SK140899A3 - Protein coding dna, a bacterium belonging to the genus escherichiaand process for producing amino acid - Google Patents

Protein coding dna, a bacterium belonging to the genus escherichiaand process for producing amino acid Download PDF

Info

Publication number
SK140899A3
SK140899A3 SK1408-99A SK140899A SK140899A3 SK 140899 A3 SK140899 A3 SK 140899A3 SK 140899 A SK140899 A SK 140899A SK 140899 A3 SK140899 A3 SK 140899A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
amino acid
dna
protein
rhtb
homoserine
Prior art date
Application number
SK1408-99A
Other languages
English (en)
Inventor
Arkadievich V Livshits
Pavlovna N Zakataeva
Venyamiovich Vladimir Aleoshin
Valentinovna Alla Belareova
Lyvovna Irina Tokhmakova
Original Assignee
Ajinomoto Kk
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ajinomoto Kk filed Critical Ajinomoto Kk
Publication of SK140899A3 publication Critical patent/SK140899A3/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/06—Alanine; Leucine; Isoleucine; Serine; Homoserine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/24—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
    • C07K14/245—Escherichia (G)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/08—Lysine; Diaminopimelic acid; Threonine; Valine

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

DNA kódujúca proteín, baktéria patriaca do rodu Escherichia a spôsob výroby aminokyseliny
Oblasť techniky < . >
I '
Predkladaný vynález sa týka spôsobu výroby aminokyseliny, najmä spôsobu výrby L-homoserínu, L-izoleucínu, L-valínu alebo L-treonínu za použitia baktérie patriacej do rodu Escherichia.
Doterajší stav techniky
Predkladatelia tohto vynálezu získali, pomocou E. Coli K-12, mutant, ktorý má mutáciu thrR (tu označenú ako rhtA23), ktorá je spojená s vysokými koncentráciami treonínu (> 40 mg/ml) alebo homoserínu (> 5 mg/ml) v minimálnom médiu (Astaurova, O. B. et al., Appl. Bioch. and Microbiol., 21, 611-616 (1985)). Na základe rhtA23 mutácie sa získal kmeň, ktorý vo zvýšenej miere produkoval treonín
I (SU patent č. 974817) a kmene produkujúce homoserín a kyselinu glutámovú (Astaurova, O. B. et al., Appl. Bioch. and Microbiol., 27, 556-561 (1991)).
Okrem toho predkladatelia vynálezu zistili, že rthA gén sa vyskytuje v 18 min na chromozóme E. coli a rthA gén je rovnaký ako ORF1 medzi pexB a ompX génmi. Jednotka exprimujúca proteín kódovaný ORF1 sa označila ako rthA (rth: rezistencia voči homoserínu a treonínu) gén. Gén rthA zahŕňa 5'-nekódujúcu oblasť vrátane SD sekvencie, ORF1 a terminátora. Predkladatelia vynálezu tiež zistili, že štandardný rthA gén sa zúčastňuje na rezistencii voči treonínu a homoserínu, ak je klonovaný multikópiovo a zvýšenie expresie rthA génu zvyšuje produkciu aminokyselín u baktérie patriacej do rodu Escherichia, ktorá má schopnosť produkovať L-lyzín, L-valín alebo L-treonín (Abstrakty zo 17. Medzinárodného kongresu biochémie a molekulárnej biológie spojeného s Výročným stretnutím Americkej spoločnosti pre biochémiu a molekulárnu biológiu, San Francisco, Kalifornia, 24.-29. August 1997, abstrakt č. 457).
-2Zistilo sa, že v E. coli počas klonovania rthA génu existujú najmenej dva odlišné gény, ktoré sa podieľajú na rezistencii voči homoserínu multikópiovo. Jedným z génov je rthA gén, druhý gén však objasnený nebol.
• 1 »,
Podstata vynálezu
Predmetom vynálezu je gén, ktorý sa podieľa na rezistencii voči homoserínu a spôsob produkcie aminokyseliny, najmä L-homoserínu, L-alanínu, L-izoleucínu a L-treonínu vo vysokom výťažku.
Zistilo sa, že oblasť na 86 min u chromozómu E. coli, ak je klonovaná multikópiovým vektorom, prepožičiava rezistenciu voči L-homoserínu u buniek E. coli a v prípade amplifikácie oblasti možno produktivitu aminokyselín u E. coli zvýšiť podobne ako rthA gén. Na základe týchto zistení bol predložený tento vynález.
Podstatou vynálezu je:
(1) DNA kódujúca proteín, ktorým je:
(A) proteín, ktorý obsahuje aminokyselinovú sekvenciu, ako je znázornené v SÉQ ID No: 2 v zozname sekvencií;
alebo (B) proteín, ktorý obsahuje aminokyselinovú sekvenciu vrátane delécie, substitúcie, inzercie alebo adície jednej alebo niekoľkých aminokyselín v aminokyselinovej sekvencii znázornenej v SEQ ID No: 2 v zozname sekvencií a tento proteín má aktivitu, ktorá spôsobuje, že baktéria s týmto proteínom je rezistentná voči Lhomoserínu, (2) DNA podľa (1), ktorou je:
(a) DNA, ktorá obsahuje nukleotidovú sekvenciu zodpovedajúcu nukleotidovým číslam 557 až 1171 v nukleotidovej sekvencii znázornenej v SEQ ID No: 1 v sekvenčnom zozname; alebo (b) DNA, ktorá hybridizuje s nukleotidovou sekvenciou zodpovedajúcou nukleotidovým číslam 557 až 1171 v nukleotidovej sekvencii znázornenej v SEQ ID No: 1 v sekvenčnom zozname za presných podmienok a ktorá kóduje proteín, ktorý spôsobuje, že baktéria s jeho obsahom je L-homoserín rezistentná,
-3(3) baktériu patriacu do rodu Escherichia, kde sa rezistencia baktérie voči Lhomoserínu zvýši amplifikáciou počtu kópií DNA (1) v bakteriálnej bunke, (4) baktériu (3), kde DNA (1) je udržiavaná na multikópiovom vektore v bakteriálnej bunke,
I, ’ (5) baktériu (3), kde DNA (1) je udržiavaná na transpozóne v bakteriálnej bunke, (6) spôsob výroby aminokyseliny, ktorý zahŕňa kroky kultivácie baktérie ktorejkoľvek z (3) alebo (5), ktorá má schopnosť produkovať aminokyselinu v kultivačnom médiu, schopnosť produkovať a akumulovať aminokyselinu v médiu, a jej získavania média, a (7) spôsob (6), kde aminokyselinou je prinajmenšom jedna aminokyselina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z L-homoserínu, L-alanínu, L-izoleucínu a L-treonínu.
DNA podľa predkladaného vynálezu možno označiť ako rhtB gén, proteín kódovaný rhtB génom možno označiť ako RhtB proteín, aktivitu RhtB proteínu, ktorá sa podieľa na rezistencii baktérie voči L-homoserínu (t.j. aktivitu, ktorá spôsobuje, že baktéria, ktorá má RhtB proteín, je rezistentná voči L-homoserínu), . možno označiť ako Rh aktivitu a štrukturálny gén kódujúci RhtB proteín v RhtB géne možno označiť ako rhtB štrukturálny gén. Termín zvýšenie Rh aktivity vyjadruje prepožičanie rezistencie baktérie voči homoserínu alebo zvýšenie rezistencie pomocou zvyšujúceho sa počtu molekúl RhtB proteínu, zvyšujúcej sa špecifickej aktivity RhtB proteínu alebo desenzibilizáciou negatívnej regulácie voči expresii alebo aktivite RhtB proteínu a pod. Termín DNA kódujúca proteín znamená DNA, ktorej jeden reťazec kóduje proteín, ak DNA je dvojreťazcová. Rezistencia voči L-homoserínu je vlastnosťou, ktorá sa prejaví rastom baktérie v minimálnom médiu s obsahom L-homoserínu s koncentráciou, pri ktorej štandardný kmeň baktérie nemôže rásť, zvyčajne pri 10 mg/ml. Schopnosť produkovať aminokyselinu predstavuje vlastnosť, že baktéria produkuje a akumuluje aminokyselinu v médiu vo väčšom množstve, ako jej kmeň štandardného typu.
Podľa predkladaného vynálezu môže byť rezistencia voči homoserínu vo vysokej koncentrácii prepožičaná baktérii patriacej do rodu Escherichia. Baktéria patriaca do rodu Escherichia, ktorá má zvýšenú rezistenciu voči homoserínu, má schopnosť produkovať a akumulovať aminokyselinu, najmä L-homoserín, L-alanínu, L-izoleucín a L-treonín vo vysokom výťažku.
-4DNA podľa predkladaného vynálezu
DNA podľa predkladaného vynálezu kóduje proteín, ktorý má Rh aktivitu a aminokyselinovú sekvenciu znázornenú v SEQ ID No: 2 sekvenčeného zoznamu.
t * ’ · *
Špecificky, môže byť DNA podľa predkladaného vynálezu označená ako DNA, ktorá obsahuje nukleotidovú sekvenciu nukletidových čísiel 557 až 1171 v nukleotidovaj sekvencií znázornenej v SEQ ID NO: 1 sekvenčného zoznamu.
DNA podľa predkladaného vynálezu obsahuje DNA fragment kódujúci RhtB proteín prepožičiavajúci baktérii Escherichia coli rezistenciu voči homoserínu, vrátane regulačných zložiek rhtB génu a štrukturálnej časti rhtB génu s nukleotidovou sekvenciou znázornenou v SEQ ID NO: 1.
Nukleotidová sekvencia znázornená v SEQ ID NO: 1 zodpovedá časti sekvenčného komplementu sekvencií v GenBank, prístupové číslo M87049. SEQ ID NO: 1 zahŕňa f138 (nukleotidové čísla 61959-61543 GenBank s prístupovým číslom M87049), čo je známym, ale funkčne neznámym ORF (otvorený čítací rámec) prítomný v 86 min na chromozóme E. coli a na jeho 5‘- a 3‘- lemovacej oblasti. F138, ktorá mala iba 160 nukleotidov v 5‘- lemovacej oblasti, nemohla prepožičiavať rezistenciu voči homoserínu. Medzi 62160 a 61959 M87049nie je žiadny terminačný kodon (proti smeru expresie génu od ORF f138). Preto kódujúca oblasť je 201 bp dlhšia. RhtB proteín a rhtB gén kódujúci proteín sú preto nové.
RhtB gén možno získať napr. infikovaním Mucts lyzogénneho kmeňa E. coli za použitia lyzátu lyzogénneho kmeňa E. coli, ako je K12 alebo W3110 spôsobom, kde sa použije mini-Mu d5005 fagemid (Groisman, E. A. et al., J. Bacteriol., 168,357-364 (1986) a izoláciou plazmidovej DNA z kolónií rastúcich v minimálnom médiu s obsahom kanamycínu (40 pg/ml) a L-homoserínu (10 mg/ml). Ako je ilustrované v príklade opísanom nižšie, rhtB gén bol mapovaný v 86 min na chromozóme E. coli,. Preto DNA fragment vrátane rhtB génu možno získať z chromozómu E. coli hybridizáciou kolónií alebo pomocou PCR (polymerázová reťazová reakcia, odkaz na White, T. J. et al., Trends Genet. 5, 185 (1989)) za použitia oligonukleotidu-olegonukleotidov, so sekvenciou zodpovedajúcou oblasti v blízkosti časti 86 min na chromozóme E. coli. Alternatívne možno oligonukleotid skonštruovať podľa nukleotidovej sekvencie znázornenej v SEQ ID NO: 1. Použitím
-5nukleotidov s nukleotidovými sekvenciami zodpovedajúcimi oblasti proti smeru expresie génu od nukleotidového čísla 557 a oblasti po smere expresie génu od nukleotidového čísla 1171 v SEQ ID NO: 1 ako primerov pre PCR, môže byť vonkajšia kódujúca oblasť amplifikovaná.
t
Syntéza oligónukleotidov sa môže uskutočniť bežným spôsobom, ako napr. fosfoamiditovou metódou (pozri Tetrahedron Letters, 22, 1859 (1981) použitím komerčne dostupného syntetizátora DNA (napr. DNA syntetizátor 380B, vyrobený Applied Biosystems). Ďalej možno PCR uskutočniť pomocou komerčne dostupnej PCR aparatúry (napr. DNA Thermal Cycler Model PJ2000 vyrobený Takara Shuzo Co., Ltd.), za použitia Taq DNA polymerázy (dodávanej Takara Shuzo Co., Ltd.) spôsobom uvádzaným dodávateľom.
DNA kódujúca RhtB proteín podľa predkladaného vynálezu môže kódovať RhtB proteín vrátane delécie, substitúcie, inzercie alebo adície jednej alebo niekoľkých aminokyselín na jednej pozícii alebo na viacerých pozíciách, za podmienky, že sa neznižuje Rh aktivita takto kódovaného RhtB proteínu. DNA, ktorá kóduje v podstate ten istý proteín ako RhtB proteín, ako.je opísané vyššie, sa môže získať napr. modifikovaním nukleotidovej sekvencie, napr. miestne smerovanou mutagenézou, takže jeden alebo viac aminokyselinových zvyškov v špecifikovanom mieste zahŕňa deléciu, substitúciu, inzerciu alebo adíciu. DNA modifikovaná, ako je opísané vyššie, sa môže získať bežne známym mutačným opracovaním. Mutačné opracovanie zahŕňa spôsob opracovania DNA kódujúcej RhtB proteín in vitro, napr. hydroxylamínom a spôsob opracovania mikroorganizmu, napr. baktérie patriacej do rodu Escheríchia, ktorá disponuje DNA kódujúcou RhtB proteín, ultrafialovým ožiarením alebo mutačným činidlom, ako je N-metyl-N'-nitro-N-nitrózoguanidín (NTG) a kyselinou dusitou obvykle používanými na mutačné opracovanie.
DNA kódujúcu v podstate ten istý proteín, ako RhtB proteín, možno získať expresiou DNA podrobenej mutačnému opracovaniu in vitro, ako bolo opísané vyššie v multikópii vo vhodných bunkách, sledovaním rezistencie voči homoserínu a výberom DNA, ktorá zvyšuje rezistenciu. Je tiež všeobecne známe, aminokyselinová sekvencia proteínu a nukleotidová sekvencia, ktorá ju kóduje, môže byť mierne odlišná medzi druhmi, kmeňmi, mutantmi alebo variantmi, a preto DNA, ktorá kóduje v podstate ten istý proteín, sa môže získať z L-homoserín-6rezistentných druhov, kmeňov, mutantov a variantov patriacich do rodu Escherichia. Špecificky, DNA, ktorá kóduje v podstate ten istý protein, ako je RhtB protein, sa môže získať izoláciou DNA, ktorá hybridizuje s DNA, ktorá má napr. nulkeotidovú sekvenciu s nukleotidovými číslami 557 a 1171 nukleotidovej sekvencie znázornenej v SEQ No: 1 v sekvenčnom zozname za presných podmienok a ktorá kóduje protein s Rh aktivitou, z baktérie patriacej do rodu Escherichia, ktorá je podrobená mutačnému opracovaniu, alebo zo spontánneho mutantu alebo variantu baktérie patriacej do rodu Escherichia. Termín presné podmienky tu predstavuje podmienku, kedy sa vytvára tzv. špecifický hybrid a nevytvára sa nešpecifický hybrid. Je obtiažne jasne vyjadriť túto podmienku použitím číselného vyjadrenia. Avšak, napr. presné podmienky zahŕňajú podmienku, kedy DNA, ktoré majú vysokú homológiu, napr. DNA, ktoré majú homológiu nie menej ako 70 % vzájomne, sa hybridizujú a DNA, ktoré majú homológiu vzájomne nižšiu ako bolo uvedené, sa nehybridizujú.
Baktéria patriaca do rodu Escherichia podľa tohto vynálezu
Baktéria patriaca do rodu Escherichia podľa tohto vynálezu je baktéria patriaca do rodu Escherichia, ktorej Rh aktivita je zvýšená. Príkladom baktérie patriacej do rodu Escherichia je Escherichia coli. Rh aktivitu možno zvýšiť napr. amplifikáciou kópiového čísla rhtB štrukturálneho génu v bunke alebo transformáciou baktérie patriacej do rodu Escherichia rekombinantnou DNA, v ktorej DNA fragment vrátane rhtB štrukturálneho génu kódujúceho RhtB protein, je spojený s promótorovou sekvenciou, ktorá účinne pôsobí v baktérii patriacej do rodu Escherichia. Rh aktivitu možno tiež zvýšiť substitúciou promótorovej sekvencie rhtB génu na chromozóme promótorovou sekvenciou, ktorá v baktérii patriacej do rodu Escherichia účinne pôsobí.
Amplifkáciu počtu kópií rhtB štrukturálneho génu v bunke možno uskutočniť zavedením multikópiového vektora, ktorý vnesie rhtB štrukturálny gén do bakteriálnej bunky patriacej do rodu Escherichia. Špecificky možno počet kópii zvýšiť zavedením plazmidu, fága alebo transpozónu (Berg, D. E. a Berg, C. M.,
-7Bio/Technol., 1, 417 (1983), ktorý vnesie štrukturálny gén do bakteriálnej bunky patriacej do rodu Escherichia.
Príkladom multikópiového vektoru je plazmid, ako napr. pBR322, pMW118, pUC19, a pod. a fágové vektory, ako A1059, ÄBF101, M13pm9, a pod. Príkladom transpozónu je Mu, Tn10, Tn5, a pod.
Zavedenie DNA do baktérie patriacej do rodu Escherichia možno napr. uskutočniť spôsobom podľa D. M. Morrisona (Methods in Enzymology, 68, 326 (1979)) alebo spôsobom, kde recipientné bakteriálne bunky sú opracované chloridom vápenatým, aby sa zvýšila permeabilita DNA (Mandel, M. a Higa, A., J. Mol. Biol., 53, 159 (1970)), a pod.
Ak u baktérie patriacej do rodu Escherichia produkujúcej aminokyselinu dôjde k zvýšeniu Rh aktivity, ako je opísané vyššie, môže sa zvýšiť produkované množstvo aminokyseliny. Ako baktérie patriace do rodu Escherichia, u ktorých sa má zvýšiť Rh aktivita, sa použijú kmene, ktoré majú schopnosť produkovať požadované aminokyseliny. Okrem toho môže byť schopnosť produkovať aminokyselinu prepožičaná baktérii, u ktorej je Rh aktivita zvýšená.
‘ I ‘ , I
Príklady baktérií produkujúcich aminokyselinu, patriacich do rodu Escherichia, sú opísané nižšie.
1) Baktérie produkujúce L-treonín
Príkladom baktérií produkujúcich L-treonín, patriacich do rodu Escherichia, môže byť kmeň MG442 (Guayatiner et al., Genetika (v ruštine), 14, 947-956 (1978).
2) Baktérie produkujúce L-homoserín
Príkladom baktérií produkujúcich L-homoserín, patriacich do rodu Escherichia, môže byť kmeň NZ10 (thrB). Tento kmeň je odvodený od známeho kmeňa C600 (thrB, leuB) (Appleyard, R. K., Genetics, 39, 440-452 (1954) ako Leu+ revertant.
Na základe rhtB DNA fragmentu sa získali nové kmene E. coli produkujúce aminokyseliny - E. coli NZ10/pAL4. pRhtB; E. coli MG422/pVIC40, pRhtB; a E. coli MG442/pRhtB, ktoré sa používajú na produkciu aminokyselín fermentáciou.
Nové kmene boli uložené (podľa medzinároných pravidiel uloženia na základe Budapeštianskej zmluvy) v Ruskej národnej zbierke priemyselných mikroorganizmov (VKPM) 6. októbra 1998. Kmeň E. coli NZ10/pAL4, pRhtB bol
-8uložený pod prístupovým číslom VKPM B-7658; kmeň E. coli MG442/pRhtB bol uložený pod prístupovým číslom VKPM B-7659; a kmeň E. coli MG442/pVIC40, pRhtB je uložený pod prístupovým číslom VKPM B-7660.
Kmeň E. coli NZ10/pAL4, pRhtB (VKPM B-7658) vykazuje nasledovné kultivačno-morfologické a biochemické vlastnosti.
Cytomorfológia:
Gram-negatívne slabo pohyblivé paličky so zaguľatenými zakončeniami. Dĺžka 1,5 až 2 mikrometrov.
Kultivačné znaky:
Agar s hovädzím extraktom. Po 24 h rastu pri 37 °C vytvára guľaté belavé semitransparentné kolónie s priemerom 1,5 až 3 mm, s hladkým povrchom, pravidelné alebo mierne zvlnené rohy, stred je mierne zväčšený, homogénnej štruktúry, pastovitej konzistencie, ľahko emulgovateľný.
Luriov agar:
Po 24 h rastu pri 37 °C vytvára guľaté belavé semitransparentné kolónie s priemerom 1,5 až 2,5 mmi, s hladkým povrchom, homogénnej štruktúry, pastovitej konzistencie, ľahko emulgovateľné.
Minimálne agarom doplnené médium M9. Po 40 až 48 h rastu pri 37 °C tvorí kolónie s priemerom od 0,5 po 1,5 mm, ktoré sú sfarbené do šedobiela, semitransparentné, mierne vypuklé, so svetielkujúcim povrchom.
Rast v bujóne s hovädzím extraktom. Po 24 h rastu pri 37 °C vykazuje jednotný zákal, má charakteristický zápach.
Fyziologické a biochemické znaky:
Rastie po injekčnej inokulácii do agaru s hovädzím extraktom. V naočkovanej oblasti vykazuje dobrý rast. Mikroorganizmus sa prejavuje ako fakultatívny anaerób.
Neskvapalňuje želatínu.
Neprodukuje indol.
Teplotné podmienky:
Rastie v bujóne s hovädzím extraktom pri 20-42 °C, optimálna teplota je medzi 33-37 °C. pH hodnota kultivačného média:
-9Rastie v tekutom médiu s pH hodnotou medzi 6 a 8, optimálna hodnota je 7,2.
Zdroje uhlíka:
Vykazuje rast v glukóze, fruktóze, laktóze, manóze, galaktóze, xylóze, glycerole a manitole, aby sa produkovala kyselina a plyn.
Zdroje dusíka:
Asimiluje dusík vo forme amoniaku, solí kyseliny dusičnej, ako aj z niektorých organických zlúčenín.
Je rezistentná na ampicilín, kanamycín a L-homoserín.
L-treonín sa používa ako rastový faktor.
Obsah plazmidov:
Bunky obsahujú multikópiový hybridný plazmid pAL4 zabezpečujúci rezistenciu na ampicilín a nesúci gén thrA treonínového operonu, ktorý kóduje aspartátkinázu-homoseríndehydrogenázu I zodpovednú za zvýšenú biosyntézu homoserínu. Okrem toho, bunky obsahujú multikópiový hybridný plazmid pRtB zabezpečujúci rezistenciu na kanamycín a nesúci. rhtB gén, ktorý prepožičiava >
rezistenciu na homoserín (10 mg/l).
Kmeň E. coli MG442/ pRhtB (VKPM B-7659) má tie isté kultivačnomorfologické a biochemické vlastnosti ako kmeň NZ10/pAL4, pRhtB s výnimkou toho, že namiesto L-treonínu sa ako rastový faktor použije L-izoleucín. Avšak kmeň bez izoleucínu môže rásť pomaly. Okrem toho bunky kmeňa obsahujú iba jeden multikópiový hybridný plazmid pRhtB zabezpečujúci rezistenciu na kanamycín a nesúci rhtB gén, ktorý prepožičiava rezistenciu voči homoserínu (10 mg/l).
Kmeň E. coli MG442/pVIC40, pRhtB (VKPM B-7660) má tie isté kultivačnomorfologické a biochemické vlastnosti ako kmeň NZ10/pAL4, pRhtB s výnimkou toho, že namiesto L-treonínu sa ako rastový faktor použije L-izoleucín. Avšak kmeň môže pomaly rásť bez izoleucínu. Bunky kmeňa obsahujú multikópiový hybridný plazmid pVIC40 zabezpečujúci rezistenciu na streptomycín a prenášajúci gény operonu treonínu. Okrem toho bunky obsahujú multikópiový hybridný plazmid pRhtB zabezpečujúci rezistenciu na kanamycín a nesúci rhtB gén, ktorý prepožičiava rezistenciu voči homoserínu (10 mg/l).
-10Spôsob produkcie aminokyseliny
Aminokyselinu je možné efektívne produkovať kultiváciou baktérie, u ktorej je Rh aktivita zvýšená amplifikáciou počtu kópií rhtB génu, ako je opísané vyššie a ’ ‘ I ktorá má schopnosť produkovať aminokyselinu v kultivačnom médiu, produkovať a akumulovať aminokyselinu v médiu a získavať aminokyselinu z média. Príkladom aminokyseliny je výhodne L-homoserín, L-alanín, L-izoleucín, L-valín a L-treonín.
V spôsobe podľa predkladaného vynálezu možno kultiváciu baktérie patriacej do rodu Escherichia, zozbieranie a purifikáciu aminokyseliny z tekutého média uskutočniť spôsobom podobným bežným technikám produkcie aminokyselín fermentáciou za použitia baktérie. Médium použité pri kultivácii môže byť alebo syntetické alebo prírodné, pokiaľ obsahuje zdroj uhlíka a dusíka a minerálov, v prípade potreby nutrienty, ktoré použitá baktéria vo vhodných množstvách požaduje pre rast. Zdrojom uhlíka môžu byť uhľohydráty, ako je glukóza a cukróza a rôzne organické kyseliny. V závislosti od asimilačnej schopnosti použitej baktérie, možno použiť alkohol vrátane etanolu a glycerolu. Ako zdroj dusíka sa používajú
I amoniak, rôzne amónne soli, ako napr. síran amónny, ďalšie dusíkové zlúčeniny, ako sú amíny, prírodný zdroj dusíka, ako je peptón, hydrolyzát sóje a strávené fermentačné mikróby. Ako minerály sa používajú fosforečnan draselný, síran horečnatý, chlorid sodný, síran železnatý, síran mangánu, uhličitan vápenatý.
Kultivácia výhodne prebieha za aeróbnych podmienok, ako kultivácia za pretrepávania a za aerácie a miešania kultúry. Teplota kultúry je zvyčajne 20 až 40 °C, výhodne 30 až 38 °C. pH kultúry je zvyčajne medzi 5 a 9, výhodne medzi 6,5 a 7,2. pH kultúry je možné upraviť amoniakom, uhličitanom vápenatým, rôznymi kyselinami, rôznymi zásadami a puframi. 1 až 3-dňová kultivácia zvyčajne vedie k hromadeniu cieľovej aminokyseliny v médiu.
Získavanie aminokyseliny možno uskutočňovať odstránením tuhých látok, ako sú bunky, z média centrifugáciou alebo membránovou filtráciou po kultivácii a potom zozbieraním a purifikáciou cieľovej aminokyseliny pomocou ionomeničov, skoncentrovaním, metódami kryštalickej frakcionácie, a pod.
Predkladaný vynález bude konkrétnejšie vysvetlený v príkladoch. V príkladoch, pokiaľ nie je označené inak, je aminokyselina v L-konfigurácii.
-11 Prehľad obrázkov na výkresoch
Obr. 1 znázorňuje klonovanie, identifikáciu a inaktiváciu rhtB génu.
Obr. 2 znázorňuje sekvenciu aminokyselín RhtB proteínu..
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1: Získanie rhtB DNA fragmentu (1) Klonovanie rhtB génu do mini-Mu fagemidu rhtB gén štandardného typu bol klonovaný in vivo za použitia mini-Mu d5005 fagemidu (Groisman, E. A., et al., J. Bacteriol., 168, 357-364 (1986). MuCts62 lyzogén kmeňa MG442 sa použil ako donor. Čerstvo pripravené lyzáty sa použili na infikovanie Mucts lyzogénneho derivátu kmeňa VKPM B-513 (Hfr K10 metB). Bunky boli nanesené na M9 glukózové minimálne médium s metionínom (50 pg/ml), kanamycínom (40 pg/ml) a homoserínom (10 mg/ml). Kolónie, ktoré sa objavili po
I h boli zozbierané a izolované. Izolovala sa plazmidová DNA a použila sa na transformáciu kmeňa VKPM B-513 pomocou štandardných techník.
Transformanty boli selektované na agarových platniach s L-bujónom a kanamycínom, ako bolo uvedené vyššie. Plazmidová DNA sa izolovala z tých, ktoré boli rezistentné na homoserín a bola analyzovaná pomocou reštrikčného mapovania zo štruktúry inzertovaných fragmentov. Dva typy inzertov patriacich k rozdielnym chromozómovým oblastiam boli klonované z donora. Teda, u E. coli existujú najmenej dva odlišné gény, ktoré sú v multikópii a prepožičiavajú rezistenciu na homoserín. Jeden z dvoch typov inzertov je rhtA gén, ktorý už bol opísaný (Abstrakty zo 17. Medzinárodného kongresu biochémie a molekulárnej biológie spojeného s Výročnou schôdzou 1997 Americkej spoločnosti pre biochémiu a molekulárnu biológiu, San Francisco, Kalifornia, 24.-29. august 1997). Medzi ďalšími z dvoch typov inzertov fragment minimálnej dĺžky, ktorý prepožičiava rezistenciu na homoserín, je 0,8 kb (obr. 1).
-12(2) Identifikácia rhtB génu
Inzertový fragment bol sekventovaný metódou Sangera pomocou dideoxy reťazcového zakončenia. Obidve vlákna DNA boli úplne sekventované a všetky spojenia sa prekrývali. Sekventovanie ukázalo, že inzertový fragment zahŕňal f138 (nukleotidové čísla 61543 až 61959 prístupového čísla GenBank M87049), bol známym, ale funkčne neznámym ORF (otvorený čítací rámec) prítomným v 86 min E. coli chromozómu a 201 bp oblasti (oblasť proti smeru expresie génu v sekvencii M87049). F138, ktorý mal iba 160 nukleotidov v 5‘-lemovanej oblasti nemohol prepožičiavať rezistenciu na homoserín. Proti smeru expresie génu od ORF f138 medzi 62160 a 61959 nukleotidmi M87049 nie je prítomný žiadny kodón. Ďalej, v sekvencii nasleduje jeden ATG po sekvencii považovaný za miesto väzby ribozómu. Väčší ORF (nukleotidové čísla 62160 až 64546) je označený ako rhtB gén. RhtB proteín dedukovaný z génu je vysoko hydrofóbny a obsahuje 5 možných transmembránových segmentov.
Príklad 2: Produkcia kmeňa produkujúceho homoserín
I '
Kmeň NZ10 E. coli bol transformovaný pomocou plazmidu pAL4, ktorý bol pBr322 vektorom, do ktorého bol inzertovaný thrA gén kódujúci aspartokinázahomoseríndehydrogenázu, aby sa získali kmene NZ10/pAL4. Kmeň NZ10 je leuB+revertovaný mutant (thrB) získaný z kmeňa E. coli C600 (thrB, leuB) (Appleyard, Genetics, 39, 440-452 (1954)).
RhtB gén bol inzertovaný do plazmidu pUK21, ktorý je známym plazmidom pUC19, kde je gén rezistencie na kanamycín substituovaný génom rezistencie na ampicilín (Vieira, J. a Messing, J., Gene, 100,189-194 (1991), aby sa získal pRhtB.
Kmeň NZ10/pAL4 bol transformovaný pUK21 alebo pRhtB, aby sa získali kmene NZ10/pAL4, pUK21 a NZ10/pAL4, pRhtB.
Takto získané transformanty boli každý kultivované pri 37 °C po dobu 17 h v nutričnom bujóne s 50 mg/l kanamycínu a 100 mg/l ampicilínu a 0,3 ml získanej kultúry sa naočkovalo do 3 ml fermentačného média, ktoré malo nasledovné zloženie a obsahovalo 50 mg/l kanamycínu a 100mg/l ampicilínu, v 20 x 200 mm testovacej trubici a kultivovali sa pri 37 °C po dobu 46 h v rotačnom pretrepávači. Po
-13kultivácii sa akumulované množstvo homoserínu v médiu a absorbancia pri 560 nm stanovili známymi spôsobmi.
Zloženie fermentačného média (g/l)
Glukóza 80 (NH4)2SO4 22
K2HPO4 2
NaCI 0,8
MgSO4.7H2O 0,8
FeSO4.7H2O 0,02
MnSO4.5H2O 0,02
Hydrochlorid tiaminu 0,0002
Kvasinkový extrakt 1,0
CaCO3 30 (CaCO3 bol oddelene sterilizovaný).
1 »
Výsledky vyjadruje tabuľka 1. Ako ukazuje tabuľka 1, kmeň NZ10/pAL4, pRhtB akumuloval homoserín vo väčšom množstve ako kmene NZ10/pAL4 a NZ10/pAL4, pUK21, v ktorých rhtB gén nebol zvýšený.
Tabuľka 1
Kmeň ODgeo Akumulované množstvo homoserínu (g/l)
NZ10/pAL4 16,4 3,1
NZ10/pAL4, pUK21 14,3 3,3
NZ10/pAL4, pRhtB 15,6 6,4
Príklad 3: Produkcia alanínu, valínu a izoleucínu u kmeňa so zavedeným pRhtB
E.coli kmeň MG442 je známym kmeňom (Gusyatiner et al., 1978, Genetika (v ruštine), 14:947-956).
x -14Kmeň MG442 bol transformovaný plazmidmi pUK21 a pRhtB, aby sa získali kmene MG442/pUK21 MG442/pRhtB.
Takto získané transformanty boli každý kultivované pri 37 °C po dobu 18 h v nutričnom bujóne ,s 50 mg/l kanamycínu a 0,3 ml získanej kultúry sa naočkovalo do 3 ml fermentačného média opísaného v príklade 3, ktoré malo nasledovné zloženie a obsahovalo 50 mg/l kanamycínu, v 20 x 200 mm testovacej trubici a kultivovali sa pri 37 °C po dobu 40 h v rotačnom pretrepávači. Po kultivácii sa akumulované množstvo alanínu, valínu a izoleucínu v médiu a absorbancia pri 560 nm stanovili známymi spôsobmi.
Výsledky sú znázornené v tab. 2. Ako ukazuje tab.2, kmeň MG442/ pRhtB akumuloval alanín, valín a izoleucín vo väčšom množstve ako kmeň MG442/pUK21, v ktorom rhtB gén nebol zvýšený.
Tabuľka 2
Kmeň OD560 Akumulované množstvo (g/l)
Alanín Valín Izoleucín
MG442/pUK21 13,4 0,2 0,2 0,3
MG442/ pRhtB 13,7 0,7 0,5 0,5
Príklad 4: Produkcia kmeňa produkujúceho treonín
Kmeň MG442 (príklad 3) bol transfornmovaný zavedením známeho plazmidu pVIC40 (US patent č. 5, 175, 107 (1992) normálnym postupom transformácie. Transformanty boli selektované na LB platne obsahujúce 0,1 mg/ml streptomycínu. Takto sa získal nový kmeň MG422/pVIC40.
Kmeň MG442/pVIC40 bol transformovaný pUK21 alebo pRhtB, aby sa získali kmene MG442/pVIC40, pUK21 a MG442/pVIC40, pRhtB.
Takto získané transformanty boli každý kultivované pri 37 °C po dobu 18 h v nutričnom bujóne s 50 mg/l kanamycínu a 100 mg/l streptomycínu a 0,3 ml zo získanej kultúry sa naočkovali do 3 ml fermentačného média opísaného v príklade 3 a obsahujúceho 50 mg/l kanamycínu a 100 mg/l streptomycínu v , v 20 x 200 mm
-15testovacej trubici a kultivovali sa pri 37 °C po dobu 46 h v rotačnom pretrepávači. Po kultivácii sa akumulované množstvo treonínu v médiu a absorbancia pri 560 nm stanovili známymi spôsobmi.
Výsledky sú znázornené v tabuľke 3. Ako ukazuje tabuľka 3, kmeň MG442/pVIC40 pRhtB akumuloval treonín vo väčšom množstve ako kmeň MG442/pVIC40 a MG442/pVIC40 pUK21, v ktorom rhtB gén nebol zvýšený.
Tabuľka 3
Kmeň ODseo Akumulované množstvo treonínu (g/l)
MG442/pVIC40 17 13,6
MG442/pVIC40 pUK21 16,3 12,9
MG442/pVIC40 pRhtB 15,2 16,3
Príklad 5: Vplyv inaktivácie rhtB génu a amplifikácie na rezistenciu baktérie E. coli > » voči niektorým aminokyselinám a áminkyselinovým analógom
Na inaktiváciu chromozomálneho rhtB génu sa skonštruoval piazmid pNPZ46 (obr. 1) na základe pUK21 vektora. Ten má DNA fragment od 86 min E. coli chromozómu, s rhtB génom a 5‘- lemovacou 3* - lemovacou oblasťou. Potom bol Clal-Eco47lll fragment pNPZ46 plazmidového rhtB génu vymenený za Asull-BsrBI fragment obsahujúci cat (CmR) gén pACYC184 plazmidu (Chang a Cohen, J. Bacteriol., 134, 1141-1156, 1978) dávajúci pNPZ47 piazmid (obr. 1). Na zavedenie získaného inzerčne inaktivovaného rhtB génu do chromozómu E. coli kmeňa N99 (streptomycín-rezistentný derivát známeho kmeňa W3350 (Campbel, Virology, 14, 22-33, 1961)) sa použila metóda Parkera a Marinusa (Parker, B. a Marinus, M. G., Gene, 73, 531/535,1988). Substitúcia alely štandardného typu za inaktivovanú sa dokázala fágovou P1 transdukciou a Southern hybridizáciou (Southern, E. M., J. Mol. Biol., 98, 503-517, 1975).
Potom sa testovala citlivosť takto získaného kmeňa E. coli N99 rhtB::cat, iniciálneho kmeňa N99 (rhtB ) a jeho derivátu transformovaného pRhtB plazmidom, N99/pRhtB voči niektorým aminokyselinám a aminokyselinovým analógom. Kultúry
-16kmeňov narastené cez noc v M9 minimálnom médiu pri 37 °C v rotačnom pretrepávači (109 cfu/ml) sa zriedili 1:100 a rástli 5 h za tých istých podmienok. Potom kultúry logaritmickej fázy takto získané boli zriedené a asi 104 živých buniek sa nanieslo na dobre vysušené testovacie platne s M9 agarom. obsahujúcim , I * * zdvojené množstvá aminokyselín alebo analógov. Minimálna inhibíčna koncentrácia (MIC) týchto zlúčenín sa hodnotila po 40-46 h kultivácie. Výsledky ukazuje tab. 4.
Tabuľka 4
Substrát MIC (pg/ml)
N99 (rhtB*) N99/pRhtB N99 RhtB::cat
1. L-homoserín 250 30000 125
2. L-treonín 30000 50000 30000
3. L-serín 5000 10000 5000
4, L-valín 0,5 ' 1 0,5
5. AHVA 50 2000 25
6.AEC 10 25 10
7. 4-aza-DL-leucín 40 100 40
Z tabuľky 4 vyplýva, že mnohopočetné kópie rhtB okrem homoserínu prepožičiavali bunkám zvýšenú rezistenciu voči treonínu, serínu, valínu, kyseline aamino-p-hydroxyvalérovej (AHVA), S-(2-aminoetyl)-L-cysteínu (AEC) a 4-aza-DLleucínu. Inaktivácia rhtB génu naopak zvýšila citlivosť buniek voči homoserínu a AHVA. Tieto výsledky v spojení s údajmi o homológii RhtB proteínu na LysE lyzínový efluxný transportér Corynebacterium glutamicum (Vrljic et al., Mol. Microbiol., 22, 815-826, 1996) naznačujú, že analógy pre rhtB génový produkt fungujú. Predpokladaný efluxný transportér, RhtB, má špecificitu voči niekoľkým substrátom (aminokyselinám) alebo môže vykazovať nešpecifické účinky ako výsledok amplifikácie.
-17Zoznam sekvencií <110> Ajinomoto Co., Inc.
<120> DNA kódujúca proteín, ktorý baktérii E. coli prepožičiava rezistenciu voči L homoserínu a spôsob produkcie L-aminokyselín <130>
<140> RU 98118425 <141> 1998-10-13 <160> 2 <170> Patentln Ver. 2.0 <210> 1 <211> 1200 <212> DNA <213> Escherichia coli <220>
<221> CDS <222> (557)..(1171) <400> 1 agaaataatg tggagatcgc accgcccatc gaatgtgcca gtatatagcg tttacgccac 60 ggaccgggct gaacctcctg ctgccagaat gccgccagat catcaacata atcattaaag 120 cgattaacat gcccgágatg cggatcggct aacaggcgac cggaacgtcc ctgcccgcga 180 tggtcgatga ttaagacatc aaaccccaaa tggaacaggt cataggccag ttccgcatat 240 tttacgtagc tctcaatacg ccccgggcag atgactacca cccggtcatg gtgctgtgcg 300 cgaaaacgga caaagcgcac cggaatgtca tccacaccag taaactctgc ttcatcacgc 360 tgacgccaga aatcagtcag cggtcccatg gtaaaagcag caaacgcgtt ttctcttgtt 420 tcccagtctt tttgctgctg aaacatcggg taatctgcct cttaaaccac gtaaaatcgt 480 tttttttagc gtgcctgaca caacgctgcg acagtagcgt attgtggcac aaaaatagac 540 acaccgggag ttcatc atg acc tta gaa tgg tgg ttt gcc tac ctg ctg aca 592
Met Thr Leu Glu Trp Trp Phe Ala Tyr Leu Leu Thr 15 10
tcg atc att tta acg ctg tcg cca ggc tet ggt gca atc aac act atg 640
Ser íle íle Leu Thr Leu Ser Pro Gly Ser Gly Ala íle Asn Thr Met
15 acc acc tcg ctc 20 25 aac cac ggt tat ccg gcc ggt ggc gtc tat tgc tgg 688
Thr Thr Ser Leu Asn His Gly Tyr Pro Ala Gly Gly Val Tyr Cys Trp
30 get tca gac cgg 35 40 act ggc gat tca tat tgt get ggt tgg cgt ggg gtt 736
Ala Ser Asp Arg Thr Gly Asp Ser Tyr Cys Ala Gly Trp Arg Gly Val
45 ggg acg cta ttt 50 55 60 tcc ege tca gtg att gcg ttt gaa gtg ttg aag tgg 784
Gly Thr Leu Phe Ser Arg Ser Val íle Ala Phe Glu Val Leu Lys Trp
gca ggc gcg get 65 70 75 tac ttg att tgg ctg gga atc cag cag tgg ege gcc 832
Ala Gly Ala Ala Tyr Leu íle Trp Leu Gly íle Gin Gin Trp Arg Ala
get ggt gca 80 att 85 90 gac ctt aaa tcg ctg gcc tet act caa tcg cgt ega 880
Ala Gly Ala íle Asp Leu Lys Ser Leu Ala Ser Thr Gin Ser Arg Arg
95 100 105
cat ttg ttc cag cgc gca gtt ttt gtg aat ctc acc aat ccc aaa agt
His Leu Phe Gin Arg Ala Val Phe Val .Asn .Leu Thr Asn Pro Lys Ser
110 115 120
att gtg ttt ctg gcg gcg cta ttt ccg caa ttc atc atg ccg caa cag
íle Val Phe Leu Ala Ala Leu Phe Pro Gin Phe íle Met Pro Gin Gin
125 130 135 140
ccg caa ctg atg cag tat atc gtg ctc ggc gtc acc act att gtg gtc
Pro Gin Leu Met Gin Tyr íle Val Leu Gly Val Thr Thr íle Val Val
145 150 155
gat att att gtg atg atc ggt tac gcc acc ctt get caa cgg att get
Asp íle íle Val Met íle Gly Tyr Ala Thr Leu Ala Gin· Arg íle Ala
160 165 170
cta tgg att aaa gga cca aag cag atg aag gcg ctg aat aag att ttc
Leu Trp íle Lys Gly Pro Lys Gin Met Lys Ala Leu Asn Lys íle Phe
175 180 185
ggc tcg ttg ttt atg ctg gtg gga gcg ctg tta gca tcg gcg agg cat
Gly Ser Leu Phe Met Leu Val Gly Ala Leu Leu Ala Ser Ala Arg His
190 195 200 gcg tgaaaaataa tgtcggatgc ggcgtaaac Ala 1 '205 <210> 2 <211> 205 <212> PRT <213> Escherichia coli <400> 2
928
976
1024
1072
1120
1168
1200
Met Thr Leu Glu Trp Trp Phe Ala Tyr Leu Leu Thr Ser íle íle Leu 15
1 5 10
Thr Leu Ser Pro Gly Ser 20 Gly Ala íle Asn Thr Met 25 Thr Thr Ser Leu 30
Asn His Gly Tyr Pro Ala 35 Gly Gly Val Tyr Cys Trp 40 Ala 45 Ser Asp Arg
Thr Gly Asp Ser Tyr Cys 50 Ala Gly Trp Arg Gly Val Gly 55 60 Thr Leu Phe
Ser 65 Arg Ser Val íle Ala 70 Phe Glu Val Leu Lys Trp 75 Ala Gly Ala Ala 80
Tyr Leu íle Trp Leu Gly 85 íle Gin Gin Trp Arg Ala 90 Ala Gly Ala íle 95
Asp Leu Lys Ser Leu Ala 100 Ser Thr Gin Ser Arg Arg 105 His Leu Phe Gin 110
Arg Ala Val Phe Val Asn 115 Leu Thr Asn Pro Lys Ser 120 íle 125 Val Phe Leu
Ala Ala Leu Phe Pro Gin 130 Phe íle Met Pro Gin Gin 135 140 Pro Gin Leu Met
Gin Tyr íle Val Leu Gly Val Thr Thr íle Val Val Asp íle íle Val
19145 150 155 160
Met íle Gly Tyr Ala Thr Leu Ala Gin Arg íle Ala Leu Trp íle Lys
165 170 175
Gly Pro Lys Gin Met Lys Ala Leu Asn Lys íle Phe Gly Ser Leu Phe ' 180 185 190
Met Leu Val Gly Ala Leu Leu Ala Ser Ala Arg His Ala
195 200 205

Claims (7)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. DNA kódujúca proteín, ktorým je:
    (A) proteín, ktorý obsahuje aminokyselinovú sekvenciu, ako je znázornené v SEQ ID No: 2 v zozname sekvencií;
    alebo (B) proteín, ktorý obsahuje aminokyselinovú sekvenciu vrátane delécie, substitúcie, * inzercie alebo adície jednej alebo niekoľkých aminokyselín v aminokyselinovej sekvencii znázornenej v SEQ ID No: 2 v zozname sekvencií, pričom tento proteín
    Λ má aktivitu, ktorá spôsobuje, že baktéria s jeho obsahom je rezistentná voči Lhomoserínu.
  2. 2. DNA podľa nároku 1, ktorou je:
    (a) DNA, ktorá obsahuje nukleotidovú sekvenciu zodpovedajúcu nukleotidovým číslam 557 až 1171 v nukleotidovej sekvencii znázornenej v SEQ ID No: 1 v sekvenčnom zozname; alebo
    I » >
    (b) DNA, ktorá hybridizuje s nukleotidovou sekvenciou zodpovedajúcou nukleotidovým číslam 557 až 1171 v nukleotidovej sekvencii znázornenej v SEQ ID No: 1 v sekvenčnom zozname za presných podmienok a ktorá kóduje proteín, ktorý vykazuje aktivitu, ktorá sa u baktérie s jeho obsahom prejaví ako rezistencia voči L'W homoserínu.
  3. 3. Baktéria patriaca do rodu Escherichia, kde sa rezistencia baktérie voči Lhomoserínu zvýši amplifikáciou počtu kópií DNA podľa nároku 1, v bakteriálnej bunke.
  4. 4. Baktéria podľa nároku 3, kde DNA podľa nároku 1 je udržiavaná na multikópiovom vektore v bakteriálnej bunke.
  5. 5. Baktéria podľa nároku 3, kde DNA podľa nároku 1 je udržiavaná na transpozóne v bakteriálnej bunke.
    -21
  6. 6. Spôsob výroby aminokyseliny, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa kultiváciu baktérie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 3 až 5, ktorá má schopnosť vyrábať aminokyselinu v kultivačnom médiu, schopnosť vyrábať a akumulovať aminokyselinu v médiu a získanie aminokyseliny z média.
  7. 7. Spôsob podľa nároku 6, vyznačujúci sa tým, že aminokyselinou je najmenej jedna aminokyselina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z L-homoserínu, L-alanínu, L-izoleucínu, L-valínu a L-treonínu.
SK1408-99A 1998-10-13 1999-10-12 Protein coding dna, a bacterium belonging to the genus escherichiaand process for producing amino acid SK140899A3 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU98118425A RU2144564C1 (ru) 1998-10-13 1998-10-13 ФРАГМЕНТ ДНК rhtB, КОДИРУЮЩИЙ СИНТЕЗ БЕЛКА RhtB, ПРИДАЮЩЕГО УСТОЙЧИВОСТЬ К L-ГОМОСЕРИНУ БАКТЕРИЯМ ESCHERICHIA COLI, И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK140899A3 true SK140899A3 (en) 2000-05-16

Family

ID=20211138

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1408-99A SK140899A3 (en) 1998-10-13 1999-10-12 Protein coding dna, a bacterium belonging to the genus escherichiaand process for producing amino acid

Country Status (12)

Country Link
US (4) US6303348B1 (sk)
EP (1) EP0994190A3 (sk)
JP (1) JP2000116390A (sk)
KR (1) KR20000029006A (sk)
CN (1) CN1204254C (sk)
AU (1) AU761557B2 (sk)
BR (1) BR9904955A (sk)
CA (1) CA2284850A1 (sk)
ID (1) ID25719A (sk)
RU (1) RU2144564C1 (sk)
SK (1) SK140899A3 (sk)
ZA (1) ZA996042B (sk)

Families Citing this family (74)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5976843A (en) 1992-04-22 1999-11-02 Ajinomoto Co., Inc. Bacterial strain of Escherichia coli BKIIM B-3996 as the producer of L-threonine
US20060040364A1 (en) * 1998-10-13 2006-02-23 Livshits Vitaly A DNA coding for a protein which imparts L-homoserine resistance to Escherichia coli bacterium, and a method for producing L-amino acids
RU2144564C1 (ru) * 1998-10-13 2000-01-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" ФРАГМЕНТ ДНК rhtB, КОДИРУЮЩИЙ СИНТЕЗ БЕЛКА RhtB, ПРИДАЮЩЕГО УСТОЙЧИВОСТЬ К L-ГОМОСЕРИНУ БАКТЕРИЯМ ESCHERICHIA COLI, И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ
RU2148642C1 (ru) * 1998-12-23 2000-05-10 ЗАО "Научно-исследовательский институт АДЖИНОМОТО-Генетика" (ЗАО "АГРИ") Фрагмент днк rhtc, кодирующий синтез белка rhtc, придающего повышенную устойчивость к l-треонину бактериям escherichia coli, и способ получения l-аминокислоты
RU2175351C2 (ru) * 1998-12-30 2001-10-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") Фрагмент днк из escherichia coli, определяющий повышенную продукцию l-аминокислот (варианты), и способ получения l-аминокислот
RU2212447C2 (ru) * 2000-04-26 2003-09-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Штамм escherichia coli - продуцент аминокислоты (варианты) и способ получения аминокислот (варианты)
DE60219969T2 (de) 2001-02-13 2008-01-17 Ajinomoto Co., Inc. Methode zur Production von L-Aminosäuren mittels Bakterien der Gattung Escherichia
DE10107002A1 (de) 2001-02-15 2002-08-29 Consortium Elektrochem Ind Verfahren zur fermentativen Herstellung von O-Acetyl-L-Serin
DE60230040D1 (de) * 2001-07-06 2009-01-08 Evonik Degussa Gmbh Fermentationsverfahren zur herstellung von l-aminosäuren unter verwendung von stämmen aus der familie der enterobacteriaceae
EP1407025B1 (en) * 2001-07-18 2008-04-23 Evonik Degussa GmbH Process for the preparation of l-threonine using strains of the enterobacteriaceae family which contain an enhanced male gene
EP1407021B1 (en) 2001-07-18 2008-02-27 Evonik Degussa GmbH Process for the preparation of l-amino acids using strains of the enterobacteriaceae family which contain an attenuated ugpb gene
RU2229513C2 (ru) * 2001-11-23 2004-05-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Способ получения l-аминокислот, штамм escherichia coli - продуцент l-аминокислоты (варианты)
CA2468179C (en) 2001-11-23 2013-05-21 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing l-amino acids using bacteria belonging to the genus escherichia
DE60321891D1 (de) * 2002-03-13 2008-08-14 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur herstellung von l-threonin unter verwendung von stämmen der enterobacteriaceae familie
ATE413456T1 (de) * 2002-03-13 2008-11-15 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur herstellung von l-aminosäuren unter verwendung von stämmen der familie enterobacteriaceae
EP1483394B1 (en) * 2002-03-13 2009-04-15 Evonik Degussa GmbH Process for the preparation of l-amino acids using strains of the enterobacteriaceae family
DE10210960A1 (de) 2002-03-13 2003-09-25 Degussa Verfahren zur fermentativen Hestellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
DE10231115A1 (de) * 2002-07-10 2004-01-22 Degussa Ag Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterbacteriaceae
DE10303571A1 (de) 2003-01-30 2004-08-12 Degussa Ag Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
RU2268300C2 (ru) * 2003-04-07 2006-01-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИЙ, ОБЛАДАЮЩИХ ПОВЫШЕННОЙ ЭКСПРЕССИЕЙ ГЕНА pckA
DE10316109A1 (de) 2003-04-09 2004-10-21 Degussa Ag Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
US7335496B2 (en) * 2003-06-05 2008-02-26 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing target substance
JP4380305B2 (ja) * 2003-11-21 2009-12-09 味の素株式会社 発酵法によるｌ−アミノ酸の製造法
DE602005016763D1 (de) * 2004-01-30 2009-11-05 Ajinomoto Kk L-aminosäure produzierender mikroorganismus und verfahren zur l-aminosäureproduktion
DE102004005836A1 (de) 2004-02-06 2005-09-15 Degussa Ag Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
US8003367B2 (en) * 2004-03-16 2011-08-23 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing L-amino acids by fermentation using bacteria having enhanced expression of xylose utilization genes
JP4760711B2 (ja) * 2004-03-31 2011-08-31 味の素株式会社 バチルス属又はエシェリヒア属に属する細菌を使用した発酵によるプリンヌクレオシド及びヌクレオチドの製造方法
US20070004014A1 (en) * 2005-06-29 2007-01-04 Yuichiro Tsuji Method for producing l-threonine
RU2333950C2 (ru) * 2005-12-27 2008-09-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПРОДУКЦИИ АРОМАТИЧЕСКИХ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ, ПРИНАДЛЕЖАЩЕЙ К РОДУ Methylophilus
US7932029B1 (en) * 2006-01-04 2011-04-26 Si Lok Methods for nucleic acid mapping and identification of fine-structural-variations in nucleic acids and utilities
WO2007086546A1 (en) * 2006-01-26 2007-08-02 Ajinomoto Co., Inc. A method for producing an l-amino acid using a bacterium of enterobacteriaceae family with attenuated expression of the aldh gene
DE102006004063A1 (de) * 2006-01-28 2007-08-02 Degussa Gmbh Verfahren zur Herstellung von Methionin aus Homoserin
EP1979486B1 (en) 2006-01-30 2013-04-17 Ajinomoto Co., Inc. L-amino acid producing bacterium and method of producing l-amino acid
JP2009118740A (ja) 2006-03-03 2009-06-04 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
EP2184348B1 (en) 2006-03-23 2013-11-27 Ajinomoto Co., Inc. A method for producing an L-amino acid using bacterium of the Enterobacteriaceae family with attenuated expression of a gene coding for small RNA
EP2007873B1 (en) * 2006-04-18 2015-11-18 Ajinomoto Co., Inc. A METHOD FOR PRODUCING AN L-AMINO ACID USING A BACTERIUM OF THE ENTEROBACTERIACEAE FAMILY WITH ATTENUATED EXPRESSION OF THE sfmACDFH-fimZ CLUSTER OR THE fimZ GENE
CN101432418B (zh) * 2006-04-24 2012-11-14 味之素株式会社 能够产生嘌呤物质的细菌和用于产生嘌呤物质的方法
BRPI0710752B1 (pt) * 2006-04-24 2017-01-24 Ajinomoto Kk métodos para produzir uma substância derivada de purina e um nucleotídeo de purina
JP2009165355A (ja) 2006-04-28 2009-07-30 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸を生産する微生物及びｌ−アミノ酸の製造法
EP2035569A1 (en) * 2006-06-01 2009-03-18 Ajinomoto Co., Inc. A method for producing an l-amino acid using a bacterium of the enterobacteriaceae family with attenuated expression of the rcsa gene
RU2337961C2 (ru) * 2006-07-04 2008-11-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-ТРЕОНИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ, ПРИНАДЛЕЖАЩЕЙ К РОДУ Escherichia, В КОТОРОЙ ИНАКТИВИРОВАН ОПЕРОН rspAB
EP2046949B1 (en) * 2006-07-19 2014-01-15 Ajinomoto Co., Inc. A method for producing an l-amino acid using a bacterium of the enterobacteriaceae family
JP2010017082A (ja) 2006-10-10 2010-01-28 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
JP2010017081A (ja) * 2006-10-10 2010-01-28 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
WO2008072761A2 (en) * 2006-12-11 2008-06-19 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing an l-amino acid
RU2006143864A (ru) * 2006-12-12 2008-06-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ cynT, cynS, cynX, ИЛИ cynR, ИЛИ ИХ КОМБИНАЦИИ
JP2010041920A (ja) 2006-12-19 2010-02-25 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
RU2006145712A (ru) 2006-12-22 2008-06-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Способ получения l-аминокислот методом ферментации с использованием бактерий, обладающих повышенной способностью к утилизации глицерина
RU2365622C2 (ru) 2006-12-22 2009-08-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПРОДУКЦИИ ПУРИНОВЫХ НУКЛЕОЗИДОВ И НУКЛЕОТИДОВ МЕТОДОМ ФЕРМЕНТАЦИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИЙ, ПРИНАДЛЕЖАЩИХ К РОДУ Escherichia ИЛИ Bacillus
JP2010088301A (ja) 2007-02-01 2010-04-22 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
JP2010110216A (ja) 2007-02-20 2010-05-20 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸または核酸の製造方法
JP2010110217A (ja) * 2007-02-22 2010-05-20 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造法
CN101715484B (zh) 2007-04-06 2014-02-19 协和发酵生化株式会社 二肽的制造方法
CN101939412B (zh) 2007-09-04 2016-01-20 味之素株式会社 生产氨基酸的微生物以及氨基酸的生产方法
JP2011067095A (ja) 2008-01-10 2011-04-07 Ajinomoto Co Inc 発酵法による目的物質の製造法
JP5526785B2 (ja) 2008-01-23 2014-06-18 味の素株式会社 Ｌ−アミノ酸の製造法
JP5217780B2 (ja) * 2008-02-08 2013-06-19 味の素株式会社 Ｌ−アミノ酸を生産する微生物及びｌ−アミノ酸の製造法
WO2010027045A1 (ja) 2008-09-08 2010-03-11 味の素株式会社 Ｌ－アミノ酸を生産する微生物及びｌ－アミノ酸の製造法
JP2012029565A (ja) 2008-11-27 2012-02-16 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
JPWO2011013707A1 (ja) 2009-07-29 2013-01-10 味の素株式会社 Ｌ−アミノ酸の製造法
JP2012223092A (ja) 2009-08-28 2012-11-15 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
JP2013013329A (ja) 2009-11-06 2013-01-24 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
RU2010101135A (ru) 2010-01-15 2011-07-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Бактерия семейства enterobacteriaceae - продуцент l-аспартата или метаболитов, производных l-аспартата, и способ получения l-аспартата или метаболитов, производных l-аспартата
JP2016192903A (ja) 2013-09-17 2016-11-17 味の素株式会社 海藻由来バイオマスからのｌ−アミノ酸の製造方法
PL3053999T3 (pl) 2013-10-02 2020-03-31 Ajinomoto Co., Inc. Przyrząd do regulowania poziomu amoniaku i sposób regulowania poziomu amoniaku
WO2015060314A1 (ja) 2013-10-21 2015-04-30 味の素株式会社 Ｌ－アミノ酸の製造法
BR112016008830B1 (pt) 2013-10-23 2023-02-23 Ajinomoto Co., Inc Método para produzir uma substância alvo
WO2017089077A1 (en) 2015-11-27 2017-06-01 Evonik Degussa Gmbh Method for producing l-methionine
JP7066977B2 (ja) 2017-04-03 2022-05-16 味の素株式会社 Ｌ－アミノ酸の製造法
CN109666617B (zh) * 2017-10-13 2021-02-02 四川利尔生物科技有限公司 一种l-高丝氨酸的生产菌株及其构建方法和应用
WO2020071538A1 (en) 2018-10-05 2020-04-09 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing target substance by bacterial fermentation
JP7491314B2 (ja) 2019-02-22 2024-05-28 味の素株式会社 ｙｄｉＪ遺伝子を過剰発現する腸内細菌科に属する細菌を用いたＬ－アミノ酸の製造方法
WO2020204179A1 (en) 2019-04-05 2020-10-08 Ajinomoto Co., Inc. Method of producing l-amino acids
US20220411835A1 (en) 2019-09-03 2022-12-29 Ningxia Eppen Biotech Co., Ltd Application of transport carrier gene which improves l-tryptophan production efficiency in escherichia coli

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU875663A1 (ru) * 1978-06-30 1982-09-15 Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Штаммы е.coLI ВНИИГенетика VL 334 @ N6 и ВНИИГенетика VL 334 @ N7-продуценты L-треонина и способ их получени
SU974817A1 (ru) 1981-06-16 1990-08-23 Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Способ получени L-треонина
US5017483A (en) * 1986-02-20 1991-05-21 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for producing L-threonine
JPS6437295A (en) 1987-07-31 1989-02-07 Kyowa Hakko Kogyo Kk Production of l-threonine by fermentation
US5976843A (en) 1992-04-22 1999-11-02 Ajinomoto Co., Inc. Bacterial strain of Escherichia coli BKIIM B-3996 as the producer of L-threonine
DE3891417T1 (de) 1988-10-25 1991-01-10 Vnii Genetiki Selektsii Promy Stamm der bakterien escherichia coli bkiim b-3996, produziert von l-threonin
US5705371A (en) 1990-06-12 1998-01-06 Ajinomoto Co., Inc. Bacterial strain of escherichia coli BKIIM B-3996 as the producer of L-threonine
US5534421A (en) 1991-05-30 1996-07-09 Ajinomoto Co., Inc. Production of isoleucine by escherichia coli having isoleucine auxotrophy and no negative feedback inhibition of isoleucine production
US6132999A (en) 1992-09-21 2000-10-17 Ajinomoto Co., Inc. L-threonine-producing microbacteria and a method for the production of L-threonine
DE19548222A1 (de) * 1995-12-22 1997-06-26 Forschungszentrum Juelich Gmbh Verfahren zur mikrobiellen Herstellung von Aminosäuren durch gesteigerte Aktivität von Exportcarriern
RU2144564C1 (ru) * 1998-10-13 2000-01-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" ФРАГМЕНТ ДНК rhtB, КОДИРУЮЩИЙ СИНТЕЗ БЕЛКА RhtB, ПРИДАЮЩЕГО УСТОЙЧИВОСТЬ К L-ГОМОСЕРИНУ БАКТЕРИЯМ ESCHERICHIA COLI, И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ
RU2148642C1 (ru) * 1998-12-23 2000-05-10 ЗАО "Научно-исследовательский институт АДЖИНОМОТО-Генетика" (ЗАО "АГРИ") Фрагмент днк rhtc, кодирующий синтез белка rhtc, придающего повышенную устойчивость к l-треонину бактериям escherichia coli, и способ получения l-аминокислоты
RU2209246C2 (ru) * 2000-01-26 2003-07-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Малая субъединица изозима iii и изозим iii синтетазы ацетогидроксикислот из escherichia coli, фрагмент днк (варианты), штамм бактерии escherichia coli - продуцент l-валина (варианты) и способ получения l-валина
RU2229513C2 (ru) * 2001-11-23 2004-05-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Способ получения l-аминокислот, штамм escherichia coli - продуцент l-аминокислоты (варианты)

Also Published As

Publication number Publication date
CN1204254C (zh) 2005-06-01
US20020058314A1 (en) 2002-05-16
US20020102670A1 (en) 2002-08-01
US6887691B2 (en) 2005-05-03
US6303348B1 (en) 2001-10-16
BR9904955A (pt) 2000-12-12
AU761557B2 (en) 2003-06-05
AU4755099A (en) 2000-04-20
KR20000029006A (ko) 2000-05-25
EP0994190A2 (en) 2000-04-19
ZA996042B (en) 2000-04-04
CN1254014A (zh) 2000-05-24
ID25719A (id) 2000-11-02
JP2000116390A (ja) 2000-04-25
CA2284850A1 (en) 2000-04-13
RU2144564C1 (ru) 2000-01-20
EP0994190A3 (en) 2002-08-14
US20060014258A1 (en) 2006-01-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6303348B1 (en) DNA coding for protein which confers on bacterium escherichia coli resistance to L-homoserine and method for producing L-amino acids
US9394346B2 (en) Method for producing an amino acid using a bacterium overexpressing an rhtC gene
AU764189B2 (en) Method for producing L-amino acid
KR100976072B1 (ko) 에스세리키아속 세균을 사용하는 ｌ-트레오닌의 제조방법
US7618803B2 (en) Method for producing L-amino acid using bacteria belonging to the genus Escherichia
KR101117513B1 (ko) 에스케리치아 속에 속하는 ｌ-트레오닌 생산 세균 및ｌ-트레오닌의 생산 방법
US20060040364A1 (en) DNA coding for a protein which imparts L-homoserine resistance to Escherichia coli bacterium, and a method for producing L-amino acids