RU2168174C2 - Твердое устройство для проведения мультианалитных анализов, способ его формирования и система, включающая такое устройство - Google Patents
Твердое устройство для проведения мультианалитных анализов, способ его формирования и система, включающая такое устройство Download PDFInfo
- Publication number
- RU2168174C2 RU2168174C2 RU98107571/13A RU98107571A RU2168174C2 RU 2168174 C2 RU2168174 C2 RU 2168174C2 RU 98107571/13 A RU98107571/13 A RU 98107571/13A RU 98107571 A RU98107571 A RU 98107571A RU 2168174 C2 RU2168174 C2 RU 2168174C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- substrate
- reaction sites
- ligands
- reaction
- indicated
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 43
- 239000012491 analyte Substances 0.000 title claims abstract description 18
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title claims description 30
- 239000007787 solid Substances 0.000 title claims description 11
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 111
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 68
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 50
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims abstract description 9
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 claims description 30
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 24
- 239000010703 silicon Substances 0.000 claims description 24
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 claims description 24
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 claims description 22
- 150000001282 organosilanes Chemical class 0.000 claims description 21
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 14
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 13
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 claims description 12
- 229910010293 ceramic material Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 239000004816 latex Substances 0.000 claims description 10
- 229920000126 latex Polymers 0.000 claims description 10
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 claims description 9
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 claims description 9
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 8
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 8
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 8
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 7
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 7
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 7
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 6
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 claims description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 5
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 4
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 4
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 claims description 3
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims description 3
- 230000007815 allergy Effects 0.000 claims description 3
- 239000010453 quartz Substances 0.000 claims description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 claims description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 2
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 claims description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 2
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 claims description 2
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 claims 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 27
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- NVBFHJWHLNUMCV-UHFFFAOYSA-N sulfamide Chemical class NS(N)(=O)=O NVBFHJWHLNUMCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 18
- -1 fluoroaryl azides Chemical class 0.000 description 16
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 8
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 6
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 6
- 102000003946 Prolactin Human genes 0.000 description 6
- 108010057464 Prolactin Proteins 0.000 description 6
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 6
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 6
- 229940097325 prolactin Drugs 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N (3-aminopropyl)triethoxysilane Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)CCCN WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 5
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 5
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 5
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical group O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 5
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 239000012965 benzophenone Substances 0.000 description 4
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920002120 photoresistant polymer Polymers 0.000 description 4
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 3
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 3
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 3
- BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N Silane Chemical compound [SiH4] BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- RWCCWEUUXYIKHB-UHFFFAOYSA-N benzophenone Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)C1=CC=CC=C1 RWCCWEUUXYIKHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 3
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 description 3
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 3
- 150000003456 sulfonamides Chemical class 0.000 description 3
- AQLJVWUFPCUVLO-UHFFFAOYSA-N urea hydrogen peroxide Chemical compound OO.NC(N)=O AQLJVWUFPCUVLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UVGHPGOONBRLCX-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-[5-(2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl)pentanoylamino]hexanoate Chemical compound S1CC2NC(=O)NC2C1CCCCC(=O)NCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O UVGHPGOONBRLCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HVBSAKJJOYLTQU-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzenesulfonic acid Chemical compound NC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 HVBSAKJJOYLTQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GOUHYARYYWKXHS-UHFFFAOYSA-N 4-formylbenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(C=O)C=C1 GOUHYARYYWKXHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 2
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 241001325209 Nama Species 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- 102000011923 Thyrotropin Human genes 0.000 description 2
- 108010061174 Thyrotropin Proteins 0.000 description 2
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 229940126575 aminoglycoside Drugs 0.000 description 2
- 239000003263 anabolic agent Substances 0.000 description 2
- 229940070021 anabolic steroids Drugs 0.000 description 2
- 229940125388 beta agonist Drugs 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 125000003700 epoxy group Chemical group 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Substances OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 150000002960 penicillins Chemical class 0.000 description 2
- 238000000206 photolithography Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000002444 silanisation Methods 0.000 description 2
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 2
- 229940040944 tetracyclines Drugs 0.000 description 2
- 238000012876 topography Methods 0.000 description 2
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RBKHNGHPZZZJCI-UHFFFAOYSA-N (4-aminophenyl)-phenylmethanone Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1C(=O)C1=CC=CC=C1 RBKHNGHPZZZJCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QBLFZIBJXUQVRF-UHFFFAOYSA-N (4-bromophenyl)boronic acid Chemical compound OB(O)C1=CC=C(Br)C=C1 QBLFZIBJXUQVRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GFNDFCFPJQPVQL-UHFFFAOYSA-N 1,12-diisocyanatododecane Chemical compound O=C=NCCCCCCCCCCCCN=C=O GFNDFCFPJQPVQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SWJPEBQEEAHIGZ-UHFFFAOYSA-N 1,4-dibromobenzene Chemical compound BrC1=CC=C(Br)C=C1 SWJPEBQEEAHIGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFMWZTSOMGDDJU-UHFFFAOYSA-N 1,4-diiodobenzene Chemical compound IC1=CC=C(I)C=C1 LFMWZTSOMGDDJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNTGWXAZMZPJPH-UHFFFAOYSA-N 1-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)oxypyrrolidine-2,5-dione Chemical compound O=C1CCC(=O)N1ON1C(=O)CCC1=O SNTGWXAZMZPJPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PFDBEACWLCHWRZ-UHFFFAOYSA-N 2-(4-bromophenyl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)C(C)C1=CC=C(Br)C=C1 PFDBEACWLCHWRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RFVPGSSPXLQNDN-UHFFFAOYSA-N 2-(fluoromethyl)pyridin-1-ium;4-methylbenzenesulfonate Chemical compound FCC1=CC=CC=[NH+]1.CC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 RFVPGSSPXLQNDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003852 3-chlorobenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C(Cl)=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- BKMRWJWLBHHGCF-UHFFFAOYSA-N 4-(2-bromoethyl)benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(CCBr)C=C1 BKMRWJWLBHHGCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WWYFPDXEIFBNKE-UHFFFAOYSA-N 4-(hydroxymethyl)benzoic acid Chemical compound OCC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 WWYFPDXEIFBNKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PQXPAFTXDVNANI-UHFFFAOYSA-N 4-azidobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1 PQXPAFTXDVNANI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FIDFAAJZZHCBDJ-UHFFFAOYSA-N 4-bromo-2-phenylbenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(Br)C=C1C1=CC=CC=C1 FIDFAAJZZHCBDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TUXYZHVUPGXXQG-UHFFFAOYSA-N 4-bromobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(Br)C=C1 TUXYZHVUPGXXQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006283 4-chlorobenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1Cl)C([H])([H])* 0.000 description 1
- SKDHHIUENRGTHK-UHFFFAOYSA-N 4-nitrobenzoyl chloride Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(C(Cl)=O)C=C1 SKDHHIUENRGTHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BRLRJZRHRJEWJY-VCOUNFBDSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-n-[3-[3-(4-azido-2-nitroanilino)propyl-methylamino]propyl]pentanamide Chemical group C([C@H]1[C@H]2NC(=O)N[C@H]2CS1)CCCC(=O)NCCCN(C)CCCNC1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1[N+]([O-])=O BRLRJZRHRJEWJY-VCOUNFBDSA-N 0.000 description 1
- 229910018072 Al 2 O 3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 1
- BVTJGGGYKAMDBN-UHFFFAOYSA-N Dioxetane Chemical compound C1COO1 BVTJGGGYKAMDBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000030914 Fatty Acid-Binding Human genes 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000007390 Glycogen Phosphorylase Human genes 0.000 description 1
- 108010046163 Glycogen Phosphorylase Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- 102000036675 Myoglobin Human genes 0.000 description 1
- 108010062374 Myoglobin Proteins 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical class ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YGYAWVDWMABLBF-UHFFFAOYSA-N Phosgene Chemical compound ClC(Cl)=O YGYAWVDWMABLBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 229920002556 Polyethylene Glycol 300 Polymers 0.000 description 1
- NHUHCSRWZMLRLA-UHFFFAOYSA-N Sulfisoxazole Chemical compound CC1=NOC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=C1C NHUHCSRWZMLRLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PJSFRIWCGOHTNF-UHFFFAOYSA-N Sulphormetoxin Chemical compound COC1=NC=NC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=C1OC PJSFRIWCGOHTNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 102000004903 Troponin Human genes 0.000 description 1
- 108090001027 Troponin Proteins 0.000 description 1
- 102000004987 Troponin T Human genes 0.000 description 1
- 108090001108 Troponin T Proteins 0.000 description 1
- GKXVJHDEWHKBFH-UHFFFAOYSA-N [2-(aminomethyl)phenyl]methanamine Chemical compound NCC1=CC=CC=C1CN GKXVJHDEWHKBFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 229960004050 aminobenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 150000008366 benzophenones Chemical class 0.000 description 1
- 239000002876 beta blocker Substances 0.000 description 1
- 229940097320 beta blocking agent Drugs 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 1
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 1
- 125000004057 biotinyl group Chemical class [H]N1C(=O)N([H])[C@]2([H])[C@@]([H])(SC([H])([H])[C@]12[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- PFYXSUNOLOJMDX-UHFFFAOYSA-N bis(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) carbonate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)ON1C(=O)CCC1=O PFYXSUNOLOJMDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- QARVLSVVCXYDNA-UHFFFAOYSA-N bromobenzene Chemical compound BrC1=CC=CC=C1 QARVLSVVCXYDNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- KRVSOGSZCMJSLX-UHFFFAOYSA-L chromic acid Substances O[Cr](O)(=O)=O KRVSOGSZCMJSLX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000001427 coherent effect Effects 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N cyanuric chloride Chemical compound ClC1=NC(Cl)=NC(Cl)=N1 MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- FFYPMLJYZAEMQB-UHFFFAOYSA-N diethyl pyrocarbonate Chemical compound CCOC(=O)OC(=O)OCC FFYPMLJYZAEMQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002050 diffraction method Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003640 drug residue Substances 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000005370 electroosmosis Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 229920006335 epoxy glue Polymers 0.000 description 1
- 125000001301 ethoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])O* 0.000 description 1
- RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N ethyl chloroformate Chemical compound CCOC(Cl)=O RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091022862 fatty acid binding Proteins 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 229940124307 fluoroquinolone Drugs 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- AWJWCTOOIBYHON-UHFFFAOYSA-N furo[3,4-b]pyrazine-5,7-dione Chemical compound C1=CN=C2C(=O)OC(=O)C2=N1 AWJWCTOOIBYHON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- RRAMGCGOFNQTLD-UHFFFAOYSA-N hexamethylene diisocyanate Chemical compound O=C=NCCCCCCN=C=O RRAMGCGOFNQTLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N hexane-1,6-diamine Chemical compound NCCCCCCN NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011141 high resolution liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- LFKYBJLFJOOKAE-UHFFFAOYSA-N imidazol-2-ylidenemethanone Chemical compound O=C=C1N=CC=N1 LFKYBJLFJOOKAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000002555 ionophore Substances 0.000 description 1
- 230000000236 ionophoric effect Effects 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 125000001261 isocyanato group Chemical group *N=C=O 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- JMZFEHDNIAQMNB-UHFFFAOYSA-N m-aminophenylboronic acid Chemical compound NC1=CC=CC(B(O)O)=C1 JMZFEHDNIAQMNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 125000003854 p-chlorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C([H])C([H])=C1Cl 0.000 description 1
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 238000005498 polishing Methods 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000012048 reactive intermediate Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000012882 sequential analysis Methods 0.000 description 1
- 150000003376 silicon Chemical class 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- XOXHILFPRYWFOD-UHFFFAOYSA-N sulfachloropyridazine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)NC1=CC=C(Cl)N=N1 XOXHILFPRYWFOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950008831 sulfachlorpyridazine Drugs 0.000 description 1
- SEEPANYCNGTZFQ-UHFFFAOYSA-N sulfadiazine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)NC1=NC=CC=N1 SEEPANYCNGTZFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004306 sulfadiazine Drugs 0.000 description 1
- 229960000973 sulfadimethoxine Drugs 0.000 description 1
- ZZORFUFYDOWNEF-UHFFFAOYSA-N sulfadimethoxine Chemical compound COC1=NC(OC)=CC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=N1 ZZORFUFYDOWNEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002135 sulfadimidine Drugs 0.000 description 1
- 229960004673 sulfadoxine Drugs 0.000 description 1
- 229960000654 sulfafurazole Drugs 0.000 description 1
- 229960002597 sulfamerazine Drugs 0.000 description 1
- QPPBRPIAZZHUNT-UHFFFAOYSA-N sulfamerazine Chemical compound CC1=CC=NC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=N1 QPPBRPIAZZHUNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASWVTGNCAZCNNR-UHFFFAOYSA-N sulfamethazine Chemical compound CC1=CC(C)=NC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=N1 ASWVTGNCAZCNNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005158 sulfamethizole Drugs 0.000 description 1
- VACCAVUAMIDAGB-UHFFFAOYSA-N sulfamethizole Chemical compound S1C(C)=NN=C1NS(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=C1 VACCAVUAMIDAGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004936 sulfamethoxypyridazine Drugs 0.000 description 1
- VLYWMPOKSSWJAL-UHFFFAOYSA-N sulfamethoxypyridazine Chemical compound N1=NC(OC)=CC=C1NS(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=C1 VLYWMPOKSSWJAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950000244 sulfanilic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960002211 sulfapyridine Drugs 0.000 description 1
- GECHUMIMRBOMGK-UHFFFAOYSA-N sulfapyridine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC=N1 GECHUMIMRBOMGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001544 sulfathiazole Drugs 0.000 description 1
- JNMRHUJNCSQMMB-UHFFFAOYSA-N sulfathiazole Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)NC1=NC=CS1 JNMRHUJNCSQMMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 1
- KUCOHFSKRZZVRO-UHFFFAOYSA-N terephthalaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=C(C=O)C=C1 KUCOHFSKRZZVRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LXEJRKJRKIFVNY-UHFFFAOYSA-N terephthaloyl chloride Chemical compound ClC(=O)C1=CC=C(C(Cl)=O)C=C1 LXEJRKJRKIFVNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- ZWZVWGITAAIFPS-UHFFFAOYSA-N thiophosgene Chemical compound ClC(Cl)=S ZWZVWGITAAIFPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005490 tosylate group Chemical group 0.000 description 1
- BPSIOYPQMFLKFR-UHFFFAOYSA-N trimethoxy-[3-(oxiran-2-ylmethoxy)propyl]silane Chemical compound CO[Si](OC)(OC)CCCOCC1CO1 BPSIOYPQMFLKFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004506 ultrasonic cleaning Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/551—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being inorganic
- G01N33/552—Glass or silica
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S977/00—Nanotechnology
- Y10S977/902—Specified use of nanostructure
- Y10S977/904—Specified use of nanostructure for medical, immunological, body treatment, or diagnosis
- Y10S977/924—Specified use of nanostructure for medical, immunological, body treatment, or diagnosis using nanostructure as support of dna analysis
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/24—Nuclear magnetic resonance, electron spin resonance or other spin effects or mass spectrometry
Abstract
Изобретение относится к твердому устройству для проведения мультианалитных анализов, способам его формирования и системе, включающей это устройство. Твердое устройство для проведения мультианалитных анализов включает субстрат и множество дискретных реакционных сайтов. Каждый дискретный реакционный сайт имеет лиганд, ковалентно связанный с поверхностью субстрата. Участки поверхности субстрата, которые находятся между реакционными сайтами, являются инертными по отношению к аналиту. Указанное устройство получено с помощью процесса, включающего активирование всей указанной поверхности субстрата. После чего указанным участкам между реакционными сайтами придают гидрофобность путем нанесения ряда лигандов. На указанные дискретные участки поверхности в воде наносят ряд лигандов таким образом, что указанные лиганды не наносятся на указанные гидрофобные участки между реакционными сайтами. Изобретение включает также систему, включающую это устройство и способ формирования твердого устройства для проведения мультианалитных анализов. Изобретение облегчает одновременное проведение множественных анализов одного образца, а также обеспечивает одновременное обнаружение широкого спектра химических веществ. 6 с. и 19 з.п.ф-лы, 15 ил., 10 табл.
Description
Изобретение относится к устройству и прибору для одновременного определения нескольких анализируемых веществ (аналитов).
Обычно различные по составу аналиты анализируются с помощью специальных способов, например ферментного иммуноанализа, жидкостной хроматографии высокого разрешения, газовой хроматографии, ферментных и колориметрических способов. Большинство из этих способов предназначены для анализа одного аналита во время одного теста.
Автоматизация аналитических способов в целом сосредоточена на серийных анализаторах и анализаторах для проверки произвольных проб, где многократные анализы отдельных образцов производятся с использованием отдельных последовательных способов анализа. Это требует использования многочисленных индивидуальных наборов для анализа. Кроме того, анализ требует использования нескольких видов оборудования, например анализаторы для клинического химического анализа, жидкостные хроматографы высокого разрешения, масс-спектроскопы с использованием газовой хроматографии, автоматические приборы для иммуноанализа или приборы с использованием атомного поглощения.
Мультианалитная система должна включать средства для обеспечения одновременного анализа нескольких аналитов в испытуемом образце. Этот анализ должен обеспечивать результаты, идентифицирующие отдельные аналиты и показывать количество каждого отдельного аналита в таком испытуемом образце. Способ мультианалитного анализа часто патентуют, однако обычно оба этих критерия не выдерживаются.
Типичный субстрат мультианалитной системы содержит большое количество различных связывающих лигандов. Испытуемый образец вносят в каждую реакционную зону и после этого для идентификации присутствующего аналита используют многочисленные методы обнаружения. Важно, чтобы используемый способ обнаружения определял количество каждого отдельного аналита.
Наиболее общим способом получения мультианалитных рядов пространственно-различных участков биологически активных лигандов на субстрате является фотолитографический метод. Субстрат покрывают фотолабильным сшивающим агентом. Теоретически этот сшивающий агент становится реактивным по отношению к связующему лиганду только после светового облучения с соответствующей длиной волны. Пространственное разрешение достигается путем нанесения на субстрат физического покрытия (обычно изготавливаемого из хрома). Конфигурация отверстий в покрытии определяет конфигурацию связующих участков на субстрате.
Для каждого иммобилизуемого биологического лиганда общая схема такова: облучение первых сайтов, инкубирование облученного субстрата с первым иммобилизуемым лигандом, промывание с целью удаления плохо связанных лигандов, блокирование непрореагировавших сайтов, активированных на стадии облучения, и облучение участков, где должен быть иммобилизован второй биологический лиганд, после которого повторяются те же стадии, что и для первого лиганда. Пространственное разрешение регулируется путем контроля участка облучения: либо посредством когерентного УФ-лазерного источника света, либо количеством физических покрытий и некогерентного источника света. Это превращает задачу иммобилизации множества биологических лигандов в длительный процесс. Другим недостатком фотолитографического метода является использование дорогих физических покрытий или лазерного источника света. Далее, уровень неспецифического связывания является высоким.
Например, использование арилазидов, фторарилазидов и бензофенонов приводит к высокой степени неспецифического связывания. Высокий уровень неспецифического связывания на высоком фоне анализа значительно снижает динамический диапазон каждого мультианалитного анализа. Неспецифическое связывание происходит в основном из-за пассивной адсорбции молекул неактивированной поверхностью фотолабильного сшивающего агента через ионные взаимодействия, силы Ван-дер-Ваальса и т.д.
WO-A-9516204 описывает фотолитографический подход к уменьшению проблемы, связанной с высоким неспецифическим связыванием. В соответствии с этим подходом поверхностно-сшивающей молекулой является авидин, а фотолабильной молекулой является фотобиотин или его производное. Несмотря на то что заявлено уменьшение неспецифического связывания, этот метод требует вышеуказанной длительной последовательности действий. Иммобилизация 20 отдельных биологических лигандов требует в целом 80 этапов при выполнении основных требований к облучению, связыванию, блокированию и промыванию для каждого отдельного иммобилизуемого лиганда.
Пространственное разрешение также может быть достигнуто пассивной адсорбцией. Например, заявка США-А-5432099 описывает связывание лиганда с поверхностью субстрата путем сочетания ионного взаимодействия, гидрофобного взаимодействия и сил Ван-дер-Ваальса. Пассивная адсорбция зависит от изменений pH, температуры, ионной концентрации и от типа используемого субстрата, затрудняя контроль над процессом связывания. Основным недостатком этого подхода является чувствительность пропорции слабоиммобилизированного лиганда, подлежащего десорбции, во время стадий промывания или инкубирования биологического анализа, что приводит к плохой интра- и интерточности анализа.
Поперечно-сшивающим агентом, описываемым во многих публикациях, является глютаральдегид. Этот сшивающий агент приводит ко многим недостаткам, включая тенденцию белков к поперечному сшиванию, что, возможно, изменяет функции белка. Следующим недостатком является то, что процедура соединения должна включать стадию восстановления, которая является длительной и потенциально очень опасной, например, если в качестве восстановителя используют цианоборогидрид натрия. Используются гетеробифункциональные сшивающие агенты, однако во многих случаях это требует связывания свободных сульфидрильных групп с белком. Это вызывает необходимость модификации белка перед иммобилизацией.
При проведении мультианалитного анализа желательно получать как качественные, так и количественные результаты.
Например, мультианалитные анализы можно проводить с антибиотиками. В большой степени они основаны на анализах с использованием микробного ингибирования, в которых антибиотик, присутствующий в образце, подавляет бактериальный рост и образует очищенную зону, пропорциональную концентрации антибиотика, присутствующего в образце. Однако этот способ не может обеспечить идентификацию антибиотика или точное определение его концентрации. Способы микробного ингибирования также очень медленны, весь процесс занимает несколько дней.
Методы химического скрининга, такие как жидкостная хроматография высокого разрешения или масс-спектроскопия с использованием газовой/жидкостной хроматографии, соперничают в определении крайних членов пропорции: структурное разнообразие/полярность каждой антибиотической группы, например пенициллины, сульфамиды, аминогликозиды, тетрациклины и т.д. Кроме того, хроматографические методы требуют большой работы по приготовлению образца с целью обеспечения такого соотношения сигнала к шуму, при котором могут быть достигнуты пределы обнаружения.
Известные мультианалитные устройства включают Triage (см. Clinical Chemistry 38 (9): 1678-1684 (1992)) и Advisor (см. Clinical Chemistry 39 (9): 1899-1903 (1993)). Эти устройства пригодны только для количественного анализа.
Устройство Triage служит для одновременного обнаружения набора из семи элоупотребляемых лекарственных средств в моче человека. Каждое устройство может анализировать только один образец мочи. В конце процедуры оператор визуально осматривает каждую исследуемую лекарственно-специфическую зону на наличие красной полосы. Все стадии процедуры анализа должны выполняться оператором вручную. Также отсутствует распечатка результатов теста.
Использование устройства Advisor сходно с использованием устройства Triage. Устройство Advisor проверяет пять различных классов злоупотребляемых лекарственных средств. Устройство действует на основе принципов агглютинационного анализа, при этом каждому лекарственному средству предназначен отдельный канал. Все стадии процедуры анализа выполняются оператором. Негативные образцы имеют склеенные частицы, в то время как позитивные образцы лекарственного средства показывают раздельное расположение частиц.
В основном в биосенсорах/микроизготовленных устройствах для биологического использования в качестве субстрата применяют кремний. Иногда субстратом является стекло или кварц. Кремний имеет легко контролируемую кристаллографическую структуру с четко определенными кристаллическими плоскостями. Равномерность кремниевого субстрата идеально подходит для использования в мультианалитном испытательном устройстве.
Однако темные субстраты, такие как кремний, дают так называемый эффект черного тела. При использовании для обнаружения флуоресценции, во время которой фторофор возбуждают, используя свет с определенной длиной волны, темный субстрат может поглощать случайно возбужденную световую энергию, таким образом уменьшая излучение света фторофором.
В соответствии с настоящим изобретением устройство для проведения мультианалитных анализов включает субстрат и множество дискретных реакционных сайтов, каждый из которых имеет лиганд, ковалентно связанный с субстратом, и в котором поверхность субстрата между реакционными сайтами является инертной по отношению к аналиту. Таким образом, данное изобретение обеспечивает твердое мультианалитное устройство, не способное или почти не способное к неспецифическому связыванию.
Заявленное устройство может быть получено активированием поверхности подходящего субстрата и нанесением ряда лигандов на дискретные сайты этой поверхности. При желании другие активные участки могут быть заблокированы. Лиганды могут быть нанесены в водной системе, при этом предпочтительно придание другим участкам гидрофобных свойств. Лиганды могут быть связаны с субстратом посредством сшивающего агента. В частности, предпочтительно, чтобы активированная поверхность реагировала последовательно с органосиланом, бифункциональным сшивающим агентом и лигандом.
Данное изобретение также предусматривает обеспечение используемыми бифункциональными поперечно-сшивающими агентами высокоэффективного химического соединения между органосиланами, ковалентно иммобилизованными на микроизготовленных кремниевых или керамических субстратах. Биологические лиганды могут быть, таким образом, иммобилизованы в мультианалитные ряды.
Данное изобретение устраняет необходимость использования большого количества индивидуальных наборов для реактивного анализа, а также нескольких видов приборов, тем самым облегчая одновременное проведение множественных анализов одного образца. Данное изобретение обеспечивает единый общий анализатор, способный к одновременному обнаружению широкого спектра химических веществ. Кроме того, можно подбирать реактивы для тестирования определенного набора аналитов.
Данное изобретение также предусматривает иммобилизацию большого количества биологических лигандов в пространственно-определенный рисунок, состоящий из точек или линий, путем микрожидкостного распределения лиганда по химически активированному, субстрату. Биологический лиганд ковалентно прикреплен к субстрату. Эффективность присоединения биологического лиганда может быть такова, что химическая реакция завершается в течение нескольких минут. Процедура иммобилизации обеспечивает сохранение биологической активности биологического лиганда на протяжении как короткого, так и длительного времени.
Данное изобретение также обеспечивает единый анализатор для одновременного обнаружения большого числа аналитов в мультианалитной системе. Этот анализатор предусматривает максимальное удобство конечного потребителя, идентифицируя мультианалит и давая количественное определение каждого испытуемого образца. Предпочтительная система для анализа включает трансляционную платформу X-Y, аппарат для обработки образца, средство для контроля жидкой обработки/течения, темную коробку, контролируемую с помощью температуры, камеру устройства с зарядовой связью, а также математическое обеспечение для обработки изображения. Платформа может быть связана с соответствующим мотором для достижения заданной точности, например 10 μм, для расположения устройства (устройств) на каждой стадии аналитической процедуры.
На прилагаемых чертежах:
фиг. 1 показывает образование неравномерной поверхности субстрата,
фиг. 2 показывает химическое активирование групп на поверхности субстрата,
фиг. 3, 5 и 6 показывают ковалентную иммобилизацию лиганда на поверхности субстрата,
фиг. 4 показывает использование латексных частиц на поверхности субстрата,
фиг. 7-11 иллюстрируют устройства для введения субстратов, осуществляющих изобретение,
фиг. 12-14 - схематические виды системы, служащей для анализа устройства по данному изобретению,
фиг. 15 показывает калибровочные кривые для аналитов, исследуемых с помощью данного изобретения.
фиг. 1 показывает образование неравномерной поверхности субстрата,
фиг. 2 показывает химическое активирование групп на поверхности субстрата,
фиг. 3, 5 и 6 показывают ковалентную иммобилизацию лиганда на поверхности субстрата,
фиг. 4 показывает использование латексных частиц на поверхности субстрата,
фиг. 7-11 иллюстрируют устройства для введения субстратов, осуществляющих изобретение,
фиг. 12-14 - схематические виды системы, служащей для анализа устройства по данному изобретению,
фиг. 15 показывает калибровочные кривые для аналитов, исследуемых с помощью данного изобретения.
Субстрат, используемый в устройстве по данному изобретению, может, например, включать кремний, кварц, стекло или керамический материал. Керамические субстраты (окись алюминия) являются хорошей альтернативой кремниевым субстратам, поскольку позволяют успешно применять как флюоресцентные, так и хемилюминесцентные методы обнаружения. Это открытие было неожиданным, потому что кристаллография керамических материалов не предполагает их ближайшего выбора в качестве субстрата.
Керамический субстрат может быть изготовлен таким образом, чтобы обеспечить интервал размера гранул 1 - 30 μм. Предпочтительный размер частиц керамического субстрата, используемого в данном изобретении, составляет менее 20 μм, предпочтительно менее 10 μм. Уменьшенный размер частиц способствует значительному улучшению равномерности поверхности, что, в свою очередь, улучшает проведение биологических анализов. Другие важные свойства керамических субстратов включают допуск топографии поверхности, пористость, вакуумную герметичность и нулевое поглощение воды.
Предпочтительный керамический материал состоит из 94% окиси алюминия (Al2O3) с размером частиц в интервале 4-8 μм. Материал является вакуумно герметичным и после измельчения имеет топографию поверхности 0,6-0,8 μм. Равномерность поверхности может быть улучшена благодаря процессу шлифования, в результате которого получают поверхность с отклонением 0,4-0,5 μм. Дальнейшее улучшение достигается полировкой и шлифованием с получением поверхности с отклонением 0,05-0,1 μм.
Было найдено, что характеристика некоторых керамических субстратов зависит от характеристик размера гранул. Было найдено, что наилучшие результаты анализа достигаются при размере гранул керамических материалов до 8 μм, например 4-8 μм. Было найдено, что результаты для материалов с большим размером гранул неудовлетворительны. Проверка керамических субстратов с размером гранул приблизительно 1 μм не привела к улучшению результатов по сравнению с результатами, полученными для субстрата с размером гранул 4-8 μм. Это является преимуществом, поскольку стоимость керамического материала с очень маленьким размером частиц значительно выше (приблизительно в 5 раз).
Было найдено, что характеристика некоторых керамических субстратов зависит от характеристик размера гранул. Было найдено, что наилучшие результаты анализа достигаются при размере гранул керамических материалов до 8 μм, например 4-8 μм. Было найдено, что результаты для материалов с большим размером гранул неудовлетворительны. Проверка керамических субстратов с размером гранул приблизительно 1 μм не привела к улучшению результатов по сравнению с результатами, полученными для субстрата с размером гранул 4-8 μм. Это является преимуществом, поскольку стоимость керамического материала с очень маленьким размером частиц значительно выше (приблизительно в 5 раз).
Подходящие кремниевые субстраты изготавливают с пленкой окиси, имеющей точную толщину, например допуск ±2 нм для пленки окиси толщиной 100 нм. Пленка окиси может иметь толщину 50-500 нм, предпочтительно менее 200 нм, более предпочтительно в районе 100 нм.
Субстрат может быть получен как часть твердого микроизготовленного и микрообработанного устройства, разработанного для широкого круга панель-тестов для проведения ветеринарных и клинических диагнозов. Каждое твердое устройство для тестов имеет ряд реакционных участков. Каждый реакционный участок является специфическим для отдельного аналита. Реакционный участок может иметь вид пятна, желоба, углубления, выемки, впадины или камеры. Реакционные участки образуются с помощью иммобилизующих биологических молекул на субстрате.
Обычно устройство по данному изобретению имеет площадь до 1 см2. Площадь каждого реакционного сайта обычно меньше 1 мм2.
Твердые субстраты предпочтительно изготавливают таким образом, чтобы обеспечить сложную сеть отверстий, камер, желобков, впадин, углублений и т. д. Также предпочтительным является создание столбиков внутри желобков или впадин. Такие неровности могут помочь в достижении максимального взаимодействия участков поверхности между связанными биологическими лигандами и реактивами анализа, в значительной степени уменьшая инкубационный период для похожих сравнительных иммуноанализов и слоистых иммуноанализов.
В качестве альтернативы или помимо, например, углублений или желобков на кремниевом или керамическом субстрате поверхность может быть также микроизготовлена таким образом, чтобы на ней имелись камеры/резервуары/желобки для смешивания объемом от нанолитра до микролитра. Например, кремниевую поверхность вначале окисляют для образования слоя окиси. Затем наносят слой фоторезиста, на котором образуют желаемый рисунок. После образования рисунка на слое окиси фоторезист удаляют. Кремний затем протравливают, например, с помощью HF, а затем пленку окиси удаляют. Наконец, пленку окиси равномерно выращивают на всей поверхности кремниевой пластинки.
Иллюстрация процесса приводится на фиг. 1. На стадии (i) кремниевую пластинку 1 окисляют для получения слоя окиси 2, на стадии (ii) наносят фоторезистентный слой 3, на стадии (iii) с помощью света наносят рисунок, на стадии (iv) фоторезист удаляют, на стадии (v) пластинку 1 протравливают, на стадии (vi) удаляют пленку окиси и на стадии (vii) вновь образуется постоянная пленка окиси 2а.
Предпочтительна ковалентная иммобилизация биологических лигандов. Можно использовать пассивную адсорбцию, однако на такое взаимодействие влияют изменения pH, температуры и концентрации ионов, оно также может в некоторых случаях привести к освобождению слабосвязанных лигандов во время стадий инкубирования и промывания, ухудшая, таким образом, воспроизводимость анализа. Конечно желательно, чтобы после процедуры иммобилизации биологический лиганд сохранял максимальную активность.
Перед любым химическим активированием поверхность субстратов должна быть тщательно очищена. Первая стадия, предпочтительно, включает очищение поверхности ультразвуком в щелочном детергенте с последующим истощающим промыванием дважды деионизированной водой. Субстраты затем обрабатывают кислотным раствором хрома. Этот раствор продолжает очистку поверхности и открывает поверхностные эпоксидные группы, как показано на фиг. 2. Эпоксидные группы могут быть также открыты другими способами, например, воздействием ультразвука в течение 1 ч.
Образованные, таким образом, поверхностные гидроксильные группы готовы для дериватизации. Например, как показано на фиг. 3, последовательность реакций включает использование органосилана, затем бифункционального поперечно-сшивающего агента Z-R-Y для образования высокореактивного промежуточного соединения, и, наконец, функционализированного лиганда для достижения ковалентной иммобилизации.
Более подробно, в органосиланах формулы (RO)3Si-(CH2)n-X каждый из R представляет собой алкильную или иную гидрокарбильную группу, такую как CH3 или CH2CH3; n является целым числом. Например, от 1 до 18; а X представляет собой функциональную группу, такую как эпоксициклогексил, NH2, CHO, ОН, SH, р-хлорбензил, m-хлорбензил, Br, Cl, -NH-CH2-CH2-NH2, 2,3-эпоксипропокси, -N= C= 0, -N= C=S или р-хлорсульфонилфенил. Эти органосиланы могут быть выбраны для получения либо реактивной терминальной группы, способной образовывать ковалентную связь с биологической молекулой, либо менее реактивный остаток, такой как NH2, где необходимо дальнейшее активирование с помощью бифункционального агента для получения соответствующей конечной группы. Органосиланы, обладающие терминальными электрофильными функциональными группами, не требуют активирования с помощью бифункционального поперечно-сшивающего агента, поскольку биологические лиганды могут быть иммобилизованы ковалентно через нуклеофильные группы на биологическом лиганде.
В том случае, если органосиланы имеют нуклеофильные группы, любой из многочисленных бифункциональных поперечно-сшивающих агентов может быть использован для получения в высшей степени реактивной химической группы, через которую биологическая молекула или лиганд могут быть присоединены ковалентно. Данное изобретение включает использование бифункциональных сшивающих агентов, которые могут быть использованы для массового производства химически активированных субстратов, являясь достаточно устойчивыми для длительного хранения до ковалентной связи биологической молекулы или связующего лиганда. Предпочтительные сшивающие агенты являются инертными в обычных атмосферных условиях, тем не менее, они также достаточно реактивны для того, чтобы образовывать ковалентные связи с функциональными группами иммобилизуемого биологического лиганда в течение очень короткого периода времени (обычно < 10 мин).
Бифункциональным сшивающим агентом может быть, например, фосген, тиофосген, N, N-дисукцинимидил карбонат, ксилилендиамин, 1,6-диаминогексан, 1,12-диаминододексан, 1,6-диизоцианатогексан, 1,12-диизоцианатододекан, 1,4-фенилендитиоизоцианат, цианурхлорид, терефтальдегид, р-нитробензоил хлорид, сульфаниловая кислота, 2-фторометилпиридин р-толуолсульфонат, 3-аминофенилбороновая кислота, р-бромфенилбороновая кислота, диэтилпирокарбонат, этил хлорформат, р-бромоаланин, р-бромфенил гидразид, р-бромбензальдегид, 1,2-этиленгликоль р-бромбензальдегида, N,N'-карбонилдиимидазол, терефталоил хлорид, эпихлоргидрин, 1,4-дииодобензол, 1,4-дибромбензол или производное N-гидроксисукцинимида, например, р-аминобензойной кислоты, р-бромбензойной кислоты, р-бромфенилуксусной кислоты, р-бромэтилбензойной кислоты, р-бромметилбензойной кислоты, р-формилбензойной кислоты, р-гидроксиметилбензойной кислоты, 1,2-этиленгликоль р-формилбензойной кислоты, р-бромфенилпропионовая кислота или р-гидроксифенилпропионовая кислота. Для реакции с органосиланом, имеющим нуклеофильную или электрофильную терминальную группу, может быть использован фотолабильный перекрестно-сшивающий агент. Таким агентом является, например, N-гидросукцинимид р-азидобензойной кислоты или р-аминобензофенон.
Вместо или помимо использования бифункциональных сшивающих агентов предпочтительно также ковалентно иммобилизовать слой латексных частиц. Диаметр латексных частиц предпочтительно менее 500 нм, а более предпочтительно менее 150 нм. Латексные частицы могут иметь ряд функциональных групп, например, -CH2Cl, -CHO, р-хлорфенил, р-хлорстирил, -N=NH, -NH-NH2 или -NH2. Латексные частицы могут быть инкубированы при концентрации приблизительно 0,5-1% вес. /об., при этом субстраты модифицируют подходящим органосиланом в присутствии или в отсутствие гетеробифункционального сшивающего агента, как описано выше.
Фиг. 4 показывает две реакционные схемы иммобилизации латекса. За каждой из них может следовать активация латекса вторым сшивающим агентом и иммобилизация биологической молекулы или прямая ковалентная иммобилизация, например, антитела.
Альтернативой использованию полистироловых латексных частиц является ковалентная иммобилизация биологических лигандов к производным этиленгликоля, уже связанным с силанизированным субстратом. Например, производные полиэтиленгликоля с двумя электрофильными группами, такими как эпокси или карбонилимидазол, вступают в реакцию с силаном, имеющим терминальную группу -NH2, такую как APTES на выбранном субстрате. Подходящая последовательность реакции показана на фиг. 5.
Предпочтительной может также явиться ковалентная иммобилизация биологического лиганда прямо к силановому слою, таким образом устраняя необходимость активирования силана полимерными материалами или бифункциональными сшивающими агентами. Органосиланы должны быть чувствительны к нуклеофильной атаке химической группой (например, NH2, SH, ОН или NH=NH2 на биологическом лиганде). Органосиланы, пригодные для прямого присоединения биологического лиганда, могут иметь галидные, эпокси-, изоцианато-, альдегидные или тозилатные функциональные группы. Такая реакция показана на фиг. 6, где E представляет собой электрофильную группу на органосилане. Примерами E являются Br, Cl, -O-CH2-CH=CH2, -NCO, -CHO и р-хлорсульфонилфенил.
Органосиланы, имеющие электрофильные группы, например глицидокси, также имеют то преимущество, что они менее чувствительны к полимеризации во время процедуры силанизирования благодаря отсутствию нуклеофильных групп, способных атаковать метокси- или этоксифункцию органосилана. Поэтому поверхность субстрата не должна содержать полимеризованного органосилана.
Химия поверхностей обеспечивает средство достижения пространственного разрешения благодаря быстрой кинетике образования ковалентных связей между химической функциональной группой поверхности и подходящей химической группой, находящейся в стерически выгодной позиции на иммобилизуемой биологической молекуле. Биологическую молекулу предпочтительно наносят на поверхность субстрата с помощью микрожидкостной пипетки в виде отдельной капли или ряда капель, образующих линию. Объем наносимой жидкости составляет порядка 1 - 100 нл, предпочтительно менее 50 нл, например ближе к 10 нл. Скорость образования ковалентных связей такова, что ковалентная иммобилизация достигается в течение нескольких минут, до того как нанесенная капелька или линия испарятся с поверхности. Позиционная точность, с которой наносится капелька или линия жидкости, должна иметь допуск ± 20 μм.
Особенно, если лиганды наносят в воде, также желательно сделать поверхность гидрофобной с целью предотвращения боковой диффузии нанесенной капельки или линии. Это свойство обеспечивает хорошее качество пятна и воспроизводимость, а также обеспечивает ковалентную иммобилизацию большего количества пятен биологических молекул на единицу площади поверхности.
Особенно, если лиганды наносят в воде, также желательно сделать поверхность гидрофобной с целью предотвращения боковой диффузии нанесенной капельки или линии. Это свойство обеспечивает хорошее качество пятна и воспроизводимость, а также обеспечивает ковалентную иммобилизацию большего количества пятен биологических молекул на единицу площади поверхности.
Настоящее изобретение устраняет проблемы, связанные с обычной фотолитографией, обеспечивая возможность образования пространственно различных пятен биологических лигандов без необходимости использования УФ-света или физических покрытий. Как указано выше, пространственное разрешение может быть достигнуто с помощью методов микронанесения. Важным фактором является быстрая кинетика реакции ковалентного соединения, необходимая для высокоэффективного соединения биологического лиганда на пространственно отличном участке, устраняющая боковую дигрессию иммобилизованного биологического лиганда.
Затем непрореагировавшие химические остатки на субстрате могут быть заблокированы, например, с помощью блокирующих молекул, известных специалистам в данной области. Такие подходящие молекулы включают белки, такие как казеин, бычий сывороточный альбумин, лактальбумин и т.д., или блокаторы с низким молекулярным весом, такие как глицин, глютамин и т.д.
Могут быть также использованы фотолабильные сшивающие агенты. Например, органосилан на поверхности субстрата в темноте вступает в реакцию с фотолабильным сшивающим агентом (например, бензофеноном, арилазидами и т.д.). Затем по желанию на поверхность наносят биологические лиганды в виде пятен, и после короткого периода облучения УФ-светом или более длительного периода облучения видимым светом осуществляют ковалентное присоединение. Оставшиеся участки поверхности субстрата блокируют, используя блокаторы, подобные вышеописанным молекулам в присутствии УФ- или видимого света.
Иммобилизованные биологические молекулы на субстрате могут быть стабилизированы, например, инкубированием в сахарном растворе (например, трегалозе) в течение короткого периода времени (1 ч), а затем высушиванием при 37oC в течение 16 ч. Затем стабилизированные субстраты могут быть для хранения запечатаны в пакеты из фольги с осушителем. Иммобилизованные биологические молекулы сохраняют стабильность в течение 6-12 месяцев и более, например до и свыше 2 лет при хранении при 2 - 8oC.
Устройства могут быть помещены в различные носители, обеспечивающие способность контролировать эффективность смешивания реактивов теста. Текучесть жидких реактивов можно контролировать капиллярным притяжением, центробежной силой, вакуумной силой или электроосмотическим течением. Использование такого течения может устранить необходимость использования клапанов, таким образом, отпадает необходимость использования механических частей.
Связывание стеклянной пластинки с микроизготовленной поверхностью обеспечивает образование закрытых каналов. До связывания стеклянной пластинки биологические молекулы ковалентно связываются на поверхности. Многие процедуры связывания, например анодное связывание, требуют высоких температур и могут разрушить биологическую молекулу. Поэтому методы связывания должны быть натурированными по отношению к иммобилизованным биологическим молекулам. Одним из подходящих методов является непрямое связывание, например, когда вафлю связывают со стеклянной пластинкой с помощью подходящего клея, например эпоксидного клея.
Затем устройства могут быть помещены в подходящие носители. Различные носители такого рода показаны на фиг. 7 и 8. В качестве примера, размеры устройства, показанного на фиг. 8, составляют 48,62 • 48,62 мм, включая впадины, имеющие внутренний диаметр 10 мм и наружный диаметр 12,82 мм. Расстояние впадин от центра до центра составляет 15,36 мм.
Устройства могут включать детали для улучшения смешивания реагентов теста, образцов и т.д. Это показано на фиг. 9, где устройство включает сайт для введения реагента 11, желобки для реагента 12 и сайты для тест-реагентов 13.
На фиг. 10 устройство включает резервуары для реагентов 21, коллектор для распределения 22, канальные тест-сайты для распределения реагентов 23 и резервуар для отходов 24. Фиг. 11 показывает четырехканальную структуру для теста с похожими частями.
Данное изобретение обеспечивает полностью интегрированную систему для одновременного количественного определения аналитов, имеющих различные молекулярные массы, структуры и полярность. Наборы аналитов могут быть использованы для проведения клинической/ветеринарной диагностики или скрининга лекарственных средств.
В зависимости от аналитов соответственно выбирают связывающие лиганды. Это зависит от умения и опыта специалистов. Подходящие аналиты включают: антибиотики, например тетрациклины, сульфамиды, ионофоры, аминогликозиды, пенициллины или фторхинолоны;
- гормоны, например лютеинизирующий гормон, пролактин, фолликулостимулирующий гормон или тиреостимулирующий гормон;
- маркеры, сердечных нарушений, например миоглобин, карбоновую ангидразу, тропонин 1, гликогенфосфорилазу ВВ, СК-МВ, связывающий белок жирной кислоты или тропонин Т;
- маркеры инфекционных заболеваний;
- маркеры аллергий;
- злоупотребляемые лекарственные средства;
- ферменты;
- вирусы;
- нуклеотиды и
- пептиды.
- гормоны, например лютеинизирующий гормон, пролактин, фолликулостимулирующий гормон или тиреостимулирующий гормон;
- маркеры, сердечных нарушений, например миоглобин, карбоновую ангидразу, тропонин 1, гликогенфосфорилазу ВВ, СК-МВ, связывающий белок жирной кислоты или тропонин Т;
- маркеры инфекционных заболеваний;
- маркеры аллергий;
- злоупотребляемые лекарственные средства;
- ферменты;
- вирусы;
- нуклеотиды и
- пептиды.
Например, один набор предназначен для определения сульфамидных антибиотиков. Данное изобретение обеспечивает способ одновременного количественного определения до 20 отдельных сульфамидов. Примерами других наборов являются панели для определения сердечных нарушений, фертильности и инфекционных заболеваний.
Данное изобретение обеспечивает возможность одновременного определения приблизительно 20 аналитов, которые могут не иметь структурного сходства. Матрицы тестируемых образцов могут включать сыворотку, плазму, мочу, желчь, фекалии, ткань, воду и пищу. Объем требуемого образца очень невелик, обычно < 1,5 μл/аналит. Тест-реагенты, например меченные ферментом антитела и гаптены, меченные флуоресцеином антитела и гаптены, могут содержаться в общем резервуаре для реагентов, значительно снижая требования по хранению жидкостей.
В слоистых анализах, например, лютеинизирующего гормона, фолликулостимулирующего гормона, пролактина, тиреостимулирующего гормона и т.д. образец добавляют вместе с буфером и инкубируют в течение короткого периода времени, обычно менее 30 мин, предпочтительно менее 10 мин. После стадии промывания добавляют смесь меченых определяющих антител и инкубируют дальше в течение определенного периода времени. Этот период также обычно составляет менее 30 мин, предпочтительно менее 10 мин. Затем устройство промывают для удаления несвязанных меток и определяют количество сигнала.
Для некоторых анализов предпочтительным может оказаться внедрение в микроизготовленное устройство средства для удаления потенциальных интерферентов, таких как интерференция ревматоидного фактора. Удаление ревматоидного фактора может быть осуществлено путем контакта тестируемого образца с участком иммобилизованного иммуноглобулина, например контакт исследуемого образца с участком для реакции.
Следующим примером является интерференция НАМА (человеческих антимышиных антител). Эти антитела могут вызвать серьезные проблемы при проведении анализов с использованием моноклональных мышиных антител. Обычно эта проблема решается путем включения в тест-реагенты дорогостоящих добавок. Преимуществом данного изобретения является устранение интерференции НАМА посредством контакта образца с участками на микроизготовленном устройстве с целью удаления этих антител до того, как образец будет помещен на реакционный участок.
В целом, лиганды могут быть нанесены на часть устройства, связывающего примеси. Это особенно важно, когда на поверхность устройства, т.е. в желобки, допустимо нанесение определенного вещества. Возможность удаления интерферентных компонентов увеличивает точность получаемых результатов.
Определяющие метки могут быть также иммобилизованы на поверхности дендримерных молекул. Дендримерные молекулы полимерны по своей природе, синтезированы повторяющимся соединением небольших строительных молекул. Такие молекулы с различной молекулярной массой промышленно изготавливаются Aldrich Chemicals (с различным набором терминальных функциональных групп, например NH2 или COOH). В соответствии с обычными методами соединения для приготовления определяющих меченых конъюгатов могут быть использованы гетеробифункциональные сшивающие агенты. При использовании небольших гаптеновых молекул, например β-агонистов, анаболических стероидов или антибиотиков предпочтительно соединение небольших дендримеров (предпочтительно не более 16 поверхностных групп) с большими дендримерами (обычно более 64 поверхностных групп). Гаптен с малой молекулярной массой (менее 1000 дальтон) соединяют с химическими группами небольшого дендримера с последующим ковалентным присоединением определяющей метки. Конъюгат дендримера может быть очищен с помощью диализа и гель-проникающей хроматографии.
Тест-реагенты содержат много компонентов (например, меченные ферментами антитела, меченные флуоресцеином антитела, иммобилизованные латексом антитела, дендримерные антитело-фторофорные конъюгаты, дендримерные антитело-ферментные конъюгаты, меченные ферментами гаптены, меченные флуоресцеином гаптены и т.д.), необходимые для конкретных наборов тестов. Наборы возможных тестов очень разнообразны и могут выбираться исходя из клинического диагноза (или ветеринарного анализа) по мере необходимости. Например, нужный набор для определения инфекционных заболеваний (таких как гепатит, ВИЧ, сифилис и т.д.). Другие наборы включают гормоны фертильности, сердечные маркеры, белки аллергии и т.д. Так же, как и клинические параметры, можно определить широкий набор остатков лекарственных средств.
Настоящее изобретение позволяет идентифицировать отдельные соединения, такие как антибиотики. Например, на устройстве, имеющем площадь поверхности 1 см2, одновременно, обычно в течение нескольких минут, можно получить количественный результат, относящийся к до 20 антибиотикам, с чувствительностью, превышающей чувствительность методов жидкостной хроматографии высокого разрешения и масс-спектроскопии с использованием газовой хроматографии, и сравнимой с чувствительностью обычных ферментных иммуноанализов c одним параметром. Этот подход может быть легко применен к анаболическим стероидам, бета-агонистам, бета-блокаторам, пестицидам, терапевтическим лекарственным средствам и т.д.
При проведении анализов может быть использована хемолюминесценция, биолюминесценция или флюоресценция. Система для определения предпочтительно представляет собой камеру с зарядно-соединительным устройством с оборудованием для измерения как флюоресцентного, так и хемолюминесцентного света. Вкратце, указанная камера принимает световой сигнал, исходящий из испытуемых участков на микроизготовленном устройстве и превращает его в относительные световые единицы.
Использование систем для определения, основанных на флюоресценции, с подходящими оптическими фильтрами для меченых фторофоров дает прямые результаты.
Подходящим хемолюминесцентным реактивом является люминол, который может быть подвергнут анализу при длине волны 433-445 нм. Можно также наблюдать хемолюминесценцию, исходя из определения щелочных, меченных фосфатазой биологических молекул, и используя 1,2-диоксетан.
Для облегчения определения аналитов данное изобретение предпочтительно применяет хемолюминесцентную систему определения с использованием устройства с зарядовой связью. Предпочтение отдается черной освещенной камере для улучшения эффективности захвата при длине волны света, излучаемого хемолюминесцентной световой реакцией (приблизительно 433-445 нм в случае с люминолом).
Вся система может контролироваться с помощью персонального компьютера, где специально составленная программа контролирует таблицу X-Y, распределительное устройство, обработку образца, наблюдение за температурой, время инкубирования и камеру с зарядно-соединительным устройством. Фиг. 12-14 показывают организацию такой системы.
Фиг. 12 схематически показывает взаимодействие персонального компьютера, имеющего два контрольных узла 31 и 32. Узел 31 связан с системой изображения зарядно-соединительного устройства, обозначенного как 33. Узел 32 связан с распределительным узлом и трансляционной картой X-Y, при этом планшет для образца обозначен как 34 и 35 соответственно.
Фиг. 13 является схематическим изображением трансляционной карты X-Y. Этот чертеж показывает платформу для образца 41, установленную на линейный исполнительный механизм 42. Трансляция X-Y находится под контролем переходных моторов 43 и 44, соединенных с соответствующими приводами 45 и 46. Трансляция ограничивается "исходным положением" датчиков 47 и 48.
Чувствительность меченых биологических молекул и некоторых немеченых биологических молекул к свету может вызвать необходимость проведения анализов при отсутствии света. Отсутствие света достигается с помощью светонепроницаемой коробки. Температура светонепроницаемого пространства также предпочтительно контролируется, например, в диапазоне ±0,2oC или предпочтительно ± 0,1oC для обеспечения удовлетворительной точности анализа.
Фиг. 14 показывает прибор в перспективе, часть плана и усеченные боковые виды. В частности, фиг. 14A показывает контейнер 51 для хранения реагентов, светонепроницаемую дверь 52 и корпус камеры 53 со съемной крышкой 54. Основная часть камеры может находиться вне кожуха. Линзы камеры помещены в отверстие в кожухе.
Фиг. 14B показывает очертания образцов на пластинке для образца 55, участка для отходов 56, а также участок для изображения 57. Камера 53 установлена над этими участками. Фиг.14C показывает, помимо контейнера 51, камеру 53, карту X-Y 41, переходный мотор 43 и распределяющий насос 58.
Конструкция системы, показанной на фиг. 14, основана на 3 х 3 держателях штатива для образцов, которые могут одновременно содержать 20 образцов. Это означает, что если на каждом 1 см2 микроизготовленного устройства находятся 20 отдельных реакционных участков, то на одном образце можно одновременно проводить 3600 анализов. Альтернативно, одновременно можно проводить анализ 180 образцов на 20 различных параметров теста.
Как указано выше, аналит может быть помечен. Лиганд также может быть помечен, обеспечивая проведение анализов при частичной занятости.
Следующие примеры иллюстрируют изобретение.
Пример 1. Анализ сульфонамида
В этом примере 12 отдельных антител (при этом каждое антитело специфично для одного сульфамида) иммобилизуют посредством ковалентного присоединения с помощью контактного взаимодействия к дискретным участкам плоского керамического (окись алюминия) субстрата, имеющего химически модифицированную поверхность. Используя сравнительный иммуноанализ, проводят мультианалитный анализ.
В этом примере 12 отдельных антител (при этом каждое антитело специфично для одного сульфамида) иммобилизуют посредством ковалентного присоединения с помощью контактного взаимодействия к дискретным участкам плоского керамического (окись алюминия) субстрата, имеющего химически модифицированную поверхность. Используя сравнительный иммуноанализ, проводят мультианалитный анализ.
Более подробно, керамические субстраты (1 • 1 см) очищают с помощью ультразвука, используя щелочной детергент (RBS35, 5% об./об.), потом дважды деионизированную воду, а затем помещают в 6 М HCl на 16 ч. Потом субстраты помещают в хромовую кислоту на 1 ч в ультразвуковой бане.
Субстраты как можно тщательнее промывают двойной деионизированной водой и ацетоном, а затем высушивают в печи при 120oC в течение 2 ч. После такой предварительной обработки субстраты силанизируют, используя органосилан гамма-глицидоксипропил триметоксисилан (10% об./об.) в безводном толуоле, 4-диметиламинопиридине (1,25 г/л) и триэтиламине (1% об./об.). Смесь подвергают дефлегмации в течение 4 ч, а
затем отстаивают в течение ночи при комнатной температуре. Перед отверждением в течение 4 ч при 120oC субстраты промывают толуолом и ацетоном.
затем отстаивают в течение ночи при комнатной температуре. Перед отверждением в течение 4 ч при 120oC субстраты промывают толуолом и ацетоном.
После отверждения субстраты помещают в контейнеры и хранят при комнатной температуре до тех пор, пока сульфамидные антитела не будут нанесены в качестве пятен. Сульфамидные антитела наносят в виде пятен, используя дозирующее устройство BIODOT XY3000. Анализу подвергают 12 сульфамидов: сульфадоксин, сульфаметиозол, сульфахлорпиридазин, сульфаметоксипиридазин, сульфамеразин, сульфапиридин, сульфисоксазол, сульфатиазол, сульфаметазин, сульфахиноксалин, сульфадиметоксин и сульфадиазин.
Для каждого сульфамидного антитела отмеряемый объем составляет приблизительно 20 нл. 12 сульфонамидных антител, образующих 12 дискретных участков на субстрате площадью 1 см2, инкубируют в течение 2 ч при 37oC. Субстраты промывают фосфатно-буферным солевым раствором (pH 7,2), содержащим 2% казеина (вес. /об. ), а затем блокируют в этом же буферном растворе в течение ночи при +2-8oC. После промывания указанным раствором, содержащим PEG 300 (0,05% об./об.), устройства помещают в носитель.
Мультисульфонамидные стандарты (200 μл) и смесь сульфонамидных коньюгатов пероксидазы хрена (100 μл) помещают в реакционные выемки, содержащие устройство в установленном порядке, и инкубируют в течение 15 мин при комнатной температуре. Стандарты содержат 5, 10, 50 и 100 нг/мл для каждого из 12 сульфамидов.
Затем мультисульфонамидные устройства промывают фосфатно-буферном солевым раствором и полиэтиленгликолевым буфером для удаления избытка реагентов и на каждое устройство наносят по 300 μл хемолюминесцентного субстрата [люминол (1,4 мМ)/перекись водорода мочевины (9,6 мМ)]. Устройства отображают, используя камеру устройства с зарядовой связью с выдержкой до 4 мин. Для каждого из 12 отдельных сульфамидов получают стандартные кривые. Калибровочные кривые для каждого из 12 отдельных сульфамидов показаны графически на фиг. 15. Процентная величина В/В0, отложенная на оси Y, показывает % ингибирования величины нулевого стандарта относительной световой единицы, вызванного каждым отдельным сульфамидным стандартом (отложенным на оси X как log10).
Пример 2. Анализ гормона
В этом примере мультианалитному анализу подвергают 3 гормона с высокой молекулярной массой, т.е. пролактин, фолликулостимулирующий гормон и лютеинизирующий гормон. Этот пример иллюстрирует мультианалитный анализ многослойного иммуноанализа. В процессе определения трех гормонов на одной и той же панели значительных перекрестных реакций не наблюдается.
В этом примере мультианалитному анализу подвергают 3 гормона с высокой молекулярной массой, т.е. пролактин, фолликулостимулирующий гормон и лютеинизирующий гормон. Этот пример иллюстрирует мультианалитный анализ многослойного иммуноанализа. В процессе определения трех гормонов на одной и той же панели значительных перекрестных реакций не наблюдается.
Процедуры предварительной химической обработки и силанизирования проводят так же, как описано в примере 1. Моноклональные антитела пролактина, фолликулостимулирующего гормона или лютеинизирующего гормона (отмеривается приблизительно 20 нл антитела) иммобилизуют на дискретных участках химически модифицированного субстрата. Мультианалитные анализы проводят как на кремниевых, так и на керамических субстратах, при этом эпоксидная поверхность такая же, как описано в примере 1.
150 μл сложного стандарта, основанного на сыворотке трех вышеуказанных гормонов, и 150 μл буферного разбавляющего раствора добавляют к устройству и инкубируют в течение 15 мин при комнатной температуре. После стадии промывания добавляют 300 μл общей смеси конъюгатов пероксидазы из хрена лютеинизирующего гормона, пролактина и фолликулостимулирующего гормона и инкубируют в течение 15 мин. Затем устройство промывают для удаления избытка реагентов и наносят хемолюминесцентный реагент [люминол (1,4 мМ)/перекись водорода мочевины (9,6 мМ)] . Устройство отображают в камере устройства с зарядовой связью с выдержкой до 4 минут. После обработки изображений откладывают стандартные кривые для каждого из гормонов.
Пример 3. Анализ сульфамида
В отличие от примера 1 мультисульфамидный анализ также проводится с использованием микрожелобков. Устройство показано на фиг. 11. В этом примере резервуары 21 для добавления реагентов имеют размеры 2 • 2 мм и глубину 300 μм (объем 1,2 μл), каналы 23 имеют длину 5 мм, ширину 200 μм и глубину 100 μм (объем 100 нл), а резервуар 24 имеет размеры 1,9 • 8,6 мм и глубину 300 μм (объем 4,9 μл).
В отличие от примера 1 мультисульфамидный анализ также проводится с использованием микрожелобков. Устройство показано на фиг. 11. В этом примере резервуары 21 для добавления реагентов имеют размеры 2 • 2 мм и глубину 300 μм (объем 1,2 μл), каналы 23 имеют длину 5 мм, ширину 200 μм и глубину 100 μм (объем 100 нл), а резервуар 24 имеет размеры 1,9 • 8,6 мм и глубину 300 μм (объем 4,9 μл).
Химическое модифицирование поверхности осуществляется, как описано в примере 1. В каждый из желобков вносят по антителу и инкубируют в течение 2 ч при 37oC. Затем субстраты блокируют и промывают, как в примере 1.
Смешивают мультисульфамидный стандарт (200 μл) и конъюгаты сульфамидной пероксидазы из хрена (100 μл). По 1 μл образующегося реагента добавляют с помощью пипетки в каждый резервуар, обеспечивая таким образом желобок, покрытый антителом, для каждого сульфамида. Стандарты, как и полагается, содержат 10 или 100 нг/мл всех сульфамидов.
Реагент течет благодаря капиллярному действию. После инкубирования в течение 2 мин устройство промывают 5 раз фосфатно-буферным солевым раствором/полиэтиленгликолем, затем добавляют хемолюминесцентный реагент [люминол (1,4 мМ)/перекись водорода мочевины (9,6 мМ)].
Устройство отображают в камере устройства с зарядовой связью с выдержкой до 4 минуют. Процентные величины В/В0 для четырех сульфамидных кривых приводятся в табл. 1.
Полезность данного изобретения по сравнению с фотолитографией показана степенью неспецифической адсорбции биологических молекул на фотолабильном (обработанном бензофеноном) субстрате. Результаты показаны в табл. 2.
Мышиный IgG определяют, используя конъюгат антимышиной пероксидазы из хрена с применением хемолюминесцентного обнаружения с помощью камеры устройства с зарядовой связью. Кремниевые или керамические субстраты, имеющие иммобилизованный бензофеноновый фотолабильный сшивающий агент, не должен связывать мышиный IgG во время реакции при отсутствии света. Однако происходит неспецифическое связывание, поскольку приблизительно 80% средней относительной световой единицы, получаемой при проведении связывания мышиного IgG при УФ-свете, возникает благодаря пассивным взаимодействиям связывания. Ряд биологических молекул, иммобилизуемых через ковалентные взаимодействия, в соответствии с данным изобретением явно более четко определенный.
Очевидность ковалентного присоединения представлена в нижеописываемых примерах. В первом случае керамические субстраты силанизируют APTES, а затем подвергают реакции с биотин-LC-сульфо NHS. Контрольный керамический субстрат не силанизируют APTES, поэтому отсутствуют терминальные нуклеофильные NH2-группы для реакции с сукцинимидиловым эфиром производного биотина. Эти субстраты затем подвергают реакции с конъюгатом авидина и флуорецинизоцианата, а флюоресценцию определяют с помощью камеры устройства с зарядовой связью. Результаты представлены в табл. 3.
Это ясно показывает специфическую иммобилизацию биотина-LC-NHS. Максимальная концентрация иммобилизованного биотина-LC-NHS составляет приблизительно 100 мг/мл, поскольку показатель относительной световой единицы для 500 мкг/мл субстрата не изменился.
В следующем примере керамические субстраты, силанизированные APTES, подвергают реакции с дигидразидным сшивающим агентом. Сульфамидные антитела обрабатывают перйодатом натрия для придания им реактивности по отношению к гидразидному сшивающему агенту. Контрольные сульфамидные антитела подвергают простому диализу против буферного раствора ацетата натрия, имеющего pH 5,5. Значения относительной световой единицы показаны в табл. 4 (необработанные) и табл. 5 (обработанные перйодатным способом). Результаты ясно показывают, что гидразидный сшивающий агент успешно связывается с керамической поверхностью. Контрольные антитела (без перйодатного активирования) дали очень плохие стандартные кривые по сравнению с ковалентно иммобилизованными сульфамидными антителами.
Процентные величины связывания благодаря ковалентным или пассивным взаимодействиям сравниваются в табл. 6 и 7. На ковалентное взаимодействие в среднем приходится 81,8% всего связывания, что ясно показывает ковалентное связывание сульфамидных антител.
Очевидно, что ковалентный метод дает более высокие результаты по сравнению с пассивным методом. Результаты пассивного метода могут быть увеличены приблизительно в два раза путем предварительной кислотной обработки сульфамидных антител, но они все-таки ниже, чем результаты ковалентного метода.
Также проводится подтверждающий анализ химически модифицированного кремния и керамических субстратов с использованием рентгенофотонной спектроскопии. Были записаны обзорные спектры двух произвольных участков каждого образца субстратов, которые служат для определения химического состава их поверхностей. Результаты приведены в табл. 8 (в атомных %).
Анализ атомного состава показывает очень хорошую конверсию родительского силикона и керамических субстратов с помощью органосилана APTES с хорошей воспроизводимостью состава поверхности двух участков, исследуемых для каждого образца. Субстраты, меченные ФИТЦ, показывают 70% и 77% маркирования кремния и керамического материала соответственно.
Количественные методы флюоресцентного измерения на темном кремниевом субстрате сравнивают с результатами, полученными на белом керамическом (окись алюминия) субстрате. Результаты по относительной световой единице, полученные при помощи устройства с зарядовой связью для флуоресцентных молекул (ФИТЦ), ковалентно связанных с каждым субстратом, сравнивают с количественным методом после удаления ФИТЦ-молекул, используя метод Hook et al. (Langmuir 1991, том 7, 142-151) (см табл. 9).
Количественный анализ флуоресцентной метки, полученной в результате удаления ФИТЦ-маркировки от субстрата и измерения сигнала с помощью камеры устройства с зарядовой связью показывает, что, несмотря на 1000-кратное увеличение сигнала керамического материала по сравнению в кремнием, действительно наблюдается значительно большее количество ФИТЦ-молекул на кремниевом субстрате.
Это явление далее иллюстрируется примерами, приведенными в табл. 10, полученными в результате анализа, проводимого на кремниевых и керамических субстратах с использованием флуоресцентных латексных частиц, связанных с пролактиновым антителом, используемым в качестве определяющей системы. Приводится также величина относительных световых единиц (выдержка 20 с).
Свойство керамического материала обеспечивают более высокие результаты по кремнию при использовании этого метода флуоресцентного определения. В дальнейшем проблемы действия темного тела на кремний при использовании флуоресценции могут быть решены использованием хемолюминесценции в качестве метода обнаружения. При сравнении идентичных анализов фолликулостимулирующего гормона, проводимых на кремнии и керамическом материале с использованием хемолюминесцентного определения, последний потребовал в 2 раза большего времени выдержки, чем керамический материал, для получения такой же величины относительной световой единицы.
В описании использованы следующие сокращения:
APTES - аминопропилтриэтоксилан;
СК-МВ - субъединица, создающая фермент MB (киназа);
HRPO - пироксидаза хрена;
LC - сульфо-NHS-сульфо-N-гидроксисукцинимид с длинной цепью;
FITC - изотиокарбамат флуоресцеина.
APTES - аминопропилтриэтоксилан;
СК-МВ - субъединица, создающая фермент MB (киназа);
HRPO - пироксидаза хрена;
LC - сульфо-NHS-сульфо-N-гидроксисукцинимид с длинной цепью;
FITC - изотиокарбамат флуоресцеина.
Claims (25)
1. Твердое устройство для проведения мультианалитных анализов, включающее субстрат и множество дискретных реакционных сайтов, каждый из которых имеет лиганд, ковалентно связанный с поверхностью субстрата, отличающееся тем, что участки поверхности субстрата, которые находятся между реакционными сайтами, являются инертными по отношению к аналиту, при этом указанное устройство получено с помощью процесса, включающего активирование всей указанной поверхности субстрата, придание гидрофобности указанным участкам между реакционными сайтами и нанесение ряда лигандов на указанные дискретные участки поверхности в воде таким образом, что указанные лиганды не наносятся на указанные гидрофобные участки между реакционными сайтами.
2. Устройство по п.1, отличающееся тем, что поверхность субстрата является неравномерной.
3. Устройство по п.2, отличающееся тем, что указанный субстрат включает в себя ряд реакционных желобков, выступов, столбиков, пятен, камер, углублений, впадин или выемок.
4. Устройство по любому из пп.1 - 3, отличающееся тем, что субстрат состоит из керамического материала, стекла, кварца или кремния.
5. Устройство по любому из пп.1 - 4, отличающееся тем, что его площадь составляет менее 1 см2.
6. Устройство по любому из пп. 1 - 5, отличающееся тем, что площадь каждого реакционного сайта составляет менее 1 мм2.
7. Устройство по п.1, отличающееся тем, что получено с помощью процесса, включающего активирование всей указанной поверхности субстрата, придание гидрофобности указанным участкам между реакционными сайтами и нанесение ряда лигандов на указанные дискретные участки поверхности в воде таким образом, что указанные лиганды не наносятся на указанные гидрофобные участки между реакционными сайтами.
8. Устройство по п.7, отличающееся тем, что оно содержит лиганды, нанесенные на поверхность, активированную органосиланом.
9. Устройство по п.8, отличающееся тем, что органосилан имеет формулу (RO)3Si-(СН2)n-X, где каждый R - гидрокарбильная группа, n - целое число, а X - функциональная группа.
10. Устройство по п.8 или 9, отличающееся тем, что оно содержит бифункционально-сшивающий агент для облегчения ковалентного присоединения биологических лигандов к органосилану.
11. Устройство по любому из пп.8 - 10, отличающееся тем, что в качестве бифункционально-сшивающего агента оно содержит фотолабильный сшивающий агент, который используют для реакции с органосиланом.
12. Устройство по п.1, отличающееся тем, что оно содержит лиганды, иммобилизованные на поверхности, дериватизированной макромолекулами.
13. Устройство по любому из пп.1 - 12, отличающееся тем, что дополнительно включает лиганды, связующие материалы, присутствие которых мешает анализу аналита.
14. Устройство по п.1, отличающееся тем, что для обнаружения аналита оно содержит хемолюминесцентную систему определения с использованием устройства с зарядовой связью с задним освещением, пригодную для обнаружения света, излучаемого хемолюминесцентной световой реакцией, при которой длина волны обнаруживаемого света составляет менее 450 нм.
15. Устройство по п. 1, отличающееся тем, что в качестве аналитов оно содержит антибиотики, гормоны, маркеры сердечных нарушений, маркеры инфекционных заболеваний, маркеры аллергии, лекарственные средства злоупотребляемых ферментов, вирусы, нуклеотиды и пептиды.
16. Устройство по п.1, отличающееся тем, что оно содержит аналиты, которые вводят в образцы цельной крови, сыворотки, плазмы, мочи, кала, желчи, ткани или еды.
17. Система для мультианалитного анализа, отличающаяся тем, что включает устройство по любому из пп.1 - 13, трансляционную платформу, систему для обработки образца, систему для подачи жидкого реагента, темную коробку с контролируемой температурой, камеру устройства с зарядовой связью и прибор для обработки изображений.
18. Устройство по п.1, отличающееся тем, что субстрат является керамическим.
19. Устройство по п.12, отличающееся тем, что указанные макромолекулы выбраны из группы, состоящей из полистироловых латексных частиц, дендримеров и полиэтиленгликоля, содержащего химические группы, облегчающие ковалентное присоединение лигандов.
20. Способ проведения мультианалитного анализа, заключающийся в том, что вводят образец, подвергаемый мультианалитному анализу, в контакт с устройством по п.1 и определяют реакционные сайты, в которых аналит связан и/или не связан.
21. Способ формирования твердого устройства для проведения мультианалитных анализов, включающего субстрат и множество дискретных реакционных сайтов, каждый из которых имеет лиганд, ковалентно связанный с поверхностью субстрата, причем участки поверхности субстрата, которые находятся между реакционными сайтами, являются инертными по отношению к аналиту, заключающийся в том, что активируют всю указанную поверхность субстрата, придают гидрофобность указанным участкам между реакционными сайтами и наносят ряд лигандов на указанные дискретные участки поверхности в воде таким образом, что указанные лиганды не наносятся на указанные гидрофобные участки между реакционными сайтами.
22. Способ формирования твердого устройства для проведения мультианалитных анализов, включающего субстрат и множество дискретных реакционных сайтов, каждый из которых имеет лиганд, ковалентно связанный с поверхностью субстрата, причем участки поверхности субстрата, которые находятся между реакционными сайтами, являются инертными по отношению к аналиту, заключающийся в том, что активируют всю указанную поверхность субстрата, блокируют указанные участки между реакционными сайтами и наносят ряд лигандов на указанные дискретные участки поверхности в воде таким образом, что указанные лиганды не наносятся на указанные блокированные участки между реакционными сайтами.
23. Твердое устройство для проведения мультианалитных анализов, включающее субстрат, имеющий по меньшей мере одну активированную поверхность и множество дискретных реакционных сайтов, каждый из которых имеет лиганд, ковалентно связанный с поверхностью субстрата, отличающееся тем, что участки поверхности субстрата, которые находятся между реакционными сайтами, являются инертными по отношению к аналиту.
24. Твердое устройство по п.23, отличающееся тем, что указанные участки поверхности субстрата, которые находятся между реакционными сайтами, являются гидрофобными.
25. Твердое устройство по п.23, отличающееся тем, что указанный субстрат является керамическим.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP97302707 | 1997-04-21 | ||
EP97302707.1 | 1997-04-21 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU98107571A RU98107571A (ru) | 2000-03-20 |
RU2168174C2 true RU2168174C2 (ru) | 2001-05-27 |
Family
ID=8229307
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU98107571/13A RU2168174C2 (ru) | 1997-04-21 | 1998-04-20 | Твердое устройство для проведения мультианалитных анализов, способ его формирования и система, включающая такое устройство |
Country Status (32)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6498010B1 (ru) |
JP (1) | JP4209494B2 (ru) |
KR (1) | KR100585548B1 (ru) |
CN (1) | CN1178063C (ru) |
AR (1) | AR015110A1 (ru) |
AT (1) | ATE289684T1 (ru) |
AU (1) | AU713388B2 (ru) |
BR (1) | BR9800655A (ru) |
CA (1) | CA2235183C (ru) |
CZ (1) | CZ297165B6 (ru) |
DE (1) | DE69829089T3 (ru) |
EG (1) | EG22471A (ru) |
ES (1) | ES2238750T5 (ru) |
GB (1) | GB2324866B (ru) |
GE (1) | GEP20022846B (ru) |
HK (1) | HK1012202A1 (ru) |
HR (1) | HRP980215A2 (ru) |
HU (1) | HU220777B1 (ru) |
ID (1) | ID20179A (ru) |
MY (1) | MY114814A (ru) |
NO (1) | NO981766L (ru) |
NZ (1) | NZ330227A (ru) |
PL (1) | PL325914A1 (ru) |
PT (1) | PT874242E (ru) |
RU (1) | RU2168174C2 (ru) |
SG (1) | SG87765A1 (ru) |
SK (1) | SK283340B6 (ru) |
TR (1) | TR199800737A1 (ru) |
TW (1) | TWI225928B (ru) |
UA (1) | UA54400C2 (ru) |
YU (1) | YU49328B (ru) |
ZA (1) | ZA983345B (ru) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2012154729A1 (en) * | 2011-05-09 | 2012-11-15 | President And Fellows Of Harvard College | A microfluidic module and uses thereof |
US8647861B2 (en) | 2008-07-16 | 2014-02-11 | Children's Medical Center Corporation | Organ mimic device with microchannels and methods of use and manufacturing thereof |
US9725687B2 (en) | 2011-12-09 | 2017-08-08 | President And Fellows Of Harvard College | Integrated human organ-on-chip microphysiological systems |
Families Citing this family (73)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
BR9800655A (pt) * | 1997-04-21 | 1999-08-10 | Randox Lab Ltd | Dispositivo de estado sólido para efetuar ensaios com múltiplos analisados seu uso e e sistema para análise de múltiplos analisados |
US20060029926A1 (en) * | 1998-05-06 | 2006-02-09 | Metrika, Inc. | Blocking compositions for immunoassays |
JP4261661B2 (ja) * | 1999-01-28 | 2009-04-30 | キヤノン株式会社 | プローブ結合基板、プローブ結合基板の製造方法、プローブアレイ、標的物質の検出方法、サンプル中の一本鎖核酸の塩基配列を特定する方法、及びサンプル中の標的物質の定量方法 |
US6326083B1 (en) * | 1999-03-08 | 2001-12-04 | Calipher Technologies Corp. | Surface coating for microfluidic devices that incorporate a biopolymer resistant moiety |
EP1336107B1 (en) * | 1999-07-14 | 2009-01-07 | Spectral Diagnostics Inc. | Preparation of spheres for diagnostic tests |
AUPR005600A0 (en) * | 2000-09-12 | 2000-10-05 | University Of Sydney, The | Diagnostic assay |
GB0027064D0 (en) * | 2000-11-06 | 2000-12-20 | Randox Lab Ltd | Multi-analyte immunoassay |
US6649078B2 (en) * | 2000-12-06 | 2003-11-18 | The Regents Of The University Of California | Thin film capillary process and apparatus |
GB0102357D0 (en) | 2001-01-30 | 2001-03-14 | Randox Lab Ltd | Imaging method |
US7687437B2 (en) | 2001-07-13 | 2010-03-30 | Nanosphere, Inc. | Method for immobilizing molecules onto surfaces |
GB0120202D0 (en) | 2001-08-18 | 2001-10-10 | Psimedica | Body fluid collection and analysis |
US7097882B2 (en) * | 2001-08-21 | 2006-08-29 | Samsung Sdi Co., Ltd. | Substrate for immobilizing physiological material, and method of fabricating same |
GB0124338D0 (en) * | 2001-10-10 | 2001-11-28 | Randox Lab Ltd | Biochips |
US6780602B2 (en) * | 2001-11-01 | 2004-08-24 | Microbiosystems, Limited Partnership | Taxonomic identification of pathogenic microorganisms and their toxic proteins |
KR100450191B1 (ko) * | 2001-12-28 | 2004-10-02 | 삼성에스디아이 주식회사 | 생체물질 고정용 기판 및 이의 제조방법 |
WO2003087823A1 (de) * | 2002-04-12 | 2003-10-23 | Micronas Gmbh | Verfahren zum immobilisieren von molekülen auf oberflächen |
US20030208936A1 (en) * | 2002-05-09 | 2003-11-13 | Lee Charles Hee | Method for manufacturing embroidery decorated cards and envelopes |
US20040115830A1 (en) * | 2002-09-25 | 2004-06-17 | Igor Touzov | Components for nano-scale Reactor |
US7070922B2 (en) * | 2002-12-04 | 2006-07-04 | International Business Machines Corporation | Surface treatment |
US20040129676A1 (en) * | 2003-01-07 | 2004-07-08 | Tan Roy H. | Apparatus for transfer of an array of liquids and methods for manufacturing same |
US6972148B2 (en) * | 2003-06-23 | 2005-12-06 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Glove having improved donning characteristics |
US7407630B2 (en) | 2003-09-19 | 2008-08-05 | Applera Corporation | High density plate filler |
US7998435B2 (en) | 2003-09-19 | 2011-08-16 | Life Technologies Corporation | High density plate filler |
US8277760B2 (en) | 2003-09-19 | 2012-10-02 | Applied Biosystems, Llc | High density plate filler |
US7695688B2 (en) * | 2003-09-19 | 2010-04-13 | Applied Biosystems, Llc | High density plate filler |
US9492820B2 (en) | 2003-09-19 | 2016-11-15 | Applied Biosystems, Llc | High density plate filler |
JP4814103B2 (ja) * | 2003-11-12 | 2011-11-16 | バイオ−ラッド・ハイファ・リミテッド | アレイフォーマットにおいて複数の結合反応を実行するためのシステムおよび方法 |
ATE396397T1 (de) * | 2003-12-31 | 2008-06-15 | Council Scient Ind Res | Verfahren und vorrichtung zur analyse von pestiziden |
US20090010819A1 (en) * | 2004-01-17 | 2009-01-08 | Gyros Patent Ab | Versatile flow path |
US8592219B2 (en) | 2005-01-17 | 2013-11-26 | Gyros Patent Ab | Protecting agent |
JP5630936B2 (ja) * | 2004-02-09 | 2014-11-26 | ラピッド パトゲン スクリーニング インコーポレイテッドRapid Pathogen Screening Inc. | ヒトの体液中のターゲットを特定することにより疾病を高速に検出する方法 |
US20140031249A1 (en) * | 2004-07-20 | 2014-01-30 | Sqi Diagnostics Systems Inc. | Multiplex measure of isotype antigen response |
US7229782B1 (en) | 2004-08-03 | 2007-06-12 | Labone, Inc. | Antibodies specific to multiple beta blockers and methods for their use |
EP1657235B1 (en) | 2004-11-10 | 2011-09-21 | Randox Laboratories Ltd. | Phenethanolamine-derived haptens, immunogens and conjugates comprising them and antibodies recognising said immunogenes and conjugates |
FR2879483B1 (fr) * | 2004-12-20 | 2007-04-27 | Commissariat Energie Atomique | Procede pour augmenter l'hydrophobicite d'un revetement externe d'un dispositif d'analyse, tel qu'une biopuce, un tel dispositif et procedes pour sa fabrication |
US7396689B2 (en) * | 2005-02-04 | 2008-07-08 | Decision Biomarkers Incorporated | Method of adjusting the working range of a multi-analyte assay |
US8445293B2 (en) * | 2005-02-09 | 2013-05-21 | Rapid Pathogen Screening, Inc. | Method to increase specificity and/or accuracy of lateral flow immunoassays |
EP1712914A1 (fr) * | 2005-04-14 | 2006-10-18 | Unisensor S.A. | Procédé in vitro pour la detection et l'identification simultanées d'antibiotiques de classes differentes et trousse de diagnostic correspondante |
EP1787699A1 (en) * | 2005-11-17 | 2007-05-23 | Vicam, L.P. | Multi-analyte affinity column |
KR100722321B1 (ko) | 2005-12-28 | 2007-05-28 | 성균관대학교산학협력단 | 모세관력 리소그래피와 자기조립단분자막을 이용한 단백질패턴 형성 방법 및 이를 이용하여 제조된 단백질칩 |
US8084765B2 (en) * | 2007-05-07 | 2011-12-27 | Xerox Corporation | Electronic device having a dielectric layer |
EP3543357A1 (en) | 2007-05-08 | 2019-09-25 | Trustees of Boston University | Chemical functionalization of solid-state nanopores and nanopore arrays and applications thereof |
JP5255247B2 (ja) * | 2007-09-04 | 2013-08-07 | 富士フイルム株式会社 | 基質の結合と反応生成物を同時に検出できるバイオセンサー |
WO2009136613A1 (ja) | 2008-05-08 | 2009-11-12 | 株式会社 日立ハイテクノロジーズ | 自動分析装置 |
ES2572377T3 (es) | 2009-07-29 | 2016-05-31 | Randox Laboratories Ltd | Método para la detección de la presencia, o el riesgo, de cáncer de vejiga |
EP2483680A4 (en) | 2009-09-30 | 2014-01-01 | Quantapore Inc | ULTRASOUND SEQUENCING OF BIOLOGICAL POLYMERS WITH THE HELP OF A MARKED NANOPORE |
US9566560B2 (en) * | 2011-10-06 | 2017-02-14 | Illumina, Inc. | Array domains having rotated patterns |
GB201214440D0 (en) | 2012-08-13 | 2012-09-26 | Randox Lab Ltd | Kidney disease biomarker |
US20140072959A1 (en) | 2012-09-12 | 2014-03-13 | Force Diagnostics, Inc. | Rapid tests for insurance underwriting |
GB201218570D0 (en) | 2012-10-16 | 2012-11-28 | Randox Lab Ltd | Method |
US9651539B2 (en) | 2012-10-28 | 2017-05-16 | Quantapore, Inc. | Reducing background fluorescence in MEMS materials by low energy ion beam treatment |
CN105283560B (zh) | 2013-05-24 | 2018-11-30 | 昆塔波尔公司 | 基于纳米孔的通过混合的fret检测的核酸分析 |
BE1022360B1 (fr) * | 2013-11-19 | 2016-03-24 | Tekinvest Sprl | Puits de microplaque, support de maintien et procede pour la detection d'analytes |
WO2015155513A1 (en) * | 2014-04-09 | 2015-10-15 | Randox Laboratories Ltd | Diagnosis of cancer by detecting dimeric il-18 |
WO2015161219A1 (en) * | 2014-04-17 | 2015-10-22 | SFC Fluidics, Inc. | Microdialysis platform |
EP2963124B1 (en) | 2014-07-01 | 2018-06-20 | Randox Laboratories Ltd. | Biomarker combinations for use in pancreatic cancer screening |
CN107109472B (zh) | 2014-10-10 | 2021-05-11 | 昆塔波尔公司 | 利用互相猝灭的荧光标记物的基于纳米孔的聚合物分析 |
JP6757316B2 (ja) | 2014-10-24 | 2020-09-16 | クアンタポール, インコーポレイテッド | ナノ構造のアレイを使用するポリマーの効率的光学分析 |
CN112881728A (zh) | 2015-07-15 | 2021-06-01 | Hycor生物医学有限责任公司 | 可定制仪器 |
GB201519142D0 (en) | 2015-10-29 | 2015-12-16 | Randox Lab Ltd | Method |
GB201520341D0 (en) * | 2015-11-18 | 2015-12-30 | Randox Lab Ltd And Randox Teoranta | Improvements relating to substrates for the attachment of molecules |
WO2018002362A1 (en) | 2016-06-30 | 2018-01-04 | Randox Laboratories Ltd | Measurement of fabp for diagnosis |
EP3482196B1 (en) | 2016-07-05 | 2022-02-23 | Quantapore, Inc. | Optically based nanopore sequencing |
GB201818744D0 (en) | 2018-11-16 | 2019-01-02 | Randox Laboratories Ltd | Detection of bladder cancer |
GB201910730D0 (en) | 2019-07-26 | 2019-09-11 | Randox Teoranta | Bovine Pathogen Array |
GB201916186D0 (en) | 2019-11-07 | 2019-12-25 | Randox Laboratories Ltd | Biomarkers for aiding in the diagnosis of mental disorders |
GB202014755D0 (en) | 2020-09-18 | 2020-11-04 | Randox Laboratories Ltd | Methods to determine coronavirus infectivty status |
GB202019663D0 (en) | 2020-12-14 | 2021-01-27 | Randox Laboratories | Predictive biomarkers for risk of bladder cancer in diabetes patients |
GB202104287D0 (en) | 2021-03-26 | 2021-05-12 | Randox Laboratories | Method for determining prognosis of chronic kidney disease |
GB202111635D0 (en) | 2021-08-13 | 2021-09-29 | Randox Laboratories | Risk prediction model for prostate cancer |
GB202114088D0 (en) | 2021-10-01 | 2021-11-17 | Randox Laboratories | Detection of bladder cancer in males |
GB202203639D0 (en) | 2022-03-16 | 2022-04-27 | Randox Laboratories Ltd | Standardisation method for glycosylation arrays |
GB202204413D0 (en) | 2022-03-29 | 2022-05-11 | Randox Laboratories Ltd | Markers for progression of inflammatory liver disease |
Family Cites Families (23)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3269567D1 (en) * | 1981-04-29 | 1986-04-10 | Ciba Geigy Ag | New devices and kits for immunological analysis |
SE431620B (sv) | 1982-07-07 | 1984-02-20 | Stojan Popovic | Suganordning, speciellt avsedd att anvendas som tennsug vid lodningsarbeten |
US4591570A (en) * | 1983-02-02 | 1986-05-27 | Centocor, Inc. | Matrix of antibody-coated spots for determination of antigens |
GB8314523D0 (en) * | 1983-05-25 | 1983-06-29 | Lowe C R | Diagnostic device |
US4745075A (en) * | 1984-09-06 | 1988-05-17 | Burroughs Wellcome Co. | Diagnostic test methods |
US4829010A (en) * | 1987-03-13 | 1989-05-09 | Tanox Biosystems, Inc. | Immunoassay device enclosing matrixes of antibody spots for cell determinations |
GB8803000D0 (en) * | 1988-02-10 | 1988-03-09 | Ekins Roger Philip | Determination of ambient concentrations of several analytes |
SU1696399A1 (ru) | 1988-07-01 | 1991-12-07 | Государственный научно-исследовательский и проектный институт по обогащению руд цветных металлов "Казмеханобр" | Способ очистки сточных вод от ионов т желых металлов |
WO1990001564A1 (en) * | 1988-08-09 | 1990-02-22 | Microprobe Corporation | Methods for multiple target analyses through nucleic acid hybridization |
US5077210A (en) * | 1989-01-13 | 1991-12-31 | Eigler Frances S | Immobilization of active agents on substrates with a silane and heterobifunctional crosslinking agent |
US5120662A (en) * | 1989-05-09 | 1992-06-09 | Abbott Laboratories | Multilayer solid phase immunoassay support and method of use |
US5474796A (en) * | 1991-09-04 | 1995-12-12 | Protogene Laboratories, Inc. | Method and apparatus for conducting an array of chemical reactions on a support surface |
FR2693740B1 (fr) | 1992-07-17 | 1994-10-14 | Univ Joseph Fourier | Procédé de détection tissulaire ou cellulaire mettant en Óoeuvre des réactifs chimiluminescents. |
GB2269896B (en) | 1992-08-03 | 1997-03-12 | Marconi Gec Ltd | Separation method |
JPH06148188A (ja) * | 1992-11-13 | 1994-05-27 | Olympus Optical Co Ltd | 免疫学的再検査方法 |
JPH08508568A (ja) * | 1993-03-30 | 1996-09-10 | テラピン テクノロジーズ,インク. | 親和性滴定による濃度の決定とドラッグデリバリーにおける競合的置換 |
EP0700514B1 (en) * | 1993-05-18 | 2001-11-28 | University of Utah Research Foundation | Apparatus and methods for multianalyte homogeneous fluoroimmunoassays |
GB9325100D0 (en) * | 1993-12-07 | 1994-02-02 | Univ Court Of The University O | Device |
US5814565A (en) * | 1995-02-23 | 1998-09-29 | University Of Utah Research Foundation | Integrated optic waveguide immunosensor |
US5624711A (en) * | 1995-04-27 | 1997-04-29 | Affymax Technologies, N.V. | Derivatization of solid supports and methods for oligomer synthesis |
EP0768530A1 (en) * | 1995-10-16 | 1997-04-16 | Nippon Paint Co., Ltd. | Process for assaying biological substance |
BR9800655A (pt) * | 1997-04-21 | 1999-08-10 | Randox Lab Ltd | Dispositivo de estado sólido para efetuar ensaios com múltiplos analisados seu uso e e sistema para análise de múltiplos analisados |
EP0874242B2 (en) * | 1997-04-21 | 2009-06-03 | Randox Laboratories Ltd. | Device and apparatus for the simultaneous detection of multiple analytes |
-
1998
- 1998-04-17 BR BR9800655A patent/BR9800655A/pt not_active Application Discontinuation
- 1998-04-17 CZ CZ0116998A patent/CZ297165B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-04-20 NZ NZ330227A patent/NZ330227A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-04-20 GB GB9808309A patent/GB2324866B/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-20 PT PT98303019T patent/PT874242E/pt unknown
- 1998-04-20 HU HU9800920A patent/HU220777B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1998-04-20 ES ES98303019T patent/ES2238750T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-20 UA UA98041977A patent/UA54400C2/ru unknown
- 1998-04-20 AU AU61988/98A patent/AU713388B2/en not_active Expired
- 1998-04-20 SG SG9800759A patent/SG87765A1/en unknown
- 1998-04-20 CA CA002235183A patent/CA2235183C/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-20 AT AT98303019T patent/ATE289684T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-04-20 DE DE69829089T patent/DE69829089T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-20 NO NO981766A patent/NO981766L/no not_active Application Discontinuation
- 1998-04-20 RU RU98107571/13A patent/RU2168174C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-04-21 HR HR97302707.1A patent/HRP980215A2/hr not_active Application Discontinuation
- 1998-04-21 ZA ZA983345A patent/ZA983345B/xx unknown
- 1998-04-21 GE GEAP19984247A patent/GEP20022846B/en unknown
- 1998-04-21 YU YU17498A patent/YU49328B/sh unknown
- 1998-04-21 KR KR1019980014131A patent/KR100585548B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-04-21 MY MYPI98001772A patent/MY114814A/en unknown
- 1998-04-21 JP JP11068798A patent/JP4209494B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-21 TW TW087106047A patent/TWI225928B/zh not_active IP Right Cessation
- 1998-04-21 TR TR1998/00737A patent/TR199800737A1/xx unknown
- 1998-04-21 AR ARP980101840A patent/AR015110A1/es active IP Right Grant
- 1998-04-21 SK SK510-98A patent/SK283340B6/sk unknown
- 1998-04-21 CN CNB981152546A patent/CN1178063C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-21 ID IDP980597A patent/ID20179A/id unknown
- 1998-04-21 PL PL98325914A patent/PL325914A1/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-04-21 EG EG34198D patent/EG22471A/xx active
- 1998-12-16 HK HK98113653A patent/HK1012202A1/xx not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-10-07 US US09/413,799 patent/US6498010B1/en not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Clinical Chemistry. - 1993, N 9, pp. 1899-1903. * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8647861B2 (en) | 2008-07-16 | 2014-02-11 | Children's Medical Center Corporation | Organ mimic device with microchannels and methods of use and manufacturing thereof |
WO2012154729A1 (en) * | 2011-05-09 | 2012-11-15 | President And Fellows Of Harvard College | A microfluidic module and uses thereof |
US9725687B2 (en) | 2011-12-09 | 2017-08-08 | President And Fellows Of Harvard College | Integrated human organ-on-chip microphysiological systems |
US10954482B2 (en) | 2011-12-09 | 2021-03-23 | President And Fellows Of Harvard College | Integrated human organ-on-chip microphysiological systems |
US11773359B2 (en) | 2011-12-09 | 2023-10-03 | President And Fellows Of Harvard College | Integrated human organ-on-chip microphysiological systems |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2168174C2 (ru) | Твердое устройство для проведения мультианалитных анализов, способ его формирования и система, включающая такое устройство | |
EP0874242B1 (en) | Device and apparatus for the simultaneous detection of multiple analytes | |
AU735107B2 (en) | Automated immunoassay cassette | |
FI76888C (fi) | Nya medel och foerpackningar foer immunologiska analyser. | |
US4689310A (en) | Methods for attaching ligands or anti-ligands to a solid phase | |
US6180135B1 (en) | Three-dimensional colorimetric assay assemblies | |
JPH03506078A (ja) | 化学的試験方法において使用する装置 | |
JPH0650973A (ja) | 固相アッセイ装置及びその使用法 | |
US4791069A (en) | Methods for attaching ligands or anti-ligands to a solid phase | |
JPH0545361A (ja) | 液体試料の分析方法及び該方法に用いる液体試料分析用基板 | |
US20020031449A1 (en) | Multiple-container systems with improved sensitivity for optical analysis | |
JP2001502052A (ja) | 液体移動および干渉に対する抵抗を改良した診断用検査デバイス | |
AU1364300A (en) | Quantitative determination of analytes in a heterogeneous system | |
US20130040378A1 (en) | Immunoassay cuvettes | |
JP2001228151A (ja) | 免疫クロマトグラフィー装置 | |
MXPA98003102A (es) | Dispositivo y aparato para la deteccion simultanea de analitos multiples | |
JP2000065832A (ja) | フィルター状生物学的特異反応測定用担体およびそれを用いた測定方法 | |
US20020127732A1 (en) | Process for the diagnosis of diseases, pathological states and pathophysiological as well as physiological measurement units | |
JPH01317389A (ja) | 生化学反応用担体およびその製造方法 | |
JPH0968532A (ja) | マイクロプレート |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20170421 |