CZ369997A3 - Použití R-enantiomeru N-propargyl-1-aminoindanu - Google Patents

Použití R-enantiomeru N-propargyl-1-aminoindanu Download PDF

Info

Publication number
CZ369997A3
CZ369997A3 CZ973699A CZ369997A CZ369997A3 CZ 369997 A3 CZ369997 A3 CZ 369997A3 CZ 973699 A CZ973699 A CZ 973699A CZ 369997 A CZ369997 A CZ 369997A CZ 369997 A3 CZ369997 A3 CZ 369997A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
propargyl
aminoindan
pai
pharmaceutically acceptable
acceptable salt
Prior art date
Application number
CZ973699A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ288724B6 (cs
Inventor
Moussa B. H. Youdim
John P. M. Finberg
Ruth Levy
Jeffrey Sterling
David Lerner
Haim Yellin
Alex Veinberd
Original Assignee
Teva Pharmaceutical Industries, Inc.
Technion Research And Development Foundation Ltd.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=23772591&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ369997(A3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Teva Pharmaceutical Industries, Inc., Technion Research And Development Foundation Ltd. filed Critical Teva Pharmaceutical Industries, Inc.
Publication of CZ369997A3 publication Critical patent/CZ369997A3/cs
Publication of CZ288724B6 publication Critical patent/CZ288724B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C211/00—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton
    • C07C211/33—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings
    • C07C211/39—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of an unsaturated carbon skeleton
    • C07C211/41—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of an unsaturated carbon skeleton containing condensed ring systems
    • C07C211/42—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings of an unsaturated carbon skeleton containing condensed ring systems with six-membered aromatic rings being part of the condensed ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/205—Amine addition salts of organic acids; Inner quaternary ammonium salts, e.g. betaine, carnitine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/20—Hypnotics; Sedatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C211/00—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton
    • C07C211/01—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C211/26—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing at least one six-membered aromatic ring
    • C07C211/30—Compounds containing amino groups bound to a carbon skeleton having amino groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton containing at least one six-membered aromatic ring the six-membered aromatic ring being part of a condensed ring system formed by two rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2602/00—Systems containing two condensed rings
    • C07C2602/02—Systems containing two condensed rings the rings having only two atoms in common
    • C07C2602/04—One of the condensed rings being a six-membered aromatic ring
    • C07C2602/08—One of the condensed rings being a six-membered aromatic ring the other ring being five-membered, e.g. indane

Description

Oblast techniky
Vynález se inhibitorů enzymu,
MAO) , a konkrétně týká oblasti selektivních nevratných známého jako monoaminoxidáza (dále jen se týká R(+) enantiomeru N-propargyl-laminoindanu (zde rovněž označovaného jako PAI), nevratným (dále jen kompozic který je inhibitorem B-formy monoaminoxidázového enzymu MAO-B). Vynález se rovněž týká farmaceutických které jsou použitelné obsahujících R( + )PAI, zejména při léčení Parkinsonovy demence, choroby, poruch paměti, syndromu, afekce, neurodeprese, hyperaktivního degenerativních chorob, neurotoxických poranění, mrtvice, mozkové ischemie, traumatického poranění hlavy, traumatického poranění míchy, neurotraumatu, schizofrenie, poruchy pozornosti, sklerózy multiplex a abstinenčních příznaků.
Dosavadní stav techniky
Parkinsonova choroba je obecně' považována za následek degradace pre-synaptických dopaminergických neuronů v mozku s následným snížením uvolňovaného množství neurotransmiterového dopaminu. Neodpovídající uvolnění dopaminu tedy způsobuje poruchy kontroly svalů ovladatelné vůlí, které jsou příznačné pro Parkinsonovu chorobu.
01-2762-97 Če 2 «· * 9 9 9 • 9»99 * · ··* * . _ · · · •: : : · ··: .........
V současnosti již existuje celá řada způsobů léčení
Parkinsonovy choroby jejichž použití je rozšířené,
například včetně podávání L-DOPA společně s
dekarboxylázovým inhibitorem, například L-carbidopou nebo benserazidem. Dekarboxylázový inhibitor chrání molekulu L-DOPA před periferní dekarboxylací a tak zajišťuje, že L-DOPA je spotřebován zbývajícími dopaminergickými neurony ve striatiu mozku. L-DOPA se konvertuje na dopamin, v důsledku čehož dojde ke zvýšeni hladin dopaminu v těchto neuronech. V odezvě na fyziologické impulzy jsou tyto neurony schopny uvolňovat větší množství dopaminu při koncentracích, které odpovídají normálně potřebným hladinám. L-DOPA léčení tedy zmírňuje příznaky nemoci a přispívá ke zlepšení stavu pacienta.
Nicméně- L-DOPA léčení má své nedostatky. Hlavním nedostatkem je to, že jeho účinnost je optimální pouze během prvních několika let léčení. Po tomto období se klinická odezva snižuje a je doprovázena nežádoucími vedlejšími účinky, mezi které patří například dyskineze, fluktuace účinnosti v průběhu dne („on-off efekt) a psychiatrické příznaky, například konfúzní stavy, paranoia a halucinace. Toto snížení účinku L-DOPA léčení je připisováno— ce“ié—řadě ' faktorů · včetně—přirozené· ‘progrese------nemoci, alterace dopaminových receptorů v důsledku dopaminové produkce nebo zvýšení hladin dopaminových metabolitů, a farmakokinetických problémů s L-DOPA absorpcí (přehled Youdim a kol., Progress in Medicinal Chemistry, 21, 138-167(1984)).
Pro překonání nedostatků L-DOPA léčení byla navržena celá řada léčení, u kterých se- L-DOPA kombinuje s MAO inhibitory, které pomáhají redukovat metabolický zlom nově
01-2762-97 Če vytvořeného dopaminu (viz například Chiese, P., patent
US 4,826,875, udělený 2. května 1989).
MAO existuje ve dvou formách známých jako MAO-A a
MAO-B, které jsou selektivní pro různé substráty a inhibitory. Například MAO-B účinněji metabolizuje substráty, jakým je například 2-fenylethylamin, a je selektivně a nevratně inhibován (-)-deprenylem, který bude popsán niže.
Nicméně je třeba uvést, že léčení kombinující L-DOPA s inhibitorem jak MAO-A tak MAO-B je nežádoucí, protože způsobuje nežádoucí vedlejší účinky, týkající se zvýšené hladiny katecholaminů v průběhu neuraxie. Kromě toho je rovněž nežádoucí kompletní inhibice MAO,, protože zesiluje účinek sympatomimetických aminů, například tyraminu, což vede k tak zvanému „sýrovému efektu (přehled Youdim a kol., Handbook of Experimental Pharmacology, vyd. Trendelenburg a Weiner, Springer-Verlag, 90, kap. 3 (1988)). Jak se ukázalo, MAO-B představuje převládající formu MAO v mozku. Dá se tedy předpokládat, že selektivní inhibitory pro tuto formu budou představovat možné nástroje pro snižovaní dopaminového rozkladu na jedné straně a na druhé straně prostředek pro minimalizaci systemických ŮČihku~čéTkové ‘'MAO“ihhib'ice; .
Mnohé inhibitory MAO představují chirální molekuly. I když jeden enantiomer často vykazuje, pokud jde o relativní potenci vůči MAO-A a MAO-B, určitou stereoselektivitu, není daná enantiomerní konfigurace, pokud jde o diskriminaci mezi MAO-A a MAO-B, vždy selektivnější než jeho zrcadlově převrácený isomer.
01-2762-97 Če
Tabulka I uvádí IC50 (mmol/1) enantiomerních párů propargylaminů při preparaci MAO v mozku krysy. Tyto výsledky ukazují na malé rozdíly v potenci při MAO-B inhibici mezi R a S enantiomery. (B. Hazelhoff a kol., Naunyn-Schmeideberg's Arch. Pharmacol., 330, 50 (1985). Oba enantiomery jsou selektivní pro MAO-B. Ve zprávě, kterou zveřejnil Magyar a kol. (1967), se uvádí, že R-(-)-deprenyl je SOOkrát účinnější než S-(+) enantiomer, pokud, jde o inhibici oxidační deaminace tyraminu homogenátem mozku krysy. (K. Magyar a kol., Act. Physiol. Acad. Sci., Hung., 32, 377 (1967)).
V homogenitu krysích jater je R-deprenyl pouze patnáctkrát účinnější než 8 enantiomer. Výsledky dalších testů farmakologické aktivity, například testu určujícího inhibici tyraminové spotřeby, ukázaly diferenční stereoselektivitu. S forma je v určitých případech účinnějším epimerem. (J. Knoll a K. Magyar, Advances in Biochemical Psychopharmacology, 5, 393 (1972)).
N-methyl-N-propargyl-l-aminotetralin (2-MPAT) je blízkým strukturním analogem deprenylu. Absolutní stereochemie 2-MPAT doposud nebyla určena. Nicméně (+) isomer je selektivní pro MAO-B a (-) isomer je selektivní ^pro-MAO-A.' Rozdíl v~úč'innosťi_mezi—2-MPAT-”enantiomery^j e·'' v * · * menší než pětinásobek. (B. Hazelhoff a kol·., tamtéž) . Enantiomery N-propargyl-l-aminotetralinu (1-PAT) mají rovněž podobnou aktivitu. Nedostatkem dat v tabulce I je to, že ukazují pouze poměr struktura-aktivita mezi izolovanými ( + ) nebo (-)-2-MPAT a tato data neumožňují předpovědět jeho absolutní stereochemii.
Na základě extenzívního počítačového modelingu
Polymeropoulos nedávno předpověděl, že (R)-N-methyl-N• φ
01-2762-97 Ce
• φ ·
propargyl-l-aminoindan (R-l-MPAI) bude jako ΜΆ0-Β inhibitor účinnější než (S) forma. (E. Polymeroupoulos, Inhibitors of Monoamine Oxidase B, I. Szelenyi, vyd. Birkhauser Verlag, str. 110 (1993)). Nicméně popsané experimenty ukázaly, že R-l-MPAI je nejen o něco účinnějším inhibitorem MAO-B než
S-l-MPAI, ale že je dokonce účinnějším inhibitorem MAO-A. Jak selektivita mezi MAO-A a -B tak relativní účinnost R a S epimerů jsou nízké. V rozporu s očekáváními, vyplývajícími ze známého stavu techniky, je 1-MPAI použitelný jako farmaceutické činidlo.
Níže uvedené údaje ukazují, že vysokou selektivitu pro MAO jednoho enantiomeru oproti druhému enantiomeru nelze předpovědět. Struktura MAO aktivních míst není natolik známá, aby umožnila předpovědět relativní účinnost nebo selektivitu libovolné dané sloučeniny nebo páru jejích enantiomeru.
Mozková mrtvice zaujímá, pokud jde o počet úmrtí, v zemích s rozvinutou ekonomikou třetí'místo. Osoby, které mozkovou mrtvici přežijí, často trpí neurologickou a motorickou nezpůsobilostí. Většina CNS mrtvic je považována za lokalizovanou tkáňovou anemii, k níž dochází v důsledku neprůchodnosti arteriálního krevního řečiště, která je příčinou vzniků“ ciě’f Tciťu kyslíku á'~gIukó’zy’._Okluze “střední’·' cerebrální arterie u krys (MCAO) je běžným experimentálním postupem, kterým se simuluje mrtvice u lidí. Předpokládá se, že neurologická léze, způsobená proximální okluzí této arterie'u krysy, odpovídá fokálnímu cerebrálnímu infarktu u lidí (Yamori a kol., 1976). Tato shoda se zakládá na podobnostech mezi kraniálním oběhem těchto dvou druhů. Další zvířecí modely mrtvice popsal Stefanovich (1983).
• ·
01-2762-97 Če
Histologické změny, -popsané Tamurou a kol. (1981), který první zavedl MCAO postup, byly zpravidla patrné v kůře frontální (100%), senzimotorické (75%) a sluchové (75%) oblasti a v menší míře v kůře okcipitálního laloku (25%). Kromě toho bylo poškození pozorováno v laterálním segmentu ocasatého jádra (100%) a pouze v proměnlivé míře v jeho mediální části (38%). U MCAO živočichů byla současně zaznamenána následující onemocnění: neurologické deficity (Menzies a kol·., 1992), poruchy vědomí (Yamamoto a kol., 1988), mozkový edém (Young a kol., 1993; Matsui a kol., 1993; Saur a kol., 1993), snížení cerebrálního proudění krve (Teasdale a kol., 1983) a fluktuace katecholaminu (Cechetto a kol·., 1989). Kterékoliv z těchto onemocnění by mohlo indikovat závažnost a rozsah poškození mozku, které následuje po MCAO u krys. Na základě výše uvedeného je možné účinnou látku, s potenciálem omezit nebo zcela zlikvidovat dané onemocnění, považovat za kandidáta pro léčení mrtvice u lidí.
• * ·
01-2762-97 Če
Tabulka IA » · ···· »
IC50 (mmol/1) DATA PRO INHIBICI PROPARGYLAMINŮ MAO V MOZKU KRYSY
SLOUČENINA REF EPIMER INHIBICE RELATIVNÍ SCHOPNOST
A B A/B +/-
A B
+ 140 16 8, 8
2-MPAI a 3 0, 2
46 88 0,5
R/S
S 3600 16 120
DEPRENYL a 80 2, 6
R 450 6 75
Ξ 70 50 1/4
1-MPAI b 23 5
R 3 10 0/3 .
S 3800 50 76
1-PAT c 4 0,5
R 900 90 10
a. B. Hazelhoff a kol., Naunyn-Schmeideberg's Arch.
Pharmacol., 330, 50 (1985)
b. Evropská patentová přihláška 436,492 A2, publikovaná
10. června 1991
c. autoři vynálezu
Selektivní MAO-B inhibitor, (-)deprenyl, byl podrobněji studován a použit jako MAO-B inhibitor pro posíleni L-DOPA léčení. Léčení pomocí (-)-deprenylu je zpravidla příznivé a nezpůsobuje při dávkách, které
01-2762-97 Če způsobuji v podstatě úplnou inhibici MAO-B, tak zvaný „sýrový efekt. (Elsworth a kol., Psychopharmacoiogy, 57, 33 (1978)). Kromě toho přidání (-)-deprenylu do kombinace L-DOPA a dekarboxylázového inhibitoru, podaného pacientům trpícím Parkinsonovou chorobou, vede k určitým zlepšením, pokud jde o akinezi a celkovou funkční kapacitu, a rovněž se tím eliminují fluktuace „on-off typu (přehled Birkmayer & Riederer v „Parkinson's Disease, Springer-Verlag, str. 138-149 (1983)). (-)-Deprenyl tedy (a) zvyšuje a prodlužuje účinek L-DOPA a (b) nezvyšuje nežádoucí účinky L-DOPA léčení.
Nicméně ani samotný (-)-deprenyl není bez vlastních nežádoucích vedlejších účinků. Mezi tyto nežádoucí vedlejší účinky patří například existující žaludeční vředy a případné hypertenzní příhody. Kromě toho je (-)-deprenyl amfetaminovým derivátem a je metabolizován na amfetamin a metamfetaminy, což jsou látky, které mohou způsobovat nežádoucí vedlejší účinky, například zvýšenou srdeční rychlost (Simpson,
Biochemical Pharmacology, 27, 1951 (1978); Finberg a kol. v „Monoamine Oxidase Inhibitors The Statě of the Art, Youdim a Paykel, ed. Willey, str.
31-43 (1981)).
-1 Byly popsány i ' další sloučeniny; které ”představují selektivní nevratné inhibitory MAO-B ale které jsou prosté nežádoucích účinků spojovaných s (-)-deprenylem. Jedna taková sloučenina, konkrétně N-propagyl-1-aminoindan.HCl (racemický PAI.HC1), je popsána v GB 1,003,686 a GB 1,037,014 a v patentu US 3,513,244, uděleném
19. května 1970. Racemický PAI.HCl· je účinným selektivním nevratným inhibitorem MAO-B, nemetabolizuje se na amfetaminy a nezvyšuje nežádoucí sympatomimetické účinky.
01-2762-97 Če
Při srovnávacích testech na zvířatech se ukázalo, že racemický PAI má mnoho výhod oproti (-)-deprenylu. Racemický PAI například nezpůsobuje podstatnější tachykardii, nezvyšuje krevní tlak (účinky, k nimž dochází při dávkách (-)-deprenylu 5 mg/kg) a při dávkách nižších nebo rovných 5 mg/kg nezpůsobuje kontrakci mžurky nebo zvýšení srdeční rychlosti (což jsou vedlejší účinky (-)-deprenylu, podávaného v dávkách vyšších než 0,5 .mg/kg). Kromě toho racemický PAI.HC1 nezesiluje kardiovaskulární účinky tyraminu (Finberg a kol. v „Enzymes a Neurotransmitters in Mental Disease, str. 205-219 (1980), Usdin a kol., ed. Wiley, New York; Finberg a kol. (1981) v „Monoamine Oxidase Inhibitors - The Statě of the Art, tamtéž; Finberg and Youdim, British Journal Pharmacol., 85, 451 (1985)).
Jedním z cílů vynálezu bylo separovat racemické PAI sloučeniny a získat enahtiomer s MAO-B inhibiční aktivitou, která by byla prostá veškerých nežádoucích vedlejších účinků, spojovaných s druhým enantiomerem.
Vzhledem k tomu, že deprenyl má podobnou strukturu jako PAI a vzhledem k tomu, že je známo, že (-)-enantiomer deprenylu, tj . (-)-deprenyl, je farmaceuticky podstatně uč'ínně”j'ši n ě ž ”'('+-) - ěňanťiorně r, ” ’' dalď^by “ še.....o čekávat, ~žě (-)-enantiomer PAI bude účinnějším MAO-B inhibitorem.
Nicméně v rozporu s tímto očekáváním se po rezoluci enantiomerů ukázalo, že (+)-PAI enantiomer je ve skutečnosti aktivním MAO-B inhibitorem, zatímco (-)-enantiomer vykazuje extrémně nízkou MAO-B inhibiční aktivitu. Kromě toho má (+)-PAI enantiomer rovněž překvapivě vyšší stupeň selektivity pro MAO-B inhibici než jeho odpovídající racemická forma a při léčení označených chorob by tedy měl
01-2762-97 Če způsobovat méně nežádoucích vedlejších účinků než racemická směs. K těmto zjištěním se dospělo pomocí in vitro a in vivo experimentů, které budou podrobněji popsány níže.
Následně se ukázalo, že (+)-PAI má R absolutní konfiguraci. Vzhledem k očekávané strukturní podobnosti (+)-PAI analogie mezi deprenylem a amfetaminy bylo toto zjištění rovněž překvapivé.
Za povšimnutí rovněž stojí vysoký stupeň stereoselektivity farmakologické aktivity mezi R(+)-PAI a S(—) enantiomerem, který bude diskutován níže. R(+)-PAI je při MAO-B inhibici téměř o čtyři řády aktivnější než S(-) enantiomer. Tento poměr je podstatně vyšší než poměr pozorovaný mezi dvěma deprenylovými enantiomery (Knoll a Magyar, Adv. Biochem. Psychopharmacol., 5, 393 (1972);
Magyar a kol., Acta Physiol. Acad. Sci. Hung., 32, 377 (1967)), Kromě toho při určitých fyziologických testech se zjistilo, že (+)-deprenyl má stejnou nebo vyšší aktivitu než (-) enantiomer (Tekes a kol., Pol. J. Pharmacol. Pharm., 40, 653 (1988)).
MPAI je schopnějším inhibitorem MAO aktivity, ale s nižší selektivitou pro MAO-B než MAO-A (Tipon' a kol., Biochem. Pharmacol., 31, 1250 (1982)) . To, že______při pozorování MPAI byl překvapivě zjištěn nízký stupeň diference v relativních aktivitách dvou rozlišených enantiomerů, ještě dále zvýraznilo chování R(+)PAI (viz tabulka 1B).
Vynález rovněž poskytuje způsoby použití samotného farmaceuticky účinného PAT-enantiomerů (bez L-DOPA) při léčení Parkinsonovy choroby, poruch deprese, hyperaktivního syndromu, paměti, demence, afekce, neuro01-2762-97 Če degenerativních chorob, neurotoxických poranění, mrtvice, mozkové ischemie, traumatického poraněni hlavy, traumatického poranění míchy, neurotraumatu,
L poruch pozornosti, sklerózy multiplex a příznaků (viz přehled Youdim a kol.,
Experimental Pharmacology, Trendelenburg schizofrenie, abstinenčních
Handbook of a Weiner,
Springer-Verlag, vyd. 90/1, kap. 3 (1988)).
Vynález dále poskytuje způsob použití samotného farmaceuticky účinného PAI-enantiomeru pro léčení Parkinsonovy choroby. Vynález rovněž poskytuje farmaceutické kompozice obsahující R( + )PAI a synergická činidla, například Levodopu. Použití těchto činidel se studovalo s ohledem na (-)-deprenyl, který, jak se ukázalo, byl účinný, pokud se podával samotný pacientům v raném stadiu Parkinsonovy choroby a měl synergický účinek u pacientů, pokud se podával společně s a-tokoferolem, derivátem vitaminu E (Parkinson's Study Group, New England J. Med., 321(20), 1364-1371 (1989)).
Kromě své využitelnosti při léčení Parkinsonovy choroby se rovněž ukázalo, že (-)-deprenyl je užitečný při léčení pacientů trpících demencí Alzheimerova typu (DAT) (Tariot a kol., Psychopharmacology, 91, 489-495 (1987)) a při léčení deprese (Mendelewicž á Ýóuďini7~~BriE. J.
Psychiat. 142, 508-511 (1983)). Ukázalo se, že R(+)PAI sloučenina podle vynálezu, a zejména její mesylátová sůl, obnovují paměť. R( + )PAI má tedy potenciál pro léčení poruch paměti, demence, zejména Alzheimerova typu, a hyperaktivního syndromu u dětí.
Cílem vynálezu je rovněž poskytnutí vysoce stabilních solí R(+)PAI s vynikajícími farmaceutickými vlastnostmi. Mesylátová sůl je zvláště stabilní, vykazuje neočekávaně
01-2762-97 Če větší selektivitu a vykazuje podstatně méně vedlejších účinků než vykazují odpovídající racemické soli.
Podstata vynálezu
Vynález tady poskytuje R(+)-N-propargyl-l-aminoindan mající strukturu:
Vynález rovněž poskytuje farmaceuticky přijatelnou sůl R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu.
Vynález dále poskytuje farmaceutickou kompozici, která obsahuje terapeuticky účinné množství R(+)-N-propargyl-laminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli a farmaceuticky přijatelný nosič.
Vynález dále poskytuje způsob léčení subjektu, trpícího Parkinsonovou chorobou, který zahrnuje podání množství R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení Parkinsonovy choroby, subjektu trpícímu touto chorobou.
Vynález dále popisuje způsob léčení subjektu trpícího poruchou paměti, který spočívá v podání množství R(+)-N01-2762-97 Če
* v w V w v τ τ ·* τ —
• · v i • * • *
• · • • • ··♦ ··♦
• « • * « • ♦
··« « • · ·'·
propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení poruchy paměti subjektu, danému subjektu.
Vynález dále poskytuje způsob léčení subjektu trpícího demencí, který zahrnuje podání množství R(+)-N-propargyl-1aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení demence, subjektu trpícímu touto chorobou. U jednoho provedení se demencí rozumí demence Alzheimerova typu (DAT).
Vynález dále poskytuje způsob léčení subjektu trpícího depresí, který zahrnuje podání množství R(+)-N-propargyl-1aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení deprese, subjektu trpícímu touto chorobou.
Vynález dále poskytuje způsob léčení subjektu trpícího hyperaktivním syndromem, který zahrnuje podání množství R(+)-N-propargyl-1-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení hyperaktivního syndromu, subjektu trpícímu touto chorobou.
Vynález dále poskytuje způsob léčení subjektu trpícího afektivní nemocí, který zahrnuje- podání množství R(+)-Npřopargyl-f-aminoinďanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení afektivní nemoci, subjektu trpícímu touto chorobou.
Vynález dále poskytuje způsob léčení subjektu trpícího neurodegenerativní nemocí, který zahrnuje podání množství R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení neurodegenerativní nemoci, subjektu trpícímu touto chorobou.
01-2762-97 Če
Vynález dále poskytuje způsob léčeni subjektu trpícího neurotoxickým poškozením, který zahrnuje podání množství
R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení neurotoxického poškození, subjektu trpícímu touto chorobou.
Vynález dále poskytuje způsob léčeni subjektu trpícího mozkovou ischemií, který zahrnuje podání množství R(+)-Npropargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení mozkové ischemie, subjektu trpícímu touto chorobou.
Vynález dále poskytuje způsob léčení subjektu trpícího traumatickým poškozením hlavy, který zahrnuje podání množství R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení traumatického poškození hlavy, subjektu trpícímu tímto poškozením.
Vynález dále poskytuje způsob léčení subjektu traumatickým poškozením míchy, který zahrnuje množství R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu nebo farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro traumatického poškození míchy, subjektu trpícímu poškozením. ___________...________________________ trpícího podání jeho léčení tímto
Vynález dále poskytuje způsob léčení subjektu trpícího schizofrenií, který zahrnuje podání množství R(+)-Npropargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení schizofrenie, subjektu trpícímu touto chorobou.
Vynález dále poskytuje způsob léčení subjektu trpícího ochabnutím pozornosti, který zahrnuje podání množství R(+)-
01-2762-97 Če
* • · 4 *
* 0 «*· ··*
♦ 0 4
«· ·· »4
N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčeni ochabnuti pozornosti, subjektu trpícímu touto chorobou.
Vynález dále poskytuje způsob léčení subjektu trpícího sklerózou multiplex, který zahrnuje podání množství R(+)-Npropargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení sklerózy multiplex, subjektu trpícímu touto chorobou.
Vynález dále poskytuje způsob prevence nervových poruch u subjektu, který zahrnuje podání množství R(+)-Npropargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro prevenci nervového poškození, subjektu..
Vynález dále poskytuje způsob léčení drogově závislého subjektu trpícího abstinenčními příznaky, který zahrnuje podání množství R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení abstinenčních příznaků, subjektu trpícímu těmito příznaky.
Vynález dále poskytuje způsob přípravy R(+)-Npropargyl-l-aminoindanu, který zahrnuje uvedení R(-)aminoindanu v přítomnosti organické nebo anorganické báze do kontaktu s propargylbromidem nebo propargylchloridem za vzniku-’ Ř(+j -Ň-propargyl-l-aminoindanu a izolaci takto vzniklého R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu.
Předmětem vynálezu je dále způsob přípravy racemického N-propargyl-l-aminoindanu, který zahrnuje uvedení racemického 1-aminoindanu v přítomnosti organické nebo anorganické báze do kontaktu s propargylbromidem nebo propargylchloridem za vzniku racemického N-propargyl-101-2762-97 Če aminoindanu a izolaci takto
« * Φ · • z « •
···· • · · • ·· ♦
• • • » ♦ A ♦
« · ·· ·*« v ♦ ··
vzniklého racemického
N-propargyl-l-aminoindanu.
Cílem vynálezu je konečně způsob přípravy R(+)-Npropárgyl-l-aminoindanové soli, který zahrnuje uvedení racemického N-propargyl-l-aminoindanu do styku s opticky aktivní kyselinou za vzniku dvou diastereomerních N-propargyl-l-aminoindanových solí a izolaci R(+)-N propargyl-l-aminoindanové soli z takto vzniklých diastereomerních N-propargyl-l-aminoindanových soli.
Stručný popis obrázků
Obr. 1 graficky znázorňuje výsledky testu prováděného v příkladu 22, který se zaměřuje na stanovení MAO-A inhibiční aktivity in vitro.
Obr. 2 graficky znázorňuje výsledky testu prováděného v příkladu 22, který se zaměřuje na stanovení MAO-B inhibiční aktivity in vitro.
Obr. 3 graficky znázorňuje výsledky testu prováděného v příkladu 22, který se zaměřuje na stanovení MAO aktivity v lidské kortikálni tkáni.
Obr. 4 graficky znázorňuje výsledky testu prováděného v příkladu 23, který analyzuje akutní inhibici (i.p.) MAO-A v mozku.
Obr. 5 graficky znázorňuje výsledky testu prováděného v příkladu 23, který analyzuje akutní inhibici (i.p.) MAO-B v mozku.
• · · i *··♦ » · · • · ·
01-2762-97 Če
• • · · •
• v ♦♦♦
• •
*··' • · ··
Obr. 6 graficky znázorňuje výsledky testu prováděného v přikladu 23, který analyzuje akutní inhibici (i.p.) MAO-A v játrech.
Obr. 7 graficky znázorňuje,výsledky testu prováděného v příkladu 23, který analyzuje akutní inhibici (i.p.) MAO-B v játrech.
Obr. 8 graficky znázorňuje výsledky testu prováděného v příkladu 23, který analyzuje akutní inhibici (per os) MAO-A v mozku.
Obr. 9 graficky znázorňuje výsledky testu prováděného v příkladu 23, který analyzuje akutní inhibici (per os) MAO-B v mozku.
Obr. 10 graficky znázorňuje výsledky testu prováděného v příkladu 23, který analyzuje akutní inhibici (per os) MAO-A v játrech.
Obr. 11 graficky znázorňuje výsledky testu prováděného v přikladu 23, který analyzuje akutní inhibici (per os) MAO-B v játrech.
Obr. 12 graficky znázorňuje výsledky testu prováděného v příkladu 24, který analyzuje chronickou inhibici MAO-A v mozku.
Obr. 13 graficky znázorňuje výsledky testu prováděného v příkladu 24, který analyzuje chronickou inhibici MAO-B v mozku.
Obr. 14 graficky znázorňuje výsledky testu prováděného v příkladu 24, který analyzuje chronickou inhibici MAO-A v j átrech.
01-2762-97 Če
• • · · 0 • • 0 0 0 ·
• 0*·« » 0 0 Φ » 00· 00 0
• 0' 0 0 0' 0 0
• 00 000 0 0 00
Obr. 15 graficky znázorňuje výsledky testu prováděného v přikladu 24, který analyzuje chronickou inhibici MAO-B v játrech.
Obr. 16 graficky znázorňuje výsledky testu prováděného v příkladu 25, který analyzuje MA.O-B aktivitu v krysím mozku jako časovou funkci po i.p. podáni R{+)PAI.
Obr. 17 graficky znázorňuje výsledky testu prováděného v příkladu 32, které · ukazují obnovu normokineze u myší, kterým byl podán haloperidol v dávce 6 mg/kg s.c. Všem myším byly podány testované účinné látky i.p. v naznačených dávkách. O 2 hodiny později jim byl aplikován haloperidol. Kinetické výsledky se odečetly 3 hodiny po podání haloperidolu. Tyto výsledky odpovídají schopnosti pohybovat se horizontálně podél tyče, schopnosti slézt vertikálně tyč obličejem dolů a zkráceni katalepsie. Při absenci haloperidolu bylo maximálně dosaženo výsledku 12, zatímco při použití samotného haloperidolu se dosáhlo výsledku 6,6+0,03. Statistická hodnota se vypočetla podle Studentova „t testu: * p < 0,05; ** < 0,01; *** p < 0,001, vztaženo k hodnotám získaným při aplikaci samotného haloperidolu. Výsledky (R)-PAI se značně liší od výsledků dosažených při aplikaci racemického PAI v dávce 5 mg/kg (p<0,05), 10 mg/kg -a- 15-mg-/-k-g- (p<0,05)—-Uvedená—dávka”je’ počítána pro volnou bázi PAI (a nikoliv pro mesylátovou sůl) .
Obr. 18 graficky znázorňuje výsledky testu prováděného v příkladu 32, které ukazují obnovu motorické aktivity u myší ošetřených α-methyl-p-tyrosinem při 100 mg/kg i.p. Krysám se aplikovala testovaná látka i.p. v naznačených dávkách. 0 dvě hodiny později jim byl aplikován α-Mpt a
• ·' ·
01-2762-97 Ce φ' · · ♦i ·· bezprostředně po jeho aplikaci se myši umístily do klecí. Celková motorická aktivita se zaznamenávala v průběhu deseti hodin. Kontrolní krysy, ošetřené fyziologickým roztokem, dosahovaly výsledku 15 862+1424. Při aplikaci samotného α-MpT dosahovaly myši výsledku 8 108+810. Statistická hodnota se vypočetla podle Studentova „t testu: * p < 0,05; *★ < 0,01; *** p < 0,001, vztaženo k hodnotám získaným při aplikaci samotného α-MpT. Výsledky (R)-PAI se značně liší od výsledků dosažených při aplikaci racemického PAI v dávce 2 mg/kg (p<0,01) (n=6). Uvedená dávka je počítána pro volnou bázi PAI a nikoliv pro mesylátovou sůl.
Obr. 19 graficky znázorňuje NADH odezvu na dvouminutovou anoxii, měřenou 30 minut po úrazu a následně v půlhodinových intervalech.
Obr. 20 graficky znázorňuje hodnocení ischemické mozkové léze pomocí měřícího přístroje MRI T2-scan 48 hodin po ošetření krys MCA-0 a [R](+)PAI mesylátem. Střední cerebrální arterie se chirurgicky uzavřela způsobem popsaným v příkladu 38. [R](+)PAI mesylát se podával následujícím způsobem: 1,0 mg/kg ip bezprostředně po chirurgickém zákroku; 0,5 mg/kg ip dvě hodiny po 'chi-rurgickém-zúkrokuv’·^ Ό'' mg7’kg^ip·· 2Thddin~po~čhÍ'ruřgrčkem zákroku. Rozsah infarktu (mm3) se určil pomoci MRI 48 hodin po zákroku.
Obr. 21 graficky znázorňuje neurologické hodnocení krys Wistar, které se podrobily léčení MCA-0 a [R](+)PAI mesylátem. Střední cerebrální arterie se chirurgicky uzavřela a [R](+)PAI mesylát se podával způsobem popsaným v souvislosti s obrázkem 20. 24 hodin po chirurgickém zákroku • · i · · ♦ · • · · • ·♦
01-2762-97 Če se způsobem popsaným v příkladu 38 získaly neurologické výsledky.
Vynález tedy poskytuje R(+)-N-propargyl-l-aminoindan obecného vzorce:
Jak demonstrují níže uvedené experimentální příklady, R(+)PAI je téměř 7 OOOkrát účinnější v roli inhibitoru MAO-B než S(-)PAI. Z pohledu známých MAO-B inhibitorů, které vykazují nízkou seliktivitu mezi MAO-A a MAO-B a které nevykazují předpokládané trendy, pokud jde o účinnost jako funkci R a S konfigurace, je selektivita R(+)PAI neočekávaná.
R(+)PAI lze získat optickou rezolucí racemických směsí R- a 'Š^enántiomeřů ” PAI. Tuto 'rezoluci lze ’řěalížovat libovolnou běžnou rezoluční metodou, která je odborníkům v daném oboru známa, například metodu, kterou popsal J. Jacques, A. Collet a S. Wilen v „Enantiomers, Racemates and Resolutions, Wiley, New York (1981), Rezoluci lze provádět například preparativní chromatografií na chirální koloně. Dalším příkladem vhodné rezoluční metody je příprava diastereomerních solí s chirální kyselinou, například kyselinou vinnou, kyselinou maleinovou, kyselinou
01-2762-97 Če « · · • · * · • ···· · ♦· • · ··
4♦ · mandlovou nebo N-acetylovými deriváty aminokyselin, například N-acetylleucinem, a následnou rekrystalizací, jejímž cílem je izolace diastereomerní soli požadovaného R enantiomeru.
Racemickou směs R a S enantiomeru PAI lze připravit například způsobem popsaným v GB 1,003,676 a GB 1,037,014. Racemickou směs PAI lze rovněž připravit uvedením 1-chloroindanu do reakce s propargylaminem. Alternativně lze tento racemát připravit uvedením propargylaminu do reakce s 1-indanonem za vzniku odpovídajícího iminu a následnou redukcí C=N dvojné vazby iminu vhodným činidlem, například borohydridem sodným.
R enantiomer PAI lze podle vynálezu rovněž připravit přímo z opticky aktivního R enantiomeru 1-aminoindanu reakcí s propargylbromidem nebo propargylchloridem v přítomnosti organické nebo anorganické báze a případně v přítomnosti vhodného rozpouštědla.
Vhodnou organickou nebo anorganickou bází pro výše zmíněnou reakci může být například triethylamin, pyridin, uhličitany alkalických kovů a hydrogenuhličitany. Pokud se reakce provádí v přítomnosti rozpouštědla, potom by se toto rozpouštědlo mělo zvolit například z toluenu, methylenu, chloridu a acetonitrilu. Jedním způsobem přípravy R(+)PAI je uvedení R-l-aminoindanu do reakce, s propargylchloridem za použití hydrogenuhličitanu draselného jako báze a acetonitrilu jako rozpouštědla.
Výše popsaná reakce 1-aminoindanu zpravidla poskytuje směs nezreagovaného primárního aminu, požadovaného sekundárního aminu a terciálního aminu Ν,Ν-bispropargylamino-produktu. Požadovaný sekundární amin, tj .
01-2762-97 Če
t · • • φ w w »
• ···♦ « • · • Φ ·♦·
• • • • • · ·
• • · • · · * · · ·
N-propargyl-l-aminoindan, lze ze získané směsi separovat běžnou separační metodou, například pomocí chromatografie, destilace a selektivní extrakce.
R-l-aminoindanový výchozí materiál lze připravit v oboru známými způsoby, které zahrnují například způsob popsaný Lawsonem a Raoem, Biochemistry, 19, 2133 (1980), způsoby citované v dokumentech, které jsou jmenovány v kapitole „Dosavadní stav techniky a způsob popsaný v Evropském patentu č. 234,590.
R-l-aminoindan lze rovněž připravit rezolucí racemické směsi R a S enantiomeru, která zahrnuje například přípravu diastereomerních solí s chirálními kyselinami nebo některou další známou metodou, například metodou, kterou popsal J. Jacques a kol., tamtéž. Alternativně lze R-l-aminoindan připravit uvedením 1-indanonu do reakce s opticky aktivním aminem a následnou redukcí dvojné vazby mezi uhlíkem a dusíkem ve výsledném iminu hydrogenací nad vhodným katalyzátorem, například nad paládiem na uhlíku, oxidem platiny nebo Raneyovým niklem. Vhodné opticky aktivní aminy zahrnují například jeden ze dvou antipodů fenethylaminu nebo ester aminokyseliny, například valinu nebo fenylalaninu. Benzylickou N-C vazbu lze následně rozštěpit —-hydro genac-í- -za-·-nebouřl-iv-ýeh-podmí-ne-k-.----------------------------.
Dalším způsobem přípravy R-l-aminoindanu je hydrogenace výše popsaných indan-l-onoximetherů, ve kterých alkylová část etheru obsahuje opticky čistý chirální střed. Alternativně lze nechirální deriváty indan-l-onu obsahující dvojnou vazbu mezi uhlíkem a dusíkem, například imin nebo oxim, redukovat chirálním redukčním činidlem, např. komplexem tetrahydridohlinitanu lithného a efedrinu.
01-2762-97 Če » · t ♦ · · * ί··· 9
Předmětem vynálezu je dále poskytnout farmaceuticky přijatelnou sůl R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu.
Farmaceuticky přijatelná sůl podle vynálezu například zahrnuje mesylát, maleinát, fumarát, vinan, hydrochlorid, hydrobromid, esylát, p-toluensulfonát, benzoát, acetát, fosfát a sulfátové soli.
U jednoho provedení se sůl zvolila ze skupiny .tvořené mesylátovou solí R( + )-N-propargyl-l-aminoindanu, esylátovou solí R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu a sulfátovou sůl R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu.
Jak demonstrují níže uvedené experimentální příklady, mesylátová sůl je vysoce stabilní vůči tepelné degradaci a vykazuje oproti racemické směsi neočekávaně dobrou selektivitu pro MAO-B.
Pro přípravu farmaceuticky přijatelných kyselinových adičních solí sloučeniny R( + )PAI lze uvést volnou bázi konvenčními metodami do reakce s požadovanými kyselinami v přítomnosti vhodného rozpouštědla. Podobně lze kyselinovou adiční sůl převést známými postupy na volnou bazickou formu.
Výhodnýzpůsob přípravy^ mesylátové formy (R) -PAI zahrnuje: (a) adici vodného roztoku 15% hydroxidu sodného do roztoku propargylbenzensulfonátu (nebo tosylátu nebo mesylátu) v toluenu; (b) míchání po dobu 5 hodin; (c) přidání dalšího toluenu a vody; (d) separováni a promytí organické fáze 10% hydroxidem sodným a následné naředění vodou; (e) nastavení pH hodnoty směsi ha 3,2 přidáním 10% vodného roztoku kyseliny sírové; (f) separování vodné fáze a nastavení pH na 7,3 10% vodným roztokem hydroxidu
01-2762-97 Če 24 ♦ · · · : * · * · Ml · ♦♦ • · ·«· «< « · •4· «· ·
sodného; (g) trojí extrahování toluenem za udržování
konstantní pH hodnoty; (h) zahuštění sloučených organických vrstev ve vakuu za vzniku žlutého oleje; (i) rozpuštění oleje a kyseliny L-vinné v isopropanolu; (j) zahřátí na refluxní teplotu a udržování při této teplotě po dobu jedné hodiny; (k) ochlazení na pokojovou teplotu a izolace sraženiny filtrací; (1) rekrystalizace surového dipropargylaminoindanvinanu ze směsi methanolu a isopropanolu (1:1) za vzniku di(R(+)-N-propargyl-l-aminoindan)vinanu; (m) rozpuštění vinanu a methansulfonové kyseliny v isopropanolu - a třicetiminutové ohřívání při refluxní teplotě; a (n) ochlazení na pokojovou· teplotu a sebrání vysráženého R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu.
Vynález dále poskytuje farmaceutickou kompozici, která obsahuje terapeuticky účinné množství R(+)-N-propargyl-1aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli a farmaceuticky přijatelný nosič. „Terapeuticky účinné množství R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli lze určit běžnými postupy,’ které jsou odborníkům v daném oboru známy.
Pro uvedené kompozice lze například použít následující soli. Hydrochlorid, fosfát, maleinát, fumarát, vinan, —-----mesylát··,—esy lát- a--sulfát ov-é-soli—.---------------——.—-..........—
Tyto kompozice lze připravit jako léčiva určená pro orální, parenterální, rektální nebo transdermální podání.
U jednoho provedení je farmaceuticky přijatelným nosičem pevná látka a farmaceutická kompozice má formu tablet. Terapeuticky účinným množstvím může být množství pohybující se přibližně od 0,1 mg do 100 mg. Farmaceuticky ♦ ♦ · · · • · φφφ φ·· φ φ · φ·φ φφ ··
01-2762-97 Če » · * *· • *φφφ · »· • φ φ· ··· * ·· účinným množstvím může být rovněž přibližně 1 mg až 10 mg
Účinné látky.
Vhodnými formami pro orální podání jsou například tablety, lisované nebo potažené pilulky, dražé, oplatky, tvrdé a měkké želatinové kapsle, podjazykové tablety, sirupy a suspenze.
U alternativního provedení je farmaceuticky přijatelným nosičem kapalina a farmaceutická kompozice má formu injektovatelného roztoku. Terapeuticky účinným množstvím může být množství pohybující se přibližně od 0,1 mg/ml do 100 mg/ml. Terapeuticky účinným množstvím může být rovněž přibližně 1 mg/ml až 10 mg/ml mg účinné látky. U jednoho provedení je podanou dávkou množství pohybující se v rozmezí od 0,5 ml do 1,0 ml.
U dalšího alternativního provedení je nosičem gel a farmaceutická kompozice má formu čípku.
Pro parenterální podání vynález poskytuje ampule nebo lahvičky, které obsahují vodný nebo bezvodý roztok nebo emulzi. Farmaceutická kompozice podle vynálezu, určená pro rektální podání, má formu čípků s hydrofilním nebo hydrofobním vehikulem. Pro topickou aplikaci je určena ”fármaceúťická'formulace 'podlé'' vynálezu, “která“ '~má“formu’' mastí a transdermální dopravu zajišťují vhodné dopravní systémy, které jsou v daném oboru známy.
U výhodného provedení je farmaceuticky přijatelnou solí mesylátová sůl.
Tyto kompozice lze pro léčeni výše jmenovaných chorob použít samotné nebo alternativně, jako v případě * · • ·
01-2762-97 Če například • f · i · * * ··· • * ré · *
Parkinsonovy choroby, mohou být použity přídavný prostředek při konvenčních L-DOPA terapiích.
Výhodné dávky účinné složky, tj.
R-PAI, ve výše zmíněných kompozicích leží v následujících rozmezích, případě orálních formulací nebo čípků lze denně brát 0,1 100 mg účinné látky na dávkovou jednotku a výhodně 1 10 mg na dávkovou jednotku denně. V formulací 0,1 až 100 mg/ml na výhodně 1 až 10 mg/ml na dávkovou inj ektovatelných jednotku denně a do až případě dávkovou j ednotku denně.
U jednoho provedení farmaceutická kompozice dále zahrnuje terapeuticky účinné množství Levodopy. U dalšího provedení farmaceutická kompozice dále zahrnuje účinné *
množství dekarboxylázového inhibitoru.
Množstvím dekarboxylázového inhibitoru, podaného v kombinaci s (R)-PAI nebo jeho farmaceuticky přijatelnou solí, je množství účinné pro zajištění spotřeby L-DOPA subjektem.
Dekarboxylovým inhibitorem může být L-Carbidopa. U jednoho provedení je terapeuticky účinným množstvím R(+)-Npropargyl-l-aminoindanu přibližně 0,1 mg až 100 mg, terapeuticky''úc’í'nným''množstvim’'Levodopy ’ přibTižhe ~5'0~mg~až' 250 mg a účinné množství L-Carbidopy je přibližně 10 mg až 25 mg.
Dekarboxylázovým inhibitorem může být rovněž benserazid. U jednoho provedení, je terapeuticky účinným množstvím R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu přibližně 0,1 mg až 100 mg, terapeuticky účinným množstvím Levodopy je
01-2762-97 Če přibližně 50 mg až 200 mg a účinným množstvím benserazidu je přibližně 12,5 mg až 50 mg.
Předmětem vynálezu je dále způsob léčení subjektu trpícího Parkinsonovou chorobou, který zahrnuje podání množství R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení Parkinsonovy choroby, subjektu trpícímu touto chorobou.
Způsoby léčení Parkinsonovy choroby, jejichž podstatou je kombinace použití (R)-PAI s dalšími účinnými látkami, například dopaminovými agonizuj ícími činidly, bromokryptinem, pergolidem, lisuridem, a do rozsahu vynálezu spadají rovněž methyltransferázové inhibitory.
katecholaminoxidázo.U výhodného provedeni je farmaceuticky přijatelnou solí mesylátová sůl.
Podání může zahrnovat orální podání, rektální podání, transdermální podání nebo parenterální podání.
U jednoho provedení způsob podle vynálezu dále zahrnuje podání terapeuticky účinného množství Levodopy subjektu. U dalšího provedení způsob podle vynálezu dále . zahrnu j.e.____..podání^ „ „účinného _ .„množství de.karboxy.lázpvého.. inhibitoru subjektu.
Dekarboxylázovým inhibitorem může být L-Carbidopa. Alternativně může být dekarboxylázovým inhibitorem benserazid.
Vynález dále popisuje způsob léčeni subjektu trpícího poruchou paměti, který spočívá v podání množství R(+)-Npropargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné » » « * · Ti ti · ··♦·♦· i · »
.......
01-2762-97 Če
..3 »* * * » t * ···· aŠSB soli, účinného pro léčení poruchy paměti subjektu, danému Vfl subjektu.
i1®
Vynález dále poskytuje způsob léčení subjektu trpícího demenci, který zahrnuje podání množství R(+)-N-propargyl-1aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení demence, subjektu trpícímu touto chorobou. U jednoho provedení se demenci rozumí demence
Alzheimerova typu (DAT).
Vynález dále poskytuje způsob léčení subjektu trpícího depresí, který zahrnuje podání množství R(+)-N-propargyl-1aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení deprese, subjektu trpícímu touto chorobou.
Vynález dále poskytuje způsob léčení subjektu trpícího hyperaktivním syndromem, který zahrnuje podání množství R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení hyperaktivního syndromu, subjektu trpícímu touto chorobou.
Toto podání může zahrnovat orální podání, rektální podání nebo parenterální podání.
- -.....—Vynález- dále poskytuje -způsob- léčení-subj-ektu -trpícího—-----------afektivní nemocí, který zahrnuje podání množství R(+)-Npropargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení afektivní nemoci, subjektu trpícímu touto chorobou.
Vynález dále poskytuje způsob léčení subjektu trpícího neurodegenerativní nemocí, který zahrnuje podání množství
R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky
01-2762-97 Če 29 *í í , z z * ; i i 4 • *♦·· · : j z · ”: ,z. z .. .i.....
přij atelné soli, účinného pro léčení neurodegenerativní
nemoci, subjektu trpícímu touto chorobou.
Vynález dále poskytuje způsob léčení subjektu trpícího neurotoxickým poškozením, který zahrnuje podání množství R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení neurotoxického poškození, subjektu trpícímu touto chorobou.
Vynález dále poskytuje způsob léčení subjektu trpícíhomozkovou ischemií, který zahrnuje podání množství R(+)-Npropargyl-l-aminoindanu.nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení mozkové ischemie, subjektu trpícímu touto chorobou.
Vynález poskytuje způsob léčení mozkové ischemie nebo mrtvice u subjektu, který zahrnuje podání určitého množství R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení mozkové ischeitíie nebo mrtvice, subjektu trpícímu touto chorobou.
U jednoho provedení způsobu léčení mozkové ischemie nebo mrtvice se farmaceuticky přijatelná sůl zvolí ze skupiny tvořené: mesylátovou solí; ethylsulfonátovou solí; sulfátovou solí; a hydrochloridovou solí. Výhodně je farmaceuticky přijatelnou solí mesylátóvá sůl' R(+j-Npropargyl-l-aminoindanu.
‘Účinné množství lze určit za použití technik, které jsou odborníkům v daném oboru známy, například titrace. U jednoho provedení vynálezu se účinné množství pohybuje přibližně v rozmezí od 0,5 miligramů na kilogram tělesné hmotnosti subjektu do 2,5 miligramů na kilogram tělesné hmotnosti subjektu. R(+)-N-propargyl-l-aminoindan nebo jeho
01-2762-97 Če ·· · * · ·
:.:.. * . . · »: ··· ·Φ ··· ·· ** farmaceuticky přijatelná sůl se podává za použiti technik známých odborníkům v daném oboru. Může být například podáván intravenózne, orálně, rektálně, transdermálně nebo parenterálně.
Subjektem je výhodně savec, například pes, kočka, myš, krysa, králík, prase, kůň, koza, ovce, kráva nebo opice. U výhodného provedení je subjektem člověk.
U jednoho provedení podle' vynálezu se účinné množství pohybuje přibližně od 0,01 mg do 50,0 mg na den. U zvláště výhodného provedení se účinné množství pohybuje od 0,1 do 10,0 mg na den.
U jednoho provedení výše popsaného způsobu se rozsah mozkové ischemie redukuje přibližně o 35 L
Vynález dále poskytuje způsob léčení subjektu trpícího traumatickým poškozením hlavy, který zahrnuje podání množství R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení traumatického poškození hlavy, subjektu trpícímu tímto poškozením.
Vynález dále poskytuje způsob léčení subjektu trpícího
.....------------- - - traumatickým- - poškozením - míchy-,—který - zahrnuje.....—podání-množství R( + )-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení traumatického poškození míchy, subjektu trpícímu tímto poškozením.
Vynález dále poskytuje způsob léčení subjektu trpícího nervovým traumatem, který zahrnuje podání množství R(+)-Npropargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné
01-2762-97 Če soli, účinného pro léčení nervového traumatu, subjektu trpícímu tímto poškozením.
Při léčení traumatického poškození hlavy, traumatického poškození míchy nebo nervového traumatu se farmaceuticky přijatelná sůl R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu zvolí ze skupiny tvořené: mesylátovou solí; ethylsulfonátovou solí; sulfátovou solí; a hydrochloridovou solí. Výhodně je farmaceuticky přijatelnou solí mesylátová sůl R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu.
Účinné množství lze určit za použití technik, které jsou odborníkům v daném oboru známy, například titrace. U jednoho provedení vynálezu se účinné množství pohybuje přibližně v rozmezí od 0,5 miligramů na kilogram tělesné hmotnosti subjektu do 2,5 miligramů na kilogram tělesné hmotnosti subjektu. R(+)-N-propargyl-l-aminoindan nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl se podává za použití technik známých odborníkům v daném oboru. Může být například podáván intravenózně, orálně, rektálně, transdermálně nebo parenterálně.
Subjektem je výhodně savec, například pes, kočka, myš, krysa, králík, prase, kůň, koza, ovce, kráva nebo opice. U výhodného.provedeni je.....subjektem., člověk. . .. ...______ __________________
U jednoho provedení podle vynálezu se účinné množství pohybuje přibližně od 0,01 mg do 50,0 mg na den. U zvláště výhodného provedení se účinné množství pohybuje od 0,1 do 10,0 mg na den.
Vynález dále poskytuje způsob léčení subjektu trpícího schizofrenií, který zahrnuje podání množství R(+)-Npropargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné
01-2762-97 Če soli, účinného pro léčení schizofrenie, subjektu trpícímu touto chorobou.
Vynález dále poskytuje způsob léčení subjektu trpícího ochabnutím pozornosti, který zahrnuje podání množství R( + )-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení ochabnutí pozornosti, subjektu trpícímu touto chorobou.
Vynález dále poskytuje způsob léčení subjektu trpícího sklerózou multiplex, který zahrnuje podání množství R(+)-Npropargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení sklerózy multiplex, subjektu trpícímu touto chorobou.
Vynález dále · poskytuje způsob prevence nervových poruch u subjektu, který zahrnuje podání množství R(+)-Npropargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro prevenci nervového poškození, subjektu..
U jednoho provedení je nervovým poškozením poškození struktury nervů. U dalšího provedení je poškozením struktury nervů poškození očních nervů.
Vynález dále poskytuje způsob léčení drogově závislého subj.e.ktu _.na_návykové.. látce_ trpícího abstinenčnimi. příznaky, který zahrnuje podání množství R(+)-N-propargyl-laminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, účinného pro léčení abstinenčních příznaků, subjektu trpících těmito příznaky.
Výraz „abstinenční' příznaky, jak je zde použit, označuje fyzické a/nebo psychické příznaky včetně neodolatelné touhy po droze, deprese, podráždění, anergie,
01-2762-97 Če amotivace, změny chuti, nespavosti, třesu a nepravidelného spánku.
Výraz „návyková látka, jak je zde použit, zahrnuje například (a) návykové opiáty, například opium, heroin a morfin, (b) psychostimulační látky, například kokain, amfetaminy a metamfetaminy, (c) alkohol, (d) nikotin, (e) barbituráty a (f) narkotika, například fentanyl, kodein, difenoxylát a thebain.
U jednoho provedení je návykovou látkou kokain, U dalšího provedení je návykovou látkou alkohol.
Vynález dále poskytuje způsob přípravy R(+)-Npropargyl-l-aminoindanu, který zahrnuje uvedení R(-)-aminoindanu v přítomnosti organické nebo anorganické báze do kontaktu s propargylbromidem nebo propargylchloridem za vzniku R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu a izolaci takto vzniklého R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu.
Předmětem vynálezu je dále způsob přípravy racemického N-propargyl-l-aminoindanu, který zahrnuje uvedení racemického 1-aminoindanu v přítomnosti organické nebo anorganické báze do kontaktu s propargylbromidem nebo propargylchloridem za vzniku racemického N-propargyl-laminoindanu a izolaci takto vzniklého racemického Npropargyl-l-aminoindanu.
Cílem vynálezu je konečně způsob přípravy
R(+)-Npropargyl-1-aminoindanové soli, který zahrnuje uvedení racemického N-propargyl-l-aminoindanu do styku s opticky aktivní kyselinou za vzniku dvou diastereomerních
N-propargyl-l-aminoindanových solí a izolaci R(+)-N·· é ·· ·
M »£] « · «
·· «
01-2762-97 Če .1 ř *J li i
f· •· i* ♦Φ ·
soli takto propargyl-l-aminoindanové diastereomerních N-propargyl-l-aminoindanových vzniklých solí.
U jednoho provedení izolace zahrnuje izolaci frakční krystalizací·
Následující příklady provedení vynálezu mají pouze ilustrativní charakter a nikterak neomezují rozsah vynálezu, který je jednoznačně vymezen přiloženými patentovými nároky.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Racemický N-propargyl-l-aminoindan hydrochlorid
Do 75 ml acetonitrilu se přidalo 10,0 g racemického 1-aminoindanu a 10,4 g uhličitanu draselného. Výsledná suspenze se ohřála na 60°C a do takto ohřáté suspenze se po kapkách přidalo 4,5 g propargylchloridu.
Směs se míchala při 60eC 16 hodin, načež se většina těkavých podílů odstranila destilací ve vakuu. Zbytek se rozdělil mezi 10% vodný roztok hydroxidu sodného a’ methylenchlorid.
Organická fáze se vysušila a rozpouštědlo se odstranilo destilací. Zbytek se čistil mžikovou chromatografií na silikagelu, přičemž jako eluční činidlo se použila směs 40% etylacetátu a 60% hexanu. Frakce, obsahující titulní sloučeninu ve formě volné báze, se sloučily a eluční činidlo se nahradilo etherem. Etherický
01-2762-97 Če
9· •· bb •b b b ·· b roztok se ošetřil plynným chlorovodíkem, vzniklá sraženina se izolovala vakuovou filtrací, rekrystalizovala z isopropanolu a poskytla výtěžek 7,3 g titulní sloučeniny, t.t. 182-4°C.
Následující chromatografická a spektroskopická data odpovídala datům uvedeným v patentu US 3,513,244, uděleném 19. května 1970, a autentickému vzorku: NMR δ (CDCI3) : 2,45 (2H, κι), 2,60 (IH, t), 2,90 (IH, m), 3,45 (IH, m), 3,70 (2H, d), 4,95 (IH, t), 7,5 (4H, m) ppm.
Příklad 2
S-(-)-N-Propargyl-1-aminoindan hydrochlorid
Titulní sloučenina ve formě volné báze se izolovala štěpením racemické směsi volné báze z příkladu 1 na Chiracel OJ (celulóza tris [p-methylbenzoát]) preparativním HPLC sloupci eluováním pomocí eluční směsi 10% isopropanolu a 90% hexanu a odebráním frakce s prvním výrazným pikem. Výsledný olej se převedl na titulní sloučeninu (hydrochlorid) ošetřením 10% diethyletherového roztoku oleje plynným chlorovodíkem a izolováním vzniklé sraženiny vakuovou -íi-lt-rací-.—[-a-]d—29/2°·(1% ethanol) , 1.1 ; 182-184eC. Další chromatografické a spektroskopické vlastnosti byly identické s vlastnostmi hydrochloridové soli z příkladu 1.
01-2762-97 Če
« 9 9 •
• * 0 «
* 0·*· • » *
• · « to
·«· * « •
Příklad 3
R- (+)-N-Propargyl-l-aminoindan hydrochlorid
Titulní sloučenina se připravila způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 2 s tou výjimkou, že se z preparativní HPLC kolony odebrala frakce, vykazující druhý pík: [a]D+29,1°(0,8%, ethanol), t.t. 179-181°C. Další chromatografické a spektroskopické vlastnosti byly identické s vlastnostmi hydrochloridové soli z příkladu 1.
Přiklad 4
R- (+)-N-Propargyl-1-aminoindan hydrochlorid
Do 95 ml acetonitrilu se přidalo 12,4 g R-(-)-laminoindanu a 12,9 g uhličitanu draselného. Výsledná suspenze se ohřála na 60°C a do takto ohřáté suspenze se po kapkách přidalo 5, 6 g propargylchloridu. Směs se 16 hodin míchala při 60°C, načež se většina těkavých podílů odstranila destilací ve vakuu. Zbytek se rozdělil mezi 10% vodný roztok hydroxidu sodného a methylenchlorid.
_ „Organická____fáze se vysušila...... rozpouštědlo se odstranilo ve vakuu. Zbytek se čistil mžikovou chromatografii na silikagelu, přičemž jako eluční činidlo se použila směs- 40% etylacetátu a 60% hexanu. Frakce, obsahující titulní sloučeninu ve formě volné báze, se sloučily a eluční činidlo se nahradilo etherem. Etherický roztok se ošetřil plynným chlorovodíkem, vzniklá sraženina se izolovala vakuovou filtrací, rekrystalizovala z isopropanolu a poskytla výtěžek 6,8 g titulní sloučeniny,
01-2762-97 Če
v v v * * » w 7·
• · 9 9 Φ * ' * • *
b·** • 9 9 9 *·'*
« « •
9 · * • * » * ·
37
t.t. 183-185°C, [a]D+30,90 (2% ethanol). Spektrální
vlastnosti byly identické se spektrálními vlastnostmi
zveřejněnými pro sloučeninu z příkladu 1.
Přiklad 5
S- (-)-N-Propargyl-l-aminoindan hydrochlorid
Titulní sloučenina se připravila způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 4 s tou výjimkou, že jako výchozí materiál se použil S-(+)-1-aminoindan. Produkt vykazoval [a]D-30,3 (2%, ethanol), t.t. 183-5°C. Spektrální vlastnosti byly identické s vlastnostmi zveřejněnými pro sloučeninu z příkladu 1.
Příklad 6A
Di(R-(+)-N-propargyl-l-aminoindan) L-vinan
Do roztoku kyseliny vinné (4,4 g) ve 48 ml vroucího methanolu se přidal roztok R-(+)-N-propargyl-1aminoindanové volné báze (5,0 g) v methanolu (48 ml). Roztok se ohříval pod zpětným chladičem a v průběhu dvaceťi minut se přidalo 284 ml t-butylmethyleheru. Směs se ohřívala dalších 30 minut, ochladila, vzniklá sraženina se izolovala vakuovou filtrací a poskytla výtěžek 6,7 g titulní sloučeniny: t.t. 175-177°C;
[a]D (1,5, H2O) = +34,3;
analýza vypočtena pro C2eH32O6N2;
C
68,26
H
6,56
N
5, 69
01-2762-97 Če ·· * » · * fr · i · ♦ · « * * ·· ·· v • ♦ • ·· J I » I • « · · · · * ** ·*
38
nalezeno: C H N
68,76 6,57 5, 61
Příklad 6B
R-(+)-N-Propargyl-l-aminoindan mesylát
a) Do roztoku propargylbenzensulfonátu (78,'4 g) a racemického aminoindanu (63,2 g) v toluenu (240 ml) se při 20’C po kapkách přidal vodný roztok 15% hydroxidu sodného (108 ml) . Po pěti hodinách následného míchání se za stálého míchání přidal toluen (80 ml) a voda (200 ml) . Organická fáze se separovala a promyla 10% vodným roztokem hydroxidu sodného a naředila vodou. Hodnota pH směsi se pomocí 10% vodného roztoku kyseliny sírové nastavila na 3,2. Vodná fáze se separovala, její pH se nastavila na 7,3 pomocí 10% hydroxidu sodného a třikrát se extrahovala toluenem za udržování konstantního pH. Sloučené organické vrstvy se zahustily ve vakuu a poskytly 40,7 g žlutého oleje.
b) Výše uvedený surový racemický propargylaminoindan a kyselina L-vinná (10 g) se rozpustily v isopropanolu (1 1) a ohřívaly pod zpětným chladičem 1 hodinu. Reakční směs se následně, za stálého míchání, ochladila na pokojovou teplotu a sraženina se izolovala filtrací. Surový di(propargylaminoindan)vinan se rekrystalizoval z 11 1:1 methanolu a isopropanolu a poskytl di(R-(+)-N-propargyl-1aminoindan)-L-vinan s fyzikálními a spektrálními vlastnostmi, které byly identické s odpovídajícími vlastnostmi sloučeniny z příkladu 6A.
01-2762-97 Če ·< · · · • · · · · • *··♦ · · · » * · . * ·*· · ··
00 • V 0 ·
• « 0 0 0
* * 000' ♦ ··
0. • *
• 0 0 • · *0
c) Roztok di-(R-(+)-N-propargyl-l-aminoindan)vinanu (15 g) a kyseliny methansulfonové (6 g) v isopropanolu (150 ml) se ohřívala pod zpětným chladičem 30 minut. Reakce se následně ochladila na pokojovou teplotu a výsledná sraženina se izolovala vakuovou filtrací a poskytla titulní sloučeninu (11,1 g), t.t. 157°C a [a]D=22°.
Příklad 7
R-(+)-N-Methyl-N-propargyl-l-aminoindan hydrochlorid
Volná báze tvořená R-(+)-N-propargyl-l-aminoindanem z příkladu 4 (1,2 g), uhličitanem draselným (0,79 gj, (0,97 g) a methyl jodidem (1 g) se přidala do 15 ml acetonu a výsledná suspenze se ohřívala 8 hodin při refluxní teplotě pod dusíkovou atmosférou. Potom se za sníženého tlaku odstranily těkavé podíly a zbytek se rozdělil mezi 10% vodný roztok hydroxidu sodného (30 ml) a methylenchlorid (30 ml). Organická fáze se vysušila a rozpouštědlo odstranilo ve vakuu. Zbytek se čistil mžikovou chromatografií na silikagelu, přičemž jako eluční činidlo se použila směs 40% ethylacetátu a 60% hexanu. Frakce, obsahujríoi_t11ulní sloučen_inu~ _ ve- “formě'_vodné--báze~se-_ sloučily a eluční činidlo se nahradilo diethyletherem. Etherický roztok se ošetřil plynným HC1. Těkavé podíly se odstranily ve vakuu a zbytek, po rekrystalizaci z isopropanolu, poskytl 400 mg titulní sloučeniny ve formě bílé krystalické pevné látky, t.t. 134-136°C, [a]D+31,40 (ethanol). NMR δ (CDC13) : 2,55 (2H, m), 2,7 (IH, široké s),
2,8 (3H, S), 3,0 (IH, m), 3,4 (IH, m), 3,9 (2H, široké s),
5,05 (IH, m), 7,7 (4H, m) ppm.
01-2762-97 Če
Příklad 8 «99 * * · »· φ 99 9« ♦» ·· «99* ··
S-(-)-N-Methyl-N-propargyl-l-aminoindan hydrochlorid
Jako výchozí materiál se použil S-(-)-N-propargyl-1aminoindan (volná báze) z příkladu 5 a titulní sloučenina z výše popsaného přikladu 7. Všechny fyzikální a spektrální vlastnosti titulní sloučeniny byly identické odpovídajícími vlastnostmi sloučeniny z příkladu 7 výjimkou [a]D -34,9°C (ethanol).
Přiklad 9
Tabletová kompozice
7,81 mg*
N-Propargyl-1-(R)-aminoindan hydrochlorid
Předželatinovaný škrob NF 47,0 mg
Vodný roztok laktózy NF 66,0 mg
Mikrokrystalická celulóza NF 20,0 mg
Škrobglykolát sodný NF 2,99 mg
Mastek USP .1,5 mg
Stearát horečnatý NF 0,7 mg
*_._Ekvi val ent ní _mno ž st ví _do—5 ,-0-mg- -N--p-r op ar gy1amino indanové báze
01-2762-97 Če
Příklad 10
Tabletová kompozice
N-Propargyl-1-(R)-aminoindan hydrochlorid 1,56 mg
Vodný roztok laktózy 50,0 mg
Předželatinovaný škrob 36,0 mg
Mikrokrystalická celulóza 14,0 mg
Škrobglykolát sodný 2,14 mg
Mastek USP 1,0 mg
Stearát hořečnatý NF 0,5 mg
* Ekvivalent do. 1,0 mg N-propargylaminoindanové báze
Příklad 11
Kapslová kompozice
N-Propargyl-1-(R)-aminoindan hydrochlorid
Předželatinovaný škrob
Škrob
Mikrokrystalická celulóza
Ethylcelulóza
Mastek ~ ~~
5, 0 mg
10,0 mg
44,0 mg
25, 0 mg
1,0 mg
Γ, 5 mg
Čištěná voda se přidala podle potřeb granulace.
01-2762-97 Če * * ··· » ··
Příklad 12
Injektovatelná kompozice
N-Propargyl-1-(R)-aminoindan hydrochlorid
Vodný roztok dextrózy
HCL, přidávaná do dosažení pH 5
Kompozice se doplnila do 1 ml čištěnou vodou.
Příklad 13
Injektovatelná kompozice
N-Propargyl-1-(R)-aminoindan hydrochlorid 1,0 mg
Chlorid sodný 8,9 mg
HCL, přidávaná do dosažení pH 5
Kompozice se doplnila do 1 ml čištěnou vodou.
f
Příklad 14
Injektovatelná kompozice
N-Propargyl-1-(R)-aminoindan hydrochlorid
2,0 mg
Chlorid sodný
8,9 mg
HCL, přidávaná do dosažení pH 5
Kompozice se doplnila do 1 ml čištěnou vodou.
«« · • · « · • * • · v · · • ♦ ··
01-2762-97 Če • ··«« * J · · * « • • ♦ ·♦· * *· «#· ·
Příklad 15
Sirupová kompozice
N-Propargyl-1-(R)-aminoindan hydrochlorid Sacharóza 5, 0 mg 2 250,0 mg
Sacharin sodný 5, 0 mg
Methylparaben 6,0 mg
Propylparaben 1,0 mg
Ochucovadlo 20,0 mg
Glycerin USP 500 mg
95%. Alkohol USP 200 mg
Kompozice se doplnila do 5,0 ml čištěnou vodou.
Příklad 16
Podjazykové tablety
N-Propargyl-1-(R)-aminoindan hydrochlorid 2,5 mg
Mikrokrystalická celulóza 20,0 mg
Vodný roztok laktózy 5, 0 mg
Předželatinovaný škrob 3,0 mg
Providon ' ' — ..... - —— ’ 0,3 mg
Barvící činidlo dle potřeby
Ochucovadlo dle potřeby
Sladidlo dle potřeby
Mastek - 0,3 mg
Směs masťových základů a účinné látky a granulátu s ethanolovým roztokem Providonu. Po vysušení a zvážení se smísila s mastkem a lisovala.
01-2762-97 Če
Příklad 17
PAI podjazykové tablety
N-Propargyl-1-(R)-aminoindan hydrochlorid
Mikrokrystalická celulóza
Předželatinovaný škrob
Ethylcelulóza
Mastek
5,0 mg
15,0 mg
12,0 mg
0,3 mg
0,3 mg
Čištěná voda se přidá podle potřeby granulace.
Příklad 18
Tabletová kompozice
N-Propargyl-1-(R) -aminoindan . hydrochlorid 5,0 mg
Levodopa 100,0 mg
Carbidopa 25,0 mg
Předželatinovaný škrob 24,0 mg
Škrob' 40,0 mg
Mikrokrystalická celulóza 49,5 mg
Barvivo Col. D .& C žluť No. 10 0,5 mg
Barvivo Col. D & C žluť No. 6 0,02 mg
Alkohol USP sé přidal podle potřeby granulace.
01-2762-97 Če • · ·· φ ··♦♦· φ ·· • Φφ*
Příklad 19
Tabletová kompozice
N-Propargyl-1-(R)-aminoindan mesylát 7,81 mg
Předželatinovaný škrob NF 4 7,0 mg
Vodný roztok laktózy NF 66,0 mg
Mikrokrystalická celulóza NF 20,0 mg
Škrobglykolát sodný NF 2,99 mg
Mastek USP 1,5 mg
Stearát hořečnatý NF 0,7 mg
* Ekvivalent do 5,0 mg N-propargylaminoindanové báze
Přiklad 2Ó
Tabletová kompozice
N-Propargyl-1-(R)-aminoindan mesylát Vodný roztok laktózy Předželatinovaný škrob Mikrokrystalická celulóza Škrobglykolát sodný
- -Mastek-USP————
Stearát horečnatý NF
1,56 mg*
50,0 mg
36,0 mg
14,0 mg
2,14 mg
1,0 mg
0,5 mg * Ekvivalent do 1,0 mg N-propargylaminoindanové báze
01-2762-97 Če
Přiklad 21
Kapslová kompozice
N-Propargyl-1-(R) -aminoindan mesylát 5, 0 mg
Předželatinovaný škrob 10,0 mg
Škrob 44,0 mg
Mikrokrystalická celulóza 25, 0 mg
Ethylcelulóza 1,0 mg
Mastek 1,5 mg
Čištěná voda se přidala podle potřeb granulace.
Následující příklady, doprovodné tabulky a obrázky se týkají biologických experimentů, prováděných podle vynálezu.
Příklad 22
Inhibice MAO aktivity in vitro .Experimentální protokol
Zdrojem MAO enzymu byl homogenit krysího mozku v 0,3M sacharóz-y-,--kte-rý-se-odstřed’ov-al··· při- -600- g po dobu' 15' minut. Supernatant se naředil na přibližně 0,05M fosfátového pufru a pre-inkuboval postupnými zředěními sloučenin: R(+)-PAI, S(-)-PAI a racemické PAI; 20 minut při 37°c. Potom se přidaly 14C-značené substráty (2-fenylethylamin, dále jen PEA; 5-hydroxytryptamin, dále jen 5-HT) a v inkubaci se pokračovalo dalších 20 minut (PEA) nebo 30 až 45 minut (5-HT). Použité koncentráty substrátů tvořily 50 μΜ (PEA) a 1 mM (5-HT). V případě PEA se koncentrace enzymu zvolila
01-2762-97 Če • · * » « φ * · 0 0 0 4
0 · 00Φ000
0 4 0 »·· ·· «0 tak, aby se během reakce nespotřebovalo více než 10 % substrátu. Reakce se potom zastavila přidáním tranylcyprominu (do konečné koncentrace 1 mM) a inkubát se odfiltroval přes malou kolonu Amberlite CG-50, pufrovanou na pH 6,3. Kolona se promyla 1,5 ml vody, eluáty se odebraly a radioaktivní obsah se určil kapalinovou scintilační spektrometrií. Vzhledem k tomu, že aminové substráty zůstaly v plném rozsahu zachyceny v .koloně, radioaktivita v eluátu stanovila produkci neutrálních a kyselinových metabolitú vzniklých v důsledku MAO aktivity.
Aktivita MAO ve vzorku se vyjádřila jako procento kontrolní aktivity za nepřítomnosti inhibitorů, po odečtení příslušných kontrolních hodnot. Aktivita, použití PEA jako substrátu, stanovená za označila
substrátu, se
aktivita, stanovená za použití 5-HT jako označila jako MAO-A.
Výsledky
Inhibiční aktivita R(+)-PAI, S(-)-PAI a racemického PAI se stanovila odděleně in vitro a výsledky typických experimentálních běhů jsou znázorněny na obrázku 1 a 2. Celý experiment se _zopakoyal třikrát.________Konc.ent.ra.ee. inhibitoru, produkující 50% inhibici metabolizmu substrátu (IC-50), které se vypočetly z inhibičních křivek, jsou uvedeny v tabulce IB. Z těchto výsledků je patrné, že:
a) R(+)-PAI je dvakrát aktivnější než racemát v případ inhibice MAO-B;
b) aktivita R(+)-PAI pro MAO-B představuje pouze 1/6 800 aktivity pro MAO-A;
• · ·
01-2762-97 Če • · •t * ·· •· • * • li
c) aktivita S(-)-PAI představuje pouze 1/6 800 aktivity R(+)PAI v případě inhibice MAO-B, přičemž S(-)-PAI vykazuje malou nebo žádnou selektivitu mezi MAO-B a MAO-A.
Tabulka IA
IC-50 (nM) HODNOTY PRO INHIBICI MAO-A A MAO-B RACEMICKÝM
PAI A JEHO R( + ) A S(-) ENANTIOMERY V HOMOGENÁTU KRYSÍHO MOZKU IN VITRO
IC-50 (NM)
MAO-A MAO-B
S(-)PAI R(+)PAI Rac S(-) PAI R( + ) PAI Rac
26000 73 ' 140 17000 2, 5 5
Výsledky stejných experimentů, při kterých se však použil R(+) a S(-)MPAI (N-methyl-N-propargyl-l-aminoindan) jsou zaznamenány v tabulce IB. Každý z enantiomeru MPAI je méně selektivní pokud jde o MAO-A a MAO-B inhibici než R( + )PAI. Kromě toho je R( + )-MPAI, na rozdíl od R( + )-PAI, .pou.ze_.pětkr át _ akt i vnější.... ne ž__S (-jMPAI-. při. MAO-B-.dnh-ibici-.—............-—
R(+)-MPAI je v tomto testu přibližně 7 OOOkrát aktivnější než S(-)-PAI.
01-2762-97 Če ·· » « · • «··* • » ·«· · * « · · * · · t · · « * .···· « > · · · *· ·»« ·« *·
Tabulka 1B
IC-50 (nM) HODNOTY PRO INHIBICI MAO-A A MAO-B RACEMICKÝM
PAl A JEHO R( + ) A S(-) ENANTIOMERY V HOMOGENÁTU KRYSÍHO
MOZKU IN VITRO
IC-50 (NM)
Sloučenina: MAO-A MAO-B
S(-)MPAI '70 R(+)MPAI 3 S(-)MPAI 50 R( + )MPAI 10
Některé experimenty se rovněž prováděly za použití
humánních cerebrálních kortikálních tkání,· získaných
hodin po smrti a zpracovaných výše popsaným způsobem. Výsledky tohoto experimentu jsou znázorněny na obrázku 3, kde R(+)-PAI, S(-)-PAI a racemický PAl jsou definovány výše.
Příklad 23
Inhibice MAO aktivity in vivo: akutní ošetření
Experimentální protokol
Krysy (samečci odvození od Sprague Dawley) o hmotnosti 250+20 g se ošetřily jedním z enantiomerů nebo racemickou formou PAl intraperitoneální injekcí (ip) nebo orálně pomocí žaludeční sondy (po) a o hodinu, resp. o dvě hodiny, později se dekapitovaly. Skupiny tří krys se použily pro
·· · í · ·! • * * · · * • · · · • · ♦ ·
01-2762-97 Če • «··· ♦ · ♦ ♦ • · · · · • ··· • ·
··· * * · ··· ·· ··
50
každou dávkovou hladinu inhibitoru a MAO aktivita se
zjišťovala v mozku a v játrech za použití výše popsané
techniky. Množství proteinu v každé inkubaci se určilo pomoci Folin-Lowryho metody a enzymatická aktivita se vypočetla jako nmol metabolizovaného substrátu za hodinu inkubace pro každý mg proteinu. Aktivita MAO ve tkáních zvířat ošetřených inhibitory se vyjádřila jako procento enzymatické aktivity ve skupině kontrolních zvířat,. kterým bylo podáváno vehikulum (voda v případě orálního podání a 0,9% fyziologický roztok v případě ip injekce) a která byla utracena výše popsaným způsobem,.
Výsledky'
Žádná z dávkových hladin, použitých společně s inhibitorem účinných látek, neprodukovala znatelnou změnu chováni. Výsledky jsou znázorněny na obrázcích 4 až 11. Po
i.p. podání způsobila sloučenina R(+)PAI, podaná v dávce 0,5 mg/kg, 90% inhibici mozkové MAO-B aktivity. Stejná dávka způsobila pouze 20% inhibici MAÓ-A aktivity. Při orálním podání způsobila stejná dávka R(+)PAI 80% inhibici MAO-B a nebyla detekována žádná inhibice ΜΑΟ-Α. V podstatě shodné výsledky byly zjištěny v případě inhibice hepatické MAO, například mozkové MAO. Dávky, způsobující 50% inhibici MAO-A a MAO-B (IC-50), se vypočetly z inhibičních křivek a jsou uvedeny v tabulce 2. Tato data ukazují: (a) že MAO inhibiční aktivita R( + )PAI in vivo v těle krys zůstává zachována;, (b) že selektivita pro inhibici MAO-B, na rozdíl od MAO-A, je udržována R(+)PAI in vivo; (c) že je zachována mnohem větší aktivita (+)-enantiomeru, na rozdíl od (-)enantiomeru, in vivo; (d) že sloučeniny jsou po orálním v
··· ···
01-2762-97 Če podáni účinně absorbovány; a (e) že sloučeniny účinně procházejí hematoencefalickou bariérou a účinně inhibují mozkovou MAO. Skutečnost, že R(+)-PAI byl přibližně dvakrát účinnější než racemická sloučenina v případě inhibice MAOB, je odrazem extrémně nízké aktivity S(-)-PAI v případě inhibice MAO-B.,
Tabulka 2
IC-50 HODNOTY (mg/kg) PRO INHIBICI MAO-A a MAO-B R(+)-PAI,
S(-)-PAI NEBO RACEMICKÝM-PAI V TĚLE KRYSY PO INTRAPERITONEÁLNÍ INJEKCI (I.P.) NEBO ORÁLNÍM PODÁNÍ (P.O.)
IC-50 (mg/kg)
MAO-A MAO-B
Sloučenina: S (-) PAI R (+) PAI Rac S (-) PAI R( + )PAI Rac
I.P. mozek >10 1,2· 2,5 >10 0,07 0,22
I.P. játra >10 5 5 >10 0,06 0,11
P.O. mozek >10 >5 >5 >10 0,17 0, 29
P.O. játra >10 >5 >5 >10 0, 05 0,09
(Rac = racemický PAI)
Přiklad 24
Inhibice MAO aktivity in vivo: dlouhodobé léčení
Experimentální protokol
Krysy (specifikované v příkladu 23, 4 zvířata pro každou dávkovou hladinu) se ošetřily R(+)PAI nebo racemickou směsí, které jim byly podávány orálně jednou β · · • II «'I
01-2762-97 Če denně po dobu 21 dní ve třech dávkových hladinách (0,05, 0,1 a 0,5 mg/kg) a dvě hodiny po poslední dávce se zvířata dekapitovala. Aktivity MAO typu A a B v mozku a v játrech se určily způsobem popsaným v příkladu 23.
Výsledky
Denní dávka 0,1 mg/kg sloučeniny R( + )PAI produkovala příznivý stupeň selektivní inhibice, přičemž inhibice mozkové MAO-B je vyšší než 80 % a inhibice mozkové MAO-A je 20% a nižší. Při vyšší dávce, tj. při dávce 0,5 mg/kg denně, byla MAO-A stále inhibována méně než z 50 % (obr. 12 a 13) . Hepatická MAO vykazuje podobný stupeň selektivní inhibice (obr. 14 a 15), Sloučenina R{+)PAI byla opět účinnější než racemická směs, a to přibližně dvakrát. V případě mozkové MAO měl R(+)PAI vyšší stupeň selektivity pro inhibici MAO-B než racemická směs.
Tyto výsledky ukazují, že selektivita MAO-B inhibice může zůstat zachována i v případě déle trvajícího léčení těmito sloučeninami. Pokud jde o další nevratné inhibitory, stupeň inhibice enzymu je v případě dlouhodobého léčení vyšší, . než v případě podání jediné dávky účinné látky.
------Sloučenina' 'R’(fj-PAI ~ vykazuj’e lepší stupeň~sel“ekťíviťy' pro inhibici MAO-B než racemická směs.
01-2762-97 Če * ·
Příklad 25
Nevratná povaha MAO inhibice
Experimentální protokol
Skupinám, které vždy tvořily čtyři krysy, byla podána
i.p. injekcí jediná dávka sloučenina R( + )PAI (1 mg/kg) a zvířata se o 2, 6, 18, 24, 48 a 72 hodin později usmrtila. Aktivita MAO-B se určila výše popsaným způsobem v celých mozkových tkáních.
Výsledky
Výsledky jsou znázorněny na obr. 16. Maximální inhibice MAO-B se dosáhlo 6 hodin po injekci. 72 hodin po injekci se MAO aktivita vrátila pouze na 30 % kontrolní aktivity. Tento experiment ukazuje na nevratnou povahu MAO inhibice způsobené R(+)PAI.
Příklad 26
Zesílení účinku _ty_raminového presoru u_krysz__které__jsou při_ vědomí
Experimentální protokol
Krysy se anestetikovaly směsí pentobarbitalu (30 mg/kg) a chloralhydrátu (120 mg/kg) intraperitoneální injekcí. Levá krční tepna a jugulární žíla se kanylovaly tenkou polytenovou trubicí (arterie) nebo tenkou silikonokaučukovou trubicí, spojenou s polyethylenovou trubicí
a 01-2762-97 Če 54 • · * • ···· · • · • · · * • « · · ······ • · ♦ · · *« ··· ·· ··
(žíla), jejíž vzdálený konec se zavedl pod kůži v upínacím
místě za krkem. Trubice se naplnila heparinizovaným
fyziologickým roztokem a ucpala tenkou ocelovou tyčkou. Zvířata se ošetřila 20 mg chloramfenikolu intramuskulární injekci a přes noc nechala zotavit po operaci. Následující den se krysy umístily do vysokostěnných beden, které jim umožnily volný pohyb. Arteriální katétr se připojil pomocí 100 cm dlouhé, fyziologickým roztokem naplněné, polyethylenové hadičky s malým průsvitem k tlakovému převodníku a venózní katétr se spojil s lml injekční jehlou pomoci podobně dlouhé hadičky, která stejně jako injekční jehla obsahovala roztok tyraminhydrochloridu ve fyziologickém roztoku (1 mg/ml). Potom následovala λ vyrovnávací 30 až 40minutová perioda, aplikace tyraminových injekci (50 nebo 100 pg) a zaznamenal se krevní tlak. Mezi jednotlivými injekcemi se zachoval alespoň patnáctiminutový interval, po kterém se krevní tlak vrátil na kontrolní hodnoty. Stanovily se odezvy kontrolního presoru, načež se intraperitoneálně injektovala jedna z účinných látek a následující 4 hodiny se zaznamenával průběh tyraminových odezev. Určila se plocha pod získanou křivkou a poměr této plochy po ošetření ku ploše před ošetřením a ku ploše získané 1 až 3 hodiny po injekci se vypočetl za použití
-....... .---------průměru-3„až-.-4_.hodno-t-,--získaných-během--kontrolní--periody--------------------Výsledky
Výsledky jsou znázorněny v tabulce 3. Sloučenina R(+)PAI při dávce 1 mg/kg (která způsobuje úplnou inhibici MAO-B v mozku á játrech a 40 až 50% inhibici MAO-A v těchto tkáních) nezpůsobila žádné významnější zesílení tyraminové
01-2762-97 Če • · v • ♦· · · odezvy. Při vyšší dávce, tj. 5 mg/kg R( + )PAI (která způsobila extenzivnější inhibici MAO-A v mozku a periferii), došlo k významnému zesíleni tyraminové presorové odezvy, která měla podobný rozsah jako v případě použití stejné dávky deprenylu a menší rozsah než v případě použití clorgylinu (při dávce, která inhibuje hepatickou MAO-A aktivitu více než z 85%).
Tabulka 3
POSÍLENÍ TYRAMINOVÉHO PRESOROVÉHO ÚČINKU U KRYS PŘI
VĚDOMÍ, DOSAŽENÉ POMOCÍ ΜΆ0 INHIBITORŮ
Inhibitor Dávka (mg/kg) Počet krys (n) Poměr plochy pod křivkou presorové odezvy po ošetření/před ošetřením SEM*
Fyziologický roztok 12 1, 25 0, 28
Clorgylin 2 6 10,39 2,13
(-)Deprenyl 1 2 1,15
(+)Deprenyl 5 3 2,36 0,16
R( + ) PAI 1 3 1, 38 0,7
R(-)PAI' ------------------ ----5 ... ... -· 3-...... —------3-,-49....... ·. ... 0,98 .
*SEM = standardní odchylka
Z tohoto experimentu lze usuzovat, že sloučenina R(+)PAI nezpůsobuje žádné zesílení tyraminového presorového účinku při dávce, která účinně inhibuje MAO-B.
··* ···
01-2762-97 Če ·· ·
Přiklad 27
Potlačeni MPTP-indukované dopaminergické toxicity pomocí
R(+)PAI
1-methylfenyl-l, 2, 3, 6-tetrahydropyridin (MPTP)· je neurotoxin, který u několika savčích druhů .včetně myší poškozuje nigrostriatální dopaminergické neurony a u lidi a primátů způsobuje Parkinsonův syndrom. Důležitým krokem mechanizmu jeho neurotoxicity je konverze MPTP na toxický metabolit, l-methyl-4-fenylpyridiniový iont (MPP+). Tato reakce se katalýzuje enzymem MAO-B a pravděpodobně probíhá vně dopaminových neuronů, zejména v glii. Je známo, že MPTP představuje jak substrát, tak nevratný inhibitor MAO-B. Předošetřeni pokusných zvířat MAO-B inhibitory, napříkladdeprenylem nebo pargylinem je chrání před MPTP indukovaným poškozením nigrostriatálních neuronů, protože dochází ke blokaci oxidační konverze MPTP na MPP+. Progresivní nigrostriatální degenerace u Parkinsonovy choroby může být. způsobena vystavením působení exogenních MPTP podobných neurotoxinů, odvozeným z okolního prostředí. V těchto případech je další silnou indikací iniciace dlouhodobějšího léčení MAO-B inhibitory již ve velmi ranných stadií Parkinsonovy choroby v přesvědčení, že toto léčení bude neutralizovat škodlivé účinky těchto ještě domnělých MPTP toxinů a tak zastaví nebo zpomalí vývoj choroby. Za úspěšný MAO-B inhibitor účinné látky je v současné době považován inhibitor, který má schopnost blokovat MPTP-indukované poškození nigrostriatálních dopaminergických neuronů in vivo. (-) a ( + ) enantiomery PAI se tedy testovaly z hlediska jejich schopnosti bránit nebo tlumit MPTP-indukované striatál-dopaminové deplece u myší.
01-2762-97 Če
Expresní protokol
Samečci černé myši C57 (o hmotnosti 20 až 25 g) se (a) injektovali MPTP.HC1 (30 mg/kg rozpuštěný v destilované vodě, s.c.) nebo samotným vehikulem, nebo se jednu hodinu po předošetření injektovali (-) nebo (+)isomerem PAI (2,5 mg/kg, i.p.) nebo deprenylem (5 mg/kg i.p.) a (b) dekapitulují o pět dní později. Mozky se odstranily a corpora striata se rozřezala na ledem chlazené skleněné desce a zmrazila na suchém ledu. Striatální tkáně se homogenizovaly v 0,1 M kyselině perchlorové a deproteinizované alikvotní. podíly, obsahující dihydroxybenzylamin jako vnitřní standard, se použily pro analýzu dopaminu a jeho hlavního metabolitu, kyseliny .'.v::.
3,4-dihydroxyfenyloctové (DOPAC), za použití HPLC s elektrochemickou detekcí.
Výsledky
Tabulka 4 ukazuje výsledky tohoto experimentu. Při ošetření samotným MPTP došlo k produkci značných striatáldopaminových (DA) a DOPAC deplecí. Ošetření (-) a (+) -enan-t-iomer-y——PAI-—nebo—-(-=-)—deprenylem—neovlivnilo.—DA_.____: koncentrace ve striatiu. Předošetření (-) isomerem PAI neovlivnilo MPTP-indukovanou DA a DOPAC hladinu produkovanou toxinem. Při dávce 2,5 mg/kg odpovídala účinnost ( + )PAI účinnosti (-) deprenylu (5 mg/kg), pokud jde o jeho ochranný účinek.
• «
01-2762-97 Če
Tabulka 4
VLIV PŘEDOŠETŘENÍ (-) A (+) ENANTIOMERY MAO-B INHIBITORU
PAI NA'STRIATÁLNÍ DA A DOPAC DEPLECE, INDUKOVANÉ MPTP U
MYŠÍ IN VIVO
DA DOPAC (mu/mg proteinu)
Kontrolní 162,8 ' + 7,2 8, 4 + 0,5
MPTP 53,1 + 6 ,2 3, 2 + 0,3
(-)PAI 174,0 + 4,8 7, 5 + 0,2
(-)PAI + MPTP 53,4 + 6 ,9 7, 0 + 0, 6
( + ) PAI 185, 0 + 6,9 3, 3 + 0,3
( + )PAI + MPTP 177 + 14 ,4 6, 0 + 0,3
(-)Deprenyl 170, 6 + 7,1 5, 6 + 0,3
(-)Deprenyl + MPTP 197,0 + 8,0 6, 4 + 0,5
Výše uvedené hodnoty pro DA a DOPAC jsou vyjádřeny jako průměr + standardní odchylka a počet krys n = 7 až 11 v každé skupině.
Tyto výsledky naznačují, že R(+)PAI je vynikajícím MAO-B inhibitorem in vivo a má zvláště velký potenciál pro léčení Parkinsonovy choroby.
Je třeba poznamenat, že i když byl vynález popsán s odkazem na výše zmíněné příklady, doprovodné tabulky a obrázky, neomezuje se pouze na tyto příklady. Rovněž jsou možné různé modifikace a aplikace vynálezu. (R)-PAI lze při
01-2762-97 Če • · v léčeni Parkinsonovy choroby například zkombinovat synergickým způsobem s α-tokoferolem (derivát vitaminu E).
Přiklad 28
Vliv PAI enantiomerů na amfetaminem indukované stereotypní chování u stárnoucích krys
Je známo, že amfetamin indukuje stereotypní chování (Sulser F. a Sanders-Bush E., Ann. Rev. Pharmacol., 11, 209-230 (1971)) mobilizaci endogenního dopaminu. Amfetamin není metabolizován MAO-B. Inhibice MAO-B účinným inhibitorem a podáni amfetaminu způsobí uvolnění dopaminu,. který nepodlehne degradaci inhíbovanou MAO-B. Takže po podání amfetaminu a účinného MAO-B inhibitoru se očekává, že dojde ke zvýšení synaptického dopaminu, které povede ke zvýšení stereotypního chování a tedy k posílení amfetaminového účinku. Rozsah tohoto chování se hodnotí na základě počtu laterálních pohybů hlavy během jednominutové časové periody.
Experimentální protokol
Testovaná sloučenina se podávala v dávce 0,5 mg/kg/den v pitné vodě 24 hodin před tím, než došlo k hypoxii (92 % dusíku + 8 % kyslíku po dobu 6 hodin) . Potom se injektoval s.c. amfetamin v dávce 0,5 mg/kg. 0 45 minut později se počítaly laterální pohyby hlavy.
01-2762-97 Če ·
*··
Výsledky tohoto experimentu jsou shrnuty v tabulce 5.
Výsledky
Tabulka 5
VLIV PAI ISOMERŮ NA AMFETAMINEM-INDUKOVANÉ STEREOTYPNÍ
CHOVÁNÍ U STÁRNOUCÍCH KRYS (KONTROLNÍCH A POŠKOZENÝCH
HYPOXIÍ)
Hodnoceni léčeni , . stereotypního chování
Skupina ------—-----------
Kontrolní (6) — 87 + 10
Kontrolní (5) (+) PAI 126 + 16*
Kontrolní (4) (-)PAI 94 + 18
Hypoxií poškozená (5) - 93 + 12
Hypoxií poškozená (6) ( + ) PAI 143 + 6*
Číslo v závorkách označuje počet testovaných zvířat * p<0,001, vztaženo k neošetřené, hypoxií postižené, skupině-nebo-neošetřené-kontrolní-skupině—---.—.——----Výsledky v tabulce 5 naznačují, že (+)PAI způsobil podstatné zvýšení amfetaminem indukovaného stereotypního chování jak u krys poškozených hypoxií, tak u kontrolních krys. (-)PAI byl v tomto ohledu zcela inaktivní. Tyto in vivo výsledky potvrzují předchozí biochemická zjištění, že ( + )PAI je aktivním inhibitorem MAO-B v mozku, zatímco (-)PAI je v tomto ohledu inaktivní.
01-2762-97 Če
Příklad 29
Vliv R(+)-PAI na zlepšení nebo obnovu paměti
Čerstvě narozená mláďata krys se podrobila krátké epizodě anoxie a potom se opět nechala normálně růst, čímž se u nich vyvinulo dlouhotrvající poškození paměti (Speiser a kol., Behav. Brain Res., 30 89-94 (1988)). Toto poškození paměti je vyjádřeno jako horší výkon v testu vyčkávání před vstupem do černé komory.
Účinek R(+)PAI a S(-)PAI na zlepšení nebo obnovu paměti se stanovil v testu vyčkávání před vstupem do černé komory. Pokud je účinná látka opravdu účinná, potom ,.*fprodlouží latenci odezvy na vstup do tmavé komory, ve které . ...
utrpěly testované krysy před prováděním experimentu elektrošok. Latence maximální odezvy je 300 sekund.
Experimentální protokol
Mladé krysy se podrobily, způsobem popsaným v příkladu 27, postnatální anoxii. R(+)PAI nebo S(-)PAI se podával podle jednoho z následujících protokolů.
Protokol A
Kojícím matkám se podávala dávka jednoho z izomerů 1 až 1,5 mg/kg/den v pitné vodě, dokud nepřestaly kojit, tj. 21 dní. Potom' se odstavení potomci přímo ošetřovali, po dobu následujících 20 dní, stejnou dávkou účinné látky. Ošetření se ukončilo po čtyřiceti dnech a test se prováděl
01-2762-97 Če ·*·· * ··’* ··’ šedesátý den, tj. 20 dní po podání poslední dávky účinné látky.
Protokol B
Dávka, která se zredukovala na 0,5 mg/kg/den, se podávala kojícím matkám dokud nepřestaly kojit, tj. 21 dní a následně přímo mladým krysám a to až do šedesátého dne, kdy se provedl test.
Test vyčkávání před vstupem do černé komory
Pro tento test se použilo zařízení tvořené osvětlenou komorou, která je spojena s tmavou komorou a posuvnými dveřmi, oddělujícími tyto dvě komory. Při výcviku se krysa umístila na 30 sekund do osvětlené komory a potom se otevřely dveře oddělující obě komory. Krysa se pohybovala do tmavé komory s latencí, která se zaznamenala. Po vstupu krysy do černé komory se dveře zavřely a krysa prodělala třísekundový elektrošok 0,3 mA, vedený do nohou.
Retence (paměť) se stanovila opakováním, testu po 4’8 hodinách· -zaznamenáním— latence, -která- -předcházela'— pohybu ze světla do tmy, přičemž za maximální latenci se považovalo 300 sekund.
Výsledky
Výsledky těchto experimentů jsou shrnuty v tabulce 6.
• 0 ♦ 0 00 • 00
01-2762-97 Ce
Tabulka 6
ÚČINEK PAI ISOMERŮ NA DOBU KOMORY U MLADÝCH VYČKÁVÁNÍ PŘED KRYS (60DENNÍ VSTUPEM DO ČERNÉ KRYSY)
Protokol A.
Skupina Ošetření Před elektrošokem Po elektrošoku
Kontrolní - 49 ± 13 201 ± 111
Kontrolní ( + ) PAI 49 ± 19 220 ± 100 (+9%)*
Kontrolní (-)PAI 48 ± 13 192 ± 116
Poškozená anoxií - 45 ± 11 183 ± 109
Poškozená anoxií ( + ) PAI 49 ± 10 239 ± 99 (19%)*
Poškozená anoxií (-)PAI 55 ± 27 179 ± 123
Protokol B
Skupina Ošetření Před elektrošokem Po elektrošoku.
Kontrolní - 53 ± 20 104 ± 101
Kontrolní ( + ) PAI 48 ± 11 128 ± 119 (.+23%)*
Poškozená anoxií - 45 ± 8 119 + 105
P.o.š.ko.z.ená.anoxií ___(+_)_PAI_._ 52 + 12 137 + 12.6 (+15-%-) * .
.Poškozená anoxií (-)PAI 48 ± 19 112 ± 112
Obrázky reprezentují latenci pro vstup do tmavé komory (v
I sekundách), ve které krysy poprvé utrpěly elektrošok * Naznačená procentická zvýšení jsou vztažena k hodnotám odpovídající anoxické nebo kontrolní skupiny
01-2762-97 Ce
»·· • · · • ·4 Η» • * 00 ··
Výsledky experimentů naznačují, že ( + )PAI je na rozdíl od (-)PAI účinný, pokud jde o zlepšení paměti anoxií poškozených krys a kontrolních krys. Látky, účinné v tomto testu, jsou považovány za látky, které mohou být účinně použity při léčení různých poškození paměti, demence a zejména při léčení senilní demence Alzheimerova typu.
Příklad 30
Účinek R(+)PAI na anoxií indukovaný hyperaktivní syndrom u juvenilních krys
Krysy, které se podrobily postnatální anoxií a. následně nechaly růst za normálních podmínek, vykazovaly ve věku 10 až 42 dní zvýšenou motorickou aktivitu na otevřeném poli (Hertshkowitz a kol., Dev. Brain Res., 2' 145-155 (1983)).
Úkolem tohoto testu bylo stanovit vliv R( + )PAI a S(-)PAI na tento hyperaktivní syndrom.
Experimentální protokol
Anoxie se provedla na mláďatech krys první postnatální den. Tyto krysy se umístily do skleněné komory a na 25 minut se vystavily 100% dusíku. Potom se resuscitovaly přerušovanou masáží, lehce aplikovanou na hrudník, a následně vrátily ke svým matkám. Kontrolním krysám bylo poskytováno stejné ošetření s tou výjimkou, že se namísto dusíku použil kyslík.
01-2762-97 Ce I ‘T * : · í > ..·
R(+)-PAI nebo S(-)-PAI (0,5 mg/kg/den) se podávaly kojícím matkám v pitné vodě, takže se přenesly na potomky prostřednictvím mléka.
Pohyb se měřil v šesti klecích, zcela sledovaných počítačem (28 x 28 cm), zaznamenáním počtu přeběhů v průběhu dané časové periody. Přeběhy .mřížky infračervených paprsků ve 4cm intervalech iniciovaly elektrické impulzy, které přijímal počítač. Záznamy pohybové aktivity se provedly ve věku 15 a 20 dní, a to při patnáctiminutové sledované periodě.
Výsledky
Výsledky experimentů jsou shrnuty v tabulce 7.
• « · ·· · *··
01-2762-97 Če
Tabulka 7
VLIV JEDNOTLIVÝCH ENANTIOMERŮ NA ANOXIÍ-INDUKOVANÝ
HYPERAKTIVNÍ SYNDROM
Skupina
Kontrolní
Kontrolní
Poškozená
Poškozená
Poškozená anoxií anoxií anoxií
Ošetření (+) PAI ( + )PAI (-) PAI
15denní krysy
414
254
482
276
334 ± 192(11) ± 149(ll)c ± 119 (7) ± 186(15)a ± 196 (5)
20denní krysy
808 ± 212(12)
719 ± 110(13)
858 ± 96 (9)
737 ± 150(16)c
778 ± 232 (6)
Čísla v závorkách znamenají počet testovaných zvířat
Hodnoty znamenají počty přeběhů mřížky infračervených paprsků v kleci během 15 minut a p<0,001 vztaženo k anoxií podrobené skupině b p<0,05 vztaženo k anoxii podrobené skupině c p<0,05 vztaženo ke kontrolní skupině
Tyto výsledky naznačují, že dlouhodobější orální léčení R(+)-PAI při dávce 0,5 mg/kg, podávané kojícím matkám a při kojení prostřednictvím mléka potomkům, podstatně zlepšuje hyperaktivní syndrom. Z těchto zjištění vyplývá, že R(+)-PAI může být účinně použit jako účinná látka při léčení dětí trpících hyperaktivním syndromem.
01-2762-97 Če
Přiklad 31
Stabilita je důležitým faktorem při volbě optimální soli jako terapeutické účinné látky. Různé soli mohou ovlivňovat fyzikálně-chemické a biologické charakteristiky účinné látky a mohou mít značný vliv na její celkové
vlastnosti Gould P.L., (Berge S.M. a kol., J. Int. J. Pharmaceutics, Pharm. Sci. 66, 1 (1977);
33, 201 ( 1986))
Experiment
Syntéza PAI solí
Roztok příslušné kyseliny (1 mol-ekv.) se přidal za stálého míchání do roztoku PAI 2-propanolu (Ar, BHT). Vzniklá sůl se ve 2-propanolu (1 mol-ekv.) ve přefiltrovala,
promyla 2-propanolem a etherem a vysušila za sníženého tlaku. Výtěžky se pohybovaly v rozmezí 70 až 90 %. Výjimka byla učiněna při přípravě PAI acetátu, kdy se jako rozpouštědlo použil ether.
Analytické metody
Chromatografické separace se prováděly za použití B 5 μ 125x4 mm kolony Lichrosphere 60 RP (Měrek), HPLC (Jasco·BIP-1) vybavené L-4200 UV-Vis detektorem (MerckHitachi). nastaveným na 210 nm a D-2500 chromatointegrátorem (Merck-Hitachi). Eluční činidlo a ředidlo byly tvořeny z 80% destilovanou vodou a z 20% acetonitrilem (HPLC kvality) a 0,07 M kyselinou perchlorovou, nastavenou na pH 2,5 vodným roztokem amoniaku. Rychlost průtoku kolonou
01-2762-97 Če dosahovala 1 ml/min, roztok příslušné PAI soli měl koncentraci 250 μ5/πι1 a do chromatografického systému se injektovalo 20 μΐ roztoku.
Rozmezí tavné teploty se měřilo pomocí automatického zařízení (Mettler FP 80) a termo-gravimetrická analýza se prováděla na přístroji Mettler TA 3000 při rychlosti 10°C/min v aplikovatelném rozmezí. Rozpustnost se určila příslušným naředěním supernatantu z vodného roztoku nasycené PAI soli a měřila na UV-Vis spektrofotometru UVIKON 941 (Kontron). Která solná forma (mono- nebo di-sůl) vznikla se zjistilo elementární analýzou za použití standardního vybavení pro stanovení C, Η, N a S. Hodnota pH se měřila v 1% vodném roztoku PAI solí.
Výsledky
Vlastnosti různých solí jsou shrnuty v tabulce 8.
• φ * · ··« ♦·♦
01-2762-97 Če
Tabulka 8
FYZIKÁLNĚ-CHEMICKÉ VLASTNOSTI PAI SOLÍ
PAI-sůl mol. hm. pH Rozpustnost mg/ml Tavné rozmezí (eC) %Hm. ztráta Solná forma
vinan 492 5,5 33 176, 2-177,3 LT 0,1 di
mesylát 267 4,3 635 156,8-157,6 0,1 mono
maleinát 287 4,0 NLT 1000 87,2-87,8 0,1 mono
SUlfát 440 3, 9 485 159,4-161,1 3,2 di
chlorid 207 4,2 238 177,0-180,0 LT 0,5 mono
tosylát 343 4,4 60-70 129,3-129,9 LT 0,1 mono·
fumarát 287 3,5 95 125,4-126,2 0,2 mono
fosfát n.a. 7,0 NTL 720 109,5-110,4 n.a. n.a..
esylát 279 2,4 NTL 300 n.a. n.a. mono
octan 6,1 NTL 720 69,2-69,7 0,4 mono
231
n.a. = není dostupná
Studie, porovnávající stabilitu solí, se prováděly za urychlujících podmínek: I) ohříváním na 80°C po dobu 72, 96 nebo 144 hodin; a II) ohříváním na refluxní teplotu v isopropanolu po dobu 30 hodin. Vyvinuté degradanční produkty se měřily HPLC a potvrdily pomocí TLC. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 9, přičemž relativní retenční doba (vztažená k PAI píku; RRT) je vyjádřena jako procento plochy, vztažené k celkové integrované píkové ploše.
01-2762-97 Če
Tabulka 9
DEGRADAČNÍ PRODUKTY VYVINUTÉ V PAI SOLÍCH ZA ZRYCHLENÝCH PODMÍNEK
Sůl 80°C/72 hod 8O°C/144 hod Reflux v iPrOH/30
RRTa %b RRT % RRT %
sulfát NDC ND ND ND - 0, 47 0,22
0, 60 0, 72
fosfát 0, 60 0,22 0, 60 0, 57 0, 60 2, 62
0, 74 0, 21
1, 84 0,20
1, 98 0,73
chlorid ND ND ND ND 2, 23 0,71
mesylát ND ND ND ND 0, 60 0, 08
maleinát 0, 60 0, 41 n.a. 0, 60 2,17
1,27 0,50 0, 65 1,35
1, 48 0, 33 1, 29 0, 59
1, 81 0,10 1, 42 1, 30
3, 07 1, 44 150 0, 16
4, 16 0, 10 1, 83 0, 18
4, 84 7,76 1, 98 0,23
4, 09 0, 65
octan 0, 44 0, 10 n.a. 0, 60 6,74
0, 60 2,56 0,74 0,35
0,73 0713’ ‘ 1, 76 0,33
1,29 0,71 1, 84 0,16
1,55 1,06 1, 99 4,17
1,75 21, 85 3, 60 0,27
1, 96 3,33
2,15 0, 08
2,32 0,15
2, 83 0,15
3,54 . 1,82
esylátd ND ND 0,85 0,26 ND ND
1, 96 0,31
01-2762-97 Če omezení kvantifikace = 0,08%
n.a. = není dostupné a Relativní retenční čas (vztaženo k PAI píku) b Plošné procento vztažené k celkové integrované píkové ploše c Množství detekovaných nečistot d Ethylsulfátová sůl
Soli se předložily vizuální kontrole barvy a formy. Zjištění jsou shrnuta v tabulce 10.
Tabulka 10
VZHLED PAI SOLÍ ZA DESTRUKČNÍCH PODMÍNEK
Sůl 80eC/72 hod 80°C/96 hod 8O°C/144 hod Reflux v iPrOH/30 hod
sulfát Ne zcela n.a. Ne zcela Hnědý
bílý prášek bílý prášek prášek
fosfát Hnědavý n.a. Hnědý Hnědý
prášek prášek prášek
chlorid Bílý prášek n.a. Bílý prášek Ne zcela
bílý prášek
mesylát Bílý prášek n.a. Bílý prášek Bílý prášek
maleinát Hnědá Hnědá n. a. Hnědá
tavenina tavenina
esylát Hnědavá n.a. Tmavě hnědá Tmavě hnědá
tavenina tavenina tavenina
n.a. = nedostupný
01-2762-97 Če
Tyto studie ukazují, že síran, esylát a mesylát vykazují oproti ostatním solím, díky své dobré rozpustnosti a chemické, stabilitě, značné výhody. Z těchto tří solí je díky své vynikající stabilitě, a to i za destrukčních podmínek, nejvýhodnější solí mesylát.
Příklad 32
Zvrat haloperidolem-indukované katalepsie u myší
Samečci ICR myší, o hmotnosti 25 až 30 g, se předošetřili některou z následujících účinných látek: fyziologickým roztokem, (R)-PAI mesylátem nebo recemickým PAI mesylátem. Všechny účinné látky se podávaly i.p., v objemu 0,2 ml. O dvě hodiny později se v dávce 6 mg/kg v objemu 0,1 až 0,2 ml injektoval s.c. haloperidol. Testy pohybové koordinace se prováděly 3 hodiny po podání haloperidolu, t j. 5 hodin po podání předpokládaných ochranných účinných látek.
Testy pohybové koordinace a rigidity se kvantifikovaly podle tří různých parametrů: (a) podle schopnosti přejít po délce horizontální tyč 80 cm dlouhou; (b) podle schopnosti sešplhat obličejem směrem dolů vertikální tyč 80 cm dlouhou; (c) podle setrvání bez pohybu v nepřirozeném sedu, při kterém je břicho myši tlačeno proti „zdi. Úplný výkon, jako v případě haloperidolem neošetřených myší, je dán čtyřmi body v každém testu, nebo dvanácti body ve všech testech. Za slabý výkon jsou považovány jeden až tři body. Klíč k hodnocení je uveden v tabulce 9A. Vlivy různých činidel při antagonizaci haloperidolem-indukované katalepsie jsou uvedeny v tabulce 11. Tři hodiny po podání
01-2762-97 Če haloperidolu dosáhla (R)-PAI mesylátem udělená ochrana proti haloperidolu, podanému v dávce 5 až 15 mg/kg, vrcholu při 7,5 až 10 mg/kg (hodnocení aktivity = 94 % kontrolního fyziologického roztoku). Racemický PAI mesylát uděloval příslušnou ochranu, pokud se podal v dávce 7,5 až 15 mg/kg a nebyl aktivní při dávce 5 mg/kg. Z obrázku 17 je patrné, že profil dávka-účinek (R)-PAI mesylátu nebo racemického PAI je takový, že při zvýšení nad hodnotu 10 mg/kg dojde ke snížení účinku, a že racemická směs má obecně nižší účinnost. To znamená, že racemický PAI mesylát v dávce dvakrát vyšší než (R)-PAI mesylát bude vždy méně účinný než uvedený (R) enantiomer.
Zvrat α-MpT-indukované hypokinese u krys
Předpokládá se, že účinná látka α-MpT inhibuje tvorbu L-DOPA z tyrosinu a tedy tvorbu samotného dopaminu. Nedostatek CNS dopaminu je vyjádřen jako hypoaktivita. Šestiměsíční samečci krys Wistar (Harlan Orkack, UK) se předošetřili solným roztokem, (R)-PAI mesylátem nebo Rac PAI mesylátem, které se podávaly v naznačených dávkách. O dvě hodiny později jim byl podán i.p. α-MpT v dávce 100 mg/kg —v 0, 3 až 0, 5 ml - Kontrolním krysám byl- -podán------fyziologický roztok. Potom se po dobu deseti hodin zaznamenávala motorická aktivita v počítačem sledované kleci. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 12 a znázorněny na obrázku 18. Při dávce 2 mg/kg (R)PAI mesylát obnovuje přibližně z 90 % hladinu aktivity, vztaženo k aktivitě krys ošetřených fyziologickým roztokem. Rac PAI mesylát nebyl v tomto ohledu aktivní. V druhém případe měl profil křivky, vyjadřující závislost účinku na dávce, zvoncovitý tvar, z
01-2762-97 Če ·· ♦ • ♦ «·* « ζ X ’· i i i · * . a » · ······ . . · · * ·· *·· ·· ··
74
čehož vyplývá snížení účinku při zvýšení dávky nad 2 až
5 mg/kg. Při 5 mg/kg Rac PAI mesylát nemohl dosáhnout
hladiny účinnosti srovnatelné s účinností. (R)-PAI mesylátu podaného v dávce 2 mg/kg.
Z těchto měření vyplývá, že (R)-PAI mesylát a Rac PAI mesylát nesdílí podobný vzor aktivity při obnově normokineze u myší ošetřených haloperidolem a u krys ošetřených α-Μρϊ. V případě všech analyzovaných dávek byl (R) -PAI mesylát vždy účinnější než Rac PAI mesylát, podaný v odpovídající dávce. Rovněž maximální účinnost Rac PAI mesylátu byla vždy nižší než maximální účinnost (R)-PAI mesylátu. Takže Rac PAI mesylát je při dané dávce vždy méně účinnější než (R)-PAI mesylát při poloviční dávce. Zdvojením dávky Rac PAI mesylátu vzhledem k (R)-PAI mesylátu se nedosáhne účinku, který odpovídá účinku (R)-PAI mesylátu.
Farmakologicky nelze Rac PAI mesylát považovat za směs tvořenou z 50 % účinnou složkou, kterou je (R)-PAI mesylát, a z 50 % inertním materiálem, jakým je ředidlo. Přítomnost (S) -PAI v Rac PAI mesylátu má nežádoucí vliv na účinnost (R)-PAI, což vede k více jak dvojnásobnému snížení účinnosti. Snížení- může být přímo důsledkem nežádoucího 'vlivu ’(S)-PAI na behaviorální parametry. ’ ......
01-2762-97 Če I * ! í ·«« · ·· ···
Tabulka 11
ZVRAT HALOPERIDOLEM-INDUKOVANÉ KATALEPSIE U MYŠÍ, DOSAŽENÝ PŘI APLIKACI (R)-PAI MESYLÁTU A RACEMICKÉHO MESYLÁTU
Myším se podaly jednotlivé testované účinné látky i.p. v naznačených dávkách. O dvě hodiny později byl myším, způsobem popsaným v textu, podán haloperidol. Uvedené dávky jsou zamýšleny pro volnou bázi.
(R)-PAI mesylát Rac PAI mesylát
Dávka mg/kg Hodnocení + SEM n % kontroly Hodnoceni + SEM n % kontroly
1,8 7,2±1 6 60 7,0±0,6 6 59
3,0 6,4±0,5 6 60 5,9±0,7 6 49
5,0 8,7±0,9* 6 73 6,4±0,4 6 53
7,5 ll,0±0,4*** 5 92 9,4±0,8++ 6 78
10 11,3+0,3*** 6 94 9,2±0,6*** 6 77
15 10,8+0,5*** 5 90 8,8+0,8*** 6 73
Kontrolní 12±0 12 100 fyziologický r ozt ok ______. . _______
Samotný 6,6+0,3 16 59
haloperidol
Statistická hodnota vzhledem k samotnému haloperidolu: *p<0,05; **p<0,01; **p<0,001 se určila pomocí
Studentova „t testu.
Hodnocení pro (R)-PAI se značně liší od hodnocení pro racemický PAI při dávce 5 mg/kg p<0,05; při dávce 10 mg/kg p<0,01; a při dávce 15 mg/kg p<0,05.
»
01-2762-97 Če • · ·« • ♦ · • ·>4 ·♦ • ·
Tabulka 11A
KLÍČ PRO HODNOCENÍ HALOPERÍDOLEM-INDUKOVANÉ KATALEPSIE
U MYŠÍ A JEJÍHO ZVRATU -DOSAŽENÉHO RŮZNÝMI ČINIDLY
Vertikální tyč:
Není schopna uchopit tyč nohama
Je schopna uchopit tyč, ale sklouzne z tyče
Je schopna uchopit tyč, částečně klouže, částečně slézá dolů
Je schopna uchopit tyč, slézá dolů za použití všech čtyř nohou
Horizontální tyč:
Není schopna uchopit tyč, padá dolů
Je schopna uchopit tyč, ale není schopna udělat na tyči více než dva kroky
Je schopna uchopit tyč a přejít půlku tyče
Je schopna uchopit tyč á přejít celou tyč
Výdrž v klidu, v sedě proti stěně:
Nehybnost delší než 5 minut
Nehybnost 3 až 5 minut
Nehybnost 1 až 3 minuty
Nehybnost 0,1 minuty
V případě, že se chování pohybovalo někde na rozhré dvou kategorií, například na rozhraní kategorie 2 a 3, kryse udělilo hodnocení 2,5.
V W ·» · 9 a ««·* · · » ♦ * 1 *
9 · ♦ ·♦ ··· Φ·*
01-2762-97 Če
Tabulka 12
OBNOVA POHYBOVÉ AKTIVITY U KRYS, OŠETŘENÝCH α-METHYL-p-TYROSINEM (α-MpT) PŘI DÁVCE 100 mg/kg i.p.
t · • · ΦΟ
Krysám se podaly testované účinné látky i.p. v naznačených dávkách. Po dvou hodinách jim byl podán α-MpT a bezprostředně potom se umístily do klecí, ve kterých se určovala jejich celková pohybová aktivita, která se automaticky zaznamenávala po dobu deseti hodin, způsobem popsaným v textu.
Dávka (R)-PAI mesylát Rac PAI mesylát
Hodnocení n % kontroly Hodnocení n % kontroly
mg/kg + SEM + SEM
2 14 132**11457 7 89 9,035+829 6 57
5 12 893*+L 869 7 81 10 926*1820 8 69
7,5 6 6791414 4 42 9 6981557 4 61
Kontrol- 15 862+1 424 5 100 ní fyziologický roztok
Samotný g 108***1810 6 51 a-MpT
Statistická hodnota podlÁ^Študentóva „t'testu:“*pk0, 01f ***p<0,001 pro testované účinné látky + α-MpT vs. a-MpT samotný a-MpT samotný vs. kontrolní fyziologický roztok
Hodnocení pro (R)-PAI se značně liší od hodnocení pro racemický PAI při dávce 2 mg/kg p<0,01.
01-2762-97 Če
Účinky (R)-PAI mesylátu na krysy při vnitřním úrazu hlavy • · * ·
9999 9 · ··
Příklad 33
Metody
1. Indukce úrazu
Úraz hlavy se u samečků krys indukoval za etherové anestézie dobře kalibrovaným závažovým zařízením, které dopadlo na exponovanou část lebky, která pokrývá levou mozkovou hemisféru ležící 1 až 2 mm bočně od středové linie ve střední koronální rovině.
2. Hodnocení motorické funkce
Jednu hodinu po způsobení úrazu se krysy testovaly podle celé řady kritérií, která hodnotila jejich neurologické výsledky (kritéria popsal Shohami a kol. v J. Neurotrauma, 10, 113 (1993)). Tato kritéria, označovaná jako Neurological Severity Score (Skóre neurologické závažnosti (NSS)), sestávají z řady reflexů a motorických funkcí. Body jsou udělovány na základě __nedostatků, pokud jde o tato kritéria, a hodnocení se opět provedla po dvaceti čtyřech hodinách.
3. Hodnocení mozkového edému
Po druhém hodnocení motorické funkce (24 hod) se mozky odstranily. Vzorek tkáně (-20 mg) se zvážil za účelem získání mokré, hmotnosti tkáně (wet weight (WW)) . Po 24hodinovém sušení v eksikační peci při 95°C se vzorek
01-2762-97 Če opět zvážil a získala se tak suchá hmotnost (dry weight (DW)). K výpočtu procenta vody ve (WW-DW) x 100/WW.
4. Ošetření účinnou látkou (R)-PAI mesylát se rozpustil ve vodě. Krysám se intraperitoneálně 0, 4, 8 a 12 hodin po indukci úrazu hlavy aplikovala účinná látka v dávce 0,1 mg/kg tělesné hmotnosti. Kontrolní krysy se ošetřily ve stejných časových okamžicích vodou.
Výsledky
NSS, které bylo mírou „klinického stavu krys, bylo většinou u ošetřených a neosetřených skupin jednu hodinu po poškození hlavy identické, ale při druhém hodnocení, tj . o dvacet čtyři hodin později, bylo u krys ošetřených (R)-PAI mesylátem' podstatně nižší (tabulka 13). Tyto výsledky naznačují, že PAI mesylát je účinný při zlepšování obnovy motorických funkcí u krys, u kterých došlo k vnitřnímu poraněni hlavy.
Dvacet čtyři hodin po úrazu byl nalezen v hemisféře hlavní edém (85,4 % vody v mozku kontrolních krys vs.
78,5 % v nepoškozené mozkové tkáni). PAI mesylát byl účinný při redukci edému, jak vyplývá z jeho vlivu na procento vody ve tkáni.
Na základě shrnutí získaných výsledků lze tvrdit, že (R)-PAI mesylát má v případě modelu simulujícího humánní
01-2762-97 Če nervové poškození a při indukci vnitřního úrazu hlavy neuroprotekční vlastnosti.
Tabulka 13
NSS Δ NSS (1 hod - 24 hod) % H20 v mozku
1 hod 24 hod
Kontrolní (n = 6) 15, 6 12,3 4,3 ± 0,5 85,4 ± 0,4
(R)-PAI Mesylát (n = 6) 16,7 10,2 6,5 ± 0,7* 82,1 ± 0,6**
* P < 0,05 (Mann Whitney U-test) ** P < 0,005 (t-test)
Přiklad 34
Účinky PAI mesylátu na prevenci NMDA indukovanou buněčnou smrt buněčných kultur malého mozku
Výsledky in vitro testů
Postupy
Kultury mechanicky disociovaného malého mozku neonatální krysy • · 0 0 · » « 4 · · · ¥ » «♦· 0 0 0 • · s • 00 * 0 to
01-2762-97 Če
0 0 · V
0*0 0 0
0 *000 > 0 ·
• 0 t *
··· · • 0
Malý mozek šestidenních nebo sedmidenních krysích mláďat se asepticky rozpitval a umístil do 15ml sterilní plastické kónické zkumavky obsahující 3 ml obohaceného média (média tvořeného Dulbecem modifikovaným Eagleovým médiem (DMEM) s vysokou koncentrací glukózy (1 g/1), 2 mM (obj./obj.) L-glutaminu, antibiotickou antimitotickou směsí a obohaceným 15 % (obj./obj.) tepelně inaktivovaným fetálním telecím sérem). Po dvaceti až dvaceti pěti průchodech sterilní, 10 cm dlouhou, nerezovou ocelovou jehlou 13, nasazenou na 5ml injekční stříkačku, ve které bylo vloženo nylonové síto s velikostí pórů 45 μΐίι se malý mozek disocioval. Disociované buňky se 5 minut odstředily při 200 g a po odstranění supernatantu se buňky resuspendovaly v obohaceném médiu. Přežívání buněk se určilo vylučovacím testem trypanové modři. Buňky se následně naočkovaly při hustotě 200/mm2 na povrchy potažené poly-L-lysinem (poly-L-lysinem potažená skleněná podložní sklíčka se připravila alespoň jednu hodinu před očkováním, ponořením sklíček do sterilního roztoku destilované vody obsahujícího 15 gg/ml poly-L-lysinu a bezprostředně před použitím se opláchla sterilní vodou a vysušila), překryly obohaceným médiem a inkubovaly se při 37°C v atmosféře obsahující 5 % CO2 ve vzduchu a při 100% vlhkosti. Po čtyřech/ dnech v kultuře se ' médium nahradí lo--médiem obsahujícím požadované testované sloučeniny. Experimenty se prováděly duplicitně a opakovaly dvakrát nebo třikrát. Po zjištění závislosti odezvy na toxické dávce testované sloučeniny se porovnávaly čtyři skupiny: (I) kontrolní (samotné obohacené médium); (II) testovaná sloučenina (jedna podskupina pro každou koncentraci (testované byly dvě koncentrace)); (III) N-methyl-D-aspartát (NMDA, expozice koncentrací 1 mM po dobu 3 hodin) , jako
01-2762-97 Če »» I · · · * WWW1», • b » b J · · ·* • ···· 9 b · · · ·»···
I · b · ·· ··· · ·♦ «·· ·· ·· cytotoxická výzva; (IV) testovaná sloučenina plus NMDA (jedna podskupina pro každou ze dvou koncentraci testovaných sloučenin); (V) kontrolní skupina pro testování vlivu rozpouštědla (ve kterém je testovaná sloučenina rozpuštěna); a (VI) další „pozitivní kontrolní skupina sperminu (0,01 μΜ rozpuštěných v kulturním médiu) plus NMDA. Přežití nervových buněk se hodnotilo fázovou kontrastní mikroskopií a barvením tripanovou modři po 24 hodinách.
Výsledky
Zjistilo se, že kyselina glutamová (Glu) vykazuje neurotoxické vlastnosti, které se exprimuji ve vážných neurologických onemocněních zahrnujících. epilepsii a mrtvici, a nejpravděpodobněji rovněž v mozkových neurodegenerativních nemocech, například v Parkinsonově chorobě, Alzheimerově chorobě a traumatickém poškození mozku. Neurotoxické účinky Glu jsou mediovány membránu vážícími Glu receptory, například N-methyl-D-asparátovými (NMDA) receptory.
Získané výsledky shrnuté v tabulce 14 ukazují, že 10 μΜ (R)-PAI mesylát zvyšuje počet buněk malého mozku, které přežívají po expozici 1 μΜ NMDA o 27 procent. Tyto in vitro výsledky podporují in vivo účinky (R)-PAI mesylátu prezentované v příkladech 33 a 35, z čehož vyplývá, že tato účinná látka má neuroprotekční vlastnosti v případe neurotoxické koncentrace NMDA.
01-2762-97 Če
Tabulka 14
NEUROPROTEKČNÍ VLIV (R)-PAI MESYLÁTU NA PREVENCI
NMDA-INDUKOVANÉ BUNĚČNÉ SMRTI BUNĚK MALÉHO MOZKU
Pokusná skupina Přežívající buňky Procentická ochrana
Cerebrální kultury
(Toxicita TD25 = 30 μΜ; TD50 = 85 μΜ; TD100 = 320 μΜ)
Kontrolní 100
Rozpouštědlo 97
NMDA 10
Rozpouštědlo + NMDA 10 0
Sloučenina + NMDA:
1) 0,01 μΜ + NMDA 12 2
2) 1,00 μΜ + NMDA 22 12
3) 10,00 μΜ + NMDA 37 27
Spermin + NMDA 75 65
Hodnoty, které jsou vyjádřeny jako procento
-neo šetřených—kon-t-ro-l-n-ích—v-zo-rků,—rep-re-zentuj-í—p-růměr^-dv-ouduplicitních běhů experimentů kultury a průměr + SEM čtyř zvířat pro ischemii· Hodnota procentické ochrany vyjadřuje účinek testované sloučeniny po odečtení vlivu rozpouštědla.
01-2762-97 Če
b 0 0 • 0 • 00 ·
• ·· ·· • · · 4 10 · * · · ♦ ·
• 0 « 0
00 • 00 ♦ · 00
Přiklad 35
Vliv (R)-PAI mesylátu po rozdrcení krysího zrakového nervu
Neuroprotekční účinky (R)-PAI mesylátu se určily bezprostředně po rozmačkání zrakového nervu u dospělé krysy. Krátkodobé účinky se měřily metabolicky a.dlouhodobé účinky se stanovily elektrofyziologicky.
Metody
1. Metabolická měření .a) Obecně
Použil se způsob, který popsal Yoles a kol. v Investigative Ophthalmology & Visual Science, 33, 358691 (1992). Při metabolických měřeních . krátkodobých účinků se monitoroval poměr mitochondriální NADH/NAD, který závisí na aktivitě elektronového transportního systému a tak indikuje úrovně energetické produkce. Změny schopnosti nervu produkovat energii v důsledku poškození se určily porovnáním NADH úrovní v odezvě na ___umělý přechodný anoxický inzult před a po poškozeni.__________
b) Povrchová fluorometrie - reflektometrie
Monitorování intramitochondriálního NADH redoxního stavu se zakládá na skutečnosti, že NADH, na rozdíl od zoxídované formy NAD+, fluoreskuje, pokud je osvětleno světlem o vlnové délce 450 nm. Pro přenos světla ke zrakovému nervu a od něj se použil pružný ·** · · ·· * · · ♦ · · · · * · b · · b »··♦· b b1 « a·· a · · b b á b b * · ··· a ·« aaa ·« «a
01-2762-97 Če svazek optických vláken ve tvaru Y (světelný vodič).
Světlo, které emitovalo od nervu, se měřilo při vlnových délkách: 366 nm (odražené světlo) a 450 nm (fluorescenční světlo). Změny v intenzitě odraženého světla korelovaly se změnami tkáňové absorpce, které
byly způsobeny hemodynamickými efekty a s pohyby
zrakového nervu, sekundárně pak se změnami arteriálního
krevního tlaku a objemem nervu. Zjistilo se, že
fluorescenční měřeni jsou adekvátně upravena pro měření
NADH redoxního stavu odečtem odraženého světla (366 nm) od fluorescenčního světla (poměr 1:1), čímž se získá správný fluorescenční signál.
c) Příprava zvířat
Použití zvířat bylo v souladu s „Rezolucí ARVO o používání zvířat pro výzkumné účely. Samci krys Sprague-Dawley (SPD) o hmotnosti 300 až 400 g se anestetikovaly pentobarbitonem sodným (50 mg/kg . intraperitoneálně). Při držení hlavy zvířete na místě, pomocí držáku hlavy, se provedla pod binokulárním operačním mikroskopem laterální katotomie a ve spojivce, ... ..bočně., ,-od -. ..rohovky ,-^-se..-...provedl______řez,._.;_-P_o_„_separaci refraktorových bulbálních svalů se identifikoval zrakový nerv a jeho úsek, dlouhý 3 až 3,5 mm, se v blízkosti oční bulvy odkryl tupým rozpitváním. Tvrdá plena se ponechala celistvá a dbalo se na to, aby nedošlo k porušeni nervu. Okolo zrakového nervu se implantoval držák světelného vodiče takovým způsobem, aby držel světelný vodič na povrchu zrakového nervu, v místě 1 mm vzdáleném od místa poškození. Zvířata, stále ještě
01-2762-97 Če anestetikovaná, se nechala minut zotavit z·^ ·· *
«·« • « • · ·· vystavila anoxickým . chirurgického zákroku a následně podmínkám. Anoxického stavu se dosáhlo tak, že se krysy nechaly dýchat dvě minuty v atmosféře 100% dusíku, načež se opět vrátily ke kyslíku. Za účelem vyhodnocení metabolické aktivity zrakového .nervu se relativní změny intenzity odraženého a fluorescenčního·světla, v odezvě na anoxii, změřily před a po poškození způsobeném drcením.
d) Experimentální protokol pro poranění způsobené drcením a metabolická měření
Pomocí lékařských kleští s kalibrovaným průřezem . r se na nervu mezi okem a držákem světelného vodiče drcením, při třicetisekundovém tlaku odpovídajícím 120g, způsobilo poranění nervu. Bezprostředně po poranění se zvířatům podala intraperitoneálními injekcemi voda s (R)-PA1 mesylátem (2 mg/kg) a samotná voda. Pro stanovení aktivity energetického produkčního systému se měřila NADH odezva na dvouminutovou anoxii u všech zvířat před poškozením, 30 minut po poškození a dále v ——--—hod-i-nov-ých—intervalech,---přičemž,—poslední—měření $.e_ r____. r.
provedlo 4 hodiny po poškození (viz obrázek 19),
2. Elektrofyziologická měření
Tento způsob popsal Assia- a kol. v Brain Res., 476, 205-212 (1989). Při těchto měřeních byla preferována stejná příprava zvířete a poškození zrakového nervu jako v případě metabolických studií.
01-2762-97 Če • 4 b ·· • * * ** b b··· * b· « ♦ b· ••4 4♦ ·
Bezprostředně po poškozeni přijala zvířata jednu injekci vody s (R)-PAI mesylátem (0,5 mg/kg) a jednu bez (R)-PAI mesylátu. Čtrnáct dní po poškození a ošetření se zrakové nervy vyjmuly a elektrofyziologicky měřily. Před odstraněním zrakových nervů pro účely elektrofyziologických měření se krysy hloubkově anestetikovaly 70 mg/kg pentobarbitonu. Z lebky se odstranila kůže a zrakové nervy se oddělily od očních bulev. Provedla se subtotálni dekapitace a lebka se otevřela pomocí štípacích kleští. Malý mozek se vyjmul bočně, čímž se odkryla intrakraniálni část zrakového nervu. Provedla se pitva na úrovni nervu, který se následně přemístil do lahviček obsahujících čerstvý solný roztok obsahující NaCl (126 mM), KC1 (3 mM), NaH2PO4 (1,25 mM), NaHCO3 (26 mM), MgSO4 (2mM), CaCl2 (2 mM) a D-glukózu (10 mM), který byl při pokojové teplotě zavzdušněn 95 % 02 a 5 % CO2. Nervy se uchovávaly v tomto roztoku, ve kterém zůstane elektrická aktivita stabilní alespoň po dobu 3 až 4 hodin. Po půl hodině regenerace při pokojové teplotě se získaly z konce zrakového vlákna, vzdáleného od rozdrcené léze, elektrofyziologické záznamy. Konce nervu se následně připojily ke dvěma odsávacím Ag-AgCl elektrodám, ponořeným' vešmáčečim 'roztoku/.....při 37°C. StTimú lační' pulz se aplikoval přes elektrodu na vzdáleném konci a akční potenciál se zaznamenával pomocí vzdálené elektrody. Pro supramaximální elektrickou stimulaci (0,5 pps) se použil stimulátor Grass SD9. Naměřený signál se přenesl do předzesilovače Medelec PA36 a následně do elektromyografu (Medelec MS7, AA7T zesilovače). Roztok, stimulátor a zesilovač měly společný podklad. Zaznamenala se a maximální amplituda osmi průměrných
01-2762-97 Če
* • 99 i» • »
• • « • 9 • • 9
* ♦ ··* 9 · • «·· 99 9
• • • • 9
99 ·· 9 9
akčních potenciálů sloučeniny (CAP), která se rovněž vyfotila pomocí polaroidu. Jako referenční hodnoty sloužily hodnoty CAP, naměřené u kontralaterálních nepoškozených nervů.
Výsledky
Výsledky ukazují, že (R)-PAI mesylát, aplikovaný bezprostředně po poškození zrakového nervu, blokoval poškozením indukovanou redukci energetické produkce. (R)-PAI mesylát má rovněž dlouhodobé účinky, jak zjistilo elektrofyziologické monitorování.
CAP (akční potenciály sloučeniny) amplituda přímo korelovala s počtem vodivých vláken v testovaném segmentu nervu.
(R)-PAI mesylát podstatně tlumí poškozením indukovanou ztrátu aktivity distálního segmentu poškozeného nervu, z čehož vyplývá, že (R)-PAI mesylát je neuroprotekčním činidlem nebo alespoň činidlem zpomalujícím degeneraci.
Tabulka 15
ELEKTROFYZIOLOGICKÁ MĚŘENÍ
Skupina CAP amplituda (μν) (Průměr + standardní odchylka)
Vehikulum N = 13 441 ± 95
(R)-PAI mesylát N = 7 2104 ± 313*
01-2762-97 Če
·· * ♦ * Φ to • « *
• • · • to * to to • ·
• • to toto • · • to > ·· · • 4
♦ • • · * * •
toto to • • · ·· « <· e ·
Příklad 36
Srovnání antikonvulzívních vlastností R-PAI a 5-PAIsolí
Jak (R)-PAI tak (S)-PAI HCI soli mají značné antikonvulzívní účinky. U myší (při i. p. podání), použitých v maximálním elektrošokovém testu (MES testu), má (S)-PAI HCI vyšší antikonvulzívní účinnost (ED50=57 mg/kg) než (R)-PAI HC1 (Εϋ50=79 mg/kg). Analogické výsledky se získaly u krys (p.o. podání). Čtyři krysy ze čtyř byly chráněny před záchvaty v MES testu, pokud jim bylo podáno 50 mg/kg (S)-PAI HCI, zatímco po stejné dávce (R)-PAI HCI byly chráněny tři ze čtyř myší. Pokud jde o účinnost v případě Parkinsonovy choroby, je zvyšování antikonvulzívní účinnosti škodlivým vedlejším účinkem. Stejný trend se objevuje v případě mesylátových solí. (S)-PAI mesylát má v MES testu vyšší antikonvulzívní účinnost než (R)-PAI mesylát. Při dávkách 100 mg/kg (S)-PAI mesylát chránil tři myši ze tří, zatímco (R)-PAI mesylát chránil při identické dávce pouze jednu myš ze tří. MES test je klasickým modelem pro indikaci účinnosti pro parciální a generalizované záchvaty u lidí. Mechanizmus účinnosti tohoto činidla spočívá v jeho schopnosti bránit šíření záchvatů. Nicméně některé_..látky,- -které - brání -šíření- -záchvatu,-...rnaj.i_,vedlejší účinek, který spočívá ve snižování křečového prahu. Tato činidla mají tedy jak prokonvulzívni, tak antikonvulzívní vedlejší účinky.
Získané výsledky tedy ukazují, že (S)-PAI mesylát má prokonvulzívní účinnost. Při testu měřené intravenózní infuze Metrazolu redukuje 141 mg/kg (S)-PAI mesylátu dobu infuze a tedy množství Metrazolu, potřebného pro vyvolání jak prvního místního záchvatu tak pro počátek škubavě
01-2762-97 Če ·*» »♦·· ·«·· • * · · · · » »· · • **»·. · « ·*« ··· * ·,;| » · · * · •·· · «· ··· · · «· křeče. Další činidla, která se zpravidla používají při parciálních a generalizovaných záchvatech, například fenytoin a karbamazepin, tento efekt nevykazují. (H.J. Kupferberg, Epilepsia, 30, s51-s56 (1989)). Stejně tak (S)-PAI mesylát vykazuje podstatně vyšší akutní neurotoxicitu než (R)-PAI mesylát. Při 300 mg/kg (R)-PAI mesylát nevykazuje u myší, při . testu zjišťujícím poruchu koordinace na rotující tyči, žádnou neurotoxicitu. Při použití (S)-PAI mesylátu vykazují čtyři myši ze čtyř neurotoxicitu a křečovitost.
Metody
TD50 (střední toxická dávka)
Tento test měří neurologické nedostatky'pomocí testu poruchy koordinace na rotující tyči. Myš se umístí na tyč- s boulovitým povrchem, která se otáčí rychlostí 6 ot./min. Potom se v každém ze tří pokusů zjišťuje, zdali má myš schopnost udržet rovnováhu a udržet se na tyči- po dobu jedné minuty.
Test měřené intravenózní infuze Metrazolu
Tento test ' měří u každého zvířete minimální křečový .práh. Metrazol se aplikuje formou infuze, která se podává rychlostí 0,185 mg/ml do ocasní žíly myši. Potom se zaznamená čas (v sekundách), který uplyne od počátku infuze do okamžiku, kdy se objeví první záškub (první fokální záchvat) a počátek škubavě křeče (škubavý záchvat). Prokonvulzívni činidla potřebují pro vyvolání těchto
01-2762-97 Če φ · ·
···· * « · * ··
·» • * * »
* • ·
·«·
t, •
···
příznaků méně Metrazolu a kratší časové periodě.
vykazují tedy konečné body v
Příklad 37
Periferní účinky (R)-PAI a (S)-PAI na stažitelnost preparátů intestinálního hladkého svalu
Periferní účinky hydrochloridových solí enantiomeru PAI se., určily v izolovaném tenkém střevě, králíka nebo morčete. Tato pozorování poskytují užitečné informace o příslušných periferních vedlejších účincích u lidí. Prvním bodem kontaktu subjektu s orálně podanou účinnou látkou je gastrointestinálni trakt, ve kterém jsou koncentrace účinné látky mnohem vyšší než po absorpci a distribuci. V případě PAI hydrochloridu (MH = 208) by lOmg orální dávka, obsažená přibližně ve lOOml objemu kapaliny, odpovídala přibližně koncentraci 0,5 mM. Terapeutická koncentrace (R)-PAI hydrochloridu v plazmě se naopak pohybuje v nanomolárním rozsahu.
Zjištění účinků enantiómerů PAI v izolovaném králičím lačníku a kyčelníku morčete mělo zjistit, zda bude společný p ř í j-ern— (-S j—PAT—a—(-Rj—PAT— (-j-a-k—s e—na chá z eg-í—v—r ae em-i-e-kém PAI) produkovat vedlejší účinky, které nebyly v případě podání samotného (R)-PAI zjištěny. (R)-PAI je díky své účinnosti a vysoké selektivitě k této formě enzymu výhodným enantiomerem pro inhibici. MAO-B v mozku. (S)-PAI je v'tomto ohledu méně účinný než (R)-PAI a není rovněž selektivní k MAO-B. V zásadě' by bylo možné jeho přítomnost v PAI racemátu tolerovat nebo přehlédnout za předpokladu, že by byl (S)-PAI při doporučených dávkách (R)-PAI inertní.
01-2762-97 Če
Φ0 Φ · · φ · 0 ·
Φ ♦··♦ Φ 0 ·
Φ 0' Φ · »00 Φ »0
Φ 0' Φ 0 0 ·
Φ' 0 Φ 0 ·
«· 0 0Φ 0 0 «Φ »0· 0 00
Výsledky shrnuté v tabulkách 16 až 19 ukazují, že (S)-PAI není inertní látkou. V kyčelníku morčete se (S) enantiomer neprojevil jako účinnější relaxační látka než (R)-PAI. Díky jeho periferním účinkům ho nelze považovat za zanedbatelný. Tyto údaje ukazují, že při podání racemického PAI obsahujícího ekvivalentní dávku (R)-PAI by se mohlo vyskytovat více periferních vedlejších účinků než při podání čistého (R)-PAI.
Tabulka 16
TYRAMINOVÁ POTENCIACE KAŽDÝM ZE DVOU ENANTIOMERŮ PAI HC1 PŘI RYCHLOSTI PREPARACE LAČNÍKU
Napínání králičího lačníku, přichyceného v orgánové komoře, vykazuje rytmické kontrakce, které jsou inhibovány noradrenalinem, ale nikoliv tyraminem. Nicméně pokud se lačník předošetří inhibitorem monoaminoxidázy, například PAI, potom tyramin způsobí uvolnění spontánních kontrakcí. Rozsah uvolnění může korelovat s relativní účinností inhibitoru.
Účinná látka a koncentrace (μΜ) Procentické uvolněni
Samotný tyramin 40 0
Noradrenalin 0,002 100
Samotný (R)PAI 0,2-4,0 0
Samotný (S)PAI 0,2-4,0 0
Tyramin 40 .
po (R)PAI 0,2 67
01-2762-97 Če ί **í* * ί ί ί * ί ”Σ ·♦« φ ·· ··· ·♦♦· pokračování______________________________________________
Účinná látka a koncentrace (μΜ) Procentické uvolnění
288
4085-90 po (S)PAI 0,20
235
4033-50
Výsledky (S)-PAI je jako inhibitor mozkové MAO-B mnohem méně účinný než (R)-PAI. Takže (S)-PAI není použitelným činidlem v případě prevence mozkové dopaminové degradace, ale může potenciovat tyraminem-evokované uvolnění noradrenalinu v tenkém střevě. Jeho účinnost v tenkém střevě je nežádoucím vedlejším účinkem, protože se dá očekávat, že bude zvyšovat absorpci a působení nežádoucího tyraminu. Takže (S)-PAI, pokud se použije společně s (R)-PAI ve formě racemického PAI, není inertní látkou.
Tabulka 17
ANTAGONISMUS BETHANECHOLEM-INDUKOVANÝCH KONTRAKCÍ KYČELNÍKU MORČETE V PŘÍTOMNOSTI 400 μΜ KAŽDÉHO ZE DVOU ENANTIOMERŮ PAI HC1
Napínání kyčelníku morčete, přichyceného ve fyziologickém roztoku v orgánové komoře, způsobí dávkově závislé kontrakce, pokud se ošetří bethanecholem, který je
01-2762-97 Če
Η · « · ♦ · 0'0 « ·
0« ♦ · 0 · 0 · ···· 0 0« 0 · ««0 ·00 «' · 0 * «0 • 00 · «0 000 00 «0 enzymaticky stabilním analogem přirozeného gastrointestinálního přenašeče neuronů, jakým je acetylcholin. Tyto kontrakce se v přítomnosti PAI zeslabily. Údaje jsou vyjádřeny v gram-napěti.
Bathenechol (μΜ) Gram-napětí
Kontrolní (R) PAI Kontrolní (S) PAI
0, 8 0, 5 1 0,2 0, 6 0
2 1,5 0, 3 2,0 0
4 2,2 0,7 3,0 0
8 4,0 1,0 3,8 0, 6
20 5, 6 2,0 3,8 1,2
40 6,2 2,8 3,8 1,7
80 6,2 3,1 3, 8 2, 6
200 6,2 4,3 3, 8 2, 6
Výsledky
(S)-PAI je většinou jako MAO-B inhibitor inaktivní,
pokud jde o (R)-PAI, a není tedy účinný při prevenci degradace mozkového dopaminu. Nicméně při prevenci bethanecholem-indukované kontrakce tenkého střeva je účinnější než R(PAI). (S)-PAI, pokud se použije spolu s
R(PAI) ve formě racemického PAI, tedy není inertní látkou.
01-2762-97 Če • 9 4 9 • •9 9 9 · · 9 9 9 9 999 99 9 9' · · • ·· · 9 * 9 · 9 · · · • 9«9 99* • · 9 ·· ·*
95
Tabulka 18
z M Z
ANTAGONISMUS HISTAMINEM-INDUKOVANÝCH KONTRAKCI KYČELNÍKU
MORČETE KAŽDÝM ZE DVOU ENANTIOMERŮ PAI HC1
Pevně stanovená dávka histaminu (40 nM) způsobuje vytrvalou kontrakci napnutého kyčelníku morčete, uchyceného ve fyziologickém roztoku v orgánové komoře. Přírůstkové přidávání každého ze dvou enantiomerů PAI HC1 způsobuje dávkově dependentní uvolnění svalu. Výsledky jsou vyjádřeny jako procentické uvolnění, přičemž za 100% uvolnění je považován stav před přidáním histaminu.
Koncentrace PAI Procentické uvolnění
μΜ (R)PAI (S) PAI
2 0 11
4 0 15
10 0 30
20 20
30 31 33
-40—____._________3-7—____._____—3.6__—
100 81 71
200 90
300 92
400 100 98
700 100
1000
100
01-2762-97 Če
9« * • • • · * · · ♦
• • • • * • ·
• ···· * · • • ··· ···
• • • • •
• · · • * 4 ·
Výsledky (S)-PAI je jako MAO-B inhibitor v mozku, v porovnání s (R)-PAI, inaktivní a tedy nepoužitelný při prevenci degradace mozkového dopaminu; ale pokud jde o uvolnění střevního hladkého svalu, potom je aktivnější než (R) isomer. Takže. (S)-PAI není inertní látkou, pokud je podán společně s (R) isomerem ve formě racemického PAI.
Tabulka 19
ANTAGONISMUS BETHANECHOLEM-INDUKOVANÝCH KONTRAKCÍ KYČELNÍKU MORČETE KAŽDÝM ZE DVOU ΕΝΑΝΤΙOMERŮ PAI HC1
Pevně stanovená dávka bethanecholu (0,8 μΜ) způsobuje vytrvalou kontrakci napnutého kyčelníku morčete, uchyceného ve fyziologickém roztoku v orgánové komoře. Přírůstkové přidávání každého ze dvou enantiomerů PAI HC1 způsobuje dávkově dependentní uvolnění svalu. Výsledky jsou vyjádřeny jako procentické uvolnění, přičemž za 100% uvolnění je považován stav před přidáním histaminu.
Knnr.Antrace PAT Procentické uvolnění.
μΜ (R)PAI (S)PAI
20 25 40-50
60 .25-50 60-70
100 50-70 100
300 100 100
01-2762-97 Če (S)-PAI je jako MAO-B inhibitor v mozku, v porovnání s
• · · • • ·· Φ · · ·
• · * • • « · • ·
• ···· • * • • »·· ···
• · • * •
· ·· « »* ·· • ·
Výsledky inaktivní a tedy nepoužitelný při prevenci degradace mozkového dopaminu;
ale pokud jde o uvolnění střevního hladkého svalu, potom je aktivnější než (R) isomer. Takže (S)-PAI není inertní látkou, pokud je podán společně s (R) isomerem ve formě racemického PAI.
Příklad 38
Určité účinky [R](+)PAI mesylátu na okluzi střední cerebrální arterie u krys, jako na model mrtvice
Metody
1.1 Okluze střední cerebrální arterie (MCAO) u krys
Použila se modifikace postupu, který popsal Tamura a kol. (1981). Samečci krysy Wistar (Olac England-Jerusalem) o hmotnosti 300 až 400 g se neestetizovali roztokem equitesinu, podaného i.p. při dávce 3 ml/kg. Equitesin sestává z 13,5 ml roztoku .___pen.to.thal.u.... sodného _U.60_.mg/ml·).,___3., 5_..g. .chloralhydrátu,
1,75 g MgSOí, 33 ml propylenglykolu, 8,3 ml bezvodého alkoholu, které byly doplněny do 83 ml destilovanou vodou. Chirurgický zákrok se provedl za použití operačního mikroskopu s vysokým rozlišením, model SMZ-2B, typ 102 (Nikon, Japan). Za účelem odkrytí levé střední cerebrální arterie se ve spánkovém svalu provedl řez. Špička koronoidního výběžku mandibuly se vyřízla a odstranila pomocí malých lékařských klestí.
44 4 · · ·· ♦ · · · • · · »4 · · 4 (t ·
01-2762-97 Če • *4*· · · · * · ··· ··· 4 4··· 4 · 44« · ·« ··· «4 04
98
Na spoji mezi střední příčkou a stropem
inferotemporální jamky se provedla kraniektomie s
vrtáním zubů. Tvrdá plena se opatrně otevřela za
použití jehly 27. MCA se trvale ucpala mikrobipolárni koagulací při nastavení nízké energie, se začátkem 2 až 3 mm od čichového traktu, mezi její kortikální větví k nosní kůře a laterálními arteriemi striata.
Po koagulaci se MCA oddělila mikronůžkami a rozdělila tak, aby zajistila kompletní okluzi. Potom se sešil spánkový sval a položil přes místo kraniektomie. Kůže se uzavřela pomocí hedvábné sutury 3 až 0. Paralelní skupina myší se podrobila kraniektomické operaci bez kauterizace MCA. Během celé chirurgické operace (20 až 25 minut) se u obou skupin pomocí regulátoru tělesné teploty (Kyoristsu, Japan), sestávajícího ze samoregulačního topného polštářku, který je připojen k rektálnímu termistoru, udržovala tělesná teplota 37 až 38°C. Dvacet čtyři hodin po chirurgickém zákroku se stanovilo neurologické skóre, aby se stanovila závažnost poškození u krys ošetřených účinnou látkou v porovnání s neošetřenými kontrolními subjekty. Po 48 hodinách se zvířata anestetikovala ___equitesinem a závažnost poškození se vizualizovala pomocí MRI postupu. Dále se určil objem mozkové tkáně, poškozené v- důsledku ischemie.
1.2. Podání účinné látky [R] ( + )PAI mesylát se podával i.p. injekcí v 0,3 až 0,4 ml destilované vody podle následujícího rozvrhu: 1 mg/kg bezprostředně po chirurgickém zákroku;
01-2762-97 Če
0,5 mg/kg 2 hodiny po chirurgickém zákroku;
mg/kg 20 až 24 hodin po chirurgickém zákroku.
·· • • • ·· • · · ·
« • · • • • · • ♦
« · s « • « • ··* » ·
« t « • • •
»· ··· ««
1.3. MRI-SCAN ischemické mozkové léze
Všechny experimenty se prováděly za použití systému 4,7T BIOSPEC (BRUKER) „Diffusion Nuclear Magnetic (viz T. Back a kol.,
Resonance Imaging in
Experimental Stroke: Correlation with Cerebral
Metabolites, Stroke (únor 1994) 25: 494-500). Čtyřicet osm hodin po MCAO nebo kraniektomii bez kauterizace se každé zvíře podrobilo rychlému víceřezému TI vyváženému zobrazení (TR/TE), (500/25), čímž se určila přesná poloha. Potom se získaly obrazy T2-vyvážené množiny řezů (300/80) (5 po sobě jdoucích řezů o tloušťce mm) .
Ke stanovení velikosti a závažnosti rozsahu infarktu se použila hyperintenzita, pozorovaná v T2 vyváženém MRI 4 8 hodin po okluzi nebo po kvazi zákroku u kontrolních zvířat. U každé skupiny krys se určovaly následující MRI parametry:
—--—--——— —c-r—I-s ehem-i-ck-á- pl o cha—(- v-mm2 Y;----------------------
d. Plocha ischemické hemisféry (v mm2);
e. Plocha neovlivněné hemisféry (v mm2) .
Použití přilehlých řezů umožnilo převést plošné jednotky na objemové jednotky jednoduchým vynásobením plochy šířkou řezu.
• 4 t • 44 4 · 4» 4 4 « 4 4 4« 4 · 4 ·
01-2762-97 Če 4 0444 4 4 4 4 4 4 • 4 4 • 000 00* 4 4
»·· 4 ·· ··« ·· 04
100
1.4. Neurologické skóre
Neurologické skóre sestává ze součtu celé řady
hodnocení pro posuzování specifických motorických aktivit u dané krysy. Stupnice hodnocení začíná od 0 (úplně normální krysy) a končí u 13 (zcela neschopné krysy). U většiny parametrů se při hodnocení používají pouze hodnoty 0 (normální) nebo 1 (neschopná); u dalších parametrů se používá postupné hodnocení. V rámci studie se použily následující testy:
Obecné pozorovací testy hypoaktivita, zklidnění, piloerekce
Motorický reflex
Krysy se zavěsily za ocas přibližně 15 cm nad podlahu. Normální krysy zaujaly polohu, při které se obě jejich přední končetiny natáhly směrem k podlaze a zadní nohy visely po straně trapézovým způsobem. MCAO způsobilo konzistentní flexi protilehlých končetin.
Motorická schopnost
Motorická schopnost se hodnotila na základě schopnosti krys udržet se na tyči o průměru 1 cm pomocí protilehlých končetin po dobu 5 až 15 sekund, pokud je krysa zavěšena na tyči za ramenní jamky.
01-2762-97 Če
101
• · · ·
• · · ·
Motorická koordinace
Normální krysy jsou schopny vyběhnout a seběhnout 5 cm široký trám, umístěný na mírném svahu. Chyba při přecházení trámu v některém směru znamená určitou motorickou nekoordinaci, nedostatek rovnováhy a slabost končetin.
Chůze
Schopnost krysy opět zaujmout normální polohu obou zadních protilehlých končetin, pokud jsou úmyslně vysunuty ze své přirozené polohy při stoji na tenkém trámu.
Rovnováha
Schopnost krysy zachytit se a udržet rovnováhu na úzkém trámu, širokém 2 cm.
Pohybová aktivita
Celkový pohyb během patnácti minut v automatizované aktivní kleci.
Hodnocení pro každý z výše uvedených parametrů je naznačeno v tabulce 20.
01-2762-97 Če • · · ♦ · • · · ·· ♦
102
Tabulka 20
NEUROLOGICKÉ SKÓRE NAVRŽENÉ PRO KAŽDÝ Z DESETI
PARAMETRŮ POSTOJE A POHYBU
Parametr Skóre
a. Aktivita v domácí kleci normální=0 hypoaktivní=l
b. Zklidnění
c. Piloerekce žádné=0 zaznamenané=l žádná=0 zaznamenaná=l
d. Extenze protilehlých předních dobrá=0 končetin krys směrem k podlaze, pokud.jsou zavěšeny ohnuté končetiny=l za ocas e_.......Roztažení, zadních protilehlých,.....dobr_é=0_____r_____________ končetin krys, pokud jsou , . , , v . . d J ť J ohnuté koncetiny=l zavěšeny za ocas (trapezoidní držení těla)
01-2762-97 Če
103 pokračování
Parametr
Skóre
f. Uchopení tyče proti- dobré=0
lehlými končetinami na
dobu 5 až 15 sekund,
pokud jsou krysy
zavěšeny za .ramenní
jamku
slabé=l
g. Chůze po trámu dobrá=0 špatná=l širokém 5 cm
h. Zaujmutí původní polohy dobré=0 protilehlých zadních nebo předních končetin krys, pokud jsou z špatné =1 (jedna končetina) =2 (dvě končetiny) této pozice záměrně vychýleny
i. Uchopení trámu a udržedobré=0 špatné=l ní rovnováhy na trámu širokém 2 cm j . Motorická aktivita krys <25 % kontrolní v porovnání s kontrolními subjekty (15 minut v automatizované aktivní kleci)
26-50 % kontrolní 2
51-75% kontrolní 1
76-100 % kontrolní 0
01-2762-97 Če v · · » ww · · ’ i ·*···· · · · ··· ··· . . . · · · · »· · ·· ··· *· ··
104
Výsledky
2.1. Rozsah infarktu
Výsledky MRI studií jsou shrnuty v tabulce 21 a
znázorněny na. obrázku 20. Rozsah infarktu byl
podstatně menší u krys ošetřených [R]( + )PAI mesylátem (n=9), než u neošetřených krys (n=10). V prvním případě představovala velikost infarktu přibližně 60 % velikosti infarktu u neošetřených krys. *
Tabulka 21
HODNOCENÍ ISCHEMICKÉ MOZKOVÉ LEZE MRI T2-SCANEM 48 HODIN PO MCA-OKLUZI A OŠETŘENÍ KRYS WISTAR [R](+)PAI MESYLÁTEM
MCA-0 MCA-0 + [R]( + )PAI mesylát*;
Zvíře č. Rozsah infarktu (mm3) Zvíře č. Rozsah infarktu (mm3)
1 252 1 . 94,4
2 272 2 139
3 314 3 240
4 273 4 137
- ' 5 201 5 13’7
6 221. 6 174
7 358 7 164
8 265 8 171
9 341 9 215
10 236
průměr ± SEM 273,3 ± 50,9 průměr ± SEM 163,5 + 43,9
• 4 »
01-2762-97 Če
105 • 44 ···· * * •♦ t = 5,0475 f = 17 p < 0,001 [R]( + )PAI mesylát redukuje velikost infarktu o.40 %.
[R](+)PAI mesylát se podával: Čas po okluzi MCA:
“1/0 mg/kg ip;
hodiny -0,5 mg/kg ip;
hodin -1,0 mg/kg ip.
2.2. Neurologické skóre
Neurologické skóre bylo u pěti krys ošetřených [R](+)PAI mesylátem a šesti neošetřených krys určeno náhodně zvoleným pozorovatelem. Výsledky jsou shrnuty v tabulce 22, ve které se porovnávají rozsahy infarktu u každého zvířete, zjištěné pomoci MRI testu, a rovněž jsou znázorněny na obrázku-21. Z výsledků vyplývá, že zvířata s minimálním neurologickým skóre jsou zvířata, která byla ošetřena [R](+)PAI mesylátem. Neurologické skóre se u MCAO zvířat, která byla ošetřena [R]( + )PAI jaěsylatem v porovnání s neošetřenými zvířaty, snížilo o 54 % a rozsah infarktu o 36 %.
• « *»
01-2762-97 Če
106
Tabulka 22
NEUROLOGICKÉ SKÓRE KRYS, KTERÉ PODSTOUPILY MCA OKLUZI
A OŠETŘENÍ [R](+)PAI MESYLÁTEM, VE VZTAHU K ROZSAHU ISCHEMICKÉHO INFARKTU, KTERÝ U NICH BYL ZJIŠTĚN
MCA-0 MCA-0 + [R](+)PAI mesylát***
Zvíře č. Neurologické * skóre Rozsah infarktu ** (mm3) Zvíře č. Neurologické * skóre Rozsah infarktu ** (mm3)
1 5,0 201 1 1,0 137
2 5, 0 221 2 2,0 174
3 6,0 358 3 4,0 164
4 6,0 265 4 4,0 . 171
5 8,25 341 5 2, 88 215
6 5,75 236
Průměr ± SEM 6,0+1,19 270±65 Průměr ± SEM 2,78+1,3 172±28
Neurologické skóre <=4,25 f = 9 p < 0,01
Rozsah infarktu t = 3,34 f = 9 p < 0,01 [R]( + )PAI mesylát redukuje neurologické skóre o 53,7 % a rozsah infarktu o 36,3 %.
Zjištěno 24 hodin po MCA-okluzi
Vyhodnoceno MRI T2-SCANnem 48 hodin po MCA-okluzi ·
01-2762-97 Če
107 *** [R]( + )PAI mesylát byl podán:
Čas po MCA-okluzi:
-1,0 mg/kg ip;
hodiny -0,5 mg/kg ip;
hodin -1,0 mg/kg ip.
Reference k přikladu 38
Cechetto DF, Wilson JX, Smith KE, Wolski D, Silver MD, Hachinski VC (1989). Autonomie and myocardial changes in middle cerebral artery occlusion: stroke models in the rat. Brain Res 502:296-305.
Kolb B, Sutherland RJ, Whishaw IQ (1983) . A comparison of the contributions of the frontal and parietal association cortex to spatial localizations in the rat. Behav. Neurosci. 97:13-27.
Menzies SA, Hoff JT, Betz AL (1992) . Middle cerebral artery occlusion in rats: A neurological and pathological evaluation of a reproducible model. Neurosurgery 31:100106.
Sauer D, Allegrini PR, Conseti A, Pataki A, Amaceker H, Fagg GE (1993) . Characterization of the cerebroprotective efficacy of the competitive NMDA receptor antagonist CGP40116 in a rat model of focal cerebral ischemia: An in vivo magnetic resonance imaging study. J. Cerebr. Blood Flow and Metabol. 13:595-602.
01-2762-97 Če
108
Stephanovich C, Editor, Stroke: Animal Models, Pergamon Press, 1983.
Tamura A, Graham DI, McCulloch J, Teasdale GH (1981). Focal cerebral ischemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following MCA occlusion. J. Cereb. Blood Flow and Metab. 1:53-60.
Teasdale G, Tyson g, Tamura A, Graham DI, McCulloch J. Focal cerebral ischaemia in the rat: Neuropathology, local cerebral blood flow and cerebrovascular permeability. In Stroke: Animal Models, Stephanovic C, Editor, Pergamon Press 1983, str. 83-97.
Yamamoto M, Tamura A, Kirino T, Shimitzu M, Sáno K, (1988). Behavioral changes'after focal cerebral ischemia by left middle cerebral artery occlusion in rats. Brain Re. 452:323-328.
Yamori Y a kol. (1976). Pathogenic similarity of strokes.in stroke prone spontaneously hypertensive rats and humans. Stroke 7:46-53.
Young W, DeCrescito V, Flamm ES, Hádáni M, Rappaport H,__Cprnu_P_.(19_8_6.)_._„.Tis.s.ue_Na.,—K,-_and-Ca—changes .in-reg-iona-l·cerebral ischemia: Their measurement and interpretation. Centra! Nervous Systém Trauma, 3:215-234. '

Claims (41)

1. Použití R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli pro výrobu farmaceutické kompozice určené pro léčení mozkové ischemie nebo mrtvice u subjektu.
2. Použití podle nároku 1, vyznačené tím, že se farmaceuticky přijatelná sůl R(+)-Npropargyl-l-aminoindanu zvolí ze skupiny tvořené: mesylátovou solí; ethylsulfonátovou solí; sulfátovou solí; a hydrochloridovou solí.
3. Použití podle nároku 2, vyznačené tím, že farmaceuticky přijatelnou solí je mesylátová sůl R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu.
4. Použití podle nároku 1, __v_y znač e n___é________ tím, že účinným množstvím R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, které má být podáno, je přibližně 0,5 miligramů na kilogram tělesné hmotnosti subjektu až 2,5 miligramů na kilogram tělesné hmotnosti subjektu.
01-2762-97
110
« · • · • B • B • * • • « 9 • · ·'· · B · • ·· • * 9 9 « B * ί 9 B · · • 9 999 · 9 999 B B · ·' · • · ·- a • 9 • • « « • · * 99 « ·
5. Použiti podle nároku 1, vyznačené tím, že se R( + ) -N-propargyl-l-aminoindan nebo farmaceuticky přijatelná sůl podává intravenózne, orálně, rektálně, transdermálně nebo parenterálně.
6. Použití podle nároku 1, vyznačené tím, že subjektem je člověk a účinným množstvím je přibližně 0,01 mg až 50,0 mg na den.
7. Použití podle nároku 6, vyznačené tím, že účinným množstvím je 0,1 až 10,0 mg na den.
8. Použití podle nároku 6, vyznačené tím, že. se R(+)-N-propargyl-l-aminoindan nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl podává intravenózne.
9. Použití podle nároku 1, vyznačené tím, že při léčení mozkové ischemie nebo mrtvice se pilicha' mozkové~íšchemi'e’ ’ reduku je ~ přibil žně’ ”o~ Ů5”p ro cent.
10. Použití R( + )-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli pro výrobu farmaceutické kompozice určené pro léčení traumatického poškození hlavy.
01-2762-97
11. Použiti podle nároku 10, vyznačené tím, že farmaceuticky přijatelná sůl R(+)-N-propargyll-aminoindanu se zvolí ze skupiny tvořené: mesylátovou solí; ethylsulfonátovou solí; sulfátovou solí; a hydrochloridóvou soli.
111
• * ·· ·· • ·♦ • · • ·' · • • · · • 9 9 99 • ♦ • « • · • · • 9 « · • Φ·· * Φ ··· ··· • Φ • · • • • 9 • · • b * ·· ·♦
12. Použití podle nároku 11, vyznačené tím, že farmaceuticky přijatelnou solí je mesylátová sůl R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu.
13. Použití podle nároku 10, vyznačené tím, že účinným množstvím R(+)-N-propargyl-laminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, které má být podáno, je přibližně 0,5 miligramů na kilogram tělesné hmotnosti subjektu -až 2,5 miligramů na kilogram tělesné hmotnosti subjektu.
14. Použití podle nároku 10, vyznačené tím, že se R( + )-N-propargyl-l-aminoindan nebo jeho - farmaceuticky—přijatelná— sůl—podává—intravenózněi orálně;-— rektálně, transdermálně nebo parenterálně.
15. Použití podle nároku 10, vyznačené tím, že subjektem je člověk a účinným množstvím je přibližně 0,01 mg až 50,0 mg na den.
01-2762-97
• * ·.♦ • i* 0 00 0 0 4 0 0 1 0, 0 * 0 0 0 0 • 0 Φ0Φ ♦: · • Φ 0» 0 0 • 0 • · • 0 ' 0 0··0 · 0 0· 0 0 0 0 0 Φ 0 4 . 0 0' · Φ 0 0 0 · 0 0 W *· 0 « 112
16. Použití podle nároku 15, vyznač e n ’ é tím, že účinným množstvím je 0,1 až 10,0 mg na den.
17. Použití podle nároku 15, vyznačené tím, že se R(+)-N-propargyl-l-aminoindan nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl podává intravenózně.
18. Použití R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli pro výrobu farmaceutické kompozice určené pro léčení traumatického poškození míchy.
19. Použití podle nároku 18, vyznačené tím, že farmaceuticky přijatelná sůl R(+)-N-propargyll-aminoindanu se zvolí ze skupiny tvořené: mesylátovou solí; ethylsulfonátovou soli; sulfátovou soli; a hydrochloridovou solí.
20. Použití podle nároku 19, vyznačené 'tf~í~‘m’ , “žě-farmaceuticky přijatelnou solí je mesylátová sůl R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu.
21. Použití podle nároku 18, vyznačené tím, že účinným' množstvím R(+)-N-propargyl-laminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, které má být podáno, je přibližně 0,5 miligramů na kilogram
01-2762-97 i
113
• · • · . «« 0 ·· 0 • 0 • 0' · • 0 0 0 4 ♦ 0 0·· t 0 Φ · 0 4 0 Φ b · 4 · ·' • . 0 • 000 0 ··· 44* • 0 0 * 0 · ♦ 4 • 99 0 · • 4' 4 4 · ··
tělesné hmotnosti subjektu až
2,5 miligramů na kilogram tělesné hmotnosti subjektu.
22. Použití podle nároku 18, vyznačené tím, že se R( + )-N-propargyl-l-aminoindan nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl podává intravenózně, orálně, rektálně, transdermálně nebo parenterálně.
23. Použití podle nároku 18, vyznačené tím, že subjektem je člověk a účinným množstvím je přibližně 0,01 mg až 50,0 mg na den.
24. Použití podle nároku 23, vyznačené tím, že účinným množstvím je 0,1 až 10,0 mg na den.
25. Použití podle nároku 23, vyznačené tím, že se R(+)-N-propargyl-l-aminoindan nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl podává intravenózně.
26. Použití R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné - soli pro výrobu farmaceutické kompozice určené pro léčení neurotraumatu.
27. Použití podle nároku 26, vyznačené tím, že farmaceuticky přijatelná sůl R(+)-N-propargyl• · · . *· * • · · · ♦ · φ ···· · · · · .· · ·· · « · · · · ·· * ···♦ 9 ··· ♦·.· • »« · b · ♦ · ·
Α· 9· ♦· · ♦· ··.
01-2762-97
114
1-aminoindanu se zvolí ze skupiny tvořené: mesylátovou solí; ethylsulfonátovou soli; sulfátovou solí; a hydrochloridovou solí.
28. Použiti podle nároku 27, vyznačené tím, že farmaceuticky přijatelnou .solí je mesylátová sůl R( + )-N-propargyl-l-aminoindanu.
29. Použití podle nároku 26, vyznačené tím, že účinným množstvím R(+)-N-propargyl-laminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, které má být podáno, je přibližně 0,5 miligramů na kilogram tělesné hmotnosti subjektu až 2,5 miligramů, na kilogram tělesné hmotnosti subjektu.
30. Použití podle nároku 26, vyznačené tím, že se R(+)-N-propargyl-l-aminoindan nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl podává intravenózně, orálně, rektálně, transdermálně nebo parenterálně.
31. Použití podle nároku 26, vyznačen· é tím, že subjektem je člověk a účinným množstvím je přibližně 0,01 mg až 50,0 mg na den.
32. Použití podle nároku 31, vyznačené tím, že účinným množstvím je 0,1 až 10,0 mg na den.
01-2762-97
33. Použití podle nároku 31,
115
• · ·· • 00 0 0 0 9 • 0 0 0 « 0 0 • 9 0 00 0 0 « 0 0 0 0 « * · • « •; · 0 0··« 0 0 · 0 0 00 * * 0 0 • 0 0 • 0 0·' • 0 0« 0 • 0 0 0
vyznačené tím, že se R(+)-N-propargyl-l-aminoindan nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl podává intravenózně.
34. Použití R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli pro výrobu farmaceutické kompozice účinné pro léčení neurodegenerativní choroby.
35. Použití R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli pro výrobu farmaceutické kompozice účinné pro léčení neurotoxického poškození.
36. Použiti R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli pro výrobu farmaceutické kompozice účinné pro léčení mozkové ischemie.
37. Použití R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli pro výrobu farmaceutické kompb’žiče“^či’nné^prb’’l’éčéní’’traumatického poškození hlavy.
38. Použití R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli pro výrobu farmaceutické kompozice účinné pro léčení traumatického poškození míchy.
116
i»· ·' • 0 0«' ϋ · • > • 0 0 0 · 0 0 * • ··· 0 • • 0 0 0 0 4 • 4 • · V 0 0 • 00 0 4 0 0« 00* 0 0 * ♦ 0 0 0' 0 • ·· 0 0 «« • • 0 • *
39. Použití R(+)-N-propargyl-l-aminoindanu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli pro výrobu farmaceutické kompozice účinné pro zabránění nervovému poškozeni.
40. Použití podle nároku 39, vyznačené tím, že nervovým poškozením je poškození struktury zrakového nervu.
41. Použití podle nároku 39, vyznačené tím, že poškozením struktury nervu je poškození zrakového nervu.
CZ19973699A 1995-05-22 1996-05-22 Léčivo proti mrtvici CZ288724B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/446,439 US5744500A (en) 1990-01-03 1995-05-22 Use of R-enantiomer of N-propargyl-1-aminoindan, salts, and compositions thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ369997A3 true CZ369997A3 (cs) 1999-06-16
CZ288724B6 CZ288724B6 (cs) 2001-08-15

Family

ID=23772591

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19973699A CZ288724B6 (cs) 1995-05-22 1996-05-22 Léčivo proti mrtvici

Country Status (22)

Country Link
US (6) US5744500A (cs)
EP (1) EP0828485A4 (cs)
JP (1) JP3341898B2 (cs)
KR (1) KR100412154B1 (cs)
CN (1) CN1096853C (cs)
AU (1) AU699090B2 (cs)
BR (1) BR9608733A (cs)
CA (1) CA2221458A1 (cs)
CZ (1) CZ288724B6 (cs)
EE (1) EE03741B1 (cs)
HK (1) HK1015269A1 (cs)
HU (1) HUP9901629A3 (cs)
IL (1) IL118247A (cs)
LT (1) LT4455B (cs)
LV (1) LV12083B (cs)
MX (1) MX9708977A (cs)
NO (1) NO975331L (cs)
NZ (1) NZ308866A (cs)
PL (1) PL184124B1 (cs)
RU (1) RU2203653C2 (cs)
SK (1) SK283675B6 (cs)
WO (1) WO1996037199A1 (cs)

Families Citing this family (83)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5744500A (en) * 1990-01-03 1998-04-28 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Use of R-enantiomer of N-propargyl-1-aminoindan, salts, and compositions thereof
US5877218A (en) * 1994-01-10 1999-03-02 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Compositions containing and methods of using 1-aminoindan and derivatives thereof and process for preparing optically active 1-aminoindan derivatives
US5726969A (en) * 1994-12-28 1998-03-10 Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. Optical recording medium having dual information surfaces
IL118836A (en) 1996-07-11 2001-01-11 Teva Pharma Pharmaceutical compositions comprising s-(-)-n-propargyl-1-aminoindan
US7129061B1 (en) * 1996-08-07 2006-10-31 Biogen Idec Ma Inc. Tumor necrosis factor related ligand
GB9715082D0 (en) * 1997-07-17 1997-09-24 Scherer Ltd R P Treatment of attention deficit hyperactivity disorder and narcolepsy
US6232326B1 (en) 1998-07-14 2001-05-15 Jodi A. Nelson Treatment for schizophrenia and other dopamine system dysfunctions
CA2387394C (en) 1999-10-27 2009-08-18 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Use of 1-aminoindan derivatives for treatment of mania in bipolar mood disorder
DK1441708T3 (da) 2001-11-05 2009-07-06 Krele Pharmaceuticals Llc Sammensætninger og fremgangsmåder til forögelse af föjelighed med terapier ved anvendelse af aldehyddehydrogenase-inhibitorer og behandling af alkoholisme
US20040010038A1 (en) * 2002-02-27 2004-01-15 Eran Blaugrund Propargylamino indan derivatives and propargylamino tetralin derivatives as brain-selective MAO inhibitors
WO2004041151A2 (en) * 2002-11-07 2004-05-21 Technion Research And Development Foundation Ltd. Neuroprotective iron chelators and pharmaceutical compositions comprising them
EP2526944B1 (en) 2002-11-15 2016-06-01 Teva Pharmaceutical Industries Limited Use of rasagiline with or without riluzole to treat amyotrophic lateral sclerosis
US20040176430A1 (en) * 2002-11-21 2004-09-09 Jeffrey Sterling Propargyl-trifluoromethoxy-amino-benzothiazole derivatives
CN1605336A (zh) 2003-10-10 2005-04-13 中国医学科学院药物研究所 左旋丁基苯酞在制备预防和治疗脑梗塞的药物中的应用
US8097608B2 (en) * 2003-11-25 2012-01-17 Technion Research And Development Foundation Ltd. Methods for treatment of cardiovascular disorders and diseases
CA2547053C (en) 2003-11-25 2014-05-27 Technion Research & Development Foundation Ltd. Compositions and methods for treatment of cardiovascular disorders and diseases
JP2005232148A (ja) * 2004-02-03 2005-09-02 Technion Research & Development Foundation Ltd 神経保護剤としてプロパルギルアミンの使用
US20050197365A1 (en) * 2004-02-27 2005-09-08 Jeffrey Sterling Diamino thiazoloindan derivatives and their use
CA2574925A1 (en) * 2004-07-26 2006-02-09 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Pharmaceutical dosage forms including rasagiline
US20060025446A1 (en) * 2004-07-27 2006-02-02 Jeffrey Sterling Propargyl nitroxides and indanyl nitroxides and their use for the treatment of neurologic diseases and disorders
WO2006014968A2 (en) * 2004-07-27 2006-02-09 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Propargyl nitroxydes and indanyl nitroxides and their use for the treatment of neurologic diseases and disorders
DK2332408T3 (da) 2005-02-17 2013-12-02 Biogen Idec Inc Behandling af neurologiske sygdomme
WO2006089164A1 (en) * 2005-02-17 2006-08-24 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Combination therapy with glatiramer acetate and rasagiline for the treatment of multiple sclerosis
US20100167983A1 (en) * 2007-10-22 2010-07-01 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Combination therapy with glatiramer acetate and rasagiline for the treatment of multiple sclerosis
RU2404746C2 (ru) 2005-02-23 2010-11-27 Тева Фармасьютикал Индастриз, Лтд. Композиции разагилина с улучшенной однородностью содержимого
US8022104B2 (en) * 2005-02-24 2011-09-20 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Formulations of ladostigil tartrate
WO2006122187A2 (en) 2005-05-10 2006-11-16 Biogen Idec Ma Inc. Treating and evaluating inflammatory disorders
EP1888056A4 (en) * 2005-06-01 2008-09-03 Teva Pharma USE OF LADOSTIGIL FOR TREATING MULTIPLE SCLEROSIS
FR2886549B1 (fr) * 2005-06-06 2007-09-07 Biocodex Composition pharmaceutique destinee a la prevention ou au traitement des oedemes cerebraux
US8263655B2 (en) * 2005-10-06 2012-09-11 Technion Research And Development Foundation Ltd Methods for treatment of renal failure
US7491847B2 (en) * 2005-11-17 2009-02-17 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Methods for isolating propargylated aminoindans
US7572834B1 (en) 2005-12-06 2009-08-11 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Rasagiline formulations and processes for their preparation
US20070135518A1 (en) * 2005-12-09 2007-06-14 Marta Weinstock-Rosin Use of low-dose ladostigil for neuroprotection
JP2009518433A (ja) * 2005-12-09 2009-05-07 イッサム リサーチ ディベロップメント カンパニー オブ ザ ヘブライ ユニバーシティー オブ エルサレム 神経保護用の低用量ラドスチギルの使用
US20110047685A1 (en) * 2006-02-16 2011-03-03 Ferrara Vincent R Impact energy management method and system
US8809310B2 (en) 2006-02-21 2014-08-19 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Use of rasagiline for the treatment of multiple system atrophy
TW200744576A (en) * 2006-02-24 2007-12-16 Teva Pharma Propargylated aminoindans, processes for preparation, and uses thereof
AU2007235517B2 (en) * 2006-04-03 2013-01-31 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Use of rasagiline for the treatment of Restless Legs Syndrome
CN101062897B (zh) * 2006-04-25 2011-11-23 重庆医药工业研究院有限责任公司 一种制备2，3-二氢-1h-茚-1-胺及其衍生物的改进方法
EP1892233A1 (de) * 2006-08-18 2008-02-27 Ratiopharm GmbH Neue Salze des Wirkstoffs Rasagilin
CA2672414A1 (en) * 2006-12-14 2008-06-26 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Crystalline solid rasagiline base
BRPI0718339A2 (pt) * 2006-12-14 2014-02-18 Teva Pharma Composto, composição, composição farmacêutica e processo de fabricação de tanato de rasagilina
EP1987816A1 (de) * 2007-04-30 2008-11-05 Ratiopharm GmbH Adsorbate eines Rasagilinsalzes mit einem wasserlöslichen Hilfsstoff
CA2698695A1 (en) * 2007-09-05 2009-03-12 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Method of treating glaucoma using rasagiline
US8188149B2 (en) * 2007-09-17 2012-05-29 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Use of R(+)-N-propargy1-1-aminoindan to treat or prevent hearing loss
CN101909438A (zh) * 2008-01-11 2010-12-08 泰华制药工业有限公司 雷沙吉兰制剂、其制备及用途
US20110105788A1 (en) * 2008-03-28 2011-05-05 Medichem, S.A. Polymorphic Form of an Aminoindan Mesylate Derivative
PL2285769T3 (pl) * 2008-06-02 2015-01-30 Generics Uk Ltd Sposób otrzymywania enancjomerycznie czystych amin
US20110184071A1 (en) * 2008-06-02 2011-07-28 Vinayak Gore process for the preparation of amines
ES2389353T3 (es) * 2008-06-10 2012-10-25 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Cápsulas de gelatina blanda de rasagilina
NZ589445A (en) * 2008-06-13 2013-06-28 Teva Pharma Rasagiline for parkinson's disease modification
US8334409B2 (en) * 2008-06-19 2012-12-18 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Process for purifying rasagiline base
WO2009154777A2 (en) * 2008-06-19 2009-12-23 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Process for preparing and drying solid rasagiline base
EA201170181A1 (ru) 2008-07-11 2011-08-30 Синтон Бв Полиморфные формы разагилина гидрохлорида
WO2010013048A1 (en) * 2008-07-30 2010-02-04 Generics [Uk] Limited Polymorphic form of rasagiline mesylate
EP2218444A3 (en) 2009-01-23 2010-08-25 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Delayed release rasagiline formulation
US20100189791A1 (en) * 2009-01-23 2010-07-29 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Delayed release rasagiline malate formulation
EP2417101B1 (en) * 2009-04-09 2013-10-23 Merck Sharp & Dohme B.V. Indane derivatives
JP2012532843A (ja) 2009-07-09 2012-12-20 ラティオファーム ゲーエムベーハー ラサギリンの塩およびその製剤
CN102048717B (zh) † 2009-10-29 2014-02-19 重庆医药工业研究院有限责任公司 一种稳定的雷沙吉兰组合物
EP2325159A1 (en) 2009-11-24 2011-05-25 LEK Pharmaceuticals d.d. Novel salts of rasagiline
US8741962B2 (en) * 2009-11-26 2014-06-03 Usv Limited Process for preparation of Rasagiline and salts thereof
EP2515891A4 (en) * 2009-12-22 2013-06-05 Teva Pharma 3-keto-N-propargyl-1-aminoindan
JP6045347B2 (ja) 2010-02-03 2016-12-14 ファーマ ツー ビー リミテッド ラサギリンの持続放出性製剤およびその使用
EP2563347B1 (en) 2010-04-30 2016-10-12 Teikoku Pharma USA, Inc. Propynylaminoindan transdermal compositions
JP2013533287A (ja) 2010-07-27 2013-08-22 テバ ファーマシューティカル インダストリーズ リミティド 嗅覚機能不全の処置のためのラサギリンの使用
WO2012015946A1 (en) 2010-07-27 2012-02-02 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Dispersion of rasagiline citrate
CA2809966C (en) 2010-09-01 2019-01-08 Tonix Pharmaceuticals, Inc. Treatment for cocaine addiction
KR20140023872A (ko) 2010-10-26 2014-02-27 테바 파마슈티컬 인더스트리즈 리미티드 중수소 농축 라사길린
WO2012125020A1 (en) * 2011-03-14 2012-09-20 N.V. Nutricia Method for treating neurotrauma
CN103476404B (zh) 2011-03-24 2017-09-29 帝国制药美国公司 包含活性剂层和活性剂转化层的透皮组合物
JP2014534197A (ja) 2011-10-10 2014-12-18 テバ ファーマシューティカル インダストリーズ リミティド Ｒ（＋）−ｎ−メチル−プロパルギルアミノインダン
MX2014004308A (es) 2011-10-10 2014-07-24 Teva Pharma R(+)-n-formil-propargil-aminoindan.
WO2013070526A1 (en) 2011-11-09 2013-05-16 Teikoku Pharma Usa, Inc. Methods for the treatment of skin neoplasms
EP2827848B1 (en) 2012-03-21 2016-04-27 Synthon BV Stabilized pharmaceutical compositions comprising rasagiline salts
WO2013175493A1 (en) 2012-04-09 2013-11-28 Cadila Healthcare Limited Stable oral pharmaceutical compositions
AR092168A1 (es) 2012-08-17 2015-03-25 Teva Pharma Formulaciones parenterales de rasagilina
SG11201502681WA (en) 2012-11-02 2015-05-28 Teikoku Pharma Usa Inc Propynylaminoindan transdermal compositions
ES2524865T1 (es) * 2013-02-06 2014-12-15 Galenicum Health S.L. Composiciones farmacéuticas estables en forma de comprimidos de liberación inmediata
ES2502140T1 (es) * 2013-02-06 2014-10-02 Galenicum Health S.L. Comprimidos de liberación inmediata de rasagilina hemitartrato
WO2014141280A1 (en) * 2013-03-13 2014-09-18 Abital Pharma Pipelines Ltd. Methods, compositions and devices for treatment of motor and depression symptoms associated with parkinson's disease
CN103804200B (zh) * 2014-02-21 2015-04-29 常州市第四制药厂有限公司 雷沙吉兰及其类似物的制备方法
US11701340B2 (en) * 2019-04-17 2023-07-18 Vici Health Sciences., Llc Liquid pharmaceutical compositions

Family Cites Families (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3201470A (en) * 1965-08-17 Chsx c cech
US513244A (en) * 1894-01-23 Island
US3253037A (en) * 1962-06-19 1966-05-24 Ciba Geigy Corp N-2-alkynyl-amino-benzocylo-alkanes
GB1187017A (en) * 1966-07-16 1970-04-08 Aspro Nicholas Ltd Substituted 1-Amino Indanes and Tetrahydronaphthalens
GB1037014A (en) 1963-08-02 1966-07-20 Aspro Nicholas Ltd Derivatives of 1-aminoindane
US3513249A (en) * 1968-12-24 1970-05-19 Ideal Ind Explosion connector with improved insulating means
GB1548022A (en) 1976-10-06 1979-07-04 Wyeth John & Brother Ltd Pharmaceutial dosage forms
DE3779500T2 (de) 1986-06-10 1993-01-21 Chiesi Farma Spa Levodopa-methyl-ester enthaltende pharmazeutische zusammensetzungen, ihre herstellung und therapeutische verwendungen.
EP0258096B1 (fr) 1986-08-21 1992-09-09 Roussel-Uclaf Dérivés de l'indane, leur procédé de préparation, leur application à titre de médicaments, les compositions pharmaceutiques les renfermant et les intermédiaires obtenus
HU197510B (en) 1986-12-19 1989-04-28 Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet Process for producing pharmaceutical composition containing phenyl-alkyl-amine derivatives, against motion-sick
US4855326A (en) * 1987-04-20 1989-08-08 Fuisz Pharmaceutical Ltd. Rapidly dissoluble medicinal dosage unit and method of manufacture
CA1327795C (en) 1987-08-14 1994-03-15 Jules Freedman Antidepressants which are aryloxy inadanamines
FR2626877B1 (fr) 1988-02-05 1991-04-05 Delalande Sa Ethers alkyliques ou benzyliques du phenol, leurs procedes de preparation et leur application en therapeutique
HU208484B (en) 1988-08-17 1993-11-29 Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet Process for producing pharmaceutical composition containing acid additional salt of selegilin as active component for treating schisofrenia
GB8909793D0 (en) 1989-04-28 1989-06-14 Beecham Group Plc Pharmaceutical formulation
US5079018A (en) * 1989-08-14 1992-01-07 Neophore Technologies, Inc. Freeze dry composition and method for oral administration of drugs, biologicals, nutrients and foodstuffs
JPH04504760A (ja) 1989-09-25 1992-08-20 アメリカ合衆国 炎症性反応の検出およびストレスに対する応答の予測をするための評価方法
JP3412694B2 (ja) 1989-10-02 2003-06-03 シーマ・ラブス、インコーポレイテッド 発泡性投与剤
FR2655044B1 (fr) 1989-11-24 1995-03-03 Delalande Sa Derives d'(hetero) arylmethyloxy-4 phenyl tetrazole et oxadiazole, leur procede de preparation et leur application en therapeutique.
JPH03176457A (ja) 1989-12-04 1991-07-31 Nippon Paint Co Ltd 新規プロパルギル化合物、その製法ならびに該化合物を含む被覆材
IL92952A (en) 1990-01-03 1994-06-24 Teva Pharma R-enantiomers of n-propargyl-1-aminoindan compounds, their preparation and pharmaceutical compositions containing them
US5744500A (en) * 1990-01-03 1998-04-28 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Use of R-enantiomer of N-propargyl-1-aminoindan, salts, and compositions thereof
CA2039742A1 (en) 1990-04-23 1991-10-24 Andrew B. Dennis Tablet composition and method for problem pharmaceutical materials
US5169868A (en) 1991-03-01 1992-12-08 University Of Saskatchewan Aliphatic propargylamines as specific mao-b inhibitors
US5767164A (en) * 1991-04-04 1998-06-16 Innovations Foundation Use of deprenyl to rescue damaged nerve cells
US5444095A (en) * 1991-04-04 1995-08-22 University Of Toronto, Innovations Foundation Use of deprenyl to rescue damaged nerve cells
US5844003A (en) * 1991-04-04 1998-12-01 Innovations Foundation Use of deprenyl compounds to maintain, prevent loss, or recover nerve cell function
IL112819A (en) 1991-10-16 2001-11-25 Teva Pharma Fluorinated 1-aminoindan compounds and a process for their preparation
NZ246091A (en) * 1991-12-24 1995-08-28 Yamanouchi Pharma Co Ltd Intrabuccally disintegrating preparation containing an active ingredient, agar, and lactose and/or mannitol
US5298261A (en) * 1992-04-20 1994-03-29 Oregon Freeze Dry, Inc. Rapidly distintegrating tablet
AU4534593A (en) 1992-06-12 1994-01-04 Affymax Technologies N.V. Compositions and methods for enhanced drug delivery
SE501848C2 (sv) 1992-11-18 1995-06-06 Kvaerner Pulping Tech Metod att koka massa kontinuerligt vid konstant temperatur
IL111240A (en) 1993-10-18 2001-10-31 Teva Pharma Salts of r(+) - enantiomers of n- propargyl-1-aminoindan and pharmaceutical compositions comprising them
IL112779A (en) 1994-03-01 1999-11-30 Gergely Gerhard Granular product or tablet containing an efferescent system and an active pharmaceutical substance and its preparation
EE04039B1 (et) 1995-03-02 2003-06-16 R.P. Scherer Limited Farmatseutiline kompositsioon peroraalseks manustamiseks, selle valmistamismeetod ja kasutamine
IL115357A (en) 1995-09-20 2000-01-31 Teva Pharma Stable compositions containing N-propargyl-1-aminoindan and polyhydric alcohols
IL118836A (en) * 1996-07-11 2001-01-11 Teva Pharma Pharmaceutical compositions comprising s-(-)-n-propargyl-1-aminoindan
WO1999037293A2 (en) * 1998-01-27 1999-07-29 Thomas Thomas N Use of an mao-a or mao-b inhibitor for the treatment of vascular disorders
FI104042B (fi) * 1998-09-29 1999-11-15 Aaro Kiuru Menetelmä keuhkojen perfuusion mittaamiseksi
US6248363B1 (en) * 1999-11-23 2001-06-19 Lipocine, Inc. Solid carriers for improved delivery of active ingredients in pharmaceutical compositions
US20030180352A1 (en) * 1999-11-23 2003-09-25 Patel Mahesh V. Solid carriers for improved delivery of active ingredients in pharmaceutical compositions
PL370793A1 (en) * 2001-07-04 2005-05-30 Sun Pharmaceutical Industries Limited Gastric retention controlled drug delivery system
US20040010038A1 (en) * 2002-02-27 2004-01-15 Eran Blaugrund Propargylamino indan derivatives and propargylamino tetralin derivatives as brain-selective MAO inhibitors
US20040166159A1 (en) * 2002-05-29 2004-08-26 Chien-Hsuan Han Pharmaceutical dosage forms having immediate and controlled release properties that contain an aromatic amino acid decarboxylase inhibitor and levodopa
US20060009483A1 (en) * 2002-05-31 2006-01-12 Bayer Pharmaceuticals Corporation Compounds and compositions for the treatment of diabetes and diabetes-related disorders
WO2004026453A2 (en) * 2002-09-06 2004-04-01 Genteric, Inc. Microcapsules and methods of use
EP2526944B1 (en) * 2002-11-15 2016-06-01 Teva Pharmaceutical Industries Limited Use of rasagiline with or without riluzole to treat amyotrophic lateral sclerosis
US20050026979A1 (en) * 2003-07-31 2005-02-03 Maha Ghazzi Methods for treating inflammation and inflammation-associated diseases with a statin and ether
RU2404746C2 (ru) * 2005-02-23 2010-11-27 Тева Фармасьютикал Индастриз, Лтд. Композиции разагилина с улучшенной однородностью содержимого

Also Published As

Publication number Publication date
CN1191481A (zh) 1998-08-26
EP0828485A4 (en) 1998-12-02
CA2221458A1 (en) 1996-11-28
IL118247A0 (en) 1996-09-12
SK283675B6 (sk) 2003-11-04
US6956060B2 (en) 2005-10-18
US20030065038A1 (en) 2003-04-03
WO1996037199A1 (en) 1996-11-28
NO975331D0 (no) 1997-11-20
EE9700310A (et) 1998-06-15
HUP9901629A3 (en) 2000-03-28
WO1996037199A8 (en) 1999-08-12
NO975331L (no) 1998-01-20
PL323470A1 (en) 1998-03-30
EP0828485A1 (en) 1998-03-18
US6316504B1 (en) 2001-11-13
SK157497A3 (en) 1998-05-06
EE03741B1 (et) 2002-06-17
KR19990021896A (ko) 1999-03-25
IL118247A (en) 2002-07-25
RU2203653C2 (ru) 2003-05-10
PL184124B1 (pl) 2002-09-30
US20060094783A1 (en) 2006-05-04
KR100412154B1 (ko) 2004-07-05
US6630514B2 (en) 2003-10-07
CN1096853C (zh) 2002-12-25
JP2000508292A (ja) 2000-07-04
US20070100001A1 (en) 2007-05-03
NZ308866A (en) 1999-09-29
CZ288724B6 (cs) 2001-08-15
AU5872396A (en) 1996-12-11
BR9608733A (pt) 1999-12-07
US20030212145A1 (en) 2003-11-13
LT4455B (lt) 1999-01-25
AU699090B2 (en) 1998-11-19
LV12083A (lv) 1998-07-20
JP3341898B2 (ja) 2002-11-05
US5744500A (en) 1998-04-28
LV12083B (en) 1998-09-20
MX9708977A (es) 1998-03-31
LT97200A (en) 1998-09-25
HUP9901629A2 (hu) 2000-02-28
HK1015269A1 (en) 1999-10-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5744500A (en) Use of R-enantiomer of N-propargyl-1-aminoindan, salts, and compositions thereof
CA2174449C (en) R-enantiomer of n-propargyl-1-aminoindan, salts, compositions and uses thereof
US5891923A (en) R-enantiomer of N-propargyl-1-aminoindan for the treatment of dementia

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20080522