CZ296208B6 - Vakcínová kompozice a zpusob produkce prumyslového mnozství PRRS vakcíny - Google Patents
Vakcínová kompozice a zpusob produkce prumyslového mnozství PRRS vakcíny Download PDFInfo
- Publication number
- CZ296208B6 CZ296208B6 CZ0361697A CZ361697A CZ296208B6 CZ 296208 B6 CZ296208 B6 CZ 296208B6 CZ 0361697 A CZ0361697 A CZ 0361697A CZ 361697 A CZ361697 A CZ 361697A CZ 296208 B6 CZ296208 B6 CZ 296208B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- virus
- prrs
- culture
- group
- pigs
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 85
- 208000005342 Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Diseases 0.000 title claims abstract description 28
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 19
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 34
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 159
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims abstract description 107
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 27
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 20
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 19
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 claims abstract description 18
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 12
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 9
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims abstract description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 25
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims description 17
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 13
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 9
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 7
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 7
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 7
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 6
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 6
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 6
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 4
- 241001135989 Porcine reproductive and respiratory syndrome virus Species 0.000 claims description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 abstract 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 63
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 49
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 45
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 28
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 24
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 24
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 16
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 16
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 16
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 15
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 15
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 15
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 14
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 13
- 208000021017 Weight Gain Diseases 0.000 description 12
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 12
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 12
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 12
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 244000144980 herd Species 0.000 description 11
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 11
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 10
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 8
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 8
- 241000710788 Lelystad virus Species 0.000 description 7
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- 235000021053 average weight gain Nutrition 0.000 description 6
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 6
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 6
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 6
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 5
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 5
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 5
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 5
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 5
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 5
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 5
- 206010038687 Respiratory distress Diseases 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 4
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 3
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 3
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 238000009021 pre-vaccination Methods 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 3
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000710803 Equine arteritis virus Species 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 2
- 241000710924 Togaviridae Species 0.000 description 2
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 2
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 2
- 206010003230 arteritis Diseases 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 244000309457 enveloped RNA virus Species 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001492 haemagglutinating effect Effects 0.000 description 2
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 208000002254 stillbirth Diseases 0.000 description 2
- 231100000537 stillbirth Toxicity 0.000 description 2
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 description 2
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 208000035404 Autolysis Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241001440741 CHER virus Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 241000867607 Chlorocebus sabaeus Species 0.000 description 1
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 208000031361 Hiccup Diseases 0.000 description 1
- 206010022095 Injection Site reaction Diseases 0.000 description 1
- 208000029523 Interstitial Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000282341 Mustela putorius furo Species 0.000 description 1
- 238000011887 Necropsy Methods 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 206010036595 Premature delivery Diseases 0.000 description 1
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 241000712907 Retroviridae Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 230000010530 Virus Neutralization Effects 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 206010047897 Weight gain poor Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 1
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 1
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 210000001132 alveolar macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000001539 anorectic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 235000021052 average daily weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 208000032625 disorder of ear Diseases 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 230000027950 fever generation Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- VHHHONWQHHHLTI-UHFFFAOYSA-N hexachloroethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)C(Cl)(Cl)Cl VHHHONWQHHHLTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000003750 lower gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000036244 malformation Effects 0.000 description 1
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000008689 nuclear function Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 208000013718 rectal benign neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000028043 self proteolysis Effects 0.000 description 1
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 1
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 description 1
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 229940071127 thioglycolate Drugs 0.000 description 1
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M thioglycolate(1-) Chemical compound [O-]C(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 210000001944 turbinate Anatomy 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/10011—Arteriviridae
- C12N2770/10034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/10011—Arteriviridae
- C12N2770/10051—Methods of production or purification of viral material
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
- Y10S424/815—Viral vaccine for porcine species, e.g. swine
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Vakcínová kompozice obsahující zivý virus reprodukcního a respiracního syndromu prasat (PRRS) v modifikované a v podstate avirulentní forme ve smesi s farmakologicky kompatibilním nosicem, pricemz virem je ATCC-VR2332 virus pasázovaný alespon 70krátna bunecné kulture z opicí bunecné linie, který nezpusobuje chorobu po svém podání prasatum nebo jiným savcum a je schopen indukovat imunitní odpoved, která imunizuje savce proti patogenním formám PRRS. Zivý virus PRRS nachází pouzití pri výrobe vakcínové kompozice pro imunizaci prasat proti PRRS. Je také popsán zpusob produkce prumyslového mnozství PRRS vakcíny.
Description
Vakcínová kompozice a způsob produkce průmyslového množství PRRS vakcíny
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká oblasti imunologie a virologie, přesněji vakcínové kompozice, použití živého viru reprodukčního a respiračního syndromu prasat (PRRS) a způsob produkce průmyslového množství PRRS vakcíny.
Dosavadní stav techniky
Nové onemocnění prasat, různě označované jako „záhadná choroba prasat“, „syndrom prasečí neplodnosti a respirační syndrom“, „onemocnění modrých uší“ nebo jako „respirační a reprodukční syndrom prasat“ (PRRS) je příčinou těžkých ztrát v chovech ve Spojených státech a v Kanadě. Podobná choroba se také objevila ve většině Evropy. Choroba se manifestuje ve dvou formách, jedna způsobuje reprodukční selhání a druhá způsobuje respirační nesnáze u mladých selat. Reprodukční forma onemocnění je popsaná v Keffaber, K.K., „Reproductive Failure of Unknown Etiology“, Američan Association of Swine Practitioners Newsletter 1, 109(1989).
Nejvýznamnějšími klinickými příznaky reprodukční formy onemocnění jsou spontánní pozdní potraty, předčasné porody (které mohou tvořit 20 až 30 % všech porodů) a porody mumifíkovaných plodů, mrtvě narozených nebo nemocných selat. Takové klinické příznaky budou typicky pozorovány během 4 až 16 týdnů nebo i déle. Mrtvě narozené plody v postižených vrzích jsou často v časných stádiích mumifíkace, jak je ukázáno červenožlutým až hnědým zabarvením kůže a post-mortem autolýzou. Někdy jsou také pozorovány kupolovité malformace fetálních lebek. Infekce prasnic nemusí být vyznamenána nebo se může sama manifestovat poruchou celkového stavu trvající více než několik dní. Například prasnice mohou trpět nechutenstvím a mohou mít tělesnou teplotu nad nebo pod normálem. V období, kdy mají mladé, mohou prasnice vykazovat depresi, letargii, pyrexii a příležitostné zvracení. V některých postižených chovech může být ztraceno až 75 % všech selat. Ekonomické následky onemocnění jsou proto ničivé.
Respirační formy onemocnění vykazují klinické příznaky, které jsou nejvýraznější u selat ve věku 3 až 8 týdnů, ale je popsáno, že se vyskytují u prasat všeho věku v postižených chovech. Nemocná selata pomalu rostou, mají hrubou srst, respirační nesnáze („škytavka“) a zvýšenou mortalitu (více než 80 % před odstavením).
Zjištění velkých a mikroskopických lézí v předběžných studiích selat postižených respirační formou onemocnění naznačují, že mikroskopické plicní léze jsou významnou klinickou vlastností tohoto onemocnění. I přes zvýrazněné respirační příznaky onemocnění jsou plíce, které se zdají být nekomplikovány sekundární bakteriální infekcí, makroskopicky buď normální, nebo mají mírné, difúzní červenožluté až šedé zabarvení na povrchu plic. Nicméně, mikroskopické vyšetření plicní tkáně PRRS nemocných selat odhalí charakteristické vzorky intersticialní pneumonitidy, podle Collins, J. E. a kol. „Respirátory Disease in Swine Herd Experiencing a Reproductive Failure Syndrome“, Proceedings, Minnesota Swine Conference for Vetarinarians, str. 254, St. Paul, MN (10. až 18. září 1990).
V souladu s tím v oboru existuje reálná potřeba účinné vakcíny, která může eliminovat nebo alespoň zmírnit účinky PRRS.
- 1 CZ 296208 B6
Podstata vynálezu
Předmětem tohoto vynálezu je vakcínová kompozice obsahující živý virus reprodukčního a respiračního syndromu prasat neboli PRRS v modifikované a v podstatě avirulentní formě ve směsi s farmakologický kompatibilním nosičem, jejíž podstata spočívá v tom, že uvedeným virem je ATCC-VR2332 virus pasážovaný alespoň 70krát na buněčné kultuře z opičí buněčné linie, který nezpůsobuje chorobu po svém podání prasatům nebo jiným savcům a je schopen indukovat imunitní odpověď, která imunizuje savce proti patogenním formám PRRS.
Podle výhodného provedení tohoto vynálezu v kompozici je uvedeným virem ATCC-VR2495 a/nebo uvedený nosič obsahuje sacharózový želatinový stabilizátor.
Předmětem tohoto vynálezu je také použití živého viru reprodukčního a respiračního syndromu prasat neboli PRRS smíšeného s farmakologický kompatibilním nosičem, kde virem je ATCC-VR2332 virus pasážovaný alespoň 70krát na buněčné kultuře z opičí buněčné linie pro modifikaci viru a vytvoření v podstatě avirulentní formy, takže pokud je tento virus podán prasatům nebo jiným savcům citlivým na PRRS, nezpůsobuje onemocnění, aleje schopen indukovat imunitní odpověď, která imunizuje savce proti patogenním formám PRRS, pro výrobu vakcínové kompozice pro imunizaci prasat proti PRRS.
Předmětem tohoto vynálezu je způsob produkce průmyslového množství PRRS vakcíny, jehož podstata spočívá v tom, že zahrnuje kroky:
přípravu produkční kultury v podstatě avirulentní formy ATCC-VR2332 viru pasážováním tohoto viru alespoň 70krát na buněčné kultuře z opičí buněčné linie pro modifikaci viru a vytvoření v podstatě avirulentního viru, takže pokud je tento virus podán prasatům nebo jiným savcům citlivým na PRRS, nezpůsobuje onemocnění, ale je schopen indukovat imunitní odpověď, která imunizuje savce proti patogenním formám PRRS, a generování produkční kultury z modifikovaného a v podstatě avirulentního ATCC-VR2332 viru;
sklízení produkční virové kultury;
přidání stabilizačního agens do produkční virové kultury; a lyofilizaci produkční virové kultury pro produkci průmyslového množství PRRS vakcíny.
Podle výhodného provedení způsobu krok přípravy zahrnuje alespoň jeden z dalších znaků:
- infikování opičí buněčné linie uvedeným virem a inkubování výsledné kultury při teplotě asi od 35 °C asi do 37 °C,
- krok sklízení zahrnující zmrazení virové kultury,
- krok přidání zahrnující smísení asi jednoho dílu sacharózového želatinového stabilizátoru s asi 3 díly virové kultury,
- krok lyofilizace zahrnující sublimaci vlhkosti ze zmrazeného vzorku virové kultury,
- výrobu uvedené kultury v sériovém objemu od 150 000 do 500 000 dávek o objemu 0,28 ml na dávku na potom rozdělení do dávek uvedeného objemu,
- dále zahrnující podrozdělení sériového objemu před krokem lyofilizace, a
- použití v podstatě avirulentního viru, který je ATCC-VR2495 virus.
Předmětem tohoto vynálezu je též vakcínová kompozice vymezená svrchu, jejíž podstata spočívá v tom že je produkována způsobem produkce průmyslového množství PRRS vakcíny, zahrnujícím kroky:
přípravu produkční kultury v podstatě avirulentní formy ATCC-VR2332 viru pasážováním tohoto viru alespoň 70krát na buněčné kultuře z opičí buněčné linie pro modifikaci viru
-2CZ 296208 B6 a vytvoření v podstatě avirulentního viru, takže pokud je uvedený virus podán prasatům nebo jiným savcům citlivým na PRRS, nezpůsobuje chorobu, aleje schopen indukovat imunitní odpověď, která imunizuje savce proti patogenním formám PRRS, a generování produkční kultury z tohoto viru;
sklízení produkční virové kultury;
přidání stabilizačního agens do produkční virové kultury; a lyofilizací produkční virové kultury pro produkci průmyslového množství PRRS vakcíny.
Předmětem výhodného provedení vynálezu je konečně použití, kompozice a způsob, jak jsou popsány svrchu, kde uvedeným virem je virus pasážovaný 75krát.
Dále se uvádějí podrobnější údaje týkající se předmětného vynálezu.
Vynález zahrnuje biologicky nebo virově čistou kulturu PRRS spolu se všemi jejími mutanty a metody pro produkci a použití těchto virionů. Přirozený virus je schopen způsobit PRRS u prasat, ale modifikované formy viru nebo jejich nepatogenní mutanty poskytují účinnou vakcínu proti tomuto onemocnění.
Modifikovaný virus je preferovaně propagován a udržován v buněčné linii opičích ledvin a tato buněčná linie je výhodně MA-104, což jsou Afričan Green Monkey Kidney buňky pasážované dvacet- nebo vícekrát.
Patogenní virové agens bylo odebráno z tkáňového homogenátu infikovaných prasat a bylo potvrzeno způsobením PRRS choroby u mnoha selat a gravidních prasnic. Depozitum izolovaného virového agens bylo uloženo 18. července 1991 ve sbírce Američan Type Culture Collection vRockville, Maryland (USA) pod přírůstkovým číslem ATCC-VR2332. Virové agens je náročný, nehemaglutinující obalený RNA virus.
Přirozený typ viru je preferovaně modifikován do v podstatě avirulentní formy v plné nebo parciální vrstvě opičích buněk za přítomnosti séra ve vhodném kultivačním prostředí; inkubováním inokulované plochy buněk při teplotě asi 35 až asi 37 °C, dokud je pozorován cytopatický efekt a opakovaným pasážováním viru přes opičí buněčnou linii v kultivačním prostředí za přítomnosti séra a za vhodných podmínek pasážování.
Vakcína obsahuje nosič, jako je sacharózový želatinový stabilizátor, který je smísen s živým modifikovaným virem, který je produkován tak, jak bylo popsáno výše. Vakcína je preferovaně použita pro zabránění PRRS imunizací prasat lokálním (horní sliznice) způsobem nebo parenterálním způsobem vakcinace. Imunizované prasnice obvykle zůstávají bez příznaků onemocnění po expozici přirozenému typu viru.
Přehled obrázků na výkresech
Obr. 1 je blokovým schématem procesu pro použití ve výrobě průmyslových množství PRRS vakcíny.
Následující příklady, které nijak neomezují tento vynález, popisují preferované metody a materiály pro použití a provádění předkládaného vynálezu.
-3CZ 296208 B6
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Izolace, identifikace a atenuace PRRS viru a produkce modifikované živé vakdny
A. Izolace a identifikace
Tkáňový homogenát byl získán od selat z PRRS infikovaných stád. Tento homogenát pravidelně reprodukovat respirační a reproduktivní formy PRRS, pokud byl intranasálně inokulován gnotobiotickým selatům a březím sviním. Gnotcbiotická selata takto inokulovaná bud’ nefiltrovaným, nebo filtrovaným (0,45, 0,22 nebo 0,1 pm) inokulem se stávala anorektickými a vyvíjely se u nich mikroskopické plicní léze podobné lézím podorovaným v PRRS postižených stádech. Stejné inokulum také způsobovalo reprodukční selhání identické tomu, které je pozorováno v PRRS postižených stádech.
Tkáňové homogenáty, ze kterých byl virus izolován, obsahovaly plicní tkáň (skupina 1) a kombinaci mozkové slezinné - jatemí - ledvinné tkáně (skupina 2), získaných od infikovaných selat v PRRS infikovaných stádech. Oddělené homogenátové skupiny byly každá centrifugována při 4000 x g po 25 minut. Vzniklý supernatant byl odebrán a byl filtrován za použití 0,45 mikronového sterilního injekčního filtru. Filtrované supematanty byly potom kombinovány. Jeden ml kombinovaného filtrovaného supematantu byl potom použit jako inokulum pro infikování každé z příslušných buněčných linií, jak je popsáno dále.
Filtrovaný supernatant byl přidán do kultivačního média obsahujícího buněčnou linii, jak je popsáno dále, modifikované Eaglovo médium („MEM“) od JRH Biosciences a gentamicin v koncentraci asi 100 pg na ml.
Byly provedeny dva testy pro každou buněčnou linii za použití 75 ml plastových nádob. V testu číslo 1 byl filtrovaný supernatant inokulován do dvou nádob, kdy každá nádoby měla plnou buněčnou vrstvu každé z buněčných linií uvedených dále. Dále, do první nádoby bylo přidáno asi 2,5 mg trypsinu. Všechny další podmínky byly stejné pro obě kultivační nádoby.
V testu číslo 2 byl materiál kombinovaného tkáňového hemogenátu inokulován do nádoby obsahující stejné buněčné linie pouze 20 až 40 % konfluentní v době inokulace. Médium dále obsahovalo asi 10% fetální hovězí sérum, které nebylo přítomno v médiu v testu 1. Inokulum bylo znovu podáno v množství asi 1 ml a kultura byla inkubována při asi 34 °C po přibližně 7 dní.
Všechny nádoby byly inkubovány po dobu asi 7 dní při přibližně 34 °C. Výsledky byly zaznamenávány asi po 7 dnech. Po zmražení a roztáni byl vzorek odebrán pro druhou pasáž ve stejné buněčné linii. Zbylý materiál byl zmražen v kapalném dusíku a byl uskladněn asi při -60 °C. Výsledky testu 1 a testu 2 jsou shrnuty v tabulce 1:
-4CZ 296208 B6
Tabulka 1
Testování buněčných linií pro virové hostitele
| Použitá buněčná linie | Test č. 1 | Test č. 2 |
| Hovězí Turbinate (BV) | - | - |
| Feline ledvina (CRFK) | - | - |
| Opičí (Věro) ledvina | - | - |
| Opičí (Věro) plíce | - | - |
| Psí ledvina (MDCK) | - | - |
| Prasečí (PK2A) ledvina | - | - |
| Norčí plíce | - | - |
| Fretčí plíce | - | - |
| Hovězí plíce | - | - |
| Bizoní plíce | - | - |
| Hovězí ledvina (MDBK) | - | - |
| Prasečí varle (ST) | - | - |
| Opičí ledvina (MA-104) | - | + |
| Lidský rektální tumor (HRT-18) | - | NT |
| Lidská plíce | NT | - |
+ = CPE efekt
- = bez CPE efektu
NT= netestováno
Žádný cytopatický efekt („CPE“) nebyl pozorován v testu č. 1 v žádné hodnocené buněčné linii. V testu č. 2 se nicméně malé shluky MA-104 buněk stávaly zbobtnalými a tvořily „malé dírky“ v monovrstvě okolo okrajů nádoby. Kapalina byla separována z nádoby a pasážována do nové nádoby s MA-104 buňkami (znovu 20 až 40% buněčná vrstvy) a potom následně pasážována potřetí. Tento zřetelný CPE se stával silnější s každou pasáží. Pasáž 3 zachovala jeho virulenci. Tato pasáž byla dodenována v Amarican Type Culture Collectionv Rockville, Maryland, pod přírůstkovým číslem ATCC-VR2332.
ATCC VR2332 virus pravidelně způsobuje klinickou symptomatologiii PRRS, plicní léze u gnotobiotických prasat a pozitivní ImF výsledky. ATCC-VR2332 virus může reprezentovat neidentifikovaný rod Togaviridae. ATCC-VR2332 není také známý patogen prasat, protože specifická antiséra k mnoha běžným patogenům prasat selhala jak při neutralizaci viru, tak při detekci antigenu v infikovaných buňkách.
ATCC-VR2332 virus je náročný nehemaglutinující obalený RNA virus. ATCC-VR2332 virus roste v kontinuální buněčné linii, konkrétně MA-104 a jiných opičích buněčných liniích. ATCC-VR2332 virus roste do vysokých titrů (107 TCID50/I ml) v komerční buněčné linii MA-104.
ATCC-VR2332 virus obsahuje lipidový obal, jak je ukázáno ztrátou infektivity po ošetření chloroformem. Lipidový obal může být také vizualizován jako elektronový translucentní kroužek obklopující prázdné částice. Morfologii PRRS viru není možné odlišit přímou elektronovou mikroskopií (DEM) a bude extremně obtížného identifikovat v přípravcích obsahujících buněč-5CZ 296208 B6 nou drť. Morfologie gradientně purifíkovaných ATCC-VR2332 částic a průměrný průměr 62 nm jsou velmi podobné virionům koňské Arteritidy a laktát dehydrogenázovým virům.
Virus koňské arteritidy má popsanou velikost v rozmezí 50 až 73 nm, což je podobné velikosti 48 až 84 nm pro ATCC-VR2332 virus. V několika částicích ATCC-VR2332 bylo pozorováno 30 až 35 nm jádro, které se podobá nukleokapsidovému jádru popsanému pro virus koňské arteritidy. Tak, morfologícky, ATCC-VR2332 virus se nejvíce podobá skupině virů arteritidy.
Přítomnost RNA genomu v ATCC-VR2332 byla potvrzena schopností viru pokračovat v replikaci za přítomnosti 5-bromo-2-deoxyuridinu a mitomycinu C, o kterých je známo, že inhibují replikaci DNA a jedné rodiny RNA virů (Retroviridae), ale ne jiných RNA virů. Nicméně, stanovená klasifikace ATCC-VR2332 virus je RNA viru je v souladu s pozorováním, že tento virus se replikuje v cytoplasmě buněk, jak je ukázáno přítomností virových antigenů detekovaných ImF. Také Aktinomycin D, který interferuje s DNA dependentním RNA přepisem, nemá žádný účinek na replikaci ATCC-VR2332 viru. Tyto výsledky ukazují, že ATCC-VR2332 virus nevyžaduje jaderné funkce pro replikaci.
Shrnuto, velikost, morfologie, přítomnosti RNA genomu a další biologické vlastnosti předběžně umísťují ATCC-VR2332 virus do rodiny Togaviridae. ATCC-VR2332, nicméně, nemůže být definitivně umístěn do známé třídy této rodiny. Ačkoliv morfologicky velmi připomíná ATCC-VR2332 virus arteriviry, nemůže být virus definitivně umístěn do této třídy, dokud nejsou dostupné další informace o DNA a proteinové struktuře.
B. Atenuace
Zisk z VR2332 pasáže číslo 3 byl podroben dalším dvěma pasážím podrobněji popsaným dále a sklizeň z pasáže číslo 5 byla popsána mimo laboratoř k purifíkaci. Přesněji, ATCC-VR2332 viriony byly identifikovány po purifíkaci v CsCl gradientem (centrifugovaných při 200000 x g) po extrakci 1,1,2-trichloro-trichloroethanem. Purifikované viriony byly značeny „immuno-gold“ kitem využívajícím anti-ATCC-VR2332 hyperimunitní sérum a konjugát zlata. Vztlaková hustota ATCC-VR2332 virionů v CSC1 gradientem byla 1,18 až 1,19 g/ml. Sacharózové gradienty pravidelně vedly ke ztrátě titru viru a nebyly použity jako vhodný gradient pro purifíkaci.
Purifíkovaná sklizeň z pasáže 5 byla potom podrobena dalším 65 pasážím jak je popsáno dále. Výsledná sklizeň z pasáže 70 byl atenuovaná a byla označen jako Master Seed Culture. Tato avirulentní Master Seed Culture byla uložená v Amarican Type Culture Coolection pod přírůstkovým číslem ATCC-VR2495. Konečně, dalších 5 pasáží bylo provedeno pro získání ATCCVR2332 pasáže 75 (další pasáže mohou být také provedeny, pokud je to požadováno).
Pasáže 4-75 ATCC-VR2332 virů byly provedeny v kultivačních nádobách hostitelské tkáně komerčně dostupné Ma-104 Green Monkey ledvinné buněčné linie. Tyto tkáňoví kultivační nádoby byly připraveny následujícím způsobem. Kultivační medium bylo připraveno tak, aby obsahovalo Eaglovo minimální esenciální médium („MEM“) od JRH Biosciences (katalogové č. 200-2041) a 10% fetální telecí sérum od JRH Biosciences. Asi 1 ml ATCC-VR2332 inokulum bylo přidáno do nádoby od objemu 75 cm3 obsahující 50 ml tohoto kultivačního média. Nádoby byla uchovávána po asi 7 dní a inkubována při teplotě v rozmezí od asi 35 °C do asi 37 °C.
Tkáňové kultivační zásobní nádoby byly připraveny expandováním vzniklé inkubované kultury, která byla rozdělena 1:4 následujícím způsobem. Kultivační médium, které mělo objem asi 50 ml, bylo odstraněno. Buněčná vrstva byla odstraněna přidáním 10 ml trypsin-versen IX a inkubací při 37 °C po 5 až 10 minut. Poté byly buňky odebrány z nádoby a byly centrifugovány při 270 x g po 5 až 10 min. Supernatant byl scezen a peleta byla resuspendována v 5 až 10 ml MEM média obsahujícího 10% fetální telecí sérum stejně jako předtím. Buňky byly umístěny do 200 kultivačního média, které bylo potom rozděleno do čtyřech 75 ml nádob po 50 ml na nádobu, čímž bylo dosaženo rozdělení 1:4.
-6CZ 296208 B6
Vzniklé kultury byly udržovány při teplotě v rozmezí mezi 35 až 37 °C až do použití. Asi po 3 až 4 dnech inkubace se v nádobách vyvinul úplný potah vrstvou buněk a byly připraveny pro použití.
PRRS virus ATCC-VR2332 vyl propagován v kontinuálních kulturách buněčné linie MA-104, které byl produkovány, jak je popsáno výše. pH kultivačního média bylo upraveno na 7,2 a kultury byly inkubovány při teplotách v rozsahu 35 až 37 °C. Virus byl inokulován na MA-104 buňky přidáním 1 ml zmrazeného inokula z předchozí pasáže do kapalného kultivačního média. Viru byla umožněna absorpce na buňky po 24 hodin.
Kultivační médium bylo zcezeno asi 24 hodin po inokulaci ATCC-VR2332 viru a nádoby byla znovu naplněna 50 ml udržovacího média, kde byla provedena substituce 4% fetálního telecího séra za 10% fetální telecí sérum v kultivačním médiu. Udržovací médium mělo pH 7,6. Po této výměně média byla kultura inkubována při teplotě mezi 35 až 37 °C. Byl umožněn růst viru, dokud nebylo asi 50 až 60% Ma-104 buněk v kultuře destruováno virem. Vzorek byl potom zmrazen v kapalném dusíku a byl připraven pro pasáž do jiné nádoby MA-104 buněk.
Zkřížená reaktivita pasáží 3 až 70 byla také demonstrována. PRRS ATCC-VR2332 pasáž 3 virus byl použit pro imunizaci prasat, králíků a koz pro produkci anti-séra k PRRS. Sérum bylo použito pro neutralizaci PRRS viru v různých pasážích od pasáže 3 do pasáže 70. Kromě toho byly připraveny dvě monoklonální protilátky (SDOW-12 a SDOW-17) za použití slezinných lymfocytů od myší imunizovaných VR-2332 PRRS virem. Monoklonální protilátky reagovaly znovu proti všem americkým a evropským izolátům jako v prosinci 1992. Monoklonální protilátky byly použity pro identifikaci nebo detekci PRRS viru z pasáží 3 až 70.
C. Produkce modifikované živé vakcíny
Dva vakcínové přípravky byly formulovány inkorporováním, v příslušném pořadí, Master Seed Culture (sklizeň z ATCC-VR2332 pasáže 70) a sklizně z ATCC-VR2332 pasáže 75. Virus Master Seed Culture a pasáže 75 jsou v podstatě avirulentní, tj., vakcíny, pokud jsou podány prasatům nebo jiným savcům s rizikem PRRS kontaktu, nezpůsobují klinické příznaky PRRS onemocnění, ale jsou schopné indukovat imunitní odpověď, která imunizuje zvířata proti patogenním formám PRRS viru. Vakcína byla produkována konvenčními prostředky. Normální stabilizátory a nosiče byly přidány před lyofilizací.
Příklad 2
In vivo testování virového izolátu
Virulentní třetí pasáž sklizně ATCC-VR2332 viru z příkladu byla použita pro inokulaci dvou tři dny starých gnotobiotických selat. Obě selata byla infikována intranasálně, jedno 1 ml a druhé 2 ml. Selata byla klinicky pozorována po sedm dní, potom byla usmrcena a byly provedeny nekropsie.
Byly odebrány tkáňové vzorky od každého selete pro histopatológii a pro získání virového agens. Histopatologická zpráva potvrdila, že plicní léze u infikovaných selat byly identické s plicními lézemi od selat, o kterých bylo známo, že mají PRRS. Vzorky tkáně byly zpracovány stejně jako v příkladu 1, a potom byly kultivovány na 20 až 40% a 100% monovrstvě MA-104 buněčné linie s hovězím fetálním sérem. Virové agens byly opět získány.
Třetí pasáž virové sklizně byla také použita pro inokulaci sviní, aby se potvrdilo, že reprodukční účinek onemocnění může být duplikován a potvrzen. Dvě vícerodivší prasnice byly inokulovány intranasálně asi v den 93 gestace. Prasnice porodily vrhy s 50 % mrtvě narozených selat
-7CZ 296208 B6 (8/13 a 6/14 mrtvě narozené/živé) v den 112 a 114 gestace, v příslušném pořadí. Sedm mrtvě narozených selat bylo částečně mumifíkováno a živě narozená selata byla slabá a slabě sála. Virové agens bylo získáno ze tkáně mrtvě narozených selat stejným způsobem jako v příkladu 1.
Virové agens bylo získáno ze tří stád, o kterých bylo známo, že mají PRRS. Titry protilátek k ATCC-VR2332 agens byly identifikovány v těchto stejných stádech.
Příklad 3
Účelem této studie byla identifikace minimální protektivní dávky PRRS viru (VR-2332 pasáž 75) vybrané pro použití jako modifikované živé virové vakcíny. Toto bylo provedeno analyzováním stupně, kterým byly schopné dvě vybrané dávky vakcíny (4,0 + 0,5 log/dávku a 2,0 + 0,5 log/dávku) kontrolovat nástup abnormálního stavu po expozici virulentními PRRS viru (VR2332 pasáž 3, 3,5 + 0,5 log/dávku) a srovnáním vakcinovaných/infikovaných prasat s nevakcinovanými/infikovanými a normálními (neinfikovanými) prasaty. Modifikovaná živá vakcína byla produkována za použitím viru pasáže 75, jak bylo vysvětleno výše.
Šedesát dva seronegativních selat bylo vybráno pro použití z farmy a bylo rozděleno do čtyř studovaných skupin, označených skupina 1, 2, 3 a 4. Dvacet jedna selat ve skupině 1 bylo vakcinováno 2,0 ml PRRS vakcíny L-4 intramuskulámě (4,0 log/dávku). Dvacet jedna selat ve skupině 2 bylo vakcinováno 20 ml PRRS vakcíny L-2 (2,0 log/dávku). Deset selat ve skupině 3 a deset selat ve skupině 4 nebylo vakcinováno. Selata v kontrolních skupinách 3 a 4 byla umístěna separátně pro zajištění citlivosti na infekci virem. Skupiny 1, 2 a 3 byly infikovány 2,0 ml PRRS viru VR-2332 pasáže 3 intranasálně ve 28 den pokusu. Selata ve skupině 4 nebyla infikována. Selata ve všech čtyřech studovaných skupinách byla pozorována a pravidelně monitorována 31 dní před infikováním a 21 dní po infikování. Parametry použité pro hodnocení studie byly klinické příznaky, tělesná hmotnost, tělesná (rektální) teplota, počet bílých krvinek, izolace viru a sérologie. Účinnost vakcíny byla demonstrována redukcí počtu dní, kdy byla vakcinovaná selata viremická, zabráněním leukopenie a teploty a zachováním normální rychlosti růstu po infekci.
Tělesná (rektální) teplota byla měřena před a po vakcinaci. Průměrná teplota skupiny byla pro skupinu č. 1 zvýšená na 2 DPV a 3 DPV, zatímco u skupiny 2 se zvýšila na 3 DPV. Doba vzestupu teploty byla pro obě skupiny krátká, 2 dny pro skupinu 1 a 1 den pro skupinu 2.
Ani u jedné z vakcinovaných skupin nedošlo k poklesu počtu bílých krvinek po ošetření. Dřívější studie ukázaly, že infikování virulentním PRRS virem by mělo způsobovat leukopenii během 72 hodin po infekci.
Výsledky měření přírůstku hmotnosti během postvakcinačního období ukázaly, že ošetření neovlivňuje nepříznivým způsobem stav vakcinovaných prasat. V průběhu 29 dnů po vakcinaci nebyl hmotnostní přírůstek pro ani jednu z vakcinovaných skupin signifikantně odlišných při intervalu spolehlivosti 0,05 do hmotnostních přírůstku ve skupinách 3 a 4.
Klinická pozorování ukázala mírné odchylky od normy většině kategorií kromě stolice a nozder. Srovnání fekálního skóre vakcinovaných skupin s fekálním skóre kombinovaných kontrolních skupin (skupiny 3 a 4) za použití dvojitého t-testu neukázalo signifikantní rozdíl při hladině spolehlivosti 0,05 p. Hodnota mezi skupinou 1 a kombinovanými kontrolními skupinami byla 0,47, zatímco mezi skupinou 2 a kombinovanou kontrolní skupinou byla 0,87. Srovnání skóre nozder mezi skupinou 1 a kombinovanou kontrolní skupinou mělo p hodnotu 0,41. Pouze u dvou z 21 prasat ve skupině 2 bylo pozorováno, že mají klinické skóre pro nozdry. Analýz t-testem pro celková jednotlivá klinická skóre skupin 1 a 2 se skóre kombinované kontrolní skupiny měla hodnotu p 0,53 a 0,74, v příslušném pořadí. Tato srovnání demonstrují chybění rozdílů mezi zvířaty, která dostala vakcínu v obou dávkách a nevakcinovanými kontrolami.
-8CZ 296208 B6
Výsledky izolace viru z krve ukázaly, že 100 % (21 z 21) skupiny 1 se stalo pozitivní, zatímco skupina 2 měla 90 % (19 z 21) pozitivně testovaných. Během postvakcinačního období zůstávala kontrolní skupina 3 a 4 negativní. Výsledky IPT (imunoperoxidázového) testu dávaly stejný obraz, kdy 100 % skupiny jedna bylo sérologicky pozitivní, stejně jako 90 % skupiny 2. Obě skupiny zůstávaly negativní pro sérové neutralizační protilátky do 21 DPV. Neutralizační protilátky byly detekovány v obou skupinách při 29 DPV (0 DPC - viz post-infekční výsledky). Kontrolní skupiny zůstávaly negativní v obou testovacích postupech až do doby infikování.
Analýza post-vakcinační pozorování ukazuje, že se neobjevují žádné nežádoucí účinky vzniklé z ošetření dávkami vakcín použitými v této studii. Nicméně, vyšší dávka způsobila sérologickou konversi všech (21 z 21) selat, zatímco nižší dávka konvertovala 19 z 21 selat 90%.
Po infekci virulentním PRRS virem dávaly klinické parametry, které byly modifikovány ve vakcinované a nevakcinované infikované skupina důkazy ochrany dvěma testovanými dávkami vakcíny. Výsledky testování viremie poskytují jasný důkaz užitku vakcíny. Nevakcinovaná skupina (skupina 3) byla 100% viremická na 3 DPC, 5 DPC, zatímco incidence virem pro stejné dny pozorování ve skupině 1 (3,65 log/dávku) a skupině 2 (1,85 log/dávku) byla 15,5 a 10% a 30%, 20% a 15%, v příslušném pořadí. Také nebyl žádný virus získán ze vzorků krve od skupiny 1 po 9 DPC a ze skupiny 2 po 13 DPC, zatímco 30% skupiny 3 bylo stále pozitivní v 19 DPC.
Výsledky monitorování tělesných (rektálních) teplot také poskytují důkaz pro účinnost vakcín. Během 21 dnů pozorování přesahovala průměrná teplota skupiny 3 104 °F v 5 dnech. Průměrné teploty skupin 2 a 3 nepřesahovaly 104 °F. Kromě toho průměrná teplota skupiny 3 přesahovala 104,5 °F ve dvou dnech, 2 DPC a 6 DPC.
Po infikování, výsledky počtu bílých krvinek ukazují, že u skupiny 3 proběhla leukopenie, která měla 16% pokles v den 5 po infikování. Ani u jedné z vakcinovaných skupin se nevyskytl pokles vyšší než 6% během pozorovacího období.
Monitorování hmotnostních přírůstků různých ošetřených skupin během 21 dnů po infekci ukázalo, že vakcinace v obou dávkách zachovává normální rychlost růstu. Dvě vakcinované skupiny, 1 a 2, měly průměrný procentuální hmotnostní přírůstek 74 a 73, v příslušném pořadí. Skupina 4, normální kontrolní zvířata, měla průměrné zvýšení hmotností 75%. Oproti tomu, průměrný procentuální přírůstek hmotnosti ve skupině 3, u nevakcinovaných - infikovaných kontrol, byl 69%. Toto bylo signifikantně odlišné od skupin 1, 2 a 4 při P = 0,009 za použití dvojitého t-Testu a intervalu spolehlivosti 0,05.
Ačkoliv výsledky klinických testů nemusí být definitivní v demonstraci účinnosti, stále ještě ilustrují přínos vakcín. Po infikování vykazovaly skupiny 1, 2 a 3 signifikantní zvýšení incidence respirační příznaků. Denní průměrné skóre jednotlivých zvířat pro skupiny 1, 2 a 3 bylo 0,39, 0,64 a 0,53, v příslušném pořadí. Toto ilustruje přínos vyšších dávek (3,65 log/dávku) vůči nižším dávkám (1,85 log/dávku) a žádné vakcinaci. Ačkoliv pozorování stolice bylo dramatické po infekci, nebylo signifikantně odlišné (za použití hladiny spolehlivosti 0,05) do pozorování po vakcinaci a před infikováním. Tak v tomto pokusu se nezdálo, že by měla infekce PRRS virem účinek na dolní gastrointestinální trakt. Celkově, zbývající klinická pozorování nevykazovala signifikantní změny jako výsledek infekce. Pro parametry nozder a úst ve skupině 1, jedno prase mělo 25 % celkového skupinového skóre nozder a jiné prase mělo 94 % skupinového skóre pro kategorii úst. Podobně, ve skupině 2, jedno prase mělo 22 % celkového skupinového skóre nozder a jiné prase mělo 43 % skupinového skóre pro kategorii úst. Celkem, incidence postinfekčních klinických pozorování pro tyto dva parametry nebyla signifikantně odlišná od postvakcinačních pozorování. Podobné závěry mohou být učiněny pro tyto dva klinické parametry pro skupinu 3. Skupina 4 zůstávala relativně normální po tělesné stránce.
V konci pozorovacího období byla všechna prasata usmrcena a byly makroskopicky vyšetřovány plíce na přítomnost patologického postižení. Šedesát procent (6 z 10) skupiny 3 vykazovalo
-9CZ 296208 B6 zaznamenání hodné postižení. Při srovnání, 10 % skupiny 1 a 19 % skupiny 2 jevilo znatelné postižení. Při srovnání se skupinou 4, normální kontrolou, 80% skupiny 1, 81 % skupiny 2 a 30 % skupiny 3 bylo popsáno jako makroskopicky nerozlišitelné.
Byla provedena izolace viru z plicní tkáně. Žádný viru nebyl izolován z plicních tkání prasat skupiny 1. Jeden vzorek z 21 prasat skupiny 2 byl pozitivní na virus. Virus byl izolován ze tří z deseti vzorků prasat skupiny 3 a od žádného z prasat skupiny 4.
Závěr uěiněný z těchto výsledků je ten, že obě hladiny dávky (3,65 log/2,0 ml a 1,85 log/2,0 ml dávku) modifikované živé PRRS virové vakcíny obsahující VR-2332 pasáž 75 byly účinné proti respiračnímu onemocnění u 3 až 5 týdnů starých selat, které byly infikovány v 29 DPV virulentním PRRS virem.
Tato studie ukázala, že preferovaná minimální protektivní dávka je 3,65 log/2 ml dávku.
V několika parametrech použitých pro hodnocení účinnosti dávek vakcíny, jako je viremie, klinické respirační příznaky, patologické postižení plic a izolace viru z plicní tkáně, byla lépe chráněna ta zvířata, která byla vakcinována vyšší dávkou. Také 21 z 21 prasat vakcinovaných 3,65 log/dávku serokonvertovalo z 21 DPV. Oproti tomu, pouze 19 z 21 selat vakcinovaných nižší dávkou serokonvertovalo v 29 DPV (0 DPC).
Příklad 4
V tomto příkladu bylo zkoumáno trvání imunity za použití modifikované živé vakcíny PRRS pasáže 75 popsané v příkladech 1 a 3. Vykrmovaná prasata normálně dosáhla porážkové hmotnosti v šesti měsících věku. V tomto příkladu byla prasata vakcinována asi v 1 měsíci věku (4 až 5 týdnech) a potom byla infikována 110 dní po vakcinaci. Toto trvání imunity by mělo pokrýt většinu očekávaného života normálních vykrmovaných prasat.
Šedesát dva PRRS seronegativních selat bylo získáno a rozděleno do čtyřech studovaných skupin označených skupina 1, 2, 3 a 4. Dvacet jedna selat ve skupině 1 bylo vakcinováno 2,0 ml PRRS-MLV pasáž 75 vakcíny mající 3,32 log na dávku. Dvacet jedno sele ve skupině 2 bylo vakcinováno 2,0 ml této skupiny mající 1,64 log na dávku. 10 selat ve skupině 3 a ve skupině 4 nebylo vakcinováno a bylo umístěno v oddělených místnostech pro zachování seronegativního stavu. Při ukončení studie popsané v příkladu 3 byly prasata ze skupiny 2 v tomto příkladu odstraněna ze studie a usmrcena, protože bylo uzavřeno, že minimální protektivní dávka byla 3,68 log a nikoliv 1,87 log na dávku. Skupiny 1 a 3 byly infikovány intranasálně v den 110 po vakcinaci (DPV) za použití viru VR-2332 pasáž 3 (3,9 log/ml). Selata ve skupině 4 nebyla infikována. Selata byla monitorována 21 dní po infekci (DPC) na klinické příznaky, změnu tělesné hmotnosti, tělesnou (rektální) teplotu, počet bílých krvinek, viremii a serologiii. Protektivní imunita v den 110 po vakcinaci byla demonstrována absencí viremie, prevencí leukopenie horečky a lepším přírůstkem hmotnosti ve srovnání s infikovanými nevakcinovanými selaty.
Po vakcinaci byla vakcinovaná selata pozorována na jakýkoliv nežádoucí reakci vakcinace. Parametry, které byly pozorovány, obsahovaly tělesnou (rektální) teplotu, počet bílých krvinek, hmotnostní přírůstek, klinické příznaky, sérologii a viremii.
Tělesná (rektální) teplota byla monitorována denně od -1 DPV do +4 DPV. Analýza skupinových průměrů neukazovala žádné signifikantní zvýšení v teplotách ošetřených skupin jako výsledek vakcinace. Vakcinovaná selata skupiny 1 vykazovala maximální zvýšení 0,2 °F ve srovnání s pre-vakcinačním průměrem.
Počty bílých krvinek byly monitorovány různou dobu před a po podání vakcíny. Skupina 1 vykazovala 14% pokles ve srovnáni s pre-vakcinačním průměrem v 4 DPV. Všechny jiné poklesy
-10CZ 296208 B6 v počtu pro skupinu 1 zůstávaly nižší než 9 %. Zbylé skupiny (3 a 4) nevykazovaly žádný pokles v počtech WBC vyšší než 11% během postvakcinační periody sledování.
Výsledky hmotnostních přírůstků od 0 DPV do 28 DPV byly konfliktní v tom, že změna hmotnosti ve skupině 1 byla signifikantně odlišná od skupiny 4 (P=0,02). Není žádné vysvětlení pro tento rozdíl, protože všechny ostatní parametry, které byly monitorovány, nevykazovaly větší rozdíly mezi skupinu 1 a skupinou 4.
Statistická analýza postvakcinačních klinických skóre neukazovala žádný rozdíl mezi vakcinovanými skupinami a nevakcinovanými kontrolními skupinami. Ačkoliv fekální skóre mělo nejvyšší incidenci, nebyl zde signifikantní rozdíl mezi skupinou 1 a skupinou 3 a 4, P=0,75, P=0,59, v příslušném pořadí. Stejně tak, klinické vzorky nozder nebyly signifikantní. Srovnání mezi skupinou 1 a skupinou 3 mělo P hodnotu vyšší než 0,8. p hodnota pro srovnání mezi skupinou 1 a skupinou 4 byla 0,02, kdy skupina 4 měla vyšší incidenci. Žádný z jiných klinických parametrů nevykazoval signifikantní stupeň výskytu.
Postvakcinační sérologické výsledky ukazují, že dávka vakcíny úspěšně imunizovala ošetřená zvířata. V 14 DPV měla skupina 1 48% testovaných pozitivních podle IPT testu. O sedm dní později v 21 DPV bylo 100 % ošetřené skupiny testováno jako pozitivní podle IPT. Skupina 1 zůstávala negativní pro sérové neutralizační (SN) protilátky do 28 DPV. Všechna prasata zůstávala serologicky pozitivní podle obou testů dále než do doby infekce v 110 DPV. Selata ve skupinách 3 a 4 zůstávala v průběhu postvakcinační periody serologicky negativní.
Výsledky postvakcinační izolace viru naznačují, že 100 % z ošetřené skupiny bylo úspěšně inokulováno. Toto podporuje dříve popsaná serologická data. Obě kontrolní skupiny 3 a 4 zůstávají negativní po dobu postvakcinační periody pozorování.
Postvakcinační pozorování ukazují, že ošetření nemělo žádné nežádoucí účinky na ošetřená zvířata a kontrolní zvířata byla bez PRRS viru.
Po infekci virulentním PRRS virem byly pozorovány různé klinické parametry pro hodnocení přínosu vakcinace. Vakcinovaná skupina (skupina 1) byla srovnávána s nevakcinovanou infikovanou skupinou (skupina 3) a nevakcinovanou neinfikovanou skupinou (skupina 4).
Postvakcinační sérologické výsledky ukazují, že infikování úspěšně stimulovalo imunitní odpověď ve skupině 3. Skupina 1 nevykazovala anamnestickou protilátkou odpověď po infekci virulentním virem. Sérologické výsledky ukazují, že skupina 4 zůstávala negativní po dobu pozorování 21 dní.
Nej dramatičtější byly výsledky izolace viru. 100 % skupiny 3 bylo pozitivně testováno v den 3, 5 a 7 po vakcinaci a v den 21 po vakcinaci bylo 20 % této skupiny pozitivních v testu. Skupina 1 byla negativní v den O DPC a zůstávala negativní do 21 dne pozorování. Neočekávaným výsledkem byla pozitivní izolace PRRS viru ze vzorků krve skupiny 4. První pozitivní izolace viru ze skupiny 4 byla v den 15 DPC. Toto pozorování koreluje s jinými parametry, které budou uvedeny dále. I když skupina 4 přišla do kontaktu s PRRS virem, mohou být shromážděná data stále považována za validní, protože expozice proběhla v poslední třetině pozorovacího období a primární interval se týkal dnů 1 DPC až 11 DPC. To znamená, že během tohoto období byla provedena většina srovnání mezi skupinami 1 a 3. Nejdůležitějším výsledkem bylo jasné zabránění infekci, jak je ukázáno chyběním izolace viru ve vakcínou ošetřené skupině.
Význam postinfekčních klinických skóre se zdá být omezený v hodnocení účinku ošetření vakcínou. Ačkoliv klinické respirační příznaky byly pozorovány ve skupinách 1 a 3, příznaky nebyly rovnoměrně rozloženy. V případě skupiny 1, dvě prasata vykazovala 88 % celkového skóre pro skupinu. Podobně, dvě prasata ze skupiny 3 vykazovala 71 % celkového skupinového skóre 49.
Celkové fekální skóre pro skupinu 1 je signifikantní, když je srovnáváno s jinými skupinami.
-11 CZ 296208 B6
Nicméně, pouze u 9 z 21 prasat bylo pozorováno, že mají jakékoliv klinické příznaky této kategorie a z 9 prasat vykazovala 3 prasata více než 55 % celkového skóre pro skupinu. Žádná fekální skóre nebyla pozorována pro skupinu 3 a pouze 1 prase ze skupiny 4 mělo klinické fekální příznaky. Klinická skóre pro nozdry a hubu mohou mít omezený význam, pokud jsou bez asociace se jinými parametry, jako např. respiračními. Incidence pozorování nozder byla v obou skupinách 1 a 3 a byla menší než 50 % pro každou skupinu mající skóre. Skóre pro pozorování tlamy mělo vysokou incidenci 90 % pro skupinu 3 až 76 % pro skupinu 1. Nebyl zde signifikantní rozdíl pro tyto dvě skupiny pro klinická skóre úst, P=0,45. Všechny ostatní pozorovatelné parametry byly normální.
Během postinfekčního pozorovacího období dosáhla skupina 1 průměrně 42,62 liber. Skupina 3 měla průměrný hmotnostní přírůstek 36,5 liber a skupina 4 dosáhla průměrně 37,1 liber. Nebyl zde signifikantní rozdíl mezi skupinami 3 a 4, P=0,9, a toto může být způsobeno tím, že skupina 4 byla dodatečně infikována PRRS virem. Nicméně, toto neovlivňuje srovnání dat mezi skupinou 1 a 3, protože zde byl statisticky signifikantní rozdíl mezi těmito dvěma skupinami. Hodnocení stavu prasat během doby poskytlo vynikající prostředek pro hodnocení celkového stavu těchto prasat. Tato data spolu s jinými parametry ukazují přínos testované vakcíny z hlediska experimentální infekce.
Post infekční teploty ukázaly přínos ošetření vakcínou z hlediska pokusné infekce. Infikovaná kontrolní skupina, skupina 3, měl 8 dní, ve kterých byla průměrná teplota skupiny alespoň o 1 °F nad průměrnou teplotou před infekcí. Skupina 1 neměla průměrný nárůst teploty o 1 °F v jakoukoliv dobu. Ačkoliv byla skupina 4 kontaminována PRRS virem, průměrná teplota skupiny se nezvýšila o stupeň. Toto bylo díky tomu, že šíření viru ve skupině bylo postupné a že nepostilo celou skupinu jako tomu je u pokusné infekce. Nicméně, analýza teplot jednotlivých prasat ode dne 15 DPC do 21 DPC ukázala, že 4 prasata ze skupiny 4 měly vzestup teploty po infekci PRRS virem. Analýza teplot jednotlivých prasat ve skupinách 1 a 3 dále potvrzuje přínos ošetření vakcínou. Deset z deseti prasat ve skupině 3 vykazovalo zvýšení o 1 °F po dobu dvou následujících dní nebo více. Oproti tomu, prasata ze skupiny 1 neměla podobné výsledky.
Další důkaz účinnosti vakcíny byl demonstrován výsledky postvakcinačního počtu bílých krvinek. Skupiny 1 měla průměrný WBC počet sníženýpo infekci. Snížení 14 %, 19 %, 14 %, 21 % a 13 % proběhlo v dny 1, 3, 5, 7 a 9 po infekci, v příslušném pořadí. Ve stejné dny testu měla skupina 3 průměrná snížení 15 %, 37 %, 43 %, 31 % 28 %. Skupina 4, neinfikovaná kontrolní skupina, měla pokles mezi 11 % a 17 % v průběhu stejného období. Analýza počtů u jednotlivých prasat dále dokazuje ochranu dodanou vakcínou. 10 z 10 prasat ve skupině 3 vykazovalo 25% nebo vyšší pokles v počtu WBC po dva nebo více následující dny testu. Skupina 1 měla 2 z 21 prasat vykazujících leukopenii 25 % nebo vyšší po dva následující dny. Infikovaná prasata ve skupině 4 vykazovala podobné výsledky jako skupina 3. Incidence leukopenie se stala zřetelnou podle toho, jak se virus šířil ve skupině. Mezi dny 15 a 21 DPC vykazovalo 50 % skupiny pokles počtu bílých krvinek o 25 % ve dvou následujících dnech testu. Tyto výsledky ukazují, že u vakcinovaných prasat nedošlo k leukopenii, ke které došlo u nevakcinovaných prasat.
Analýza makroskopických vyšetření plic v den 2 DPC byla rozdělena do parenchymového a pleurálního skóre, která byla potom spojena do celkového plicního skóre. Analýza vyšetření byla obtížněji provedena pro dodatečnou expozici neinfikované kontrolní skupiny PRRS viru, protože nemohla být stanovena negativní základní hodnota. Tak je nezbytné omezit srovnání mezi skupinami 1 a 3, protože obě skupiny měly expozici stejné virové infekci v stejnou dobu. Parenchymové skóre pro skupinu 3 bylo vyšší v závažnosti u 4 z 10 prasat majících individuální skóre 200. Nejvyšší skóre ve skupině 1 bylo 100. Jak procento postižení v ošetřené skupině, tak závažnost parenchymových lézí byla snížena při vakcinaci. Podobně, vakcinace snižovala incidenci a závažnost pleurálních lézí. Skupina 1 měla 24 % (5 z 21) majících pleurální skóre 100; zatímco skupina 3 měla 50 % (5 z 10) majících pleurální skóre 100. Většina prasat (9 z 21) ve skupině 1 měla doprovodné pleurální skóre 15 nebo nižší. Korelace plicního skóre s respiračními problémy neexistovala. Například, jedno prase ze skupiny 3 mělo klinické respirační skóre 23 a
-12CZ 296208 B6 celkové plicní skóre 287,5, zatímco jiné prase ze skupiny 3 mělo klinické respirační skóre 0 a celkové plicní skóre 300. Je zde několik dalších příkladů chybění korelace mezi plicním skóre a klinickým respiračním skóre. Bez ohledu na to, zda je makroskopické pozorování validní pro analýzu přínosu vakcíny, může být uzavřeno, že ve vakcinované skupině 1 bylo málo zvířat s lézemi a závažnost těchto lézí byla snížena.
Závěrem, mnoho z parametrů použitých pro hodnocení účinku vakcíny z hlediska pokusné infekce v den 110 po vakcinaci korelované dobře jeden s druhým. Během periody (3 až 9 DPC), ve které je viremie nejzřetelnější, se vyskytla signifikantní leukopénie a vzestup tělesné teploty.
V době infekce byla prasata asi 20 týdnů stará nebo o 12 týdnů starší než prasata infikovaná v příkladu 3. Mnoho klinických příznaků zaznamenávaných v této studii bylo více závažných. Například, vzestup tělesné (rektální) teploty byl zvýšen po dobu 8 dnů v této studii proti 5 dnům ve studii imunogenicity. Závažnost leukopénie v nevakcinované infikované kontrolní skupině (skupina 3) v této studii byla mnohem více dramatická než v infikované kontrolní skupině ve studii imunogenicity. V pozdější studii vykazovala infikovaná kontrolní skupina pokles počtu WBC o 43 % až 27 % (3 až 9 DPC). Ve studii imunogenicity vykazovala infikovaná kontrolní skupina snížení o 15 až 21 % od 2. do 9. dne po infekci. Počet dní, ve kterých byla detekována viremie během post infekční periody (1 až 14 DPC) pro vakcinovanou infikovanou skupinu ve studii imunogenicity, byl 0 zmožných 110 dní ve srovnání se 45 ze 110 dní v infikované kontrolní skupině v této studii, tak zvýší závažnosti klinických příznaků nebylo plně způsobeno zvýšením trvání viremie.
Post-infekční výsledky této studie ukazují, že vakcinace PRRS-MLV vakcínou v dávce 3,32 log na 2,0 ml dává ochranu před infekcí virulentním PRRS virem v den 110 po vakcinaci. Tyto výsledky jsou: 1) vakcinovaná zvířata byla zcela negativní pro viremii během 21 denního období pozorování po infekci, 2) kromě minoritního výskytu respiračních, fekálních, nasálních nebo orálních příznaků byla vakcinovaná prasata pozorována jako normální z hlediska klinických příznaků, 3) hmotnostní přírůstek nevakcinovaných prasat byl signifikantně vyšší než hmotnostní přírůstek nevakcinovaných infikovaných selat, 4) vakcinovaná selata nevykazovala zaznamenání hodný vzestup tělesné teploty, 5) žádné významné snížení počtu bílých krvinek se nevyskytlo u vakcinovaných prasat, 6) výskyt a závažnost parenchymových a pleurálních lézí byl nižší u vakcinovaných prasat.
Příklad 5
V tomto příkladu byla vakcína PRRS-MLV pasáž 75 popsána v příkladu 1 a 3 testovaná pro určení nástupu imunity. Sedm dní před začátkem studie bylo 35 prasat testováno na PRRS protilátky za použití imunoperoxidázového testu (IPT) a na přítomnost PRRS viru v krvi izolací viru na MA-104 buňkách. Prasata ve skupině 1 byla vakcinována intramuskulárně 2,0 ml vakcíny PRRS-MLV pasáž 75 v den 0 pokusu. 10 prasat ve skupině 2 bylo vakcinováno stejným způsobem v den pokusu 7. Deset prasat skupiny 3 a 5 prasat skupiny 4 bylo udržováno v separátních místnostech, ale ve stejném prostředí a sloužili jako nevakcinované současné kontroly. Prasata ve skupině 1, 2 a 3 byla infikována v den 14 pokusu. Infekční inokulum, skládající se z virulentního PRRS viru (VR-2332, pasáž 3, 3,7 log10 viru na 1,0 ml) bylo podáno intranasálně (2,0 ml/prase). Prasata skupiny 4 zůstala neinfikována. Všechna prasata byla monitorována po dobu 10 dní na klinické příznaky respiračního onemocnění. Všechna prasata byla usmrcena v závěru studie pro hodnocení plicních lézí.
V době infekce byla prasata skupiny 1 sérologicky pozitivní podle IPT testu, ale nikoli na sérum neutralizační aktivitu. Oproti tomu, všechna ostatní prasata obsahující prasata skupiny 2 byla negativní podle obou postupů. 50 % prasat ze skupiny 2 bylo pozitivních při testu IPT v den 7 DPC a 100 % v den 10 DPC. U jednoho prasete ze skupiny 1 a 2 se vyvinula SN aktivita v den 10 DPC a v den 7 DPC, v příslušném pořadí. SN výsledky nejsou signifikantně odlišné při p=0,05. Výsledky této studie ukazují, že ochrana byla zvýšena v důsledku ošetření, i když byla
-13CZ 296208 B6 prasata v době infekce buď serologicky negativní, nebo bez sérum neutralizační aktivity. Ochrana nemusí být přímo vázána na protilátkovou imunitu. Buňkami zprostředkovaná imunita v odpovědi na vakcinaci modifikovanou živou vakcínou může hrát hlavní roli v ochraně proti virulentní infekci.
V příkladu 4 bylo chybění viremie po infekci významným kritériem pro demonstraci ochrany před vakcinaci. Nicméně, krátká doba mezi vakcinaci a infekcí v předkládané studii vakcinovaných zvířat neřešila post-vakcinační viremii. Také, protože infekce byla homologní infekce, nebylo možné rozlišit infekční virus od vakcinačního viru. 4 prasata ze skupiny 1 a 1 prase ze skupiny 2 byla testována jako negativní alespoň v jednom testu od 3 do 9 DPC. 100 % skupiny 3 bylo testováno jako pozitivní na viremii během stejného období.
Oproti předešlým příkladům byla v této studii detekována signifikantní přítomnost klinických respiračních příznaků. Skupina 3 měla 9 z 10 zvířat vykazujících respirační obtíže jeden nebo více dní (průměrný počet dnů = 3,6). Počet zvířat pro skupiny 1 a 2 vykazujících dechové obtíže po dobu jednoho nebo více dnů byl jedna a nula, v příslušném pořadí (p < 0,001). Incidence klinických příznaků pro nozdry byla podobná incidenci respiračních příznaků. Skupina 3 měla 8 z 10 vykazujících klinické příznaky pro nozdry jeden nebo více dní. Průměrná doba trvání klinických příznaků byla 3,1 dne. Oproti tomu, skupiny 1 a 2 se signifikantně lišily s průměrnou dobou trvání 1,3 dne a 0,1 dne, v příslušném pořadí (p < 0,001). Výskyty zbylých klinických parametrů byly normální.
Obě vakcínové skupiny dosáhly vyšší hmotnosti než infikované kontrolní skupiny. Skupina 2 dosáhla průměru 10,6 liber během 10 denního období pozorování ve srovnání se 7,8 librami pro skupinu 3 (p=0,01). Průměrný přírůstek hmotnosti pro skupinu 1 byl 9,6 liber, což není signifikantně odlišné ve srovnání se skupinou 3. Tato skupina měla dvě nejmenší selata, která vážila 7 a 12,5 liber, v příslušném pořadí, v den 0 pokusu a 6 a 12 liber, v příslušném pořadí, v den infekce. Průměrný přírůstek hmotnosti pro skupinu po odstranění dvou nejmenších selat je 12,3 libry, což je signifikantně odlišné od skupiny 3 (P < 0,001). Špatný přírůstek hmotnosti pro dvě prasata může být přisouzen jejich neschopnosti soutěžit s většími prasaty ve skupině. Tato prasata také měla průjem v průběhu postvakcinačního období pozorování. Prasata ve skupině 4 měla průměrný přírůstek hmotnosti 15,5 liber během 10 denního období. U prasat tohoto věku může být očekáván průměrný denní přírůstek hmotnosti 1,0 až 1,5 libry. Tyto výsledky ukazují, že vakcinace 7 a 14 dní před infekcí poskytuje ochranu, která umožňuje normální rychlost růstu.
Po infekci měla prasata ze skupiny 3 zvýšenou teplotu o 1 °F vůči průměru před infekcí po dobu průměrně 4,6 dne. Průměrný počet dní, po které měla prasata ve skupině 1 a 2 srovnatelné zvýšení teploty byl 0,5 a 1,1 dne, v příslušném pořadí (p < 0,001). Pouze 1 z 20 vakcinovaných selat mělo sestup o 1 °F po dva po sobě následující dny ve srovnání s 8 z 10 ve skupině 3. Statistický rozdíl mezi vakcinovanými a kontrolami byl p < 0,001. Tyto výsledky ukazují, že vakcinace prasat ve skupině 1 a 2 bránila výskytu horečky v důsledku expozice virulentnímu PRRS viru.
Prasata ve skupině 3 vykazovala dramatické snížení počtu bílých krvinek v den 3, 5 a 7 po infekci. Tyto výsledky přesně odpovídají vzestupu teploty, který zvířata vykazovala během stejného období. Prasata ve vakcinovaných skupinách měla mírnou leukopénii trvající 1 až 2 dny před návratem na hodnoty před infekcí. Hodnoty pro vakcinovaná prasata byly signifikantně odlišné od infikovaných kontrol (p = < 0,001). Tyto výsledky zdůrazňují hladiny ochrany poskytnout vakcinaci 7 nebo 14 dní před infekcí redukcí hladiny a trvání leukopénie.
Vakcíny 14 nebo 7 dní před infekcí redukovala závažnost plicních lézí. Obě vakcinované skupiny byly signifikantně odlišné od infikované kontrolní skupiny (P = 0,01). Skóre pro vakcinovaná zvířata jsou podobná jako skóre pro skupinu 4, normální kontrolní skupinu. Průměrné plicní skóre pro skupinu 3 bylo 97,1 ve srovnání s 9,3 a 7 pro skupiny 1 a 2, v příslušném pořadí. Léze pozorované v posledních dvou skupinách jsou považovány za normální a očekávané u zdravých běžně chovaných prasat.
-14CZ 296208 B6
Výsledky předkládané studie ukazují, že protektivní imunita byla stimulována během 7 dní vakcinace vakcínou modifikovaného živého viru. Signifikantní rozdíly byly pozorovány v teplotní odpovědi, přírůstku hmotnosti, leukopénii, plicních lézích a klinických příznacích po pokusné infekci u vakcinovaných prasat ve srovnání s nevakcinovanými infikovanými prasaty.
Příklad 6
V tomto příkladu byly dvě skupiny (A a B) po 100 tři týdny starých odstavených prasat ze PRRS pozitivních stád vakcinovány buď vakcínou PRRS-MLV pasáž 70 podle příkladu 1, nebo placebem (sterilní vodou). Třicet prasat z každé skupiny bylo monitorováno na přítomnost nežádoucích účinků sledováním tělesné teploty, přírůstku hmotnosti a reakce v místě injekce. Tato prasata a zbývajících 70 prasat z každé skupiny bylo také sledováno na jejich zdravotní stav po dobu 28 dnů po léčbě. Výsledky této studie ukazují, že vakcína nezpůsobuje žádné nežádoucí účinky a je bezpečná, pokud je správně použita v PRRS pozitivních stádech.
Rektální teploty před vakcinaci (-2 DPV) ukázaly, že prasata použitá v tomto pokusu byla normální zdravá prasata. Teploty skupiny A byly signifikantně vyšší než teploty skupiny B v den -2 a -1 pokusu (p < 0,05). Nebyly zde žádné signifikantní rozdíly mezi oběma skupinami vden 0, 1, 2 a 3 pokusu (p < 0,05). Tyto výsledky ukazují, že vakcinace modifikovanou živou PRRS vakcínou neexacerbuje stavy způsobující existující zvýšenou teplotu.
Žádné prase v žádné skupině nevykazovalo jakoukoliv poléčebnou reakci v místě inokulace. Tyto výsledky dále demonstrují bezpečnost vakcíny, pokud je podána vhodným způsobem.
Během 29 dnů ode dne -2 pokusu do 27 pokusu mělo 30 prasat skupiny A přírůstek hmotnosti průměrně 21,02 liber a 29 prasat skupiny B mělo průměrný přírůstek hmotnosti 18,18. Tento rozdíl je signifikantní při P < 0,05. Protože tento pokus byl proveden při aktivní PRRS infekci, ukazují výsledky bezpečnosti stejně jako účinnost.
Výsledky klinických pozorování ukazují, že vakcinace signifikantně redukuje incidenci několika klinických parametrů.
Redukované parametry zahrnují vzhled z 62 na 6, stolici z 48 na 24, oči ze 162 na 89, nozdry z 30 na 0, Hamu ze 30 na 0, chuť k jídlu z 91 na 13, léčbu z 37 na 14 úmrtí z 5 na 0. Snížení počtu ošetření ve skupině 1 ve srovnání se skupinou B bylo signifikantní (p < 0,05). Redukce klinických příznaků dává další důkaz, že modifikovaná živá PRRS vakcína je bezpečná, pokud je použita ve stádech vykazujících klinické známky asociované sPRRS virem.
Závěrem, bylo ukázáno, že vakcína je bezpečná, pokud je správně použita ve stádech vykazujících aktivní klinické onemocnění asociované s infekcí PRRS virem. Vakcína nezvýrazňuje klinické příznaky, ať asociované s PRRS virem nebo se sekundárními patogeny, o kterých je známo, že jsou přítomny u těchto stavů u prasat. Za podmínek, které existují v tomto místě testu tyto výsledky také ukazují benefiční účinek ve skupině, která dostala vakcínu.
Příklad 7
V tomto příkladu byl určován účinek vakcinace 20 „Dutch landrace breed“ selat, prostých specifického patogenu, smíšeného pohlaví, 5 týdnů starých, nízkých dávkou vakcíny ATCC VR-2332 pasáž 75 (ATCC VR-2495) na šíření Lelystad viru (LV). O přirozeném kmenu LV se soudí, že je významný pro predispozici prasat pro sekundární respirační infekce a že způsobuje špatný stav a vysoký stupeň mortality. Tento příklad poskytuje data týkající se účinku vakcíny na přenos evropského antigenního typu LV viru.
- 15CZ 296208 B6
Prasata byla separována do dvou skupin o 10 prasatech, jedna byla pokusná a druhá byla kontrolní skupina. Každé prase pokusné skupiny bylo vakcinováno intramuskulámě 2 ml ředěné vakcíny obsahující asi 103 TCID50 vakcíny ATCC VR-2332 pasáž 75. O šest týdnů později bylo 5 zvířat z každé skupiny infikováno intranasální inokulaci přirozenému evropskému kmenu LV (kod CDI-NL-2.91, Ter Huurne, 5. pasáž na prasečích alveolárních makrofágách) za použití infekční dávky 105 3 TCID50/2 ml. Po jednom dnu byla infikovaná prasata vrácena do svých ohrad.
Pokus testoval za, kdy a kolik z vakcinovaných a nevakcinovaných prasat vykazovalo klinické příznaky onemocnění nebo bylo viremických, a zda a kolik kontaktem infikovaných prasat bylo infikováno Lelysted virem. Infekce ve vakcinované a kontrolní skupině byla kvantifikována a stupeň přenosu Lelystad viru byl počítán ve vakcinované a kontrolní skupině. Pro úspěšnou vakcinaci musela být závažnost a trvání onemocnění a viremie a stupeň přenosu nižší než v kontrolní skupině.
Tato studie, testovaná za extremních podmínek nízké vakcinační dávky a heterologní infekce ukázala protektivní hodnotu vakcíny.
Vakcinace redukovala klinické známky onemocnění pod infekci. Signifikantně redukovala průměrnou rektální teplotu po infekci; signifikantně redukovala počet dní, po které byla infikována prasata viremická; a signifikantně redukovala závažnost viremie u infikovaných prasat. Dále, ačkoliv se přenos z přímo infikovaných a kontaktem infikovaných prasata vyskytoval u všech prasat ve vakcinované i nevakcinované skupině, byl zde signifikantní rozdíl v přenosu přirozeného typu LV mezi vakcinovanou a nevakcinovanou skupinou.
Vakcinace vakcínou amerického antigenního typu PRRS ATCC VR-2332 pasáž 75 byla proto účinná v navození ochrany před infekcí evropským antigenním typem Lelysted viru.
Příklad 8
Produkce vakcíny v komerčním rozsahu
Obrázek 1 ukazuje schématický diagram procesu pro použití v produkci komerčních množství živého modifikovaného Master Seed Culture viru z příkladu 1. Proces P10 začíná krokem P12, což je sterilizace všech kontejnerů. Sterilizace je preferovaně provedena radiací, ale může být také provedena termálně nebo chemicky. Typy kontejnerů zahrnují inokulační nádoby, např. 75 až 150 ml, pěti litrové nádoby, otočné kultivační zkumavky a nádoby ocelového bioreaktoru se vzduchovým mícháním.
Krok P14 obsahuje přípravu expanzních kultur hostitelských MA-104 buněk. Zásoba MA-104 buněčné linie, v pasáži 58, je uskladněna v kapalném dusíku a je použita pro dodání hostitelských buněk pro virovou kulturu do pasáže 78. Zásobní MA-104 kultury jsou kultivovány v nádobách o objemu 75 až 150 ml a obsahujících 50 až 150 ml média. Médium preferovaně obsahuje MEM smísené s 10% hovězím nebo fetálním telecím sérem a okolo 30 pg/ml neomycinu. Sterilní nádoby a média jsou preferovaně inokulovány asi 1 ml dřívější pasáže MA-104 kultury a jsou inkubovány při 35 až 37 °C po tři až sedm dní.
Expanze zásobních buněčných kultur preferovaně probíhá v nádobách od 150 ml až asi do 400 až
600 ml média v poměru 1:5 (objem:objem). Asi po 4 až 7 dnech inkubace při asi 35 až 37 °C může být těchto 400 až 600 ml média subkultivováno do pětilitrových nádob naplněných médiem. Alternativně, inokulum může být aplikováno v poměru 1:3,4 do otočné kultury mající kultivační plochu okolo 670 až 850 cm2 a 150 ml média, které je potom subkultivováno do jiných
-16CZ 296208 B6 otočných kultivačních nádob v poměru asi od 1:9 do 1:11. Subkultury jsou inkubovány asi po 4 až 7 dní asi při 35 až 37 °C.
Krok 16 obsahuje přípravu produkčních kultur virem infikovaných MA-104 buněk. Expanzní kultury kroku P14 jsou typicky dále expandovány do bioreaktorových nádob o větším objemu v poměru od asi 1:3 do asi 1:5 (objenr.objem). Produkční nádoby mohou zahrnovat, například, pětilitrové nádoby expanzních kultur nebo 401itrové kultivační nádoby z nerez oceli vybavené vzduchovým mícháním, kontrolou teploty a kontrolou pH. Nádoba je naplněna vhodným množstvím kultivačního média, inokulována MA-104 buňkami, inkubována při asi 35 °C po 4 až 7 dní a infikována virem Master Seed Culture podle příkladu 1. Tento virus bude mít preferovaně titr alespoň 106 TCID50 na ml podle CPE a bude přidán do nádob produkčních kultur v poměru alespoň okolo až 10 ml na 100 ml média. Produkční kultury jsou inkubovány asi při 35 °C až asi 37 °C po 2 až 3 dny po infekci atenuovaným virem.
Krok P18 obsahuje sklízení produkčních kultur kroku P16 po postinfekční inkubační periodě. Správná doba pro objemovou sklizeň by měla být určena pozorováním CPE, jak je ukázáno asi 10% makroskopickými změnami (okrouhlé buňky a degradace buněčné vrstvy) nebo 10% změnou pH. Produkční kultura podle kroku P16 je sklízena odsávačem s laminárním prouděním nalitím do sterilního kontejneru nebo v uzavřeném sklízecím systému za pozitivního tlaku. Objemově sklízený virus je zmrazen a uskladněn při teplotě asi od-40 °C do asi -70 °C.
Jsou získány alikvoty pro kontrolní měření kvality podle požadavků. Vzorky každé sklizně jsou testovány v thioglykolátu a sójovém kaseinovém trávícím médiu, které je inkubováno asi při 36 °C a 20 °C, v příslušném pořadí, po 14 dní při každé teplotě. Tento očkovací virus je použit pro potěr následujících kultur, pokud testování ukazuje titr alespoň okolo 105 TCnj50/ml podle CPE. Nedostačující materiál je sterilizován 5% chlornanem sodným po 24 hodin a autoklávován.
Krok P20 obsahuje sterilizaci a lyofílizaci zmrazeného viru získaného v kroku P18. Objem zmrazeného viru je potom rozmražen a preferovaně smísen s farmakologický kompatibilním stabilizátorem, jako je konvenční sacharózový želatinový stabilizátor, v poměru asi tři části rozmražené MAster Seed Culture asi na jednu část stabilizátoru. Fyziologický roztok může být přidán pro úpravu konečné koncentrace viru.
Směs je potom rozdělena do subobjemů dávek asi po 0,28 ml kapaliny pro každou dávku, kdy každá dávka obsahuje asi 0,20 ml PRRS kultury na dávku v minimálním titru 104'9 TCID5o na dávku. Je zde uvedeno, že preferované množství stabilizované produkční kultury, které vzniklo z kroků P16, P18 a P20 bude dostatečné pro zisk asi 150 000 a 500 000 stabilizovaných dávek. Například, 25 dávek bude obsahovat asi 7,0 ml subobjemu. Tyto subobjemy jsou nárazově zmrazený, preferovaně v kapalném dusíku. Sušicí komůrka je udržována ve vakuu, zatímco teplota je zvýšena na maximum asi 30 °C a subobjem je udržován maximálně po 18 hodin pro sublimaci vlhkosti ve vzorku.
Krok 22 obsahuje kontinuální monitorování vakcinovaného produktu, který vzešel z kroku P20. Kontejner konečných vzorků na série jedné lázně PRRS vakcíny je testována ve skvrnách pro zjištění toho, že obsah vlhkosti klesl pod 5 %. Série s obsahem vlhkosti vyšším než 4 % nebo nižším než 1 % budou testovány na svou sílu v šestiměsíčním intervalech. Pro měření bezpečnosti jsou morčata infikována hmotnostními ekvivalenty 10 dávek vakcíny a pozorování po dobu 21 dní na známky nežádoucí klinické reakce.
VR-2332 virus byl také za chladu adaptován paralelně satenuací popsanou v příkladu 1. Toto bylo provedeno proto, aby se vyvinul vakcínový kmen, který brání odpuzení viru infikovaným zvířetem. Taková chladová adaptace byla provedena postupným pasážováním při teplotě 31 až °C. Vzniklé kmeny budou také stimulovat imunitní odpověď.
Claims (16)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Vakcínová kompozice obsahující živý virus reprodukčního a respiračního syndromu prasat neboli PRRS v modifikované a v podstatě avirulentní formě ve směsi s farmakologicky kompatibilním nosičem, vyznačující se tím, že uvedeným virem je ATCC-VR2332 virus pasážovaný alespoň 70krát na buněčné kultuře z opičí buněčné linie, který nezpůsobuje chorobu po svém podání prasatům nebo jiným savcům a je schopen indukovat imunitní odpověď, která imunizuje savce proti patogenním formám PRRS.
- 2. Kompozice podle nároku 1, vy z n a č u j í c í se tím, že uvedeným virem je ATCC-VR2495.
- 3. Kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený nosič obsahuje sacharózový želatinový stabilizátor.
- 4. Použití živého viru reprodukčního a respiračního syndromu prasat neboli PRRS smíšeného s farmakologicky kompatibilním nosičem, kde virem je ATCC-VR2332 virus pasážovaný alespoň 70krát na buněčné kultuře z opičí buněčné linie pro modifikaci viru a vytvoření v podstatě avirulentní formy, takže pokud je tento virus podán prasatům nebo jiným savcům citlivým na PRRS, nezpůsobuje onemocnění, ale je schopen indukovat imunitní odpověď, která imunizuje savce proti patogenním formám PRRS, pro výrobu vakcínové kompozice pro imunizace prasat proti PRRS.
- 5. Způsob produkce průmyslového množství PRRS vakcíny podle nároku 1,vyznačující se tím, že zahrnuje kroky:přípravu produkční kultury v podstatě avirulentní formy ATCC-VR2332 viru pasážováním tohoto viru alespoň 70krát na buněčné kultuře z opičí buněčné linie pro modifikaci viru a vytvoření v podstatě avirulentního viru, takže pokud je tento virus podán prasatům nebo jiným savcům citlivým na PRRS, nezpůsobuje onemocnění, ale je schopen indukovat imunitní odpověď, která imunizuje savce proti patogenním formám PRRS, a generování produkční kultury z modifikovaného a v podstatě avirulentního ATCC-VR2332 viru;sklízení produkční virové kultury;přidání stabilizačního agens do produkční virové kultury; a lyofilizaci produkční virové kultury pro produkci průmyslového množství PRRS vakcíny.
- 6. Způsob podle nároku 5, vyznačující se tím, že krok přípravy zahrnuje infikování opičí buněčné linie uvedeným virem a inkubování výsledné kultury při teplotě asi od 35 °C asi do 37 °C.
- 7. Způsob podle nároku 5, vyznačující se tím, že krok sklízení zahrnuje zmrazení virové kultury.
- 8. Způsob podle nároku 5, v y z n a č u j í c í se tím, že krok přidání zahrnuje smísení asi jednoho dílu sacharózového želatinového stabilizátoru asi se 3 díly virové kultury.
- 9. Způsob podle nároku 5, vyznačující se tím, že krok lyofilizace zahrnuje sublimaci vlhkosti ze zmrazeného vzorku virové kultury.-18CZ 296208 B6
- 10. Způsob podle nároku 5, vyzn a č u j ící se tím, že uvedená kultura se vyrobí v sériovém objemu od 150 000 do 500 000 dávek o objemu 0,28 ml na dávku a potom se rozdělí do dávek uvedeného objemu.
- 11. Způsob podle nároku 10, vy z n a č u j í c í se tím, že dále zahrnuje podrozdělení sériového objemu před krokem lyofilizace.
- 12. Způsob podle nároku 5, v y z n a č u j í c í se tím, že uvedeným v podstatě avirulentním virem je ATCC-VR2495 virus.
- 13. Vakcínová kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že je produkována způsobem produkce průmyslového množství PRRS vakcíny, zahrnujícím kroky:přípravu produkční kultury v podstatě avirulentní formy ATCC-VR2332 viru pasážováním tohoto viru alespoň 70krát na buněčné kultuře na opičí buněčné linie pro modifikaci viru a vytvoření v podstatě avirulentního viru, takže pokud je uvedený virus podán prasatům nebo jiným savcům citlivým na PRRS, nezpůsobuje chorobu, aleje schopen indukovat imunitní odpověď, která imunizuje savce proti patogenním formám PRRS, a generování produkční kultury z tohoto viru;sklízení produkční virové kultury;přidání stabilizačního agens do produkční vírové kultury; a lyofilizace produkční virové kultury pro produkci průmyslového množství PRRS vakcíny.
- 14. Použití podle nároku 4, kde uvedeným virem je virus pasážovaný 75krát.
- 15. Kompozice podle nároku 1,vyznačující se tím, že uvedený virem je virus pasážovaný 75krát.
- 16. Způsob podle nároku 5, vyznačující se tím, že uvedeným virem je virus pasážovaný 75krát.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/440,750 US6042830A (en) | 1992-08-05 | 1995-05-15 | Viral agent associated with mystery swine disease |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ361697A3 CZ361697A3 (cs) | 1998-06-17 |
| CZ296208B6 true CZ296208B6 (cs) | 2006-02-15 |
Family
ID=23750027
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ0361697A CZ296208B6 (cs) | 1995-05-15 | 1996-05-14 | Vakcínová kompozice a zpusob produkce prumyslového mnozství PRRS vakcíny |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6042830A (cs) |
| EP (1) | EP0830142B1 (cs) |
| JP (1) | JP4300252B2 (cs) |
| KR (1) | KR19990014840A (cs) |
| CN (1) | CN1130227C (cs) |
| AT (1) | ATE213166T1 (cs) |
| AU (1) | AU717395B2 (cs) |
| BR (1) | BR9608535B1 (cs) |
| CA (1) | CA2221242C (cs) |
| CZ (1) | CZ296208B6 (cs) |
| DE (1) | DE69619233T2 (cs) |
| DK (1) | DK0830142T3 (cs) |
| ES (1) | ES2170234T3 (cs) |
| HK (1) | HK1016872A1 (cs) |
| HU (1) | HU223763B1 (cs) |
| MX (1) | MX9708804A (cs) |
| PL (1) | PL184973B1 (cs) |
| PT (1) | PT830142E (cs) |
| RU (1) | RU2166327C2 (cs) |
| SK (1) | SK283579B6 (cs) |
| UA (1) | UA39991C2 (cs) |
| WO (1) | WO1996036356A1 (cs) |
Families Citing this family (67)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2103460C (en) * | 1991-06-06 | 2000-09-26 | Gert Wensvoort | Causative agent of the mystery swine disease, vaccine compositions and diagnostic kits |
| ATE144144T1 (de) † | 1991-08-26 | 1996-11-15 | James Edward Collins | Vakzine gegen und diagnosemethode für das schweine-unfruchtbarkeits- und atmungs-syndrom (suas) |
| US6982160B2 (en) | 1991-08-26 | 2006-01-03 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Immunogenic compositions that include SIRS virus |
| US5846805A (en) | 1991-08-26 | 1998-12-08 | Boehringer Ingelheim Animal Health, Inc. | Culture of swine infertility and respiratory syndrome virus in simian cells |
| US6080570A (en) * | 1991-08-26 | 2000-06-27 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Method of producing a vaccine for Swine Infertility and Respiratory Syndrome |
| US5695766A (en) * | 1992-10-30 | 1997-12-09 | Iowa State University Research Foundation | Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome viruses which produce lesions in pigs and vaccines that protect pigs against said syndrome |
| US6380376B1 (en) * | 1992-10-30 | 2002-04-30 | Iowa State University Research Foundation | Proteins encoded by polynucleic acids of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) |
| US6773908B1 (en) | 1992-10-30 | 2004-08-10 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Proteins encoded by polynucleic acids of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) |
| US6592873B1 (en) | 1992-10-30 | 2003-07-15 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Polynucleic acids isolated from a porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) and proteins encoded by the polynucleic acids |
| US5866401A (en) * | 1996-03-01 | 1999-02-02 | Schering Corporation | Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine |
| JP3135069B2 (ja) * | 1996-03-01 | 2001-02-13 | シェーリング コーポレイション | ブタ生殖および呼吸症候群ワクチン |
| EP0839912A1 (en) * | 1996-10-30 | 1998-05-06 | Instituut Voor Dierhouderij En Diergezondheid (Id-Dlo) | Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof |
| US20040224327A1 (en) * | 1996-10-30 | 2004-11-11 | Meulenberg Johanna Jacoba Maria | Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof |
| FR2771375A1 (fr) | 1997-11-25 | 1999-05-28 | Saint Gobain Isover | Procede et dispositif de conditionnement de materiaux compressibles |
| US7132106B2 (en) * | 1998-12-22 | 2006-11-07 | Pfizer Inc. | Infectious cDNA clone of North American porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus and uses thereof |
| NZ501264A (en) | 1998-12-22 | 2001-09-28 | Pfizer Prod Inc | Polynucleotide DNA sequence encoding an infectious RNA molecule encoding a North American PRRS |
| US7618797B2 (en) * | 1998-12-22 | 2009-11-17 | Pfizer Inc | Infectious cDNA clone of North American porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus and uses thereof |
| US7691389B2 (en) | 1998-12-22 | 2010-04-06 | Pfizer Inc | Infectious cDNA clone of north american porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus and uses thereof |
| EP1157121B1 (en) * | 1999-03-08 | 2013-04-24 | Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH | Prrsv replicon |
| MXPA01010681A (es) * | 1999-04-22 | 2003-08-20 | Us Agriculture | Vacuna de sindrome respiratorio y reproductiva porcina a base de ja-142 aislado. |
| US20020012670A1 (en) * | 2000-01-26 | 2002-01-31 | Knut Elbers | Recombinant attenuation of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRSV) |
| AU2002249852A1 (en) * | 2000-11-09 | 2002-08-12 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Enhancement of immune response to vaccine by interferon alpha |
| US6841364B2 (en) * | 2002-01-22 | 2005-01-11 | Protatek International, Inc. | Infectious cDNA clones of porcine reproductive and respiratory syndrome virus and expression vectors thereof |
| AR049924A1 (es) * | 2004-06-18 | 2006-09-13 | Univ Minnesota | Identificacion de organismos viralmente infectados y vacunados |
| US7632636B2 (en) * | 2004-09-21 | 2009-12-15 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Porcine reproductive and respiratory syndrome isolates and methods of use |
| UA95602C2 (ru) | 2004-12-30 | 2011-08-25 | Берингер Ингельхейм Ветмедика, Инк. | Иммуногенная композиция цвс2 и способы приготовления такой композиции |
| US7833707B2 (en) | 2004-12-30 | 2010-11-16 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Methods of overexpression and recovery of porcine circovirus type 2 ORF2 |
| AU2006205852A1 (en) | 2005-01-13 | 2006-07-20 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Improved PRRS vaccines |
| US8834891B2 (en) | 2005-03-14 | 2014-09-16 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Immunogenic compositions comprising Lawsonia intracellularis |
| CA2894069C (en) | 2005-06-24 | 2019-02-26 | Regents Of The University Of Minnesota | Prrs viruses, infectious clones, mutants thereof, and methods of use |
| EP1968630B1 (en) | 2005-12-29 | 2018-01-24 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Multivalent pcv2 immunogenic compositions |
| DK3127551T3 (da) | 2005-12-29 | 2020-10-12 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Pcv2-immunogen-sammensætning til at mindske kliniske symptomer i grise |
| US20100129397A1 (en) | 2006-12-11 | 2010-05-27 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Effective method of treatment of porcine circovirus and lawsonia intracellularis infections |
| PT2481420T (pt) | 2006-12-15 | 2019-05-31 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Vacina para porcos anti-pcv2 de dose única |
| EP1941903A1 (en) | 2007-01-03 | 2008-07-09 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Prophylaxis and treatment of PRDC |
| CN100523177C (zh) * | 2007-01-09 | 2009-08-05 | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 | 猪繁殖与呼吸综合症病毒弱毒疫苗株及其应用 |
| AR064888A1 (es) * | 2007-01-12 | 2009-04-29 | Univ Illinois | Celulas no simias para el crecimiento del virus del sindrome reproductor y respiratorio porcino (prrs) |
| US8563313B2 (en) * | 2007-02-13 | 2013-10-22 | Washington State University Research Foundation | Macrophage cell-lines for propagation of porcine reproductive and respiratory syndrome virus |
| EP1958644A1 (en) | 2007-02-13 | 2008-08-20 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Prevention and treatment of sub-clinical pcvd |
| US7666585B2 (en) * | 2007-06-15 | 2010-02-23 | Protatek International, Inc. | Construction of chimera PRRSV, compositions and vaccine preparations |
| US7829274B2 (en) | 2007-09-04 | 2010-11-09 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Reduction of concomitant infections in pigs by the use of PCV2 antigen |
| US20090317423A1 (en) | 2008-01-23 | 2009-12-24 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Pcv2 mycoplasma hyopneumoniae immunogenic compositions and methods of producing such compositions |
| CN101612395B (zh) * | 2008-06-24 | 2012-02-08 | 扬州优邦生物制药有限公司 | 一种培养敏感细胞生产蓝耳病疫苗的方法 |
| US20100003278A1 (en) * | 2008-07-03 | 2010-01-07 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Immunological Compositions Effective for Lessening the Severity or Incidence of PRRSV Signs and Methods of Use Thereof |
| WO2010025109A1 (en) * | 2008-08-25 | 2010-03-04 | Boehringer Ingelheim Vetmedia, Inc. | Vaccine against highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome (hp prrs) |
| JP5306943B2 (ja) * | 2009-08-24 | 2013-10-02 | 全国農業協同組合連合会 | 弱毒ウイルスの作出方法 |
| TWI627281B (zh) * | 2009-09-02 | 2018-06-21 | 百靈佳殷格翰家畜藥品公司 | 降低ｐｃｖ－２組合物殺病毒活性之方法及具有改良免疫原性之ｐｃｖ－２組合物 |
| UA108902C2 (uk) | 2010-11-10 | 2015-06-25 | Вірус північноамериканського репродуктивного та респіраторного синдрому свиней (prrs) та його застосування | |
| PL2675475T3 (pl) * | 2011-02-17 | 2015-12-31 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Nowy europejski szczep prrs |
| US9944902B2 (en) | 2011-02-17 | 2018-04-17 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Commercial scale process for production of PRRSV |
| US9315781B2 (en) | 2011-07-29 | 2016-04-19 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Infectious CDNA clone of european PRRS virus and uses thereof |
| US9187731B2 (en) | 2011-07-29 | 2015-11-17 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | PRRS virus inducing type I interferon in susceptible cells |
| US8906385B2 (en) | 2011-12-01 | 2014-12-09 | University Of Maryland, College Park | Interferon-inducing porcine reproductive and respiratory syndrome virus isolate |
| WO2013173443A1 (en) | 2012-05-17 | 2013-11-21 | Zoetis Llc | Effective vaccination against porcine reproductive and respiratory syndrome (prrs) virus prior to weaning |
| CN105308178B (zh) | 2012-12-07 | 2019-06-07 | 伊利诺伊大学评议会 | 猪繁殖与呼吸综合征病毒组合物及其用途 |
| EP2968513A2 (en) | 2013-03-15 | 2016-01-20 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, compositions, vaccine and methods of use |
| US9505808B2 (en) | 2013-10-02 | 2016-11-29 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | PCV2 ORF2 protein variant and virus like particles composed thereof |
| MX2020010248A (es) | 2013-12-20 | 2020-10-16 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Variante del virus prrs, clon de adnc del virus europeo y sus usos. |
| CN103690633B (zh) * | 2013-12-25 | 2015-10-28 | 成都乾坤动物药业有限公司 | 一种含有枇杷叶的治疗畜禽呼吸道疾病综合征的兽用药物组合物 |
| US9920302B2 (en) | 2015-08-31 | 2018-03-20 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Pestivirus vaccines for congenital tremors |
| US10188725B2 (en) | 2015-12-14 | 2019-01-29 | Elanco Us Inc. | Hybrid core feline vaccines |
| DK3534939T3 (da) | 2016-11-03 | 2023-04-24 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Vaccine mod porcin parvovirus og porcin reproduktions- og respirationssyndromvirus og fremgangsmåder til fremstilling deraf |
| WO2018099889A1 (en) * | 2016-11-29 | 2018-06-07 | Intervet International B.V. | Swine vaccine |
| BR112019012158A2 (pt) | 2016-12-14 | 2019-11-12 | Zoetis Services Llc | vacinação eficaz contra cepas europeias de vírus da síndrome reprodutiva e respiratória suína (prrs) antes do desmame |
| EP4335455A3 (en) | 2017-04-13 | 2024-05-22 | Intervet International B.V. | Vaccines containing swine pathogens for associated non-mixed use |
| US11701419B2 (en) | 2019-04-04 | 2023-07-18 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Porcine Circovirus Type 3 (PCV3) vaccines, and production and uses thereof |
| BR112023001324A2 (pt) | 2020-07-24 | 2023-02-14 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Combinação de vacina de suíno |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4753884A (en) * | 1986-01-28 | 1988-06-28 | Novagene, Inc. | Pseudorabies virus mutants, vaccines containing same, methods for the production of same and methods for the use of same |
| ATE144144T1 (de) * | 1991-08-26 | 1996-11-15 | James Edward Collins | Vakzine gegen und diagnosemethode für das schweine-unfruchtbarkeits- und atmungs-syndrom (suas) |
| CA2076744C (en) * | 1991-08-26 | 2000-06-27 | Danny W. Chladek | Viral agent associated with mystery swine disease |
| US5695766A (en) * | 1992-10-30 | 1997-12-09 | Iowa State University Research Foundation | Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome viruses which produce lesions in pigs and vaccines that protect pigs against said syndrome |
| CZ289743B6 (cs) * | 1993-02-08 | 2002-03-13 | Bayer Corporation | Izolát viru vepřového reprodukčního a respiračního syndromu PRRSV, způsob kultivace PRRSV, tkáňová kultura, způsob přípravy vakcíny a vakcína obsahující PRRSV izolát |
| ES2074950B1 (es) * | 1993-09-17 | 1996-03-16 | Iberica Cyanamid | Vacuna para la prevencion de la enfermedad reproductiva y respiratoria de la cerda. |
-
1995
- 1995-05-15 US US08/440,750 patent/US6042830A/en not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-05-14 CN CN96195440A patent/CN1130227C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1996-05-14 CZ CZ0361697A patent/CZ296208B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1996-05-14 HU HU9802493A patent/HU223763B1/hu active IP Right Grant
- 1996-05-14 DK DK96915746T patent/DK0830142T3/da active
- 1996-05-14 EP EP19960915746 patent/EP0830142B1/en not_active Revoked
- 1996-05-14 BR BRPI9608535-5A patent/BR9608535B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1996-05-14 CA CA 2221242 patent/CA2221242C/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-05-14 PL PL96323365A patent/PL184973B1/pl unknown
- 1996-05-14 WO PCT/US1996/006800 patent/WO1996036356A1/en active IP Right Grant
- 1996-05-14 AT AT96915746T patent/ATE213166T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-05-14 UA UA97126039A patent/UA39991C2/uk unknown
- 1996-05-14 PT PT96915746T patent/PT830142E/pt unknown
- 1996-05-14 DE DE1996619233 patent/DE69619233T2/de not_active Revoked
- 1996-05-14 RU RU97120712A patent/RU2166327C2/ru active
- 1996-05-14 JP JP53495496A patent/JP4300252B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1996-05-14 KR KR1019970708184A patent/KR19990014840A/ko not_active Application Discontinuation
- 1996-05-14 ES ES96915746T patent/ES2170234T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-05-14 SK SK1539-97A patent/SK283579B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1996-05-14 AU AU57443/96A patent/AU717395B2/en not_active Expired
- 1996-08-15 US US08/698,240 patent/US5989563A/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-11-14 MX MX9708804A patent/MX9708804A/es unknown
-
1998
- 1998-12-31 HK HK98119251A patent/HK1016872A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ296208B6 (cs) | Vakcínová kompozice a zpusob produkce prumyslového mnozství PRRS vakcíny | |
| US10668144B2 (en) | European PRRSV strain | |
| CA2076744C (en) | Viral agent associated with mystery swine disease | |
| JP3710095B2 (ja) | ブタ生殖及び呼吸症候群ウイルスの増殖方法並びにワクチンにおけるその使用 | |
| US6110467A (en) | Isolated porcine respiratory and reproductive virus, vaccines and methods of protecting a pig against a disease caused by a porcine respiratory and reproductive virus | |
| US6001370A (en) | Attenuated strain of the virus causing the porcine reproductive respiratory syndrome (PRRS), and vaccines | |
| AU734320B2 (en) | Vaccines inducing an immune response against viruses causing porcine respiratory and reproductive diseases | |
| AU771883B2 (en) | Vaccines inducing an immune response against viruses causing porcine respiratory and reproductive diseases | |
| MXPA97010149A (en) | Live pathogenicity live virus vaccines and methods of preparation of mis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20160514 |