SK14022001A3 - Inhibítory väzby LFA-1 na ICAM a ich použitie - Google Patents

Inhibítory väzby LFA-1 na ICAM a ich použitie Download PDF

Info

Publication number
SK14022001A3
SK14022001A3 SK1402-2001A SK14022001A SK14022001A3 SK 14022001 A3 SK14022001 A3 SK 14022001A3 SK 14022001 A SK14022001 A SK 14022001A SK 14022001 A3 SK14022001 A3 SK 14022001A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
sulfide
chlorophenyl
amino
chloro
dichlorophenyl
Prior art date
Application number
SK1402-2001A
Other languages
English (en)
Inventor
Kerry Fowler
Mark Orme
Donald E. Staunton
Janet Adolphson
Original Assignee
Icos Corporation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Icos Corporation filed Critical Icos Corporation
Publication of SK14022001A3 publication Critical patent/SK14022001A3/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/36—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D207/40—2,5-Pyrrolidine-diones
    • C07D207/416—2,5-Pyrrolidine-diones with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to other ring carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/01—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and halogen atoms, or nitro or nitroso groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/09—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and halogen atoms, or nitro or nitroso groups bound to the same carbon skeleton having sulfur atoms of thio groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/23—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/31—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton
    • C07C323/33—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton having at least one of the nitrogen atoms bound to a carbon atom of the same non-condensed six-membered aromatic ring
    • C07C323/35—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton having at least one of the nitrogen atoms bound to a carbon atom of the same non-condensed six-membered aromatic ring the thio group being a sulfide group
    • C07C323/37—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton having at least one of the nitrogen atoms bound to a carbon atom of the same non-condensed six-membered aromatic ring the thio group being a sulfide group the sulfur atom of the sulfide group being further bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/23—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/39—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton at least one of the nitrogen atoms being part of any of the groups, X being a hetero atom, Y being any atom
    • C07C323/40—Y being a hydrogen or a carbon atom
    • C07C323/41—Y being a hydrogen or an acyclic carbon atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D213/70—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/36—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D235/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings
    • C07D235/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D235/04—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles
    • C07D235/06—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/60—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D277/62—Benzothiazoles
    • C07D277/68—Benzothiazoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached in position 2
    • C07D277/70—Sulfur atoms
    • C07D277/74—Sulfur atoms substituted by carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/04—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms
    • C07D295/08—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly bound oxygen or sulfur atoms
    • C07D295/096—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly bound oxygen or sulfur atoms with the ring nitrogen atoms and the oxygen or sulfur atoms separated by carbocyclic rings or by carbon chains interrupted by carbocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/04—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms
    • C07D295/12—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly or doubly bound nitrogen atoms
    • C07D295/135—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly or doubly bound nitrogen atoms with the ring nitrogen atoms and the substituent nitrogen atoms separated by carbocyclic rings or by carbon chains interrupted by carbocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/77—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D307/87—Benzo [c] furans; Hydrogenated benzo [c] furans
    • C07D307/90—Benzo [c] furans; Hydrogenated benzo [c] furans with an oxygen atom in position 1 and a nitrogen atom in position 3, or vice versa

Landscapes

  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Quinoline Compounds (AREA)
  • Control Of El Displays (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Thiazole And Isothizaole Compounds (AREA)
  • Furan Compounds (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Description

Oblasť techniky
Predkladaný vynález sa týka nových zlúčenín, ktoré inhibujú väzbu LFA1 na prirodzený ligand ako na väzbového partnera. Ďalej sa predkladaný vynález týka použitia týchto zlúčenín.
Doterajší stav techniky
Leukocyt funkčne prepojený antigén (LFA-1, CDlla/CD18) je leukocyt špecifický β2 integrín, ktorý participuje v bunka/bunka adhézii. Väzbová aktivita LFA-1 je nevyhnutná na leukocytovú extravazáciu z obehu na miesto zápalu pri zápalovej reakcii. Sú známe tri zásadné ligandy na väzbu LFA-1, ICAM-1, ICAM-2 a ICAM-3, ktoré sú intercelulárnymi adhéznymi molekulami, ktoré zohrávajú dôležitú úlohu v lokalizácii leukocytovej adhézii na endoteliálne bunky v mieste zápalu. ICAM-4 a ICAM-5 sú tiež známe pri väzba LFA-1. Väčšina leukocytov podstatne exprimujú LFA-1, ale väzbový ligand si vyžaduje aktiváciu v snahe vyvolať konformačné zmeny a zvýšenie schopnosti ligandu viazať. Napríklad, ICAM-1 je normálne exprimovaný v nízkych hladinách na endotélium, avšak, zápal vyvolaný zápalovými mediátormi podporuje zvýšenie povrchovej expresie v bunkách v mieste zápalu, pričom hneď podporuje lokalizáciu leukocytovej adhézie cez väzbu s aktivovaným LFA-1.
Štruktúra LFA-1 zahrnuje rozdielne intracelulárne a extracelulárne domény, ktoré pravdepodobne participujú a/alebo regulujú ICAM väzbu. Konkrétnym záujmom je oblasť v <Xl reťazci približne s 200 aminokyselinami, označená I doména, ktorá sa na nachádza vo všetkých β2 integrínoch, rovnako ako v iných proteínoch. Dôkaz naznačuje, že I doména je nevyhnutná na väzbu LFA-1 na ICAM-1 a 3. Napríklad, anti-LFA-1 blokujúce monoklonálne protilátky boli zmapované na epitopy v rámci I domény. Rekombinantné I doménové polypeptidové fragmenty inhibujú adhéziu sprostredkovanú • · • · • · · · * integrínom a väzbu ICAM-1. Vo vnútri I domény LFA-1 (a iných proteínoch) je jediný kovový ión závislý na adhéznom mieste (MIDAS), ktorý prednostne viaže mangánový ión alebo ión horčíka. Väzba akéhokoľvek katiónu je žiaduca kvôli ligandovej interakcii a predpokladá sa, že vyvoláva konformačné zmeny v LFA-1 nevyhnutné pre väzbu. Viažuci sa katión môže potom byť regulačným mechanizmom, ktorý reaguje na zmeny v extracelulárnom leukocytovom prostredí. Táto hypotéza je podporovaná pozorovaním, pri ktorom viažuci sa vápnikový ión aktuálne inhibuje LFA-1 interakciu s ICAM-1. Samozrejme, by sa mohlo predpokladať že, inaktívna LFA-1 konformácia je dôsledkom viazania vápnika a že nahradenie vápnikového iónu mangánovým alebo horečnatým je krokom potrebným na LFA-1 aktiváciu [Griggs a kol., J. Biol. Chem. 273:22113-22119 (1998)]. Aj iné faktory by mohli vyvolať LFA-1 aktiváciu, vrátane T bunkového receptora, cytokínovej stimulácie a in vitro PMA stimulácie.
V praxi sa identifikácia LFA-1/ICAM väzbových miest vykonáva terčmi na modulovanie leukocytových zápalových odpovedí. Viaceré protilátky, ktoré boli izolované sú schopné indukovať LFA-1 aktiváciu [pozri, napríklad, Landis a kol., J. Celí Biol. 120:1519-1527 (1993)] alebo napríklad predchádzať ICAM1 interakcii [pozri napríklad, Randi a Hogg, J. Biol. Chem. 269: 12395-12398 (1994)]. Predchádzajúca identifikácia anti-LFA-1 aktivovaných protilátok, ktoré rozpoznávajú viaceré a rozdielne extracelulárne epitopy predpokladá existenciu viac ako jednej regulačnej oblasti, pravdepodobne závislej od cytoplazmatickej signalizácie. Lokalizácia LFA-1 miest, ktoré viažu ICAM-1 sa skúmala s využitím chimerických LFA-1 α proteínov zahrnujúcich ľudské a myšie komponenty [Huang a Springer, J. Biol. Chem. 270:19008-19016 (1995)]. Štúdie naznačujú, že zvyšky ktoré koordinujú väzbu katiónu a zvyšky blízke ku miestu sú nevyhnutné pre väzbu ICAM-1 v relatívne širokom rozhraní. Presnejšie vymedzenie extracelulárnej oblasti a kontaktných bodov pre ICAM-1 väzbu bude umožňovať označenie účinných modulátorov.
Teda v tejto problematike je potrebné presne identifikovať regulačné oblasti pre proteíny, ktoré participujú na zápalových odozvách a obzvlášť LFA1 a ICAM, ktoré viažu LFA-1. Určenie terciárnej (alebo kvartérnej) štruktúry r r proteínu môže pomôcť určiť eventuálne regulačné oblasti, čo umožní rozumné označenie biologicky kompatibilných malých molekúl na terapeutickú a profylaktickú intervenciu pri zápalových poruchách. Taktiež je potrebné identifikovať zlúčeniny, ktoré inhibujú väzbu LFA-1 na ICAM a ktoré môžu byť použité na liečbu zápalových porúch.
Podstata vynálezu
Predkladaný vynález je zameraný na zlúčeniny, ktoré sa viažu na nové regulačné miesto v I doméne LFA-1 a týmto inhibujú LFA-1 väzbu na ICAMs, ktorý viaže LFA-1. Predkladaný vynález z tohto dôvodu poskytuje metódy regulácie leukocytovej adhézie na endotelové bunky. Zlúčeniny vynálezu sú využiteľné pri liečbe patologických stavov, takých ako tie, ktoré sú spojené so zápalovými ochoreniami, autoimunitnými ochoreniami, tumorovými metastázami, odhojením štepu a reperfúznym poškodením. Konkrétne je predkladaný vynález zameraný na diarylové sulfidy všeobecného štruktúrneho vzorca (I), farmaceutický prijateľnú soľ alebo ich proliečivá, ďalej je zameraný na použitie diarylsulfidov a konkrétne na použitie zlúčenín vzorca (I) na inhibovanie väzby LFA-1 na ICAM, ktorý sa viaže na LFA-1.
kde A a B, nezávisle, sú arylové skupiny vybrané zo skupiny obsahujúcej 5- a 6- členné aromatické kruhy zahrnujúce, ale nie len, fenyl, tienyl, furyl, pyrimidinyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrolyl a pyridazinyl;
Ri, R2 a R3, nezávisle, sú vybrané zo skupiny obsahujúcej vodík,
Ra, pričom Ra je vodík alebo alkylová skupina obsahujúca jeden až šesť nasýtených rozvetvených alebo nerozvetvených reťazových uhlíkových atómov (Cj.6alkyl),
-O-Ra-;
halogén, pričom halogén je Cl, F, Br alebo I,
NRbRc kde Rb a Rc, nezávisle, sú H, Ci-ôalkyl alebo -CH2-aryl,
-no2,
-C(=O)Ra,
-CN perfluoroRa taký ako trifluórmetyl,
-N-C(=O)Ra,
-(CH2)n-NRbRc pričom n je celé číslo 1 až 6,
5- alebo 6- členný heterocyklický kruh, buď alifatický alebo aromatický, obsahujúci jeden alebo viac O, N alebo S, voliteľne substituovaný, taký ako morfolino a -S-aryl, pričom aryl je 5- alebo 6- členný aromatický kruh, voliteľne substituovaný;
a R4, R5 a Rô, nezávisle, sú vybrané zo skupiny obsahujúcej vodík
-Ra
-O-Ra
-halogén
-NRbRc
-NO2
-(C=O)Ra
-CN
-pentafluoroRa,
-N-C(=O)Ra,
-(CH2)„-NRbRc a
5- alebo 6- členný heterocyklický kruh, alifatický alebo aromatický, obsahujúci jeden alebo viac O, N alebo S a voliteľne substituovaný
-S-aryl alebo kde
R4 a R5 ak sú spolu formujú 5- alebo 6- členný aromatický kruh, voliteľne obsahujúci jeden alebo viac O, N alebo S v kruhu, voliteľne substituovaný.
Príklady nových negatívnych regulátorov LFA-1 viažucich sa na ICAM zahrnujú, ale nie len, zlúčeniny uvedené v tabuľke I.
Tabuľka 1: Príkladné negatívne regulátory
3- Chlór-4-(2-chlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
4- Nitro-2-chlórfenyl-(2 ,3'-dichIórfenyl)-sulfid
3-Chlór-4-(2-naftylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
3-Chlór-4-(2,3-dichIórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
3-Chlór-4-(2,4,5-trichlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
3- Chlór-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
4- (Benzotiazol-2-ylsulfanyl)-3-chlór-fenylamín
3-Chlór-4-(l-chlór-naftalen-2-ylsulfanyl)-fenylamín
3- Metoxy-4-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín
5- Amino-2-(2,3-dichlórfenylsuIfanyl)-acetofenón hydrochlorid
4- (2,3-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín
3-Chlór-4-(l-naftylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
3- Metyl-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid l-Acetamido-3-chlór-4-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)-benzén
4- Metylamino-2,2 ,4 -trichlórdifenylsulfid
3-Bróm-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
3- Hydroxy-4-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
6-Chlór-5-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-lH-benzimidazol
4- Amino-2-chlórfenyl-(2,4 -dimetylfenyl)-sulfid hydrochlorid
2.5- Dichlór-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
4-Amino-2-chlórfenyl-(2 -metyl-4 -chlórfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlórfenyl-(2 ,4 -difluórfenyl)-sulfid hydrochlorid
4-Amino-2-chlórfenyl-(2 ,4 ,6 -trichlórfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlórfenyl-(2 -amino-4 -chlórfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlórfenyl-(2 -chlór-4 -nitrofenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlórfenyl-(2 -nitro-4 -chlórfenyl)-sulfid
4-Amino'-2-chlórfenyl-(3 ,4 -dichlórfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlórfenyl-2-(3-chlór-5-trifluórmetylpyridyl)-sulfid Zh's-(4,4 -diamino-2,2 -dichlórfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlórfenyl-(2 ,4 -dichlórfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlórfenyl-(4 -acetamido-2 -chlórfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlórfenyI-6-(5-nitrochinolino)-sulfid
4-Amino-2-chlórfenyl-(4 -dimetylamino-2 -chlórfenyl)-sulfid 2-Chlór-4-amino-5-metylaminofenyl-(2 ,4 -dichlórfenyl)-sulfid 2-Chlór-4-amino-5-N-morfolinofenyl-(2 ,4 -dichlórfenyl)-sulfid
4-Amino-2-trifluórmetylfenyl-(2 ,4 -dichlórfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlórfenyl-2-(5-nitro-3-bromo)-pyridín sulfid 4-Aminometyl-2-chlórfenyl-(2 ,4 -dichlórfenyl)-sulfid
4.5- Dichlór-2-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín
3.5- Dichlór-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín
2,3-Dichlór-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín
4- Amino-2-fluórfenyl-(2 ,4 -dichlórfenyl)-sulfid
5- Amino-3-chlórfenyl-(2,4-dichlórfenyl)-sulfid
3-Chlór-4-(l-chlór-naftalen-2-ylsulfanyl)-fenylamín l-(3-Nitro-4-fenylsulfanyl-fenyl)-etanón
1- (3-Nitro-4-fenyIsulfanyl-fenyl)-etanón oxím
5- Trifluórmetyl-2-fenylsulfanyl-benzonitril
-(3,5-dichlórfenyl)-3-fenylsulfanyl-pyrolidín-2,5-dión
5ťď-2,4,6-Trinitrofenyl-sulfid
2- Metyl-l-(2-o-tolylsulfanyl-fenyl)-lH-pyrol
3- [2-(4-Chlór-2-nitro-fenylsulfanyl)]-fenylamino-3H-izobenzofurán-l-ón
4- (Benzotiazol-2-ylsulfanyl)-3-chlór-fenylamín
2-Nitro-4-chlórfenyl-(2 -aminofenyl)-sulfid
6- Amino-2-chlórfenyl-(4 -metylfenyl)-sulfid
4-Nitrofenyl-(2 -chlórfenyl)-sulfid
2.4- Dinitrofenyl-(4 -chlórfenyl)-sulfid
4-Aminofenyl-(2-chlórfenyl)-sulfid
2.4- Diaminofenyl-(4 -izopropylfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-chlórfenyl-(2 ,3 -dichlórfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlórfenyl-2-(5-nitro-3-bróm)-pyridín-sulfid
Zlúčeniny ako sú prezentované štruktúrnym vzorcom (I) sa môžu pripraviť syntetickými metódami alebo pomocou metabolických procesov. Príprava zlúčenín pomocou metabolických procesov zahrnuje aj in vivo a in vitro procesy. Farmaceutické kompozície obsahujúce zlúčeniny vynálezu sú taktiež zahrnuté.
Vynález tiež poskytuje metódy inhibicie LFA-1 väzby na ICAM, ktorý sa viaže LFA-1; obsahujúce krok kontaktovania LFA-1 s diaryl sulfidom a výhodne zlúčeninu štruktúrneho vzorca I. Podobne, vynález poskytuje metódy inhibície leukocytovej adhézie na endotelové bunky obsahujúce krok kontaktovania leukocytov exprimujúcich LFA-1 s diarylsulfidom a výhodne zlúčeninu štruktúrneho vzorca (I). Vynález tiež zahrnuje metódy liečby zápalovej poruchy obsahujúce kroky podávania účinného množstva farmaceutickej kompozície vynálezu cicavcovi na inhibovanie väzby LFA-1 na ligand, ktorý konkuruje s ICAM-1 alebo ICAM-3. Vynález tiež zahŕňa metódy liečby zápalovej poruchy vznikajúcej z LFA-1 väzby na ligand, ktorý konkuruje s ICAM-1 alebo ICAM-3 na väzbu na LFA-1, obsahujúce podanie zlúčeniny, ktorá konkuruje s 3-chlór-4-(l-chlór-naftalen-2-ylsulfanyl)-fenylamínom na viazanie na LFA-1 v dostatočnom množstve na inhibovanie väzby ligandu na LFA-1. Vynález ďalej poskytuje metódy zlepšujúce patologický stav spojený s LFA-1 viazaním na ICAM, ktorý viaže LFA-1, obsahujúce podávanie účinného množstva diarylsulfidu a výhodne zlúčeniny štruktúrneho vzorca (I) na inhibovanie LFA-1 väzby na ICAM.
Príklady inhibítorov predkladaného vynálezu zahrnujú, ale nie len, zlúčeniny uvedené v tabuľke I.
Vynález tiež zahŕňa použitie zlúčeniny podľa vynálezu pri príprave liečiva na liečbu patologických stavov spojených s LFA-1, ktorý sa viaže na ICAM-1.
Vynález tiež poskytuje metódy na identifikáciu negatívneho regulátora LFA-1, ktorý sa viaže na ligand, ktorý konkuruje s CAM-1 alebo ICAM-3 viažucimi sa na LFA-1, obsahujúce kroky: a) kontaktovanie LFA-1 s aktivátorom LFA-1 väzby; b)meranie LFA-1 väzby s ligandom v prítomnosti a v neprítomnosti testovanej zlúčeniny; a c) identifikáciu testovanej zlúčeniny ako inhibítora ak je detegované zníženie LFA-1 väzby na ligand v prítomnosti testovanej zlúčeniny. V jednom prípade je aktivátorom kryštalická fialová farba.
Podrobný opis vynálezu
IC50 hodnota zlúčeniny je definovaná ako koncentrácia zlúčeniny potrebnej na 50% inhibíciu biologickej aktivity tejto zlúčeniny. Ako je používané v tomto texte, negatívny regulátor je definovaný ako zlúčenina charakterizovaná pomocou IC50 na inhibovanie LFA-1 väzby na ligand. Negatívne regulátory viazania LFA-1 sú definované tak aby mali IC50 menšiu než asi 200 μΜ, menšiu než asi 100 μΜ, menšiu než 50 μΜ a výhodne od asi 0,05 μΜ do 40 μΜ.
Termín „farmaceutický prijateľný nosič“ ako je používaný tu zodpovedá prekurzorom zlúčenín vynálezu, ktoré sú vhodné na použitie pri kontakte s príjemcom a ktoré majú primeranú toxicitu, podráždenie, alergickú odpoveď porovnateľnú s pomerom úžitok/riziko.
Termín „prekurzor“ ako je používaný v tomto texte zodpovedá zlúčeninám, ktoré sú rýchlo transformované in vivo na rodičovskú zlúčeninu vyššie uvedeného vzorca, napríklad, hydrolýzou. Dôkladný komentár je možné nájsť v Higuchi a kol., Prodrugs as Novel Delivery Systems, vol. 14 A.C.S.D. Symposium Šerieš and in Roche (ed), Bioreversible Carriers in Drug Design. American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987, obidve sú tu uvedené ako odkaz. Prekurzory sú všeobecne diskutované v Hardma a kol., (E d s), Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Terapeutics, d e v i a t e vydanie, New York, New York (1996), pp. 11-16. Podanie liečiva je nasledované elimináciou z tela alebo nejakou biotransformáciou, pomocou ktorej je biologická aktivita liečiva redukovaná alebo eliminovaná. Alternatívne, biotransformačný proces môže viesť k metabolickému produktu, ktorý je sám o sebe aktívnejší alebo rovnako aktívny v porovnaní s liečivom, ktoré bolo podané na začiatku. Lepšie pochopenie týchto biotransformačných procesov umožňuje označenie “proliečiv“, po ktorých nasleduje biotransformácia, lebo sú viac fyziologicky aktívne v pozmenenom stave. Proliečivá sú potom farmakoligicky inaktívne zlúčeniny, ktoré sú konvertované na biologicky aktívne metabolity. V určitých formách, sa proliečivá stávajú farmakologicky aktívne cez hydrolýzu, napríklad, esterovej alebo amidovej väzby, často krát zavedením alebo expozíciou funkčnej skupiny na proliečivo. Taktiež modifikované liečivo môže reagovať s endogénnou zlúčeninou za vytvorenia vodou rozpustného konjugátu, pričom sa ďalej zvyšujú farmakologické vlastnosti zlúčeniny, napríklad, zvýšenie obehového polčasu.
V ďalšej alternatíve sa môžu proliečivá podrobiť kovalentnej modifikácii na funkčnej skupine s, napríklad, kyselinou glukorónovou, sulfátom, glutatiónom, a aminokyselinami alebo acetátom. Výsledný konjugát môže byť inaktivovaný a exkretovaný v močovine alebo sa môže stať účinnejším než rodičovská zlúčenina. Konjugáty s vysokou molekulovou hmotnosťou môžu byť exkretované do žlče, kde sa podrobujú enzymatickému štiepeniu a uvoľňujú sa späť do cirkulácie, týmto sa zvyšuje biologický polčas života originálne podanej zlúčeniny.
Zlúčeniny podľa vynálezu môžu existovať ako stereoizoméry, kde sú prítomné asymetrické alebo chirálne centrá. Stereoizoméry sú označované buď „S“ alebo „R“ v závislosti na umiestnení substituentov okolo chirálneho uhlíkového atómu. Zmesi stereoizomérov sú predmetom vynálezu. Stereoizoméry zahrnujú enantioméry, diastereoméry a ich zmesi. Jednotlivé stereoizoméry zlúčenín podľa vynálezu sa môžu pripraviť synteticky z komerčne vhodných východiskových materiálov, ktoré obsahujú asymetrické alebo chirálne centrá alebo prípravou racemických zmesí, po ktorej nasledujú separačné alebo rezolučné techniky dobre známe odborníkom v odbore. Spôsoby rezolúcie zahŕňajú (1) pripojenie zmesi enantiomérov ku pomocnej chirálnej látke, separáciu výslednej zmesi rekryštalizáciou alebo chromatografiou a uvoľnenie opticky čistého produktu z pomocnej chirálnej látky; (2) tvorbu soli s využitím opticky aktívneho rozpúšťacieho činidla a (3) priamu separáciu zmesi optických enantiomérov na chirálnych chromatografických kolónach.
Zlúčeniny predkladaného vynálezu zahŕňajú tie zlúčeniny, ktoré spadajú pod všeobecný štruktúrny vzorec (I) uvedený vyššie a sú zhrnuté v tabuľke I, ale nie len tieto.
Vynález tie poskytuje farmaceutické kompozície obsahujúce jednu alebo viac zlúčenín podľa vynálezu, výhodne ďalej obsahujúce farmaceutický prijateľný nosič alebo riedidlo.
Vynález ďalej poskytuje spôsoby inhibície väzby LFA-1 na ICAM, ktorá viaže LFA-1 zahŕňajúce krok kontaktovania LFA-1 alebo ICAM-väzbového fragmentu s negatívnou regulačnou zlúčeninou; uvedený negatívny regulátor väzby LFA-1 <xl polypeptidu alebo jeho fragment pri mieste vybranom zo skupiny obsahujúcej konformáciu, ktorá viaže diaryl sulfid alebo väzbové miesto definované pomocou íle259, Leu298, íle235. Val157, Leu161 a íle306 ľudského LFA-1 aL polypeptidu a LFA-1 domény, ktorá viaže 3-chlór-4-(lchlór-naftalen-2ylsulfanyl)-fenylamín majúci štruktúru uvedenú vyššie. Alternatívne, negatívny regulátor väzbového miesta na LFA-1 je definovaný aminokyselinovými zvyškami íle259, Leu298, íle235, Val157, Leu161, íle306, Leu302, Tyr257, Leu132, Val233, Val130 a Tyr166. V ešte ďalšej alternatíve, nagatívny regulátor väzbového miesta na LFA-1 je definovaný aminokyselinovými zvyškami Lys287, Leu298, íle259’ Leu302, íle235, Val157, Tyr257, Lys305, Leu161, Leu132, Val233, íle255, Val130, Tyr166, íle306, Phe134, Phe168, Phe153, Tyr307, Val308, íle309, Thr231, Glu284, Phe285, Glu301, Met154, íle237, íle150 a Leu295. LFA-1 regulátor väzbového miesta je opísaný v U.S. patentovej prihláške pod názvom „LFA-1 regulačné väzbové miesto a jeho využitie“, podanej 2. apríla 1999, č. 27866/35375, č. 09/285,477, ktorá je tu zahrnutá ako odkaz. V jednom uskutočnení, spôsoby vynálezu zahrnujú použitie buniek exprimujúcich buď LFA-1 alebo ICAM. V spôsobe, kde jeden z väzbových partnerov je exprimovaný v bunke, druhý väzbový partner je buď čistený alebo izolovaný, vo fluidnej vzorke (čistenej, čiastočne čistenej alebo surovej) získanej z jedinca alebo v bunkovom lyzáte. Vynález tiež zahŕňa spôsoby, kde obidva LFA-1 a ICAM sú exprimované v bunkách. LFA-1 a ICAM väzbový partneri môžu byť exprimovaný na tom istom bunkovom type alebo na rozdielnych bunkových typoch. Výhodne, LFA-1 polypeptid je exprimovaný na leukocytoch ako napríklad lymfocytoch, monocytoch alebo granulocytoch a ICAM polypeptid je exprimovaný na endotelových bunkách.
Vynález tiež poskytuje spôsoby inhibovania leukocytovej adhézie na endotelové bunky, zahŕňajúce krok kontaktovanie uvedeného leukocytu s negatívnym regulátorom väzby LFA-1 na ICAM, ktorá viaže LFA-1, uvedený negatívny regulátor väzby LFA-1 na regulačnom mieste je vybraný zo skupiny obsahujúcej konformáciu, ktorá viaže diaryl sulfid alebo väzbové miesto označované íle259, Leu298, íle235, Val157, Leu161 a íle306 ľudského LFA-1 ccl polypeptidu alebo LFA-1 domény, ktorá viaže 3-chlór-4-(l-chlór-naftalen-2ylsulfanyl)-fenylamín. Alternatívne, diaryl sulfidová väzbová konformácia je definovaná aminokyselinovými zvyškami ako sú uvedené vyššie. Sú tiež zahrnuté in vivo a in vitro metódy.
Vynález tiež poskytuje spôsoby zlepšenia patologických stavov z LFA-1 väzby na ICAM, zahŕňajúce krok podania, jednotlivcovi, ktorý to potrebuje negatívneho regulátora väzby LFA-1 na ICAM v množstve potrebnom na inhibíciu väzby LFA-1 na ICAM. Uvedený negatívny regulátor väzby na LFA-1 regulačné miesto je vybraný zo skupiny obsahujúcej konfirmáciu, ktorá viaže diaryl sulfid alebo miesto určené pomocou ILE259, Leu298, íle235, Val157, Leu161 a íle306 ľudského LFA-1 alebo LFA-1 domény, ktorá viaže zlúčeninu 3-chlór-4(l-chlór-naftalen-2ylsulfanyl)-fenylamín.
V preferovanom uskutočnení, spôsoby vynálezu zahŕňajú použitie diaryl sulfidovej zlúčeniny na inhibovanie väzby LFA-1 na ICAM. Preferovaný spôsob zahŕňa použitie zlúčeniny všeobecného štruktúrneho vzorca (I) a farmaceutickej prijateľnej soli alebo proliečivá ako je uvedené vyššie.
Terapeutické metódy
Do tej miery, že leukocytová adhézia na endotelové bunky vyvoláva nárast patologických porúch, vynález poskytuje spôsoby zlepšenia patologických stavov spojených s nahromadením leukocytov kvôli väzbe LFA-1 na ICAM, ktorá viaže LFA-1, pričom tieto spôsoby zahrnujú krok podanie, jednotlivcovi, ktorý to potrebuje, množstva inhibítora väzby LFA-1 na ICAM účinného na inhibovanie väzba LFA-1 na ICAM, pričom uvedený inhibítor sa viaže na LFA-1 v mieste predstavovanom aminokyselinovými zvyškami Ile259, Leu298, Ile235, Vall57, Leulól a Ile306. Medzi lekárske stavy patria, ale neobmedzuje sa to len na ne, zápalové ochorenia, autoimunitné ochorenia, reperfúzne poškodenie, infarkt myokardu, mŕtvicam, hemoragický šok, transplantácia orgánu a podobne. Spôsoby podľa vynálezu poskytujú zlepšenie rôznych patologických stavov, zahrnujúcich ale neobmedzuje sa to len na ne, syndróm dýchacích ťažkostí, mnohonásobné poškodenie orgánu syndrómom sekundárnej septikémie, mnohonásobné poškodenie orgánu sekundárnou traumou: reperfúzne poškodenie tkaniva, akútna glomerulonefritída, reaktívna artritída, dermatóza s akútnymi zápalovými zložkami, mozgová príhoda, termálne poškodenie, Crohnovo ochorenie, nekrotizujúca enterokolitída, granulocytová transfúzia spojená so syndrómom a cytokínom vyvolaná toxicita a ochorenia sprostredkované T bunkami.
Zápalová bunková aktivácia a nadmerná alebo neregulovateľná cytokínová (napr. TNFa a IL-Ιβ) produkcia sú tiež zahrnuté v poruchách takých ako reumatoidná artritída, osteoartritída, dnu pôsobiaca artritída, spondylitída, štítna žľaza spojená s oftalmopatiou, Behcetová porucha, sepsa, septický šok, endotoxický šok, gram negatívna sepsa, gram pozitívna sepsa, toxický šokový syndróm, astma, chronická bronchitída, syndróm alergických dýchacích ťažkostí, chronické zápalové pľúcne ochorenie, také ako chronické obštrukčné pľúcne ochorenie, silikóza, pľúcna sarkoidóza, reperfúzne poškodenie myokardu, mozgu, fibróza, cystická fibróza, tvorba keloidu, tvorba jaziev, ateroskleróza, poruchy odmietnutia transplantátu také ako reakcia štep versus hostiteľ a alografické odmietnutie, chronická glamerulonefritída, lupus, zápalové ochorenie pečene, také ako ulceratívna kolitída, proliferatívne lymfocytové ochorenia také ako leukémia a zápalové dermatózy také ako atopická dermatitída, psoriáza, urtikária, uveitída.
Iné stavy charakterizované zvýšením hladín cytokínu zahrnujú poškodenie mozgu spôsobené miernou traumou (pozri J. Neurotrauma, 12, pp. 1035-1043 (1995); J. Clin. Invest., 91, pp. 1421-1428 (1993)), kardiomyopatiu takú ako kongestívne zlyhanie srdca (pozri Circulation, 97, pp. 1340-1341 (1998)), kachexiou, sekundárnu kachexiu na infekciu alebo zhubný nádor, sekundárnu kachexiu na získaný syndróm imunitnej nedostatočnosti (AIDS), ARC (AIDS príbuzný komplex), myalgickú horúčku spôsobenú infekciou, cerebrálnu maláriu, osteoporózu a ochorenia resorpcie kosti, tvorbu keloidu, tvorbu zjazveného tkaniva a pyrexiu.
Schopnosť negatívnych regulátorov podľa vynálezu na liečbu artritídy môže byť demonštrovaná v myšom modely artritídy vyvolanom zavedením kolagénu (Kakimoto a kol., Immunol. 142:326-337 (1992)) v krysom modely artritídy vyvolanom zavedením kolagénu (Knoerzer a kol. Toxical Pathol. 25:13-19 (1997)) v krysom modely artritídy vyvolanom prídavnou látkou (Halloran a kol. Artritis Rheum 39:810-819 (1996)), v krysom modely artitídy vyvolanom zavedením bunkových stien streptokokov (Schimmer a kol., J.
Immunol. 160:1466-1477 (1998)) alebo v SCID-myšom ľudskom modely reumatickej artritídy (Oppenheimer-Marks a kol., J. Clin. Invest 101:1261-1272 (1998)).
Schopnosť negatívnych regulátorov liečiť Lymeovú artritídu môže byť demonštrovaná v súlade s metódou Grossa a kol., Science, 2J8:1Q3-TQ6, (1998).
Schopnosť negatívnych regulátorov liečiť astmu môže byť demonštrovaná na myšom modely alergickej astmy v súlade s metódou Wegnera a kol., Science, 247:456-459, (1990), alebo na myšom modely nealergickej astmy v súlade s metódou Bloemen a kol., Am. J. Respir. Crit. Čare Med. 153:521529 (1996).
Schopnosť negatívnych regulátorov liečiť zápalové poškodenie pľúc môže byť demonštrovaná na myšom modely poškodenia pľúc vyvolanom zavedením kyslíka v súlade s metódou Wegnera a kol., Lung, 170:261 -279, (1992), na myšom modely poškodenia pľúc vyvolanom zavedením imunitného komplexu v súlade s metódou Mulligan a kol., J. Immunol., 754:1350-1363, (1995) alebo na myšom modely poškodenia pľúc vyvolanom podaním kyseliny v súlade s metódou Nagase a kol., Am. J. Respir. Crit. Čare Med., 154:504-510, (1996).
Schopnosť negatívnych regulátorov liečiť zápalové poškodenie pľúc môže byť demonštrovaná na myšom modely kolitídy vyvolanom podaním chemickej látky v súlade s metódou Bennetta a kol., J. Pharmacol. Exp. Ther., 280:988-1000, (1997).
Schopnosť negatívnych regulátorov liečiť autoimunitnú diabetes môže byť demonštrovaná na NOD myšom modely v súlade s metódou Hasagawa a kol., Int. Immunol. 6:831-838 (1994) alebo na myšom modely diabetes vyvolanom zavedením streptozotocínu v súlade s metódou Herrolda a kol., Celí Immunol. 157:489-500, (1994).
Schopnosť negatívnych regulátorov liečiť zápalové poškodenie pečene môže byť demonštrovaná v myšom modely poškodenia pečene v súlade s metódou Tanaka a kol., J. Immunol., 151:5088-5095, (1993).
Schopnosť negatívnych regulátorov liečiť zápalové glomerulárne poškodenie môže byť demonštrovaná na krysom modely nefritídý vyvolanom nefrotoxickým sérom v súlade s metódou Kawasaki a kol., J. Immunol., 150: 1074-1083 (1993).
Schopnosť negatívnych regulátorov liečiť enteritídu vyvolanú radiáciou môže byť demonštrovaná na krysom abdominálnom modely vyvolanom ožiarením v súlade s metódou Panes a kol., Gastroenterology, 108:1761-1769 (1995).
Schopnosť negatívnych regulátorov liečiť pneumonitídu vyvolanú ožiarením môže byť demonštrovaná na myšom pulmonárnom modely vyvolanom ožiarením v súlade s metódou Hallahana a kol., Proc. Natl. Acad. Sci (USA), 94: 6432-6437 (1997).
Schopnosť negatívnych regulátorov liečiť reperfúzne poškodenie môže byť demonštrovaná na izolovanom srdci v súlade s metódou Tamiya a kol., Immunopharmacology, 29.53-63 (1995) alebo na uspaných psoch v súlade s modelom podľa Hartman a kol., Cardiovasc. Res. 30:47-54 (1995).
Schopnosť negatívnych regulátorov liečiť pulmonárne reperfúzne poškodenie môže byť demonštrovaná na krysom modely reperfuzného poškodenia pľúcneho štepu v súlade s metódou DeMeester a kol., Transplantation, 62: 1477-1485 (1996) alebo na králičom modely pulmonárneho edému v súlade s metódou Horgana a kol., Am. J. Physiol. 261: H1578-H1584 (1991).
Schopnosť negatívnych regulátorov liečiť mŕtvicu môže byť demonštrovaná na králičom modely cerebrálnej mŕtvice v súlade s metódou Bowes a kol., Exp. Neurol., 779:215-219 (1993) a na krysom ischemickoreperfúznom modely strednej cerebrálnej artérie v súlade s metódou Chopp a kol., Stroke, 25:869-875 (1994) alebo na králičom ischemickom modely reverzibilnej spinálnej chordy v súlade s metódou Clark a kol., Neurosurg., 75:623-627 (1991). Schopnosť negatívnych regulátorov liečiť cerebrálnu vazospazmu môže byť demonštrovaná na krysom experimentálnom vazospazmovom modely v súlade s metódou podľa Oshiro a kol., Stroke, 28: 2031-2038 (1997).
Schopnosť negatívnych regulátorov liečiť uzavretie periférnej artérie môže byť demonštrovaná na krysom modely skeletalnej svalovej ischémie/reperfúzie v súlade s metódou podľa Gute a kol., Mol. Celí Biochem., 179-Λ69-Μ (1998).
Schopnosť negatívnych regulátorov liečiť odmietnutie štepu môže byť demonštrovaná na myšom modely odmietnutia srdcového aloštepu v súlade s metódou podľa Isobe a kol., Science, 255:1125-1127 (1992), na myšom modely štítnej žľazy a nadobličky v súlade s metódou podľa Talento a kol., Transplantation 55:418-422 (1993), na opičom modely renálneho aloštepu v súlade s metódou podľa Cosimi a kol., J. Immunol., 744:4604-4612 (1990), na krysom modely nervového aloštepu v súlade s metódou podľa Nakao a kol., Muscle Nerve, 75:93-102 (1995), na myšom modely kožného aloštepu v súlade s metódou Gorczynski a Wojcik, J. Immunol. 752:2011-2019, (1994), na myšom modely korneálneho aloštepu v súlade s metódou He a kol., Opthalmol. Vis. Sci., 55:3218-3225 (1994) alebo na modely xenogénových pankreatických transplantačných buniek v súlade s metódou podľa Zeng a kol., Transplantation, 55:681-689 (1994).
Schopnosť negatívnych regulátorov liečiť ochorenie štep versus hostiteľ (GVHD) môže byť demonštrovaná na myšom GVHD modely v súlade s metódou Harning a kol., Transplantation, 52:842-845 (1991).
Schopnosť negatívnych regulátorov liečiť rakovinové ochorenie môže byť demonštrovaná na ľudskom modely lymfómovej metastázy (u myši) v súlade s metódou Aoudjit a kol., J. Immunol., 161:2333-2338, (1998).
Farmaceutické kompozície
Predkladaný vynález tiež poskytuje farmaceutické kompozície, ktoré obsahujú diaryl sulfid formulovaný spolu s jedným alebo viacerými farmaceutickými prijateľnými nosičmi.
Farmaceutické kompozície podľa vynálezu môžu byť podané ľuďom a iným živočíchom rôznou vhodnou cestou. Napríklad, kompozície môžu byť podávané orálne, rektálne, parenterálne, intracisternálne, intravaginálne, intraperitoneálne, topicky (vo forme práškov, mastí alebo kvapiek), bukálne alebo nazálne.
Termín „parenterálne“ podanie ako je používaný v tomto texte zodpovedá módom podania, ktoré zahrnujú intravenóznu, intraarteriálnu, intramuskulárnu, intraperitoneálnu, intrasternálnu, intratekálnu, subkutánnu a intraartikulárnu injekciu a infúziu.
Farmaceutické kompozície podľa vynálezu vhodné na parenterálnu injekciu obsahujú farmaceutický prijateľné sterilné vodné alebo nevodné roztoky, disperzie, suspenzie alebo emulzie rovnako ako sterilné prášky na opätovnú prípravu sterilných roztokov alebo disperzii na okamžité použitie. Príklady vhodných vodných a nevodných nosičov, riedidiel, rozpúšťadiel alebo vehikúl zahrnujú vodu, etanol, polyóly (také ako glycerol, propylén, glykol, polyetylén glykol a podobne) a ich vhodné zmesi, rastlinné oleje (také ako olivové oleje) a organické estery vhodné pre injekciu také etyloleát. Patričná tekutosť môže byť udržiavaná, napríklad, použitím takých materiálov ako lecitín a požadovaná veľkosť častíc v prípade disperzií je udržiavaná použitím povrchovo aktívnych látok.
Tieto kompozície tiež môžu obsahovať adjuvanty také ako konzervačné látky, zvlhčovacie látky, emulzifikačné látky a disperzačné látky. Prevencia proti účinkom mikroorganizmov môže byť zaistená začlenením rôznych antibakteriálnych a antifugálnych agens, napríklad parabénu, chlórbutanolu, kyseliny fenol sorbovej a podobne. Taktiež môže byť vhodné začleniť izotonické agens také ako cukry, chlorid sodný a podobne. Predlžujúca absorpcie farmaceutickej formy do injekcie môže byť zabezpečená pomocou začlenenia agens, ktoré oneskorujú absorpciu takých ako alumínium monosterát a želatína.
V takýchto prípadoch, aby sa dosiahol predlžujúci efekt liečiva, je žiaduce pomalé absorbovanie z subkutánnej alebo intramuskulárnej injekcie. Toto môže byť uskutočnené použitím kvapalnej suspenzie kryštalických a amorfných materiálov so slabou rozpustnosťou vo vode. Rýchlosť absorpcie liečiva potom závisí na jeho rýchlosti rozpustenia, ktorá, môže závisieť od veľkosti kryštálu a kryštalickej forme. Alternatívne, oneskorená absorpcia paranterálne podaného liečiva je uskutočňovaná rozpustením alebo suspendovaním liečiva v olejovom vehikulu.
Injektovateľné depotné formy sú pripravené vytvorením mikrokapsulovaných matríc liečiva v biologicky odbúratelných polyméroch takých ako polyaktidpolyklykolid. V závislosti na pomere liečiva ku polyméru a povahe konkrétneho polyméru môže byť kontrolovaná rýchlosť uvoľňovania liečiva. Príklady iných biologicky odbúrateľných polymérov zahrnujú poly(ortoestery) a poly(anhydridy). Depotné injektovateľné formulácie sú tiež pripravené zachytením liečiva v lipozómoch alebo mikroemulziách, ktoré sú kompatibilné s tkanivom.
Injikovateľné formulácie môžu byť sterilizované, napríklad, filtráciou cez bakteriálny alebo vírusový zachytávajúci filter alebo začlenením sterilizujúceho agens vo forme sterilných tuhých kompozícií, ktoré sa môžu rozpúšťať alebo dispergovať v sterilnej vode alebo inom sterilnom injikovateľnom médiu pred použitím.
Tuhé dávkové formy na orálne podanie zahrnujú kapsule, tablety, pilule, prášky a granule. V takýchto tuhých dávkových formách, účinná zlúčenina je zmiešaná s aspoň jedným inertným, farmaceutický prijateľným excipientom alebo nosičom takým ako citrát sodný alebo fosfát vápenatý a/alebo (a) plnivom alebo nastavovadlom takým ako škroby, laktóza, sacharóza, glukóza, manitol a kyselina kremičitá, (b) spojivom takým ako, napríklad, karboxymetylcelulóza, gumy (algináty, akácia), želatína, polyvinylpyrolidón a sacharóza, (c) zvlhčovačom takým ako glycerol, (d) dezintegrujúcim činidlom takým ako agar-agar, uhličitan vápenatý, zemiakový alebo tapiokový škrob, kyselina algínová, určité silikáty a uhličitan sodný, (e) roztokom spomaľujúcim agens takým ako parafín, f) urýchľovačom absorpcie takým ako kvartérne amóniové zlúčeniny, g)zvlhčovacími činidlami takými ako napríklad cetyl alkohol a glycerol monosterát, h) absorbentami takými ako kaolín a bentonit a (I) lubrikantami takými ako mastenec, kalcium stearát, magnézium stearát, pevné polyetylén glykoly, lauryl sulfát sodný a ich zmesi. V prípade kapsúl, tabliet a piluliek, dávková forma môže tiež obsahovať pufrujúce činidlá.
» r * ľ
Tuhé kompozície podobného typu môžu byť využívané ako plnivá v mäkkých a tvrdých plnených kapsulách za použitia takých excipientov ako laktóza alebo mliečny cukor rovnako ako vysokomolekulové polyetylén glykoly a podobne.
Tuhé dávkové formy tabliet, pastiliek, kapsúl, pilúl a granúl môžu byť pripravené s povlakom a vonkajšou stenou takou ako črevné povlaky a iné povlaky dobre známe v odbore farmaceutických formulácii. Prípadne ešte môžu obsahovať kaliace činidlá a môžu tiež byť kompozíciou s oneskoreným uvoľňovaním účinných zložiek v časti intestinálneho traktu. Príkladné materiály zahrnujú polyméry majúce na pH citlivú rozpustnosť, také ako materiály dostupné pod značkou Eudragit®. Medzi ukončovacie kompozície, ktoré sa môžu použiť patria polymérové substancie a vosky.
Aktívne zlúčeniny môžu byť tiež v mikro-kapsulovanej forme ak je to vhodné s jedným alebo viacerými z vyššie uvedených excipientov.
Kvapalné dávkové formy na orálne podanie zahrnujú farmaceutický prijateľné emulzie, roztoky, suspenzie, sirupy a elixíry. Okrem toho aktívne zlúčeniny, kvapalné dávkové formy môžu obsahovať inertné riedidlá bežne používané v odbore, napríklad, vodu alebo iné rozpúšťadlá, solubilizujúce agens a emulzifikátory také ako etylalkohol, izopropyl alkohol, etyl karbonát, etylacetát, benzylalkohol, benzyl benzoát, propylén glykol, 1,3-butylénglykol, dimetylformamid, oleje (napríklad zo semien bavlnovníka, z podzemnice olejnej, kukuričný olej, zárodočný olej, olivový olej, sezámový olej), glycerol, tetrahydrofurfuryl alkohol, polyetylén glykoly a estery mastných kyselín sorbitanu ich zmesi.
Okrem inertných riedidiel, orálne kompozície môžu tiež zahrnovať adjuvans také ako zvlhčovacie agens, emulzifikačné a suspendačné agens, sladidlá, ochucovacie prostriedky a parfumačné látky.
Suspenzie, okrem účinných zlúčenín môžu obsahovať suspendačné činidlá, také ako, napríklad, etoxylované izostearyl alkoholy, polyoxyetylén sorbitol a estery sorbitanu, mikrokryštalická celulóza, alumínium metahydroxid, bentonit, agar-agar a traganth a ich zmesi.
Kompozície na rektálne alebo vaginálne podanie sú výhodne čapíky, ktoré môžu byť pripravené zmiešaním zlúčeniny tohto vynálezu s vhodnými nedráždivými excipientami alebo nosičmi takými ako kakaové maslo, polyetylén glykol alebo čapíkový vosk, ktoré sú tuhé pri izbovej teplote alebo kvapalné pri telesnej teplote a teda sa roztopia v rekte alebo vaginálnej kavite a uvoľňujú účinnú zlúčeninu.
Zlúčeniny predkladaného vynálezu môžu tiež byť podané vo forme lipozómov. Ako je známe v stave techniky, lipozómy sú všeobecne odvodené z fosfolipidov alebo iných lipidových substancií. Lipozómy sú vytvorené mono- alebo multi- vrstvovými hydratovanými kvapalnými kryštálmi, ktoré sú dispergované vo vodnom médiu. Môžu sa použiť netoxické, fyziologickyprijateľné a metabolizujúce lipidy formujúce lipozómy. Predkladané kompozície v lipozómovej forme môžu obsahovať okrem zlúčeniny predkladaného vynálezu, stabilizéry, konzervačné látky, excipienty a podobne. Preferované lipidy sú fosfolipidy a fosfatidyl cholíny (lecitíny) buď prírodné alebo syntetické. Metódy na vytvorenie lipozómov sú známe v stave techniky. Pozri napríklad Prescott, Ed., Methods in Celí Biology, Volume XIV, Academic Press, New York, N.Y. (1976), p. 33 atď.
Zlúčeniny predkladaného vynálezu môžu byť používané vo forme farmaceutický prijateľných solí odvodených od anorganických alebo organických kyselín.
Výraz „farmaceutický prijateľná soľ“ prináleží soliam, ktoré sú, v rámci lekárskej odbornosti, vhodné na použitie v kontakte s ľudskými tkanivami a tkanivami nižších živočíchov bez toxickej, dráždivej, alergickej odpovede a pomer riziko/prospešnosť je výhodnejší pre prospešnosť. Farmaceutický prijateľné soli sú dobre známe v stave techniky. Napríklad, S.M. Berge a kol., opisujú farmaceutický prijateľné soli detailnejšie v J.Pharmaceutical Sciences, 66:1 (1997). Soli môžu byť pripravené in situ počas konečnej izolácie a čistenia zlúčenín podľa vynálezu alebo oddelene reagovaním voľnej bázickej funkčnej skupiny s vhodnou kyselinou. Reprezentatívne adičné soli kyselín, ale neobmedzuje sa to len na ne zahrnujú acetát, adipát, alginát, citrát, aspartát, benzoát, benzénsulfonát, bisulfát, butyrát, kamforát, kamforsulfonát, diglukonát, glycerofosfát, hemisulfát, heptanoát, hexanoát, fumarát hydrochlorid, hydrobromid, hydrojodid, 2-hydroxyetánsulfonát (izotionát), laktát, maleát, metánsulfonát, nikotinát, 2-naftalénsulfonát, oxalát, pamoát, pektinát, persulfát, 3-fenylpropionát, pikrát, pivalát, propionát, sukcinát, tartrát, tiokyanát, fosfát, glutamát, hydrogénuhličitan, p-toluénsulfonát a undekanoát. Príklady kyselín, ktoré môžu byť využité na tvorbu farmaceutický prijateľných adičných solí kyselín zahrnujú anorganické kyseliny ako kyselinu chlorovodíkovú, kyselinu bromovodíkovú, kyselinu sírovú a kyselinu fosforečnú a také organické kyseliny ako kyselina oxalová, kyselina maleínová, kyselina sukcínová a kyselina citrónová.
Základné skupiny obsahujúce dusík môžu byť kvaternizované s takými agens ako nižšie alkyl halogenidy také ako metyl, etyl, propyl a butyl chloridy, bromidy a jodidy; dialkyl sulfáty podobné ako dimetyl, dietyl a diamyl sulfáty; halogenidy s dlhým reťazcom také ako decyl, lauryl, myristyl a stearyl chloridy, bromidy a jodidy; arylalkyl halogenidy také ako benzyl a fenetyl a iné. Potom sú získané vo vode alebo v oleji rozpustné alebo dispergovateľné produkty.
Základné bázické adičné soli môžu byť pripravené in situ počas konečnej izolácie a čistenia zlúčenín vynálezu reakciou skupiny obsahujúcej karboxylovú kyselinu s vhodnou bázou takou ako hydroxid, uhličitan alebo hydrogénuhličitan farmaceutický prijateľného kovového katiónu alebo s amoniakom alebo organickým primárnym, sekundárnym alebo terciárnym amínom. Farmaceutický prijateľné bázické adičné soli zahrnujú, ale neobmedzuje sa to len na ne, katióny alkalických kovov alebo kovov alkalických zemín také ako lítne, sodné, draselné, vápenaté, horečnaté a hlinité soli a podobne a netoxické kvartérne amónne a amínové katióny zahrnujúce amónium, tetrametylamónium, tetraetylamónium, metylamín, dimetylamín, trimetylamín, trietylamín, dietylamín, etylamín a podobne. Iné reprezentatívne organické amíny vhodné na tvorbu bázických adičných solí zahrnujú etyléndiamin, etanolamín, dietanolamín, piperidín, piperazín a podobne.
Dávkové formy na topické podanie zlúčeniny tohto vynálezu zahrnujú prášky, spreje, masti a inhaláty. Účinná zlúčenina je zmiešaná za sterilných podmienok s farmaceutický prijateľným nosičom a potrebným konzervačným prostriedkom, pufrom alebo pohonnou látkou. Oftalmologické formulácie, očné r «· masti, prášky alebo roztoky sú tiež zahrnuté do predmetu predkladaného vynálezu.
Aktuálne dávkové hladiny účinných zložiek vo farmaceutických kompozíciách predkladaného vynálezu sa môžu rôzniť za účelom získania množstva účinnej zlúčeniny, ktoré je účinné na získanie požadovanej terapeutickej odozvy u pacienta po podaní kompozície v určitom móde. Výsledná dávková hladina bude závisieť na účinnosti konkrétnej zlúčeniny, ceste podania, prísnosti podmienok liečby a na lekárskej diagnóze. Avšak, v rámci zvyklosti v odbore, východiskové dávky zlúčeniny sú v nižšej hladine, než je žiadúca na získanie požadovaného terapeutického efektu a postupne sa táto dávka zvyšuje až je dosiahnutý potrebý efekt.
Všeobecne dávkové hladiny sú okolo 0,1 až 1000 mg, asi 0,5 až asi 500 mg, asi 1 až 250 mg, asi 1,5 až asi 100, a výhodne asi 5 až 20 mg účinnej zlúčeniny na kilogram telesnej váhy na deň pri orálnom alebo intravenóznom podaní pacientovi. Ak je to potrebné, účinná denná dávka môže byť rozdelená na viaceré dávky za účelom podania, napr. dva až štyri krát za deň.
Predkladaný vynález je ilustrovaný nasledujúcimi príkladmi.
Príklad 1 opisuje výkonný test na skrining pre negatívne regulátory väzby LFA-1 na ICAM, ktorý viaže LFA-1. Príklad 2 sa týka väzbových testov na zisťovanie vhodnosti rôznych zlúčenín inhibovať LFA-1 väzbu na ICAM. Príklad 3 opisuje syntézu negatívnych regulátorov. Príklad 4 poskytuje výsledky z bunkových testov za použitia negatívnych regulátorov.
Príklad 1
Vysoko výkonný skrining pre LFA-l/ICAM väzbové inhibítory
V snahe indentifikovať inhibítory LFA-l/ICAM-1 väzby sa využil vysokovýkonný skrining (HTS), ktorý umožňuje vykonávať skrinning veľkého počtu chemických zlúčenín.
Predbežné experimenty boli uskutočňované za účelom určenia lineárneho intervalu LFA-l/ICAM interakcie. Rekombinantný ICAM-1/IgGl fúzny protein (obsahujúci celú dĺžku ICAM-1) sa pripravil tak ako je to uvedené v U.S.
patente č. 5,770,686, 5,837,478 a 5,869,262 každá prihláška je tu zahrnutá ako odkaz. Fúzny proteín bol biotinylovaný použitím kitu získaného od Pierce Chemical (Rockford, IL). Biotinylovaná proteínová (BiolgICAM-l) koncentrácia sa určila meraním absorbancie pri 280 nm, a sériové riedenia boli pripravené na získanie konečného koncentračného intervalu od 50 pg/ml do 0,008 pg/ml. Titrácia BiolgICAM-l sa vykonávala s proteínovým prvým alikvótom do jamiek na testovacej platne. Rekombinantná LFA-1 sa pridala do každej jamky v tej istej koncentrácii a experiment (ako je opísané nižšie) bol ponechaný na dokončenie. Množstvo väzby sa určilo pre každú jamku a z následného plotu pre výsledky, jednotlivá koncentrácia BiolgICAM-l sa vybrala pre nasledujúci experiment. Podobným spôsobom sa LFA-1 titrovala použitím BiolgICAM-l koncentrácie vybranej ako je uvedené vyššie.
Na prvý deň HTS procedúry, zachytávacia protilátka, napr. ne-blokujúca anti-LFA-1 monoklonálna protilátka (TS2/4,1; ATCC#HB244) sa rozriedila na platni prekrytej pufrom (50 mM uhličitan sodný/hydrogenuhličitan, 0,05% ProClin® 300, pH 9,6) na konečnú koncentráciu 2 pg/ml. Immulon® 4 (Dynex Technologies, Chantilly, VA) jamková platňa bola prekrytá 100 μΐ roztoku zriedenej protilátky na jamku a platňa sa nechala inkubovať cez noc pri 4 °C. Na druhý deň, sá platne zahriali na izbovú teplotu a premyli sa dva krát pufrom (fosfátový pufrovaný fyziologický roztok bez vápnika a horčíka, CMF-PBS s 0,05% Tween®-20). Do každej jamky sa pridalo 200 μΐ blokujúceho roztoku (5% želatína z kože rýb v CMF-PBS s 0,05% ProClin® 300) a blokujúca inkubácia sa uskutočnila pri izbovej teplote počas 30 minút. Blokujúci roztok sa odstránil ašpiráciou a platne sa nepremyli. LFA-1 sa zriedila na konečnú koncentráciu 1 pg/ml v testovacom pufry (1% želatína z rybej kože a 2 mM MgCl2 v CMF-PBS) a 100 μΐ sa pridalo do každej jamky. Inkubácia sa uskutočňovala počas jednej hodiny a platne sa premyli dva krát premývacím pufrom.
Pripravil sa 2X zásobný roztok BiolgICAM-l obsahujúci 0,1 pg/ml BiolgICAM-l a 4 μΜ kryštálovej violete (aktívator LFA-l/ICAM-1 väzba) v testovacom pufry (EG&G Wallac, Gaithersburg, MD.). Alikvóty (50 μΐ) zásobových chemikálii (22 zlúčenín/zásoba v 100% DMSO) z chemickej r f knižnice sa pridali do jamiek, nasledovalo pridanie 50 μΐ 2X zásobného BiolgICAM-l a získal sa konečný testovací objem 100 μΐ (obsahujúci 2% DMSO). Platne sa inkubovali jednu hodinu pri izbovej teplote a premyli sa jeden krát premývacím pufrom. Európiom označený streptavidín (Eu-SA; #1244-360, EG&G Wallac) sa zriedil 1:500 v testovacom pufry, 100 μΐ zriedeného Eu-SA sa pridalo do každej jamky a platne sa inkubovali pri izbovej teplote počas jednej hodiny.
Platne sa premyli osem krát premývacím pufrom, 100 μΐ DELFIA® posilňujúceho roztoku (EG&G Wallac) zriedeného 1:2 sa pridali do každej jamky a platne boli pretriasané päť minút použitím Wallacovho miešača pri najrýchlejšej rýchlosti. Platne sa čítali použitím Wallac DELFIA® fluorescenčného počítača (fluorimeter). Kontroly zahrnovali obidve pozitívne a negatívne jamky a 50% väzbových jamiek stanovených s využitím blokačných protilátok, ako napríklad anti-LFA-1 monoklonálna protilátka (TSl/22,1, ATCC#HB202) alebo anti-ICAM-1 monoklonálna protilátka. Chemikálie v jamkách prejavujúce 50% alebo väčšiu inhibíciu LFA-1 väzby na ICAM-1 boli identifikované a experiment bol opakovaný použitím jednotlivých chemikálii z týchto chemikálii. Inhibítory LFA-l/ICAM-1 väzby boli identifikované a bol vykonávaný ďalší skrinning na určenie dávky v závisloti na inhibičnej aktivite. Ďalšia štúdia vybraných zlúčenín sa uskutočnila s využitím biocemických a bunkových testovacích techník.
Zlúčeniny boli zatriedené v súlade s bežnými štruktúrnymi črtami a dokázalo sa, že podskupina (uvedené nižšie) zlúčenín zahrnuje charakteristickú diaryl sulfidovú štruktúru.
3-Chlór-4-(l-chlór-naftalen-2-ylsulfanyl)-fenylamín
-(3-Nitro-4-fenylsulfanyl-fenyl)-etanón
-(3-Nitro-4-fenylsulfanyl-fenyl)-etanón oxím
5-Trifluórmetyl-2-fenylsulfanyl-benzonitril
1- (3,5-dichlórfenyl)-3-fenylsulfanyl-pyyrolidín-2,5-dión
Bis-2,4,6-Trinitrofenyl-sulfid
2- Metyl-l -(2-o-tolylsulfanyI-fenyl)-l H-pyrol
3- (2-(4-Chlór-2-nitro-fenylsulfanyl)-fenylamino-3H-izobenzofuran-l-ón
4- (Benzotiazol-2-ylsulfanyl)-3-chlór-fenylamín
2-Nitro-4-chlórfenyl-(2'-aminofenyl)-sulfid
6-Amino-2-chlórfenyl-(4’-metylfenyl)-sulfid
4-NitrofenyI-(2'-chlórfenyl)-sulfid
2.4- Dinitrofenyl-(4’-chlórfenyl)-sulfid
4-Aminofenyl-(2'-chlórfenyl)-sulfid
2.4- Diaminofenyl-(4'-izopropylfenyl)-sulfid
V snahe optimalizovať negatívnu regulačnú kapacitu identifikovaných zlúčenín, rôzne diarylsulfidové deriváty boli kondukované ako je opísané v príklade 3. Ďalšie diaryl sulfidové deriváty sú opísané v patentovej prihláške s názvom „Protizápalové a imunosupresívne zlúčeniny inhibujúce bunkovú adhéziu“ podanej 2. apríla 1999 pod č. 6446.US.Z3, č. 09/286,645 v tomto texte je zahrnutá ako odkaz.
Príklad 2
Väzbový test
A. ICAM-1//LFA-1 test biochemickej interakcie
Zlúčeniny, ktoré antagonizujú interakciu medzi ICAM-1 a LFA-1 môžu byť identifikované a ich aktivity kvantifikované použitím aj biochemického testu aj testu založenom na bunke. Primárne biochemické testové merania schopnosti zlúčeniny v otázke blokovania interakcie medzi LFA-1 a jeho adhéznym partnerom ICAM-1 sú opísaná nižšie.
V tomto biochemickom teste sa na prekrytie jamiek 96 jamkovej mikrotitrovej platne cez noc pri 4 °C použilo 100 μΐ anti-LFA-1 protilátky pri koncentrácii 5 pg/ml v Duibeccovom fosfátom pufrovanom fyziologickom roztoku (D-PBS). Jamky sa premyli dva krát premývacím pufrom (CMF-PBS, 0,05% Tween® 20) a blokovali pridaním 200 μΐ D-PBS, ktoré obsahovalo 5% želatíny z rybej kože. Rekombinantá LFA-1 (100 μΐ 0,7 μg/ml) v D-PBS sa pridala do každej jamky. Inkubácia pokračoval jednu hodinu pri izbovej teplote a jamky sa premyli dva krát premývacím pufrom. Sériové zriedenia zlúčenín sú testované ako LFA-l/ICAM-1 negatívne regulátory, pripravené ako 10 mM zásobné roztoky v DMSO a boli zriedené v D-PBS, 2 mM MgCb, 1% želatíne rybej kožy a 500 μΐ z každého zriedenia sa pridalo do každej jamky, nasledovalo pridanie 50 μΐ 0,8 μg/ml BiolgICAM-l do jamky a platne sa inkubovali pri izbovej teplote počas jednej hodiny. Jamky boli potom premyté dva krát premývacím pufrom a 100 μΐ Eu-SA (EG&G Wallac) zriedenom 1:100 v Delfia® testovacom pufry (EG & G Wallac) sa pridalo do jamiek. Inkubácia sa vykonávala jednu hodinu pri izbovej teplote. Jamky sa premyli osem krát premývacím pufrom a 100 μΐ roztoku (EG & G Wallac) sa pridalo do každej jamky. Inkubácia pokračovala päť minút za konštantného miešania. Fluorimetrické merania sa vykonávali použitím Vietor 1420 mnohovrstvového počítača (EG&G Wallac) a percentá inhibície každej zlúčeniny sa vypočítali použitím nasledujúcej rovnice:
%inhibície = 100 X {1-priemer OD w/zlúčenina mínus základ/priemer OD wfo zlúčenina mínus základ) kde „základ“ znamená jamky, ktoré neboli prekryté anti-LFA-1 protilátkou.
B. ICAM-l/JY-8 testovanie bunkovej adhézie
Biologicky relevantná účinnosť zlúčenín v tomto vynáleze sa potvrdila použitím testu bunkovej adhézie, v ktorom sa merala schopnosť zlúčenín blokovať adherenciu JY-8 buniek (ľudská EBV-transformovaná B bunková línia exprimujúca LFA-1 na ich povrchu) na imobilizované ICAM-1. Tento test môže byť vykonávaný s alebo bez pridania IL-8. Na IL8 stimuláciu štandardu JY-8 buniek, sa pridalo 30 ng/ml IL-8 v 30 minútovej inkubácii pri 37 °C s bunkami
Na meranie inhibičnej aktivity v teste bunkovej adhézie sa 96 jamkové mikrotitrové platne prekryli 70 μΐ rekombinantného ICAM-l/Ig pri koncentrácii μg/ml v CMF-PBS cez noc pri 4 °C. Jamky sa premyli dva krát D-PBS a blokovali pridaním 200 μΐ D-PBS, 5% želatíny z rybej kože, inkubáciou počas jednej hodiny pri izbovej teplote. Fluorenscenčne označené JY-8 bunky (50 μΐ pri 2 x 106 buniek/ml v RPMI-1640/1% hovädzie sérum (FBS)) sa pridali do jamiek. Na fluorescenčné označenie JY-8 buniek, 5 x 106 buniek premytých jeden krát v RPMI 1640 sa resuspendovalo v 1 ml RPMI-1640 obsahujúcom 2 μΜ Kalceínu AM (molekulárne vzorky, OR) sa inkubovalo pri 37 °C počas 30 minút a premylo jeden krát s RPMI-1640/1% FBS. Zriedenia zlúčenín testovaných na LFA-l/ICAM-1 antagonistickú účinnosť sa pripravili v RPMI1640/1% FBS z 10 mM zásobných roztokov v DMSO a 50 μΐ alikvóty sa pridali na zdvojenie jamiek. Mikrotitrové platne sa inkubovali počas 45 minút pri izbovej teplote a jamky sa premyli opatrne jeden krát s PMI-1640/1% FBS. Fluorescenčná intenzita sa merala na fluorescenčnom platňovom počítači s excitáciou vlnovej dĺžky pri 495 nm a emisiou vlnovej dĺžky pri 530 nm. Percentuálna inhibícia kandidujúcich zlúčenín v určitej koncentrácii sa vypočítala použitím nasledujúceho vzťahu:
%inhibícia = 100 X {1-priemer OD w/zlúčenina/priemer OD w/o zlúčenina}
C. ICAM-3/JY-8 testovanie bunkovej adhézie f
Účinnosť zlúčenín v tomto vynáleze môže byť demonštrovaná cez interakciu s integrínom LFA-1, konkrétne cez väzbu na (Xl doménu, ktorá je ako je známe kritická pre adhéziu LFA-1 na rôzne bunkové adhézne molekuly. Predpokladá sa, že tieto zlúčeniny by mohli blokovať interakciu LFA-1 s inými CAM a táto inhibícia bola demonštrovaná pre LFA-1 väzbu na ICAM-3. Zlúčeniny predkladaného vynálezu boli vyhodnotené na schopnosť blokovania adhézie JY-8 buniek na imobilizované ICAM-3.
Na meranie inhibičnej aktivity v teste bunkovej adhézie sa 96 jamkové mikrotitrové platne prekryli 50 μΐ rekombinantného ICAM-3/Ig pri koncentrácii 10 pg/ml v CMF-PBS cez noc pri 4 °C. Jamky sa premyli dva krát D-PBS a blokovali pridaním 100 μΐ D-PBS, 1% hovädzieho sérového albumínu (BSA), inkubáciou počas jednej hodiny pri izbovej teplote a potom sa premyli jeden r · krát RPMI-1640/5% teplom inaktivované FBS (adhézny pufer). Zriedenia zlúčenín na testovanie na LFA-l/ICAM-3 antagonistickú aktivitu sa pripravili v adhéznom pufry z 10 mM zásobných roztokov v DMSO a 100 μΐ alikvóty sa pridali do dvojnásobných jamiek. JY-8 bunky (100 μΐ pri 0,75 x 106 buniek/ml v adhéznom pufry) sa potom pridali do jamiek (s alebo bez 30 ng/ml IL-8). Mikrotitrové platne sa inkubovali 30 minút pri izbovej teplote, adherentné bunky sa fixovali s 50 μΐ 14% glutaraldehydu/D-PBS a inhibícia sa vykonávala ďalších 90 minút. Jamky sa premyli jemne s dH2O a pridalo sa 50 μΐ dH2O, potom sa pridalo 50 μΐ 1% kryštálovej violete. Po piatich minútach sa platne premyli dva krát s dH2O a pridalo sa 225 μΐ etanolu (EtOH) do každej jamky na extrahovanie kryštálovej violete z buniek. Absorbancia sa merala pri 570 nm v ELISA platňovom čítači. Percentuálna inhibícia kandidujúcich zlúčenín v určitej koncentrácii sa vypočítala použitím nasledujúceho vzťahu:
%inhibícía = 100 X {1-priemer OD w/zlúčenina/priemer OD w/o zlúčenina}
Príklad 3
Syntéza negatívnych regulátorov
Syntéza rôznych diarylsulfidových zlúčenín v súlade s vynálezom je opísaná nižšie.
Všeobené postupy a východiskové materiály
Vo všeobecnosti, rozpúšťadlá sa zakúpili ako bezvodé a neboli vysušené alebo ďalej čistené a východiskové materiály boli najlepšie komerčne dostupné. Tenkovrstvová chromatografia (TLC) sa vykonala použitím E. Merck, silikagélu 60 F254, 0,25 mm, sklenených alebo alumínových prekrývacích platní alebo Analtech gélových uniplatní (250 mikrónov silikagélu). Vizualizácia bola dosiahnutá pomocou UV. Získané hodnoty Rf naznačujú jednotlivý bod. Rýchla chromatografia sa vykonávala na E. Merck silikagély 60, 230-400 ók. Nukleárne magnetizačné rezonančné (NMR) spektrá sa e r zaznamenali na Bruker DPX 300 alebo Varian 300 Gemini 2000 spektrometre. Chemické posuny sú označené v častiach na milión (ppm) dolného poľa z tetrametylsilánu (TMS). Kaplingové konštanty sú v Hz. V iných prípadoch, NMR spektrá sa zaznamenali s využitím Unity XL-200 spektrometra. Hmotnostné spektrá sa zaznamenali buď na VG 70 SEG zariadení na Univerzite Washington, Katedra Medicínskej chémie, alen na hmotnostnom spektrometre (vysoké rozlíšenie) alebo Finnigan Mat TSQ 70 spektrometre (nízke rozlíšenie). Boli zaznamenané len molekulové ióny. Elementárne analýzy sa vykonávali na Quantitative Technologies, Inc.
Všeobecné syntetické metódy A: Aminodiarylsulfidy
1. Všeobecný opis syntetickej metódy A
Jedno molárny ekvivalent (aq) požadovaného tiolfenolu a jedno molárny ekvivalent príslušnej nitroarylovej zlúčeniny sa vložili do suchej nádoby pod dusíkovou atmosférou a rozpustili sa v suchom acetóne. Pridalo sa jeden a pol molárnych ekvivalentov bezvodého uhličitanu draselného (K2CO3) a zmes sa energicky miešala cez noc. Reakcia sa potom zriedila éterom, premyla nasýteným NaHCCh, 3% NaHSC>4 a nasýteným NaCl. Organické vrstvy sa vysušili cez síran sodný a prefiltrovali sa. Pridal sa heptán a roztok sa koncentroval zahrievaním až do kým sa neodstránila väčšina éteru. Okamžite sa reakcia ochladila a vykryštalizoval nitrodiaryl sulfid. Produkt sa oddelil filtráciou, premyl pentánom a vysušil vo vákuu.
Jedno molárny ekvivalent diaryl sulfidu a päť molárnych ekvivalentov dihydrátu chloridu cínu sa rozpustilo v etanole (10 až 30 dielov). Zmes sa zahrievala na 60 °C v olejovom kúpeli a pridala sa koncentrovaná HCI (10 až 30 objemov). Po troch hodinách sa reakcia ochladila a pridalo sa 20 až 60 dielov ľadu. Zmes sa neutralizovala na pH 10 až 12 pridaním 5 N NaOH. Zmes sa extrahoval dva krát éterom a spojené éterové extrakty sa premyli nasýteným hydrogenuhličitanom sodným a nasýteným NaCl. Organická vrstva sa vysušila cez síran sodný a rozpúšťadlo sa odstránilo pomocou rotačnej odparky. Výsledná tuhá látka alebo olej boli držané v étery a po kvapkách sa pridalo päť molárnych ekvivalentov 1 N HC1 v étery. Výsledná tuhá látka sa zachytila filtráciou, premyla sa éterom a vysušila vo vákuu.
Všeobecná syntetická metóda A je znázornená v schéme uvedenej nižšie, pričom X je halogén, napr. chlór
2. Špecificky príklad všeobecnej syntetickej metódy A
Všeobecná syntetická metóda A sa špecificky využila tak, ako je to opísané nižšie s výnimkou, že sa použili granule cínu namiesto dihydrátu chloridu cínu, ktorý je znázornený v schéme uvedenej vyššie.
2,4-Dichlórfenyl-(2'-chlór-4'-nitrofenyl)-sulfid
1,54 g (8,60 mmol) 2,4-dichlórtiofenolu a 1,65 g (1 eq, 8,60 mmol) 3,4dichlórnitrobenzénu sa navážili so suchej nádoby za atmosféry dusíka a rozpustili sa v 20 ml suchého acetónu. Pridalo sa 1,78 g (1,5 eq, 12,9 mmol) bezvodého uhličitanu draselného (K2CO3) a zmes sa miešala magneticky 20 hodín. Reakcia sa potom zriedila 150 ml éteru a potom sa premyla nasýteným hydrogénuhličitanom sodným (2 x 75 ml), 3% hydrogensíranom sodným (2 x 75 ml) a nasýtených NaCI (2 x 75 ml). Organická fáza sa potom vysušila cez bezvodý síran sodný a prefiltrovala sa. Pridalo sa 50 ml heptánu a roztok sa koncentroval približne na 50 ml zahrievaním v parnom kúpeli. Po ochladení vznikli vysoko kvalitné kryštály. Tieto sa oddelili filtráciou, prepláchli troma časťami pentánu a vysušili sa vo vákuu (70 °C, 0,05 mm Hg, 2 hodiny). Získalo sa 1,43 g (50% výťažok) žltých kryštálov. Teplota topenia 145-146 °C, Rf 0,37 (Etylacetát [EtAc]/Heptán, 1:20). *H NMR (CDC13) 6,71 (d, J = 8,9, 1H), 7,38 (d z d, Ji = 2,2, J2 = 8,2, 1H), 7,59 (d, J = 8,2, 1H), 7,63 (d, J = 2,2, 1H), 7,94 (d z d, Ji = 2,2, J2 = 8,9, 1H), 8,26 (d, J = 2,5, 1H). MS (EI) m/z 333 (M+, 98). Analýza vypočítaná pre C12H6CI3NO2S: C 43,08, H 1,81, N 4,19. Nájdené: C 43,06, H 1,77, N 4,02.
3-Chlór-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín Hydrochlorid
0,680 g (2,03 mmol) 2,4-Dichlórfenyl-(2'-chlór-4'-nitrofenyl)-sulfidu a 0,844 g (3,5 eq, 7,11 mmol) granúl cínu sa opláchlo 20 ml koncentrovanej HCL Za energického miešania sa táto zmes zahrievala pod refluxom počas dvoch dní. Zmes sa ochladila na laboratórnu teplotu a potom sa zriedila 50 ml ľadu. Za miešania sa zmes neutralizovala na pH 10 pridaním približne 80 ml 5 N NaOH a potom sa extrahovala éterom (2 x 100 ml). Spojené organické vrstvy sa premyli 100 ml nasýteného hydrogénuhličitanu sodného a 2 x 100 ml nasýteného chloridu sodného, potom sa vysušili cez síran sodný a prefiltrovali sa a koncentrovali na rotačnej odparke za vzniku hnedého oleja. Olej sa prekryl 50 ml éteru a po kvapkách sa pridali 4 ml 1 N HC1 v étery. Vznikla biela tuhá látka. Táto sa oddelila filtráciou, prepláchla niekoľkými podielmi éteru a vysušila sa (90 °C, 3 hodiny, 0,05 mm Hg). Získalo sa 0,548 g (79% výťažku) bielej tuhej látky s teplotou topenia 183 - 185 °C (rozkl.), Rf 0,33 (EtAc/Heptán 1:2 hmotn/ 1% TEA). *H NMR (DMSO-dô) 6,55 (d, J = 8,6, 1H),
6,66 (d z d, Ji = 2,5, J2 = 8,6, 1H), 6,89 (br s, 3H), 6,89 (d, J = 2,5, 1H), 7,29 (d, J = 2,2, 1H), 7,32 (d, J = 2,2, 1H), 7,62 (d, J = 2,2, 1H). MS (EI) m/z 303 M+(100). Analýza vypočítaná pre C^HgCbNS: C 42,26, H 2,66, N 4,11. Nájdené: C 42,39, H 2,57, N 4,14.
3. Doplňujúce príklady zlúčenín pripravených všeobecnou syntetickou metódou
A
Nasledujúce zlúčeniny sa pripravili z komerčne dostupných reagentov použitím všeobecnej . syntetickej metódy A. Získal sa východiskový tiol a nitroarylové zlúčeniny spolu s medziproduktom (tiol + nitroaryl -» medziprodukt).
3-Chlór-4-(2-chlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
2-Chlórtiofenol + 3,4-dichlórnitrobenzén -> 4-nitro-2-chlórfenyl-(2'chlórfenyl)-sulfid
Šedá tuhá látka, t.t. 197 - 198 °C (rozkl.), Rf 0,16 (EtAc/Heptán 1:4 hmotn/ 1% TEA). ’H NMR (DMSO-d6) 6,61 (d z d, Ji = 1,9, J2 = 7,3, 1H), 6,70 (d z d, J, = 2,4, J2 = 8,4, 1H), 6,94 (d, J = 2,5, 1H), 7,18 (m, 2H), 7,28 (d, J =
8,9, 1H), 7,45 (d z d, J, = 1,6, J2 = 7,6, 1H), 7,78 (br s, 3H). MS (El) m/z 269 M+(100). Analýza vypočítaná pre C12H10C13NS . HC1: C 47,22, H 3,30, N 4,59. Nájdené: C 47,34, H 3,15, N 4,45.
3-Chlór-4-(2-naftylsulfanyI)-fenylamín hydrochlorid
2-naftaléntiol + 3,4-dichlórnitrobenzén —> 4-nitro-2-chlórfenyl-2-naftyl-sulfid
Biela tuhá látka, t.t. 188 °C (rozkl.), Rf 0,16 (EtAc/Heptán 1:4 hmotn/ 1% TEA). *H NMR (DMSO-d6) 6,08 (br s, 3H), 6,60 (d z d, J, = 2,4, J2 = 8,4, 1H), 6,90 (d, J = 2,5, 1H), 7,20 (d z d, Ji = 1,9, J2 = 8,6, 1H), 7,30 (d, J = 8,6, 1H), 7,45 (m, 2H), 7,53 (s, 1H), 7,76 (m, 1H), 7,83 (m, 2H). MS (El) m/z 285 M+ (100). Analýza vypočítaná pre C16H,2C1NS . HC1: C 59,64, H 4,07, N 4,35: Nájdené: C 59,59, H 4,07, N 4,09.
3-Chlór-4-(2,3-dichlórfenylsuIfanyl)-fenylamín hydrochlorid
2,3-dichlórtiofenol + 3,4-dichlórnitrobenzén -> 4-nitro-chlórfenyl-(2',3'dichlórfenyl)-sulfid
Biela tuhá látka, t.t. 207-209 °C (rozkl.), Rf 0,33 (EtAc/Heptán 1:2 hmotn/ 1% TEA). *H NMR (DMSO-d6) 6,45 (d z d, J, = 1,4, J2 = 8,1, IH), 6,62 (d z d, Ji = 2,2, J2 = 8,6, IH), 6,79 (br s, 3H), 6,86 (d, J = 2,5, IH), 7,21 (t, J =
7,9, IH), 7,33 (d, J = 8,2, IH), 7,38 (d z d, J, = 1,4, J2 = 8,1, IH). MS (EI) m/z 303 (M+, 93). Analýza vypočítaná pre Ci2H8C13NS . HC1: C 42,26, H 2,66, N 4,11. Nájdené: C 42,49, H 2,56, N 4,10.
3-Chlór-4-(2,4,5-trichlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
2,3,4-trichlórtiofenol + 3,4-dichlórnitrobenzén -> 4-nitro-2-chlórfenyl(2',4',5'-trichlórfenyl)-sulfid
Biela tuhá látka, t.t. 192 - 194 °C (rozkl.), Rf 0,33 (EtAc/Heptán 1 : 2 hmotn./ 1% TEA). ’H NMR (DMSO-d6) 6,46 (br s, 3H), 6,53 (s, IH), 6,65 (d z d, J, = 2,3, J2 = 8,4, IH), 6,89 (d, J = 2,2, IH), 7,35 (d, J = 8,6, IH), 7,88 (s, IH). MS (EI) m/z 337 (M+, 73). Analýza vypočítaná pre C12H7CI4NS . HC1: C 38,38, H 2,15, N 3,73. Nájdené: C 38,73, H 2,07, N 3,60.
3-Metoxy-4-(2,3-dichIórfenylsulfanyl)-fenylamín
2,3-dichlórtiofenol + 2-bróm-5-nitroanizol -> 4-nitro-2-metoxyfenyl-(2',3'dichlórfenyl)-sulfid
Táto zlúčenina sa izolovala kryštalizáciou z éteru skôr ako cez tvorbu HC1 soli. Vypadli biele kryštály, t.t. 166 - 167 °C, Rf 0,17 (EtAc/Heptán 1:2 hm/ 1% TEA). ’H NMR (DMSO-d6) 3,67 (s, 3H), 5,75 (br s, 2H), 6,26 (d z d, , J, = 1,9, J2 = 8,3, IH), 6,37 (d, J = 1,9, IH), 6,46 (d, J = 7,9, IH), 7,13 (d, J =
8,2, IH), 7,16 (t, J = 8,1, IH), 7,31 (d, J = 7,9, IH). MS (EI) m/z 299 M+ (100). Analýza vypočítaná pre C13H1 iC12NOS: C 52,01, H 3,69, N 4,67. Nájdené: C 51,97, H 3,59, N 4,67.
5-Amino-2-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)-acetofenón hydrochlorid
2,3-dichlórtiofenol + 2-chlórnitroacetofenón -> 4-nitro-2-acetylfenyI(2',3'-dichlórfenyl)-sulfid
Žltá tuhá látka, t.t. 151 - 153 °C (rozkl.),Rf 0,35 (EtAc/Heptán 1:1 hm/ 1% TEA). ‘H NMR (DMSO-d6) 2,51 (s, 3H), 7,00 - 7,09 (m, 3H), 7,34 (t, J =
7,9, 1H), 7,41 (br s, 1H), 7,44 (br s, 3H), 7,58 (d, J = 7,9, 1H). MS (EI) m/z 311 M+ (100). Analýza vypočítané pre C|3Hi,C13NOS . HC1: C 48,23, H 3,47, N 4,02. Nájdené: C 47,78, H 3,43, N 3,79.
4-(2,3-dichlórfenyIsulfanyI)-fenylamín
2,3-dichlórtiofenol + 4-brómnitrofenol -> 4-nitrofenyl-(2',3'-dichlórfenyl)sulfid
Vypadla biela tuhá látka, t.t. 175 °C (rozkl.), Rf 0,31 (EtAc/Heptán 1:2 hm./ 1% TEA). *H NMR (DMSO-d6) 7,13 (d, J = 8,2, 2H), 7,26 (t, J = 7,8, 1H), 7,42 (d, J = 8,6, 2H), 7,47 (d z d, J, = 1,9, J2 = 7,8, 1H), 7,76 (d z d, J, = 1,3, J2 = 7,9, 1H), 8,04 (br s, 3H). MS (EI) m/z 269 M+ (100). Analýza vypočítaná pre C,2H9C12NS . HC1: C 47,00, H 3,29, N 4,57. Nájdené: C 46,92, H 3,36, N 4,27.
3-Chlór-4-(l-naftylsulfanyI)-fenylamín hydrochlorid
1-naftaléntiol + 3,4-dichlórnitrobenzén -> 4-nitro-2-chlórfenyl-(l-naftyl)sulfid
Vypadla biela tuhá látka, t.t. 192-194 °C, Rf 0,37 (EtAc/Heptán 1:2 h/ 1% TEA). ’H NMR (DMSO-d6) 6,84 (m, 2H), 7,20 (d, J = 1,9, 1H), 7,40 (d, J = 7,0, 1H), 7,50 (t, J = 7,8, 1H), 7,56-7,61 (m, 2H), 7,94 (d, J = 8,2, 1H), 7,99 (m, 1H), 8,12-8,15 (m, 5H). MS (EI) m/z 285 M+ (100). Analýza vypočítaná pre Ci6Hi2C1NS . HC1: C 59,64, H 4,07, N 4,35. Nájdené: C 59,59, H 4,19, N 4,11.
3-Mety 1-4-(2,4-dichIórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
2,4-dichlórtiofenol + 2-bróm-5-nitrotoluén -> 4-nitro-2-metylfenyl-(2',4’dichlórfenyl)-sulfid
Biela tuhá látka, t.t. 195 - 197 ’C, Rf = 0,41 (EtAc/Heptán 1:2 hm./ 1% TEA). *H NMR (DMSO-de) 2,22 (s, 3H), 6,62 (d, J = 8,6, IH), 6,94 (d, J = 8,2, IH), 7,04 (br s, IH), 7,29 (s, IH), 7,32 (s, IH), 7,66 (d, J = 2,2, IH), 7,89 (br s, 3H). MS (EI) m/z 283 M+ (100). Analýza vypočítaná pre C13H11CI2NS . HC1: C 48,69, H 3,77, N 4,37. Nájdené: C 48,87, H 3,73, N 4,34.
3-Bróm-4-(2,4-dichlórfenyIsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
2,4-dichIórtiofenol + 3-bróm-4-chlórnitrobenzén -t 4-nitro-2-brómfenyl-(2',4'dichlórfenyl)-sulfid
Vypadla biela tuhá látka, t.t. 171-173 °C (rozkl.), Rf 0,69 (EtAc/Heptán 1:1 hm./l% TEA). *H NMR (DMSO-d6) 6,66 (d, J = 8,6, IH), 6,81 (d z d, Jj =
2,2, J2 = 8,4, IH), 7,19 (d, J = 2,2, IH), 7,29 (d, J = 8,2, IH), 7,32 (d z d, J, =
2,2, J2 = 8,6, IH), 7,64 (d, J = 2,2, IH), 7,92 (br s, 3H). MS (EI) m/z 347 (M+,60). Analýza vypočítaná pre Ci2H8BrCl2NS . HC1: C 37,39, H 2,28, N 3,61.
2,5-Dichlór-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyI)-fenyIamín Hydrochlorid
2.4- dichlórtiofenol + 2,4,5-trichlórnitrofenol -> 4-nitro-2,5-dichlórfenyl-(2',4'dichlórfenyl)-sulfid
Vypadla biela tuhá látka, t.t. 168-176 °C, Rf 0,39 (EtAc/Heptán 1:2 hm/ 1% TEA). ’H NMR (DMSO-dô) 6,57 (d, J = 8,6, IH), 6,83 (br s, 3H), 7,06 (s, IH), 7,30 (d z d, J, = 2,2, J2 = 8,6, IH), 7,55 (s, IH), 7,63 (d, J = 2,2, IH). MS (EI) m/z 347 (M+, 60). Analýza vypočítaná pre CnibCUNS. 0,75HCl: C 39,34, H 2,13, N 3,82. Nájdené: C 39,34, H 2,11, N 3,71.
4.5- Dichlór-2-(2,4-dichIórfenyIsulfanyl)-fenylamín
2,4-dichlórtiofenol + 3,4-dichlór-2-fluórnitrobenzén -> 4-nitro-2-chlór-5fluórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
Vychádza sa z 3,4-dichlór-2-fluórnitrobenzénu, fluorid je vytlačený za vzniku 2-sulfanylovej zlúčeniny. Táto zlúčenina sa čistila rýchlou chromatografiou ako voľný amín, vypadla biela tuhá látka, t.t. 119-122 °C, Rf
0,20 (EtAc/Heptán 1:20). *H NMR (DMSO-d6) 5,93 (s, 2H), 6,61 (d, J = 8,6, 1H), 7,08 (s, 1H), 7,31 (d z d, J, = 2,1, J2 = 8,5, 1H), 7,55 (s,lH), 7,65 (d, J =
1,9, 1H). MS (EI) m/z 337 (M+, 75). Analýza vypočítaná pre C]2H7C14NS: C 42,51, H 2,08, N 4,13. Nájdené: C 42,94, H 1,97; N 4,08.
3,5-Dichlór-4-(2,4-dichlórfenyIsulfanyl)-fenylamín
2,4-Dichlórtiofenol + 3,4,5-trichlórnitrobenzén -> 4-nitro-2,6-dichlórfenyl(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
Táto zlúčenina sa rekryštalizovala ako voľný amín za vzniku bielej tuhej látky, t.t. 128-131 °C. Rf 0,36 (EtAc/Heptán 1:2). ’HNMR (DMSO-d6) 6,33 (br s, 2H), 6,46 (d, J = 8,5, 1H), 6,83 (s, 2H), 7,32 (d z d, Ji = 2,1, J2 = 8,5 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 2,2, 1H). MS (EI) m/z 337 (M+,77). Analýza vypočítaná pre C12H7C14NS: C 42,51, H 2,08, N 4,13. Nájdené: C 42,15, H 2,10, N 4,01.
2.3- Dichlór-4-(2,4-dichlórfenylsuIfanyl)-fenylamín
2.4- dichlórtiofenol + 2,3,4-trinitrobenzén -» 2,3-dichlór-4-(2,4-dichlórfenyltio)-nitrobenzén
Táto zlúčenina sa čistila rýchlou chromatografiou ako voľný amín za vzniku bielej tuhej látky, t.t. 116 -119 °C, Rf 0,33 (EtAc/heptán 1:4 hm/ 1% TEA). ’H NMR (DMSO-dô) 6,09 (s, 2H), 6,47 (d, J = 8,7, 1H), 6,86 (d, J = 8,7, 1H), 7,32 (d z d, J, = 2,3, J2 = 8,7, 1H), 7,46 (d, J = 8,7, 1H), 7,46 (d, J = 8,7, 1H), 7,69 (d, J = 2,2, 1H). MS (EI) m/z 337 (M+,71). Analýza vypočítaná pre Ci2H7C14NS: C 42,51, H 2,08, N 4,13. Nájdené: C 42,83, H 2,02, N 4,06.
A. Všeobecná metóda syntézy B
Všeobecná metóda syntézy B je znázornená schematicky nižšie:
pričom X je halogén, výhodne chlór
Nasledujúce zlúčeniny sa pripravili použitím všeobecnej metódy syntézy B:
4-Nitro-2-chlórfenyl-(2',4’-dimetylfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlórfenyl-(2',4'-dimetylfenyl)-sulfid hydrochlorid
4-Amino-2-chlórfenyl-(2'-metyl-4'-chlórfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlórfenyl-(2’,4’-difluórfenyl)-sulfid hydrochlorid
4-Amino-2-chlórfenyl-(2',4',6'-trichlórfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlórfenyl-(2'-amino-4'-chlórfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlórfenyl-(3',4'-dichlórfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlórfenyl-2-(3-chlór-5-trifluórmetylpyridyl)-sulfid
Bis-(4,4'-diamino-2,2'-dichlórfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
2-Chlór-4-amino-5-metylaminofenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
2-Chlór-4-amino-5-morfolinofenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
4-Amino-2-trifluórmetylfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
4- Amino-2-fluórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
5- Amino-3-chlórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
Začiatočný krok vo všeobecnej metóde syntézy B je ilustrovaný pomocou prípravy medziproduktovej zlúčeniny opísanej hneď nižšie.
4-Nitro-2-chlórfenol-(2',4'-dimetylfenyl)sulfid
2,4-Dimetyltiofenol (1,0 g) a 3,4-dichlórnitrobenzén (1 ekvivalent) sa pridali do 100 ml acetónu obsahujúcom K2CO3 (5 g). Zmes sa refluxovala 24 hodín. Po ochladení pri izbovej teplote sa zmes filtrovala a odstránil sa acetón použitím rotačnej odparky. Výsledný zvyšok sa rozpustil v malom objeme CH2CI2 a filtroval sa. CH2CI2 sa potom odstránil použitím rotačnej vákuovej odparky. Výsledný zvyšok sa spracoval metanolom (MeOH), čím sa vyzrážal produkt. Produkt vo forme žltej tuhej látky sa potom zachytil filtráciou a vysušil sa pri 40 °C vo vákuovej peci počas 24 hodín. Produktový výťažok bol 66% a teplota topenia bola 128-130 °C. Štandardné analytické techniky zahrnujúce protónovú NMR spektroskopiu, elementárnu analýzu a tenkovrstvovú chromatografiu sa vykonali s cieľom charakterizovať produkt.
Nasledujúce zlúčenina sa pripravili použitím začiatočného kroku všeobecne v súlade s vyššie uvedeným medziproduktom.
4-Amino-2-chIórfenyl-(2',4'-dimety lfenyl)-sulfid Hydrochlorid
2-Chlór-4-nitrofenyl-(2',4'-dimetylfenyl)-sulfid (0,85 g) a železitý prášok v metanole (300 ml) sa pridali do 20 ml vodného roztoku NH4CI v molárnom pomere 1:3:5 pre substrát, železitý prášok a NH4CI respektívne. Zmes sa miešala mechanicky pod refluxom cez noc. Rozpúšťadlo sa odstránilo použitím rotačnej vákuovej odparky. Výsledný zvyšok sa rozpustil v malom objeme chloroforme a filtroval sa. Produkt sa získal použitím preparatívnej chromatografie aplikovaním rozpusteného zvyšku na malej kolóne vyplnenej »* r silikagélom ¢70-230 ók), po ktorej nasledovala elúcia s použitím rozpúštacieho systému chloroform:hexán (1:4). Frakcie obsahujúce produkt sa spojili a rozpúšťadla sa odstránili použitím rotačnej vákuovej odparky. Vypadol produkt vo forme bielej tuhej látky, ktorý sa zachytil filtráciou a vysušil pri 50 °C vo vákuovej peci počas 24 hodín. Výťažok produktu bol 57% a teplota topenia bola 180-185 °C (rozklad). Štandardné analytické techniky zahrnujúce protónovú spektroskopiu, elementárnu analýzu a tenkovrstvovú chromatografiu sa použili s cieľom charakterizovať produkt.
4-Amino-2-chlórfenyl-(2'-metyl-4'-chlórfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-chlórfenyl-(2'-metyl-4'-chIórfenyl)-sulfid (1,0 g) a železitý prášok v metanole (300 ml) sa pridali do 5 ml vodného roztoku NH4CI v molárnom pomere 1:3:5 pre substrát, práškové, železo a NH4CI, respektíve. Zmes sa miešala mechanicky pod refluxom cez noc. Rozpúšťadlo sa odstránilo použitím rotačnej vákuovej odparky. Výsledný zvyšok sa rozpustil v malom objeme chloroform:hexánoch (1:4) a filtroval sa. Produkt sa získal použitím preparatívnej chromatografie aplikovaním rozpusteného zvyšku na malú kolónu vyplnenú silikagélom (70-230 ók), po ktorej nasledovala elúcia použitím systému rozpúšťadiel chloroform:hexány (1:1). Frakcie obsahujúce produkt sa spojili a rozpúšťadlo sä odstránilo použitím rotačnej vákuovej odparky. Biela tuhá látka sa zachytila filtráciou a vysušila sa pri 60 °C vo vákuovej peci počas 24 hodín. Výťažok produktu bol 71% a teplota topenia bola 91-93 °C. Štandardné analytické techniky zahrnujúce protónovú NMR spektroskopiu, elementárnu analýzu a tenkovrstvovú chromatografiu sa použili na charakterizáciu produktu.
4-Amino-2-chlórfenyl-(2',4'-difluórfenyl)-sulfid Hydrochlorid
4-Nitro-2-chlórfenyl-(2',4'-difluórfenyl)-sulfid a práškové železo v metanole (300 ml) sa pridali do 20 ml vodného roztoku NH4CI v molárnom pomere 1:3:5 pre substrát, práškové železo a NH4C1. Zmes sa miešala mechanicky pod refluxom cez noc. Rozpúšťadlo sa odstránilo použitím rotačnej vákuovej odparovačky. Výsledný zvyšok sa rozpustil v malom objeme chloroformu a filtroval sa. Produkt sa získal použitím preparatívnej chromatografie aplikovaním rozpusteného zvyšku na malú kolónu vyplnenú silikagélom (70-230 ók), po čom nasledovala elúcia systémom rozpúšťadiel chloroform:hexánu (1:5). Frakcie obsahujúce produkt sa spojili a rozpúšťadlá sa odstránili použitím rotačnej vákuovej odparky. Farebný tuhý produkt sa zachytil filtráciou a vysušil sa pri 50 °C vo vákuovej peci počas 24 hodín. Výťažok produktu bol 88% a teplota topenia bola 187-190 °C. Štandardné analytické techniky zahrnujúce protónovú NMR spektroskopiu, elementárnu analýzu a tenkovrstvovú chromatografiu sa použili na charakterizáciu produktu.
4-amino-2-chlórfenyl-(2',4',6'-trichlórfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-chlórfenyl-(2',4',6'-trichlórfenyl)-sulfid (0,6 g) a práškové železo v metanole (250 ml) sa pridali do 32 ml vodného roztoku NH4CI v molárnom pomere 1:3:5 pre substrát, práškové železo a NH4CI. Zmes sa miešala mechanicky pod refluxom cez noc. Rozpúšťadlo sa odstránilo použitím rotačnej vákuovej odparky. Výsledný zvyšok sa rozpustil v malom objeme chloroformu a prefiltroval sa. Produkt sa získal použitím preparatívnej chromatografie aplikovaním rozpusteného zvyšku na malú kolónu naplnenú silikagélom (70-230 ók) po čom nasledovala elúcia použitím systému rozpúšťadiel chlorofom:hexán (1:3). Frakcie obsahujúce produkt sa spojili a rozpúšťadlo sa odstránilo rotačnou vákuovou odparkou. Biely tuhý produkt sa zachytil filtráciou a vysušil sa pri 40 °C vo vákuovej peci počas 24 hodín. Výťažok produktu bol 72% a teplota topenia bola 109-111 °C. Štandardné analytické techniky zahrnujúce protónovú NMR spektroskopiu, elementárnu analýzu a tenkovrstvovú chromatografiu sa použili na charakterizáciu produktu.
4-Amino-2-chlórfenyl-(2'-amino-4'-chlórfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlórfenyl-(2'-nitro-4'-chlórfenyl)-sulfid (1,02 g) a práškové železo v metanole (250 ml) sa pridali do 60 ml vodného roztoku NH4CI v molárnom pomere 1:3:5 pre substrát, práškové železo a NH4CI. Zmes sa r r * r miešala mechanicky pod refluxom cez noc. Rozpúšťadlo sa odstránilo použitím rotačnej vákuovej odparky. Výsledný zvyšok sa rozpustil v malom objeme chloroformu aplikovaním rozpusteného zvyšku na malú kolónu vyplnenú silikagélom (70-230 ók), po čom nasledovala elúcia použitím systému rozpúšťadiel chloroform:hexán (3:7). Frakcie obsahujúce produkt sa spojili a rozpúšťadlá sa odstránili použitím rotačnej vákuovej odparky. Vypadnutý biely tuhý produkt sa získal po filtrácii a vysušení pri 50 °C vo vákuovej peci počas 24 hodín. Výťažok produktu bol 59% a teplota topenia bola 86-88 °C. Štandardné analytické techniky zahrnujúce protónovú NMR spektroskopiu, elementárnu analýzu a tenkovrstvovú chromatografiu sa použili na charakterizáciu produktu.
4-Amino-2-chlórfenyl-(3',4'-dichlórfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-chlórfenyl-(3',4'-dichlórfenyl)-sulfid (1,0 g) a práškové železo v metanole (250 ml) sa pridali do 40 ml vodného roztoku NH4CI, respektíve. Zmes sa miešala mechanicky pod refluxom cez noc. Rozpúšťadlo sa odstránilo použitím rotačnej vákuovej odparky. Výsledný zvyšok sa rozpustil v malom objeme chloroformu a prefiltroval sa. Produkt sa získal použitím preparatívnej chromatografie aplikovaním rozpusteného zvyšku na malú kolónu vyplnenú silikagélom (70-230 ók), po čom nasledovala elúcia systémom rozpúšťadiel chloroform:hexán (3:7). Frakcie obsahujúce produkt sa spojili a rozpúšťadlá sa odstránili použitím rotačnej vákuovej odparovačky. Farebný tuhý produkt sa získal filtráciou a vysušil pri 70 °C vo vákuovej peci počas 24 hodín. Teplota topenia produktu bola 103-105 °C. Štandardné analytické techniky zahrnujúce protónovú NMR spektroskopiu, elementárnu analýzu a tenkovrstvovú chromatografiu sa využili na charakterizáciu produktu.
4-Amino-2-chlórfenyl-2-(3-chlór-5-trifluórmetylpyridyl)-sulfid
4-Nitro-2-chlórfenyl-2-(3-chlór-5-trifluórmetylpyridyl)-sulfid (1,5 g) a práškové železo v metanole (250 ml) sa pridali do 80 ml vodného roztoku NH4CI v molárnom pomere 1:3:5 pre substrát, práškové železo a NH4CI. Zmes sa miešala mechanicky pod refluxom cez noc. Rozpúšťadlo sa odstránilo použitím rotačnej vákuovej odparky. Výsledný zvyšok sa rozpustil v malom objeme chloroformu a prefiltroval sa. Produkt sa získal s využitím preparatívnej chromatografie aplikovaním rozpusteného zvyšku na malú kolónu naplnenú silikagélom (70-230 ók), po čom nasledovala elúcia systémom rozpúšťadiel chloroform:hexán (3:7). Frakcie obsahujúce produkt sa spojili a rozpúšťadlá sa odstránili použitím rotačnej vákuovej odparovačky. Farebný tuhú produkt sa získal po filtrácii a vysušení pri 60 °C vo vákuovej peci počas 24 hodín. Výťažok produktu bol 97% a teplota topenia bola 96-98 °C. Štandardné analytické techniky zahrnujúce protónovú NMR spektroskopiu, elementárnu analýzu a tenkovrstvovú chromatografiu sa využili na charakterizáciu produktu.
Bis-(4,4'-diamino-2,2'-dichlórfenyl)-suIfid
4-Amino-2-chlórfenyl-(2'-chlór-4'-nitrofenyl)-sulfid a práškové železo v metanole (125 ml) sa pridali do 20 ml vodného roztoku NH4CI v molárnom pomere 1:3:5 pre substrát, práškové železo a NH4CI. Zmes sa miešala mechanicky pod refluxom cez noc. Rozpúšťadlo sa odstránilo použitím rotačnej vákuovej odparky. Výsledný zvyšok sa rozpustil v malom objeme chloroformu a prefiltroval sa. Produkt sa získal použitím preparatívnej chromatografie aplikovaním rozpusteného zvyšku na malú kolónu vyplnenú silikagélom (70230 ók), po čom nasledovala elúcia systémom rozpúšťadiel chloroform.hexán (3:7). Frakcie obsahujúce produkt sa spojili a rozpúšťadlo sa odstránilo použitím rotačnej vákuovej odparovačky. Vypadla biela tuhá látka, ktorá sa získala po filtrácii a vysušení pri 60 °C vo vákuovej peci počas 24 hodín. Výťažok produktu bol 66% a teplota topenia bola 113-115 °C. Štandardné analytické techniky zahrnujúce protónovú NMR spektroskopiu, elementárnu analýzu a tenkovrstvovú chromatografiu sa použili na charakterizáciu produktu.
4-Amino-2-chlórfenyl-(2',4'-dichlórfenyI)-sulfid
2-Chlór-4-nitrofenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-suifid a práškové železo v metanole (50 ml) sa pridali do 50 ml vodného roztoku NH4CI v molárnom pomere 1:3:5 pre substrát, práškové železo a NH4CI. Zmes sa miešala mechanicky pod refluxom cez noc. Rozpúšťadlo sa odstránilo použitím rotačnej vákuovej odparky. Výsledný zvyšok sa rozpustil v malom objeme chloroformu a prefiltroval sa. Rozpúšťadlo sa potom odstránilo z filtrátu využitím rotačnej odparky. Produkt sa získal po zmiešaní zvyšku s 75 ml destilovanej vody (dHaO). Precipitát vo forme farebnej tuhej látky sa získal po filtrácii. Výťažok produktu bol 83% a teplota topenia bola 105-107 °C. Štandardné analytické techniky zahrnujúce protónovú NMR spektroskopiu, elementárnu analýzu a tenkovrstvovú chromatografiu sa využili na charakterizáciu produktu.
4-Amino-2-chlórfenyl-(4'-acetamido-2'-chlórfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-chlórfenyl-(4'-acetamido-2'-chlórfenyl)-sulfid a práškové železo v metanole (250 ml) sa pridali do 20 ml vodného roztoku NH4CI v molárnom pomere 1:3:5 pre substrát, práškové železo a NH4CI. Zmes sa miešala mechanicky pod refluxom cez noc. Rozpúšťadlo sa odstránilo využitím rotačnej vákuovej odparky. Výsledný zvyšok sa rozpustil v malom objeme chloroforme a prefiltroval sa. Produkt sa získal použitím preparatívnej chromatografie aplikovaním rozpusteného zvyšku na malú kolónu naplnenú so silikagélom (70-230 ók), po čom nasleduje elúcia systémom rozpúšťadiel chloroform-hexán (1:4). Frakcie obsahujúce produkt sa spojili a rozpúšťadlá sa odstránili využitím rotačnej vákuovej odparky. Vypadol produkt vo forme bielej tuhej látky, ktorý sa zachytil filtráciou a vysušil sa pri 60 °C vo vákuovej peci počas 24 hodín. Výťažok produktu bol 76 % a teplota topenia bola 170-175 °C. Štandardné analytické techniky zahrnujúce protónovú NMR spektroskopiu, elementárnu analýzu a tenkovrstvovú chromatografiu sa využili na charakterizáciu produktu.
4-Amino-2-chlórfenyI-(4'-dimetylamino-2'-chlórfenyl)-sulfid '
4-Nitro-2-chlórfenyl-(4'-dimetylamino-2'-chlórfenyl)-sulfid (0,2 g) a práškové železo v metanole (250 ml) sa pridali do 20 ml vodného roztoku NH4CI v molárnom pomere 1:3:5 pre substrát, práškové železo a NH4CI. Zmes sa miešala mechanicky pod refluxom cez noc. Rozpúšťadlo sa odstránilo použitím rotačnej vákuovej odparky. Výsledný zvyšok sa rozpustil v malom objeme chloroformu a prefiltroval sa. Produkt sa získal použitím preparatívnej chromatografie aplikovaním rozpusteného zvyšku na malú kolónu naplnenú silikagélom (70-230 ok), po čom nasledovala elúcia systémom rozpúšťadiel chloroform:hexán (2:3). Frakcie obsahujúce produkt sa spojili a rozpúšťadla sa odstránili rotačnou vákuovou odparkou. Produkt vo forme svetlo žltej tuhej látky sa zachytil filtráciou a vysušil pri 60 °C vo vákuovej peci počas 24 hodín. Výťažok produktu bol 58% a teplota topenia bola 133-135 °C. Štandardné analytické techniky zahrnujúcej protónovú NMR spektroskopiu, elementárnu analýzu a tenkovrstvovú chromatografiu sa použili na charakterizáciu produktu.
2-Chlór-4-amino-5-metyIaminofenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
2-Chlór-4-nitro-5-metylaminofenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid (0,2 g) a práškové železo v metanole (250 ml) sa pridali do 20 ml vodného roztoku NH4CI v molárnom pomere 1:3:5 pre substrát, práškové železo a NH4CI. Zmes sa miešala mechanicky pod refluxom cez noc. Rozpúšťadlo sa odstránilo použitím rotačnej vákuovej odparky. Výsledný zvyšok sa rozpustil v malom objeme chloroformu a prefiltroval sa. Produkt sa získal použitím preparatívnej chromatografie aplikovaním rozpusteného zvyšku na malú kolónu naplnenú silikagélom (70-230 ók), po čom nasledovala elúcia systémom rozpúšťadiel chloroform:hexán (1:4). Frakcie obsahujúce produkt sa spojili a rozpúšťadla sa odstránili s využitím rotačnej vákuovej odparky. Produkt vo forme hnedej tuhej látky sa zozbieral filtráciou a vysušil pri 50 °C vo vákuovej peci počas 24 hodín. Výťažok produktu bol 16% a teplota topenia bola 65-70 °C. Štandardné analytické techniky zahrnujú protónovú NMR spektroskopiu, elementárnu analýzu a tenkovrstvovú chromatografiu sa využili na charakterizáciu produktu.
r r f r
2-Chlór-4-amino-5-N-morfolinofenyl-(2',4'-dichlórfenyI)-suIfid
2-Chlór-4-nitro-5-N-morfolinofenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-suIfid (0,9 g) a práškové železo v metanole (250 ml) sa pridali do 20 ml vodného roztoku NH4CI v molárnom pomere 1:3:5 pre substrát, práškové železo a NH4CI. Zmes sa miešala mechanicky pod refluxom cez noc. Rozpúšťadlo sa odstránilo použitím rotačnej vákuovej odparky. Výsledný zvyšok sa rozpustil v malom objeme chloroformu a prefiltroval sa. Produkt sa získal využitím preparatívnej chromatografie aplikovaním rozpustenej zmesi na malú kolónu naplnenú silikagél (70-230 ók), po čom nasledovala elúcia systémom rozpúšťadiel chloroform:hexán (3:2). Frakcie obsahujúce produkt sa spojili a rozpúšťadla sa odstránili použitím rotačnej vákuovej odparky. Produkt vo forme bielej tuhej látky sa zachytil filtráciou a vysušil sa pri 50 °C vo vákuovej peci počas 24 hodín. Teplota topenia produktu bola 153-155 °C. Štandardné analytické techniky zahrnujúce protónovú NMR spektroskopiu, elementárnu analýzu a tenkovrstvovú chromatografiu sa využívajú na charakterizáciu produktu.
4-Amino-2-trifluórmetylfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-trifluórmetylfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid (0,6 g) a práškové železo v metanole (250 ml) sa pridali do 20 ml vodného roztoku NH4CI v molárnom pomere 1:3:5 pre substrát, práškové železo a NH4CI. Zmes sa miešala mechanicky pod reluxom cez noc. Rozpúšťadlo sa odstránilo použitím rotačnej vákuovej odparky. Výsledný zvyšok sa rozpustil v malom objeme chloroformu a prefiltroval sa. Produkt sa získal využitím preparatívnej chromatografie aplikovaním rozpusteného zvyšku na malú kolónu naplnenú silikagélom (70-230 ók), po čom nasledovala elúcia s využitím systému rozpúšťadiel chloroform.hexán (1:1). Frakcie obsahujúce produkt sa spojili a rozpúšťadla sa odstránili použitím rotačnej vákuovej odparky. Produkt sa zachytil filtráciou a vysušil pri 50 °C vo vákuovej peci počas 24 hodín. Teplota topenia produktu nebola určená, pretože produkt bol vo forme farebného oleja. Štandardné analytické techniky zahrnujúce protónovú NMR spektroskopiu, elementárnu analýzu a tenkovrstvovú chromatografiu sa využili na charakterizáciu produktu.
4-Amino-2-fluórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-fluórfenyl-(2',4'-dichIórfenyl)-sulfid a práškové železo v metanole (250 ml) sa pridali do 20 ml vodného roztoku NH4CI v molárnom pomere 1:3:5 pre substrát, práškové železo a NH4CL Zmes sa miešala mechanicky pod refluxom cez noc. Rozpúšťadlo sa odstránilo s využitím rotačnej vákuovej odparky. Výsledný zvyšok sa rozpustil v malom množstve chloroformu a prefiltroval sa. Produkt sa získal použitím preparatívnej chromatografie aplikovaním rozpusteného zvyšku na malú kolónu naplnenú silikagélom ¢70-230 ók), po čom nasledovala elúcia systémom rozpúšťadiel chloroform:hexán (1:1). Frakcie obsahujúce produkt sa spojili a rozpúšťadla sa odstránili s využitím rotačnej vákuovej odparky. Produkt vo forme svetlo žltej tuhej látky sa zachytil filtráciou a vysušil pri 30 °C vo vákuovej peci počas 24 hodín. Výťažok produktu bol 55% a teplota topenia bola 101-102 °C. Štandardné analytické techniky zahrnujúce protónovú NMR spektroskopiu, elementárnu analýzu a tenkovrstvovú chromatografiu sa využili na charakterizáciu produktu.
5-Amino-3-chlórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
3-chlór-5-nitrofenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid (0,1 g) a práškové železo v metanole (250 ml) sa pridali do 20 ml vodného roztoku NH4CI v molárnom pomere 1:3:5 pre substrát, práškové železo a NH4CI. Zmes sa miešala mechanicky pod refluxom cez noc. Rozpúšťadla sa odstránilo použitím rotačnej vákuovej odparky. Výsledný zvyšok sa rozpustil v malom objeme chloroformu a prefiltroval sa. Produkt sa získal použitím preparatívnej chromatografie aplikovaním rozpusteného zvyšku na malú kolónu naplnenú silikagélom (70230 ók), po čom nasledovala elúcia systémom rozpúšťadiel chloroform:hexán (3:2). Frakcie obsahujúce produkt sa spojili a rozpúšťadla sa odstránili použitím rotačnej vákuovej odparky. Produkt sa zachytil filtráciou a vysušil sa pri 25 °C vo vákuovej peci počas 24 hodín. Výťažok produktu bol 16% a teplota topenia nebola určená pretože produkt bol vo forme hnedého oleja. Štandardné analytické techniky zahrnujúce protónovú NMR spektroskopiu, r * elementárnu analýzu a tenkovrstvovú chromatografiu sa využili na charakterizáciu produktu.
5-Amino-3-chlórfenyl-(2',4'-dichIórfenyI)-sulfid
3-Chlór-5-nitrofenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid (0,1 g) a práškové železo v metanole (250 ml) sa pridali do 20 ml vodného roztoku NH4CI v molárnom pomere 1:3:5 pre substrát, práškové železo a NH4CI. Zmes sa miešala mechanicky pod refluxom cez noc. Rozpúšťadlo sa odstránilo použitím rotačnej vákuovej odparky. Výsledný zvyšok sa rozpustil v malom objeme chloroformu a prefiltroval sa. Produkt ša získal použitím preparatívnej chromatografie aplikovaním rozpusteného zvyšku na malú kolónu naplnenú silikagélom (70230 ók), po čom nasledovala elúcia použitím systému rozpúšťadiel chloroform:hexán (3:2). Frakcie obsahujúce produkt sa spojili a rozpúšťadla sa odstránili využitím rotačnej vákuovej odparky. Produkt sa zachytil filtráciou a vysušili pri 25 °C vo vákuovej peci počas 24 hodín. Výťažok produktu bol 16% a teplota topenia nebola určená pretože produkt bol vo forme hnedého oleja. Štandardné analytické techniky zahrnujúce protónovú NMR spektroskopiu, elementárnu analýzu a tenkovrstvovú chromatografiu sa využili na charakterizáciu produktu.
C. Všeobecná syntetická metóda C
Všeobecná syntetická metóda C je schematicky znázornená nižšie:
Všeobecnou syntetickou metódou C boli pripravené nasledujúce zlúčeniny:
4-Amino-2-chlórfenyl-(2'-chlór-4'-nitrofenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlórfenyl-(2'-nitro-4'-chlórfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chIórfenyl-6-(5-nitrochinolino)-sulfid.
4-Amino-2-chlórfenyl-(2'-chlór-4'-nitrofenyl)-sulfid
2-Chlór-4-aminotiofenol (2,0 g) a 3,4-dichlórnitrobenzén (1 ekvivalent) boli pridané do 300 ml acetónu obsahujúceho K2CO3 (20 g). Zmes sa refluxovala 24 hodín pri 60 °C. Po ochladení na izbovú teplotu sa zmes filtrovala a acetón sa odstránil použitím rotačnej vákuovej odparky. Výsledný zvyšok sa rozpustil v malom objeme chloroformu a prefiltroval sa. Chloroform sa potom odstránil využitím rotačnej odparky. Výsledný zvyšok sa trituroval metanolom, ktorý spôsobil precipitáciu produktu. Precipitát sa zozbieral filtráciou a produkt vo forme žltej tuhej látky sa vysušil pri 80 °C vo vákuovej peci počas 24 hodín. Výťažok produktu bol 59% a teplota topenia bola 135-136 °C. Štandardné analytické techniky zahrnujúce protónovú NMR spektroskopiu, elementárnu analýzu a tenkovrstvovú chromatografiu sa využili na charakterizáciu produktu.
4-Amino-2-chlórfenyl-(2'-nitro-4'-chlórfenyl)-sulfid
2-Chlór-4-aminotiofenol (2,0 g) a 2,5-dichlórnitrobenzén (1 ekvivalent) sa pridali do 300 ml acetónu obsahujúceho uhličitan draselný (20 g). Zmes sa refluxovala počas 24 hodín pri 60 °C. Po ochladení na izbovú teplotu sa zmes prefiltrovala a acetón sa odstránil s využitím rotačnej vákuovej odparky. Výsledný zvyšok sa rozpustil v malom objeme CH2CI2 a prefiltroval sa. CH2CI2 sa potom odstránil s využitím rotačnej vákuovej odparky. Výsledný zvyšok sa trituroval metanolom, ktorý spôsobil vyzrážanie produktu. Precipitán sa zachytil filtráciou a produkt vo forme žltej tuhej látky sa vysušil pri 60 °C vo vákuovej peci počas 24 hodín. Výťažok produktu bol 57% a teplota topenia r ·
ΓΓ · · ,, r , r f r · e · r r * r f - · - .
bola 191-193 °C. Štandardné analytické techniky zahrnujúce protónovú NMR spektroskopiu, elementárnu analýzu a tenkovrstvovú chromatografiu sa využili na charakterizáciu produktu.
w
D. Špecifické syntetické postupy
Kompletné preparatívne postupy sú poskytnuté pre nasledujúce zlúčeniny: l-Acetamido-3-chlór-4-(2,3-dichlórfenylsulfany)-benzén
3-Hydroxy-4-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín Hydrochlorid
6-Chlór-5-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-lH-benzimidazol l-Acetamido-3-chlór-4-(2,3-dichlórfenyIsulfanyl)-benzén
0,165 g (2,1 ekvivalent, 1,35 mmol) 4-dimetylaminopyridínu (4-DMAP) sa premiestnilo do suchej nádoby pod dusíkovou atmosférou a rozpustilo v 5 ml bezvodého tetrahydrofuránu (THF). Pridali sa 2 ml anhydridu kyseliny octovej potom 0,220 g (1 ekvivalent, 0,643 mmol) 3-chlór-4-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)fenylamín hydrochloridu. Toto sa miešalo počas 18 hodín. Zmes sa potom zriedila 75 ml éteru a premyla sa nasýteným hydrogenuhličitanom sodným (3 x 50 ml), 0,3 N HCI (3 x 30 ml) a nasýteným NaCl (2 x 30 ml), vysušila cez Na2SO4, prefiltrovala sa a rozpúšťadlo sa odstránilo na rotačnej odparke. Rýchla chromatografia (1,9 x 27 cm, EtAc/Heptán (1:1) poskytla 0,135 g (61% výťažok) vo forme bielej tuhej látky, t. t. 167-169 °C, Rf 0,25 (EtAc/Heptán 1:1). ‘H NMR (DMSO-d6) 2,07 (s, 3H), 6,59 (d z d, J, = 1,3, J2 = 7,9, IH), 7,24 (t, J = 8,1, IH), 7,46 (d z d, J, = 1,4, J2 = 8,1, IH), 7,55 (m, 2H), 8,04 (d, J =
1,9, IH), 10,35 (s, IH). MS (EI) m/z 345 (M+, 82). Analýza vypočítaná pre C,4HioC13NOS: C 48,51, H 2,91, N 4,04. Nájdené: C 48,29, H 2,88, N 3,92.
3-Hydroxy-4-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín Hydrochlorid
0,19 g (0,67 mmol) 3-Metoxy-4-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)fenylamínu sa vložilo do vysušenej nádoby za dusíkovej atmosféry, rozpustilo v 10 ml suchého CH2C12 a ochladilo sa na -78 °C. Po kvapkách sa pridalo 0,32 ml (5 ekvivalentov, 3,3 mmol) bóridu bromitého za miešania. Studený kúpeľ sa odstránil a reakcia prebiehala 20 hodín. Roztok sa opäť ochladil na -78 °C a potom sa po kvapkách pridalo 10 ml MeOH. Roztok sa zohrial na izbovú teplotu a miešal sa jednu hodinu. Rozpúšťadlo sa odstránilo vákuovou odparovačkou a výsledný olej sa dvakrát premyl 10 ml metanolu a opäť sa odstránil. Materiál sa znova premyl v 10 ml metanolu a potom zriedil 100 ml EtAc. Vzniknutý biely precipitát sa oddelil filtráciou a potom sa filtrát premyl nasýteným chloridom sodným (3 x 50 ml), vysušil cez síran sodný a rozpúšťadlo sa odstránilo rotačnou odparkou. Výsledný olej sa čistil rýchlou chromatografiou (2,9 x 28 cm, EtAc/Heptán (1:3)) a potom sa rozpustil v 25 ml éteru a precipitoval sa ako HCI soľ pridaním 5 ml IN HCI v étery. Táto bola zachytená filtráciou, premytá éterom a vysušená (90 °C, 3 h, 0,3 mm Hg) za vzniku 0,17 g (80% výťažku) bielej tuhej látky s teplotou topenia 222 °C (rozkl.), Rf 0,49 (EtAc/Heptán 1:1). ’H NMR (DMSO-dĎ) 6,56-6,61 (m, 2H), 6,79 (d, J = 1,9, 1H), 6,90 (br pík), 7,19 (t, J = 8,1, 1H), 7,27 (d, J = 8,2, 1H), 7,38 (d zd, Ji = 1,4, J2 = 8,1, 1H), 10,37 (br s, 1H). MS (EI) m/z 285 M+ (100). Analýza vypočítaná pre Ci2H9C12NOS . HCI: C 44,67, H 3,12, N 4,34. Nájdené: C 44,53, H 2,91; N 4,17.
6-Chlór-5-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-lH-benzimidazol
4-Chlór-2-nitro-5-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín sa pripravil všeobecným postupom s výnimkou toho, že bol čistený ako voľný amín rýchlou chromatografiou. 1,37 g (3,93 mmol) voľného amínu sa pridalo do 10 ml DMF a 10 ml EtOH. Pridalo sa 4,43 g (5 ekvivalentov, 19,7 mmol) dihydrátu chloridu cínu, potom 10 ml koncentrovanej HCI. Toto sa zahrievalo na 60 °C počas 20 hodín. Reakcia sa nechala ochladiť na laboratórnu teplotu a potom sa zriedila s 30 ml vody a pH sa upravilo na 12 pridaním 30 ml 5 N NaOH. Táto zmes sa dva krát extrahovala 150 ml éteru. Spojené organické vrstvy sa premyli 100 ml nasýteného hydrogénuhličitanu sodného a 2 x 100 ml nasýteného chloridu sodného, vysušili sa cez síran sodný a prefiltrovali sa. Pridalo sa 40 ml heptánu a reakcia sa koncentrovala na rotačnej odparke a vysušila vo vákuu (100 °C, 2 h, 0,3 mm Hg). Dosiahol sa výťažok 1,06 g (82%) bielej tuhej látky r r s analytickou čistotou a teplotou topenia 206 - 208 °C, Rf 0,51 (CH2Cl2/MeOH (9:1) w/ 1% TEA). 'H NMR (DMSO-d6) 6,63 (d, J = 8,6, IH), 7,28 (d z d, J, =
2,2, J2 = 8,7, IH), 7,69 (d, J = 2,2, IH), 7,86 (br s, IH), 7,93 (s, IH), 8,38 (s, IH), 12,80 (s, IH). MS (EI) m/z 328 (M+, 97). Analýza vypočítaná pre C13H7CI3N2S: C 47,37, H 2,14, N 8,50. Nájdené: C 47,40, H 2,04, N 8,32.
E. Špecifické syntetické postupy
Nasledujúce zlúčeniny boli pripravené metódami opísanými nižšie. 4-Metylamino-2,2',4'-trichlórdifenylsulfid
4-Amino-2-chlórfenyl-(4'-acetamido-2'-chlórfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlórfenyl-(4'-dimetylamino-2'-chlórfenyl)-sulfid
4-Aminometyl-2-chlórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
4-Metylamino-2,2',4'-trichlórdifenylsulfid
4-amino-2,2',4'-trichlórdifenylsulfid (0,305 g, 1,0 mmol) sa pridal do 15 ml kyseliny mravčej. Zmes sa miešala počas 8 hodín, po ktorých sa pridalo 0,23 ml 37% formaldehydu a zmes sa refluxovala osem hodín. Rozpúšťadlo sa potom odstránilo použitím rotačnej odparky. Výsledný zvyšok sa potom aplikoval na malú kolónu obsahujúcu chloroform. Rozpúšťadlo sa odstránilo z eluátu použitím rotačnej odparky a zachytil sa svetlo žltý tuhý produkt. Výťažok produktu bol 44% a teplota topenia bola 211 °C. Štandardné analytické techniky zahrnujúce protónovú NMR spektroskopiu, elementárnu analýzu a tenkovrstvovú chromatografiu sa využili na charakterizáciu produktu.
4-Nitro-2-chlórfenyl-(4'-acetamido-2'-chlórfenyl)-suIfid
4-Amino-2,2'-dichlór-4'-nitrodifenylsulfid (1,0 g, 3,17 mmol) sa zahrieval v 15 ml anhydridu kyseliny octovej obsahujúcom stopu kyseliny ptoluénsulfónovej. Zmes sa nechala stáť jednu hodinu, po ktorej sa rozpúšťadlo odstránilo použitím rotačnej odparky. Zvyšok sa rozpustil v EtAc a prelial cez malú kolónu silikagélu ¢70-230 ók). Filtrát sa zachytil, odparil do sucha a rekryštalizoval z acetonitrilu za vzniku žltého tuhého produktu. Výťažok produktu bol 97% a teplota topenia bola 163-163 °C. Štandardné analytické techniky zahrnujúce protónovú NMR spektroskopiu, elementárnu analýzu a tenkovrstvovú chromatografiu sa využili na charakterizáciu produktu.
4-Nitro-2-chlórfenyI-(4'-dimetylamino-2'-chIórfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlórfenyl-(2'-chlór-4'-nitrofenyl)-sulfid (1,0 g, 3,17 mmol) sa pridal do suspenzie 60% hydridu sodného (1,43 g) v 250 ml THF pri 0 °C. Potom sa pridal jódmetán (0,2 ml v 20 ml THF) a zmes sa miešala pri izbovej teplote 48 hodín. Zmes sa potom aplikovala na silikagélové platne „Analtech“. Každá platňa má hrúbku 1000 mikrónov silikagélu. Dva produkty reakcie, napr. 4-nitro-2-chlórfenyl-(4'-metylamino-2'-chlórfenyl)-sulfid a 4-nitro-2chlórfenyl-(4'-dimetylamino-2'-chlórfenyl)-sulfid sa eluovali použitím 1:1 zmesi CHCI3 a hexánu. Pomalší elučný pás zodpovedal skôr uvedenému a rýchlejší elučný pás zodpovedal neskôr uvedenému. Po zachytení pásov sa zlúčeniny rozpustili v CHC13. Rozpúšťadlo sa odstránilo rotačnou odparkou za vzniku žltého tuhého produktu. Výťažok požadovaného produktu bol 36% a teplota topenia bola 138-139 °C. Štandardné analytické techniky zahrnujúce protónovú NMR spektroskopiu, elementárnu analýzu a tenkovrstvovú chromatografiu sa využívali na charakterizáciu produktu.
4-Aminometyl-2-chlórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
2-Chlór-4-kyanofenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid (1,0 g, 3,18 mmol) sa pridal do 200 ml THF pod dusíkovou atmosférou pri 0 °C. Do roztoku sa potom po častiach pridal hydrid LiAl (0,24 g). Zmes sa potom nechala stáť dve hodiny pri 0 °C, po ich uplynutí sa do zmesi pridal 1 ml 20% NaOH, ďalej sa pridal 1 ml dH2O. Roztok sa potom filtroval a rozpúšťadlá sa odstránili použitím rotačnej odparky. Výsledný zvyšok sa potom aplikoval na malú kolónu obsahujúcu silikagél (70-230 ók). Kolóna sa premyla 1:1 zmesou chloroformu a hexánu, po čom sa produkt eluoval použitím rotačnej odparky a produkt sa získal vo forme farebného oleja. Výťažok produktu bol 40% a teplota topenia nebola určená. Štandardné analytické techniky zahrnujúce protónovú NMR spektroskopiu, elementárnu analýzu a tenkovrstvovú chromatografiu sa využívajú na charakterizáciu produktu.
F. Iné zlúčeniny
Medzi zlúčeniny syntetizované v súlade so všeobecnými syntetickými metódami patria:
Tabuľka II
4-Nitro-2-chlórfenyl-(2',4'-dimetylfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-chlórfenyl-(2'-metyl-4'-chlórfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-chlórfenyl-(2',4'-difluórfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-chlórfenyl-(2',4',6'-trichlórfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-chlórfenyl-(3',4'-dichlórfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-chlórfenyl-2-(3-chlór-5-trifluórmetylpyridyl)-sulfid
2- Chlór-4-nitrofenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-chlórfenyl-(4'-acetamido-2'-chlórfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-chlórfenyl-(4'-dimetylamino-2'-chlórfenyl)-sulfid
3- Chlór-4-nitro-5-metylaminofenyl-(2',4’-dichlórfenyl)-sulfid
2- Chlór-4-nitro-5-morfolinofenyl-(2’,4'-dichlórfenyl)-sulfid
4- Nitro-2-trifluórmetylfenyl-(2'-4'-dichlórfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-fluórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
3- Chlór-5-nitrofenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
4- Nitro-2-chlórfenyl-(l -naftyl)-sulfid
P P
4-Nitro-2-metylfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-brómfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
4-Nitro-2,5-dichlórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
4-Nitro-2,6-dichlórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-chlór-5-fluórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
4-Nitro-2,3-dichlórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-chlórfenyl-(4'-chlór-2'-aminofenyl)-sulfid
4-Nitro-5-acetamido-2-chlórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-chlórfenyl-(4'-benzylamino-2'-chlórfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-chlórfenyl-(4'-dibenzylamino-2'-chlórfenyl)-sulfid
4-Nitro-5-fenylsulfo-2-chlórfenyl-(2',4'-dichlórfenfyl)-sulfid
3-Nitro-5-chIórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
Príklad 4
Výsledky testu založenom na bunke
Testovali sa zlúčeniny vynálezu v testoch založených na bunke a sú uvedené v tabuľke III nižšie a poskytujú μΜ IC50 hodnoty pre inhibíciu LFA-1 viazania na ICAM-1 a ICAM-3. Dvojica hodnôt (X/Y) potvrdzuje inhibíciu v neprítomnosti a v prítomnosti IL-8. Násobné párové hodnoty (W/X; Y/Z) potvrdzujú opakované experimenty. Čiarkovanie (—/X) znamená, že experiment nebol vykonávaný. „NT“ naznačuje, že zlúčenina nebola testovaná v konkrétnom teste.
Aj keď predkladaný vynález nebol opísaný v termínoch špecifických uskutočnení to neznamená, že variácie a modifikácie by nemohli byť odborníkmi v odbore realizované. Preto by mali byť brané do úvahy len tie obmedzenia, ktoré sú uvedené v priložených patentových nárokoch.
Tabuľka III
Zlúčenina LFA1/ICAM-1 LFA-l/ICAM-3
3-Chlór-4-(2-chlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid 7,6/4,7; 17,7/16,3 NT
3-Chlór-4-(2-naftylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid 7,8/7,2; · 10,0/9,3 NT
3-Chlór-4-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)fenylamín hydrochlorid 1,1/0,7; 3,4/3,9 1,8/1,0
3-Chlór-4-(2,4,5-trichlórfenylsulfanyl)fenylamín hydrochlorid 7,5/12,5; 18,9/22,6 NT
3-Chlór-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)fenylamin hydrochlorid 1,6/1,9; 3,0/4,1; 5,0/6,0 1,2/1,4
3-Metoxy-4-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)- fenylamín -/7,5; 8,7/7,0 NT
5-Amino-2-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)acetofenón hydrochlorid -/20 NT
4-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín -/8,0; 8,5/7,6 NT
3-Chlór-4-(l-naftylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid -/31 NT
3-Metyl-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)fenylamín hydrochlorid 7,9/8,2; 7,0/6,5 NT
l-Acetamido-3-chlór-4-(2,3- dichlórfenylsulfanyl)-benzén -/29,5 NT
4-Metylamino-2,2',4'-trichlórdifenylsulfid 34,0/>40 NT
3-Bróm-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)fenylamín hydrochlorid 4,0/7,5; 2,6/3,1 NT
3-Hydroxy-4-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)fenylamín hydrochlorid 14,2/14,2 NT
6-Chlór-5-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-lH- benzimidazol 27,8/>41 NT
4-Amino-2-chlórfenyl-(2',4'-dimetylfenyl)sulfid hydrochlorid 12,6/23,0 NT
2,5-Dichlór-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)fenylamín hydrochlorid 3,3/3,9; 3,6/3,1; 2,2/4,0 1,1/1,1
4-Amino-2-chlórfenyl-(2'-metyl-4'- chlórfenyl)-sulfid 13,4/22,6 NT
4-Amino-2-chlórfenyl-(2',4'-difluórfenyl)sulfid hydrochlorid 16,5/17,8 NT
4-Amino-2-chlórfenyl-(2',4',6'- trichlórfenyl)-sulfid 8,7/12,4 NT
4-Amino-2-chlórfenyl-(2'-amino-4'- chlórfenyl)-sulfid 29,0/36,0 NT
4-Amino-2-chlórfenyl-(2'-chlór-4'- nitrofenyl)-sulfid 10,0/12,0 NT
4-Amino-2-chlórfenyl-(2'-nitro-4'- chlórfenyl)-sulfid 6,7/7,8; 6,0/5,6 2,5/2,3;1,1/3,0
4-Amino-2-chlórfenyl-(3',4'-dichlórfenyl)- sulfid 17,4/14,5 NT
4-Amino-2-chlórfenyl-2-(3-chlór-5- trifluórmetylpyridyl)-sulfid 9,3/13,5; 7,6/7,3 NT
Bis-(4,4'-diamino-2,2'-dichIórfenyl)-sulfid 35,5/30,5 NT
4-Amino-2-chlórfenyl-(2',4'-dichlórfenyI)- sulfid 6,0/6/7; 5,9/4,2 2,1/2,0
4-Amino-2-chlórfenyl-(4'-acetamido-2'- chlórfenyl)-sulfid 17,0/29,0 NT
4-Amino-2-chlórfenyl-6-(5-nitrochinolino)- sulfid 6,0/7,3; 3,8/7 2,5/3,8
4-Amino-2-chlórfenyl-(4'-dimetylamino-2'- chlórfenyl)-sulfid 9,7/9,2 NT
2-Chlór-4-amino-5-metylaminofenyl-(2',4'- dichlórfenyl)-sulfid 17,7/31,6 NT
2-Chlór-4-amino-5-N-morfolinofenyl-(2',4'- dichlórfenyl)-sulfid 35,7/24,3 NT
4-Amino-2-trifluórmetylfenyl-(2',4'- dichlórfenyl)-sulfid 7,5/6,6 NT
4-Aminometyl-2-chlórfenyl-(2',4'- dichlórfenyl)-sulfid >40/18,7 NT
4,5-Dichlór-2-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)- fenylamín 31,5/35,0; 33,7/36 NT
3,5-DichIór-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)- fenylamín 3,9/5,0 NT
2,3-Dichlór-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)- fenylamín 27,5/27,5 NT
4-Amino-2-fluórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)- sulfid 4,8/5,9 NT
5-Amino-3-chlórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)- sulfid 31,8/32,9 NT
4-(Benzotiazol-2-ylsulfanyl)-3-chlór- fenylamín 10,0/8,3; 7,8/8,8 3,0/3,5
3-Chlór-4-(l -chlór-naftalén-2-ylsulfanyl)fenylamín 1,0/1,5 0,5/0,3
4-Nitro-2-chlórfenyl-(2',3'-dichlórfenyl)- sulfid 29,0/40,0 NT
4-Amino-2-chlórfenyl-2-(5-nitro-3-bróm)pyridín sulfid >40/31,0 NT
p P p * r p p p p r p r · r f f

Claims (17)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Zlúčenina vybraná zo skupiny obsahujúcej:
    3-Chlór-4-(2-chlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
    3-Chlór-4-(2-naftylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
    3-Chlór-4-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
    3-Chlór-4-(2,4,5-trichlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
    3-Chlór-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
    3- Metoxy-4-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín
    I
    5- Amino-2-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)-acetofenón hydrochlorid
    4- (2,3-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín
    3-Chlór-4-(l-naftylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
    3- Metyl-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid l-Acetamido-3-chlór-4-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)-benzén
    4- Metylamino-2,2 ,4 -trichlórdifenylsulfid
    3-Bróm-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
    3- Hydroxy-4-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
    6- Chlór-5-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-lH-benzimidazol
    4- Amino-2-chlórfenyl-(2 ,4 -dimetylfenyl)-sulfid hydrochlorid
  2. 2,5-Dichlór-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
    4-Amino-2-chlórfenyl-(2’-metyI-4-chlórfenyl)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-(2 ,4 -difluórfenyl)-sulfid hydrochlorid
    4-Amino-2-chlórfenyl-(2,4’,6-trichlórfenyl)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-(2 -amino-4 -chlórfenyl)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-(2 -chlór-4 -nitrofenyl)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-(2 -nitro-4 -chlórfenyl)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-(3 ,4 -dichlórfenyl)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-2-(3-chlór-5-trifluórmetylpyridyl)-sulfid B/'í-(4,4 -diamino-2,2 -dichlórfenyl)-sulfid 4-Amino-2-chlórfenyl-(2 ,4 -dichlórfenyl)-sulfid 4-Amino-2-chlórfenyl-(4 -acetamido-2 -chlórfenyl)-sulfid 4-Amino-2-chlórfenyl-6-(5-nitrochinolino)-sulfid 4-Amino-2-chlórfenyl-(4 -dimetylamino-2 -chlórfenyl)-sulfid 2-Chlór-4-amino-5-metylaminofenyl-(2 ,4 -dichlórfenyl)-sulfid 2-Chlór-4-amino-5-N-morfolinofenyl-(2 ,4 -dichlórfenyl)-sulfid 4-Amino-2-trifluórmetylfenyl-(2 ,4 -dichlórfenyl)-sulfid 4-Aminometyl-2-chlórfenyl-(2 ,4 -dichlórfenyl)-sulfid
    4.5- Dichlór-2-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín
  3. 3.5- Dichlór-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín
    2,3-Dichlór-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyI)-fenylamín
  4. 4- Amino-2-fluórfenyl-(2 ,4 -dichlórfenyl)-sulfid
  5. 5- Amino-3-chlórfenyl-(2 ,4 -dichlórfenyl)-sulfid
    4-Nitro-2-chlórfenyl-(2',4'-dimetylfenyl)-sulfid
    4-Nitro-2-chlórfenyl-(2'-metyl-4'-chlórfenyl)-sulfid
    4-Nitro-2-chIórfenyl-(2',4'-difluórfenyl)-sulfid
    4-Nitro-2-chlórfenyl-(2',4',6'-trichlórfenyl)-sulfid
    4-Nitro-2-chlórfenyl-(3',4'-dichlórfenyl)-sulfid
    4-Nitro-2-chlórfenyl-2-(3-chlór-5-trifluórmetylpyridyl)-sulfid
    2- Chlór-4-nitrofenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
    4-Nitro-2-chlórfenyl-(4'-acetamido-2'-chlórfenyl)-sulfid
    4-Nitro-2-chlórfenyl-(4'-dimetylamino-2'-chlórfenyl)-sulfid
    3- Chlór-4-ni tro-5-metyl amino fenyl-(2', 4'-di chlór fenyl)-sulfid
    2- Chlór-4-nitro-5-morfolinofenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
    4-Nitro-2-trifluórmetylfenyl-(2'-4'-dichlórfenyl)-sulfid 4-Nitro-2-fluórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
    3- Chlór-5-nitrofenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
    4- Nitro-2-chlórfenyl-(l-naftyl)-sulfid 4-Nitro-2-metylfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid 4-Nitro-2-brómfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid 4-Nitro-2,5-dichlórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid 4-Nitro-2,6-dichlórfenyl-(2',4’-dichlórfenyl)-sulfid 4-Nitro-2-chlór-5-fluórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid 4-Nitro-2,3-dichlórfenyl-(2’,4’-dichlórfenyl)-sulfid 4-Nitro-2-chlórfenyl-(4'-chlór-2'-aminofenyl)-sulfid 4-Nitro-5-acetamido-2-chlórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid 4-Nitro-2-chlórfenyl-(4'-metylamino-2'-chlórfenyl)-sulfid 4-Nitro-2-chlórfenyl-(4'-benzylamino-2'-chlórfenyl)-sulfid 4-Nitro-2-chlórfenyl-(4'-dibenzylamino-2'-chlórfenyl)-sulfid 4-Nitro-5-fenylsulfo-2-chlórfenyl-(2',4'-dichlórfenfyl)-sulfid
    3-Nitro-5-chlórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
    2. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa tým, že obsahuje zlúčeninu podľa nároku 1 a farmaceutický prijateľný nosič.
    3. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa tým, že obsahuje zlúčeninu vybranú zo skupiny zahrnujúcej:
    3-Chlór-4-(l -chlór-naftalén-2-ylsulfanyl)-fenylamín l-(3-Nitro-4-fenylsulfanyl-fenyI)-etanón
    1 -(3-Nitro-4-fenylsulfanyl-fenyl)-etanón oxím
    5- Trifluórmetyl-2-fenylsulfanyl-benzonitril
    1- (3,5-dichlórfenyl)-3-fenylsulfanyl-pyrolidín-2,5-dión
    Bis-2,4,6-Trinitrofenyl-sulfid
    2- Metyl-l-(2-o-tolylsulfanyl-fenyl)-lH-pyrol
    3- 2-(4-Chlór-2-nitro-fenylsulfanyl)-fenylamino-3H-izobenofurán-l-ón
    4- (Benzotiazol-2-ylsulfanyl)-3-chlór-fenylamín
    2-Nitro-4-chlórfenyl-(2'-aminofenyl)-sulfid
  6. 6- Amino-2-chlórfenyl-(4'-metylfenyl)-sulfid
    4-Nitrofenyl-(2'-chlórfenyl)-sulfid
    2.4- Dinitrofenyl-(4'-chlórfenyl)-sulfid
    4-Aminofenyl-(2'-chlórfenyl)-sulfid
    2.4- Diaminofenyl-(4'-izopropylfenyI)-sulfid
    4-Nitro-2-chlórfenyl-(2',3'-dichlórfenyl)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-2-(5-nitro-3-bromo)-pyridín sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-(2'-nitro-4'-chlórfenyl)-sulfid
    4. Spôsob liečby zápalovej poruchy, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa krok podania cicavcovi množstva farmaceutickej kompozície podľa nároku 2 alebo 3 dostatočného na inhibíciu väzby LFA-1 na prirodzený ligand, ktorý konkuruje s ICAM-1 alebo ICAM-3 pri väzba na LFA-1.
    5. Spôsob inhibície LFA-1 viažucej sa na ICAM, ktorý viaže LFA-1, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa krok kontaktovania LFA-1 s diaryl sulfidom.
    r r
    6. Spôsob podľa nároku 5, vyznačujúci sa tým, že diaryl sulfid je substituovaný.
  7. 7. Spôsob podľa nároku 5, vyznačujúci sa tým, že diaryl sulfid je zlúčenina predstavovaná všeobecným štruktúrnym vzorcom (I):
    kde A a B, nezávisle, sú arylové skupiny vybrané zo skupiny zahrnujúcej
    5- a 6- členné aromatické kruhy obsahujúce, ale nie je to obmedzené len na ne, fenyl, tienyl, furyl, pyrimidinyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrolyl a pyridazinyl;
    Ri, R.2 a R.3, nezávisle, sú vybrané zo skupiny zahrnujúcej vodík
    Ra pričom Ra je vodík alebo alkylová skupina obsahujúca nasýtený rozvetvený alebo nerozvetvený reťazec s jedným až šiestimi atómami uhlíka (Ci-ealkyl),
    -O-Ra>
    -halogén, kde halogén je Cl, F, Br alebo I,
    NRbRc kde Rb a Rc, nezávisle, sú H, Ci-ealkyl alebo -CH2-aryl
    -NO2,
    -C(=O)Ra
    -CN
    -perfluórRa taký ako trifluórmetyl r r
    -N-C(=O)Ra
    -(CH2)n-NRbRc, pričom n je celé číslo 1 až 6
    5- alebo 6-členný heterocyklický kruh, buď alifatický alebo aromatický obsahujúci jeden alebo viac O, N alebo S, voliteľne substituovaný skupinou takou ako morfolino a
    -S-aryl, pričom aryl je 5- alebo 6- členný aromatický kruh, voliteľne substituovaný;
    a R4, Rs a R6, nezávisle, sú vybrané zo skupiny zahrnujúcej vodík
    -Ra
    -O-Ra
    -halogén
    -NRbRe
    -NO2
    -C(=O)Ra
    -CN
    -perfluórRa
    -N-C(=O)Ra
    -(CH2)„-NRbRc a
    5- alebo 6- členný heterocyklický kruh, alifatický alebo aromatický, obsahujúci jeden alebo viac O, N alebo S a voliteľne substituovaný -S-aryl alebo kde
    R4 a Rs spolu vytvárajú 5- alebo 6-členný aromatický kruh, voliteľne obsahujúci jeden alebo viac O, N alebo S v kruhu, voliteľne substituovaný.
  8. 8. Spôsob podľa nároku 7, vyznačujúci sa tým, že diaryl sulfid je vybraný zo skupiny obsahujúcej:
    3- Chlór-4-(2-chlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
    4- Nitro-2-chlórfenyl-(2',3'-dichlórfenyl)-sulfid 3-Chlór-4-(2-naftylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid 3-Chlór-4-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid 3-Chlór-4-(2,4,5-trichlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
    3- Chlór-4-(2,4-díchlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
    4- (Benzotiazol-2-ylsulfanyl)-3-chlór-fenylamín 3-Chlór-4-(l-chlór-naftalen-2ylsulfanyl)-fenylamín
    3- Metoxy-4-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín
    5- Amino-2-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)-acetofenón hydrochlorid
    4- (2,3-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín 3-Chlór-4-(l-naftylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
    3- Metyl-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid l-Acetamino-3-chlór-4-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)-benzén
    4- Metylamino-2,2',4'-trichlórdifenyl sulfid 3-Bróm-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
    3- Hydroxy-4-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
    6- Chlór-5-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-lH-benzimidazol
    4- Amino-2-chlórfenyl-(2',4'-dimetylfenyl)-sulfid hydrochlorid
    2,5-Dichlór-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid 4-Amino-2-chlórfenyl-(2'-metyl-4'-chlórfenyl)-sulfid 4-Amino-2-chlórfenyl-(2',4'-difluórfenyl)-sulfid hydrochlorid 4-Amino-2-chlórfenyl-(2',4',6'-trichlórfenyl)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-(2'-amino-4'-chlórfenyl)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-(2'-chlór-4'-nitrofenyl)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-(2'-nitro-4'-chlórfenyl)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-(3',4'-dichlórfenyl)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-2-(3-chlór-5-trifluórmetylpyridyl)-sulfid
    Bis-(4,4'-diamino-2,2'-dichlórfenyl)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-(4'-acetamido-2'-chlórfenyl)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-6-(5-nitrochinolino)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-(4'-dimetylamino-2'-chlórfenyl)-sulfid
    2-Chlór-4-amino-5-metylaminofenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
    2- Chlór-4-amino-5-N-morfolinofenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid 4-Amino-2-trifluórmetylfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid 4-Amino-2-chlórfenyl-2-(5-nitro-3-bromo)-pyridín sulfid 4-Aminometyl-2-chlórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
    4.5- Dichlór-2-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín
    3.5- Dichlór-4-(2,4-dichlórfenylsuIfanyl)-fenylamín
    2,3-Dichlór-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín
    4- Amino-2-fluórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
    5- Amino-3-chlórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
    3- Chlór-4-(l-chlór-naftalén-2-ylsulfanyl)-fenylamín l-(3-Nitro-4-fenylsulfanyl-fenyl)-etanón l-(3-Nitro-4-fenylsulfanyl-fenyl)-etanón oxím
    5-Trifluórmetyl-2-fenylsulfanyl-benzonitril
    1 -(3,5-dichlórfenyl)-3-fenylsuIfanyl-pyrolidín-2,5-dión r- e
    Bis-2,4,6-Trinitrofenyl-sulfid
    2- Metyl-l-(2-o-tolylsulfanyl-fenyl)-lH-pyrol
    3- (2-(4-chlór-2-nitro-fenylsulfanyl)-fenylamino-3H-izobenzofurán-l-ón
    4- (Benzotiazol-2-ylsulfanyl)-3-chlór-fenylamín
    2-Nitro-4-chlórfenyl-(2'-aminofenyl)-sulfid
    6-Amino-2-chlórfenyl-(4'-metylfenyl)-sulfid
    4-NitrofenyI-(2'-chlórfenyl)-sulfid
    2.4- Dinitrofenyl-(4'-chlórfenyl)-sulfid
    4-Aminofenyl-(2'-chlórfenyl)-sulfid
    2.4- Diaminofenyl-(4'-izopropylfenyl)-sulfid
    4-Nitro-2-chlórfenyl-(2',3'-dichlórfenyl)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-2-(5-nitro-3-bromo)-pyridín-sulfid
  9. 9. Spôsob liečby zápalovej poruchy, ktorá nastane kvôli väzbe LFA-1 na prirodzený ligand, ktorý súťaží s ICAM-1 alebo s ICAM-3 o väzbu na LFA-1, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie zlúčeniny, ktorá súťaží s 3-chlór-4-(l-chlór-nafatelen-2-ylsulfanyl)-fenylamínom o väzbu na LFA-1 v dostatočnom množstve na inhibovanie väzby prirodzeného ligandu na LFA-1 cicavcovi.
  10. 10. Spôsob podľa nároku 9, vyznačujúci sa tým, že zlúčenina je diaryl sulfid.
  11. 11. Spôsob podľa nároku 10, vyznačujúci sa tým, že diaryl sulfid je substituovaný.
  12. 12. Spôsob podľa nároku 10, vyznačujúci sa tým, že diaryl sulfid je zlúčenina s všeobecným štruktúrnym vzorcom (I):
    kde A a B, nezávisle, sú arylové skupiny vybrané zo skupiny obsahujúcej
    5- a 6- členné aromatické kruhy, zahrnujúce, ale nie obmedzene len na ne, fenyl, tienyl, furyl, pyrimidinyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrolyl a pyridazinyl,
    I
    Ri, R2 a R3, nezávisle, sú vybrané zo skupiny obsahujúcej vodík
    -Ra, pričom Ra je vodík alebo alkylová skupina obsahujúca nasýtený rozvetvený alebo nerozvetvený reťazec s jedným až šiestimi atómami uhlíka (Ci.ealkyl),
    -O-Ra
    -halogén, pričom halogén je Cl, F, Br alebo I,
    -NRbRc, kde Rb a Rc, nezávisle, sú H, Ci.ealkyl alebo -CH2-aryl,
    -NO2
    -C(=O)Ra
    -CN
    -perfluórRa taký ako trifluórmetyl
    -N-C(=O)Ra
    -(CH2)n-NRbRc kde n je celé číslo 1 až 6
    5- alebo 6- členný heterocyklický kruh buď alifatický alebo aromatický, obsahujúci jeden alebo viac O, N alebo S, voliteľne substituovaný, taký ako morfolino a
    -S-aryl, kde aryl je 5- alebo 6- členný aromatický kruh, voliteľne substituovaný;
    a R4, Rs a Re, nezávisle, sú vybrané zo skupiny obsahujúcej vodík
    -Ra
    -O-Ra
    -halogén
    -NRbRc '
    -NO2
    -C(=O)Ra
    -CN
    -perfluórRa
    -(CH2)n-NRbRc a
    5- alebo 6- členný heterocyklický kruh, alifatický alebo aromatický obsahujúci jeden alebo viac O, N alebo S a voliteľne substituovaný, -S-aryl alebo kde
    R4 a R5 spolu vytvárajú 5- alebo 6- členný aromatický kruh, voliteľne obsahujúci jeden alebo viac O, N alebo S v kruhu, voliteľne substituovanom.
  13. 13. Spôsob podľa nároku 12, vyznačujúci sa tým, že diaryl sulfid je vybraný zo skupiny obsahujúcej:
    3- Chlór-4-(2-chlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
    4- Nitro-2-chlórfenyl-(2',3’-dichlórfenyl)-sulfid
    3-Chlór-4-(2-naftylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
    3-Chlór-4-(2,3-dichlórfenylsuIfanyl)-fenylamín hydrochlorid
    3-Chlór-4-(2,4,5-trichlórfenylsulfanyI)-fenylamín hydrochlorid
    3- Chlór-4-(2,4-dichlórfenylsuIfanyl)-fenylamín hydrochlorid
    4- (Benzotiazol-2-ylsulfanyl)-3-chlór-fenylamín
    3-Chlór-4-(l-chlór-naftalen-2-ylsulfanyl)-fenylamín
    3- Metoxy-4-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín
    5- Amino-2-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)-acetofenón hydrochlorid
    4- (2,3-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín
    3-Chlór-4-(l-naftylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
    3- Metyl-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid l-Acetamido-3-chlór-4-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)-benzén
    4- Metylamino-2,2',4'-trichlórdifenylsulfid
    3-Bróm-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyI)-fenylamín hydrochlorid
    3- Hydroxy-4-(2,3-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
    6- Chlór-5-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-l H-benzimidazol
    4- Amino-2-chlórfenyl-(2',4'-dimetylfenyl)-sulfid hydrochlorid
    2,5-Dichlór-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín hydrochlorid
    4-Amino-2-chlórfenyl-(2',4'-difluórfenyl)-sulfid hydrochlorid
    4-Amino-2-chlórfenyl-(2',4',6'-trichlórfenyl)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-(2'-amino-4'-chlórfenyl)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-(2'-chlór-4'-nitrofenyl)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-(2'-nitro-4'-chlórfenyl)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-(3',4'-dichlórfenyl)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-2-(3-chlór-5-trifluórmetylpyridyl)-sulfid
    Bis-(4,4'-diamino-2,2'-dichlórfenyI)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-(4'-acetamido-2'-chlórfenyl)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-6-(5-nitrochinolino)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-(4'-dimetylamino-2'-chlórfenyl)-sulfid
    2-Chlór-4-amino-5-metylaminofenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
    2- Chlór-4-amino-5-N-morfolinofenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid 4-Amino-2-trifluórmetylfenyI-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid IC86405 4-Amino-2-chIórfenyl-2-(5-nitro-3-bróm)-pyridín sulfid 4-Aminometyl-2-chlórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
    4.5- Dichlór-2-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín
    3.5- Dichlór-4-(2i4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín
    2,3-Dichlór-4-(2,4-dichlórfenylsulfanyl)-fenylamín
    I
    4- Amino-2-fluórfenyl-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
    5- Amino-3-chlórfenyI-(2',4'-dichlórfenyl)-sulfid
    3- Chlór-4-(l -chlór-naftalén-2-ylsulfanyl)-fenylamín l-(3-Nitro-4-fenylsulfanyl-fenyl)-etanón l-(3-Nitro-4-fenylsulfanyl-fenyl)-etanón oxím
    5- Trifluórmetyl-2-fenylsulfanyl-benzonitril
    1- (3,5-dichlórfenyl)-3-fenylsulfanyl-pyrolidín-2,5-dión
    Bis-2,4,6-Trinitrofenyl-sulfid
    2- Metyl-l-(2-o-tolylsulfanyl-fenyl)-lH-pyrol
    3- (2-(4-Chlór-2-nitro-fenylsulfanyl)-fenylamino-3H-izobenzofuran-l-ón
    4- (Benzotiazol-2-ylsuIfanyl)-3-chlór-fenylamín
    2-Nitro-4-chlórfenyl-(2'-aminofenyl)-suIfid
    6- Amino-2-chlórfenyl-(4'-metylfenyl)-sulfid
    4-Nitrofenyl-(2'-chlórfenyl)-sulfid
    4-Aminofenyl-(2'-chlórfenyl)-sulfid
    2,4-Diaminofenyl-(4'-izopropylfenyl)-sulfid
    4-Nitro-2-chlórfenyl-(2',3'-dichlórfenyl)-sulfid
    4-Amino-2-chlórfenyl-2-(5-nitro-3-bróm)-pyridín-sulfid
  14. 14. Spôsob inhibície väzby LFA-1 na prirodzený ligand, ktorý súťaží s ICAM-1 alebo s ICAM-3 o väzbu na LFA-1, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa kontaktovanie bunky, ktorá exprimuje LFA-1 na jej povrchu so zlúčeninou, ktorá súťaží s 3-chlór-4-(l-chlór-naftalen-2-ylsulfanyl)fenylamínom o väzbu na LFA-1 v množstve, ktoré je dostatočné na inhibovanie väzbyLFA-1 na prirodzený ligand.
  15. 15. Spôsob podľa nároku 9 alebo 14, vyznačujúci sa tým, že ligand je ICAM-1 alebo ICAM-3.
  16. 16. Spôsob identifikácie negatívneho regulátora LFA-1 väzby na prirodzený ligand, ktorý súťaží s ICAM-1 alebo s ICAM-3 o väzbu na LFA-1, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa kroky:
    a) kontaktovanie LFA-1 s aktivátorom LFA-1 väzby;
    b) meranie LFA-1 väzby s prirodzeným ligandom v prítomnosti a v neprítomnosti testovanej zlúčeniny; a
    c) identifikáciu testovanej zlúčeniny ako negatívneho regulátora, pričom zníženie LFA-1 väzby na ligand je zisťované v prítomnosti testovanej zlúčeniny.
  17. 17. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa tým, že aktivátor je kryštálová violet.
SK1402-2001A 1999-04-02 2000-04-03 Inhibítory väzby LFA-1 na ICAM a ich použitie SK14022001A3 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US28532599A 1999-04-02 1999-04-02
PCT/US2000/008840 WO2000059878A2 (en) 1999-04-02 2000-04-03 INHIBITORS OF LFA-1 BINDING TO ICAMs AND USES THEREOF

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK14022001A3 true SK14022001A3 (sk) 2002-03-05

Family

ID=23093752

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1402-2001A SK14022001A3 (sk) 1999-04-02 2000-04-03 Inhibítory väzby LFA-1 na ICAM a ich použitie

Country Status (21)

Country Link
EP (1) EP1165504A2 (sk)
JP (1) JP2002541141A (sk)
KR (1) KR20020003559A (sk)
CN (2) CN1721401A (sk)
AU (2) AU774054B2 (sk)
BG (1) BG106019A (sk)
BR (1) BR0009421A (sk)
CA (1) CA2369005A1 (sk)
CZ (1) CZ20013524A3 (sk)
EA (1) EA200101017A1 (sk)
EE (1) EE200100514A (sk)
HR (1) HRP20010777A2 (sk)
HU (1) HUP0201904A3 (sk)
IL (1) IL145528A0 (sk)
IS (1) IS6096A (sk)
MX (1) MXPA01009915A (sk)
NO (1) NO20014768L (sk)
NZ (1) NZ515238A (sk)
PL (1) PL351323A1 (sk)
SK (1) SK14022001A3 (sk)
WO (1) WO2000059878A2 (sk)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6515124B2 (en) * 2000-02-09 2003-02-04 Hoffman-La Roche Inc. Dehydroamino acids
CN1705649A (zh) 2000-06-29 2005-12-07 艾伯特公司 芳基苯基杂环基硫醚衍生物及其作为抑制细胞粘附的抗炎和免疫抑制剂的用途
US7064180B2 (en) 2000-07-31 2006-06-20 The General Hospital Corporation High affinity integrin polypeptides and uses thereof
US7323552B2 (en) 2000-07-31 2008-01-29 The General Hospital Corporation Variant integrin polypeptides and uses thereof
EP1311282A4 (en) * 2000-07-31 2005-07-13 Gen Hospital Corp HIGH AFFINIT INT-GRIN POLYPEPTIDES AND USES THEREOF
US7153944B2 (en) * 2000-07-31 2006-12-26 The General Hospital Corporation High affinity integrin polypeptides and uses thereof
UA81749C2 (uk) 2001-10-04 2008-02-11 Х. Луннбек А/С Фенілпіперазинові похідні як інгібітори зворотного захоплення серотоніну
JP4617449B2 (ja) 2002-07-11 2011-01-26 ヴィキュロン ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 抗菌活性を有するｎ−ヒドロキシアミド誘導体
EP1626720B1 (en) 2003-04-04 2008-09-03 H. Lundbeck A/S 4-(2-phenylsulfanyl-phenyl)-piperidine derivatives as serotonin reuptake inhibitors
BRPI0417858B1 (pt) 2003-12-23 2017-10-10 H. Lundbeck A/S Derivative compounds of aniline and pharmaceutical composition that understand it
EP1735268B1 (en) 2004-03-15 2012-02-15 Eli Lilly And Company Opioid receptor antagonists
AR052308A1 (es) 2004-07-16 2007-03-14 Lundbeck & Co As H Derivados de 2-(1h-indolilsulfanil)-arilamina y una composicion farmaceutica que contiene al compuesto
AR054393A1 (es) 2005-06-17 2007-06-20 Lundbeck & Co As H Derivados de benzo(b)furano y benzo(b)tiofeno, composiciones farmaceuticas que los contienen y su uso en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de enfermedades mediadas por la inhibicion de la reabsorcion de neurotransmisores de amina biogenicos.
US7629473B2 (en) 2005-06-17 2009-12-08 H. Lundbeck A/S 2-(1H-indolylsulfanyl)-aryl amine derivatives
JP2007008877A (ja) * 2005-06-30 2007-01-18 Sato Pharmaceutical Co Ltd ２−ピリドン誘導体を有効成分とする医薬組成物
EP1937243A2 (en) * 2005-10-18 2008-07-02 SIGMA-TAU Industrie Farmaceutiche Riunite S.p.A. Naphthyl derivatives as inhibitors of beta-amyloid aggregation
WO2010033655A1 (en) * 2008-09-19 2010-03-25 Complegen, Inc. Compounds and methods for pkc theta inhibition
US9884046B1 (en) * 2017-06-26 2018-02-06 Macau University Of Science And Technology Method of treating lung cancer
NL2026714B1 (en) 2020-10-20 2022-06-16 Lumicks Ca Holding B V Improved detection of lymphocyte - target cell interaction

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1493728A1 (de) * 1965-07-20 1969-08-28 Lauterbach Dr Rudolf Verfahren zur Herstellung von Aminophenylthioaethern
US3576872A (en) * 1968-05-03 1971-04-27 Exxon Research Engineering Co Herbicidal s-aryl arylamides
DE2313721A1 (de) * 1973-03-20 1974-10-03 Bayer Ag Neue 1-phenylsubstituierte 1,3,5triazine, verfahren zu ihrer herstellung, sowie ihre verwendung als arzneimittel
GR73690B (sk) * 1979-01-15 1984-04-02 Celamerck Gmbh & Co Kg
US4973599A (en) * 1989-03-14 1990-11-27 Hoffman-La Roche Inc. Phenylthioheterocyclic derivatives
GB9403408D0 (en) * 1994-02-23 1994-04-13 Wellcome Found Therapeutic benzonitriles
TW530047B (en) 1994-06-08 2003-05-01 Pfizer Corticotropin releasing factor antagonists
US6110922A (en) * 1998-12-29 2000-08-29 Abbott Laboratories Cell adhesion-inhibiting antiinflammatory and immune-suppressive compounds

Also Published As

Publication number Publication date
MXPA01009915A (es) 2003-08-20
EE200100514A (et) 2002-12-16
AU4191900A (en) 2000-10-23
WO2000059878A3 (en) 2001-08-09
HUP0201904A2 (en) 2002-09-28
PL351323A1 (en) 2003-04-07
KR20020003559A (ko) 2002-01-12
NO20014768L (no) 2001-11-29
NO20014768D0 (no) 2001-10-01
CN1351588A (zh) 2002-05-29
HRP20010777A2 (en) 2002-12-31
EA200101017A1 (ru) 2002-04-25
EP1165504A2 (en) 2002-01-02
BR0009421A (pt) 2002-03-26
JP2002541141A (ja) 2002-12-03
IS6096A (is) 2001-09-28
CA2369005A1 (en) 2000-10-12
NZ515238A (en) 2005-02-25
CZ20013524A3 (cs) 2002-06-12
AU2004205210A1 (en) 2004-09-23
AU774054B2 (en) 2004-06-17
BG106019A (en) 2002-06-28
HUP0201904A3 (en) 2003-04-28
WO2000059878A2 (en) 2000-10-12
IL145528A0 (en) 2002-06-30
CN1721401A (zh) 2006-01-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SK14022001A3 (sk) Inhibítory väzby LFA-1 na ICAM a ich použitie
US5922763A (en) Biphenyl derivatives, pharmaceutical compositions containing these compounds and processes for preparing them
US5411971A (en) N-alkylenepiperidino compounds, their enantiomers and pharmaceutical compositions
JP5261176B2 (ja) 電位作動型ナトリウムチャンネル阻害剤
AU2005241073B2 (en) Adamantyl-acetamide derivatives as inhibitors of the 11-beta-hydroxysteroid dehydrogenase Type 1 enzyme
DE60013575T2 (de) Zelladhäsion inhibierende entzündungshemmende und immunsuppressive verbindungen
CZ296915B6 (cs) Slouceniny inhibující proteázy retroviru
PL204281B1 (pl) Pochodna α-(N-sulfonamido)-acetamidu jako inhibitor ß-amyloidu oraz kompozycja farmaceutyczna
JP2002504483A (ja) ヒスタミンｈ３受容体リガンド
EP0873123A1 (en) Inhibitors of protein isoprenyl transferases
NZ231165A (en) Substituted pyrimidinedione derivatives and pharmaceutical compositions
BG65177B1 (bg) Инхибиращи клетъчната адхезия противовъзпалителнии имуноподтискащи съединения, използването им, фармацевтичен състав и метод за получаването им
JP2010506918A (ja) ヒスタミンｈ３受容体に関連する障害の処置に有用なヒスタミンｈ３受容体のビフェニルスルホニルおよびフェニル−ヘテロアリールスルホニルモジュレーター
EP1771432B1 (en) Non-imidazole heterocyclic compounds as histamine h3 receptor modulators
AU709611B2 (en) Histamine h3 receptor ligands
US6166050A (en) 3,4-diamino-3-cyclobutene-1,2-dione derivatives which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
JP2000502693A (ja) ブラジキニンｂ▲下２▼レセプタ拮抗剤としての１―ベンゼンスルホニルピロリジン誘導体
US5686454A (en) Camphorcarbonyl
HU202508B (en) Process for producing new 1,4-disubstituted piperazine derivatives and pharmaceutical compositions containing them as active components
PT88543B (pt) Processo para a preparacao de compostos derivados de amidina
CS268189B2 (en) Method of quinazolinediones and pyridopyrimidinodiones production
AU666793B2 (en) Phenyl-imidazolidinone derivatives, process for their preparation and their use as 5HT3 receptor antagonists
JP2006511528A (ja) Ｎｒ２ｂレセプターアンタゴニストとしての２−ピリジル及び２−ピリミジルシクロアルキレンアミド化合物
RU2095346C1 (ru) Производные пирролидина и их фармацевтически приемлемые соли, способ их получения, фармацевтическая композиция
AU2011202889B2 (en) Adamantyl-acetamide derivatives as inhibitors of the 11-beta-hydroxysteroid dehydrogenase Type 1 enzyme