SK284564B6 - Použitie beta-L-nukleozidovej zlúčeniny na výrobu liečivého prípravku na liečenie nádoru - Google Patents

Použitie beta-L-nukleozidovej zlúčeniny na výrobu liečivého prípravku na liečenie nádoru Download PDF

Info

Publication number
SK284564B6
SK284564B6 SK281-97A SK28197A SK284564B6 SK 284564 B6 SK284564 B6 SK 284564B6 SK 28197 A SK28197 A SK 28197A SK 284564 B6 SK284564 B6 SK 284564B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
tumor
compound according
cancer
oddc
medicament
Prior art date
Application number
SK281-97A
Other languages
English (en)
Other versions
SK28197A3 (en
Inventor
Chung K. Chu
Yung-Chi Cheng
Original Assignee
University Of Georgia Research Foundation, Inc.
Yale University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US08/301,298 external-priority patent/US5817667A/en
Application filed by University Of Georgia Research Foundation, Inc., Yale University filed Critical University Of Georgia Research Foundation, Inc.
Publication of SK28197A3 publication Critical patent/SK28197A3/sk
Publication of SK284564B6 publication Critical patent/SK284564B6/sk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/04—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

Použitie (-)-(2S,4S)-1-(2-hydroxymetyl-1,3-dioxolán-4-yl)- cytozínu (označovaného tiež ako L-OddC) alebo jeho derivátu na výrobu liečivého prípravku na liečenie nádorov, vrátane rakovinových, u živočíchov, vrátane ľudí.ŕ

Description

Oblasť techniky
Vynález sa týka oblasti lekárskej chémie a najmä (-)-(2S,4S)-1 -(2-hydroxymetyl-1,3-dioxolán-4-yl)cytozínu (označovaného tiež ako (-)-OddC) alebo jeho derivátu a jeho použitia na liečenie rakoviny u živočíchov, včítane ľudí.
Doterajší stav techniky
Nádor je neregulovaná dezorganizovaná proliferácia bunkového rastu. Nádor je malígny alebo rakovinový, ak má vlastnosti invazivity a metastázy. Invazivita označuje tendenciu nádoru vstupovať do okolitého tkaniva prelomením spodinových dosiek, ktoré definujú hranice tkanív, pričom často dochádza ku vstupu do obehového systému organizmu. Metastáza označuje tendenciu nádoru migrovať do iných oblastí organizmu a tvoriť oblasti proliferácie vzdialené od miesta pôvodného výskytu.
V súčasnosti je rakovina na druhom mieste príčin úmrtí v Spojených štátoch. Rakovina bola diagnostikovaná u viac ako 8 000 000 osôb v Spojených štátoch a očakáva sa 1 208 000 nových diagnóz v r. 1994. Ročne umiera v tejto krajine na rakovinu vyše 500 000 ľudí.
Rakovina nie je plne pochopená na molekulárnej úrovni. Je známe, že vystavenie bunky pôsobeniu karcinogénu, ako sú určité vírusy, určité chemikálie alebo žiarenie, vedie ku zmene DNA, ktorá inaktivuje „supresorový“ gén alebo aktivuje „onkogén“. Supresorové gény sú rastovo regulačné gény, ktoré po mutácii už nemôžu kontrolovať rast buniek. Onkogény sú spočiatku normálne gény (nazývané proonkogény), z ktorých sa mutáciou alebo zmeneným kontextom expresie stanú transformačné gény. Produkty transformačných génov vyvolávajú nesprávny rast buniek. Onkogény môžu vzniknúť genetickou zmenou z viac ako dvadsiatich rôznych normálnych bunkových génov. Transformované bunky sa od normálnych buniek líšia v mnohých ohľadoch včítane bunkovej morfológie, interakcií bunka-bunka, obsahu membrán, cytoskeletámej štruktúry, sekrécie bielkovín, génovej expresie a mortality (transformované bunky môžu neobmedzene rásť).
Všetky rôzne bunkové typy v organizme môžu byť transformované na benígne alebo malígne nádorové bunky. Najčastejšími miestami nádorov sú pľúca, potom nasleduje kolorektum, prsník, prostata, močový mechúr, pankreas a potom vaječník. Medzi ďalšie prevládajúce typy rakoviny patrí leukémia, rakoviny centrálneho nervového systému včítane rakoviny mozgu, melanóm, lymfóm, erytroleukémia, rakovina maternice a rakovina hlavy a krku.
V súčasnosti sa rakovina primárne lieči jedným z týchto troch typov terapie alebo ich kombinácií: chirurgie, ožarovania a chemoterapie. Chirurgia spočíva v hrubom odstránení zasiahnutého tkaniva. Je síce niekedy úspešná pri odstraňovaní nádorov umiestnených v určitých miestach, napríklad v prsníku, hrubom čreve a na koži, ale nemožno ju použiť na ošetrenie nádorov umiestnených v iných oblastiach, ako je chrbtica, ani na ošetrenie rozptýlených neoplastických stavov, ako je leukémia.
Pri chemoterapii dochádza k prerušeniu replikácie buniek alebo bunkového metabolizmu. Používa sa najčastejšie pri liečbe leukémie, rovnako ako rakoviny prsníka, pľúc a semenníkov.
V súčasnosti sa na liečbu rakoviny používa päť hlavných skupín chemoterapeutických prostriedkov: prírodné produkty a ich deriváty, antracyklíny, alkylačné prostriedky, antiproliferatívne prostriedky (nazývané tiež antimeta bolity) a hormonálne prostriedky. Chemoterapeutické prostriedky sa často označujú ako antineoplastické látky.
Pôsobenie alkylačných prostriedkov spočíva v alkylácii a sieťovaní guanínu a prípadne iných báz v DNA a zastavení bunkového delenia. Medzi typické alkylačné prostriedky patria dusíkaté horčice, etylénimínové zlúčeniny, alkylsulfáty, cisplatina a rôzne nitrózomočoviny. Nevýhodou týchto zlúčenín je, že napadajú nielen maligne bunky, ale aj iné bunky, ktoré sa delia prirodzene, napríklad bunky kostnej drene, kože, gastrointestinálnej sliznice a fetálneho tkaniva.
Antimetabolity sú typicky reverzibilné alebo ireverzibilné enzýmové inhibitory alebo zlúčeniny, ktoré inak interferujú s replikáciou, transláciou alebo transkripciou nukleových kyselín.
Bolo identifikovaných niekoľko syntetických nukleozidov, ktoré majú protirakovinovú účinnosť. Známym nukleozidovým derivátom so silnou protirakovinovou účinnosťou je 5-fluóruracil. 5-Fluóruracil je klinicky používaný pri liečení malígnych nádorov včítane napríklad kareínómov, sarkómov, rakoviny kože, rakoviny zažívacích orgánov a rakoviny prsníka. Vyvoláva však vážne nepriaznivé reakcie, ako je nauzea, alopécia, hnačky, stomatitída, leukocytová trombocytopénia, anorexia, pigmentácia a edém. Deriváty 5-fluóruracilu s protirakovinovou účinnosťou sú opísané v patente US 4,336.381 a v japonských patentových publikáciách č. 50-50383, 50-50384, 50-64281, 51-146482 a 53-84981.
Patent US 4 000 137 uvádza, že produkt peroxidačnej oxidácie inozínu, adenozinu alebo cytidínu metanolom alebo etanolom má účinnosť proti lymfocytickej leukémii.
Cytozínarabinozid (označovaný tiež Cytarabin, araC a Cytosar) je nukleozidový analóg deoxycytidínu, ktorý bol prvý raz syntetizovaný v r. 1950 a zavedený do klinickej medicíny v r. 1963. V súčasnosti je významným liečivom v prípade akútnej myeloidnej leukémie. Je účinný tiež proti akútnej lymfocytickej leukémii a v menšej miere je použiteľný pri chronickej myelocytickej leukémii a nehodgkinovskom lymfóme. Primárnym účinkom araC je inhibícia syntézy jadrovej DNA; Handschumacher, R. a Cheng, Y., „Purine and Pyrimidine Antimetabolites“, Cancer Medicíne, kapitola XV-1, 3. vyd., ed. J. Holland a ď., vyd. Lea and Febigol.
5-Azacytidín je analóg cytidínu, ktorý sa primáme používa pri liečbe akútnej myelocytickej leukémie a myelodysplastického syndrómu.
2-Fluóradenozín-5'-fosfát (Fludara, označovaný tiež FaraA) je jeden z najúčinnejších prostriedkov pri liečbe chronickej lymfocytickej leukémie. Jeho pôsobenie spočíva v inhibícii syntézy DNA. Pôsobenie F-araA na bunky je spojené s hromadením buniek na rozhraní fáz Gl/S a vo fáze S; ide teda o liečivo špecifické pre S fázu bunkového cyklu. Zabudovanie aktívneho metabolitu F-araATP oneskoruje predlžovanie reťazca DNA. F-araA je tiež účinným inhibítorom ribonukleotidreduktázy, kľúčového enzýmu zodpovedného za tvorbu dATP.
2-Chlórdeoxyadenozín je použiteľný pri liečbe nižších stupňov neoplazmov B buniek, ako je chronická lymfocytická leukémia, nehodgkinovský lymfóm a leukémia vlasatých buniek. Spektrum účinnosti je podobné ako pri prípravku Fludara. Zlúčenina inhibuje syntézu DNA v rastúcich bunkách a opravy DNA v pokojových bunkách.
Aj keď bolo identifikovaných a je v súčasnosti používaných na liečbu rakoviny mnoho chemoterapeutik, hľadajú sa nové prostriedky, ktoré by boli efektívne a mali by nízku toxicitu proti zdravým bunkám.
Cieľom vynálezu je teda nájsť zlúčeniny, ktoré majú protinádorovú a najmä protirakovinovú účinnosť.
Ďalej je cieľom vynálezu nájsť farmaceutické kompozície na liečbu rakoviny.
Podstata vynálezu
Vynález sa týka použitia (-)-(2S,4S)-l-(2-hydroxymetyl-l,3-dioxolán-4-yl)cytozínu (označovaného tiež (-)OddC, L-OddC alebo (-)-L-OddC), jeho farmaceutický prijateľnej soli vrátane 5'- alebo N4-alkylovaného alebo acylovaného derivátu alebo ich farmaceutický prijateľnej soli na výrobu liečivého prípravku na liečenie nádorov, a obzvlášť rakoviny, u ľudí a iných hostiteľských živočíchov.
Vo výhodnom uskutočnení má (-)-(2S,4S)-l-(2-hydroxymetyl-l,3-di-oxolán-4-yl)cytozín formu uvedeného enantioméru (L-enantioméru) v podstate bez prítomnosti zodpovedajúceho enantioméru (t. j. enantioméme obohatenú formu, vrátane enantioméme čistej formy).
(-)-(2S,4 S)-1 -(2-Hydroxymetyl-1,3-dioxolán-4-yl)cytozín je prvým príkladom „L“ nukleozidu, ktorý má protinádorovú účinnosť. (-)-(2S,4S)-l-(2-Hydro-xymetyl-l,3-dioxolán-4-yl)cytozín má štruktúru zodpovedajúcu vzorcu (I)
Zistilo sa, že (-)-(2S,4S)-l-(2-hydroxymetyl-l,3-dioxolán-4-yl)cytozín má v hostiteľovi významnú účinnosť proti rakovinovým bunkám a nízku toxicitu proti zdravým bunkám. Ako neobmedzujúce príklady rakoviny, ktorú možno liečiť pomocou tejto zlúčeniny, je možné uviesť rakovinu pľúc, kolorekta, prsníka, prostaty, močového mechúra, nosohltanu, pankreasu, vaječníkov, leukémiu, lymfóm, rakovinu hlavy a krku, rakovinu centrálneho nervového systému (včítane rakoviny mozgu), karcinóm krčku maternice, mclanóm a hepatocelulárnu rakovinu.
V alternatívnom uskutočnení je opísané použitie derivátu L-OddC vzorca
kde R je F, Cl, -CH3, -C(H)=CH2, -Br, -NO2, -OCH alebo -C=N a R1 je vodík, C, až Cj8 alkyl, C2 až C19 acyl, monofosfát, difosfát alebo trifosfát, alebo jeho farmaceutický prijateľného derivátu, výhodne v enantioméme obohatenej forme, na výrobu liečivého prípravku na liečenie nádorov, a najmä rakoviny, u ľudí alebo iných hostiteľských živočíchov.
Hoci výhodným uskutočnením vynálezu je použitie účinných zlúčenín alebo ich derivátov, alebo ich solí v prirodzene sa nevyskytujúcej konfigurácii (konfigurácii L), môžu byť opisované zlúčeniny alebo ich deriváty, alebo soli alternatívne podávané v prirodzene sa vyskytujúcej konfigurácii (konfigurácii D) alebo ako racemická zmes.
Ktorákoľvek z tu opisovaných zlúčenín na použitie na liečenie nádorov môže byť na zvýšenie účinnosti terapie podávaná v kombinácii s inými protinádorovými farmaceutickými prostriedkami alebo alternatívne k nim. Ako príklady možno uviesť prírodné produkty a ich deriváty, antracyklíny, alkylačné prostriedky, antiproliferatívne prostriedky (nazývané tiež antimetabolity) a hormonálne prostriedky. Konkrétne tieto prostriedky zahŕňajú, bez toho, aby sa na ne obmedzovali, dusíkaté horčice, etylénimínové zlúčeniny, alkylsulfáty, cisplatinu, nitrózomočoviny, 5-fluóruracil, cytozínarabinozid, 5-azacytidín, 2-fluór-adenozín-5'-fosfát, 2-chlórdeoxyadenozín, tamoxifén, aktinomycín, amsakrín, bleomycín, karboplatinu, karmustín, cyklofosfamid, cyklosporín, daunorubicín, doxirubicín, interleukín, lomustín, merkaptopurín, metotrexát, mitomycín, tioguanín, vinblastín, rastové faktory včítane GCSF, GMCSF a faktorov rastu doštičiek; adriamycín, WP-16, hydroxymočovinu, etopozid; interferóny a, β a ζ a vinkristín. Spôsoby podávania účinných množstiev týchto prostriedkov možno ľahko stanoviť alebo je možné ich nájsť napríklad v The Physician's Desk Reference, posl. vyd., publikované Medical Economics Data Production Company, a Martindale, The Extra Pharmacopoeia, posl. vyd., publikované The Pharmaceutical Press. Tieto metódy je možné rutinne modifikovať na optimalizáciu účinnosti kombinačnej a altemačnej terapie.
Podrobný opis vynálezu
Opísaný vynález predstavuje použitie (-)-(2S,4S)-l-(2-hydroxymetyl-l,3-dioxolán-4-yl)cytozínu, ďalej definovaného derivátu tejto zlúčeniny, zahŕňajúceho 5-substituovaný alebo 5'-, alebo N4-alkylovaný, alebo acylovaný derivát, alebo ich fyziologicky prijateľných solí na výrobu liečivého prípravku na liečenie nádorov, a najmä rakoviny, u ľudí a iných živočíšnych hostiteľov.
(-)-(2S,4S)-1 -(2-Hydroxymetyl-1,3 -dioxolán-4-yl)cytozín sa označuje ako „L“-nukleozid. Pretože uhlíky 2 a 5 na dioxolánovom kruhu sú chirálne, môžu byť ich nevodíkové substituenty (CH2OH, resp. bázy cytozínu) proti dioxolánovému kruhovému systému buď cis (na rovnakej strane), alebo trans (na protiľahlých stranách). Štyri optické izoméry teda predstavujú tieto konfigurácie (ak je dioxolánová skupina orientovaná vo vodorovnej rovine, takže kyslík v polohe 3 je vpredu): cis (s oboma skupinami „hore“, čo zodpovedá konfigurácii prirodzene sa vyskytujúcich nukleozidov, označovaných ako ,,D“-nukleozid), cis (s oboma skupinami „dole“, čo je prirodzene sa nevyskytujúca konfigurácia, označovaná ako ,,L“-nukleozid), trans (so substituentom C2 „hore“ a substituentom C5 „dole“) a trans (so substituentom C2 „dole“ a substituentom C5 „hore“). Má sa za to, že (-)-(2S,4S)-l-(2-hydroxymetyl-l,3-dioxolán-4-yljcytozín alebo jeho derivát je prvým príkladom „L“-nukleozidu, ktorý má protinádorovú účinnosť. Je to prekvapujúce vzhľadom na skutočnosť, že táto konfigurácia „L“-nukleozidu sa nevyskytuje v prírode.
Tu používaný výraz „enantioméme obohatený“ sa vzťahuje na zloženie nukleozidu, ktoré zahŕňa aspoň približne 95 a prednostne približne 97, 98, 99 alebo 100 % jediného enantioméru tohto nukleozidu. Vo výhodnom uskutočnení je (-)-(2S,4S)-l-(2-hydroxymetyl-l,3-dioxolán-4-yl)cytozín alebo jeho derivát, alebo soľ k dispozícii v nukleozidovej kompozícii, ktorý je tvorený v podstate jediným enantiomérom, t. j. uvedeným enantiomerom (enan
SK 284564 Β6 tiomérom L), a je v podstate prostý zodpovedajúceho enantioméru D (t. j. v enantioméme obohatenej forme včítane enantioméme čistej formy).
Účinná zlúčenina môže byť podávaná ako akýkoľvek derivát, ktorý je pri podávaní príjemcovi schopný priamo alebo nepriamo poskytovať materskú zlúčeninu (-)-L-OddC alebo tu na inom mieste definovaný 5-substituovaný derivát, alebo ktorý má účinnosť sám osebe. Ako neobmedzujúce príklady možno uviesť farmaceutický prijateľné soli (alternatívne označované ako „fyziologicky prijateľné soli“) (-)-OddC, uvedené 5-deriváty a 5'- a N4-acylované alebo alkylované deriváty účinnej zlúčeniny (alternatívne označované ako „fyziologicky aktívne deriváty“). V jednom uskutočnení je acylová skupina vo forme esteru karboxylovej kyseliny (-C(O)R), kde nekarboxylová časť esterovej skupiny je vybraná zo súboru zahrnujúceho priamy, rozvetvený alebo cyklický alkyl (typicky Ci až C18, najčastejšie Č] až C5), alkaryl, aralkyl, alkoxyalkyl, napríklad metoxymetyl, aralkyl, napríklad benzyl, alkyl alebo Cj až C4 alkoxy; sulfonátové estery, ako je alkyl- alebo aralkylsulfonyl, napríklad metánsulfonyl, mono-, di- alebo trifosfátový ester, trityl alebo monometoxytrityl, substituovaný benzyl, trialkylsilyl (napríklad dimetyl-ierc-butylsilyl) alebo difenylmetylsilyl. Arylové skupiny v esteroch sú optimálne tvorené fenylovou skupinou.
Konkrétne príklady farmaceutický prijateľných derivátov L-O-ddC zahrnujú, ale neobmedzujú sa na ne, zlúčeniny vzorca
kde R je F, Cl, -CH3, -C(H)=CH2, -C=CH alebo -ON, -Br, -NO2, a substituenty R1 a R2 sú nezávisle volené zo súboru zahŕňajúceho vodík, C; až C18 alkyl a C2 až C19 acyl, konkrétne zahŕňajúce, ale neobmedzujúce sa na ne, metyl, etyl, propyl, butyl, pentyl, hexyl, izopropyl, izobutyl, sek. butyl, terc.butyl, izopentyl, amyl, terc-pentyl, 3-metylbutyryl, hydrogensukcinát, 3-chlórbenzoát, cyklopentyl, cyklohexyl, benzoyl, acetyl, pivaloyl, mezylát, propionyl, butyryl, valeryl, zvyšok kyseliny kaprónovej, kaprylovej. kaprinovej, laurovej, myristovej, palmitovej, stearovej, olejovej a aminokyselín, zahŕňajúci, ale neobmedzujúci sa na ne, alanyl, valinyl, leucinyl, izoleucinyl, prolinyl, fenylalaninyl, tryptofanyl, metioninyl, glycinyl, serinyl, treoninyl, cysteinyl, tyrozinyl, asparaginyl, glutaminyl, aspartoyl, glutaoyl, lyzinyl, argininyl a histidinyl. Vo výhodnom uskutočnení je derivát vo forme L-enantioméru a v podstate bez jeho zodpovedajúceho enantioméru (t. j. v enantioméme obohatenej, resp. enantioméme čistej forme).
L-OddC alebo jeho derivát môže mať formu farmaceutický prijateľných soli. Tu používaný výraz farmaceutický prijateľné soli alebo komplexy sa vzťahuje na soli alebo komplexy L-OddC, alebo jeho derivátov, ktoré si zachovávajú požadovanú biologickú účinnosť materskej zlúčeniny a majú nanajvýš minimálne nežiaduce toxikologické účinky. Ako neobmedzujúce príklady takýchto solí možno uviesť (a) adičné soli s anorganickými kyselinami (napríklad kyselinou chlorovodíkovou, bromovodíkovou, sírovou, fosforečnou, dusičnou a pod.) a soli s organickými kyselinami, ako je kyselina octová, šťaveľová, vínna, jantárová, jablč ná, askorbová, benzoová, tanín, kyselina pamoová, algínová, polyglutámová, naftalénsulfónová, naftaléndisulfónová a polygalakturónová, (b) adičné soli s bázami, tvorené s katiónmi viacmocných kovov, ako je zinok, vápnik, bizmut, báryum, horčík, hliník, meď, kobalt, nikel, kadmium, sodík, draslík a pod., alebo s organickým katiónom vytvoreným z A'./V-dibenzyletyléndiamínu, amónia alebo etyléndiamínu, alebo (c) kombinácie (a) a (b), napríklad zinkovú soľ tanínu a pod.
Modifikácie účinnej zlúčeniny, konkrétne v polohách N4 a 5'-O, môžu ovplyvňovať rozpustnosť, biodostupnosť a rýchlosť metabolizmu účinnej látky, čo umožňuje kontrolu uvoľňovania účinnej látky. Ďalej môžu tieto modifikácie ovplyvniť protirakovinovú účinnosť zlúčeniny a v niektorých prípadoch ju zvýšiť oproti materskej zlúčenine. Je to možné ľahko overiť prípravou derivátu a testovaním jeho protirakovinovej účinnosti tu opísanými alebo inými metódami, známymi odborníkom.
Súhrnne zahŕňa vynález tieto znaky:
použitie zlúčenín predtým definovaných všeobecným vzorcom vrátane (-)-(2S,4S)-l-(2-hydroxymetyl-l,3-dioxolán-4-yl)cytozínu a jeho farmaceutický prijateľných derivátov a solí alebo jeho (+)-enantioméru alebo ich racemickej zmesi a ich farmaceutický prijateľných derivátov a solí na výrobu liečivého prípravku na liečenie nádoru, vrátane rakovinového nádoru.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obr. 1 uvádza hodnoty ID50 (-)-OddC a kombinácie (-)-OddC + THU (tetrahydrouridín, inhibítor cytidíndeaminázy) na bunkách rakoviny hrubého čreva.
V grafe je uvedená inhibícia rastu ako percentuálny podiel kontroly rastu proti koncentrácii (μΜ). Údaje pre (-)-OddC samotný predstavujú plné krúžky a údaje pre (-)-OddC + THU predstavujú trojuholníčky.
Obr. 2 predstavuje závislosť hmotnosti rastúceho nádoru pre myší karcinóm (Colon 38), ošetrovaný dvakrát denne (-)-OddC v dávke 25 mg/kgbid.
V grafe je vynesený rast nádoru ako percentuálny podiel pôvodnej hmotnosti nádoru oproti dňom. Ošetrenie myší prebiehalo v deň 1, 2, 3, 4 a 5. Údaje pre kontrolu (bez podávania (-)-OddC predstavujú plné krúžky a údaje pre (-)-OddC trojuholníčky.
Obr. 3 ukazuje pomer prežitia leukemických myší P388, ktoré boli ošetrované (-)-OddC. V grafe je vynesené percento prežitia oproti dňom. Ošetrenie myší prebiehalo v deň 1, 2, 3,4 a 5. Pomer prežitia pre kontrolu (bez podávania (-)-OddC) predstavujú plné krúžky, pomer prežitia pre myši, ktorým bol podávaný (-)-OddC po 25 mg/kgbid dvakrát denne, trojuholníčky a pomer prežitia pre myši, ktorým bol podávaný (-)-OddC raz denne po 50 mg/kgbid, prázdne krúžky.
Obr. 4 znázorňuje závislosť relatívnej citlivosti určitých rakovinových bunkových línií proti (-)-OddC na základe GI50. Úsečky smerujúce doprava predstavujú citlivosť bunkovej línie na (-)-OddC nad priemernou citlivosťou všetkých testovaných bunkových línií. Pretože je mierka úsečiek logaritmická, úsečka s veľkosťou 2 jednotiek doprava znamená, že pre danú bunkovú líniu dosiahla zlúčenina GI50 pri koncentrácii stokrát menšej ako je priemerná koncentrácia nutná pre všetky bunkové línie, a táto bunková línia je teda proti (-)-OddC neobvykle citlivá. Úsečky smerujúce doľava predstavujú zodpovedajúcim spôsobom citlivosť pod priemerom.
Obr. 5 je graf znázorňujúci inhibíciu rastu ľudských nádorov pomocou (-)-OddC. Nahé myši NCr vo veku 3 až 6 týždňov boli subkutánne inokulované do každého boku 2.106 buniek HepG2 alebo DU-145. Ošetrenie sa začalo, keď boli nádory v pokročilom štádiu rastu. Liečivá boli podávané dvakrát denne v dňoch 0 až 4 a v označené dni boli merané miesta nádorov. Krivky A a B znázorňujú účinok liečiva na nádory HepG2, resp. Du-145 (prázdne krúžky kontrola, plné krúžky - AraC 25 mg/kg i. p., prázdne štvorčeky (-)-OddC 25 mg/kg p. o., plné štvorčeky (-)-OddC 25 mg/kg i. p.). Každý bod predstavuje priemer ± ± SD pre 10 nádorov v grafe A a 6 nádorov v grafe B.
Príklady uskutočnenia vynálezu
I. Príprava účinných zlúčenín (-)-L-OddC a jeho deriváty je možné pripravovať uvedeným spôsobom, metódou podrobne opísanou v medzinárodnej patentovej prihláške WO 92/18517, zverejnenej 29.10.1992, spôsobom znázorneným na ďalej uvedenej schéme 1 a opísaným v ďalej uvedených príkladoch uskutočnenia alebo akoukoľvek inou metódou, známou odborníkom. Tieto alebo iné známe metódy môžu byť upravené na prípravu derivátov L-OddC, uvedených v príkladoch.
Schéma 1: Syntéza (-)-OddC
H,O, QQC
2)
a p-tsoh
Siiylované baza
L· N. ioo°c
TMSOTT CJCHjCH/a o°c
OR (Reuopropyliôéoj
I NKjMeOtt r
HilQ*. RuOj CHjOLCCU-.HjO
PbčOAí).
I
(B » .
Príklad 1
Príprava 6-anhydro-L-gulózy
6-Anhydro-L-gulóza bola pripravená v jednom stupni z L-gulózy pôsobením kyseliny, napríklad 0,5N HC1, na gulózu, v 60 % výťažku (Evans, M. E., a ď., Carbohydr. Res. (1973), 28, 359). Bez selektívneho chránenia, ako už bolo opísané (Jeong, L. S. a ď., Tetrahedron Lett. (1992), 33, 595, a Beach, J.W. a ď., J. Org. Chem. (1992, v tlači) bol (2) prevedený priamo oxidáciou NaIO4 na dioxolántriol (3), ktorý bol po redukcii s NaBH4 bez izolácie prevedený na izopropylidénový derivát (4). Benzoyláciou na (5), sňatím ochranných skupín na (6) a oxidáciou diolu (6) sa získala kyselina (7). Oxidačnou dekarboxyláciou (7) pomocou Pb(OAc)4 v suchom THF vznikol v dobrom výťažku acetát (8) ako kľúčový medziprodukt. Acetát bol kondenzovaný s požadovanými pyrimidínmi (napríklad silylovaným tymí nom a N-acetylcytozínom) v prítomnosti TMSOTf za vzniku zmesi α,B, ktorá bola rozdelená na stĺpci silikagélu za vzniku jednotlivých izomérov (9 a 10). Debenzoyláciou metanolickým amoniakom vznikol požadovaný (-)-OddC (11)·
Príklad 2
Príprava (-)-1,6-anhydro-ct-L-gulopyranózy (2)
Zmes L-gulózy (1) (33 g, 0,127 mol) a 0,5N HC1 (330 ml, 0,165 mol) bola 20 h zahrievaná k varu pod spätným chladičom. Zmes bola ochladená a neutralizovaná na pH 6 s použitím živice (Dowex-2, HCO3-forma) s prebublávaním vzduchom. Živica bola recyklovaná premytím 10 % HC1, vodou, metanolom, vodou a nasýteným roztokom NaHCO3. Reakčná zmes bola prefiltrovaná a živica bola premytá vodou (500 ml). Spojený filtrát bol skoncentrovaný do sucha a cez noc bol sušený za zníženého tlaku. Zvyšok bol prečistený na stĺpci (hĺbka 5 cm, silikagél, mesh, CHC13-CH3OH 10 : 1) a poskytol svetložltú pevnú látku, ktorá prekryštalizovaním z absolútneho alkoholu poskytla bezfarebnú pevnú látku (2) [Rf = 0,43 (CHC13-CH3OH 5 : 1), 7,3 g, 35,52 %]. Získaná L-gulóza (Rf = = 0,07,11 g) bola recyklovaná a bola získaná látka (2) (5 g, celkový výťažok 60 %): t. t. 142,5-145 °C, *H NMR (DMSO-d6) δ 3,22-3,68 (m, 4H, H-2, -3, -4 a -6a), 3,83 (d, J® 6a = 7,25 Hz, 1H, Hb-6), 4,22 (pseudo t, J56a = 4,61 a 4,18 Hz, H, H-5), 4,46 (d, J2.Oh,2 = 6,59 Hz, 1H, 2-OH, vymeniteľný s D2O), 4,62 (d, J3_oh,3 = 5,28 Hz, 1H, 3-OH, vymeniteľný s D2O), 5,07 (d, J4.oh.4 = 4,84 Hz, 1H, 4-OH, vymeniteľný s D2O), 5,20 (d, J12 = 2,19 Hz, 1H, H-l). [a]D 25 -50,011 (c, 1,61, CHjOH).
Príklad 3
Príprava (-)-(l'S,2S,4S)-4-(l,2-dihydroxyctyl-l,2-0-izopropylidén)-2-hydroxymetyl)-dioxolánu (4)
Roztok NaIO4 (22,36 g, 0,1 mol) vo vode (300 ml) bol po kvapkách v priebehu 10 min. pridávaný k roztoku (2) (11,3 g, 0,07 mol) v metanole (350 ml), chladenému na 0 °C. Zmes bola mechanicky miešaná počas 15 min. K tejto zmesi bol pridaný NaBH4 (7,91 g, 0,21 mol) a reakčná zmes bola miešaná 10 min. pri 0 °C. Bola odfiltrovaná biela pevná látka a táto látka bola premytá metanolom (300 ml). Spojený filtrát bol neutralizovaný 0,5N HC1 (~ 200 ml) a skoncentrovaný do sucha. Zvyšok bol sušený cez noc za zníženého tlaku. Sirupovitý zvyšok bol s použitím mechanického miešadla (5 h) triturovaný so zmesou metanolacetón (1 : 5,1200 ml) a bola odfiltrovaná biela pevná látka (1. podiel). Filtrát bol skoncentrovaný do sucha a zvyšok bol rozpustený v acetóne (500 ml) a potom bola pridaná kyselina p-toluénsulfónová (6,63 g, 0,035 mol). Po 6 h miešaní bola zmes neutralizovaná trietylamínom, bola odfiltrovaná pevná látka (2. podiel) a filtrát bol skoncentrovaný do sucha. Zvyšok bol rozpustený v etylacetáte (350 ml) a premytý vodou (50 ml x 2), vysušený (MgSO4), prefiltrovaný a odparením bol získaný surový (4) (3,6 g) ako nažltlý sirup. Vodná vrstva bola skoncentrovaná do sucha a vysušená za zníženého tlaku. Získaná pevná látka (1. a 2. podiel) bola spojená s vysušenou vodnou vrstvou a recyklovaná miešaním počas 1 h v 10 % metanol-acetóne (900 ml) a kyseline p-toluénsulfónovej (5,6 g). Surová látka (4) bola prečistená v suchej kolóne nad silikagélom (CHC13-CH3OH 1 % - 5 %) na látku (4) [Rf = 0,82 (CHC13-CH3OH 10:1), 8,8 g, 61,84 %] ako bezfarebný olej. ’H NMR (DMSO-dg) δ 1,26 a 1,32 (2 x s, 2 x 3H, izopropylidén), 3,41 (dd, Jcmoii.oii= 6,04 Hz, Jcrnom = 3,96 Hz, 2H, CH2OH), 3,56-4,16 (m, 6H, H-4, -5, -ľ a -2'), 4,82 (t, J0H,Ch2 = 6,0 Hz, 1H, CH2OH, vymeniteľný s D2O), 4,85 (t, J20h,ch20h = = 3,96 Hz, 1H, H-2). [a]D 25 -12,48 (c, 1,11, CHC13), analýza: pre C9H]rjO5 vypočítané C 52,93, H 7,90, nájdené C 52,95, H 7,86.
Príklad 4 Príprava (+)-(l'S,2S,4S)-4-(l,2-dihydroxymetyl-l,2-0-izopropylidén)-2-(<?-benzoyloxymetyl)-dioxolánu (5)
Benzoylchlorid (6,5 ml, 0,056 mol) bol pri 0 °C prikvapkávaný k roztoku (4) (8,5 g, 0,042 mol) v zmesi pyridín-CH2Cl2 (1 : 2,120 ml) a teplota bola zvýšená na teplotu miestnosti. Po 2 h miešaní bola reakcia schladená metanolom (10 ml) a zmes bola za zníženého tlaku skoncentrovaná do sucha. Zvyšok bol rozpustený v CH2C12 (300 ml) a premytý vodou (100 ml x 2), soľankou, vysušený (MgSO4), prefíltrovaný, odparený na nažltlý sirup, ktorý bol prečistený stĺpcovou chromatografiou na silikagéli (EtOAc-hexán 4 % až 30 %), čím bola získaná látka (5) [Rf= 0,45 (hexán-EtOAc 3 : 1), 10,7 g, 83,4 %] ako bezfarebný olej. ’H NMR (CDClj) δ 1,35 a 1,44 (2 x s, 2 x 3H, izopropylidén), 3,3-4,35 (m, 6H, H-4, -5, -ľ a -2'), 4,44 (d, J = 3,96 Hz, 2H, CH2-OBz), 5,29 (t, J = 3,74 Hz, 1H, H-2), 7,3-7,64, 8,02-8,18 (m, 3H, 2H, -OBz). [a]D 25 +10,73 (c, 1,75, CH3OH), analýza: pre C16H20Os vypočítané C 62,33, H 6,54, nájdené C 62,39, H 6,54.
Príklad 5
Príprava (+)-(l'S,2S,4S)-4-(l,2-dihydroxyetyl)-2-(O-benzoyloxymetyl)-dioxolánu (6)
Zmes (5) (5,7 g, 0,018 mol) a kyseliny p-toluénsulfónovej (1,05 g, 0,0055 mol) v metanole (70 ml) bola 2 h miešaná pri teplote miestnosti. Reakcia nebola dokončená, takže bolo rozpúšťadlo odparené na polovicu pôvodného objemu a bol pridaný ďalší metanol (50 ml) a kyselina p-toluénsulfónová (0,7 g, 3,68 mmol). Po ďalšom 1 h miešaní bola reakčná zmes neutralizovaná trietylamínom a rozpúšťadlo bolo odparené do sucha.
Zvyšok bol prečistený stĺpcovou chromatografiou na silikagéli (hexán-EtOAc 10 % až 33 %) na látku (6) [Rf = = 0,15 (hexán-EtOAc 1:1), 4,92 g, 99,2 %] ako bezfarebný sirup. ’H NMR (DMSO-d6) δ, 3,43 (m, 2H, H-2'), 3,67-4,1 (m, 4H, H-4, -5 a -ľ), 4,32 (d, J = 3,73 Hz, 2H, CH2-OBz), 4,60 (t, J = 5,72 Hz, 2'-OH, vymeniteľný s D2O), 5,23 (t, J = 3,96 Hz, 1H, H-2), 7,45-7,7, 7,93-8,04 (m, 3H, 2H, -OBz), [a]D 25 +9,16 (c, 1,01, CHCI3). Analýza: pre Ci3H16O6 vypočítané C 58,20, H 6,01, nájdené C 58,02, H 6,04.
Príklad 6
Príprava (-)-(2S,4S) a (2S,4R)-4-acetoxy-2-(O-benzoyloxymetyl)-dioxolánu (8)
K roztoku (6) (3,04 g, 0,011 mol) v CC14-CH3CN (1:1, 160 ml) bol pridaný roztok NaIO4 (10,18 g, 0,048 mol) vo vode (120 ml) a potom hydrát RuO2 (0,02 g). Po 5 h miešaní reakčnej zmesi bol filtráciou cez celit odstránený pevný podiel a filtrát bol odparený na 1/3 objemu. Zvyšok bol rozpustený v CH2C12 (100 ml) a vodná vrstva bola extrahovaná CH2C12 (100 ml x 2). Spojená organická vrstva bola premytá soľankou (50 ml), vysušená (MgSO4), prefíltrovaná, odparená do sucha a sušená vo vákuu 16 h, čím bola získaná surová látka (7) (2,6 g, 91 %).
K roztoku surovej látky (7) (2,6 g, 0,01 mol) v suchom THF (60 ml) bol v atmosfére N2 pridaný Pb(OAc)4 (5,48 g, 0,0124 mol) a pyridín (0,83 ml, 0,0103 mol). Zmes bola miešaná 45 min. pod N2 a pevný podiel bol odfiltrovaný. Pevný podiel bol premytý etylacetátom (60 ml) a spojená organická vrstva bola odparená do sucha. Zvyšok bol prečistený stĺpcovou chromatografiou na silikagéli (hexán
-EtOAc 2 : 1) a poskytol látku (8) [Rf = 0,73 a 0,79 (hexán-EtOAc 2 : 1), 1,9 g, 69,34 %] ako bezfarebný olej. ’H NMR (CDClj) δ 1,998, 2,11 (2 x s, 3Η, -OAc), 3,93-4,33 (m, 2H, H-5), 4,43, 4,48 (2 x d, J = 3,73 Hz, 3,74 Hz, 2H, CH2OBz), 5,46, 5,55 (2 x t, J = 4,18, 3,63 Hz, 1H, H-2), 6,42 (m, 1H, H-4), 7,33-7,59, 8,00-8,15 (m, 3H, 2H, -OBz), [a]D 25 -12,53 (c, 1,11, CHCI3). Analýza: pre C13HWO6 vypočítané C 58,64, H 5,30, nájdené C 58,78, H 5,34.
Príklad 7
Príprava (-)-(2S,4S)-l-[2-(benzoyl)-l,3-dioxolán-4-yl]cytozínu (9) a (+)-(2S,4R)-l-[2-(benzyloxy)-l,3-dioxolán-4-yl)cytozínu (10)
Zmes N4-acetylcytozínu (1,24 g, 7,52 mmol) v suchom dichlórmetáne (20 ml), hexametyldisilazánc (15 ml) a síran amónny (katalyt. množstvo) bola zahrievaná 4 h v dusíkovej atmosfére k varu pod spätným chladičom. Vzniknutý číry roztok bol ochladený na teplotu miestnosti. K tomuto silylovanému acetyl-cytozínu bol pridaný roztok (8) (1,0 g, 3,76 mmol) v suchom dichlóretáne (10 ml) a TMSOTf (1,46 ml, 7,55 mmol). Zmes bola miešaná 6 h. Bol pridaný nasýtený roztok NaHCO3 (10 ml) a zmes bola miešaná ďalších 15 min. a prefiltrovaná cez vrstvu celitu. Filtrát bol odparený a pevný podiel bol rozpustený v EtOAc a premytý vodou a soľankou, vysušený, prefíltrovaný a odparený na surový produkt. Tento surový produkt bol prečistený na stĺpci silikagélu (5 % CH3OH/CHC13) a poskytol čistú zmes α,β (9) a (10) (0,40 g, 30 %) a zmes α,β (13) a (14) (0,48 g, 40 %). Zmes (14) bola pre rozdelenie reacetylovaná, spojená zmes α,β bola rozdelená dlhým stĺpcom silikagélu (3 % CH3OH/CHC13) za vzniku látok (9) (0,414 g, 30,7 %) a (10) (0,481 g, 35,6 %) vo forme pien. Trituráciou týchto pien s CH3OH boli získané biele pevné látky. 9: UV (CHjOH) λ max 298 nm, anal. (C17Hi7N3O8) C, H, N. 10: UV (CH3OH) λ max 298 nm.
Príklad 8
Príprava (-)-(2S,4S)-l-(2-hydroxymetyl-l,3-dioxolán-4-yl)-cytozínu (11)
Roztok (9) (0,29 g, 0,827) v CH3OH/NH3 (50 ml, nasýtený pri 0 °C) bol 10 h miešaný pri teplote miestnosti. Bolo odparené rozpúšťadlo a surová látka (11) bola čistená na preparatívnych silikagélových doskách (20 % CH3OH/CHC13) za vzniku oleja. Ten bol prekryštalizovaný z CH2Cl2/hexánu a poskytol látku (11) (0,136 g, 77,7 %) ako bielu pevnú látku. UV λ max 278,0 nm (ε 11967) (pH 2), 270,0 nm (ε 774) (pH 7), 269,0 nm (ε 8379) (pH 11), anal. (υ8ΗηΝ3Ο4) C, H, N.
II. Farmaceutické kompozície
Ľudia, kone, psi, kravy a iné zvieratá, najmä cicavce, trpiace nádormi, najmä rakovinou, môžu byť liečené podávaním účinného množstva (-)-OddC alebo jeho derivátu alebo ich farmaceutický prijateľnej soli, prípadne vo farmaceutický prijateľnom nosiči alebo riedidle, buď samotných, alebo v kombinácii s inými známymi protirakovinovými alebo farmaceutickými prostriedkami. Toto liečenie môže byť aplikované tiež v spojení s inými bežnými terapiami rakoviny, ako je ožarovanie alebo chirurgia.
Tieto zlúčeniny môžu byť podávané akoukoľvek vhodnou cestou, napríklad orálne, parenterálne, intravenózne, intradermálne, subkutánne alebo topicky, v kvapalnej, krémovej, gélovej alebo pevnej forme alebo vo forme aerosólu.
Účinná zlúčenina je vo farmaceutický prijateľnom nosiči alebo riedidle zahrnutá v množstve, dostačujúcom na dodanie terapeuticky účinného množstva na požadovanú indikáciu pacientovi bez vyvolania vážnych toxických ú
SK 284564 Β6 činkov u ošetrovaného pacienta. Výhodná dávka zlúčeniny pre všetky tu uvádzané stavy je v rozmedzí asi 10 ng/kg až 300 mg/kg, prednostne 0,1 až 100 mg/kg za deň, výhodnejšie 0,5 až asi 25 mg na kilogram telesnej hmotnosti príjemcu za deň. Typické topické dávkovanie sa pohybuje od 0,01 do 3 % hmotn./hmotn. vo vhodnom nosiči.
Zlúčenina sa výhodne podáva vo forme vhodných dávkových jednotiek, napríklad, ale nie výlučne, s obsahom 1 až 3 000 mg, prednostne 5 až 500 mg účinnej zložky na dávkovú jednotku. Obvykle je vyhovujúca orálna dávka 25 až 250 mg.
Účinná zložka sa prednostne podáva tak, aby bolo možné dosiahnuť pikové plazmové koncentrácie účinnej zlúčeniny asi 0,00001 až 30 mM, prednostne asi 0,1 až 30 μΜ. Toto je možné dosiahnuť napríklad intravenóznou injekciou roztoku alebo formulácie aktívnej zložky, pripadne vo fyziologickom roztoku alebo vo vodnom prostredí, alebo pri podávaní ako bolus účinnej zložky.
Koncentrácia účinnej zlúčeniny v kompozícii liečiva závisí od rýchlosti absorpcie, distribúcie, inaktivácie a exkrécie liečiva a od ďalších faktorov známych odborníkom. Je potrebné uviesť, že hodnoty dávkovania sa tiež pohybujú v závislosti od vážnosti stavu, ktorý má byť zmierňovaný. Ďalej je potrebné uviesť, že pre každý konkrétny subjekt je treba v priebehu času upraviť konkrétny režim dávkovania podľa individuálnej potreby a odborného úsudku osoby podávajúcej kompozície alebo na ich podávanie dozerajúcej, a že tu uvádzané koncentračné rozmedzia sú iba ako príklad a nemajú za cieľ obmedzovať rozsah alebo uskutočniteľnosť nárokovaných kompozícií. Účinná zložka môže byť podávaná naraz alebo môže byť rozdelená do určitého počtu menších dávok, podávaných v rôznych časových intervaloch.
Orálne kompozície všeobecne obsahujú inertné riedidlo alebo jedlý nosič. Môžu byť uzatvorené v želatínových kapsulách alebo lisované do tabliet. Na orálne terapeutické podávanie môže byť účinná zlúčenina alebo jej prekurzorový derivát (prodrug) zabudovaná do vehikula a používaná vo forme tabliet, pastiliek alebo kapsúl. Ako súčasť kompozície môžu byť obsiahnuté farmaceutický kompatibilné spojivá a/alebo pomocné látky.
Tablety, pilulky, kapsuly, pastilky a pod. môžu obsahovať ktorúkoľvek z týchto prísad alebo zlúčenín podobnej povahy: spojivo, ako je mikrokryštalická celulóza, tragant alebo želatína, vehikulum, ako je škrob alebo laktóza, dispergačný prostriedok, ako je kyselina algínová, Primogel alebo kukuričný škrob, lubrikant, ako je stearát horečnatý alebo Sterotes, klzný prostriedok, ako je koloidný oxid kremičitý, sladidlo, ako je sacharóza alebo sacharín, alebo ochucovadlo, ako je pepermint, metylsalicylát alebo pomarančová aróma. Ak je dávková jednotka vo forme kapsuly, môže okrem látok uvedeného typu obsahovať kvapalný nosič, ako je mastný olej. Dávkové jednotky môžu ďalej obsahovať rôzne iné látky, ktoré modifikujú fyzikálnu formu dávkovej jednotky, napríklad povlaky cukru, šelaku alebo enterosolventných prostriedkov.
Účinná zlúčenina alebo jej farmaceutický prijateľná soľ môže byť podávaná ako zložka elixíru, suspenzie, sirupu, oblátky, žuvacej gumy a pod. Sirup môže okrem účinných zlúčenín obsahovať sacharózu ako sladidlo a určité konzervačné, farbiace a aromatizačné prísady.
Účinná zlúčenina alebo jej farmaceutický prijateľné soli môžu byť tiež zmiešané s ďalšími účinnými látkami, ktoré nezhoršujú požadovaný účinok alebo ktoré ho doplňujú, ako sú iné protirakovinové prostriedky, antibiotiká, proti-pliesňové prostriedky, protizápalové prostriedky alebo protivírusové zlúčeniny.
Roztoky alebo suspenzie používané na parenterálnu, intradermálnu, subkutánnu alebo topickú aplikáciu môžu zahrnovať nasledujúce zložky: sterilné riedidlo, ako je voda pre injekcie, fyziologický roztok, fixované oleje, polyetylénglykoly, glycerín, propylénglykol alebo iné syntetické rozpúšťadlá; antibakteriálne prostriedky, ako je benzylalkohol alebo metylparabény; antioxidanty, ako je kyselina askorbová alebo hydrogensiričitan sodný; chelatačné prostriedky, ako je kyselina etyléndiamíntetraoctová; pufre, ako sú acetáty, citráty alebo fosfáty, a prostriedky na úpravu tonicity, ako je chlorid sodný alebo dextróza. Parenterálny prípravok môže byť uzatvorený v ampuliach, jednorazových injekčných striekačkách alebo viacrazových dávkových liekovkách zo skla alebo plastu.
Pri intravenóznej aplikácii sú výhodnými nosičmi fyziologický roztok alebo fosfátom pufrovaný soľný roztok (PBS).
V jednom uskutočnení sa účinné zlúčeniny pripravujú s nosičmi, ktoré chránia zlúčeninu pred rýchlym odstránením z tela, ako sú formulácie s kontrolovaným uvoľňovaním, včítane implantátov a systémov na báze mikrokapsúl. Môžu byť používané biodegradabilné, biokompatibilné polyméry, ako je etylénvinylacetát, polyanhydridy, kyselina polyglykolová, kolagén, polyortoestery a kyselina polymliečna. Spôsoby prípravy týchto formulácií sú odborníkovi zrejmé.
Farmaceutický prijateľnými nosičmi môžu byť tiež lipozomálne suspenzie. Tieto môžu byť pripravované metódami známymi odborníkom, napríklad podľa patentu US 4,522.811 (ktorý je tu týmto zahrnutý ako celok). Lipozómové formulácie je možné napríklad pripravovať rozpustením vhodných lipidov (ako je stearoylfosfatidyletanolamín, stearoylfosfatidylcholín, arachadoylfosfatidylcholín a cholesterol) v anorganickom rozpúšťadle, ktoré sa potom odparí a zanechá na povrchu nádoby tenký film vysušeného lipidu. Potom sa do nádoby vovedie vodný roztok účinnej zlúčeniny. Nádoba sa potom ručne rozvíri, aby sa uvoľnil lipid z bokov nádoby a rozptýlili sa lipidové agregáty, čím vznikne lipozomálna suspenzia.
III. Biologická účinnosť
Na hodnotenie protirakovinovej účinnosti zlúčenín sa používajú a medzi odborníkmi prijímajú rôzne biologické testy. Na hodnotenie zlúčenín podľa vynálezu možno použiť ktorúkoľvek z týchto metód.
Jednou z obvyklých metód hodnotenia účinnosti je použitie testovacích panelov rakovinových bunkových línií podľa National Cancer Inštitúte („NCI“). Pri týchto testoch sa hodnotí protirakovinová účinnosť konkrétnych zlúčenín in vitro a získané údaje umožňujú predpovedať chovanie testovaných zlúčenín vzhľadom na použitie in vivo. Pri iných testoch sa hodnotí účinok zlúčeniny in vivo na ľudské alebo myšie nádorové bunky, implantované alebo transplantované nahej myši. (-)-OddC bol testovaný na protirakovinovú účinnosť in vivo proti bunkovej línii leukémie P388 a bunkovej línii rakoviny hrubého čreva C38. Experimentálne detaily a výsledky týchto testov sú uvedené v príkladoch 9 a 10.
Príklad 9
Ošetrovanie buniek leukémie P388 in vivo pomocou (-)-OddC
106 buniek leukémie P388 bolo i. p. implantované myšiam BDF1, získaným zo Southem Research Inštitúte, Alabama. Počínajúc prvým dňom po implantácii nádorových buniek bol dvakrát denne po päť dní podávaný (-)-OddC. Pri tomto postupe sa ukázalo, že dávka 75 mg/kg je pre myši toxická.
Výsledky týchto štúdií ukazuje obr. 3 a tabuľka 1. Na obr. 3 znázorňujú plné krúžky údaje pre kontrolu (neošetrené zvieratá), prázdne trojuholníčky ukazujú pomer prežitia pri zvieratách, ktorým bolo podávané dvakrát denne 25 mg/kgbid, a prázdne krúžky predstavujú pomer prežitia pri myšiach, ktorým bolo podávané raz denne 50 mg/kgbid. Zo šiestich myší, ošetrovaných dávkou 25 mg/kg (-)-OddC, jedna dlhodobo prežívala a dĺžka života ostatných sa zvýšila o 103 %.
Tabuľka 1
V tabuľke 2 opisujú prvé dva stĺpce subpanel (napríklad leukémia) a bunkovú líniu (napríklad CCRF-CEM), ktoré boli ošetrené s (-)-OddC. Stĺpec 3 uvádza logio, pn ktorom sa objavila hodnota GI50, a stĺpec 4 uvádza logio, pri ktorom sa objavila hodnota TGI. Pokiaľ nebolo možné získať tieto parametre odpovede interpoláciou, je hodnota, uvedená pre každý parameter odpovede, najvyššou testovanou koncentráciou a predchádza ju znamienko Napríklad ak všetky PG pri všetkých koncentráciách (-)-OddC, dodávaného určitej bunkovej línii, prekračujú +50, nemožno tento parameter získať interpoláciou.
skupina kontrola -OddC
dávka’ (mg/kg) .. 25 x 2 x 5
cesta Ψ
stredná doba prežitia (dni) 13,3 27
ILSb(%) - 103
doba ú hynú (deň) 11,12,13,13,13,18 18,20,22,25,33,45
vyliečeniec/celkora 0/6 1/6
Inokulum: každej myši bolo v deň 0 i. p. inokulované 10
buniek P3 88, a: ošetrenie bolo uskutočňované v dňoch 1 až 5 dvakrát denne, b: percento zvýšenia dĺžky života oproti kontrole, c: prežitie rovnajúce sa alebo dlhšie ako 45 dní dĺžky života.
Príklad 10
Ošetrovanie buniek nádoru hrubého čreva 38 in vivo pomocou (-)-OddC
Myšiam BDF1 boli s. c. implantované bunky nádoru hrubého čreva 38. Dvakrát denne počas 5 dní bol myšiam podávaný (-)-OddC v dávke 25 mg/kg/dávku. Ako je zrejmé z obr. 2, bol rast buniek nádoru hrubého čreva spomalený. Na obr. 2 predstavujú plné krúžky údaje pre kontrolné zvieratá a plné trojuholníčky údaje pre myši ošetrené s (-)-OddC.
Príklad 11
Testovanie (-)-OddC in vitro (-)-OddC bol hodnotený skriningovým programom NCI. V teste sa meria inhibícia rôznych rakovinových bunkových línií pri rôznych koncentráciách (-)-OddC. Testované bunkové línie sú uvedené v tabuľke 2.
Tabuľka 2 uvádza tiež koncentráciu, pri ktorej boli v testovaných bunkových líniách pozorované GI50 a TGI. Hodnoty GI50, TGI a LC50 predstavujú koncentrácie, pri ktorých PG (ďalej definované percento inhibície rastu) robí +50, resp. 0, resp. -50. Tieto hodnoty sa stanovujú interpoláciou kriviek závislosti reakcie na dávke, zostavených pre každú bunkovú líniu, vynesených ako závislosť PG na logio koncentrácie (-)-OddC.
PG predstavuje nameraný účinok (-)-OddC na bunkovú líniu a vypočíta sa podľa jedného z týchto dvoch výrazov: Ak je (str. ODtest - str. ODtzero)> 0, potom PG = 100 x (str. ODtKt - str. ODtze-ro)/(str. ODclrI - str. ODtzer0).
Ak je (str. ODtest - str. 0DtzCTO) < 0, potom PG = 100 x (str. ODtet - str. ODtzero)/(str. OD^), kde str. ODteelO = priemer z meraní optickej hustoty sfarbenia odvodeného od SRB tesne pred vystavením buniek testovanej zlúčenine, str. ODtest = priemer z meraní optickej hustoty sfarbenia odvodeného od SRB po 48 h vystavení buniek testovanej zlúčenine, str. ODctr] = priemer z meraní optickej hustoty sfarbenia odvodeného od SRB po 48 h bez vystavenia buniek testovanej zlúčenine.
Tabuľka 2
panel bunková línia log10GI50 logioTGÍ
leukémia CCRF-CEM -6,64 > -4,00
RL-60(FB} -6,28 > -4,00
K.-562 •4,59 > -4,00
BSOLT-4 -6,66 -4,39
RPMI-2,26 -4,03 > -4,00
SR -5,95 > -4,00
nemalobunková rakovina pľic A549,'ATCC 6,01 > -4,00
BKVX > -4,00 > -4,00
HOP-62 -6,23 -4,71
NCI-H23 -4,92 >-4,00
NCI-H322M > -4,00 >-4.00
NCI-H460 -4,32 >-4,00
NCI-I1522 -6,06 > -4,00
rakovina hrubého čreva COLO205 -4,03 > -4,00
HCT-116 -5,23 > -4,00
HCT-15 -5,39 > -4,00
HT29 > -4,00 > -4,00
K2112 > -4,00 > -4,00
rakovina CNS SP-268 -5,18 >-4,00
SP-295 -6,24 >-4,00
SNB-19 -5,71 > -4,00
U25|. -4,91 > -4,00
melanóm LOX D6VI •6,39 >-4,00
MALME-3M -4,51 > -4,00
M14 -6,27 -5,07
SK-MEL-28 -4,31 > -4,00
SK-MEL-5 -4,91 >-4,00
UACC-257 > -4,00 > -4,00
UACC-62 -5,53 > -4,00
rakovina vaječníkov ORUV1 -4,03 > -4,00
OVCAR-3 -4,44 > -4,00
OVCAR-4 >-4,00 > -4,00
OVCAR-.5 4,41 > -4,00
OVCAR-8 -5,82 > -4,00
SKOV-3 -5,35 > -4,00
rakovina obličiek 785-4 -5,36 > -4,00
ACHN -6,46 > -4,00
CAK.I-1 -6,65 -4,87
R.XF-393 -6,17 > -4,00
SN12C -6,27 > -4,00
TK-30 > -4,00 > -4,00
UO-31 -5,60 > -4,00
rakovina prostaty PC-3 -6,29 > -4,00
DU-145 -6,97 > -4,00
rakovina prsníka MCF7 -5,95 > -4,00
MCF7/ADR-RES -4,97 > -4,00
MDA-MB- 231/ATCC > -4,00 > -4,00
HS578T > -4,00 > -4,00
MDA-MB-435 -4,62 > -4,00
MDA-N -4,33 > -4,00
BT-549 -4,59 >4,00
T-47D > -4,00 > -4,00
Obr. 4 predstavuje graf, ktorý znázorňuje relatívnu selektivitu (-)-OddC pre konkrétnu bunkovú líniu. Úsečky smerujúce doprava znázorňujú citlivosť bunkovej línie proti (-)-OddC, presahujúcu priemernú citlivosť všetkých testovaných línií. Pretože mierka úsečiek je logaritmická, znamená úsečka s veľkosťou 2 jednotiek smerom doprava, že zlúčenina mala GI50 pre bunkovú líniu pri koncentrácii rovnajúcej sa jednej stotine strednej koncentrácie, nutnej pre všetky bunkové línie, a že teda táto bunková línia je proti (-)-OddC neobvykle citlivá. Úsečky smerujúce doľava zodpovedajúcim spôsobom zobrazujú podpriemernú citlivosť. Tieto bunkové línie možno ľahko zistiť z tabuľky 2, pretože pred log10 koncentrácie predchádza symbol
Z obr. 4 je zrejmé, že aspoň jedna bunková línia každého typu testovaných rakovinových buniek mala citlivosť proti (-)-OddC. Určité bunkové línie rakoviny prostaty, leukémie a hrubého čreva majú extrémnu citlivosť proti (-)-OddC.
Príklad 12
Porovnanie (-)-OddC a AraC
Ako je uvedené v opise doterajšieho stavu techniky, používa sa pri liečbe akútnej myeloidnej leukémie cytozínarabinozid (označovaný tiež ako Cytarabin, araC a Cytosar), čo je nukleozidový analóg deoxycytidínu. Je účinný tiež proti akútnej lymfocytickej leukémii a v menšom rozsahu je použiteľný pri chronickej myelocytickej leukémii a nehodgkinovskom syndróme. Primáme pôsobenie araC spočíva v inhibícii syntézy jadrovej DNA. Bolo zaujímavé porovnať toxicitu (-)-OddC a AraC proti nádorovým bunkám.
Bunky v logaritmickom raste boli naočkované na 24-jamkové platne v hustote 5 000 buniek/ml/jamku. K bunkám boli v rôznych dávkach pridávané liečivá a kultúry boli uchovávané počas troch generácií. Po skončení tohto času boli uskutočnené skúšky metylénovou modrou a/alebo boli priamo spočítané počty buniek. Metylénová modrá je farbivo, ktoré sa stechiometricky viaže na bielkoviny životaschopných buniek a môže byť použité k nepriamej kvantifikácii počtu buniek (Finlay, 1984). Hodnoty IC5o boli stanovené interpoláciou vynesených hodnôt. Každá uvedená hodnota predstavuje priemer ± štandardnú odchýlku z piatich experimentov, kde bol každý údaj získaný duplicitne.
Pri všetkých testovaných nádorových bunkových líniách bol (-)-OddC viac cytotoxický ako AraC. (-)-OddC bol významne účinnejší ako AraC v bunkovej línii nazofaryngálneho karcinómu KB a vo dvoch bunkových líniách karcinómu prostaty, DU-145 a PC-3. Bunky HepG2 pochádzajú z hepatocelulámeho karcinómu a bunková línia 2.2.15 je odvodená z buniek HepG2, ktoré boli transfikované kópiou genómu vírusu hepatitídy B. Bunky CEM sú odvodené od akútnej lymfoblastickej leukémie. (-)-OddU, čo je zlúčenina, ktorá by vznikla deamináciou (-)-OddC, nebola toxická v žiadnej z testovaných bunkových línií. Enzymatické štúdie naznačujú, že na rozdiel od AraC, ktorého klinická účinnosť je silne znižovaná jeho náchylnosťou k deaminácii, (-)-OddC nie je substrátom pre deaminázu.
Zistilo sa, že (-)-OddC môže byť fosforylovaný in vivo na mono-, di- a trifosfátnukleotid. Zdá sa, že (-)-ÓddC má svoju bunkovú toxicitu vo fosforylovanej forme, pretože bunky, ktoré nie sú schopné túto zlúčeninu fosforylovať, sú proti nej oveľa menej citlivé. Prvým enzýmom, zodpovedným za jej fosforyláciu, je ľudská deoxycytidínkináza. Enzymatické štúdie in vitro naznačujú, že (-)-OddC môže byť týmto enzýmom fosforylovaný.
Na rozdiel od araC nie je (-)-OddC deaminovaný cytidíndeaminázou. Prítomnosť cytidíndeaminázy v tuhých nádorových tkanivách môže byť kľúčovým faktorom, zodpovedným za neúčinnosť araC v tuhých nádoroch. To môže čiastočne vysvetľovať, prečo je (-)-OddC proti bunkám HepG2 pri nahej myši účinný, zatiaľ čo araC je neúčinný. Vysvetľuje to tiež, prečo má (-)-OddC odlišné spektrum protinádorovej účinnosti ako araC. Prítomnosť cytidíndeaminázy v gastrointestinálnom trakte môže ďalej hrať významnú úlohu v dôvodoch, prečo nemôže byť araC podávaný orálne.
Biochemické štúdie (-)-Oddc Cytotoxicita AraC, (-)-OddC a(-)-OddU in vitro
bunková línia ID50 (μΜ)
AraC (-)-OddC (-)-OddU
KB 0,152 ± 0,010 0.048 ± 0,021 > 30
DU-145 0,170 + 0,035 0,024 ± 0,020 > 30
PC-3 0,200 + 0,078 0,056 ± 0,039 > 30
HepG2 0,125 ± 0,013 0,110 ± 0,050 > 30
2.2.15 0,145 ± 0,007 0,110 ± 0,011 >-30
CEM 0,030 ± 0,010 0,025 ± 0,030 > 30
Príklad 12 Štúdie in vivo
Nahé myši NCr staré tri až šesť týždňov (Taconic Immunodeficient Mice and Rats) boli s. c. inokulované do každého boku 2.106 buniek HepG2 alebo DU-145 a nádory sa nechali rásť. Ošetrenie sa začalo pri veľkosti nádorov 100 až 250 mg, stanovené meraním kaliperom a výpočtom podľa vzorca hmotnosť nádore (mg) = dĺžka (mm) x šírka (mm2) = 2.
Liečivá boli podávané v uvedených dávkach v dňoch 0 až 4 a po každých niekoľkých dňoch bola meraná veľkosť nádorov. Krivky rastu nádorov boli zostavené spôsobom opísaným v práci Beli ad’., Cancer(phila.) 36:2437-2440 (1975) a sú znázornené na obr. 5(a) a 5(b).
Toxicita bola hodnotená podľa zmien telesnej hmotnosti.
Hoci bola toxicita AraC in vitro podobná ako pri (L)-OddC, bol AraC na tomto zvieracom modeli neúčinný. Enzymatická analýza nádorového extraktu ukázala, že to nebolo v dôsledku zvýšenej aktivity dCD alebo zníženej aktivity dCK, ale že môže ísť o výsledok intenzívneho metabolizmu AraC v pečeni, ktorá mala vysokú hladinu dCD. Na rozdiel od AraC bol (L)-OddC účinný tak v xenoimplantátoch HepG2, ako DU-145. Čisté usmrtenie buniek (log 10), vypočítané pre nádory HepG2, robilo 0,67 pre ošetrenie i. p. a 0,87 pre orálne ošetrenie. Veľkosť nádorov DU-145 sa zmenšuje a polovica z nich do dňa 15 celkom zaniká. Po asi 25 dňoch od posledného ošetrenia sa nádory začali znovu objavovať, ale po dni 47 sa rast opäť zastavil. V deň 60 boli zvieratá usmrtené a boli odohrané nádory. Nádory mali nekrotickú morfológiu a len veľmi málo buniek bolo schopných vylučovať trypánovú modrú. Okrem toho nemohli byť v tomto tkanive delegované žiadne enzymatické aktivity. Podávané dávky AraC a (L)-OddC boli rovnako toxické, čo ukazuje strata hmotnosti zvierat, a predbežné testy toxicity naznačujú, že 25 mg/kg dvakrát denne môže byť maximálna tolerovaná dávka pri piatich po sebe nasledujúcich dňoch liečby. Preferovaný môže byť protokol, v ktorom sa liečivo podáva prerušovane.
SK 284564 Β6
Tu uvádzané údaje in vitro a in vivo demonštrujú, že (L)-OddC má významnú protirakovinovú účinnosť a môže v mnohých smeroch prekonať v súčasnosti dostupné analógy deoxycytidínu. Nielen že ide o vôbec prvý analóg L-nukleozidu, ktorý má protirakovinovú účinnosť, aleje to aj prvý skutočný terminátor reťazca, schopný inhibovať rast nádoru. Hoci jeho neprirodzená stereochémia nechráni (L)-OddC pred aktiváciou metabolickými enzýmami alebo pred zabudovaním do DNA, môže byť faktorom, ktorý túto zlúčeninu chráni pred degradáciou dCD. (L)-OddC je ďalej jedinečný v tom, že je účinný v tuhých nádoroch, ktoré obvykle nereagujú na terapiu pomocou analógov nukleozidov. Liečivo 2',2'-difluórdeoxycytidín (gemcitibin), ktoré je v súčasnosti podrobované klinickému hodnoteniu pre liečbu tuhých nádorov, je ešte náchylné k inaktivácii pôsobením dCD(16). Pretože zvýšenie hladiny dCD je mechanizmus, ktorým sa bunka stáva rezistentnou proti analógom dCyd, ako je AraC(17), môže byť (L)-OddC použiteľný pri liečbe pacientov, ktorí na toto liečivo prestali reagovať.
IV. Použitie (-)-OddC v oligonukleotidoch a v antimediátorovej technológii
Antimediátorová technológia sa všeobecne týka modulácie génovej expresie procesom, pri ktorom je syntetický oligonukleotid hybridizovaný s komplementárnou sekvenciou nukleovej kyseliny s cieľom inhibicie transkripcie alebo replikácie (ak je cieľovou sekvenciou DNA), inhibicie translácie (ak je cieľovou sekvenciou RNA) alebo inhibicie spracovania (ak je cieľovou sekvenciou pre-RNA). Touto metódou je možné modulovať rôzne bunkové aktivity. Jednoduchým príkladom je inhibícia biosyntézy bielkovín antimediátorovým oligonukleotidom viazaným na mRNA. V inom uskutočnení je syntetický oligonukleotid hybridizovaný s konkrétnou sekvenciou génu v dvojvláknovej DNA za vzniku trojvláknového komplexu (triplexu), ktorý inhibuje expresiu sekvencie tohto génu. Antimcdiátorové oligonukleotidy môžu byť používané tiež na aktiváciu génovej expresie nepriamo potlačením biosyntézy prirodzeného represoru alebo priamo redukciou terminácie transkripcie. Antimediátorová oligonukleotidová terapia (AOT) môže byť používaná na inhibíciu expresie patogénnych génov včítane tých, ktoré sa zúčastňujú na nekontrolovanom raste benígnych alebo malígnych nádorových buniek alebo replikách vírusov, včítane HIV a HPV.
Stabilita oligonukleotidov proti nukleázam je významným faktorom pre aplikáciu in vivo. Je známe, že 31-exonukleázová aktivita je zodpovedná za väčšinu degradácie nemodifíkovaných antimediátorových oligonukleotidov v sére; Vlassov, V. V., Yakubov, L. A., Prospects for Antisense Nucleic Acid Iherapy of Cancers and AIDS, 1991, 243-266, Wiley-Liss, Inc., New York, Nucleic Acids Res., 1993,21, 145.
Náhrada nukleotidu na 3'-konci oligonukleotidu (-)-OddC alebo jeho derivátom môže stabilizovať oligonukleotid proti degradácii 3’-exonukleázou. Alternatívne alebo navyše môže byť s cieľom odolnosti proti degradácii oligonukleotidu endonukleázami nahradený (-)-OddC alebo jeho derivátom interný nuldeotid.
Na základe uvedeného opisu môže bežný odborník používať (-)-OddC alebo jeho derivát na stabilizáciu rôznych oligonukleotidov proti degradácii tak exonukleázami, ako endonukleázami, včítane nukleozidov používaných v antimediátorovej oligonukleotidovej terapii. Všetky tieto uskutočnenia spadajú do rozsahu vynálezu. Príklad 13 je neobmedzujúcim príkladom použitia (-)-OddC pre odolnosť proti pôsobeniu 3'-exonukleázy.
Príklad 13
Odolnosť proti aktivite 3’-exonukleázy pôsobením (-)-OddC
Aktivita ľudskej cytosólovej exonukleázy z ľudských H9 (lymfocytické leukemické bunky typu T) bola stanovená gélovým sekvenovaním. Substrát s 3'-zakončenim bol pripravený z priméru DNA s dĺžkou 20 alebo 23 báz so sekvenciou
3'-CAATTTTGAATTTCCTTAACTGCC-5'
1
Priméry boli na 5'-konci značené s [Y-32P]ATP, tepelne hybridizované s komplementárnymi RNA templátmi a zakončené na 3'-konci dTTP (20mér), dCTP (23 mér) alebo (-)-OddCTP (23 mér) reakciou so stojacim štartom katalyzovanou HIV-1 RT. Za týchto podmienok bol 20 mér zakončený dTMP (A) a 23 mér bol zakončený dCMP (B) alebo (-)-O-ddCMP(C). Tieto substráty jednovláknovej DNA boli použité na testovanie ich citlivosti proti cytoplazmatickej exonukleáze. Testy boli uskutočňované v reakčných zmesiach 10 μΐ, obsahujúcich 50 mM Tris-HCl s pH 8,0, mM MgCl2, 1 mM ditiotreitolu, 0,1 mg/ml hovädzieho sérového albumínu, 0,18 pCi/rnl 3'-zakončeného substrátu a μΐ exonukleázy (0,03 jednotiek). Reakcie boli inkubované v určitom čase pri 37 °C a ukončené prídavkom 4 μΐ 98 % formamidu, 10 mM EDTA a 0,025 % brómfenolovej modrej. Vzorky boli denaturované 5 min. pri 100 °C a potom rýchlo ochladené na ľade. Nezreagovaný materiál a reakčné produkty boli oddelené na sekvenovacích géloch 15 % polyakrylamidu/močoviny a vizualizované autorádiografiou. Oligonukleotid s (-)-OddC na 3'-konci bol aspoň päťkrát odolnejší proti 3'-exonukleáze ako ostatné oligonukleotidy.
Z uvedeného podrobného opisu vynálezu sú odborníkom zrejmé modifikácie a obmeny vynálezu pri liečbe rakoviny, ktoré tiež spadajú do rozsahu pripojených patentových nárokov.

Claims (24)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Použitie β-L-nukleozidovej zlúčeniny so štruktúrou cr
    NHR2 kde R1 a R2 sú zvolene zo skupiny zahŕňajúcej vodík, C2 až C|9 acyl a Ci až Ci8 alkyl, alebo jej farmaceutický prijateľnej soli, na výrobu liečivého prípravku na liečenie nádoru u hostiteľského živočícha.
  2. 2. Použitie zlúčeniny podľa nároku 1, kde R1 a R2 predstavujú vodík.
  3. 3. Použitie zlúčeniny podľa nároku 1, kde alkylovú skupina je zvolená zo skupiny zahŕňajúcej metyl, etyl, propyl, butyl, pentyl, hexyl, izopropyl, izobutyl, sec-butyl, terc-butyl a izopentyl.
  4. 4. Použitie zlúčeniny podľa nároku 1, kde acylová skupina je -C(O)R, kde R je C] až C5 alkylová skupina, fenyl alebo benzyl.
    SK 284564 Β6
  5. 5. Použitie zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 4, kde nádor je rakovinový.
  6. 6. Použitie zlúčeniny podľa nároku 1, kde liečivý prípravok je vhodnýna orálnu aplikáciu.
  7. 7. Použitie zlúčeniny podľa nároku 1, kde liečivý prípravok je vhodný na intravenóznu aplikáciu.
  8. 8. Použitie zlúčeniny podľa nároku 1, kde liečivý prípravok je vhodný na topickú alebo transdermálnu aplikáciu.
  9. 9. Použitie β-L-nukleozidovej zlúčeniny všeobecného vzorca ,0.
    r’o·
    NHR* kde R je zvolené zo skupiny zahŕňajúcej vodík, fluór, chlór, -CH3, -C(H)=CH2, -OCH, -CN, Br, N02 a R1 a R2 sú zvolené zo skupiny zahŕňajúcej vodík, Cj až Ci8 alkyl, C2 až C19 acyl, monofosfát, difosfát a trifosfát, alebo jej farmaceutický prijateľnej soli na výrobu liečivého prípravku na liečenie nádoru u hostiteľského živočícha.
  10. 10. Použitie zlúčeniny podľa nároku 9, kde R je fluór a R1 a R2 predstavujú vodík.
  11. 11. Použitie zlúčeniny podľa nárokov 1,9 alebo 10, kde hostiteľským živočíchom je človek.
  12. 12. Použitie zlúčeniny podľa nárokov 9 alebo 10, kde nádor je rakovinový.
  13. 13. Použitie zlúčeniny podľa nároku 12, kde nádorom je leukémia.
  14. 14. Použitie zlúčeniny podľa nároku 12, kde nádorom j c rakovina hrubého čreva.
  15. 15. Použitie zlúčeniny podľa nároku 12, kde nádorom je rakovina močového mechúra.
  16. 16. Použitie zlúčeniny podľa nároku 12, kde nádorom je hepatoceluláma rakovina.
  17. 17. Použitie zlúčeniny podľa nároku 12, kde nádorom je rakovina prsníka.
  18. 18. Použitie zlúčeniny podľa nároku 12, kde nádorom je rakovina pľúc.
  19. 19. Použitie zlúčeniny podľa nároku 12, kde nádorom je rakovina nosohltanu.
  20. 20. Použitie zlúčeniny podľa nároku 12, kde nádorom je rakovina pankreasu.
  21. 21. Použitie zlúčeniny podľa nároku 12, kde nádorom je rakovina vaječníkov.
  22. 22. Použitie zlúčeniny podľa nároku 12, kde nádorom je lymfóm.
  23. 23. Použitie zlúčeniny podľa nároku 12, kde nádorom je rakovina prostaty.
  24. 24. Použitie (-)-(2S,4S)-l-(2-hydroxymetyl-l,3-dioxolán-4-yl)cytozínu alebo jeho solí, alebo jeho (+)-enantioméru, alebo ich racemickej zmesi, alebo ich farmaceutický prijateľných solí na výrobu liečivého prípravku na liečenie alebo profylaxiu nádoru, vrátane rakovinového nádoru. 5
SK281-97A 1994-09-06 1995-09-05 Použitie beta-L-nukleozidovej zlúčeniny na výrobu liečivého prípravku na liečenie nádoru SK284564B6 (sk)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/301,298 US5817667A (en) 1991-04-17 1994-09-06 Compounds and methods for the treatment of cancer
US39063395A 1995-02-17 1995-02-17
PCT/US1995/011464 WO1996007413A1 (en) 1994-09-06 1995-09-05 Compounds and methods for the treatment of cancer

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK28197A3 SK28197A3 (en) 1997-09-10
SK284564B6 true SK284564B6 (sk) 2005-06-02

Family

ID=26972285

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK281-97A SK284564B6 (sk) 1994-09-06 1995-09-05 Použitie beta-L-nukleozidovej zlúčeniny na výrobu liečivého prípravku na liečenie nádoru

Country Status (31)

Country Link
US (3) US6063787A (sk)
EP (2) EP1468687A1 (sk)
JP (1) JP3979662B2 (sk)
KR (1) KR100374477B1 (sk)
CN (3) CN1111409C (sk)
AP (1) AP783A (sk)
AT (1) ATE267015T1 (sk)
AU (1) AU704977B2 (sk)
BG (1) BG63122B1 (sk)
BR (1) BR9508886A (sk)
CA (1) CA2199117C (sk)
CZ (1) CZ297873B6 (sk)
DE (1) DE69533066T2 (sk)
DK (1) DK0781136T3 (sk)
ES (1) ES2219666T3 (sk)
FI (1) FI970918A (sk)
HU (1) HUT77172A (sk)
IL (1) IL115156A (sk)
IS (1) IS2011B (sk)
MY (1) MY121548A (sk)
NO (1) NO313268B1 (sk)
NZ (1) NZ335013A (sk)
OA (1) OA10473A (sk)
PL (2) PL189288B1 (sk)
PT (1) PT781136E (sk)
RO (1) RO118748B1 (sk)
RU (1) RU2168995C2 (sk)
SI (1) SI0781136T1 (sk)
SK (1) SK284564B6 (sk)
WO (1) WO1996007413A1 (sk)
ZA (1) ZA957483B (sk)

Families Citing this family (45)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6903224B2 (en) 1988-04-11 2005-06-07 Biochem Pharma Inc. Substituted 1,3-oxathiolanes
US5728575A (en) * 1990-02-01 1998-03-17 Emory University Method of resolution of 1,3-oxathiolane nucleoside enantiomers
IL115156A (en) * 1994-09-06 2000-07-16 Univ Georgia Pharmaceutical compositions for the treatment of cancer comprising 1-(2-hydroxymethyl-1,3-dioxolan-4-yl) cytosines
US6022876A (en) * 1996-11-15 2000-02-08 Yale University L-β-dioxolane uridine analogs and methods for treating and preventing Epstein-Barr virus infections
AU9016998A (en) 1997-08-08 1999-03-01 Newbiotics, Inc. Methods and compositions for overcoming resistance to biologic and chemotherapy
US7462605B2 (en) 1998-01-23 2008-12-09 Celmed Oncology (Usa), Inc. Phosphoramidate compounds and methods of use
PT1045897E (pt) 1998-01-23 2002-07-31 Newbiotics Inc Agentes terapeuticos por catalise enzimatica
DK1058686T3 (da) 1998-02-25 2007-03-05 Univ Emory 2'-fluornukleosider
DE60042921D1 (de) * 1999-03-29 2009-10-22 Shire Canada Inc Verwendung von cytidinderivaten zur behandlung von leukämie
AU2004201676B2 (en) * 1999-03-29 2006-03-09 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Methods of treating leukemia
US6653318B1 (en) 1999-07-21 2003-11-25 Yale University 5-(E)-Bromovinyl uracil analogues and related pyrimidine nucleosides as anti-viral agents and methods of use
US6683061B1 (en) 1999-07-22 2004-01-27 Newbiotics, Inc. Enzyme catalyzed therapeutic activation
ES2218216T3 (es) 1999-09-24 2004-11-16 Shire Biochem Inc. Analogos de nucleosidos de dioxolano para el tratamiento o la prevencion de infecciones viricas.
CA2389745C (en) 1999-11-04 2010-03-23 Shire Biochem Inc. Method for the treatment or prevention of flaviviridae viral infection using nucleoside analogues
EP1600451A3 (en) 1999-11-12 2008-09-10 Pharmasset, Inc. Synthesis of 2'-deoxy-l-nucleosides
AU2002212015B2 (en) * 2000-10-13 2007-01-25 Shire Canada Inc. Dioxolane analogs for improved inter-cellular delivery
CA2441350A1 (en) 2001-01-19 2002-07-25 Newbiotics, Inc. Methods to treat autoimmune and inflammatory conditions
ATE450265T1 (de) * 2001-03-23 2009-12-15 Shire Canada Inc Pharmazeutische mischung zur behandlung von krebs,die dioxolan nukleosidanalogen enthält
CN1744902B (zh) * 2001-03-23 2010-05-26 希拉加拿大股份有限公司 治疗癌症的药物组合
EP1372658A2 (en) * 2001-03-30 2004-01-02 Shire Biochem Inc. Methods of treating cancer using cyplastin combined with a dioxolane nucleoside such as troxacitabine
JP2005512984A (ja) * 2001-11-02 2005-05-12 シャイアー バイオケム インコーポレイテッド ジオキソランヌクレオシド類似体を含む白血病の治療のための医薬組成物
RU2302861C3 (ru) * 2001-11-19 2017-04-14 Медигене Аг Лекарственное средство для лечения вирусных кожных и опухолевых заболеваний
KR100631243B1 (ko) 2002-06-21 2006-10-02 엘지전자 주식회사 비디오 데이터의 재생을 관리하기 위한 데이터 구조를갖는 기록 매체
KR100582957B1 (ko) 2002-06-21 2006-05-23 엘지전자 주식회사 비디오 데이터의 재생을 관리하기 위한 데이터 구조를 갖는기록 매체
BR0305211A (pt) 2002-06-24 2005-06-28 Lg Electronics Inc Meio de gravação possuindo estrutura de dados para gerenciamento de reprodução de dados de vìdeo de trajetória de reprodução múltipla gravados no mesmo e aparelhos e métodos de gravação e reprodução
KR20040000290A (ko) 2002-06-24 2004-01-03 엘지전자 주식회사 고밀도 광디스크의 멀티 경로 데이터 스트림 관리방법
EP1518240B1 (en) 2002-06-28 2014-05-07 LG Electronics, Inc. Recording medium having data structure for managing recording and reproduction of multiple path data recorded thereon and recording and reproducing methods and apparatus
CA2469176C (en) 2002-10-14 2010-09-14 Lg Electronics Inc. Recording medium having data structure for managing reproduction of multiple audio streams recorded thereon and recording and reproducing methods and apparatuses
KR100672111B1 (ko) 2002-10-15 2007-01-19 엘지전자 주식회사 기록된 복수의 그래픽 스트림의 재생을 관리하기 위한데이터 구조를 갖는 기록 매체, 그에 따른 기록 및 재생방법 및 장치
US7720356B2 (en) 2002-11-12 2010-05-18 Lg Electronics Inc Recording medium having data structure for managing reproduction of multiple reproduction path video data recorded thereon and recording and reproducing methods and apparatuses
US7664372B2 (en) 2002-11-20 2010-02-16 Lg Electronics Inc. Recording medium having data structure for managing reproduction of multiple component data recorded thereon and recording and reproducing methods and apparatuses
US7693394B2 (en) 2003-02-26 2010-04-06 Lg Electronics Inc. Recording medium having data structure for managing reproduction of data streams recorded thereon and recording and reproducing methods and apparatuses
US7809775B2 (en) 2003-02-27 2010-10-05 Lg Electronics, Inc. Recording medium having data structure for managing playback control recorded thereon and recording and reproducing methods and apparatuses
EP1604356A4 (en) 2003-02-28 2009-12-16 Lg Electronics Inc RECORD MEDIUM WITH A DATA STRUCTURE FOR MANAGING THE RANDOM / SHUFFLE PLAYBACK OF RECORDED VIDEO DATA, AND METHOD AND DEVICES FOR RECORDING AND PLAYING
US7620301B2 (en) 2003-04-04 2009-11-17 Lg Electronics Inc. System and method for resuming playback
AR045865A1 (es) 2003-10-09 2005-11-16 Medigene Ag El uso de un polifenol para el tratamiento de una lesion cancerosa o pre-cancerosa de la piel
CN103735560A (zh) * 2005-06-07 2014-04-23 耶鲁大学 使用克来夫定和替比夫定治疗癌症和其它病症或疾病状态的方法
CN101511375B (zh) * 2005-12-02 2012-09-05 耶鲁大学 L-胞嘧啶核苷类似物在制备用于治疗癌症和其它病症或疾病状态的药物中的应用
NO324263B1 (no) 2005-12-08 2007-09-17 Clavis Pharma Asa Kjemiske forbindelser, anvendelse derav ved behandling av kreft, samt farmasoytiske preparater som omfatter slike forbindelser
CN101534835B (zh) * 2006-09-01 2012-05-30 佐治亚大学研究基金会 用于癌症的L-OddC的前药
CN103720693A (zh) * 2011-11-15 2014-04-16 张始状 人体五种正常碱基在制备治疗肿瘤药物中的应用
CN102406649A (zh) * 2011-11-15 2012-04-11 张始状 人体五种正常碱基在制备治疗肿瘤药物中的应用
SG10201609131YA (en) 2016-11-01 2018-06-28 Xylonix Ip Holdings Pte Ltd Zinc-pga compositions and methods for treating cancer
CA3045228C (en) * 2016-12-28 2024-01-02 Transgene Sa Oncolytic viruses and therapeutic molecules
SG10201708886RA (en) * 2017-10-30 2019-05-30 Xylonix Ip Holdings Pte Ltd α-PGA-ZINC COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING CANCER

Family Cites Families (52)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4000137A (en) * 1975-06-10 1976-12-28 American Home Products Corporation Antitumor derivatives of periodate-oxidized nucleosides
JPS5668674A (en) * 1979-11-08 1981-06-09 Shionogi & Co Ltd 5-fluorouracil derivative
PT82580B (pt) * 1985-05-15 1989-01-17 Wellcome Found Processo para a preparacao de 2',3'- didesoxinucleosidos e de composicoes farmaceuticas que os contem
US4879277A (en) * 1985-08-26 1989-11-07 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Antiviral compositions and methods
JPS62501712A (ja) * 1985-08-26 1987-07-09 アメリカ合衆国 ２′、３′―ジデオキシイノシン、２′，３′―ジデオキシグアノシンまたは２′，３′―ジデオキシアデノシンを含有する抗ｈｔｌｖ―３／ｌａｖ剤
DK167377B1 (da) * 1985-09-17 1993-10-25 Wellcome Found 3'-azidopyrimidinnucleosider eller farmaceutisk acceptable salte eller estere deraf til anvendelse ved behandling af eller profylakse for en human retrovirusinfektion
IN164556B (sk) * 1986-03-06 1989-04-08 Takeda Chemical Industries Ltd
US4916122A (en) * 1987-01-28 1990-04-10 University Of Georgia Research Foundation, Inc. 3'-Azido-2',3'-dideoxyuridine anti-retroviral composition
FR2601385B1 (fr) * 1986-07-09 1989-09-29 Sucre Rech & Dev Procede de preparation a partir de saccharose d'un melange de sucres a haute teneur en isomaltose par voie enzymatique et produits obtenus
US4963533A (en) * 1986-10-24 1990-10-16 Stichting Rega Vzw (Rega) Therapeutic application of dideoxycytidinene
US5215971A (en) * 1986-12-19 1993-06-01 Medivir Ab Antiviral pharmaceutical composition comprising 5-substituted pyrimidine nucleosides
DE3850571T2 (de) * 1987-03-24 1994-10-27 Nycomed Imaging As 2',3'-dideoxyribofuranoxid-derivate.
US5185437A (en) * 1987-04-09 1993-02-09 Burroughs Wellcome Co. Therapeutic nucleosides
US5466806A (en) * 1989-02-08 1995-11-14 Biochem Pharma Inc. Processes for preparing substituted 1,3-oxathiolanes with antiviral properties
US5047407A (en) * 1989-02-08 1991-09-10 Iaf Biochem International, Inc. 2-substituted-5-substituted-1,3-oxathiolanes with antiviral properties
US5270315A (en) * 1988-04-11 1993-12-14 Biochem Pharma Inc. 4-(purinyl bases)-substituted-1,3-dioxlanes
US5041449A (en) * 1988-04-11 1991-08-20 Iaf Biochem International, Inc. 4-(nucleoside base)-substituted-1,3-dioxolanes useful for treatment of retroviral infections
NZ228645A (en) * 1988-04-11 1991-09-25 Iaf Biochem Int 1,3-dioxolane derivatives substituted in the 5th position by a purine or pyrimidine radical; treatment of viral infections
US4900828A (en) * 1988-05-12 1990-02-13 Hoffmann-Laroche Inc. Intermediate compounds and an improved procedure for the synthesis of 2',3'-dideoxycytidine
SE8802687D0 (sv) * 1988-07-20 1988-07-20 Astra Ab Nucleoside derivatives
DE10299039I1 (de) * 1988-12-19 2003-02-20 Wellcome Found Antivirale Pyrimidin- und Purinverbindungen Verfahren zu ihrer Herstellung und sie enthaltende pharmazeutische Praeparte
UA45942A (uk) * 1989-02-08 2002-05-15 Біокем Фарма, Інк. 1,3-оксатіолан, його похідні, спосіб (варіанти) його одержання та фармацевтична композиція
NZ233197A (en) * 1989-04-13 1991-11-26 Richard Thomas Walker Aromatically substituted nucleotide derivatives, intermediates therefor and pharmaceutical compositions
US5059690A (en) * 1990-03-01 1991-10-22 E. R. Squibb & Sons, Inc. Purinyl tetrahydrofurans
US5071983A (en) * 1989-10-06 1991-12-10 Burroughs Wellcome Co. Therapeutic nucleosides
US5350836A (en) * 1989-10-12 1994-09-27 Ohio University Growth hormone antagonists
IE904378A1 (en) * 1989-12-20 1991-07-03 Abbott Lab Analogs of oxetanyl purines and pyrimidines
US5204466A (en) * 1990-02-01 1993-04-20 Emory University Method and compositions for the synthesis of bch-189 and related compounds
US5700937A (en) * 1990-02-01 1997-12-23 Emory University Method for the synthesis, compositions and use of 2'-deoxy-5-fluoro-3'-thiacytidine and related compounds
US5276151A (en) * 1990-02-01 1994-01-04 Emory University Method of synthesis of 1,3-dioxolane nucleosides
US5527782A (en) * 1990-03-13 1996-06-18 Acic (Canada) Inc. 5-halo-2,3'-O-cyclocytidines
GB9009861D0 (en) * 1990-05-02 1990-06-27 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
AU9125991A (en) * 1990-12-05 1992-07-08 University Of Georgia Research Foundation, Inc., The Enantiomerically pure beta -l-(-)-1,3-oxathiolane nucleosides
US5248776A (en) * 1990-12-05 1993-09-28 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Process for enantiomerically pure β-L-1,3-oxathiolane nucleosides
US5179104A (en) * 1990-12-05 1993-01-12 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Process for the preparation of enantiomerically pure β-D-(-)-dioxolane-nucleosides
US5444063A (en) * 1990-12-05 1995-08-22 Emory University Enantiomerically pure β-D-dioxolane nucleosides with selective anti-Hepatitis B virus activity
IL100502A (en) * 1991-01-03 1995-12-08 Iaf Biochem Int PHARMACEUTICAL PREPARATIONS CONTAINING CIS-4-AMINO-1-) 2-HYDROXIMETHIL-1,3-OXETYOLEN-5-IL (-
NZ241625A (en) * 1991-02-22 1996-03-26 Univ Emory 1,3-oxathiolane derivatives, anti-viral compositions containing such and method of resolving racemic mixture of enantiomers
GB9104740D0 (en) * 1991-03-06 1991-04-17 Wellcome Found Antiviral nucleoside combination
DK0574487T3 (da) * 1991-03-06 2002-10-14 Univ Emory Anvendelse af 5-fluor-2'-deoxy-thiacytidin til behandling af hepatitis B
US5817667A (en) * 1991-04-17 1998-10-06 University Of Georgia Research Foudation Compounds and methods for the treatment of cancer
WO1992018517A1 (en) * 1991-04-17 1992-10-29 Yale University Method of treating or preventing hepatitis b virus
GB9110874D0 (en) * 1991-05-20 1991-07-10 Iaf Biochem Int Medicaments
ZA923641B (en) * 1991-05-21 1993-02-24 Iaf Biochem Int Processes for the diastereoselective synthesis of nucleosides
GB9111902D0 (en) * 1991-06-03 1991-07-24 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB9116601D0 (en) * 1991-08-01 1991-09-18 Iaf Biochem Int 1,3-oxathiolane nucleoside analogues
GB9226927D0 (en) 1992-12-24 1993-02-17 Iaf Biochem Int Dideoxy nucleoside analogues
US5627160A (en) * 1993-05-25 1997-05-06 Yale University L-2',3'-dideoxy nucleoside analogs as anti-hepatitis B (HBV) and anti-HIV agents
WO1995018137A1 (en) * 1993-12-30 1995-07-06 Genta Incorporated Improved process for the purification of oligomers
US5587362A (en) * 1994-01-28 1996-12-24 Univ. Of Ga Research Foundation L-nucleosides
IL115156A (en) * 1994-09-06 2000-07-16 Univ Georgia Pharmaceutical compositions for the treatment of cancer comprising 1-(2-hydroxymethyl-1,3-dioxolan-4-yl) cytosines
US5971983A (en) * 1997-05-09 1999-10-26 The Regents Of The University Of California Tissue ablation device and method of use

Also Published As

Publication number Publication date
MY121548A (en) 2006-02-28
AU704977B2 (en) 1999-05-13
NO971015L (no) 1997-03-05
KR100374477B1 (ko) 2003-06-19
OA10473A (en) 2002-04-08
PL188359B1 (pl) 2005-01-31
CZ63397A3 (en) 1997-07-16
NO971015D0 (no) 1997-03-05
IS4434A (is) 1997-03-04
IS2011B (is) 2005-05-13
FI970918A (fi) 1997-05-02
CN1251680C (zh) 2006-04-19
US8076347B2 (en) 2011-12-13
ES2219666T3 (es) 2004-12-01
SK28197A3 (en) 1997-09-10
DK0781136T3 (da) 2004-08-02
JP3979662B2 (ja) 2007-09-19
DE69533066T2 (de) 2005-06-02
CA2199117A1 (en) 1996-03-14
CN1160351A (zh) 1997-09-24
CA2199117C (en) 2006-04-11
NO313268B1 (no) 2002-09-09
RU2168995C2 (ru) 2001-06-20
IL115156A0 (en) 1995-12-31
US20080171758A1 (en) 2008-07-17
NZ335013A (en) 2000-07-28
AU3586295A (en) 1996-03-27
CN1448142A (zh) 2003-10-15
CZ297873B6 (cs) 2007-04-18
PL318971A1 (en) 1997-07-21
CN1827108A (zh) 2006-09-06
HUT77172A (hu) 1998-03-02
IL115156A (en) 2000-07-16
AP9700939A0 (en) 1997-04-30
US20050261320A1 (en) 2005-11-24
BG101284A (en) 1998-03-31
US7262213B2 (en) 2007-08-28
FI970918A0 (fi) 1997-03-04
EP0781136A4 (en) 1999-06-23
WO1996007413A1 (en) 1996-03-14
BR9508886A (pt) 1997-12-30
PT781136E (pt) 2004-09-30
ZA957483B (en) 1997-06-06
RO118748B1 (ro) 2003-10-30
US6063787A (en) 2000-05-16
KR970705393A (ko) 1997-10-09
AP783A (en) 1999-11-17
DE69533066D1 (de) 2004-06-24
SI0781136T1 (en) 2004-08-31
EP1468687A1 (en) 2004-10-20
EP0781136A1 (en) 1997-07-02
CN1111409C (zh) 2003-06-18
PL189288B1 (pl) 2005-07-29
ATE267015T1 (de) 2004-06-15
EP0781136B1 (en) 2004-05-19
JPH10506385A (ja) 1998-06-23
BG63122B1 (en) 2001-04-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0781136B1 (en) Compounds and methods for the treatment of cancer
US5817667A (en) Compounds and methods for the treatment of cancer
BG63121B1 (bg) Таксоиди, тяхното получаване и фармацевтични състави, които ги съдържат
AU781323B2 (en) Anti-viral pyrimidine nucleoside analogues
US8399420B2 (en) Azacytidine analogues and uses thereof
JPH10507772A (ja) Ｌ−リボフラノシルヌクレオシド
US6436948B1 (en) Method for the treatment of psoriasis and genital warts
JP2009518393A (ja) がん治療用ジオキソラン誘導体
CZ20001667A3 (cs) Deriváty adenosinu

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees

Effective date: 20090905