SK2912004A3 - pH-sensitive polymeric conjugates of an anthracycline cancerostatic drug for targeted therapy - Google Patents
pH-sensitive polymeric conjugates of an anthracycline cancerostatic drug for targeted therapy Download PDFInfo
- Publication number
- SK2912004A3 SK2912004A3 SK291-2004A SK2912004A SK2912004A3 SK 2912004 A3 SK2912004 A3 SK 2912004A3 SK 2912004 A SK2912004 A SK 2912004A SK 2912004 A3 SK2912004 A3 SK 2912004A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- amino acids
- conjugates
- units
- gly
- acid
- Prior art date
Links
- 230000003327 cancerostatic effect Effects 0.000 title claims abstract description 13
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 title claims abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 title description 50
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title description 48
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 title description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 65
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 claims abstract description 39
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 claims abstract description 39
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims abstract description 25
- -1 aromatic amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 21
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 12
- 229960004050 aminobenzoic acid Drugs 0.000 claims abstract description 11
- CCBIBMKQNXHNIN-ZETCQYMHSA-N Gly-Leu-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O CCBIBMKQNXHNIN-ZETCQYMHSA-N 0.000 claims abstract description 10
- IGOYNRWLWHWAQO-JTQLQIEISA-N Gly-Phe-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 IGOYNRWLWHWAQO-JTQLQIEISA-N 0.000 claims abstract description 10
- 108010077435 glycyl-phenylalanyl-glycine Proteins 0.000 claims abstract description 10
- WEZDRVHTDXTVLT-GJZGRUSLSA-N 2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 WEZDRVHTDXTVLT-GJZGRUSLSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 108010009504 Gly-Phe-Leu-Gly Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims abstract description 7
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 claims abstract description 5
- OKPYIWASQZGASP-UHFFFAOYSA-N n-(2-hydroxypropyl)-2-methylprop-2-enamide Chemical group CC(O)CNC(=O)C(C)=C OKPYIWASQZGASP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229940042795 hydrazides for tuberculosis treatment Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 101150044980 Akap1 gene Proteins 0.000 claims abstract 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 2
- 125000000998 L-alanino group Chemical group [H]N([*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(=O)O[H] 0.000 claims abstract 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract 2
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 claims description 84
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 claims description 41
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 20
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 15
- 239000012704 polymeric precursor Substances 0.000 claims description 15
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 15
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 claims description 10
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 150000001371 alpha-amino acids Chemical class 0.000 claims description 5
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 5
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 5
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 claims description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 4
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000005263 alkylenediamine group Chemical group 0.000 claims description 2
- 229920006158 high molecular weight polymer Polymers 0.000 claims 3
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 claims 2
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 claims 2
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 2
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N (+/-)-DABA Natural products NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims 1
- SMFGCTXUBWEPKM-KBPBESRZSA-N Phe-Leu-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 SMFGCTXUBWEPKM-KBPBESRZSA-N 0.000 claims 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 claims 1
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 claims 1
- 150000007857 hydrazones Chemical class 0.000 abstract description 8
- OQEBBZSWEGYTPG-UHFFFAOYSA-N 3-aminobutanoic acid Chemical compound CC(N)CC(O)=O OQEBBZSWEGYTPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 abstract 1
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 73
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 24
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 19
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 16
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- VHSHLMUCYSAUQU-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropyl methacrylate Chemical compound CC(O)COC(=O)C(C)=C VHSHLMUCYSAUQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 9
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 9
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 5
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 5
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 5
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 5
- NHJVRSWLHSJWIN-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O NHJVRSWLHSJWIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 4
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 description 4
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N (2s)-2,6-diaminohexanoic acid;(2s)-2-hydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N 0.000 description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 3
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 201000010989 colorectal carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 3
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 3
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 3
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N hydrazine monohydrate Substances O.NN IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000006698 hydrazinolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 125000005597 hydrazone group Chemical group 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000011285 therapeutic regimen Methods 0.000 description 3
- OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 2-(2-cyanopropan-2-yldiazenyl)-2-methylpropanenitrile Chemical compound N#CC(C)(C)N=NC(C)(C)C#N OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000004736 B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 2
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 0 CCC(C)(CC(C)(CC(*)(*)CC(C)(C(*)(*)C(*)(*)CC(C)(C(*)(*)CC(C)(CC=C)C(*C(O)=O)=O)C(*NN)=O)C(*C)=O)C(*NN=CCO)=O)C(NCC(C)O)=O Chemical compound CCC(C)(CC(C)(CC(*)(*)CC(C)(C(*)(*)C(*)(*)CC(C)(C(*)(*)CC(C)(CC=C)C(*C(O)=O)=O)C(*NN)=O)C(*C)=O)C(*NN=CCO)=O)C(NCC(C)O)=O 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100024165 G1/S-specific cyclin-D1 Human genes 0.000 description 2
- 101000980756 Homo sapiens G1/S-specific cyclin-D1 Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 2
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000001494 anti-thymocyte effect Effects 0.000 description 2
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 2
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 2
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N hexane-1,6-diamine Chemical compound NCCCCCCN NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 2
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-imine Chemical compound N=C1CCCS1 CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 2
- JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dithiobis(6-nitrobenzoic acid) Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)O)=CC(SSC=2C=C(C(=CC=2)[N+]([O-])=O)C(O)=O)=C1 KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IUTPJBLLJJNPAJ-UHFFFAOYSA-N 3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)CCN1C(=O)C=CC1=O IUTPJBLLJJNPAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DJBRKGZFUXKLKO-UHFFFAOYSA-N 3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 DJBRKGZFUXKLKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 4'-epidoxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 0.000 description 1
- KAVKUZZRBQNSGV-UHFFFAOYSA-N 4-(2-methylprop-2-enoylamino)benzoic acid Chemical compound CC(=C)C(=O)NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 KAVKUZZRBQNSGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 125000006847 BOC protecting group Chemical group 0.000 description 1
- XDUOMKKDUDUQKH-SYXBEOGYSA-N CC(C(C(C1)N)O)OC1O[C@@H](C[C@](C)(C1)O)C([C@@H]2O)C1=C2O Chemical compound CC(C(C(C1)N)O)OC1O[C@@H](C[C@](C)(C1)O)C([C@@H]2O)C1=C2O XDUOMKKDUDUQKH-SYXBEOGYSA-N 0.000 description 1
- KSRFWDSMEOOFEF-UHFFFAOYSA-N CC(c1cccc(OC)c1C(C)=O)=O Chemical compound CC(c1cccc(OC)c1C(C)=O)=O KSRFWDSMEOOFEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010010071 Coma Diseases 0.000 description 1
- WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N Daunomycin Natural products CCC1(O)CC(OC2CC(N)C(O)C(C)O2)c3cc4C(=O)c5c(OC)cccc5C(=O)c4c(O)c3C1 WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 238000003072 Ellman's test Methods 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical class CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000028530 T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 1
- HPZOOQSXPMEJBV-ODCFVKFUSA-N Tirilazad mesylate Chemical compound CS(O)(=O)=O.O=C([C@@H]1[C@@]2(C)CC=C3[C@@]4(C)C=CC(=O)C=C4CC[C@H]3[C@@H]2C[C@H]1C)CN(CC1)CCN1C(N=1)=CC(N2CCCC2)=NC=1N1CCCC1 HPZOOQSXPMEJBV-ODCFVKFUSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003817 anthracycline antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000003560 cancer drug Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N dihydromaleimide Natural products O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HWJHWSBFPPPIPD-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.CCOCC HWJHWSBFPPPIPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 230000024924 glomerular filtration Effects 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 230000004217 heart function Effects 0.000 description 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000005917 in vivo anti-tumor Effects 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- RPKCZJYDUKVMGF-UHFFFAOYSA-L lucifer yellow carbohydrazide dye Chemical compound [Li+].[Li+].[O-]S(=O)(=O)C1=CC(C(N(NC(=O)NN)C2=O)=O)=C3C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC3=C1N RPKCZJYDUKVMGF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- VHRYZQNGTZXDNX-UHFFFAOYSA-N methacryloyl chloride Chemical compound CC(=C)C(Cl)=O VHRYZQNGTZXDNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000155 polyglutamine Polymers 0.000 description 1
- 239000000580 polymer-drug conjugate Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N propan-2-one;hydrate Chemical compound O.CC(C)=O OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000010926 purge Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6883—Polymer-drug antibody conjugates, e.g. mitomycin-dextran-Ab; DNA-polylysine-antibody complex or conjugate used for therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
Vynález sa týka polymérnych kancerostatík umožňujúcich cielený transport v organizme a zameraných na cielenú terapiu nádorových ochorení v humánnej medicíne.
Doterajší stav techniky
V posledných rokoch sa vývoj nových liečiv a liekových foriem stále viac zameriava na využitie polymérnych látok, zvlášť vodorozpustných polymérov ako nosičov liečiv. Bol pripravený a študovaný celý rad polymérnych konjugátov kancerostatík s rozpustnými polymérmi, v ktorých bolo liečivo s protinádorovým účinkom pripojené k polyméru neštiepiteľnou kovalentnou väzbou, hydrolyticky nestabilnou iónovou väzbou alebo kovalentnou väzbou náchylnou na enzymatickú či obyčajnú hydrolýzu. Cieľom bolo pripraviť liečivá so zlepšeným farmakokinetickým a farmakodynamickým chovaním, umožňujúcim cielenú terapiu nádorových ochorení. Významnú skupinu tvoria polymérne liečivá pripravené na báze kopolymérov HPMA. V týchto látkach je kancerostatikum pripojené k polymérnemu V-(2-hydroxypropyl)metakrylamidovému nosiču enzymaticky štiepiteľnou oligopeptidovou sekvenciou, pripravenou ako substrát pre lyzozomálne enzýmy (enzýmy prítomné v cicavčích bunkách). Štruktúra, syntéza a vlastnosti takýchto konjugátov sú opísané v patente [Duncan 1985]. Prehľad doposiaľ dosiahnutých výsledkov v tejto oblasti veľmi dobre spracoval Kopeček a spol. [Kopeček a spol. 2000]. Polymérne liečiva opísaného typu boli účinné pri liečení celého radu nádorov pri myšiach a krysách. Dva polymérne konjugáty sú v súčasnosti dokonca testované klinicky [Vasey 1999 a spol., Julyan a spol. 1999, Thomson a spol. 1999], Výsledky klinického testovania ukázali, že polymémy konjugát doxorubicínu je menej nešpecifický toxický než voľné liečivo. Jeho maximálna
Ί tolerovaná dávka (MTD) je 320 mg/m2, čo je 4 - 5 x viac než je normálne používaná klinická dávka voľného doxorubicínu (60 - 80 mg/m2). Po podaní polymérneho liečiva sa nepozorovalo žiadne závažné ovplyvnenie srdcových funkcií, aj keď individuálna kumulatívna dávka dosiahla hodnotu až 1680 mg/m2. Všetky ostatné toxicity, pozorované v súvislosti s podávaním voľných, t.j. nesmerovaných antracyklínových antibiotík, boli významne znížené. Nevýhodou doteraz klinicky testovaných polymérnych konjugátov liečiv je pomerne malá špecifita účinku, pretože tieto konjugáty buď neobsahujú smerujúcu jednotku vôbec, ako napríklad PK1, alebo pomerne málo špecifický karbohydrát (galaktózamín v konjugáte PK2, pri ktorom sa overuje schopnosť smerovať polyméme liečivo do pečene). Vo vývoji sú preto i konjugáty. pri ktorých by sa mal dosiahnuť cielený špecifický účinok pripojením špecifickej smerujúcej molekuly (napríklad protilátky, ale tiež lektínu, rastového hormónu, transferínu apod.) k molekule nosiča.
Ďalšou nevýhodou doteraz klinicky testovaných konjugátov, vrátane konjugátov poly(HPMA) s doxorubicínom, je skutočnosť že liečivo je z nich intracelulárne uvoľňované vo farmakologicky aktívnej podobe iba enzymatickou reakciou, ku ktorej dochádza v lyzozómoch. To znamená, že také liečivo je účinné iba v bunkách, v ktorých sa vyskytuje vysoká koncentrácia lyzozomálnych enzýmov - peptidáz. Ďalšou nevýhodou je i pomerne zložitá štruktúra konjugátu, ktorý musí obsahovať sekvenciu, z ktorej sa liečivo pôsobením peptidáz uvoľňuje, väčšinou tetrapeptidovú spojku GlyPheLeuGly, čo predražuje a komplikuje syntézu.
V literatúre existuje celý rad informácií o príprave a štúdiu vlastností polymérov nesúcich pripojené kancerostatikum väzbou náchylnou na hydrolýzu vo vodnom prostredí. Výsledky sú zhrnuté v prehľadnom článku Kratze [Kratz a spol., 1999]. Ako nosiče kancerostatík boli väčšinou použité prírodné makromolekuly, napr. albumín, dextrány, transferín, algináty alebo protilátky. V niekoľkých prípadoch boli použité i syntetické polyméme nosiče, poly(etylénglykol) a polyglutamíny. Liečivá boli k nosičom pripojené väzbami umožňujúcimi hydrolýzou riadené uvoľnenie aktívneho liečiva ako v extracelulárnom priestore, tak aj vo vnútri buniek. V prípade doxorubicínu (Dox) to
J bola najčastejšie väzba tvorená estermi kyseliny cis-akonitylovej alebo hydrazónová väzba. In vivo testovanie všetkých vyššie uvedených pH senzitívnych konjugátov na pokusných zvieratách však neprinieslo presvedčivé výsledky, a tak žiadny z polymémych konjugátov nie je pri liečení nádorových ochorení používaný ani klinicky testovaný.
Nami vyvinuté polymérne kancerostatiká pripravené na báze kopolymérov HPMA s kancerostatikom naviazaným pomocou hydrazónovej pH senzitívnej väzby vykazovala pri in vitro i in vivo testoch na myšiach podstatne vyššiu protinádorovú účinnosť proti radu nádorových línií, než vykazovali konjugáty. pri ktorých bolo liečivo pripojené na polymérny nosič enzymaticky štiepiteľnou väzbou cez oligopeptidovú spojku. Syntéza konjugátov je v porovnaní so skôr vyvinutými poly(HPMA) konjugátmi jednoduchšia, lacnejšia a lepšie zvládnuteľná, pretože je možné ako spojku použiť namiesto enzymaticky degradovateľnej oligopeptidovej· sekvencie iba jednu aminokyselinu a väzba liečiva na polymér je jednoduchou reakciou. K uvoľneniu liečiva dochádza na základe zmeny pH okolia a nie je preto na aktiváciu nutná prítomnosť lyzozomálnych enzýmov. Rýchlosť uvoľnenia (a teda okamžitá koncentrácia cytostatika) je oveľa vyššia, než v prípade konjugátov obsahujúcich sekvencie štiepiteľné iba enzymaticky [Ŕíhová a spol.,2001, Etrych a spol.,2001],
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu sú lineárne a rozvetvené polymérne konjugáty doxorubicínu, daunomycínu, farmorubicínu a ďalších antracyklínových kancerostatík obsahujúcich karbonylovú skupinu s kopolymérmi pripravenými na báze A'-(2-hydroxypropyl)-metakrylamidu (HPMA) a prípadne s protilátkami. ich fragmentárni či nešpecifickým imunoglobulínom (Obr. 3). Tieto konjugáty sa vyznačujú tým, že polymérny nosič spolu s protilátkou (imunoglobulínom) zaisti predĺženú cirkuláciu polymérneho liečiva v krvnom riečisku a jeho následnú prednostnú pasívnu alebo aktívnu akumuláciu v nádore. Kancerostatikum je k nosiču pripojené väzbou stálou v krvnom riečisku (pri pH
7.4). Po naviazaní liečiva na polymér stráca kanccrostatikum biologický účinok, je transportované krvným riečiskom v neaktívnej forme a k aktivácii cytotoxického liečiva dôjde až intraceluláme v organelách cieľových buniek v dôsledku poklesu pH a hydrolýzy väzby, ktorou je liečivo k polyméru pripojené.
Konjugáty pozostávajú z polymémeho nosiča tvoreného 30 až 3 000 monomérnymi jednotkami spojenými do polymémeho reťazca, z ktorých 60 až 99 % tvoria jednotky /V-(2-hydroxypropyl)metakrylamidu, 1 až 25 % tvoria jednotky metakryloylovaných hydrazónov a-aminokyselín, ε-aminokyselín, aromatických aminokyselín alebo oligopeptidov zakončených molekulou antracyklínového kancerostatika (s výhodou doxorubicínu) a 0,5 až 15 % tvoria jednotky metakryloylovaných a-aminokyselín, ε-aminokyselín, aromatických aminokyselín alebo oligopeptidov či ich sodných solí, prípadne je obsiahnutých 0,5 až 10 % jednotiek metakryloylovaných hydrazidov a-aminokyselín, ε-aminokyselín, aromatických aminokyselín alebo oligopeptidov a konjugát môže mať prípadne naviazaných 0,5 až 5 % metakryloylovaných a-aminokyselín, ε-aminokyselín alebo oligopeptidov zakončených molekulou imunoglobulínu alebo špecifickej monoklonálnej alebo polyklonálnej protilátky.
Rozvetvené vysokomolekulárne štruktúry obsahujú okrem vyššie uvedených jednotiek ešte 0,1 až 5 % jednotiek tvoriacich spojky, prepájajúce jednotlivé polyméme reťazce do vysokomolekulárnej rozvetvenej štruktúry, ktoré pozostávajú z enzymaticky degradovateľných metakryloylovaných oligopeptidov, s výhodou tripeptidov GlyPheGly, GlyLeuGly alebo tetrapeptidu GlyPheLeuGly, prepojených diamínmi (etyléndiamín, hexametyiéndiamín).
Podstatou polymérnych konjugátov s cieleným protinádorovým účinkom podľa vynálezu je väzba aktívnej zložky - cytostatika - na polymérny nosič prostredníctvom hydrazónovej skupiny vzniknutej reakciou karbonylovej skupiny v molekule liečiva s hydrazidovou skupinou polyméru. Väzbou liečiva na polymérny nosič dôjde k výraznému zvýšeniu molekulovej hmotnosti liečiva, a tým k predĺženiu času cirkulácie v krvnom obehu i celkového času zotrvania účinnej látky v organizmu. Väzba liečiva na polymér je relatívne stála v priebehu transportu liečiva v krvnom riečisku a hydrolyticky štiepiteľná v mierne kyslom prostredí vo vnútri buniek, menovite v bunkových organelách vyznačujúcich sa kyslým pH. To znamená, že liečivo je transportované krvným riečiskom v neaktívnej, na polymér viazanej forme, a k jeho uvoľneniu a aktivácii dôjde až po prieniku do cieľových nádorových buniek. Aktivácia liečiva až v cieľových bunkách vedie k eliminácii vedľajších účinkov inak toxických cytostatík a k zacieleniu ich účinku prednostne na nádorové bunky. Za cielený transport do nádoru či nádorových buniek je zodpovedný polymérny nosič na báze kopolymérov ΗΡΜΑ. V prípade rozvetveného vysokomolekulárneho poly(HPMA) nosiča dochádza k ukladaniu polymérneho liečiva do tkaniva pevných nádorov v dôsledku pasívneho targetingu a EPR efektu (Enhanced Permeability and Retention effect). Polymér môže byt z organizmu uvoľnený po enzymatickej degradácii oligopeptidových spojok vo forme kratších polymérnych reťazcov napr. glomerulárnou filtráciou. V prípade nosičov obsahujúcich protilátky (imunoglobulín) je protilátka pripojená k nosiču pomocou hydrazónovej väzby vzniknutej reakciou aldehydových skupín zavedených do Fc fragmentu protilátky oxidáciou jodistanom sodným s hydrazónovými skupinami nosiča. Protilátka (imunoglobulín) môže byť pripojená k reťazcu polymérneho nosiča taktiež s použitím bifunkčných činidiel. V tomto prípade je molekula protilátky modifikovaná reakciou s 2-iminotiolánom (zavedenie -SH skupín), do polyméru sú zavedené maleimidové skupiny reakciou hydrazidových skupín polyméru so sukcínimidovým esterom 3-maleimidopropiónovej kyseliny a ku konjugácii dôjde adíciou -SH skupiny protilátky na dvojitú väzbu maleimidovej skupiny polyméru. Obdobne je možné na konjugáciu použiť iné bifunkčné činidlo - SPDP (N-hydroxysukcínimidový ester kyseliny 3-(2-pyridylditio) propiónovej), ktorým je možné konjugovať -SH skupiny obsahujúce protilátku (imunoglobulín) priamo na hydrazidové skupiny polymérneho nosiča.
Konjugát s protilátkou (imunoglobulínom) je v cieľových orgánoch/tkanivách akumulovaný pasívne a aktívne. Pasívnu akumuláciu umožňuje vyššia molekulová hmotnosť konjugátu a uplatňuje sa pri nej tzv. EPR efekt, aktívnu akumuláciu zaisťuje proces, pri ktorom dochádza k interakcii väzbového miesta smerujúcej protilátky so zodpovedajúcimi receptormi na povrchu cieľových buniek. V tomto prípade hrá HPMA kopolymér úlohu nielen nosiča, ale aj ochranného obalu, ktorý podstatným spôsobom znižuje imunogenicitu smerujúceho glykoproteínu v konjugáte.
Polymérne liečivo podľa vynálezu môže byť použité v troch formách, líšiacich sa detailnou štruktúrou. Prvá štruktúra predstavuje lineárny polymérny konjugát s liečivom bez smerujúcej protilátky (imunoglobulínu) (Obr. 1), druhá štruktúra je vysokomolekulárna a predstavuje rozvetvenú štruktúru polyméru s biodegradovateľnými oligopeptidovými spojkami (Obr. 2) a tretia štruktúra zahŕňa aj smerujúcu protilátku (imunoglobulín) (Obr. 3).
Príprava nesmerovaných lineárnych polymérnych liečiv prebieha vo viacerých reakčných krokoch. V prvom kroku je pripravený polymérny prekurzor I (viz. Obr. 4) ako kopolymér HPMA s metakryloylovanými reaktívnymi estermi (4-nitrofenylovými, N-hydroxysukcínimidovými a pod.) aminokyselín či oligopeptidov, v druhom kroku, vedúcemu k príprave polymémeho prekurzoru II, sú koncové reaktívne esterové skupiny prevedené hydrazínolýzou na hydrazidy a v treťom kroku je pripojené k hydrazidovým skupinám chemickou hydrazónovou väzbou kancerostatikum obsahujúce keto skupinu v molekule.
Pri príprave rozvetveného polymémeho liečiva je treba vyjsť z polymémeho prekurzora I obsahujúceho v postranných reťazcoch enzymaticky degradovateľný oligopeptid, s výhodou GlyPheGly, GlyLeuGly, GlyPheLeuGly alebo GlyLeuPheGly. Druhý krok je zahájený miernym rozvetvením polyméru reakciou polymémeho prekurzora I s alkyléndiamínom (etyl, butyl, hexyl) a dokončený následnou hydrazínolýzou hydrazínhydrátom ako v predchádzajúcom prípade.
Protilátkami (imunoglobulínom) smerované liečivá je možné pripraviť z oboch predchádzajúcich typov liečiv následnou reakciou s protilátkou (imunoglobulínom), do štruktúry ktorej boli vopred zavedené miernou oxidáciou K.IO4 alebo NaIO4 aldehydové skupiny a alebo ich konjugáciou s protilátkou (imunoglobulínom) pomocou bifunkčných činidiel, ako je opísané vyššie.
Vynález je využiteľný na prípravu polymérnych liečiv, použiteľných na liečbu rôznych typov nádorových ochorení v humánnej medicíne.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obr. 1 predstavuje štruktúru lineárneho polymémeho konjugátu s liečivom. Jedná sa o nesmerované polymérne liečivá. Na biologické experimenty bol s výhodou používaný konjugát s x=94 % mol., a=3 % mol., b=2 % mol., c = l % mol a X = AB alebo AK pri použití aminokyseliny a GlyPheLeuGly pri použití oligopeptidu.
Obr. 2 predstavuje schému prípravy a štruktúry rozvetvených vysokomolekulárnych konjugátov s biodegradovateľnými oligopeptidovými spojkami. Vhodná molekulová hmotnosť konjugátu je 120 000 g/mol. Obsah priečnych väzieb 0,5 % mol., obsah DOX 9 % hmotn., obsah hydrazónových skupín 2 % mol. a karboxylov 2 % mol.
Obr. 3 znázorňuje všeobecnú štruktúru konjugátu zahŕňajúceho aj smerujúcu protilátku. Na biologické experimenty sa s výhodou použil konjugát s x=92 % mol., a=3 % mol., b=0,7 % mol., c=2 % mol, d=2,3 % mol. a X=AB alebo AK s použitím aminokyseliny ako spaceru a GlyPheLeuGly s použitím oligopeptidu.
Obr. 4 znázorňuje štruktúru polymémeho prekurzora.
Obr. 5 znázorňuje výsledky meraní rýchlosti uvoľňovania doxorubicínu z konjugátov podľa vynálezu líšiacich sa zložením spaceru; A) pri pH modelujúcom prostredí endozómov (pH 5); B) pri pH modelujúcom pH krvi (7,4). Obsah liečiva v konjugátoch bol 10 % hmotn.
Obr. 6 znázorňuje výsledky zisťovania protinádorovej aktivity konjugátov podľa vynálezu obsahujúcich hydrolyticky uvoľňovaný doxorubicín in vivo (protektívny režim). T bunkový lymfóm EL4: 105 buniek/ myš, s.c.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Príprava nesmerovaného lineárneho polymérneho liečiva na báze doxorubicínu
Syntéza polymérneho liečiva sa uskutočnila v štyroch syntetických krokoch. V prvom kroku boli pripravené monoméry N-(2-hydroxypropyl)metakrylamid (HPMA) a 4-nitrofenylové estery metakryloylovanej aminokysesliny alebo oligopeptidu (MA-X-ONp). Druhým krokom bola príprava polymérneho prekurzora I radikálovou kopolymerizáciou HPMA s MA-X-ONp. V treťom kroku bol hydrazínolýzou prekurzora I pripravený polymérny prekurzor II a v poslednom kroku sa uskutočnila väzba Dox na polymérny prekurzor.
Príprava monomérov:
HPMA bol pripravený skôr opísanou metódou [Ulbrich 2000], Metakryloylované reaktívne estery boli pripravené metakryloyláciou príslušnej aminokyseliny alebo oligopeptidu (X = Gly, diGly, GlyLeuGly, GlyPheGly, GlyOheLeuGly, β-alanín. kyselina ε-aminokaprónová (AKap), kyselina y>-aminobenzoová (AB) a pod.) reakciou podľa Schotten-Baumana a následnou reakciou vzniknutého derivátu metakrylovej kyseliny s 4-nitrofenolom v prítomnosti dicyklohexylkarbodiimidu (DCCI).
Predpis na prípravu 4-nitrofenylových esterov metakryloylovaných ε-aminokyselín
Postup prípravy monomérov MA-Gly-ONp, MA-GlyGly-ONp a MA-ABONp je zhodný vo všetkých troch prípadoch. Nižšie je uvedený postup na prípravu MA-AB-ONp:
MA-AB-ONp: V trojhrdlej banke sa rozpustilo 0,024 mol (3,34 g) ^-aminobenzoovej kyseliny v 1 5 ml roztoku 0,024 mol (0,97 g) hydroxidu sodného. K vodnému roztoku sodnej soli aminokyseliny sa za miešania a chladenia (5 °C) po kvapkách súčasne pridalo 0,024 mol (2.55 g) metakryloylchloridu a roztoku 0,024 mol (0,97 g) hydroxidu sodného rozpusteného v 10 ml vody. V priebehu reakcie nesmie pH reakčnej zmesi prekročiť pH 9. Reakčná zmes sa miešala 1 hod a po okyslení reakčnej zmesi na pH 2 sa vypadnutá biela zrazenina odfiltrovala na frite S4. Produkt sa čistil kryštalizáciou zo zmesi etanol-voda.
4-nitrofenylový ester bol pripravený reakciou 0,014 mol (2,85 g) /V-metakryloyl 4-aminobenzoovej kyseliny s 0,014 mol (1,93 g) 4-nitrofenolu v dimetylformamide pri -10 °C v prítomnosti 0,0153 mol (3,16 g) dicyklohexylkarbodiimidu. Reakcia prebiehala počas 10 hod, potom sa vylúčená dicyklohexylmočovina odfiltrovala a produkt sa prečistil kryštalizáciou zo zmesi acetón-voda. Ostatné dva 4-nitrofenylové estery (MA-X-ONp) sa pripravujú obdobným spôsobom.
Metakryloylované deriváty GlyLeuGly, GlyPheGly, GlyPheLeuGl, β-alanínu a kyseliny ε-aminokaprónovej boli pripravené tiež metakryloyláciou oligopeptidov či kyseliny, metakryloylované kyseliny však po okyslení vodnej fázy museli byť extrahované do etylacetátu a izolované kryštalizáciou. Príslušné reaktívne estery (ONp estery) sa pripravujú obdobným spôsobom ako MA-AB-ONp, iba reakčným prostredím na esterifikáciu MA-GlyLeuGly-OH a MA-GlyPheLeuGly-OH bol tetrahydrofurán.
Príprava polymérneho prekurzora I: 1 g zmesi HPMA (95 %mol, 0,89 g) a MA-AB-ONp (5 %mol, 0,11 g) a 0,048 g azo-bis-izobutyronitrilu sa rozpustilo v 6,95 g acetónu a roztok sa predložil do polymerizačnej ampuly. Po prebublaní polymerizačnej zmesi dusíkom bola ampula zatavená a polymerizácia sa uskutočňovala pri 50 °C počas 24 hod. Vylúčený polymér sa odfiltroval, trikrát premyl acetónom, dietyléterom a usušil za vákua. Obsah postranných reťazcov zakončených reaktívnymi -ONp skupinami (zloženie kopolyméru) je možné riadiť zložením polymerizačnej násady (pomerom monomérov). Rovnakým spôsobom boli pripravené všetky polymérne prekurzory líšiace sa zložením postranného reťazca.
Príprava polymérneho prekurzora II: Kopolymér poly(HPM A-co-MA-ABNHNHi) bol pripravený reakciou polymérneho prekurzora I s hydrazínhydrátom. 300 mg polymérneho prekurzora I (1,3 x 10'4mol ONp) sa rozpustilo v 2 ml metanolu a za intenzívneho miešania sa pridal roztok 69 mg NH2NH2.H2O v 1 ml metanolu (1,3,.10-3 mol. 10-násobný nadbytok oproti ONp). Reakčná zmes sa ponechala reagovať 3 hodiny, potom bol metanolový roztok nariedený destilovanou vodou na 30 ml a produkt zbavený nízkomolekulárnych zložiek pomocou dialýzy proti destilovanej vode (2 dni). Finálny produkt bol izolovaný z vodného roztoku lyofilizáciou. Molekulová hmotnosť (M«) a polydisperzita polyméru bola stanovená pomocou gélovej chromatografie vybavenej detektorom rozptylu svetla. Množstvo hydrazidových skupín sa zistilo spektrálne po reakcii hydrazidových skupín s TNBS (kyselinou trinitrobenzénsulfónovou). Rovnakým spôsobom boli pripravené prekurzory obsahujúce ostatné aminokyseliny a oligopeptidy.
Polymérne prekurzory II boli takisto pripravené radikálovou zrážacou kopolymerizáciou zodpovedajúceho N-Zerc-butyloxykarbony Ihydrazidu metakryloylovaného oligopeptidu či aminokyseliny (poly(HPMA-co-MA-X-NHNHBOC)) s HPMA za podmienok uvedených vyššie. Polymérne prekurzory II boli po odstránení ochrannej BOC skupiny z poly(HPMA-co-MA-X-NHNH-BOC kyselinou trifluóroctovou vyzrážané do zmesi acetón-dietyléter, rozpustené vo vode. dialyzované proti vode a lyofilizované.
Väzba doxorubicínu na polymérny prekurzor: 250 mg polymérneho prekurzora II (poly(HPMA-co-MA-AB-NHNPl2) (0.1 mmol NHNH2) sa rozpustilo v 3 ml metanolu. Takto pripravený roztok polyméru sa pridal k 23 mg Dox.HCl (40 pmol). Do reakčnej zmesi sa pridali 2 kvapky kyseliny octovej a tento nehomogénny roztok sa miešal pri laboratórnej teplote (v tme). Po 48 hodinách reakcie bol homogénny roztok dvakrát čistený gélovou filtráciou od voľného Dox na kolóne naplnenej Sephadexom LH-20 v metanole. Polyméma frakcia bola izolovaná, zahustená na vákuovej odparke a produkt zrážaný do dietyléteru. Produkt bol prezrážaný z metanolu do dietyléteru a sušený do konštantnej hmotnosti. Obsah Dox bol stanovený spektrálne (λ 480 nm, ε 11 500 L moľ1 cm'1, voda) a obsah hydrazidových skupín TNBS metódou. <MW> a distribúcie molekulových hmotností boli zistené pomocou kvapalinovej chromatografie (kolóna Superose™6 (300x10 mm), 0,3 M octanový pufer (CľDCOONa/CHjCOOH; pH 6,5; 0,5 g/L NaN.i), prietok 0,5 ml/min, detekcia diferenciálnym refraktometrom, detektorom rozptylu svetla (DAWN-DSP-F, Wyatt Technology, USA) a UV detektorom (280 a 488 nm).
Uvedený postup sa použil pri príprave všetkých ostatných polymérnych konjugátov doxorubicínu.
Príklad 2
Príprava rozvetveného vysokomolekulárneho konjugátu.
400 mg polymémeho prekurzora I obsahujúceho oligopeptidové sekvencie GlyPheGly, GlyLeuGly alebo GlyPheLeuGl (0,19 mmol ONp) sa rozpustilo v 1,1 ml DMSO. Za výrazného miešania roztoku polyméru sa pridalo 105 μΐ 0,2 M roztoku 1,2-etyléndiamínu v DMSO (21 pmol EDA) a reakčná zmes sa nechala pri laboratórnej teplote reagovať 1 hodinu. Za intenzívneho miešania roztoku polyméru sa pridal roztok 100 mg hydrazínhydrátu (2 mmol) v 0,3 ml DMSO a reakčná zmes sa ďalšie 3 hodiny intenzívne miešala. Potom bola reakčná zmes nariedená destilovanou vodou na 30 ml a produkt sa čistil dialýzou proti destilovanej vode (2 dni). Vysokomolekulárny prekurzor bol lyofilizovaný. <MW> a distribúcia molekulových hmotností bola zistená pomocou kvapalinovej chromatografie, obsah hydrazidových skupín bol zistený spektrálne TNBSA metódou. Doxorubicín bol viazaný k polyméru a konjugát charakterizovaný za podmienok opísaných v príklade 1.
Príklad 3
Príprava protilátkami (imunoglobulínom) smerovaného konjugátu 1
Čiastočnou modifikáciou hydrazidových skupín polymérneho prekurzora II s obsahom hydrazidových skupín 10 až 15 % mol pomocou V-hydroxysukcínimidylového esteru kyseliny maleínimidylpropiónovej (SMP) bol pripravený kopolymér nesúci v postranných reťazcoch hydrazidovej a maleínimidovej skupiny (MI) (poly(HPMA-co-MA-X-NHNH2-co-MA-X-NHNH-MI)). 250 mg prekurzora II polyíHPMA-co-MA-diGly-NHNH? (125 pmol hydrazidových skupín) sa rozpustilo v 1,2 ml DMSO a pridal sa roztok 16,6 mg SMP (62,5 prnol) v 0,6 ml DMSO. Reakčná zmes sa miešala pri laboratórnej teplote 8 hodín. Po prečistení na kolóne PD-10 (eluent: destilovaná voda) bola stanovená <M w> a distribúcia molekulových hmotností konjugátu pomocou kvapalinovej chromatografie, množstvo maleínimidových skupín bolo stanovené modifikovanou Ellmanovou skúškou a obsah zostávajúcich hydrazidových skupín metódou TNBS. K tomuto polyméru bol naviazaný doxorubicín rovnakým spôsobom, ako bolo uvedené v príklade 1.
Zavedenie -SPI skupín do molekuly protilátky (imunoglobulínu): 15 mg protilátok (polyklonové anti-tymocytárne IgG) (0,1 pmol) sa na kolóne PD-10 previedlo do 1 ml fosfátového pufru (0,05 M NaH2PO.i/Na2HPO4; 0,1 M NaCl; 0,01 EDTA; pH 7,4). 0,67 mg 2-iminotioIánu (4 pmol) sa rozpustilo v 50 pL DMF a pridalo k roztoku intenzívne miešaných protilátok. Produkt bol po 2,5 hodinách miešania pri laboratórnej teplote izolovaný gélovou filtráciou na kolóne PD-10 (fosfátový pufer, pH 7,4). Stupeň modifikácie protilátky (imunoglobulínu) bol stanovený metódou využívajúcou reakciu sulfhydrylových skupín s Ellmanovým činidlom.
Konjugácia 60 mg polyméru poly(HPMA-co-MA-diGly-NHN = Dox-coMA-X-NHNH2-co-MA-X-NHNH-MI obsahujúceho doxorubicín, hydrazidové a maleínimidové skupiny s 20 mg modifikovaných protilátok sa uskutočnila v fosfátovom pufri pH 7,4 (pozri vyššie) pri izbovej teplote. Konečný produkt sa čistil gélovou filtráciou a charakterizoval pomocou UV spektroskopie (obsah Dox). aminokyselinovou analýzou (obsah protilátok, imunoglobulínu) a elektroforézou Phastsystem - Pharmacia LKB (prítomnosť voľného proteínu či liečiva).
Príklad 4
Príprava protilátkami (imunoglobulínom) smerovaného konjugátu II.
Polymémy prekurzor II bol modifikovaný v prvom kroku syntézy pomocou SPDP za obdobných podmienok, za akých bola uskutočnená modifikácia polyméru pomocou SMP uvedená v príklade 3
Ku 14 mg -SH skupinou modifikovaných protilátok, imunoglobulínu (pozri vyššie) obsahujúcich 0,68 pmol SH skupín rozpustených v 1,7 ml fosfátovom pufri (0,05 M NaH2PO4/Na2HPO4; 0,1 M NaCl; 0,01 EDTA; pH 7,4) sa za miešania pridal roztok 42 mg polyméru poly(HPMA-co-MA-diGlyNHN=Dox-co-M A-diGly-NHNH2-co-MA-digly-NHNH-PD (obsahujúceho
3.3 pmol pyridylditiových (PD) skupín) v 0,6 ml pufra. Reakčná zmes sa miešala 7 hod pri laboratórnej teplote. Po tomto čase boli od konjugátu gélovou filtráciou odstránené nízkomolekulárne podiely a nenaviazaný polymér, následne bol konjugát zahustený ultrafiltráciou a charakterizovaný obdobne ako je uvedené v príklade 3.
Príklad 5
Príprava protilátkami (imunoglobulínom) smerovaného konjugátu III.
Tieto konjugáty boli pripravené reakciou protilátok, do molekuly ktorých boli zavedené aldehydové skupiny miernou oxidáciou jodistanom sodným s hydrazidovými skupinami, ktoré zostali po reakcii polymérneho prekurzora II s doxorubicínom.
Príprava oxidovaných protilátok): 40 mg protilátok (polyklonové antitymocytárne IgG) sa na kolóne PD-10 previedlo do octanového pufra (0,02 M CH.íCOONa/CIHCOOH: 0,15 M NaCl; pH 5). V rovnakom pufri bol za tmy pripravený roztok 0,1 M NalOi. Roztoky protilátok a jodistanu sa zmiešali v pomere 4:1 tak, aby výsledná koncentrácia NalCU bola 0,02 mol/1 a koncentrácia protilátok bola 9 mg/ml. Reakčná zmes bola pri laboratórnej teplote v tme miešaná dve hodiny a potom sa pridalo 25 pl etylénglykolu na každý ml reakčnej zmesi. Po 20 minútach sa oxidované protilátky (imunoglobulín) čistili a izolovali kvapalinovou chromatografiou na kolóne PD-10. Koncentrácia protilátok (imunoglobulínu) v roztoku bola stanovená spektrofotometricky. Počet aldehydových skupín bol stanovený metódou využívajúcou reakciu aldehydových skupín s farbivom Lucifer Yellow CH .
Príklad prípravy vzorku konjugátu: 36,5 mg oxidovaných protilátok v 5 ml acetátového pufra (0,02 M CH3COONa/CH3COOH; 0,15 M NaCl; pH 5) sa za chladenia na 15 °C zmiešalo s roztokom 73 mg polymémeho prekurzora II poly(HPMA-co-MA-diGly-NHN=Dox-co-MA-diGly-NHNH2 s naviazaným Dox rozpusteným v 1 ml pufru. Reakčná zmes sa miešala v tme 16 hod pri 15 °C. Po 16 hodinách bolo pH reakčnej zmesi upravené 0,1 M NaOH na pH 7,2. Od konjugátu boli odstránené gélovou filtráciou nízkomolekulárne podiely a nenaviazaný polymér, následne bol konjugát zahustený a charakterizovaný obdobne ako ostatné konjugáty s protilátkami (imunoglobulínom).
Na konjugácie s polymérmi sa použil ľudský aj králičí nešpecifický imunoglobulín (IgG), polyklonové anti-tymocytové protilátky (ATG), monoklonové protilátky anti-Thy 1.2, anti-CD4, anti-CD 71, anti-BCLl, antiCD4, anti-CD8, anti-CD14 a ďalšie protilátky proti tumor-asociujúcim antigénosm (anti-TAA).
Príklad 6
In vitro uvoľňovanie doxorubicínu z polymérnych konjugátov
Hydrolytická stabilita konjugátov a rýchlosť uvoľňovania aktívneho liečiva z polyméru boli merané v modelových systémoch pri rôznych pH a teplotách. Na obr. 5 sú uvedené výsledky meraní rýchlostí uvoľňovania doxorubicínu z polymérov líšiacich sa zložením spaceru pri pH modelujúcom pH krvi (7,4) a pH modelujúcom prostredie endozómov či lyzozómov (pH 5 - 6). Pri experimentoch bola koncentrácia viazaného Dox konštantná (0,5 mmol.l _l) v 0,1 M acetátovom pufri (CH3COONa/CH3COOH, 0,05 M NaCl). Vzorky sa inkubovali v tme pri 37 °C a vo vopred daných časových intervaloch sa odoberali 0,1 ml časti vzoriek a analyzovali pomocou HPLC po extrakcii Dox z roztoku. Z výsledkov je zrejmé, že štruktúra spojky medzi liečivom a polymérnym nosičom ovplyvňuje rýchlosť uvoľňovania liečiva z nosiča, pričom rýchlosť uvoľňovania je pomerne malá pri pH krvi a viac než o rád rýchlejšia pri pH modelujúcom prostredie bunky. Ak vezmeme do úvahy, že čas zotrvania liečiva v krvnom riečisku je pomerne krátky, experiment potvrdzuje relatívnu stálosť polymérneho konjugátu v priebehu transportu a jeho schopnosť uvoľniť aktívne liečivo až po prieniku do buniek.
Príklad 7
Cytotoxická aktivita in vitro polymérnych konjugátov obsahujúcich hydrolyticky uvoľňovaný doxorubicín pri bunkách s normálnym obsahom lyzozómov (tabuľka 1)
Schopnosť polymérnych konjugátov obmedziť bunkové delenie, čiže proliferáciu cieľových buniek, je označovaná ako cytotoxická alebo cytostatická aktivita. Tato cytotoxická aktivita bola in vitro detegovaná inhibíciou inkorporácie 3H-tymidínu do jadier cieľových buniek [Ŕíhová a spol., 2000]. Inkorporácia tymidínu a aktivita konjugátov sú nepriamo úmerné. Nízka inkorporácia tymidínu znamená vysokú cytotoxickú aktivitu testovaných látok. Bunky vybraných nádorových línií (myšej T leukemickej línie EL4, myšej B bunkovej leukémie BCL1, myšieho B bunkového lymfómu 38C13, ľudského kolorektálneho karcinómu primárneho S\V 480, ľudského kolorektálneho karcinómu metastázujúceho SW 620, ľudského kolorektálneho karcinómu SW620 geneticky modifikovaného myším génom pre Thy 1.2 SW620/T) a T bunkovým mitogénom, t.j. konkanavalínom A. stimulované myšie splenocyty a ľudské periférne lymfocyty boli v dávkach 1 x 104 - 5 x 10> (v závislosti od použitých testovacích bunkových systémov) v rastovom médiu RPMI 1640 napipetované do 96-jamkových FB-tkanivových doštičiek (NUNC, Dánsko). Ďalšia kultivácia prebehla buď bez ďalšej stimulácie (všetky nádorové línie a neovplyvnené myšie a ľudské lymfocyty) alebo v prítomnosti T bunkového mitogénu konkanavalínu A, pokiaľ se jednalo o zistenie efektu na normálne intenzívne proliferujúces T lymfocyty. Koncentrácia konkanavalínu A, v ktorej boli bunky kultivované bola 1.25 pg/jamku. Ku každej experimentálnej jamke tkanivovej doštičky, obsahujúcej testované bunky v médiu bez alebo s prítomnosťou konkanavalínu A, boli pridané testované vzorky alebo voľný doxorubicín v konečných koncentráciách 0.0016 - 80 pg/ml.. Celkový objem jamky bol 250 pl. Každá koncentrácia bola paralelne testovaná pri jednej vzorke a jednej línii tri až päťkrát. Mikrotitračné tkanivové doštičky boli inkubované 24 až 72 hodín pri 37 °C v prostredí 5 % CO2. Po ukončenej kultivácii sa do každej jamky pridalo 1 pCi 3H-tymidínu. Po ďalších piatich až šiestich hodinách (v závislosti od testovacieho systému) boli bunky zozberané (zberač buniek-Tomtec) na sklenený vláknitý filter (Filtermat, Wallac), usušené a vyhodnotené na inkorporovanú rádioaktivitu (MicroBeta Trilux, Wallac). IC50 pre nesmerované konjugáty obsahujúce hydrolyticky uvoľňovaný doxorubicín sa pohybovalo od 0,01 pg doxorubicínu/ml do 1,41 pg doxorubicínu/ml v závislosti od rezistencie (citlivosti použitej cieľovej línie na terapius) a od typu konjugátu. Potvrdilo sa, že cytotoxicita je výlučnou vlastnosťou konjugátov obsahujúcich hydrolyticky uvoľňovaný doxorubicín, pretože konjugát bez liečiva nie je cytotoxický.
Testy in vitro preukázali, že a) aktivita konjugátov s hydrolyticky uvoľniteľným liečivom nezávisí od enzymatickej degradovateľnosti kovalentnej väzby medzi týmto liečivom a oligopeptidickou spojkou a že b) konjugáty, u ktorých je spojka medzi základným polymérnym reťazcom a liečivom tvorená iba ε-aminokaprónovou alebo p-aminobenzoovou kyselinou sú rovnako účinné ako konjugáty obsahujúce di- alebo tetrapeptidovú spojku.
Tabuľka 1. Porovnanie in vitro inhibičných aktivít vzoriek obsahujúcich liečivo viazané pomocou rôznych spojok; testovaná línia myšej leukémie EL4 (T bunkový lymfóm EL4).
| Vzorka | ICjo (pg DOX/ml) |
| P-GFLG-DOX (PK1) | 19,1 |
| P-GG-DOX (hydrazón) | 0,40 |
| P-GFLG-DOX (hydrazón) | 0,26 |
| P-p-aminobenzoová-DOX (hydrazón) | 0,04 |
| Ρ-ε-aminokapronová-DOX (hydrazón) | 0,08 |
| Doxorubicín (DOX) | 0,02 |
ICjo je koncentrácia liečiva spôsobujúca 50 %-nú inhibíciu proliferácie.
Príklad 8
Cytotoxická aktivita in vitro polymémych konjugátov obsahujúcich hydrolyticky uvoľňovaný doxorubicín pri bunkách s nízkým obsahom lyzozómov
Test cytotoxickej aktivity in vitro sa uskutočňoval rovnako, ako je uvedené v príklade 7. Ako cieľové bunky boli vybrané bunky erytroleukemickej línie K 562 s nízkym obsahom lyzozómov. Preukázalo sa, že konjugáty obsahujúce hydrolyticky uvoľňovaný doxorubicín sú významne cytotoxické aj pri tejto línii, pri ktorej sú len veľmi obmedzene cytotoxické konjugáty s enzymaticky uvoľňovaným doxorubicínom (tabuľka 2). Tento výsledok preukazuje, že konjugáty s hydrolyticky uvoľňovaným doxorubicínom sú účinné aj v bunkových systémoch, ktoré sú chudobné na lyzozómy.
Tabuľka 2. Porovnanie in vitro inhibičných aktivít vzoriek obsahujúcich liečivo viazané pomocou rôznych spojok; testovaná erytroleukemická línia K 562.
| Vzorka | IC50 (Pg DOX/ml) |
| P-GFLG-DOX (PK1) | 9,71 |
| P-GG-DOX (hydrazón) | 0,06 |
| Doxorubicín (DOX) | 0,28 |
IC5o je koncentrácia liečiva spôsobujúca 50 %-nú inhibíciu proliferácie.
Príklad 9
Protinádorová aktivita polymérnych konjugátov obsahujúcich hydrolyticky uvoľňovaný doxorubicín in vivo (Obr. 6)
Myši inbredného kmeňa C57BL/10 boli subkutánne transplantované T bunkovým Ivmfómom (EL4). Nádorové bunky boli injikované do dolnej polovice chrbta experimentálnych zvierat v dávke 1 x 105 buniek/myš. Deň transplantácie buniek bol označený ako deň 0. Potom boli polymérne konjugáty s hydrolyticky uvoľňovaným doxorubicínom podané intraperitoneálne buď v deň 1, 3, 5, 7 a 9 (protektívny režim), v deň 10, 12, 14, 16 a 18 alebo v deň
12. 14, 16, 18 a 20 (terapeutický režim). Denná dávka doxorubicínu bola 50 pg/myš. Konjugáty významným spôsobom potláčali rast nádoru a zvyšovali počet dlhodobo prežívajúcich experimentálnych zvierat. Zatiaľ čo polymérny konjugát bez liečiva bol celkom bez účinku a klasický, t.j. nemodifikovaný doxorubicín, mal účinok len veľmi obmedzený (maximálny čas prežitia experimentálnych zvierat bol 40 dní oproti 35 dňom pri skupine kontrolnej), podanie polymérnych konjugátov s hydrolyticky uvoľňovaným doxorubicínom umožnilo dlhodobé prežitie, t.j. viac než 80 dní v protektívnom režime pri 40 % myší, v terapeutickom režime pri 20 % myší.
Myši inbredného kmeňa Balb/c boli i.p. transplantované myšou B bunkovou leukémiou BCL1. Nádorové bunky boli injikované v dávke 5 x 105 buniek/myš. Deň transplantáce bol označený ako deň 0. Potom boli polymérne konjugáty s hydrolyticky uvoľňovaným doxorubicínom podané intravenózne v deň 11, 13 a 17 (terapeutický režim). Denná dávka doxorubicínu bola 100 pg/myš. Testované konjugáty mali výraznú protinádorovú aktivitu. Zatiaľ čo kontrolné myši prežívali maximálne 40 dní, 20 % myší liečených testovanými konjugátmi prežilo dlhšie než 100 dní a 10 % dlhšie než 140 dní.
Literatúra
R. Duncan, J.B. Lloyd, J. Kopeček, P, Rejmanová, J. Strohalm, K. Ulbrich, B. Ŕíhová, V. Chytrý: Synthetic Polymeric Drugs. Czech. PV 0095/85, Austrália 589587, Canada 130053, Denmark 164485, Európe 0187547, US 5,037,883, Japan 000137/86
K. Ulbrich. V. Šubr, J. Strohalm, D. Plocová, M. Jelínková, B. Ŕíhová, Polymeric Drugs Based on Conjugates of Synthetic and Natural Macromolecules L Synthesis and Physico-chemical Characterisation. J. Controlled Rel. 64. 63-79 (2000)
Vasey P.A., Kaye S.B.. Morrison R., Twelves C., Wilson P., Duncan R., Thomson A.H., Murrav L.S.. Hilditch T.E., Murray T., Burtles S., Fraier D., Frigerio E. Cassidy, J.: Phase I clinical and pharmacokinetic study of PK1 [N(2-hydroxypropyl)metacrylamide copolymer doxorubidin]: first member of a new class of chemotherapeutic agents - drug polymér conjugates, Clinical Cancer Research 5, 83-94 (1999)
Julyan, P.J.. Seymour, L.W., Ferry, D.R., Daryani, S., Boivin, CH. M., Doran, J., Dávid, M., Anderson, D., Christodoulou, CH., Young, A.M., Hesslewood,
S. , Kerr, D.J.: Preliminary clinical study of the distribution of HPMA copolymers bearing doxorubicin and galactosamine, J.Control. Rel. 57, 281-290 (1999)
Thomson A.H., Vasey P.A.. Murray L.S., Cassidy J., Fraier D., Frigerio E., Twleves C.: Population pharmacokinetics in phase I drug development: a phase I study of PK1 in patients with solid tumors, Br. J. Cancer. 81, 99-107 (1999)
J. Kopeček, P. Kopečková, T. Minko, Z. Lu, HPMA Copolymer-Anticancer Drug Conjugates: Design, Activity, and Mechanism of Action. Európ. J. Pharm. Biopharm. 50, 61 - 81 (2000)
F. Kratz, U. Beyer. H. T. Schutte, Drug-Polymér Conjugates Containing AcidCleavable Bonds. Critical Reviews in Therapeutic Drug Carriers Systems. 16(3). 245-288 (1999)
B. Ŕíhová. T. Etrych, M. Pechar, M. Jciínková, M. Šťastný, O. Hovorka, M. Kovár, K. Ulbrich, Doxorubicin Bound to a PIPMA Copolymesr Carrier Through Hydrazone Bond is Effective also in a Cancer Celí Line with a Limited Content of Lysosomes. J. Controlled Release 74, 225-232 (2001)
Tomáš Etrych, Markéta Jelínková, Blanka Ríhová, Karel Ulbrich, New HPMA copolymers containing doxorubicin bound via pH sensitive linkage. Synthesis, in vitro and in vivo biological properties. J. Controlled Rel. 73, 89-102 (2001)
Claims (10)
1. Konjugáty pozostávajúce z polymérneho nosiča tvoreného 30 až 3000 monomérnymi jednotkami spojenými do polymérneho reťazca, zložené z
a. 60 až 99 % jednotiek /V-(2-hydroxypropyl)metakrylamidu
b. 1 až 25 % jednotiek metakryloylovaných hydrazónov a-aminokyselín. ε-aminokyselín, aromatických aminokyselín alebo oligopeptidov zakončených molekulou antracyklínového kancerostatika
c. 0,5 až 15 % jednotiek metakryloylovaných a-aminokyselín, ε-aminokyselín, aromatických aminokyselín alebo oligopeptidov či ich sodných solí a prípadne
d. 0,5 až 10 % jednotiek metakryloylovaných hydrazidov a-aminokyselín, ε-aminokyselín, aromatických aminokyselín alebo oligopeptidov.
2. Konjugáty podľa nároku 1, ktoré ďalej obsahujú 0,5 až 5 % metakryloylovaných a-aminokyselín, ε-aminokyselín alebo oligopeptidov zakončených molekulou imunoglobulínu alebo špecifickej monoklonovej alebo polyklonovej protilátky.
3. Konjugáty podľa nároku 1 alebo 2, ktoré ďalej obsahujú 0,1 až 5 % jednotiek enzymaticky odbúrateľných metakryloylovaných oligopeptidov prepojených alkyléndiamínmi, ktoré tvoria bivalentnú spojku medzi jednotlivými polymérnymi reťazcami, čím vytvárajú zosietenú štruktúru konjugátu.
4. Konjugáty podľa nároku 1, 2 alebo 3, kde antracyklínovým kancerostatikom je doxorubicín.
5. Konjugát podľa nároku 1 všeobecného vzorca pričom jednotlivé štruktúrne jednotky sú v reťazci usporiadané náhodne a kde X predstavuje vhodnú spojku tvorenú aminokyselinovým či oligopeptidovým zvyškom vzniknutým z a-aminokyselín, ω-aminokyselín alebo oligopeptidov a x nadobúda hodnoty 20 až 3000, a je 1 až 750, b aj c sú 1 až 450.
6. Konjugát podľa nároku 2 všeobecného vzorca
CH,
I 3
CH,-C2 I c—o
CH, ch2-cC=0
X
NH
NH2 je acylovaný zvyšok a-aminokyseliny, ε-aminokyseliny, aromatickej kyseliny alebo oligopeptidu
X
COOH je v prípade protilátkou smerovaného konjugátu jedna z nasledujúcich štruktúr je v prípade vysokomolekulárneho polyméru biodegradovateľné oligopeptidová spojka obsahujúca sekvenciu GlyPheĽeuGIy, GlyPheGly, GlyLeuGly a pod. a pripájajúca ďalšie polyméme reťazce kde X, x, a. b a c majú hore uvedený význam, d nadobúda hodnoty 1 až 150. pričom protilátka je zvolená zo skupiny zahŕňajúcej γ-globulín na
i.v. aplikácie, autológne protilátky, protilátky anti-17-ΙΑ, anti-CA 15-3 a ďalšie.
7. Konjugáty podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde sú viazané aminokyseliny alebo oligopetidy zvolené zo skupiny zahŕňajúcej Gly, Ala, Leu, GlyGly, GlyLeuGly, GlyPheGly, GlyPheLeuGly, β-alanín, kyselinu γ-aminomaslovú, kyselinu e-aminokaprónovú (AKap), kyselinu p-aminobenzoovú (AB).
8. Konjugáty podľa nároku 2 alebo 6, kde sú viazané protilátky zvolené zo skupiny zahŕňajúcej γ-globulŕn pre i.v. aplikácie, autológne protilátky, protilátky anti-17-ΙΑ, anti-CA 15-3 a ďalšie nádorovo špecifické a nádorovo asociované protilátky.
9. Konjugáty podľa nároku 3, kde sú bivalentné jednotky spájajúce lineárne reťazce volené z radu GlyPheLeuGly, GlyLeuGly, GlyPheGly, GlyLeuPheGly.
10. Farmaceutická kompozícia na liečbu nádorových ochorení, vyznačujúca sa tým, že ako účinnú zložku obsahuje konjugát podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov.
Farmaceutická kompozícia podľa nároku 10, určená na liečbu nádorov, ako je nádor prsníka alebo kolorektálny nádor.
1/6
Obr. 1
CH
NH.. HCI
2/6
Obr. 2
NH-NH2.H2O
NH-NH2 COOH vysokomolekulárny polymérny prekurzor + Dox metanol, tma
V ch3cooh
A hydrolýza vodný roztok vysokomolekulárny konjugát
3/6
Obr. 3
CH, ?H3
CH—OH ch2—cch2-cC=O
I x
c=o
Jd
NH
I nh2
X
COOH a-aminokyselina, ε-aminokyselina X = aromatická aminokyselina, oligopeptid θ je v prípade vysokomolekulárneho polyméru biodegradovateľná oligopeptidová spojka obsahujúca sekvenciu GlyPheLeuGIy, GlyPheGly, GlyLeuGly a pod. a pripájajúca ďalšie polyméme reťazce
Μ6
Obr. 4
Štruktúra polymérnych prekurzorov
CH,
I c=o
I
NH
CH,
I
CH—OH I
CH, + nh2— nh2.h2o
NO, polymérny prekurzor 1
X= a-aminokyselina, ε-aminokyselina aromatická aminokyselina, oligopeptid
polymérny prekurzor 2
5/6
Obr. 5
Gly
Gly-Gly
-ώ-Gly-LeU'Gly
O Gly -Phe-Leu-G(y •-p-aminobenzoová kyselina
O-ε-aminokaprónová kyselina β-alanín 20 čas (h) 30
-♦--Gly
25 —*—G|y-G|y &“— Gly -Leu-Gly
2Q -Gly ’Phe-Leu-Gly
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20014653A CZ293787B6 (cs) | 2001-12-20 | 2001-12-20 | pH senzitivní polymerní konjugáty antracyklinového kancerostatika pro cílenou terapii |
| PCT/CZ2002/000070 WO2003053473A2 (en) | 2001-12-20 | 2002-12-20 | Ph-sensitive polymeric conjugates of an anthracycline drug |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK2912004A3 true SK2912004A3 (en) | 2004-12-01 |
Family
ID=5473644
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK291-2004A SK2912004A3 (en) | 2001-12-20 | 2002-12-20 | pH-sensitive polymeric conjugates of an anthracycline cancerostatic drug for targeted therapy |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7919076B2 (sk) |
| EP (2) | EP1782833A3 (sk) |
| JP (1) | JP4718117B2 (sk) |
| KR (1) | KR20040076874A (sk) |
| AT (1) | ATE439864T1 (sk) |
| AU (1) | AU2002366715A1 (sk) |
| CA (1) | CA2470976A1 (sk) |
| CZ (1) | CZ293787B6 (sk) |
| DE (1) | DE60233434D1 (sk) |
| DK (1) | DK1463529T5 (sk) |
| EA (1) | EA007353B1 (sk) |
| ES (1) | ES2331303T3 (sk) |
| HU (1) | HUP0500541A3 (sk) |
| PL (1) | PL216518B1 (sk) |
| PT (1) | PT1463529E (sk) |
| SI (1) | SI1463529T1 (sk) |
| SK (1) | SK2912004A3 (sk) |
| WO (1) | WO2003053473A2 (sk) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ294996B6 (cs) * | 2003-07-16 | 2005-04-13 | Ústav Makromolekulární Chemie Av Čr | Reaktivní polymery a kopolymery na bázi N-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu, způsob jejich přípravy a jejich použití pro syntézu polymerních léčiv, pro modifikaci biologicky aktivních proteinů a přípravu systémů pro dopravu genů |
| EP1877097B1 (en) | 2004-08-11 | 2012-06-20 | Arqule, Inc. | Aminoacid conjugates of beta-lapachone for tumor targeting |
| US8614228B2 (en) | 2004-08-11 | 2013-12-24 | Arqule, Inc. | Quinone prodrug compositions and methods of use |
| CZ297827B6 (cs) * | 2005-09-05 | 2007-04-04 | Zentiva, A. S. | Zpusob prípravy polymerních konjugátu doxorubicinu s pH-rízeným uvolnováním léciva |
| CZ2006207A3 (cs) * | 2006-03-28 | 2008-01-16 | Zentiva, A. S. | Micelární nosiče léčiv s protinádorovou aktivitou |
| CN103217523B (zh) * | 2006-08-09 | 2015-05-06 | 住友电木株式会社 | 糖链捕获物及其用途 |
| CZ2006505A3 (cs) * | 2006-08-09 | 2008-04-09 | Zentiva, A. S. | Polymerní konjugáty doxorubicinu s pH-rízeným uvolnováním léciva a zpusob jejich prípravy |
| CZ2006592A3 (cs) | 2006-09-18 | 2008-03-19 | Zentiva, A. S. | Polymerní lécivo a zpusob jeho výroby |
| ES2532656T3 (es) | 2007-04-30 | 2015-03-30 | Arqule, Inc. | Compuestos de hidroxi sulfonato de quinona y sus usos |
| CZ2008661A3 (cs) * | 2008-10-23 | 2009-12-30 | Zentiva, A. S | Polymerní prípravek se synergickým úcinkem pri lécbe nádorových onemocnení |
| CZ302830B6 (cs) * | 2009-12-15 | 2011-11-30 | Ústav makromolekulární chemie AV CR, v.v.i. | Vysokomolekulární polymerní nosice léciv odvozené od dendrimeru a jejich konjugáty s lécivy pro lécbu zejména pevných nádoru |
| EP3069715A1 (en) | 2015-03-20 | 2016-09-21 | Salmon Pharma GmbH | Immediate release dosage forms of Atomoxetine |
| WO2018071767A1 (en) * | 2016-10-14 | 2018-04-19 | University Of Utah Research Foundation | Antibody-polymer-drug conjugates |
| CZ309828B6 (cs) * | 2019-10-09 | 2023-11-15 | I.T.A.-Intertact S.R.O. | Fluorescenční polymer, fluorescenční sonda a konjugační sada pro pokročilé funkční analýzy buněk v hematologii, imunologii a mikrobiologii, způsob jejich přípravy a jejich použití |
| CA3150503A1 (en) * | 2019-10-30 | 2021-05-06 | Cis Pharma Ag | BIOCOMPATIBLE POLYMERIC MEDICATION CARRIES FOR THE DELIVERY OF ACTIVE AGENTS |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8500209D0 (en) * | 1985-01-04 | 1985-02-13 | Ceskoslovenska Akademie Ved | Synthetic polymeric drugs |
-
2001
- 2001-12-20 CZ CZ20014653A patent/CZ293787B6/cs not_active IP Right Cessation
-
2002
- 2002-12-20 SK SK291-2004A patent/SK2912004A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2002-12-20 EP EP06025316A patent/EP1782833A3/en not_active Withdrawn
- 2002-12-20 EA EA200400802A patent/EA007353B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2002-12-20 PT PT02805243T patent/PT1463529E/pt unknown
- 2002-12-20 HU HU0500541A patent/HUP0500541A3/hu unknown
- 2002-12-20 DE DE60233434T patent/DE60233434D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-12-20 SI SI200230855T patent/SI1463529T1/sl unknown
- 2002-12-20 ES ES02805243T patent/ES2331303T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-12-20 JP JP2003554229A patent/JP4718117B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2002-12-20 WO PCT/CZ2002/000070 patent/WO2003053473A2/en active Application Filing
- 2002-12-20 CA CA002470976A patent/CA2470976A1/en not_active Abandoned
- 2002-12-20 EP EP02805243A patent/EP1463529B9/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-12-20 DK DK02805243.9T patent/DK1463529T5/da active
- 2002-12-20 AT AT02805243T patent/ATE439864T1/de active
- 2002-12-20 US US10/499,422 patent/US7919076B2/en active Active
- 2002-12-20 AU AU2002366715A patent/AU2002366715A1/en not_active Abandoned
- 2002-12-20 PL PL370719A patent/PL216518B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2002-12-20 KR KR10-2004-7009872A patent/KR20040076874A/ko not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2003053473A2 (en) | 2003-07-03 |
| CZ293787B6 (cs) | 2004-07-14 |
| AU2002366715A1 (en) | 2003-07-09 |
| HUP0500541A3 (en) | 2011-08-29 |
| PT1463529E (pt) | 2009-11-03 |
| ES2331303T9 (es) | 2011-08-18 |
| EP1463529A2 (en) | 2004-10-06 |
| ES2331303T3 (es) | 2009-12-29 |
| US7919076B2 (en) | 2011-04-05 |
| PL216518B1 (pl) | 2014-04-30 |
| EP1782833A3 (en) | 2008-03-19 |
| PL370719A1 (en) | 2005-05-30 |
| EA200400802A1 (ru) | 2005-02-24 |
| HUP0500541A2 (hu) | 2005-09-28 |
| DE60233434D1 (de) | 2009-10-01 |
| EP1463529B1 (en) | 2009-08-19 |
| ATE439864T1 (de) | 2009-09-15 |
| CA2470976A1 (en) | 2003-07-03 |
| CZ20014653A3 (cs) | 2003-08-13 |
| KR20040076874A (ko) | 2004-09-03 |
| EA007353B1 (ru) | 2006-10-27 |
| AU2002366715A8 (en) | 2003-07-09 |
| JP2005519044A (ja) | 2005-06-30 |
| SI1463529T1 (sl) | 2010-01-29 |
| DK1463529T3 (da) | 2009-10-19 |
| EP1782833A2 (en) | 2007-05-09 |
| WO2003053473A3 (en) | 2004-04-29 |
| JP4718117B2 (ja) | 2011-07-06 |
| EP1463529B9 (en) | 2011-03-23 |
| DK1463529T5 (da) | 2011-06-27 |
| US20060057099A1 (en) | 2006-03-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ulbrich et al. | Antibody-targeted polymer–doxorubicin conjugates with pH-controlled activation | |
| Etrych et al. | New HPMA copolymers containing doxorubicin bound via pH-sensitive linkage: synthesis and preliminary in vitro and in vivo biological properties | |
| Ulbrich et al. | HPMA copolymers with pH-controlled release of doxorubicin: in vitro cytotoxicity and in vivo antitumor activity | |
| Ulbrich et al. | Structural and chemical aspects of HPMA copolymers as drug carriers | |
| US8603990B2 (en) | Grafted macromolecular conjugates of doxorubicin with anticancer activity and method of their preparation | |
| Lu et al. | Design of novel bioconjugates for targeted drug delivery | |
| EP1463529B1 (en) | Ph-sensitive polymeric conjugates of an anthracycline cancerostatic drug for targeted therapy | |
| US20110014151A1 (en) | Macromolecule conjugate | |
| Etrych et al. | Star-shaped immunoglobulin-containing HPMA-based conjugates with doxorubicin for cancer therapy | |
| ES2458841T3 (es) | Portadores de fármacos de polímero de alto peso molecular dendrítico y sus conjugados con fármacos especialmente para el tratamiento de tumores sólidos | |
| CZ303072B6 (cs) | Polymerní konjugáty paclitaxelu a docetaxelu s pH rízeným uvolnováním kancerostatika | |
| CZ2006207A3 (cs) | Micelární nosiče léčiv s protinádorovou aktivitou | |
| Pechar et al. | Poly (ethylene glycol)-doxorubicin conjugates with pH-controlled activation | |
| Chytil et al. | Structural design and synthesis of polymer prodrugs | |
| Hudecz et al. | Drug targeting by macromolecules without recognition unit? | |
| CZ2003605A3 (en) | pH sensitive polymeric conjugates of anthracycline cancerostatic for targeted therapy | |
| Rihova | Antibody-targeted HPMA copolymer-bound anthracycline antibiotics | |
| Etrych et al. | Micellar and Antibody‐Targeted Polymer Therapeutics | |
| Hoes et al. | Design of soluble conjugates of biodegradable polymeric carriers and adriamycin | |
| SK9785A3 (en) | Polymeric remedy and preparation method thereof | |
| Rihova et al. | HPMA-Anticancer Drug Conjugates | |
| Ulbrich et al. | Synthetic polymer-drug conjugates for human therapy | |
| CZ22175U1 (cs) | Polymerní konjugáty paclitaxelu a docetaxelu s pH řízeným uvolňováním kancerostatika |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FC9A | Refused patent application |