CZ2008661A3 - Polymerní prípravek se synergickým úcinkem pri lécbe nádorových onemocnení - Google Patents

Polymerní prípravek se synergickým úcinkem pri lécbe nádorových onemocnení Download PDF

Info

Publication number
CZ2008661A3
CZ2008661A3 CZ20080661A CZ2008661A CZ2008661A3 CZ 2008661 A3 CZ2008661 A3 CZ 2008661A3 CZ 20080661 A CZ20080661 A CZ 20080661A CZ 2008661 A CZ2008661 A CZ 2008661A CZ 2008661 A3 CZ2008661 A3 CZ 2008661A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
doxorubicin
units
amino acid
oligopeptide
methacryloylated
Prior art date
Application number
CZ20080661A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ301288B6 (cs
Inventor
Etrych@Tomáš
Ulbrich@Karel
Hovorka@Ondrej
Ríhová@Blanka
Original Assignee
Zentiva, A. S
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zentiva, A. S filed Critical Zentiva, A. S
Priority to CZ20080661A priority Critical patent/CZ2008661A3/cs
Priority to PCT/CZ2009/000115 priority patent/WO2010045896A2/en
Priority to EP09759869.2A priority patent/EP2349343B1/en
Priority to ES09759869T priority patent/ES2433577T3/es
Publication of CZ301288B6 publication Critical patent/CZ301288B6/cs
Publication of CZ2008661A3 publication Critical patent/CZ2008661A3/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6883—Polymer-drug antibody conjugates, e.g. mitomycin-dextran-Ab; DNA-polylysine-antibody complex or conjugate used for therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/58—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. poly[meth]acrylate, polyacrylamide, polystyrene, polyvinylpyrrolidone, polyvinylalcohol or polystyrene sulfonic acid resin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Smícháním dvou polymerních konjugátu doxorubicinu, lišících se mechanizmem pusobení zániku nádorových bunek, ve vhodném pomeru, je možné docílit synergie v protinádorovém úcinku a takto vzniklý prípravek je mimorádne úcinným prostredkem pro lécbu nádorových onemocnení.

Description

Polymerní přípravek se synergickým účinkem při léčbě nádorových onemocnění
Oblast techniky
Vynález se týká složení polymemího přípravku sestávajícího ze směsi dvou polymemích léčiv (konjugátů doxorubicinu) umožňujícího vysoce efektivní léčbu nádorových onemocnění. Použití polymemího přípravku je zaměřeno na cílenou terapii nádorových onemocnění, především solidních nádorů, v humánní medicíně.
Dosavadní stav techniky
Chemoterapie nádorových onemocnění se zaměřuje na použití léčiv s minimalizovanými vedlejšími účinky na zdravé tkáně a s maximálně specifickým účinkem na nádorovou tkáň a nebo dokonce na jednotlivé nádorové buňky. Použití polymemích nosičů při přípravě nových generací kancerostatik nabízí jak možnost dosažení cílené dopravy kancerostatika do nádorové tkáně, tak i řízené aktivace na nosič vázaného léčiva v místě požadovaného účinku, tedy v nádorové tkáni nebo dokonce i uvnitř nádorové buňky. Bylo ukázáno, že vhodná molekulová hmotnost polymemího nosiče může zajistit přednostní ukládání polymemího léčiva v nádorové tkáni celé řady pevných nádorů (tzv. EPR efekt) [Maeda a kol. 2000]. Uvolnění cytostatika z polymemího nosiče může být řešeno prostřednictvím biodegradovatelné spojky, použité k vazbě léčiva na polymer. K degradaci a tedy uvolnění léčiva může dojít buď enzymatickou a nebo chemickou hydrolýzou.
Významnou skupinu takovýchto léčiv tvoří polymerní léčiva připravená na bázi kopolymerů V-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu (HPMA). Byla vyvinuta řada polymemích kancerostatik připravených na bázi kopolymerů N-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu (HPMA) umožňujících jak pasivní [Kopeček a kol. 2000, Říhová a kol. 2001, Lammers a kol. 2005 a 2006, Kissel a kol. 2001, Ulbrich a kol. 2000], tak i aktivní [Říhová a kol. 2000, Jelínková a kol. 2003, Sírová a kol. 2007, Ulbrich a kol. 2004,] směrování takového kancerostatika k nádoru. Prvním takovým polymemím kancerostatikem umožňujícím pasivní směrování kancerostatika do pevných nádorů, které bylo klinicky testováno, byl konjugát HPMA kopolymerů s doxorubicinem (DOX) nazvaný PK1 [Duncan a kol. 1985, Vasey a kol. 1999, Julian a kol, 1999]. V tomto léčivu byl DOX vázán na polymerní nosič pomocí oligopeptidové sekvence degradovatelné v biologickém prostředí lysosomálními enzymy. Nedávno bylo prokázáno [Hovorka a kol. 2002], že takové polymerní léčivo proniká velmi rychle do nádorových buněk, váže se na membrány buněčných organel jako je endoplasmatické retikulum, Golgiho aparát, lysozomy a endosomy a působí zánik buňky, ke kterému převážně dochází díky nekrotickým změnám v buňce. Ačkoli byl prokázán významný protinádorový účinek takového léčiva u pacientů s různými typy nádorů při současném snížení vedlejší toxicity [Říhová a kol. 2003a, 2003b a 2005], léčebný účinek nebyl tak přesvědčivý, aby došlo ke komerčnímu využití tohoto léčiva.
V roce 1985 bylo patentováno strukturně velmi podobné léčivo nesoucí však ve své struktuře jednotky umožňující cílené směrování polymemího kancerostatika k membránovým receptorům nádorových buněk [Duncan a kol. 1985]. K tomuto směrování byly využity některé aminocukry, hormony, ale především protilátky. Protinádorový účinek konjugátu HPMA kopolymeru, doxorubicinu a protilátky Intraglobinu anebo Endobulinu byl rovněž klinicky ověřen [Říhová a kol.2003, 2005]. In vivo pokusy u myší ukázaly vysokou protinádorovou aktivitu i dalších konjugátů směrovaných monoklonálními protilátkami. Ve všech případech byl DOX vázán na polymerní nosič přes enzymaticky štěpitelnou oligopeptidovou sekvenci. Přehled dosud dosažených výsledků v této oblasti je velmi dobře zpracován v monografii G.S. Kwona a práci J. Kopečka a spol. [Kopeček a kol. 2000, Kwon 2005] a dalších [Kim 2003],
V poslední době byly publikovány studie o působení polymemích léčiv, ve kterých bylo kancerostatikum doxorubicin navázáno na polymerní nosič, připravený na bázi kopolymerů HPMA, prostřednictvím hydrolyticky nestálé hydrazonové vazby (HYDRAZON) [Etrych a kol. 2001 a 2002, Říhová a kol. 2001, Ulbrich a kol. 2003, 2004] a tyto látky byly patentovány v několika patentových přihláškách [Ulbrich a kol. CZ 293886, Etrych a kol. PV z r. 2005 a 2006, Chytil a kol. PV zr. 2006]. Takováto léčiva vykazovala podstatné snížení vedlejších, především toxických účinků na zdravý organizmus za současného výrazného zvýšení protinádorového účinku ve srovnání s běžně užívanými cytostatiky [Říhová a kol. 2001, Kovář a kol. 2004, Hovorka a kol. 2002] i ve srovnání skonjugátem PK1, a to jak v nesměřované formě, tak i ve formě směrované protilátkou. Bylo ukázáno, že v případě HYDRAZONU je mechanizmus účinku polymemího kancerostatika odlišný od účinku konjugátů typu PK1 a k zániku nádorových buněk dochází především v důsledku apoptózy [Hovorka a kol. 2002, Kovář a kol. 2004, Kovář a kol. 2007,].
Předmětem tohoto vynálezu je přípravek složený z obou typů výše uvedených polymemích léčiv lišících se mechanizmem účinku na nádorové buňky smíšených v poměrech vedoucích k synergickému efektu obou typů léčiv a tedy k mimořádně významnému proti nádorovému efektu při velmi nízké nespecifické toxicitě léčiva. Dalším významným efektem doprovázejícím léčbu přípravkem je vyvolání autostimulačního protinádorového efektu.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je přípravek složený ze dvou komponent - polymemích konjugátů doxorubicinu, určený k léčbě nádorových onemocnění, mající významnou cytotoxickou protinádorovou aktivitu a současně i autostimulační protinádorový účinek.
První komponentou tvořící přípravek je kopolymer ΗΡΜΑ (PK1), kde podstata spočívá v tom, že DOX je připojen k polymemímu nosiči enzymaticky štěpitelnou oligopeptidovou GlyPheLeuGly sekvencí. Polymerní řetězec je tvořen 50 - 1000 monomemími jednotkami sestávajícími z 80 - 99 % (mol%) z jednotek A-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu (ΗΡΜΑ), 1 -
- 5 mol% methakryloylovaného oligopeptidu (GlyPheLeuGly) zakončeného amidickou vazbou navázaného doxorubicinu, 0 - 10 mol% methakryloylovaného oligopeptidu (GlyPheLeuGly) zakončeného karboxylovou skupinou, 0-10 mol% methakryloylovaného oligopeptidu (GlyPheLeuGly) zakončeného 2-hydroxypropylamidovou skupinou, případně 0,5 -
- 10 mol% jednotek methakryloylovaného oligopeptidu (GlyPheLeuGly) zakončených molekulou lidské nespecifické (Hulg, Endobulin, Intraglobin) nebo monoklonální protilátky (Erbitux, Herceptin).
Druhou komponentou je kopolymer HPMA (HYDRAZON, H), kde podstata spočívá v tom, že DOX je připojen k polymemímu nosiči prostřednictvím spaceru obsahujícího pH-senzitivní hydrolyticky labilní hydrazonovou vazbu. Kopolymer sestává z 30 - 3500 monomemích jednotek spojených do lineárního nebo větveného polymemího řetězce tvořeného z 60 až 98,5 % jednotkami HPMA a dále obsahuje 1 až 20 % jednotek methakryloylovaných hydrazonů a~ aminokyselin, ε-aminokyselin, aromatických aminokyselin nebo oligopeptidů zakončených _ molekulou doxorubicinu, 0,5 až 15 % jednotek hydrazidů methakryloylovaných hydrazonů aaminokyselin, ε-aminokyselin, aromatických aminokyselin nebo oligopeptidů, případně jejich sodných solí. Konjugát může mít případně navázáno 0,5 až 5 % jednotek methakryloylovaných a-aminokyselin, ε-aminokyselin, aromatických aminokyselin nebo oligopeptidů zakončených molekulou imunoglobulinu nebo specifické monoklonální protilátky.
Výhodně může být přípravek podle vynálezu složen ze dvou komponent, z nichž první lze znázornit vzorcem I
I kde x, y, v a z nabývá hodnot x = 40 až 990; y = 1 až 50; v = 0 až 100 a z = 0 až 100.
Druhou komponentu lze znázornit vzorcem II:
II kde parametry x, a, b, c nabývají hodnot x = 20 až 3000; jednotek A, a = 1 až 700; jednotek B, b - 1 až 450 a jednotek C, c = 1 až 450; X představuje spojku tvořenou a-aminokyselinou, ε-aminokyselinou, aromatickou aminokyselinou nebo oligopeptidem, případně ve formě jejich sodných solí.
Pro srovnání s předmětným vynálezem druhou komponentou systému může být i polymemí miceia dle CZ PV 2006-207 [Chytil 2006]. Schéma polymemí micely lze znázornit vzorcem III
Hydrofobní molekula Léčivo - doxorubicin Polymemí řetězec
III
Hydrofílní povrch této miceiy je tvořen kopolymerem HPMA typu I nebo II. Hydrofobní součástí jsou pak alifatické nebo cyklické uhlovodíky nebo jejich deriváty.
K hlavnímu řetězci HPMA u obou typů komponent mohou být připojeny postranní řetězce. Tento roubovaný kopolymer je blíže popsán v přihlášce CZ PV 2006-592 [Etrych 2006] Spojení mezi postranním a hlavním řetězcem je uskutečněno v nádorové buňce odbouratelnou spojkou.
Ať již micelámí uspořádání nebo uspořádání v roubovaném kopolymeru umožní lepší průnik konjugátu do nádorové tkáně pevných nádorů výše popsaným EPR efektem. Oba typy konjugátu se současně s uvolněním účinné látky rozpadnou na nižší polymerní jednotky, které jsou pak z těla snadno vyloučeny. Blíže jsou oba efekty popsány v příslušných přihláškách CZ PV 2006-207 a CZ PV 2006-592.
Přípravek se podle tohoto vynálezu vyznačuje tím, že jednotlivé komponenty (polymerní konjugáty) jsou v přípravku smíchány tak, aby byl výsledný poměr hmotnosti doxorubicinu vázaného amidíckou vazbou (PK) a hydrazonovou vazbou (H) v poměru PK/H od 1 : 3 až do poměru 3 : 1, s výhodou pak v poměru 1 : 2 (přepočteno na poměr množství léčiva v jednotlivých složkách systému).
Přehled obrázků na výkresech:
Obr. 1 znázorňuje přežití myší kmene B/6 s inokulovaným T-buněčným lymfomem EL 4 (s.c.) léčených jednou dávkou 15 mg DOX ekv/kg přípravku (hmotnostní poměr léčiva v PKl/H 1:2), konjugátu PK1 a konjugátu Hydrazon podaných injekčně (i.v.) 8. den po inokulaci nádorových buněk.
Obr. 2 znázorňuje přežití myší kmene C57BL/6 s s.c. inokulovaným T-buněčným lymfomem EL 4 léčených jednou dávkou 10 mg DOX ekv/kg přípravku podaného injekčně (i.v.) 8. den po inokulaci nádorových buněk,
Obr. 3 znázorňuje přežití myší kmene C57BL6 s s.c. inokulovaným T-buněčným lymfomem EL 4 léčených jednou dávkou 5 nebo 7,5 mg DOX ekv/kg přípravku podaného injekčně (i.v.) 9 den po inokulaci nádorových buněk.
Obr. 4 znázorňuje přežití myší kmene C57BL/6, vyléčených z myšího T-buněčného lymfomu EL 4 podáním přípravku dle příkladu 1, inokulovaných letální dávkou stejného nádoru a ponechaných bez léčby.
Příklady provedení vynálezu:
V příkladech byly použity výše popsané komponenty s označením PK1 a Hydrazon s touto specifikací:
PK1 se skládala z 95,2 mol% (x = 0,952) jednotek N-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu (HPMA), 1,9 mol% methakryloylovaného oligopeptidu (GlyPheLeuGly) zakončeného amidickou vazbou navázaného doxorubicinu (vzorec I) (y = 0,019), 2,9 mol% (z = 0,029) methakryloylovaného oligopeptidu (GlyPheLeuGly) zakončeného 2-hydroxypropylamidovou skupinou (vzorec III). Obsah karboxylů byl minimální (v-~0) a jeho obsah byl v mezích přesnosti měření.
Hydrazon byl tvořen 94,2 mol% (x = 0,942) jednotkami HPMA a dále obsahuje 3,8 mol% (a = 0,038) jednotek methakryloylovaného hydrazonu 6-aminohexanove kyseliny zakončených molekulou doxorubicinu a 2 mol% (b = 0,02) jednotek hydrazidu methakryloylované 6aminohexanové kyseliny.
Obsah jednotek s karboxylem (c) byl opět v mezích chyby měření.
Příklad 1
Samicím kmene C57BL/6 bylo subkutánně inokulováno lxlO5 buněk myšího T-buněčného lymfomu EL 4. Po 8 dnech inkubace, kdy byl nádor hmatatelný (o rozměru 120 - 150 mm3), byl zvířatům intravenózně a v jedné dávce podán roztok přípravku o poměru hmotnostního obsahu doxorubicinu v konjugátech PK1 a Hydrazon PK/H 1:2, dále roztok konjugátu PK1 a roztok Hydrazonu v 0,2 ml fyziologického roztoku tak, aby konečná koncentrace doxorubicinu vždy odpovídala dávce 15 mg DOX ekv/kg. Jako kontrola byl použit fyziologický roztok (0,2 ml). Přípravek byl složen z Hydrazonu (Mw = 34,7 kDa, obsah volných hydrazidových skupin 2 % mol., obsahu DOX 13,5 % hmot.) a konjugátu PK1 (Mw = 25 kDa, obsah GFLG sekvencí
4,9 % mol. a obsah DOX 6,6 % hmot.). Byl sledován růst nádoru, váha myší a přežití zvířat. Na rozdíl od kontrolních myší, které uhynuly mezi 24 až 31 dnem, u léčených myší došlo k inhibici růstu nádoru, nej výraznějšímu po podání přídavku. Do 73. dne nebyl nádor u žádného z přežívajících zvířat léčených přípravkem (7 dlouhodobě přežívajících myší z 8 léčených) f detekován. Účinnost léčby samotnými konjugáty PK1 a nebo Hydrazonem byla významně nižší, což se projevilo jak méně výraznou inhibici růstu nádoru, tak i menším počtem přežívajících zvířat (3 přežívající z 8 léčených), viz Obr 1. Vedlejší toxicita projevující se snížením váhy nebyla pozorována u žádného z konjugátů ani u přípravku.
Příklad 2
Samicím kmene C57BL/6 bylo subkutánně inokulováno lxlO5 buněk myšího T-buněcného lymfomu EL 4. Po 8 dnech inkubace, kdy byl nádor hmatatelný o rozměru 100 ~ 150 mm3, byl zvířatům intravenózně v jedné dávce podán roztok přípravku o třech různých složeních (o různém poměru PK1 a Hydrazonu smíchaných tak, aby byl výsledný poměr léčiva v přípravku - PK/H v poměrech 2:1, 1:1 a 1:2) v 0,2 ml fyziologického roztoku tak, aby konečná koncentrace vždy odpovídala celkové dávce 10 mg DOX ekv/kg. Přípravek byl složen z Hydrazonu (Mw = 34,7 kDa, obsah volných hydrazidových skupin 2 % mol., obsahu DOX
13,5 % hmot.) a konjugátu PK1 (Mw = 25 kDa, obsah GFLG sekvencí 4,9 % mol. a obsah DOX 6,6 % hmot.). Na rozdíl od kontrolních myší, které uhynuly mezi 24 až 35 dnem, u léčených myší došlo k výrazné inhibici růstu nádoru a k vyléčení myší s účinností závisející na složení přípravku. Při složení přípravku o PK/H 1:1 dlouhodobě přežilo 7 z 8 pokusných zvířat. Při složení PK1/H 1:2 dlouhodobě přežily 4 myši ze 4 podobně jako při poměru PK/H 2:1. Při této nižší dávce není možné ve stejném režimu léčby vyléčit konjugátem PK1 žádné zvíře, ke stejné účinnosti léčby konjugátem Hydrazon je pak možné dospět pouze při dávce 25 mg DOX ekv/kg a vyšší.
Příklad 3
Přípravek o složení stejném jako v Příkladu 2 byl aplikován samicím kmene C57BL/6 nesoucím inokulovaný nádor myšího T-buněČného lymfomu EL 4 (lxlO5 buněk) devátý den po inokulaci v množství 5 a 7,5 mg DOX ekv/kg. I při této snížené dávce aktivního léčiva došlo, v závislosti na složení a dávce přípravku k dlouhodobému vyléčení významného procenta léčených zvířat (25 -75%). Stejně jako v příkladu 1 není možné při takto nízké dávce podané ve stejném režimu léčby experimentální zvířata konjugátem PK1 vyléčit. K vyléčení kolem 25% experimentálních zvířat je nutné použít dávku 25 mg Dox ekv./kg vyšší. Ke stejné účinnosti léčby konjugátem Hydrazon (sedm z osmi experimenánlních zvířat) je pak možné dospět pouze pří dávce cca 25 mg DOX ekv/kg a vyšší.
Příklad 4:
Samice myšího inbredního kmene C57BL/6, vyléčené podáním přípravku tak jak je uvedeno v příkladu 1, byly 73. den po podání prvního transplantátu myšího T buněčného lymfomu EL4 re-transplantovány letální dávkou (1 x 105 buněk) stejných nádorových buněk a ponechány bez podání přípravku. Kontrolní skupinu tvořily konvenční myši, kterým byla podána stejná dávka nádorových buněk. Byl sledován růst nádoru a zaznamenáváno dlouhodobé přežití (% tzv. LTS = long term survivors). Zatím co kontrolní myši vyhynuly mezi 28 až 43 dnem, 57% myší ze skupiny vyléčené podáním přípravku dle příkladu 1 a re-transplantované stejnými nádorovými buňkami přežilo 60 a více dní. Toto dlouhodobé přežívání letální dávky nádorových buněk bez chemoterapeutické léčby je možné vysvětlit pouze tím, že při účinné léčbě přípravkem dle příkladu 1 dochází současně ke stimulaci imunitního systému, který retransplantovaná zvířata účinně chrání před rozvíjejícím se nádorem.
Literatura:
R. Duncan, J.B. Lloyd, J. Kopeček, P. Rejmanová, J, Strohalm, K. Ulbrich, B. Říhová, V, Chytrý, Synthetíc Polymeric Drugs. Czech. PV 0095/1985
T. Etrych, M. Jelínková, B. Říhová, K. Ulbrich, New HPMA copolymers containing doxorubicin bound via PH sensitive linkage. Synthesis, in vitro and in vivo biological properties. J. Controlled Rel. 73,89-102 (2001)
T. Etrych, P. Chytil, M. Jelínková, B. Říhová, K. Ulbrich, Synthesis of HPMA Copolymers Containing Doxorubicin Bound via a Hydrazone Linkage. Effect of Spacer on Drug Release and in vitro Cytotoxicity. Macromolecular Biosci. 2, 43-52 (2002)
T. Etrych, K. Ulbrich, P. Chytil, M. Studenovský, M. Pechar, Způsob přípravy polymerních konjugátů doxorubicinu s pH-řízeným uvolňováním léčiva. CZ PV 524-2005
T. Etrych, P. Chytil, M. Pechar, M. Studenovský, B. Říhová a K. Ulbrich, Způsob přípravy polymerních konjugátů doxorubicinu s pH-řízeným uvolňováním léčiva. CZ PV 2005-558
T. Etrych, K. Ulbrich: Způsob přípravy polymerních konjugátů doxorubicinu s pH-řízeným uvolňováním léčiva. Metod of preparing polymeric conjugates of doxorubicin with pHreguiated release of the drug. CZ PV-2006-505
T. Etrych, Ρ. Chytil, Κ. Ulbrich, Τ. Mrkvan, Β. Říhová, Roubované vysokomolekulámí konjugáty doxorubicinu s protinádorovou aktivitou a způsob jejich výroby, PV 2006 - 592
O. Hovorka, T. Etrych, M. Šubr, J. Strohalm, K. Ulbrich, B. Říhová, Differences in the Intracellular Fate of Free and Polymer-Bound Doxorubicin. J. Controlled Release 80, 101-117 (2002)
P. Chytil, T. Etrych, M. Hrubý, K. Ulbrich, B. Říhová: Micelámí nosiče léčiv s protinádorovou aktivitou. CZ PV 2006-207
M. Jelínková, J. Strohalm, T. Etrych, K. Ulbrich, B. Říhová, Starlike versus Classic Macromolecular Prodrugs: Two Different Antibody-Targeted HPMA Copolymers of Doxorubicin Studied In Vitro and In Vivo as Potential Anticancer Drugs. Pharm. Res. 20, 1556-1564 (2003)
J.A.Kim, Targeted Therapies for the treatment of cancer. Am. J. Surgery 186,264-268 (2003)
M. Kissel, P. Peschke, V. Šubr, K. Ulbrich, J. Schuhmacher, J. Debus, E. Friedrich, Synthetic Macromolecular Drug Carriers: Biodistribution of Poly[N-(2-hydroxypropyl)methacrylamide] and its Accumulation in Solid Rat Tumors. PDA J. Pharm. Sci. Technol. 55,191-201 (2001)
J. Kopeček, P. Kopečková, T. Minko, Z. Lu, HPMA Copolymer-Anticancer Drug Conjugates: Design, Activity, and Mechanism of Action. Europ. J. Pharm. Biopharm. 50, 61 -81 (2000)
M. Kovář, L.Kovár, V. Šubr, T. Etrych, K. Ulbrich , T. Mrkvan, J. Loucká and B.Říhová, HPMA Copolymers Containing Doxorubicin Bound by Proteolyticaily or Hydrolyticaliy Cleavable Bond: Comparison of Biological Properties In Vitro. J. Controlled Release 99,301314(2004)
L. Kovář, J. Strohalm, P. Chytil, T. Mrkvan, M. Kovář, O. Hovorka, K. Ulbrich, B. Říhová,. The same drug but a different mechanism of action: comparison of free doxorubicin with two different N-(2-hydroxypropyl)methacrylamide copolymer-bound doxorubicin conjugates in EL-4 cancer cell line. Bioconjugate Chemistry, 18, 894-902 (2007)
G. S. Kwon, Polymeric Drug Delivery Systems, Series: Drugs and the Pharmaceutical Sciences, Vol. 148, Dekker, Marcel Incorporated, 2005
T. Lammers, R. Kuhnlein, V. Šubr, K. Ulbrich, G. Storm, P. Peschke, P. Huber, Effect of intratumoral injection on the biodistribution and therapeutic potential of HPMA copolymers. Neoplasia 8, 788 - 795 (2006)
T.Lammers, R. Kuhnlein, M. Kissel, V.Šubr, T. Etrych, R. Póla, M. Pechar, K. Ulbrich, G. Storm, P. Huber, P. Peschke: Effect of physicochemical modification on the biodistribution and tumor accumulation of HPMA copolymers. J. Controlled Releasel 10, 103-118 (2005)
H. Maeda, J. Wu, T. Sawa, Y. Matsumura, K. Hoři, Tumor vascular permeability and the EPR effect in macromolecular therapeutics: a review. J Control Release 65, 271-284 (2000).
B. Říhová, M. Jelínková, J. Strohalm, M. Šťastný, M. Hovorka, D. Plocová, M. Kovář, L. Drábelová, K. Ulbrich, The Anti-proliferative effect of Lectin- and Anti-Thy-1.2 Antibody targeted HPMA Copolymer-bound Doxorubicin on Primary and Methastatic Human Colorectal Carcinoma and on Human Colorectal Carcinoma Transfected with Mouše Thy-1.2 Gene. Bioconjugate Chemistry, 11, 664-673 (2000)
B. Říhová, T. Etrych, M. Pechar, M. Jelínková, M. Šťastný, O. Hovorka, M. Kovář, K. Ulbrich, Doxorubicin Bound to a HPMA Copolymer Carrier Through Hydrazone Bond is Effective also in a Cancer Cell Line with a Limited Content of Lysosomes. J. Controlled Release 74, 225-232 (2001)
Říhová, J. Strohalm, K. Kubáčková, M. Jelínková, L. Rozprimová, M. Šírová, D. Plocová, T. Mrkvan, M. Kovář, J. Pokorná, T. Etrych, K. Ulbrich, Drug-HPMA-Hulg Conjugates Effective Against Human Solid Cancer. Advances in Experimental Medicine and Biology, Vol. 19. Polymer Drugs in the Clinical Stage, Maeda et al Eds., New York, 125 - 143 (2003a)
B. Říhová, K. Kubáčková, Clinical Implications of N-(2-Hydroxypropyl)Methacrylamide Copolymers. Cunent Pharmaceut. Biotech. 4,311-322 (2003b
B. Říhová, J. Strohalm, M. Kovář, T. Mrkvan, V. Šubr, O, Hovorka, M. Šírová, L. Rozprimová, K. Kubáčková, K. Ulbrich, Induction of Systemic Antitumour Resistence with Targeted Polymers. Scandinavian J. Immunology 62,100- 105 (2005)
M, Šírová, J. Strohalm, V. Šubr, D. Plocová, T. Mrkvan, K. Ulbrich, B. Říhová, Treatment with HPMA copolymer-based doxorubicin conjugate containing human immunoglobulin induces systemic and long-lasting anti-tumor immunity in mice. Cancer hnmunol. Immunother. 56, 35-47 (2007)
K. Ulbrich, V. Šubr, J. Strohalm, D. Plocová, M. Jelínková, B. Říhová, Polymeric Drugs Based on Conjugates of Synthetic and Natural Macromolecules I. Synthesis and Physicochemical Characterisation. J. Controlled Rel. 64,63-79 (2000)
K. Ulbrich, T. Etrych, P. Chytil, M. Jelínková, B. Říhová, Antibody-Targeted PolymerDoxorubicin Conjugates with pH-Controlled Activation. J. Drug Targeting, 12, 477-490 (2004)
K. Ulbrich, T. Etrych, P. Chytil, M. Jelínková, B. Říhová, HPMA Copolymers with pHControlled Release of Doxorubicin. In vitro Cytotoxicity and in vivo Antitumor Activity. J. Controlled Release 87, 33-47 (2003)
K. Ulbrich, T. Etrych, P. Chytil, M, Pechar, M. Jelínková, B. Říhová, Polymeric Anticancer Drugs with pH-Controlled Activation. Int. J. Pharm. 277/1-2 67-72 (2004)
K. Ulbrich, T. Etrych, B. Říhová, M. Jelínková, M. Kovář: pH Senzitivní polymerní konjugáty doxorubicinu pro cílenou terapii. CZ 293886, Europ. Pat. Appl. 06025316.8-1216

Claims (6)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Farmaceutický přípravek s významnou cytotoxickou protinádorovou aktivitou a současným autostimulačním protinádorovým účinkem, s účinnou látkou doxorubicin vyznačující se tím, že sestává ze dvou komponent, kde:
    a) první komponentou tvořící přípravek je kopolymer N-(2-
    - hydroxypropyljmethakrylamidu (HPMA) označený PK1, ve kterém je doxorubicin připojen k polymemímu nosiči enzymaticky štěpitelnou oligopeptidovou GlyPheLeuGly sekvencí, kde je polymerní řetězec tvořen 50- 1000 monomemími jednotkami sestávajícími z 80- 99,5nol %?z jednotek N-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu (HPMA), l-5]mot%, methakryloylovaného oligopeptidu (GlyPheLeuGly) zakončeného amidickou vazbou navázaného doxorubicinu, 0 M 10 molJFo. methakryloylovaného oligopeptidu (GlyPheLeuGly) zakončeného karboxylovou skupinou, O^TOánol^ó methakryloylovaného oligopeptidu (GlyPheLeuGly)^ zakončeného 2-hydroxypropylamidovou skupinou,-(vzorce I) a případně 0,5 — 10 Tmoljyo jednotek methakryloylovaného oligopeptidu (GlyPheLeuGly) zakončených molekulou lidské nespecifické protilátky, jako například Hulg, Endobulin, Intraglobin, nebo monoklonální protilátky, jako Erbitux nebo Herceptin, kde x, y, v a z nabývá hodnot x = 40 až 990; y=laž 50; v = Oaž 100 a z = 0 až 100;
    b) druhou komponentouývzorec II) je kopolymer HPMA označený H, v němž je ' 4 doxorubicin připojen k polymemímu nosiči prostřednictvím spaceru obsahujícího pH-senzitivní hydrolyticky labilní hydrazonovou vazbu, který sestává z 30 3500 monomemích jednotek spojených do lineárního nebo větveného polymerního řetězce tvořeného z 60 až 98,5 % jednotkami HPMA a dále obsahuje 1 až 20 % jednotek methakryloylovaných hydrazonů a-aminokyselin, ε-aminokyselin, aromatických aminokyselin nebo oligopeptidů zakončených molekulou doxorubicinu, 0,5 až 15 % jednotek hydrazidů methakryloylovaných hydrazonů a-aminokyselin, ε-aminokyselin, aromatických aminokyselin nebo oligopeptidů, případně jejich sodných solí, popřípadě 0,5 až 5 % jednotek methakryloylovaných a-aminokyselin, ε-aminokyselin, aromatických aminokyselin nebo oligopeptidů zakončených molekulou imunoglobulinu nebo specifické monoklonální protilátky kde parametry x, a, b, c nabývají hodnot x = 20 až 3000; jednotek A, a - I až 700; jednotek B, b = 1 až 450 a jednotek C, c = 1 až 450; X představuje spojku tvořenou a-aminokyselinou, ε-aminokyselinou, aromatickou aminokyselinou nebo oligopeptidem, případně ve formě jejich sodných solí.
  2. 2. Přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že jsou komponenty smíchány tak, aby výsledná dávka doxorubicinu z prvé komponenty PK1, kde je doxorubicin vázán amidickou vazbou, a z druhé komponenty H, kde je vázán hydrazonovou vazbou, byla v hmotnostním poměru PK1/H 1 : 3 až 3 :1.
  3. 3. Přípravek podle nároku 2, vyznačující se tím, že jsou komponenty v takovém poměru, aby výsledná dávka doxorubicinu PK1/H byla v hmotnostním poměru 1; 2.
  4. 4. Přípravek podle některého z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že se struktura alespoň jedné z komponent skládá z hlavního řetězce HMPA nesoucího účinnou látku a postranních řetězců HMPA - roubů, které případně rovněž nesou účinnou látku, přičemž tyto rouby jsou k hlavnímu řetězci připojeny vazbou štěpitelnou v nádorové buňce.
  5. 5. Přípravek podle nároku 4, vyznačující se tím, že molámí hmotnost komponenty obsahující postranní řetězce dosahuje 50 000 až 400 000 g/mol.
  6. 6, Přípravek podle nároku 4 nebo 5, vyznačující se tím, že vazby spojující hlavní a postranní řetězec jsou odbouratelné bud’ enzymaticky a nebo reduktivně.
CZ20080661A 2008-10-23 2008-10-23 Polymerní prípravek se synergickým úcinkem pri lécbe nádorových onemocnení CZ2008661A3 (cs)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ20080661A CZ2008661A3 (cs) 2008-10-23 2008-10-23 Polymerní prípravek se synergickým úcinkem pri lécbe nádorových onemocnení
PCT/CZ2009/000115 WO2010045896A2 (en) 2008-10-23 2009-09-30 Polymeric composition with synergistic effect in treatment of tumour diseases
EP09759869.2A EP2349343B1 (en) 2008-10-23 2009-09-30 Polymeric composition with synergistic effect in treatment of tumour diseases
ES09759869T ES2433577T3 (es) 2008-10-23 2009-09-30 Composición polimérica con efecto sinérgico en el tratamiento de enfermedades tumorales

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ20080661A CZ2008661A3 (cs) 2008-10-23 2008-10-23 Polymerní prípravek se synergickým úcinkem pri lécbe nádorových onemocnení

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ301288B6 CZ301288B6 (cs) 2009-12-30
CZ2008661A3 true CZ2008661A3 (cs) 2009-12-30

Family

ID=41459902

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20080661A CZ2008661A3 (cs) 2008-10-23 2008-10-23 Polymerní prípravek se synergickým úcinkem pri lécbe nádorových onemocnení

Country Status (4)

Country Link
EP (1) EP2349343B1 (cs)
CZ (1) CZ2008661A3 (cs)
ES (1) ES2433577T3 (cs)
WO (1) WO2010045896A2 (cs)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113101414B (zh) * 2021-03-18 2023-03-14 常熟中科世纪生物科技有限公司 一种具有抗感染功能的人工关节假体

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ293787B6 (cs) * 2001-12-20 2004-07-14 Zentiva, A.S. pH senzitivní polymerní konjugáty antracyklinového kancerostatika pro cílenou terapii
CZ2006207A3 (cs) * 2006-03-28 2008-01-16 Zentiva, A. S. Micelární nosiče léčiv s protinádorovou aktivitou
CZ2006592A3 (cs) * 2006-09-18 2008-03-19 Zentiva, A. S. Polymerní lécivo a zpusob jeho výroby

Also Published As

Publication number Publication date
WO2010045896A3 (en) 2010-08-12
WO2010045896A2 (en) 2010-04-29
CZ301288B6 (cs) 2009-12-30
EP2349343B1 (en) 2013-09-18
ES2433577T3 (es) 2013-12-11
EP2349343A2 (en) 2011-08-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Etrych et al. Polymer conjugates of doxorubicin bound through an amide and hydrazone bond: Impact of the carrier structure onto synergistic action in the treatment of solid tumours
Kopeček et al. HPMA copolymer–anticancer drug conjugates: design, activity, and mechanism of action
Kopeček et al. HPMA copolymers: origins, early developments, present, and future
Nakamura et al. Two step mechanisms of tumor selective delivery of N-(2-hydroxypropyl) methacrylamide copolymer conjugated with pirarubicin via an acid-cleavable linkage
KR101705077B1 (ko) Ｈｐｍａ-도세탁셀 또는 젬시타빈 컨쥬게이트 및 이의 용도
AU4094300A (en) Amplification of folate-mediated targeting to tumor cells using polymers
CA2376175A1 (en) Vitamin directed dual targeting therapy
Mrkvan et al. Chemotherapy based on HPMA copolymer conjugates with pH-controlled release of doxorubicin triggers anti-tumor immunity
JP5749273B2 (ja) 抗がん剤送達のためのポリマー系
Yang et al. Backbone degradable N-(2-hydroxypropyl) methacrylamide copolymer conjugates with gemcitabine and paclitaxel: Impact of molecular weight on activity toward human ovarian carcinoma xenografts
Jelínková et al. Starlike vs. classic macromolecular prodrugs: two different antibody-targeted HPMA copolymers of doxorubicin studied in vitro and in vivo as potential anticancer drugs
Sirova et al. Preclinical evaluation of linear HPMA-doxorubicin conjugates with pH-sensitive drug release: efficacy, safety, and immunomodulating activity in murine model
Zhang et al. A new construct of antibody-drug conjugates for treatment of B-cell non-Hodgkin's lymphomas
Šírová et al. The structure of polymer carriers controls the efficacy of the experimental combination treatment of tumors with HPMA copolymer conjugates carrying doxorubicin and docetaxel
Říhová Biocompatibility and immunocompatibility of water-soluble polymers based on HPMA
Shamay et al. Complexation of Cell-Penetrating Peptide–Polymer Conjugates with Polyanions Controls Cells Uptake of HPMA Copolymers and Anti-Tumor Activity
CN109762099B (zh) 一种聚合物-抗肿瘤药物偶联物及其制备方法和用途
SK2912004A3 (en) pH-sensitive polymeric conjugates of an anthracycline cancerostatic drug for targeted therapy
CZ303072B6 (cs) Polymerní konjugáty paclitaxelu a docetaxelu s pH rízeným uvolnováním kancerostatika
RU2451509C1 (ru) Противоопухолевый препарат
US20050220754A1 (en) Vitamin directed targeting therapy
CZ2008661A3 (cs) Polymerní prípravek se synergickým úcinkem pri lécbe nádorových onemocnení
Chytil et al. Structural design and synthesis of polymer prodrugs
Rihova et al. Induction of systemic antitumour resistance with targeted polymers
EP3442594A1 (en) Block copolymer for overcoming drug resistance of tumours to chemotherapy, its polymer-drug conjugate, pharmaceutical composition containing them, method of preparation and use thereof

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20191023