SK283675B6 - Použitie R(+)-N-propargyl-1-aminoindánu - Google Patents

Použitie R(+)-N-propargyl-1-aminoindánu Download PDF

Info

Publication number
SK283675B6
SK283675B6 SK1574-97A SK157497A SK283675B6 SK 283675 B6 SK283675 B6 SK 283675B6 SK 157497 A SK157497 A SK 157497A SK 283675 B6 SK283675 B6 SK 283675B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
pai
mao
propargyl
aminoindan
methanesulfonate
Prior art date
Application number
SK1574-97A
Other languages
English (en)
Other versions
SK157497A3 (en
Inventor
Moussa B. H. Youdim
John P. M. Finberg
Ruth Levy
Jeffrey Sterling
David Lerner
Haim Yellin
Alex Veinberg
Original Assignee
Teva Pharmaceutical Industries, Ltd.
Technion Research And Development Foundation Ltd.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=23772591&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=SK283675(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Teva Pharmaceutical Industries, Ltd., Technion Research And Development Foundation Ltd. filed Critical Teva Pharmaceutical Industries, Ltd.
Publication of SK157497A3 publication Critical patent/SK157497A3/sk
Publication of SK283675B6 publication Critical patent/SK283675B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C211/00—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton
    • C07C211/33—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings
    • C07C211/39—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of an unsaturated carbon skeleton
    • C07C211/41—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of an unsaturated carbon skeleton containing condensed ring systems
    • C07C211/42—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of an unsaturated carbon skeleton containing condensed ring systems with six-membered aromatic rings being part of the condensed ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/205—Amine addition salts of organic acids; Inner quaternary ammonium salts, e.g. betaine, carnitine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/20—Hypnotics; Sedatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C211/00—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton
    • C07C211/01—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C211/26—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing at least one six-membered aromatic ring
    • C07C211/30—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing at least one six-membered aromatic ring the six-membered aromatic ring being part of a condensed ring system formed by two rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2602/00—Systems containing two condensed rings
    • C07C2602/02—Systems containing two condensed rings the rings having only two atoms in common
    • C07C2602/04—One of the condensed rings being a six-membered aromatic ring
    • C07C2602/08—One of the condensed rings being a six-membered aromatic ring the other ring being five-membered, e.g. indane

Abstract

Použitie R(+)-N-propargyl-1-aminoindánu alebo jeho farmaceuticky prijateľnej soli na výrobu liečiva na liečenie mŕtvice u subjektu. ŕ

Description

Doterajší stav techniky
V tejto prihláške sú použité viaceré odkazy. Opisy vynálezov z týchto publikácií sú vo svojom celku teda začlenené ako odkaz v tejto prihláške na to, aby sa úplnej šie opísal stav v oblasti, do ktorej tento vynález patrí.
Parkinsonova choroba sa bežne považuje za dôsledok degradácie pre-synaptických dopamínergických neurónov v mozgu s následným poklesom uvoľňovaného množstva neurotransmiterového dopamínu. Nesprávne uvoľňovanie dopamínu preto vedie k vzniku porúch s vôľovým ovládaním svalov, ktoré sú symptomatické pre Parkinsonovú chorobu.
Boli vytvorené viaceré metódy liečenia Parkinsonovej choroby a v súčasnosti sú široko používané vrátane napríklad podávania L-DOPA spolu s inhibítorom dekarboxylázy, ako je napríklad L-carbidopa alebo benserazid. Inhibítor decarboxylázy chráni L-DOPA molekulu proti periférnej dekarboxylácii a tak zabezpečuje zachytenie L-DOPA zostávajúcimi dopaminergickými neurónmi v striatum mozgu. Tu sa L-DOPA konvertuje na dopamín, čo vedie k zvýšeným hladinám dopamínu v týchto neurónoch. V reakcii na fyziologické podnety sú tieto neuróny preto schopné uvoľniť väčšie množstvá dopamínu s hladinami, ktoré sa približujú normálne požadovaným hladinám. Liečenie s L-DOPA teda zmierňuje symptómy choroby a prispieva k vyliečeniu pacienta.
Ale liečenie s L-DOPA má svoje nevýhody, hlavnou je, že jeho účinnosť je optimálna len počas prvých niekoľkých rokov liečenia. Po tomto období sa klinická reakcia zmenšuje a je sprevádzaná nepriaznivými vedľajšími účinkami, ktoré zahŕňajú dyskinéziu, fluktuácie v účinnosti počas dňa („on-off účinok“) a psychiatrické symptómy, ako sú napríklad konfúzne stavy, paranoja a halucinácie. Tento pokles účinku L-DOPA liečenia sa priraďuje mnohým faktorom vrátane prirodzeného vývoja choroby, zmenám dopamínových receptorov ako dôsledku zvýšenej produkcie dopaminu alebo zvýšených hladín dopamínových metabolitov a farmakokinetickým problémom absorpcie L-DOPA (prehľad urobený v Youdim, a spol., Progress in Medicinal Chemistry, 21, 138 až 167 (1984)).
Na prekonanie nevýhod liečenia s L-DOPA boli navrhnuté viaceré spôsoby liečenia, v ktorých je L-DOPA kombinované s MAO inhibítormi s cieľom znížiť metabolické odbúravanie novotvoreného dopamínu (pozri napríklad Chiese, P., U.S. Patent No. 4 826 875, vydaný 2. mája 1989).
MAO existuje v dvoch formách známych ako MAO-A a MAO-B, ktoré sú selektívne pre rôzne substráty a inhibitory. Napríklad MAO-B účinnejšie metabolizuje také substráty, ako je napríklad 2-fenyletylamín, a je selektívne a ireverzibilne inhibovaný pomocou (-)-deprenylu, ako je opísané neskôr.
Treba však poznamenať, že spôsoby liečenia kombinovaním L-DOPA s inhibítorom aj MAO-A aj MAO-B sú nežiaduce, pretože vedú k nepriaznivým vedľajším účinkom spojeným so zvýšenou hladinou katecholamínov v celom centrálnom nervovom systéme. Ďalej je tiež nežiaduca úplná inhibícia MAO, pretože zosilňuje pôsobenie sympatomimetických amínov, ako sú napríklad tyramín, čo vedie k takzvanému „syr efektu“ (opísané Youdim a spol., Handbook of Experimentálny Pharmacology, ed. Trendelenburgom a Weinerom, Springer-Verlag, 90, kap. 3 (1988)). Pretože bolo zistené, že MAO-B je prevládajúcou formou MAO v mozgu, selektívne inhibítory pre túto formu sú teda považované za možné prostriedky na dosiahnutie poklesu dopamínového odbúravania na jednej strane, spolu s minimalizovaním systemických účinkov celkovej inhibície MAO na druhej strane.
Mnohé inhibítory MAO sú chirálnymi molekulami. Hoci jeden enantiomér často má určitú stcrcoselcktivitu v relatívnej účinnosti k MAO-A a -B, daná enantioméma konfigurácia nie je vždy pri rozlišovaní medzi MAO-A a MAO-B selektívnejšia než jeho zrkadlový izomér.
Tabuľka I uvádza IC50 (mmol/1) enantiomémych párov propargylamínov v preparátoch mozgu potkanov pre MAO. Tieto výsledky ukazujú malý rozdiel v schopnosti inhibície MAO-B medzi R a S enantiomérmi. (B. Hazelhoff, a spol., Naunyn-Schmeideberg’s Árch. Pharmacol., 330, 50 (1985)). Oba enantioméry sú selektívne pre MAO-B. V 1967, Magyar, a spol. oznámili, že R-(-)-deprenyl je 500-krát účinnejší než S-(+) enantiomér pri inhibovaní oxidačnej deaminácie tyramínu homogenátom mozgu potkanov. (K. Magyar, a spol., Act. Physiol. Acad. Sci., Hung., 32, 377 (1967)).
V homogenáte pečene potkanov je R-deprenyl len 15krát účinnejší ako S enantiomér. V ďalších skúškach farmakologickej aktivity, ako napríklad inhibícia zachytenia tyramínu, má deprenyl rôzne stereoselektivity. S forma je v niektorých prípadoch účinnejším epimérom. (J. Knoll a K. Magyar, Advances in Biochemical Psychopharmacology, 5, 393 (1972)).
N-Metyl-N-propargyl-l-aminotetralín (2-MPAT) je blízky štrukturálny analóg deprenylu. Absolútna stereochémia 2-MPAT doteraz nebola určená. Ale (+) izomér je selektívny pre MAO-B a (-) izomér je selektívny pre MAOA. Rozdiel v účinnosti medzi 2-MPAT enantiomérmi je menej ako 5-násobný. (B. Hazelhoff, a spol., id.). Enantioméry N-propargyl-l-aminotetralínu (1-PAT) majú tiež podobné aktivitu. Nedostatok údajov v Tabuľke I ukazujúcej jasné vzťahy štruktúra-aktivita medzi izolovanými (+) alebo (-)-2-MPAT, spôsobuje nemožnosť predpovedať ich absolútnu stereochémiu.
Po rozsiahlom počítačovom modelovaní Polymeropoulos nedávno predpovedal, že (R)-N-metyl-N-propargyl-laminoindán (R-l-MPAI) by mal byť účinnejší než (S) ako MAO-B inhibítor. (E. Polymeropoulos, Inhibitors of Monoaminc Oxidase B, I. Szclenyi, cd., Birkhauser Verlag, str. 110 (1993)). Ale opísané experimenty ukazujú, že R-lMPAI je mierne silnejší inhibítor MAO-B než S-l-MPAI, ale je ešte silnejším inhibítorom MAO-A. Aj selektivita medzi MAO-A a -B, aj relatívna účinnosť R a S epimérov sú nízke. Teda napriek očakávaniam je 1-MPAI bez úžitku ako farmaceutické činidlo.
Údaje uvedené neskôr demonštrujú, že vysoká selektivita pre MAO jedného enantioméru oproti druhému sa nedá predpovedať. Štruktúra MAO aktívnych miest nie je dosť dobre známa na to, aby dovolila predpovedať relatívnu účinnosť alebo selektivitu niektorej danej látky alebo páru jej enantiomérov.
Mozgová porážka je treťou najčastejšou príčinou smrti v rozvinutých krajinách. Tí čo prežili často trpia neurologickými a motorickými nespôsobilosťami. Väčšina CNS mŕtvie sa považuje za lokalizovanú anémiu tkaniva po obštrukcii arteriálneho toku krvi, ktorá spôsobuje kyslíkovú a glukózovú depriváciu. Oklúzia strednej cerebráinej artérie pri potkanoch (MCAO) je bežný experimentálny postup, ktorý sa považuje za reprezentovanie mŕtvice pri človeku. Bolo navrhnuté, že neurologické poškodenie spôsobené proximálnou oklúziou tejto artérie pri potkanoch zodpovedá veľkému ložiskovému cerebrálnemu infarktu u ľudí (Yamori a spol., 1976). Táto korešpondencia je založená na podobnostiach medzi kraniálnym obehom týchto dvoch organizmov. Ďalšie zvieracie modely boli opísané Stefanovichom (1983).
Histologické zmeny opísané Tamuraom a spol. (1981), ktorý bol prvý, čo zaviedol MCAO postup, bolo bežne vidno v čelovom kortexe (100 %), v oblasti senzimotorickej (75 %) a auditómej (75 %) a v menšom rozsahu v kortexe okcipitálneho laloku (25 %). Okrem toho boli pozorované Škody v laterálnom segmente spodinového mozgového jadra (100 %), a len v premenlivom rozsahu v jeho strednej časti (38 %). Sprievodne boli opísané pri MCAO zvierat nasledujúce poruchy: neurologické deficity (Menzies a spol., 1992), kognitívne poruchy (Yamamoto a spol., 1988), mozgový edém (Young a spol., 1993; Matsui a spol., 1993; Saur a spol., 1993), znížený prietok cerebrálnej krvi (Teasdale a spol., 1983), katecholamínové fluktuácie. (Cechetto a spol., 1989). Akékoľvek z týchto porúch môžu byť ukazovateľom miery ťažkosti a rozsahu poškodenia mozgu, ktoré spôsobuje MCAO pri potkanoch. Naopak lieky s potenciálom obmedziť alebo zastaviť danú poruchu sa môžu považovať za kandidátov na liečenie mŕtvice u ľudí.
Tabuľka IA IC50 (mmol/1) údaje inhibicie MAO mozgu potkanov propargylamínmi
Látka REF Epimér ΙΝΗΠ3 ICIA RELATÍVNA ÚČINNOSŤ A/B +/-
A B A B
2-MPAI a 140 16 8,8 3 03
46 88 0,5
DEPRENYL a s 3600 16 120 R/S
R 450 6 75 80 2,6
1-MPAI b S 70 50 1,4 23 5
R 3 10 03
1-PAT C S 3800 50 76 4 03
R 900 90 10
a) B. Hazelhoff, a spol., Naunyn-Schmeideberg’s Árch. Pharmacol., 330, 50 (1985).
b) Európska patentová prihláška 436,492 A2, publikovaná 10. júla 1991.
c) Tento vynález.
Ako selektívny MAO-B inhibítor bol rozsiahle študovaný (-)-deprenyl a bol použitý ako MAO-B inhibítor na zosilnenie L-DOPA liečenia. Toto liečenie s (-)-deprenylom je všeobecne výhodné a nespôsobuje „syr efekt“ pri dávkach spôsobujúcich takmer úplnú inhibíciu MAO-B (Elsworth a spol., Psychopharmacology, 57, 33 (1978)). Okrem toho, prídavok (-)-deprenylu ku kombinácii LDOPA a inhibítora dekarboxylázy podávaný Parkinsonovským pacientom vedie k zlepšeniu akinézie a celkovej ľunkčnej kapacity, ako aj k eliminácii fluktuácií typu „onoff ‘ (podľa prehľadu Birkmayer & Riederer v „Parkinson’s Disease,“ Springer-Verlag, str., 138 až 149 (1983)). (-)-deprenyl teda (a) zvyšuje a predlžuje účinok L-DOPA, a (b) nezvyšuje nepriaznivé účinky L-DOPA liečenia.
(-)-Deprenyl však nie je bez svojich vlastných nepriaznivých vedľajších účinkov, ktoré zahŕňajú aktiváciu už existujúcich žalúdkových vredov a príležitostných hypertenzných epizód. Okrem toho je (-)-deprenyl amfetamínový derivát a metabolizuje sa na amfetamín a metamfetamíny, tieto látky vedú k nežiaducim vedľajším účinkom, ako napríklad zvýšený tep srdca (Simpson, Biochemical Pharmacology, 27, 1951 (1978); Finberg, a spol., v „Monoamine Oxidase Inhibitors - The State of the Art,“ editori: Youdim a Paykel, Wiley, str. 31 až 43 (1981)).
Boli opísané ďalšie látky, ktoré sú selektívnymi ireverzibilnými inhibítormi MAO-B, ale ktoré sú bez nežiaducich účinkov spojených s (-)-deprenylom. Jedna takáto látka.
najmä N-propargyl-1-aminoindán.HCl (racemická PA1.HC1), bola opísaná v GB 1,003,686 a GB 1,037,014 a U.S. Patente č. 3,513,244, vydanom 19 mája 1970. Racemický PAI.HC1 je silný, selektívny ireverzibilný inhibítor MAO-B, nie je metabolizovaný na amfetamíny a nespôsobuje vznik neočakávaných sympatomimetických účinkov.
Podstata vynálezu
Podstatu vynálezu tvorí použitie R(+)-N-propargyl-laminoindánu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli na výrobu liečiva na liečenie mŕtvice pri subjekte.
V jednom uskutočnení tohto vynálezu je účinné množstvo od asi 0,01 mg do 50,0 mg za deň. V konkrétnejšom uskutočnení je účinné množstvo od 0,1 do 10,0 mg na deň.
R(+) enantiomér N-propargyl-l-aminoindánu so štruktúrou
(označovaný tiež v tomto dokumente ako PAI), je selektívny ireverzibilný inhibítor B-formy enzýmu monoaminooxidáza (ďalej v tomto dokumente označovaný ako MAOB).
Farmaceutické zmesi obsahujúce R(+)PAI, sú zvlášť užitočné na liečenie Parkinsonovej choroby, porúch pamäti, demencie, depresie, syndrómu hyperaktivity, afektívneho ochorenia, neurodegeneratívnej choroby, neurotoxického poškodenia, mŕtvice, mozgovej ischémie, poranenia hlavy úrazom, poranenia chrbtice úrazom, neuroúrazov, schizofrénie, poruchy nedostatku pozornosti, roztrúsenej sklerózy a abstinenčných symptómov.
Farmaceutická zmes obsahuje terapeuticky účinné množstvo R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli a farmaceutický prijateľný nosič.
Pri porovnávacích testoch na zvieratách bolo zistené, že racemický PAI má významné výhody pred (-)-deprenylom. Napríklad racemický PAI nespôsobuje významnú tachykardiu, nezvyšuje krvný tlak (účinky spôsobované dávkami 5 mg/kg (-)-deprenylu), a nevedie ku kontrakcii niktitačnej membrány alebo k zvýšeniu tepu srdca pri dávkach do 5 mg/kg (účinky spôsobované dávkami 0,5 mg/kg (-)-deprenylu). Okrem toho racemický PAI.HC1 nezosilňuje kardiovaskulárne účinky tyramínu (Finberg a spol., v „Enzymes and Neurotransmitters in Mental Disease,“ str. 205 až 219 (1980), Usdin a spol., Editori, Wiley, New York; Finberg a spol. (1981), v „Monoamine Oxidase Inhibitors - The State of the Art,“ ibid.; Finberg a Youdim, British Joumal Pharmacol., 85, 451 (1985)).
Separáciou racemických PAI látok sa získa enantiomér s MAO-B inhibičnou aktivitou, ktorý by bol bez akýchkoľvek nežiaducich vedľajších účinkov spojených s druhým enantiomérom.
Pretože dcprenyl má podobnú štruktúru na PAI a je známe, že (-)-enantiomér deprenylu, t. j. (-)-deprenyl, je významne viac farmaceutický aktívny ako (+)-enantiomér, očakávalo by sa, že (-)-enantiomér PAI bude aktívnejším MAO-B inhibítorom.
Ale oproti takýmto očakávaniam, po rozdelení enantiornérov sa zistilo, že (+)-PAI enantiomér je naozaj aktívnym MAO-B inhibítorom, kým (-)-enantiomér má extrémne nízku MAO-B inhibičnú aktivitu. Ďalej mal tiež (+)-PAI enantiomér stupeň selektivity na MAO-B inhibíciu prekvapivo vyšší než je selektivita zodpovedajúcej racemickej formy a teda by mal mať menšie nežiaduce vedľajšie účinky pri liečení indikovaných chorôb, než by mala racemická zmes. Tieto zistenia sú založené tak na in vitro, ako aj na in vivo experimentoch, ako je podrobne diskutované neskôr.
Následne sa zistilo, že (+)-PAI má R absolútnu konfiguráciu. Toto zistenie bolo tiež prekvapivo založené na očakávanej štrukturálnej podobnosti (+)-PAI analógu s deprenylom a amfetamínmi.
Vysoký stupeň stereoselektivity farmakologickej aktivity medzi R(+)-PAl a S(-) enantiomérom, ako je diskutovaný ďalej, je tiež významný. Látka R(+)-PAI je takmer štyri poriadky aktívnejšia ako S(-) enantiomér pri MAO-B inhibícii. Tento pomer je významne vyšší než pomer pozorovaný medzi dvoma enantiomérmi deprenylu (Knoll a Magyar, Adv. Biochem. Psychopharmacol., 5, 393 (1972); Magyar a spol., Acta Physiol. Acad. Sci. Hung., 322, 377 (1967)). Ďalej v niektorých fyziologických testoch bolo zistené, že (+)-deprenyl mal aktivitu rovnakú alebo dokonca vyššiu, ako je aktivita (-) enantioméru (Tekes a spol., Pol. J. Pharmacol. Pharm., 40, 653 (1988)).
MPAI je silnejším inhibítorom MAO aktivity, ale s nižšou selektivitou pre MAO-B oproti MAO-A (Tipton a spol., Biochem. Pharmacol., 31, 1250 (1982)). Pretože sa prekvapivo pozoroval len malý stupeň rozdielnosti v relatívnych aktivitách dvoch rozdelených enantiomérov u MPAI, znova sa zdôrazňuje pozoruhodné správanie sa R(+)PAI (pozri Tabuľku IB),
Farmaceutický aktívny ΡΑΙ-enantiomér samotný (bez L-DOPA) sa dá použiť na liečenie Parkinsonovej choroby, porúch pamäti, demencie, depresie, syndrómu hyperaktivity, afektivneho ochorenia, neurodegeneratívnej choroby, neurotoxického poškodenia, mozgovej ischémie, poranenia hlavy úrazom, poranenia chrbtice úrazom, schizofrénie, poruchy nedostatku pozornosti, roztrúsenej sklerózy alebo abstinenčných symptómov (pozri prehľad Youdim a spol., v Handbook of Experimental Pharmacology, Editori: Trendelenbery a Wiener, 90/1, kap. 3 (1988)).
Farmaceutické zmesi obsahujú R(+) PAI a synergistické činidlá, ako napríklad levodopa. Použitie takýchto činidiel bolo študované vzhľadom na (-)-deprenyl, ktorý sa preukázal ako účinný, keď sa podával samotný pacientom so začínajúcou Parkinsonovou chorobou, a tiež môže mať synergistický účinok u týchto pacientov, keď sa podáva spolu s α-tokoferolom, derivátom vitamínu E (The Parkinson’s Study Group, New England J. Med 321(20), 1364 až 1371 (1989)).
Okrem užitočnosti pri liečení Parkinsonovej choroby bolo ukázané, žc (-)-deprenyl je tiež užitočný na liečenie pacientov demenciou Alzheimerovho typu (DAT) (Tariot a spol., Psychopharmacology, 91, 489-495 (1987)), a na liečenie depresie (Mendelewicz a Youdim, Brit. J. Psychiat. 142. 508-511 (1983)). Preukázalo sa, že R(+)PA1 látka podľa tohto vynálezu, a zvlášť jej metánsulfónanová soľ, obnovuje pamäť. R(+)PAI teda má potenciál na liečenie porúch pamäti, demencie, zvlášť Alzheimerovho typu, a hyperaktívneho syndrómu u detí.
Soli R(+)PAI sú vysoko stabilné s vynikajúcimi farmaceutickými vlastnosťami. Metánsulfónanová soľ je zvlášť stabilná, má neočakávane vyššiu selektivitu, a má významne menšie vedľajšie účinky, než majú zodpovedajúce racemické soli.
Ako je demonštrované v tomto dokumente neskôr v Experimentálnych príkladoch, R(+)PAI je takmer 7000-krát aktívnejší ako an inhibítor MAO-B, nezje S(-)PAI. Z hľadiska doterajších znalosti MAO-B inhibítorov, ktoré majú nízku selektivitu medzi MAO-A a MAO-B, a ktoré nevykazujú predpovedateľné trendy účinnosti ako funkcie tren dov R alebo S konfigurácie, je selektivita R(+)PAI neočakávaná.
R(+)PA1 sa môže získať rozdelením na optické izoméry racemických zmesí R- a S-enantiomérov PAI. Takéto rozdelenie sa môže uskutočniť konvenčným spôsobom rozdelenia optických izomérov známym odborníkom v tejto oblasti, ako sú spôsoby opísané v J. Jacques, A. Collet a S. Wilen, „Enantiomers, Racemates and Resolutions,“ Wiley, New York (1981). Napríklad sa rozdelenie optických izomérov môže uskutočniť pomocou preparatívnej chromatografie na chirálnej kolóne. Ďalším príkladom vhodnej metódy rozdelenia optických izomérov je tvorba diastereomémych solí s chirálnou kyselinou, ako je napríklad kyselina vínna, jablčná, mandľová alebo N-acetylderivátmi aminokyselín, ako je napríklad N-acetylleucin, po čom nasleduje rekryštalizácia na izolovanie diastereomérnej soli požadovaného R enantioméru. Racemická zmes R a S enantiomérov PAI sa môže pripraviť napríklad tak, ako je opísané v GB 1 003 676 a GB 1 037 014. Racemická zmes PAI sa tiež môže pripraviť reagovaním 1-chlórindánu s propargylaminom. Alternatívne sa tento racemát môže pripraviť reagovaním propargylamínu s 1-indanónom, čím sa vytvorí zodpovedajúci imín, po čom nasleduje redukcia dvojitej väzby uhlík-dusík imínu pomocou vhodného činidla, ako je napríklad hydridoboritan sodný.
Podľa tohto vynálezu sa R enantiomér PAI môže tiež pripraviť priamo z opticky aktívneho R-enantioméru 1-aminoindánu reakciou s propargylbromidom alebo propargylchloridom v prítomnosti organickej alebo anorganickej zásady, a voliteľne v prítomnosti vhodného rozpúšťadla.
Vhodné organické alebo anorganické zásady na použitie v uvedenej reakcii zahŕňajú, ako príklad, trietylamín, pyridin, uhličitany alkalických kovov, a hydrogenuhličitany alkalických kovov. Ak sa reakcia robí v prítomnosti rozpúšťadla, môže sa rozpúšťadlo vybrať napríklad z toluénu, dichlórmetánu a acetonitrilu. Jedným spôsobom prípravy R(+)PAI je reagovanie R-l-aminoindánu s propargylchloridom s použitím hydrogenuhličitanu draselného ako zásady a acetonitrilu ako rozpúšťadla.
Opísaná reakcia 1-aminoindánu všeobecne vedie k zmesi nezreagovaného primárneho amínu, požadovaného sekundárneho amínu a terciámeho amínového N,N-bispropargylamínového produktu. Požadovaný sekundárny amín, t. j. N-propargyl-l-aminoindán, sa môže odseparovať z tejto zmesi konvenčným separačným spôsobom vrátane napríklad chromatografie destilácie a selektívnej extrakcie.
R-l-aminoindánový východiskový materiál sa môže pripraviť spôsobmi známymi v tejto oblasti, ktoré zahŕňajú napríklad spôsob z publikácie Lawson a Rao, Biochemistry, 19. 2133 (1980), spôsoby v tam citovaných odkazoch, a spôsob z Európskeho patentu č. 235 590.
R-l-aminoindán sa tiež môže pripraviť rozdelením racemickej zmesi R a S enantiomérov, ktoré zahŕňa napríklad tvorbu diastereomémych solí s chirálnymi kyselinami, alebo nejaký iný známy spôsob, ako sú napríklad spôsoby opísané v publikácii J. Jacques a spol., ibid. Alternatívne sa môže R-l-aminoindán pripraviť reagovaním 1-indanónu s nejakým opticky aktívnym aminom, po čom nasleduje redukcia dvojitej väzby uhlík-dusík výsledného imínu hydrogenáciou nad vhodným katalyzátorom, ako je napríklad paládium na uhlíku, oxid platičitý alebo alebo Raneyov nikel. Vhodné opticky aktívne amíny zahŕňajú napríklad antipódy fenetylamínu alebo ester aminokyseliny, ako je napríklad valín alebo fenylalanín. Benzylová N-C väzba sa môže štiepiť následne pomocou hydrogenácie za nieprudkých podmienok.
Dodatočný spôsob prípravy R-l-aminoindánu je hydrogenácia éterov indan-l-ónoxímu, ako je opísané, kde alkylový podiel éteru obsahuje opticky čisté chirálne centrum. Alternatívne sa môže nechirálny derivát indan-l-ónu obsahujúci dvojitú väzbu uhlík-dusík, ako napríklad imín alebo oxím, redukovať s chirálnym redukčným činidlom, napríklad komplexom hydridu hlinito-lítneho a efedrínu.
V praxi tohto vynálezu zahŕňajú farmaceutický prijateľné soli, ale bez obmedzenia na ne, metánsulfónanové, maleátové, fumarátové, vínanové, hydrochloridové, hydrobromidové, etánsulfónanové, p-toluénsulfónanové, benzoátové, acetátové, fosfátové a sulfátové soli.
Soľ je vybraná zo skupiny pozostávajúcej z metánsulfónanovej soli R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu, etánsulfónanovej soli R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu, sulfátovej soli R(+)-N-propargyl-1 -aminoindánu.
Ako je demonštrované v Experimentálnych príkladoch, metánsulfónanová soľ je vysokostabilná k tepelnej degradácii a má neočakávane najvyššiu selektivitu k MAO-B oproti racemickej soli.
Na prípravu farmaceutický prijateľných kyslých adičných solí z látky R(+)PAI, môže voľná zásada reagovať s požadovanými kyselinami v prítomnosti vhodného rozpúšťadla konvenčnými spôsobmi. Podobne môže byť kyslá adičná soľ konvertovaná na voľnú zásadu známym spôsobom.
Výhodný spôsob prípravy metánsulfónanovej soli (R)-PA1 zahŕňa a) pridanie vodného roztoku 15 % hmotnostných hydroxidu sodného k roztoku propargylbenzénsulfónanu (alebo toluénsulfónanu alebo metánsulfónanu) v toluéne; b) premiešavame počas 5 hodín; c) pridanie dodatočného toluénu a vody; d) oddelenie a premytie organickej fázy s roztokom 10 % hmotnostných hydroxidu sodného, a potom zriedenie s vodou; e) upravenie pH zmesi na hodnotu 3,2 pomocou pridania vodného roztoku 10 % hmotnostných kyseliny sírovej; f) oddelenie vodnej fázy a upravenie pH na 7,3 s roztokom 10 % hmotnostných hydroxidu sodného; g) extrahovanie trikrát s toluénom, za udržiavania konštantného pH; h) skoncentrovanie spojených organických vrstiev za vákua, čo poskytne žltý olej; i) rozpustenie oleja a kyseliny L-vínnej v izopropanole; j) zahrievanie pod refluxom počas 1 hodiny; k) ochladenie na laboratórnu teplotu a oddelenie zrazeniny filtráciou; 1) rekryštalizovanie surového vínanu di-propargylaminoindánu zo zmesi metanol/izopropanol (1 : 1), čo poskytne vinan di(R(+)-N-propargyl-1-aminoindánu; m) rozpustenie vínanovej soli a kyseliny metánsulfónovej v izopropanole, a zahrievanie pod refluxom počas 30 minút; a n) ochladenie na laboratórnu teplotu, a oddelenie vyzrážaného R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu.
Tento vynález ďalej poskytuje farmaceutickú zmes, ktorá zahŕňa terapeuticky účinné množstvo R(+)-N-propargyl-1-aminoindánu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli a farmaceutický prijateľný nosič. „Terapeuticky účinné množstvo“ R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli sa môže určiť spôsobmi dobre známymi odborníkom v tejto oblasti.
Možné užitočné soli pre takéto zmesi zahŕňajú hydrochloridové, fosfátové, maleátové, fumarátové, vínanové, metásulfónanové, etánsulfónanové a sulfátové soli.
Tieto zmesi sa môžu pripraviť ako medikamenty na podávanie orálne, parenterálne, rektálne, alebo transdermálne.
V jednom uskutočnení je farmaceutický prijateľným nosičom tuhá látka a farmaceutický prípravok je tableta. Terapeuticky účinné množstvo môže byť množstvo od asi 0,1 mg do asi 100 mg. Terapeuticky účinné množstvo môže tiež byť množstvo od asi 1 mg do asi 10 mg.
Vhodné formy na orálne podávanie zahŕňajú tablety, zlisované alebo potiahnuté piluly, dražé, prášky, tvrdé alebo mäkké želatínové kapsuly, podjazykové tablety, sirupy a suspenzie.
V alternatívnom uskutočnení je farmaceutický prijateľným nosičom kvapalina a farmaceutická zmes je injektovateľný roztok. Terapeuticky účinné množstvo môže byť množstvo od asi 0,1 mg/ml do asi 100 mg/ml. Terapeuticky účinné množstvo môže tiež byť množstvo od asi 1 mg/ml do asi 10 mg/ml. V jednom uskutočnení je podávanou dávkou množstvo medzi 0,5 ml a 1,0 ml.
V ďalšom alternatívnom uskutočnení je nosičom gél a farmaceutický' prípravok je čapík.
Na parenterálne podávanie tento vynález poskytuje ampuly alebo fľaštičky, ktoré obsahujú vodný alebo nevodný roztok alebo emulziu. Na rektálne podávanie sa poskytujú čapíky s hydrofilným alebo hydrofóbnym vehikulom. Na topikálnu aplikáciu ako masti a na transdermálne dodávanie sa poskytujú vhodné dodávacie systémy, ako sú známe v tomto odbore.
Vo výhodnom uskutočnení je farmaceutický prijateľnou soľou metánsulfónanová soľ.
Tieto zmesi sa môžu použiť samotné na liečenie uvedených porúch, alebo alternatívne, ako v prípade Parkinsonovej choroby sa napríklad môžu použiť ako prídavok ku konvenčným L-DOPA liečeniam.
Výhodné dávkovania aktívnej zložky, t. j. R-PAI, v uvedených zmesiach sú v nasledujúcich rozsahoch. Pre orálne alebo čapíkové prípravky sa môže brať denne 0,1 až 100 mg na dávkovú jednotku, a výhodne sa berie denne 1 až 10 mg na dávkovú jednotku. Pre injektovateľné prípravky sa môže brať denne 0,1 až 100 mg na dávkovú jednotku, a výhodne sa berie denne 1 až 10 mg na dávkovú jednotku.
V jednom uskutočnení farmaceutická zmes ďalej obsahuje terapeuticky účinné množstvo Levodopa. V inom uskutočnení farmaceutická zmes ešte ďalej obsahuje účinné množstvo inhibítora dekarboxylázy.
Množstvo inhibítora dekarboxylázy podávané v spojení s (R)-PAI alebo s jej farmaceutický prijateľnou soľou je množstvo účinné na zabezpečenie absorpcie L-DOPA pri subjekte.
Inhibítorom dekarboxylázy môže byť L-carbidopa. V jednom uskutočnení je terapeuticky účinné množstvo R(+)-N-propargyl-1-aminoindánu asi 0,1 mg až asi 100 mg, terapeuticky účinné množstvo Levodopa je asi 50 mg až asi 250 mg, a účinné množstvo L-carbidopa je asi 10 mg až asi 25 mg.
Inhibítorom dekarboxylázy môže tiež byť benserazid (DL-serín 2[(2,3,4-trihydroxyfenyl)metyl]hydrazid). V jednom uskutočnení je terapeuticky účinné množstvo R(+)-N-propargyl-1-aminoindánu asi 0,1 mg až asi 100 mg, terapeuticky účinné množstvo Levodopa je asi 50 mg až asi 200 mg a účinné množstvo benserazidu je asi 12,5 mg až asi 50 mg.
Uvedený prostriedok je účinný aj na liečenie subjektu postihnutého Parkinsonovou chorobou, ktoré zahŕňa podávanie tomuto subjektu určitého množstva R(+)-N-propargyl-1-aminoindánu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli, účinného na liečenie Parkinsonovej choroby subjektu.
(R)-PAI sa môže použiť aj s ďalšími liečivami, ako sú napríklad dopamínové antagonistické látky, bromoeryptín, pergolid, lisurid, ako aj inhibítory katecholamínoxidázymetyltransferázy.
Farmaceutický prijateľnou soľou môže byť metánsulfónová soľ.
Podávanie môže zahrnovať orálne podávanie, rektálne podávanie, transdermálne podávanie alebo parenterálne podávanie.
Taktiež sa môže podávať subjektu terapeuticky účinného množstva Levodopa alebo účinného množstva inhibítora dekarboxylázy.
Inhibítorom dekarboxylázy môže byť L-Carbidopa. Alternatívne môže byť inhibítorom dekarboxylázy benserazide.
Uvedený prostriedok je účinný aj na liečenie subjektu postihnutého poruchou pamäti, ktoré zahŕňa podávanie tomuto subjektu určitého množstva R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli účinného na liečenie poruchy pamäti subjektu.
Uvedený prostriedok je účinný aj na liečenie subjektu postihnutého demenciou, ktoré zahŕňa podávanie tomuto subjektu určitého množstva R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli účinného na liečenie demencie subjektu. V jednom uskutočnení je demencia Alzheimerovho typu (DAT).
Uvedený prostriedok je účinný aj na liečenie subjektu postihnutého depresiou, ktoré zahŕňa podávanie tomuto subjektu určitého množstva R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli, účinného na liečenie depresie subjektu.
Uvedený prostriedok je účinný aj na liečenie subjektu postihnutého syndrómom hyperaktivity, ktoré zahŕňa podávanie tomuto subjektu určitého množstva R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli účinného na liečenie syndrómu hyperaktivity subjektu.
Podávanie môže zahrnovať orálne podávanie, rektálne podávanie alebo parenterálne podávanie.
Uvedený prostriedok je účinný aj na liečenie subjektu postihnutého afektívnym ochorením, ktoré zahŕňa podávanie tomuto subjektu určitého množstva R(+)-N-propargyl-1-aminoindánu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli účinného na liečenie afektívneho ochorenia subjektu.
Uvedený prostriedok je ďalej účinný aj na liečenie subjektu postihnutého neurodegeneratívnou chorobou, ktoré zahŕňa podávanie tomuto subjektu určité množstvo R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli účinné na liečenie neurodegeneratívnej choroby subjektu.
Uvedený prostriedok je ďalej účinný aj na liečenie subjektu postihnutého neurotoxickým poškodením, ktoré zahŕňa podávanie tomuto subjektu určité množstvo R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli účinné na liečenie neurotoxického poškodenia subjektu.
Uvedený prostriedok je ďalej účinný aj na liečenie subjektu postihnutého mozgovou ischémiou, ktoré zahŕňa podávanie tomuto subjektu určité množstvo R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli účinné na liečenie mozgovej ischémie subjektu.
Uvedený prostriedok je ďalej účinný aj na liečenie subjektu postihnutého mozgovou ischémiou alebo mŕtvicou, ktoré zahŕňa podávanie tomuto subjektu určité množstvo R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli účinné na liečenie mozgovej ischémie alebo mŕtvice subjektu.
Farmaceutický prijateľná soľ R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu vybraná zo skupiny pozostávajúcej z: metánsulfónanovej soli, etánsulfónanovej soli, sulfátovej soli a hydrochloridovej soli. Výhodne je farmaceutický prijateľnou soľou metánsulfónanová soľ R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu.
Účinné množstvo sa môže určiť použitím techník známych odborníkom v tejto oblasti napríklad titráciou. V uskutočnení tohto vynálezu je účinné množstvo od asi 0,5 miligramov na kilogram telesnej hmotnosti subjektu do asi
2,5 miligramov na kilogram telesnej hmotnosti subjektu. R(+)-N-propargyl-l-aminoindán alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ sa podáva s použitím technik známych odborníkom v tejto oblasti. Napríklad sa môžu podávať intravenózne, orálne, rektálne, transdermálne alebo parenterálne.
Subjektom je výhodne cicavec, ako napríklad pes, mačka, myš, potkan, králik, prasa, kôň, koza, ovca, krava, opica alebo ľudoop. Vo zvláštnom uskutočnení je subjektom človek.
Účinné množstvo od asi 0,01 mg do 50,0 mg za deň, konkrétnejšie od 0,1 do 10,0 mg na deň.
V jednom uskutočnení opísaného spôsobu sa plocha mozgovej ischémie zníži o asi tridsaťpäť percent.
Uvedený prostriedok je ďalej účinný aj na liečenie subjektu postihnutého úrazovým poranením hlavy, ktoré zahŕňa podávanie tomuto subjektu určitého množstva R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli účinného na liečenie úrazového poranenia hlavy subjektu.
Uvedený prostriedok je ďalej účinný aj na liečenie subjektu postihnutého úrazovým poranením chrbtice, ktoré zahŕňa podávanie tomuto subjektu určitého množstva R(+)-N-propargyl-l-atninoindánu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli účinného na liečenie úrazového poranenia chrbtice subjektu.
Uvedený prostriedok je ďalej účinný aj na liečenie subjektu postihnutého úrazom nervov, ktoré zahŕňa podávanie tomuto subjektu určitého množstva R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli účinného na liečenie úrazu nervov subjektu.
Na liečenie úrazového poranenia hlavy, úrazového poranenia chrbtice alebo poranenia nervov je farmaceutický prijateľná soľ R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu vybraná zo skupiny pozostávajúcej z: metánsulfónanovej soli, etánsulfónanovej soli, sulfátovej soli a hydrochloridovej soli. Výhodne jc farmaceutický prijateľnou soľou metánsulfónanová soľ R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu.
Účinné množstvo sa môže určiť použitím techník známych odborníkom v tejto oblasti napríklad titráciou. V uskutočnení tohto vynálezu jc účinné množstvo od asi 0,5 miligramov na kilogram telesnej hmotnosti subjektu do asi
2,5 miligramov na kilogram telesnej hmotnosti subjektu. R(+)-N-propargyl-l-aminoindán alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ sa podáva s použitím techník známych odborníkom v tejto oblasti. Napríklad sa môžu podávať intravenózne, orálne, rektálne, transdermálne alebo parenterálne.
Subjektom je výhodne cicavec, ako napríklad pes, mačka, myš, potkan, králik, prasa, kôň, koza, ovca, krava, opica alebo ľudoop. Vo zvláštnom uskutočnení je subjektom človek.
Účinné množstvo od asi 0,01 mg do 50,0 mg za deň. Konkrétnejšie od 0,1 do 10,0 mg na deň.
Uvedený prostriedok je ďalej účinný aj na liečenie subjektu postihnutého schizofréniou, ktoré zahŕňa podávanie tomuto subjektu určitého množstva R(+)-N-propargyl-1-aminoindánu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli účinného na liečenie schizofrénie subjektu.
Uvedený prostriedok je ďalej účinný aj na liečenie subjektu postihnutého poruchou nedostatku pozornosti, ktoré zahŕňa podávanie tomuto subjektu určitého množstva R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli účinného na liečenie poruchy nedostatku pozornosti subjektu.
Uvedený prostriedok je ďalej účinný aj na liečenie subjektu postihnutého roztrúsenou sklerózou, ktoré zahŕňa podávanie tomuto subjektu určitého množstva R(+)-N-propargyl-1-aminoindánu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli účinného na liečenie roztrúsenej sklerózy subjektu.
Uvedený prostriedok je ďalej účinný aj na prevenciu nervového poškodenia subjektu, ktorá zahŕňa podávanie tomuto subjektu určitého množstva R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli účinného na prevenciu nervového poškodenia subjektu.
Nervovým poškodením môže byť štrukturálne nervové poškodenie, konkrétnejšie poškodenie optického nervu.
Uvedený prostriedok je ďalej účinný aj na liečenie subjektu postihnutého abstinenčnými symptómami na návykové látky, ktoré zahŕňa podávanie tomuto subjektu určitého množstva R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli účinného na liečenie abstinenčných symptómov subjektu.
V tomto dokumente pojem „abstinenčné symptómy“ zodpovedá fyzickým a/alebo psychologickým symptómom vrátane potreby drogy, depresie, dráždivosti, energie, amotivácie, zmeny chuti dojedla, nevoľnosti, triašky a nepravidelnosti spánku.
V tomto dokumente pojem „návyková látka“ zahŕňa napríklad a) návykové opiáty, ako napríklad ópium, heroín a morfín, b) psychostimulanty, ako napríklad kokaín, amfetaminy a metamfetamíny, c) alkohol, d) nikotín, e) barbituráty a f) narkotiká, ako napríklad fentanyl, kodeín, difenoxylát a tebaín.
Návykovou látkou môže byť kokaín alebo alkohol.
Spôsob prípravy R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu, zahŕňa kontaktovanie, v prítomnosti organickej alebo anorganickej zásady, R(-)-aminoindánu buď s propargylbromidom alebo propargylchloridom až sa tak vytvorí R(+)-N-propargyl-l-aminoindán, a izolovanie takto vytvoreného R(+)-N-propargyl-1 -aminoindánu.
Spôsob prípravy racemického N-propargyl-1-aminoindánu, zahŕňa kontaktovanie, v prítomnosti organickej alebo anorganickej zásady, racemického 1-aminoindánu s propargylbromidom alebo propargylchloridom až sa tak vytvorí racemický N-propargyl- 1-aminoindan, a izolovanie takto vytvoreného racemického N-propargyl-1-aminoindánu.
Spôsob prípravy soli R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu, ktorý zahŕňa kontaktovanie racemického N-propargyl-1-aminoindánu s opticky aktívnou kyselinou tak, že sa vytvoria dve diastereoméme soli N-propargyl-l-aminoindánu, a izolovanie soli R(+)-N-propargyl-l -aminoindánu z takto vytvorených diastereomérnych solí N-propargyl-l-aminoindánu. Izolovanie môže zahrňovať frakčnú kryštalizáciu.
Nasledujúce príklady uskutočnenia vynálezu sú uvedené ako prostriedok na pochopenie vynálezu a nie sú mienené a neboli zostavené na akýkoľvek spôsob obmedzenia vynálezu, ktorý je uvedený v nárokoch nasledujúcich potom.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obr. 1 je grafickou reprezentáciou výsledkov z príkladu 22 ukazujúcou in vitro MAO-A inhibičnú aktivitu.
Obr. 2 je grafickou reprezentáciou výsledkov z príkladu 22 ukazujúcou in vitro MAO-B inhibičnú aktivitu.
Obr, 3 je grafickou reprezentáciou výsledkov z príkladu 22 ukazujúcou MAO aktivitu v ľudskom kortikálnom tkanive.
Obr. 4 je grafickou reprezentáciou výsledkov z príkladu 23 ukazujúcou akútnu inhibíciu (i. p.) MAO-A v mozgu.
Obr. 5 je grafickou reprezentáciou výsledkov z príkladu 23 ukazujúcou akútnu inhibíciu (i. p.) MAO-B v mozgu.
Obr. 6 je grafickou reprezentáciou výsledkov z príkladu 23 ukazujúcou akútnu inhibíciu (i. p.) MAO-A v pečeni.
Obr. 7 je grafickou reprezentáciou výsledkov z príkladu 23 ukazujúcou akútnu inhibíciu (i. p.) MAO-B v pečeni.
Obr. 8 je grafickou reprezentáciou výsledkov z príkladu 23 ukazujúcou akútnu inhibíciu (per os) MAO-A v mozgu.
Obr. 9 je grafickou reprezentáciou výsledkov z príkladu 23 ukazujúcou akútnu inhibíciu (per os) MAO-B v mozgu.
Obr. 10 je grafickou reprezentáciou výsledkov z príkladu 23 ukazujúcou akútnu inhibíciu (per os) MAO-A v pečeni.
Obr. 11 je grafickou reprezentáciou výsledkov z príkladu 23 ukazujúcou akútnu inhibíciu (per os) MAO-B v pečeni.
Obr. 12 je grafickou reprezentáciou výsledkov z príkladu 24 ukazujúcou chronickú inhibíciu MAO-A v mozgu.
Obr. 13 je grafickou reprezentáciou výsledkov z príkladu 24 ukazujúcou chronickú inhibíciu MAO-B v mozgu.
Obr. 14 je grafickou reprezentáciou výsledkov z príkladu 24 ukazujúcou chronickú inhibíciu MAO-A v pečeni.
Obr. 15 je grafickou reprezentáciou výsledkov z príkladu 24 ukazujúcou chronickú inhibíciu MAO-B v pečeni.
Obr. 16 je grafickou reprezentáciou výsledkov z príkladu 25 ukazujúcou MAO-B aktivitu v mozgu potkana ako funkciu času nasledujúceho po i. p. podaní R(+)PA1.
Obr. 17 je grafickou reprezentáciou výsledkov z príkladu 32 ukazujúcou obnovenie normokinézie u myší, ktoré dostali haloperidol 6 mg/kg s.c. Myši dostali každé testované liečivo i. p. v indikovanej dávke. 2 hodiny neskôr dostali haloperidol. Kinetické skóre sa meralo 3 hodiny po haloperidole. Toto skóre pozostávalo zo schopnosti pohybovať sa horizontálne pozdĺž tyče, schopnosti zísť po zvislej tyči a zo skrátenia katalepsie. V neprítomnosti haloperidolu je maximálne skóre 12, s haloperidolom samotným 6,6 ± ± 0,03. Štatistická významnosť sa počítala pomocou Študentovho „t“ testu: *p < 0,05; **p < 0,01; ***p < 0,001 vzhľadom na haloperidol samotný. Skóre (R)-PAI sú významne odlišné od skóre racemického-ΡΑΙ pri 5 mg/kg (p <
< 0,05), pri 10 mg/kg (p < 0,01), a pri 15 mg/kg (p < 0,05), (n = 5,6). Uvedená dávka platí pre voľnú zásadu PAI (a nie pre metánsulfónanovú soľ).
Obr. 18 je grafickou reprezentáciou výsledkov z príkladu 32 ukazujúcou obnovenie motorickej aktivity potkanov po aplikácii a-metyl-p-tyrozinu 100 mg/kg i. p. Potkany dostali testované liečivo i. p. pri indikovaných dávkach. Po dvoch hodinách dostali α-Mpt a ihneď boli umiestnené do klietok na hodnotenie aktivity. Celková motorická aktivita sa zaznamenávala počas 10 hodín. Kontrolné potkany po aplikácii soľného roztoku mali skóre len 15,862+1424. S α-Mpt samotným mali skóre 8,108±810. Štatistická významnosť podľa Študentovho „t“ testu: * p < 0,05; ** p <
< 0,01; ***p < 0,001 vzhľadom na α-Mpt samotný. Skóre (R)-PAI sú významne odlišné od skóre racemického-PAI pri 2 mg/kg (p < 0,01), (n = 6). Uvedená dávka platí pre voľnú zásadu PAI a nie pre metánsulfónanovú soľ).
Obr. 19 je graf ukazujúci NADH reakciu na 2 minútovú anoxiu meranú 30 minút po poškodení a potom v polhodinových intervaloch.
Obr. 20: Hodnotenie ischemickej mozgovej lezie s MRI T2-skenom 48 hodín po MCAO a liečení s [R](+)PAI metánsulfónanom pri potkanoch: Stredná cerebrálna artéria bola chirurgicky uzatvorená, ako je opísané v príklade 38. [R](+)PAI metánsulfónan sa podával takto: 1,0 mg/kg i. p.
ihneď po zákroku; 0,5 mg/kg i. p., 2 hodiny po zákroku; 1,0 mg/kg i. p., 24 hodín po zákroku. Infarktový objem (mm3) sa určil pomocou MRI 48 hodín po zákroku.
Obr. 21: Neurologické hodnotenie potkanov Wistar podrobených liečeniu MCA-0 a [R](+)PAI metánsulfónanom: Stredná cerebrálna artéria bola chirurgicky uzatvorená a podával sa [R](+)PAI metánsulfónan, ako je na obrázku 20. 24 hodín po zákroku sa odmeralo neurologické skóre, ako je opísané v príklade 38.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Hydrochlorid racemického N-propargyl-l-aminoindánu
10,0 g racemického 1-aminoindánu a 10,4 g uhličitanu draselného sa pridali k 75 ml acetonitrilu. Výsledná suspenzia sa zahrievala na 60 °C a po kvapkách sa pridalo 4,59 g propargylchloridu.
Zmes sa premiešavala pri 60 °C počas 16 hodín, potom sa väčšina prchavých látok odstránila destiláciou za vákua. Zvyšok sa rozdelil medzi vodný roztok 10 % hmotnostných hydroxidu sodného a dichlórmetán.
Organická fáza sa vysušila a rozpúšťadlo sa odstránilo destiláciou. Zvyšok sa chromatografoval na silikagéli, elúciou so zmesou 40 % hmotnostných etylacetátu/60 % hmotnostných hexánu. Frakcie obsahujúce látku z názvu tohto príkladu ako voľnú zásadu sa spojili a elučné činidlo sa nahradilo éterom. Éterický roztok sa opracoval plynným HC1, vytvorená zrazenina sa izolovala filtráciou s odsatím a rekryštalizovala sa z izopropanolu, čím poskytla výťažok 7,3 g látky z názvu tohto príkladu, 1.1. 182 až 184 °C.
Chromatografické a spektroskopické údaje boli v zhode s U.S. Patentom č. 3,513,244, vydanom 19. mája, 1970, a autentickej vzorky a boli nasledujúce: NNR δ (CDC13): 2,45 (2H, m), 2,60 (1H, t), 2,90 (1H, m), 3,45 (1H, m), 3,70 (2H, d), 4,95 (1H, t), 7,5 (4H, m) ppm.
Príklad 2
Hydrochlorid S-(-)-N-propargyl-1 -aminoindánu
Látka z názvu tohto príkladu vo forme voľnej zásady bola izolovaná rozdelením optických izomérov z racemickej zmesi voľnej zásady z príkladu 1 na preparativnej HPLC kolóne Chiracel OJ (tris [p-metylbenzoát] celulózy) eluovaním so zmesou 10 % hmotnostných izopropanolu/90 % hmotnostných hexánu a oddelením prvého eluujúceho hlavného piku. Výsledný olej sa konvertoval na látku z názvu tohto príkladu (hydrochlorid) opracovaním s dietyléterovým roztokom 10 % hmotnostných oleja s plynným HC1, a výsledná zrazenina sa oddelila filtráciou s odsávaním, (ajD -29,2 (1 % hmotnostné, etanol), t. t. 182 až 184 °C. Ostatné chromatografické a spektroskopické vlastnosti boli identické s hydrochloridovou soľou z príkladu 1.
Príklad 3
Hydrochlorid R-(+)-N-propargyl-l-aminoindánu
Látka z názvu tohto príkladu bola pripravená ako v príklade 2 s výnimkou, že sa pri preparativnej HPLC oddelil druhý eluujúci pík: [a]D +29,1 (0,8 % hmotnostného, etanol), 1.1. 179 až 181 °C. Ostatné chromatografické a spektroskopické vlastnosti boli identické s hydrochloridovou soľou z príkladu 1.
Príklad 4
Hydrochlorid R-(+)-N-propargyl-1 -aminoindánu
12,4 g R-(-)-l-aminoindánu a 12,9 g of uhličitanu draselného sa pridali do 95 ml acetonitrilu. Výsledná suspen zia sa zahrievala na 60 °C a po kvapkách sa pridalo 5,6 g propargylchloridu. Zmes sa premiešavala pri 60 °C počas 16 hodín. Potom sa destiláciou za vákua odstránila väčšina prchavých látok. Zvyšok sa rozdelil medzi vodný roztok 10 % hmotnostných hydroxidu sodného a dichlórmetán.
Organická fáza sa vysušila a rozpúšťadlo sa odstránilo za vákua. Zvyšok sa chromatografoval na silikagéli elúciou zmesou 40 % hmotnostných etylacetátu/60 % hmotnostných hexánu. Frakcie obsahujúce voľnú zásadu látky z názvu tohto príkladu boli spojené a rozpúšťadlo bolo nahradené éterom. Étcrový roztok bol opracovaný s plynným HC1 a výsledná zrazenina bola izolovaná filtráciou s odsávaním a skryštalizovaná z izopropanolu, čím poskytla 6,8 g látky z názvu tohto príkladu, t. t. 183 až 185 °C, [a]D +30,90 (2 % hmotnostné, etanol). Spektrálne vlastnosti boli identické ako vlastnosti uvedené pre látku z príkladu 1.
Príklad 5
Hydrochlorid S-(-)-N-propargyl-l-aminoindánu
Látka z názvu tohto príkladu bola pripravená spôsobom príkladu 4 s výnimkou, že ako východiskový materiál sa použil S-(+)-l-aminoindán. Produkt vykazoval [ajD -30,3 (2 % hmotnostné, etanol), t. t. 183 až 185 °C. Spektrálne vlastnosti boli identické ako vlastnosti uvedené pre látku z príkladu L
Príklad 6A
Di(R-(+)-N-propargyl-l-aminoindán) L-vínan
K roztoku kyseliny vínnej (4,4 g) v 48 ml vriaceho metanolu sa pridal roztok voľnej zásady R-(+)-N-propargyl-1-aminoindánu (5,0 g) v metanole (48 ml). Roztok sa zahrieval pod refluxom a po 20 minútach sa pridalo 284 ml terc.butylmetyléteru. Zmes sa zahrievala počas ďalších 30 minút, ochladila sa a výsledná zrazenina sa izolovala filtráciou s odsávaním, čím poskytla 6,7 g látky z názvu tohto príkladu: 1.1 175 až 177 °C; [a]D (1,5, H2O) = +34,3; Analýza vypočítaná C28H32O6N2; C, 68,26, H, 6,56, N, 5,69. Nájdené: C, 68,76; H, 6,57; N, 5,61.
Príklad 6B
Metánsulfónan R-(+)-N-propargy 1-1 -aminoindánu
a) K roztoku propargylbenzénsulfonátu (78,49) a racemického aminoindánu (63,2 g) v toluéne (240 ml) pri 20 °C sa po kvapkách pridal vodný roztok of 15 % hmotnostných hydroxidu sodného (108 ml). Po 5 hodín premiešavania sa za premiešavania pridali ďalší toluén (80 ml) a voda (200 ml). Organická fáza sa separovala a premyla s vodným roztokom 10 % hmotnostných hydroxidu sodného a potom sa zriedil s vodou. pH zmesi bolo upravené na hodnotu 3,2 pridaním vodného roztoku 10 % hmotnostných kyseliny sírovej. Vodná fáza sa oddelila a jej pH bolo upravené na hodnotu 7,3 s roztokom 10 % hmotnostných hydroxidu sodného a extrahovala sa trikrát s toluénom za udržiavania konštantného pH. Spojené organické vrstvy boli skoncentrované za vákua na 40,7 g žltého oleja.
b) Uvedený surový racemický propargylaminoindán a kyselina L-mliečna (10 g) boli rozpustené v izopropanole (1 1) a zahrievané pod refluxom počas 1 hodiny. Reakčná zmes sa potom nechala ochladiť na laboratórnu teplotu za premiešavania a zrazenina sa oddelila filtráciou. Surový vínan di- propargylaminoindánu sa rekryštalizoval z 1 1 zmesi 1 : 1 metanol/izopropanol, čím poskytol di(R-(+)-N-propargyl-l-aminoindán)-L-vínanu s fyzikálnymi a spektrálnymi vlastnosťami identickými s vlastnosťami látky z príkladu 6A.
c) Roztok di-(R-(+)-N-propargyl-l-aminoindán)-vínanu (15 g) a kyseliny metánsulfónovej (6 g) v izopropanole (150 ml) sa zahrieval pod refluxom počas 30 minút. Reakčná zmes sa potom nechala ochladiť na laboratórnu teplotu a výsledná zrazenina sa oddelila filtráciou s odsávaním, čím poskytla látku z názvu tohto príkladu (11,1 g) s 1.1. 157 °C a [a]D Ξ 22 .
Príklad 7
Hydrochlorid R-(+)-N-metyl-N-propargyl-1 -aminoindánu Forma voľnej zásady R-(+)-N-propargyl-l-aminoindánu z príkladu 4 (1,2 gramu), uhličitan draselný (0,97 gramu) a jódmetán (1 gram) sa pridali do 15 ml of acetónu a výsledná suspenzia sa zahrievala pod refluxom pod dusíkovou atmosférou 8 hodín. Potom sa prchavé látky odstránili za zníženého tlaku a zvyšok sa rozdelil medzi vodný roztok 10 % hmotnostných hydroxidu sodného (30 ml) a dichlórmetán (30 ml). Organická fáza sa vysušila a rozpúšťadlo sa odstránilo za vákua. Zvyšok sa chromatografoval na silikagéli eluovaním zmesou 40 % hmotnostných etylacetátu/60 % hmotnostných hexánu. Frakcie obsahujúce látku z názvu tohto príkladu ako voľnú zásadu boli spojené a rozpúšťadlo bolo nahradené dietyléterom. Eterový roztok bol opracovaný s plynným HC1. Prchavé látky sa odstránili za vákua a zvyšok sa rekryštalizoval z izopropanolu, čím poskytol 400 mg látky z názvu tohto príkladu ako bielu kryštalickú tuhú látku, t. t. 134 až 136 “C, [a]D +31,40 (etanol). NMR δ (CDC13): 2,55 (2H, m); 2,7 (1H, široký s); 2,8 (3H, 5); 3,0 (1H, m); 3,4 (1H, m); 3,9 (2H, široký s); 5,05 (1H, m); 7,7 (4H, m) ppm.
Príklad 8
Hydrochlorid S-(-)-N-metyl-N-propargyl-1 -aminoindánu
Látka z názvu tohto príkladu bola pripravená ako v príklade 7 s výnimkou, že ako východiskový materiál sa použil S-(-)-N-propargyl-l-aminoindán (voľná zásada) z príkladu 5. Všetky fyzikálne a spektrálne vlastnosti látky z názvu tohto príkladu boli rovnaké ako vlastnosti látky z príkladu 7 s výnimkou [a]D -34,9 (etanol).
Príklad 9
Zloženie tabliet
N-Propargyl-l(R)-aminoindán, Hydrochlorid 7,81 mg*
Predželatinizovaný škrob NF 47,0mg
Laktóza NF hydratovaná 66,0mg
Mikrokryštalická celulóza NF 20,0mg
Sódny glykolát škrobu NF 2,99 mg
Mastenec USP 1,5 mg
Stearan horečnatý NF 0,7mg * Ekvivalent k 5,0 mg zásady N-propargylaminoindánu
Príklad 10
Zloženie tabliet
N-Propargyl-l(R)-aminoindán, Hydrochlorid 1,56 mg*
Laktóza hydratovaná 50,0mg
Predželatinizovaný škrob 36,0mg
Mikrokryštalická celulóza 14,0mg
Sódny gíykolát škrobu 2,14 mg
Mastenec USP 1,0 mg
Stearan horečnatý NF 0,5mg * Ekvivalent k 1,0 mg zásady N-propargylaminoindánu
Príklad 11
Zloženie kapsuly
N-Propargyl-l(R)-aminoindán, Hydrochlorid 5,0 mg
Predželatinizovaný škrob 10,0 mg
Škrob 44,0 mg
Mikrokryštalická celulóza 25,0 mg
Etyl celulóza 1,0 mg
Mastenec 1,5 mg
Podľa požiadavky granulovania sa pridáva čistá voda.
Príklad 12
Zloženie injekcií
N-Propargyl-l(R)-aminoindán, Hydrochlorid 5,0 mg Dextróza bezvodá 44,0 mg
HC1 pridané do pH 5
Podľa potreby sa pridáva čistá voda do 1 ml.
Príklad 13
Zloženie injekcií
N-Propargyl-1 (R)-aminoindán, Hydrochlorid 1,0 mg Chlorid sodný 8,9 mg
HC1 pridané do pH 5
Podľa potreby sa pridáva čistá voda do 1 ml.
Príklad 14
Zloženie injekcií
N-Propargyl-l(R)-aminoindán, Hydrochlorid 2,0 mg Chlorid sodný 8,9 mg
HC1 pridané do pH 5
Podľa potreby sa pridáva čistá voda do 1 ml.
Príklad 15
Zloženie sirupu
N-Propargyl-l(R)-aminoindán, Hydrochlorid 5,0 mg
Sacharóza Sacharín sodný Metylparabén Propylparabén Príchuť
Glycerín USP Alkohol 95 % USP
Podľa potreby sa pridáva čistá voda do 5,0 ml.
Príklad 16
Podjazykové tablety
N-Propargyl-l(R)-aminoindán, Hydrochlorid 2,5 mg
Mikrokryštalická celulóza Laktóza hydratovaná Predželatinizovaný škrob Povidone
Farbiace činidlo
Príchuť
Sladidlo
Mastenec
2250,0 mg
5,0 mg
6,0 mg
1,0 mg 20,0 mg 500 mg 200 mg
20,0 mg 5,0 mg 3,0 mg 0,3 mg podľa potreby podľa potreby podľa potreby
0,3 mg
Zmiešajú sa vehikulá a aktívna zložka a granulát s etanolovým roztokom Povidone. Po usušení a zvážení sa zmieša s mastencom a zlisuje.
Príklad 17
PAI podjazykové tablety
N-Propargyl-l(R)-aminoindán, Hydrochlorid
Mikrokryštalická celulóza
Predželatinizovaný škrob
Etylcelulóza
5,0 mg
15,0 mg 12,0 mg
0,3 mg
Mastenec 0,3 mg
Podľa požiadavky granulovania sa pridáva čistá voda.
Príklad 18
Zloženie tabliet
N-Propargyl-l(R)-aminoindán, Hydrochlorid 5,0 mg Levodopa 100,0 mg
Carbidopa 25,0mg
Predželatinizovaný škrob 24,0mg
Škrob 40,0mg
Mikrokryštalická celulóza 49,5mg
Farbivo D & C Yellow No. 10 0,5mg
Farbivo D & C Yellow No. 6 0,02 mg
Podľa požiadavky granulovania sa pridáva alkohol USP.
Príklad 19
Zloženie tabliet
N-Propargyl-l(R)-aminoindán, mctánsulfónan 7,81 mg
Predželatinizovaný škrob NF 47,0mg
Laktóza NF hydratovaná 66,0mg
Mikrokryštalická celulóza NF 20,0mg
Sódny glykolát škrobu NF 2,99 mg
Mastenec USP 1,5mg
Stearan horečnatý NF 0,7mg * Ekvivalent k 5,0 mg zásady N-propargylaminoindánu.
Príklad 20
Zloženie tabliet
N-Propargyl-1 (R)-aminoindán, metánsulfónan 1,56 mg *
Laktóza hydratovaná 50,0mg
Predželatinizovaný škrob 36,0mg
Mikrokryštalická celulóza 14,0mg
Sódny glykolát škrobu 2,14 mg
Mastenec USP 1,0 mg
Stearan horečnatý NF 0,5mg * Ekvivalent k 1,0 mg zásady N-propargylaminoindánu.
Príklad 21
Zloženie kapsúl
N-Propargyl-1 (R)-aminoindán, metánsulfónan 5,0 mg
Predželatinizovaný škrob 10,0 mg
Škrob 44,0 mg
Mikrokryštalická celulóza 25,0 mg
Etylcelulóza 1,0 mg
Mastenec 1,5 mg
Podľa požiadavky granulovania sa pridáva čistá voda.
Nasledujúce príklady a sprevádzajúce tabuľky a obrázky sa týkajú biologických experimentov uskutočnených podľa tohto vynálezu.
Príklad 22 Inhibícia of MAO aktivity in vitro
Experimentálny postup
Zdrojom MAO enzýmu bol homogenát mozgu potkana v 0,3 mol/1 sacharóze, ktorý bol centrifúgovaný pri 600 g počas 15 minút. Supematant bol podľa potreby zriedený v 0,05 mol/1 fosfátovom pufŕi, a predinkubovaný so sériou postupného zriedenia látok: R(+)-PAI, S(-)-PAI a racemickej PAI počas 20 minút pri 37 °C. Potom sa pridali ’4C-označené substráty (2-fenyletylamíne, ďalej označovaný PEA; 5-hydroxytryptamin, ďalej označovaný 5-HT), a inkubovanie pokračovalo počas ďalších 20 minút (PEA), ale bo 30 - 45 minút (5-HT). Použili sa koncentrácie substrátov 50 mol/1 (PEA) a 1 mmol/1 (5-HT). V prípade PEA bola koncentrácia enzýmu vybraná tak, že sa v priebehu reakcie nemetabolizovalo viac ako 10 % substrátu. Reakcia bola potom zastavená prídavkom tranylcypromínu (trans-2-fenylcyklopropylamínu) (na konečnú koncentráciu 1 mmol/1), a inkubát sa prefiltroval cez malý stĺpec Ambcrlite CG-50 pufrovanú na hodnotu pH 6,3. Kolóna sa premyla s
1,5 ml vody, eluáty sa spojili a obsah rádioaktivity sa určil pomocou spektrometrie s kvapalným scintilátorom. Pretože amínové substráty sa úplne zachytávajú v kolóne, rádioaktivita v eluáte indikuje tvorbu neutrálnych a kyselinových metabolitov, tvorených ako dôsledok MAO aktivity. Aktivita MAO vo vzorke bola vyjadrená ako percento z porovnávacej aktivity v neprítomnosti inhibítorov po odčítaní príslušných hodnôt blanku. Aktivita určená použitím PEA ako substrátu je označená ako MAO-B, a aktivita určená použitím 5-HT ako MAO-A.
Výsledky
Inhibičná aktivita R(+)-PAI, S(-)-PAI a racemickej-PAI sa skúšali samostatne in vitro, a výsledky typických experimentov sú uvedené na obrázkoch 1 a 2. Celý experiment sa opakoval trikrát. Koncentrácie inhibítora spôsobujúce 50 % inhibíciu metabolizácie substrátu (IC-50) boli vypočítané z kriviek inhibície, a sú uvedené v tabuľke IB. Z týchto údajov možno vidieť, že:
a) R(+)-PAI je dvakrát aktívnejší ako racemát pri inhibícii MAO-B;
b) R(+)-PAI je 29-krát aktívnejší pre inhibíciu MAO-B než MAO-A;
c) S(-)-PAI je len 1/6800 z aktivity R(+)-PAI na inhibíciu MAO-B, a má malú alebo žiadnu selektivitu medzi MAO-B a MAO-A.
Tabuľka 1A
IC-50 (nmol/1) hodnoty na inhibíciu MAO-A a MAO-B racemickou zmesou PAI a R(+) a S(-) enantiomérmi v homogenáte mozgu potkana in vitro
IC-50 (nmol/1)
MAO-A MAO-B
S(-)PAI R(+)PAI Rac S(-)PAI R(+)PAI Rac
26000 73 140 17000 2,5 5
Výsledky rovnakých experimentov s použitím R(+) a S(-) MPAI (N-metyl-N-propargyl-l-aminoindán) sú uvedené v tabuľke IB. Všetky enantioméry MPAI sú menej selektívne pri MAO-A a MAO-B inhibícii než R(+)PAI. Ďalej R(+)-MPAI je len päťkrát taký aktívny ako S(-)-MPAI v MAO-B inhibícii, oproti R(+)-PAI, ktorý je asi 7000-krát taký aktívny ako S(-)-PAI v tejto skúške.
Tabuľka IB
IC-50 (nmol/1) hodnoty na inhibíciu MAO-A a MAO-B R(+) a S(-) enantiomérmi v homogenáte mozgu potkana in vitro
IC-50 (nmol/1)______________________________________
Látka MAO-A MAO-B
S(-)PAI R(+)PAI S(-)PAI R(+)PAI
70 3 50 10
Niektoré experimenty sa tiež uskutočnili s ľudskými cerebrálnymi kortickými tkanivami získanými 6 hodín post-mortem, a opracovanými, ako je opísané. Výsledky ta kýchto experimentov sú uvedené na obrázku 3, kde R(+)-PAI, S(-)-PAI, a racemická zmes PAI sú podľa uvedenej definície.
Príklad 23
Inhibícia MAO aktivity in vivo: akútne pôsobenie
Experimentálny postup
Potkany (samce typu Sprague-Dawley) vážiace 250 ± ± 20 g boli liečené s jedným z enantiomérov alebo racemickou formou PAI intraperitoneálnu injekciou (i. p.) alebo zavedením orálnej sondy (p. o.) a boli dekapitované 1 hodinu alebo 2 hodiny neskôr. Pre každú hladinu dávky inhibítora bola použitá skupina troch potkanov, a aktivita MAO sa určila v mozgu a pečeni pomocou všeobecnej opísanej techniky. Množstvo proteínu v jednotlivých inkubáciách sa určilo pomocou Folin-Lowryho spôsobu, a enzýmová aktivita sa vypočítala ako nmol substrátu metabolizované za hodinu inkubácie na každý mg proteínu. Aktivita MAO v tkanivách zvierat liečených s inhibítormi bola vyjadrená ako percento enzýmovej aktivity v skupine kontrolných zvierat, ktorým sa podávalo vehikulum (voda pri orálnom podávaní, 0,9 % roztok soli pri i. p. injekcii) a boli usmrtené, ako je opísané.
Výsledky
Žiadna z dávkových hladín použitá s inhibítorom liečiva nespôsobila nijakú očividnú zmenu správania sa. Výsledky sú vyznačené na obrázkoch 4 až 11. Po i. p. podávaní spôsobila látka R(+)PAI 90 % inhibíciu mozgovej MAO-B aktivity pri dávke 0,5 mg/kg. Rovnaká dávka spôsobila len 20 % inhibíciu MAO-A aktivity. Pri orálnom podávaní spôsobovala rovnaká dávka R(+)PA1 80 % inhibíciu MAO-B s nedetegovateľnou inhibíciou MAO-A. V podstate podobné výsledky bolo vidno pri inhibícii hepatickej MAO, ako aj mozgovej MAO. Dávky spôsobujúce 50 % inhibíciu MAO-A a MAO-B (IC-5O) boli vypočítané z inhibičných kriviek, a sú uvedené v tabuľke 2. Tieto údaje ukazujú:
a) že MAO inhibičná aktivita R(+)PAI je zachovaná in vivo pri potkanoch;
b) že selektivita na inhibíciu MAO-B, oproti MAO-A, s R(+)PAI je zachovaná in vivo;
c) že je in vivo zachovaná oveľa vyššia aktivita (+)-enantioméru v porovnaní s (-)-enantiomérom;
d) že tieto látky sú po orálnom podávaní účinne absorbované: a
e) že tieto látky účinne prechádzajú krvno-mozgovou bariérou a účinne inhibujú mozgovú MAO. Skutočnosť, že R(+)-PAI bola asi dvojnásobne aktívna ako racemická látka pri inhibícii MAO-B je odrazom extrémne nízkej aktivity S(-)-PAI pri inhibícii MAO-B.
Tabuľka 2
Hodnoty IC-50 (mg/kg) na inhibíciu MAO-A a MAO-B pomocou R(+)-PAI, S(-)-PAI alebo racemickou PAI, pri potkanoch po intraperitoneálnej (i. p.) injekcii alebo orálnom podávaní (p. o.)
IC-50 (mg/kg)
Látka: MAO-A MAO-B
S(-)PAI R(+)PAI Rac S(-)PAI R(+)PAI Rac
I. P. mozog >10 12 2,5 >10 0,07 022
I. P. pečeň >10 5 5 >10 0,06 0,11
P.O. mozog >10 >5 >5 >10 0,17 029
P.O. pečeň >10 >5 >5 >10 0,05 0,09
(Rac = racemická PAI)
Príklad 24
Inhibícia MAO aktivity in vivo: chronické pôsobenie
Experimentálny postup
Potkany (špecifikácie ako v príklade 23, po 4 zvieratá na každú dávkovú hladinu) boli liečené s R(+)PAI alebo s racemickou zmesou pri troch dávkových hladinách (0,05, 0,1 a 0,5 mg/kg) orálnym podávaním, jedna dávka denne počas 21 dní, a boli dekapitované 2 hodiny po poslednej dávke. Aktivity MAO typov A a B boli určené v mozgu a pečeni, ako je opísané v príklade 23.
Výsledky
Denná dávka 0,1 mg/kg látky R(+)PAI spôsobila výrazný stupeň selektívnej inhibície, s viac ako 80 % inhibíciou mozgovej MAO-B a 20 % alebo menšou inhibíciou mozgovej MAO-A. Pri vyššej dávke 0,5 mg/kg denne, bola MAO-A ešte inhibovaná menej ako 50 % (obrázky 12 a 13). Hepatická MAO vykazovala podobný stupeň selektívnej inhibície (obrázky 14 a 15). Látka R(+)PAI bola znova silnejšia než racemická zmes s faktorom asi dvakrát. V prípade mozgovej MAO, R(+)PAI mala lepší stupeň selektivitv pre inhibíciu MAO-B než mala racemická zmes.
Tieto výsledky ukazujú, že selektivita MAO-B inhibície sa môže udržať po chronickom pôsobení s týmito látkami. Ako s inými ireverzibilnými inhibítormi je stupeň enzýmovej inhibície väčší pri chronickom pôsobení, nezje stupeň inhibície po jednotlivej dávke liečiva. Látka R(+)PAI ukazuje lepší stupeň selektivity na inhibíciu mozgovej MAO-B než racemická zmes.
Príklad 25
Ireverzibilná povaha MAO inhibície
Experimentálny postup
Jednotlivá dávka látky R(+)PAI (1 mg/kg) bola podávaná i. p. injekciou skupinám po 4 potkanoch, a zvieratá boli usmrtené 2, 6, 18, 24, 48 a 72 hodín neskôr. Aktivita MAO-B sa určila v celých mozgových tkanivách, ako je opísané.
Výsledky
Výsledky sú uvedené na obrázku 16. Maximálna inhibícia MAO-B bola získaná po 6 hodinách po injekcii. MAO aktivita sa vrátila len na 30 % kontrolnej aktivity po 72 hodinách po injekcii. Tento pokus demonštruje ireverzibilnú povahu MAO inhibície pomocou R(+)PAI.
Príklad 26
Zosilnenie účinku tyramínu na tlak pri potkanoch pri vedomí
Experimentálny postup
Potkany boli anestetizované so zmesou pentobarbital (30 mg/kg) a chloralhydrát (120 mg/kg) pomocou intraperitoneálnej injekcie. Ľavá krčnicová artéria a krčná žila boli kanylované jemnou polyetylénovou trubičkou (artéria) alebo jemnou trubičkou zo silikónovej gumy spojenou s polyetylénovou trubičkou (žila), ktorej voľný vzdialenejší koniec bol zavedený pod kožu k upinaciemu bodu za krkom. Trubičky boli naplnené s heparinizovaným roztokom soli a boli zazátkované tenkým oceľovým vláknom. Zvieratá sa opracovali s 2,0 mg chloramfenikolu intramuskulámou injekciou a nechali sa zotaviť po operácii počas noci. Nasledujúci deň sa potkany umiestnili do kontajnera z vysokými stenami, ktorý dovoľoval slobodný pohyb. Arteriálny katéter sa pripojil na prevodník tlaku pomocou 100 cm dlhej soľným roztokom naplnenej trubičky z polyetylénu s tenkým otvorom, a žilný katéter sa pripojil na 1 ml striekačku s podobnou dĺžkou trubičky, ktorá spolu so striekačkou obsahovala roztok tyramínhydrochloridu v soľnom roztoku (1 mg/ml). Po čase ustálenia 30 až 40 minút sa podali tyramínové injekcie (50 alebo 100 pg) a zaznamenala sa reakcia krvného tlaku. Medzi injekciami po návrate krvného tlaku na kontrolné hodnoty sa udržiavali intervaly najmenej 15 minút. Keď boli zistené kontrolné tlakové reakcie, injektovalo sa intraperitoneálne jedno z liečiv a zaznamenávali sa tyramínové odozvy počas nasledujúcich 4 hodín. Určila sa plocha pod krivkou reakcie krvného tlaku a určil sa pomer tejto plochy po liečení k ploche pred liečením a k 1 a k 3 hodinám po injektovaní látok, s použitím priemeru 3 až 4 hodnôt získaných v kontrolnom období.
Výsledky
Výsledky sú uvedené v tabuľke 3. Látka R(+)PAI pri dávke 1 mg/kg (ktorá spôsobuje úplnú inhibíciu MAO-B v mozgu a pečeni, a 40 to 50 % inhibíciu MAO-A v týchto tkanivách) nespôsobila významné zosilnenie reakcie tlaku na tyramín. Pri vyššej dávke R(+)PAI 5 mg/kg (ktorá spôsobuje rozsiahlejšiu inhibíciu MAO-A v mozgu a periférnych tkanivách) bolo pozorované významné zosilnenie reakcie tlaku na tyramín, ktorá bolo podobná rozsahom na reakciu vyvolanú rovnakou dávkou deprenylu, a menšia ako reakcia, ktorá bola vyvolaná clorgylínom (pri dávke, ktorá inhibuje hepatickú MAO-A aktivitu cez 85 %).
Tabuľka 3
Účinok zosilnenia pôsobenia tyramínu na tlak pri potkanoch pri vedomí pôsobením MAO inhibitorov
Inhibítor Dávka (mgkg) Počet potkanov (n) Pomer plochy pod krivkou odozvy tlaku Po/Pred SEM*
Soľný roztok 12 1,25 0,28
Clorgylín 2 6 10,39 2,13
(-)Deprenyl 1 2 1,15
(+)Deprenyl 5 3 2,36 0,16
R(+)PAI 1 3 1,38 0,7
R(+)PAI 5 3 3,49 0,98
*SEM = štandardná chyba priemeru
Z tohto experimentu možno uzavrieť, že látka R(+)PAI nespôsobuje zosilnenie účinku tyramínu na tlak pri dávke, ktorá účinne inhibuje MAO-B.
Príklad 27
Potlačenie MPTP-indukovanej dopaminergickej toxicity pomocou R(+)PAI l-Metyl-fenyl-l,2,3,6-tetrahydropyridín (MPTP) je neurotoxín, ktorý poškodzuje nigrostriatálne dopaminergické neuróny pri viacerých druhoch cicavcov vrátane myší, a vyvoláva parkinsonovský syndróm u ľudí a primátov. Podstatný počiatočný krok v mechanizme jeho neurotoxicity zahŕňa konverziu MPTP na jeho toxický metabolit 1-metyl-4-fenyl-pyridíniový ión (MPP+). Táto reakcia je katalyzovaná enzýmom MAO-B a pravdepodobne sa uskutočňuje mimo dopamínergických neurónov, hlavne v gliu. Je známe, že MPTP je aj substrátom aj ireverzibilným inhibítorom MAO-B. Pred-liečenie experimentálnych zvierat MAO-B inhibítormi, ako napríklad je deprenyl alebo pargylín, chráni a predchádza MPTP-indukovanému poškode niu nigrostriatálnych neurónov, pretože je zablokovaná oxidačná konverzia MPTP na MPP+. Pokračujúca nigrostriatálna degenerácia v Parkinsonovej chorobe môže byť spôsobená expozíciou z prostredia exogénnymi MPTP-podobnými neurotoxínmi. V týchto prípadoch existuje ďalšia silná indikácia začatia podporného liečenia s MAOB inhibítorom od veľmi skorých štádií Parkinsonovej choroby v nádeji, že to neutralizuje škodlivé účinky takýchto doteraz domnelých MPTP-toxínov, a teda zastaviť alebo spomaliť postup choroby. Úspešné MAO-B inhibítorové liečivo sa v súčasnosti posudzuje podľa jeho schopnosti blokovať MPTP-indukované poškodenie nigrostriatálnych dopamínergických neurónov in vivo. (-) a (+) enantioméry PAI boli preto testované z hľadiska ich schopnosti zabrániť alebo zoslabiť MPTP-indukovanú striatalnu dopamínovú depléciu u myší.
Experimentálny postup
Samce C57 čiernych myší (s hmotnosťou 20 až 25 g) dostali a) injekciu s MPTP.HC1 (30 mg/kg rozpusteného v destilovanej vode, s.c.), alebo samotné vehikulum, alebo jednu hodinu po pred-liečení s (-) alebo (+) izomérmi PAI (2,5 mg/kg, i. p.), alebo s deprenylom (5 mg/kg, i. p.), a b) boli dekapitované 5 dní neskôr. Odstránil sa mozog a prúžkované teleso sa rozrezalo na ľadovostudenej platni a zmrazilo sa suchým ľadom. Striatálne tkanivá sa homogenizovali v 0,1 mol/1 kyseline chloristej, a deproteinizované alikvóty obsahujúce dihydroxybenzylamín ako vnútorný štandard sa testovali na dopamín a jeho hlavný metabolite kyselinu 3,4-dihydroxyfenyloctovú (DOPAC) pomocou HPLC s elektrochemickou detekciou.
Výsledky
Tabuľka 4 ukazuje výsledky tohto experimentu. Pôsobenie s MPTP samotným spôsobilo značnú striatalnu dopamínovú (DA) a DOPAC depléciu. Pôsobenie s (-) a (+) enantiomérmi PAI alebo s (-)deprenyl neovplyvnilo striatálne DA koncentrácie. Pôsobenie s (-) izomérom PAI neovplyvnilo MPTP-indukované DA a DOPAC hladiny v striatum. (+) izomér PAI podaný pred MPTP úplne zrušil redukciu striatálnych DA a DOPAC hladín spôsobenú toxínom. Pri dávke 2,5 mg/kg, (+)PAI bol rovnako silný vo svojom ochrannom účinku ako (-)deprenyl (5 mg/kg).
Tabuľka 4
Účinok pôsobenia s (-) a (+) enantiomérov MAO-B inhibítora PAI na striatalnu DA a DOPAC depléciu vyvolanú s MPTP pri myšiach in vivo
DA DOPAC
(ng/mg proteínu)
Kontrolné 162,8 ±7.2 8,4±0,5
MPTP 53,1 ±6,2 3,2 ±0,3
(-)PAI 174,0 ±4,8 7,5 ±0,2
(-)PAI + MPTP 53,4 ±6,9 7,0 ±0,6
(+)PAI 185,0 ±6,9 3,3 ±0,3
(+)PAI + MPTP 177,8 ±14,4 6,0 ±0,3
(-)deprenyl 170,6 ±7,1 5,5 ±0,3
(-)deprenyl + MPTP 197,0± 8,0 6,4 ±0,5
Uvedené hodnoty pre DA a DOPAC sú vyjadrené ako priemer ± štandardná chyba priemeru a počet potkanov, n = 7-11 v každej skupine.
Tieto výsledky indikujú, že R(+)PAI je vynikajúcim MAO-B inhibítorom in vivo, a má zvlášť veľký potenciál pre liečenie Parkinsonovej choroby.
Hoci bol vynález opísaný s odkazom na skôr zmienené príklady a sprievodné tabuľky, nie je tým obmedzený. Sú možné rôzne modifikácie a aplikácie. Napríklad sa (R)-PAI môže na liečenie Parkinsonovej choroby kombinovať, synergickým spôsobom, s α-tokoferolom (derivát vitamínu E).
Príklad 28
Účinok PAI enantiomérov na amfetamínom indukované stereotypové správanie sa stareckých potkanov
Amfetamín je známy, že stereotypické správanie sa (Sulser, F. a Sanders-Bush, E., Ann. Rev. Pharmacol., H., 209 - 230 (1971)) mobilizáciou endogénneho dopamínu. Amfetamín nie je metabolizovaný s MAO-B. Inhibícia MAO-B účinným inhibítorom a podávanie amfetamínu spôsobujú uvoľnenie dopamínu, ktorý nebude podliehať degradovaniu inhibovaným MAO-B. Teda, vzrast synaptického dopamínu je očakávaný po podávaní amfetamínu a účinného MAO-B inhibítora, čo vedie k vzrastu stereotypického správania sa účinkom amfetamínu. Rozsah tohto správania sa hodnotí podľa počtu laterálnych pohybov hlavy počas 1 minúty.
Experimentálny postup
Testovaná látka sa podávala s dávkou 0,5 mg/kg/deň v pitnej vode, 24 hodín pred pôsobením hypoxie (92 % hmotnostných dusíka + 8 % hmotnostných kyslíka počas 6 hodín). Po tom sa injektoval amfetamín s. c. pri dávke 0,5 mg/kg. 45 minút neskôr sa počítali laterálne pohyby hlavou.
Výsledky
Výsledky týchto experimentov sú uvedené v tabuľke 5.
Tabuľka 5
Účinok PAI izomérov na amfetamínom indukované stereotypické správanie sa pri stareckých potkanoch (kontrolná skupina a hypoxiou poškodené)
Skupina Hodnotenie liečenia stereotypického správania
Kontrolná (6) - 87 ±10
Kontrolná (5) (+)PAI 126 ±16*
Kontrolná (4) (-)PAI 94 ±18
Hypoxiou poškodené (5) - 93 ±12
Hypoxiou poškodené (6) (+)PAI 143 ±6*
Čísla v zátvorkách sú počty testovaných zvierat.
* P<0,001 vzhľadom na neliečenú skupinu po hypoxii alebo neliečenú kontrolnú skupinu
Výsledky v tabuľke 5 naznačujú, že (+)PAI spôsobuje významné zosilnenie amfetamínom indukovaného stereotypického správania sa aj u hypoxiou poškodených aj pri kontrolných potkanoch. Z tohto hľadiska bol (-)PAI celkom inaktívny. Tieto výsledky správania sa in vivo podporujú predchádzajúce biochemické zistenia, že (+)PAI je aktívnym inhibítorom MAO-B v mozgu, kým z tohto hľadiska je (-)PAI inaktívny.
Príklad 29
Účinok R(+)-PAI na zlepšenie alebo obnovenie pamäti
Novorodené potkanie mláďatá podrobené krátkemu pôsobeniu anoxie a potom sa nechali pokračovať v raste normálnym spôsobom, čím sa vyvolá dlhotrvajúce zhoršenie pamäti (Spciser a spol., Behav. Brain Res., 30, 89 až 94 (1988)). Toto zhoršenie pamäti sa prejavuje ako horšia účinnosť v teste pasívneho vyhýbania.
Účinok R(+)-PAI a S(-)-PAI na zlepšenie alebo obnovenie pamäti sa skúmalo v teste pasívneho vyhýbania. Ak je liečivo účinné, zvyšuje pri testovaných potkanoch latenciu reakcie na vstup do tmavého oddelenia alebo komory, kde pred tým boli podrobené elektrošoku. Latencia maximálnej reakcie je 300 sekúnd.
Experimentálny postup
Mladé potkany boli podrobené post-natálnej anoxii, ako je opísané v príklade 27. R(+)-PAI alebo S(-)-PAI boli podávané podľa jedného z nasledujúcich postupov.
Postup A
Dojčiace samice dostali dávku každého izoméru 1 až
1,5 mg/kg/deň v pitnej vode pri dojčení počas 21 dní. Po tom boli odstavené mláďatá priamo liečené rovnakou dávkou počas 20 dní. Liečenie bolo skončené po 40 dňoch a test trval 60 dní, teda 20 dní po poslednej dávke liečiva.
Postup B
Dávka bola znížená na 0,5 mg/kg/deň podávaná dojčiacim samiciam pri dojčení počas 21 dní, potom priamo mladým potkanom do 60 dní, keď sa uskutočnil test.
Test pasívneho vyhýbania
Prístroj pozostávajúci z osvetlenej komory spojenej s tmavou komorou a pohyblivými dverami medzi týmito dvoma komorami. Pri tréningu sa potkan umiestnil do osvetlenej komory na 30 sekúnd a potom sa dvere otvorili. Potkan sa pohyboval do tmavej komory s latenciou, ktorá sa zaznamenala. Po vstupe potkana do tmavého oddelenia sa dvere zavreli a počas 3 sekúnd sa do nôh zaviedol 0,3 mA elektrošok.
Retencia (pamäti) po 48 hodinách sa určila opakovaním testu a zaznamenaním latencie do kroku zo svetla do tmy do dohodnutého maxima 300 sekúnd.
Výsledky
Výsledky týchto experimentov sú uvedené v tabuľke 6.
Tabuľka 6
Účinok PAI izomérov na reakciu pasívneho vyhýbania pri mladých potkanoch (60-dní staré)
Postup A
Skupina Liečenie Predelektrošokom Po elektrošoku
Kontrolná - 49± 13 201 ±111
Kontrolná (+)PAI 49±19 220 ± 100 (+9%)*
Kontrolná (-)PAI 48 ±13 192±116
Anoxiou-poškodené - 45±11 183 ±109
Anoxiou-poškodené (+)PAI 49± 10 239 ±99 (19%)*
Anoxiou-poškodené (-)PAI 55 ±27 179±123
Postup B
Skupina Liečenie Pred elektrošo-kom Poelektrošoku
Kontrolná - 53 ±20 104± 101
Kontrolná (+)PAI 48± 11 128 ±119 (±23%)*
Anoxiou-poškodené - 45±8 119 ±105
Anoxiou-poškodené (-)PAI 52± 12 137 ± 126 (±15%)*
Anoxiou-poškodené (-)PAI 48± 19 112± 112
Obrázky predstavujú latenciu v sekundách pre vstup do tmavého oddelenia, kde testovaný potkan najprv dostal elektrošok.
* Označené percentuálne zvýšenia sú vzhľadom na zodpovedajúce skupiny po anoxii alebo kontrolné skupiny
Experimentálne výsledky indikujú, že (+)PAI, ale nie (-)PAI je účinný na zlepšenie pamäti poškodenej anoxiou a kontrolných potkanov. Liečivá aktívne v tomto teste sa považujú za potenciálne užitočné na liečenie rôznych porúch zhoršenia pamäti, demencie a zvlášť senilnej demencie Alzheimerovho typu.
Príklad 30
Účinok of R(+)-PAI na anoxiou vyvolaný syndróm hyperaktivity pri juvenilných potkanoch
Potkany, ktoré sa postnatálne exponovali anoxii a potom ponechali rásť za normálnych podmienok, vykazujú zvýšenú motorickú aktivitu v otvorenom priestore vo veku 10 až 42 dní (Hertshkowítz a spol., Dev. Brain Res., 7, 145 až 155 (1983)). Skúmal sa účinok R(+)PAI a S(-)PAI na takýto syndróm hyperaktivity.
Experimentálny postup
Anoxia bola uskutočnená na potkaních mlád’atách v prvý deň po narodení. Boli umiestnené v sklenej komore a vystavené na 25 minút 100 % dusíku. Oživili sa striedavou masážou jemne aplikovanou na hruď a potom sa vrátili k zodpovedajúcim matkám. Kontrolné potkany dostali rovnaké opracovanie, ale so vzduchom namiesto dusíka.
R(+)-PAI alebo S(-)-PAI (0,5 mg/kg/deň) bol podaný dojčiacim matkám vo vode na pitie, čím sa preniesli do mláďat cez mlieko.
Lokomócia sa merala v 6 plne počítačom riadených klietkach (28 x 28 cm), zaznamenaním počtu prechodov počas danej časovej doby. Prechod mriežkou infračervených lúčov v 4 cm intervaloch indukoval elektrické impulzy, ktoré sa posielali na počítadlo. Záznamy motorickej aktivity boli urobené vo veku 15 a 20 dní, počas 15 minút.
Výsledky
Experimentálne výsledky sú uvedené v tabuľke 7.
Tabuľka 7
Účinok oboch enantiomérov na anoxiou vy volaný syndróm hyperaktivity
Skupina Liečenie 15-dní staré potkany 20-dní staré potkany
Kontrolná 414± 192(11) 808 ±212 (12)
Kontrolná (±)PAI 254 ± 149(ll)c 7I9± 110(13)
Anoxiou-poškodené 482 ±119(7) 858 ±96 (9)
Anoxiou-poškodené (±)PAI 276±186(15)a 737 ± 150(16)c
Anoxiou-poškodené (-)PAI 334 ±196(5) 778 ±232 (6)
Čísla v zátvorke sú počty testovaných zvierat.
Uvedené hodnoty sú počty prechodov cez mriežku infračervených lúčov v klietke na hodnotenie aktivity v čase 15 minút.
a) PO,001 v porovnaní so skupinou bez pôsobenia anoxie,
b) PO,05 v porovnaní so skupinou bez pôsobenia anoxie,
c) PO,05 v porovnaní s kontrolnou skupinou.
Tieto výsledky ukazujú, že chronické orálne pôsobenie s R(+)-PAI pri dávke 0,5 mg/kg podávanej dojčiacim matkám a odstavčatám pijúcim mlieko významne zlepšujú syndróm hyperaktivity. R(+)-PAI je teda potenciálne užitočným liečivom na liečenie syndrómu hyperaktivity u detí.
Príklad 31
Rozdiely stability medzi desiatimi soľami PAI
Stabilita je jedným z dôležitých faktorov pri výbere optimálnej soli ako terapeutického liečiva. Rôzne soli môžu meniť fyzikálnochemické a biologické charakteristiky liečiva a môžu mať dramatický vplyv na jeho celkové vlastnosti. (Berge, S.M. a spol., J. Pharm. Sci. 66, 1 (1977); Gould, P.L., Int. J. Pharmaceutics, 33, 201 (1986)).
Experimentálne postupy
Syntéza PAI solí
Roztok príslušnej kyseliny (1 mol-ekv.) v 2-propanole sa pridal k roztoku PAI (1 mol-ekv.) za premiešavania v 2propanole (Ar, BHT). Vytvorená soľ sa odfiltrovala, premyla s 2-propanolom a éterom, a vysušila sa za zníženého tlaku. Výťažky boli medzi 70 až 90 %. Pri príprave PAI acetátu sa výnimočne použil ako rozpúšťadlo éter.
Analytické metódy
Chromatografické separácie sa uskutočňovali pomocou kolóny Lichrosphere 60 RP sclect B 5μ 125 x 4 mm (Merck), zariadenia HPLC (Jasco BIP-1) vybaveného s L-4200 UV-Vis detektorom (Merck-Hitachi) nastaveným na 210 nm, a D-2500 chromatografickým integrátorom (Merck-Hitachi). Elučné činidlo a rozpúšťadlo pozostávali z 80 % hmotnostných destilovanej vody/20 % hmotnostných acetonitrilu (HPLC čistota), a 0,07 mol/1 kyseliny chloristej upravenej na pH 2,5 s vodným roztokom amoniaku. Použila sa prietoková rýchlosť 1 ml/min. koncentrácia roztoku príslušnej PAI soli bola 250 pg/ml, a do chromatografického systému sa injektovalo 20 pl roztoku.
Teplota topenia sa merala automatickým prístrojom (Mettler FP 80) a termo-gravimetrická analýza sa uskutočnila na zariadení Mettler TA 3000 systém pri rýchlosti ohrevu 10 °C/min. v použiteľnom rozsahu. Rozpustnosť sa určovala príslušným zriedením supematantu z nasýteného vodného roztoku PAI soli a merala sa pomocou UV-Vis spektrofotometra UVIKON 941 (Kontron). Forma soli (mono- alebo di-soľ) bola určená z elementárnej analýzy s použitím štandardného zariadenia na určovanie C, H, N a S. pH sa meralo vo vodnom roztoku 1 % hmotnostné PAI solí.
Výsledky
Charakterizácia rôznych solí je sumarizovaná v tabuľke 8.
Tabuľka 8
Fyzikálnochemické vlastnosti PAI solí
PAI-soľ mol. hmotn. PH Rozspustnosť mg/ml Teplota topenia ČC) % hmotn. straty Forma soli
vínan 492 53 33 1762-177,3 LT0,l di
metánsulfonán 267 4β 635 156,8 -157,6 0,1 mono
maleát 287 4,0 NLT1000 87,2-87,8 o,l mono
sulfát 440 3,9 485 159,4-161,1 32 di
chlorid 207 42 238 177,0-180,0 LT03 mono
toluénsulfonán 343 4,4 60-70 1293 -129,9 LT0,l mono
fúmarat 287 3,5 95 125,4-1262 02 mono
fosfát n.a 7,0 NLT720 1093-110,4 n. a. n. a
etánsulfónan 279 2,4 NLT300 n. a. n.a. mono
acetát 231 6,1 NLT720 69,2-69,7 0,4 mono
n. a.= nedostupné
Porovnávacie štúdium stability sa uskutočnilo za podmienok zrýchleného rozkladu: I) zahrievanie pri 80 °C počas 72, 96 alebo 144 hodín; a II) reflux v izopropanole počas 30 hodín. Vzniknuté produkty degradácie sa merali pomocou HPLC a potvrdzovali s TLC. Výsledky sú uvedené v tabuľke 9 s časom relatívnej retencie (vztiahnuté na PAI pík; RRT) ako percento plochy vztiahnuté na celkovú integrovanú pikovú plochu.
Tabuľka 9
Degradačné produkty vzniknuté v PAI soliach za skrátených podmienok rozkladu
Soľ 80°C/72h so°c/i44h Reflux viPiOH/30h
RRT %b RRT % RRT %
sulfát NDC ND ND ND 0,47 022
0,60 0,72
fosfát 0,60 022 0,60 037 0,60 2,62
0,74 021
1,84 020
1,98 0,73
chlorid ND ND ND ND 223 0,71
Metánsulfónan ND ND ND ND 0,60 0,08
maleát 0,60 0,41 n. a 0,60 2,17
127 030 0,65 135
1,48 033 129 039
1,81 0,10 1,42 130
3,07 1,44 130 0,16
4,16 0,10 1,83 0,18
4,84 7,76 1,98 023
4,09 0,65
acetát 0,44 0,10 n. a 0,60 6,74
0,60 236 0,74 035
0,73 0,13 1,76 033
129 0,71 1,84 0,16
135 1,06 1319 4,17
1,75 21,85 3,60 027
1,96 3,33
2,15 0,08
232 0,15
2,83 0,15
334 1,82
Etylsulfó- ND ND 0,85 026 ND ND
nand
1,96 0,31
medza kvantifikácie = 0,08%
n. a. nedostupné
Relatívny retenčný čas (vztiahnutý na PAI pík) b percento plochy vztiahnuté na celkovú integrovanú pikovú plochu c nedetegované žiadne nečistoty d etánsulfónanová soľ
Tieto soli sa podrobili vizuálnej prehliadke farby a formy. Zistenia sú uvedené v tabuľke 10.
Tabuľka 10
Vzhľad PAI solí za podmienok rozkladu
Soľ 80°C/72h 80°C/96h 80°C/144h Reflux v iPrOHCOh
sulíät špinavo biely prášok n.a špinavo biely prášok hnedý prášok
fosfát hnedastý prášok n.a hnedý prášok hnedý prášok
chlorid biely prášok n. a biely prášok špinavobiely prášok
Metánsulfónan biely prášok n.a biely prášok biely prášok
maleát hnedý topiaci sa hnedý n.a hnedý topiaci sa
etylsulfónan hnedastý topiaci sa n. a tmavohnedý topiaci sa tmavohnedý topiaci sa
n.a.= nedostupné
Tieto štúdie ukazujú, že sulfát, etánsulfónan a metánsulfónan majú významné výhody oproti iným soliam pre dobrú rozpustnosť a chemickú stabilitu. Z týchto troch solí je metánsulfónan výhodný pre svoju vynikajúcu stabilitu dokonca aj za deštruktívnych podmienok.
Príklad 32
Reverzná haloperidolom vyvolaná katalepsia pri myšiach
Samce, ICR myší po 25 - 30 g, boli predliečené s niektorým z nasledujúcich liečiv: roztok soli, (R)-PAI metánsulfonan, alebo racemický-PAI metánsulfónan. Všetky liečivá sa podávali i. p. v objeme 0,2 ml. O dve hodiny neskôr sa injektoval haloperidol s.c. s dávkou 6 mg/kg v objeme 0,1 až 0,2 ml. Testy motorickej koordinácie sa robili 3 hodiny po podaní haloperidolu, teda 5 hodín po podávaní predpokladaného ochranného liečiva.
Testy motorickej koordinácie a rigidity sa kvantifikovali podľa troch rôznych parametrov: a) schopnosti chodiť pozdĺž horizontálnej tyče, 80 cm dlhej; b) schopnosti zliezť dolu vertikálnu tyč, 80 cm dlhú; c) trvania nepohyblivosti v neprirodzenom sediacom postoji, pričom je brucho myši tlačené proti „stene.“ Celkový zisk ako u haloperidolom neopracovaných myší má v každom teste skóre 4, alebo celkovo vo všetkých testoch 12. Nižší zisk je daný skóre 1 až 3. Kľúč hodnotenia skóre je uvedený v tabuľke 9A. Účinky rôznych činidiel na antagonizovanie haloperidolom vyvolanej katalepsie sú uvedené v tabuľke 1L Po troch hodinách po haloperidolc (R)-PAI metánsulfónan poskytoval ochranu proti haloperidolu pri 5 až 15 mg/kg, dosahujúc vrchol účinku pri 7,5-10 mg/kg (skóre aktivity 94 % kontrolnej skupiny so soľným roztokom). Racemický PAI metánsulfónan poskytoval čiastočnú ochranu v rozsahu 7,5 až 15 mg/kg, a nebol aktívny pri 5 mg/kg. Z obrázka 17 možno vidieť, že profil dávka-účinok aj pre (R)-PAI metánsulfónan aj pre racemický PAI je taký, že vzrast dávky nad 10 mg/kg prináša pokles účinku, ale účinok racemickej zmesi je celkovo menej silný. To znamená, že racemický PAI metánsulfónan pri dvojnásobnej dávke oproti (R)-PAI metánsulfónanu bude ešte vždy menej aktívny ako (R) enantiomér.
Reverzná α-ΜρΤ-indukovaná hypokinézia pri potkanoch
O liečive α-MpT sa predpokladá, že inhibuje tvorbu L-DOPA z tyrozínu, a následne tvorbu dopamínu samotného. Nedostatok CNS dopamínu sa prejaví ako hypoaktivita. Šesť mesiacov staré samce potkanov Wistar (od Harlan Orkack, UK) boli predliečené so soľným roztokom, (R)-PAI metánsulfónanom alebo Rac PAI metánsulfónanom, pri uvedených dávkach. O dve hodiny neskôr dostali i. p. α-MpT dávku 100 mg/kg v 0,3 - 0,5 ml. Kontrolná skupina dostala soľný roztok. Potom sa zaznamenávala motorická aktivita v počítačom riadenej klietke počas 10 hodín. Výsledky sú dané v tabuľke 12 a na obrázku 18. Pri 2 mg/kg (R)-PAI metánsulfónan obnovil hladinu aktivity asi na 90 % soľným roztokom opracovaných potkanov, ale Rac PAI metánsulfónan nebol aktívny. Vo všetkých prípadoch bola krivka dávka-účinok zvonovitého tvaru, vykazujúca pokles účinku so vzrastom dávky nad vrchol 2 až 5 mg/kg. Pri 5 mg/kg Rac PAI metánsulfónan nebol schopný vyvolať hladinu aktivity porovnateľnú s hladinou (R)-PAI metánsulfónanu pri 2 mg/kg.
Z týchto meraní vidno, že (R)-PAI metánsulfónan a Rac PAI metánsulfónan nezdieľajú podobný obraz aktivity na obnovenie normokinézie haloperidolom opracovaných myší a α-Mpt opracovaných potkanov. Pri všetkých študovaných dávkach je (R)-PAI metánsulfónan vždy silnejší než Rac PAI metánsulfónan pri zodpovedajúcej dávke. Tiež jc vždy nižší vrchol aktivity Rac PAI metánsulfónanu, než vrchol aktivity (R)-PAI metánsulfónanu. Teda Rac PAI metánsulfónan pri danej dávke je vždy menej účinný než (R)-PAI metánsulfónan pri polovici rovnakej dávky. Zdvojnásobenie dávky Rac PAI metánsulfónanu oproti (R)-PAI metánsulfónanu nespôsobí účinok ekvivalentný účinku (R)-PAI metánsulfónanu.
Farmakologicky sa Rac PAI metánsulfónan nemôže považovať za konzistentný s 50 % aktívnej zložky, ktorou je (R)-PAI metánsulfónan a 50 % inertného materiálu ako zried’ovadla. Prítomnosť (S)-PAI v Rac PAI metánsulfónane má nepriaznivý účinok na aktivitu (R)-PAI, čo vedie k viac ako dvojnásobnému poklesu schopnosti. Pokles môže byť spôsobený priamym nepriaznivým účinkom (S)-PAI na parametre správania sa.
Tabuľka 11
Reverzná haloperidolom vyvolaná katalepsia myší s (R)-PAI metánsulfónanom a racemickým metánsulfónanom
Myši dostali každé testované liečivo i. p. pri uvedených dávkach. O dve hodiny neskôr dostali haloperidol tak, ako je uvedené v texte. Uvedené dávky sú pre tri základy.
(R)-PAI metánsulfónan Rac PAI metánsulfónan
Dávka mg/kg Skóre+SE n %z kont Skóre+SE n %z kont
1,8 7^ ±1 6 60 7,0 ±0,6 6 59
3,0 6,4 ±0,5 6 60 5,9 ±0,7 6 49
5,0 8,7 ±0,9* 6 73 6,4 ±0,4 6 53
7,5 11,0 ±0,4*** 5 92 9,4 ±0,8^ 6 78
10 11,3 ±0,3*** 6 94 9í ±0,6*** 6 77
15 10,8 ±0,5*** 5 90 8,8 ±0,8* 6 73
Skóre+SE n % z kont
Kontrolná skupina soľanka 12±0 12 100
Haloperidol samotný 6,6 ±0,3 16 59
Štatistická významnosť vzhľadom na haloperidol samotný: *p < 0,05; **p S 0,01; ***p < 0,001 podľa Študentovho „t“ testu. Skóre pre (R)-PAI sú významne odlišné od skóre racemickej PAI pri 5 mg/kg, p < 0,05; pri 10 mg/kg, p < 0,01; a pri 15 mg/kg, p < 0,05.
Tabuľka 1 IA
Kľúč hodnotenia skóre haloperidolom indukovanej katalepsie pri myšiach a j ej odvrátenia rôznymi činidlami
Vertikálna tyč:
Neschopné uchopiť tyč labkami1
Schopné uchopiť, ale zošmykujú sa dolu2
Schopné uchopiť, čiastočne sa šmýkajú, čiastočne lezú dolu 3 Schopné uchopiť, lezú dolu pomocou všetkých labiek 4
Horizontálna tyč:
Neschopné uchopiť, padajú z tyče1
Schopné uchopiť, neschopné chodiť po tyči viac ako 2 kroky 2 Schopné uchopiť, prejdú polovicu tyče3
Schopné uchopiť, prejdú celú dĺžku tyče4
Nepohyblivosť sedenie oproti stene
Nepohyblivosť > 5 min1
Nepohyblivosť 3-5 min2
Nepohyblivosť 1-3 min3
Nepohyblivosť 0,1 min4
Zlomkové skóre, napríklad ako 2,5, sú vyznačené vtedy, keď správanie sa patrí medzi dve kategórie, ako napríklad medzi 2 a 3.
Tabuľka 12
Obnovenie motorickej aktivity pri potkanoch opracovaných s α-metyl-p-tyrozínom (a-MpT) pri 100 mg/kg i. p.
Potkany dostali testované liečivo i. p. pri uvedených dávkach. Po dvoch hodinách dostali α-MpT a boli ihneď umiestnené do klietky na vyhodnocovanie aktivity. Celková motorická aktivita sa automaticky zaznamenávala počas 10 hodín tak, ako je opísané v texte.
(R)-PAI metánsulfónan Rac PAI metánsulfónan
Dávka mg/kg Skóre+SE n %z kont Skórc+-SE n %z kont
2 14,132** ± 1457 7 89 9,035 ±829 6 57
5 12,893* ± 1,869 7 81 10,926* ±820 8 69
7,5 6,679 ±414 4 42 9,698 ±557 4 61
Skóre+SE n % z kont
Kontrolná skupina soľanka 15,862 ± 1,424 5 100
α-Mpt samotný 8,108*** ±810 9 51
Štatistická významnosť podľa Študentovho „t“ testu, *p < <0,01;
***p < 0,001 pre testované liečivo+a-Mpt versus a-MpT samotný α-Mpt samotný versus kontrolná skupina po soľanke
Skóre (R)-PAI oproti racemickej zmesi PAI sú odlišné pri 2 mg/kg, p < 0,01.
Príklad 33
Účinky (R)-PAI metánsulfónanu po uzavretom úraze hlavy pri potkanoch
Metódy
1. Vyvolanie úrazu
Úraz hlavy bol vyvolaný u samcov potkanov pod éterovou anestéziou pomocou vhodne kalibrovaného zariadenia s padajúcim závažím, ktoré padalo na exponovanú lebku, kryjúcu ľavú mozgovú hemisféru, 1 až 2 mm bočné od strednej línie, v strednej temenovej rovine.
2. Hodnotenie motorických funkcií
Jednu hodinu po vyvolaní úrazu sa potkany testovali sériou kritérií, ktoré hodnotili ich neurologický stav (kritéria sú opísané Shohami, a spol., J. Neurotrauma, jO, 113 (1993)). Tieto kritéria, označované ako Neurological Severity Score (NSS), pozostávajú zo série reflexov a motorických funkcií. Udávajú sa body založené na nedostatku týchto kritérií. Po 24 hodinách sa potkany hodnotili znova.
3. Hodnotenie mozgového edému
Mozog sa odobral po druhom hodnotení motorických funkcií (24 h). Kúsok tkaniva (asi 20 mg) sa odvážil, aby sa zistila vlhká hmotnosť (WW). Po vysušení v piecke počas 24 hodín pri 95 “C sa znova odvážil na zistenie suchej hmotnosti (DW). Percento vody v tkanive sa vypočítalo ako (WW-DW) x 100/WW.
4. Podávanie liečiva (R)-PAI metánsulfónan bol rozpustený vo vode. Potkanom sa injektovala intraperitoneálne dávka 0,1 mg/kg, 0, 4, 8 a 12 hodín po vy volaní úrazu hlavy. Kontrolné potkany sa opracovali v rovnakom čase s vodou.
Výsledky
NSS, ktoré je mierou „klinického“ stavu potkanov, bolo takmer identické v liečených a neliečených skupinách 1 hodinu po úraze hlavu, ale významne nižšie po 24 hodinách v skupine potkanov liečených (R)-PAI metánsulfónanom (Tabuľka 13). Tieto výsledky ukazujú, že PAI metánsulfónan je účinný na zlepšenie obnovenia motorických funkcií po uzavretom úraze hlavy pri potkanoch.
Po 24 hodín po úraze sa na hemisfére zistil väčší edém (85,4 % hmotnostného vody v mozgu kontrolných potkanov vs. 78,5 % hmotnostného v nepoškodenom mozgovom tkanive). PAI metánsulfónan bol účinný na zmenšenie edému, ako sa overilo jeho účinkom na obsahu vody v percentách.
Na záver, výsledky tu uvedení demonštrujú, že (R)-PAI metánsulfónan má neuroprotektívne vlastnosti v modeli zameranom na poškodenie ľudských mimických nervov a na indukovaný úraz v uzavretej lebke.
Tabuľka 13
NSS ANSS (1-24 h) ’/oHjO v mozgu
lh 24h
Kontrolná skupina (n=6) 15,6 12,3 4,3 ±0,5 85,4 ±0,4
(R)-PAI mettánsulfónan(n=6) 16,7 10,2 6,5 ±0,7* 82,1 ±0,6**
* P < 0,05 (Mann Whitney U-test) ** P < 0,005 (t-test)
Príklad 34
Účinky PAI metánsulfónanu na prevenciu NMDA vyvolanej smrti buniek v kultúrach buniek malého mozgu
Výsledky skúšok in vitro
Postupy
Kultúry sa mechanicky oddelili z malého mozgu novorodených potkanov. Malý mozog sa vypitval aseptický od 6 alebo 7 dňových potkaních mláďat a umiestnil sa v 15 ml sterilnej plastovej kónickej banke obsahujúcej 3 ml obohateného kultivačného prostredia (prostredie sa pripravilo z Dulbeccovho modifikovaného Eagleovho prostredia (DMEM) s vysokou koncentráciou glukózy (1 g/1), 2 mmol/1 (v/v) L-glutamín, antibiotická antimitotická zmes, a obohatená s 15 % (v/v) teplom inaktivovaného fetálneho teľacieho séra). Mozoček sa potom rozobral po 20 až 25 prechodoch cez sterilné oceľové ihly mierky 13, 10 cm dlhé pripevnené na 5 ml striekačku s vloženým sitkom z nylonu s veľkosťou pórov 45 pm. Rozdelené bunky sa centrifugovali pri 200 g počas 5 minút, supematant sa odhodil a bunky sa resuspendovali v obohatenom prostredí. Živosť buniek sa určovala pomocou testu vylučovania trypanovej modrej. Potom sa bunky umiestnili na platne s hustotou ŽOO.'mm'· na povrchy pokryté poly-L-lyzínom (Poly-L-lyzínom pokryté povlaky na skle sa pripravili najmenej 1 hodinu pred nanášaním buniek ponorením do roztoku sterilnej destilovanej vody obsahujúcej 15 pg/ml poly-L-lyzínu, a tesne pred použitím, umytím destilovanou vodou a usušením), pokryli sa obohateným kultivačným prostredím a inkubovali sa pri 37 °C v atmosfére 5 % hmotnostných CO2 vo vzduchu a 100 % vlhkosti. Po 4 dňoch kultivácie sa prostredie nahradilo prostredím obsahujúcim testovanú látku. Pokusy sa robili dvojmo a opakovali sa 2 alebo 3-krát. Po určení toxickej reakcie na testovanú látku sa porovnávali štyri skupiny: (I) kontrolná (samotné obohatené kultivačné prostredie), (II) testovaná látka (jedna podskupina pre každú koncentráciu (testovali sa dve koncentrácie)), (III) N-metyl-D-aspartát (NMDA, expozícia koncentrácii 1 mmol/1 počas 3 hodín) ako cytotoxický podnet, (IV) testovaná látka plus NMDA (jedna podskupina pre každú z dvoch koncentrácií testovanej, (V) kontrolná skupina na testovanie účinku rozpúšťadla (v ktorom je rozpustená testovaná látka), a (VI) dodatočná „pozitívna kontrolná“ skupina spermínu (0,01 pmol/l rozpustené v kultivačnom prostredí) plus NMDA. Prežívajúce nervové bunky sa vyhodnocovali fázovo kontrastnou mikroskopiou a škvrnami trypanovej modrej po 24 hodinách.
Výsledky
Je dobre známe, že kyselina glutámová (Glu) má neurotoxické vlastnosti, ktoré sa prejavujú vo viacerých neurologických poruchách vrátane epilepsie a mŕtvice, a najpravdepodobnejšie tiež v mozgových neurodegeneratívnych chorobách, ako napríklad je Parkinsonova choroba, Alzheimerová choroba a pri traumatickom poškodení mozgu. Neurotoxické účinky Glu sú sprostredkované receptormi viažucimi Glu v membránach, ako napríklad sú N-metyl-D-asparátové (NMDA) receptory.
Tieto výsledky, ako sú uvedené v tabuľke 14, demonštrujú, že 10 pmol/l (R)-PAI metánsulfónanu zvýšilo prežívajúce bunky mozočka o 27 percent, po expozícii 1 pmol/l NMDA. Tieto in vitro výsledky podporujú in vivo účinky (R)-PAI metánsufónanu uvedené v príkladoch 33 a 35, čo indikuje, že toto liečivo má neuroprotektívne vlastnosti proti neurotoxickej koncentrácii NMDA.
Tabuľka 14
Neuroprotektívny účinok (R)-PAI metánsulfónanu na prevenciu NMDA-indukovaného odumierania buniek malého mozgu
Experimentálna skupina Prežívajúce bunky Percento ochrany
Cerebeláme kultúiy
(Toxicita TD25=30 pmol/l; TD53=85 pmol/l; TD1Oo=32O pmol/l)
Kontrolná 100
Rozpúšťadlo 97
NMDA 10
Rozpúšťadlo-^ NMDA 10 0
Látka+NMDA:
1)0,01 pmol/l + ” 12 2
2) 1,00 pmol/l+ ” 22 12
3) 10,00 pmol/l + ” 37 27
Spermin+NMDA 75 65
Hodnoty vyjadrené ako percento z neliečenej kontrolnej skupiny predstavujú priemer z 2 pokusov pri duplikovaných kultivačných experimentoch, a priemer ± štandardná chyba priemeru zo 4 zvierat pre ischémiu. Hodnoty percento ochrany sú účinok testovanej látky po odčítaní účinku rozpúšťadla.
Príklad 35
Účinky (R)-PAI metánsulfónanu po stupňovanom rozdrvení optického nervu potkana
Neuroprotektívne účinky (R)-PA1 metánsulfónan boli určené na aplikáciu ihneď po mechanickom poškodení rozdrvením optického nervu dospelého potkana. Krátkodobé účinky sa merali metabolický, a dlhodobé účinky elektrofyziologicky.
Metódy
1. Metabolické merania
a) Všeobecne
Tento spôsob je opísaný Yoles, a spol., Investigative Ophthalmology & Visual Science, 33, 3586-91 (1992). Pri krátkodobých účinkoch sa metabolické merania monitorovali pomocou mitochondriálneho NADH/NAD pomeru, ktorý závisí od aktivity elektrón-transportného systému, a teda ukazuje hladiny tvorby energie. Zmeny v schopnosti nervu produkovať energiu ako dôsledok poranenia, sa určovali porovnaním hladín NADH v reakcii na umelé prechodné anoxické poškodenie pred úrazom a po úraze.
b) Povrchová fluorimetria-reflektometria
Monitorovanie intramitochondriálneho NADH redoxného stavu je založené na fakte, že NADH, na rozdiel od oxidovancj formy NAD+, fluoreskuje pri ožiarení s 450 nm. Na prenos svetla k optickému nervu a od neho sa použili ohybné zväzky tvaru Y optických vlákien (svetlovodiče). Svetlo emitované z nervu sa meralo pri dvoch vlnových dĺžkach: 366 nm (odrazené svetlo) a 450 nm (fluorescenčné svetlo). Zmeny v odrazenom svetle boli korelované so zmenami v absorpcii tkaniva spôsobenej hemodynamickými účinkami a s pohybmi optického nervu sekundárne ku zmenám arteriálneho krvného tlaku a objemu nervu. Zistilo sa, že fluorescenčné merania sú zodpovedajúco korigované na meranie NADH redoxného stavu odčítaním odrazeného svetla (366 nm) od fluorescenčného svetla (pomer 1:1), čím sa získa korigovaný fluorescenčný signál.
c) Príprava zvierat
Použitie zvierat bolo v zhode s ARVO Resolution o použití zvierat vo výskume. Samce potkanov SpragueDawley (SPD) vážiace 300 až 400 g boli anestetizované so pentobarbitonom sodným (50 mg/kg intraperitoneálne). S upevnenou hlavou zvieraťa držanou na mieste držiakom hlavy sa pod binokulárnym operačným mikroskopom vykonala laterálna kantotomia a spojivka bola narezaná laterálne ku rohovke. Po oddelení svalov retraktora očnej gule sa identifikoval optický nerv a dĺžka 3 až 3,5 mm bola odkrytá pri očnej guli tupým oddelením. Dura sa nechala intaktná a dával sa pozor, aby sa nepoškodil nerv. Špeciálny držiak svetlovodiča sa inplantoval okolo optického nervu takým spôsobom, že sa svetlovodič umiestnil na povrchu optického nervu vo vzdialenosti 1 mm k miestu poranenia. Zvieratá sa ešte anestetizované nechali zotaviť počas 30 minút od chirurgického zákroku a potom boli vystavené anoxickým podmienkam. Anoxický stav sa dosiahol tak, že potkany dýchali atmosféru 100 % dusíka počas 2 minút, po tomto čase boli vrátené na vzduch. Aby sa vyhodnotila metabolická aktivita optického nervu, merali sa relatívne zmeny v intenzitách odrazeného a fluorescenčného svetla v odozve na anoxiu pred a po poranení drvením.
d) Experimentálny postup ns poranenie drvením a metabolické merania
Pomocou svorky s kalibrovaným prierezom sa na nerv spôsobí mierne drvivé poranenie medzi okom a držiakom svetlovodiča pri tlaku zodpovedajúcom 120 g počas 30 sekúnd. Ihneď po poranení dostali zvieratá intraperitoneálne injekcie vody s (R)-PAI metánsulfónanom (2 mg/kg) a bez neho. Na vyhodnotenie aktivity systému produkcie energie sa merala NADH reakcia na 2 minútovú anoxiu pri všetkých zvieratách pred poranením, 30 minút po poranení, a potom v hodinových intervaloch do 4 hodín (pozri obrázok 19).
2. Elektrofyziologické merania
Táto metóda je opísaná Assia, a spol., Brain Res., 476, 205 až 212 (1989). Príprava zvierat a poranenie optického nervu boli uskutočnené ako pri metabolickom štúdiu. Ihneď po poranení dostali zvieratá jedinú injekciu vody s (R)-PAI metánsulfónanom (0,5 mg/kg) a bez neho. Štrnásť dní po poranení a liečení sa optické nervy vyrezali a merali sa elektrofyziologicky. Pred odohraním optických nervov na elektrofyziologické merania boli potkany hlboko anestetizované so 70 mg/kg pentobarbitónu. Z lebky sa odstránila koža a optické nervy sa odizolovali od očných gulí. Urobila sa neúplná dekapitácia a lebka sa otvorila pomocou kostných klieští. Veľký mozog sa premiestnil bokom, čím sa ukázala intrakraniálna časť optického nervu. Na úrovni nervu sa urobila disekcia, a nerv sa preniesol do nádobiek obsahujúcich čerstvý soľný roztok pozostávajúci z NaCl (126 mmol/1), KC1 (3 mmol/1), NaH2PO4 (1,25 mmol/1), NaHCO3 (26 mmol/1), MgSO4 (2 mmol/1), CaCl2 (2 mmmol/1) a D-glukózy (10 mmol/1), a prevzdušnený so zmesou 95 % hmotnostných O2 a 5 % hmotnostných CO2 pri laboratórnej teplote. Nervy sa uchovávali v tomto roztoku, v ktorom ich elektrická aktivita zostávala stabilná najmenej 3 až 4 hodiny. Po 0,5 hodine zotavenia pri laboratórnej teplote sa získali elektrofyziologické záznamy z nervu vzdialeného od poškodenia drvením. Konce nervu sa potom pripojili ku dvom prísavným elektródam Ag-AgCI ponoreným v kúpeľovom roztoku pri 37 °C. Stimulujúce pulzy sa aplikovali cez elektródu na proximálnom konci a akčný potenciál sa zaznamenal vzdialenejšou elektródou. Na supramaximálnu elektrickú stimuláciu (0,5 pps) sa použil Grass SD9 stimulátor. Meraný signál sa preniesol do predzosilňovača Me delec PA36 a potom do elektromyografu (Medelec M57, AA7T zosilňovač). Roztok, stimulátor a zosilňovač mali bežné uzemnenie. Maximálna amplitúda ôsmich spriemerovaných akčných potenciálov látky (CAPs) sa zaznamenala a fotografoval kamerou Polaroid. Merané CAP hodnoty pri kontralaterálnych nepoškodených nervoch slúžili ako referenčné hodnoty.
Výsledky
Výsledky demonštrujú, že (R)-PAI metánsulfónan aplikovaný ihneď po poškodení optického nervu blokoval poškodením vyvolané zníženie tvorby energie. (R)-PAI metánsulfónan tiež má dlhodobý účinok meraný pomocou elektrofyziologického monitoringu.
Amplitúda CAP (akčný potenciál látky) je priamo korelovaná s počtom vodivých vlákien v testovanom segmente nervu.
(R)-PAI metánsulfónan významne zoslabil stratu aktivity vyvolanú poranením vo vzdialenom segmente poraneného nervu, čo indikuje, že (R)-PAI metánsulfónan je a neuroprotektívnym činidlom alebo aspoň spomaľuje degeneráciu.
Tabuľka 15
Elektroíyziologické merania
Skupina CAP amplitúda (pV) (Priemertštand. chyba)
VehikulumN= 13 441 ±95
(R)-PAI metánsulfónan N = 7 2104±313*
Príklad 36
Porovnanie protikŕčových vlastností R-PAI a S-PAI solí
Aj (R)-PAI aj (S)-PAI HC1 soli majú významnú protikŕčovú aktivitu. V teste maximálneho elektrošoku (MES test) u myší (i. p. podávanie) mal (S)-PAI HC1 vyššiu protikŕčovú aktivitu (ED50 = 57 mg/kg) než (R)-PAI HC1 (E5() = = 79 mg/kg). Analogické výsledky sa pozorovali pre potkany (p.o. podávanie). Štyri zo štyroch potkanov boli chránené pred záchvatom v teste MES, ak sa podalo 50 mg/kg (S)-PAI HC1, kým pri rovnakej dávke (R)-PAI HC1 boli chránené tri zo štyroch myší. Vzhľadom na účinnosť proti Parkinsonovej chorobe, je zvýšená protikŕčová aktivita nepriaznivým vedľajším účinkom. Rovnaký trend sa prejavuje s metánsulfónanovými soľami. (S)-PAI metánsulfónan má väčšiu protikŕčovú aktivitu než (R)-PAI metánsulfónan pri MES teste. Pri dávkach 100 mg/kg, (S)-PAI metánsulfónan chránil tri z troch myší, pričom len jedna z troch myší bola chránená s (R)-PAI metánsulfónanom.
MES test je klasický model na indikáciu účinnosti pre čiastkové a celkové záchvaty u ľudí. Mechanizmus pôsobenia činidiel je prostredníctvom ich schopnosti brániť šíreniu záchvatov. Niektoré činidlá však, ktoré bránia šíreniu záchvatu, majú vedľajší účinok v znížení prahu záchvatu. Tieto činidlá preto majú aj kŕče podporujúci aj protikŕčový vedľajší účinok.
Výsledky v tomto dokumente ukazujú, že (S)-PAI metánsulfónan má aktivity podpory kŕčov. V teste časovanej intravenóznej infúzie metrazolu, 141 mg/kg (S)-PAI metánsulfónanu znižuje čas, a teda množstvo metrazolu, požadovaný na vyvolanie prejavu aj prvého lokálneho záchvatu aj na vznik klonusu. Iné činidlá, ktoré sa klasicky používajú pri čiastočných alebo generalizovaných záchvatoch, ako napríklad fenytoín a karbamazepín, nevykazujú tento účinok. (H.J. Kupferberg, Epilepsia, 30, s51-s56 (1989)). Podobne, (S)-PAI metánsulfónan vykazoval významne vyššiu akútnu neurotoxicitu, než (R)-PAI metánsulfónan. Pri 300 mg/kg, (R)-PAI metánsulfónan nevykazoval žiadnu neurotoxicitu u myší pri teste ataxie na rotačnej tyči. S (S)-PAI metánsulfónanom štyri zo štyroch myší vykazovali neurotoxicitu a spasticitu.
Metódy
TD5o (medián toxickej dávky)
Týmto testom sa merajú neurologické deficity pomocou testu ataxie na rotačnej tyči. Myš sa umiestni na vrúbkovanú tyč rotujúcu so 6 ot./min. Potom sa určuje, či má myš schopnosť zostať v rovnováhe a zostať na tyči počas jednej minúty pri každej z troch skúšok.
Test časovanej intravenóznej infúzie metrazolu
Tento test meria minimálny prah pre záchvat u jednotlivého zvieraťa. Metrazol sa podáva infúziou 0,185 mg/ml do chvostovej žily myši. Potom sa zaznamenáva čas (sekundy) od štartu infúzie do objavenia sa prvého trhnutia (prvý ohniskový záchvat) a nástupu klonusu (klonického záchvatu). Látky podporujúce kŕče vyžadujú menej metrazolu na vyvolanie týchto symptómov a preto vykazujú koncové body v kratšom časovom období.
Príklad 37
Periférne účinky (R)-PAI a (S)-PAI na zmrštiteľnosť preparátov intestinálneho hladkého svalstva
Periférne účinky hydrochloridových solí enantiomérov PAI sa určovali na izolovanom tenkom čreve králika alebo morčaťa. Tieto pozorovania poskytujú užitočnú informáciu o ich príbuzných periférnych vedľajších účinkoch u ľudí. Prvým bodom kontaktpri subjekte s orálne podávaným liečivom je gastrointestinálny trakt, kde je koncentrácia liečiva oveľa vyššia než po absorpcii a distribúcii. V prípade PAI hydrochloridu (m. hm. = 208), 10 mg orálna dávka obsiahnutá v objeme kvapaliny asi 100 ml by bola ekvivalentná koncentrácii asi 0,5 mmol/1. Naproti tomu terapeutická koncentrácia v plazme (R)-PA1 hydrochloridu je v nanomolámom rozsahu.
Účinok enantiomérov PAI v izolovanom lačníku králika a bedrovníku morčaťa sa určil tak, že sa zistilo, či príjem (S)-PAI spolu s (R)-PAI (ako sa nachádzajú v racemickom PAI) by spôsobili vedľajšie účinky neprítomné pri podávaní čistého (R)-PAI. (R)-PAI je výhodným enantiomérom pre inhibíciu MAO-B v mozgu, z hľadiska jeho sily a vysokej selektivity k tejto forme enzýmu. (S)-PAI je v tomto ohľade oveľa menej silný, než (R)-PAI a je tiež neselektívny k MAO-B. V princípe by jeho prítomnosť v PAI racemáte mohla byť tolerovaná alebo prehliadnutá za predpokladu, že (S)-PAI je inertný pri odporučených dávkach (R)-PAI. Výsledky uvedené v tabuľkách 16 až 19 ukazujú, že (S)-PAI nie je inertnou látkou. Naopak v bedrovníku morčaťa je silnejším relaxantom ako (R)-PAI. Pre jeho periférne účinky nemôže sa nebrať do úvahu ako zanedbateľný. Tieto údaje ukazujú, že pri podávaní čistej (R)-PAI by bolo menej periférnych vedľajších účinkov, než pri podávaní racemickej PAI obsahujúcej ekvivalentnú dávku (R)-PAI.
Tabuľka 16
Zosilnenie pôsobenia tyramínu oboma enantiomérmi PAI HC1 v preparátoch lačníka potkana
Natiahnutý lačník potkana, upevnený v orgánovom kúpeli, vykazoval rytmické kontrakcie, ktoré sa inhibujú norepinefrínom, ale nie tyramínom. Ak je však lačník predopracovaný s inhibítorom monoaminooxidázy, ako je napríklad PAI, potom tyramín spôsobuje relaxáciu spontánnych kontrakcií. Rozsah relaxácie sa môže korelovať s relatívnou účinnosťou inhibítora.
Látka Koncentrácia (pmol/l) % relaxácie
Tyramín samotný 40 0
Norepinifŕín 0,002 100
(R) PAI samotný 0,2-4,0 1
(S) PAI samotný 0,2-4,0 1
Tyramín 40
po (R) PAI Oí 67
2 88
40 85-90
po (S) PAI 0Í 0
2 35
40 33-50
Výsledky
Ako inhibítor mozgovej MAO-B je (S)-PAI oveľa menej silný než (R)-PAI. Preto nie je (S)-PAI užitočným činidlom na prevenciu mozgovej dopamínovej degradácie, ale môže zosilňovať tyramínom-vyvolané uvoľnenie norepinefrínu v tenkom čreve. Jeho aktivita v tenkom čreve je nežiaducim vedľajším účinkom, pretože sa očakáva vzrast absorpcie a pôsobenia nerozloženého tyramínu. Teda, (S)-PAI nie je inertnou látkou, ak sa používa spolu s (R)-PAI, ako sa nachádzajú v racemickej PAI.
Tabuľka 17
Antagonizmus Betanecholom vyvolaných kontrakcií preparátov bedrovníka morčaťa v prítomnosti 400 pmol/l oboch enantiomérov PAI HC1
Natiahnutý bedrovník morčaťa upevnený vo fyziologickom roztoku v orgánovom kúpeli sa kontrahuje v závislosti od dávky, ak sa pôsobí s betanecholom, ktorý je enzymaticky stabilným.analógom prirodzeného gastrointestinálneho neurotransmitéra acetylcholínu. Tieto kontrakcie sa zoslabujú v prítomnosti PAI. Údaje sú vyjadrené v gram-napätí
Batenechol (pmol/l) gram-napätie
kontrola (R)PAi kontrola (S) PAI
0,8 03 0Í 0,6 0
2 13 0,3 2,0 0
4 2Í 0,7 3,0 0
8 4,0 l,o 3,8 0,6
20 5,6 2,0 3,8 1Í
40 6Í 2,8 3,8 1,7
80 6Í 3,1 3,8 2,6
200 6Í 43 3,8 2,6
Výsledky (S)-PAI je takmer neaktívny ako MAO-B inhibítor oproti (R)-PAI, a teda nie je účinný na prevenciu degradácie mozgového dopamínu. Je však účinnejší ako R(PAI) pri prevencii betanecholom vyvolaných kontrakcií tenkého čreva. Teda (S) -PAI nie je inertnou látkou pri použití s R(PAI), ako sa nachádzajú v racemickej zmesi PAI.
Tabuľka 18
Anatagonizmus histamínom vyvolaných kontrakcií preparátov bedrovníka morčaťa pri oboch enantioméroch PAI HC1
Fixná dávka histamínu (40 nmol/1) spôsobuje trvalú kontrakciu natiahnutého bedrovníka morčaťa upevneného vo fyziologickom roztoku v orgánovom kúpeli. Postupný prídavok oboch z enantiomérov PAI HC1 spôsobuje relaxáciu svalu v závislosti od dávky. Výsledky sú vyjadrené ako percento relaxácie vzhľadom na základnú líniu pred prídavkom histamínu, ktorá sa berie ako 100 % relaxácie.
PAI koncentrácia pmol/l Percento relaxácie
(R) PI (S) PAI
2 0 11
4 0 15
10 0 30
20 20
30 31 33
40 37 36
100 81 71
200 90
300 92
400 100 98
700 100
1000 100
Výsledky (S)-PAI je neaktívny vzhľadom na (R)-PAI ako MAOB inhibítor v mozgu, a teda nie je užitočný na prevenciu degradácie mozgového dopamínu, aleje aktívnejší než (R) izomér pri spôsobovaní relaxácie intestinálneho hladkého svalstva. Teda (S)-PAI nie je inertnou látkou pri použití s R(PAI), ako sa nachádzajú v racemickej zmesi PAI.
Tabuľka 19
Antagonizmus Betanecholom vyvolaných kontrakcií preparátov bedrovníka morčaťa oboma enantiomérmi PAI HC1
Fixná dávka betanecholu (0,8 pmol/l) spôsobuje trvalú kontrakciu natiahnutého bedrovníka morčaťa upevneného vo fyziologickom roztoku v orgánovom kúpeli. Postupný prídavok oboch z enantiomérov PAI HC1 spôsobuje relaxáciu preparátu v závislosti od dávky. Výsledky sú vyjadrené ako percento relaxácie vzhľadom na základnú líniu pred prídavkom histamínu, ktorá sa berie ako 100 % relaxácie.
PAI koncentrácia jimoll Percento relaxácie
(R) PAI (S)PAI
20 25 40-50
60 25-50 60-70
100 50-70 100
300 100 100
Výsledky (S)-PAI je neaktívny vzhľadom na (R)-PAI ako MAOB inhibítor v mozgu, a teda nie je užitočný na prevenciu degradácie mozgového dopamínu, aleje aktívnejší než (R) izomér pri spôsobovaní relaxácie intestinálneho hladkého svalstva. Teda (S)-PAI nie je inertnou látkou pri použití s R(PAI), ako sa nachádzajú v racemickej zmesi PAI.
Príklad 38
Niektoré účinky [R](+)PAI metánsulfónanu pri oklúzii strednej cerebrálnej artérie pri potkanovi ako modeli mŕtvice
Metódy
1.1. Oklúzia strednej cerebrálnej artérie (MOAC) pri potkanovi
Použila sa modifikácia postupu opísaného Tamura a spol., (1981). Samce potkanov Wistar (Olac EnglandJerusalem) po 300 až 400 g boli anestetizované s roztokom Equitesinu podaným i. p. s dávkou 3 ml/kg. Equitcsín pozostáva z 13,5 ml roztoku pentotalu sodného (60 mg/ml),
3,5 g chloralhydrátu, 1,75 g MgSO4, 33 ml propylénglykolu, 8,3 ml absolútneho alkoholu doplnené do 83 ml s destilovanou vodou. Chirurgický zákrok sa uskutočnil s použitím operačného mikroskopu s veľkým zväčšením, model SMZ-2B, typ 102 (Nikon, Japan). Aby sa ukázala ľavá stredná cerebrálna artéria, urobil sa rez v temporálnom svale. Tiež sa odrezala špička kruhového výbežku čeľuste a odstránila sa pomocou jemných klieští. Zubárskou vŕtačkou sa urobila kraniektómia pri spojení medzi stredovou stenou a stropom spodnej spánkovej jamky. Opatrne sa otvorila tvrdá pléna pomocou ihly kalibru 27. MCA sa trvalo okludovala mikrobipolárnou koaguláciou pri nastavení nízkej sily, začínajúc 2 až 3 mm v strede k olfaktorickému traktu medzi jej kortickú vetvu ku nosovému kortexu a bočné prúžkové artérie.
Po koagulácii bola MCA prerušená s mikronožničkami a rozdelená na zabezpečenie úplnej oklúzie. Potom sa spánkový sval zošil a položil cez miesto kraniektómie. Koža sa uzavrela s priebežnou hodvábnou 3-0 niťou. Na paralelnej skupine potkanov sa vykonala predstieraná operácia kraniocktómie, ale bez kauterizácie MCA. Počas celej chirurgickej operácie (20 až 25 minút) vo všetkých skupinách, sa telesná teplota udržiavala na 37 až 38 °C pomocou regulátora telesnej teploty (Kyoristsu, Japan) pozostávajúceho z samoregulovanej vyhrievacej dosky spojenej s rektálnym tcrmistorom. Po 24 hodinách post chirurgickom zákroku sa vyhodnotilo neurologické skóre na ocenenie miery poškodenia u liečených potkanov vzhľadom na ich neliečenú kontrolnú skupinu. Po 48 hodinách sa zvieratá anestetizovali s Equitesínom a miera poškodenia sa vizualizovala pomocou MRI postupu. Určil sa objem mozgového tkaniva so spôsobenými škodami po ischemii.
1.2. Podávanie liečiva [R](+)PAI metánsulfónan sa podával ako i. p. injekcia v 0,3 až 0,4 ml destilovanej vody, podľa nasledujúceho programu:
mg/kg ihneď po chirurgickom zákroku 0,5 mg/kg 2 hodiny po chirurgickom zákroku 1 mg/kg 20-24 hodín po chirurgickom zákroku
1.3. MRI skenovanie ischemického mozgového poškodenia
Všetky experimenty sa uskutočnili pomocou 4.7T BIOSPEC systému (BRUKER) (Pozri T. Back, a spol., „Diffusion Nuclear Magnetic Resnonance Imaging in Experimental Stroke: Correlation with Cerebral Metabolites,“ Stroke (Február 1994) 25: 494 - 500). Štyridsaťosem hodín po MCAO alebo zdanlivej operácii sa každé zviera podrobilo rýchlemu multivrstvovému TI váženému zobrazeniu (TR/TE), (500/25) na polohovanie. Potom sa získali multivrstvové T2-vážené obrazy (3000/80) (5 priľahlých vrstiev, 3 mm hrubých).
Veľkosť a miera poškodenia infarktového priestoru sa určila na základe hyperintenzity pozorovanej v T2 váženom MRI 48 hodín po oklúzii alebo po zdanlivej operácii. Určili sa nasledujúce parametre MRI na každú skupinu potkanov:
c. Ischemická plocha (v mm2)
d. Plocha ischemickej hemisféry (v mm2)
e. Plocha nezasiahnutej hemisféry (v mm2)
Použitie priľahlých vrstiev umožňuje konverziu jednotiek plochy na jednotky objemu jednoducho násobením plochy hodnotou hrúbky vrstvy.
1.4. Neurologické skóre
Neurologické skóre pozostáva z celkovej sumy série hodnotení priradených účinnosti špecifických lokomotorických aktivít daného potkana. Stupnica ide od 0 (celkom normálne potkany) do 13 (celkom neschopné potkany). Väčšina parametrov sa hodnotila ako buď 0 (normálne) alebo 1 (neschopné); iné boli odstupňované. V tejto štúdii sa použili nasledujúce testy:
Všeobecné pozorovacie testy: hypoaktivita; upokojenie; vstávanie chlpov
Motorický reflex
Potkany sa zdvihli za chvost asi 15 cm nad podložku. Normálne potkany zaujmú postoj, v ktorom natiahnu obe predné labky smerom k podložke a roztiahnu zadné labky na bok lichobežníkovým spôsobom. MCAO, ak je silná, spôsobuje konzistentné ohnutie protiľahlých labiek.
Motorická schopnosť
Toto je vidieť ako schopnosť uchopiť tyč s priemerom 1 cm protiľahlými labkami počas 5 až 15 sekúnd, ak sa potkan nechá visieť na tyči cez podpazušie.
Motorická koordinácia
Normálne potkany sú schopné prejsť hore a dolu trámom 5 cm široký umiestnený s miernym sklonom. Nezdar pri prechode trámu v niektorom smere odhaľuje určitú motorickú nekoordináciu, nedostatok rovnováhy a slabosť labiek.
Chôdza
Schopnosť obnoviť normálnu polohu niektorej zadnej protiľahlej labky, keď sa zámerne vytlačí z miesta na úzkom tráme.
Rovnováha
Schopnosť ovládať rovnováhu na úzkom tráme 2 cm širokom.
Lokomotorická aktivita
Celkový pohyb počas 15 minút v automatickej klietke na vyhodnotenie aktivity.
Hodnotenia priradené každému z uvedených parametrov sú uvedené v tabuľke 20.
Tabuľka 20
Neurologické skóre priradené každému z 10 parametrov postoja a pohybu
Parameter
a. Aktivita vo vlastnej klietke normálna=0
hypoaktivita=l
b. Upokojenie žiadne=0
značné=l
C. Vztýčenie chlpov žiadne=0
značné=l
d. Natiahnutie protiľahlých predných labiek k podložke pri zdvihnutí za chvost dobré=0
ohnuté labky=l
e. Roztiahnutie protiľahlých zadných labiek pri zdvihnutí za chvost (lichobežníkový postoj) dobré=0
ohnuté labky=l
f. Uchopenie tyče protiľahlými labkami počas 5 až 15 sekúnd pri zavesení za podpazušie dobré=0
slabé=l
g· Chodenie po tráme širokom 5 cm dobré-0
slabé=l
h. Obnovenie pôvodnej polohy protiľahlých zadných alebo predných labiek pri zámernom vytlačení z miesta dobré=0
slabé=l (jedna 1.)
=2 (dva L)
Uchopenie a rovnováha na trá- dobré=0
me širokom 2 cm slabé=l
Motorická a aktivita vzhľadom < 25 % kontroly 3
j· na kontrolnú skupinu počas 15 26-50% 2
min v automatizovanej aktivít- 51-75% 1
nej klietke 76- 100% 0
2. Výsledky
2.1. Veľkosť infarktu
Výsledky MRI štúdia sú sumarizované v tabuľke 21 a na obrázku 20. Veľkosť infarktu bola významne menšia pri potkanoch po opracovaní [R](+)PAI metánsulfónanom (n=9) než u neliečených potkanov (n=10). V prvej skupine bola veľkosť infarktu asi 60 % veľkosti neliečených zvierat.
Tabuľka 21
Hodnotenie ischemického poškodenia mozgu pomocou MRI T2-SCAN - 48 hodín po MCA-Oklúzií a liečení [R](±)PAI metánsulfónanom pri potkanoch Wistar.
MCA-O MCA-O +[R] (+) PAI metánsulfónan*
Zviera č. Veľkosť infarktu (mm3) Zviera č. Veľkosť infarktu (mm3)
1 252 1 94,4
2 272 2 139
3 314 3 240
4 273 4 137
5 201 5 137
6 221 6 174
7 358 7 164
8 265 8 171
9 341 9 215
10 236
Priemer+ + SD 273,3 ±50,9 priemer+ + SD 163,5 ±43,9
t = 5,0475 f= 17 p <0,001 [R](+)PAI metánsulfónan znižuje významne veľkosť infarktu o 40 % * [R](+)PAI metánsulfónan podávaný:
Čas po MCA-oklúzii: 0 -1,0 mg/kg ip;
h -0,5 mg/kg ip; 24 h -1,0 mg/kg ip.
2.2. Neurologické skóre
Neurologické skóre pri piatich potkanoch po opracovaní s [R](+)PAI metánsulfónanom a šiestich neliečených potkanov bolo určené „oslepeným“ pozorovateľom. Výsledky sú uvedené v tabuľke 22, kde sú porovnané s veľkosťou infarktu jednotlivých zvierat, ako bola určená testom MRI, a tiež na obrázku 21. Možno vidieť, že tie zvieratá s menším neurologickým skóre sú zvieratá liečené s [R](+)PAI metánsulfónanom. Neurologické skóre sa znížilo o 54 % a veľkosť infarktu o 36 % pri potkanoch liečených s [R](+)PAI metánsulfónanom po MCAO v porovnaní s neliečenými potkanmi.
Tabuľka 22
Neurologické skóre potkanov podrobených MCA-oklúzii a liečeniu s [R](+)PAI metánsulfónanom vo vzťahu k veľkosti ich ischemického infarktu.
MCA-O MCA - O + [R] (+) PAI metánsulfónan***
Zviera č. Neurologické* skóre Veľkosť infarktu (mm3)** Zviera č. Neurologické* skóre Veľkosť infarktu (mm3)**
1 5,0 201 1 1,0 137
2 5,0 221 2 2,0 174
3 6,0 358 3 4,0 164
4 6,0 265 4 4,0 171
5 875 314 5 2,88 215
6 5,75 236
Priemer + + SD 6,0 ± ±1,19 270 ±65 Priemer+ + SD 2,78 ± ±1,3 172 ±28
Neurologické skóre t = 4,25 f=9 p < 0,01 veľkosť infarktu t = 3,34 f=9 p <0,01 [R](+)PAI metánsulfónan znižuje neurologické skóre o 53,7 % a veľkosť infarktu o 36,3 %.
* Skúšané 24 hodín po MCA-oklúzii.
** Hodnotené pomocou MRI T2-SCAN 48 hodín po MCA-oklúzii.
* * * R](+)PAI metánsulfónan podávaný:
Čas po MCA-oklúzii:
-1,0 mg/kg ip;
h -0,5 mg/kg ip;
h -1,0 mg/kg ip.
Odkazy pre príklad 38
Cechetto DF, Wilson JX, Smith KE, Wolski D, Silver MD, Hachinski VC (1989). Autonómie and myocardial changes in middle cerebral artery occlusion: stroke models in the rat. Brain Res 502:296 až 305.
Kôlb B, Sutherland RJ, Whishaw IQ (1983). A comparison of the contributions of the fŕontal and parietal association cortex to spatial localizations in the rat. Behav. Neurosci. 97:13 až 27.
Menzies SA, Hoff JT, Betz AL (1992). Middle cerebral artery occlusion in rats: A neurological and pathological evaluation of a reproducible model. Neurosurgery 31:100 až 106.
Sauer D, Allegrini PR, Cosenti A, Pataki A, Amaceker H, Fagg GE (1993). Characterization of the cerebroprotective efficacy of the competitive NMDA receptor antagonist CGP4O116 in a rat model of focal cerebral ischemia: An in vivo magnetic resonance imaging study. J. Cerebr. Blood Flow and Metabol. 13:595 až 602.
Stefanovich C, Editor, Stroke: Animal Models, Pergamon Press, 1983
Tamura A, Graham Dl, Maculloch J„ Teasdale GH (1981). Focal cerebral ischemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following MCA occlusion. J. Cereb. Blood Flow and Metab. 1:53 až 60.
Teasdale G, Tyson G, Tamura A, Graham Dl, McCulloch J. Focal cerebral ischaemia in the rat: Neuropatholgy, local cerebral blood flow and cerebrovascular permeability.
In stroke: Animal Models, Stephanovic C, Editor, Pergamon Press 1983, pp. 83 až 97.
Yamamoto M, Tamura A, Kirino T, Shimitzu M, Sano K (1988). Behavioral changes after focal cerebral ischemia by left middle cerebral artery occlusion in rats. Brain Re. 452:323 až 328
Yamori Y a spol. (1976). Pathogenic similarity of strokes in stroke prone spontaneously hypertensive rats and humans. Stroke 7:46 až 53.
Young W, DeCrescito V, Flamm ES, Hadani M, Rappaport H, Čomu P (1986). Tissue Na, K, and Ca changes in regional cerebral ischemia: Their measurement and interpretation. Centrál Nervous Systém Trauma, 3:215 až 234.

Claims (10)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Použitie účinného množstva R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli na výrobu farmaceutického prostriedku na liečenie mŕtvice pri subjekte.
  2. 2. Použitie podľa nároku 1, kde farmaceutický prostriedok obsahuje farmaceutický prijateľnú soľ R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu vybranú zo skupiny pozostávajúcej z metánsulfónanovej soli, etánsulfónanovej soli, sulfátovej soli a hydrochloridovej soli.
  3. 3. Použitie podľa nároku 2, kde farmaceutický prijateľná soľ R(+)-N-propargyl-l-aminoindánu je metánsulfónanová soľ.
  4. 4. Použitie podľa nároku 1, kde R(+)-N-propargyl-l-aminoindán je pripravená vo forme na intravenózne, orálne, rektálne, transdermálne alebo parenterálne podanie.
  5. 5. Použitie podľa nároku 1, kde R(+)-N-propargyl-l-aminoindán alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ je vo forme na orálne podanie.
  6. 6. Použitie podľa nároku 1, kde subjektom je človek a účinné množstvo je od 0,1 do 100,0 mg.
  7. 7. Použitie podľa nároku 1, kde účinné množstvo je od 0,1 do 10,0 mg.
  8. 8. Použitie podľa nároku 1, kde farmaceutický prostriedok ďalej obsahuje farmaceutický prijateľný nosič, ktorý je tuhého skupenstva, keď farmaceutický prípravok je vo forme tablety; farmaceutický prijateľný nosič je kvapalná látka, keď farmaceutický prípravok je vo forme injekčného roztoku; alebo farmaceutický prijateľný nosič je gél, keď farmaceutický prípravok je vo forme čapíku.
  9. 9. Použitie podľa nároku 8, kde farmaceutický prostriedok obsahuje farmaceutický prijateľnú soľ R(+)-N-propargyl-1-aminoindánu a a) je vo forme tablety, obsah soli v tablete je od 0.1 do 100 mg, alebo b) je vo forme injekčného roztoku, obsah soli v injekčnom roztoku je od 0,1 do 100 mg/ml.
  10. 10. Použitie podľa nároku 9, kde farmaceutický prostriedok obsahuje farmaceutický prijateľnú soľ R(+)-N-propargyl-1-aminoindánu a a) je vo forme tablety, obsah soli v tablete je od 1 do 10 mg, alebo b) je vo forme injekčného roztoku, obsah soli v injekčnom roztoku je od 1 do 10 mg/ml.
SK1574-97A 1995-05-22 1996-05-22 Použitie R(+)-N-propargyl-1-aminoindánu SK283675B6 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/446,439 US5744500A (en) 1990-01-03 1995-05-22 Use of R-enantiomer of N-propargyl-1-aminoindan, salts, and compositions thereof
PCT/US1996/007465 WO1996037199A1 (en) 1995-05-22 1996-05-22 Use of r-enantiomer of n-propargyl-1-aminoindan, salts, and compositions thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK157497A3 SK157497A3 (en) 1998-05-06
SK283675B6 true SK283675B6 (sk) 2003-11-04

Family

ID=23772591

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1574-97A SK283675B6 (sk) 1995-05-22 1996-05-22 Použitie R(+)-N-propargyl-1-aminoindánu

Country Status (22)

Country Link
US (6) US5744500A (sk)
EP (1) EP0828485A4 (sk)
JP (1) JP3341898B2 (sk)
KR (1) KR100412154B1 (sk)
CN (1) CN1096853C (sk)
AU (1) AU699090B2 (sk)
BR (1) BR9608733A (sk)
CA (1) CA2221458A1 (sk)
CZ (1) CZ288724B6 (sk)
EE (1) EE03741B1 (sk)
HK (1) HK1015269A1 (sk)
HU (1) HUP9901629A3 (sk)
IL (1) IL118247A (sk)
LT (1) LT4455B (sk)
LV (1) LV12083B (sk)
MX (1) MX9708977A (sk)
NO (1) NO975331L (sk)
NZ (1) NZ308866A (sk)
PL (1) PL184124B1 (sk)
RU (1) RU2203653C2 (sk)
SK (1) SK283675B6 (sk)
WO (1) WO1996037199A1 (sk)

Families Citing this family (83)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5744500A (en) * 1990-01-03 1998-04-28 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Use of R-enantiomer of N-propargyl-1-aminoindan, salts, and compositions thereof
US5877218A (en) * 1994-01-10 1999-03-02 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Compositions containing and methods of using 1-aminoindan and derivatives thereof and process for preparing optically active 1-aminoindan derivatives
US5726969A (en) * 1994-12-28 1998-03-10 Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. Optical recording medium having dual information surfaces
IL118836A (en) 1996-07-11 2001-01-11 Teva Pharma Pharmaceutical compositions comprising s-(-)-n-propargyl-1-aminoindan
US7129061B1 (en) * 1996-08-07 2006-10-31 Biogen Idec Ma Inc. Tumor necrosis factor related ligand
GB9715082D0 (en) * 1997-07-17 1997-09-24 Scherer Ltd R P Treatment of attention deficit hyperactivity disorder and narcolepsy
US6232326B1 (en) 1998-07-14 2001-05-15 Jodi A. Nelson Treatment for schizophrenia and other dopamine system dysfunctions
CA2387394C (en) 1999-10-27 2009-08-18 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Use of 1-aminoindan derivatives for treatment of mania in bipolar mood disorder
DK1441708T3 (da) 2001-11-05 2009-07-06 Krele Pharmaceuticals Llc Sammensætninger og fremgangsmåder til forögelse af föjelighed med terapier ved anvendelse af aldehyddehydrogenase-inhibitorer og behandling af alkoholisme
US20040010038A1 (en) * 2002-02-27 2004-01-15 Eran Blaugrund Propargylamino indan derivatives and propargylamino tetralin derivatives as brain-selective MAO inhibitors
WO2004041151A2 (en) * 2002-11-07 2004-05-21 Technion Research And Development Foundation Ltd. Neuroprotective iron chelators and pharmaceutical compositions comprising them
EP2526944B1 (en) 2002-11-15 2016-06-01 Teva Pharmaceutical Industries Limited Use of rasagiline with or without riluzole to treat amyotrophic lateral sclerosis
US20040176430A1 (en) * 2002-11-21 2004-09-09 Jeffrey Sterling Propargyl-trifluoromethoxy-amino-benzothiazole derivatives
CN1605336A (zh) 2003-10-10 2005-04-13 中国医学科学院药物研究所 左旋丁基苯酞在制备预防和治疗脑梗塞的药物中的应用
US8097608B2 (en) * 2003-11-25 2012-01-17 Technion Research And Development Foundation Ltd. Methods for treatment of cardiovascular disorders and diseases
CA2547053C (en) 2003-11-25 2014-05-27 Technion Research & Development Foundation Ltd. Compositions and methods for treatment of cardiovascular disorders and diseases
JP2005232148A (ja) * 2004-02-03 2005-09-02 Technion Research & Development Foundation Ltd 神経保護剤としてプロパルギルアミンの使用
US20050197365A1 (en) * 2004-02-27 2005-09-08 Jeffrey Sterling Diamino thiazoloindan derivatives and their use
CA2574925A1 (en) * 2004-07-26 2006-02-09 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Pharmaceutical dosage forms including rasagiline
US20060025446A1 (en) * 2004-07-27 2006-02-02 Jeffrey Sterling Propargyl nitroxides and indanyl nitroxides and their use for the treatment of neurologic diseases and disorders
WO2006014968A2 (en) * 2004-07-27 2006-02-09 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Propargyl nitroxydes and indanyl nitroxides and their use for the treatment of neurologic diseases and disorders
DK2332408T3 (da) 2005-02-17 2013-12-02 Biogen Idec Inc Behandling af neurologiske sygdomme
WO2006089164A1 (en) * 2005-02-17 2006-08-24 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Combination therapy with glatiramer acetate and rasagiline for the treatment of multiple sclerosis
US20100167983A1 (en) * 2007-10-22 2010-07-01 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Combination therapy with glatiramer acetate and rasagiline for the treatment of multiple sclerosis
RU2404746C2 (ru) 2005-02-23 2010-11-27 Тева Фармасьютикал Индастриз, Лтд. Композиции разагилина с улучшенной однородностью содержимого
US8022104B2 (en) * 2005-02-24 2011-09-20 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Formulations of ladostigil tartrate
WO2006122187A2 (en) 2005-05-10 2006-11-16 Biogen Idec Ma Inc. Treating and evaluating inflammatory disorders
EP1888056A4 (en) * 2005-06-01 2008-09-03 Teva Pharma USE OF LADOSTIGIL FOR TREATING MULTIPLE SCLEROSIS
FR2886549B1 (fr) * 2005-06-06 2007-09-07 Biocodex Composition pharmaceutique destinee a la prevention ou au traitement des oedemes cerebraux
US8263655B2 (en) * 2005-10-06 2012-09-11 Technion Research And Development Foundation Ltd Methods for treatment of renal failure
US7491847B2 (en) * 2005-11-17 2009-02-17 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Methods for isolating propargylated aminoindans
US7572834B1 (en) 2005-12-06 2009-08-11 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Rasagiline formulations and processes for their preparation
US20070135518A1 (en) * 2005-12-09 2007-06-14 Marta Weinstock-Rosin Use of low-dose ladostigil for neuroprotection
JP2009518433A (ja) * 2005-12-09 2009-05-07 イッサム リサーチ ディベロップメント カンパニー オブ ザ ヘブライ ユニバーシティー オブ エルサレム 神経保護用の低用量ラドスチギルの使用
US20110047685A1 (en) * 2006-02-16 2011-03-03 Ferrara Vincent R Impact energy management method and system
US8809310B2 (en) 2006-02-21 2014-08-19 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Use of rasagiline for the treatment of multiple system atrophy
TW200744576A (en) * 2006-02-24 2007-12-16 Teva Pharma Propargylated aminoindans, processes for preparation, and uses thereof
AU2007235517B2 (en) * 2006-04-03 2013-01-31 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Use of rasagiline for the treatment of Restless Legs Syndrome
CN101062897B (zh) * 2006-04-25 2011-11-23 重庆医药工业研究院有限责任公司 一种制备2，3-二氢-1h-茚-1-胺及其衍生物的改进方法
EP1892233A1 (de) * 2006-08-18 2008-02-27 Ratiopharm GmbH Neue Salze des Wirkstoffs Rasagilin
CA2672414A1 (en) * 2006-12-14 2008-06-26 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Crystalline solid rasagiline base
BRPI0718339A2 (pt) * 2006-12-14 2014-02-18 Teva Pharma Composto, composição, composição farmacêutica e processo de fabricação de tanato de rasagilina
EP1987816A1 (de) * 2007-04-30 2008-11-05 Ratiopharm GmbH Adsorbate eines Rasagilinsalzes mit einem wasserlöslichen Hilfsstoff
CA2698695A1 (en) * 2007-09-05 2009-03-12 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Method of treating glaucoma using rasagiline
US8188149B2 (en) * 2007-09-17 2012-05-29 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Use of R(+)-N-propargy1-1-aminoindan to treat or prevent hearing loss
CN101909438A (zh) * 2008-01-11 2010-12-08 泰华制药工业有限公司 雷沙吉兰制剂、其制备及用途
US20110105788A1 (en) * 2008-03-28 2011-05-05 Medichem, S.A. Polymorphic Form of an Aminoindan Mesylate Derivative
PL2285769T3 (pl) * 2008-06-02 2015-01-30 Generics Uk Ltd Sposób otrzymywania enancjomerycznie czystych amin
US20110184071A1 (en) * 2008-06-02 2011-07-28 Vinayak Gore process for the preparation of amines
ES2389353T3 (es) * 2008-06-10 2012-10-25 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Cápsulas de gelatina blanda de rasagilina
NZ589445A (en) * 2008-06-13 2013-06-28 Teva Pharma Rasagiline for parkinson's disease modification
US8334409B2 (en) * 2008-06-19 2012-12-18 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Process for purifying rasagiline base
WO2009154777A2 (en) * 2008-06-19 2009-12-23 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Process for preparing and drying solid rasagiline base
EA201170181A1 (ru) 2008-07-11 2011-08-30 Синтон Бв Полиморфные формы разагилина гидрохлорида
WO2010013048A1 (en) * 2008-07-30 2010-02-04 Generics [Uk] Limited Polymorphic form of rasagiline mesylate
EP2218444A3 (en) 2009-01-23 2010-08-25 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Delayed release rasagiline formulation
US20100189791A1 (en) * 2009-01-23 2010-07-29 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Delayed release rasagiline malate formulation
EP2417101B1 (en) * 2009-04-09 2013-10-23 Merck Sharp & Dohme B.V. Indane derivatives
JP2012532843A (ja) 2009-07-09 2012-12-20 ラティオファーム ゲーエムベーハー ラサギリンの塩およびその製剤
CN102048717B (zh) † 2009-10-29 2014-02-19 重庆医药工业研究院有限责任公司 一种稳定的雷沙吉兰组合物
EP2325159A1 (en) 2009-11-24 2011-05-25 LEK Pharmaceuticals d.d. Novel salts of rasagiline
US8741962B2 (en) * 2009-11-26 2014-06-03 Usv Limited Process for preparation of Rasagiline and salts thereof
EP2515891A4 (en) * 2009-12-22 2013-06-05 Teva Pharma 3-keto-N-propargyl-1-aminoindan
JP6045347B2 (ja) 2010-02-03 2016-12-14 ファーマ ツー ビー リミテッド ラサギリンの持続放出性製剤およびその使用
EP2563347B1 (en) 2010-04-30 2016-10-12 Teikoku Pharma USA, Inc. Propynylaminoindan transdermal compositions
JP2013533287A (ja) 2010-07-27 2013-08-22 テバ ファーマシューティカル インダストリーズ リミティド 嗅覚機能不全の処置のためのラサギリンの使用
WO2012015946A1 (en) 2010-07-27 2012-02-02 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Dispersion of rasagiline citrate
CA2809966C (en) 2010-09-01 2019-01-08 Tonix Pharmaceuticals, Inc. Treatment for cocaine addiction
KR20140023872A (ko) 2010-10-26 2014-02-27 테바 파마슈티컬 인더스트리즈 리미티드 중수소 농축 라사길린
WO2012125020A1 (en) * 2011-03-14 2012-09-20 N.V. Nutricia Method for treating neurotrauma
CN103476404B (zh) 2011-03-24 2017-09-29 帝国制药美国公司 包含活性剂层和活性剂转化层的透皮组合物
JP2014534197A (ja) 2011-10-10 2014-12-18 テバ ファーマシューティカル インダストリーズ リミティド Ｒ（＋）−ｎ−メチル−プロパルギルアミノインダン
MX2014004308A (es) 2011-10-10 2014-07-24 Teva Pharma R(+)-n-formil-propargil-aminoindan.
WO2013070526A1 (en) 2011-11-09 2013-05-16 Teikoku Pharma Usa, Inc. Methods for the treatment of skin neoplasms
EP2827848B1 (en) 2012-03-21 2016-04-27 Synthon BV Stabilized pharmaceutical compositions comprising rasagiline salts
WO2013175493A1 (en) 2012-04-09 2013-11-28 Cadila Healthcare Limited Stable oral pharmaceutical compositions
AR092168A1 (es) 2012-08-17 2015-03-25 Teva Pharma Formulaciones parenterales de rasagilina
SG11201502681WA (en) 2012-11-02 2015-05-28 Teikoku Pharma Usa Inc Propynylaminoindan transdermal compositions
ES2524865T1 (es) * 2013-02-06 2014-12-15 Galenicum Health S.L. Composiciones farmacéuticas estables en forma de comprimidos de liberación inmediata
ES2502140T1 (es) * 2013-02-06 2014-10-02 Galenicum Health S.L. Comprimidos de liberación inmediata de rasagilina hemitartrato
WO2014141280A1 (en) * 2013-03-13 2014-09-18 Abital Pharma Pipelines Ltd. Methods, compositions and devices for treatment of motor and depression symptoms associated with parkinson's disease
CN103804200B (zh) * 2014-02-21 2015-04-29 常州市第四制药厂有限公司 雷沙吉兰及其类似物的制备方法
US11701340B2 (en) * 2019-04-17 2023-07-18 Vici Health Sciences., Llc Liquid pharmaceutical compositions

Family Cites Families (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3201470A (en) * 1965-08-17 Chsx c cech
US513244A (en) * 1894-01-23 Island
US3253037A (en) * 1962-06-19 1966-05-24 Ciba Geigy Corp N-2-alkynyl-amino-benzocylo-alkanes
GB1187017A (en) * 1966-07-16 1970-04-08 Aspro Nicholas Ltd Substituted 1-Amino Indanes and Tetrahydronaphthalens
GB1037014A (en) 1963-08-02 1966-07-20 Aspro Nicholas Ltd Derivatives of 1-aminoindane
US3513249A (en) * 1968-12-24 1970-05-19 Ideal Ind Explosion connector with improved insulating means
GB1548022A (en) 1976-10-06 1979-07-04 Wyeth John & Brother Ltd Pharmaceutial dosage forms
DE3779500T2 (de) 1986-06-10 1993-01-21 Chiesi Farma Spa Levodopa-methyl-ester enthaltende pharmazeutische zusammensetzungen, ihre herstellung und therapeutische verwendungen.
EP0258096B1 (fr) 1986-08-21 1992-09-09 Roussel-Uclaf Dérivés de l'indane, leur procédé de préparation, leur application à titre de médicaments, les compositions pharmaceutiques les renfermant et les intermédiaires obtenus
HU197510B (en) 1986-12-19 1989-04-28 Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet Process for producing pharmaceutical composition containing phenyl-alkyl-amine derivatives, against motion-sick
US4855326A (en) * 1987-04-20 1989-08-08 Fuisz Pharmaceutical Ltd. Rapidly dissoluble medicinal dosage unit and method of manufacture
CA1327795C (en) 1987-08-14 1994-03-15 Jules Freedman Antidepressants which are aryloxy inadanamines
FR2626877B1 (fr) 1988-02-05 1991-04-05 Delalande Sa Ethers alkyliques ou benzyliques du phenol, leurs procedes de preparation et leur application en therapeutique
HU208484B (en) 1988-08-17 1993-11-29 Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet Process for producing pharmaceutical composition containing acid additional salt of selegilin as active component for treating schisofrenia
GB8909793D0 (en) 1989-04-28 1989-06-14 Beecham Group Plc Pharmaceutical formulation
US5079018A (en) * 1989-08-14 1992-01-07 Neophore Technologies, Inc. Freeze dry composition and method for oral administration of drugs, biologicals, nutrients and foodstuffs
JPH04504760A (ja) 1989-09-25 1992-08-20 アメリカ合衆国 炎症性反応の検出およびストレスに対する応答の予測をするための評価方法
JP3412694B2 (ja) 1989-10-02 2003-06-03 シーマ・ラブス、インコーポレイテッド 発泡性投与剤
FR2655044B1 (fr) 1989-11-24 1995-03-03 Delalande Sa Derives d'(hetero) arylmethyloxy-4 phenyl tetrazole et oxadiazole, leur procede de preparation et leur application en therapeutique.
JPH03176457A (ja) 1989-12-04 1991-07-31 Nippon Paint Co Ltd 新規プロパルギル化合物、その製法ならびに該化合物を含む被覆材
IL92952A (en) 1990-01-03 1994-06-24 Teva Pharma R-enantiomers of n-propargyl-1-aminoindan compounds, their preparation and pharmaceutical compositions containing them
US5744500A (en) * 1990-01-03 1998-04-28 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Use of R-enantiomer of N-propargyl-1-aminoindan, salts, and compositions thereof
CA2039742A1 (en) 1990-04-23 1991-10-24 Andrew B. Dennis Tablet composition and method for problem pharmaceutical materials
US5169868A (en) 1991-03-01 1992-12-08 University Of Saskatchewan Aliphatic propargylamines as specific mao-b inhibitors
US5767164A (en) * 1991-04-04 1998-06-16 Innovations Foundation Use of deprenyl to rescue damaged nerve cells
US5444095A (en) * 1991-04-04 1995-08-22 University Of Toronto, Innovations Foundation Use of deprenyl to rescue damaged nerve cells
US5844003A (en) * 1991-04-04 1998-12-01 Innovations Foundation Use of deprenyl compounds to maintain, prevent loss, or recover nerve cell function
IL112819A (en) 1991-10-16 2001-11-25 Teva Pharma Fluorinated 1-aminoindan compounds and a process for their preparation
NZ246091A (en) * 1991-12-24 1995-08-28 Yamanouchi Pharma Co Ltd Intrabuccally disintegrating preparation containing an active ingredient, agar, and lactose and/or mannitol
US5298261A (en) * 1992-04-20 1994-03-29 Oregon Freeze Dry, Inc. Rapidly distintegrating tablet
AU4534593A (en) 1992-06-12 1994-01-04 Affymax Technologies N.V. Compositions and methods for enhanced drug delivery
SE501848C2 (sv) 1992-11-18 1995-06-06 Kvaerner Pulping Tech Metod att koka massa kontinuerligt vid konstant temperatur
IL111240A (en) 1993-10-18 2001-10-31 Teva Pharma Salts of r(+) - enantiomers of n- propargyl-1-aminoindan and pharmaceutical compositions comprising them
IL112779A (en) 1994-03-01 1999-11-30 Gergely Gerhard Granular product or tablet containing an efferescent system and an active pharmaceutical substance and its preparation
EE04039B1 (et) 1995-03-02 2003-06-16 R.P. Scherer Limited Farmatseutiline kompositsioon peroraalseks manustamiseks, selle valmistamismeetod ja kasutamine
IL115357A (en) 1995-09-20 2000-01-31 Teva Pharma Stable compositions containing N-propargyl-1-aminoindan and polyhydric alcohols
IL118836A (en) * 1996-07-11 2001-01-11 Teva Pharma Pharmaceutical compositions comprising s-(-)-n-propargyl-1-aminoindan
WO1999037293A2 (en) * 1998-01-27 1999-07-29 Thomas Thomas N Use of an mao-a or mao-b inhibitor for the treatment of vascular disorders
FI104042B (fi) * 1998-09-29 1999-11-15 Aaro Kiuru Menetelmä keuhkojen perfuusion mittaamiseksi
US6248363B1 (en) * 1999-11-23 2001-06-19 Lipocine, Inc. Solid carriers for improved delivery of active ingredients in pharmaceutical compositions
US20030180352A1 (en) * 1999-11-23 2003-09-25 Patel Mahesh V. Solid carriers for improved delivery of active ingredients in pharmaceutical compositions
PL370793A1 (en) * 2001-07-04 2005-05-30 Sun Pharmaceutical Industries Limited Gastric retention controlled drug delivery system
US20040010038A1 (en) * 2002-02-27 2004-01-15 Eran Blaugrund Propargylamino indan derivatives and propargylamino tetralin derivatives as brain-selective MAO inhibitors
US20040166159A1 (en) * 2002-05-29 2004-08-26 Chien-Hsuan Han Pharmaceutical dosage forms having immediate and controlled release properties that contain an aromatic amino acid decarboxylase inhibitor and levodopa
US20060009483A1 (en) * 2002-05-31 2006-01-12 Bayer Pharmaceuticals Corporation Compounds and compositions for the treatment of diabetes and diabetes-related disorders
WO2004026453A2 (en) * 2002-09-06 2004-04-01 Genteric, Inc. Microcapsules and methods of use
EP2526944B1 (en) * 2002-11-15 2016-06-01 Teva Pharmaceutical Industries Limited Use of rasagiline with or without riluzole to treat amyotrophic lateral sclerosis
US20050026979A1 (en) * 2003-07-31 2005-02-03 Maha Ghazzi Methods for treating inflammation and inflammation-associated diseases with a statin and ether
RU2404746C2 (ru) * 2005-02-23 2010-11-27 Тева Фармасьютикал Индастриз, Лтд. Композиции разагилина с улучшенной однородностью содержимого

Also Published As

Publication number Publication date
CN1191481A (zh) 1998-08-26
EP0828485A4 (en) 1998-12-02
CA2221458A1 (en) 1996-11-28
IL118247A0 (en) 1996-09-12
CZ369997A3 (cs) 1999-06-16
US6956060B2 (en) 2005-10-18
US20030065038A1 (en) 2003-04-03
WO1996037199A1 (en) 1996-11-28
NO975331D0 (no) 1997-11-20
EE9700310A (et) 1998-06-15
HUP9901629A3 (en) 2000-03-28
WO1996037199A8 (en) 1999-08-12
NO975331L (no) 1998-01-20
PL323470A1 (en) 1998-03-30
EP0828485A1 (en) 1998-03-18
US6316504B1 (en) 2001-11-13
SK157497A3 (en) 1998-05-06
EE03741B1 (et) 2002-06-17
KR19990021896A (ko) 1999-03-25
IL118247A (en) 2002-07-25
RU2203653C2 (ru) 2003-05-10
PL184124B1 (pl) 2002-09-30
US20060094783A1 (en) 2006-05-04
KR100412154B1 (ko) 2004-07-05
US6630514B2 (en) 2003-10-07
CN1096853C (zh) 2002-12-25
JP2000508292A (ja) 2000-07-04
US20070100001A1 (en) 2007-05-03
NZ308866A (en) 1999-09-29
CZ288724B6 (cs) 2001-08-15
AU5872396A (en) 1996-12-11
BR9608733A (pt) 1999-12-07
US20030212145A1 (en) 2003-11-13
LT4455B (lt) 1999-01-25
AU699090B2 (en) 1998-11-19
LV12083A (lv) 1998-07-20
JP3341898B2 (ja) 2002-11-05
US5744500A (en) 1998-04-28
LV12083B (en) 1998-09-20
MX9708977A (es) 1998-03-31
LT97200A (en) 1998-09-25
HUP9901629A2 (hu) 2000-02-28
HK1015269A1 (en) 1999-10-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5744500A (en) Use of R-enantiomer of N-propargyl-1-aminoindan, salts, and compositions thereof
CA2174449C (en) R-enantiomer of n-propargyl-1-aminoindan, salts, compositions and uses thereof
US5519061A (en) R-enantiomer of n-propargyl-1-aminoindan, salts, compositions and uses thereof
US6277886B1 (en) Pharmaceutical compositions comprising S-(−)-N-propargyl-1-aminoindan
JPH09510188A (ja) １−アミノインダン及びこれらの組成物
JPH11506469A (ja) 神経障害の治療に有用な受容体作動性カルシウムチャネル上の新規部位で活性な化合物