SK283579B6 - Vakcínová kompozícia proti reprodukčnému a respiračnému syndrómu prasiat, spôsob produkcie komerčných množstiev tejto vakcíny a jej použitie - Google Patents
Vakcínová kompozícia proti reprodukčnému a respiračnému syndrómu prasiat, spôsob produkcie komerčných množstiev tejto vakcíny a jej použitie Download PDFInfo
- Publication number
- SK283579B6 SK283579B6 SK1539-97A SK153997A SK283579B6 SK 283579 B6 SK283579 B6 SK 283579B6 SK 153997 A SK153997 A SK 153997A SK 283579 B6 SK283579 B6 SK 283579B6
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- virus
- group
- prrs
- pigs
- culture
- Prior art date
Links
- 208000005342 Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Diseases 0.000 title claims abstract description 25
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 title claims abstract description 22
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 153
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 76
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 5
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims description 138
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 44
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 20
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 13
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 13
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 claims description 11
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims description 9
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 9
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 8
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 7
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 7
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 7
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 5
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 5
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 5
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 4
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 4
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 4
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 4
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 abstract description 32
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 25
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 62
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 47
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 29
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 26
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 18
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 17
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 17
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 16
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 15
- 208000021017 Weight Gain Diseases 0.000 description 15
- 244000144980 herd Species 0.000 description 15
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 15
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 15
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 15
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 15
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 12
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 12
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 12
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 10
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 10
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 10
- 241000710788 Lelystad virus Species 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 9
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 9
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 8
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 8
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 7
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 7
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 7
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- 235000021053 average weight gain Nutrition 0.000 description 6
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 6
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 5
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 5
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 5
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 5
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 4
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 4
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 3
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 238000009021 pre-vaccination Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 3
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- 206010038687 Respiratory distress Diseases 0.000 description 2
- 241000710924 Togaviridae Species 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 2
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 2
- 206010003230 arteritis Diseases 0.000 description 2
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 2
- 244000309457 enveloped RNA virus Species 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 208000002254 stillbirth Diseases 0.000 description 2
- 231100000537 stillbirth Toxicity 0.000 description 2
- AJDIZQLSFPQPEY-UHFFFAOYSA-N 1,1,2-Trichlorotrifluoroethane Chemical compound FC(F)(Cl)C(F)(Cl)Cl AJDIZQLSFPQPEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PENWAFASUFITRC-UHFFFAOYSA-N 2-(4-chlorophenyl)imidazo[2,1-a]isoquinoline Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1C1=CN(C=CC=2C3=CC=CC=2)C3=N1 PENWAFASUFITRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035404 Autolysis Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000157302 Bison bison athabascae Species 0.000 description 1
- 241001440741 CHER virus Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 241000867607 Chlorocebus sabaeus Species 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 241000710803 Equine arteritis virus Species 0.000 description 1
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 1
- 206010055690 Foetal death Diseases 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 206010022095 Injection Site reaction Diseases 0.000 description 1
- 208000029523 Interstitial Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- 208000035752 Live birth Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000282341 Mustela putorius furo Species 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 208000005107 Premature Birth Diseases 0.000 description 1
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000037656 Respiratory Sounds Diseases 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 241000712907 Retroviridae Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 206010047924 Wheezing Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 1
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 210000001132 alveolar macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000001539 anorectic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 235000021052 average daily weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 208000032625 disorder of ear Diseases 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 230000027950 fever generation Effects 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001492 haemagglutinating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000003750 lower gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000036244 malformation Effects 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000008689 nuclear function Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 208000013718 rectal benign neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000028043 self proteolysis Effects 0.000 description 1
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 1
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 229940071127 thioglycolate Drugs 0.000 description 1
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M thioglycolate(1-) Chemical compound [O-]C(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 210000001944 turbinate Anatomy 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/10011—Arteriviridae
- C12N2770/10034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/10011—Arteriviridae
- C12N2770/10051—Methods of production or purification of viral material
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
- Y10S424/815—Viral vaccine for porcine species, e.g. swine
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Je poskytnutá v podstate avirulentná vakcína proti reprodukčnému a respiračnému syndrómu prasiat (PRRS), ktorá po podaní účinne imunizuje cicavce, ako sú prasatá, proti tomuto ochoreniu. Ďalej je uvedené použitie vakcíny na prípravu liečiva na imunizáciu prasiat a spôsob produkcie vakcíny komerčnej akosti.ŕ
Description
Predkladaný vynález sa týka oblasti imunológie a virológie, presnejšie, vakcíny odvodenej od patogénneho vírusového izolátu. Presnejšie, patogénna forma vírusu je modifikovaná alebo atenuovaná na avirulentnú formu podľa metódy produkcie vakcíny na použitie proti ničivej novej chorobe prasiat.
Doterajší stav techniky
Nová choroba prasiat, rôzne označovaná ako „záhadná choroba prasiat“, „syndróm neplodnosti prasiat a respiračný syndróm prasiat“, „ochorenie modrých uší“, „respiračný a reprodukčný syndróm prasiat“ (PRRS) je príčinou ťažkých strát v chovných stádach v Spojených štátoch a v Kanade. Podobná choroba sa taktiež objavila vo väčšine Európy. Choroba sa manifestuje v dvoch podobách, jedna spôsobuje reprodukčné zlyhanie, a druhá spôsobuje respiračnú tieseň pri mladých odstavčatách. Reprodukčná forma ochorenia je opísaná v Kaffaber, K.K., „Reproductive Failure of Unkown Etiology“, Američan Association of Swine Practitioners Newsletter, 1: 109(1989).
Nemenej významnými klinickými príznakmi reprodukčnej formy ochorenia sú spontánne neskoré potraty, predčasné pôrody (ktoré môžu tvoriť až 20 - 30 % všetkých pôrodov) a pôrody mumifikovaných plodov, narodenie mŕtvych alebo chorých odstavčiat. Takéto klinické príznaky budú typicky pozorované v stádach od 4 - 16 týždňov alebo aj dlhšie. Narodené mŕtve plody v postihnutých vrhoch sú v ranných štádiách mumifikácie, ako je ukázané svetlohnedým sfarbením kože a post-mortem autolýzou. Niekedy sú tiež pozorované kupolovité malformácie fetálnych lebiek. Infekcia prasiat nemusí byť zaznamenaná alebo sa môže sama manifestovať poruchou celkového stavu trvajúceho viacej ako niekoľko dní. Napríklad, prasatá môžu trpieť nechutenstvom a môžu mať telesnú teplotu nad alebo pod normálom. V období, kedy majú mlade, môžu prasatá mať depresiu, letargiu, pyrexiu a príležitostne zvracanie. V niektorých postihnutých stádach môže byť stratených až 75 % všetkých odstavčiat. Ekonomické následky ochorenia sú preto ničivé.
Respiračné formy ochorenia majú klinické príznaky, ktoré sú najvýraznejšie pri odstavčatách vo veku 3 - 8 týždňov, ale je opísané, že sa vyskytujú pri prasatách každého veku v postihnutých stádach. Choré odstavčatá pomaly rastú, majú hrubú srsť, respiračnú tieseň („sípanie“) a zvýšenú mortalitu (viacej ako 80 % pred odstavením).
Zistenia veľkých a mikroskopických lézií v predbežných štúdiách odstavčiat postihnutých respiračnou formou ochorenia naznačujú, že mikroskopické pľúcne lézie sú významnou klinickou vlastnosťou tohto ochorenia. I cez zvýraznené respiračné príznaky ochorenia sú pľúca, ktoré sa zdajú byť nekomplikované sekundárnou bakteriálnou infekciou makroskopický buď normálne, alebo majú mierne, difúzne svetlohnedé zafarbenie na povrchu pľúc. Nakoniec mikroskopické vyšetrenie pľúcnej tkaniny PRRS chorých odstavčiat odhalí charakteristické vzorky intersticiálnej pneumonitídy, podľa Collins, J. E. et al., „Respirátory Disease Swine Herd Experiencing a Reproductive Failure Syndróme“, Proceedings, Minnesota Swine Conference for Veterinars, str. 254, St. Paul, MN (10. - 18.10.1990).
V súlade s tým v odbore existuje reálna potreba účinnej vakcíny, ktorá môže eliminovať alebo aspoň zmierniť účinky PRRS.
Podstata vynálezu
Predkladaný vynález prekonáva uvedené problémy tým, že poskytuje vakcínu, ktorá účinne redukuje alebo zabraňuje ochoreniu spôsobenému PRRS vírusom pri prasatách.
Všeobecne povedané, vynález zahŕňa biologicky alebo vírusovo čistú kultúru PRRS spolu so všetkými jej mutantmi a spôsoby na produkciu a používanie týchto viriónov. Prirodzený vírus je schopný spôsobiť PRRS pri prasatách, ale modifikované formy vírusu alebo ich nepatogénne mutanty, poskytujú účinnú vakcínu proti tomuto ochoreniu.
Patogénny vírusový agens bol odobratý z tkanivového homogenátu infikovaných prasiat a bol potvrdený spôsobením PRRS choroby pri mnohých odstavčatách a ťarchavých prasatách. Depozitum izolovaného vírusového agens bolo uložené 18. 6. 1991 v Američan Type Culture Collection v Rockville, Maryland, pod prírastkovým číslom ATCC-VR2332. Vírusový agens je náročný, nehemaglutinujúci obalený RNA vírus.
Prirodzený typ vírusu je preferovane modifikovaný do v podstate avirulentnej formy inokulovaním vírusu na plnej alebo parciálnej vrstve opičích buniek za prítomnosti séra vo vhodnom kultivačnom médiu, inkubovaním inokulovanej plochy buniek pri teplote okolo 35 °C až 37 “C pokiaľ nie je spozorovaný cytopatický efekt a opakovaným pasážovaním vírusu cez opičiu bunkovú líniu na kultivačnom médiu za prítomnosti séra a za vhodných podmienok pasážovania.
Vakcína obsahuje nosič, ako je sacharózový želatínový stabilizér, ktorý je zmiešaný so živým modifikovaným vírusom, ktorý' je produkovaný tak, ako bolo opísané skôr. Vakcína je preferovane použitá na zabránenie PRRS imunizácii prasiat lokálnym (horná sliznica) spôsobom alebo parenterálnym spôsobom vakcinácie. Imunizované prasatá typicky zostávajú bez príznakov ochorenia po expozícii prirodzenému typu vírusu.
Pri jednom uskutočnení vynálezu tu opísaného ide o vakcínovú kompozíciu obsahujúcu živý vírus reprodukčného a respiračného syndrómu prasiat alebo PRRS v modifikovanej a v podstate avirulentnej forme a v zmesi s farmakologicky kompatibilným nosičom, kde uvedený modifikovaný a v podstate avirulentný vírus obsahuje ATCC-VR2332 vírus pasážovaný aspoň 70-krát na bunkovej kultúre z opičej obličkovej bunkovej línie MA-104, takže ak je modifikovaný a v podstate avirulentný vírus podaný prasatám alebo iným cicavom citlivým na PRRS, nespôsobuje klinické príznaky PRRS ochorenia, aleje schopný indukovať imunitnú odpoveď, ktorá imunizuje cicavce proti patogénnym formám PRRS.
Pri inom uskutočnení je vynález tu opísaný zameraný na použitie vakcínovej kompozície obsahujúcej živý vírus reprodukčného a respiračného syndrómu prasiat alebo PRRS v zmesi s farmakologicky akceptovateľným nosičom, kde uvedený vírus obsahuje ATCC-VR2332 vírus pasážovaný aspoň 70-krát na bunkovej kultúre kvôli modifikácii vírusu a vytvoreniu v podstate avirulentného vírusu, takže ak je modifikovaný a v podstate avirulentný vírus podaný prasatám alebo iným cicavcom citlivým na PRRS, nespôsobuje klinické príznaky PRRS ochorenia, ale je schopný indukovať imunitnú odpoveď, ktorá imunizuje cicavce proti patogénnym formám PRRS, na výrobu liečiva na imunizáciu prasiat proti PRRS.
V inom uskutočnení tento vynález tu opísaný je zameraný na spôsob produkcie komerčných množstiev PRRS vakcíny a na vakcínu produkovanú z tohto komerčného množstva PRRS vakcíny, zahrnujúci kroky: prípravu pro dukčnej kultúry v podstate avirulentnej formy ATCC-VR2332 vírusu, čo zahŕňa kroky pasážovania ATCC-VR2332 vírusu aspoň 70-krát na bunkovej kultúre z opičej obličkovej bunkovej línie MA-104 kvôli modifikácii vírusu a vytvoreniu v podstate avirulentného vírusu, takže ak je modifikovaný a v podstate avirulentný vírus podaný prasatám alebo iným cicavcom citlivým na PRRS, nespôsobuje klinické príznaky PRRS ochorenia, ale je schopný indukovať imunitnú odpoveď, ktorá imunizuje cicavce proti patogénnym formám PRRS, a generovanie produkčnej kultúry z modifikovaného a v podstate avirulentného ATCC-VR2332 vírusu; zbieranie produkčnej vírusovej kultúry; pridanie stabilizačného agens do produkčnej vírusovej kultúry; a lyofilizáciu produkčnej vírusovej kultúry.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obrázok 1 je schematický diagram procesu na použitie vo výrobe komerčných množstiev PRRS vakcíny.
Nasledujúce nelimitujúce príklady uvádzajú preferované spôsoby a materiály na použitie v uskutočňovaní predkladaného vynálezu.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Izolácia, identifikácia a atenuácia PRRS vírusu a produkcia modifikovanej živej vakcíny.
A. Izolácia a identifikácia
Tkanivový homogenát bol získaný od odstavčiat z PRRS infikovaných stád. Tento homogenát pravidelne produkoval respiračné a reproduktívne formy PRRS, pokiaľ bol intranasálne inokulovaný gnotobiotickým odstavčatám a ťarchavým prasatám. Gnotobiotické odstavčatá takto inokulované alebo nefiltrovaným, alebo filtrovaným (0,45; 0,22 alebo 0,1 pm) inokulom sa stávali anorektickými a vyvíjali sa pri nich mikroskopické pľúcne lézie podobné léziám pozorovaným v PRRS postihnutých stádach. Rovnaké inokulum tiež spôsobovalo reprodukčné zlyhanie identické tomu, ktoré jc pozorované v PRRS postihnutých stádach.
Tkanivové homogenáty, z ktorých bol vírus izolovaný, obsahovali pľúcne tkanivo (skupina 1) a kombináciu mozgového - slezinového - pečeňového - obličkového tkaniva (skupina 2) získaných od infikovaných odstavčiat v PRRS infikovaných stádach. Oddelené homogenátovc skupiny boli každá centrifugovaná pri 4000 x g po 25 minút. Vzniknutý supematant bol odobraný a bol filtrovaný s použitím 0,45 mikrónového sterilného injekčného filtru. Filtrované supernatanty boli potom kombinované. Jeden ml kombinovaného filtrovaného supematantu bol potom použitý ako inokulum na infikovanie každej z príslušných bunkových línií ako je opísané ďalej.
Filtrovaný supematant bol pridaný do kultivačného média obsahujúceho bunkovú líniu ako je opísané ďalej, modifikované Eaglovo médium („MEM“) od JRH Biosciences a gentamicín v koncentrácii asi 100 pg na ml.
Boli vykonané dva testy pre každú bunkovú líniu s použitím 75 ml plastových nádob. V teste číslo 1 bol filtrovaný supematant inokulovaný do dvoch nádob, kedy každá nádoba mala plnú bunkovú vrstvu každej z bunkových línií uvedených ďalej. Ďalej, do prvej nádoby bolo pridané asi 2,5 mg trypsínu. Všetky ďalšie podmienky boli rovnaké pre obidve kultivačné nádoby.
V teste číslo 2 bol materiál kombinovaného tkanivového homogenátu inokulovaný do nádoby obsahujúcej rovnaké bunkové línie aké boli použité v teste číslo 1, nakoniec bunkové vrstvy boli iba 20 - 40 % konfluentné v čase inokulácie. Médium ďalej obsahovalo asi 10 % fetálneho hovädzieho séra, ktoré nebolo prítomné v médiu v teste 1. Inokulum bolo znovu podané v množstve asi 1 ml a kultúra bola inkubovaná pri asi 34 °C po približne 7 dní.
Všetky nádoby boli inkubované počas asi 7 dní pri približne 34 °C. Výsledky boli zaznamenané po asi 7 dňoch. Po zmrazení a rozmrazení bola vzorka odobraná na druhú pasáž v rovnakej bunkovej línii. Materiál, ktorý zostal, bol zmrazený v kvapalnom dusíku a bol uskladnený pri asi -60 °C. Výsledky testu 1 a testu 2 sú zhrnuté v tabuľke 1.
Tabuľka 1
Testovanie bunkových línii pre vírusových hostiteľov
| Použitá bunková línia | Test č. 1 | Test č. 2 |
| hovädzie Turbinate (BV) | - | |
| Feline oblička (CRFK) | ||
| opičia (Vero) oblička | ||
| opičie (Vero) pľúca | ||
| psia oblička (MDCK) | ||
| (PK2A) oblička prasaťa | ||
| norčie pľúca | ||
| fretčie pľúca | ||
| hovädzie pľúca | - | |
| bizónie pľúca | ||
| hovädzia oblička (MDBK) | ||
| prasačie vajcia (ST) | ||
| opičia oblička (MA-104) | ||
| ľudský rektálny tumor (HRT-18) | NT | |
| ľudské pľúca | NT | - |
+ = CPE efekt
- = bez CPE efektu
NT = netestované
Žiadny cytopatický efekt (CPE) nebol pozorovaný v teste č. 1 v žiadnej hodnotenej bunkovej línii. V teste č. 2, nakoniec, sa malé zhluky MA-104 buniek stávali napučanými a tvorili „malé dierky“ v monovrstve okolo okrajov nádoby. Kvapalina bola separovaná z nádoby a pasážovaná do novej nádoby s MA-104 bunkami (znovu 20 - 40 % bunková vrstva) a potom následne pasážovaná tretíkrát. Tento zreteľný CPE sa stával silnejší s každým pasážovaním. Pasáž 3 zachovala jeho virulenciu. Táto pasáž bola deponovaná v Američan Type Culturc Collcction v Rocville, Maryland, pod prírastkovým číslom ATCC-VR2332.
ATCC-VR2332 vírus pravidelne spôsobuje klinickú symptomatológiu PRRS, pľúcnu léziu pri gnotobiotických prasatách a pozitívne ImF výsledky. ATCC-VR2332 vírus môže reprezentovať neidentifikovaný rod Togaviridae. ATCC-VR2332 nie je tiež známy patogén prasiat, pretože špecifické antiséra k mnohým bežným patogénom prasiat zlyhali tak pri neutralizácii vírusu, ako aj pri detekcii antigénov v infikovaných bunkách.
ATCC-VR2332 vírus je náročný nehemaglutinujúci obalený RNA vírus. ATCC-VR2332 vírus rastie v kontinuálnej bunkovej línii, konkrétne MA-104 a iných opičích bunkových líniách. ATCC-VR2332 vírus rastie do vysokých titrov (107TCID50/l ml) v komerčnej bunkovej línii MA-104.
ATCC-VR2332 vírus obsahuje lipidový obal ako je ukázané stratou infekčnosti po ošetrení chloroformom. Lipi dový obal môže byť tiež vizualizovaný ako elektrónový transucentný krúžok obklopujúci prázdne častice. Morfológiu PRRS vírusu nie je možné rozlíšiť priamou elektrónovou mikroskopiou (DEM) a bude extrémne ťažké ho identifikovať v prípravkoch obsahujúcich bunkovú drvinu. Morfológia gradientne purifikovaných ATCC-VR2332 častíc a priemerný priemer 62 nm sú veľmi podobné k viriónom konskej Arteritídy a laktátom dehydrogenázových vírusov.
Vírus konskej arteridídy má opísanú veľkosť v rozmedzí 50 - 73 nm, čo je podobné veľkosti 48 - 84 nm pre ATCC-VR2332 vírus. V niekoľkých časticiach ATCC-VR2332 bolo pozorované 30 - 35 nm jadro, ktoré sa podobá nukleokapsidovému jadru opísanému pre vírus konskej arteritídy. Tak, morfologicky, ATCC-VR2332 vírus sa podobá najviac skupine vírusov arteritídy.
Prítomnosťou RNA genómu v ATCC-VR2332 bola potvrdená schopnosť vírusu pokračovať v replikách za prítomnosti 5-brómo-2-deoxiuridínu a mitomycínu C, o ktorých je známe, že inhibujú replikáciu DNA a jednej rodiny RNA vírusov (Retroviridae), ale nie iných RNA vírusov. Nakoniec, stanovená klasifikácia ATCC-VR2332 vírusu ako RNA vírusu je v súlade s pozorovaním, že tento vírus sa replikuje v cytoplazme buniek. Ako je ukázané prítomnosťou vírusových antigénov detekovaných ImF. Tiež Aktinomicín D, ktorý interferuje s DNA dependentným RNA prepisom, nemá žiadny účinok na replikáciu ATCC-VR2332 vírusu. Tieto výsledky ukazujú, že ATCC-VR2332 vírus nevyžaduje jadrové funkcie na replikáciu.
Zhrnuté, veľkosť, morfológia, prítomnosť RNA genómu a ďalšie biologické vlastnosti predbežne umiestňujú ATCC-VR2332 vírus do rodiny Togaviridae. ATCC-VR2332, nakoniec, nemôže byť definitívne umiestnený do známej triedy tejto rodiny. Aj keď morfologicky veľmi pripomína ATCC-VR2332 vírus artevírusy, nemôže byť vírus definitívne umiestnený do tejto triedy, dokiaľ nie sú dostupné ďalšie informácie o DNA a proteínovej štruktúre.
B. Atenuácia
Zisk z ATCC-VR2332 pasáže č.3 bol podrobený ďalším dvom pasážam podrobnejšie opísaných ďalej a zber z pasáže č. 5 bol poslaný mimo laboratórium na purifikáciu. Presnejšie, ATCC-VR2332 viróny boli identifikované po purifikácii v CsCl gradientoch (centrifugovaných pri 200 000 x g) po extrakcii 1,1,2-trichlóro-trifluóroetánom. Purifikované viróny boli označené „immuno-gold“ kitom využívajúcim anti- ATCC-VR2332 hyperimunitné sérum a konjugát zlata. Vztlaková hustota ATCC-VR2332 virónov v CsCl gradientoch bola 1,18 - 1,19 g/ml. Sacharózové gradienty pravidelne viedli ku strate titru vírusu a neboli použité ako vhodný gradient na purifikáciu.
Purifikovaný zber z pasáže 5 bol potom podrobený ďalším 65 pasážam ako je opísané ďalej. Výsledný zber z pasáže 70 bol atenuovaný a bol označený ako Master Seed Culture. Táto avirulentná Master Seed Culture bola uložená v Američan Type Culture Collection pod prírastkovým číslom ATCC-VR2495. Nakoniec, ďalších 5 pasáží bolo vykonaných na získanie ATCC-VR2332 pasáže 75 (ďalšie pasáže môžu byť tiež uskutočnené, pokiaľ je to požadované).
Pasáže 4-75 ATCC-VR2332 vírusov boli vykonané v kultivačných nádobách hostiteľského tkaniva komerčne dostupnej Ma- 104 Green Monkey obličkovej bunkovej línie. Tieto tkanivové kultivačné nádoby boli pripravené nasledujúcim spôsobom. Kultivačné médium bolo pripravené tak, aby obsahovalo Eaglovo minimálne esenciálne médium („MEM“) od JRH Biosciences (katalógové č. 200-2041) a 10 % fetálneho teľacieho séra od JRH Biosciences. Asi 1 ml ATCC-VR2332 inokula bolo pridané do ná doby s objemom 75 cm3 obsahujúcej 50 ml tohto kultivačného média. Nádoba bola uchovávaná po asi 7 dní a inkubovaná pri teplote v rozmedzí od asi 35 °C do asi 37 °C.
Tkanivové kultivačné zásobné nádoby boli pripravené expandovaním vzniknutej inkubovanej kultúry, ktorá bola rozdelená 1 : 4 nasledovným spôsobom. Kultivačné médium, ktoré malo objem asi 50 ml, bolo odstránené. Bunková vrstva bola odstránená pridaním asi 10 ml trypsínversán IX a inkubácii pri 37 °C po 5 - 10 minút. Potom boli bunky odobrané z nádoby a boli centrifugované pri 270 x g po 5 - 10 minút. Supematant bol scedený a paleta bola resuspendovaná v 5 - 10 ml MEM média obsahujúceho 10 % fetálneho teľacieho séra rovnako ako predtým. Bunky boli umiestnené do 200 ml kultivačného média, ktoré bolo potom rozdelené do štyroch 75 ml nádob po 50 ml na nádobu, čím bolo dosiahnuté rozdelenie 1 : 4.
Vzniknuté kultúry boli udržiavané pri teplote v rozmedzí medzi 35 - 37 °C až po použitie. Po asi 3 až 4 dňoch inkubácie sa v nádobách vyvinul úplný poťah vrstvou buniek a boli pripravené na použitie.
PRRS vírus ATCC-VR2332 bol propagovaný v kontinuálnych kultúrach bunkovej línie MA-104, ktoré boli produkované ako je opísané skôr. pH kultivačného média bolo upravené na 7,2 a kultúry boli inkubované pri teplotách v rozsahu 35 °C až 37 °C. Vírus bol inokulovaný na MA-104 bunky pridaním 1 ml zmrazeného inokula z predchádzajúcej pasáže do kvapalného kultivačného média. Vírusu bola umožnená absorpcia na bunky po 24 hodinách.
Kultivačné médium bolo scedené asi 24 hodín po inokulácii ATCC-VR2332 vírusu a nádoba bola znovu naplnená 50 ml udržovacieho média, kde bola vykonaná substitúcia 4 % fetálneho teľacieho séra za 10 % fetálneho teľacieho séra v kultivačnom médiu. Udržovacie médium malo pH 7,6. Po tejto výmene média bola kultúra inkubovaná pri teplote medzi 35 - 37 °C. Bol umožnený rast vírusu pokiaľ nebolo asi 50 - 60 % MA-104 buniek v kultúre deštruovaných vírusom. Vzorka bola potom zmrazená v kvapalnom dusíku a bola pripravená na pasáž do inej nádoby MA-104 buniek.
Skrížená reaktivita pasáží 3 -70 bola tiež demonštrovaná. PRRS ATCC-VR2332 pasáž 3 vírus bol použitý pre imunizáciu prasiat, králikov a kôz na produkciu anti-séra k PRRS. Sérum bolo použité na neutralizáciu PRRS vírusu v rôznych pasážach od pasáže 3 do pasáže 70. Okrem toho boli pripravené dve monoklonálne protilátky (ADOW-12 a SDOW-17) s použitím slezinových lymfocytov od myší imunizovaných VR-2332 PRRS vírusom. Monoklonálne protilátky reagovali proti znovu všetkým U.S. a Európskym izolátom ako v decembri 1992. Monoklonálne protilátky boli použité na identifikáciu alebo detekciu PRRS vírusu z pasáží 3 -70.
C. Produkcia modifikovanej živej vakcíny
Dva vakcínové prípravky boli formulované inkorporovaním, v príslušnom poradí, Master Seed Culture (zber z ATC-VR2332 pasáže 70) a zber z ATCC-VR2332 pasáže 75. Vírus Master Seed Culture a pasáže 75 sú v podstate avirulentné, t. j., vakcíny, pokiaľ sú podané prasatám alebo iným cicavcom s rizikom PRRS kontaktu, nespôsobujú klinické príznaky PRRS ochorenia, ale sú schopné indukovať imunitnú odpoveď, ktorá imunizuje zvieratá proti patogénnym formám PRRS vírusu. Vakcína bola produkovaná konvenčnými prostriedkami. Normálne stabilizéry a nosiče boli pridané pred lyofilizáciou.
Príklad 2
In vivo testovanie vírusového izolátu
Virulentná tretia pasáž zberu ATCC-VR2332 vírusu z príkladu 3 bola použitá na inokuláciu dva tri dni starých gnotobiotických odstavčiat. Obe odstavčatá boli infikované intranasálne, jedno 1 ml a druhé 2 ml. Odstavčatá boli klinicky pozorované po sedem dní, potom boli usmrtené a boli vykonané nekroskopie.
Boli odobrané tkanivové vzorky od každého odstavčaťa na histopatológiu a na získanie vírusového agens. Histopatologická správa potvrdila, že pľúcne lézie pri infikovaných odstavčatách boli identické s pľúcnymi léziami pri infikovaných odstavčatách, o ktorých bolo známe, že majú PRRS. Vzorky tkaniva boli spracované rovnako ako v príklade 1, a potom boli kultivované na 20 - 40 % a 100 % monovrstve MA-104 bunkovej línie s hovädzím fetálnym sérom. Vírusový agens bol opäť získaný.
Tretia pasáž vírusového zberu bola tiež použitá na inokuláciu prasiat, aby sa potvrdilo, že reprodukčný účinok ochorenia môže byť duplikovaný a potvrdený. Dve viacrodiace prasnice boli inokulované intranasálne v asi 93 deň gestácie. Prasnice porodili vrhy s 50 % mŕtvo narodenými odstavčatami, (8/13 a 6/14 mŕtvo narodené/živé) v deň 112 a 114 gestácie, v príslušnom poradí. Sedem mŕtvo narodených odstavčiat bolo čiastočne mumifikovaných a živo narodené odstavčatá boli slabé a slabo cicali. Vírusový agens bol získaný z tkaniva mŕtvo narodených odstavčiat rovnakým spôsobom ako v príklade 1.
Vírusový agens bol získaný z troch stád, o ktorých bolo známe, že majú PRRS. Titry protilátok k ATCC-VR2332 agens boli identifikované v týchto rovnakých stádach.
Príklad 3
Účelom tejto štúdie bola identifikácia minimálne protektívnej dávky PRRS vírusu (VR-2332 pasáž 75) vybranej na použitie ako modifikované živé vírusové vakcíny. Toto bolo vykonané analyzovaním stupňa, ktorým boli schopné dve vybrané dávky vakcíny (4,0 + 0,5 log/dávku a 2,0 + + 0,5 log/dávku) kontrolovať nástup abnormálneho stavu po expozícii virulentnými PRRS vírusu (VR-2332 pasáž 3, 3,5 + + 0,5 log/dávku) a porovnávaním vakcinovaných/infikovaných prasiat s nevakcinovanými/infikovanými a normálnymi (neinfikovanými) prasatami. Modifikovaná živá vakcína bola produkovaná s použitím vírusu pasáže 75 ako bolo vysvetlené skôr.
Šesťdesiatdva séronegatívnych odstavčiat bolo vybraných na použitie z farmy a bolo rozdelených do štyroch sledovaných skupín, označených skupina 1, 2, 3 a 4. Dvadsaťjeden odstavčiat v skupine 1 bolo vakcínovaných 2,0 ml PRRS vakcín L-4 intramuskulárne (4,0 log/dávku). Dvadsaťjeden odstavčiat v skupine 2 bolo vakcínovaných 20 ml PRRS vakcíny L-2 (2,0 log/dávku). Desať odstavčiat v skupine 3 a desať odstavčiat v 4 bolo umiestnených separátne na zistenie citlivosti na infekciu vírusom. Skupiny 1, a 3 boli infikované 2,0 ml PRRS vírusu VR-2332 pasáže intranasálne v 28. deň pokusu. Odstavčatá v skupine 4 neboli infikované. Odstavčatá vo všetkých štyroch študovaných skupinách boli pozorované a pravidelne monitorované 31 dní pred infikovaním a 21 dní po infikovaní. Parametre použité na hodnotiace štúdie boli klinické príznaky, telesná hmotnosť, telesná (rektálna) teplota, počet bielych krviniek, izolácia vírusu a sérológia. Účinnosť vakcíny bola demonštrovaná redukciou počtu dní, kedy boli vakcinované odstavčatá viremické, zabránením leukémie a teploty a zachovaním normálnej rýchlosti rastu po infekcii.
Telesná (rektálna) teplota bola meraná pred a po vakcinácii. Priemerná teplota skupiny bola pre skupinu č. 1 zvýšená na 2 DPV a 3 DPV, zatiaľ čo pri skupine č. 2 sa zvý šila na 3 DPV. Čas zvýšenia teploty bol pre obe skupiny krátky, 2 dni pre skupinu 1 a 1 deň pre skupinu 2.
Ani pri jednej z vakcínovaných skupín nedošlo k poklesu počtu bielych krviniek po ošetrení. Predchádzajúce štúdie ukázali, že infikovanie virulentným PRRS vírusom by malo spôsobovať leukopéniu v priebehu 72 hodín po infekcii.
Výsledky meraní prírastkov hmotnosti počas postvakcinačného obdobia ukázali, že ošetrenie neovplyvňuje nepriaznivým spôsobom stav vakcínovaných prasiat. V priebehu 29 dní po vakcinácii nebol hmotnostný prírastok pre ani jednu z vakcínovaných skupín signifikantne odlišný pri intervale spoľahlivosti 0,05 od hmotnostného prírastku v skupinách 3 a 4.
Klinické pozorovania ukázali mierne odchýlky od normy väčšiny kategórií okrem stolice a nozdier. Porovnanie fekálneho skóre vakcínovaných skupín s fekálnym skóre kombinovaných kontrolných skupín (skupiny 3 a 4) s použitím dvojitého t-testu neukázalo signifikantný rozdiel pri hladine spoľahlivosti 0,05. p hodnota medzi skupinou 1 a kombinovanými kontrolnými skupinami bola 0,47, zatiaľ čo medzi skupinou 2 a kombinovanou kontrolnou skupinou bola 0,87. Porovnávaním skóre medzi skupinou 1 a kombinovanou skupinou malo p hodnotu 0,41. Iba pri dvoch z 21 prasiat v skupine 2 bolo spozorované, že majú klinické skóre pre nozdry. Analýza t-testom pre celkové jednotlivé klinické skóre skupín 1 a 2 so skóre kombinovanej kontrolnej skupiny mala hodnotu p 0,53 a 0,74, v príslušnom poradí. Tieto porovnávania demonštrujú chýbanie rozdielu medzi zvieratami, ktoré dostali vakcínu v oboch dávkach a nevakcinovanými kontrolami.
Výsledky izolácie vírusu z krvi ukázali, že 100 % (21 z 21) skupiny 1 sa stalo pozitívnou, zatiaľ čo skupina 2 mala 90 % (19 z 21) pozitívne testovaných. Počas postvakcinačného obdobia zostávali kontrolné skupiny 3 a 4 negatívne. Výsledky IPT (imunoperoxidázového) testu poskytovali rovnaký obraz, kedy 100 % skupiny jeden bolo sérologicky pozitívne, rovnako ako 90 % skupiny 2. Obidve skupiny zostávali negatívne pre sérové neutralizačné protilátky do 21 DPV. Neutralizačné protilátky boli detegované v oboch skupinách pri 29 DPV (0 DPC - pozri post-infekčné výsledky). Kontrolné skupiny zostávali negatívne v oboch testovacích postupoch až do času infikovania.
Analýza post-vakcinačných pozorovaní ukazuje, že sa neobjavujú žiadne nežiaduce účinky vzniknuté z ošetrenia dávkami vakcín použitými v tejto štúdii. Napriek tomu, vyššia dávka spôsobila sérologickú konverziu všetkých (21 z 21) odstavčiat, zatiaľ čo nižšia dávka konvertovala 19 z 21 odstavčiat, 90 %.
Po infekcii virulentným PRRS vírusom poskytovali klinické parametre, ktoré boli monitorované vo vakcinovanej a nevakcinovanej infikovanej skupine dôkazmi ochrany dvoma testovacími dávkami vakcíny. Výsledky testovania virémie poskytujú jasný dôkaz účinnosti vakcíny. Nevakcinovaná skupina (skupina 3) bola 100 % viremická na 3 DPC, 5 DPC a 7 DPC, zatiaľ čo incidencia virémie pre rovnaké dni pozorovania v skupine 1 (3,65 log/dávku) a skupine 2 (1,85 log/dávku) bola 15,5 a 10 % a 30 %, 20 % a 15 %, v príslušnom poradí. Taktiež žiadny vírus získaný zo vzoriek krvi od skupiny 1 po 9 DPC a zo skupiny 2 po 13 DPC, zatiaľ čo 30 % skupiny 3 bolo stále pozitívne v 19 DPC.
Výsledky monitorovania telesných (rektálnych ) teplôt taktiež poskytujú dôkaz pre účinnosť vakcín. Počas 21 dní pozorovania presahovala priemerná teplota skupiny 3 40 °C. Okrem toho, priemerná teplota skupiny 3 presahovala 40,3 °C počas dvoch dní, 2 DPC a 6 DPC.
Po infikovaní výsledky počtu bielych krviniek ukazujú, že pri skupine 3 prebehla leukopénia, ktorá mala 16 % pokles v 5. dni po infikovaní. Ani pri jednej z vakcinovaných skupín sa nevyskytol pokles vyšší ako 6 % počas pozorovacieho obdobia.
Monitorovanie hmotnostných prírastkov rôznych ošetrených skupín počas 21 dní po infekcii ukázalo, že vakcinácia v obidvoch dávkach zachováva normálnu rýchlosť rastu. Dve vakcinované skupiny, 1 a 2, mali priemerný percentuálny hmotnostný prírastok 74 a 73, v príslušnom poradí. Skupina 3, normálne kontrolné zvieratá, mala priemerne zvýšenie hmotnosti 75 %. Oproti tomu, priemerný percentuálny prírastok hmotnosti v skupine 3, pri nevakcinovaných - infikovaných kontrolách, bol 69 %. Toto bolo signifikantne odlišné od skupín 1, 2 a 4 pri P = 0,009 s použitím dvojitého t-testu a intervale spoľahlivosti 0,05.
Napriek tomu, že výsledky klinických testov nemusia byť ešte definitívne v demonštrácii účinnosti, stále ešte ilustrujú prínos vakcín. Po infikovaní mali skupiny 1, 2 a 3 signifikantné zvýšenie incidencie respiračných príznakov. Denné priemerné skóre jednotlivých zvierat pre skupiny 1, 2 a 3 bolo 0,39, 0,64 a 0,53, v príslušnom poradí. Toto ilustruje prínos vyšších dávok (3,65 log/dávka) proti nižším dávkam (1,85 log/dávka) a žiadnej vakcinácii. Napriek tomu pozorovanie stolice bolo dramatické po infekcii, nebolo signifikantne odlišné (s použitím hladiny spoľahlivosti 0,05) od pozorovania po vakcinácii a pred infikovaním. Tak v tomto pokuse sa nezdalo, že by mala infekcia PRRS vírusom účinok na dolný gastrointestinálny trakt. Celkovo, zostávajúce klinické pozorovania nemali signifikantné zmeny ako výsledok infekcie. Pre parametre nozdier a úst v skupine 2, jedno prasa malo 25 % celkového skupinového skóre nozdier a iné prasa malo 94 % skupinového skóre pre kategóriu úst. Podobne, v skupine 2, jedno prasa malo 22 % celkového skupinového skóre nozdier a iné prasa malo 43 % skupinového skóre pre kategóriu úst. Celkom, incidencia postinfekčných klinických pozorovaní pre tieto dva parametre nebola signifikantné odlišná od postvakcinačných pozorovaní. Podobné závery sa môžu urobiť pre tieto dva klinické parametre pre skupinu 3. Skupina 4 zostávala relatívne normálna po telesnej stránke.
Na konci pozorovacieho obdobia boli všetky prasatá usmrtené a boli makroskopický vyšetrované pľúca na prítomnosť patologického postihnutia. Šesťdesiat percent (6 z 10) skupiny 3 malo významné postihnutia. Pri porovnávaní, 10 % skupiny 1 a 19 % skupiny 2 javilo značné postihnutie. Na porovnanie so skupinou 4, normálnou kontrolou, 80 % skupiny 1, 81 % skupiny 2 a 30 % skupiny 3 bolo opísané ako makroskopický nerozlíšiteľné.
Bola uskutočnená izolácia vírusu z pľúcneho tkaniva. Žiadny vírus nebol izolovaný z pľúcneho tkaniva prasiat skupiny 1. Jedna vzorka z 21 prasiat skupiny 2 bola pozitívna na vírus. Vírus bol izolovaný z troch z desiatich vzoriek prasiat skupiny 3 a od žiadneho prasaťa skupiny 4.
Záver uskutočnený z týchto výsledkov je ten, že obe hladiny dávky (3,65 log/2,0 ml a 1,85 log/2,0 ml dávky) modifikovanej živej PRRS vírusovej vakcíny obsahujúce VR-2332 pasáž 75 boli účinné proti respiračnému ochoreniu pri 3 až 5 týždňoch starých odstavčiat, ktoré boli infikované v 29 DPV virulentným PRRS vírusom.
Táto štúdia ukázala, že preferovaná minimálna protektívna dávka je 3,65 log/2 ml dávky. V niekoľkých parametroch použitých na hodnotenie účinnosti dávok vakcíny, ako je virémia, klinické respiračné príznaky, patologické postihnutie pľúc a izolácia vírusu z pľúcneho tkaniva, boli lepšie chránené tie zvieratá, ktoré boli vakcinované vyššou dávkou. Tiež 21 z 21 prasiat vakcinovaných 3,65 log/dávku sérokonvertovalo v 21 DPV. Oproti tomu, iba 19 z 21 odstavčiat vakcinovaných nižšou dávkou sérokonvertovalo v 29 DPV (0 DPC).
Príklad 4
V tomto príklade bolo skúmané trvanie imunity s použitím modifikovanej živej vakcíny PRRS pasáže 75 opísanej v príkladoch 1 a 3. Vykrmované prasatá normálne dosiahli porážkovú hmotnosť v šiestich mesiacoch veku. V tomto príklade boli prasatá vakcinované v asi 1 mesiaci veku (4 - 5 týždňov) a potom boli infikované 110 dni po vakcinácii. Toto trvanie imunity by malo pokryť väčšinu očakávaného života normálnych vykrmovaných prasiat.
Šesťdesiatdva PRRS séronegatívnych odstavčiat bolo získaných a rozdelených do štyroch skúmaných skupín označených skupina 1, 2, 3 a 4. Dvadsaťjeden odstavčiat v skupine 1 bolo vakcinovaných 2,0 ml PRRS-MLV pasáž 75 vakcíny majúcej 3,32 log na dávku. Dvadsaťjeden odstavčiat v skupine 2 bolo vakcinovaných 2,0 ml tejto vakcíny majúcej 1,64 log na dávku. 10 odstavčiat v skupine 3 a v skupine 4 nebolo vakcinovaných a bolo umiestnených v oddelených miestnostiach na zachovanie séronegatívneho stavu. Pri ukončení štúdie opísanej v príklade 3 boli prasatá zo skupiny 2 v tomto príklade odstránené zo štúdie a usmrtené, pretože bolo uzavreté, že minimálna protektívna dávka bola 3,68 log a nie 1,87 log na dávku. Skupiny 1 a 3 boli infikované intranasálne v deň 110 po vakcinácii (DPV) s použitím vírusu (VR-2332) pasáž 3 (3,9 log/ml). Odstavčatá v skupine 4 neboli infikované. Odstavčatá boli monitorované 21 dní po infekcii (DPV) na klinické príznaky, zmenu telesnej hmotnosti, telesnú (rektálnu) teplotu, počet bielych krviniek, virémiu a sérológiu. Protektívna imunita v deň 110 po vakcinácii bola demonštrovaná absenciou virémie, prevenciou leukopénie horúčky a lepším prírastkom hmotnosti v porovnaní s infikovanými nevakcinovanými odstavčatami.
Po vakcinácii boli vakcinované odstavčatá pozorované na akékoľvek nežiaduce reakcie vakcinácie. Parametre, ktoré boli pozorované, obsahovali telesnú (rektálnu) teplotu, počet bielych krviniek, hmotnostný prírastok, klinické príznaky, sérológiu a virémiu.
Telesná (rektálna ) teplota bola monitorovaná denne od -1 DPV do +4 DPV. Analýza skupinových priemerov neukazovala žiadne signifikantné zvýšenie v teplotách ošetrovaných skupín ako výsledok vakcinácie. Vakcinované odstavčatá skupiny 1 mali maximálne zvýšenie 0,2 °F v porovnaní s pre-vakcinačným priemerom.
Počet bielych krviniek bol monitorovaný rozdielny čas pred a po podaní vakcíny. Skupina 1 mala 14 % pokles v porovnaní s pre-vakcinačným priemerom v 4 DPV. Všetky ostatné poklesy v počte na skupinu 1 zostávali nižšie ako 9 %. Ostatne skupiny (3 a 4) nemali žiadny pokles v počtoch WBC vyšší ako 11 % počas postvakcinačnej periódy sledovania.
Výsledky hmotnostných prírastkov od 0 DPV do 28 DPV neboli konfliktné v tom, že zmena hmotnosti v skupine 1 bola signifikantné odlišná od skupiny 4 (P = 0,02). Nie je žiadne vysvetlenie na tento rozdiel, pretože všetky ostatné parametre, ktoré boli monitorované, nemali väčšie rozdiely medzi skupinou 1 a skupinou 4.
Štatistická analýza postvakcinačného klinického skóre neukazovala žiadny rozdiel medzi vakcinovanými skupinami a nevakcinovanými kontrolnými skupinami. Napriek tomu, že fekálne skóre malo najvyššiu incidenciu, nebol tu signifikantný rozdiel medzi skupinou 1 a skupinami 3 a 4, P = 0,75, P = 0,59, v príslušnom poradí. Taktiež klinické vzorky nozdier neboli signifikantné. Porovnanie medzi skupinou 1 a skupinou 3 malo P hodnotu vyššiu ako 0,8. p hodnota na porovnanie medzi skupinou 1 a skupinou 4 bola 0,02, kedy skupina 4 mala vyššiu incidenciu. Žiadny z iných klinických parametrov nemal signifikantný stupeň výskytu.
Postvakcinačné sérologické výsledky ukazujú, že dávka vakcíny úspešne imunizovala ošetrené zvieratá. V 14 DPV mala skupina 1 48 % testovaných pozitívnych podľa IPT testu. O sedem dní neskôr v 21 DPV bolo 100 % ošetrenej skupiny testované ako pozitívne podľa IPT. Skupina 1 zostávala negatívna pre sérové neutralizačné (SN) protilátky do 28 DPV. Všetky prasatá zostávali sérologicky pozitívne podľa oboch testov dlhšie ako do času 110 DPV. Odstavčatá v skupinách 3 a 4 zostávali v priebehu postvakcinačnej periódy sérologicky negatívne.
Výsledky postvakcinačnej izolácie vírusu naznačujú, že 100 % z ošetrenej skupiny bolo úspešne inokulované. Toto podporuje skôr opísané sérologické dáta. Obe kontrolné skupiny 3 a 4 zostávajú negatívne počas postvakcinačnej periódy pozorovania.
Postvakcinačné pozorovania ukazujú, že ošetrenie nemalo žiadny vplyv na ošetrené zvieratá a kontrolné zvieratá boli bez PRRS vírusu.
Po infekcii virulentným PRRS vírusom boli pozorované rôzne klinické parametre na hodnotenie prínosu vakcinácie. Vakcinovaná skupina (skupina 1) bola porovnávaná s nevakcinovanou skupinou infikovanou skupinou (skupina 3) a nevakcinovanou neinfikovanou skupinou (skupina 4).
Postvakcinačné sérologické výsledky ukazujú, že infikovanie úspešne stimulovalo imunitnú odpoveď v skupine
3. Skupina 1 nemala amnestickú protilátkovú odpoveď po infekcii virulentným vírusom. Sérologické výsledky ukazujú, že skupina 4 zostávala negatívna počas pozorovania 21 dní.
Najdramatickejšie boli výsledky izolácie vírusu. 100 % skupiny 3 bolo pozitívne testované v deň 3, 5 a 7 po vakcinácii a v deň 21 po vakcinácii bolo 20 % tejto skupiny pozitívnych v teste. Skupina 1 bola negatívna v deň 0 DPC a zostávala negatívna do 21. dňa pozorovania. Neočakávaným výsledkom bola pozitívna izolácia PRRS vírusu zo vzoriek krvi skupiny 4. Prvé pozitívne izolácie vírusu zo skupiny 4 boli v deň 15 po DPC. Toto pozorovanie koreluje s inými parametrami, ktoré budú uvedené neskôr. I keď skupina 4 prišla do kontaktu s PRRS vírusom, môžu byť zhromaždené dáta stále považované za platné, pretože expozícia prebehla v poslednej tretine pozorovacích období a primárny interval sa týkal dní 1 DPC až 11 DPC. To znamená, že počas tohto obdobia bola vykonaná väčšina porovnaní medzi skupinami 1 a 3. Najdôležitejším výsledkom bolo jasné zabránenie infekcii, ako je ukázané, chýbaním izolácie vírusu vo vakcínou ošetrovanej skupine.
Význam postinfekčných klinických skóre sa zdá byť obmedzený v hodnotení účinku ošetrenia vakcínou. Napriek tomu, že klinické respiračné príznaky boli pozorované v skupinách 1 a 3, príznaky neboli rovnomerne rozmiestnené. V prípade skupiny 1, dve prasatá mali 88 % celkového skóre pre skupinu. Podobne, dve prasatá zo skupiny 3 mali 71 % celkového skupinového skóre 49. Celkové fekálne skóre pre skupinu 1 je signifikantné, keď je porovnávané s inými skupinami. Nakoniec, iba pri 9 z 21 prasiat bolo pozorované, že majú akékoľvek klinické príznaky tejto kategórie a z 9 prasiat mali 3 prasatá viacej ako 55 % celkového skóre na skupiny. Žiadne fekálne skóre nebolo pozorované pre skupinu 3 a iba 1 prasa zo skupiny 4 malo klinické fekálne príznaky. Klinické skóre pre nozdry a tlamu môžu mať obmedzený význam, pokiaľ sú bez asociácie s inými parametrami, ako napr. respiračnými. Incidencia pozorovania nozdier bola obmedzená v obidvoch skupinách 1 a 3 a bola menšia ako 50 % pre každú skupinu majúcu skóre. Skóre pre pozorovanie tlamy malo vysokú incidenciu % pre skupinu 3 a 76 % pre skupinu 1. Nebol tu signifikantný rozdiel pre tieto dve skupiny pre klinické skóre tlamy, P = 0,45. Všetky ostatné pozorované parametre boli normálne.
Počas postinfekčného pozorovacieho obdobia dosiahla skupina 1 priemerne 19,33 kg. Skupina 3 mala priemerný hmotnostný prírastok 16,56 kg a skupina 4 dosiahla priemerne 16,83 kg. Nebol tu signifikantný rozdiel medzi skupinami 3 a 4, P = 0,9, a toto môže byť spôsobené tým, že skupina 4 bola dodatočne infikovaná PRRS vírusom. Ale toto neovplyvňuje porovnanie dát medzi skupinou 1 a 3, pretože tu bol štatistický signifikantný rozdiel medzi týmito dvoma skupinami. Hodnotenie stavu prasiat počas doby poskytlo vynikajúci prostriedok na hodnotenie celkového stavu týchto prasiat. Tieto dáta spolu s inými parametrami ukazujú prínos testovanej vakcíny z hľadiska experimentálnej infekcie.
Postinfekčné teploty ukázali prínos ošetrenia vakcínou z hľadiska pokusnej infekcie. Infikovaná kontrolná skupina, skupina 3, mala 8 dní, počas ktorých bola priemerná teplota skupiny aspoň o 1 °C nad priemernou teplotou pred infekciou. Skupina 2 nemala priemerný nárast teploty o 1 °C v akýkoľvek čas. Napriek tomu, že skupina 4 bola kontaminovaná PRRS vírusom, priemerná teplota skupiny sa nezvýšila ani o stupeň. Toto bolo vďaka tomu, že šírenie vírusu v skupine bolo postupné a že nepostihlo celú skupinu ako tomu je pri pokusnej infekcii. Nakoniec, analýza teplôt jednotlivých prasiat od dňa 15 DPC do 21 DPC ukázala, že 4 prasatá zo skupiny 4 mali vzostup teploty po infekcii PRRS vírusom. Analýza teplôt jednotlivých prasiat v skupinách 1 a 3 ďalej potvrdzuje prínos ošetrenia vakcínou. Desať z desiatich prasiat v skupine 3 malo zvýšenie o 1 °C počas dvoch nasledujúcich dní alebo viacerých. Oproti tomu, prasatá zo skupiny 1 nemali podobné výsledky.
Ďalší dôkaz účinnosti vakcíny bol demonštrovaný výsledkami postvakcinačného počtu bielych krviniek. Skupina 1 mala priemerný WBC počet znížený po infekcii. Zníženie 14 %, 19 %, 14 %, 21 % a 13 % prebehlo v dni 1, 3, 5, 7 a 9 po infekcii, v príslušnom poradí. V rovnaké dni testu mala skupina 3 priemerné zníženie 15 %, 37 %, 43 %, 31 % a 28 %. Skupina 4, neinfikovaná kontrolná skupina, mala pokles medzi 11 % a 17 % v priebehu rovnakého obdobia. Analýza počtu pri jednotlivých prasatách ďalej dokazuje ochranu dodanú vakcínou. 10 z 10 prasiat v skupine 3 malo 25 % alebo vyšší pokles v počte WBC po dva alebo viacej nasledujúcich dní testu. Skupina 1 mala 2 z 21 prasiat majúcich leukémiu 25 % alebo vyššiu po dva nasledujúce dni. Infikované prasatá v skupine 4 mali podobné výsledky ako skupina 3. Incidencia leukopénie sa stala zreteľnou podľa toho, ako sa vírus šíril v skupine. Medzi dňami 15 a 21 DPC malo 50 % skupiny pokles počtu bielych krviniek o 25 % v dvoch nasledujúcich dňoch testu. Tieto výsledky ukazujú, že pri vakcinovaných prasatách nedošlo k leukopénii, ku ktorej došlo pri nevakcinovaných prasatách.
Analýza makroskopických vyšetrení pľúc v deň 21 DPC bola rozdelená do parenchýmového a pleurálneho skóre, ktoré bolo potom spojené do celkového pľúcneho skóre. Analýza vyšetrenia bola namáhavejšie vykonaná pre dodatočnú expozíciu neinfikovanej skupiny PRRS vírusu, pretože nemohla byť stanovená negatívna základná hodnota. Tak nezostáva nič iné, ako obmedziť porovnávanie medzi skupinami 1 a 3, pretože obidve skupiny mali expozíciu rovnakej vírusovej infekcie v rovnaký čas. Parenchýmové skóre pre skupinu 3 bolo vyššie v závažnosti pri 4 z 10 prasiat majúcich individuálne skóre 200. Najvyššie skóre v skupine 1 bolo 100. Tak percento postihnutia v ošetrenej skupine, ako závažnosť parenchýmových lézií bola znížená pri vakcinácii. Podobne, vakcinácia znižovala incidenciu a závažnosť pleurálnych lézií. Skupina 1 mala 24 % (5 z 21) majúcich pleurálne skóre 100, zatiaľ čo skupina 3 mala 50 % (5 z 10) majúcich pleurálne skóre 100. Väčšina prasiat (9 z 21) v skupine 1 mala sprievodné pleurálne skóre 100. Väčšina prasiat (9 z 21) v skupine 1 mala sprievodné pleurálne skóre 15 alebo nižšie. Korelácia pľúcneho skóre s respiračnými problémami neexistovala. Napríklad, jedno prasa zo skupiny 3 malo klinické respiračné skóre 23 a celkové pľúcne skóre 287,5, zatiaľ čo iné prasa zo skupiny 3 malo klinické respiračné skóre 0 a celkové pľúcne skóre 300. Je tu niekoľko ďalších príkladov chýbania korelácie medzi pľúcnym skóre a klinickým respiračným skóre. Bez ohľadu na to, či je makroskopické pozorovanie platné pre analýzu prínosu vakcíny, môže byť uzavrené, že vo vakcinovanej skupine 1 bolo málo zvierat s léziami a závažnosť týchto lézií bola znížená.
Záverom, veľa z parametrov použitých na hodnotenie účinkov vakcíny z pohľadu pokusnej infekcie v deň 110 po vakcinácii korelovalo dobre jeden s druhým. Počas periódy (3 - 9 DPC), v ktorej je virémia najzreteľnejšia, sa vyskytla signifikantná leukopénia a vzostup telesnej teploty. V čase infekcie boli prasatá asi 20 týždňov staré alebo o 12 týždňov staršie než prasatá infikované v príklade 3. Mnoho klinických príznakov zaznamenávaných v tejto štúdii bolo viacej závažných. Napríklad, vzostup telesnej (rektálnej) teploty bol zvýšený počas 8 dní v tejto štúdii proti 5 dňom v štúdii imunogenicity. Závažnosť leukopénie v nevakcinovanej infikovanej kontrolnej skupine (skupina 3) v tejto štúdii bola omnoho viac dramatická než v infikovanej kontrolnej skupine v štúdii imunogenicity. V neskoršej štúdii mala infikovaná kontrolná skupina pokles počtu WBC o 43 % až 27 % (3 - 9 DPC). V štúdii imunogenicity mala infikovaná kontrolná skupina zníženie o 15-21 % od 2 - 9 dňa po infekcii. Počet dní, v ktorých bola detegovaná virémia počas postinfekčnej periódy (1-14 DPC) pre vakcinovanú infikovanú skupinu v štúdii imunogenicity bol 0 z možných 220 dní v porovnaní so 45 zo 110 dní v infikovanej kontrolnej skupine v tejto štúdii. Tak zvýšenie závažnosti klinických príznakov nebolo plne spôsobené zvýšením trvania virémie.
Postinfekčné výsledky tejto štúdie ukazujú, že vakcinácia PRRS-MLV vakcínou v dávke 3,32 log na 2,0 ml poskytuje ochranu pred infekciou virulentným PRRS vírusom v deň 110 po vakcinácii. Tieto výsledky sú: 1. vakcinované zvieratá boli celkom negatívne na virémiu počas 21 denného obdobia pozorovania po infekcii, 2. okrem minoritného výskytu respiračných, fekálnych, nasálnych alebo orálnych príznakov boli vakcinované prasatá pozorované ako normálne z hľadiska klinických príznakov, 3. hmotnostný prírastok nevakcinovaných prasiat bol signifíkantne vyšší než hmotnostný prírastok nevakcinovaných infikovaných odstavčiat, 4. vakcinované odstavčatá nemali význačný vzostup telesnej teploty, 5. žiadne významné zníženie počtu bielych krviniek sa nevyskytlo pri vakcinovaných prasatách, 6. výskyt a závažnosť parenchýmových a pleurálnych lézií bol nižší pri vakcinovaných prasatách.
Príklad 5
V tomto príklade bola vakcína PRRS-MLV pasáž 75 opísaná v príklade 1 a 3 testovaná na určenie nástupu imunity'. Sedem dní pred začiatkom štúdie bolo 35 prasiat testovaných na PRRS protilátky s použitím imunoperoxidázo vého testu (IPT) a na prítomnosť PRRS vírusu v krvi izoláciou vírusu na MA-104 bunkách. Prasatá v skupine 1 boli vakcinované intramuskuláme 2,0 ml vakcíny PRRS-MLV pasáž 75 v deň 0 pokusu. 10 prasiat v skupine 2 bolo vakcinovaných rovnakým spôsobom v deň pokusu 7. Desať prasiat skupiny 3 a 5 prasiat skupiny 4 bolo udržiavaných v separátnych miestnostiach, ale v rovnakom prostredí a slúžili ako nevakcinované súčasné kontroly. Prasatá v skupine 1, 2 a 3 boli infikované v deň 14 pokusu. Infekčné inokulum, skladajúce sa z virulentného PRRS vírusu (VR-2332, pasáž 3, 3,7 log10 vírusu na 1,0 ml) bolo podané intranasálne (2,0 ml/prasa). Prasatá skupiny 4 zostali neinfikované. Všetky prasatá boli monitorované počas 10 dní na klinické príznaky respiračného ochorenia. Všetky prasatá boli usmrtené v závere štúdie na hodnotenie pľúcnych lézií.
V čase infekcie boli prasatá skupiny 1 sérologicky pozitívne podľa IPT testu, ale nie na sérum neutralizačnej aktivity. Oproti tomu, všetky ostatné prasatá obsahujúce prasatá skupiny 2 boli negatívne podľa oboch postupov. 50 % prasiat zo skupiny 2 bolo pozitívne pri teste IPT v deň 7 DPC a 100 % v deň 10 DPC. Pri jednom prasati zo skupiny a 2 sa vyvinula SN aktivita v deň 10 DPC a v deň 7 DPC, v príslušnom poradí. SN výsledky nie sú signifíkantne odlišné pri p = 0,05. Výsledky tejto štúdie ukazujú, že ochrana bola zvýšená v dôsledku ošetrení, i keď boli prasatá v čase infekcie buď sérologicky negatívne, alebo bez sérum neutralizačnej aktivity. Ochrana nemusí byť priamo viazaná na protilátkovú imunitu. Bunkami sprostredkovaná imunita v odpovedi na vakcináciu modifikovanou živou vakcínou môže mať hlavnú rolu v ochrane proti virulentnej infekcii.
V príklade 4 bola absencia virémie po infekcii významným kritériom na demonštráciu ochrany pred vakcináciou. Ale krátky čas medzi vakcináciou a infekciou v predkladanej štúdii vakcinovaných zvierat neriešil postvakcinačnú virémiu. Tiež, pretože infekcia bola homológna infekcia, nebolo možné rozlíšiť infekčný vírus od vakcinačného vírusu. 4 prasatá zo skupiny 1 a 1 prasa zo skupiny boli testované ako negatívne v aspoň jednom teste od 3 do 9 DPC. 100 % skupiny 3 bolo testované ako pozitívne na virémiu počas rovnakého obdobia.
Oproti predošlým príkladom bola v tejto štúdii detegovaná signifikantná prítomnosť klinických respiračných príznakov. Skupina 3 mala 9 z 10 zvierat majúcich respiračné problémy jeden alebo viac dní (priemerný počet dní = 3,6). Počet zvierat pre skupiny 1 a 2 majúcich dychové problémy počas jedného alebo viacerých dní bol jeden a nula, v príslušnom poradí (p < 0,001). Incidencia klinických príznakov pre nozdry bola podobná incidencii respiračných príznakov. Skupina 3 mala 8 z 10 majúcich klinické príznaky pre nozdry jeden alebo viacej dní. Priemerný čas trvania klinických príznakov bol 3,1 dňa. Oproti tomu, skupiny 1 a 2 sa signifíkantne líšili s priemerným časom trvania 1,3 dňa a 0,1 dňa, v príslušnom poradí (p < 0,001). Výskyty ostatných klinických parametrov boli normálne.
Obidve vakcinované skupiny dosiahli vyššiu hmotnosť než infikované kontrolné skupiny. Skupina 2 dosiahla priemer 4,81 kg v priebehu 10 denného obdobia pozorovania v porovnaní s 3,53 kg pre skupinu 3 (p = 0,01). Priemerný prírastok hmotnosti pre skupinu 1 bol 4,53 kg, čo nie je signifíkantne odlišné v porovnaní so skupinou 3. Táto skupina mala 2 najmenšie odstavčatá, ktoré vážili 7 a 12,5 libry, v príslušnom poradí, v deň 0 pokusu a 2,75 - 5,44 kg, v príslušnom poradí, v deň infekcie. Priemerný prírastok hmotnosti pre skupinu po odstránení dvoch najmenších odstavčiat je 5,58 kg, čo je signifíkantne odlišné od skupiny 3 (p < 0,001). Nesprávny prírastok hmotnosti pre dve prasatá môže byť prisúdený ich neschopnosti súťa žiť s väčšími prasatami v skupine. Tieto prasatá tiež mali hnačku v priebehu postvakcinačného obdobia pozorovania. Prasatá v skupine 4 mali priemerný prírastok hmotnosti 7,03 kg počas 10 denného obdobia. Pri prasatách tohto veku môže byť očakávaný priemerný denný prírastok hmotnosti 0,45 až 0,68 kg. Tieto výsledky ukazujú, že vakcinácia 7 a 14 dní pred infekciou poskytuje ochranu, ktorá umožňuje normálnu rýchlosť rastu.
Po infekcii mali prasatá zo skupiny 3 zvýšenú teplotu o 1 °C proti priemeru pred infekciou počas priemerne 4,6 dňa. Priemerný počet dní, počas ktorých mali prasatá v skupine 1 a 2 porovnateľné zvýšenie teploty bol 0,5 a 1,1 dňa, v príslušnom poradí (p < 0,001). Len jedno z 20 vakcinovaných odstavčiat malo zostup o 1 °C po dva po sebe nasledujúce dni v porovnaní s 8 z 10 v skupine 3. Štatistický rozdiel medzi vakcinovanými a kontrolnými bol p < 0,001. Tieto výsledky ukazujú, že vakcinácia prasiat v skupine 1 a 2 bránila výskytu horúčky v dôsledku expozície virulentného PRRS vírusu.
Prasatá v skupine 3 mali dramatické zníženie počtu bielych krviniek v deň 3, 5 a 7 po infekcii. Tieto výsledky presne zodpovedajú vzostupu teploty, ktorú zvieratá mali v priebehu rovnakého obdobia. Prasatá vo vakcinovaných skupinách mali miernu leukopéniu trvajúcu 1 - 2 dni pred návratom na hodnoty pred infekciou. Hodnoty pre vakcinované prasatá boli signifikantne odlišné od kontrol (p = = < 0,001). Tieto výsledky zdôrazňujú hladinu ochrany poskytnutú vakcináciou 7 alebo 14 dní pred infekciou redukciou hladiny a trvania leukopénie.
Vakcinácia 14 alebo 7 dní pred infekciou redukovala závažnosť pľúcnych lézií. Obe vakcinované skupiny boli signifikantne odlišné od infikovanej kontrolnej skupiny (P = 0,001). Skóre pre vakcinované zvieratá sú podobné ako skóre pre skupinu 4, normálnu kontrolnú skupinu. Priemerne pľúcne skóre pre skupinu 3 bolo 97,1 v porovnaní s 9,3 a 7 pre skupiny 1 a 2, v príslušnom poradí. Lézie pozorované v posledných dvoch skupinách sú normálne a očakávané pri zdravých, bežne chovaných prasatách.
Výsledky predkladanej štúdie ukazujú, že protektívna imunita bola stimulovaná počas 7 dní vakcinácie vakcínou modifikovaného živého vírusu. Signifikantné rozdiely boli pozorované v teplotnej odpovedi, prírastku hmotnosti, leukopénii, pľúcnych léziách a klinických príznakov po pokusnej infekcii pri vakcinovaných prasatách v porovnaní s nevakcinovanými infikovanými prasatami.
Príklad 6
V tomto príklade boli dve skupiny (A a B) po 100 tri týždne starých odstavených prasiat zo PRRS pozitívnych stád vakcinované buď vakcínou PRRS-MLV pasáž 70 podľa príkladu 1, alebo placebom (sterilnou vodou). Tridsať prasiat z každej skupiny bolo monitorovaných na prítomnosť nežiaducich účinkov sledovaním telesnej teploty, prírastku hmotnosti a reakcie v mieste injekcie. Tieto prasatá a ostávajúcich 70 prasiat z každej skupiny bolo tiež sledovaných na ich zdravotný stav počas 28 dní po liečbe. Výsledky tejto štúdie ukazujú, že vakcína nespôsobuje žiadne nežiaduce účinky a je bezpečná, pokiaľ je správne použitá v PRRS pozitívnych stádach.
Rektálna teplota pred vakcináciou (-2 DPV) ukázala, že prasatá použité v tomto pokuse boli normálne zdravé prasatá. Teploty skupiny A boli signifikantné vyššie ako teploty skupiny B v deň -2 a -1 pokusu (p < 0,05). Neboli tu žiadne signifikantné rozdiely medzi dvoma skupinami v deň 0, 1, 2 a 3 pokusu (p < 0,05). Tieto výsledky ukazujú, že vakcinácia modifikovanou živou PRRS vakcínou neexacerbuje stavy spôsobujúce existujúcu zvýšenú teplotu.
Žiadne prasa v žiadnej skupine nemalo akúkoľvek poliečebnú reakciu v mieste inokulácie. Tieto výsledky ďalej demonštrujú bezpečnosť vakcíny pokiaľ je podaná vhodným spôsobom.
Počas 29 dní odo dňa -2 pokusu do 27 pokusu malo 30 prasiat skupiny A prírastok hmotnosti priemerne 9,53 kg a 29 prasiat skupiny B malo priemerný prírastok hmotnosti 8,25 kg. Tento rozdiel je signifikantný pri P < 0,05. Pretože tento pokus bol vykonaný pre aktívnu PRRS infekciu, ukazujú výsledky bezpečnosť rovnako ako účinnosť.
Výsledky klinických pozorovaní ukazujú, že vakcína signifikantné redukuje incidenciu niekoľkých klinických parametrov. Redukované parametre zahŕňajú vzhľad z 62 na 6, stolicu z 48 na 24, oči zo 162 na 89, nozdry z 30 na 0, tlamu z 30 na 0, chuť k jedlu z 99 na 13, liečbu z 37 na 14 a úmrtie z 5 na 0. Zníženie počtu ošetrení v skupine 1 v porovnaní zo skupinou B bolo signifikantné (p < 0,05). Redukcia klinických príznakov poskytuje ďalší dôkaz, že modifikovaná živá PRRS vakcína je bezpečná, pokiaľ je použitá v stádach majúcich klinické známky asociované s PRRS vírusom.
Záverom, bolo ukázané, že vakcína je bezpečná, pokiaľ je správne použitá v stádach majúcich aktívne klinické ochorenie asociované s infekciou PRRS vírusom. Vakcína nezvýrazňuje klinické príznaky, hoci asociované s PRRS vírusom alebo so sekundárnymi patogénmi, o ktorých je známe, že sú prítomné pri týchto stavoch pri prasatách. Za podmienok, ktoré existujú v tomto mieste testu, tieto výsledky tiež ukazujú benefičný účinok v skupine, ktorá dostala vakcínu.
Príklad 7
V tomto príklade bol určovaný účinok vakcinácie 20 „Dutch landrace breed“ odstavčiat, bez špecifického patogénu, zmiešaného pohlavia, 5 týždňov starých, nízkou dávkou vakcíny ATCC VR-2332 pasáž 75 (ATCC VR-2495) na šírenie Lelystad vírusu (LV). O prirodzenom kmeni LV sa súdi, že je významný pre dispozíciu prasiat pre sekundárne respiračné infekcie a že spôsobuje zlý stav a vysoký stupeň mortality. Tento príklad poskytuje dáta týkajúce sa účinku vakcíny na prenos európskeho antigénneho typu LV vírusu.
Prasatá boli separované do dvoch skupín po 10 prasiat, jedna bola pokusná skupina a druhá bola kontrolná skupina. Každé prasa pokusnej skupiny bolo vakcinované intramuskuláme 2 ml riedenej vakcíny obsahujúcej asi 103 TCID50 vakcíny ATCC VR-2332 pasáž 75. O šesť týždňov neskôr bolo 5 zvierat z každej skupiny infikovaných intranasálnou inokuláciou prirodzeným európskym kmeňom LV (kód CDI-NL-2,91, Ter Huume, 5. pasáž na prasačích alveolárnych makrofágoch) pri použití infekčnej dávky 1033 TCID5O/2 ml. Po jednom dni boli infikované prasatá vrátené do svojich ohrád.
Pokus testoval, či, kedy a koľko z vakcinovaných a nevakcinovaných prasiat malo klinické príznaky oneskorenia, alebo bolo viremických a či a koľko kontaktom infikovaných prasiat bolo infikovaných Lelystad vírusom. Infekcia vo vakcinovanej a kontrolnej skupine bola kvantifikovaná a stupeň prenosu Lelystad vírusu bol počítaný vo vakcinovanej a kontrolnej skupine. Pre úspešnú vakcináciu musela byť závažnosť a trvanie ochorenia a virémie a stupeň prenosu nižší ako v kontrolnej skupine.
Táto štúdia, testovaná za extrémnych podmienok nízkej vakcinačnej dávky a heterológnej infekcie, ukázala protektívnu hodnotu vakcíny.
Vakcinácia redukovala klinické známky ochorenia po infekcii. Signifikantné redukovala priemernú rektálnu tep lotu po infekcii, signifikantne redukovala počet dní, po ktorých boli infikované prasatá viremické, a signifikantne redukovala závažnosť virémie pri infikovaných prasatách. Ďalej, hoci sa prenos z priamo infikovaných na kontaktom infikované prasatá vyskytoval pri všetkých prasatách, vo vakcinovanej i nevakcinovanej skupine, bol tu signifikantný rozdiel v prenose prirodzeného typu LV vakcinovanou a nevakcinovanou skupinou.
Vakcinácia vakcínou amerického antigénneho typu PRRS ATCC VR-2332 pasáž 75 bola preto účinná v navodzovaní ochrany pred infekciou európskym antigénnym typom Lelystad vírusu.
Príklad 8
Produkcia vakcíny v komerčnom rozsahu
Obrázok 1 ukazuje schematický diagram procesu na použitie v produkcii komerčného množstva živého modifikovaného Master Seed Culture vírusu z príkladu 1. Proces P10 začína krokom P12, čo je sterilizácia všetkých kontajnerov. Sterilizácia je preferovane vykonaná radiáciou, ale môže byť tiež prevedená termálne alebo chemicky. Typy kontajnerov zahŕňajú inokulačné nádoby, napr. 75 až 150 ml, päť litrové nádoby, otočené kultivačné skúmavky a nádoby oceľového bioreaktora so vzduchovým miešaním.
Krok PI4 obsahuje prípravu expanzívnych kultúr hostiteľských MA-104 buniek. Zásoba MA-104 bunkovej línie, v pasáži 58, je hostiteľských buniek pre vírusovú kultúru do pasáže 78. Zásobné MA-104 kultúry sú kultivované v nádobách s objemom 75 až 150 ml a obsahujúcich 50 a 150 ml média. Médium preferovane obsahuje MEM zmiešané s 10 % hovädzím alebo fetálnym teľacím sérom a okolo 30 pg/ml neomycínu. Sterilné nádoby a médiá sú preferovane inokulované asi 1 ml skoršou pasážou MA-104 kultúry a sú inkubované pri 35 °C až 37 °C po tri až sedem dní.
Expanzia zásobných bunkových kultúr preferovane prebieha v nádobách od 150 ml až asi do 400 - 600 ml média v pomere 1 : 5 (objem:objem). Po asi 4 - 7 dňoch inkubácie pri asi 35 - 37 °C môže byť týchto 400 - 600 ml média subkultivované do päťlitrových nádob naplnených médiom. Alternatívne, inokulum môže byť aplikované v pomere 1 : 3,4 do otočnej kultúry majúcej kultivačnú plochu okolo 670 až 850 cm2 a 150 ml média, ktoré je potom subkultivované do iných otočných kultivačných nádob v pomere od asi 1 : 9 do 1 : 11. Subkultúry sú inkubované po asi 4 - 7 dní pri asi 35 - 37 °C.
Krok 16 obsahuje prípravu produkčných kultúr vírusom infikovaných MA-104 buniek. Expanzívne kultúry kroku P14 sú typicky ďalej expandované do bioreaktorových nádob s väčším priemerom od asi 1 : 3 do asi 1 : 5 (objem : : objem). Produkčné nádoby môžu zahŕňať, napríklad, päťlitrové nádoby expanzívnych kultúr alebo 40 litrové kultivačné nádoby z nehrdzavejúcej ocele vybavené vzduchovým miešaním, kontrolou teploty a kontrolou pH. Nádoba je naplnená vhodným množstvom kultivačného média, inokulovaná MA-104 bunkami, inkubovaná pri asi 35 °C po 4 až 7 dní a infikovaná vírusom Master Seed Culture podľa príkladu 1. Tento vírus bude mať preferovane titer aspoň 1O6TCID5o na ml podľa CPE a bude pridaný do nádob produkčných kultúr v pomere aspoň okolo 0,11 až 10 ml na 100 ml média. Produkčné kultúry sú inkubované pri asi 35 °C až po asi 37 °C po 2 až 3 dni po infekcii atenuovaným vírusom.
Krok P18 obsahuje zber produkčných kultúr kroku P16 po postinfekčnej inkubačnej perióde. Správny čas na objemový zber by mal byť určený pozorovaním CPE ako je ukázané asi 10 % makroskopickými zmenami (okrúhle bunky a degradácia bunkovej vrstvy) alebo 10 % zmenou pH.
Produkčná kultúra podľa kroku P16 je zbieraná odsávačom s laminámym prúdením naliatym do sterilného kontajnera alebo v uzavretom zberovom systéme za pozitívneho tlaku. Objemovo zbieraný vírus je zmrazený a uskladnený pri teplote od asi -40 °C do asi -70 °C.
Sú získané alikvóty na kontrolné merania kvality podľa požiadaviek. Vzorky každej úrody sú testované v tioglykoláte a sójovom kazeínovom tráviacom médiu, ktoré je inkubované pri asi 36 °C a 20 “C, v príslušnom poradí, o 14 dní pri každej teplote. Tento očkovací vírus je použitý na poter nasledujúcich kultúr pokiaľ testovanie ukazuje titer aspoň okolo 105 TCIĎ5o/ml podľa CPE. Nedostatočný materiál je sterilizovaný 5 % chlómanom sodným po 24 hodín a autoklávovaný.
Krok P20 obsahuje stabilizáciu a lyofilizáciu zmrazeného vírusu získaného v kroku PI8. Objem zmrazeného vírusu je potom rozmrazený a preferovane zmiešaný s farmakologicky kompatibilným stabilizátorom, ako je konvenčný sacharózový želatínový stabilizér, v pomere asi troch častí rozmrazenej Master Seed Culture na asi jednu časť stabilizátora. Fyziologický roztok môže byť pridaný na úpravu konečnej koncentrácie vírusu.
Zmes je potom rozdelená do subobjemov dávok po asi 0,28 ml kvapaliny na každú dávku, kedy každá dávka obsahuje asi 0,20 ml PRRS kultúry na dávku v minimálnom titre 1049 TCID50 na dávku. Je tu uvedené, že preferované množstvo stabilizovanej produkčnej kultúry, ktoré vzniklo z krokov P16, PI8 a P20 bude dostatočné pre zisk asi 150 000 a 500 000 stabilných dávok. Napríklad, 25 dávok bude obsahovať asi 7,0 ml subobjemu. Tieto subobjemy sú nárazovo zmrazené, preferovane v kvapalnom dusíku. Sušiaca komôrka je udržovaná vo vákuu, zatiaľ čo teplota je zvýšená na maximum asi 30 °C a subobjem je udržovaný po maximálne 18 hodín pre sublimáciu vlhkosti vo vzorke.
Krok 22 obsahuje kontinuálne monitorovanie vakcinovaného produktu, ktorý vzišiel z kroku P20. Kontajner konečných vzoriek alebo série jednej náplne PRRS vakcíny je testovaný v škvrnách na zistenie toho, že obsah vlhkosti klesol pod 5 %. Série s obsahom vlhkosti vyšším ako 4 % alebo nižším ako 1 % budú testované na svoju silu v šesťmesačných intervaloch. Na meranie bezpečnosti sú morčatá injikované hmotnostnými ekvivalentmi 10 dávok vakcíny a pozorované počas 21 dni na známky nežiaducej klinickej reakcie.
VR-2332 vírus bol tiež za chladu adaptovaný paralelne s atenuáciou opísanou v príklade 1. Toto bolo vykonané preto, aby sa vyvinul vakcínový kmeň, ktorý bráni odpudeniu vírusu infikovaným zvieraťom. Takáto chladová adaptácia bola vykonaná postupným pasážovaním pri teplote 31-35 °C. Vzniknuté kmene budú tiež stimulovať imunitnú odpoveď.
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (16)
1. Vakcínová kompozícia obsahujúca živý vírus reprodukčného a respiračného syndrómu prasiat alebo PRRS v modifikovanej a v podstate avirulentnej forme a v zmesi s farmakologicky kompatibilným nosičom, kde uvedený modifikovaný a v podstate avirulentný vírus predstavuje ATCC-VR2332 vírus pasážovaný aspoň 70-krát na bunkovej kultúre z opičej obličkovej bunkovej línie MA-104 tak, že pokiaľ je modifikovaný a v podstate avirulentný vírus podaný prasatám alebo iným cicavcom citlivým na PRRS, nespôsobuje klinické príznaky PRRS ochorenia, ale je schopný indukovať imunitnú odpoveď, ktorá imunizuje cicavce proti patogénnym formám PRRS.
2. Kompozícia podľa nároku 1, kde uvedený vírus je ATCC VR-2495 vírus.
3. Kompozícia podľa nároku 1, kde uvedený nosič obsahuje sacharózový želatínový stabilizér.
4. Použitie vakcínovej kompozície obsahujúcej živý vírus reprodukčného a respiračného syndrómu prasiat alebo PRRS v zmesi s farmakologicky akceptovateľným nosičom, kde uvedený vírus predstavuje ATCC-VR2332 vírus pasážovaný aspoň 70-krát na bunkovej kultúre kvôli modifikácii vírusu a vytvoreniu v podstate avirulentného vírusu tak, že ak je modifikovaný a v podstate avirulentný vírus podaný prasatám alebo iným cicavcom citlivým na PRRS, nespôsobuje klinické príznaky PRRS ochorenia, ale je schopný indukovať imunitnú odpoveď, ktorá imunizuje cicavce proti patogénnym formám PRRS, na výrobu liečiva na imunizáciu prasiat proti PRRS.
5. Spôsob produkcie komerčných množstiev PRRS vakcíny, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa kroky: príprava produkčnej kultúry v podstate avirulentnej formy ATCC-VR2332 vírusu, čo zahŕňa kroky pasážovania ATCC-VR2332 vírusu aspoň 70-krát na bunkovej kultúre z opičej obličkovej bunkovej línie MA-104 pre modifikáciu vírusu a vytvorenie v podstate avirulentného vírusu tak, že pokiaľ je modifikovaný a v podstate avirulentný vírus podaný prasatám alebo iným cicavcom citlivým na PRRS, nespôsobuje klinické príznaky PRRS ochorenia, aleje schopný indukovať imunitnú odpoveď, ktorá imunizuje cicavce proti patogénnym formám PRRS, a generovanie produkčnej kultúry z modifikovaného a v podstate avirulentného ATCC-VR2332 vírusu; zber vírusovej kultúry; pridanie stabilizačného agens do vírusovej kultúry; a lyofilizáciu produkčnej vírusovej kultúry.
6. Spôsob podľa nároku 5, vyznačujúci sa t ý m , že krok prípravy zahŕňa infikovanie opičej bunkovej línie uvedeným vírusom a inkubovanie výslednej kultúry pri teplote od 35 °C do 37 °C.
7. Spôsob podľa nároku 5, vyznačujúci sa t ý m , že krok zberu zahŕňa zmrazenie vírusovej kultúry.
8. Spôsob podľa nároku 5, vyznačujúci sa tým, že krok pridania zahŕňa zmiešanie jedného dielu sacharózového želatínového stabilizátora s tromi dielmi vírusovej kultúry.
9. Spôsob podľa nároku 5, vyznačujúci sa t ý m , že krok lyofilizácie zahŕňa sublimáciu vlhkosti zo zmrazenej vzorky vírusovej kultúry.
10. Spôsob podľa nároku 5, vyznačujúci sa tým, že uvedená kultúra obsahuje sériový objem od 150 000 do 500 000 dávok s objemom 0,28 ml na dávku.
11. Spôsob podľa nároku 10, vyznačujúci sa t ý m , že ďalej zahŕňa podrozdelenie sériového objemu pred krokom lyofilizácie.
12. Spôsob podľa nároku 5, vyznačujúci sa t ý m , že uvedený v podstate avirulentný vírus jc ATCC 2495 vírus.
13. Vakcína produkovaná spôsobom podľa nároku 5.
14. Použitie podľa nároku 4, kde uvedený vírus bol pasážovaný 75-krát.
15. Kompozícia podľa nároku 1,vyznačuj úca sa t ý m , že uvedený vírus bol pasážovaný 75-krát.
16. Spôsob podľa nároku 5, vyznačujúci sa t ý m , že uvedený vírus bol pasážovaný 75-krát.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/440,750 US6042830A (en) | 1992-08-05 | 1995-05-15 | Viral agent associated with mystery swine disease |
| PCT/US1996/006800 WO1996036356A1 (en) | 1995-05-15 | 1996-05-14 | Viral agent associated with mystery swine disease |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK153997A3 SK153997A3 (en) | 1998-07-08 |
| SK283579B6 true SK283579B6 (sk) | 2003-09-11 |
Family
ID=23750027
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK1539-97A SK283579B6 (sk) | 1995-05-15 | 1996-05-14 | Vakcínová kompozícia proti reprodukčnému a respiračnému syndrómu prasiat, spôsob produkcie komerčných množstiev tejto vakcíny a jej použitie |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6042830A (sk) |
| EP (1) | EP0830142B1 (sk) |
| JP (1) | JP4300252B2 (sk) |
| KR (1) | KR19990014840A (sk) |
| CN (1) | CN1130227C (sk) |
| AT (1) | ATE213166T1 (sk) |
| AU (1) | AU717395B2 (sk) |
| BR (1) | BR9608535B1 (sk) |
| CA (1) | CA2221242C (sk) |
| CZ (1) | CZ296208B6 (sk) |
| DE (1) | DE69619233T2 (sk) |
| DK (1) | DK0830142T3 (sk) |
| ES (1) | ES2170234T3 (sk) |
| HK (1) | HK1016872A1 (sk) |
| HU (1) | HU223763B1 (sk) |
| MX (1) | MX9708804A (sk) |
| PL (1) | PL184973B1 (sk) |
| PT (1) | PT830142E (sk) |
| RU (1) | RU2166327C2 (sk) |
| SK (1) | SK283579B6 (sk) |
| UA (1) | UA39991C2 (sk) |
| WO (1) | WO1996036356A1 (sk) |
Families Citing this family (67)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2103460C (en) * | 1991-06-06 | 2000-09-26 | Gert Wensvoort | Causative agent of the mystery swine disease, vaccine compositions and diagnostic kits |
| ATE144144T1 (de) † | 1991-08-26 | 1996-11-15 | James Edward Collins | Vakzine gegen und diagnosemethode für das schweine-unfruchtbarkeits- und atmungs-syndrom (suas) |
| US6982160B2 (en) | 1991-08-26 | 2006-01-03 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Immunogenic compositions that include SIRS virus |
| US5846805A (en) | 1991-08-26 | 1998-12-08 | Boehringer Ingelheim Animal Health, Inc. | Culture of swine infertility and respiratory syndrome virus in simian cells |
| US6080570A (en) * | 1991-08-26 | 2000-06-27 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Method of producing a vaccine for Swine Infertility and Respiratory Syndrome |
| US5695766A (en) * | 1992-10-30 | 1997-12-09 | Iowa State University Research Foundation | Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome viruses which produce lesions in pigs and vaccines that protect pigs against said syndrome |
| US6380376B1 (en) * | 1992-10-30 | 2002-04-30 | Iowa State University Research Foundation | Proteins encoded by polynucleic acids of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) |
| US6773908B1 (en) | 1992-10-30 | 2004-08-10 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Proteins encoded by polynucleic acids of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) |
| US6592873B1 (en) | 1992-10-30 | 2003-07-15 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Polynucleic acids isolated from a porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) and proteins encoded by the polynucleic acids |
| US5866401A (en) * | 1996-03-01 | 1999-02-02 | Schering Corporation | Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine |
| JP3135069B2 (ja) * | 1996-03-01 | 2001-02-13 | シェーリング コーポレイション | ブタ生殖および呼吸症候群ワクチン |
| EP0839912A1 (en) * | 1996-10-30 | 1998-05-06 | Instituut Voor Dierhouderij En Diergezondheid (Id-Dlo) | Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof |
| US20040224327A1 (en) * | 1996-10-30 | 2004-11-11 | Meulenberg Johanna Jacoba Maria | Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof |
| FR2771375A1 (fr) | 1997-11-25 | 1999-05-28 | Saint Gobain Isover | Procede et dispositif de conditionnement de materiaux compressibles |
| US7132106B2 (en) * | 1998-12-22 | 2006-11-07 | Pfizer Inc. | Infectious cDNA clone of North American porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus and uses thereof |
| NZ501264A (en) | 1998-12-22 | 2001-09-28 | Pfizer Prod Inc | Polynucleotide DNA sequence encoding an infectious RNA molecule encoding a North American PRRS |
| US7618797B2 (en) * | 1998-12-22 | 2009-11-17 | Pfizer Inc | Infectious cDNA clone of North American porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus and uses thereof |
| US7691389B2 (en) | 1998-12-22 | 2010-04-06 | Pfizer Inc | Infectious cDNA clone of north american porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus and uses thereof |
| EP1157121B1 (en) * | 1999-03-08 | 2013-04-24 | Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH | Prrsv replicon |
| MXPA01010681A (es) * | 1999-04-22 | 2003-08-20 | Us Agriculture | Vacuna de sindrome respiratorio y reproductiva porcina a base de ja-142 aislado. |
| US20020012670A1 (en) * | 2000-01-26 | 2002-01-31 | Knut Elbers | Recombinant attenuation of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRSV) |
| AU2002249852A1 (en) * | 2000-11-09 | 2002-08-12 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Enhancement of immune response to vaccine by interferon alpha |
| US6841364B2 (en) * | 2002-01-22 | 2005-01-11 | Protatek International, Inc. | Infectious cDNA clones of porcine reproductive and respiratory syndrome virus and expression vectors thereof |
| AR049924A1 (es) * | 2004-06-18 | 2006-09-13 | Univ Minnesota | Identificacion de organismos viralmente infectados y vacunados |
| US7632636B2 (en) * | 2004-09-21 | 2009-12-15 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Porcine reproductive and respiratory syndrome isolates and methods of use |
| UA95602C2 (ru) | 2004-12-30 | 2011-08-25 | Берингер Ингельхейм Ветмедика, Инк. | Иммуногенная композиция цвс2 и способы приготовления такой композиции |
| US7833707B2 (en) | 2004-12-30 | 2010-11-16 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Methods of overexpression and recovery of porcine circovirus type 2 ORF2 |
| AU2006205852A1 (en) | 2005-01-13 | 2006-07-20 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Improved PRRS vaccines |
| US8834891B2 (en) | 2005-03-14 | 2014-09-16 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Immunogenic compositions comprising Lawsonia intracellularis |
| CA2894069C (en) | 2005-06-24 | 2019-02-26 | Regents Of The University Of Minnesota | Prrs viruses, infectious clones, mutants thereof, and methods of use |
| EP1968630B1 (en) | 2005-12-29 | 2018-01-24 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Multivalent pcv2 immunogenic compositions |
| DK3127551T3 (da) | 2005-12-29 | 2020-10-12 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Pcv2-immunogen-sammensætning til at mindske kliniske symptomer i grise |
| US20100129397A1 (en) | 2006-12-11 | 2010-05-27 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Effective method of treatment of porcine circovirus and lawsonia intracellularis infections |
| PT2481420T (pt) | 2006-12-15 | 2019-05-31 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Vacina para porcos anti-pcv2 de dose única |
| EP1941903A1 (en) | 2007-01-03 | 2008-07-09 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Prophylaxis and treatment of PRDC |
| CN100523177C (zh) * | 2007-01-09 | 2009-08-05 | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 | 猪繁殖与呼吸综合症病毒弱毒疫苗株及其应用 |
| AR064888A1 (es) * | 2007-01-12 | 2009-04-29 | Univ Illinois | Celulas no simias para el crecimiento del virus del sindrome reproductor y respiratorio porcino (prrs) |
| US8563313B2 (en) * | 2007-02-13 | 2013-10-22 | Washington State University Research Foundation | Macrophage cell-lines for propagation of porcine reproductive and respiratory syndrome virus |
| EP1958644A1 (en) | 2007-02-13 | 2008-08-20 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Prevention and treatment of sub-clinical pcvd |
| US7666585B2 (en) * | 2007-06-15 | 2010-02-23 | Protatek International, Inc. | Construction of chimera PRRSV, compositions and vaccine preparations |
| US7829274B2 (en) | 2007-09-04 | 2010-11-09 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Reduction of concomitant infections in pigs by the use of PCV2 antigen |
| US20090317423A1 (en) | 2008-01-23 | 2009-12-24 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Pcv2 mycoplasma hyopneumoniae immunogenic compositions and methods of producing such compositions |
| CN101612395B (zh) * | 2008-06-24 | 2012-02-08 | 扬州优邦生物制药有限公司 | 一种培养敏感细胞生产蓝耳病疫苗的方法 |
| US20100003278A1 (en) * | 2008-07-03 | 2010-01-07 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Immunological Compositions Effective for Lessening the Severity or Incidence of PRRSV Signs and Methods of Use Thereof |
| WO2010025109A1 (en) * | 2008-08-25 | 2010-03-04 | Boehringer Ingelheim Vetmedia, Inc. | Vaccine against highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome (hp prrs) |
| JP5306943B2 (ja) * | 2009-08-24 | 2013-10-02 | 全国農業協同組合連合会 | 弱毒ウイルスの作出方法 |
| TWI627281B (zh) * | 2009-09-02 | 2018-06-21 | 百靈佳殷格翰家畜藥品公司 | 降低ｐｃｖ－２組合物殺病毒活性之方法及具有改良免疫原性之ｐｃｖ－２組合物 |
| UA108902C2 (uk) | 2010-11-10 | 2015-06-25 | Вірус північноамериканського репродуктивного та респіраторного синдрому свиней (prrs) та його застосування | |
| PL2675475T3 (pl) * | 2011-02-17 | 2015-12-31 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Nowy europejski szczep prrs |
| US9944902B2 (en) | 2011-02-17 | 2018-04-17 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Commercial scale process for production of PRRSV |
| US9315781B2 (en) | 2011-07-29 | 2016-04-19 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Infectious CDNA clone of european PRRS virus and uses thereof |
| US9187731B2 (en) | 2011-07-29 | 2015-11-17 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | PRRS virus inducing type I interferon in susceptible cells |
| US8906385B2 (en) | 2011-12-01 | 2014-12-09 | University Of Maryland, College Park | Interferon-inducing porcine reproductive and respiratory syndrome virus isolate |
| WO2013173443A1 (en) | 2012-05-17 | 2013-11-21 | Zoetis Llc | Effective vaccination against porcine reproductive and respiratory syndrome (prrs) virus prior to weaning |
| CN105308178B (zh) | 2012-12-07 | 2019-06-07 | 伊利诺伊大学评议会 | 猪繁殖与呼吸综合征病毒组合物及其用途 |
| EP2968513A2 (en) | 2013-03-15 | 2016-01-20 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, compositions, vaccine and methods of use |
| US9505808B2 (en) | 2013-10-02 | 2016-11-29 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | PCV2 ORF2 protein variant and virus like particles composed thereof |
| MX2020010248A (es) | 2013-12-20 | 2020-10-16 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Variante del virus prrs, clon de adnc del virus europeo y sus usos. |
| CN103690633B (zh) * | 2013-12-25 | 2015-10-28 | 成都乾坤动物药业有限公司 | 一种含有枇杷叶的治疗畜禽呼吸道疾病综合征的兽用药物组合物 |
| US9920302B2 (en) | 2015-08-31 | 2018-03-20 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Pestivirus vaccines for congenital tremors |
| US10188725B2 (en) | 2015-12-14 | 2019-01-29 | Elanco Us Inc. | Hybrid core feline vaccines |
| DK3534939T3 (da) | 2016-11-03 | 2023-04-24 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Vaccine mod porcin parvovirus og porcin reproduktions- og respirationssyndromvirus og fremgangsmåder til fremstilling deraf |
| WO2018099889A1 (en) * | 2016-11-29 | 2018-06-07 | Intervet International B.V. | Swine vaccine |
| BR112019012158A2 (pt) | 2016-12-14 | 2019-11-12 | Zoetis Services Llc | vacinação eficaz contra cepas europeias de vírus da síndrome reprodutiva e respiratória suína (prrs) antes do desmame |
| EP4335455A3 (en) | 2017-04-13 | 2024-05-22 | Intervet International B.V. | Vaccines containing swine pathogens for associated non-mixed use |
| US11701419B2 (en) | 2019-04-04 | 2023-07-18 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Porcine Circovirus Type 3 (PCV3) vaccines, and production and uses thereof |
| BR112023001324A2 (pt) | 2020-07-24 | 2023-02-14 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Combinação de vacina de suíno |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4753884A (en) * | 1986-01-28 | 1988-06-28 | Novagene, Inc. | Pseudorabies virus mutants, vaccines containing same, methods for the production of same and methods for the use of same |
| ATE144144T1 (de) * | 1991-08-26 | 1996-11-15 | James Edward Collins | Vakzine gegen und diagnosemethode für das schweine-unfruchtbarkeits- und atmungs-syndrom (suas) |
| CA2076744C (en) * | 1991-08-26 | 2000-06-27 | Danny W. Chladek | Viral agent associated with mystery swine disease |
| US5695766A (en) * | 1992-10-30 | 1997-12-09 | Iowa State University Research Foundation | Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome viruses which produce lesions in pigs and vaccines that protect pigs against said syndrome |
| CZ289743B6 (cs) * | 1993-02-08 | 2002-03-13 | Bayer Corporation | Izolát viru vepřového reprodukčního a respiračního syndromu PRRSV, způsob kultivace PRRSV, tkáňová kultura, způsob přípravy vakcíny a vakcína obsahující PRRSV izolát |
| ES2074950B1 (es) * | 1993-09-17 | 1996-03-16 | Iberica Cyanamid | Vacuna para la prevencion de la enfermedad reproductiva y respiratoria de la cerda. |
-
1995
- 1995-05-15 US US08/440,750 patent/US6042830A/en not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-05-14 CN CN96195440A patent/CN1130227C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1996-05-14 CZ CZ0361697A patent/CZ296208B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1996-05-14 HU HU9802493A patent/HU223763B1/hu active IP Right Grant
- 1996-05-14 DK DK96915746T patent/DK0830142T3/da active
- 1996-05-14 EP EP19960915746 patent/EP0830142B1/en not_active Revoked
- 1996-05-14 BR BRPI9608535-5A patent/BR9608535B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1996-05-14 CA CA 2221242 patent/CA2221242C/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-05-14 PL PL96323365A patent/PL184973B1/pl unknown
- 1996-05-14 WO PCT/US1996/006800 patent/WO1996036356A1/en active IP Right Grant
- 1996-05-14 AT AT96915746T patent/ATE213166T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-05-14 UA UA97126039A patent/UA39991C2/uk unknown
- 1996-05-14 PT PT96915746T patent/PT830142E/pt unknown
- 1996-05-14 DE DE1996619233 patent/DE69619233T2/de not_active Revoked
- 1996-05-14 RU RU97120712A patent/RU2166327C2/ru active
- 1996-05-14 JP JP53495496A patent/JP4300252B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1996-05-14 KR KR1019970708184A patent/KR19990014840A/ko not_active Application Discontinuation
- 1996-05-14 ES ES96915746T patent/ES2170234T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-05-14 SK SK1539-97A patent/SK283579B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1996-05-14 AU AU57443/96A patent/AU717395B2/en not_active Expired
- 1996-08-15 US US08/698,240 patent/US5989563A/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-11-14 MX MX9708804A patent/MX9708804A/es unknown
-
1998
- 1998-12-31 HK HK98119251A patent/HK1016872A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0830142B1 (en) | Prrs (porcine reproductive and respiratory syndrome) virus vaccine | |
| US10668144B2 (en) | European PRRSV strain | |
| CA2076744C (en) | Viral agent associated with mystery swine disease | |
| US5695766A (en) | Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome viruses which produce lesions in pigs and vaccines that protect pigs against said syndrome | |
| EP0601062B1 (en) | Sirs vaccine and diagnosis method | |
| JP3710095B2 (ja) | ブタ生殖及び呼吸症候群ウイルスの増殖方法並びにワクチンにおけるその使用 | |
| US6001370A (en) | Attenuated strain of the virus causing the porcine reproductive respiratory syndrome (PRRS), and vaccines | |
| US5976537A (en) | Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine | |
| SK119498A3 (en) | Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine | |
| JP2019505217A (ja) | ブタ繁殖・呼吸障害症候群ワクチンウイルス | |
| AU734320B2 (en) | Vaccines inducing an immune response against viruses causing porcine respiratory and reproductive diseases | |
| MXPA97007302A (en) | New attenuated cepa of the virus causing the respiratory and reproductive swine syndrome (prrs), vaccines and diagnostic media obtained with the same and the procedures for your obtenc | |
| MXPA97010149A (en) | Live pathogenicity live virus vaccines and methods of preparation of mis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK4A | Patent expired |
Expiry date: 20160514 |