KR19990021896A

KR19990021896A - Ｎ-프로파길-1-아미노인단의 ｒ-에난시오머, 염, 및 그들의 조성물의 사용

Info

Publication number: KR19990021896A
Application number: KR1019970708371A
Authority: KR
Inventors: 모우사 비. 에이치. 유딤; 존 피. 엠. 핀베르그; 루스 레비; 제프리 스터링; 데이비드 러너; 하임 옐린; 알렉스 베인베르그
Original assignee: 비.제트.와이너, 예후다흐 리브네흐; 테바 파마슈티칼 인더스트리스, 인코포레이티드; 예후다 드비르, 기르 하이모비츠; 테크니온 리서치 앤드 디벨롭먼트 파운데이션 리미티드
Priority date: 1995-05-22
Filing date: 1996-05-22
Publication date: 1999-03-25
Also published as: LV12083B; JP3341898B2; EP0828485A1; EP0828485A4; US6630514B2; AU699090B2; LT97200A; CN1191481A; JP2000508292A; WO1996037199A8; RU2203653C2; AU5872396A; EE9700310A; IL118247A0; US20030065038A1; PL184124B1; IL118247A; SK157497A3; KR100412154B1; US6956060B2

Abstract

본 발명은 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 및 제약학적으로 허용가능한 이것의 염류 그리고 같은 것을 포함하는 제약학적인 조성물을 제공한다. 또한 본 발명은 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 본 발명과 제약학적으로 허용가능한 염을 이용하여 파킨슨씨 병, 기억 혼란, 치매, 우울증, 기능항진성 증후군, 정서 장애, 신경퇴행성 질병, 신경독 손상, 발작, 뇌 허혈, 두개외상성 손상, 척추외상성 손상, 신경외상, 정신분열증, 다동증후군, 다발성 경화증 또는 금단증이 있는 환자를 치료하는 방법을 제공한다. 더 나아가 본 발명은 환자의 신경 손상을 방지하는 방법을 제공한다. 결국 본 발명은 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단, 그것의 염류 및 라세미 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단을 조제하는 방법을 제공한다.

Description

Ｎ-프로파길-1-아미노인단의 Ｒ-에난시오머, 염, 및 그들의 조성물의 사용

본 명세서전체를 통해서, 다양한 참고 문헌이 인용되어 있다. 이들 간행물의 개시 내용은 본 발명과 관련있는 기술 상태를 더욱 완전하게 설명하기 위해 본 명세서내에 참고로 삽입되어 있다.

Ⅰ.

본 발명은 효소 모노아민 옥시다아제(이하 MAO)의 선택 비가역적 억제물질의 기술 분야에 관한 것이며 그리고 모노아민 옥시다아제 효소(이하 MAO-B)의 B-형태의 선택 비가역적 억제물질인 N-프로파길-1-아미노인단(N-propargyl-a-aminoindan) (이하 PAI)의 R(+) 에난시오머(enantiomer)를 제공한다. 본 발명은 또한 파킨슨씨 병(Parkinson's disease), 기억 혼란(a memory disorder), 치매(dimentia), 우울증(depression), 기능항진성 증후군(hyperactive syndrome), 정서 장애(an affective illness), 신경 퇴행성 질병(a neurodegenerative disease), 신경독 손상(a neurotoxin injury), 발작(stroke), 뇌 허혈(brain ischemia), 두개 외상성 손상(a head trauma injury), 척추 외상성 손상(a spinal trauma injury), 신경외상(neurotrauma), 정신분열증(schiwophrenia), 다동증후군(a attention deficit disorder), 다발성 경화증(multiple sclerosis) 및 금단증(withdrawal symptoms)의 치료에 특히 유용한 R(+)PAI를 함유하는 제약학적 조성물을 제공한다.

Ⅱ.

파킨스씨 병은 광범위하게 방출되는 신경전달물질 도파민(neurotransmitter dopamine) 총량의 계속적인 감소로 인한, 뇌의 접합부전 도파민작동성 뉴런(pre-synaptic dopaminergic neurons)의 퇴화의 결과일 거라고 간주된다. 따라서, 부적당한 도파민 방출(release)은 파킨슨씨 병의 증상인 자율 근육 조절의 장애 시작을 이끌어낸다.

각종 파킨슨씨 병을 치료하는 방법이 확립되었고 예를 들면, L-카르비도파(carbidopa) 또는 벤제라지드(benserazide)와 같은 디카르복실라제(decarboxylase) 억제물질과 함께 L-DOPA의 투여를 포함해서 현재 널리 보급되어 있는 용법을 사용한다. 디카르복실라제 억제물질은 주변의 탈카르복실반응으로 부터 L-DOPA 분자를 보호하고 따라서 뇌의 선조(striatum)에 잔류하는 도파민작동성 뉴런에 의한 L-DOPA 흡수를 보장한다. 여기서, L-DOPA는 도파민으로 변환되어 이들 뉴런에 도파민의 수준을 증가시킨다. 따라서, 생리학적 충동에 대한 반응으로, 이들 뉴런은 정상적으로 요구되는 것과 비슷한 수준으로 다량의 도파민을 방출할 수 있다. 따라서 L-DOPA 치료는 질병의 증상을 완화시키고 환자의 안녕에 기여한다.

하지만, L-DOPA 치료는 단지 치료한지 처음 몇 년동안만 최적의 효과가 있다는 주된 결점을 가진다. 이 기간이 지나면, 임상 반응이 감소하고, 운동장애(dyskinesia), 하루종일 효능의 변동("온-오프 효과") 및 혼동 상태, 편집증 및 환각과 같은 정신병 증상을 포함하는 해로운 부작용이 따른다. 이런 L-DOPA 치료의 효과의 감소는 질병의 자연스런 진행, 도파민 생산의 증가 및 도파민 대사산물(metabolites)의 증가의 결과로써 도파민 수용체에서의 변성 및 L-DOPA 흡수의 약물 동력학적 문제(문헌 Youdim, et al., Progress in Medicinal Chemistry, 21, 138-167(1984)을 참조)를 포함하여, 다수의 인자에 기인한다.

L-DOPA 치료의 결점을 극복하기 위해, 각종 치료 방법들이 고안되어 왔고, 새롭게 형성된 도파민의 대사 장애를 감소시킬 목적으로 L-DOPA가 MAO 억제물질과 결합된다(예를 들면, 1989년 5월 2일에 부여된 Chiese, P., US. Patent No. 4,826,875를 참조하기 바란다).

MAO는 상이한 기질과 억제물질에 대해 선택적인 MAO-A 및 MAO-B로 알려진 두가지 형태로 존재한다. 예를 들면, MAO-B는 2-페닐에틸아민과 같은 기질을 더욱 효과적으로 물질 대사시키고, 선택적으로 그리고 비가역적으로 하기와 같은 (-)-디프레닐(deprenyl)에 의해 억제된다.

하지만, L-DOPA와 MAO-A 및 MAO-B 모두의 억제물질과 결합되는 치료방법은 바람직하지 않다는 것을 알려야한다. 왜냐하면, 그 치료방법은 중추신경축(neuraxis)를 통해서 증가된 카테콜아민의 수준에 관한 해로운 부작용을 이끌어 내기 때문이다. 더욱이, MAO의 완벽한 억제는 또한 이것은 소위 "치즈 효과(cheese effect)"(Youdim et al., Handbook of Experimental Pharmacology, ed. by Trendelenburg and Weiner, Springer Verlag, 90, ch. 3(1988)을 참고한다)를 이끌어 내는 티라민(tyramin)과 같은 교감 신경 자극성 아민의 작용을 가능하게 하기 때문에 바람직하지 않다. MAO-B가 뇌에서 MAO의 주(主) 형태일 거라고 보였기 때문에, 따라서 이런 형태에 대한 선택적인 억제물질은 한편으로는 도파민 파괴의 감소와 함께 다른 한편으로는 전체 MAO 억제의 체계적 효과의 최소화를 달성하기 위한 가능한 도구일 거라고 간주된다.

MAO의 많은 억제물질은 키랄 분자이다. 비록 한 에난시오머가 MAO-A 및 -B에 관하여 상대 역가(potency)에서 종종 몇몇 입체 선택성(stereoselectivity)을 보이긴 하지만, 주어진 에난시오머의 배치는 MAO-A와 MAO-B를 판별하는데 있어서 항상 그것의 거울상 이성체보다 더 선택적인 것은 아니다.

표 Ⅰ에는 MAO의 래트의 뇌를 제조하는 데 있어서 프로파길 아민의 에난시오머 쌍의 IC₅₀(mmol/L)가 실려 있다. 이들 결과는 MAO-B 억제물질에서의 역가에 있어서 R과 S 에난시오머사이의 차이가 적었음을 보여준다(B. Hazelhoff, et al., Naunyn-Schmeideberg's Arch. Pharmacol., 330, 50(1985)). 에난시오머 모두는 MAO-B에 대해 선택적이다. 1967년, 매기어 등(Magyar, et al.)은 R-(-)-디프레닐이 래트 뇌의 호모제네이트(homogenate)에 따라 티라민의 산화적 탈아민화를 억제하는데 있어서 500배 더 강력하다고 보고했다(K. Magyar, et al., Act. Physiol. Acad. Sci., Hung., 32, 377(1967)).

래트 간의 호모제네이트에서, R-디프레닐은 단지 S 에난시오머보다 단지 15배 강력하다. 티라민 흡수의 억제와 같은 다른 약리학적 활성 분석에서는 디프레닐은 상이한 입체 선택성을 보였다. 어떤 경우에 있어서 S 형태는 더욱 강력한 에피머(epimer)이다(J. Knoll and K. Magyar, Advances in Biochemical Psychopharmacology, 5, 393(1972)).

N-메틸-N-프로파길-1-아미노테트랄린(2-MPAT)는 디프레닐의 가까운 구조성 동족체이다. 2-MPAT의 절대 입체화학은 설정되지 않았다. 하지만, (+) 이성체는 MAO-B에 대해서 선택적이고 (-) 이성체는 MAO-A에 대해서 선택적이다. 2-MPAT 에난시오머사이의 역가의 차이는 5배보다 적다(B. Hazelhoff, et al., id.). 또한 N-프로파길-1-아미노테트랄린(1-PAT)의 에난시오머는 활성이 비슷하다. 분리된 (+) 또는 (-)-2-MPAT사이의 명확한 구조-활성 관계를 보여주는 표 Ⅰ의 데이터의 부족은 그의 절대 입체 화학을 예측하는 것을 불가능하게 한다.

확장 컴퓨터 모델링후, 폴리머로폴로스(Polymeropoulos)는 최근에 (R)-N-메틸-N-프로파길-1-아미노인단(R-1-MPAI)가 MAO-B 억제물질같은 (S)보다 더욱 강력할 거라고 예측했다(E. Polymeropoulos, Inhibitors of Monoamine Oxidase B, I. Szelenyi, ed., Birkhauser Verlag, p. 110(1993)). 하지만, 설명된 시험은 R-1-MPAI가 S-1-MPAO보다 MAO-B의 억제가 약간 더 강력하지만, MAO-A의 억제는 훨씬 더 강력하다는 것을 보여준다. MAO-A과 -B사이의 선택성과 R과 S 에피머의 상대 역가는 둘다 낮다. 따라서, 기술 분야에서 예측한 것과 반대로, 1-MPAI는 제약학적 약제로써 쓸모가 없다.

아래에 있는 데이터는 하나의 에난시오머 대 다른 에난시오머의 MAO에 대한 높은 선택성을 예측할 수 없다는 것을 보여준다. MAO 활성 부위의 구조는 어떤 주어진 화합물 또는 그의 에난시오머의 쌍의 상대 역가 또는 선택성을 예측할 수 있다는 것을 충분히 납득할 수 없다.

Ⅲ.

뇌의 발작은 선진국에서 사망 원인중 제 3위에 해당한다. 그 생존자들은 흔히 신경학상 및 운동 신경 장애로 고생한다. 대부분의 CNS 발작은 산소와 글루코스 결핍을 야기시키는 동맥혈 흐름의 폐색증에 이어 국소성 조직 무기력(localized tissue anemia)으로 간주된다. 레트에서 중앙 대뇌 동맥의 차단(MCAO)은 인간에게 있어서는 발작을 나타내는 것이라고 추정되는 공통 실험적 과정이다. 레트에서 몸 중심에 가까운 위치의 이런 동맥의 차단에 의해 일어나는 신경학 장애가 인간의 큰 초점 대뇌경색에 해당한다고 제안되고 있다(Yamori et al., 1976). 이러한 대응은 두 개 종의 두개순환사이의 유사함에 바탕을 두었다. 발작에 관한 다른 동물 모델은 Stefanovich에 의해 설명되었다.(1983).

MCAO 과정을 처음으로 소개한 다무라 등(Tamura et al.)(1981)에 의해 설명된 조직학의 변천은 일반적으로 프론탈(frontal)(100%), 센시모터(sensimotor)(75%) 및 오디토리(auditory)(75%) 지역의 외피에서 나타나고, 그리고 후두부의 돌출부 외피(25%)에서 작은 정도로 나타났다. 더욱이, 손상은 꼬리 모양의 핵(caudate nucleus)(100%)의 측면 세그먼트에서 관찰되고, 단지 그것의 중간 부분(38%)에서 다양하게 관찰되었다. 부수적으로, 하기 장애는 MCAO 동물에서 보고되었다: 신경학적 결핍(Menzies et al., 1992), 인식 장애(cognitive disturbances)(Yamamoto et al., 1988), 뇌 부종(Young et al., 1993; Matsui et al., 1993; Saur et al., 1993), 줄어든 동맥혈 흐름(Teasdale et al., 1983), 카데콜아민 변동(Cechetto et al., 1989). 이들 장애중 어떤 것이라도 래트에서 MCAO 다음에 오는 뇌 손상의 심각함과 범위를 나타낼지도 모른다. 반대로, 주어진 장애를 제한하거나 저지할 능력을 가진 약은 인간의 발작을 치료하기 위한 후보물질로 간주될 수 있다.

하나의 선택적 MAO-B 억제물질인,(-)-디프레닐은 광범위하게 연구되고 있고 L-DOPA 치료를 증대시키기 위해 MAO-B 억제물질로 사용된다. (-)-디프레닐로 치료하는 것은 일반적으로 바람직하며, MAO-B의 억제를 거의 완벽하게 할 수 있는 투여량에서 "치즈 효과"를 발생시키지 않는다(Elsworth, et al., Psychopharmacology, 57, 33(1978)). 더욱이, L-DOPA와 파킨슨씨 병 환자에게 투여된 디카르복실라제 억제물질의 조합에 (-)-디프레닐을 첨가하는 것은 운동불능(akinesia)과 전체 기능 향상 및 또한 "온-오프"형 변동(Birkmayer & Riederer in "Parkinson's Disease," Springer-Verlag, pp. 138-149(1983)을 참조)을 제거를 야기시킨다. 따라서, (-)-디프레닐은 (a)L-DOPA의 효과를 증대시키고 연장시키며, (b) L-DOPA 치료의 역효과를 증가시키지 않는다.

하지만, (-)-디프레닐은 선재하는 위궤양의 활성과 가끔 발생하는 고혈압 에피소드 (hypertensive episodes)를 포함하는 자기자신의 역 부작용이 없는 것은 아니다. 더욱이, (-)-디프레닐은 암페타민 유도체(an amphetamine derivative)이고, 심장박동수(heart rate)를 증가시킬 수 있는 좋지못한 부작용을 이끌어낼 수 있는 물질인 암페타민과 메타암페타민(methamphetamines)으로 변형된다(Simpson, Biochemical Pharmacology, 27, 1951(1978); Finberg, et al., in "Monoamine Oxidase Inhibitors-The State of the Art," Youdim and Paykel, eds., Wiley, pp. 31-43(1981)).

기타 화합물들은 MAO-B의 선택 비가역적 억제물질이지만 (-)-디프레닐과 관련해서 좋지못한 효과가 없는 것으로 설명되어 왔다. 일명 N-프로파길-1-아미노인단·HCl(라세미 PAI·HCl)인 화합물은 GB 1,003,686호와 GB 1,037,014호 그리고 1970년 5월 19일에 부여받은 USP 3,513,244호에 설명되었다. 라세미 PAI·HCl는 강력하고, 선택적이고, 비가역적인 MAO-B의 억제물질이고, 아페타민으로 변형되지 않고, 원치않은 교감신경 자극성 효과를 일으키지 않는다.

비교 동물 시험에서, 라세미 PAI는 (-)-디프레닐을 능가하는 상당한 이점을 가진 것으로 보여졌다. 예를 들면 라세미 PAI는 현저한 심빈박(tachycardia)을 만들어내지 않고, 혈압을 상승시키지 않고((-)-디프레닐의 5mg/kg의 투여량에 의해 생산된 효과), 순막의 수축 또는 5mg/kg까지의 투여량에서 심장박동수를 증가시키지 않았다(0.5 mg/kg이상의 투여량에서 (-)-디프레닐에 의해 발생된 효과). 또한, 라세미 PAI·HCl은 티라민의 심장혈관 효과를 더하지 않는다(Finberg, et al., in "Enzymes and Neurotransmitters in Mental Disease", pp. 205-219(1980), Usdin, et al., Eds., Wiley, New York; Finberg, et al.(1981), in "Monoamine Oxidase Inhibitors-The State of the Art',ibid.; Finberg and Youdim, British Journal Pharmacol., 85, 451(1985)).

본 발명의 기초가 되는 목적은 라세미 PAI 화합물을 분리해내고 다른 에난시오머와 관련하여 바람직하지 못한 부작용이 없는 MAO-B 억제물질 활성을 가진 에난시오머를 얻는 것이었다.

디프레닐이 PAI와 비슷한 구조를 가지고 디프레닐의 (-)-에난시오머, 예를 들면, (-)-디프레닐이 (+)-에난시오머보다 제약학적으로 더욱 우수한 활성이 있기 때문에, PAI의 (-)-에난시오머는 더 활성인 MAO-B 억제물질일 것이라고 기대되었다.

하지만, 이러한 예상과 반대로, 에나시오머가 분해되면, (+)-PAI 에난시오머가 활성 MAO-B 억제물질이고, 반면에 (-)-에난시오머가 극히 낮은 MAO-B 억제 활성을 보인다는 것이 발견되었다. 더욱이, (-)-PAI 에난시오머는 또한 라세미 형태에 따른 것보다 놀라울 정도로 높은 MAO-B 억제물질에 대한 선택도를 가지고, 따라서 지적된 질병의 치료에서 라세미 혼합물보다 바람직하지 못한 부작용을 더 적게 가질 것이다. 이 연구 결과는 하기에 더욱 상세히 설명된 바와 같이 시험관내(in vitro) 및 생체내(in vivo) 모두의 실험을 바탕으로 하고 있다.

결국 (+)-PAT는 R 절대 배열을 가진다는 것이 나타났다. 이 연구 결과는 또한 놀랍게도 디프레닐과 암페타민과의 (+)-PAI 동족체의 예상 구조 유사성을 바탕으로 했다.

본 명세서 하기에 설명된 바와 같은 R(+)-PAI와 S(-)에난시오머사이의 약리학적 활성의 높은 입체 선택성은 또한 주목할 만하다. 화합물 R(+)-PAI는 MAO-B 억제물질에서 S(-) 에난시오머보다 활성이 거의 10⁴더 활성이다. 이런 비율은 두 개의 디프레닐 에난시오머사이에서 관찰된 것 보다 현저하게 높다.(Knoll and Magyar, Adv. Biochem. Psychopharmacol., 5, 393(1972); Magyar, et al., Acta Physiol. Acad. Sci. Hung., 32, 377(1967)). 또한, 몇몇 약리학 시험에서, (+)-디프레닐은 (-) 에난시오머의 것보다 같거나 훨씬 높은 활성을 가진다고 보고되었다(Tekes, et al., Pol. J. Pharmacol. Pharm., 40, 653(1988)).

MPAI는 MAO 활성의 더 강력한 억제물질이지만, MAO-A 보다 B에 대한 선택성이 더 낮다(Tipton, et al., Biochem. Pharmacol., 31, 1250(1982)). MPAI로 놀랍게도 두 개의 분해된 에난시오머의 상대 활성에서 단지 적은 차이가 관찰되었기 때문에, R(+)PAI의 주목할 만한 작용이 더욱 강조된다(표 1B를 참조하기 바란다).

본 발명은 또한 파킨슨씨 병, 기억 혼란, 치매, 우울증, 기능항진성 증후군, 정서 장애, 신경 퇴행성 질병, 신경독 손상, 뇌 허혈, 두개 외상성 손상, 척추 외상성 손상, 정신분열증, 다동증후군, 다발성 경화증 또는 금단증의 치료를 위해 제약학적으로 활성인 PAI-에난시오머를 단독(L-DOPA없이)으로 사용하는 방법을 제공한다(문헌 Youdim, et al., in Handbook of Experimental Pharmacology, Trendelenberg and Wiener, eds., 90/I, ch. 3(1988)를 참조하기 바란다).

또한 본 발명은 파킨슨씨 병의 예비 치료를 위해 제약학적으로 활성인 PAI-에난시오머를 사용하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 R(+)PAI와 레보도파(levodopa)와 같은 상승 작용제(synergistic agents)를 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다. 이런 약제의 사용은 초기 파킨슨씨 병 한자에게 단독으로 투여할 때 효과적이라고 나타난 (-)-디프레닐에 대하여 연구되었고, 또한 α-토코페롤, 비타민 E 유도체와 함께 투여될 때 이들 환자에게 있어서 상승 효과가 있을 것이다(The Parkinson's Study Group, New England J. Med., 321(20), 1364-1371(1989)).

파킨슨씨 병을 치료하는 데 있어서 이의 유용성에 더해, (-)-디프레닐은 또한 알츠하이머 타입의 치매(DAT) 환자의 치료(Tariot, et al., Psycho- pharmacology, 91, 489-495(1987)) 및 우울증 치료(Mendelewicz and Youdim, Brit. J. Psychiat. 142, 508-511(1983))에 있어서도 유용하다고 보였다. 본 발명의 R(+)PAI 화합물 및 특히 제약학적인 그의 메실레이트 염이 기억을 회복시키는 것으로 나타났다. 따라서, R(+)PAI는 기억 혼란, 특히 알츠하미머 타입의 치매 그리고 어린이의 기능항진성 증후군의 치료를 위한 가능성을 가진다.

마지막으로, 본 발명은 제약학적으로 우수한 성질을 가진 고도로 안정한 R(+)PAI의 염을 제공한다. 메실레이트염은 특히, 안정하고, 예기치 않게 큰 선택성을 나타내고, 해당 라세미염이 나타낸 것 보다 현저하게 적은 부작용을 보인다.

도 1은 시험관내에서 MAO-A의 활성을 억제하는 실시예 22의 결과를 나타내는 그래프이다.

도 2는 시험관내에서 MAO-B의 활성을 억제하는 실시예 22의 결과를 나타내는 그래프이다.

도 3은 인간의 외피 조직에서 MAO-A의 활성을 억제하는 실시예 22의 결과를 나타내는 그래프이다.

도 4은 뇌에서 MAO-A의 급성 억제(복강내 주사(i.p))를 도시한 실시예 23의 결과를 나타내는 그래프이다.

도 5은 뇌에서 MAO-B의 급성 억제(복강내 주사(i.p))를 도시한 실시예 23의 결과를 나타내는 그래프이다.

도 6은 간에서 MAO-A의 급성 억제(복강내 주사(i.p))를 도시한 실시예 23의 결과를 나타내는 그래프이다.

도 7은 간에서 MAO-B의 급성 억제(복강내 주사(i.p))를 도시한 실시예 23의 결과를 나타내는 그래프이다.

도 8은 뇌에서 MAO-A의 급성 억제(경구 투입(per os))를 도시한 실시예 23의 결과를 나타내는 그래프이다.

도 9은 뇌에서 MAO-B의 급성 억제(경구 투입(per os))를 도시한 실시예 23의 결과를 나타내는 그래프이다.

도 10은 간에서 MAO-A의 급성 억제(경구 투입(per os))를 도시한 실시예 23의 결과를 나타내는 그래프이다.

도 11은 간에서 MAO-B의 급성 억제(경구 투입(per os))를 도시한 실시예 23의 결과를 나타내는 그래프이다.

도 12은 뇌에서 MAO-A의 만성 억제를 도시한 실시예 24의 결과를 나타내는 그래프이다.

도 13은 뇌에서 MAO-B의 만성 억제를 도시한 실시예 24의 결과를 나타내는 그래프이다.

도 14은 간에서 MAO-A의 만성 억제를 도시한 실시예 24의 결과를 나타내는 그래프이다.

도 15은 간에서 MAO-B의 만성 억제를 도시한 실시예 24의 결과를 나타내는 그래프이다.

도 16은 R(+)PAI를 i.p로 투여한 후 시간이 경과함에 따라 래트(rat)의 뇌에서 MAO-B의 활성을 나타내는 실시예 25의 결과를 나타내는 그래프이다.

도 17은 할로페리돌 6mg/kg s.c을 주사한 마우스(mice)의 정상적인 대사의 회복을 도시한 실시예 32의 결과를 나타내는 그래프이다. 마우스에는 지정된 투여량의 시험 약물이 i.p로 각각 투여된다. 활성 스코어(kinetic scores)는 할로페리돌이 투여되고 3시간 뒤에 관찰되었다. 이러한 스코어는 봉을 따라 수평으로 이동할 수 있는 능력과, 수칙봉을 내려오는 능력, 강직증의 단축을 관찰하는 것으로 구성된다. 할로페리돌이 없이, 최대 스코어는 12이고, 할로페리돌 한가지만일 경우는, 6.6±0.03이다. 통계적인 중요도는 Student의 "t" 테스트에 의해 계산되었다. 할로페리돌 하나만에 대해^★p≤0.05;^★★p≤0.01;^★★★p≤0.01. (R)-PAI의 스코어는 5mg/kg(p≤0.05), 10mg/kg(p≤0.01), 15mg/kg(p≤0.05), (n=5.6)에서 라세미-PAI 스코어와는 상당히 달랐다. 도시된 투약량은 PAI가 제거된 (또한 메실레이트염이 없는) 것을 기준으로 한다.

도 18은 100mg/kg의 α-메틸-p-타이로신을 i.p하여 치료한 래트의 활성 근육 활성의 회복을 도시한 실시예 32의 결과를 나타내는 그래프이다. 마우스에는 지지된 투여량의 시험 약물이 i.p로 투여된다. 2시간후에 래트에는 α-Mpt이 투여되고 곧바로 활성 케이지로 옮겨졌다. 총 근육 활성의 약 10시간 동안 기록되었다. 살린으로 치료된 대조구 래트는 15,862+1424의 스코어만을 나타냈다. α-Mpt 하나만으로는 8,108±810의 스코어를 나타냈다. 스튜던트의 "t" 테스트에 의한 통계적인 중요도는: α-Mpt 하나만에 대해^★p≤0.05;^★★p≤0.01;^★★★p≤0.01. (R)-PAI의 스코어는 2mg/kg(p≤0.01), (n=6)에서 라세미-PAI 스코어와는 상당히 달랐다. 도시된 투약량은 PAI가 제거된 메실레이트염이 없는 것을 기준으로 한다.

도 19는 손상 30분후와 이후 30분 간격으로 측정된 2분간의 산소 결핍에 대한 NADH 반응을 도시하는 그래프이다.

도 20은 래트에게 MCA-O와 [R](+)PAI 메실레이트염 치료후 48시간의 MRI T2-스캔에 의한 국소 빈혈에 의한 뇌손상 평가를 나타내는 그래프이다. 중뇌동맥은 실시예 38에 기술한 바와 같이, 외과적으로 폐색되었다. [R](+)PAI 메실레이트염은 하기와 같이 투여되었다: 외과 수술후 1.0mg/kg로 ip를 실시하였다. 경색 체적은(mm³) 수술 48시간후 MRI에 의해 결정되었다.

도 21은 MCA-O와 [R](+)PAI 메실레이트염을 치료를 받게되는 위스타 래트(Wistar rats)의 신경학적인 평가를 나타낸는 그래프이다: 중뇌동맥은 외과적으로 폐쇄되었고, 도 20과 같이 [R](+)PAI 메실레이트염이 투여되었다. 수술후 24시간에서 신경학적인 스코어는 실시예 38에 기술한 바와 같이 나타났다.

발명의 요약

본 발명은 다음 구조의 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단을 제공한다.

본 발명은 또 제약학적으로 허용 가능한 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 염을 제공한다.

본 발명은 또 치료학적으로 효과적인 양의 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단이나 제약학적으로 허용 가능한 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 염과 제약학적으로 허용 가능한 담체를 제공한다.

본 발명은 또 파킨슨씨 병에 걸린 환자를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 환자에게 환자의 파킨슨씨 병을 치료하는 데 효과적인 본 발명의 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단이나 제약학적으로 허용 가능한 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 염을 일정 양 복용시키는 것이다.

본 발명은 또 기억 혼란증에 걸린 환자를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 환자에게 환자의 기억 혼란증을 치료하는 데 효과적인 본 발명의 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단이나 제약학적으로 허용 가능한 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 염을 일정양 복용시키는 것이다.

본 발명은 또 치매에 걸린 환자를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 환자에게 환자의 치매를 치료하는 데 효과적인 본 발명의 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단이나 제약학적으로 허용 가능한 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 염을 일정양 복용시키는 것이다. 일 실시예에서, 위의 치매는 알츠하이머 타입이다.

본 발명은 또 우울증에 걸린 환자를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 환자에게 환자의 우울증을 치료하는 데 효과적인 본 발명의 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단이나 제약학적으로 허용 가능한 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 염을 일정양 복용시키는 것이다.

본 발명은 또 기능 항진성 증후군에 걸린 환자를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 환자에게 환자의 기능 항진성 증후군을 치료하는 데 효과적인 본 발명의 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단이나 제약학적으로 허용 가능한 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 염을 일정양 복용시키는 것이다.

본 발명은 또 정서 장애에 걸린 환자를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 환자에게 환자의 정서 장애를 치료하는 데 효과적인 본 발명의 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단이나 제약학적으로 허용 가능한 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 염을 일정양 복용시키는 것이다.

본 발명은 또 신경 퇴행성 질병에 걸린 환자를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 환자에게 환자의 신경 퇴행성 질병을 치료하는 데 효과적인 본 발명의 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단이나 제약학적으로 허용 가능한 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 염을 일정양 복용시키는 것이다.

본 발명은 또 신경독 손상을 입은 환자를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 환자에게 환자의 신경독 손상을 치료하는 데 효과적인 본 발명의 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단이나 제약학적으로 허용 가능한 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 염을 일정양 복용시키는 것이다.

본 발명은 또 뇌 허혈에 걸린 환자를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 환자에게 환자의 뇌 허혈을 치료하는 데 효과적인 본 발명의 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단이나 제약학적으로 허용 가능한 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 염을 일정양 복용시키는 것이다.

본 발명은 또 두개 외상성 손상을 입은 환자를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 환자에게 환자의 두개 외상성 손상을 치료하는 데 효과적인 본 발명의 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단이나 제약학적으로 허용 가능한 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 염을 일정양 복용시키는 것이다.

본 발명은 또 척추 외상성 손상을 입은 환자를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 환자에게 환자의 척추 외상성 손상을 치료하는 데 효과적인 본 발명의 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단이나 제약학적으로 허용 가능한 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 염을 일정양 복용시키는 것이다.

본 발명은 또 정신 분열증에 걸린 환자를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 환자에게 환자의 정신 분열증을 치료하는 데 효과적인 본 발명의 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단이나 제약학적으로 허용 가능한 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 염을 일정양 복용시키는 것이다.

본 발명은 또 다동 증후군에 걸린 환자를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 환자에게 환자의 다동 증후군을 치료하는 데 효과적인 본 발명의 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단이나 제약학적으로 허용 가능한 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 염을 일정양 복용시키는 것이다.

본 발명은 또 다발성 경화증에 걸린 환자를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 환자에게 환자의 다발성 경화증을 치료하는 데 효과적인 본 발명의 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단이나 제약학적으로 허용 가능한 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 염을 일정양 복용시키는 것이다.

본 발명은 또 환자의 신경 손상을 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 환자에게 환자의 신경 손상을 치료하는 데 효과적인 본 발명의 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단이나 제약학적으로 허용 가능한 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 염을 일정양 복용시키는 것이다.

본 발명은 또 금단증에 걸린 환자를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 환자에게 환자의 금단증을 치료하는 데 효과적인 본 발명의 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단이나 제약학적으로 허용 가능한 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 염을 일정양 복용시키는 것이다.

본 발명은 또 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은 유기 또는 무기 염기의 존재하에서 R(-)-아미노인단을 프로파길 브로마이드나 프로파길 클로라이드에 접촉시켜 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단을 형성하여, 형성된 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단을 분리하는 것이다.

본 발명은 또 라세미 N-프로파길-1-아미노인단을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은 유기 또는 무기 염기의 존재하에서 라세미 1-아미노인단을 프로파길 브로마이드나 프로파길 클로라이드에 접촉시켜 라세미 N-프로파길-1-아미노인단을 형성하여, 형성된 라세미 N-프로파길-1-아미노인단을 분리하는 것이다.

마지막으로, 본 발명은 또 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 염을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은 라세미 N-프로파길-1-아미노인단을 광학적 활성인 산과 접촉시켜 두 개의 디아스테레오머 N-프로파길-1-아미노인단 염을 형성하여, 형성된 디아스테레오머 N-프로파길-1-아미노인단염으로 부터 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 염을 분리하는 것이다.

본 발명은 다음과 같은 구조를 갖는 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단을 제공한다.

하기의 실험 예에서 입증된 바와 같이, R(+)PAI는 S(-)PAI의 약 7,000배이상으로 MAO-B의 억제물질로서 활성화된다. 당해 기술 분야에서 알려진 MAO-B 억제물질이 MAO-A 및 MAO-B 사이에서 낮은 선택성을 가지며, R 또는 S 구성 기능으로서의 효능에서는 예측가능한 경향을 보여주지 않는다는 관점에서 R(+)PAI의 선택성이 예상되지 않는다.

R(+)PAI는 PAI의 R- 및 S-에난시오머의 라세미산 혼합물의 광학 분해에 의해 얻어질수 있다. 그러한 분해는 J. Jacques, A. Collet and S. Wilen, "Enansiomers, Racemates and Resolution", Wiley, New York (1981)에 설명된 바와 같은, 당해 기술 분야에서 숙련된 기술을 가진 사람에게 잘 알려진 통상적인 분해 방법에 의해 달성 될 수 있다. 예를 들어, 비대칭 칼럼 (chiral column)에서 예비 크로마토그래피에 의해 수행될 수 있다. 적절한 분해 방법에 대한 또다른 실시예는 바람직한 R 에난시오머의 다이아스테레오머 염를 분리시키는 재결정에 이어지는 타르타르산, 말산, 만델산 또는 아미노산으로부터 파생된 N-아세틸과 같은 키랄산으로 이루어진 다이아스테레오머 염의 형성이다.

PAI의 R 및 S 에난시오머의 라세미 혼합물은 예를 들어 유럽 특허 GB 1,003,676 및 GB 1,037,014에 설명된 바와 같이 제조될 수 있다. PAI의 라세미 혼합물은 또한 1-요오드와 프로파길아민을 반응시켜 제조될 수 있다. 또한, 이 라세미 혼합물은 이민의 카본-질소 이중 본드를 소듐 보로하이드리드와 같은 적절한 화학 약품과의 환원 후 프로파길아민과 1-인다논을 반응시켜 상응하는 이민을 형성할수 있도록 제조 될 수 있다.

본 발명에 따르면, PAI의 R 에난시오머는 유기적인 또는 비유기적인 염기 상태에서 그리고 적절한 화학약품에서 프로파길 브로미드 또는 프로파길 요오드와 반응하여 1-아미노인단의 광학적으로 활성화된 R-에난시오머로부터 직접적으로 제조될 수 있다.

상기 반응에서 사용을 위한 적절한 유기적 또는 비유기적 염기는, 예를 들어 트리틸라민, 피리딘, 알칼리 금속 카보네이트 및 바이카보네이트를 포함한다. 솔벤트가 있는 상태에서 반응이 행해지면, 솔벤트는 예를 들어 톨루엔, 메틸렌, 요오드 및 아세톤이트릴로부터 선택될 수 있다. R(+)PAI를 제조하는 한 방법은 염기물로서 포타슘 바이카보네이트를 이용하고 솔벤트로서 아세톤이트릴을 이용하여 R-1-아미노인단과 프로파길 요오드를 반응시키는 것이다.

1-아미노인단의 상기 설명된 반응은 일반적으로 반응하지않는 1차 아민, 바람직한 2차 아민 및 3차 아민 N의 혼합물인 N-비스프로파길아미노 생산물을 야기시킨다. 바람직한 2차 아민, 즉, N-프로파길-1-아미노인단은 통상적인 분리 방법, 예를 들어 크로마토그래피, 증류 및 선택적인 추출 방법에 의해 이 혼합물로부터 분리 될 수 있다.

R-1-아미노인단 출발 물질은 당해 기술 분야에서 알려진 방법, 예를 들어 Lawson and Rao의 방법인 Bichemistry, 19, 2133 (1980), 본 발명에 참고로 인용된 방법 및 유럽 특허 EP No. 235, 590의 방법에 의해 제조 될 수 있다.

또한, R-1-아미노인단은 R 및 S 에난시오머의 라세미 혼합물의 분해, 예를 들어 키랄산으로 이루어진 다이아스테레오머 염의 형성 또는 J, Jacques, et al., ibid에 보고된 방법들과 같은 기타 알려진 방법에 의해 제조될 수 있다. 또한, R-1-아미노인단은 탄소, 플라티늄 산화물 또는 라네이 니켈 (Raney nickel) 상의 팔라듐과 같은 적절한 촉매를 거쳐 수소화처리에 의해 생성된 이민의 탄소 질소 이중 본드의 환원에 이어, 1-인다논을 광학적으로 활성화된 아민과 반응시켜 제조 될 수 있다. 광학적으로 활성화된 적절한 아민은, 예를 들어 발린 또는 페닐라라닌 (phenylalanine)과 같은 페네틸라민의 정반대의 것 중의 하나 또는 아미노산의 에스테르를 포함한다.

R-I-아미노인단을 제조하는 또다른 방법은 상기 설명된 바와 같이 인단-1-온 옥심 에테르의 수호화이며, 에테르의 알킬 부는 광학적으로 정제된 비대칭 중심을 포함한다. 또한, 이민 또는 옥심과 같은 탄소-질소 이중 본드를 포함하는 인단-1-온의 비대칭이 아닌 유도체가 키랄 환원제, 즉, 리듐 알루미늄-하이드리드 및 에페드린의 복합물로 환원될 수 있다.

본 발명은 또한 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 제약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.

본 발명의 실시예에서, 제약학적으로 허용가능한 염은 메실레이트, 말레산염, 푸마르산염, 타르타르산염, 염화수소, 브롬화수소산염, 에실레이트, p-톨루엔술포네이트, 벤졸산염, 아세테이트, 인산염 및 황산염등을 포함한다.

일실시예에서, 염은 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 메실레이트염, R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 에실레이트 염 및 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 황산염으로 구성되는 그룹으로부터 선택된다.

하기의 실험 예에서 입증된 바와 같이, 메실레이트 염은 열 분해에 매우 안정적이며 예상치 않게도 MAO-B에 대한 선택성이 라세미 염보다 우위임을 보여준다.

R(+)PAI의 화합물에 대한 제약학적으로 허용가능한 산 첨가 염의 제조에 있어서, 무염기가 통상적인 방법에 의해 적절한 솔벤트가 있는 상태에서 바람직한 산과 반응할 수 있다. 이와 유사하게, 산 첨가 염이 알려진 방법으로 무염기 형태로 변환될 수 있다.

(R)-PAI의 메실레이트 염을 제조하는 바람직한 방법은 (a) 15% 소듐 수산화물 수용액을 톨루엔 내의 프로파길 벤젠술포네이트 (또는 토실레이트 또는 메실레이트) 용액에 첨가하는 단계와, (b) 5시간동안 교반하는 단계와, (c) 별도의 톨루엔과 물을 첨가하는 단계와, (d) 유기 상을 10% 소듐 수산화물로 분리시키고 세척시킨 후 물로 증류시키는 단계와, (e) 10% 수용성 황산을 첨가하여 혼합물의 pH를 3.2로 조정하는 단계와, (f) 수용성 상을 분리시키고 10% 소듐으로 pH를 7.3으로 조정하는 단계와, (g) 일정한 pH를 유지하면서 톨루엔으로 3번 추출하는 단계와, (h) 노란색 오일을 제공할 수 있도록 결합된 유기층을 시험관 내로 집중시키는 단계와, (i) 이소프로페놀에 상기 오일 및 L-타르타르산을 용해시키는 단계와, (j) 1시간동안 환류시키기 위해 가열하는 단계와, (k) 실온으로 냉각시키고 여과에 의해 침전물을 수집하는 단계와, (l) 디(R(+)-N-프로파길-1-아미노인단) 타르타르산염을 제공하기 위해 메탄올/이소페놀 (1:1)로부터의 조잡한 디-프로파길아미노인단 타르타르산염을 재결정시키는 단계와, (m) 타르타르산염 및 메탄술포닉산을 이소페놀에 용해시키고 30분동안 환류시키기 위해 가열하는 단계와, (n) 실온으로 냉각시키고 침전된 R(+)-N- 프로파길-1-아미노인단을 수집하는 단계로 이루어진다.

본 발명은 또한 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 치료적으로 유효한 양 또는 제약학적으로 허용가능한 염 및 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 제약학적인 조성물을 제공한다. R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 "치료적으로 유효한 양" 또는 제약학적으로 허용가능한 염은 당해 기술 분야에서 숙련된 기술을 가진 사람에 잘 알려진 방법에 따라 결정될 수 있다.

그러한 조성물에 대한 유용한 염은 염화수소, 인산염, 말레산염, 푸마르산염, 타르타르산염, 메실레이트, 에실레이트 및 황산염을 포함한다.

이러한 조성물은 약제로서 제조되어 경구적으로, 비경구적으로, 직장으로, 또는 피부흡수적으로 투여될수 있다.

일실시예에서, 제약학적으로 허용가능한 담체는 고체 형태이고, 제약학적 조성물은 정제 형태이다. 치료적으로 유효한 양은 약 0.1 mg에서 약 100 mg이 될 수 있다. 치료적으로 유효한 양은 또한 약 1 mg에서 약 10 mg이 될 수 있다.

경구 투여의 적절한 형태는 정제, 압축되거나 코팅된 알약, 당의정(dragees), 가루, 딱딱하거나 부드러운 젤라틴 캡슐, 설하투여(sublingual) 정제, 시럽 및 액을 포함한다.

또다른 실시예에서, 제약학적으로 허용가능한 담체는 액체 형태이고 제약학적 조성물은 주사가능한 용액이다. 치료적으로 유효한 양은 약 0.1 mg/ml에서 약 100 mg/ml이 될 수 있다. 치료적으로 유효한 양은 또한 약 1 mg/ml에서 약 10 mg/ml이 될 수 있다. 일실시예에서, 투여된 복용량은 0.5 ml와 1.0 ml 사이의 양이다.

또다른 실시예에서, 제약학적으로 허용가능한 담체는 겔 상태이고 제약학적인 조성물은 좌약이다.

비경구 투여를 위해, 본 발명은 수용성 또는 비수용성 용액 또는 유액을 포함하는 앰풀(ampoules) 또는 유리병을 제공한다. 직장 투여를 위해, 친수성 또는 소수성의 부형약으로 좌약이 제공된다. 연고 및 경피흡수제(transdermal delivery)로서 국부의 적용을 위해, 당해 기술 분야에서 알려진 적절한 경피흡수 시스템이 제공된다.

바람직한 실시예에서, 제약학적으로 허용가능한 염은 메실레이트 염이다.

이들 조성물은 상기 리스트된 병을 치료하기 위해 단독으로 사용될 수 있고, 또한, 예를 들어 파킨슨씨 병의 경우, 통상적인 L-DOPA 치료제의 첨가물로서 사용될 수 있다.

상기 조성물에서 활성 성분, 즉, R-PAI의 바람직한 투약량은 다음의 범위에 있다. 경구 또는 좌약 계통 조직화를 위해, 투약 단위마다 0.1 - 100 mg이 매일 복용될 수 있고, 바람직하게는 투약 단위마다 1 - 10 mg이 매일 복용된다. 주사가능한 계통 조직화를 위해, 0.1 - 100 mg/ml이 매일 복용될 수 있고, 바람직하게는 투약 단위마다 1 - 10 mg/ml이 매일 복용된다.

일실시예에서, 제약학적인 조성물은 또한 Levodopa의 치료적으로 유효한 양을 포함한다. 또다른 실시예에서, 제약학적인 조성물은 또한 카르복시이탈효소 억제 물질의 유효한 양을 포함한다.

(R)-PAI와 함께 투여되는 디카르복실레이트 억제 물질의 양 또는 제약학적으로 허용가능한 염은 환자의 L-DOPA 흡수(uptake)를 보장하는데 유효한 양이다.

디카르복실레이트 억제 물질은 L-Carbidopa가 될 수 있다. 일실시예에서, R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 치료적으로 유효한 양은 약 0.1 mg에서 약 100 mg이며, Levodopa의 치료적으로 유효한 양은 약 50 mg에서 약 250 mg이며, L-Carbidopa의 유효한 양은 약 10 mg에서 약 25mg이다.

디카르복실레이트 억제 물질은 벤제라지드(benserazide)가 될 수 있다. 일실시예에서, R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 치료적으로 유효한 양은 약 0.1 mg에서 약 100 mg이며, Levodopa의 치료적으로 유효한 양은 약 50 mg에서 약 250 mg이며, 벤제라지드의 유효한 양은 약 12.5 mg에서 약 50mg이다.

본 발명은 또한 파킨슨씨 병으로 고통을 받는 환자를 치료하는 방법을 제공하는 것으로서, 환자의 파킨슨씨 병을 치료하는데 유효한 본 발명에 따른 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 양 또는 치료적으로 허용가능한 염을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.

(R)-PAI의 사용을 카테콜아민 옥시다아제 메틸 전이효소 억제 물질 뿐만 아니라 도파민 아고니스트, 브로모크립틴(bromocryptine), 페르골리드(pergolide), 리수리드(lisuride)와 같은 다른 약과 결합하는 파킨슨씨 병의 치료 방법은 본 발명의 영역내에 있다.

바람직한 실시예에서, 치료적으로 허용가능한 염은 메실레이트 염이다.

투여 방법은 경구 투여, 직장 투여, 피부흡수 투여, 또는 비경구 투여를 포함할 수 있다.

일실시예에서, 본 발명에 따른 방법은 Levodopa의 치료적으로 유효한 양을 환자에게 투여하는 단계를 더 포함한다. 또다른 실시예에서, 본 발명의 방법은 카르복시이탈효소 억제 물질의 유효한 양을 환자에게 투여하는 단계를 더 포함한다.

카르복시이탈효소 억제 물질은 L-Carbidopa가 될 수 있다. 또한, 카르복시이탈효소 억제 물질은 벤제라지드가 될 수 있다.

또한, 본 발명은 기억 혼란으로 고통을 받는 환자를 치료하는 방법을 제공하는 것으로서, 환자의 기억 혼란을 치료하는데 유효한 본 발명에 따른 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 양 또는 치료적으로 허용가능한 염을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.

또한, 본 발명은 치매로 고통을 받는 환자를 치료하는 방법을 제공하는 것으로서, 환자의 치매를 치료하는데 유효한 본 발명에 따른 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 양 또는 치료적으로 허용가능한 염을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 일실시예에서, 치매는 알츠하이머 타입 (DAT)이다.

본 발명은 또한 우울증으로 고통을 받는 환자를 치료하는 방법을 제공하는 것으로서, 환자의 우울증을 치료하는데 유효한 본 발명에 따른 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 양 또는 치료적으로 허용가능한 염을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명은 또한 기능항진성 증후군으로 고통을 받는 환자를 치료하는 방법을 제공하는 것으로서, 환자의 기능항진성 증후군을 치료하는데 유효한 본 발명에 따른 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 양 또는 치료적으로 허용가능한 염을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.

투여 방법은 경구 투여, 직장 투여, 또는 비경구 투여를 포함할 수 있다.

또한, 본 발명은 정서 장애로 고통을 받는 환자를 치료하는 방법을 제공하는 것으로서, 환자의 정서 장애를 치료하는데 유효한 본 발명에 따른 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 양 또는 치료적으로 허용가능한 염을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명은 또한 신경퇴행성 질병으로 고통을 받는 환자를 치료하는 방법을 제공하는 것으로서, 환자의 신경퇴행성 질병을 치료하는데 유효한 본 발명에 따른 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 양 또는 치료적으로 허용가능한 염을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명은 신경독 손상 환자를 치료하는 방법에 관한 것으로서, 신경독 손상를 치료하는 데 효과적인 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염을 환자에게 유효량 투여하는 것으로 이루어진다.

또한 본 발명은 뇌 허혈 환자를 치료하는 방법에 관한 것으로서, 뇌 허혈을 치료하는 데 효과적인 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염을 환자에게 유효량 투여하는 것으로 이루어진다.

본 발명은 환자의 뇌 허혈 및 발작을 치료하는 방법에 관한 것으로서, 환자의 뇌 허혈 및 발작을 치료하는 데 효과적인 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염을 환자에게 유효량 투여하는 것으로 이루어진다.

뇌 허혈 또는 발작을 치료하는 방법에 관한 실시예에서, R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 제약학적으로 허용가능한 이것의 염은 메실레이트염; 에틸황산염; 황산염; 및 염산염으로 이루어지는 군에서 선택된다. 바람직하게는 제약학적으로 허용가능한 염는 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 메실레이트염이다.

상기 유효량은 적정(titration)같은 당업자에게 알려져있는 기술을 사용하여 결정할 수 있다. 본 발명의 실시예에서는, 유효량은 환자의 체중 1킬로로램당 약 0.5밀리그램부터 약 2.5밀리그램이다. R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염은 당업자에게 알려진 기술을 이용하여 투여된다. 예를 들어, 정맥으로, 입으로, 직장으로, 피부로 또는 비경구적으로 투여될 수 있다.

환자는 바람직하게는 개, 고양이, 쥐(mouse, rat), 토끼, 돼지, 말, 염소, 양, 원숭이(ape, monkey)와 같은 포유동물이다. 특별한 실시예에서는 환자는 인간이다.

본 발명에 따른 실시예에서는 유효량은 하루에 약 0.01mg에서 50.0mg이다. 좀 더 특별한 실시예에서는 유효량은 하루에 약 0.1mg에서 10.0mg이다.

상술한 방법중에 한 실시예에서 뇌 허혈의 영역은 약 35퍼센트로 감소된다.

또한 본 발명은 두개외상성 손상 환자를 치료하는 방법에 관한 것으로서, 환자의 두개외상성 손상을 치료하는 데 효과적인 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염을 유효량 환자에게 투여하는 것으로 이루어진다.

또한 본 발명은 척추외상셩 장애 환자를 치료하는 방법에 관한 것으로서, 환자의 척추외상성 장애를 치료하는 데 효과적인 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염을 유효량 환자에게 투여하는 것으로 이루어진다.

또한 본 발명은 환자의 신경외상을 치료하는 방법에 관한 것으로서, 환자의 신경외상을 치료하는 데 효과적인 알R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염을 유효량 환자에게 투여하는 것으로 이루어진다.

두개외상성 손상, 척추외상성 손상 또는 신경외상의 치료에 있어서, R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 제약학적으로 허용가능한 이것의 염은 메실레이트염; 에틸황산염; 황산염; 및 염산염으로 이루어지는 군에서 선택된다. 바람직하게는 제약학적으로 허용가능한 염는 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 메실레이트염이다.

유효량은 적정같은 당업자에게 알려져있는 기술을 사용하여 결정할 수 있다. 본 발명의 실시예에서는, 유효량은 환자의 체중 1킬로로램당 약 0.5밀리그램부터 약 2.5밀리그램이다. R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염은 당업자에게 알려진 기술을 이용하여 투여된다. 예를 들어, 정맥으로, 입으로, 직장으로, 피부로 또는 비경구적으로 투여될 수 있다.

본 발명에 따른 실시예에서는 효과적인 양은 하루에 약 0.01mg에서 50.0mg이다. 좀 더 특별한 실시예에서는 효과적인 양는 하루에 약 0.1mg에서 10.0mg이다.

또한 본 발명은 정신분열증 환자를 치료하는 방법에 관한 것으로서, 환자의 정신분열을 치료하는 데 효과적인 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염을 유효량 환자에게 투여하는 것으로 이루어진다.

또한 본 발명은 다동증후군 환자를 치료하는 방법에 관한 것으로서, 환자의 다동증후군을 치료하는 데 효과적인 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염을 유효량 환자에게 투여하는 것으로 이루어진다.

또한 본 발명은 다발성 경화증 환자를 치료하는 방법에 관한 것으로서, 환자의 다발성 경화증를 치료하는 데 효과적인 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염을 유효량 환자에게 투여하는 것으로 이루어진다.

또한 본 발명은 환자의 신경 손상을 방지하는 방법에 관한 것으로서, 환자의 신경 손상을 치료하는 데 효과적인 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염을 유효량 환자에게 투여하는 것으로 이루어진다.

일 실시예에서는 상기 신경 손상은 조직 신경손상이다. 다른 실시예에서는 상기 조직 신경손상은 시각 신경 손상이다.

또한 본 발명은 중독성 물질(addictive substance)을 끊을 때의 금단증상으로 고생하는 환자를 치료하는 방법에 관한 것으로서, 환자의 금단증상(symptoms of withdrawal)을 치료하는 데 효과적인 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염을 유효량 환자에게 투여하는 것으로 이루어진다.

여기에서 사용되는 "금단증"이라는 용어는 약을 탐미, 우울, 불안, 아네르기아(anergia), 무동기, 식욕변화, 메스꺼움, 부정기적 떨림 및 잠을 포함하는 정신적 및/또는 심리적인 증상을 나타낸다.

여기에서 사용되는 "중독성 물질"이라는 용어는 (a) 아편, 헤로인 및 몰핀같은 중독성 진정제, (b)코카인, 암페타민(amphetamine) 및 메탐페타민(methamphetamine)같은 심리적흥분제(psychostimulant), (c)알콜, (d)니코틴, (e)바르비트루산염(barbiturate) 및 (f)펜타닐(pentanyl), 코데인(codeine), 디페녹시레이트(diphenoxylatw) 및 테바인(thebaine)같은 마취제를 포함한다.

실시예에서 중독성 물질은 코카인이다. 다른 실시예에서 중독성 물질은 알콜이다.

또한 본 발명은 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단을 제조하는 방법에 관한 것으로서, 유기 또는 무기 베이스하에서 (R-)-아미노인단을 프로파길 브로마이드(propargyl bromide) 또는 프로파길 클로라이드(propargyl chloride)와 접촉시켜 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단을 형성하는 단계와, 형성된 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단을 유리시키는 과정을 포함하여 이루어진다.

또한 본 발명은 라세미 N-프로파길-1-아미노인단을 제조하는 방법에 관한 것으로서, 유기 또는 무기 베이스하에서 라세미 1-아미노인단을 프로파길 브로마이드 또는 프로파길 클로라이드와 접촉시켜 라세미 N-프로파길-1-아미노인단을 형성하는 단계와, 형성된 라세미 N-프로파길-1-아미노인단을 유리시키는 과정을 포함하여 이루어진다.

마지막으로, 본 발명은 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 염을 제조하는 방법에 관한 것으로서, 라세미 N-프로파길-1-아미노인단을 광학적인 활성산과 접촉시켜 두개의 다이아스테레오메트릭(diastereometric) N-프로파길-1-아미노인단 염을 형성하는 단계와, 형성된 다이아스테레오메트릭 N-프로파길-1-아미노인단 염으로 부터 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 염을 유리시키는 과정을 포함하여 이루어진다.

일 실시예에서 상기 유리시키는 단계는 단편 결정화(fractional crystallization)로써 유리화시키는 것을 포함하여 구성된다.

다음에는 실험의 상세한 사항을 본 발명의 이해를 돕기위하여 설명한다. 이것은 특허청구범위에서 설명된 본 발명을 제한하기위한 의도가 아니며, 또한 그렇게 해석되어져서는 않된다.

상세한 실험

실시예 1

라세미 N-프로파르킬-1-아미노인단 하이드로클로리드

라세미 1-아미노인단 10.0g과 탄산 칼륨을 아세토니트릴 75ml에 더했다. 현탁액을 60℃로 가열하고 프로파르길 클로라이드 (propargyl chloride) 4.5g을 적하하여 더했다.

혼합물을 60℃에서 16시간동안 교반하였고, 이어서, 대부분의 휘발성분은 진공내에서 증류에 의해 제거됐다. 잔기는 10% 수용성 수산화 나트륨과 메틸렌 클로라이드 사이에서 나누어졌다.

유기 상(organic phase)은 건조됐고, 용제는 증류에 의해 제거됐다. 잔기는 실리카 겔(silica gel) 상에서 크로마토그래피된 플래쉬(flash)였고, 40% 에틸 아세테이트/60% 헥산(hexane)으로 용리했다. 유리염기와 같은 표제 혼합물을 함유하는 분류(frictions)를 혼합하고 용리제는 에테르(ether)에 의해 대치했다. 에테르성 용액은 가스성 HCL에 의해 처리됐고, 형성된 침전물은 진공여과에 의해 분리됐고, 이소프로패놀로부터 재결정화되어서 표제 혼합물의 7.3g, m.p. 182-4℃을 생산한다.

크로마토그래픽 및 스펙트로스코픽 데이터는 1970, 5월 19일에 출원된 미국특허 3,513,244와 샘플에 따른 것이다: NMRσ (CDCL₃): 2.45 (2H, m), 2.60 (1H, t), 2.90 (1H, m), 3.45(1H, m), 3.70 (2H, d), 4.95(1H, t), 7.5 (4H, m) ppm.

실시예 2

S-(-)-N-프로파르길-1-아미노인단 하드로클로리드

유리염기 형태에서 표제 화합물은 10% 이소프로파놀/90% 헥산으로 용리하고 제 1 용리된 주요 피크를 모으는 치라셀 OJ(Chiracel OJ)(셀룰로서 트리스(p-메틸벤조아텔)조제적 HPLC 칼럼 상에서 실시예 1의 유리염기의 라세미 혼합물을 용해함으로 분리됐다. 상기 오일은 가스성 HCl (gaseous HCl)로 오일의 디에틸 에테르 용액 10%의 처리에 의해 표제혼합물(하이드로 클로라이드)로 콘버트됐고, 결과적인 침전물은 진공여과(suction filteration)에 의해 수집됐다. [a]_D-29.2°(1%, 에타놀), m.p. 182-184℃. 다른 크로마토그라피 및 스펙트로스코프 특성(chromatographic and spectroscopic properties)은 실시예 1의 하이드로클로라이드 솔트와 동일한다.

실시예 3

R-(+)-N-프로파르길-1-아미노인단 하이드로클로라이드

조제적인 HPLC로부터 제 2 용리된 피크(peak)가 수집됐다는 것을 제외하고는 표제 화합물은 상기한 실시예 2에서처럼 조제됐다: (a)_D+29.1°(0.8%, 에타놀), m.p. 179-181℃. 다른 크로마토그래피 및 스펙트로스코프 특성은 실시예 1의 하이드로클로라이드 솔트와 동일했다.

실시예 4

R-(+)-N-프로파르길-1-아미노인단 하이드로클로리드

R-(-)-1-아미노인단 12.4g과 탄산 칼슘 12.9g을 아세토니트릴 95ml에 첨가했다. 결과적인 현탁물은 60℃로 가열했고, 프로파르길 클로리드 5.6g이 첨가됐다. 상기 혼합물을16시간 동안 60℃에서 휘저었고, 이어서 휘발성분 대부분은 진공에서 증류에 의해 제거됐다. 잔기는 10% 수용성 수산화 나트륨과 메틸렌 클로라이드 사이에서 나누어졌다.

유기 상(organic phase)은 건조됐고, 용제는 증류에 의해 제거됐다. 잔기는 40% 에틸 아세테이트/60% 헥산(hexane)으로 용리하는 실리카 겟상에서 크로마토그래피된 플래쉬였다. 유리염기와 같은 표제 혼합물을 함유하는 분류를 혼합했고, 용리제는 에테르(ether)에 의해 대치됐다. 에테르성 용액은 가스 HCL에 의해 처리됐고, 형성된 침전물은 진공여과에 의해 분리됐고, 이소프로패놀로부터 재결정화되어서 표제 혼합물 6.8g, m.p. 183-5℃, [a]_D+30.90 (2% 에타놀)을 생산한다. 스펙트럼특성은 실시예 1의 화합물을 위해 보고된 것과 같았다.

실시예 5

S-(-)-N-프로파르길-1-아미노인단 하이드로클로리드

S-(-)-1-아미노인단이 시작 물질로 사용됐다는 것을 제외하고 표제화합물 실시예 1의 방법에 의해 제조됐다. 생성물은 [a]_D-30.3 (2% 에티놀), m.p. 183-5℃를 나타냈다. 스펙트럼 특성은 실시예 1의 화합물을 위해 보고된 바와 같았다.

실시예 6A

Di(R-(+)-N-프로파르길-1-아미노인단) L-타르타르산염

메타놀(48ml)에서 R-(+)-N-프로파르길-1-아미노인단 유리염기(5.0g)의 용액을 끓는 메타놀 48ml에서 타르타르산(4.4g)의 용액에 첨가했다. 상기 용액을 환류하도록 가열했고, t-부틸메틸에테르 284ml을 20분 후 첨가했다. 상기 혼합물을 추가로 30분동안 가열하고, 다시 냉각하였고, 그결과 침전물을 진공여과(suction filteration)로 분리하여 표제 혼합물 6.7g을 생산했다: m.p. 175-177℃; [α]_D(1.5, H₂O)=+34.3; C₂₈H₃₂O₆N₂을 위한 아날(Anal). 칼크드(calcd); C, 68.26, H, 6.56, N, 5.69. 발견: C, 68.76; H, 6.57; N, 5.61.

실시예 6B

R-(+)-N-프로파르길-1-아미노인단 메실레이트(aminoindan mesylate)

a) 수용성의 15% 수산화 나트륨(108ml)을 20℃에서 톨루엔(240ml)에서 라세미 아미노인단(63.2g)과 프로파길 벤젠술폰산염(propargyl benzenesulfonate) (78.4g) 용액에 적하하여 첨가했다. 5시간동안의 교반(stirring) 후, 추가 톨루엔(80ml)과 물(200ml)을 교반하여 첨가했다. 유기 상은 10%의 수용성 수산화 나트륨으로 분리하여 세정했고, 이어서 물로 희석했다. 상기 혼합물의 pH는 10%의 수용성 황산의 첨가에 의해 3.2로 조절했다. 수성 상(aqueous phase)은 분리됐고, pH는 10%의 수산화 나트륨으로 7.3으로 조절했고, pH를 일정하게 유지하는 동안 톨루엔으로 3배 추출됐다. 혼합 유기층(combined organic layer)은 노란색 오일(yellow oil) 40.7로 in vacuo 농축했다.

b) 상기 라세미 프로파르길라미노인단 (racemic propargylaminoindan) 및 타르타르산 (10g)은 이소프로파놀(1 L)에 용해됐고, 1시간 동안 환류하도록 가열됐다. 반응은 교반으로 실온까지 냉각하고, 침전물은 여과에 의해 수집됐다. 상기 디프로파르길아미노인단 타르타르산염은 1:1의 메타놀/이소프로파놀로부터 재결정화되어서, 실시예 6A의 화합물과 동일한 물리적 및 스펙트럼 특성으로 di(R-(+)-N-프로파르길-1-아미노인단)-L-타르타르산염을 줬다.

c) 이소프로파놀(150mL)에서 메탄술폰산(6g)과 di-(R-(+)-N-프로파르길-1-아미노인단) 타르타르산염(15g)의 용액을 30분동안 환류하도록 가열됐다. 반응은 실온까지 냉각했고, 그결과 침전물을 진공여과로 분리하여 m.p. 157℃ 및 [α]_D=22로 표제 혼합물(11.1g)을 주었다.

실시예 7

R-(+)-N-메틸-N-프로파르길-1-아미노인단 하이드로클로리드

실시예 4(1.2g)로부터 R-(+)-N-프로파르길-1-아미노인단의 유리염기 형태와, 탄산 칼륨(0.97g)과 메틸 이오디드(methyl iodide)(1g)을 가열된 현탁액과 아세톤 15ml에 첨가하여서 8시간동안 질소 분위기에서 환류하였다. 이어서, 휘발성분은 감소한 압력하에서 제거됐고 잔기는 10%의 수용성 수산화 나트륨(30ml)과 염화메틸렌(30ml)사이에서 구분됐다. 유기상은 건조됐고 용제는 in vacuo로 제거됐다. 잔기는 40%의 에틸 아세테이트/60%의 헥산으로 용리하는 실리카겔 상에서 크로마토그래피된 플래쉬였다. 유리염기로서 표제 화합물을 함유하는 분류들은 혼합됐고, 용제는 디에틸 에테르(diethyl ether)로 대체됐다. 에테르성 용액은 가스 HCL로 처리됐다. 휘발성분은 in vacuo로 제거됐고, 잔기는 이소프로파놀(isopropanol)로부터 재결정화되어서 흰색의 결정 고체, m.p. 134-136℃, [α]_D+31.40(에타놀)로서 표제화합물 400mg를 생산했다.

NMRσ (CDCL₃): 2.55 (2H, m); 2.7 (1H, br.s); 2.8 (3H, s); 3.0(1H, m); 3.4 (1H, m), 3.9(2H, br.s); 5.05 (1H, m); 7.7(4H, m) ppm.

실시예 8

S-(-)-N-메틸-N-프로파르길-1-아미노인단 하이드로클로리드

실시예 5로부터 S-(-)-N-아미노인단(유리염기)이 시작 물질(starting material)로 사용되었다는 것을 제외하면 표제 화합물 실시예 7에서와 동일하게 제조됐다. 상기 표제 화합물의 물리적 스펙트럼 특성은 [α]_D-34.9℃(에타놀)을 제외하고 실시예 7과 동일하다.

실시예 9

정제 조성물

N-프로파르길-1(R)-아미노인단 하이드로클로리드 7.81mg*

선교질화된(pregelatinized) 녹말 NF 47.0mg

가수된 락토스 NF(lactose NF hydrous) 66.0mg

마이크로 결정성 셀룰로스 NF(microcrystalline cellulose NF) 20.0mg

나트륨 녹말 글리콜라트 NF (sodium starch glycolate NF) 2.99mg

탈크 (Talc) USP 1.5mg

마그네슘 스테아린산염 NF (magnesium stearate NF) 0.7mg

*N-프로파르길 아미노인단 염기 5.0mg와 동등함

실시예 10

정제 조성물

N-프로파르길-1(R)-아미노인단 하이드로클로리드 1.56mg*

가수된 락토스 (lactose hydrous) 50.0mg

선교질화된(pregelatinized) 녹말 36.0mg

마이크로 결정성 셀룰로스 (microcrystalline cellulose) 14.0mg

나트륨 녹말 글리콜라트 (sodium starch glycolate) 2.14mg

탈크 (Talc) USP 1.0mg

마그네슘 스테아린산염 (magnesium stearate) NF 0.5mg

*N-프로파르길 아미노인단 염기 1.0mg와 동등함

실시예 11

캡슐 조성물

N-프로파르길-1(R)-아미노인단 하이드로클로리드 5.0mg

선교질화된(pregelatinized) 녹말 10.0mg

녹말 44.0mg

마이크로 결정성 셀룰로스 (microcrystalline cellulose) 25.0mg

에틸셀룰로스 1.0mg

탈크 (Talc) USP 1.5mg

결정화(granulation)를 위해 요구되는 대로 첨가된 정화된 물

실시예 12

주입 조성물

N-프로파르길-1(R)-아미노인단 하이드로클로리드 5.0mg

덱트로즈 무수(Dextrose anhydrous) 44.0mg

pH 5에 첨가된 HCl

1 ml을 위해 요구되는 대로 첨가된 정화된 물

실시예 13

주입 조성물

N-프로파르길-1(R)-아미노인단 하이드로클로리드 1.0mg

염화 나트륨 8.9mg

pH 5에 첨가된 HCl

1 ml을 위해 요구되는 대로 첨가된 정화된 물

실시예 14

주입 조성물

N-프로파르길-1(R)-아미노인단 하이드로클로리드 2.0mg

염화 나트륨 8.9mg

pH 5에 첨가된 HCl

1 ml을 위해 요구되는 대로 첨가된 정화된 물

실시예 15

시럽 조성물

N-프로파르길-1(R)-아미노인단 하이드로클로리드 5.0mg

수크로즈(sucrose) 2250.0mg

사카린 나트륨(saccarin sodium) 5.0mg

메틸파라벤(methylparaben) 6.0mg

프로필파라벤(propylparaben) 1.0mg

플레이버(flavor) 20.0mg

글리세린 USP (glycerin USP) 500mg

알콜 95% USP 200mg

5.0 ml을 위해 요구되는 대로 첨가된 정화된 물

실시예 16

섭링구알(sublingual) 정제

N-프로파르길-1(R)-아미노인단 하이드로클로리드 2.5mg

마이크로 결정성 셀룰로스(microcrystalline cellulose) 20.0mg

락토즈 하이드로우스 5.0mg

선교질화된 녹말 3.0mg

프로비돈(providone) 0.3mg

컬러링 에이전트(coloring agent) q.s.

플레이버(flavor) q.s.

감미료(sweetener) q.s.

탈크 0.3mg

excipients 및 액티브(active) 및 그레뉼레이트(granulate)를 프로비돈(providone) 용액과 섞어라. 건조하고 무게를 측정한 후 그것은 탈크와 컴프레스트(compressed)와 섞인다.

실시예 17

PAI 섭링구알 정제

N-프로파르길-1(R)-아미노인단 하이드로클로리드 5.0mg

마이크로결정 셀룰로스 15.0mg

선교질화된 녹말 12.0mg

에틸 셀룰로스 0.3mg

탈크 0.3mg

결정화(granulation)를 위해 요구되는 대로 첨가된 정화된 물

실시예 18

정제 조성물

N-프로파르길-1(R)-아미노인단 하이드로클로리드 5.0mg

레보도파(levodopa) 100.0mg

카르비도파(carbidopa) 25.0mg

선교질화된 녹말 24.0mg

녹말 40.0mg

마이크로 결정 셀룰로스 49.5mg

Col. D & C Yellow No. 10 0.5mg

Col. D & C Yellow No. 6 0.02mg

결정화(granulation)을 위해 요구되는 대로 첨가된 알콜 USP

실시예 19

정제 조성물

N-프로파르길-1(R)-아미노인단 메실레이트 7.81mg*

선교질화된(pregelatinized) 녹말 NF 47.0mg

가수된 락토스 NF(lactose NF hydrous) 66.0mg

마이크로 결정성 셀룰로스 NF(microcrystalline cellulose NF) 20.0mg

나트륨 녹말 글리콜라트 NF (sodium starch glycolate NF) 2.99mg

탈크 (Talc) USP 1.5mg

마그네슘 스테아린산염 NF (magnesium stearate NF) 0.7mg

*N-프로파르길 아미노인단 염기 5.0mg와 동등함

실시예 20

정제 조성물

N-프로파르길-1(R)-아미노인단 메실레이트 1.56mg*

가수된 락토스 (lactose hydrous) 50.0mg

선교질화된(pregelatinized) 녹말 36.0mg

마이크로 결정성 셀룰로스 (microcrystalline cellulose) 14.0mg

나트륨 녹말 글리콜라트 (sodium starch glycolate) 2.14mg

탈크 (Talc) USP 1.0mg

마그네슘 스테아린산염 (magnesium stearate) NF 0.5mg

*N-프로파르길 아미노인단 염기 1.0mg와 동등함

실시예 21

캡슐 조성물

N-프로파르길-1(R)-아미노인단 메실레이트 5.0mg

선교질화된(pregelatinized) 녹말 10.0mg

녹말 44.0mg

마이크로 결정성 셀룰로스 (microcrystalline cellulose) 25.0mg

에틸셀룰로스 1.0mg

탈크 (Talc) USP 1.5mg

결정화(granulation)를 위해 요구되는 대로 첨가된 정화된 물

하기 실시예와 첨부한 표와 도면은 본 발명에 따라 실시한 생물학적 실험에 관한 것이다.

실시예 22

in vitro 실험 프로토콜에 있는 MAO 활성의 억제

MAO 효소 소스는 0.3 수크로스(sucrose)에 있는 쥐의 뇌의 호모제네이트(homogenate)이었다. 상기 수크로스는 15분 동안 600g에서 원심분리됐다. 상청액은 0.05M 인산염 버퍼에서 적당히 희석됐고, 화합물의 연속적인 희석으로 프리-인큐베이션됐다(pre-incubate): 37℃에서 20분동안 R(+)-PAI, S(-)-PAI 및 라세미 PAI.³⁴C-라벨된 기질 (2-페닐에틸아민(phenylethylamine:PEA), 5-하이드록시트립트아민(5-HT)을 이어서 첨가했고, 인큐베이션은 20분동안(PEA) 또는 30-45분동안(5-HT) 지속했다. 사용된 기질 농도는 50uM(PEA) 및 1mM(5-HT)였다. PEA의 경우, 효소 농도는 10% 이하의 기질이 반응하는 동안 신진대사됐다. 반응은 트래닐시프로민(tranylcypromine)의 첨가에 의해 중단됐고, 인큐베이트는 pH 6.3으로 버퍼된 암베르리트 (Amberlite) CG-50의 작은 칼럼을 통해 여과됐다. 상기 칼럼은 물 1.5ml로 세척했고, 용리액과 반응성 물질은 액체 신틸레이션 분광법(liquid scintillation spectrometry)에 의해 결정됐다. 아민 기질이 전체적으로 칼럼 상에서 유지됐기 때문에 용리액에 있는 반응성은 MAO 활성의 결과로서 형성된 중성 및 산성 신진대사의 생산을 나타낸다. 샘플에 있는 MAO 활성은 적당한 블랭크 값(blank values)을 뺀 후 억제물질이 없을 때 조절 활성(control activity)의 퍼센티지로서 나타냈다. 기질로서 PEA를 사용하는 결정된 활성은 MAO-B로 언급되고, 5-HT를 사용하는 결정된 활성은 MAO-A로 언급된다.

결과

R(+)-PAI, S(-)-PAI의 억제 활성과 라세미-PAI는 in vitro로 분리해서 검사했고, 전형적인 실험의 진행은 도 1 및 2에서 나타나있다. 전체적인 실험은 3번 반복됐다. 기질 신진대사(substrate metabolism)(IC-50)의 50% 억제를 만들어낸 억제물질의 농도는 억제 곡선으로부터 계산되었고, 표 1B에 나타나있다. 이러한 데이터로부터 하기의 것을 알 수 있다:

a) R(+)-PAI는 MAO-B의 억제를 위해 라세미체보다 2배의 활성을 가진다;

b) R(+)-PAI는 MAO-A보다 MAO-B의 억제를 위한 활성보다 29배 이상이다;

c) S(-)-PAI는 MAO-B의 억제를 위한 R(+) PAI의 활성보다 1/6,800이고, MAO-B 및 MAO-A 사이에서 선택성이 거의 없거나 아예없다.

[표 1A]

MAO-A 및 MAO-B의 억제를 위한 IC-50 (nM) 값 및 IN VITRO로 쥐의 뇌의 호모제네이트에 있는 R(+) 및 S(-) 에난시오머

R(+) 및 S(-)MPAI(N-methyl-N-propargyl-1-aminoindan)을 사용하는 동일한 실험의 결과는 표 1B에 보고되어 있다. MPAI의 에난시오머 각각은 R(+)PAI보다 MAO-A 및 MAO-B에서 덜 선택적이다. 더욱이, R(+)-MPAI는 MAO-B 억제에서 S(-)-MPAI의 활성보다 5배이고, R(+)-PAI와 대조하면, MAO-B 억제는 상기 분석에서 S(-)-PAI의 활성보다 약 7000배이다.

[표 1B]

쥐의 뇌의 호모제네이트에서 MPAI의 R(+) 및 S(-)에난시오머에 의해 MAO-A 및 MAO-B의 억제를 위한 IC-50 (nM) 값

어떤 실험은 6시간의 포스트-모템(post-mortem)으로 얻은 인간 뇌의 외피조직(cerebral cortical tissue)로 또한 실행됐고, 상기한 바와 같이 처리됐다. 이러한 실험의 결과는 도 3에 나타나 있고, R(+)-PAI, S(-)-PAI, 및 라세미 PAI는 여기서 정의한 바와 같다.

실시예 23

in vivo MAO 활성의 억제: 정확한 처리 실험 프로토콜

250±20g의 무게가 나가는 쥐(rat)(male Sprague-Dawley-derived)는 복강내 주입 (intraperitoneal injection)(ip) 또는 구강 강제 영양 (oral gavage)(po)에 의해 PAI의 라세미 형태 또는 에난시오머 중 하나로 처리하였고, 나중에 각각 1시간 또는 2시간 베었다. 쥐 3마리 그룹들은 억제물질의 각각의 양 레벨 (dose level)을 위해 사용됐고, MAO 활성은 상기한 일반적인 기술을 사용하는 뇌와 간에서 결정됐다. 각 인큐베이션에서 단백질의 양은 폴린-로우리(Folin-Lowry) 방법을 사용하여 결정했고, 효소 활성은 단백질 1mg당 인큐베이션의 1시간 당 신진대사되는 기질의 nmol로서 계산됐다. 억제물질로 처리된 동물로부터 조질에서 MAO의 활성은 한 그룹의 조절 동물 투여한 비클(vechile) (구강 투여, ip 주입을 위한 0.9% 염분)에서 효소 활성의 퍼센티지로 나타났고, 상기한 바와 같이 죽었다.

결과

억제 약제와 함께 사용된 투여 수준의 어느 것도 명백하게 행동 변화를 가져오지 않았다. 결과는 도 4 내지 도 11에 도시되었다. 복강내 투여에 따르면, 화합물 R(+)PAI는 0.5mg/kg의 투여량에서 뇌 MAO-B 활동을 90% 억제하였다. 동일한 투여량은 MAO-A 활동을 단지 20% 억제하였다. 경구 투여에 의하면, R(+)PAI의 동일한 투여량은 MAO-B를 80% 억제하고 MAO-A의 억제는 감지되지 않았다. 간 MAO의 억제는 뇌 MAO에서 처럼 본질적으로 유사한 결과가 나타났다. MAO-A 및 MAO-B(IC-50)를 50% 억제시키는 투여량은 억제 곡선에서 계산되었고, 이를 표 2에 나타내었다. 이러한 데이터들는 (a) R(+)PAI의 MAO 억제 활동는 래트의 생체조건하에서 유지되며, (b) R(+)PAI에 의한 MAO-B 억제의 선택성은 MAO-A와는 반대로 생체조건하에서 유지되며, (c) (+)-인엔티오머(enantiomer)의 더욱 우수한 활동는 (-)-인엔티오머와는 반대로 생체조건하에서 유지되며, (d) 화합물은 경구 투여후에 효과적으로 흡수되며, (e) 화합물은 피-뇌-장벽(blood-brain barrier)를 통과하며, 뇌 MAO를 효과적으로 억제한다는 것을 나타낸다. R(+)-PAI는 MAO-B의 억제에 대하여 라세미 화합물보다 약 2배가 활동적이었다는 사실은 S(-)-PAI가 MAO-B 억제에 대하여 극히 낮게 활동하는 것의 반영이다.

[표 2]

복강내 주사(INTRAPERITONEAL(I.P.) INJECTION) 또는 경구 투여(ORAL ADMINSTRATION)로 래트에 R(+)-PAI, S(-)-PAI 또는 라세미-PAI를 투여하여 MAO-A 및 MAO-B를 억제하기 위한 IP-50의 양(mg/kg)

실시예 24

생체조건하에서 MAO 활동의 억제 : 만성 치료

실험 프로토콜

래트(실시예 23에서 처럼, 각 투여 수준에서 4마리)에게 R(+)PAI 또는 라세미 혼합물이 세가지 투여 수준(0.05, 0.1 및 0.5mg/kg)으로 경구 투여하고, 21일 동안 매일 한가지 투여량이 투여되며, 마지막 투여후 2시간에 목을 베었다. MAO-A, B의 활동은 실시예 23에 기술된 바와 같이 뇌와 간에서 측정되었다.

결과

화합물 R(+)PAI를 1일 투여량 0.1mg/kg으로 한 경우는 선택적 억제의 우수한 수치, 즉 뇌 MAO-B의 80% 이상의 억제 및 뇌 MAO-A의 20% 이하의 억제를 얻었다. 매일 더 높은 투여량 5.0mg/kg을 투여한 경우는, MAO-A는 여전히 50%이하로 억제되었다(도 12 및 도 13). 간 MAO는 선택적 억제에 대하여 비슷한 수치를 보였다(도 14 및 도 15). 화합물 R(+)PAI는 약 2배의 인자에 의하여 라세미 혼합물보다 역시 더욱 효능이 있었다. 뇌 MAO의 경우는 R(+)PAI는 MAO-B의 억제에 대하여 선택성이 라세미 화합물보다 더욱 좋은 수치를 보였다.

이러한 결과는 MAO-B의 억제에 대한 선택성을 화합물로 만성 치료를 하여 유지시킬 수 있다는 것을 보여준다. 다른 비가역 억제물질에 대하여, 효소 억제의 수치는 약제 하나의 투여의 경우보다 만성 치료가 더욱 우수하다. 화합물 R(+)PAI는 라세미 화합물보다 뇌 MAO-B의 억제에 대한 선택성이 우수한 수치를 보여준다.

실시예 25

MAO 억제의 비가역 성질

실험 프로토콜

화합물 R(+)PAI(1mg/kg) 하나를 복강내주사로 여러군의 4마리의 래트에 투여하였고, 이 동물들을 2, 6, 18, 24, 48 및 72 후에 죽였다. MAO-B 활동는 이후에 기술되는 것과 같이 모든 뇌 조직에서 측정되었다.

결과

결과는 도 16에 도시하였다. MAO-B의 최대 억제는 주사후 6시간후에 얻어졌다. MAO 활동은 주사후 72시간에 통제 활동의 30%로 회복되었다. 이 실험은 R(+)PAI에 의한 MAO 억제의 비가역 성질을 나타내준다.

실시예 26

의식이 있는 래트의 티라민 증압 효과에 의한 약효 증가

실험 프로토콜

래트는 펜토바리비탈(30mm/kg)과 만성 수산화물(120mm/kg)의 화합물을 복강내 주사하여 마취되었다. 좌측 경동맥과 경부 정맥은 폴리에틸렌관(정맥)에 연결된 미세한 다사성의 관(동맥) 또는 미세한 실리콘 고무관에 캐뉼러로 연결되는데, 그 말단은 피부 하부에서 목의 앵커 포인트(an anchor point)로 연결되었다. 관은 헤파린으로 치료된 살린 용액으로 충진되고, 미세한 강봉에 삽입되었다. 실험 동물은 20mg의 클로랄페니콜을 근육 주사하여 치료하고, 밤 사이에 수술로 부터 회복될 수 있도록 하였다. 다음날에는, 래트는 높은 높은 벽으로 둘러쌓인 용기에 놓아서 자유롭게 움직일 수 있게 하였다. 동맥 카테테르는 살린이 채워지고 정교한 구멍이 가공된 진 길이 100cm의 폴리에틸렌관을 통해 압력 변환기에 연결되며, 정맥 카테테르는 비슷한 길이를 갖는 관을 통헤 1ml의 주사기에 연결되고, 이 관은 주사기와 같이 살린내에 티라민 염산염을 포함(1mg/ml)하고 있다. 아래의 평형 주기는 30-40분이고, 티라민이 주사(50 또는 100μg)되며, 혈압이 측정된다. 주사는 최소 15분의 간격으로 유지하여 혈압이 회복된 후에도 수치를 대조할 수 있도록 하였다. 대조 압력 반응이 형성되고, 약물중 하나가 복강내 주사되며, 티라민에 대한 반응이 다음 4시간 이상 반복되었다. 혈압 반응 커브의 아래 부분이 평가되고, 이 영역의 비는 화합물의 주사후에 치료후와 치료전 비율을 1-3시간동안 측정하여 3-4개의 수치의 평균을 사용하여 결정된다.

결과

결과는 표3에 도시된다. (뇌와 간에서 MAO-A를 완전히 억제하는) 1mg/kg의 [R](+)PAI는 티라민 증압 반응의 상당한 약효 증가를 유발하지 않는다. (뇌 또는 그 주변부에서 MAO-A의 보다 강한 억제를 유발하는) 보다 높은 5mg/kg의 [R](+)PAI 투여량에서는, 티라민 증압 반응의 상당한 약효 증가를 유발하고, 이는 디프레닐의 같은 투여량에 의해 발생되는 정도와 비슷하며(간의 MAO-A의 활성을 85%이상 억제하는 투여량의) 클로지린에 의해 발생되는 것보다는 작았다.

[표 3]

의식이 있는 래트의 티라민 증압 효과에 의한 약효 증가

이 실험으로부터, 화합물 R(+)PAI는 효과적으로 MAO-B를 억제하는 용량에서 티라민 증압 효과에 의한 약효 증가를 유발하지 않는다고 결론지을수 있다.

실시예 27

R(+)PAI에 의한 도파민에 민감한 독성에 의해 유발된-MTPT의 억제

1-메틸-페닐-1, 2, 3, 6-테트라하이드로피리딘(MTPD)는 마우스를 포함하는 포유류에서 흑질선상체의 도파민에 민감한 뉴런에 손상을 주는 신경독이고, 인간과 영장류에게 파킨스씨 병 증후군을 유발한다. 신경독의 메카니즘에 있어서 중요한 최초의 단계는 MTPD가 독성 대사 물질인 1-메틸-4-페닐 피리디니움 이온(MPP+로 변환과 관련된다. 이 반응은 효소 MAO-B에 의해 촉매 반응되고, 주로 글리아내에서 도파민에 민감한 뉴런의 외측에서 반응되는 것으로 추정된다. MTPD는 물질이면서 MAO-B의 비가역 억제 물질로 알려져 있다. 디프레닐 또는 파르질린과 같은 MAO-B 억제 물질로 실험 동물의 사전 치료하는 것은 흑질선체상의 뉴런에 손상에 의해 유발된 MTPD를 보호하거나 방해하는데 이는 MTPD에서 MPP+로 산화 변환이 블록화되기 때문이다. 파킨스씨 병에서 악화성의 흑질선체상의 퇴화는 환경적으로 유발된 신경독과 같은 외인성의 MTPD로 부터 노출되기 때문일 수도 있다. 이와 같은 경우에는, 아직까지는 독성을 갖는 것으로 추정되는 MTPD의 손상 효과를 중화시킬수 있고, 따라서 병의 진전을 정지 또는 약화시킬수 있다는 희망에서 파킨스씨 병의 아주 초기 단계에 MAO-B의 억제 물질로 지속적인 치료의 시작하여 강한 징후를 나타낼수가 있게 한다. MAO-B의 억제 물질 약품은 시험관내에서 흑질선체상의 도파민에 민감한 뉴런에 가해진 손산에 의해 유발된 MPTP를 블록화 시킬수 있는 능력을 갖는 것으로 현재 판단된다. PAI의 (-), (+) 에난시오머는 따라서 마우스에서 선조체의 도파민 소모에 의해 유발된 MPTP를 방지하거나 약화시키는 효능 시험을 거쳤다.

실험 프로토콜

숫놈 C57 검은 마우스(20-25g)는 MPTP-HCL(희석수내에 용해된 30mm/kg, s.c), 또는 단지 용액, 또는 후치료 한시간 후에 PAI(2.5mg/kg, i.p) 의 (-) 또는 (+) 이성체, 또는 디프레닐 (5mg/kg, i.p)이 주사되고 (b) 5일후에는 목을 자른다. 뇌가 제거되고 시체의 선조체는 분리하여 차거운 유리판에 놓고 드라이 아이스로 얼린다. 선조체 조직은 0.1M의 과염소산으로 균질화하고, 국제 표준으로서 디하이드로벤질라민을 포함하는 단백질을 제거한 부분 표본의 도파민과 주요 대사 물질인 3, 4-디하이드로시-페닐아세틱 산(DOPAC)이 HPLC를 사용하여 전기화학 검출로 분석된다.

결과

이 실험의 결과는 표 4에 도시되었다. 생성된 MPTP만으로 한 치료는 선조체 도파민(DA)와 DOPAC의 감소를 나타내었다. (-) 및 (+)인 에난시오머는 PAI 또는 (-)디프레닐의 치료는 선조체의 DA 농도에 영향을 주지 못하였다. (-) 이성체인 PAI의 선치료는 선조체내의 DA 또는 DOPAC에 의해 유발된 MPTP에 영향을 주지 않았다. MTPT전에 주어진 (+) 이성체인 PAI는 독에 의해 생성된 선조체의 DA와 DOPAC 레벨의 감소를 없앤다. 2.5mg/kg의 (+)PAI는 그 예방 효과에 있어서 (5mg/kg)의 (-)디프레닐과 같다.

[표 4]

시험관내에서 마우스의 MPTPdp 의해 유발된 선조체의 DA와 DOPAC의 감소에 MAO-O 억제 물질 PAI의 (-) 및 (+) 에난시오머를 이용한 선치료 효과

상기 수치는 평균±S.E.M으로 표현된 DA와 DOPAC 및 래트의 수에 대한 것이다. 이 결과는 R(+)PAI가 시험관내에서 뛰어난 MAO-B 억제 물질이고, 특히 파킨스씨 병의 치료에 대한 큰 가능성을 보여준다.

본 발명이 상술한 실시예와 첨부된 표와 도면을 참조하여 설명되었지만, 여기에 제한되는 것은 아니다. 본 발명에 대한 다양한 변형과 적용이 가능하다. 예를 들면, (R)-PAI는 씨너지 효과의 방안으로 파킨스씨 병의 치료를 위해 α-토코페롤(비타민 E 유도체) 혼합될 수도 있다.

실시예 28

노화된 쥐의 전형적인 행동 특성으로 부터 유발된 암페타민에 대한 PAI 에난시오머 효과

암페타민은 내생의 도파민에 이동에 의해 전형적인 행동을 유발하는 것으로 알려져 있다(Sulser, F.와 Sanders-Bush, E., Ann. Rev. Pharmacol., 11,209-230(1971)). 효과적인 억제 물질과 암페타민의 투여에 의해 MAO-B의 억제는 억제된 MAO-B에 의해 변질되지 않은 도파민을 분비시킨다. 따라서, 시내틱 도파민의 증가는 암페타민과 효과적인 MAO-B 억제 물질의 투여로 암페타민의 효과에 의해서 전형적인 행동-강화의 증가를 가져온다. 이러한 행동 특성의 정도는 1분 주기 이상의 머리의 측방향 활성의 수에 따라 평가된다.

실험 프로토콜

(6시간동안의 92% 질소+8%산소에 의한) 저산소증 감염 24시간 전에 시험 화합물이 식수에 0.5mg/kg/일의 투여량으로 투여되었다. 이후, 암페타민이 0.5mg.kg의 투여량으로 주사되었다(s.c.). 45분 후에, 머리의 측방향 활성이 측정되었다.

결과

이 실험의 결과는 표 5에 도시된다.

[표 5]

노화된 래트의의 전형적인 행동으로 부터 유발된 암페타민에 대한 PAI 이성체 효과(대조구 및 저산소에 의한 손상)

도 5에서의 결과는 (+)PAI가 저산소 손상에 의한 그룹의 래트와 대조구 그룹의 래트이 양쪽에서의 전형적인 행동으로 유발된 암페타민에 상당한 약물 효과를 나타내도록 한다. (-)PAI이 경우는, 완전히 비활성적이다. 이러한 시험관 내에서의 특성은 결과는 (-)PAI가 뇌에서의 MAO-B의 활성 억제 물질이고 반면에 (+)PAI가 이 경우에는 비활성적이라는 생화학적 발견을 확증한다.

실시예 29

기억 회복 향상에 대한 R(+)-PAI의 효과

단기간의 산소 결핍을 받게 된후 정상적으로 성장을 시작할 수 있게한 새로 태어난 새끼 래트는 장기적으로 기억 손상이 증가한다.(Speiser외, Behav. Brain Res., 30, 89-94(1988)). 이러한 기억 손상은 수동적인 회피 시험을 수행하는데 있어 열등한 것으로 나타난다.

기억 회복 또는 향상에 대한 R(+)-PAI와 S(-)-PAI의 효과는 수동 회피 시험에서 연구되었다. 약물이 효과적이라면, 시험된 래트가 이전에 전기 쇼크를 받은 경험이 있는 어두운 칸막이 또는 챔버로 들어갈 때 잠복된 반응을 증가시킨다. 최대 잠복 반응은 300초이다.

실험 프로토콜

젊은 래트는 실시예 27에서 기술한 바와 같이 태어난후에 산소 결핍 실험을 받게 된다. R(+)-PAI 또는 S(-)-PAI는 하기의 프로토콜중 하나를 따라 투여된다.

프로토콜 A

젖을 주는 래트에는 식수에 1-1.5mg/kg/일 투여량의 이성체가 새끼에게 젖을 떼기 21일전까지 투여된다. 이후, 젖을 떼인 새끼는 동일한 투여량으로 20일간 치료된다. 치료는 40일에서 종료되고, 약물 복용의 20일 후인 60일째에 시험이 시행된다.

프로토콜 B

젖을 주는 래트에는 젖을 떼기 21일 전까지 0.5mg/kg/일 투여량의 약물이 투여되고, 이후 시험이 수행되었던 시기인 60일까지 젊은 래트에게 직접 투여된다.

수동 회피 시험

실험 장치는 밝은 챔버와 어두운 챔버와, 그 사이를 분리하는 슬라이딩 문으로 구성된다. 훈련시, 래트는 밝은 챔버에 30초간 놓여지고 문이 열려지게 된다. 멈칫거림이 기록되는 상태에서 래트는, 어두운 챔버로 이동한다. 래트가 어두운 칸막이로 이동하자 마자, 문은 닫히고 0.3mA의 바닥 쇼크가 3초가 가해진다.

48시간 후의 보유(기억)은 실험을 반복하여 밝은데서 어두운 곳으로 올겨갈 때 무작위로 최대 300초간 래트의 멈칫거림을 기록함으로서 결정된다.

결과

이 시험의 결과는 표 6에 도시되어 있다.

[표 6]

젊은 래트의 수동 회피에 대한 PAI 이성체 효과

실험 결과는 (-)PAI가 아닌 (+)PAI는 산소 결핍 손상을 입은 래트와 대조구 래트의 기럭을 증가하는데 효과적인 것으로 나타났다. 이 시험에서 약물 활성은 여러 가지 정신 손상에 의한 장애, 치매, 특히 알츠 하이머형과 같은 노인성 치매에 대한 치료에 약효가 유요한 것으로 여겨진다.

실시예 30

젊은 래트에서 산소 결핍에 의해 야기된 과민반응 증후군에 대한 (+)-PAI 효과

출생후 산소 결핍에 노출된 후, 정상 조건으로 성장된 래트는 10-42일의 연령에서 개방된 곳에서 활성이 증가하는 것을 나타낸다.(Hershkowitz외, Dev. Brain Res., 7, 145-155(1983)). 과민 반응 증후군등에 대한 R(+)PAI가 아닌 S(-)PAI의 효과가 연구되었다.

실험 프로토콜

생후 첫째날 새끼 래크에 산소 결핍 실험이 행해졌다. 새끼 래트들은 유리 챔버에 놓여지고, 25분동안 100%의 질소에 노출되었다. 새끼 래트에는 가슴을 부드럽게 문질러 인공 호흡이 가해지고 어미에게 돌려 보내졌다. 대조구 래트에는 질소 대신에 공기로 동일한 치료가 행해진다.

어미에는 식수에 가해진 R(+)-PAI 또는 S(-) PAI(0.5mg/kg/일)가 투여됨으로서 젖을 통해 새끼에게 전달된다.

래트의 활성력은 6개의 전산화된 우리(28×28cm)에서 주어진 시간에 횡단 회수를 기록함으로서 측정되었다. 4cm 간격의 경자형 적외선 빔을 가로지르는 것은 계수를 하는 전기 충격을 발생시킨다. 활성의 기록은 생후 15-20일에, 15분 이상의 주기로 기록된다.

결과

실험 결과는 표 7에 나타나 있다.

[표 7]

산소결핍 유발 기능항진성 증후군의 두가지 에난시오머 각각에 대한 효과

이들 결과는 0.5 mg/kg의 양으로 R(+)-PAI로 구성되어 유모에게 투여되어 수유된 자식에게 도달되는 만성적인 경구 치료가 기능항진성 증후군을 개선시켰다는 것을 보여준다. 결과적으로, R(+)-PAI는 어린이의 기능항진성 증후군을 치료하는 잠재적으로 유용한 약이다.

실시예 31

PAI의 10가지 염의 안정성 차이

안정성은 치료약으로서 최적의 염의 선택에 있어서 중요한 인자이다. 여러 가지 염은 약의 물리화학적인 특성 및 생리학적인 특성을 변화 시킬 수 있으며, 전체 특성에 지대한 영향력을 가질 수 있다.

PAI 염의 실험적인 합성

2-프로파놀에 있는 적절한 산 (1 mol-eq.) 용액을 2-프로파놀 (Ar, BHT)에 교반하면서 PAI (1 mol-eq.) 용액에 첨가했다. 생성된 염을 여과시키고, 2-프로파놀 및 에테르로 세척하고 저 압력 상태에서 건조시켰다. 70 에서 90% 사이로 수율이 얻어졌다. 솔벤트와 같이 에테르를 이용하는 것에 관계되는 PAI 아세테이트 제조에서는 제외.

분석 방법

Lichrosphere 60 RP 선택 B 5μ 125 ×4 mm (Merck) 칼럼, 210 nm으로 세팅된 L-4200 UV-Vis 검출기 (Merck-Hitachi)가 구비된 HPLC (Jasco BIP-1), 및 d-2500 크로마토-적분기를 이용하여 크로마토그래픽 분리를 수행하였다. 용리제와 희석제는 80% 증류된 물/20% 아세토니트릴 (HPLC 등급)로 구성되었고 0.07 M 과염소산은 수용성 암모니아로 pH 2.5로 조정되었다. 사용된 유량은 1 ml/min이었고, 적절한 PAI 염 용액 농도는 250 μg/ml이었고, 이 용액중 20 μl이 크로마토그래픽 시스템에 주입되었다.

용융 범위는 자동 장치 (Mettler FP 80)로 측정되었고 열무게법 분석이 적용가능한 범위의 10℃/min의 비율로Mettler TA 3000 시스템에서 수행되었다. 포화된 PAI 염 수용액으로부터의 상청액의 적절한 희석에 의해 용해도가 결정되었고 UVIKON 941 (Kontron) UV-Vis 분광광도계로 측정되었다. C, H, N 및 S 정량을 이용하는 기초 분석에 의해 표준 장치 염 형태 (mono- 또는 di- 염)가 얻어졌다. PAI 염의 1% 수용액에서 pH가 측정되었다.

결과

다양한 염의 특성이 표 8에 요약된다.

[표 8]

몇가지 촉진 조건 즉, I) 72시간, 96시간 또는 144시간동안 80℃에서 가열하는 조건과 II) 30시간동안 이소프로파놀에서 환류하는 조건하에서 비교 안정성 연구가 수행되었다. 개발된 분해 생산물이 HPLC에 의해 측정되었고 TLC에 의해 확인되었다. 결과는 총 집적된 피크 면적에 상대적인 면적 %와 같이 표 9에서 상대적인 체류 시간 (PAI 피크에 비례하는; RRT)으로 제시된다.

[표 9]

단기 조건하에서 PAI 염에서 개발된 분해 생산물

염이 색 및 형태의 시각 검사로 위탁되었다.

이러한 연구는 황산염, 에실레이트 및 메실레이트가 양호한 용해도 및 화학적 안정성으로 인해 다른 염에 비해 중요한 이점을 가지고 있다는 것을 보여준다. 이들 세가지 염 중에서는 부정적인 조건하에서도 우수한 안정성을 보여주는 메실레이트가 보다 낫다.

실시예 32

쥐(mice)의 할로페리돌 유도성 강경증의 반전 현상

25-30 g의 수컷 ICR 쥐(mice)에게 살린이나 (R)-PAI 메실레이트, 라세미 PAI 메실레이트 중의 어느 하나를 투약한다. 모든 약물의 투여량은 0.2 ㎖ 부피로 한다. 두시간 후, 할로페리돌을 0.1-0.2 ㎖의 부피에 6 mg/kg의 분량으로 투약하고, 이후 3 시간 되는 시간에 즉, 예비 보호약물을 투약한지 5 시간 후에 근육 운동 정합 시험을 실시한다.

근육 운동 정합 시험은 세가지의 다른 파라미터에 따라 측량한다; (a) 80 ㎝ 길이의 수평 막대 위를 걸을 수 있는 능력; (b) 80 ㎝ 길이의 수직 막대를 내려갈 수 있는 능력; (c) 쥐의 복부를 "벽"으로 눌러서 불안정하게 앉은 자세로 움직이지 않고 가만히 견딜 수 있는 능력. 각각의 시험에서 4점을 최고 점수로 하여 전체 시험에서는 12점을 최고 점수로 정한다. 이 때 1 내지 3점을 낮은 점수로 한다. 점수를 매기는 기준은 표 9A에 나타내었다. 그리고 할로페리돌 유도성 강경증을 완화시키는 여러 가지 약제의 효과를 표 11에 나타냈다. 할로페리돌을 투약한지 3 시간 후에, (R)-PAI 메실레이트가 5-15 mg/kg에서 할로페리돌에 대하여 보호효과를 나타내어 7.5-10 mg/kg(활동 점수 = 살린 대조구의 94%)에서의 효과 이후에 최대 효과를 보인다. 라세미 PAI 메실레이트는 7.5-15 mg/kg의 범위에서 부분적인 보호작용을 나타내고 5 mg/kg에서는 효과가 없다. 도 17을 보면, (R)-PAI 메실레이트나 라세미 PAI는 10 mg/kg 이하에서 투여량을 증가시키면 효과가 감소하는 반면에 라세미 혼합물은 전반적으로 효력이 적다. 즉, 라세미 PAI 메실레이트의 투여량을 (R)-PAI 메실레이트 투여량의 두 배로 하면 (R) 에난시오머보다 덜 활성적이다.

쥐(rat)의 α-MpT 유도성 운동감퇴증의 반전 현상

약물 α-MpT는 티로신으로부터 L-DOPA의 생성을 억제하여 도파민을 형성하는 것으로 추정된다. CNS 도파민이 결핍되면 활동감퇴를 보인다. 생후 6개월된 수컷 쥐(Wistar rat, from Harlan Orkack, UK) 여섯 마리를 살린이나 (R)-PAI 메실레이트, 라세미 PAI 메실레이트를 일정량 투약한다. 두시간 후, α-MpT를 0.3-0.5 ml에 100 mg/kg의 양만큼 투여한다. 대조구에는 살린을 투약한다. 이후, 컴퓨터 처리 활동 케이지 안에서 10 시간 동안 근육 운동을 기록한다. 결과는 표 12와 도 18에 나타냈다. 2 mg/kg에서 (R)-PAI 메실레이트는 살린을 투여한 래트의 약 90%의 활동 수준을 기록하지만 라세미 PAI 메실레이트는 효과가 없다. 두가지 경우 모두에서 투여량 효과 곡선은 종모양을 형성하여 2-5 mg/kg 이하에서는 투여량이 증가하여도 효과가 감소하는 것으로 밝혀졌다. 5 mg/kg 라세미 PAI 메실레이트는 2 mg/kg의 (R)-PAI 메실레이트에 필적하는 효과를 내지 못한다.

상기 측정의 결과로서, (R)-PAI 메실레이트와 라세미 PAI 메실레이트는 할로페리돌로 처리한 마우스와 α-MpT로 처리한 래트에서 정상운동을 회복하는 효과 패턴이 서로 다르다는 것을 알 수 있다. 조사한 모든 투여량에서, (R)-PAI 메실레이트는 동량의 라세미 PAI 메실레이트보다 더 효과적이다. 또한, 라세미 PAI 메실레이트의 피크 활성은 (R)-PAI 메실레이트의 피크 활성보다 항상 낮다. 따라서, 일정 투여량에서 라세미 PAI 메실레이트는 그 절반에 해당하는 투여량의 (R)-PAI 메실레이트보다 덜 효과적이다. 라세미 PAI 메실레이트의 투여량을 (R)-PAI 메실레이트 투여량의 두 배로 하여도 (R)-PAI 메실레이트와 같은 효력이 발생하지 않는다.

약리학적으로, 라세미 PAI 메실레이트는 (R)-PAI 메실레이트인 50% 활성 성분과 희석제인 50% 비활성물로 이루어져 있지 않다. 라세미 PAI 메실레이트에서 (S)-PAI가 존재하면 (R)-PAI의 활성에 역효과를 주어 효력이 두배 감소하게 된다. 이와 같은 효력 감소는 활동 파라미터에 미치는 (S)-PAI의 역효과에 기인하는 것이다.

[표 11]

(R)-PAI 메실레이트와 라세미 메실레이트를 투여한 마우스의 할로페리돌 유도성 강경증의 반전 현상. 마우스에 일정 투여량의 시험 약물을 투약하고 두시간 후에 마우스에 상기 설명한 할로페리돌을 투여하였다.

[표 11A]

쥐(mice)의 할로페리돈 유동성 강직증과 여러 가지 약물에 의한 반전 작용의 채점 기준

[표 12]

100 mg/kg 분량으로 α-메틸-ρ-티로신(α-MpT)을 투약한 쥐(rat)의 근육 운동 활동의 복귀.

실시예 33

쥐(rat)에 두부 외상을 가한 후 투여된 (R)-PAI 메실레이트의 영향

방법

1. 외상 유도

좌측 대뇌 반구를 덮고 있는 두정 평면 중앙선에서 1-2 mm 측상으로 노출된 두골 위에 잘 보정된 질량 강하 장치를 떨어뜨려서 에테르 마취 상태에 있는 수컷 래트의 두부에 외상을 가한다.

2. 근육 운동 능력 평가

외상을 가한 1시간 후에 래트의 신경 출력을 조사하기 위한 두가지 기준 시험(Shohami et al., J. Neurotrauma, 10, 113 (1993)에 설명된 기준)을 실시한다. 이들 기준을 NSS(Neurological Severity Score)라고 하는데, 일련의 근육 이완과 운동 능력으로 이루어진다. 이들 기준에 미달하는 것을 근거로하여 점수를 산정한다. 24시간 후, 래트를 다시 평가한다.

3. 뇌부종 평가

근육 운동 능력(24시간)의 이차 평가후 뇌를 제거한다. 조직 일부(∼20 mg)의 무게를 측정하여 습식 중량(WW)을 측정한다. 데시케이터 오븐에서 24시간 동안 95 ℃에서 건조시킨 다음, 다시 무게를 재어 건조 증량(DW)을 측정한다. 조직 내의 수분 함량은 (WW - DW) × 100/WW로 계산한다.

4. 약물 처리

(R)-PAI 메실레이트를 물에 용해시킨다. 쥐의 두부에 외상을 가한 지 0, 4, 8, 12시간 후에 상기 약물을 0.1 mg/kg 양만큼 복강내에 주사한다. 대조구 쥐에는 같은 시간에 물을 주사한다.

결과

쥐(rat)의 "임상" 상태를 측정하는 NSS는 두부 외상을 가한 지 1시간 후에 약물 처리하거나 처리하지 않은 집단에서 모두 동일하지만 (R)-PAI 메실레이트로 처리한 쥐의 경우에는 NSS가 24 시간 후에 크게 감소한다(표 13). 그 결과, PAI 메실레이트가 쥐의 두부에 외상을 가한 후 운동 능력 회복을 개선시키는데 효과적이라는 것을 알 수 있다.

외상을 가한 후 24시간이 지났을 때, 뇌반구에 부종이 발견된다(손상되지 않은 뇌조직에 물이 78.5%인 것에 반해 대조구 쥐의 뇌에는 85.4%). 따라서, PAI 메실레이트는 물 함량 백분율에 영향을 미친 바와 같이 부종을 감소시키는 효과가 있다.

결과적으로, (R)-PAI 메실레이트는 인체의 신경 외상을 모사하여 폐쇄된 두골에 외상을 가한 모델에서 신경보호 특성을 갖는 것으로 증명된다.

[표 13]

실시예 34

NMDA 유도 세포 보호에 대한 PAI 메실레이트의 효과

소뇌 세포 배양체의 파괴

분석 결과

방법: 기계적으로 분리 처리한 신생 쥐(rat)의 소뇌 배양. 생후 6일 또는 7일된 쥐(rat)로부터 소뇌를 절개하여 3 ml의 부양 매질(고농도의 글루코오스(1 g/l), 2 mM (v/v) L-글루타민, 항생 유사분열 방지 혼합물을 갖는 Dulbecco 변형 Eagle 매질(DMEM)으로 이루어지고 15%(v/v) 열적 비활성 처리된 송아지 태아 혈청을 포함함)을 함유하고 있는 15 ml 멸균 플라스틱 원추형 튜브에 넣는다. 멸균 13 게이지와 45 μm 크기의 구멍이 뚫린 나일론 체를 갖는 5 ml 주사에 부착된 10 cm 길이의 스테인레스강 바늘을 통하여 소뇌 세포를 분리한다. 분리된 세포를 5 분동안 200 g에서 원심분리하고 상청액을 분리하고 세포를 부양 매질에 다시 부유시킨다. 세포의 생육력은 트립판 블루 추출 시험으로 결정한다. 폴리-L-라이신으로 피복된 표면( )에 세포를 200/mm²밀도로 입히고 부양 매질로 덮은 다음, 공기중 5% CO₂와 습도 100%의 대기에서 37 ℃ 온도에서 배양시킨다. 배양한지 4시간 후에 매질을 원하는 시험 화합물을 함유하는 매질로 바꾸어주고 실험을 두 번씩 그리고 두 번 또는 세 번 반복한다. 시험 화합물 독성 분량-반응을 결정한 후, 네 개의 군을 비교한다: (Ⅰ) 대조구(매질로만 부양됨), (Ⅱ) 시험 화합물 (각 농도에서 하위군 (2 농도에서 시험), (Ⅲ) 세포 독성 자극제로서 N-메틸-D-아스파르트산 (NMDA, 3시간 동안 1 mM 농도에 노출시킴), (Ⅳ) 시험 화합물 + NMDA(시험 화합물의 2 농도 각각에 대한 하위군), (Ⅴ) 용매 효과를 시험하기 위한 대조구군(시험 화합물이 녹아있음), 및 (Ⅵ) 스퍼민(배양 매질에 0.01 μM가 용해됨) + NMDA의 추가 "양성 대조구"군. 신경 세포 생육력은 24시간 후 상태 대조 현미경과 트립판 블루 추출 시험으로 결정한다.

결과

글루타민산(Glu)은 간질이나 경련을 포함한 신경성 혼란과, 파킨슨씨병과 알츠하이머, 외상성 뇌손상과 같은 뇌신경퇴행성 질병을 일으키는 신경독으로 작용한다. Glu의 신경독에 의한 작용은 N-메틸-D-아스파르트산(NMDA) 수용기와 같은 막결합 글루타민산 수용기가 중간역할을 한다.

표 14에 나타낸 결과로부터 (R)-PAI 메실레이트 10 μM가 1 μM NMDA 노출된 뇌세포의 생존율을 27% 증가시킨 것을 알 수 있다. 이와 같은 결과는, 실시예 33과 35에 나타난 NMDA의 신경독성 농도에 대한 (R)-PAI 메실레이트의 신경보호 효과를 뒷받침해준다.

[표 14]

NMDA에 의한 뇌세포 파괴를 억제하는 (R)-PAI 메실레이트의 신경 보호 효과.

비처리 대조구의 백분율로서 표시한 수치는 배얄시험에서 2번의 동일한 실험에서 평균치와, 평균 ± SEM(네마리 쥐의 국소 출혈에 대한)을 나타낸다. 보호값 백분율은 용매 효과를 뺀 시험 화합물의 효과이다.

실시예 35

쥐(rat)의 광신경 압착 손상 후 (R)-PAI 메실레이트의 영향

성체인 쥐의 광신경을 파괴한 후 (R)-PAI 메실레이트의 신경 보호 효과를 결정하였다. 물질 대사적으로는 단기적인 효과가 측정되었고 전자생리학적으로는 장기적인 효과가 있었다.

방법

1. 대사 측정

a) 일반. 방법은 Yoles, et al., Investigative Opthalmology & Visual Science, 33, 3586-91 (1992)에 설명되어 있다. 단기적으로는, 전자 전달 시스템의 활성에 의해 결정되어 에너지 생성 수준을 나타내는 미토콘드리아 NADH/NAD비를 통하여 물질 대사를 조사하였다. 일시적으로 의도한 무산소 상태에 따른 신경 손상 전후의 NADH 수준을 비교하여 신경 외상의 결과로서 신경이 에너지를 생산하는 능력의 변이를 결정하였다.

b) 표면 형광측정 - 반사측정. 내부미토콘드리아 NADH 산화환원 상태 조사는 NAD⁺의 산화 형태와는 달리 NADH가 450 nm에서 형광을 낸다는 사실에 기초한 것이다. 광섬유(light guide)의 유연한 Y자형 다발이 광신경에서 광신경으로 빛을 전달한다. 신경에서 발하는 빛은 두 개의 파장으로 측정된다: 366 nm (반사광), 450 nm (형광). 반사광의 변화는 혈액 동력 작용에 의한 조직 흡수 변화와 연관되고, 동맥 혈압과 신경 부피 변경에 이차적인 광신경의 이동과 관련이 있다. 수정된 형광신호를 얻기 위하여 형광(1:1 비율)에서 반사광(366 nm)을 차감함으로써 형광 측정치를 NADH 산화환원 상태 측정치에 적합하게 맞춘다.

c) 실험 동물 준비. 동물의 이용은 조사할 동물의 이용에 대한 ARVO Resolution에 따른다. 수컷의 Sprague-Dawley(SPD) 쥐(rat)의 무게가 300-400 g이고 펜토바르비톤 나트륨을 50 mg/kg로 복강내에 주사하여 마취시킨다. 동물의 머리를 고정시키고 쌍안경 현미경 아래에서 측면 canthotomy를 수행하고 conjunctiva를 각막 측부에서 칼로 상처를 낸다. 후인근을 분리한 후, 광신경을 확인하고 절개하여 안구 가까이의 3-3.5 mm 길이를 노출시킨다. 뇌경막을 건두리지 않고 신경을 손상하지 않도록 주의한다. 광신경 주위에 특수한 광섬유 홀더를 주입하여 광섬유가 손상 위치로부터 1 mm 떨어진 광신경 표면에 위치하도록 한다. 아직 마취상태인 쥐를 30분간 회복시킨 후 무산소 상태에서 방치한다. 무산소 상태는 쥐가 2분동안 100% 질소 대기에서 호흡하도록 하면 된다. 광신경의 물질 대사 활동을 조사하기 위하여 압착 손상 전후의 무산소 상태에 따른 반사광과 형광 세기의 상대적인 변화를 측정한다.

d) 압착 손상의 실험 프로토콜 및 대사 측정. 보정 단면 겸자를 사용하여 30초 당 120 g의 압력에서 안구와 광섬유 홀더 사이의 신경에 적당하게 압착 손상을 가한다. 손상을 준 즉시, 쥐에게 (R)-PAI 메실레이트 2 mg/kg을 함유하거나 그렇지 않은 물을 복강내에 주사한다. 에너지 생산 시스템의 활성을 조사하기 위해 손상을 가하기 전에 2 분간의 무산소 상태에 대한 모든 쥐의 NADH값을 측정한 후 4 시간까지의 시간 간격을 준다(도 19 참조).

2. 전자생리학적 측정. 방법은 Assia et al., Brain Res., 476, 205-212 (1989)에 설명되어 있다. 실험 쥐의 준비와 광신경 파괴 방법은 대사 실험에서와 동일하다. 손상을 가한 후 즉시 쥐에 (R)-PAI 메실레이트를 0.5 mg/kg 포함하거나 포함하지 않는 물을 한차례 주사한다. 이후 14일 째 되는 날에 광신경을 잘라내어 전자생리학적으로 조사한다. 광신경을 제거하기 전에 쥐는 70 mg/kg 펜토바르비톤으로 마취시킨다. 두골의 피부를 벗기고 광신경을 안구로부터 떼어낸다. subtotal decapitation 수행 후 두골을 열어서 뇌를 옆으로 밀어서 광신경을 노출시킨다. 신경을 절개하고 126 mM NaCl과 3 mM KCl, 1.25 mM NaH₂PO₄, 26 mM NaHCO₃, 2 mM MgSO₄, 2 mM CaCl₂, 10 mM D-글루코오스로 이루어진 염용액을 함유하고 실온에서 95% O₂와 5% CO₂로 채운 약병으로 옮긴다. 신경을 이 용액에 방치하여 적어도 3-4 시간 동안 전기적 활성이 안정하게 둔다. 실온에서 회복시킨 지 0.5 시간 후에 압착 손상 위치에서 떨어진 신경에서 전자생리학적인 기록을 측정한다. 신경 말단을 37 ℃에서 용액에 담긴 두 개의 흡입 Ag-AgCl 전극과 연결한다. 전극을 통하여 중앙단에 자극 펄스를 인가하고 활동 전위를 전극으로 기록한다. 유리 SD9 자극기를 사용한다(0.5 pps). 측정된 신호를 Medelec PA36 예비엠프와 전자근전도(Medelec MS7, AA7T 엠프)로 보낸다. 8개의 평균 활동 전우(CAPs)의 최대 진폭을 기록하고 폴라로이드 카메라도 촬영한다. 손상되지 않은 신경에서 측정된 CAP 값은 기준값으로 한다.

결과

광신경 손상 후에 즉시 투약한 (R)-PAI 메실레이트는 에너지 생산 시스템에서 손상으로 인한 환원 반응을 억제한다. (R)-PAI 메실레이트는 또한 전자생리학적 조사에 의해 측정된 장기 효과를 나타낸다.

CAP(Compound Action Potential) 진폭은 신경편에서 전도 섬유의 수와 직접 관계가 있다.

(R)-PAI 메실레이트는 손상된 신경과 근접한 부분이 손상으로 인해 활동이 감소하는 것을 크게 방지하여, (R)-PAI 메실레이트가 신경 보호 물질로 작용하거나 적어도 조직의 변성을 완화시킨다는 사실을 입증한다.

[표 15]

전자생리학적 측정

실시예 36

R-PAI 염과 S-PAI 염의 발작 억제 특성 비교

(R)-PAI 및 (S)-PAI HCl 염은 모두 발작을 억제하는 작용을 한다. 최대 전자충격 시험(MES 시험)에서 사용된 쥐(mice)에서 (R)-PAI HCl의 발작 억제 활성(ED50 = 57 mg/kg)이 (S)-PAI HCl(ED₅₀= 79 mg/kg)보다 더 컸다. 이 결과가 쥐(rat)에서도 관찰되었다. 네 마리의 쥐(rat)에게 (S)-PAI HCl 50 mg/kg을 투약했을 때 MES 시험에서 네 마리 모두 발작 억제 효과가 있어던 반면에, 동량의 (R)-PAI HCl를 투약한 경우에는 그 중 세 마리에만 효과가 나타났다. 파킨슨씨병에 대한 효과에 있어서, 경력 억제 작용의 향상은 부작용이다. 메실레이트 염으로도 같은 경향이 발생한다. MES 시험에 의하면 (S)-PAI 메실레이트가 (R)-PAI 메실레이트보다 발작억제 활성이 크다. 100 mg/kg의 투여량에서, (R)-PAI 메실레이트로 세 마리의 쥐(mice) 중에 단 한 마리만 발작이 예방된 반면에 (S)-PAI 메실레이트로 세 마리 모두가 발작이 억제되었다.

MES 시험은 사람의 부분적인 또는 전반적인 발작 증상에 대한 효능을 나타내는 고전적인 모델이다. 약물 작용의 메커니즘은 발작의 전파를 막는 기능에 의한 것이다. 그러나 발작의 전파를 막는 동일한 약물이 발작 한계치를 낮추는 부작용을 나타낸다. 따라서 이들 약물은 발작유도 및 발작억제 부작용을 동시에 가져야 한다.

결과적으로, (S)-PAI 메실레이트는 발작유도 작용을 한다. 메트라졸(Metrazol) 시험에서 (S)-PAI 메실레이트 141 mg/kg을 피하주사 하였을 때, 발작의 최초의 집중 발작 징후와 간헐적인 근육 경력이 나타났다. 부분 또는 전반적인 발작에 사용되는 페닐토인과 카르바마제핀과 같은 다른 약물들은 이와 같은 효과를 내지 않는다 (H.J. Kupferberg, Epilepsia, 30, s51-56 (1989)). 마찬가지로, (S)-PAI 메실레이트는 (R)-PAI 메실레이트보다 매우 높은 신경작용을 나타낸다. 300 mg/kg의 투여량일 때, (R)-PAI 메실레이트는 회전대 근육 실조 시험에서 쥐(mice)에게 아무런 신경작용을 나타내지 않지만 (S)-PAI 메실레이트는 네 마리 모두에게 신경작용과 경련을 유도한다.

방법

TD₅₀(중간 독성 분량). 이 시험은 회전대 운동 실조 시험으로 신경학적 결핍을 측정하는 것이다. 한 마리의 쥐(mouse)를 6 rpm으로 회전하고 있는 막대에 올려놓고 평형을 유지하여 세 번의 시도에서 각각 1분 동안 가만히 있을 수 있는지를 알아본다.

메트라졸 시험에서 피하주사 이 시험은 동물의 최소 발작 한계치를 측정하는 것이다. 메트라졸을 쥐(mice)의 꼬리 혈관에 0.185 mg/ml 분량을 주사하여, 이로부터 최초의 경련(최초의 집중 발작)과 간헐적인 근육 경련(간헐성 발작)이 일어날때가지의 시간을 잰다. 메트라졸의 투여량이 이보다 적었을 때에는 같은 증상이 나타나지만 보다 빨리 종료된다.

실시예 37

내장 유연근의 수축에 미치는 (R)-PAI와 (S)-PAI의 주위 효과

격리 토끼나 모르모트(기니 피그)의 소장에 대하여 PAI 에난시오머의 염산염의 주위 효과를 알아본다. 이 실험으로부터 이들 물질이 인체에 미치는 상대적인 주위 부작용에 대한 유용한 정보를 얻을 수 있다. 실험 대상에 복용시킨 약물이 먼저 닿는 지점은 약물 흡수 및 전파 후 약물의 농도가 매우 높은 위도이다. PAI 염산(MW = 208)의 경우, 약 100 ml에 함유된 10 mg의 복용량은 약 0.5 mM의 농도에 해당한다. 대조적으로, (R)-PAI HCl의 치료학적 혈장 농도는 나노몰 단위이다.

격리 토끼의 공장과 모르모트의 회장에 대한 PAI 에난시오머의 효과를 조사하여 (R)-PAI와 (S)-PAI를 모두(라세미 PAI에서와 같이) 흡수하였을 때 순수 (R)-PAI 투약시 나타나지 않는 부작용이 생기는지를 알아본다. (R)-PAI는 효소 형태의 MAO-B에 대한 효능이나 고선택성 면에서 뇌내 MAO-B 억제를 위한 바람직한 에난시오머 화합물이다. 이와 같은 측면에서 (S)-PAI는 (R)-PAI 보다 효과가 적고 MAO-B에 대해서도 선택성이 약하다. 원리상, PAI 라세미에서 (S)-PAI의 효과는 별로 없다. 그러나, 표 16-19에 나와 있는 결과로부터 (S)-PAI가 PAI 라세미 혼합물에서 불활성 물질이 아님을 알 수 있다. 그와 반대로, 모르모트의 회장에서 (S)-PAI가 더 강력한 이완제로 작용하므로 그 부작용을 간과할 수 없다. 표 16-19에서 볼 수 있는 바와 같이, 순수 (R)-PAI을 투약하는 것이 동량의 (R)-PAI를 포함하는 라세미 PAI를 투약하는 것보다 부작용이 더 적다는 것을 알 수 있다.

[표 16]

토끼의 공장에서 PAI HCl의 두 에난시오머에 의한 티라민 효과

결과

(S)-PAI가 뇌내 MAO-B 억제물질로서 (R)-PAI 보다 더 효능이 약하다. 그러므로, (S)-PAI는 뇌내 도파민 분해 방지제로서 유용하지 않지만 소장에서 티라민 자극에 의한 노르에피네프린 방출을 증대시킨다. 소장 내에서 (S)-PAI는 분해되지 않은 티라민의 흡수와 작용을 증가시키기 때문에 바람직하지 못한 부작용을 일으킨다. 따라서, (S)-PAI는 라세미 PAI에서처럼 (R)-PAI와 함께 사용될 때에는 불활성이 아니다.

[표 17]

각각 400 μM의 PAI HCl 에난시오머에 의한 모르모트 회장의 베탄에콜(Bathenechol) 유도성 수축 길항작용

결과

(R)-PAI에 비해서 (S)-PAI는 MAO-B 억제물질로서 거의 불활성이므로 뇌내 도파민의 분해를 방지하는 데에는 효과가 없다. 그러나, 소장의 베탄에콜 유도성 수축 억제에 있어서는 (R)-PAI 보다 더 효력이 있다. 따라서, (S)-PAI는 라세미 PAI에서처럼 (R)-PAI와 함께 사용될 때 불활성이 아니다.

[표 18]

PAI HCl 에난시오머에 의한 모르모트 회장의 히스타민 유도성 수축 길항작용

결과

(R)-PAI에 비해서 (S)-PAI는 뇌내 MAO-B 억제물질로서 불활성이므로 뇌내 도파민의 분해를 방지하는 데에는 효과가 없다. 그러나, 내장 유연근을 이완시키는 효과는 (R)-PAI 보다 더 효과적이다. 따라서, (S)-PAI는 라세미 PAI에서처럼 (R)-PAI와 함께 사용될 때 불활성이 아니다.

[표 19]

PAI HCl 에난시오머에 의한 모르모트 회장의 베탄에콜 유도성 수축 길항작용

결과

실시예 38

쥐(rat)의 중뇌 동맥 폐색에 미치는 [R] (+) PAI 메틸레이트의 영향

방법

1.1. 쥐(rat)의 중뇌 동맥 폐쇄(MCAO).

Tamura et al (1981)에 나와 있는 방법을 참고로 한다. 300-400 g의 수컷 쥐(Wistar rat; Olac England-Jerusalem)에 Equitesine 용액을 3 ml/kg의 분량으로 투약하여 마취시킨다. Equitesine은 13.5 ml의 펜토탈 나트륨 용액(60 mg/ml), 3.5 g 클로랄 수화물, 1.75 g MgSO₄, 33 ml 프로필렌 글리콜, 8.3 ml 절대 알콜을 증류수로 83 ml로 희석한 것으로 이루어진다. 고해상 현미경(모델 SMZ-2B, 102형(Nikon, 일본)을 이용하여 외과술을 실시한다. 좌측 중뇌 동맥을 노출시키기 위하여 관자근을 절개한다. 아래턱의 치관 끝을 절개하여 제거한다. 치과 천공기로 정중벽과 하부 관자구 사이의 연결부에 개구술을 실행한다. 뇌경막을 27 게이지 바늘로 조심스럽게 열고 비강 피질 가지와 측선 동맥 사이의 비도 중간 2-3 mm에서 시작하여 중뇌 동맥(MCA)을 마이크로바이폴라 응고로 완전히 막아버린다.

응결 후, MCA를 미세가위로 절단하여 분해해서 폐색을 확인한다. 이후, 관자근을 봉합하고 개구술 위치에 놓는다. 3-0 명주실로 피부를 봉합한다. 쥐(rat)의 한 집단에 MCA 소작은 하지 않고 위장 개구술을 수행한다. 20-25 분간의 외과술 중에는 직장 근처의 회로소자와 접속되어 있는 자기 조절 가열 패드로 이루어진 체온 조절기(Kyoristsu, 일본)로 체온을 37 내지 38 ℃로 유지시킨다. 수술 후 24시간이 지나면, 약물 처리를 하지 않은 대조구에 비하여 약물 처리한 쥐의 손상 정도를 조사하기 위해 신경학적 점수를 매긴다. 48 시간 째에는 쥐를 Equitesine으로 마취시키고 MRI법에 의해 손상 정도를 확인한다. 손상되어 국소 출혈을 보이는 뇌조직의 부피를 측정한다.

1.2. 약물 투여

아래와 같은 일정에 따라 0.3-0.4 ml 증류수에 넣은 [R] (+) PAI 메실레이트를 주사한다.

수술후 바로 1 mg/kg

수술 2 시간 후에 0.5 mg/kg

수술 20-24 시간 후에 1 mg/kg

1.3. 국소 출혈을 나타내는 뇌 손상부의 MRI 스캔

4.7T BIOSPEC 시스템(BRUKER)(Back et al., "Diffusion Nuclear Magnetic Resonance Imaging in Experimental Stroke: Correlation with Cerebral Metabolites, "Stroke (1994년 2월) 25: 494-500 참고)을 사용하여 실험한다. MCAO 또는 모의 수술 후 48시간이 되면 실험 동물을 무게 T1(TR/TE = 500/25)의 여러조각으로 절단한다. 그런 다음에 무게 T2(3000/80)의 여러 조각으로 나눈다 (3 mm 두께의 5개 조각).

경색된 영역의 크기와 정도는 개구술 또는 모의 수술 후 48시간 되었을 때 무게 T2의 MRI에서 관찰되는 세기를 이용하여 추정한다. 쥐(rat)의 각 집단에 대하여 다음과 같은 MRI 파라미터를 결정한다.

c. 국소 출혈 영역 (mm²)

d. 국소 출혈 반구 영역 (mm²)

e. 영향 받지 않은 반구 영역 (mm²)

면적에 절단편의 두께를 곱하므로써 절단편을 사용하여 면적 단위를 부피 단위로 전화시킬 수 있다.

1.4. 신경 점수

신경 점수는 임의의 쥐(rat)에서 고유 이동 활동도의 성과에 매긴 일련의 등급을 모두 합산한 것이다. 점수는 0(완전 정상인 쥐)에서부터 13(완전하게 무력한 쥐)까지이다. 대부분의 파라미터는 0(정상)이거나 1(비정상)로 나누어지지만 그 외의 것은 등급이 매겨진다. 이 연구에서 다음의 시험들을 실시한다.

일반 관찰 시험 : 활동저하; 진정; 털이 일어남

근육 이완 : 쥐의 꼬리를 잡아서 바닥에서 15 cm가량 들어올린다. 정상적인 쥐는 앞발을 모두 바닥쪽으로 뻗고 뒷발을 그네처럼 양옆으로 편다. MCAO이면 대립 위치의 발이 동시에 이완된다.

근육 운동 능력 : 쥐를 겨드랑이로 막대에 매달리게 했을 때 5-15 초 동안 대립 위치의 발로 1 cm 직경의 막대를 잡을 수 있는 능력을 말한다.

근육 운동 정합 : 정상적인 쥐는 일정한 기울기로 비스듬히 세우둔 5 cm 폭의 막대를 오르내릴 수 있다. 어느 방향이든 막대 위를 걷지 못하면 근육 운동 부정합을 나타내는 것이다.

걸음 : 좁은 막대 위에서 고의로 재위치시켰을 때 뒷발로 다시 정상 위치로 복귀할 수 있는 능력.

평형 능력 : 2 cm 폭의 좁은 막대위에서 잡고 균형을 잡을 수 있는 능력.

자력 운동 능력 : 자동 활동 케이지 내에서 15 분 동안의 총 움직임.

상기 파라미터 각각에 매긴 등급은 표 20에 나타냈다.

[표 20]

10가지 자세 파라미터와 자력 운동 파라미터의 신경 점수

2. 결과

2.1. 경색 크기

MRI 연구 결과가 표 21과 도 20에 요약되어 있다. [R](+)PAI 메실레이트로 처리한 래트(n = 9)에서 경색 크기는 그렇지 않은 래트(n = 10)보다 훨씬 작았다. [R](+)PAI 메실레이트로 처리한 래트에서 경색 크기는 그렇지 않은 래트의 약 60%나 작다.

[표 21]

쥐(Wistar rat)에서 48시간 MRI T2-스캔, MCA-폐색 및 [R](+)PAI 메실레이트 처리에 의한 국소 출혈 뇌손상 평가

2.2. 신경 점수

[R](+)PAI 메실레이트를 투여한 다섯 마리의 래트와 투여하지 않은 여섯 마리에 대한 신경 점수를 결정한다. 그 결과를 MRI 검사에서 결정된 각 동물에 대한 경색 크기와 비교한 것이 표 22에 나타나 있고 도 21에도 도시되어 있다. 신경 점수가 가장 낮은 동물은 [R](+)PAI 메실레이트로 처리한 것이다. [R](+)PAI 메실레이트를 투여한 MCAO 래트는 그렇지 않은 것에 비하여 신경 점수가 54% 감소하고 경색 크기도 36%나 감소한다.

[표 22]

쥐(Wistar rat)의 국소 출혈 경색 크기와 관련하여 MCA-폐색 및 [R](+)PAI 메실레이트 처리에 의한 신경 점수

실시예 38의 참고 자료

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Claims

환자의 뇌 허혈 및 발작의 치료에 효과가 있는 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염을 유효량 환자에게 투여하는 것으로 이루어진 환자의 뇌 허혈 및 발작의 치료방법.
제1항에 있어서,

상기 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 제약학적으로 허용가능한 염은

메실레이트염; 에틸황산염; 황산염; 및 염산염으로 이루어지는 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 환자의 뇌 허혈 및 발작의 치료방법.
제2항에 있어서,

상기 제약학적으로 허용가능한 염은 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 메실레이트염인 것을 특징으로 하는 환자의 뇌 허혈 및 발작의 치료방법.
제1항에 있어서,

유효량은 환자의 체중 1kg당 약 0.5mg부터 약 2.5mg인 것을 특징으로 하는 환자의 뇌 허혈 및 발작의 치료방법.
제1항에 있어서,

상기 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 그것의 제약학적으로 허용가능한 이것의 염은 정맥, 입, 직장, 피부 또는 비경구적으로 투여되는 것을 특징으로 하는 환자의 뇌 허혈 및 발작의 치료방법.
제1항에 있어서,

상기 환자는 인간이며, 유효량은 하루에 약 0.01mg에서 약 50.0mg인 것을 특징으로 하는 환자의 뇌 허혈 및 발작의 치료방법.
제6항에 있어서,

상기 유효량은 하루에 0.1mg에서 10.0mg인 것을 특징으로 하는 환자의 뇌 허혈 및 발작의 치료방법.
제6항에 있어서,

상기 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염은 정맥으로 투여되는 것을 특징으로 하는 환자의 뇌 허혈 및 발작의 치료방법.
제1항에 있어서,

상기 뇌 허혈의 영역이 약 35% 감소되는 것을 특징으로 하는 환자의 뇌 허혈 및 발작의 치료방법.
환자의 두개외상성 손상의 치료에 효과가 있는 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염을 유효량 환자에게 투여하는 것으로 이루어진 환자의 두개외상성 손상의 치료방법.
제10항에 있어서,

상기 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 제약학적으로 허용가능한 염은

메실레이트염(mesylate salt); 에틸황산염(ethylsulfonate salt); 황산염; 및 염산염으로 이루어지는 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 환자의 두개외상성 손상의 치료방법.
제11항에 있어서,

상기 제약학적으로 허용가능한 염은 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 메실레이트염인 것을 특징으로 하는 환자의 두개외상성 손상의 치료방법.
제10항에 있어서,

상기 유효량은 환자의 체중 1킬로로램당 약 0.5mg부터 약 2.5mg인 것을 특징으로 하는 환자의 두개외상성 손상의 치료방법.
제10항에 있어서,

상기 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 그것의 제약학적으로 허용가능한 이것의 염은 정맥, 입, 직장, 피부 또는 비경구적으로 투여되는 것을 특징으로 하는 환자의 두개외상성 손상의 치료방법.
제10항에 있어서,

상기 환자는 인간이며, 유효량은 하루에 약 0.01mg에서 약 50.0mg인 것을 특징으로 하는 환자의 두개외상성 손상의 치료방법.
제15항에 있어서,

상기 유효량은 하루에 0.1mg에서 10.0mg인 것을 특징으로 하는 환자의 두개외상성 손상의 치료방법.
제15항에 있어서,

상기 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염은 정맥으로 투여되는 것을 특징으로 하는 환자의 두개외상성 손상의 치료방법.
환자의 척추외상성 손상의 치료에 효과가 있는 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염을 유효량 환자에게 투여하는 것으로 이루어진 환자의 척추외상성 손상의 치료방법.
제18항에 있어서,

상기 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 제약학적으로 허용가능한 염은

메실레이트염; 에틸황산염; 황산염; 및 염산염으로 이루어지는 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 환자의 척추외상성 손상의 치료방법.
제19항에 있어서,

상기 제약학적으로 허용가능한 염은 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 메실레이트염인 것을 특징으로 하는 환자의 척추외상성 손상의 치료방법.
제18항에 있어서,

상기 유효량은 환자의 체중 1킬로로램당 약 0.5mg터 약 2.5mg인 것을 특징으로 하는 환자의 척추외상성 손상의 치료방법.
제18항에 있어서,

상기 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 그것의 제약학적으로 허용가능한 이것의 염은 정맥, 입, 직장, 피부 또는 비경구적으로 투여되는 것을 특징으로 하는 환자의 척추외상성 손상의 치료방법.
제18항에 있어서,

상기 환자는 인간이며, 상기 유효량은 하루에 약 0.01mg에서 50.0mg인 것을 특징으로 하는 환자의 척추외상성 손상의 치료방법.
제23항에 있어서,

상기 유효량은 하루에 0.1mg에서 10.0mg인 것을 특징으로 하는 환자의 척추외상성 손상의 치료방법.
제23항에 있어서,

상기 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염은 정맥으로 투여되는 것을 특징으로 하는 환자의 척추외상성 손상의 치료방법.
환자의 신경외상의 치료에 효과가 있는 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염을 유효량 환자에게 투여하는 것으로 이루어진 환자의 신경외상의 치료방법.
제26항에 있어서,

상기 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 제약학적으로 허용가능한 염은

메실레이트염; 에틸황산염; 황산염; 및 염산염으로 이루어지는 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 환자의 신경외상의 치료방법.
제27항에 있어서,

상기 제약학적으로 허용가능한 염은 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단의 메실레이트염인 것을 특징으로 하는 환자의 신경외상의 치료방법.
제26항에 있어서,

상기 유효량은 환자의 체중 1kg당 약 0.5mg부터 약 2.5mg인 것을 특징으로 하는 환자의 신경외상의 치료방법.
제26항에 있어서,

상기 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 그것의 제약학적으로 허용가능한 이것의 염은 정맥, 입, 직장, 피부 또는 비경구적으로 투여되는 것을 특징으로 하는 환자의 신경외상의 치료방법.
제26항에 있어서,

상기 환자는 인간이며, 상기 유효량은 하루에 약 0.01mg에서 50.0mg인 것을 특징으로 하는 환자의 신경외상의 치료방법.
제31항에 있어서,

상기 유효량은 하루에 0.1mg에서 10.0mg인 것을 특징으로 하는 환자의 신경외상의 치료방법.
제31항에 있어서,

상기 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염은 정맥으로 투여되는 것을 특징으로 하는 환자의 신경외상의 치료방법.
환자의 신경퇴행성 질병의 치료에 효과가 있는 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염을 유효량 환자에게 투여하는 것으로 이루어진 신경퇴행성 질병 환자의 치료방법.
환자의 신경독 손상의 치료에 효과가 있는 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염을 유효량 환자에게 투여하는 것으로 이루어진 신경독 손상 환자의 치료방법.
환자의 뇌 허혈의 치료에 효과가 있는 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염을 유효량 환자에게 투여하는 것으로 이루어진 뇌 허혈 환자의 치료방법.
환자의 두개외상성 손상의 치료에 효과가 있는 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염을 유효량 환자에게 투여하는 것으로 이루어진 두개외상성 손상 환자의 치료방법.
환자의 척추외상성 손상의 치료에 효과가 있는 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염을 유효량 환자에게 투여하는 것으로 이루어진 척추외상성 환자의 치료방법.
환자의 신경 손상의 치료에 효과가 있는 R(+)-N-프로파길-1-아미노인단 또는 제약학적으로 허용가능한 이것의 염을 유효량 환자에게 투여하는 것으로 이루어진 환자의 신경 손상 방지방법.
제39항에 있어서,

상기 신경 손상은 조직 신경 손상인 것을 특징으로 하는 환자의 신경 손상 방지방법.
제39항에 있어서,

상기 조직 신경 손상은 시각 신경 손상인 것을 특징으로 하는 환자의 신경 손상 방지방법.