelými na silikónových alebo keramických podkladových vrstvách s mikroštruktúrou. Biologické ligandy tak môžu byť znehybnené v multianalytných zoskupeniach.
Tento vynález odstraňuje potrebu používať viacnásobnú
A individuálnu reagenčnú testovaciu súpravu a takisto nástroje rôzneho typu, čím sa zjednodušuje súčasná detekcia viacnásobnej analýzy na jednej vzorke. Vynález poskytuje jeden integrovaný analyzačný prístroj schopný uskutočňovať súčasnú detekciu širokého rozsahu chemických látok. Okrem toho sa môžu dodávať testovacie reagenty v kombinovanom formáte, a to pre konkrétny panel analytov.
Časťou tohto vynálezu je proces znehybnenia množstva biologických ligandov do priestorové definovaných vzorov, tvorených bodmi alebo čiarami, a to pomocou mikrofluidného rozmiestnenia ligandov na chemicky aktivovanú podkladovú vrstvu (substrát). Biologický ligand je kovalentnou väzbou pripojený k substrátu. Účinnosť spojenia biologického ligandu môže byt taká, že chemická reakcia môže byt dokončená behom niekoľko minút. Procedúra znehybnenia môže
-Ίzaistiť to, že si biologický ligand ponechá svoju biologickú aktivitu ako počas krátkej doby, tak i počas dlhšej doby.
Vynález takisto poskytuje integrovaný systém analýzy pre súčasnú detekciu širokého rozsahu analytov v multianalytnom formáte. Systém analýzy je navrhnutý tak, aby bol maximálne výhodný pre koncového užívateľa a pre získanie multianalytnej identifikácie a kvantifikácie z každej testovanej vzorky. Systém analýzy, ktorému sa dáva prednosť, je kombinácia prenášania v plošine X-Y, jednotky manipulácie so vzorkou, prostriedku manipulácie a riadenia toku kvapaliny, čiernej skrinky ovládanej teploty, CCD kamery a softwaru procesu zobrazovania. Plošina môže byť pripojená ku krokovému motoru z dôvodu dosiahnutia presného nastavenia zariadenia do polohy v rozmedzí 10 μτη, a to v každom stupni analytickej procedúry.
Prehľad obrázkov na výkrese
Na pripojených výkresoch:
obr.l znázorňuje vytváranie neuniformného povrchu podkladovej vrstvy (substrátu), obr.2 znázorňuje chemickú aktiváciu skupín na povrchu substrátu, obr.3,5 a 6 znázorňuje kovalentné znehybnenie ligandov na povrchu substrátu obr.4 znázorňuje použitie častíc latexu na povrchu substrátu, obr.7-11 znázorňuje zariadenie pre pripojenie čipov, ktoré sú stelesnením tohto vynálezu, obr. 12-.14 schematicky znázorňuje systém, ktorý je vhodný pre analýzu zariadenia podľa tohto vynálezu, obr.15 znázorňuje kalibračné krivky analytov skúmaných pomocou prostriedkov tohto vynálezu.
-8Priklady uskutočnenia vynálezu
Podkladová vrstva používaná v zariadení podľa tohto vynálezu, môže byť zhotovená napríklad zo silikónu, kryštálov kremíka, skla alebo keramického materiálu. Keramický substrát (oxid hliníka) poskytuje vynikajúcu alternatívu k substrátu zo silikónu, nakoľko sa u obidvoch dajú úspešne použiť fluorescenčné a chemiluminiscenčné detekčné techniky. Toto zistenie bolo neočakávané, lebo kryštalografia keramických materiálov z nich nečinila okamžitých kandidátov pre výrobu substrátu.
Keramický substrát sa môže vyrábať tak, aby poskytoval veľkosť zrna v rozmedzí 1- 30 μτα. Veľkosť častíc keramického substrátu podľa tohto vynálezu je menšia ako 20 μτα, lepšie menšia ako 10 μτα. Redukovaná veľkosť častíc poskytuje mnoho lepšiu povrchovú uniformitu, ktorá poskytuje vyššiu výkonnosť biologickej skúšky. Ďalšími dôležitými rysmi keramického substrátu sú napríklad tolerancia povrchovej topografie, pórovitosť, vákuová tesnosť a nulová absorpcia vody.
Keramický materiál, ktorému sa dáva prednosť, sa skladá z 94% hliníka (Al 0 s časticami o veľkosti v rozmedzí 4-8 pri vákuu a rozomletý má μτα. Uniformita povrchu sa sa tým získal povrch μτα. Materiál poskytuje tesnosť povrchovú topografiu 0,6 až 0,8 môže zlepšiť leštením, aby s premenlivosťou povrchu 0,05-0,1 /zm.
Výkonnosť niektorých keramických substrátov je závislá na charakteristikách veľkosti zrna. Najlepšieho rozboru sa dosiahlo u keramického materiálu s veľkosťou zrna substrátu nad 8 μτα, napríklad 4-8 μτα. Výsledky u materiálu s vyššou veľkosťou zrna neboli uspokojivé. Keramický substrát s veľkosťou zrna približne l μτα nepreukázal zlepšené výsledky pri porovnaní s výsledkami dosiahnutými pri veľkosti zrna 4-8 μτα. Je to výhodné zistenie, pretože cena
-9materiálu s malou veľkosťou zrna je o mnoho vyššia (približne päťkrát).
Vhodné silikônové substráty sa vyrábajú s filmom oxidu, ktorý má presnú hrúbku, to znamená s toleranciou ±2 nm u lOOnm filmu oxidu. Tento film môže mať hrúbku 50-500 nm,lepšie menej ako 200 nm, najlepšie okolo 100 nm.
Substrát môže byt zhotovený ako časť polovodičového zariadenia vyrábaného mikrotechnickým spôsobom, ktoré bolo vyvinuté pre panelové cesty širokého rozsahu pre veterinárne a klinicko diagnostické aplikácie. Každé polovodičové zariadenie má sústavu reakčných oblastí. Každá reakčná oblasť je špecifikovaná pre jednotlivý analyt. Reakčná oblasť môže existovať vo forme bodu, kanálu, jamky, priehlbne alebo komôrky. Reakčné oblasti sa vytvárajú znehybnením biologických molekúl na substráte.
Zariadenie podľa tohto vynálezu má plochu nad 1 cm2. Plocha každého reakčného miesta bude obvykle menšia ako lmm2.
Kompaktný substrát je vyrobený tak, aby poskytoval t
zložitú sieť otvorov, komôrok, kanálikov, priehlbní, jamiek a pod. Výhodné takisto bude vytvorenie stípkov vo vnútri kanálikov alebo priehlbní. Také nepravidelnosti môžu pomôcť k dosiahnutiu maximálnej interakcie plochy povrchu medzi viazanými biologickými ligandami a testovacími činidlami, čo značne znižuje inkubačnú dobu konkurenčných imunitných rozborov a podobne i sendvičových imunitných rozborov.
Ako alternatíva, alebo ako dodatok k jamkám alebo kanálikom na silikónovom alebo keramickom substráte, môže byť povrch vyrobený prostriedkami mikrotechniky tak, aby vznikli miesiace komôrky/nádržky/kanálky s obsahom nanolitrov alebo mikrolitrov. Silikónový povrch sa najprv oxiduje tak, aby vytvoril vrstvu oxidu. Nanesie sa fotorezistentná vrstva, z ktorej sa vytvára požadovaná vzorka. Po vytvorení vzorky na vrstve oxidu sa
-10fotorezistentná vrstva odstráni. Silikón sa ďalej leptá pomocou HF a odstráni sa film oxidu. Nakoniec film oxidu rovnomerne narastá po celej silikónovej membráne.
Vysvetlujúci proces je znázornený na obr.l. V kroku (i) je silikónová membrána okysličovaná, aby sa z nej stala vrstva oxidu 2; v kroku (ii) sa nanáša fotorezistentná vrstva J; v kroku (iii) sa aplikovaním svetla vytvára vzorovaná vrstva oxidu; v kroku (iv) sa fotorezistentná vrstva odstráni; v kroku (v) sa membrána leptá; v kroku (vi) sa film oxidu odstráni; v kroku (vii) sa vytvára neprerušovaný film oxidu 2a.
Dáva sa prednosť kovalentnému znehybneniu biologických ligandov. Môžu sa použiť pasívne adsobčné interakcie, sú však citlivé na zmenu pH, na teplotu a iónovú pevnosť, a v istých prípadoch môžu mať za následok uvoľnenie ligandov so slabou väzbou, a to v priebehu kroku inkubácie a umývania, čo prispieva k rozboru. Samozrejme je žiadúce, znehybňujúcej procedúre zachoval maximálnu aktivitu.
Pred akoukoľvek chemickou aktiváciou sa musí povrch substrátu dôkladne očistiť. Prvý krok preto zahrňuje čistenie povrchu ultrazvukom v alkalickom rozpúšťadle, nasleduje dôkladné mytie v dvojitej deiónizovanej vode. Substrát sa ďalej ošetrí v roztoku kyseliny chrómovej. Roztok kyseliny chrómovej ďalej čistí povrch a otvára povrchy epoxidových skupín, tak ako je to znázornené na obr.
2. Epoxidové skupiny sa môžu otvárať i inými prostriedkami, napríklad ultrazvukom po dobu jednej hodiny. Povrch takto vytvorených hydroxylových skupín je vhodný pre derivatizáciu. Tak napríklad, ako je to znázornené na obr.
3, sekvencia reakcií zahrňuje použitie organosilanu, ďalej (hetero) bifunkčné krížové spojovacie látky Z-R- (linkeru), aby sa vytvoril vysoko reaktívny medziľahlý prvok a nakoniec funkcionalizovaný ligand pre kovalentné znehybnenie.
malej reprodukovateľnosti aby si biologický ligand po
-11Podrobnejšie povedané, aby sa vytvorili organosilany so vzorcom (RO)3Si-(CH2)n-X, kde každé R je alkyl alebo iná hydrokarbylová skupina, napríklad CH3 alebo CH2CH3, a %ďalej kde n je celé číslo (1 až 18), a kde X je funkčná skupina, napríklad epoxycyklohexylová NH2 CO, OH, SH, p-chlorobenzyl, m-chlorobemzyl, Br, Cl, -NH-CH2-NH2, 2,3 epoxypropoxy, -N=C=O, N=C=S alebo p-chlorosulphonylphenyl. Tieto organosilany sa môžu vyberať tak, aby poskytovali buď to reaktívnu koncovú skupinu, ktorá je schopná vytvárať kovalentnú väzbu s biologickou molekulou, alebo menej reaktívnu moietu, napríklad NH2, u ktorej je potrebná ďalšia aktivácia bifukčnou krížové spojovacou látkou, aby sa poskytla príslušná koncová skupina. Organosilany vlastniace elektrofilné funkčné skupiny nevyžadujú aktiváciu bifukčným krížovým linkerom, pretože biologické ligandy sa môžu znehybnieť kovalentne cez nukleofilné skupiny na biologických ligandoch.
V prípade organosilanov vlastniacich nukleofilné skupiny, môže sa pre poskytnutie veľmi reaktívnej chemickej skupiny, cez ktorú sa biologická molekula alebo ligand môže kovalentne pripojiť, použiť akýkoľvek z množstva bifunkčných krížových linkerov. Tento vynález zahrňuje použitie bifunkčných linkerov, ktoré sa môžu použiť v hromadnej výrobe chemicky aktivovaných podkladových vrstiev, a ktoré sú dostatočne stabilné, aby umožnili dlhodobé skladovanie pred kovalentným pripojením biologickej molekuly alebo ligandu. Linkery, ktorým sa dáva prednosť, sú v bežnej atmosfére inertné, sú dostatočne reaktívne pre vytváranie kovalentných väzieb s funkčnými skupinami biologických majú znehybniť v krátkom čase (< 10 ktoré sa ligandov, minút).
Linkerom môže N,N-disuccinimidil 1-6-diaminohexan, napríklad byť carbonate,
1,12· fosgén, thiofosgen, xylylenediamin, diaminododecan,
1,6
-12diisocyanotohexan, 1,12- diisocyanatododecan,
1,4-phenylennedithioisocyanat, cyanuric chlorid, tersaphtaldehyd, p-toulenesulfonát, 3- aminophenylboronic acid, p-bromophenolboronic acid, diethylpyrokarbonát, ethyl chlorofornát, p-bromonilin, p-bromobenzaldehyd, N,N,-carbonyldiimidazol, terephtaloyl chlorid, epichlorhydrin, 1,4-diiodobenzen, 1,4 dibromobenzen alebo N-hydroxysucciminid derivát, napríklad z p-amenobenzoic acid, p-bromobenzoic acid,, p- bromophenylacetic acid, phydroxymethylbenzoic acid, 1,2 ethylene glycol kyseliny p-formybenzoic, p-bromphenylpropionic acid alebo p-hydroxyphenylpropionic acid. Fotolabilný krížový linker sa dá použiť k reakcii s organosilanom, ktorý má nukleofilnú alebo elektrofilnú koncovú skupinu. Krížovým linkerom môže napríklad byť N-hydroxysuccimid kyseliny p-azidobenzoic alebo p-amionobenzophenone.
Namiesto používania bifunkčných linkerov, alebo dodatok k nim, je takisto možné kovalentne znehybňovať vrstvu latexových častíc. Priemer latexových častíc by mal byť menší ako 500nm,lepšie menšia ako 150nm. Latexové častice môžu mač istý rozsah funkčných skupín, napríklad -CH2C1, -CHO, p-cvhlorophenyl, p-chlorostyryl, N-=NH, -NH-NH2 alebo -NHa. Latexové častice sa môžu inkubovať pri koncentrácii približne 0,5 až 1% W/V s podkladovou vrstvou modifikovanou príslušným organosilanom, a to za prítomnosti alebo bez prítomnosti bifunkčných linkerov, tak ako to už bolo popísané.
Obr.4 znázorňuje dva schematické náčrty týkajúce sa znehybnenia latexu. Môže nasledovať buď to aktivácia latexu druhým linkerom a znehybnenie biologických molekúl, alebo priame kovalentné znehybnenie protilátky.
Alternatívou pre použitie polystyrénových latexových častíc je kovalentné znehybnenie biologických ligandov na polyethylen-glykol deriváty, ktoré sú už zakotvené na
-13silinátovanej podkladovej vrstve. Napríklad na PEG deriváty s dvomi elektrofilnými skupinami, napríklad epoxy alebo carbonylimidazol, sa pôsobí silanom, ktorý má koncovú skupinu, napríklad APTES na zvolenej podkladovej vrstve. Vhodná reakčná sekvencia je znázornená na obr. 5.
Pokrokovým riešením môže takisto byt kovalentné znehybnenie biologického ligandu priamo na silanovej vrstve, čím sa dá vyhnúť aktivácii silanu polymernými materiálmi alebo bifunkčnými linkermi. Organosilany by mali byť vnímavé na nukleofilné pôsobenie chemických skupín (napríklad NHZ2, SH, OH alebo NH=NHa) na biologický ligand. Organosilany vhodnými k priamemu pripojeniu biologickým ligandom môžu napríklad byt halid, epoxy, isokyanát, aldehyd alebo tosylátové funkčné skupiny. Taká reakcia je znázornená na obr. 6, kde E je elektrofilná skupina na organosilane. Príkladom E sú Br, Cl, -O-CH2-CH=CH2, NCO, -CHO a p-chlorosulphonylphenyl.
Organosilany s elektrofilnými skupinami, napríklad glycidoxy, majú takisto výhodu menšiu citlivosti k polymerizácii počas silanovania, a to vplyvom neprítomnosti nukleofilných skupín vhodných pre pôsobenie na methoxy alebo ethoxy funkciu organosilanu. Povrch substrátu by preto nemal obsahovať polymérizovaný organosilan. Chemické reakcie povrchov poskytujú prostriedok k dosiahnutiu priestorového rozloženia na základe rýchleho pohybu formáciou kovalentných väzieb medzi povrchovou chemickou funkčnou skupinou a vhodnou chemickou skupinou prítomnou v priestorové výhodnej polohe na biologickej molekule, ktorá sa má znehybniť. Biologická molekula sa k povrchu . substrátu pripojí pomocou mikrofluidného dávkovača, a to vo forme jednotlivých kvapiek alebo série kvapiek, ktoré vytvoria čiaru. Objem dávky sa radové pohybuje od 1 do 100 nl, lepšie menej ako 50nl, to je bližšie k lOnl. Rýchlosť formovania kovalentných väzieb je
-14taká, že sa kovalentného znehybnenia dosiahne počas niekoľkých minút, a to pred dávkovaným nakvapkaním alebo odparovaním na povrchu. Pozičná presnosť rozmiestnenia kvapiek alebo čiar kvapaliny by mala byť v tolerancii + 20μτη.
Ak sú Ugandy aplikované vo vode, je takisto žiadúce, aby sa vyvinul hydrofóbny povrch, a tým sa zabránilo akejkoľvek priečnej difúzii dávkovaných kvapiek alebo čiar. Táto vlastnosť prispieva k výbornej kvalite a reprodukovatelnosti miest s kvapkami a umožňuje, aby sa na jednotku plochy povrchu kovalentne znehybnelo väčšie množstvo miest biologických molekúl. Tento vynález prekonáva problém spojený s bežnou fotolitografiou tým, že umožňuje vytvorenie priestorové zreteľne oddelených miest biologických ligandov, ani by sa požadovalo použitie UV žiarenia alebo fyzických masiek. Ako to už bolo naznačené, priestorové rozloženie sa môže dosiahnuť pomocou mikrodávkovacích techník. Významným faktorom je rýchly pohyb kovalentnej spojovacej reakcie, aby sa zaistilo vysoko a
efektívne pripojenie biologického ligandu v priestorové odlišnej oblasti, čím sa eliminuje priečna odchýlka znehybneného biologického ligandu.
Chemické moiety, u ktorých nedošlo k reakcii na substráte sa môžu zablokovať, napríklad použitím blokovacích molekúl, ktoré sú odborníkom v odbore známe. Také vhodné molekuly zahrňujú proteíny, akými sú kasein, bovin sérum albumín, lactalbulmin atď., alebo blokovače s nízkou molekulovou hmotnosťou, napríklad glycin, glutamin atď.
Môžu sa takisto použiť fotolabilné linkery. Napríklad organosilan. na povrchu substrátu reaguje v tme s fotolabilným linkerom (napríklad benzofenonem, arylazydem a pod.). Povrch je ďalej postriekaný požadovaným biologickým ligandom, pričom sa po krátkej dobe ožiarenia UV žiarením, alebo osvietením viditeľným svetlom po dlhšiu dobu, dosiahne
-15kovalentné spojenie. Zostávajúce oblasti povrchu substrátu sú blokované, pri použití blokovacích látok podobných tým molekulám, ktoré boli popísané už skôr, a to za prítomnosti UV žiarenia a viditeľného svetla.
Znehybnené biologické molekuly substrátu sa môžu stabilizovať, a to napríklad inkubáciou v cukornom roztoku (trehalose) po krátku dobu (jednej hodiny), po ktorej nasleduje sušenie pri 37°C po doby 16 hodín. Stabilizovaná podkladová vrstva sa môže zalepiť do tenkého vrecka so sikatívom a uskladniť. Znehybnené biologické molekule sú stabilné po dobu viac ako 6 až 12 mesiacov, to znamená i cez dva roky, pokiaľ sú skladované pri teplote +2 až +8°C.
Zariadenia môžu byť umiestnené na rôzne nosiče, ktoré zahrňujú vybavenie ovládacie účinnosť miešania testovacích látok. Tok tekutých testovacích látok sa môže dosiahnuť pomocou kapilárnych síl, odstredivých síl, vákuových síl, alebo pomocou elektroosmotického prúdu. Použitie elektroosmotického prúdu môže vylúčiť potrebu ventilov, takže nie je potrebné používat žiadne mechanické súčiastky.
Uzavreté kanáliky sa môžu vytvárať prilepením sklenených doštičiek k povrchu vyrobenému mikrotechnickým spôsobom. Biologické molekuly sa na povrchu kovalentne znehybnia, a to prilepením sklenených doštičiek. Mnoho lepiacich procedúr, napríklad anódové lepenie, prebieha za zvýšenej teploty, ktorá by mohla zničiť biologické molekuly. Preto by sa ku znehybňovaniu biologických molekúl mali používať nedenaturačné techniky. Jedným z vhodných spôsobov je nepriame lepenie, to znamená lepenie pri ktorom je membrána prilepená ku sklenenej doštičke vhodným lepidlom, napríklad epoxidovým lepidlom.
Zariadenie sa potom umiestni do vhodného nosiča. Rôzne také nosiče sú zobrazené na obr.7 a 8. Podľa zobrazeného príkladu, má zariadenie na obr.8 rozmery 48,62 mm x 48,62 mm. Rozmiestnenie stredov priehlbní je vo vzdialenosti
-1615,36 mm.
Zariadenie môže zahrňovať prvky, ktoré zvyšujú miesenie testovacích činidiel, vzoriek atď. Je to znázornené na obr.9, kde zariadenie zahrňuje doplnkové miesto činidiel 11. kanáliky činidiel 12 a testovacie reakčné miesta 13.
Na obr.10 zariadenie zahrňuje nádržku činidla 21. zberné potrubie 22. zásobovací kanálik činidla testovacích miest 13 a nádržku pre odpad 24.· Obr. 11 znázorňuje štvorkanálikovú testovaciu štruktúru s podobnými súčasťami.
Vynález poskytuje úplný integrovaný systém pre súčasné kvantitatívne stanovenie analytov s rôznou molekulovou hmotnosťou, štrukturálnou rozmanitosťou a polaritou. Dostupné panely analytov sú vhodné pre klinickú/veterinárnu diagnostiku, alebo pre zobrazovanie liekov.
V závislosti na analytoch sa vyberajú spojovacie ligandy. Je to ponechané na múdrosti a znalosti odborníkov v odbore.
Vhodné analyty zahrňujú:
antibiotiká, napríklad tetracyklín, suphonamidy, ionoforézy, aminoglykocidy, penicilíny alebo fluoroguinolony, hormóny, napríklad Luteinising Hormone (LH), prolaktin (PL), stimulačný hormón Follicle (FSH), stimulačný hormón Thyroid (TSH), indikátory poškodenia srdca, napríklad mioglobin, uhličitú anhydrázu, troponin I, glykogenovú fosforylázu BB, CK-MB, proteín alebo troponin T pojúci mastné kyseliny, indikátory infekčných chorôb, indikátory alergie, zneužité lieky, víry, nukleotidy a peptidy.
enzýmy
-17Jeden panel je napríklad určený pre zisťovanie sulphonamidových antibiotík. Tento vynález poskytuje metódu súčasnej kvantitatívnej identifikácie až 20 jednotlivých sulphonamidov. Ostatné príklady zahrňujú srdečné a infekčné choroby a poruchy plodnosti.
Vynález takisto poskytuje možnosť súčasnej detekcie až dvadsiatich analytov, ktoré nemajú podobnú Štruktúru. Matrice testovaných vzoriek zahrňujú sérum, plazmu, moč, žlč, výkaly, tkanivo, vodu a krmivo. Požadované množstvo vzorky je veľmi nízke a dosahuje hodnoty <1,5 μΐ/analyt. Testovacie činidlá, napríklad protilátky označené enzýmom, hapteny označené enzýmom, protilátky značené fluorescenčné alebo hapteny značené fluorescenčné, môžu byť obsiahnuté v jednej nádobe, čo dramaticky znižuje požiadavky na manipuláciu s tekutinou.
V sendvičovom rozbore, napríklad u luteinizačného hormónu, u folikúlneho stimulačného hormónu, prolaktinu, u hormónu u thyoridného stimulačného hormónu sa vzorka pridáva spolu so vzorkou pufru a je inkubovaná po krátku ♦
dobu, čo znamená menej ako 30 minút, najlepšie menej ako 10 minút. Po umytí vzorky sa pridá koktail značenej detekčnej protilátky a po istú dobu sa opäť inkubuje. Táto doba je opäť kratšia ako 30 minút, najlepšie menej ako 10 minút. Zariadenie sa potom umyje, aby sa odstránili nepripojené znaky a kvantifikuje sa signál.
U istých vzoriek rozboru by bolo výhodné zaradiť zariadenie vo vnútri mikrofabrikovaného zariadenia, aby sa odstránili možné rušivé vplyvy, napríklad rušivý reumatický faktor. Odstránenie reumatického faktoru sa môže dosiahnuť kontaktovaním testovanej vzorky v oblasti znehybnelého imunoglobulínu, napríklad pred tým, ako testovaná vzorka kontaktuje reakčnú oblasť.
Ďalšou vzorkou je HAMA (Human Anti-Mouse Antibodies) rušenie. Táto protilátka môže spôsobiť mnoho problémov
-18v účinnosti rozborov, ktoré využívajú monoklonálne myšie protilátky. Tradičným riešením je zaradenie drahých aditívov do testovacích činidiel, ktoré by mali pôsobiť proti vzniknutému problému. Tento vynález poskytuje výhodu v tom, že odstraňuje škodlivý vplyv HAMA tým, že vzorku kontaktuje s oblasťou na mikrofabrikovanom zariadení aby sa tieto protilátky odstránili pred tým, ako vzorka dosiahne reakčnú oblasť.
Obecnejšie platí, ligandy sa môžu vyskytovať nad časťou zariadenia, ktoré viaže kontaminanty. Je to zvlášť cenné je povolené definované šírenie na povrchu napríklad v kanálikoch. Schopnosť odstránenia zvyšuje presnosť generovaných komponentov tam, kde zariadenia, rušivých výsledkov.
Detekčné značenie sa môže takisto na povrchu dendrimerných molekúl znehybniť. Dendrimerné molekule sú v podstate polyméry syntetizované opakovaným spojovaním malých stavebných molekúl. Sú dostupné u Aldrich Chemicals v rozmedzí molekulových hmotností s voľbou koncových funkčných skupín, NH2 alebo COOH. K príprave detekčných značkových konjugátov sa môžu použiť heterobifunkčné linkery v spojení s obvyklými spojovacími chemickými látkami. Pre malé haptenové molekuly, napríklad β-agonisty, anabolické steroidy alebo antibiotika, sa dáva prednosť tomu, aby malé dendrimery (nie viac ako 16 povrchových skupín) boli spojené do veľkého dendrimeru (viac ako 64 povrchových skupín). Hapten o malej molekulovej hmotnosti (menej ako 1,000 Daltonov) je pripojený k chemickým skupinám na malom dendrimere s následným kovalentným pripojením detekčných znakov. Konjugát dendrimeru sa môže čistiť pomocou dialýzy a permeaČnej gelovej chromatografie.
Testovacie činidlá obsahujú množstvo zložiek (protilátky značené enzýmom, protilátky značené fluorescenčné, protilátky znehybnené latexom, konjugáty
-19dendrimeru s protilátkov-fluoroforem, konjugáty dendrimeru s protilátkou-enzýmom, hapteny značené enzýmom, hapteny značené fluorescenčné, atd'.), ktoré sú vhodné pre konkrétne panely testov. Panely testou sú veľmi rozmanité a môžu sa vyberať na základe klinickej diagnózy (alebo veterinárnej diagnózy). Tak napríklad istý panel je určený pre detekciu infekčných ochorení (hepatitis, HIV, syphilis, atď) . Iné panely zahrňujú hormóny plodnosti, srdečné indikátory, alergické proteíny atď. Okrem klinických parametrov tu existuje možnosť detekcie veľkých panelov zvyškov liekov.
Tento vynález- umožňuje identifikáciu jednotlivých zložiek, napríklad antibiotík. Výsledok týkajúci sa kvantitatívneho stanoveného sa dá súčasne získať pre viac ako 20 antibiotík na zariadenie s povrchom l cm2, a to v dobe čítajúcej len niekoľko minút s citlivosťou lepšou ako u metód HPL/GCMS a zrovnateľné s metódou pre imunitné skúšky jedného parametra enzýmu. Tento spôsob sa dá ľahko rozšíriť na anabolické steroidy, beta agonisty, beta blokery, pesticídy, terapeutické lieky atď.
Pre uskutočnenie analýzy je vhodné použiť chemiluminiscenciu, bioluminiscenciu alebo fluorescenciu. Detekčným systémom je najlepšie kamera CCD (charged-coupeld device) vybavená k meraniu ako fluorescenčného, tak i chemiluminiscenčného svetla. Stručne povedané, CCD kamera zhromažďuje signály generované z testovacích oblastí na mikrofabrikovanom zariadení a mení ich na relatívne svetelné jednotky (RLU).
Detekčné systémy fungujúce na základe fluorescencie sa dajú čítať priamo použitím príslušných optických filtrov pre značkovanie fluorofor.
Vhodným chemiluminiscenčným činidlom je luminol, ktorý môže byt analyzovaný na vlnovej dĺžke 433-445 nm. Chemiluminiscencia sa môže takisto pozorovať na základe detekcie biologických molekúl značkovaných alkalin fosfátom
-20pri použití 1,2-dioxetanu.
Z dôvodu uľahčenia detekcie analytov, vynález dáva prednosť použitia chémiiluminiscenčného detekčného systému s kamerou CCD. Dáva sa prednosť spätne osvetlenej kamere, aby sa zlepšila kapacita zachytenia pri vlnovej dĺžke svetla generovaného chemiluminiscenčného svetelnou reakciou (približne 433-445 nm v prípade použitia luminolu).
Celý systém je ovládaný osobným počítačom s konkrétne navrhnutým programom, ktorý riadi X-Y stôl, dávkovaciu jednotku, manipuláciu so vzorkou, teplotu, dobu inkubácie a CCD kameru. Na obr. 12 je taký systém zobrazený. Obr. 12 schematicky znázorňuje vzájomné fungovanie počítača (PC) s dvomi riadiacimi jednotkami 31. 22. Jednotka 31 je v spojení s CCD zobrazovacím systémom 22. Jednotka 32 je v spojení s dávkovacou jednotkou a prevodnou tabuľkou s miskou vzorky 24, 35.
Obr. 13 schematicky znázorňuje X-Y prevodný stôl. Obrázok znázorňuje základňu vzorky lineárnom akčnom člene 42. X-Y prevod motormi pripojenými s príslušnými pohonmi 42, 42. Prevod je obmedzený senzormi 42, 48 tzv. domáce polohy.
Citlivosť značkovaných biologických molekúl a istých neznačkovaných biologických molekúl na svetlo môže spôsobiť, že sa rozbor uskutoční bez prítomnosti svetla. Neprítomnosti svetla sa dosiahne dokonalým utesnením zariadenia. Okolie bez svetla má takisto riadenú teplotu v rozmedzí ± 0,2°C, alebo lepšie ± 0,l°C, aby sa tým zaistila dostatočná presnosť a správnosť rozboru.
Obr.14 znázorňuje prístroj v perspektívnom pohľade, v čiastočnom pôdoryse a bočnom pohľade. Obr. 14 ä znázorňuje zásobovací kontajner činidla 21/ svetlotesné dvere 22 a teleso kamery 53 s odnímateľným vekom 24. Hlavná časť kamery môže byť umiestnená z von puzdra. Šošovka kamery je umiestnená v otvore puzdra.
41. namontovanú na je riadený krokovými
-21Obr.l4B znázorňuje obrys vzorky na miske vzorky 55 a obrys odpadnej plochy 56 a zobrazovaciu plochu 57. Kamera 53 je umiestnená nad touto plochou. Obr. 14C znázorňuje, okrem kontajneru 51, kamery 52/ X-Y stola 41 a krokového motora 15, i dávkovacie čerpadlo 58.
Konštrukcia systému znázorneného na obr. 14 je založená na existencii 3x3 posuvných držiakov vzoriek, z nich 20 môže byť držaných v ktoromkoľvek čase. Znamená to, že je 20 jednotlivých reakčných oblastí umiestnených na každom 1 cm2 mikrofabrikovaného zariadenia, čím sa môže uskutočniť súčasne celkom 3600 analýz na jednej vzorke. Alternatívne sa môže súčasne analyzovať 20 rôznych parametrov u 180 vzoriek.
Ako to už bolo uvedené, analyty môžu byť značené. Ligandy môžu byť takisto značené, čo umožňuje analýzu pri zlomkovom obsadení.
Tento vynález objasňujú nasledujúce príklady.
Príklad 1: rozbor sulphonamidov
V tomto príklade bolo 12 jednotlivých protilátok, každá špecifická pre jeden sulphonamid, znehybnené kovalentným spojením pomocou kontaktných interakcií na nespojitých oblastiach plochej keramickej (oxid hliníka) podkladovej vrstve s chemicky modifikovaným povrchom. Uskutočnil sa multianalytný rozbor použitím skúšky na imunitu súbežného formátu.
Podrobnejšie, keramické substráty (1 cm x 1 cm) sa vyčistili pomocou ultrazvuku a alkalického rozpúšťadla (RBS35, 5% v/v) s následným použitím dvojitej deionisovanej vody, a boli ďalej umiestnené do 6M HCL po dobu 16 hodín. Podkladové vrstvy sa potom umiestnili na 1 hodinu do kyseliny chrómovej v ultrazvukovom kúpeli.
Substráty sa umyli dvojité deionisovou vodou a acetónom a potom sa sušili v peci pri teplote 12O°C po dobu dvoch
-22hodín. Po tejto predbežnej príprave sa substráty silanovali použitím τ-glycidoxpropyl trimethoxylaminom (1% v/v) v bezvodnom toulenu, 4-dimethylaminopiridinu (1,25 g/1) a triethylamin (1% v/v). Táto zmes bola refluxovaná po dobu 4 hodín a potom ponechaná cez noc v kľude pri izbovej teplote. Substráty boli umyté toulenom a acetónom pred ďalšou úpravou po dobu 4 hodín pri teplote 120°C.
Po úprave boli substráty vložené do kontajneru a tu ponechané pri izbovej teplote, a to až do vyžiadania pre značkovanie sulphonamidových protilátok. Sulfónamidové protilátky boli značkované použitím dávkovača BIODOT XY3000. Dvanástimi sulphonamidmi podrobenými rozboru boli sulphadoxin, sulphamethizol, sulphachloropyridazin, sulphamethoxypyridazin, sulphamerazin, sulphapyridin, suphisoxazol, sulphathiazol, sdulphamethazin, sulphaguinoxalin, sulphadimethoxin a sulphadiazin.
Pre každú sulphonamidovú protilátku sa použilo približne 20 nl. Dvanásť sulphonamidových protilátok, ktoré tvorili dvanásť nespojitých plôch na l cm2 substrátu, bolo inkubované po dobu 2 hodín pri teplote 37°C. Substráty sa umývali fosfátopufrovaným soľným roztokom (PBS) (pH 7,2), ktorý obsahoval 2% kaseinu (w(v), a ďalej cez noc blokovaná v rovnakom pufre pri 2-8°C. Po umytí substrátu roztokom PBS s obsahom PEG300 (0,5 v/v) bolo zariadenie vložené do nosiča.
Multi-sulphonamidové štandardy (200μ1) sa pridali do reakčných priehlbeň obsahujúcich zariadenie a inkubovali sa po dobu 15 minút pri izbovej teplote. Štandardy obsahovali 5, 10, 50 a 100 ng/ml pre každý z dvanástich sulphonamidov. Multi-sulphonamidové zariadenia sa umyli v PBS/PEG pufre, aby sa odstránili zvyšky činidla a pridalo sa 300 μΐ chemiluminiscenčného substrátu [luminol (1/4 mM)/ureahydrogen peroxid (9,6 mM)) na j edno zariadenie. Zariadenie bolo zobrazené pomocou kamery CCD pri dobe
-23expozície až do 4 minút. Získali sa štandardné krivky pre každý z dvanástich suphonamidov. Kalibračné krivky pre každý z dvanástich sulphonamidov sú znázornené na obr. 15. Percentné vyjadrenie hodnôt Β/Βθ bolo vynesené na osu Y a predstavuje % hodnotu inhibície nulového štandardu RLU (relatívna jednotka svetla), zapríčinenú každým jednotlivým štandardom sulphonamidu (nanesené na ose X ako logaritmická funkcia).
Príklad 2: rozbor hormónu
U tohto príkladu sa uskutočnil multyanalytný rozbor u troch hormónov s veľkou molekulovou hmotnosťou, a síce u prolaktínu (PL), folikúlneho-stimulačného hormónu (FSH) a luteinizačného hormónu (LH). Príklad predstavuje multianalytný rozbor pre imunitné skúšky na sendvičovom základe. Nebola pozorovaná žiadna skrížená reaktivita, keď tri hormóny boli umiestnené v rovnakom paneli.
Chemické predspracovanie a silanizačné procedúry prebehli presne podľa toho, ako to bolo popísané u príkladu
1. Znehybneli sa jednotlivé PL, FSH alebo LH monoklónne protilátky (približne 20 nl dávkovanej protilátky), a to na nespojitých plochách chemicky modifikovaného sendviča. Multyanalytné rozbory sa uskutočňovali ako na silikónových, tak i na keramických substrátoch s epoxidovým povrchom, tak ako to bolo popísané v príklade 1.
Behom rozboru sa do zariadenia pridávalo 150 μΐ viacnásobného LH/PL/FSH štandardu na báze séria a 150 μΐ zriedeného pufru, ďalej sa uskutočňovala inkubácia po dobu 15 minút pri izbovej teplote. Po umytí sa pridalo 300 μΐ konjugovaného koktailu LH-HRPO/PL-HRPO/FSH-HRPO, ktorý bol inkubovaný po dobu 15 minút. Zariadenia sa umyli, aby sa odstránilo nadbytočné činidlo a pridalo sa chemiluminiscenčné činidlo [luminol(l,4 mM)/urea hydrogén
-24peroxid (9,6 mM)]. Zariadenia sa zobrazili pomocou CCD kamery pri dobe expozície až do 4 minút. Štandardné krivky každého hormónu sa vyniesli po zobrazení.
Príklad 3: rozbor sulphonamidu
Na rozdiel od príkladu 1, bol uskutočnený rozbor multisulphonanmidu použitím mikrokanálikov. Zariadenie je znázornené na obr. 11. U tohto príkladu majú prídavné nádržky činidiel 21 rozmer 2 mm x 2 mm a hĺbku 300 μτη (objem
1,2 μΐ), pričom kanáliky 23 sú dlhé 5 mm, 200 μτη. široké a 100 μτη hlboké (objem 100 nl), a nádržka 24 má rozmer 1,9 mm x 8,6 mm a je hlboká 300 m (objem 4,9 μΐ).
Chemická modifikácia bola uskutočnená rovnako ako u príkladu l. Protilátka sa pridala do každého kanálika a inkubovala sa po dobu 2 hodín pri teplote 37°C. Podkladové vrstvy sa ďalej blokovali a umývali rovnako ako u príkladu 1.
Multisulphonamidový štandard (200 μΐ) sa zmiešal s konjugátom sulphonamidu a peroxidázy chrenu poľného (sulphonamid horseradish pexoxidase) (100 μΐ). 1 μΐ výslednej látky sa pipetoval do každej nádržky zásobujúcej kanálik naplnený protilátkou, a to pre každý sulphonamid. Štandardy obsahovali 10 alebo 100 ng/ml všetkých sulphonamidov, čo sa dá považovať za primerané.
Činidlo pretekalo pomocou kapilárnych síl. Po inkubácii trvajúcej 2 minúty, bolo zariadenie 5 x umývané roztokom PBS/PEG a ďalej sa pridalo chemiluminiscenčné činidlo [luminol (l,4mM)/urea hydrogén peroxid (9,6 mM)].
Zariadenie bolo zobrazené pomocou CCD kamery pri dobe expozície až do 4 minút. Hodnoty Β/Βθ v percentách, pre 4 krivky sulphonamidu, sú uvedené v tab. 1.
-25Tabuľka J
| Sulphonamid | % B/B ' o | ||
| 0 ng/ml | 10 ng/ml | 100 ng/ml | |
| Sulphametazin | 100 | 14 | 7 |
| Sulphamethooxypyridazin | 100 | 28 | 15 |
| Sulphaguinoxalin | 100 | 56 | 24 |
| Sulphamerazin | 100 | 40 | 22 |
Použitie tohto vynálezu, pri zrovnaní s fotolitografickou metódou, bolo demonštrované stupňom nešpecifickej adsorpcie biologických molekúl na fotolabilnej podkladovej vrstve ( z upraveného benzophenonu). Výsledky sú uvedené v tab. 2
Tabuľka 2
| Myš lgG | Ožiarenie UV lampou (10 minút) | Šedý stred (RLU) | |
| / | / | 22368 | 24022 |
| / | x | 17586 | 20531 |
Myš lgG bola zistená použitím konjugátu anti-mous HRPO pomocou chemiluminiscenčnej detekcie kamerou CCD. Silikónové alebo keramické substráty so znehybneným benzofenonovým fotolabilným linkerom by nemali viazať myš lgG, ak sú podrobené reakciám bez prítomnosti svetla. Nič menej sa vyskytuje nešpecifická väzba, nakoľko približne 80% hodnoty šedého stredu (grey mean) RLU, dosiahnutého ked' je väzba myši lgG uskutočňovaná pod UV lúčmi, je výsledkom pasívnych väzbových interakcií. Sústava biologických molekúl,
-26znehybnených kovalentnými interakciami je, podľa tohto vynálezu, preukázateľne j asnej šia.
Dôkaz o kovalentnom pripojení je poskytnutý v príkladoch, ktoré budú ešte uvedené. V prvom prípade boli keramické substráty silanované prípravkom APTES a následne reagovali s biotínom-LC-supho NHS. Kontrolný keramický substrát nebol APTESem silanovaný prípravkom, preto neboli žiadne koncové nukleofilné NHa skupiny k dispozícii pre reakciu s esterom succinimidylu derivátu biotínu. Substrát ďalej reagoval s Avidin-FITC konjugátom a fluorescencia bola stanovená pomocou kamery CCD. Výsledky sú uvedené v tab.3.
Tabuľka 3
| [Biotin-LC-NHS] | APTES substrát RLU expozícia 1 sek. | Kontrolný substr.RLU expozícia 1 sek. |
| 0 | 2,448 | NS |
| lOOgg/ml | 8,881 | NS |
| 500Mg/ml | 7,922 | N& |
NS = nebol zistený žiadny fluorescenčný signál
Výsledky celkom jasne ukazujú na špecifické znehybnenie biotínu-LC-NHS. Maximálna koncentrácia znehybneného biotínu-LC-NHS dosahovala hodnotu okolo 100 Mg/ml, nakoľko RLU výsledok pre 500 Mg/ml substrát sa nezvyšuje.
V ďalšom prípade keramický substrát silanovaný pomocou APTES sa nechal reagovať s lenkerom dihydrazidu. Sulphonamidové protilátky sa upravovali jodistanom sodným NaJO^, aby získali schopnosť reagovať s linkerom hydrazidu. Kontrolné suphonamidové protilátky boli diazované pufrom octanu sodného pH 5,5. Výsledky RLU sú uvedené v tab.4 (neupravené) a 5 (upravené jodistanom). Výsledky jasne
-27ukazujú, že linker hydrazidu sa úspešne spojil s keramickým povrchom. Kontrolné protilátky (bez aktivácie jodistanom) poskytujú, pri porovnaní s kovalentne znehybnenými sulphonamidovými protilátkami, veľmi slabé štandardné krivky.
Percentá zviazanosti, vplyvom kovalentnej alebo pasívnej interakcie, sú porovnané v tab. 5, 6 a 7. Kovalentná interakcia prispela k celkovej zviazanosti v priemere 81,8 percentami, pričom sa jasne preukázala kovalentná väzba sulphonamidových protilátok.
Tabuľka 4
| Sulphonamid | 0 ng/ml | 10 ng/ml | % B/B ' o | 100 ng/ml | % B/B ' o |
| Sulphadoxin | 2825 | 1456 | 51 | NS | - |
| Sulphametizol | 3531 | 1257 | 36 | NS | - |
| Suplhachloropyridazin | 1099 | 928 | 84 | NS | - |
| Sulphamerazin | 2177 | 1137 | 52 | 1224* | 56 |
| Sulphasoxazol | 4879 | 1108 | 23 | NS | - |
| Sulphatiazol | 2932 | 814 | 28 | NS | - |
| Sulphamethazin | NS | NS | - | NS | - |
| Sulphaquinoxalin | 1041 | 828 | 79 | 968 | 93 |
| Sulphadimethoxin | 804 | NS | - | 781 | 97 |
28ľabuľka 5
| Sulphonamid | 0 ng/ml | 10 ng/ml | % B/B O | 100 ng/ml | % B/B= |
| Sulphadoxin | 10522 | 3240 | 31 | 2135 | 20 |
| Sulphametizol | 17141 | 5689 | 33 | 4882 | 28 |
| Suplhachloropyridaz in | 24944 | 7565 | 30 | 2096 | 8 |
| Sulphamethoxypyridazin | 14082 | 10509 | 74 | 5687 | 40 |
| Sulphamerazin | 12594 | 5521 | 43 | 3240 | 26 |
| Sulphasoxazol | 24419 | 6686 | 27 | 2270 | 9 |
| Sulphatiazol | 14279 | 4602 | 32 | 2553 | 16 |
| Sulphamethaz in | 3644 | 2810 | 77 | 2213 | 61 |
| Sulphaguinoxalin | 10575 | 6112 | 58 | 5588 | 53 |
| Sulphadimethoxin | 5526 | 2554 | 46 | 1983 | 36 |
Tabuľka 6
| Sulphonamid | Percento väzby sulphonamidových protilátok | |
| Kovalentná interak. | pasívna interak. | |
| Sulphadoxin | 73,1 | 26,9 |
| Sulphamet i zol | 79,4 | 20,6 |
| Suplhachloropyridazin | 74,0 | 26,0 |
| Sulphamethoxypyridazin | 92,2 | 7,8 |
| Sulphamerazin | 82,7 | 17,3 |
| Sulphasoxazol | 80,0 | 20,0 |
| Sulphatiazol | 79,4 | 20,6 |
| Sulphametha z in | - | - |
| Sulphaquinoxalin | 90,2 | 9,8 |
| Sulphadimethoxin | 85,4 | 14,6 |
| Stredná hodnota | 81,8 18,2 |
Tabuľka 7
| Sulphonamid | RLU | |||
| Kovalentné | Pasívne | |||
| 0 | 10 ng/ml | 0 | 10 ng/ml | |
| Sulphadoxin | 32756 | 11131 | 1950 | 904 |
| Sulphametizol | 39220 | 11132 | 2782 | 1359 |
| Suplhachloropyridazin | 39632 | 8434 | 4410 | 1051 |
| Sulphamethoxypyridazin | 29489 | 13408 | 1793 | 770 |
| Sulphameraz in | 28455 | 11077 | 2011 | 988 |
| Sulphasoxazol | 38486 | 5774 | 4083 | . 1031 |
| Sulphatiazol | 28837 | 8087 | 2010 | 675 |
| Sulphamethazin | 11331 | 7535 | 802 | 574 |
| Sulphaquinoxalin | 13838 | 8716 | 951 | 548 |
| Sulphadimethoxin | 13062 | 5832 | 910 | 581 |
Kovalentné znehybnenie: Priame nanesenie na povrch glycidoxy silan
Pasívne znehybnenie : Priame nanesenie na povrch reagujúci na dichlorodimethylsilan
Kovalentné metódy oproti pasívnym metódam dosahujú tie najlepšie výsledky. Výsledky pasívnych metód sa môžu zlepšiť približne dvakrát, ak sa na sulphonamidové protilátky vopred
-30pôsobí kyselinou, ale i táto metóda je proti kovalentnému prístupu menej hodnotná.
Preukázané analýzy chemicky modifikovaných silikónových a keramických substrátov sa takisto uskutočňovali, a to pri použití rontgenovej-fotónovej spektroskopie (XPS). Prehľad spektra sa zaznamenával z náhodne vybraných oblastí každej vzorky substrátu, z ktorej povrchu sa stanovovalo chemické zloženie. Výsledky sú uvedené v tab.8 (uvedené sú v atómových %).
Tabuľka 8
| Vzorka | Oblasť | C | 0 | Si | Al | N | Cl | Ca |
| Silikónový substrát | 1 | 21,9 | 52,7 | 25,4 | - | - | - | - |
| neupravený | 2 | 23,0 | 51,0 | 26,0 | - | - | - | - |
| Silikónový | 1 | 55,5 | 23,3 | 10,5 | - | 10,2 | 0,5 | - |
| substrát | 2 | 55,6 | 22,5 | 10,9 | - | 10,5 | 0,5 | - |
| silanovaný | 1 | 51,3 | 25,6 | 13,0 | - | 7,2 | 2,7 | - |
| APTES | 2 | 52,5 | 25,0 | 12,3 | 7,5 | 2,7 | - | |
| APTES silik. substrát upr | 1 | 58,7 | 25,0 | 9,6 | - | 6,1 | 0,5 | |
| FITC | 2 | 58,8 | 24,7 | 9,8 | - | 6,0 | 0,8 | |
| Keram. sub. | 1 | 27,2 | 46,3 | 11,3 | 13,3 | 1,4 | 0,5 | |
| neupravený | 2 | 27,1 | 46,6 | 9,6 | 14,8 | - | 1,1 | 0,7 |
| Keram. sub. silanovaný | 1 | 47,0 | 31,6 | 13,4 | 2,6 | 5,4 | - | - |
| APTES | 2 | 45,9 | 31,7 | 13,7 | 3,3 | 5,3 | ||
| APTES keram substrát | 1 | 52,0 | 29,3 | 11,3 | 2,4 | 5,0 | - | - |
| upr. FITC | 2 | 51,0 | 30,6 | 11,7 | 2,3 | 4,5 | - | - |
Výsledky atómového zloženia ukazujú na veľmi dobrú premenu pôvodných silikónových a keramických substrátov pomocou organosilanov APTES a dobrú reprodukovateľnosť v povrchovom zložení indikovanú pre obidve oblasti, ktoré
-31boli u každej vzorky testované. FITC označené substráty ukazujú na 70% a 77% označenie silikónových a keramických substrátov.
Kvantitatívne metódy fluorescenčného merania tmavého silikónového substrátu sa porovnávali s metódami na bielom keramickom (oxid hliníku) substrátu. Výsledky RLU z CCD molekúl (FITC) kovalentne substrátu sa porovnávali tom, čo boli molekule FITC detekcie fluorescenčných pripoj ených ku každému s kvantitatívnou metódou po obnažené
142-151) metódou Hook a spol. (Langmuir 1991, diel 7,
| Substrát | CCD expoz. (sec) | Šedý priemer | Počet obnaž. FITC molekuly/subst. | |
| Str. 1 | Str. 2 | |||
| Keramický | 0,1 | 7483 | 7063 | 4,548xlOls |
| Silikónový | 10 | 753 | 612 | l,412xlOxe |
Kvantitatívna analýza fluorescenčného značenia získaná odstránením značky zo substrátu a meraním signálu pomocou kamery CCD ukazuje, navzdory 1000-násobnému zvýšeniu signálu keramického substrátu oproti silikónovému, skutočne existuje viac FITC molekúl prítomných na silikónovom substráte.
Ďalší príklad tohto javu je uvedený v tab. 10 a vychádza z rozboru prolaktinu, ktorý sa uskutočňoval na silikónovom a keramickom substráte za použitia fluorescenčných latexových častíc spojených do protilátky zisťujúci prolaktin, pričom hodnoty detekčného systému sú dané pri 20 sec. expozícii.
-32Tabuľka 10
| [Prolaktin] Štandard | RLU | |
| Silikónový substrát | Keramický substrát | |
| 550 MlU/ml | 814 | 8594 |
| 2200 MlU/ml | 799 | 16735 |
Uskutočnenie s keramickým substrátom vykazuje proti uskutočneniu so silikónovým substrátom, pri použití tejto fluorescenčnej detekčnej metódy, vynikajúce výsledky. Okrem toho, problém efektu čierneho telesa na silikóne používajúceho fluorescenciu sa môže riešiť použitím chemoluminiscencie ako detekčnej metódy. Pri porovnávaní identických rozborov FSH uskutočnených na silikónovom a keramickom substráte pomocou chemiluminiscenčnej detekcie, silikónový substrát vyžaduje k dosiahnutiu rovnakej hodnoty RLU dvojnásobne dlhšiu expozičnú dobu ako. keramický substrát.
V popise tohto vynálezu boli použité nasledujúce skratky:
APTES
CK-MB
HRPO
LC-SUlfO-NHS
FITC = aminopropyltriethoxysilane = Creative kinese MB (submit)
- horsendish peroxidase = long-chain sulfo-N-hydroxysuccinimide = fluorescein isocarbonate
Claims (18)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Polovodičové zariadenie k uskutočňovaniu multianalytných rozborov zahrňuje substrát a viacnásobné miesta nespojitých reakcií, z ktorých každé je nositeľom ligandu kovalentne pripojeného k substrátu, pričom povrch substrátu medzi reakčnými miestami je voči analytu inertný.
- 2. Zariadenie podľa nároku l, vyznačujúce sa tým, že povrch substrátu je nerovnomerný, pričom z interakcie medzi analytom a ligandom je možné získať zosilnený signál.
- 3. Zariadenie podľa nároku 2, vyznačujúce sa tým, že zahrňuje sústavu reakčných kanálikov, hrebeňov stĺpikov, bodov, komôrok, jamiek, priehlbní alebo malých jamiek.
- 4. Zariadenie podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujce sa tým, že substrát je zhotovený z keramického materiálu skla, kremíka alebo silikónu.Zariadenie podľa ktoréhokoľvek z nárokov, vyznačujúce sa plochu menšiu ako 1 cm2Zariadenie podľa ktoréhokoľvek nárokov, vyznačujúce s každého reakčného miesta je menšia z predchádzajúcich a t ý m, že plocha ako 1 mm2.Zariadenie podľa ktoréhokoľvek z nárokov, vyznačujúce sa predchádzaj úcich tým, že má predchádz aj úc i ch tým, že sa dá-34získať pomocou aktivácie povrchu substrátu a nanesením sústavy ligandov na nespojité plochy povrchu.
- 8. Zariadenie podľa nároku 7, vyznačujúce sa tým, že proces ďalej zahrňuje blokáciu ostatných aktívnych plôch.
- 9. Zariadenie podľa nároku 7a 8, vyznačujúce sa t ý m, že proces zahrňuje hydrofobizáciu ostatných plôch a ďalej tým, že ligandy sa aplikujú vo vode.
- 10. Zariadenie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 7 až 9, vyznačujúce sa tým, že nanášanie ligandov zahrňuje začiatočný krok kontaktovania aktivovaného povrchu organosilanom.
- 11. Zariadenie podľa nároku 10, vyznačujúce sa t ý m, že organosilan má vzorec (RO)3Si-(CHa)n-X, kde každé R je hydrokarbylová skupina, n je celé číslo a X je funkčná skupina.
- 12. Zariadenie podľa nároku 10 alebo 11, vyznačujúce sa tým, že proces zahrňuje použitie bifunkčných linkerov s krížovou väzbou, ktoré majú uľahčiť kovalentné pripojenie biologických ligandov k organosilanu.
- 13. Zariadenie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 10 až 12, vyznačujúce sa tým, že fotolabilný linker s krížovou väzbou sa používa k reakcii s organosilanom, ktorý má nukleofilnú alebo elektrofilnú koncovú skupinu.
- 14. Zariadenie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 8,-35vyznačujúce sa tým, že sa získava znehybnením ligandov na povrchu derivatizácie makromolekulami, napríklad polystyrén-latexovými časticami, dendrimery alebo polyetylén glykoly, ktoré obsahujú chemické skupiny uľahčujúce kovalentné pripojenie ligandov.
- 15. Zariadenie podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúce sa tým, že ďalej zahrňuje ligandy, ktoré viažu materiály, ktorých prítomnosť pôsobí rušivé pri rozbore analytu.
- 16. Použitie zariadenia podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačuj úceho sa t ý m, že je určené k multianalytnému rozboru.
- 17. Zariadenie podľa nároku 16, vyznačujúce sa tým, že zahrňuje pozorovanie sústavy miest, ku ktorým je pripojený a/alebo nie je pripojený analyt, a uvádzanie tejto informácie do vzťahu s ligandami.Použitie zariadenia vyznačuj úce zobrazovanie pomocou
- 18. Použitie zariadenia podľa nároku 16 alebo 17, sa tým, že zahrňuje zariadenia CCD (Chargé Coupled Device) typu so spätným osvetlením, ktoré je schopné zisťovať svetlo z reakcie cheluminiscenčného svetla, kde vlnová dĺžka zisťovaného svetla je menšia ako 450 nm.
- 19. Použitie zariadenia podľa ktoréhokoľvek z nárokov 16 a 18,vyznačujúce sa tým, že sa analyty vyberajú z antibiotík, hormónov, značkovačov srdečných porúch, značkovačov infekčných ochorení, alergických značkovačov, liekov zneužívaných enzýmov, vírov,-36nukleotidov a peptidov.
- 20. Použitie zariadenia podľa ktoréhokoľvek z nárokov 16 až 19, vyzačujúce sa tým, že analyty sú prítomné vo vzorke krvi, séra, plazmy, moči, žlči, tkaniva alebo potrave.analýzy zahrňujúci zariadenie z nárokov 1 až 15, sa tým, že sa skladá ovládacieho systému vzorky, tekutého činidla, teplotou CCD kamery a prístroja
- 21. Systém multianalytnej podľa ktoréhokoľvek vyznačujúci z prevodnej plošinky, zásobovacieho systému ovládanej tmavej skrinky, zobrazovacieho procesu.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP97302707 | 1997-04-21 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK51098A3 true SK51098A3 (en) | 1998-11-04 |
| SK283340B6 SK283340B6 (sk) | 2003-06-03 |
Family
ID=8229307
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK510-98A SK283340B6 (sk) | 1997-04-21 | 1998-04-21 | Spôsob výroby zariadenia na vykonávanie multianalytných rozborov |
Country Status (32)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6498010B1 (sk) |
| JP (1) | JP4209494B2 (sk) |
| KR (1) | KR100585548B1 (sk) |
| CN (1) | CN1178063C (sk) |
| AR (1) | AR015110A1 (sk) |
| AT (1) | ATE289684T1 (sk) |
| AU (1) | AU713388B2 (sk) |
| BR (1) | BR9800655A (sk) |
| CA (1) | CA2235183C (sk) |
| CZ (1) | CZ297165B6 (sk) |
| DE (1) | DE69829089T3 (sk) |
| EG (1) | EG22471A (sk) |
| ES (1) | ES2238750T5 (sk) |
| GB (1) | GB2324866B (sk) |
| GE (1) | GEP20022846B (sk) |
| HK (1) | HK1012202A1 (sk) |
| HR (1) | HRP980215A2 (sk) |
| HU (1) | HU220777B1 (sk) |
| ID (1) | ID20179A (sk) |
| MY (1) | MY114814A (sk) |
| NO (1) | NO981766L (sk) |
| NZ (1) | NZ330227A (sk) |
| PL (1) | PL325914A1 (sk) |
| PT (1) | PT874242E (sk) |
| RU (1) | RU2168174C2 (sk) |
| SG (1) | SG87765A1 (sk) |
| SK (1) | SK283340B6 (sk) |
| TR (1) | TR199800737A1 (sk) |
| TW (1) | TWI225928B (sk) |
| UA (1) | UA54400C2 (sk) |
| YU (1) | YU49328B (sk) |
| ZA (1) | ZA983345B (sk) |
Families Citing this family (76)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ297165B6 (cs) * | 1997-04-21 | 2006-09-13 | Randox Laboratories Ltd. A British Company Of Ardmore | Zpusob výroby zarízení s pevnou fází k provádení multianalytních rozboru |
| US20060029926A1 (en) * | 1998-05-06 | 2006-02-09 | Metrika, Inc. | Blocking compositions for immunoassays |
| JP4261661B2 (ja) * | 1999-01-28 | 2009-04-30 | キヤノン株式会社 | プローブ結合基板、プローブ結合基板の製造方法、プローブアレイ、標的物質の検出方法、サンプル中の一本鎖核酸の塩基配列を特定する方法、及びサンプル中の標的物質の定量方法 |
| US6326083B1 (en) * | 1999-03-08 | 2001-12-04 | Calipher Technologies Corp. | Surface coating for microfluidic devices that incorporate a biopolymer resistant moiety |
| WO2001004633A2 (en) * | 1999-07-14 | 2001-01-18 | Spectral Diagnostics, Inc. | Preparation of spheres for diagnostic tests |
| AUPR005600A0 (en) * | 2000-09-12 | 2000-10-05 | University Of Sydney, The | Diagnostic assay |
| GB0027064D0 (en) * | 2000-11-06 | 2000-12-20 | Randox Lab Ltd | Multi-analyte immunoassay |
| US6649078B2 (en) * | 2000-12-06 | 2003-11-18 | The Regents Of The University Of California | Thin film capillary process and apparatus |
| GB0102357D0 (en) | 2001-01-30 | 2001-03-14 | Randox Lab Ltd | Imaging method |
| AU2002322458A1 (en) | 2001-07-13 | 2003-01-29 | Nanosphere, Inc. | Method for immobilizing molecules onto surfaces |
| GB0120202D0 (en) | 2001-08-18 | 2001-10-10 | Psimedica | Body fluid collection and analysis |
| US7097882B2 (en) * | 2001-08-21 | 2006-08-29 | Samsung Sdi Co., Ltd. | Substrate for immobilizing physiological material, and method of fabricating same |
| GB0124338D0 (en) * | 2001-10-10 | 2001-11-28 | Randox Lab Ltd | Biochips |
| US6780602B2 (en) * | 2001-11-01 | 2004-08-24 | Microbiosystems, Limited Partnership | Taxonomic identification of pathogenic microorganisms and their toxic proteins |
| KR100450191B1 (ko) * | 2001-12-28 | 2004-10-02 | 삼성에스디아이 주식회사 | 생체물질 고정용 기판 및 이의 제조방법 |
| EP1495326A1 (de) * | 2002-04-12 | 2005-01-12 | Micronas GmbH | Verfahren zum immobilisieren von molekülen auf oberflächen |
| US20030208936A1 (en) * | 2002-05-09 | 2003-11-13 | Lee Charles Hee | Method for manufacturing embroidery decorated cards and envelopes |
| US20040115830A1 (en) * | 2002-09-25 | 2004-06-17 | Igor Touzov | Components for nano-scale Reactor |
| US7070922B2 (en) * | 2002-12-04 | 2006-07-04 | International Business Machines Corporation | Surface treatment |
| US20040129676A1 (en) * | 2003-01-07 | 2004-07-08 | Tan Roy H. | Apparatus for transfer of an array of liquids and methods for manufacturing same |
| US6972148B2 (en) * | 2003-06-23 | 2005-12-06 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Glove having improved donning characteristics |
| US9492820B2 (en) | 2003-09-19 | 2016-11-15 | Applied Biosystems, Llc | High density plate filler |
| US8277760B2 (en) | 2003-09-19 | 2012-10-02 | Applied Biosystems, Llc | High density plate filler |
| US7695688B2 (en) * | 2003-09-19 | 2010-04-13 | Applied Biosystems, Llc | High density plate filler |
| US7998435B2 (en) | 2003-09-19 | 2011-08-16 | Life Technologies Corporation | High density plate filler |
| US7407630B2 (en) | 2003-09-19 | 2008-08-05 | Applera Corporation | High density plate filler |
| JP4814103B2 (ja) * | 2003-11-12 | 2011-11-16 | バイオ−ラッド・ハイファ・リミテッド | アレイフォーマットにおいて複数の結合反応を実行するためのシステムおよび方法 |
| AU2003300703A1 (en) * | 2003-12-31 | 2005-07-21 | Council Of Scientific And Industrial Research | Method and kit for pesticide analysis |
| US20090010819A1 (en) * | 2004-01-17 | 2009-01-08 | Gyros Patent Ab | Versatile flow path |
| US8592219B2 (en) | 2005-01-17 | 2013-11-26 | Gyros Patent Ab | Protecting agent |
| WO2005075982A2 (en) | 2004-02-09 | 2005-08-18 | Rapid Pathogen Screening Inc. | Method for the rapid diagnosis of targets in human body fluids |
| US20140031249A1 (en) * | 2004-07-20 | 2014-01-30 | Sqi Diagnostics Systems Inc. | Multiplex measure of isotype antigen response |
| US7229782B1 (en) | 2004-08-03 | 2007-06-12 | Labone, Inc. | Antibodies specific to multiple beta blockers and methods for their use |
| EP1657235B1 (en) | 2004-11-10 | 2011-09-21 | Randox Laboratories Ltd. | Phenethanolamine-derived haptens, immunogens and conjugates comprising them and antibodies recognising said immunogenes and conjugates |
| FR2879483B1 (fr) * | 2004-12-20 | 2007-04-27 | Commissariat Energie Atomique | Procede pour augmenter l'hydrophobicite d'un revetement externe d'un dispositif d'analyse, tel qu'une biopuce, un tel dispositif et procedes pour sa fabrication |
| US7396689B2 (en) * | 2005-02-04 | 2008-07-08 | Decision Biomarkers Incorporated | Method of adjusting the working range of a multi-analyte assay |
| US8445293B2 (en) | 2005-02-09 | 2013-05-21 | Rapid Pathogen Screening, Inc. | Method to increase specificity and/or accuracy of lateral flow immunoassays |
| EP1712914A1 (fr) * | 2005-04-14 | 2006-10-18 | Unisensor S.A. | Procédé in vitro pour la detection et l'identification simultanées d'antibiotiques de classes differentes et trousse de diagnostic correspondante |
| EP1787699A1 (en) * | 2005-11-17 | 2007-05-23 | Vicam, L.P. | Multi-analyte affinity column |
| KR100722321B1 (ko) | 2005-12-28 | 2007-05-28 | 성균관대학교산학협력단 | 모세관력 리소그래피와 자기조립단분자막을 이용한 단백질패턴 형성 방법 및 이를 이용하여 제조된 단백질칩 |
| US8084765B2 (en) * | 2007-05-07 | 2011-12-27 | Xerox Corporation | Electronic device having a dielectric layer |
| US9121843B2 (en) | 2007-05-08 | 2015-09-01 | Trustees Of Boston University | Chemical functionalization of solid-state nanopores and nanopore arrays and applications thereof |
| JP5255247B2 (ja) * | 2007-09-04 | 2013-08-07 | 富士フイルム株式会社 | 基質の結合と反応生成物を同時に検出できるバイオセンサー |
| JP5209705B2 (ja) | 2008-05-08 | 2013-06-12 | 株式会社日立ハイテクノロジーズ | 自動分析装置 |
| ES2672201T3 (es) | 2008-07-16 | 2018-06-13 | Children's Medical Center Corporation | Dispositivo de imitación de órganos con microcanales y métodos de uso |
| US9562905B2 (en) | 2009-07-29 | 2017-02-07 | Radox Laboratories Limited | Method for detection of, or the risk of, bladder cancer |
| AU2010301128B2 (en) | 2009-09-30 | 2014-09-18 | Quantapore, Inc. | Ultrafast sequencing of biological polymers using a labeled nanopore |
| WO2012154729A1 (en) * | 2011-05-09 | 2012-11-15 | President And Fellows Of Harvard College | A microfluidic module and uses thereof |
| US9566560B2 (en) * | 2011-10-06 | 2017-02-14 | Illumina, Inc. | Array domains having rotated patterns |
| US9725687B2 (en) | 2011-12-09 | 2017-08-08 | President And Fellows Of Harvard College | Integrated human organ-on-chip microphysiological systems |
| GB201214440D0 (en) | 2012-08-13 | 2012-09-26 | Randox Lab Ltd | Kidney disease biomarker |
| US20140072959A1 (en) | 2012-09-12 | 2014-03-13 | Force Diagnostics, Inc. | Rapid tests for insurance underwriting |
| GB201218570D0 (en) | 2012-10-16 | 2012-11-28 | Randox Lab Ltd | Method |
| US9651539B2 (en) | 2012-10-28 | 2017-05-16 | Quantapore, Inc. | Reducing background fluorescence in MEMS materials by low energy ion beam treatment |
| CA2910019A1 (en) | 2013-05-24 | 2014-11-27 | Quantapore, Inc. | Nanopore-based nucleic acid analysis with mixed fret detection |
| BE1022360B1 (fr) * | 2013-11-19 | 2016-03-24 | Tekinvest Sprl | Puits de microplaque, support de maintien et procede pour la detection d'analytes |
| EP3129785B1 (en) * | 2014-04-09 | 2019-02-27 | Randox Laboratories Ltd. | Diagnosis of cancer by detecting dimeric il-18 |
| WO2015161219A1 (en) * | 2014-04-17 | 2015-10-22 | SFC Fluidics, Inc. | Microdialysis platform |
| ES2686736T3 (es) | 2014-07-01 | 2018-10-19 | Randox Laboratories Ltd. | Combinaciones de biomarcadores para su uso en la detección del cáncer de páncreas |
| AU2015330841B2 (en) | 2014-10-10 | 2019-08-15 | Quantapore, Inc. | Nanopore-based polymer analysis with mutually-quenching fluorescent labels |
| CA2964790C (en) | 2014-10-24 | 2023-02-21 | Quantapore, Inc. | Efficient optical analysis of polymers using arrays of nanostructures |
| WO2017011560A1 (en) | 2015-07-15 | 2017-01-19 | Hycor Biomedical, Llc. | Customizable instrument |
| GB201519142D0 (en) | 2015-10-29 | 2015-12-16 | Randox Lab Ltd | Method |
| GB201520341D0 (en) * | 2015-11-18 | 2015-12-30 | Randox Lab Ltd And Randox Teoranta | Improvements relating to substrates for the attachment of molecules |
| US20190154672A1 (en) | 2016-06-30 | 2019-05-23 | Randox Laboratories Ltd. | Measurement of fabp for diagnosis |
| CN109477813A (zh) | 2016-07-05 | 2019-03-15 | 昆塔波尔公司 | 基于光学的纳米孔测序 |
| GB201818744D0 (en) | 2018-11-16 | 2019-01-02 | Randox Laboratories Ltd | Detection of bladder cancer |
| GB201910730D0 (en) | 2019-07-26 | 2019-09-11 | Randox Teoranta | Bovine Pathogen Array |
| GB201916186D0 (en) | 2019-11-07 | 2019-12-25 | Randox Laboratories Ltd | Biomarkers for aiding in the diagnosis of mental disorders |
| GB202014755D0 (en) | 2020-09-18 | 2020-11-04 | Randox Laboratories Ltd | Methods to determine coronavirus infectivty status |
| GB202019663D0 (en) | 2020-12-14 | 2021-01-27 | Randox Laboratories | Predictive biomarkers for risk of bladder cancer in diabetes patients |
| GB202104287D0 (en) | 2021-03-26 | 2021-05-12 | Randox Laboratories | Method for determining prognosis of chronic kidney disease |
| GB202111635D0 (en) | 2021-08-13 | 2021-09-29 | Randox Laboratories | Risk prediction model for prostate cancer |
| GB202114088D0 (en) | 2021-10-01 | 2021-11-17 | Randox Laboratories | Detection of bladder cancer in males |
| GB202203639D0 (en) | 2022-03-16 | 2022-04-27 | Randox Laboratories Ltd | Standardisation method for glycosylation arrays |
| GB202204413D0 (en) | 2022-03-29 | 2022-05-11 | Randox Laboratories Ltd | Markers for progression of inflammatory liver disease |
Family Cites Families (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AR231590A1 (es) * | 1981-04-29 | 1984-12-28 | Ciba Geigy Ag | Dispositivo de analisis inmunologico y procedimiento para obtenerlo |
| SE431620B (sv) | 1982-07-07 | 1984-02-20 | Stojan Popovic | Suganordning, speciellt avsedd att anvendas som tennsug vid lodningsarbeten |
| US4591570A (en) * | 1983-02-02 | 1986-05-27 | Centocor, Inc. | Matrix of antibody-coated spots for determination of antigens |
| GB8314523D0 (en) * | 1983-05-25 | 1983-06-29 | Lowe C R | Diagnostic device |
| US4745075A (en) * | 1984-09-06 | 1988-05-17 | Burroughs Wellcome Co. | Diagnostic test methods |
| US4829010A (en) * | 1987-03-13 | 1989-05-09 | Tanox Biosystems, Inc. | Immunoassay device enclosing matrixes of antibody spots for cell determinations |
| GB8803000D0 (en) * | 1988-02-10 | 1988-03-09 | Ekins Roger Philip | Determination of ambient concentrations of several analytes |
| SU1696399A1 (ru) | 1988-07-01 | 1991-12-07 | Государственный научно-исследовательский и проектный институт по обогащению руд цветных металлов "Казмеханобр" | Способ очистки сточных вод от ионов т желых металлов |
| WO1990001564A1 (en) * | 1988-08-09 | 1990-02-22 | Microprobe Corporation | Methods for multiple target analyses through nucleic acid hybridization |
| US5077210A (en) * | 1989-01-13 | 1991-12-31 | Eigler Frances S | Immobilization of active agents on substrates with a silane and heterobifunctional crosslinking agent |
| US5120662A (en) * | 1989-05-09 | 1992-06-09 | Abbott Laboratories | Multilayer solid phase immunoassay support and method of use |
| US5474796A (en) * | 1991-09-04 | 1995-12-12 | Protogene Laboratories, Inc. | Method and apparatus for conducting an array of chemical reactions on a support surface |
| FR2693740B1 (fr) | 1992-07-17 | 1994-10-14 | Univ Joseph Fourier | Procédé de détection tissulaire ou cellulaire mettant en Óoeuvre des réactifs chimiluminescents. |
| GB2269896B (en) | 1992-08-03 | 1997-03-12 | Marconi Gec Ltd | Separation method |
| JPH06148188A (ja) * | 1992-11-13 | 1994-05-27 | Olympus Optical Co Ltd | 免疫学的再検査方法 |
| WO1994023298A1 (en) * | 1993-03-30 | 1994-10-13 | Terrapin Technologies, Inc. | Determination of concentration by affinity titration and competitive displacement in drug delivery |
| ES2169079T3 (es) * | 1993-05-18 | 2002-07-01 | Univ Utah Res Found | Aparato y metodos para fluoroinmunoensayos homogeneos multianalitos. |
| GB9325100D0 (en) * | 1993-12-07 | 1994-02-02 | Univ Court Of The University O | Device |
| US5814565A (en) * | 1995-02-23 | 1998-09-29 | University Of Utah Research Foundation | Integrated optic waveguide immunosensor |
| US5624711A (en) * | 1995-04-27 | 1997-04-29 | Affymax Technologies, N.V. | Derivatization of solid supports and methods for oligomer synthesis |
| EP0768530A1 (en) * | 1995-10-16 | 1997-04-16 | Nippon Paint Co., Ltd. | Process for assaying biological substance |
| CZ297165B6 (cs) * | 1997-04-21 | 2006-09-13 | Randox Laboratories Ltd. A British Company Of Ardmore | Zpusob výroby zarízení s pevnou fází k provádení multianalytních rozboru |
| EP0874242B2 (en) * | 1997-04-21 | 2009-06-03 | Randox Laboratories Ltd. | Device and apparatus for the simultaneous detection of multiple analytes |
-
1998
- 1998-04-17 CZ CZ0116998A patent/CZ297165B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-04-17 BR BR9800655A patent/BR9800655A/pt not_active Application Discontinuation
- 1998-04-20 CA CA002235183A patent/CA2235183C/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-20 GB GB9808309A patent/GB2324866B/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-20 SG SG9800759A patent/SG87765A1/en unknown
- 1998-04-20 RU RU98107571/13A patent/RU2168174C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-04-20 HU HU9800920A patent/HU220777B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1998-04-20 AU AU61988/98A patent/AU713388B2/en not_active Expired
- 1998-04-20 PT PT98303019T patent/PT874242E/pt unknown
- 1998-04-20 NO NO981766A patent/NO981766L/no not_active Application Discontinuation
- 1998-04-20 ES ES98303019T patent/ES2238750T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-20 AT AT98303019T patent/ATE289684T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-04-20 NZ NZ330227A patent/NZ330227A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-04-20 DE DE69829089T patent/DE69829089T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-20 UA UA98041977A patent/UA54400C2/uk unknown
- 1998-04-21 PL PL98325914A patent/PL325914A1/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-04-21 AR ARP980101840A patent/AR015110A1/es active IP Right Grant
- 1998-04-21 TR TR1998/00737A patent/TR199800737A1/xx unknown
- 1998-04-21 YU YU17498A patent/YU49328B/sh unknown
- 1998-04-21 JP JP11068798A patent/JP4209494B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-21 ID IDP980597A patent/ID20179A/id unknown
- 1998-04-21 CN CNB981152546A patent/CN1178063C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-21 GE GEAP19984247A patent/GEP20022846B/en unknown
- 1998-04-21 ZA ZA983345A patent/ZA983345B/xx unknown
- 1998-04-21 KR KR1019980014131A patent/KR100585548B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-04-21 TW TW087106047A patent/TWI225928B/zh not_active IP Right Cessation
- 1998-04-21 EG EG34198D patent/EG22471A/xx active
- 1998-04-21 SK SK510-98A patent/SK283340B6/sk unknown
- 1998-04-21 HR HR97302707.1A patent/HRP980215A2/hr not_active Application Discontinuation
- 1998-04-21 MY MYPI98001772A patent/MY114814A/en unknown
- 1998-12-16 HK HK98113653A patent/HK1012202A1/xx not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-10-07 US US09/413,799 patent/US6498010B1/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SK51098A3 (en) | Device and apparatus for the simultaneous detection of multiple analytes | |
| EP0874242B1 (en) | Device and apparatus for the simultaneous detection of multiple analytes | |
| FI76888B (fi) | Nya medel och foerpackningar foer immunologiska analyser. | |
| JPH03506078A (ja) | 化学的試験方法において使用する装置 | |
| US20060286682A1 (en) | Surface treatment | |
| US4689310A (en) | Methods for attaching ligands or anti-ligands to a solid phase | |
| JPH02176466A (ja) | 液性試料中の特定物質の測定方法および測定器具 | |
| CN102539733B (zh) | 一种可视化塑料基生物芯片及其制备方法和检测方法 | |
| GB1565401A (en) | Viewing housing for a diagnostic reagent holder and method | |
| US7947461B2 (en) | Colloidal silica particle containing light-absorbing substance, nano light-absorbing material, absorption labeling nanobead kit, and method for detection or quantification of biological molecule using the colloidal silica particle containing light-absorbing substance | |
| US4791069A (en) | Methods for attaching ligands or anti-ligands to a solid phase | |
| JPH1164336A (ja) | 免疫クロマトグラフィーによる分析対象物の検出方法 | |
| AU1364300A (en) | Quantitative determination of analytes in a heterogeneous system | |
| JP4000671B2 (ja) | 非特異的吸着防止剤 | |
| JP2001228151A (ja) | 免疫クロマトグラフィー装置 | |
| JP3179673B2 (ja) | 多層乾式イムノアッセイ要素およびイムノアッセイの実施方法 | |
| Mitchell et al. | Surface plasmon resonance biosensors for highly sensitive detection of small biomolecules | |
| JP2000065832A (ja) | フィルター状生物学的特異反応測定用担体およびそれを用いた測定方法 | |
| MXPA98003102A (es) | Dispositivo y aparato para la deteccion simultanea de analitos multiples | |
| WO2008066994A2 (en) | Application of surface plasmon resonance technology to maternal serum screening for congenital birth defects | |
| US20020127732A1 (en) | Process for the diagnosis of diseases, pathological states and pathophysiological as well as physiological measurement units | |
| JPH01317389A (ja) | 生化学反応用担体およびその製造方法 | |
| WO2005085853A1 (ja) | バイオチップおよびその製造方法、ならびに該チップを用いた化学物質の相互作用検出方法 |