CZ22175U1 - Polymerní konjugáty paclitaxelu a docetaxelu s pH řízeným uvolňováním kancerostatika - Google Patents
Polymerní konjugáty paclitaxelu a docetaxelu s pH řízeným uvolňováním kancerostatika Download PDFInfo
- Publication number
- CZ22175U1 CZ22175U1 CZ201023236U CZ201023236U CZ22175U1 CZ 22175 U1 CZ22175 U1 CZ 22175U1 CZ 201023236 U CZ201023236 U CZ 201023236U CZ 201023236 U CZ201023236 U CZ 201023236U CZ 22175 U1 CZ22175 U1 CZ 22175U1
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- drug
- ptx
- oxo
- derivative
- dtx
- Prior art date
Links
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 title claims description 71
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 title claims description 71
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 title claims description 70
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 title claims description 54
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 title claims description 53
- 230000003327 cancerostatic effect Effects 0.000 title description 9
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 title description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 79
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 71
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 43
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims description 25
- -1 glycylglycyl Chemical group 0.000 claims description 23
- 239000003118 drug derivative Substances 0.000 claims description 18
- JOOXCMJARBKPKM-UHFFFAOYSA-N 4-oxopentanoic acid Chemical compound CC(=O)CCC(O)=O JOOXCMJARBKPKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- VHSHLMUCYSAUQU-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropyl methacrylate Chemical compound CC(O)COC(=O)C(C)=C VHSHLMUCYSAUQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- SEFGUGYLLVNFIJ-QDRLFVHASA-N larotaxel dihydrate Chemical compound O.O.O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@@]23[C@H]1[C@@]1(CO[C@@H]1C[C@@H]2C3)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 SEFGUGYLLVNFIJ-QDRLFVHASA-N 0.000 claims description 10
- 229950005692 larotaxel Drugs 0.000 claims description 7
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 claims description 6
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 claims description 6
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 claims description 6
- 150000004715 keto acids Chemical class 0.000 claims description 6
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 claims description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 claims description 4
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- IGOYNRWLWHWAQO-JTQLQIEISA-N Gly-Phe-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 IGOYNRWLWHWAQO-JTQLQIEISA-N 0.000 claims description 2
- 230000010933 acylation Effects 0.000 claims description 2
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 2
- 108010077435 glycyl-phenylalanyl-glycine Proteins 0.000 claims description 2
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims 3
- 125000000043 benzamido group Chemical group [H]N([*])C(=O)C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims 3
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 claims 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims 2
- CCBIBMKQNXHNIN-ZETCQYMHSA-N Gly-Leu-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O CCBIBMKQNXHNIN-ZETCQYMHSA-N 0.000 claims 1
- 125000001539 acetonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)C([H])([H])* 0.000 claims 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid group Chemical group C(C1=CC=CC=C1)(=O)O WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 claims 1
- 125000001231 benzoyloxy group Chemical group C(C1=CC=CC=C1)(=O)O* 0.000 claims 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 claims 1
- 150000004625 docetaxel anhydrous derivatives Chemical class 0.000 claims 1
- RTYRONIMTRDBLT-UHFFFAOYSA-N hept-5-en-2-one Chemical compound CC=CCCC(C)=O RTYRONIMTRDBLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- JOLMPYGCINNRAB-UHFFFAOYSA-N heptadec-13-en-2-yl benzoate Chemical compound CCCC=CCCCCCCCCCCC(C)OC(=O)C1=CC=CC=C1 JOLMPYGCINNRAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- YRXUQYBLFBZHNE-UHFFFAOYSA-N hex-4-en-2-one Chemical compound CC=CCC(C)=O YRXUQYBLFBZHNE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 claims 1
- LABTWGUMFABVFG-UHFFFAOYSA-N methyl propenyl ketone Chemical compound CC=CC(C)=O LABTWGUMFABVFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 claims 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 claims 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims 1
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 42
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 35
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 16
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 15
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 15
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 12
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 9
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 9
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- FLZUYXUBDVKWPO-UHFFFAOYSA-N 4-(2-oxopropyl)benzoic acid Chemical compound CC(=O)CC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 FLZUYXUBDVKWPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 7
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- WDYVUKGVKRZQNM-UHFFFAOYSA-N 6-phosphonohexylphosphonic acid Chemical compound OP(O)(=O)CCCCCCP(O)(O)=O WDYVUKGVKRZQNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 6
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 6
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 5
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 5
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 5
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 5
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 5
- 239000012704 polymeric precursor Substances 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 4
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 4
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 4
- 229920000578 graft copolymer Polymers 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 229940040102 levulinic acid Drugs 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 4
- OKDQKPLMQBXTNH-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethyl-2h-pyridin-1-amine Chemical compound CN(C)N1CC=CC=C1 OKDQKPLMQBXTNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 4
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 4
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 4
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XQAHOFAHGMZYNU-UHFFFAOYSA-N 5-oxohex-2-enoic acid Chemical compound CC(=O)CC=CC(O)=O XQAHOFAHGMZYNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000030453 Drug-Related Side Effects and Adverse reaction Diseases 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002685 Polyoxyl 35CastorOil Polymers 0.000 description 3
- 206010070863 Toxicity to various agents Diseases 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 3
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 description 3
- IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N dihydroxy(oxo)silane Chemical compound O[Si](O)=O IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 150000007857 hydrazones Chemical class 0.000 description 3
- QUANRIQJNFHVEU-UHFFFAOYSA-N oxirane;propane-1,2,3-triol Chemical compound C1CO1.OCC(O)CO QUANRIQJNFHVEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001562 poly(N-(2-hydroxypropyl)methacrylamide) Polymers 0.000 description 3
- 239000008389 polyethoxylated castor oil Substances 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 3
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 3
- XGTKSWVCNVUVHG-NSCUHMNNSA-N (e)-4-oxopent-2-enoic acid Chemical compound CC(=O)\C=C\C(O)=O XGTKSWVCNVUVHG-NSCUHMNNSA-N 0.000 description 2
- 108010051152 Carboxylesterase Proteins 0.000 description 2
- 102000013392 Carboxylesterase Human genes 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000007073 chemical hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 125000005597 hydrazone group Chemical group 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- DKPFODGZWDEEBT-QFIAKTPHSA-N taxane Chemical class C([C@]1(C)CCC[C@@H](C)[C@H]1C1)C[C@H]2[C@H](C)CC[C@@H]1C2(C)C DKPFODGZWDEEBT-QFIAKTPHSA-N 0.000 description 2
- 150000004579 taxol derivatives Chemical class 0.000 description 2
- XGTKSWVCNVUVHG-UHFFFAOYSA-N trans-beta-acetylacrylic acid Natural products CC(=O)C=CC(O)=O XGTKSWVCNVUVHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SPBQWHPKNVUQLO-UHFFFAOYSA-N 6-oxohept-2-enoic acid Chemical compound CC(=O)CCC=CC(O)=O SPBQWHPKNVUQLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010015866 Extravasation Diseases 0.000 description 1
- 108010009504 Gly-Phe-Leu-Gly Proteins 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010021118 Hypotonia Diseases 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000003560 cancer drug Substances 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 230000036461 convulsion Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000036251 extravasation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 208000017561 flaccidity Diseases 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 230000024924 glomerular filtration Effects 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- OKPYIWASQZGASP-UHFFFAOYSA-N n-(2-hydroxypropyl)-2-methylprop-2-enamide Chemical compound CC(O)CNC(=O)C(C)=C OKPYIWASQZGASP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LYUQWAGPWZUFNV-UHFFFAOYSA-N n-(6-hydrazinyl-6-oxohexyl)-2-methylprop-2-enamide Chemical compound CC(=C)C(=O)NCCCCCC(=O)NN LYUQWAGPWZUFNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 108700027936 paclitaxel poliglumex Proteins 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 238000009520 phase I clinical trial Methods 0.000 description 1
- 230000008884 pinocytosis Effects 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 229920005604 random copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 125000002456 taxol group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- ZPUHVPYXSITYDI-HEUWMMRCSA-N xyotax Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O.O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZPUHVPYXSITYDI-HEUWMMRCSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Polymemí konjugáty paclitaxelu a docetaxelu s pH řízeným uvolňováním kancerostatika
Oblast techniky
Technické řešení se týká struktury a vlastností vodorozpustných polymemích terapeutik (prodrag) na bázi derivátů paclitaxelu (PTX), docetaxelu (DTX) a Larotaxelu (LTX) určených pre5 devším pro léčbu pevných nádorů při terapii nádorových onemocnění v humánní medicíně. Dosavadní stav techniky
Trendy vývoje léčiv se v poslední době velmi často zaměřují na vývoj lékových forem umožňujících specifický účinek léčiva pouze v místě požadovaného terapeutického efektu. Takto cíleně působící biologicky aktivní látky nalézají uplatnění zejména v oblastech, kdy nežádoucí vedlejší io účinky léčiva mohou vést k poškození zdravých částí organizmu. Toto nebezpečí je zvláště aktuální při léčbě cytotoxickými látkami při chemoterapii nádorových onemocnění. Je známo, že připojení cytostatika k vodorozpustnému polymemímu nosiči chemickou vazbou umožňuje zvýšit rozpustnost jinak nerozpustných nebo málo rozpustných léčiv a výrazně snížit jejich přímou toxicitu. Vysoká molekulová hmotnost polymerů zabraňuje rychlému vyloučení léčiva z organiz15 mu glomerulámí filtrací, a tím zajišťuje prodlouženou dobu cirkulace v krvi a setrvání v organizmu a tím i časově delší biologickou využitelnost léčiva.
V minulosti bylo připraveno a studováno mnoho polymemích konjugátů kancerostatik s rozpustnými polymery, ve kterých bylo léčivo s protinádorovým účinkem připojeno k polymeru neštěpitelnou kovalentní vazbou, hydrolyticky nestabilní iontovou vazbou a nebo kovalentní vazbou umožňující řízené uvolnění léčiva a tím i jeho aktivaci na základě enzymatické či prosté chemické hydrolýzy této vazby. Obecně jsou polymemí nosičové systémy konstruovány tak, aby byly schopné uvolnit terapeuticky aktivní kancerostatikum z nosiče buď v nádoru, nebo i více specificky, přímo v nádorové buňce. Významnou skupinu polymemích terapeutik tvoří polymemí léčiva připravená na bázi kopolymerů N-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu (HPMA), z nichž je řada aktivně směrována k nádorům prostřednictvím k polymeru připojené směrující struktury (protilátky, lektinu, hormonu). [Duncan 1985, Říhová 2000, Kopeček 2001, 2000, Duncan, 2005; Satchi-Fainaro et al., 2006]. Jejich syntéza je však značně složitá. Při vývoji polymemích kancerostatik bylo rovněž ukázáno, že pro specifickou dopravu léčiva do místa výskytu nádoru není nutné použít aktivně směrovaného nosiče, ale výrazně zvýšené akumulace polymemích cytosta30 tik, zvláště v pevných nádorech, může být dosaženo zvýšením molekulové hmotnosti polymemího terapeutika nad vylučovací mez nosiče ledvinami (tzv. pasivní směrování do pevných nádorů). Tato schopnost makromolekul akumulovat se v pevných nádorech byla nazvána EPR efektem (Enhanced Permeability and Retention) a bylo ukázáno, že se tento efekt významně projevuje i u nosičů na bázi kopolymerů HPMA [Noguchi et al., 1998; Seymour et al., 1995].
Jedním z hlavních problémů použití HPMA kopolymerů jako pasivně směrovaných vysokomolekulámích nosičů je jejich neštěpitelný uhlíkatý řetězec a z organizmu vyloučitelné jsou pouze polymery nepřesahující molekulovou hmotnost 40 až 50 000 g/mol. To znamená, že nemá-li dojít po opakovaném podání léčiva k hromadění polymeru v organizmu a má-li být molekulová hmotnost nosiče co nejvyšší, aby bylo pasivní směrování co nej účinnější, musí být polymemí nosič konstruován jako v organizmu degradovatelný. Takové polymemí nosiče na bázi HPMA kopolymerů byly nedávno vyvinuty a jejich struktura byla patentována [Chytil et al., 2008; Etrych et al., 2008, Chytil PV 2006-207, Etrych PV 2006 - 592].
V literatuře existuje celá řada informací o přípravě a studiu vlastností polymerů nesoucích kancerostatikum připojené k polymeru vazbou náchylnou k hydrolýze ve vodném prostředí [Kratz
1999], Mezi nimi zaujímají významné postavení kopolymery HPMA, nesoucí kancerostatikum doxorubicin vázaný k polymemímu řetězci hydrolyticky štěpitelnou hydrazonovou vazbou [Etrych 2002, Ulbrich 2004a, Ulbrich 2004b, Ulbrich pat CZ 293787 B6], Tato vazba je relativně stálá v prostředí krevního řečiště (v průběhu transportu v organizmu) a hydrolyticky labilní v
-1 CZ 22175 Ul mírně kyselém prostředí živé buňky. Rychlost hydrolýzy této vazby řídí i rychlost uvolňování léčiva, a tedy i koncentraci aktivní látky v místě požadovaného účinku. Takováto polymemí kancerostatika vykazovala pri in vitro i in vivo testech na myších podstatně vyšší protinádorovou účinnost proti řadě nádorových linií nežli volné léčivo a v řadě případů vedlo jejich použití k úplnému vyléčení pokusných zvířat i pri terapeutickém způsobu podání. [Říhová 2001, Etrych 2001]. Zvýšení molekulové hmotnosti nosiče (biodegradovatelné roubované polymery, micelámí a nanogelové systémy) vždy vedlo ke zvýšení účinnosti protinádorové aktivity léčiva ověřované v in vivo systémech.
Paclitaxel a docetaxel patří do skupiny taxanů, protinádorových léčiv rutině používaných pri io léčbě ovariálních nádorů a nádorů prsu, plic, prostaty a dalších [Vanhoefer at al., 1997]. Kromě vedlejší toxicity běžné u kancerostatik je jejich další nevýhodou velmi malá rozpustnost ve vodných roztocích a tedy nezbytnost podání v různých excipientech, především v Cremophoru EL, což rovněž vede k dalším vedlejším účinkům lékové formy. Pri některých schématech podání může dokonce podání taxanů v Cremophoru EL významně snižovat efekt léčby [Ng at al., 2006].
Vazbou těchto léčiv na polymemí nosiče (PEG, HPMA kopolymer, poly(glutamová kyselina) byla získána ve vodě velmi dobře rozpustná pro-léčiva, s prodlouženou dobou cirkulace v organizmu a zvýšenou akumulací v pevných nádorech. Jejich protinádorová aktivita byla ověřována in vivo na zvířecích modelech a v některých případech i klinicky. Tak paclitaxel (PTX) byl kovalentně vázán na poly(ethylenglykol) (PEG) neštěpitelnou esterovou nebo 7-arbamátovou vaz20 bou (C2 -OH skupina) a nebo pomocí hydrolytícky labilní aminokyselinové spojky (Ala, Gly) [Greenwald et al., 1995; Greenwald, 2001; Greenwald et al., 2003; Pendri et al., 1998]. Bylo ukázáno, že protinádorová aktivita konjugátu závisí na struktuře použité vazby mezi polymerem a léčivem a že významným faktorem je i molekulová hmotnost nosiče. Konjugát s PTX byl testován ve fázi I klinických testů [Satchi-Fainaro et al., 2006], ale zřejmě s malým úspěchem.
Mnohem úspěšnější v klinických testech se ukazuje být konjugát paclitaxelu s poly(glutamovou kyselinou) (Xyotax) [Winter 2005, Kratz et al., 2008]. V tomto konjugátu je PTX vázán na polyaminokyselinový nosič esterovou vazbou přes -OH skupinu v pozici 2. K uvolnění léčiva dochází v důsledku degradace polymemího řetězce, vzniku Glu derivátu PTX a jeho následné hydrolýzy. V současné době je tento konjugát ve fázi ΙΠ klinických testů.
Paclitaxel byl rovněž vázán na HPMA kopolymery esterovou vazbou za použití biodegradovatelné oligopeptidové GlyPheLeuGly spojky. Bylo ukázáno, že PTX se po inkubaci s lysozomálními enzymy uvolňuje z nosiče a toto uvolnění je důležité pro dosažení protinádorové aktivity in vivo. PNU166945 je konjugát HPMA kopolymeru s esterově vázaným PTX, který byl klinicky testován ve fázi I [Terwogt et al., 2000; Terwogt et al., 2001], po této fázi však bylo další testování zastaveno. Z výše uvedených výsledků je zřejmé, že konjugace paclitaxelu s polymemím nosičem vede k výraznému zlepšení vlastností léčiva (rozpustnost, zlepšená biologická využitelnost). Má-li však léčivo najít uplatnění v humánní medicíně, je třeba pečlivě volit a na míru připravit jak strukturu a molekulovou hmotnost nosiče, tak i strukturu spojky mezi polymerem a léčivem řídící rychlost a tedy i koncentraci léčiva v místě požadovaného účinku. Při vývoji optimálních struktur je nezbytné ověřit funkci těchto struktur ve vhodných in vivo modelech.
Podstata technického řešeni
Polymemí léčivo podle technického řešení se vyznačuje tím, že je na vodorozpustný polymemí nosič připravený na bázi lineárního nebo roubovaného kopolymeru HPMA navázáno kancerostatikum ze skupiny taxanů, paclitaxel (PTX), docetaxel (DTX) nebo larotaxel (LTX) (dále léči45 va). Léčivo je připojené k polymemím řetězcům přes esterovou skupinu vzniklou acylací -OH skupiny v poloze 2 pomocí spojek (spacerů) obsahujících pH-senzitivní hydrolytícky štěpitelné hydrazonové vazby. Tyto spojky mohou být tvořeny kyselinovými zbytky různých oxokyselin, kterými je do struktury léčiv zavedena karbonylová skupina, spojených se zbytky jednotlivých aminokyselin, oligopeptidů a nebo dalšími strukturami dovolujícími zakončení postranních ře50 tězců polymemího nosiče hydrazonovou skupinou. Molekulová hmotnost polymemího řetězce je
-2CZ 22175 Ul v případě lineárního polymeru volena pod vylučovací mezí HPMA kopolymerů z organizmu, s výhodou v rozmezí 10 až 50 000g/mol. V případě roubovaného kopolymerů je molekulová hmotnost volena v rozmezí 50 až 250 000 g/mol.
Polymemí léčivo podle technického řešení je připraveno pro intravenózní (injekce nebo infuze) podání v roztoku, může být ale podáno i intratumorálně či intraperitoneálně a je určeno pro léčbu pevných nádorů. Polymer s chemicky vázaným cytostatikem je konstruován tak, aby byl stabilní v průběhu cirkulace v krevním řečišti a nedocházelo k hydrolýze hydrazonové vazby mezi daným taxanem a polymerem, případně aby byla rychlost hydrolýzy v průběhu transportu organizmem minimální (při pH v krevním řečišti 7,4) tak, aby se nemohl projevit cytotoxický efekt uvolněnéio ho léčiva či jeho derivátu. Celý systém je konstruován jako systém působící dvoufázově. Díky vhodné volbě molekulové hmotnosti nosiče, umožňující extravasaci ale i účinnou akumulaci v nádorové tkáni, by mělo po počáteční akumulaci léčiva v nádorové tkáni dojít k interakci s buněčnou membránou a k průniku molekulárně rozpuštěného polymemího léčiva do jednotlivých nádorových buněk pinocytózou. Uvnitř cílových buněk by mělo dojít v důsledku poklesu pH z i5 vnějšího pH (7,4) na intracelulární pH (5 až 6) k rychlé hydrolýze hydrazonové vazby a k uvolnění léčiva nebo jeho derivátu z nosiče. V následném kroku by mělo dojít k hydrolýze esterové vazby již z polymeru uvolněného derivátu léčiva chemickou hydrolýzou a nebo specifičtěji účinkem intracelulární ch enzymů, např. karboxyesteráz. Reálnost výše navrženého mechanizmu působení polymemí ch léčiv podle technického řešení je doložena experimenty modelového uvol20 ňování léčiv z polymemího nosiče. Výsledky těchto testů, včetně testů protinádorové aktivity, jsou uvedeny v příkladové části přihlášky.
Polymemí konjugáty s cíleným protinádorovým účinkem podle technického řešení se vyznačují tím, že cytostatikum (taxol, docetaxel, larotaxel) je připojeno prostřednictvím esterové vazby a spaceru na polymemí nosič tvořený lineárním [Etrych pat. CZ 297827 B6, publ. 2008] a nebo roubovaným [Etrych pat. CZ 298945 B6, publ. 2008] HPMA kopolymerem prostřednictvím hydrolyticky labilní hydrazonové skupiny vzniklé reakcí karbonylové skupiny derivátu molekuly léčiva s hydrazidovou skupinou polymemího nosiče. Polymemí nosiče jsou připraveny zpravidla radikálovou roztokovou kopolymerizací HPMA s komonomery odpovídajícími požadovanému složení. Vazbou příslušného taxanu na polymemí nosič dojde k výraznému snížení jeho cytoto30 xicity, výraznému zvýšení molekulové hmotnosti léčiva a tím k prodloužení doby cirkulace v krevním oběhu, dojde k prodloužení celkové doby setrvání léčiva v organizmu a tedy i ke zvýšení jeho biologické využitelnosti (bioavailability). Polymemí léčivo podle technického řešení se dále vyznačuje tím, že vazba léčiva k polymemí mu nosiči je relativně stálá v průběhu transportu v krevním řečišti a tělních tekutinách a je hydrolyticky Štěpitelná v mírně kyselém prostředí ná35 doru a zejména uvnitř cílových nádorových buněk v endozómech vyznačujících se mírně kyselým pH. To znamená, že léčivo je transportováno krevním řečištěm v neaktivní, na polymer vázané formě, a k jeho uvolnění a aktivaci dojde především až po průniku do cílových nádorových buněk. Aktivace léčiva až v cílových buňkách vede k eliminaci vedlejších účinků jinak toxických cytostatik a k zacílení jejich účinku přednostně na nádorové buňky. Za cílený (pasivní) transport do nádoru či nádorových buněk je odpovědný polymemí nosič připravený na bázi kopolymerů HPMA, jehož molekulová hmotnost a tedy i účinnost akumulace v nádorové tkáni může být řízena změnami ve struktuře skeletu polymemího nosiče (nedegradovatelný lineární polymer, vysokomolekulámí biodegradovatelný roubovaný polymer).
Oblastí použití předloženého technického řešení je použití polymemích léčiv pro léčbu solidních nádorů při maligních onemocněních v humánní medicíně.
Syntéza a struktury polymemích konjugátů
Syntéza polymemích konjugátů je prováděna v několika krocích, detailní finální struktura konjugátu významně záleží na zvolené syntetické cestě.
-3CZ 22175 Ul
V prvním kroku syntézy jsou syntetizovány základní monomery: HPMA, methakryloylované deriváty aminokyselin a oligopeptidů zakončené hydrazidovou (CONHNH2) skupinou, případně zakončené hydrazidovou skupinou chráněnou t.-butyloxykarbonylovou skupinou (Boc).
Ve druhém kroku jsou syntetizovány polymemí prekur2ory, tj. HPMA kopolymery nesoucí funkční skupiny (random copolymers) sloužící jako polymemí nosiče pro léčiva.
Polymemí prekurzor nesoucí podél řetězce funkční hydrazidové skupiny je možné připravit buď radikálovou kopolymerizací výše uvedených funkčních monomerů s HPMA, nebo polymeranalogickou přeměnou základního kopolymeru nesoucího funkční skupiny. Roubované kopolymery jsou připraveny z multivalentních a semitelechelických HPMA kopolymeru podle postupu poio psaného v [Etrych 2008 pat. publ.].
Základní kopolymer (prekurzor) je kopolymer HPMA a methakryloylovaných hydrazidů aminokyselin nebo oligopeptidů vybraných ze skupiny glycyl, glycylglycyl, β-alanyl, 6-aminohexanoyl (AH), 4-aminobenzoyl a nebo složený acyl vycházející z oligopeptidů GlyPheGly, GlyLeuGly, GlyLeuPheGly a GlyPheLeuGly) vyznačující se tím, že obsahuje 70 až 98 mol % HPMA a 2 až 30 % mol jednotek s hydrazidovýtni funkčními skupinami (viz Schéma 2 se spojkou tvořenou 6-aminohexanoylem).
Derivát léčiva je sloučenina léčiva (PTX, DTX nebo LTX) vzniklá acylací hydroxylové skupiny v pozici 2 lé20 čiva příslušnou oxokyselinou. S výhodou byly použity následující oxokyseliny: kyselina levuíová, 4-(2-oxopropyl) benzoová kyselina, 4-oxo-pent-2-enová a kyselina 5-oxo-hex-2-enová a 6oxo-hept-2-enová (viz Schéma 1).
Polymemí konjugát je sloučenina polymemího prekurzoru s derivátem léčiva, kde derivát léčívaje navázán na poly25 měrní prekurzor hydrazonovou vazbou připravenou reakcí karbonylové skupiny derivátu léčiva s hydrazidovými skupinami polymeru, vyznačující se tím, že obsahuje 70 až 98 mol % HPMA, 1,5 až 29,5 mol % jednotek s hydrazidovými funkčními skupinami a 0,5 až 10 mol % jednotek s hydrazonově navázaným derivátem léčiva (viz Schéma 3 se spojkou tvořenou 6-aminohexanoylem a kyselinou levulovou).
Přehled obrázků
Obr. 1: Graf rychlosti uvolňování PTX a jeho derivátů z lineárních polymemích konjugátů v pufru o pH 5 (model intracelulámího prostředí).
Obr. 2: Graf rychlosti uvolňování PTX a jeho derivátů z lineárních polymemích konjugátů v pufru o pH 7,4 (model krevního řečiště).
Obr. 3: Přežití myší C57BL/6 s lymfomem EL-4, kterým byl podán DTX, derivát LEV-DTX a lineární polymemí konjugát PHPMA-AH-NH-N-DTX-LEV. Dávky léčiv byly 2*20 mg ekvivalentu DTX/kg, konjugát PHPMA-AH-NH-N-DTX-LEV byl podán v dávce 2x20 a 2*40 mg ekvivalentu DTX/kg.
Obr. 4: Přežití myší C57BL/6 s lymfomem EL-4, kterým byl podán derivát paclitaxelu LEV40 PTX a lineární polymemí konjugát PHPMA-AH-NH-N=PTX-LEV. Pro omezenou rozpustnost nemohl být podán PTX ve volné formě.
Obr. 5: Přežití myší BALB/c s karcinomem mléčné žlázy 4T1, kterým byl podán paclitaxel, derivát paclitaxelu LEV-PTX a lineární polymemí konjugát PHPMA-AH-NH-N=PTX-LEV. PTX a PTX-LEV byly injikovány v dávce 2*30 mg ekvivalentu PTX v den 8 a 12 (viz text), a konjugát
PHPMA-AH-NH-N=PTX-LEV v dávce 2*60 mg ekvivalentu PTX/kg v den 8 a 12.
-4CZ 22175 Ul
Obr. 6; Přežití myší C57BL/6 s íymfomem EL-4, kterým byl podány lineární polymemí konjugáty PHPMA-AH-NH-N=DTX-LEV s obsahem DTX 8,2 % a 16,3 %, v dávce 2*30 mg ekvivalentu DTX i.v., den 9 a 13.
Příklady provedení
Příklady provedení syntézy meziproduktů a konjugátů
Příklad 1: Syntéza monomerů a derivátů léčiv
HPMA byl připraven podle drive popsaného postupu [Ulbrich a kol. 2000], Elementární analýza: vypočteno 58,8 % C, 9,16 % H, 9,79 % N; nalezeno 58,98 % C, 9,18 % H, 9,82 % N. Produkt byl chromatografícky čistý.
6-(Methakryloylamino)hexanoylhydrazin (A'!-(6-hydrazino-6-oxohexyl)-2-methylakrylamid) (MA-AH-NHNH2) byl připraven podle drive popsaného postupu [Ulbrich patenty, Etrych patent].
Ester kyseliny levulové a paclitaxelu (v pozici -OH 2) (LEV-PTX) byl přípraven reakcí kyseliny levulové s paclitaxelem pomocí karbodiimidové metody (dicyklohexylkarbodiimid, DCC) v
N, N'-di methyl formamidu (DMF).
Kyselina levulová (19,4 mg, 0,167 mmol) a DCC (37,5 mg, 0,182 mmol) byly při laboratorní teplotě rozpuštěny každý v 0,15 mL DMF. Oba roztoky byly ochlazeny na -18 °C a smíchány. Po 20 minutách byl k tomuto roztoku přidán roztok paclitaxelu (100 mg, 0,117 mmol) a VA-dimethylaminopyridinu (DMAP) (14 mg, 0,117 mmol) v 0,3 mL DMF. Reakce probíhala 30 minut při -18 °C a 16 h při 4 °C. Průběh reakce sledován na TLC - destičky Silikagel 60 F254 (ethylacetát : hexan 1:1, Rf(PTX) = 0,25, Rf(LEV-PTX) = 0,15, Rf(Levulic acid) = 0,45). Produkt byl vyčištěn od nízkomolekulámích příměsí pomocí chromatografie na koloně (60 cm χ 4 cm) naplněné Silikagelem v ethylacetátu. Frakce obsahující produkt PTX-LEV byla zachycena a zahuštěna na 0,4 mL a produkt vysrážen do 20 mL diethyleteru. Produkt byl odsát, promyt malým množstvím diethyleteru a vakuově sušen do konstantní hmotnosti. Výtěžek činil 98 mg produktu (84 %) s bodem tání 136 až 138 °C. TLC (ethylacetát : hexan 1:1) jedna skvrna při Rf - 0,15. MALDITOF MS: 970 (M+Na).
Čistota všech monomerů a derivátů léčiv byla stanovena pomocí HPLC systému [Shimadzu HPLC systém vybavený kolonou s reverzní fází Chromolith Performance RP-18e (100x 4,6 mm) a UV-VIS detektoru Shimadzu SPD- lOAVvp (230 nm); eluent voda-acetonitril s gradientem 50100 vol.% acetonitrilu, průtok 0,5 mL. min l].
Ester kyseliny levulové a docetaxelu (v pozici -OH 2) (LEV-DTX) byl připraven obdobně jako LEV-PTX reakcí kyseliny levulové s docetaxelem karbodiimidovou metodou (DCC) v DMF. Kyselina levulová (38 mg, 0,327 mmol) a DCC (100 mg, 0,487 mmol) byly při laboratorní teplotě rozpuštěny každý v 0,25 mL DMF. Oba roztoky byly ochlazeny na -18 °C a smíchány. Po 20 minutách byl k tomuto roztoku přidán roztok docetaxelu (200 mg, 0,247 mmol) a W-dimethylaminopyridinu (DMAP) (28 mg, 0,229 mmol) v 0,6 mL DMF. Reakce probíhala 30 minut při -18 °C a 16 h při 4 °C. Průběh reakce sledován na TLC - destičky Silikagel 60 F254 (ethylacetát: hexan 1:1, Rf(DTX) = 0,3, Rf(LEV-DTX) = 0,2, Rf(Levulic acid) = 0,45). Produkt byl vyčištěn od nízkomolekulámích příměsí dvakrát pomocí chromatografie na koloně (60 cm x 4 cm) naplněné Silikagelem v ethylacetátu. Frakce obsahující produkt DTX-LEV byla pokaždé zachycena a zahuštěna na 0,6 mL a produkt vysrážen do 20 mL diethyleteru. Produkt byl odsát, promyt malým množstvím diethyleteru a vakuově sušen do konstantní hmotnosti. Výtěžek činil 179 mg produktu (80 %) s bodem tání 86 až 89 °C. TLC (ethylacetát: hexan 1:1) jedna skvrna při Rf =
O, 20. MALDI-TOF MS: 929 (M+Na).
-5CZ 22175 Ul
Schéma 1 struktury esterů kyseliny levulové a 4-(2-oxopropyl)benzoové s paclitaxelem a docetaxelem: A) Ester kyseliny levulové a paclitaxelu, LEV-PTX; B) Ester 4-(2-oxopropyl)benzoové kyseliny a paclitaxelu, OPB-PTX; C) Ester kyseliny levulové a docetaxelu, LEV-DTX.
Ester 4-(2-oxopropyl)benzoové kyseliny a paclitaxelu (v pozici -OH 2) (OPB-PTX) byl připraven stejným výše popsaným postupem pro přípravu LEV-PTX, a to reakcí 4-(2-oxopropyí)benzoové kyseliny s paclitaxelem pomocí konjugačního činidla DCC v DMF.
Výtěžek činil 85 %. Bod tání 143 až 145 °C. TLC (ethylacetát: hexan 1:1) jedna skvrna při Rf= 0,25. MALDI-TOF MS: 1032 (M+Na).
ío Ester 4-(2-oxopropyl)benzoové kyseliny a docetaxelu (v pozici -OH 2) (OPB-DTX) byl připraven stejným výše popsaným postupem pro přípravu DTX-LEV, a to reakcí 4-(2-oxopropyl)benzoové kyseliny s docetaxelem pomocí DCC v DMF.
Výtěžek činil 81 %. Bod tání 94 až 96 °C. TLC (ethylacetát : hexan 1:1) jedna skvrna při Rf = 0,28. MALDI-TOF MS: 990 (M+Na).
Ester 4-oxo-pentenové [3-acetylakrylové] kyseliny a paclitaxelu (v pozici -OH 2) (AAK-PTX) byl připraven stejným výše popsaným postupem pro přípravu LEV-PTX, a to reakcí 4-oxo-pentenové kyseliny s paclitaxelem pomocí DCC v DMF.
Výtěžek činil 86 %. Bod tání 138 až 139 °C. TLC (ethylacetát: hexan 3:1) jedna skvrna pri Rf=
0,6. MALDI-TOF MS: 968 (M+Na).
Ester 5-oxo-hexenové kyseliny a paclitaxelu (v pozici -OH 2) (OHE-PTX) byl připraven stejným výše popsaným postupem pro přípravu PTX-LEV, a to reakcí 5-oxo-hexenové kyseliny s paclitaxelem pomocí konjugačního činidla DCC v DMF.
Výtěžek činil 85 %. Bod tání 132 až 134 °C. TLC (ethylacetát: hexan 3:1) jedna skvrna při Rf0,65. MALDI-TOF MS: 982 (M+Na).
-6CZ 22175 Ul
Ester 5-oxo-hexenové kyseliny a docetaxelu (v pozici -OH 2) (OHE-DTX) byl připraven stejným výše popsaným postupem pro přípravu DTX-LEV, a to reakcí 5-oxo-hexenové kyseliny s docetaxelem pomocí konjugačního činidla DCC v DMF.
Výtěžek činil 86 %. Bod tání 84 až 86 °C. TLC (ethylacetát : hexan 3:1) jedna skvrna pri Rf = 5 0,7. MALDI-TOF MS: 940 (M+Na).
Příklad 2: Syntéza poíymemího prekurzoru - kopolymeru HPMA s MA-AH-NHNH2
Kopolymer poly(HPMA-co-MA-AH-NHNH2) byl připraven roztokovou radikálovou kopolymerizací HPMA a MA-AH-NHNH2 v methanolu při 60 °C podle drive popsaného postupu [Etrych patent].
Schéma 2 struktury poíymemího prekurzoru, kopolymeru poly(HPMA-co-MA-AH-NHNH2).
Příklad 3: Příprava polymemích konjugátů obsahujících deriváty léčiv (PHPMA-AH-NH-N-LEV-PTX, PHPMA-AH-NH-N=LEV-DTX, PHPMA-AH-NH-N=OPB-PTX, PHPMA-AH-NH-N=OPB-DTX,
PHPMA-AH-NH-N=OHE-PTX, PHPMA-AH-NH-N=OHE-DTX,
PHPM A-AH-NH-N=AKK-PTX a PHPM A-AH-NH-N=AKK-DTX)
Kopolymery s deriváty PTX, DTX a LTX navázanými k PHPMA nosiči hydrolyticky štěpitelnou hydrazonovou vazbou byly připraveny reakcí polymemích prekurzorů obsahujících hydrazidové skupiny s příslušným derivátem léčiva v methanolu za katalýzy kyselinou octovou.
Roztok 100 mg kopolymeru poly(HPMA-co-MA-AH-NHNH2) v 1,1 mL methanolu byl smíchán s roztokem LEV-PTX v 0,2 mL methanolu. Do míchané reakční směsi bylo při 25 °C po 1 minutě přidáno 40 pL kyseliny octové. Průběh reakce (úbytek LEV-PTX) byl sledován pomocí TLC (destičky Silikagel 60 F254, ethylacetát. Rf(LEV-PTX) = 0,8). Po 2 h byla reakční směs čištěna gelovou filtrací od volného derivátu léčiva na koloně naplněné Sephadexem LH-20 v methanolu. Polymemí frakce byla izolována, zahuštěna na vakuové odparce a produkt srážen do 50 mL ethylacetátu, izolován filtrací na fritě S4, promyt 150 mL ethylacetátu a sušen do konstantní hmotnosti. Obsah celkového PTX nebo jeho derivátu v polymemím konjugátu byl stanoven pomocí HPLC stanovení (HPLC Shimadzu systém) po úplné hydrolýze poíymemího konjugátu v roztoku HCl (pH 2) po dobu 1 h pri 37 °C a extrakci derivátu PTX do chloroformu.
<MW> a distribuce molekulových hmotností byly zjištěny pomocí kapalinové chromatografie (kolona TSKGel 4000 (300*10 mm), 20% 0,3 M octanový pufr (CH3COONa/CH3COOH; pH 6,5; 0,5 g/L NaN3) a 80% methanol, průtok 0,5 mL/min, detekce diferenciálním reťraktometrem, detektorem rozptylu světla (DAWN-DSP-F, Wyatt Technology, USA) a UV detektorem
-7CZ 22175 Ul (250 nm). Charakterizace polymemího léčiva: Celkový výtěžek reakce vazby léčiva: 96 mg (88 %), obsah celkového LEV-PTX 9,2 % váhových, obsah volného PTX <0,2 % z celkového obsahu PTX. Postup vazby derivátu PTX na polymemí prekurzory hydrazonovou vazbou byl stejný pro všechny typy prekurzorů a derivátů léčiv.
Schéma 3 struktury polymemího konjugátu PHPMA-AH-NH-N=DTX-LEV s navázaným derivátem, esterem kyseliny levulové a docetaxelu.
Příklad 4: Uvolňování PTX, DTX nebo jejich derivátů z polymemích konjugátu
Bylo měřeno množství PTX, DTX nebo jejich derivátů uvolněných z polymemích konjugátů po jejich inkubaci ve fosfátovém pufru o pH 5,0 (0,1 M fosfátový pufr obsahujícím 0,05 M NaCl) modelujícím intracelulámí prostředí a fosfátovém pufru pH 7,4 modelujícím prostředí krevního řečiště. Množství uvolňovaných léčiv nebo jejich derivátů v inkubačním roztoku bylo stanoveno pomocí HPLC (Shimadzu). V předem určených časových intervalech bylo odebíráno 200 pL inkubačního roztoku a po extrakci uvolněných léčiv a jejich derivátů do chloroformu bylo jejich množství stanoveno pomocí HPLC systému [Shimadzu HPLC systém vybavený kolonou s reverzní fází Chromolith Performance RP-18e (100* 4,6 mm) aUV-VIS detektoru Shimadzu SPDlOAVvp (230 nm); eluent voda-acetonitril s gradientem 50- 100 vol.% acetonitrilu, průtok 0,5 mL.min'1.
Po inkubaci konjugátů (koncentrace 5 mg/mL) ve fyziologickém prostředí při 37 °C (fosfátový pufr, pH 7,4) se uvolňují léčiva PTX a DTX (či jejich deriváty) významně pomaleji (Obr. 2) než v mírně kyselém prostředí při pH 5,0 modelujícím prostředí v endozomech a lysozomech nádorových buněk (Obr. 1). U obou léčiv má na rychlost uvolňování z polymemího konjugátu a poměr uvolněných složek (léčivo a jeho derivát) zásadní vliv struktura oxokyselinové spojky. Spojka tvořená kyselinou levulovou nebo 4-(2-oxopropyl)benzoovou umožňuje velmi rychlé uvolnění derivátu léčiva v pH 5, k hydrolýze esterové vazby mezi léčivem a kyselinou ovšem
-8CZ 22175 Ul dochází jen velmi pomalu. Naproti tomu spojka tvořená kyselinou 4-oxo-pentenovou stabilizuje jak hydrazonovou vazbu tak vazbu esterovou, nedochází k významnému uvolnění léčiva ani jeho derivátu. Při inkubaci ve fyziologickém prostředí o pH 7, 4 dochází u polymemích konjugátů se spojkou tvořenou kyselinou levulovou nebo 4-(2-oxopropyl)benzoovou k částečné hydrolýze hydrazonové vazby, ve srovnání s prostředním o pH 5 významně nižší rychlostí. V pH 7,4 je patrné, že stabilita esterové vazby mezi kyselinou levulovou a léčivem je nižší a z jedné třetiny se uvolňuje volné léčivo. Naproti tomu v případě spojky tvořené 4-(2-oxopropyl)benzoovou kyselinou se uvolňuje jen derivát léčiva, esterová vazba je stabilní. Rozpad derivátu léčiva na volné léčivo nebo přímé odštěpení léčiva z polymemího konjugátu je předpokládáno účinkem enzymů a to především karboxy esteráz.
Příklad 5: Ukázka in vitro biologické aktivity lineárních polymemích konjugátů docetaxelu a paclitaxelu při inkubaci s buňkami nádorových linií; T buněčného lymfomu EL-4 a karcinomu mléčné žlázy 4T1.
Tabulka 1 Hodnoty IC50 (v ng/ml)
| EL 4 | 4T1 | |
| DTX | 0,0001 | 0,0004 |
| DTX-LEV | 0,015 | 0,0031 |
| PHPMA-AH-NH-N-DTX-LEV | 3,9 | 0,750 |
| PTX | 0,0013 | 0,0003 |
| PTX-LEV | 0,19 | 0,0054 |
| PHPMA-AH-NH-N=PTX-LEV | 33,6 | 8,90 |
Příklad 6: Ukázka in vivo biologické aktivity lineárních polymemích konjugátů docetaxelu a paclitaxelu u myší inokulovaných T buněčným lymfomem EL4
Pro in vivo demonstraci aktivity konjugátů docetaxelu a paclitaxelu byl použit model myšího syngenního T buněčného lymfomu EL-4. Myším kmene C57BL/6 (samice) bylo v den 0 subkutánně implantováno l*105 nádorových buněk EL-4. Léčiva byla podána intravenózně (i.v.), a to ve dvou dávkách podaných v den 8 a den 12 po transplantaci nádorových buněk. První dávka byla podána v době, kdy byly nádory dobře vyvinuté, hmatatelné, o velikosti zhruba 300 mm3. V pokusu byla sledována velikost nádorů, tělesná váha myší, celkový zdravotní stav a přežití. Efekt konjugátu byl vždy porovnáván s efektem volného léčiva (DTX, PTX) a jeho derivátů (DTXLEV, PTX-LEV). Průměrná doba přežití neléčených kontrolních myší s lymfomem EL-4 byla 31,3 dne (SD 3,66, střední doba přežití 30,5 dne).
DTX, PTX a deriváty DTX-LEV, PTX-LEV byly pro i.v. aplikaci rozpouštěny ve směsi Cremophor EL (Sigma, USA) a etanol (1:1), po rozpuštění léčiva byl objem doplněn 4 objemovými díly PBS (fosfátem pufrovaný fyziologický roztok). Konjugáty PHPMA-AH-NH- N=DTX-LEV, PHPMA-AH-NH-N=PTX-LEV byly rozpouštěny v PBS. Objem každé jednotlivé dávky léčiva byl 0,2 ml. Aplikovány byly následující dávky léčiv: DTX a derivát DTX-LEV 2x20 mg ekvivalentu DTX/kg, konjugát PHPMA-AH-NH-N=DTX-LEV v dávce 2x20 a 2x40 mg DTX ekvivalentu/kg, PTX a derivát PTX-LEV v dávce 2x30 mg ekvivalentu PTX/kg, konjugát PHPMAAH-NH-N=PTX-LEV v dávce 2x60 mg ekvivalentu PTX /kg.
A. Protinádorová účinnost konjugátu PHPMA-AH-NH-N=DTX-LEV (Obr. 3)
Volný DTX indukoval úplnou regresi nádorů EL-4 u 4 myší ze 7 testovaných. Derivát LEV-DTX měl nižší efekt a indukoval úplnou regresi nádoru EL-4 u 1 z 8 testovaných myší. Konjugát PHPMA-AH-NH-N-DTX-LEV v dávce ekvivalentní volnému DTX (2x20 mg ekvivalentu DTX/kg) vyléčil také 1 myš ze skupiny 8 myší. Zvýšení dávky konjugátu na dvojnásobek (2x40 mg DTX ekvivalentu DTX/kg) však vedlo k vyléčení 7 myší ze skupiny (n = 8), V žádné
-9CZ 22175 Ul testované skupině nebyl zaznamenán úbytek váhy (jakožto znak toxicity léčiva). Myši, u nichž došlo k úplné regresi nádoru, zůstaly bez známek nádorového růstu či toxicity do dne 94, kdy jim byly znovu transplantovány nádorové buňky EL-4 ve stejné (tj. letální) dávce, a myši byly ponechány bez léčby. Tato druhá transplantace byla provedena pro průkaz imunologicky zprostředko5 váné resistence proti nádoru. Statisticky významný podíl myší vyléčených konjugátem PHPMAAH-NH-N=DTX-LEV (2x40 mg eq. DTX/kg) byl resistentní vůči nádoru EL-4 (5 myší resistentních ze 7, tj. 71 %). Odpovídající podíl resistentních jedinců byl i mezi myšmi vyléčenými volným DTX (ze 4 vyléčených myší byly 3 myši resistentní).
Závěr: Konjugát PHPMA-AH-NH-N=DTX-LEV měl významný protinádorový účinek u myší to C57BL/6 s lymfomem EL-4, jeho podání nebylo provázeno vedlejšími toxickými efekty a umožnilo ustavení resistence proti nádoru u 71 % vyléčených jedinců.
B. Protinádorová účinnost konjugátu PHPMA-AH-NH-N=PTX-LEV (Obr. 4)
Volný PTX se pro velmi omezenou rozpustnost nepodařilo myším podat (myši ihned po injekci hynuly). Derivát PTX-LEV neměl protinádorový efekt u lymfomu EL-4 (neprodloužil průměrné ís přežití, žádná myš se nevyléčila; n = 8). Konjugát PHPMA-AH-NH-N=PTX-LEV v dávce
2x60 mg ekvivalentu PTX/kg nevyléčil žádnou myš ani neprodloužil průměrné přežití (n = 8). V žádné skupině nebyl zaznamenán pokles váhy jako příznak toxicity léčiva.
Závěr: Derivát PTX-LEV (2x30 mg PTX eq./kg) ani konjugát obsahující derivát PTX (2x60 mg ekvivalentu PTX/kg) neměly při léčení syngenního myšího lymfomu EL-4 terapeuti tický efekt.
Příklad 7: Ukázka in vivo biologické aktivity lineárního polymemího konjugátu paclitaxelu u myší inokulovaných karcinomem mléčné žlázy 4T1 (Obr. 5)
Byl použit model myšího syngenního karcinomu mléčné žlázy 4T1. Myším kmene BALB/c (samice) bylo v den 0 subkutánně implantováno 1 * 10& nádorových buněk 4T1. Léčiva byla podána intravenózně (i.v.), a to ve dvou dávkách podaných v den 8 a den 12 po transplantaci nádorových buněk. První dávka byla podána v době, kdy byly nádory dobře vyvinuté, hmatatelné, o velikosti zhruba 300 mm3. V pokusu byla sledována velikost nádorů, tělesná váha myší, celkový zdravotní stav a přežití. Efekt konjugátu byl porovnáván s efektem volného léčiva (PTX) a jeho derivátu (PTX-LEV). Průměrné přežití neléčených kontrolních myší bylo 34,9 dní (SD 2,59; střední doba přežití 35 dní).
PTX, PTX-LEV a konjugát PHPMA-AH-NH-N=PTX-LEV byly pro i.v. aplikaci připraveny stejně jak uvedeno výše (viz Příklad 6 A, B). Aplikovány byly tyto dávky: PTX a derivát PTXLEV v dávce 2x30 mg ekvivalentu PTX/kg, konjugát PHPMA-AH-NH-N=PTX-LEV v dávce 2x60 mg ekvivalentu PTX /kg.
Konjugát PHPMA-AH-NH-N=PTX-LEV úplně vyléčil 3 z 8 testovaných myší. Po aplikaci derivátu PTX-LEV došlo k regresi nádoru 4T1 u 1 z 8 myší. Aplikace volného léčiva (PTX) byla provázena významnými nežádoucími účinky: aplikace druhé dávky i.v. vyvolala prudkou reakci (křeče, později špatný celkový stav - naježená srst, ochablost, který trval nejméně 24 hodin) u první z myší. Ostatním myším ve skupině pak byla druhá dávka snížena o 10 % a aplikována intraperitoneálně místo i.v. Vyléčila se pouze jedna myš, které byla dávka injikována i.v., u ostatních se neprojevil žádný léčebný efekt PTX. V žádné pokusné skupině se neprojevilo snížení váhy jako příznak toxicity léčiva.
Pro zjištění resistence vyléčených myší proti nádoru 4T1 byly vyléčené myši znovu transplantovány 129 dní po první transplantaci nádorových buněk. Podruhé bylo injikováno 1χ105 buněk
4T1 s.c. a myši byly ponechány bez léčby. U všech těchto myší (3 vyléčené konjugátem
PHPMA-AH-NH-N=PTX-LEV, 1 vyléčená PTX-LEV) nádory nerostly, to znamená, že tyto myši byly resistentní vůči danému nádoru.
- 10CZ 22175 Ul
Závěr: Konjugát PHPMA-AH-NH-N=PTX-LEV měl významný protinádorový účinek u myší BALB/c s karcinomem mléčné žlázy 4T1, jeho podání nebylo provázeno vedlejšími toxickými efekty a umožnilo ustavení resistence proti nádoru u 38 % vyléčených jedinců.
Příklad 8: Ukázka in vivo biologické aktivity lineárních polymemích konjugátů docetaxelu s různým obsahem léčiva u myší inokulovaných T buněčným lymfomem EL4 (Obr. 6)
Byl použit nádorový model lymfomu EL-4, popsaný výše (Příklad 6). Konjugáty PHPMA-AHNH-N-DTX-LEV s obsahem léčiva 8,2 hmotn. % DTX (9,1 hmotn. % DTX-LEV) a 16,3 hmotn. % DTX (18,0 hmotn. % DTX-LEV) byly pro aplikaci rozpuštěny v PBS (0,2 ml), a byla použita suboptimální dávka 2*30 mg ekvivalentu DTX/kg intravenózně, den 9 a 13 po transplantaci nádorových buněk.
Konjugát s nižším obsahem léčiva (8,2 % DTX) vyléčil 1 myš z 8 testovaných a u ostatních statisticky významně prodloužil přežití (neléčené kontroly průměr přežití 27,25 dne, SD 1,64, medián 28 dní; léčené myši průměr 41,75 dne, SD 6,54, medián 45 dní; p<0, 01). Konjugát s vyšším obsahem léčiva (16,3 % DTX) vyléčil také 1 z 8 testovaných myší, ale přežití ostatních myší ve skupině nebylo významně prodlouženo.
Závěr: Obsah derivátu léčiva v konjugátu PHPMA-AH-NH-N=DTX-LEV měl významný vliv na protinádorový účinek u myší C57BL/6 s lymfomem EL-4 pri podání suboptimální dávky 2x30 mg ekvivalentu DTX/kg. Polymerní konjugát s nižším obsahem prokázal vyšší protinádorovou aktivitu.
Literatura:
R. Duncan, J.B. Lloyd, J. Kopeček, P. Rejmanová, J. Strohalm, K. Ulbrich, B. Říhová, V. Chytrý, Synthetic Polymeric Drugs (1985), Czech. PV 0095/85, Australia 589587, Canada 130053, Denmark 164485, Europe 0187547, US 5,037,883, Japan 000137/86.
R. Duncan, N-(2-HydroxypropyI)methacryIamide copolymer conjugates, in j Swarbrick (ed), Drugs and the Pharmaceutiutical Sciences: Boča Raton, Taylor & Francis, p. 1-92 (2005).
T. Etrych, M. Jelínková, B. Říhová, K. Ulbrich, New HPMA copolymers containing doxorubicin bound via pH sensitive linkage. Synthesis, in vitro and in vivo biological properties. J. Controlled Release 73, 89-102 (2001).
T. Etrych, P. Chytil, M. Jelínková, B. Říhová, K. Ulbrich, Synthesis of HPMA Copolymers Containing Doxorubicin Bound via a Hydrazone Linkage. Effect of Spacer on Drug Release and in vitro Cytotoxicity. Macromolecular Biosci. 2, 43-52 (2002).
T. Etrych, P. Chytil, M, Pechar, M. Studenovský, B. Říhová, K. Ulbrich, Způsob přípravy polymemích konjugátů doxorubicinu s pH-rizeným uvolňováním léčiva, CZ 297 827 B6.
T. Etrych, P. Chytil, K. Ulbrich, T. Mrkvan, B. Říhová, Polymerní léčivo a způsob jeho výroby. CZ 298945 B6.
T. Etiych, K. Ulbrich: Polymerní konjugáty doxorubicinu s pH-rizeným uvolňováním léčiva a způsob jejich přípravy. CZ PV-2006-505, CZ pat. 299053 B6.
T. Etrych, P. Chytil, T. Mrkvan, M. Sírová, B. Říhová, K. Ulbrich, Conjugates of doxorubicin with graft HPMA copolymers for passive tumor targeting: Journal of Controlled Release 132, 184-192 (2008).
R.B. Greenwald, PEG drugs: an overview, Journal of Controlled Release 74, 159-171 (2001).
R.B. Greenwald, Y.H. Choe, J. McGuire, C.D. Conover, Effective drug delivery by PEGylated drug conjugates, Advanced Drug Delivery Reviews 55, p. 217-250 (2003).
-11CZ 22175 Ul
R. B. Greenwald, A. Pendri, D. Bolikal, Highly Water-Soluble Taxol Derivatives - 7Polyethylene Glycol Carbamates and Carbonates, Journal of Organic Chemistry 60, 331-336 (1995).
P. Chytil, T. Etrych, M. Hrubý, K. Ulbrich, B. Říhová: Micelámí nosiče léčiv s protinádorovou aktivitou. CZ PV 2006-207.
P. Chytil, T. Etrych, Č. Koňák, M. Šírová, T. Mrkvan, J. Bouček, B. Říhová, K. Ulbrich, New HPMA copolymer-based drug carriers with covalently bound hydrophobic substituents for solid tumour targeting, Journal of Controlled Release 127,121-130 (2008).
J. Kopeček, P Kopečková, T. Minko, Z. Lu, HPMA Copolymer-Anticancer Drug Conjugates: Design, Activity and Mechanism of Action. Europ. J. Pharm. Biopharm. 50, 61-81 (2000).
J. Kopeček, P. Kopečková, T. Minko, Z. Lu, C.M. Peterson, Water soluble polymers ín tumor targeted delivery, J. Controlled Release 74, 165-173 (2001).
F. Kratz, U. Beyer, M.T. Schutte, Drug-polymer conjugates contaíning acid-cleavable bonds, Crit, Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 16, 245-288 (1999).
F. Kratz, I.A. Muller, C. Ryppa, A. Wamecke, Prodrug strategies in anticancer chemotherapy, Chemmedchem 3, 20-53 (2003).
S. Ng, A. Sparreboom, Y. Shaked, C. Lee, S. Man, N. Desai, P. Soon-Shiong, W.D. Figg, R. Korbel, Influence of FormulationVehicle on Metronomic Taxane Chemotherapy: AlbuminBound versus Cremophor EL-Based Paclitaxel, Clin Cancer Res 26; 4331-4338, 2006,
Z. Noguchi, J. Wu, R, Duncan, J. Strohalm, K. Ulbrich, T. Akaike, H. Maeda, Early phase tumor accumulation ofmacromolecules: a great difference in clearance rate between tumor and normál tissues, Jpn. J. Cancer Res. 89, 307-314 (1998).
A. Pendri, C.D. Conover, R.B. Greenwald, Antitumor activity ofpaclitaxel-2 '-glycinate conjugated to polyethylene glycol): a water-soluble prodru, Anti-Cancer Drug Design 13, 387395 (1998).
B. Říhová, M. Jelínková, J. Strohalm, V. Šubr, D. Plocová, O. Hovorka, M. Novák, D. Plundrová, Y. Germano, K. Ulbrich, Polymeric Drugs Based on Conjugates of Synthetic and Natural Macromolecules Π. Anti-cancer Activity of antibody or (Fab')2-targeted Conjugates and Combined Therapy with Immunomodulators. J. Controlled Rel. 64,241-261 (2000).
B. Říhová, T. Etrych, M. Pechar, M. Jelínková, M. Šťastný, O. Hovorka, M. Kovář, K. Ulbrich, Doxorubicin bound to a HPMA copolymer carrier through hydrazone bond is effective also in a cancer cell line with a limited content of lysosomes, J. Controlled Release 74, 225-232 (2001).
R. Satchi-Fainaro, R. Duncan, C. Bames, Polymer therapeutics for cancer: Current status and future challenges, in R Satchi-Fainaro and R Duncan (eds), Advances in Polymer Science, Polymer Therapeutics Π: Berlin / Heidelberg, Springer, p. 1-65 (2006).
L.W. Seymour, Y. Miyamoto, H. Maeda, M. Brereton, J. Strohalm, K. Ulbrich, R. Duncan, Influence of Molecular-Weight on Passive Tumor Accumulation of A Soluble Macromolecular Drug Carrier, Eur.J.Cancer 31 A, 766-770 (1995).
J.M.M. Terwogt, W.T. Huinink, J.H.M. Schellens, M. Schot, I.A.M. Mandjes, M. Zurlo, M. Rocchetti, H. Rosing, F.J. Koopman, J.H. Beijnen, Phase I clinical and pharmacokinetic study of PNUI66945, a novel water-soluble polymer-conjugated prodrug of paclitaxel, Anti-Cancer Drugs 12,315-323 (2001).
J.M.M. Terwogt, H. Rosing, M. Rocchetti, E. Frigerio, D. Fraier, F.J. Koopman, J.H.M. Schellens, W.T. Huinink, J.H. Beijnen, High-performance liquid chromatographic methods for the determination of a novel polymer-bound paclitaxel derivative and free paclitaxel in human plasma, J.Liq.Chromatogr.Relat.Technol. 23, 1233-1251 (2000).
- 12CZ 22175 Ul
K, Ulbrich, V. Šubr, J. Strohalm, D. Plocová, M. Jelínková, B. Říhová, Polymeric Drugs Based on Conjugates of Synthetic and Natural Macromolecules I. Synthesis and Physico-chemical Characterisation. J. Controlled Rel. 64, 63-79 (2000).
K. Ulbrich, T. Etrych, P. Chytil, M. Jelínková, B. Říhová, Antibody-Targeted PolymerDoxorubicin Conjugates with pH-Controlled Activation, J. Drug Targeting 12, 477-489 (2004) (A).
K. Ulbrich, V. Šubr, Polymeric Anticancer Drugs with pH-Controlled Activation, Adv. Drug Delivery Rev. 56/7, 1025-1052 (2004) (B).
K. Ulbrich, T. Etrych, B. Říhová, M. Jelínková, M. Kovář; pH Senzitivní polymerní konjugáty antracyklinového kancerostatika pro cílenou terapii. CZ 293787 B6.
U. Vanhoefer, et al., Comparative antitumor efficacy of docetaxel and paclitaxel in nudě mice bearing human tumor xenografts that overexpress the multidrug resistance protein (MRP), Annals of Oncology 8, 1221-1228 (1997).
J.W. Winter, Paclitaxel poliglumex (XYOTAX, CT-2103): A macromolecular taxane, Journal of Controlled Release 109, 120-126 (2005).
Claims (6)
- NÁROKY NA OCHRANU1. Polymerní konjugát sestávající ze základního kopolymeru a na tento kopolymer hydrazonovou vazbou kovalentně vázaného derivátu léčiva, kde základní kopolymer je vytvořen monomerními jednotkami N-2-hydroxypropylmethakrylarnidu (HPMA) a monomemími jednotkami na aminoskupině methakryloylované aminokyseliny nebo na aminoskupině methakiyloylovaného oligopeptidu, kde acyl aminokyseliny tvořící součást monomemí jednotky nebo složený acyl oligopeptidu tvořícího součást monomemí jednotky je vybrán ze skupiny sestávající z glycylu, glycylglycylu, beta-alanylu, 6-aminohexanoylu (AH), 4-aminobenzoylu, GlyPheGly, GlyLeuGly, GlyLeuPheGly a GlyPheLeuGly, vyznačující se tím, že derivát léčiva je sloučenina léčiva vybraného ze skupiny složené z paclitaxelu (PTX), docetaxelu (DTX) a larotaxelu (LTX) vzniklá acylací hydroxylové skupiny v pozici 2 léčiva oxokyselinou mající 5 až 10 uhlíkových atomů a hydrazonová vazba je vytvořena mezi uhlíkovým atomem původně nesoucím karbonylovou skupinu oxokyseliny a koncovým dusíkovým atomem hydrazidové skupiny základního kopolymeru.
- 2. Konjugát podle nároku 1 obecného vzorce I-13CZ 22175 Ul kde symbol SPj představuje na aminoskupině methakryloylovanou aminokyselinu nebo na aminoskupině methakryloylovaný oligopeptid, n, m a p jsou přirozená Čísla a symboly R1 až R4 představují substituenty tvořící jednu ze skupin a), b), c), kde5 a) R1 = benzoyl, R2 = acetyl, R3 = methyl, R4 = hydroxy, takže derivát léčívaje derivátem paclitaxelu,b) R1 = tert-butoxykarbonyl, R2 = H, R3 = methyl, R4 = hydroxy, takže derivát léčiva je derivátem docetaxelu,c) R1 = tert-butoxykarbonyl, R2 = acetyl a R3 představuje společně s R4 methylenovou skupinu, to takže derivát léčívaje derivátem larotaxelu, vyznačující se tím, že oxokyselina je vybrána ze skupiny složené z kyseliny levulové, 4-(2-oxopropyl)benzoové, 4-oxo-pent-2-enové, 5-oxo-hex-2-enové a 6-oxo-hept-2-enové, takže symbol =R- znamená15
- 3. Konjugát podle některého z předchozích nároků, vyznačující se tím, že monomem! jednotky HPMA tvoří 70 až 98 molámích %, monomemí jednotky s hydrazidovými funkčními skupinami 1,5 až 29,5 molámích % a jednotky s navázaným derivátem cytostatika 0,5 až 10 molámích % všech monomemích jednotek konjugátu.
- 4. Konjugát podle některého z předchozích nároků, vyznačující se tím, že sestává20 z hlavního řetězce nesoucího léčivo a dalších řetězců-roubů, které případně rovněž nesou léčivo, přičemž tyto rouby jsou k hlavnímu řetězci připojeny vazbou v organismu Štěpitelnou.-14CZ 22175 Ul
- 5. Konjugát podle některého z předchozích nároků, vyznačující se tím, že pokud je lineární, spadá jeho molámí hmotnost do intervalu 10 000 až 50 000 g/mol a pokud je roubovaný, spadá jeho molámí hmotnost do intervalu 50 000 až 250 000 g/mol.
- 6. Derivát léčiva podle nároku 1 vybraný ze skupinyLEV-PTX (1S,2S,3R,4S,7R,9S,1OS,12R,15S) -4,I2-Diacetoxy-15-{[(2R,3S)-3-(benzoylamino)-2-(4-oxo pentanoyloxy)-3-feny!propanoyl]oxy} -1,9-dihydroxy-l 0,14,17,17-tetramethyl-l 1 -oxo-6oxatetracyklo-[heptadec-13-en-2-yl-benzoát],LEV-DTX1,76,106-trihydroxy-9-oxo-5 P,20-epoxytax-11 -en-2a,4,13a-triyl-4-acetát2-benzoát-l 3- {(2R,3S)3-[(tert-butoxykarbonyl)amino]-2-(4-oxo-pentanoyloxy)-3-fenyIpropanoát},- 15CZ 22175 UlOPB-PTX (1S,2S,3R,4S,7R,9S,1OS,12R,15S) -4,12-Diacetoxy-15-{[(2R,3S)-3-(benzoylamino)-2-[4-(2oxopropyl) benzoyloxy]-3-fetiylpropanoyl]oxy} -1,9-dihydroxy-10,14,17,17 -tetramethyl-11 -oxo5 6-oxatetracyklo-[heptadec-l 3-en-2-yl-benzoát],OPB-DTX l,7p,10p-trihydroxy-9-oxo-5p,20-epoxytax-l l-en-2a,4,13a-triyl-4-acetát-2-benzoát-13{(2R,3 S)-3- [(tert-butoxykarbonyl)amino] -2-[4-(2-oxopropyl)-benzoyloxy] -3 -fenylpropanoát},-16CZ 22175 UlAAK-PTX (1S,2S,3R,4S,7R,9S,1OS,12R,15S) -4,12-Diacetoxy-15-{[(2R,3S)-3-(benzoyiamino)-2-[4oxopent-2-enoyloxy]-3-fenylpropanoyl]oxy} -1,9-dihydroxy-10,14,17,17-tetramethyl-l 1 -oxo-65 oxatetracyklo-[heptadec-l 3-en-2-yl-benzoát],OHE-PTX (1S,2S,3R,4S,7R,9S,1OS,12R,15S) -4,12-Diacetoxy-15-{[(2R,3S)-3-(benzoylainino)-2-[4oxohex-2-enoyloxy] -3-fenylpropanoyl]oxy} -1,9-dihydroxy-10,14,17,17-tetramethyl-11 -oxo-6ío oxatetracyklo-[heptadec-l 3-en-2-yl-benzoát],- 17 CZ 22175 UlOHE-DTX1,7β, 10p-trihydroxy-9-oxo-5p,20-epoxytax-l 1 -en-2a,4,13a-triyl-4-acetát-2-benzoát-l 3 {(2R,3S)-3-[(tert-butoxykarbonyl)amino]-2-[4-oxohex-2-enoyloxy]-3-fenylpropanoát}.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ201023236U CZ22175U1 (cs) | 2009-02-13 | 2009-02-13 | Polymerní konjugáty paclitaxelu a docetaxelu s pH řízeným uvolňováním kancerostatika |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ201023236U CZ22175U1 (cs) | 2009-02-13 | 2009-02-13 | Polymerní konjugáty paclitaxelu a docetaxelu s pH řízeným uvolňováním kancerostatika |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ22175U1 true CZ22175U1 (cs) | 2011-05-09 |
Family
ID=43989621
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ201023236U CZ22175U1 (cs) | 2009-02-13 | 2009-02-13 | Polymerní konjugáty paclitaxelu a docetaxelu s pH řízeným uvolňováním kancerostatika |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ22175U1 (cs) |
-
2009
- 2009-02-13 CZ CZ201023236U patent/CZ22175U1/cs not_active IP Right Cessation
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Etrych et al. | New HPMA copolymers containing doxorubicin bound via pH-sensitive linkage: synthesis and preliminary in vitro and in vivo biological properties | |
| JP5687899B2 (ja) | 生理活性物質の高分子結合体 | |
| JP6013424B2 (ja) | Ｈｐｍａ−ドセタキセルコンジュゲートおよびその使用 | |
| IL263973A (en) | Protein-polymer-drug couplings | |
| CZ200985A3 (cs) | Polymerní konjugáty paclitaxelu a docetaxelu s pH rízeným uvolnováním kancerostatika | |
| Nakamura et al. | Comparison between linear and star-like HPMA conjugated pirarubicin (THP) in pharmacokinetics and antitumor activity in tumor bearing mice | |
| JP5749273B2 (ja) | 抗がん剤送達のためのポリマー系 | |
| WO2008034391A1 (en) | Grafted macromolecular conjugates of doxorubicin with anticancer activity and method of their preparation | |
| Polyak et al. | Polymer conjugates for focal and targeted delivery of drugs | |
| SK2912004A3 (en) | pH-sensitive polymeric conjugates of an anthracycline cancerostatic drug for targeted therapy | |
| Mero et al. | A biodegradable polymeric carrier based on PEG for drug delivery | |
| Hudecz et al. | Drug targeting by macromolecules without recognition unit? | |
| CZ308419B6 (cs) | Blokový kopolymer pro překonání lékové rezistence nádorů k chemoterapii, jeho polymerní konjugát s léčivem, farmaceutická kompozice je obsahující, způsob jejich přípravy a jejich použití | |
| CZ22175U1 (cs) | Polymerní konjugáty paclitaxelu a docetaxelu s pH řízeným uvolňováním kancerostatika | |
| JP5734209B2 (ja) | プロドラッグ | |
| WO2017176648A1 (en) | Topoisomerase poisons | |
| Uddin et al. | In Vitro Cytotoxicity and In Vivo Anti-Tumor Efficacy of CD13 Targeted Peptide-Monomethyl Auristatin E (MMAE) Conjugates | |
| WO2021121446A1 (en) | Copolymer with hydrolytic release of cancerostatic agent cytarabine, method of its preparation and use thereof | |
| CZ293886B6 (cs) | pH senzitivní polymerní konjugáty antracyklinového kancerostatika pro cílenou terapii | |
| EP2349343A2 (en) | Polymeric composition with synergistic effect in treatment of tumour diseases |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG1K | Utility model registered |
Effective date: 20110509 |
|
| ND1K | First or second extension of term of utility model |
Effective date: 20121213 |
|
| ND1K | First or second extension of term of utility model |
Effective date: 20151203 |
|
| MK1K | Utility model expired |
Effective date: 20190213 |