CZ20001667A3 - Deriváty adenosinu - Google Patents

Abstract

Sloučeniny vzorce (I), kde skupina R2 znamená Ci.3alkyl, halogen nebo atom vodíku; R3 znamená fluorovanou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku s přímým nebo rozvětveným řetězcem a její soli a solváty, obzvláště fyziologicky přijatelné solváty a soli. Sloučeniny jsou agonisty adenosinového receptorů Al a mají nízkou nebo žádnou aktivitu vůči receptorů A3. Sloučeniny jsou použitelné jako inhibitory lipolýzy.

Description

Deriváty adenosinu

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká nových derivátů adenosinu, způsobů jejich výroby, farmaceutických prostředků s jejich obsahem a jejich použití v lékařství.

Podstata vynálezu

Vynález poskytuje sloučeniny vzorce (I), které mají agonistické účinky na adenosinový receptor A1

R¹

HÓ ÓH kde

R² znamená C-i.₃ alkyl, halogen nebo atom vodíku;

R³ znamená fluorovanou alkylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem s 1 až 6 atomy uhlíku;

R¹ znamená skupinu zvolenou ze skupiny (1) -(alk)_n-(C3-7)cykloalkyl včetně přemostěného cykloalkylu, přičemž cykloalkylové skupina může být popřípadě substituována jedním nebo více substituenty ze skupiny OH, halogen, -(Ci.₃)alkoxy, kde (alk) znamená Ci-₃alkylen a n znamená 0 nebo 1, (2) alifatická heterocyklická skupina s 4 až 6 atomy v kruhu obsahující alespoň jeden heteroatom zvolený z O, N a S, popřípadě substituovaný jedním nebo více substituenty zvolenými ze skupiny -(Ci .₃)alkyl, -CO₂-(Ci.₄)alkyl, -COCC^alkyl), -S(=O)_n-(C₁.₃alkyl), -CONR^aR^b, kde skupiny R^a a R^b nezávisle znamenají atom vodíku nebo skupinu Ci.₃alkyl, nebo =0; kde pokud je v heterocyklickém kruhu přítomen atom síry, je tento atom síry popřípadě substituovaný skupinou (=0)_n, kde n je 1 nebo 2, (3) přímý nebo rozvětvený C-|.i₂alkyl, který popřípadě obsahuje jeden nebo více atomů kyslíku, skupin S(=0)_n, kde n je O, 1 nebo 2, nebo atomů dusíku substituovaných alkylovým řetězcem, kde uvedený alkyl je popřípadě substituovaný jednou nebo více z následujících skupin: fenyl, halogen, hydroxy nebo NR^aR^b, kde R^a a R^b znamenají obě O^alkyl nebo atom vodíku, (4) fúzovaný bicyklický atomatický kruh kde B znamená 5- nebo 6-člennou heterocyklickou aromatickou skupinu obsahující jeden nebo více atomů O, N nebo S, kde bicyklický kruh je navázán na atom dusíku vzorce (I) přes atom kruhu A a kruh B je popřípadě substituován skupinou -CO₂-(Ci.₃alkyi), (5) fenylová skupina popřípadě substituovaná jedním nebo více substituenty zvolenými ze skupiny: halogen, -SO₃H, -(alk)nOH, -(alk)n-kyano, -(O)_n-(Ci.₆)alkyl popřípadě substituovaný jedním nebo více atomy halogenu, -(alk)n-nitro, -(O)_m-(alk)_n-CO₂R^c, -(alkn)-CONR^cR^d-(alk)n··· · · · ·«·« • ······ · · · · · · ·

3· · ··· ···· — ···· · ·· · · · · ·

-COR^c, -(alk)n-SOR^e, -(alk)n-SO₂R^e, -(alk)n-SO2NR^cR^d, -(alk)nOR^c, -(alk)n-(CO)m-NHSO2R^e, -(alk)n-NHCOR^c, -(alk)n-NR^cR^d, kde man znamenají O nebo 1 a alk znamená C-i.6alkyíenovou skupinu nebo C₂-6alkenylovou skupinu, (6) fenylová skupina substituovaná 5- nebo 6-člennou heterocyklickou aromatickou skupinou, kde heterocyklická aromatická skupina je popřípadě substituována skupinou C-|.₃alkyl nebo NR^cR^d.

Skupiny R^c a R^d mohou každá nezávisle znamenat atom vodíku nebo skupinu Ci_3alkyl, nebo jestliže může část skupiny NR^cR^d, R^c a R^d spolu s atomem dusíku tvořit 5nebo 6-členný heterocyklický kruh popřípadě obsahující jiné heteroatomy, tento heterocyklický kruh může být popřípadě substituován jednou nebo více C-|.3alkylovými skupinami.

R^e znamená Ci_₃alkyl a jejich soli a solváty, zvláště jejich fyziologicky přijatelné solváty a soli.

Látky s agonistickým účinkem na receptor adenosinu A1 obecného vzorce (I) výše mají vyšší aktivitu vůči adenosinovému receptoru A1 než vůči jiným subtypům adenosinového receptoru, zvláště A3. Sloučeniny zvláště mají malou nebo žádnou aktivitu vůči receptoru A3.

Bude zřejmé, že jestliže skupiny R¹ a/nebo R² ve sloučeninách vzorce (I) obsahují jeden nebo více asymetrických atomů uhlíku, vynález zahrnuje všechny diastereoizomery sloučenin vzorce (I) a jejich směsi. Jinak je stereochemická konfigurace sloučenin podle vynálezu tak jak je znázorněno ve vzorci (I) výše.

• · · ·

- 4 ·«· · » · ·>·· ··· ·· · · · a · • ······ · * ·· · a · • · ··· β · · a ···· · · · · · · ··

Jak se zde používá, termín „alkyl“ znamená alkylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem. Příklady vhodných alkylových skupin ve významu R¹ a R² zahrnují skupiny methyl, ethyl, n-propyl, ipropyl, n-butyl, s-butyl, t-butyl a 2,2-dimethylpropyl.

Jak se zde používá, termín alkylen znamená alkylenovou skupinu obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, např. methylenovou skupinu.

Jak se zde používá, termín C₂.₆alkenyl znamená alkenylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující 2 až 6 atomů uhlíku. Skupina allyl je jeden z příkladů vhodné C₂-6alkenylové skupiny.

Termín halogen znamená fluor, chlor, brom nebo jod.

Termín alifatická heterocyklická skupina znamená cyklickou skupinu obsahující 4 až 6 atomů uhlíku, kde jeden nebo více atomů uhlíku je nahrazeno heteroatomy nezávisle zvolenými ze skupiny dusík, kyslík nebo síra. Tato skupina může být popřípadě substituována jak je definováno výše.

Termín heterocyklická aromatická skupina označuje aromatický mono- nebo bicyklický kruhový systém obsahující od 5 do 10 atomů uhlíku, kde jeden nebo více atomů uhlíku je nahrazeno heteroatomy nezávisle zvolenými ze skupiny dusík, kyslík a síra, přičemž tento kruhový systém může být popřípadě substituován jak je definováno výše.

Farmaceuticky přijatelné soli sloučenin vzorce (I) zahrnují soli odvozené od farmaceuticky přijatelných anorganických a organických kyselin. Mezi příklady vhodných kyselin patří kyselina chlorovodíková, bromovodíková, sírová, dusičná, chlorečná, fumarová, maleinová, fosforečná, glykolová, mléčná, salicylová, jantarová, toluen-psulfonová, vinná, octová, citrónová, methansulfonová, mravenčí, benzoová, malonová, naftalen-2-sulfonová a benzensulfonová. Zvláště vhodnou farmaceuticky přijatelnou solí sloučenin vzorce (I) je ··· ·· · ·*·· ··· · · · · * · ·

5« ·····« « · «· β « · _ · · ··· «··· •··· · · · · ·· ·· hydrochloridové sůl. Další kyseliny jako je kyselina šťavelová, které samy o sobě nejsou farmaceuticky přijatelné, mohou být použity jako meziprodukty pro získávání sloučenin podle vynálezu a jejich farmaceuticky přijatelných adičních solí s kyselinami. Solváty mohou být například hydráty.

Skupina R³ s výhodou znamená C₁_₃fluoralkylovou skupinu, zvláště skupinu fluormethyl nebo fluorethyl, výhodněji skupinu F₂C(Me)-, FCH₂-.

Skupina R² znamená s výhodou atom vodíku, methyl nebo halogen, výhodněji atom vodíku nebo atom chloru.

Skupina R¹ může vhodně znamenat skupinu (alk)_n-C₃-6-cykloalkyl, kde n je 0 nebo 1 a uvedený cykloalkyl je buď substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z atomu halogenu, zvláště fluoru, skupiny OH nebo je nesubstituovaný. n je s výhodou 0. Výhodněji je cykloalkylová skupina monosubstituována buď skupinou OH nebo atomem fluoru a výhodněji má cykloalkylový kruh pět atomů uhlíku.

Skupina R¹ může alternativně znamenat substituovanou nebo nesubstituovanou alifatickou heterocyklickou skupinu, přičemž substituent je zvolený ze skupiny -CO2-(C-i-4)alkyl, -CO-(Ci.3)alkyl, -S(=O)n-(C1.3)alkyl, CONR^aR^b (kde R^a a R^b jsou jak definováno výše), a jestliže v kruhu je přítomen heteroatom S, tento heteroatom může být popřípadě substituován skupinou (=O)n, kde n je 1 nebo 2. Výhodněji je heterocyklický kruh nesubstituovaný nebo jsou substituenty -CO₂-(Ci-₄)alkyl, nebo jestliže je heteroatom S, substituent (=O)_n je navázán na heterocyklický atom síry.

Alifatická heterocyklická skupina je s výhodou nesubstituovaná, nebo jestliže je substituent -CO₂(Ci.₄)alkyl, heteroatom je N a substituent je přímo navázán na uvedený atom dusíku v kruhu.

Heterocyklický kruh je s výhodou šestičlenný a s výhodou obsahuje pouze heteroatom O, N nebo S.

Alternativně může skupina R¹ znamenat přímou nebo rozvětvenou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, popřípadě s alespoň skupinou S(=O)_n a/nebo atomem N substituovaných v řetězci, přičemž jestliže je v řetězci skupina S(=O)_n, n je s výhodou 1 nebo 2. Alkylová skupina může být vhodně nesubstituované nebo substituovaná alespoň jednou skupinou OH.

Skupina R¹ může alternativně znamenat fenylovou skupinu, která je substituovaná jedním nebo více substituenty zvolenými ze skupiny OH a halogen. S výhodou je skupina fenyl disubstituovaná v polohách 2, 4. Oba substituenty jsou s výhodou atomy halogenu, zvláště atomy fluoru a chloru. Zvláště výhodná kombinace je například 2-fluor a 4-chlor.

Je třeba rozumět, že předkládaný vynález zahrnuje všechny kombinace zvláštních a výhodných skupin uvedené výše.

Mezi konkrétní sloučeniny podle vynálezu patří následující látky;

5'-deoxy-5'-fluor-N-(tetrahydropyran-4-yl)-adenosin,

5'-deoxy-5'-fluor-2-methyl-N-(tetrahydropyran-4-yl)-adenosin,

2-chlor-5'-deoxy-5'-fluor-N-(tetrahydropyran-4-yl)-adenosin, (2R,3R,4S,5S)-2-[2-chlor-6-(tetrahydropyran-4-ylamino)-purin-9-yl]-5-trifluormethyltetrahydrofuran-3,4-diol,

2-chlor-5'-deoxy-5'-fluor-N-(2R-fluorcyklopent-(R)-yi)-adenosin,

2-chlor-5'-deoxy-5'-fluor-N-(2S-hydroxy-cyklopent-(S)-yl)-adenosin,

N-(endo-bicyklo[2.2.1]hept-2-yl)-2-chlor-5'-deoxy-5'-fluor-adenosin, • · • « • · » 9 »

ethylester kyseliny 4-[2-chlor-9-(5S-fiuormethyl-3R,4S-dihydroxytetrahydrofuran-2R-yl)-9H-purin-6-ylamino]-piperidin-1-karboxylové,

1- {4-[2-chlor-9-(5S-fluormethyl-3R,4S-dihydroxytetrahydrofuran -2R-yl)-9H-purin-6-ylamino]-piperidin-1-yl}-ethanon, N-(endo-bicyklo[2.2.1]hept-2-yl)-5'-deoxy-5'-fluoradenosin, N-(exo-bicyklo[2.2.1]hept-2-yl)-5'-deoxy-5'-fluoradenosin, 5'-deoxy-5'-fluor-N-(2S-hydroxycyklopent-(S)-yl)-adenosin, ethylester kyseliny 4-[9-(5S-fluormethyl-3R,4S-dihydroxytetrahydrofuran-2R-yl)-9H-purin-6-ylamino]-piperidin-1-karboxylové,

2- chlor-5'-deoxy-N-(1,1-dioxohexahydro-1.delta.6-thiopyran-4-yl)-5'-fluoradenosin,

2-chlor-5'-deoxy-N-(2,3-dihydroxypropyl)-5'-fluoradenosin, (2R,3R,4S,5S)-2-[6-(cyklopropylmethylamino)-purin-9-yl]-(1,1-difluorethyl)-tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5S)-2-[6-(bicyklo[2.2.1]hept-2-ylamino)-purin-9-yl]-5-(1,1 -d if luorethy l)-tetrahyd rof uran-3,4-d iol, methylamid kyseliny 2-[9-(5S-fluormethyl-3R,4R-dihydroxy -tetrahydrofuran-2R-yl)-9H-purin-6-ylamino]-ethansulfonové, 5'-deoxy-5'-fluor-N-(2,2-dimethylpropyi)-adenosin, N-terc-butyl-5'-deoxy-5'fluoradenosin,

5'-deoxy-5'-fluor-N-(tetrahydrothiopyran-4-yl)-adenosin,

2-chlor-5'-deoxy-5'-fluor-N-isobutyladenosin,

2-chlor-5'-deoxy-5'-fluor-N-(1-methansulfonylpiperidin-4-yl)-adenosin,

2-chlor-5'-deoxy-N-(2,2-dimethylpropyl)-5'-fluor-adenosin, • · • · · · • · · · « · «··· • »· ·· · «··«

8· ·«··«« · · · · · « « _ · · ·«· ···· ···* · ·· · ·· ·«

N-(exo-bicyklo[2.2.1]hept-2-yl)-2-chlor-5'-deoxy-5'-fluor-adenosin, butylester kyseliny 4-[2-chlor-9-(5S-fluormethyl-3R,4S-dihydroxytetrahydrofuran-2R-yl)-9H-6-ylamino]-piperidin-1-karboxylové, ethylamid kyseliny 5'-deoxy-N-(1,1-dioxohexahydro-1.delta.6-thiopyran-4-yl)-5'-fluoradenosinpurin-6-yiamino]-piperidin-1-karboxylové,

N-(4-chlor-2-fluorfenyl)-5'-deoxy-5'-fluoradenosin, ethylamid kyseliny 4-[2-chlor-9-(5S-fluormethyl-3R,4S-dihydroxytetrahydrofuran-2R-yl)-9H-purin-6-ylamino]piperidin-1-karboxylové.

Sloučeniny podle vynálezu jsou použitelné jako inhibitory lipolýzy, tj. snižují koncentrace volných mastných kyselin v plazmě. Tyto sloučeniny mohou být tedy použity při léčení hyperlipidemií. Navíc mají tyto sloučeniny jako důsledek své antilipolytické aktivity schopnost snižovat zvýšenou hladinu krevní glukózy, inzulinu a ketonů v těle, a proto mohou být vhodné při léčení cukrovky. Protože antilipolytické prostředky mají hypolipidemické a hypofibrinogenemické účinky, sloučeniny mohou mít také antisklerotické účinky. Antilipolytická aktivita sloučenin podle předkládaného vynálezu byla ukázána jejich schopností snižovat koncentraci neesterifikovaných mastných kyselin (NEFA) u hladovějících krys při orálním dávkování podle způsobu popsaného v P. Strong a další, Clinical Science (1993), 84, 663 - 669.

Navíc k jejich antilipolytickým účinkům mohou sloučeniny podle vynálezu nezávisle ovlivňovat srdeční funkci snižováním tepové frekvence a vodivosti. Sloučeniny mohou být tedy použity při léčení celé řady kardiovaskulárních poruch, například srdečních arytmií, zvláště po infarktu myokardu a angíny.

Navíc jsou sloučeniny podle vynálezu použitelné jako kardioprotektivní látky použitelné při léčbě ischemické srdeční choroby. Jak se zde používá, termín „ischemická srdeční choroba“ zahrnuje poškození spojené jak s ischemií myokardu, tak i reperfuzí, například spojenou se zavedením štěpu při koronárním arteriálním bypassu (CABG), perkutánní transluminální koronární angioplastikou (PTCA), kartioplegií, akutním infarktem myokardu, trombolýzou, stabilní a nestabilní angínou a chirurgickými zákroky na srdci včetně částečné transplantace srdce. Sloučeniny podle vynálezu jsou navíc použitelné pro léčení ischemického poškození dalších orgánů. Sloučeniny podle vynálezu mohou být také cenné při léčení jiných poruch vznikajících jako důsledek rozšířené aterosklerózy, například onemocnění periferních cév (PVD) a mrtvice.

Sloučeniny mohou také inhibováruvolňování reninu a mohou být tak použitelné při léčení hypertenze a selhání srdce. Sloučeniny mohou být také použitelné jako látky ovlivňující centrální nervovou soustavu (například jako hypnotika, sedativa, analgetika a/nebo antikonvulzivní látky, které se používají zvláště při léčení epilepsie).

Navíc se mohou sloučeniny podle vynálezu používat při léčení apnoické pauzy ve spánku.

Sloučenina vzorce (I) a její farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinami jsou použitelné jako analgetika. Proto jsou použitelné při léčení nebo prevenci bolesti. Mohou být použity pro zlepšení stavu hostitele, typicky člověka trpícího bolestí. Mohou být také použity pro zmírnění bolesti u pacienta. Sloučenina vzorce (I) a její farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinami mohou být použity jako preventivní analgetika pro léčení akutní bolesti jako je bolest kosterního svalstva, pooperativní bolest a bolest při chirurgickém zákroku, chronická bolest jako je chronická zánětlivá bolest (například při revmatoidní artritidě a osteoartritidě), neuropatická bolest (například postherpetická neuralgie, neuralgie trigeminu, neuropatie spojené s diabetem

- 10 a bolesti udržované sympatikem) a bolest spojená s rakovinou a fibromyalgií. Sloučenina vzorce (I) může být také použita při léčení nebo prevenci bolesti spojené se stavem jako migréna, tenzní bolest hlavy a bolest spojená s funkčním onemocněním střev (například IBS), bolest na hrudi jiného než srdečního původu a bolest žaludku nevředového původu.

Vynález tedy poskytuje sloučeninu vzorce (I) nebo její fyziologicky přijatelnou sůl nebo solvát pro použití v lékařství a zvláště při léčení člověka nebo zvířete trpícího stavem, při kterém je výhodné snížení koncentrace volných mastných kyselin v plazmě nebo snížení tepové frekvence a vodivosti nebo jestliže terapie zahrnuje léčení ischemického onemocnění srdce, onemocnění periferních cév nebo mrtvici, nebo jestliže pacient trpí poruchami CNS, apnoickými poruchami ve spánku nebo bolestí. '

V dalším provedení poskytuje vynález způsob léčení člověka nebo zvířete trpících stavem, při kterém je výhodné snížení koncentrace volných mastných kyselin v plazmě nebo snížení tepové frekvence a vodivosti, nebo jestliže pacient trpí ischemickým onemocněním srdce nebo je citlivý na toto onemocnění, nebo jestliže pacient trpí onemocněním CNS nebo apnoickou poruchou ve spánku nebo bolestí, přičemž tento způsob zahrnuje podávání účinného množství sloučeniny vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo solvátů.

V dalším provedení poskytuje vynález použití sloučeniny vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo solvátů pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení člověka nebo zvířete trpících stavem, při kterém je výhodné snížení koncentrace volných mastných kyselin v plazmě nebo snížení tepové frekvence a vodivosti, nebo jestliže pacient trpí ischemickým onemocněním srdce nebo je citlivý na toto onemocnění, nebo jestliže pacient trpí onemocněním CNS nebo apnoickou poruchou ve spánku nebo bolestí.

• · · · • · ··« ·· · ·*·« ··* · · « «·«· • ······ · · * · ·· · • · ··· ···· ···· · «· · ·· ··

Vzhledem k výše uvedenému léčení ischemické choroby bylo zjištěno, že podle zvláště neočekávaného hlediska předkládaného vynálezu podávání sloučeniny vzorce (I) před ischemií nejen poskytuje ochranu proti infarktu myokardu, ale ochrana je poskytována také v případě, jestliže je sloučenina vzorce (I) podána po ischemické příhodě a před reperfuzí. To znamená, že způsoby podle předkládaného vynálezu jsou použitelné nejen při plánované nebo očekávané ischemii, například při chirurgickém zákroku na srdci, ale také v případech náhlé a neočekávané ischemie, například při srdeční příhodě a nestabilní angíně.

Bude zřejmé, že odkazy na léčení zahrnují akutní léčení i prevenci stejně jako zmírnění již vytvořených příznaků.

V dalším provedení poskytuje vynález farmaceutický prostředek obsahující alespoň jednu sloučeninu vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo solvát ve spojení s farmaceutickým nosičem a/nebo pomocnou látkou pro použití v lékařství a zvláště při léčení člověka nebo zvířete trpících stavem, při kterém je výhodné snížení koncentrace volných mastných kyselin v plazmě nebo snížení tepové frekvence a vodivosti, nebo jestliže pacient trpí ischemickým onemocněním srdce nebo je citlivý na toto onemocnění, nebo jestliže pacient trpí onemocněním CNS nebo apnoickou poruchou ve spánku nebo bolestí.

Předkládaný vynález dále poskytuje způsob výroby farmaceutického prostředku, který zahrnuje míšení alespoň jedné sloučeniny vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo solvátu s farmaceuticky přijatelným nosičem a/nebo pomocnou látkou.

Prostředky podle vynálezu mohou být formulovány pro topické, orální, bukální, parenterální nebo rektální podávání nebo ve formě vhodné pro podávání inhalací nebo insuflací. Výhodné je orální podávání. Farmaceutické prostředky mohou být upraveny pro zpožděné uvolňování.

• · · · • ·

- 12 Pro místní podávání může být farmaceutický prostředek vhodně ve formě transdermální náplasti.

Tablety a kapsle pro orální podávání mohou obsahovat běžné pomocné látky jako jsou pojivá, například sliz škrobu nebo polyvinylpyrrolidonu, plniva, například laktóza, mikrokrystalická celulóza nebo kukuřičný škrob; kluzné látky, například stearan hořečnatý nebo kyselina stearová; rozvolňovadla, například bramborový škrob, sodná sůl kroskarmelózy nebo sodná sůl glykolátu škrobu; nebo smáčedla jako je laurylsulfát sodný. Tablety mohou být potahovány v oboru známým způsobem. Orální kapalné preparáty mohou být ve formě například vodných nebo olejových suspenzí, roztoků, emulzí, sirupů nebo elixírů nebo mohou být ve formě suchého produktu pro rekonstituci s vodou nebo jiným vhodným vehikulem před použitím. Tyto kapalné prostředky móhou obsahovat běžná aditiva jako jsou suspendující látky, například sorbitolový sirup, methylcelulóza nebo karboxymethylcelulóza; emulgátory, například sorbitanmonooleát; nevodná vehikula (která mohou zahrnovat jedlé oleje), například propylenglykol nebo ethylalkohol; a ochranné látky, například methyl- nebo propyl-p-hydroxybenzoáty nebo kyselinu sorbovou. Farmaceutické prostředky mohou také obsahovat, pokud je to vhodné, pufrační soli, aromatické látky, barviva a sladidla (například mannitol).

Pro bukální podávání mohou být farmaceutické prostředky ve formě tablet nebo pastilek formulovaných běžným způsobem. Sloučeniny vzorce (I) mohou být formulovány pro parenterální podávání jednorázovou injekcí nebo kontinuální infuzí a mohou být obsaženy v jednotkové dávce v ampulích nebo v zásobnících obsahujících více dávek s přidanou ochrannou látkou. Prostředky mohou být ve formě suspenzí, roztoků nebo emulzí v olejových'nebo vodných vehikulech a mohou obsahovat formulační činidla jako suspendující, stabilizační a/nebo dispergační činidla. Alternativně může být účinná složka ve formě prášku pro rekonstituci s vhodným

- 13 • · · · · ··· « · · · * • · · · · · • ·····« · · • · · · · ···· · ·· « vehikulem, například sterilní apyrogenní vodou, před použitím.

Sloučeniny vzorce (I) mohou být také formulovány jako čípky, tj. mohou obsahovat běžné čípkové základy jako je kakaové máslo a další glyceridy.

Navrhovaná dávka sloučenin podle vynálezu pro podávání člověku (tělesné hmotnosti přibližně 70 kg) je 1 mg až 2 g, s výhodou 1 mg až 100 mg účinné složky na jednotkovou dávku, která může být podávána například jednou až čtyřikrát za den. Bude zřejmé, že mohou být prováděny rutinní variace dávkování v závislosti na věku a stavu pacienta. Dávkování bude také záviset na způsobu podávání.

V ještě dalším provedení vynález také poskytuje použití sloučeniny vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo solvátu pro výrobu farmaceutického .prostředku pro léčení člověka nebo zvířete trpících stavem při kterém je výhodné snížení koncentrace volných mastných kyselin v plazmě nebo snížení tepové frekvence a vodivosti, nebo jestliže pacient trpí ischemickým onemocněním srdce nebo je citlivý na toto onemocnění, onemocněním periferních cév (PVD) nebo mrtvicí, nebo jestliže pacient trpí onemocněním CNS nebo apnoickou poruchou ve spánku nebo bolestí.

Sloučeniny vzorce (I) a jejich fyziologicky přijatelné soli nebo solváty mohou být připraveny dále popsanými způsoby, přičemž tyto způsoby tvoří další provedení vynálezu. V následujícím popisu mají skupiny R¹, R² a R³ význam definovaný pro vzorec (I), pokud není uvedeno jinak.

Podle prvního obecného způsobu (A) může být sloučenina vzorce (I) připravena reakcí sloučeniny vzorce (II)

L

o (li)

- 14 kde L znamená odštěpitelnou skupinu jako je atom halogenu (například atom chloru) a skupiny P¹ a P² znamenají atom vodíku nebo vhodnou ochrannou skupinu (například acetyl) se sloučeninou vzorce R¹NH₂ nebo její solí za bazických podmínek.

Sloučeniny vzorce (II) mohou být použity pro výrobu sloučenin vzorce (I) přímo reakcí se skupinou R¹NH₂ buď v nepřítomnosti nebo přítomnosti rozpouštědla jako je alkohol (například nižší alkohol jako je isopropanol, t-butanol nebo 3-pentanol), ether (například tetrahydrofuran nebo dioxan) substituovaný amid (například dimethylformamid), halogenovaný uhlovodík (např. chloroform) nebo acetonitril, s výhodou při zvýšené teplotě, (například až do teploty varu rozpouštědla pod zpětným chladičem) v přítomnosti vhodné látky odstraňující kyselinu, například anorganických bází jako je uhličitan sodný nebo draselný nebo organických bází jako je triethylamin, diisopropylethylamin nebo pyridin.

Před touto reakcí může předcházet nebo po ní následovat v případě potřeby odstranění ochranných skupin P¹ a P² in sítu. Například jestliže skupiny P¹ a P² znamenají acetyl, může se odstranění provést aminem jako je amoniak nebo terc-butylamin v rozpouštědle jako je methanol při vhodné teplotě.

Sloučeniny vzorce (II) mohou být vyrobeny reakcí sloučeniny vzorce (III) °X ,-sOPp’o''

OP (III)

- 15 • · ·

9 kde P³ znamená vhodnou ochrannou skupinu, například Ci_ 3alkyl nebo acetyl, a skupiny Ρ¹, P² a R³ jsou jak definováno výše, se sloučeninou vzorce (IV)

L

R²^

(IV) kde La R² jsou jak definováno výše.

Reakce se pohodlně provádí ve vhodném rozpouštědle, jako je acetonitril v přítomnosti silylačního činidla jako je trimethylsilyltrifluoromethansulfonát a báze jako je diazabicyklo[5.4.0]undec-7~en (DBU). Alternativně je možno sloučeninu vzorce (IV) nejprve silylovat vhodným silylačním činidlem jako je hexamethyldisilazan s následnou reakci silylovaného meziproduktu se sloučeninou vzorce (III) a vhodnou Lewisovou kyselinou, například trimethylsilyltrifluoromethansulfonátem ve vhodném rozpouštědle jako je acetonitril. Sloučeniny vzorce (IV) jsou buď v oboru známé nebo mohou být připraveny ze známých sloučenin použitím analogických metod jako jsou metody používané pro výrobu známých sloučenin vzorce (IV).

Sloučeniny vzorce (III) mohou být vyrobeny z alternativních chráněných sloučenin náhradou alternativních ochranných skupin skupinami P¹ a P²; například jestliže P¹ a P² znamenají acetyl, sloučeniny vzorce (III) mohou být vyrobeny ze sloučenin vzorce (V), kde P⁴ a P⁵ znamenají Ci-3alkyl a P³ je definováno výše odstraněním alkylidenové ochranné skupiny katalyzovaným kyselinou jako je například chlorovodík v methanolu a následnou acylací in šitu například acetanhydridem v přítomnosti báze jako je pyridin v rozpouštědle jako dichloromethan.

- 16 R

O ó

X p·

Sloučeniny vzorce (V) jsou známé sloučeniny nebo mohou být připraveny metodami analogickými se způsoby používanými v oboru pro výrobu známých sloučenin vzorce V. Je zřejmé, že acetyiová skupina v jakýchkoli výše uvedených sloučeninách může být nahrazena jakoukoli vhodnou ochrannou skupinou, například jinými estery.

Analogickými způsoby mohou být také vyrobeny sloučeniny vzorce (I) nebo (II) ze sloučeniny, kde alkylidenové skupiny definované skupinami P⁴ a P⁵ nahradí skupiny P¹ a P². Tato reakce představuje záměnu jedné ochranné skupiny za jinou a uvedené reakce budou odborníkům v oboru zřejmé.

Podle způsobu B je možno sloučeniny vzorce (II) vyrobit z 6-chloropurinribosidu (VI), který je komerčně dostupný nebo se vyrobí z inosinu.

Cl

HO OH

První stupeň tohoto způsobu spočívá v ochraně 2',3‘hydroxylových skupin za vytvoření sloučenin vzorce (VII)

- 17 • · · · · ·

(Vil) kde P⁴ a P⁵ jsou jak definováno výše. Kde jsou 2',3'-hydroxylové skupiny chráněny isopropylidenovou skupinou (P⁴ a P⁵ znamenají methyl), způsob se může provádět použitím acetonu a PTSA (kyselina para-toluensulfonová) nebo jinými standardními způsoby použitím dimethoxypropanu, což je způsob známý odborníkům v oboru.

Sloučenina vzorce (Vil) se potom fluoruje v jediném kroku použitím TsF (para-toluensulfonylfluorid) a TBAF (tetra-n-butylamoniumfluorid) v THF (tetrahydrofuran). Tak se vytvoří sloučenina vzorce (Vlil).

(Vlil)

Odborníkům v oboru bude zřejmé, že fluoralkylový substituent v poloze R³ může být v tomto stupni modifikován. Ve vhodném stupni může být také zaveden substituent R².

Nakonec se sloučenina vzorce (Vlil) zbaví ochranných skupin za standardních podmínek, například kyselou pryskyřicí Dowex a chlorová skupina se nahradí R¹NH₂ jak je popsáno výše, za vytvoření sloučeniny vzorce (I).

- 18 ♦ · · · · · * · · · · · · · » · * ft * ft ♦ ·

Podle dalšího způsobu (C) mohou být sloučeniny vzorce (I) připraveny použitím purin-pyrimidin transferázového enzymatického systému. To je schematicky znázorněno dále:

R¹ ci

6-chlorpurin r¹nh₂

IPA/Hunigsova báze Krok 1

HN

N'

ff

pryskyřice Dowex

Krok 5 - odstranění ochranných skupin

Sloučenina vzorce (I) » » · 1 · i

Tento enzymatický systém v kroku 2 převede purinový kruh na cukerný kruh puridinu. Jak je ukázáno na reakčním schématu, skupina

R¹NH- již byla zavedena standardními způsoby, ale odborníku v oboru bude zřejmé, že tento krok je možno provést kdykoli v průběhu sledu reakcí.

Po kroku 2 je cukerný kruh chráněn skupinami P⁴ a P⁵ jak bylo popsáno výše, například P⁴ a P⁵ znamenají methyl, a následně se provede fluorace 5'-hydroxylové skupiny. Sloučenina se potom zbaví ochranných skupin za získání sloučeniny vzorce (I).

Toto reakční schéma má demonstrovat použití enzymatického systému. Odborník v oboru by byl schopen provést úpravy pro výrobu sloučenin vzorce (I) s jinými skupinami R² a R³. Takový standardní chemický postup je odborníkům v oboru zřejmý.

Další způsob (D) zahrnuje převedení sloučeniny vzorce (I) na jinou sloučeninu vzorce (I) modifikací skupiny R¹, R² nebo R³.

Některé sloučeniny vzorců (II), (III) a (V) jsou nové meziprodukty a tvoří proto další provedení předkládaného vynálezu.

Sloučeniny vzorce R¹NH₂ jsou buď známé látky nebo mohou být vyrobeny ze známých sloučenin použitím běžných postupů s některými výjimkami uvedenými v experimentální části dále.

Určité optické izomery sloučeniny vzorce (I) mohou být získány běžnými způsoby, například syntézou z vhodného asymetrického výchozího materiálu použitím jakéhokoli z popsaných způsobů, nebo pokud je to vhodné dělením směsi izomerů sloučeniny vzorce (I) běžnými způsoby, například frakční krystalizaci nebo chromatograficky. Při výše popsaných obecných způsobech může být získaná sloučenina vzorce (I) ve formě soli, vhodně ve formě farmaceuticky přijatelné soli. Jestliže je zapotřebí, tyto soli mohou být převedeny na odpovídající volné báze běžnými způsoby.

« · φ » « ·· »··» »0 «»

Farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinami sloučenin vzorce (I) mohou být připraveny reakcí sloučeniny vzorce (I) s vhodnou kyselinou v přítomnosti vhodného rozpouštědla jako je acetonitril, aceton, chloroform, ethylacetát nebo alkohol (například methanol, ethanol nebo isopropanol). Farmaceuticky přijatelné adiční soli s bázemi mohou být získány analogickým způsobem působením vhodné báze na roztok sloučeniny vzorce (I). Farmaceuticky přijatelné soli mohou být také připraveny z jiných solí včetně jiných farmaceuticky přijatelných solí sloučenin vzorce (I) použitím běžných způsobů.

Vynález je dále ilustrován následujícími neomezujícími příklady a meziprodukty.

Příklady provedení vynálezu

Standardní podmínky HPLC jsou následující:

Kolona, podmínky a eluent pro standardní automatizovanou preparativní HPLC

Automatizovaná preparativní kapalinová chromatografie s vysokou účinnosti (autoprep. HPLC) byla prováděna na koloně Supelco® ABZ+5 pm 100 mm x 22 mm s elucí směsí rozpouštědel složenou z následujících látek: i) 0,1% kyselina mravenčí ve vodě a ii) 0,05% kyselina mravenčí v acetonitrilu, kde eluent je vyjádřen jako procento ii) ve směsi rozpouštědel při průtoku 4 ml za minutu. Pokud není uvedeno jinak, eluent byl použit jako gradient 0-95 % složky (ii) v průběhu 20 min.

Systém LC/MS

Byly použity dva alternativní systémy pro kapalinovou chromatografií a hmotnostní spektroskopii (LC/MS).

·· ···· ·· ·· • fe » 9 » >: 9 * * « * · • * · · · - _w « • · · « « v · ·· · ·· A·

Systém A:

Tento systém používal kolonu ABZ+PLUS, 3,3 cm x 4,6 mm a eluci rozpouštědly: A - 0,1% obj/obj kyselina mravenčí + 0,077 % hmotn/obj octanu amonného ve vodě; a B - 95:5 acetonitrikvoda + 0,05 % obj/obj kyseliny mravenci s průtokem 1 ml za min. Byl použit následující protokol: 100 % A 0,7 min; A+B směs, profil gradientu 0 až 100 % B v průběhu 3,5 min; zdržení na 100 % B 3,5 min; návrat na 100 % A v průběhu 0,3 min.

Systém B:

Tento systém používal kolonu ABZ+PLUS, 3,3 cm x 2,0 mm s elucí rozpouštědly: A - 0,1 % obj/obj kyselina mravenčí + 0,077 % hmotn/obj octan amonný ve vodě; a B - 95:5 acetonitrikvoda + 0,05 % obj/obj kyseliny mravenčí, průtok .0,8 ml za min. Bylo použito následujícího protokolu gradientu: směsi A+B, profil gradientu 0 100 % B v průběhu 3,5 min; zdržení na 100 % B 1,5 min; návrat na 100 % A v průběhu 0,5 min.

Oba systémy používaly přístroje typu micromass „platform“ spectrometer v modu elektrorozprašovací ionizace, přepínání kladných a záporných iontů, rozmezí hmotnosti 80 až 1000 jednotek atomové hmotnosti.

Systém HPLC

Analytický systém HPLC používal kolonu Inertsil® ODS2 150 mm x 4,6 mm s elucí rozpouštědly: A - 0,1 % obj/obj kyselina fosforečná a B - 95:5 acetonitrikvoda + 0,1 % obj/obj kyselina fosforečná. Bylo použito následujícího protokolu pro gradient při průtoku 1,0 ml/min: 100 % A 2 min; směsi A+B, profil gradientu 0 až 100 % B v průběhu 40 min; zdržení při 100 % B 10 min.

• · · · • · • · • · • · · ► · · · ·

- 22 Blesková chromatografie byla prováděna buď na silikagelu Merck (Merck 9385), nebo na předplněných silikagelových patronách (Biotage).

Meziprodukt 1 β anomer: 4R-acetoxv-2S-fluormethvl-5R-methoxytetrahvdrofuran-3S-yl-ester kyseliny octové α anomer: 4R-acetoxv-2S-fluormethyl-5S-methoxvtetrahydrofuran-3S-yl-ester kyseliny octové (3aS,4S,6R,6aR)-4-fluormethyl-6-methoxy-2,2-dimethyl-tetrahydro-furo[3,4-d][1,3]dioxol (Sharma, Moheshwar; Li, Yi X; Ledvina, Miroslav; Bobek, Miroslav, Nucleosides Nucleotides (1995), 14 (9 & 10), 1831 - 52) (4,0 g) byl zahříván pod zpětným chladičem s koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou (0,8 ml) v methanolu (140 ml) 1,5 hod. Roztok byl odpařen, bylo přidáno větší množství methanolu (120 ml) a zahřívání pod zpětným chladičem pokračovalo přes noc (16 hod). Rozpouštědlo bylo znovu odpařeno ve vakuu, byl přidán čerstvý methanol (120 ml) a zahřívání pod zpětným chladičem pokračovalo 5 hod. Rozpouštědlo bylo odpařeno ve vakuu a zbytek byl azeotropně destilován s methanolem (50 ml) za poskytnutí surového diolového meziproduktu jako bezbarvého oleje (3,04 g). Surový diol byl rozpuštěn v suchém dichlormethanu (80 ml) a smísen s pyridinem (6,3 ml), acetanhydridem (5,5 ml; 5,85 mmol) a 4-dimethylaminopyridinem (100 ml). Směs byla míchána při pokojové teplotě pod dusíkem 16 hod a rozpouštědlo bylo odpařeno ve vakuu za získání bleděžlutého oleje (4,8 g). Tento olej byl rozdělen mezi dichlormethan a 8% vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného. Organické vrstvy byly promyty roztokem soli, sušeny (MgSO₄) a odpařeny ve vakuu za získání bleděžlutého oleje (4,34 g). Čištění bleskovou chromatografií na silikagelu (Biotage), eluce směsí • · · · · · · • · · · « · • · · · · · · ······ · · · ·

QQ · · · · · ·

ZO ···· · ·· · ethylacetátcyklohexan 25:75 a 40:60, poskytly v názvu uvedenou sloučeninu (anomery α a β).

β-anomer: bezbarvý olej (2,2 g)

TLC SiO₂ (ethylacetát:cyklohexan 1:2) Rf=0,4 a-anomer: bezbarvý olej (0,945 g)

TLC SiO₂ (ethylacetát:cyklohexan 1:2) Rf=0,2

Meziprodukt 2

4S-acetoxy-2R-(6-chlorpurin-9-vl)-5S-fluormethyltetrahydrofuran-3R-vl-ester kyseliny octové

Suspenze 6-chlorpurinu (5,53 g) v hexamethyldisilazanu (75 ml) a suchém toluenu (75 ml) byla zahřívána pod zpětným chladičem v proudu dusíku 2 hod. Po ochlazení byla rozpouštědla odpařena ve vakuu a zbytek byl odpařen společně s toluenem (50 ml). Takto získaný silylovaný purin byl rozpuštěn v suchém acetonitrilu (75 ml) a byl přidán 4R-acetoxy-2S-fluormethyl-5R-methoxytetrahydrofuran-3S-yl-ester kyseliny octové (3,03 g) a potom trimethylsilyltrifluormethansulfonát (5,0 ml). Roztok byl zahříván na 90 °C 2 hod, ochlazen, vlit do 8% vodného roztoku hydrogenuhíičitanu sodného (200 ml). Směs byla extrahována ethylacetátem extrakty byly sušeny (Na₂SO₄) a odpařeny ve vakuu. Další surový produkt byl získán z 4R-acetoxy-2S-fluormethyl-5S-methoxytetrahydrofuran-3S-yl-esteru kyseliny octové (5,56 g) a 6-chlorpurinu (5,53 g) jak bylo popsáno výše. Surové produkty byly spojeny a čištěny bleskovou chromatografií na silikagelu (Merck 9385), s eluci etherem za získání v názvu uvedené sloučeniny jako bílé pevné látky (9,17 g).

TLC SiO₂ (ether) Rf=0,2

- 24 Meziprodukt 3

4S-acetoxv-5S-fluormethvl-2R-f6-(tetrahvdropvran-4-vlamino)-purin-9-vH-tetrahydrofuran-3R-yl ester kyseliny octové

Roztok 4S-acetoxy-2R-(6-chlorpurin-9-yl)-5Sfluormethyltetrahydrofuran-3R-yl ester kyseliny octové (3,03 g) v isopropanolu (120 ml) byl smíchán s diisopropylethylaminem (8,4 ml) a hydrochloridem 4-aminotetrahydropyranu (Johnston, Thomas P.; McCaler, George S.; Opliger, Pamela S.; Laster, W. Russell; Montgomery, John A. Kettering-Meyer Lab, J. Med. Chem. (1971), 14(7), 600 - 14.) (3,26g), a směs byla zahřívána pod zpětným chladičem v atmosféře dusíku 8 hod. Roztok byl ochlazen a rozpouštědlo odpařeno ve vakuu. Zbytek byl zpracován 8% hydrogenuhličitanem sodným (150 ml) a extrahován ethylacetátem. Extrakty byly sušeny (Na₂SO₄) a odpařeny ve vakuu za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny jako pěny (3,67 g).

LC/MS (Systém A): R_t = 3,81 min

Meziprodukt 4 (mezinárodní přihláška PCT WO 9507921 A1 950323)

4S-acetoxv-2R-(2,6-dichlorpurin-9-vl)-5S-fluormethyltetrahydrofuran-3R-yl-ester kyseliny octové

2,6-dichlorpurin (6,1 g) byl zahříván s hexamethyldisilazanem (112 ml) při 130 °C za míchání v atmosféře dusíku 2 hod. Směs byla odpařena ve vakuu za poskytnutí bílé pevné látky, která byla azeotropně destilována se suchým toluenem (80 ml). Zbytek byl smíchán s roztokem 4R-acetoxy-2S-fluormethyl-5Rmethoxytetrahydrofuran-3S-yl-esteru kyseliny octové (β-anlmer meziproduktu 1) (2,5 g) v suchém acetonitrilu (100 ml) a potom s trimethylsilyltrifluormethansulfonátem (6,63 ml) a směs byla zahřívána pod zpětným chladičem 2 hod. Směs byla rozdělena mezi nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného a dichlormethan • · » «

- 25 a organické vrstvy byly promyty roztokem soli, sušeny (MgSO₄) a odpařeny ve vakuu za poskytnutí hnědé gumy (4,6 g). Čištění bleskovou chromatografií na silikagelu (Merck 9385) s eluci směsí ethylacetát:cyklohexan 40:60 poskytlo v názvu uvedenou sloučeninu jako bílou pěnu (2,67 g; 64 %).

TLC SiO₂ (ethylacetát:cyklohexan 2:1) Rf = 0,55.

Meziprodukt 5

4S-acetoxv-2R-(6-chlor-2-methvlpurin-9-vl)-5S-fluormethyltetrahydro-furan-3R-yl-ester kyseliny octové

6-chlor-2-methylpurin (Bourguignon, Jean-Jacques; Desaubry, Laurent; Raboisson, Pierre; Wermuth, Camille-Georges; Lugnier, Claire. Bourguignon, Jean-Jacques; Desaubry, Laurent; Raboisson, Pierre; Wermuth, Camille Georges; Lugnier, Claire. Laboratoire de Pharmacochimie Moleculaire, Centre de Neurochimie, Strasbourg, 67084, Fr. J. Med. Chem. (1997), 40(12), 1768 - 1770) (202 mg) byl zahříván při 80 °C s hexamethyldisilazanem (2 ml) a suchým toluenem (3 ml) 24 hod. Byl přidán suchý toluen (5 ml), rozpouštědlo bylo odpařeno ve vakuu a zbytek byl azeotropně destilován s dalším suchým toluenem (5 ml). K surovému silylovanému purinu byl přidán roztok 4R-acetoxy-2S-fluormethyl-5R-methoxytetrahydrofuran-3S-yl-esteru kyseliny octové (98 mg) v suchém acetonitrilu (5 ml) a potom byl přidán trimethylsilyltrifluormethansulfonát (0,26 ml). Směs byla zahřívána pod zpětným chladičem 4 hod, ponechána ochladit a rozdělena mezi nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (5 ml) a dichlormethan (40 ml). Organická vrstva byla promyta vodou, sušena (MgSO₄) a odpařena ve vakuu za poskytnutí surového produktu. Čištění bleskovou chromatografií na silikagelu (Merck 9385) s eluci směsí cyklohexan:ethylacetát (1:1) poskytlo v názvu uvedenou sloučeninu jako bílou pevnou látku (109 mg).

• · ·

- 26 » * · I

I · · ( » · · I • · · ·

Hmotnostní spektrum m/z 387 (MH⁺)

Meziprodukt 6

4S-acetoxv-5S-fluormethvl-2R-f2-methyl-6-(tetrahvdropvran-4-vlamino)-purin-9-vH-tetrahydrofuran-3R-vl-ester kyseliny octové

Roztok 4S-acetoxy-2R-(6-chlor-2-methylpurin-9-yl)-5S-fluormethyltetrahydro-furan-3R-yl-esteru kyseliny octové (108 mg), 4-aminotetrahydropyranhydrochlorid (153 mg) a diisopropylethylamin (0,13 ml) v isopropanolu (10 ml) byly zahřívány při 80 °C 72 hod. Rozpouštědlo bylo odpařeno ve vakuu za poskytnutí hnědého polotuhého zbytku. Čištění bleskovou chromatografií na silikagelu (Merck 9385) s eluci směsí ethylacetátcyklohexan 1:1, ethylacetátem a směsí ethylacetát:ethanol 10:1 poskytlo v názvu uvedenou sloučeninu (61 mg).

Hmotnostní spektrum m/z 452 (MH⁺)

Meziprodukt 7

4R,5-diacetoxv-2-trifluormethvltetrahydrofuran-3S-yl-ester kyseliny octové (3aR,6S,6aS)-2,2-dimethyl-6-trifluormethyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-ol (Munier, Pascal; Picq, Dominique; Anker, Daniel. Munier, Pascal; Picq, Dominique; Anker, Daniel. Lab. Chim. Org, Univ. Claude Bernard, Villeurbanne, 69622, Fr. Tetrahedron Lett. (1993), 34(51), 8241 - 4) (1,07 g) byl rozpuštěn ve směsi 9:1 kyselina trifluoroctová:H2O (15 ml) a roztok byl míchán při 22 °C 4 hod. Roztok byl zakoncentrován ve vakuu a potom opakovaně společně odpařován s toluenem za získání čiré bezbarvé gumy. Tato guma byla rozpuštěna v suchém pyridinu (30 ml), byl přidán acetanhydrid (8,99 ml) a získaný roztok byl míchán při 22 °C v atmosféře N₂ 3 dny.

- 27 • · « . « ···· • · · ·· · ***· ·····« · · · « ·· · • ··· ···· • · · · · ····

Pyridin a nadbytečný acetanhydrid byly odpařeny ve vakuu a potom byl zbytek opakovaně odpařován spolu s toluenem za získání tmavěhnědého oleje. Čištění bleskovou chromatografií na koloně silikagelu (Merck 9385) s elucí směsí cyklohexamethylacetát 1:1 poskytlo v názvu uvedenou sloučeninu jako bleděžlutou gumu (1,37 g).

TLC SiO₂ (ethylacetát) Rf = 0,9.

Meziprodukt 8

4S-acetoxv-2R-(2,6-dichlorpurin-9-vl)-5S-trifluormethvltetrahydrofuran-3R-yl-ester kyseliny octové

4R,5-diacetoxy-2-trifluormethyltetrahydrofuran-3S-yl-ester kyseliny octové (1,09 g) byl rozpuštěn v bezvodém acetonitrilu (5 ml) a byl přidán 2,6-dichlorpurin (0,788 g) a potom 1,8-diazabicyklo[5.4.0]undec-7-en (DBU) (0,676 ml) a trimethylsilyl trifluormethansulgonát (0,94 ml) (TMSOTf). Získaný roztok byl míchán při 22 °C v atmosféře dusíku 16 hod. Byl přidán další 2,6-dichlorpurin (200 mg) a potom DBU (0,17 ml) a TMSOTf (0,24 ml) a směs byla míchána při 22 °C v atmosféře dusíku 4 dny a potom byla zahřívána pod zpětným chladičem 4 hodiny. Směs byla ochlazena a rozdělena mezi ethylacetát a vodu. Vodná vrstva byla extrahována ethylacetátem a spojené organické extrakty byly sušeny (MgSO₄) a koncentrovány ve vakuu za poskytnutí hnědé gumy. Čištění bleskovou chromatografií na silikagelu (Merck 9385) s elucí směsí 1:1 cyklohexamethylacetát poskytlo v názvu uvedenou sloučeninu jako ableděžlutou pěnu (1,30 g).

TLC SiO₂ (ethylacetát) R_f=0,6.

• · • ·

- 28 » · « · ·

Meziprodukt 9

4S-acetoxv-2R-F2-chlor-6-(tetrahvdropyran-4-vlamino)-purin-9-vi1-5S-trifluormethvltetrahydrofuran-3R-vl-ester kyseliny octové

4S-acetoxy-2R-(2,6-dichlorpurin-9-yl)-5S-trifluormethyl-tetrahydrofuran-3R-yl-ester kyseliny octové (177 mg) byl zahříván při 60 °C s 4-aminotetrahydropyranhydrochloridem (110 mg) a diisopropylethylaminem (0,17 ml) v isopropanolu (5 ml) 2 dny. Rozpouštědlo bylo odpařeno ve vakuu a zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií na silikagelu (Merck 9385) s eluci směsí ethylacetát:cyklohexan 2:1, za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny jako bílé pěny (0,146 g).

Hmotnostní spektrum m/z 508 (MH⁺).

Meziprodukt 10 (3aS,4S_l6R,6aR)-4-(1,1-difluorethvl)-6-methoxv-2,2-dimethyl-tetrahydrofurof3,4-diri,31dioxol

Roztok 1-(6R-methoxy-2,2-dimethyltetrahydro-(3aS,6aR)-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4S-yl)-ethanonu (Hampton, Alexander; Perini, Florian; Harper, Peter J. Fox Chase Cent. Hampton, Alexander; Perini, Florian; Harper, Peter J. Fox Chase Cent. Cancer Med. Sci., Inst. Cancer Res., Philadelphia, Pa, USA, Carbohydr. Res. (1974), 37(2), 359 - 67) (6,53 g) v dichlormethanu (200 ml) byl smísen s trifluoridem diethylaminosírovým (10,4 ml) a směs byla míchána při 22 °C 5 dnů. Roztok byl opatrně přidán do 2M vodného roztoku uhličitanu sodného (200 ml), směs byla opatrně protřepána, organická fáze oddělena a vodná vrstva dále extrahována dichlormethanem. Spojené organické vrstvy byly sušeny (Na₂SO₄) a odpařeny. Zbytek byl čištěn chromatografií na silikagelu (Merck 9385) s eluci cyklohexanem a směsí cyklohexan.ether (19:1 - 9:1) za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny jako bleděžlutého oleje (4,72 g).

- 29 NMR (CDCI3)

5,08 δ(1Η, brs, CH), 4,95 δ(1Η, brd, CH), 4,59 δ(1Η, d, CH),

4,21 δ(1Η, dd, CH, JF-C-CH6.22 Hz, 3,39 δ(3Η, s, OMe), 1,68 δ (3H, t,

JF-C-CH3), 1,5, 1,33 6(2x3(2x3H,2xs,2xCH₃).

Meziprodukt 11 (β anomer): rel-4R,5S-diacetoxy-2S-( 1,1 -difluorethyQ-tetrahydrofuran-3S-yl-ester kyseliny octové (a anomer): rel-4R,5R-diacetoxy-2S-(1,1-difluorethyl)-tetrahydrofuran-3S-yl-ester kyseliny octové (3aS,4S,6R,6aR)-4-(1,1-difluorethyl)-6-methoxy-2,2-dimethyl-tetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol (4,71 -g) byl rozpuštěn ve směsi kyselina octová:voda (4:1, 125 ml) a směs byla zahřívána pod zpětným chladičem 18 hod. Zbytek byl dvakrát odpařen společně s toluenem, rozpuštěn v dichlormethanu (70 ml) a smísen s pyridinem (8 ml), 4-dimethylaminopyridinem (30 mg) a acetanhydridem (7 ml). Tmavý roztok byl ponechán stát 41 hod. Rozpouštědla byla odstraněna ve vakuu a zbytek byl znovu odpařen dvakrát s toluenem. Zbytek byl rozdělen mezi 8% vodný hydrogenuhličitan sodný a dichlormethan. Organické extrakty byly sušeny (Na₂SO₄) a odpařeny ve vakuu a zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií na silikagelu (Merck 9385) s elucí směsí cyklohexan.ether (1:1 - 2:3 - 1:4) za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (β anomer): 2,51 g (41 %); a v názvu uvedené sloučeniny (a anomer): 2,13 g (35 %).

(β anomer): TLC SiO₂ (ether) R_f = 0,58.

(a anomer): TLC SiO₂ (ether) Rf = 0,51.

• · · ·

Meziprodukt 12

4S-acetoxy-2R-(6-chlorpurin-9-yl)-5S-( 1,1 -difluorethyl)-tetrahydrofuran-3R-yl-ester kyseliny octové

6-chlorpurin (1,52 g), hexamethyldisiiazan (10 ml) a toluen (50 ml) byly zahřívány pod zpětným chladičem 2 hod. Rozpouštědla byla odstraněna ve vakuu a byl přidán rel-4R,5R-diacetoxy-2S-(1,1difiuorethyl)-tetrahydrofuran-3S-yl-ester kyseliny octové (2,31 g) v suchém acetonitrilu (50 ml) a potom 1,8-diazabicyklo[5.4.0]undec-7-en (2,0 ml, 13,4 mmol) a trimethylsilyltrifluormethansulfonát (4,8 ml). Směs byla míchána při 22 °C 17 hod, potom byla zahřívána při 85 °C 90 min. Směs byla vlita do 8% vodného hydrogenuhličitanu sodného a extrahována ethylacetátem. Organické extrakty byly sušeny (Na2SO₄) a odpařeny ve vakuu, a zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií na silikagelu (Merck 9385) s elucí směsí cyklohexan:ether (1:1) a etherem za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny jako bleděžluté gumy (2,49 g).

TLC SiO₂ (ether) R_f = 0,30

Meziprodukt 13

2-(2S-hvdroxy-(S)-cvklopentvl)-isoindol-1,3-dion (1S,2S)-2-aminocyklopentanolhydrochlorid (1,20 g) byl rozpuštěn v roztoku methoxidu sodného (497 mg) v methanolu (10 ml), zfiltrován a odpařen ve vakuu. Zbytek byl rozpuštěn v toluenu (30 ml) a byl přidán ftalanhydrid (1,55 g) a směs byla zahřívána pod zpětným chladičem 24 hod. Po ochlazení byl přidán ethylacetát a směs byla zfiltrována. Filtrát byl odpařen ve vakuu a zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií na silikagelu (40 g) s elucí směsí cyklohexanethylacetát (2:1) za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny jako bezbarvé pevné látky (1,08 g).

Hmotnostní spektrum m/z 232 (MH⁺) • · • ·

- 31 • · · · · · • · • · · · · · · ······ · · ·· • · · · · ···· · · · · · ·

Meziprodukt 14

2-(2S-fluor-(S)-cyklopentyl)-isoindol-1,3-dion

2-(2S-hydroxy-(S)-cyklopentyl)-isoindol-1,3-dion (3,42 g) byl rozpuštěn v suchém dichlormethanu (55 ml) a byl přidán trifluorid diethylaminosírový (3,43 ml) a roztok byl zahříván pod zpětným chladičem v atmosféře dusíku 72 hod. Roztok byl opatrně vlit do 8% roztoku hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a organická fáze byla oddělena. Vodná fáze byla dále extrahována dichlormethanem a spojené organické vrstvy byly sušeny (MgSO₄) a odpařeny ve vakuu. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií na silikagelu (100 g) s eluci směsí cyklohexan-ethylacetát (1:1) za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny jako krémového prášku (1,25 g).

Hmotnostní spektrum m/z 234 (MH⁺), 251 (MNH₄ ⁺)

Meziprodukt 15 (1S,2S)-2-fluorcvklopentylaminhydrochlorid

2-(2S-fluor-(S)-cyklopentyl)-isoindol-1,3-dion (6,75 g), hydrát hydrazinu (1,55 ml) a ethanol (200 ml) byly smíseny s vodou (1,55 ml) a zahřívány pod zpětným chladičem 4 hod. Směs byla ochlazena na 20 °C, zfiltrována a filtrát byl smísen s koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou v množství dostatečném pro dosažení pH 1. Roztok byl odpařen ve vakuu a vložen do vody, zfiltrován a filtrát byl odpařen ve vakuu. Zbytek byl rekrystalizován (s filtrací za horka) ze směsi ethylacetát-methanol (3:1) za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny jako bělavé pevné látky (2,59 g).

NMR 5(DMSO) 8,3 (3H, brs, -NH₃ ⁺), 5,04, (1H, dm, CHF, J F-C-H, 52Hz), 3,49 (1H, brdm, CH, J F-C-C-H 20Hz) a 2,2-1,4 (6H m, 3xCH₂).

• · • · · ·

Příklad 1

5'-deoxv-5'-fluor-N-(tetrahydropyran-4-vl)-adenosin

Roztok 4S-acetoxy-5S-fluormethyl-2R-[6-tetrahydropyran-4-yl-amino)-purin-9-yl]-tetrahydrofuran-3R-yl-esteru kyseliny octové (3,67 g) v methanolu (120 ml) byl smísen s roztokem uhličitanu draselného (3,50 g) ve vodě (přibližně 15 ml) a směs byla míchána při 23 °C 17 hod. Získaný roztok byl nanesen přímo na silikagel (20 g) a čištěn bleskovou chromatografií na silikagelu (Merck 9385) s eluci směsí dichlormethammethanol (10:1) za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny jako bezbarvého oleje (2,16 g).

Rekrystalizace z ethanolu (75 ml) poskytla v názvu uvedenou sloučeninu jako bezbarvou pevnou látku (1,48 g).

LC/MS (Systém A): R_t = 3,25 min.

Hmotnostní spektrum m/z 360 (MH⁺)

Příklad 2

5^,-deoxv-5'-fluor-2-methvl-N-(tetrahydropvran-4-vl)-adenosin

4S-acetoxy-5S-fluormethyl-2R-[2-methyl-6-(tetrahydropyran-4-ylamino)-purin-9-yl]-tetrahydrofuran-3R-yl-ester kyseliny octové (56 mg) byl míchán s uhličitanem draselným (42 mg) v methanolu (2 ml) a vodě (2 ml) při 22 °C 24 hod. Rozpouštědlo bylo odpařeno ve vakuu a zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií na silikagelu (Merck 9385) s eluci směsí dichlormethan:ethanol:880 amoniak (100:10:1) za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny jako bílé pevné látky (44 mg).

TLC SiO₂ (CH₂CI₂:EtOH:880 amoniak, 100:10:1) Rf = 0,25. Hmotnostní spektrum m/z 368 (MH⁺)

- 33 Příklad 3

2-chlor-5'-deoxv-5'-fluor-N-(tetrahvdropvran-4-vl)-adenosin

4S-acetoxy-2R-(2,6-dichlorpurin-9-yl)-5S-fluormethyltetrahydro-furan-3R-yl-ester kyseliny octové (50 mg) byl zahříván při 55 - 58 °C s 4-aminotetrahydropyranhydrochloridem (33 mg) a diisopropylethyl-aminem (0,125 ml) v isopropanolu (5 ml) 21 hod. Po ochlazení na pokojovou teplotu byl přidán methanolový roztok amoniaku (4 ml) a směs byla ponechána stát při pokojové teplotě (22 °C) přes noc (16 hod). Směs byla odpařena dosucha ve vakuu za získání surového produktu, který byl čištěn extrakcí na pevné fízi (5 g, patrona Varian Mega Bondelut, fáze s navázaným aminopropylem, eluce (i) CHCI₃, (ii) acetonem, za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (47 mg).

TLC SiO₂ (CH₂CI₂:MeOH 9:1) R_f = 0,5

Hmotnostní spektrum m/z 388 (MH⁺)

Příklad 4 (2R,3R,4S,5S)-2-í2-chlor-6-(tetrahvdropvran-4-ylamino)-purin-9-yn-5-trifluormethvltetrahydrofuran-3,4-diol

4S-acetoxy-2R-[2-chlor-6-(tetrahydropyran-4-ylamino)-purin-9yl]-5S-trifluormethyltetrahydrofuran-3R-yl-ester kyseliny octové (141 mg) byi míchán při pokojové teplotě s uhličitanem draselným (115 mg) ve směsi 2:1 methanokvoda (6 ml) 17 hod. Rozpouštědlo bylo odstraněno ve vakuu za získání žluté pevné látky (0,274 g). Čištění bleskovou chromatografií na silikagelu (Merck 9385) s eluci ethylacetátem a směsí ethylacetát:methanol 9:1 poskytlo v názvu uvedenou sloučeninu jako bílou pevnou látku (96 mg).

TLC SiO₂ (ethylacetát) R_f = 0,25.

Hmotnostní spektrum m/z 424 (MH⁺).

- 34 Příklad 5 (2R,3R,4S,5S)-2-í6-(bicyklo[2.2.nhept-2-ylamino)-purin-9-vn-5-(1,1-difluorethyl)-tetrahydrofuran-3,4-diol kyseliny octové

4S-acetoxy-2R-(6-chlorpurin-9-yl)-5S-(1,1 -d if I uorethy I)-tetrahydrofuran-3R-yl-ester kyseliny octové (70 mg) byl zahříván při 80 až 85 °C s (±)-endonorbornylaminhydrochloridem a N,N-diisopropylethylaminem (0,18 ml) v isopropanolu (5 ml) 24 hod. Rozpouštědlo bylo odstraněno na objem přibližně 1 ml, byl přidán methanolický amoniak (3 ml) a směs byla ponechána stát 17 hod. Rozpouštědlo bylo odpařeno a zbytek byl čištěn extrakcí na pevné fázi (patrona Varian Bondelut, navázaný aminopropyl) s elucí chlorformem (pro eluci nadbytečného aminu) a směsí ethylacetát:methanol 9:1, za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (0,025 g).

Hmotnostní spektrum m/z 396 (MH⁺).

NMR (MeOD)

8,22 δ (1H, s, heterocyklický CH), 8,17 δ (1H, s, heterocyklický CH), 6,08 δ (1H, d, CH), 4,64 δ (1H, t, CH), 4,49 δ (1H, dd, CH), 4,40 δ (1H, vbrs, CH), 4,15 δ (1H, ddd, CH) JF-C-CH, 7, 17H₃), 2,57 δ (1H, brt, CH), 2,3 - 2,08 δ (2H, brt+m, 2xCH), 1,8-1,5 δ (6H,t+3xCH), 1,51,3 δ (3H, m, 3xCH), 1,04 δ (1H, ddd, CH).

Analogickým způsobem byly syntetizovány sloučeniny z následujících příkladů:

Příklad 6

2-chlor-5-deoxv-5’-fluor-N-(2R-fluorcyklopent-(R)-yl-adenosin

Vyroben z meziproduktu 4 (jako příklad 3)

LC/MS (systém A): R_t = 4,01 min • * · ·· · ··«· ··· · · · «»«·

ΛΑ- · ·♦·* · · · · ·· · · *

- 00 - · · ··· ··*· • · · · 9 9 9 · · 9 9 9

Hmotnostní spektrum m/z 390 (MH⁺)

Příklad 7

2-chlor-5^,-deoxv-5^,-fluor-N-(2S-hvdroxycvklopent-(S)-adenosin

Vyroben z meziproduktu 4 (jako příklad 3)

LC/MS (systém A): R_t = 3,55 min Hmotnostní spektrum m/z 388 (MH⁺)

Příklad 8

N-(endo-bicvklof2.2.11hept-2-yl)-2-chlor-5'-deoxy-5'-fiuoradenosin

Vyroben z meziproduktu 4 (jako příklad 3)

LC/MS (systém A): R_t = 4,32 min Hmotnostní spektrum m/z 398 (MH⁺)

Příklad 9

Ethylester kyseliny 4-r2-chlor-9-(5S-fluormethyl-3R,4S-dihvdroxv-tetrahydrofuran-2R-yl)-9H-purin-6-ylaminol-piperidin-1 -karboxylové

Z meziproduktu 4 (jako příklad 3)

LC/MS (systém A): R_t = 3,90 min Hmotnostní spektrum m/z 459 (MH⁺)

Příklad 10

1-f4-[2-chlor-9-(5S-fluormethvl-3R,4S-dihydroxvtetrahvdrofuran-2R-yl)9H-purin-6-ylaminoj-piperidin-1-yl)-ethanon

Z meziproduktu 4 (jako příklad 1)

- 36 • « · tf • · · · · • » » · · · • »··*«· · * * · * * · • · · · « « · ·

LC/MS (systém A): R_t = 3,67 min Hmotnostní spektrum m/z 429 (MH⁺)

Příklad 11

N-(endo-bicvklo(2.2.11hept-2-vl)-5'-deoxv-5’-fluoradenosin

Z meziproduktu 2 (jako příklad 1)

LC/MS (systém A): R_t = 4,05 min Hmotnostní spektrum m/z 364 (MH⁺)

Příklad 12

N-(exo-bicykloí2.2.1jhept-2-yl')-5'-deoxvr5'-fluoradenosin

Z meziproduktu 2 (jako příklad 1)

Hmotnostní spektrum m/z 364 (MH⁺)

HPLC R_t = 14,8 min

Příklad 13

5'-deoxv-5'-fluor-N-(2S-hydroxvcvklopent-(S)-vl)-adenosin

Z meziproduktu 2 (jako příklad 1)

Hmotnostní spektrum m/z 354 (MH⁺)

HPLC R_t = 10,3 min

Příklad 14

Ethylester kyseliny 4-f9-(5S-fluormethvl-3R,4S-dihvdroxvtetrahydro-furan-2R-vl)-9H-purin-6-ylaminoj-piperidin-1-karboxylové

Z meziproduktu 2 (jako příklad 1) • * ♦ ** ·· · t . * «*·»···»· ·« «

- - „J,. ; « ·.. .»·

Hmotnostní spektrum m/z 425 (MH⁺)

HPLC R_t = 14,0 min

Příklad 15

2-chlor-5'-deoxy-N-(1,1-dioxohexahydro-1 .delta.6-thiopyran-4-yl)-5'-fluoradenosin

Z meziproduktu 4 (jako příklad 3)

LC/MS (systém A): R_t = 3,66 min Hmotnostní spektrum m/z 436 (MH⁺)

Příklad 16

2-chlor-5'-deoxv-N-(2,3-dihydroxvpropvl)-5'-fluoradenosin

Z meziproduktu 4 (jako příklad 3)

LC/MS (systém A): R_t = 3,07 min Hmotnostní spektrum m/z 378 (MH⁺)

Příklad 17 (2R,3R,4S,5S)-2-[6-(cvklopropylmethvlamino)-purin-9-vn-(1,1-difluor-ethyl)-tetrahydrofuran-3,4-diol

Z meziproduktu 12 (příklad 5)

Hmotnostní spektrum m/z 356 (MH⁺)

LC/MS (systém A): R_t = 3,73 min

- 38 Příklad 18

Methylamid kyseliny 2-í9-(5S-fluormethvl-3R,4R-dihydroxvtetrahvdro-furan-2R-yl)-9H-purin-6-ylamino1-ethansulfonové

Z meziproduktu 2 (jako příklad 1)

Hmotnostní spektrum m/z 391 (MH⁺)

HPLC R_t = 10,1 min

Příklad 19

5'-deoxv-5'-fluor-N-(2,2-dimethylpropyl)-adenosin

Z meziproduktu 2 (jako příklad 1)

LC/MS (systém A): R_t = 4,26 min Hmotnostní spektrum m/z 340 (MH⁺)

Příklad 20

N-terc-butyl-5'-deoxv-5'-fluoradenosin

Z meziproduktu 2 (jako příklad 1)

LC/MS (systém A): R_t = 4,29 min Hmotnostní spektrum m/z 326 (MH⁺)

Příklad 21

5'-deoxv-5'-fluor-N-(tetrahydrothiopvran-4-vl)-adenosin

Z meziproduktu 2 (jako příklad 1)

LC/MS (systém A): R_t = 4,09 min Hmotnostní spektrum m/z 370 (MH⁺) • · · · • ·

- 39 • · · • « · • · · ·

Příklad 22

2-chlor-5^,-deoxv-5^,-fluor-N-isobutyladenosin

Z meziproduktu 4 (jako příklad 3) LC/MS (systém A): R_t = 4,61 min Hmotnostní spektrum m/z 360 (MH⁺)

Příklad 23

2-chlor-5'-deoxv-5'-fluor-N-(1-methansulfonylpiperidin-4-yl)-adenosin

Z meziproduktu 4 (jako příklad 3)

LC/MS (systém A): R_t = 4,22 min Hmotnostní spektrum m/z 465 (MLH⁺)

Příklad 24

2-chlor-5'-deoxv-N-(2,2-dimethvlpropyl)-5^,-fluoradenosin

Z meziproduktu 4 (jako příklad 3)

LC/MS (systém A): R_t = 4,77 min Hmotnostní spektrum m/z 374 (MH⁺)

Příklad 25

N-(exo-bicvklof2.2.nhept-2-yl)-2-chlor-5'-deoxy-5'-fluoradenosin

Z meziproduktu 4 (jako příklad 3)

LC/MS (systém A): R_t = 4,92 min Hmotnostní spektrum m/z 398 (MH⁺)

- 40 • ·

Příklad 26

Butylester kyseliny 4-|'2-chlor-9-(5S-fluormethyl-3R,4S-dihydroxvtetra-hydrofuran-2R-yl)-9H-purin-6-vlamino1-piperidin-1-karboxylové

Z meziproduktu 4 (jako příklad 3)

LC/MS (systém A): R_t = 4,84 min Hmotnostní spektrum m/z 487 (MH⁺)

Příklad 27

5'-deoxy-N-(11-dioxohexahydro-1 .delta. 6-thiopyran-4-vl)-5'-fluor-adenosin

Z meziproduktu 2 (jako příklad 1)

LC/MS (systém A): R_t = 3,64 min Hmotnostní spektrum m/z 402 (MH⁺)

Příklad 28

N-(4-chlor-2-fluorfenyl)-5’-deoxv-5'-fluoradenosin

Z meziproduktu 2 (jako příklad 1)

Hmotnostní spektrum m/z 398 (MH⁺)

LC/MS (systém A): R_t = 4,03 min

Příklad 29

Ethylamid kyseliny 4-f2-chlor-9-(5S-fluormethvl-3R,4S-dihvdroxytetra-hydrofuran-2R-yl')-9H-purin-6-vlamino1-piperidin-1-karboxylové

Z meziproduktu 4 (jako příklad 3)

LC/MS (systém A): R_t = 4,04 min Hmotnostní spektrum m/z 458 (MH⁺)

- 41 ··· ······ ·· ·· ·«« ·· * ··»· ··· ·· · · · · · • ······ · · ·· ·· · • · ··· ···· •··· · ·· · ·· ··

Experimenty s reportérovým genem

Agonistická aktivita byla měřena na buňkách vaječníků čínských křečků (CHO) obsahujících prvky reporterového genu CRE/SPAP/HYG (CRE = prvek odpovědi na cyklický AMP; HYG = rezistence na hygromycin; SPAP = sekrenovaná placentární alkalická fosfatáza), které po stimulaci cAMP produkovaly SPAP. Byla použita buněčná linie, která byla navíc k výše uvedeným prvkům stabilně transfekována buď lidským receptorem A1 pro adenosin nebo lidským receptorem A3 pro adenosin. Buňky byly vysety do 96-jamkových destiček v kultivačním médiu a kultivovány při 37 °C 1 hod. Pro měření účinnosti byly do příslušných jamek přidávány látky s agonistickým účinkem v rozmezí koncentrací přibližně 1O'¹⁰ až 10⁵ M. Po 15 min byly maximální hladiny cAMP stimulovány přídavkem maximální koncentrace forskolinu. Všechny buňky byly potom inkubovány dalších 5 hod při 37 °C a ochlazeny na pokojovou teplotu a potom byl přidán substrát pro fosfatázu (paranitrofenolfosfát, pNPP), který se převádí prostřednictvím SPAP na zbarvenou látku) a 96-jamkové destičky byly odečítány na čtecím zařízení. Z těchto výsledků může být vypočtena závislost inhibice agonistou produkce SPAP stimulované forskolinem na koncentraci. Jedním z agonistů testovaných na každé 96-jamkové destičce byl standardní neselektivní agonista, N-ethylkarboxamidoadenosin (NECA), přičemž účinnost všech testovaných sloučenin s agonistickým účinkem se vyjadřuje vzhledem k účinnosti standardu NECA.

(ECR = poměr koncentrace se stejnou účinnosti vzhledem k NECA = 1) ·

- 42 - Tabulka 1 Bioloaické údaie: receptor A1, A3, hodnoty	• ······ · · · • · · · · ···· · ·· · ECR pro test
reporterového qenu
Příklad	A1	A3
1	1,9	>226,00
2	11,8	>226,00
3	2,41	>139,00
4	190,10
5	7,14	>257,00
6	0,91	>156,00
7	0,45	>91,00
8	0,21	>91,00
9	3,00	>129,00
10	66,80	>162,00
11	0,47	>152,00
12	0,54	>152,00
13	1,47	>152,00
14	1,68	>435,00
15	9,16	>435,00
16	7,29	>240,00
17	22,30	>353,00
18	0,71	>353,00
19	3,51	>353,00
20	8,17	>353,00
21	1,64	>353,00

22	3,30	>145,00
23	11,20	48,90
24	7,83	>233,00
25	0,78	>151,00
26	4,50	>233,00
27	6,20	>162,00
28	2,05	>170,00
29	51,60	>236,00

Zastupuje:

Claims (25)

1. Sloučenina vzorce (I), s agonistickými účinky na adenosinový receptor A1

R¹ (i) kde

R² znamená C1.3 alkyl, halogen nebo atom vodíku;

R³ znamená fluorovanou alkylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem s 1 až 6 atomy uhlíku;

R¹ znamená skupinu zvolenou ze skupiny (1) -(alk)_n-(C₃.₇)cykloalkyl včetně přemostěného cykloalkylu, přičemž cykloalkylové skupina může být popřípadě substituována jedním nebo více substituenty ze skupiny OH, halogen, -(Ci-3)alkoxy, kde (alk) znamená Ci.₃alkylen a n znamená 0 nebo 1, (2) alifatická heterocyklická skupina s 4 až 6 atomy v kruhu obsahující alespoň jeden heteroatom zvolený z O, N a S, popřípadě substituovaný jedním nebo více substituenty zvolenými ze skupiny -(Ci_3)alkyl, -CO2-(Ci-4)alkyl, -CO(Ci.₃alkyl), -S(=O)_n-(C₁.₃alkyl), -CONR^aR^b, kde skupiny R^a a R^b nezávisle znamenají atom vodíku nebo skupinu Ci.₃alkyl, nebo =0; kde pokud je v heterocyklickém kruhu • · • · ·

- 45 přítomen atom síry, je tento atom substituovaný skupinou (=O)„, kde n je 1 síry popřípadě nebo 2, (3) přímý nebo rozvětvený CM₂alkyl, který popřípadě obsahuje jeden nebo více atomů kyslíku, skupin S(=O)_n, kde n je 0, 1 nebo 2, nebo atomů dusíku substituovaných alkylovým řetězcem, kde uvedený alkyl je popřípadě substituovaný jednou nebo více z následujících skupin: fenyl, halogen, hydroxy nebo NR^aR^b, kde R^a a R^b znamenají obě Csalkyl nebo atom vodíku, (4) fúzovaný bicyklický atomatický kruh kde B znamená 5- nebo 6-člennou heterocyklickou aromatickou skupinu obsahující jeden nebo více atomů O, N nebo S, kde bicyklický kruh je navázán na atom dusíku vzorce (I) přes atom kruhu A a kruh B je popřípadě substituován skupinou -CO₂-(C₁.₃alkyl), (5) fenylová skupina popřípadě substituovaná jedním nebo více substituenty zvolenými ze skupiny: halogen, -SO₃H, -(alk)nOH, -(aik)_n-kyano, -(O)_n-(Ci-6)alkyl popřípadě substituovaný jedním nebo více atomy halogenu, -(alk)_n-nitro, -(O)_m-(alk)_n-CO₂R^c, -(alkn)-CONR^cR^d-(alk)n-COR^C, -(alk)n-SOR^e, -(alk)n-SO₂R^e, -(alk)n-SO2NR^cR^d, -(alk)nOR^c, -(alk)n-(CO)m-NHSO2R^e, -(alk)n-NHCOR^c, -(alk)n-NR^cR^d, kde man znamenají 0 nebo 1 a alk znamená Cvsalkylenovou skupinu nebo C2.₆alkenylovou skupinu, (6) fenylová skupina substituovaná 5- nebo 6-člennou heterocyklickou aromatickou skupinou, kde heterocyklická

- 46 • « · • · · · • » · * • · · » » « • « · aromatická skupina je popřípadě substituována skupinou Ci_3alkyl nebo NR^cR^d.

Skupiny R^c a R^d mohou každá nezávisle znamenat atom vodíku nebo skupinu Ci-3alkyl, nebo jestliže může část skupiny NR^cR^d, R^c a R^d spolu s atomem dusíku tvořit 5nebo 6-členný heterocyklický kruh popřípadě obsahující jiné heteroatomy, tento heterocyklický kruh může být popřípadě substituován jednou nebo více Ci.₃alkylovými skupinami.

R^e znamená Ci-3alkyl a její soli a solváty, zvláště fyziologicky přijatelné solváty a soli.

2. Sloučenina podle nároku 1, kde skupina R³ znamená C-|.₃fluoralkylovou skupinu.

3. Sloučenina podle nároku 2, kde skupina R³ znamená skupinu F₂C(Me)- nebo FCH₂-.

4. Sloučenina podle některého z nároků 1 až 3, kde skupina R znamená atom vodíku, methyl nebo halogen.

5. Sloučenina podle nároku 4, kde skupina R² znamená atom vodíku nebo atom chloru.

6. Sloučenina podle některého z nároků 1 až 5, kde skupina R znamená skupinu (alk)_n-C3-₆cykloalkyl, kde n je 0 nebo 1 a uvedený cykloalkyl je substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z atomu halogenu, skupiny OH nebo je nesubstituovaný.

7. Sloučenina podle nároku 6, kde n je 0.

8. Sloučenina podle nároku 6 nebo 7, kde cykloalkylová skupina obsahuje pět atomů v kruhu a je monosubstituována skupinou OH nebo atomem fluoru.

9. Sloučenina podle některého z nároků 1 až 5, kde skupina R¹ znamená substituovanou nebo nesubstituovanou alifatickou heterocyklickou skupinu, přičemž substituent je zvolený ze skupiny -CO2-(Ci.4)alkyl, -CO-ÍCf.sjalkyl, -S(=O)n-(C1.3)alkyl, CONR^aR^b, kde R^a a R^b jsou jak definováno v nároku 1, a jestliže v kruhu je přítomen heteroatom S, tento heteroatom může být popřípadě substituován skupinou (=O)n, kde n je 1 nebo 2.

10. Sloučenina podle nároku 2, kde heterocyklický kruh je nesubstituovaný nebo je substituovaný skupinou -CO₂-(Ci.₄)alkyl, nebo jestliže je heteroatom S, substituent (=O)_n je navázán na heterocyklický atom síry.

11. Sloučenina podle nároku 9, kde heteroatom je atom dusíku a substituent -CO₂(Ci.₄)alkyl je navázán na atom dusíku.

12. Sloučenina podle některého z nároků 9 až 11, kde heterocyklický kruh je šestičlenný a obsahuje pouze jeden heteroatom.

- 48 • · · · ·

13. Sloučenina podle některého z nároků 1 až 5, kde skupina R¹ znamená substituovanou nebo nesubstituovanou přímou nebo rozvětvenou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, popřípadě s alespoň jednou skupinou S(=O)_n a/nebo atomem dusíku substituovaným v řetězci, a n je 1 nebo 2.

14. Sloučenina podle nároku 13, kde alkylová skupina je substituovaná alespoň jednou skupinou OH.

15. Sloučenina podle některého z nároků 1 až 5, kde skupina R¹ znamená fenylovou skupinu, která je substituovaná jedním nebo více substituenty zvolenými ze skupiny OH nebo halogenu.

16. Sloučenina podle nároku 15, kde fenylová skupina je disubstituovaná v polohách 2,4.

17. Sloučenina podle nároku 16, kde oba substituenty jsou atomy halogenu.

18. Sloučenina podle nároku 17, kde substituent v poloze 2 je atom fluoru a substituent v poloze 4 je atom chloru.

19. Sloučenina podle nároku 1, kterou je: 5'-deoxy-5’-fluor-N-(tetrahydropyran-4-yl)-adenosin, 5'-deoxy-5'-fluor-2-methyl-N-(tetrahydropyran-4-yl)-adenosin, 2-chlor-5'-deoxy-5'-fluor-N-(tetrahydropyran-4-yl)-adenosin,

-49 • · (2R,3R,4S,5S)-2-[2-chlor-6-(tetrahydropyran-4-ylamino)-purin-9-yl]-5-trifluormethyltetrahydrofuran-3,4-diol,

2-chlor-5'-deoxy-5'-fluor-N-(2R-fluorcyklopent-(R)-yl)-adenosin,

2-chlor-5'-deoxy-5'-fluor-N-(2S-hydroxy-cyklopent-(S)-yl)-adenosin,

N-(endo-bicyklo[2.2.1]hept-2-yl)-2-chlor-5’-deoxy-5'-fluor-adenosin, ethylester kyseliny 4-[2-chlor-9-(5S-fluormethyl-3R,4S-dihydroxytetrahydrofuran-2R-yl)-9H-purin-6-ylamino]-piperidin-1-karboxylové,

1- {4-[2-chlor-9-(5S-fluormethyl-3R,4S-dihydroxytetrahydrofuran-2R-yl)-9H-purin-6-ylamino]-piperidin-1-yl}-ethanon, N-(endo-bicyklo[2.2.1]hept-2-yl)-5'-deoxy-5'-fluoradenosin, N-(exo-bicyklo[2.2.1]hept-2-yl)-5'-deoxy-5'-fluoradenosin, 5'-deoxy-5'-fluor-N-(2S-hydroxycyklopent-(S)-yl)-adenosin, ethylester kyseliny 4-[9-(5S-fluormethyl-3R,4S-dihydroxytetrahydrofuran-2R-yl)-9H-purin-6-ylamino]-piperidin-1-karboxylové,

2- chlor-5’-deoxy-N-(1,1-dioxohexahydro-1 .delta.6-thiopyran-4-yl)-5'-fluoradenosin,

2-chlor-5'-deoxy-N-(2,3-dihydroxypropyl)-5'-fluoradenosin, (2R,3R,4S,5S)-2-[6-(cyklopropylmethylamino)-purin-9-yl]-(1,1-difluorethyl)-tetrahydrofuran-3,4-diol, (2R,3R,4S,5S)-2-[6-(bicyklo[2.2.1]hept-2-ylamino)-purin-9-yl]-5-(1,1-difluorethyl)-tetrahydrofuran-3,4-diol, methylamid kyseliny 2-[9-(5S-fluormethyl-3R,4R-dihydroxy

-tetrahydrofuran-2R-yl)-9H-purin-6-ylamino]-ethansulfonové,

5'-deoxy-5'-fluor-N-(2,2-dimethylpropyl)-adenosin,

- 50 ·· ···* * * · · » · · * * « · • ♦ · · . «. »

N-terc-butyl-5'-deoxy-5'fluoradenosin,

5'-deoxy-5'-fluor-N-(tetrahydrothiopyran-4-yl)-adenosin,

2-chlor-5'-deoxy-5'-fluor-N-isobutyladenosin,

2-chlor-5'-deoxy-5'-fluor-N-(1-methansulfonylpiperidin-4-yl)-adenosin,

2-chlor-5’-deoxy-N-(2,2-dimethylpropyl)-5'-fluor-adenosin,

N-(exo-bicyklo[2.2.1]hept-2-yl)-2-chlor-5'-deoxy-5'-fluor-adenosin, butylester kyseliny 4-[2-chlor-9-(5S-fluormethyl-3R,4S-dihydroxytetrahydrofuran-2R-yl)-9H-6-ylamino]-piperidin-1-karboxylové, ethylamid kyseliny 5'-deoxy-N-(1;4-dioxohexahydro-1.delta.6-thiopyran-4-yl)-5'-fluoradenosinpurin-6-ylamino]-piperidin-1-karboxylové,

N-(4-chlor-2-fluorfenyl)-5'-deoxy-5'-fluoradenosin, ethylamid kyseliny 4-[2-chlor-9-(5S-fluormethyl-3R,4S-dihydroxytetrahydrofuran-2R-yl)-9H-purin-6-ylamino]piperidin-1-karboxylové.

20. Sloučenina podle nároku 1, která má malou nebo nemá vůbec žádnou aktivitu na adenosinový receptor A3.

21. Sloučenina podle některého z nároků 1 až 20 pro použití v lékařství.

22. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, ž e obsahuje sloučeninu podle některého z nároků 12 až 20 spolu s farmaceutickým nosičem a/nebo pomocnou látkou.

»· 4 9 9 9

23. Použití sloučeniny podle některého z nároků 1 až 20 pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení pacienta trpícího stavem, při kterém je výhodné snížení koncentrace volných mastných kyselin v plazmě nebo snížení tepové frekvence nebo jestliže pacient trpí nebo je náchylný k ischemickému onemocnění srdce, onemocnění periferních cév nebo mrtvici, nebo jestliže pacient trpí bolestí, poruchami CNS nebo apnoickými poruchami ve spánku.

24. Způsob léčení pacienta trpícího stavem, při kterém je výhodné snížení koncentrace volných mastných kyselin v plazmě nebo snížení tepové frekvence nebo, jestliže pacient trpí nebo je náchylný k ischemickému onemocnění srdce, onemocnění periferních cév nebo mrtvici, nebo jestliže pacient trpí bolestí, poruchami CNS nebo apnoickými poruchami ve spánku.

25. Způsob výroby sloučeniny podle některého z nároků 1 až 20, vyznačující se tím, že se provede reakce sloučeniny vzorce (II) (ii) kde L znamená odštěpitelnou skupinu, R¹, R² a R³ jsou jak definováno v nároku 1 a P¹ a P² znamenají atom vodíku nebo ochrannou skupinu, se sloučeninou vzorce R¹NH₂ nebo její solí za bazických podmínek.