HRP20010777A2 - INHIBITORS OF LFA-1 BINDING TO ICAMs AND USES THEREOF - Google Patents

INHIBITORS OF LFA-1 BINDING TO ICAMs AND USES THEREOF Download PDF

Info

Publication number
HRP20010777A2
HRP20010777A2 HR20010777A HRP20010777A HRP20010777A2 HR P20010777 A2 HRP20010777 A2 HR P20010777A2 HR 20010777 A HR20010777 A HR 20010777A HR P20010777 A HRP20010777 A HR P20010777A HR P20010777 A2 HRP20010777 A2 HR P20010777A2
Authority
HR
Croatia
Prior art keywords
sulfide
chlorophenyl
amino
chloro
dichlorophenyl
Prior art date
Application number
HR20010777A
Other languages
English (en)
Inventor
Kerry Fowler
Mark Orme
Donald
Janet Adolphson
Original Assignee
Icos Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Icos Corp filed Critical Icos Corp
Publication of HRP20010777A2 publication Critical patent/HRP20010777A2/hr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/36—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D207/40—2,5-Pyrrolidine-diones
    • C07D207/416—2,5-Pyrrolidine-diones with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to other ring carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/01—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and halogen atoms, or nitro or nitroso groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/09—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and halogen atoms, or nitro or nitroso groups bound to the same carbon skeleton having sulfur atoms of thio groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/23—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/31—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton
    • C07C323/33—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton having at least one of the nitrogen atoms bound to a carbon atom of the same non-condensed six-membered aromatic ring
    • C07C323/35—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton having at least one of the nitrogen atoms bound to a carbon atom of the same non-condensed six-membered aromatic ring the thio group being a sulfide group
    • C07C323/37—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton having at least one of the nitrogen atoms bound to a carbon atom of the same non-condensed six-membered aromatic ring the thio group being a sulfide group the sulfur atom of the sulfide group being further bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/23—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/39—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton at least one of the nitrogen atoms being part of any of the groups, X being a hetero atom, Y being any atom
    • C07C323/40—Y being a hydrogen or a carbon atom
    • C07C323/41—Y being a hydrogen or an acyclic carbon atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D213/70—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/36—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D235/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings
    • C07D235/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D235/04—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles
    • C07D235/06—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/60—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D277/62—Benzothiazoles
    • C07D277/68—Benzothiazoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached in position 2
    • C07D277/70—Sulfur atoms
    • C07D277/74—Sulfur atoms substituted by carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/04—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms
    • C07D295/08—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly bound oxygen or sulfur atoms
    • C07D295/096—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly bound oxygen or sulfur atoms with the ring nitrogen atoms and the oxygen or sulfur atoms separated by carbocyclic rings or by carbon chains interrupted by carbocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/04—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms
    • C07D295/12—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly or doubly bound nitrogen atoms
    • C07D295/135—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly or doubly bound nitrogen atoms with the ring nitrogen atoms and the substituent nitrogen atoms separated by carbocyclic rings or by carbon chains interrupted by carbocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/77—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D307/87—Benzo [c] furans; Hydrogenated benzo [c] furans
    • C07D307/90—Benzo [c] furans; Hydrogenated benzo [c] furans with an oxygen atom in position 1 and a nitrogen atom in position 3, or vice versa

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Control Of El Displays (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Quinoline Compounds (AREA)
  • Thiazole And Isothizaole Compounds (AREA)
  • Furan Compounds (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)

Description

Područje izuma
Izum je iz područja farmakologije.
Stanje tehnike
Antigen koji je povezan s funkcijom leukocita (LFA-1, CD11a/CD18) je leukocit-specifičan β2 integrin koji sudjeluje u stanica/stanica adheziji. Vezujuća aktivnost LFA-1 je bitna za ekstravazaciju leukocita od cirkulacije do mjesta ozljede pri upalnom odgovoru. Tri glavna liganda za koje se zna da vežu LFA-1; ICAM-1, ICAM-2 i ICAM-3, su međustanične adhezijske molekule koje imaju značajnu ulogu pri lokalizaciji leukocitne adhezije za endotelne stanice na mjestu ozljede. Nađeno je da ICAM-4 i ICAM-5 vežu LFA-1. Većina leukocita konstitutivno vrši ekspresiju LFA-1, ali vezanje liganda zahtijeva aktiviranje za koje se vjeruje da izaziva konformacijske promjene i povećava avidnost vezanja liganda. Primjerice, ICAM-1 ima normalnu ekspresiju na nižim razinama endotelija, međutim ozljedom izazvani medijatori upale dovode do povećane površinske ekspresije u stanicama na mjestu ozljede što, opet, izaziva lokaliziranu adheziju leukocita putem vezanja s aktiviranim LFA-1.
U strukturi LFA-1 nalazimo odvojene unutarstanične i izvanstanične domene za koje se vjeruje da sudjeluju i/ili reguliraju ICAM vezanje. Od posebnog je interesa područje u αL lancu od približno 200 aminokiselina, označeno kao I domena, koje je nađeno je svim β2 integrinima, kao i u većini ostalih proteina. Činjenice ukazuju na to da je I domena značajna za LFA-1 vezanje za ICAM-1 i 3. Primjerice, anti-LFA-1 blokirajuća monoklonska antitijela bila su mapirana za epitope unutar I domene. Nadalje, rekombinantni polipeptidni fragmenti I domene, pokazalo se, inhibiraju adheziju koju određuje integrin i vežu ICAM-1. Unutar I domene LFA-1 (i drugih proteina) postoji adhezijsko mjesto koje ovisi o jednom ionu (MIDAS) za koje se preferentno vežu ioni mangana ili magenzija. Vezanje nekog od ovih kationa je neophodno za interakciju liganda i vjeruje se da izaziva konformacijske promjene LFA-1 koje su neophodne za vezanje. Vezanje kationa dakle može biti regulacijski mehanizam koji je odgovoran za promjene u izvanstaničnoj leukocitnoj okolini. Ovu hipotezu potkrepljuju opažanja da vezanje kalcijeva iona ustvari inhibira LFA-1 interakciju s ICAM-1. Zaista, pretpostavljeno je da je neaktivna LFA-1 konformacija rezultat vezanja kalcija, te da je zamjena kalcijeva iona s magnezijevim neophodan stupanj za LFA-1 aktiviranje [Griggs, et al.. J. Biol. Chem. 173:22113-22119 (1998)]. Pokazalo se da i ostali čimbenici izazivaju LFA-1 aktiviranje, uključujući sudjelovanje receptora T-stanica, stimuliranje citokina te in vitro PMA stimuliranje.
Konkretnim rječnikom, identificiranje LFA-1/ICAM vezujućih mjesta daje ciljeve za moduliranje leukocitnih upalnih odgovora. Izdvojena su brojna antitijela koja mogu izazvati LFA-1 aktiviranje (vidi, primjerice, Landis, et al., J. Cell Biol. 120:1519-1527 (1993)] ili, naprimjer, spriječiti ICAM-1 interakciju [vidi primjerice, Randi and Hogg, J. Biol. Chem. 169:12395-12398 (1994)]. Prethodno identificiranje anti-LFA-1 aktivirajućih antitijela koja prepoznaju višestruke i udaljene izvanstanične epitope ukazuje na postojanje više nego jednog regulacijskog područja, za koja se pretpostavlja da su neovisna o signaliziranju citoplazme. Lokaliziranje LFA-1 mjesta koja vežu ICAM-1 istraženo je uporabom kimernih LFA-1 podjediničnih proteina koji sadrže humane i mišje komponente (Huang and Springer, J. Biol. Chem. 170:19008-19016 (1995)]. Istraživanja su ukazala da su rezidue koje koordiniraju vezanjem kationa i rezidue koje su proksimalno bitne za vezanje ICAM-1 na relativno ravnom međusloju. Preciznije omeđenje izvanstaničnih regulacijskih područja i dodirnih točaka za ICAM-1 vezanje će omogućiti oblikovanje učinkovitih modulatora.
Prema tome, postoje potreba u tehnici da se točno odrede regulacijska područja za proteine koji sudjeluju u upalnim odgovorima, a posebice za LFA-1 i ICAM-e koji vežu LFA-1. Određivanje tercijarne (ili kvarterne) strukture proteina može odrediti moguća regulacijska područja što omogućuje racionalno oblikovanje biološki sukladnih malenih molekula za terapeutsku i profilaktičku intervenciju za upalne bolesti. Također postoji potreba u tehnici da se odrede spojevi koji mogu inhibirati LFA-1 vezanje za ICAM-e koji se mogu koristiti pri tretiranju upalnih bolesti.
Sažetak izuma
Ovaj izum odnosi se na spojeve koji se vežu za nova regulacijska mjesta u I domeni LFA-1, pa time inhibiraju vezanje LFA-1 za ICAM-e koji vežu LFA-1. Ovaj izum prema tome daje metode za reguliranje adhezije leukocita za endotelne stanice. Spojevi ovog izuma korisni su za tretiranje patoloških stanja, kao što su ona povezana s upalnim bolestima, autoimunim bolestima, tumorskim metastazama, odbacivanjem transplantata i oštećenjem reperfuzije. Konkretno, ovaj izum se odnosi na diaril sulfide opće formule (I), njihove farmaceutski prihvatljive soli ili prolijekove, te na uporabu diaril sulfida, posebice spojeva formule (I), u inhibiranju vezanja LFA-1 za ICAM koji veže LFA-1.
[image]
gdje su A i B, neovisno, arilne skiupine odabrane iz skupa kojega sačinjavaju 5- i 6-člani aormatski prsteni, uključujući i ne ograničavajući se samo na njih – fenil, tienil, furil, pirimidinil, imidazolil, pirazolil, piridil, pirazinil, pirolil i piridazinil;
R1, R2 i R3 su neovisno odabrani iz skupa kojega sačinjavaju vodik,
-Ra, gdje je Ra vodik ili alkilna skupina koja sadrži od jedan od šest lančastih ili razgranatih ugljikovih atoma (C1-6 alkil),
-halogen, gdje je halogen Cl, F, Br ili I,
-NRbRc, gdje su Rb i Rc neovisno H, C1-6 alkil ili –CH2-aril,
-NO2,
-C(=O)Ra,
-CN,
-perfluorRa, kao trifluormetil,
-N-C(=O)Ra,
-(CH2)n-NRbRc, gdje je n cijeli broj od 1 do 6,
5- ili 6-člani heterociklički prsten, bilo alifatski ili aromatski, koji sadrži jedan ili više O, N ili S, proizvoljno supstituiranih, kao što su morfolino, i –S-aril, gdje je aril 5- ili 6-člani aromatski prsten, proizvoljno supstituiran;
a R4, R5 i R6, neovisno, odabrani su iz skupa kojega sačinjavaju
vodik,
-Ra,
-O-Ra,
-halo,
-NRbRc,
-NO2,
-C(=O)Ra,
-CN,
-perfluorRa,
-N-C(=O)Ra,
-(CH2)n-NRbRc, i
- 5- ili 6-člani heterociklički prsten, alifatski ili aromatski, koji sadrži jedan ili više O, N ili S, proizvoljno supstituiran,
-S-aril, ili gdje
R4 i R5 su uzeti zajedno da sačinjavaju 5- ili 6-člani aromatski prsten, koji proizvoljno sadrži jedan ili više O, N ili S u prstenu, proizvoljno supstituiran.
Primjeri novih negativnih regulatora vezanja LFA-1 za ICAM-e uključuju, ali nisu ograničeni na spojeve koji su prikazani u tablici I.
Tablica I
Primjeri negativnih regulatora
3-Klor-4-(2-klorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid
4-Nitro-2-klorfenil-(2',3'-diklorfenil)-sulfid
3-Klor-4-(2-naftilsulfanil)-fenilamin hidroklorid
3-Klor-4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid
3-Klor-4-(2,4,5-triklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid
3-Klor-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid
4-(Benzotiazol-2-ilsulfanil)-3-klor-fenilam~ne
3-Klor-4-(1-klor-naftalen-2-ilsulfanil)-fenilamin
3-Metoksi-4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-fenilamin
5-Amino-2-(2,3-diklorfenilsulfanil)-acetophenone hidroklorid
4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-fenilamin
3-Klor-4-(1-naftilsulfanil)-fenilamin hidroklorid
3-Metil-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid
1-Acetamido-3-klor-4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-benzen
4-Metilamino-2,2',4'-triklordifenilsulfid
3-Brom-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid
3-Hidroksi-4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid
6-Klor-5-(2,4-diklorfenilsulfanil)-1 H-benzimidazol
4-Amino-2-klorfenil-(2'4'-dimetilfenil)-sulfid hidroklorid
2,5-Diklor-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid
4-Amino-2-klorfenil-(2'-metil-4'-klorfenil)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-(2',4'-difluorfenil)-sulfid hidroklorid
4-Amino-2-klorfenil-(2',4',6'-triklorfenil)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-(2'-amino-4'-klorfenil)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-(2'-klor-4'-nitrofenil)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-(2'-nitro-4'-klorfenil)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-(3',4'-diklorfenil)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-2-(3-klor-5-trifluormetilpiridil)-sulfid
Bis-(4,4'-diamino-2,2'-diklorfenil)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-(4'-acetamido-2'-klorfenil)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-6-(5-nitrokinolino)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-(4'-dimetilamino-2'-klorfenil)-sulfid
2-Klor-4-amino-S-metilaminofenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid
2-Klor-4-amino-5-N-morfolinofenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid
4-Amino-2-trifluormetilfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-2-(5-nitro-3-brom)-pyridine sulfid
4-Aminometil-2-klorfenil-(2', 4'-diklorfenil)-sulfid
4,5-Diklor-2-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin
3,5-Diklor-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin
2,3-Diklor-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin
4-Amino-2-fluorfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid
5-Amino-3-klorfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid
3-Klor-4-( 1-klor-nafthalen-2-ilsulfanil)-fenilamin
1-(3-Nitro-4-fenilsulfanil-fenil)-etanon
1-(3-Nitro-4-fenilsulfanil-fenil)-etanon oksim
5-Trifluormetil-2-fenilsulfanil-benzonitril
1-(3,5-diklorfenil)-3-fenilsulfanil-pirolidin-2,5-dion
Bis-2,4,6-Trinitrofenil-sulfid
2-Metil-1-(2-o-tolilsulfanil-fenil)-1H pirol
3-[2-(4-Klor-2-nitro-fenilsulfanil)-fenilamino-3H isobenzofuran-1-one
4-(Benzotiazol-2-ilsulfanil)-3-klor-fenilamin
2-Nitro-4-klorfenil-(2'aminofenil)-sulfid
6-Amino-2-klorfenil-(4'-metilfenil)-sulfid
4-Nitrofenil-(2'-klorfenil)-sulfid
2, 4-Dinitrofenil-(4'-klorfenil)-sulfid
4-Aminofenil-(2'-klorfenil)-sulfid 2,
4-Diaminofenil-(4'-izopropilfenil)-sulfid
4-Nitro-2-klorfenil-(2',3'-diklorfenil)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-2-(5-nitro-3-brom)-piridin-sulfid
Spojevi kojima odgovara strukturna formula (I) mogu se prirediti sintetskim metodama ili metaboličkim procesima. Priređivanje spojeva metaboličkim procesima uključuje in vivo i in vitro procese. Podrazumijevaju se i farmaceutske smjese koje sadrže spojeve ovog izuma.
Izumom su definirane metode inhibiranja LFA-1 vezanja za ICAM-e koji vežu LFA-1, koje uključuju kontakt LFA-1 s diaril sulfidom, te poželjno spojem formule 1. Slično, izumom su definirane metode za inhibiranje adhezije leukocita za endotelne stanice koje uključuju stupanj kontakta leukocita s ekspresijom LFA-1 s diaril sulfidom, te poželjno spojem strukturne formule (I). Izum također obuhvaća metode za tretiranje upalnih bolesti koje uključuju stupnjeve primjene sisavcu određene količine farmaceutske smjese ovog izuma koja je dovoljna za inhibiranje vezanja LFA-1 za svoje prirodne ligande koji kompetiraju s ICAM-1 ili ICAM-3 za vezanje s LFA-1. Izumom su također obuhvaćene metode za tretiranje upalnih bolesti koje nastaju nakon LFA-1 vezanja za svoje prirodne ligande koji kompetiraju s ICAM-1 ili ICAM-3 vezanjem za LFA-l, koje uključuju primjenu sisavcu kojemu je to potrebno spoja koji kompetira s 3-klor-4-(1-klornaftalen-2-ilsulfanil)-fenilaminom za vezanje na LFA-1 u količini koja je dovoljna da se inhibira vezanje za prirodne ligande LFA-1. Nadalje, izumom su definirane metode za poboljšanje patoloških stanja koja su povezana s LFA-1 vezanjem za ICAM koji veže LFA-1, koje uključuju primjenu osobi kojoj je to potrebno učinkovite količine diaril sulfida, te poželjno spoja strukturen formule (I) za inhibiranje LFA-1 vezanja za ICAM.
Primjeri inhibitora ovog izuma uključuju, ali nisu ograničeni na spojeve koji su navedeni u tablici I.
Izumom je također obuhvaćena primjena spoja ovog izuma pri proizvodnji medikamenta za tretiranje patoloških stanja koja su povezana s LFA-1 koji se veže za ICAM-1.
Ovim izumom su također obuhvaćene metode za identificiranje negativnog regulatora LFA-1 koji se veže za svoje prirodne ligande koji kompetiraju s ICAM-1 ili ICAM-3 za vezanje s LFA-1, što uključuje sljedeće stupnjeve:
a) dovođenje u međusobni kontakt LFA-1 s aktivatorom vezanja LFA-1;
b) mjerenje LFA-1 vezanja s prirodnim ligandom u prisutnosti i odsutnosti ispitivanog spoja; i
c) identificiranje spoja koji se ispituje kao inhibitora kada se smanjeno LFA-1 vezanje za ligand uočava u prisutnosti ispitivanog spoja. U jednom aspektu, aktivator je kristalno ljubičasto (crystal violet).
Realizacija izuma s primjerima izvođenja
Vrijednost IC50 spoja definira se kao ona koncentracija spoja koje je potrebna da se postigne 50% inhibiranje biološke aktivnosti koja je od interesa. Kako se ovdje rabi, negativni regulator je spoj koji je karakteriziran s IC50 vrijednošću za inhibiranje LFA-1 vezanja za prirodni ligand. Negativni regulatori LFA-1 definirani su kao oni koji imaju IC50 vrijednost manju od oko 200 µM, manju od oko 100 µM, manju od oko 50 µM, te poželjno od oko 0,05 µM do oko 40 µM.
Pojam “farmaceutski prihvatljivi nosač” kako se ovdje rabi odnosi se na one prolijekove spojeva ovog izuma koji su pogodni za uporabu u kontaktu s životnjama primateljima i za koje su nepoželjna toksičnost, nadražaj i alergijski odgovor u razumnom odnosu boljitak/rizik, te koji su učinkoviti za predviđenu uporabu.
Pojam “prolijek” kako se ovdje rabi, odnosi se na spojeve koji podliježu brzoj transformaciji in vivo matičnog spoja gore navedene formule, primjerice hidrolizom. Iscrpna diskusija može se naći u Higuchi, et al., Prodrugs as Novel Delivery Systems, vol. 14 A.C.S.D. Symposium Series, te u Roche (ed), Bioreversible Carriers in Drug Design, American Phannaceutical Association i Pergamon Press, 1987, a oboje je ovdje uključeno kao referenca. Oblikovanje prolijeka općenito je razmotreno u Hardma, et al., (Eds), Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, Ninth Edition, New York, New York (1996), pp. 11-16. Ukratko, nakon primjene lijeka slijedi uklanjanje iz tijela ili neka biološka transformacija, čime se biološka aktivnost lijeka smanjuje ili uklanja. Alternativno, proces biološke transformacije može rezultirati metaboličkim sporednim produktima koji su sami metabolički aktivniji ili jednako aktivni kao i lijek koji je početno primijenjen. Bolje razumijevanje ovih bioloških promjena omogućuje oblikovanje tzv. “prolijekova” koji, nakon biološke transformacije, postaju biološki aktivni na nekom drugom mjestu. Prolijekovi su prema tome farmakološki neaktivni spojevi koji su prevedeni u biološki aktivne metabolite. U nekim oblicima, prolijekovi ostaju biološki aktivni tijelom hidrolize, primjerice, esterske ili amidne veze, pri čemu se često uvodi ili izlaže funkcionalna skupina na prolijeku. Tako promijenjeni lijek može također reagirati s endogenim spojem tako da nastane u vodi topljivi konjugat koji dodatno povećava farmakološka svojstva spoja, primjerice kao rezultat povećanog poluživota u krvotoku.
Kao druga mogućnost, prolijekovi mogu biti tako oblikovani da podliježu kovalentnoj promjeni na funkcionalnoj skupini s, primjerice, glukuronskom kisleinom, sulfatom, glutationom, aminokiselinama ili acetatom. Nastali konjugat može biti deaktiviran i izlučen u žuč, podvrgnut enzimskom cijepanju ili ostati jači od svog matičnog spoja. Visokomolekularni konjugati mogu također biti izlučeni u žuč, podvrgnuti enzimskom cijepanju i vraćeni natrag u optok, čime se djelotvorno povećava biološki vrijeme poluživota izvorno primijenjenog spoja.
Spojevi ovog izuma mogu postojati kao stereoizomeri s asimetričnim ili kiralnim centrima. Stereoizomeri su označeni bilo “S” ili “R”, ovisno o rasporedu supstituenata oko kiralnog ugljikova atoma. Ovim izumom obuhvaćene su smjese stereoizomera. Stereoizomeri uključuju enantiomere, diastereomere i njihove smjese. Pojedinačni stereoizomeri spojeva ovog izuma mogu se prirediti sintetski oz komercijalno raspoloživih tvari koje imaju asimetrične ili kiralne centre ili priređivanjem racemičkih smjesa, nakon čega slijede tehnike odvajanja ili razlučivanja, koje su poznate u tehnici. Metode razlučivanja su (1) dodavanje smjese enantiomera za kiralnu pkmoćnu tvar, odvajanje dobivene smjese pomoćšu rekristaliziranja ili kromatografije, te oslobađanje optički čistog produkta od pomoćne tvari; (2) nastajanje soli korištenjem optički aktivnog sredstva za razlučivanje, i (3) izravno odvajanje smjese optičkih enantiomera na kiralnim kromatografskim kolonama.
Spojevi ovog izuma uključuju, ali nisu ograničeni na one koji su obuhvaćeni općom formulom (I) i spojeve koji su navedeni u tablici I.
Izumom se također dobivaju farmaceutske smjese koje sadrže jedan ili više spojeva ovog izuma, koje također sadrže i farmaceutski prihvatljiv nosač ili razrjeđivač.
Izumom su također obuhvaćene metode inhibiranja LFA-1 vezanja za ICAM koji veže LFA-1 što uključuje stupanj dovođenja u dodir LFA-1, ili ICAM-vezujući fragment, s negativnim regulatorskim spojem; pri čemu negativni regulator veže LFA-1 αL polipeptid ili njegov fragment, na mjestu koje je odabrano iz skupa kojega sačinjava konformacija koja veže diaril sulfid ili vezujuće mjesto koje je definirano s Ile259, Leu298, Ile235, Val157, Leu161 i Ile306 humanog LFA-1 αL polipeptida i LFA-1 domene koja veže 3-klor-4-(1-klor-naftalen-2-ilsulfanil)-fenilamin koja ima strukturu koja je prije opisana. Alternativno, vezujuće mjesto negativnog regulatora na LFA-1 definirano je aminokiselinskim reziduama Ile259, Leu298, Ile235, Val157, Leu161, Ile306, Leu302,Tyr257, Leu132, Val233, Val130 i Tyr166. U sljedećoj alternativi, vezujuće mjesto negativnog regulatora na LFA-1 definirano je aminokiselinskim reziduama Lys287, Leu298, Ile259, Leu302, Ile235, Val157, Tyr257, Lys305, Leu161, Leu132, Val233, Ile255, Val130, Tyr166, Ile306, Phe134, Phe168, Phe153, Tyr307, Val308, Ile309, Thr231, Glu284, Phe285, Glu301, Met154, Ile237, Ile150 i Leu295. Vezujuće mjesto LFA-1 regulatora opisano je u pratećoj američkoj patentnoj prijavi koja je naslovljena "Vezujuće mjesto LFA-1 regulatora i njegovo korištenje”, podnesenoj 2. travnja 1999. br. 27866/35375, serijski broj 09/285,477, koja je ovdje u cijelosti uključena kao referenca. U jednoj realizaciji, metode ovog izuma obuhvaćaju korištenje stanica koje vrše ekspresiju bilo LFA-1 ili ICAM.
U metodama gdje se vrši ekspresija u stanici jednog od vezujućih partnera, drugi vezujući partner je bilo pročišćen ili izdvojen, u tekućem uzorku (pročišćen, djelomično pročišćen ili sirov) koji je uzet od neke osobe ili u staničnom lizatu. Izumom su također obuhvaćene metode gdje se vrši ekspresija u stanici i LFA-1 i ICAM. Ekspresija LFA-1 i ICAM vezujućih partnera može biti na istom staničnom tipu ili na različitim tipovima stanica. Poželjno, ekspresija LFA-1 polipeptida je na leukocitima, tj. limfocitima, monocitima ili granulocitima, dok je ekspresija ICAM polipeptida na endotelnim stanicama.
Izumom su također definirane metode za inhibiranje adhezije leukocita za endotelne stanice, koje uključuju stupanj dovođenja u dodir navedenih leukocita s negativnim regulatorom LFA-1 vezanja za ICAM koji veže LFA-1, pri čemu je negativan regulator vezanja nekog LFA-1 regulacijskog mjesta odabran iz skupine koju sačinjava konformacija koja veže diaril sulfid ili vezujuće mjesto koje je definirano s Ile259, Leu298, Ile235, Val157, Leu161 i Ile306 humanog LFA-1 αL polipeptida ili LFA-1 domene koja veže 3-klor-4-(1-klor-naftalen-2-ilsulfanil)-fenilamin. Alternativno, vezujuća konformacija diaril sulfida definirana je aminokiselinskim reziduama kao što je prije opisano. Podrazumijevaju se in vivo i in vitro metode.
Ovim izumom su također definirane metode za poboljšanje patološkog stanja koje je posljedica LFA-1 vezanja za ICAM, koje obuhvaćaju primjenu osobi kojoj je potrebno negativnog regulatora LFA-1 vezanja za ICAM u količini koja je učinkovita za inhibiranje LFA-1 vezanja za ICAM, pri čemu je negativan regulator vezanja za LFA-1 regulacijsko mjesto odabran iz skupa kojega sačinjava konformacija koja veže diaril sulfid ili mjesto koje je definirano s Ile259, Leu298, Ilei235, Val157, Leu161 i Ile306 humanog LFA-1 ili humane LFA-1 domene koji vežu spoj 3-klor-4-(1-klor-naftalen-ilsulfanil)-fenilamin.
U poželjnoj realizaciji, metode ovog izuma uključuju uporabu diarilnog sulfidnog spoja za inhibiranje vezanja LFA-1 za ICAM. Poželjne metode uključuju uporabu spoja opće formule (I), njegove farmaceutski prihvatljive soli ili njegova prolijeka, kao što je prije opisano.
Terapeutske metode
U opsegu u kojem je adhezija leukocita za endotelne stanice povezanom s patološkim stanjem, izumom su definirane metode za poboljšanje patološkog stanja koje je povezano s akumuliranjem leukocita zbog LFA-1 vezanja za neki ICAM koji veže LFA-1 koje uključuju stupanj primjene osobi kojoj je to potrebno određene količine inhibitora LFA-1 vezanja za ICAM koja je učinkovita glede inhibiranja LFA-1 vezanja za ICAM, pri čemu se navedeni inhibitor veže za LFA-1 na mjestu na kojem se nalaze aminokiselinske rezidue Ile259, Leu298, Ile235, Val157, Leu161 i Ile306. Primjeri takvih medicinskih stanja uključuju, bez ograničenja, upalne bolesti, autoimune bolesti, reperefuzijske ozljede, infarkt miokarda, udar, hemoragični šok, presađivanje organa, i slično. Metode ovog izuma omogućuju poboljšanje cijelog niza patoloških stanja, uključujući primjerice (bez ograničenja) respiratorni stres sindrom, sindrom višestruke ozljede organa sekundarno do septikemije, sindrom višestruke ozljede organa sekundarno do traume; reperfuzijska ozljeda tkiva, akutni glomeluronefritis, reaktivni artritis, dermatoza s akutnim upalnim komponentama, moždani udar, toplinska ozljeda, Crohn-ova bolest; nekrotizirajući enterokolitis, sindrom povezan s granulocitnom transfuzijom, citokinom izazvana toksičnost, te bolesti koje su upravljane T-stanicama.
Upalno stanično aktiviranje te suvišni ili neregulirani citokini (npr. TNFα i IL-1β) također su obuhvaćeni bolestima kao što je reumatoidni artritis, osteoartritis, giht artritis, spondilitis, oftalmopatija povezana sa štitnom žlijezdom, Behcet-ova bolest, sepsa, septički šok, ednotoksični šok, gram negativna sepsa, gram pozitivna sepsa, sindrom toksičnog šoka, astma, kronični bronhitis, alergijski respiratorni distres sindrom, kronična plućna upalna bolest kao što je kronična ostruktivna plućna bolest, silikoza, plućna sarkoidoza, reperfuzijska ozljeda mikarda, mozda i ekstremiteta, fibroza, cistična fibroza, keloidno formiranje, nastajanje ožiljaka, ateroskleroza, bolesti odbacivanja transplantata, kronični glomerulonefritis, lupus, upalna trbušna bolest kao što je ulcerativni kolitis, proliferativna limfocitna bolest kao što je leukemija, te upalne dermatoze, kao što su atopički dermatitis, psorijaza, urtikarija, uveitis.
Ostala stanja koja su karakterizirana povišenom razinom citokina uključuju ozljedu mozga zbog umjerene traume (vidi J. Neurotrauma, 12, pp. 1035-1043 (1995); J. Clin. Invest., 91, pp. 1421-1428 (1993)), kardiomiopatije, kao što je kongestivan srčani ispad (vidi Circulation, 97, pp. 1340-1341 (1998)), kaheksija, kaheksija sekundarno do infekcije ili malignosti, kaheksija sekundarno do sindroma imune deficijencije (AIDS), ARC (kompleks povezan s AIDS-om), mialgije groznice zbog infekcije, moždana malarija, osteoporoza i bolesti koštane resorpcije, keloidno formiranje, nastajanje ožiljnog tkiva i pireksija.
Sposobnost negativnih regulatora ovog izuma za tretiranje artritisa može se demonstrirati modelom mišjeg kolagenom izazvanog artritisa [Kakimoto, et al. Immunol. 142:326-337 (1992)], modelom štakorova kolagenom izazvanog artritisa [Knoerzer, et al., Toxical Pathol. 25:13-19 (1997)], modelom štakorova adjuvantnog artritisa [Halloran, et al., Arthritis Rheum 39:810-819 (1996)], modelom štakorova stijekom streptokokne stanice izazvanog artritisa [Schimmer, et al., J. Immunol. 160:1466-1477 (1998)], ili modelom SCID-mišjeg humanog reumatoidnog artritisa [Oppenheimer-Marks, et al., J. Clin. Invest 101:1261-1272 (1998)].
Sposobnost negativnih regulatora za tretiranje Lyme artritisa može se demonstrirati sukladno metodi Gross, et al., Science, 218:703-706, (1998). Sposobnost negativnih regulatora za tretiranje astme može se demonstrirati modelom mišje alergijske astme sukladno metodi Wegner, et al., Science, 247:456-459, (1990), ili modelom mišje nealergijske astme sukladno metodi Bloemen, et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med. 153:521529 (1996).
Sposobnost negativnih regulatora za tretiranje upalne ozljede pluća može se demonstrirati modelom kisikom-izazvane mišje ozljede pluća sukladno metodi Wegner, et al., Lung, 170:267-279, (1992), modelom imunim kompleksom izazvane mišje ozljede pluća sukladno metodi Mulligan, et al., J. Immunol., 154:1350-1363, (1995), ili modelom kiselinom izazvane mišje ozljede pluća sukladno metodi Nagase, et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med., 154:504-510, (1996).
Sposobnost negativnih regulatora za tretiranje upalnog gihta može se demonstrirati modelom mišjeg kemijski izazvanog kolitisa sukladno metodi Bennett, et al., J. Pharmacol. Exp. Ther.,180:988-1000, (1997).
Sposobnost negativnih regulatora za tretiranje autoimunog dijabetesa može se demonstrirati modelom NOD miša sukladno metodi Hasagawa, et al., Int. Immunol. 6:831-838 (1994), ili modelom mišjeg streptomicin-izazvanog dijabetesa sukladno metodi Herrold, et al., Cell Immunol. 157:489-500, (1994).
Sposobnost negativnih regulatora za tretiranje upalne ozljede jetre može se demonstrirati modelom ozljede mišje jetre sukladno metodi Tanaka, et al., J. Immunol., 15I:5088-5095, (1993).
Sposobnost negativnih regulatora za tretiranje upalne glomerularne ozljede može se demonstrirati modelom nefritisa štakorova nefrotoksična seruma sukladno metodi Kawasaki, et al., J. Immunol., 150:1074-1083 (1993).
Sposobnost negativnih regulatora za tretiranje radijacijski-izazvanog enteritisa može se demonstrirati modelom štakorova abdominalnog ozračenja sukladno metodi Panes, et al., Gastroerrterology, 108:1761-1769 (1995).
Sposobnost negativnih regulatora za tretiranje radijacijskog preumonitisa može se demonstrirati modelom mišjeg plućnog ozračenja sukladno metodi Hallahan, et al., Proc. Natl. Acad. Sci (USA), 94:6432-6437 (1997).
Sposobnost negativnih regulatora za tretiranje reperfuzijske ozljede može se demonstrirati u izoliranog srca sukladno metodi Tamiya, et al., Immunopharmacology, 29:53-63 (1995), ili u anesteziranog psa sukladno modelu Hartman, et al., Cardiovasc. Res. 30:47-54 (1995).
Sposobnost negativnih regulatora za tretiranje plućne reperfuzijske ozljede može se demonstrirati modelom reperfuzijske ozljede pluća štakora sukladno metodi deMeester, et al., Transplantation, 62:1477-1485 (1996), ili modelom plućnog edema kunića sukladno metodi Horgan, et al., Am. J. Physiol. 261:H1578-H1584 (1991).
Sposobnost negativnih regulatora za tretiranje može se demonstrirati modelom moždanog embolijskog udara kunića sukladno metodi Bowes, et al., Exp. Neurol., 119:215-219 (1993), modelom ishemije/reperfuzije srednje moždane arterije štakora metodom Chopp, et al., Stroke, 2.5:869875 (1994), ili modelom povratne ishemije kralježnice kunića sukladno metodi Clark et al., Neurosurg., 75:623-627 (1991). Sposobnost negativnih regulatora za tretiranje moždanog spazma krvnih žila može se demonstrirati modelom eksperimentalnog vazospazma štakora sukladno metodi Oshiro, et al., Stroke, 18:2031-2038 (1997).
Sposobnost negativnih regulatora za tretiranje periferne arterijske okluzije može se demonstrirati modelom ishemije/reperfuzije štakorova skeletna mišića sukladno metodi Gute, et al., Mol. Cell Biochem., 179:169-187 (1998).
Sposobnost negativnih regulatora za tretiranje odbacivanja organa može se demonstrirati modelom odbacivanja mišjeg srca sukladno metodi Isobe, et al., Science,155:1125-1127 (1992), modelom bubrežne kapsule mišje štitine žlijezde sukladno metodi Talento, et al., Transplantation, 55:418-422 (1993), modelom prihvaćanja bubrega cinomolškog majmuma sukladno metodi Cosimi, et al., J. Immunol., 144:4604-4612 (1990), modelom prihvaćanja živa štakora sukladno metodi Nakao, et al., Muscle Nerve, 18:93-102 (1995), modelom prihvaćanja mišje kože sukladno metodi Gorczynski and Wojcik, J. Immunol. 152:2011-2019, (1994), modelom prihvaćanja mišje rožnice sukladno metodi He, et al., Ophtalmol. Vis. Sci., 35:3218-3225 (1994), ili modelom ksenogenskog presađivanja stanice gušterače sukladno metodi Zeng, et al., Transplantation, 58:681-689 (1994).
Sposobnost negativnih regulatora za tretiranje bolesti odbacivanja organa (GVHD) može se demonstrirati modelom mišjeg letalnog GVHD sukladno metodi Harning, et al., Transplantation, 52:842-845 (1991).
Sposobnost negativnih regulatora za tretiranje može se demonstrirati modelom metastaze humanog limfoma (u miševa) sukladno modelu Aoudjit, et al., J. Immunol., 161:2333-2338, (1998).
Farmaceutske smjese
Ovim izumom također su definirane farmaceutske smjese koje sadrže diaril sulfid formuliran zajedno s jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača.
Farmaceutske smjese ovog izuma mogu se primijeniti ljudima ili životinjama bilo kojim pogodnim putem. Primjerice, smjese se mogu primijeniti oralno, rektalno, parenteralno, intracisterno, intravaginalno, intraperitonealno, lokalno (kao prašci, pomade ili kapi), bukalno ili nazalno. Pojam “parenteralna” primjena kako se ovdje rabi označuje načine primjene koji uključuju intravensku, intramuskularnu, intraperitonealnu, intrasternalnu, intratekalnu, supkutanu ili intraartikularnu injekciju i infuziju.
Farmaceutske smjese ovog izuma za parenteralnu injekciju obuhvaćaju farmaceutski prihvatljive sterilne vodene ili nevodene otopine, disperzije, suspenzije ili emulzije kao i sterilne praške za rekonstituiranje s sterilne otopine ili disperzije za injiciranje neposredno prije uporabe. Primjeri pogodnih vodenih ili nevodenih nosača, razrjeđivala, otapala ili posrednika uključuju vodu, etanol, polioli (kao što su glicerol, propilenglikol, polietilenglikol i slično), te njihove odgovarajuće smjese, biljna ulja (kao što je maslinovo ulje) te injicirajući organski esteri kao što je etil oleat. Odgovarajuća protočnost može se održati, primjerice, uporabom materijala za prevlake kao što je lecitin, zadržavanjem odgovarajuće veličine čestica u slučaju disperzija, te uporabom površinski aktivnih tvari.
Ove smjese mogu također sadržavati adjuvante kao što su konzervansi, sredstva za vlaženje, sredstva za emulgiranje i raspršivanje. Sprječavanje djelovanja mikroorganizama može se provesti uključivanjem različitih antibakterijskih i antigljivičnih sredstava, primjerice parabena, klorbutanola, fenol sorbične kiseline i slično. Također može biti poželjno da se uključe izotonična sredstva kao što su, primjerice, šećeri, natrijev klorid i slična. Produžena apsorpcija injicirajućeg farmaceutskog oblika može se postići uključivanjem sredstva koje odgađa apsorpciju kao što je aluminijev monostearat i želatina.
U nekim slučajevima, da bi se produžio učinak lijeka, poželjno je usporiti apsorpciju lijeka nakon supkutane ili intramuskularne injekcije. To se može provesti uporabom tekuće suspenzije kristalnog ili amorfnog materijala koji je slabo topljiv u vodi. Brzina apsorpcije lijeka onda ovisi o brzini njegova otapanja koje opet može ovisiti o veličini kristala i kristalnom obliku. Alternativno, odgođena asporpcija lijeka koji je parenteralno primijenjen može se realizirati otapanjem ili raspršenjem lijeka u uljnom nosaču.
Injicirajući depo oblici izrađuju se oblikovanjem mikroenkapsuliranih matrica lijeka u biološki razgradivim polimerima kao što su polilaktid-poliglikolid. Ovisno o odnosu lijeka prema polimeru i prirodi konkretnog polimera koji se rabi, može se kontrolirsti brzina otpuštanja lijeka. Primjeri drugih biološki razgradivih polimera uključuju poli(ortoestere) i poli(anhidride). Depo injicirajuće formulacije mogu se također prirediti stavljanjem lijeka u liposome ili mikroemulzije koje su sukladne s tjelesnim tkivom.
Formulacije za injiciranje mogu se primjerice sterilizirati filtriranjem kroz bakterijski filter ili filter koji zadržava viruse, ili ugrađivanjem sredstava za sterilizaciju u obliku sterilnih čvrstih smjesa koje se mogu otopiti ili raspršiti u sterilnoj vodi ili drugom sterilnom mediju za injiciranje neposredno prije uporabe.
Čvrsti dozirajući oblici za oralnu primjenu uključuju kapsule, tablete, pilule, praške i granule. U takvih čvrstim dozirajućim oblicima, aktivan spoj se miješa s bar jednim inertnim, farmaceutski prihvatljivim ekscipijentom ili nosačem kao što je natrijev citrat i dikalcijev fosfat i/ili punila kao što su škrob, laktoza, saharoza, glukoza, manitol i silicijeva kiselina, (b) veziva kao što su, primjerice, karboksimetilceluloza, gume (npr. alginati, akacija), želatine, polivinilpirolidon i saharoza, (c) vlažila kao što su glicerol, (d) sredstva za razgradnju kao što su agar-agar, kalcijev karbonat, krumpirov ili tapioka škrob, alginska kiselina, neki silikati i natrijev karbonat, (e) sredstva koja zadržavaju tekuće stanje kao što je parafin, (f) ubrzivači apsorbiranja kao što su kvarterni amonijevi spojevi, (g) sredstva za vlaženje kao što su primjerice cetilni alkohol i glicerol monostearat, (h) apsorbensi kao što su kaolin i bentonitna glina, te (i) lubrikanti kao što su talk, kalcijev stearat, magnezijev stearat, čvrsti polietilen glikoli, natrijev lauril sulfat i njihove smjese. U slučaju kapsula, tableta i pilula, dozirajući oblik može također sadržavati sredstva za puferiranje.
Čvrste smjese sličnog tipa mogu se također upotrebljavati kao punila u mekim ili tvrdim kapsulama korištenjem takvih ekscipijenata kao laktoza ili mliječni šećer, kao i visokomolekularnih polietileglikola i slično.
Čvrsti oblici za doziranje kao što su tablete, dražeje, kapsule, pilule i granule mogu se prirediti s prevlakama kao što su enteričke prevlake ili druge prevlake koje su dobro poznate u tehnici farmaceutskog formuliranja. Oni mogu proizvoljno sadržavati sredstva koja daju neprozirnost i mogu također biti takvog sastava koji otpušta aktivne sastojke isključivo ili djelomično u crijevnom traktu, proizvoljno na odgođeni način. Primjerni materijali uključuju polimere koji su topljivosti koja ovisi o pH, kakvi se javljaju pod imenom Eudragit®. Primjeri ugrađenih smjesa koje se mogu koristiti su polimerne tvari i voskovi.
Aktivni spojevi mogu također biti u mikroenkapsuliranom obliku ako je to odgovarajuće, s jednim ili više prije navedenih ekscipijenata.
Tekući dozirajući oblici za oralnu primjenu uključuju farmaceutski prihvatljive emulzije, otopine, suspenzije, sirupe i eliksire. Uz aktivne spojeve, tekući dozirajući oblici mogu sadržavati inertna razrjeđivala koja su poznata u tehnici, kao što su primjerice voda i druga otapala, sredstva za otapanje i emulgiranje kao što su etilni alkohol, etil acetat, etil karbonat, benzilni alkohol, benzil benzoat, propilenglikol, 1,3-butilenglikol, dimetilformamid, ulja (konkretno ulje orašca, kukuruzno, ulje klica, maslinovo ulje, dabrovo i sezamovo ulje), glicerol, tetrahidrofurfurilni alkohol, polietilenglikolni i esteri masnih kiselina sorbitana, te njihove smjese.
Uz inertna razrjeđivala, oralne smjese mogu također sadržavati adjuvante kao što su sredstva za vlaženje, emulgiranje i suspendiranje, te sredstva za boju, miris i okus.
Suspenzije, uz aktivne spojeve, mogu sadržavati sredstva za raspršivanje kao što su, primjerice, etoksilirani izostearilni alkoholi, polioksietilen sorbitol i sorbitan esteri, mikrokristalna celuloza, aluminijev metahidroksid, bentonit, agar-agar i tragakant, te njihove smjese.
Smjese za rektalnu i vaginalnu primjenu mogu poželjno sadržavati supozitorije koje se mogu prirediti miješanjem spojeva ovog izuma s odgovarajućim nenadražujućim ekscipijentima ili nosačima kao što su kakao maslac, polietilen glikol ili vosak za supozitorije koji je čvrst na sobnoj temperaturi ali je tekuć pri tjelesnoj temperaturi te se prema tome tali u rektalnoj ili vaginalnoj šupljini oslobađajući aktivan spoj.
Spojevi ovog izuma mogu se također primijeniti u obliku liposoma. Kao što je poznato u tehnici, liposomi se općenito ozvode iz fosfolipida ili ostalih lipidnih tvari. Liposomi nastaju iz mono- ili višelamelnih hidrtiranih tekućih kristala koji su raspršeni u vodenom mediju. Može se koristiti bilo koji netoksični, fiziološki prihvatljiv i metabolizirajući lipid koji može izgrađivati liposome. Ove smjese u liposomnom obliku, uz spoj ovog izuma, mogu sadržavati spoj ovog izuma, stabilizatore, konzervanse, ekscipijente i slično. Poželjni lipidi su fosfolipidi i fosfatidil kolini (lecitini), prirodni i umjetni. Metode dobivanja lecitina su poznate u tehnici. Vidi, primjerice, Prescott, Ed., Methods in Cell Biology, Vo1ume XN, Academic Press, New York, N.Y. ( 1976), p. 33 i dalje.
Spojevi ovog izuma mogu se koristiti u obliku farmaceutski prihvatljivih soli koje su izvedene iz anorganskih ili organskih kiselina.
“Farmaceutski prihvatljivom soli” smatraju se one soli koje su, unutar dosega jasnog medicinskog rasuđivanja, pogodne za uporabu u dodiru s tkivima čovjeka i nižih životinja bez nepoželjne toksičnosti, nadražaja, alergijskog odgovora i slično, te odgovara razumnom odnosu boljitak/rizik. Farmaceutski prihvatljive soli su dobro poznate u tehnici. Primjerice, S. M. Berge, et al., opisuje detaljno farmaceutski prihvatljive soli u J. Pharmaceutical Sciences, 66:1 (1977). Doli se mogu prirediti in situ tijekom konačnog odvajanja i pročišćavanja spoja izuma ili odvojeno, reakcijom funkcijske skupine slboodne baze s odgovarajućom kiselinom. Reprezentativne kisele adicijske soli uključuju, ali nisu ograničene na acetat, adipat, alginat, citrat, aspartat, benzoat, benzensulfonat, bisulfat, butirat, kamforat, kamforolsulfonat, diglukonat, glicerofosfat, hemisulfat, heptanoat, heksanoat, fumarat hidroklorid, hidrobromid, hidrojodid, 2-hidroksietansulfonat (izotionat), laktat, maleat, metansulfonat, nikotinat, 2-naftalensulfonat, oksalat, pamoat, pektinat, persulfat, 3-fenilpropionat, pikrat, pivalat, propionat, sukcinat, tartrate, tiocijanat, fosfat, glutamat, bikarbonat, p-toluensulfonat i undekanoat. Primjeri kiselina koje se mogu koristiti za dobivanje farmaceutski prihvatljivih kiselih adicijskih soli uključuju anroganske kiseline kao što su klorovodična kiselina, bromovodična kiselina, sumporna kiselina i fosforna kiselina te takve organske kiseline kao što su oksalna kiselina, maleinska kiselina, jantarna kiselina i limunska kiselina.
Bazične skupine koje sadrže dušik mogu biti kvarternizirane s takvim sredstvima kao što su metil, etil, propil i butil kloridi, bromidi i jodidi; dialkil sulfati kao dimetil, dietil, dibutil i diamil sulfati; dugolančani halogenidi kao što su decil, lauril, miristil i stearil kloridi, bromidi i jodidi; arilalkil halogenidi kao što su benzil i fenetil bromidi i ostali. Time se dobivaju u vodi ili u ulju topljivi produkti ili dispergirani produkti.
Bazične adicijske soli mogu se prirediti in situ tijekom konačnog izdvajanja i pročišćavanja spoja ovog izuma reakcijom vrste koja sadrži karboksilnu kiselinu s odgovarajućom bazom kao što je hidorksid, karbonat ili bikarbonat farmaceutski prihvatljivog metalnog kationa ili amonija ili organskog primarnog , sekundarnog ili tercijarnog amina. Farmaceutski prihvatljive bazične adicijske soli uključuju, ali nisu isključivo ograničene na katione alkalnih metala ili zemnoalkalnih metala kao što su soli litija, natrija, kalija, kalcija, magnezija il aluminija i slično, te netoksične kvarterne amonijeve ili aminske katione uključujući amonij, tetrametilamonij, tetraetilamonij, metilamin, dimetilamin, trimetilamin, trietilamin, dietilamin, etilamin i slično. Ostali reprezentativni organski amini koji su korisni za dobivanje baznih adicijskih soli uključuju etilendiamin, atanolamin, dietanolamin, piperidin, piperazin i slično.
Dozirajući oblici za lokalnu primjenu spoja ovog izuma uključuju praške, sprejeve, pomade i inhalante. Aktivan spoj miješa se u sterilnim uvjetima s farmaceutski prihvatljivim nosačem te s eventualno potrebnim konzervansima, puferima ili propelantima. Formulacija za očnu primjenu, očne pomade, prašci i otopine također su unutar dosega ovog izuma.
Stvarna razina doziranja aktivnih sastojaka u farmaceutskim smjesama može varirati da se postigne određena količina aktivnog spoja (spojeva) koja je djelotvorna da se postigne određeni terapeutski odgovor za određenog bolesnika, smjesu i način primjene. Odabrana razina doziranja ovisi o aktivnosti konkretnog spoja, putu primjene, o uznapredovalosti stanja koje se tretira, te o stanju i povijesti bolesti bolesnika koji se tretira. Međutim, smatra da je unutar poznatog iskustva tehnike da se započne s razinama spoja koje su manje od potrebnih da bi se postigao željeni terapeutski učinak i da bi se postepeno povećalo doziranje sve dok se ne postigne željeni učinak.
Općenito, oralno ili intravenski se bolesnom sisavcu primjenjuju doze od oko 0,1 do oko 1000 mg, oko 0,5 do oko 500 mg, oko 1 do oko 250 mg, oko 1,5 do oko 100, te poželjno oko 5 do oko 20 mg aktivnog spoja po kilogramu tjelesne težine. Po želji, učinkovita dnevna doza može se podijeliti u višestruke doze za potrebe primjene, npr. u dvije ili četiri odvojene doze dnevno.
Ovaj izum prikazan je primjerima koji slijede. Primjer 1 prikazuje analizu visokog kapaciteta za detektiranje negativnih regulatora za LFA-1 vezanje za ICAM koji veće LFA-1. Primjer 2 odnosi se na vezujuću analizu za procjenu sposobnosti različitih spojeva u svezi s inhibiranjem LFA-1 vezanja za ICAM. Primjer 3 prikazuje sintezu negativnih regulatora. Primjer 4 prikazuje rezultate stanične analize korištenjem negativnih regulatora.
Primjer 1
Visokokapacitetni “screening” LFA-1/ICAM-1 vezujućih inhibitora
U nastojanju da se identificiraju inhibitori LFA-1/ICAM-1 vezanja, razrađena je visokokapacitetna “screening” analiza (HTS) da bi se ispitao veliki broj kemijskih spojeva iz vlastite biblioteke spojeva.
Prethodni eksperimenti su provedeni da bi se odredio linearni raspon LFA-1/ICAM-1 interakcije. Rekombinantni ICAM-1/IgGI protein (koji sadrži ICAM-1 pune duljine) priređen je kao kao što je opisano u američkim patentima br. 5,770,686, 5,837,478, i 5,869,262, a oba su ovdje uključena kao reference. Fuzijski protein je biotiniliran korištenjem pribora koji je dobiven od Pierce Chemical (Rockford, IL). Koncentracija biotiniliranog proteina (BioIgICAM-1) određena je mjerenjem apsorbancije na 280 nm, te su serijska razrjeđenja priređena da se dobije konačni koncentracijski raspon od 50 µg/ml do 0,008 µg/ml. Titriranje BioIgICAM-1 izvršeno je s proteinom koji je prvo razdijeljen na jažice ploče za analizu. Rekombinantni LFA-1 dodan je svakoj jažici u istoj koncentraciji i eksperiment (kao što je niže opisano) je proveden do završetka. Količina vezanja određena je za svaku jažicu, te je na temelju dijagrama rezultata odabrana jedna koncentracija BioIgICAM-1 za kasnije eksperimente. Na sličan način, titriran je LFA-1 korištenjem BioIgICAM-1 koncentracije koja je određena kao što je prije opisano.
Prvog dana HTS postupka, tijelo za hvatanje tj. neblokirajuće anti-LFA-1 monoklonsko antitijelo (TS2/4.1; ATCC #HB244), razrijeđeno je puferom (50 mM natrijev karbonat/bikarbonat, 0,05% ProClin® 300, pH 9,6) do konačne koncentracije od 2 µg/ml. Immulon® 4 (Dynex Technologies, Chantilly, VA) jažice na ploči prevučene su sa 100 µl razrijeđenog antitijela po jažici, te je inkubacija provedena preko noći na 4°C. Drugog dana, ploče su zagrijana na sobnu temperaturu i isprane dva puta s puferom (fosfatna puferirana otopina bez kalcija i magnezija, CMF-PBS) s 0,05% Tween®-20). Svakoj jažici dodano je 200 µl blokirajuće otopine (5% želatine riblje kože u CMF-PBS s 0,05% ProClin® 300), te je provedeno blokirajuće inkubiranje na sobnoj temperaturi tijekom 30 min. Blokirajuća otopina je uklonjena sisanjem, te ploče nisu isprane. LFA-1 razrijeđen je na konačnu koncentraciju od 1 µg/ml u puferu za analizu (1% želatina riblje kože i 2 mM MgCl2 u CMF-PBS), te je u svaku jažicu dodano 100 µl. Inkubiranje je trajalo 1 sat i ploče su dva puta isprane puferom.
Priređena je 2× “stock” otopina BioIgICAM-1 koja sadrži 0,1 µg/ml BioIgICAM-1 i 4 µM kristalnog ljubičastog (za koje je nađeno da je aktivator LFA—1/ICAM-1 vezanja) u puferu analize (EG&G Wallac, Gaithetsburg, MD). Alikvoti (50 µl) spojenih kemikalija (22 spoja/nakupina u 100% DMSO) iz kemijske biblioteke je dodano u jažice, a nakon toga je dodano 50 µl 2X “stock” BioIgICAM-1 da se dobije konačan volumen od 100 µl (sadrži 2% DMSO). Ploče su inkubirane jedan sat na sobnoj temperaturi, te isprane jednom puferom za ispiranje. Europij-obilježeni streptavidin (Eu-SA; #1244-360, EG&G Wallac) razrijeđen je 1:500 u puferu analize, 100 µl razrijeđenog Eu-SA dodano je u svaku jažicu, te su ploče inkubirane na sobnoj temperaturi jedan sat.
Ploče su osam puta isprane puferom, u svaku jažicu dodano je 100 µl DELFIA® otopine za pojačavanje (EG&G Wallac) razrijeđene 1:2, te su ploče potresivane pet minuta pomoću Wallac mućkalice pri velikoj brzini. Ploče su očitane pomoću Wallac DELFIA® čitača fluorescencije (fluorimetar). Kontrole su se sastojale od pozitivnih i negativnih jažica i 50% vezujanih jažica koje su načinjene korištenjem blokirajućih antitijela, tj. anti-LFA-1 monoklonskih antitijela (TS 1/22.1, ATCC #HB202) ili anti-ICAM-1 monoklonskih antitijela. One nakupine (“pools”) koje su pokazale 50% ili veće inhibiranje LFA-1 vezanja za ICAM su identificirane i eksperiment je ponovljen korištenjem pojedinih kemikalija iz dotične nakupine. Određeni su inhibitori LFA-1/ICAM-1 vezanja, te je provedeno dodatno ispitivanje da se odredi ovisnost doze o inhibitorskoj aktivnosti. Izvršeno je daljnje ispitivanje odabranih spojeva tehnikama biokemijske i citološke analize.
Spojevi su grupirani sukladno zajedničkim strukturnim svojstvima, te je nađeno da sljedeći skup spojeva (navedeni niže) sadrži karakterističnu strukturu diaril sulfida.
3-Klor-4-(1-klor-nafthalen-2-ilsulfanil)-fenilamin
1-(3-Nitro-4-fenilsulfanil-fenil)-etanon
1-(3-Nitro-4-fenilsulfanil-fenil)-etanon oksim
5-Trifluormetil-2-fenilsulfanil-benzonitril
1-(3,5-diklorfenil)-3-fenilsulfanil-pirolidin-2,5-dion
Bis-2,4,6-Trinitrofenil-sulfid
2-Metil-1-(2-o-tolilsulfanil-fenil)-1H-pirol
3-[2-(4-Klor-2-nitro-fenilsulfanil)-fenilamino-3H-izobenzofuran-1-on
4-(Benzotiazol-2-ilsulfanil)-3-klor-fenilamin
2-Nitro-4-klorfenil-(2'-aminofenil)-sulfid
6-Amino-2-klorfenil-(4'-metilfenil)-sulfid
4-Nitrofenil-(2'-klorfenil)-sulfid
2, 4-Dinitrofenil-(4'-klorfenil)-sulfid
4-Aminofenil-(2'-klorfenil)-sulf de
2, 4-Diaminofenil-(4'-izopropilfenil)-sulfid
U nastojanju da se optimizira negativni regulacijski kapacitet identificiranih spojeva, načinjeni su različiti derivati diaril sulfida kao što je opisano u primjeru 3. Dodatni derivati diaril sulfida opisani su u pratećoj patentnoj priujavi naslovljenoj “Protivupalni i imuno-supresivni spojevi koji inhibiraju staničnu adheziju” koja je podnesena 2. travnja 1999, zastupnički broj 6446.US.Z3, serijski broj 09/286 645, koja je ovdje u cijelosti uključena kao referenca.
Primjer 2
Vezujuće analize
A. Analiza ICAM-1/LFA-1 biokemijske interakcije
Spojevi koji antagoniziraju interakciju između ICAM-1 i LFA-1 mogu biti identificirani i njihova aktivnost izmjerena korištenjem biokemijskih i staničnih analiza. Primarna biokemijska analiza mjeri sposobnost konkretnog spoja da blokira interakciju između LFA-1 i njegova adhezijskog partnera ICAM-l, kao što je niže objašnjeno.
U ovoj biokemijskoj analizi, 100 µl anti-LFA-1 antitijela u svezi 5 µg/ml u Dulbecco-voj fosfatno puferiranoj otopini soli (D-PBS) korišteno je za prevlačenje jažica mikrotitarske ploče s 96 jažica preko noći na 4°C. Jažice su dva puta isprane puferom za ispiranje (CMF-PBS, 0,05% Tween® 20) i blokirane dodatkom 200 µl D-PBS koji sadrži 5% želatinu riblje kože. U svaku jažicu dodan je rekombinantni LFA-1 (100 µl 0,7 µg/ml) u D-PBS. Inkubiranje je nastavljeno jedan sat na sobnoj temperaturi i jažice su isprane dva puta puferom za ispiranje. Serijska razrjeđenja spojeva koji su ispitani kao LFA-1/ICAM-I negativni regulatori priređena su kao 10 mM “stock” otopine u DMSO, razrijeđena u D-PBS, 2 mM MgCl2, 1% želatine riblje kože i 50 µl svakog razrjeđenja dodano je u svaku jažicu, nakon čega je slijedio dodatak 50 µl 0,8 pg/ml BioIgICAM-1 svakoj jažici, te su ploče inkubirane na sobnoj temperaturi jedan sat. Jažice su zatim isprane dva puta puferom za ispiranje i jažicama je dodano 100 µl Eu-SA (EG&G Wallac) razrijeđeno je 1:100 u Delfia® puferu analize (EG&G Wallac). Inkubiranje je provedeno jedan sat na sobnoj temperaturi. Jažice su isprane osam puta puferom za ispiranje i u svaku jažicu dodano je 100 µ1 otopine za pojačavanje (EG&G Wallac). Inkubiranjem je nastavljeno pet minuta uz konstantno miješanje. Vremenski razlučena fluorimetrijska mjerenja izvršena su korištenjem Victor 1420 Multilabel Counter (EG&G Wallac) brojača i postotak inhibiranja svakog potencijalnog spoja izračunat je pomoću sljedeće jednadžbe:
[image]
gdje se bkg odnosi na jažice koje nisu prevučene s anti-FA-1 antitijelom.
B. Analiza ICAM-1/JY-8 stanične adhezije
Biološki relevantna aktivnost spojeva ovog izuma potvrđena je analizom stanične adhezije kojom se mjeri sposobnost spojeva da blokiraju adherenciju JY-8 stanica (humana EBV-transformirana B stanična linija s ekspresijom LFA-1 na njegovoj površini) za imobilizirani ICAM-1, na sljedeći način. Ova analiza može se provesti sa i bez dodanog IL-8. Za IL8 stimuliranje standardnih JY-8 stanica dodano je 30 ng/ml IL-8 za 30 minutno inkubiranje na 37°C.
Za mjerenje aktivnosti inhibiranja u analizi stanične adhezije, ploče s 96 jažica prevučene su sa 70 µl rekombinantnog ICAM-1/Ig s koncentracijom 5 µg/ml u CMF-PBS preko noći 4°C. Jažice su isprane dva puta s D-PBS i blokirane dodatkom 200 µl D-PBS, 5% želatine riblje kože inkubiranjem jedan sat na sobnoj temperaturi. Fluorescentno obilježene JY-8 stanice (50 µl za 2×106 stanica/ml u RPMI-1640/1% fetalnog volovskog seruma (FBS)) dodane su u jažice. Za fluorescentno obilježavanje JY-8 stanica, 5×106 stanica isprano je jednom u RPMI 1640, resuspendirano u 1 ml RPMI-1640 koji sadrži 2 uM kalcein AM (Molecular Probes, OR), inkubirano na 37°C tijekom 30 minuta i isprano je jednom s RPMI-1640/1% FBS. Razrjeđenja spojeva koji se ispituju na LFA-1/ICAM-3 antagonističku aktivnost načinjena su u adhezijskom puferu iz 10 mM “stock” otopina u DMSO i 50 µl alikvoti dodani su u duplikatne jažice. Mikrotitarske ploče inkubirane su 45 minuta na sobnoj temperaturi i jažice su isprane blago jednom s RPMI-1640/1% FBS. Intenzitet fluorescencije izmjeren je u čitaču fluorescencije za ploče s valnom duljinom pobude na 495 nm i valnom duljinom emisije na 530 nm. Postotak inhibiranja potencijalnog spoja za danu koncentraciju izračunat je prema sljedećoj jednadžbi:
[image]
C. Analiza ICAM-31/Y-8 stanične adhezije
Može se pokazati da spojevi ovog izuma djeluju putem interakcije s integrinom LFA-l, specifično vezanjem αL I domene za koju se zna da je kritična za adheziju LFA-1 s cijelim nizom molekula stanične adhezije. Kao takvi, očekuje se da bi ti spojevi mogli blokirati interakciju LFA-1 s drugim CAM-ima, te je ovo inhibiranje demonstrirano LFA-1 vezanjem za ICAM-3. Spojevi ovog izuma procijenjeni su glede sposobnosti blokiranja dhezije JY-8 stanica za imobilizirani ICAM-3, na sljedeći način.
Za mjerenje aktivnosti inhibiranja u analizi stanične adhezije, mikrotitarske ploče s 96 jažica prevučene su s 50 µl rekombinantnog ICAM-3/Ig s koncentracijom 10 µg/ml u CMF-PBS preko noći na 4°C. Jažice su isprane dva puta s D-PBS, blokirane dodatkom 100 µl D-PBS, 1% volovskog serum albumina (BSA) inkubiranjem jedan sat na sobnoj temperaturi, te su isprane jednom s RPM1-1640/5% toplinski inaktiviranim FBS (adhezijski pufer). Razrjeđenja spojeva koji se ispituju na LFA-1/ICAM-3 antagonističku aktivnost načinjena su u adhezijskom puferu iz 10 mM “stock” otopina u DMSO i 100 µl alikvoti dodani su u duplikatne jažice. Zatim su JY-8 stanice (100 µl pri 0,75×106 stanica/ml u adhezijskom puferu) dodane jažicama (sa i bez 30 ng/ml IL-8). Mikrotitarske ploče inkubirane su 30 minuta na sobnoj temperaturi, adherentne stanice fiksirane su s 50 µ1 14% glutaraldehid/D-PBS i provedeno je inkubiranje daljnjih 90 minuta. Jažice su isprane blago s dH2O i dodano je 50 µl dH2O, a nakon toga 50 µl 1% kristalno ljubičastog. Nakon pet minuta, ploče su isprane dva puta s dH2O i u svaku jažicu je dodano 225 µl etanola (EtOH) da se ekstrahira kristalno ljubičasto iz stanica. Apsorbancija je izmjerena na 570 nm u ELISA čitaču ploča. Postotak inhibiranja potencijalnog spoja izračunat je prema sljedećoj jednadžbi:
[image]
Primjer 3
Sinteza negativnih regulatora
U nastavku je opisana sinteza različitih diaril sulfidnih spojeva sukladno ovom izumu.
Opći postupci i polazne tvari
Općenito, otapala su nabavljena bezvodna te nisu pročišćavana ili sušena, a plazne tvari su najbolje koje se mogu nabaviti. Tankoslojna kromatografija (TLC) načinjena je korištenjem staklenih ili aluminijskih ploča E. Merck, silika-gel 60 F254, 0,25 mm, ili Analtech silika-gel ploča (250 mikrona silika-gela). Vizualiziranje je izvršeno pomoću UV svjetla. Navedene vrijednosti Rf označuju jednu detektiranu mrlju. Spektri nuklearne magnetske rezonancije (NMR) načinjeni su na Bruker DPX 300 ili Varian 300 Gemini 2000 spektrometrima. Kemijski pomaci navedeni su u dijelovima na milijun (ppm) u odnosu na tetrametilsilan (TMS). Konstante vezanja su u Hz. U drugim slučajevima, NMR spektri su zabilježeni pomoću Unity XL-200 spektrometra. Maseni spektri su snimljeni na VG 70 SEG instrumentu na University of Washington, Department of Medicinal Chemistry, Mass Spectrometry Facility (visoko razlučivanje) ili na Finnigan Mat TSQ 70 spektrometru (nisko razlučivanje). Navedeni su samo molekularni ioni. Elementarna analiza je izvršena pomoću Quantitative Technologies, Inc.
A. Opća sintetska metoda A: Aminodiarilsulfidi
B. 1. Opći opis sintetske metode A
Jedan molarni ekvivalent (ekv.) željenog tiolfenola i 1 molarni ekvivalent odgovarajućeg nitroarilnog spoja stavljeni su u suhu tikvicu pod dušikom i otopljeni u suhom acetonu. Dodan je jedan i pol molarni ekvivalent bezvodnog kalijeva karbonata (K2CO3) i smjesa je energično miješana preko noći. Reakcijska smjesa je zatim razrijeđena eterom, isprana zasićenom otopinom NaHCO3, 3% otopinom NaHSO4 i zasićenom otopinom NaCl. Organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4 i filtrirani. Dodan je heptan i otopina je koncentrirana vrijanjem sve dok nije uklonjena većina etera. Nakon hlađenja, kristalizirao je nitrodiaril sulfid. Produkt je sakupljen filtriranjem, ispran pentanom i osušen u vakuumu.
Jedan molarni ekvivalent diaril sulfida i 5 molarnih ekvivalenata kositrenog klorida dihidrata otopljeno je u etanolu (10 do 30 volumena). Smjesa je zagrijana na 60°C u uljnoj kupelji i dodana je koncentrirana HCl (10 do 30 volumena). Nakon tri sata, reakcijska smjesa je ostavljena da se ohladi i dodano je 20 do 60 volumnih dijelova leda. Smjesa je neutralizirana na pH 10-12 dodatkom 5N otopine NaOH. Smjesa je dva puta ekstrahirana eterom i sjedinjeni eterski ekstrakti isprani su zasićenom otopinom NaHCO3 i zasićenom otopinom NaCl. Organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran i otapalo je uklonjeno rptacijskim uparavanjem. Dobivena krutina ili ulje je sakupljeno eterom, te je dokapavanjem dodano približno 5 molarnih ekvivalenata 1 N otopine HCl u eteru. Dobivena krutina je sakupljena filtriranjem, isprana eterom, pa osušena u vakuumu.
Opća metoda sinteze A je shematski prikazana sljedećim dijagramom, gdje je X halogen, primjerice klor.
[image]
2. Specifični primjer opće sintetske metode A
Korištena je opća sintetska metoda A kao što je prije opisano, s izuzetkom što su korištene granule kositra umjesto poželjnog kositrenog klorida dihidrata, kao što je prikazano prije shematski.
2,4-Diklorfenil-(2'-klor-4'-nitrofenil)-sulfid
1,54 g (8,60 mmol) 2,4-diklortiofenola i 1,65 g (1 ekv., 8,60 mmol) 3,4-diklornitrobenzena stavljeno je u suhu tikvicu u atmosferi dušika i otopljeno u suhom acetonu. Dodano je 1,78 g (1,5 ekv., 12,9 mmol) bezvodnog kalijeva karbonata (K2CO3) i magnetski je miješano 20 sati. Reakcijska smjesa je razrijeđena sa 150 ml etera i isprana zasićenom otopinom NaHCO3 (2×75 ml), 3% otopinom NaHSO3 (2×75 ml) i zasićenom otopinom NaCl (2×75 ml). Organska faza je osušena iznad bezvodnog NaHSO3, te filtrirana. Dodano je 50 ml heptana, te je otopina koncentrirana na približno 50 ml vrenjem u parnoj kupelji. Nakon hlađenja dobiveni su visokokvalitetni rkistali. Sakupljeni su filtriranjem, isprani s tri obroka pentana, te osušeni u vakuumu (70°C, 0,05 mm Hg, 2 sata). Dobiveno je 1,43 g (50% prinos) žutih kristala, talište 145-146°C, Rf 0,37 (etilacetat [EtAc]/Heptan, 1:20). 1H-NMR (CDCl3) 6.71 (d, J=8.9, 1H), 7.38 (d od d, J1=2.2, J2=8.2, 1H), 7.59 (d, J=8.2, 1H), 7.63 (d, J=2.2, 1H), 7.94 (d od d, J1=2.2, J2=8.9, 1H), 8.26 (d;1=2.5, 1H). MS (EI) m/z 333 (M+, 98). Analitički izračunato za C12H6Cl3NO2S: C, 43.08; H, 1.81; N, 4.19. Nađeno: C, 43.06; H, 1.77; N, 4.02.
3-Klor-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid
0,680 g (2,03 mmol) 2,4-Diklorfenil-(2'-klor-4'-nitrofenil)-sulfida i 0,844 g (3,5 ekv., 7,11 mmol) kositrenih granula razmuljeno je u 20 ml koncentrirane HCl. Uz snažno miješanje, grijano je pod refluksom dva dana. Smjesa je ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu i razrijeđena je s 50 ml leda. Uz miješanje, smjesa je neutralizirana na pH 10 dodatkom približno 80 ml 5 N otopine NaOH. Izvršeno je ekstrahiranje eterom (2×100 ml). Sjedinjeni organski slojevi isprani su sa 100 ml zasićene otopine NaHCO3 i 2×100 ml zasićene otopine NaCI. To je osušeno iznad Na2SO4 i filtrirano. Izvršeno je koncentriranje na rotavaporu da se dobije smeđe ulje. Ulje je pokupljeno s 50 ml etera, dodano je 4 ml 1 N otopine HCI u eteru, dokapavanjem, da se dobije bijela krutina. Krutina je sakupljena filtriranjem, isprana s nekoliko dijelova etera, osušena (90°C, 3 sata, 0,05 mm Hg). Dobiveno je 0,548 g (79% prinos) bijele krutine, talište 183-185°C (raspad), Rf 0,33 (EtAc/Heptan 1:2 w/ 1% TEA). 1H-NMR (DMSO-d6) 6.55 (d, J=8.6, 1H), 6.66 (d od d, J1=2.5, J2=8.6, 1H), 6.89 (br s, 3H), 6.89 (d, J=2.5, 1H), 7.29 (d, J=2.2, 1H), 7.32 (d, J=2.2, 1H), 7.62 (d, J=2.2, 1H). MS (EI) m/z 303 M+ [100]. Analitički izračunato za C12H8Cl3NS·HCl: C, 42.26; H, 2.66; N, 4.11. Nađeno: C, 42.39; H, 2.57; N, 4.14.
3. Dodatni primjeri spojeva koji su priređeni općom sintetskom metodom A
Sljedeći spojevi priređeni su iz komercijalno raspoloživih reagnesa korištenjem opće sintetske metode A. Načinjeni su polazni tiolni i nitroarilni spojevi, zajedno sintermedijerima (tiol+nitroaril-intermedijer).
3-Klor-4-(2-klorfenilsulfanil}-fenilamin hidroklorid
2-klortiofenol + 3,4-diklornitrobenzen - 4-nitro-2-klorfenil-(2'-klorfenil)-sulfid
Siva krutina, talište 197-198°C (raspad), Rf 0,16 (EtAc/Heptan 1:4 w/ 1% TEA). 1H-NMR (DMSO-d6) 6.61 (d od d, J1=1.9, J2=7.3, 1H), 6.70 (d od d, J1=2.4, J2=8.4, 1 H), 6.94 (d, J=2.5, 1H), 7.18 (m, 2H), 7.28 (d, J=8.9, 1H), 7.45 (d od d, J1=1.6, J2=7.6, 1H), 7.78 (br s, 3H). MS (EI) m/z 269 M+ [100]. Analitički izračunato za C12H10Cl3NS·HCl: C, 47.22; H, 3.30; N, 4.59. Nađeno: C, 47.34; H, 3.15; N, 4.45.
3-Klor-4-(2-naftilsulfanil)-fenilamin hidroklorid
2-naftalentiol + 3,4-diklornitrobenzen - 4-nitro-2-klorfenil-2-naftilsulfid
Prljavobijela krutina, talište 188°C (raspad), Rf 0,16 (EtAc/heptan 1:4 s 1% TEA). 1H-NMR (DMSO-d6) 6.08 (br s, 3H), 6.60 (d od d, J1=2.4, J2=8.4, 1H), 6.90 (d, J=2.5, 1H), 7.20 (d od d, J1=1.9, J2=8.6, 1H), 7.30 (d, J=8.6, 1H), 7.45 (m, 2H), 7.53 (s, 1H), 7.76 (m, 1H), 7.83 (m, 2H). MS (EI) m/z 285 M+ [100]. Analitički izračunato za C16H12ClNS·HCl: C, 59.64; H, 4.07; N, 4.35. Nađeno: C, 59.59; H, 4.07; N, 4.09.
3-Klor-4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid
2,3-diklortiofenol +3,4-diklornitrobenzen- 4-nitro-klorfenil-(2',3'-diklorfenil)-sulfid
Prljavobijela krutina, talište 207-209°C (raspad), Rf 0,33 (EtAc/heptan 1:2 s 1% TEA). 1H-NMR (DMSO-d6) 6.45 (d od d, J1=1.4, J2=8.1, 1H), 6.62 (d od d, J1=2.2, J2=8.6, 1 H), 6.79 (br s, 3H), 6.86 (d, J=2.5, 1 H), 7.21 (t, J=7.9, 1 H), 7.33 (d, J=8.2, 1H), 7.38 (d od d, J1=1.4, J2=8.1, 1H). MS (EI) m/z 303 (M+, 93). Analitički izračunato za C12H8Cl3NS·HCl: C, 42.26; H, 2.66; N, 4.11. Nađeno: C, 42.49; H, 2.56; N, 4.10.
3-Klor-4-(2,4,5-triklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid
2,3,4-triklortiofenol + 3,4-diklornitrobenzen-4-nitro-2-klorfenil(2',4',5'-triklorfenil)-sulfid
Prljavobijela krutina, talište 192-194°C (raspad), Rf 0,33 (EtAc/heptan 1:2 s 1% TEA). 1H-NMR (DMSO-d6) 6.46 (br s, 3H), 6.53 (s, 1H), 6.65 (d od d, J1=2.3, J2=8.4, 1H), 6.89 (d, J=2.2, 1H), 7.35 (d, J=8.6, 1H), 7.88 (s, IH). MS (EI) m/z 337 (M+, 73). Analitički izračunato za C12H7Cl4NS·HCl: C, 38.38; H, 2.15; N, 3.73. Nađeno: C, 38.73; H, 2.07; N, 3.60.
3-Metoksi-4-(2,3-diklorfenilsulfanil}-fenilamin
2,3-diklortiofenol + 2-brom-5-nitroanizol-4-nitro-2-metoksifenil-(2',3'-diklorfenil)-sulfid
Ovaj spoj je izdvojen kristaliziranjem iz etera, a ne dobivanjem HCl soli. Dobiveni su prljavobijeli kristali, talište 166-167°C, Rf 0,17 (EtAc/heptan 1:2 s 1% TEA). 1H-NMR (DMSO-d6) 3.67 (s, 3H), 5.75 (br s, 2H), 6.26 (d od d, J1=1.9, J2=8.3, 1 H), 6.37 (d, J=1.9, 1H), 6.46 (d, J=7.9, 1H), 7.13 (d, J=8.2, 1H), 7.16 (t, J=8.1, 1H), 7.31 (d, J=7.9, 1H). MS (EI) m/z 299 M+ [100]. Analitički izračunato za C13H11Cl2NOS: C, 52.01; H, 3.69; N, 4.67. Nađeno: C, 51.97; H, 3.59; N, 4.67.
5-Amino-2-(2,3-diklorfenilsulfanil)-acetofenon hidroklorid
2,3-diklortiofenol + 2-klornitroacetofenon- 4-nitro-2-acetilfenil-(2',3'-diklorfenil)-sulfid
Žuta krutina, talište 151-153ºC (raspad), Rf 0,35 (EtAc/heptan 1:1 s 1% TEA). 1H-NMR (DMSO-d6) 2.51 (s, 3H), 7.00-7.09 (m, 3H), 7.34 (t, J=7.9, 1H), 7.41 (brs, 1H), 7.44 (br s, 3H), 7.58 (d, J=7.9, 1H). MS (EI) m/z 311 M+ [100]. Analitički izračunato za C13H11Cl3NOS·HCl: C, 48.23; H, 3.47; N, 4.02. Nađeno: C, 47.78; H, 3.43; N, 3.79.
4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-fenilamin
2,3-diklortiofenol + 4-bromnitrofenol-4-nitrofenil-(2',3'-diklorfenil)sulfid
Prljavobijela krutina, talište 175°C (raspad), Rf 0,31 (EtAc/heptan 1:2 s 1 % TEA). 1H-NMR (DMSO-d6) 7.13 (d, J=8.2, 2H); 7.26 (t, J=7.8, 1H), 7.42 (d, J=8.6, 2H), 7.47 (d od d, J1=1.9, J2=7.8, 1H), 7.76 (d od d, J1=1.3, J2=7.9, 1H), 8.04 (br s, 3H). MS (EI) m/z 269 M+ [100]. Analitički izračunato za C12H9Cl2NS·HCl: C, 47.00; H. 3.29; N, 4.57. Nađeno: C, 46.92; H, 3.36; N, 4.27.
3-Klor-4-(1-naftilsulfanil~fenilamin hidroklorid
1-naftalentiol + 3,4-diklornitrobenzen-4-nitro-2-klorfenil-(1-naftil)-sulfid
Prljavobijela krutina, talište 192-194°C, Rf 0,37 (EtAc/heptan 1:2 s 1% TEA). 1H-NMR (DMSO-d6) 6.84 (m, 2H), 7.20 (d, J=1.9, 1H), 7.40 (d, J=7.0, 1H), 7.50 (t, J=7.8, 1H), 7.56-7.61 (m, 2H), 7.94 (d, J=8.2, 1H), 7.99 (m, 1H), 8.12-8.15 (m, 5H). MS (EI) m/z 285 M+ [100]. Analitički izračunato za C16H12ClNS·HCl: C, 59.64; H, 4.07; N, 4.35. Nađeno: C, 59.59; H, 4.19; N, 4.11.
3-Metil-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid
2,4-diklortiofenol + 2-brom-5-nitrotoluen-4-nitro-2-metilfenil-(2', 4'-diklorfenil)-sulfid
Prljavobijela krutina, talište 195-197°C, Rf 0,41 (EtAc/heptan 1:2 s 1% TEA). 1H-NMR (DMSO-d6) 2.22 (s. 3H), 6.62 (d, J=8.6, 1H), 6.94 (d, J=8.2, 1H), 7.04 (br s, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.66 (d, J=2.2, 1H), 7.89 (br s, 3H). MS (EI) m/z 283 M+ [100]. Analitički izračunato za C13H11Cl2NS·HCl: C, 48.69; H, 3.77; N, 4.37. Nađeno: C, 48.87; H, 3.73; N, 4.34.
3-Brom-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid
2,4-diklortiofenol + 3-brom-4-klornitrobenzen-4-nitro-2-bromfenil-(2', 4'-diklorfenil)-sulfid
Prljavobijela krutina, talište 171-173°C (raspad), Rf 0,69 (EtAc/heptan 1:1 s 1% TEA). 1H-NMR (DMSO-d6) 6.66 (d, J=8.6, 1H), 6.81 (d od d, J1=2.2, J2=8.4, 1H), 7.19 (d, J=2.2, 1H), 7.29 (d, J=8.2, 1H), 7.32 (d od d, J1=2.2, J2=8.6, 1H), 7.64 (d, J=2.2, 1H), 7.92 (br s, 3H). MS (EI) m/z 347 (M+, 60). Analitički izračunato za C12H7BrCl2NS·HCl: C, 37.39; H, 2.35; N, 3.63. Nađeno: C, 37.78; H, 2.28; N, 3.61.
2,5-Diklor-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid
2,4-diklortiofenol + 2,4,5-triklornitrofenol - 4-nitro-2,5-diklorfenil-(2', 4'-diklorfenil)-sulfid
Prljavobijela krutina, talište 168-176°C, Rf 0,39 (EtAc/heptan 1:2 s 1% TEA). 1H-NMR (DMSO-d6) 6.57 (d, J=8.6, 1H), 6.83 (br s, 3H), 7.06 (s, 1H), 7.30 (d od d, J1= 2.2, J2=8.6, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.63 (d, J=2.2, 1H). MS (EI) m/z 347 (M+, 60). Analitički izračunato za C12H7Cl4NS·0,75HCl: C, 39.34; H, 2.13; N, 3.82. Nađeno: C, 39.34; H, 2.11; N, 3.71.
4,5-Diklor-2-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin
2,4-diklortiofenol + 3,4-diklor-2-fluornitrobenzen-4-nitro-2-klor-5-fluorfenil-(2', 4'-diklorfenil)-sulfid
Polazeći od 2-fluornitrobenzena, zamijenjen je fluor da se dobije 2-sulfanilni spoj. Ovaj spoj je pročišćen “flash” kromatografijom kao slobodni amin, prljavobijela krutina, talište 119-122°C, Rf 0,20 (EtAc/heptan 1:20). 1H-NMR (DMSO-d6) 5.93 (s, 2H), 6.61 (d, J=8.6, 1H), 7.08 (s, 1H), 7.31 (d od d, J1=2.1, J2=8.5, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.65 (d, J=1.9, 1H). MS (EI) m/z 337 (M+, 75). Analitički izračunato za C12H7Cl4NS: C, 42.51; H, 2.08; N, 4.13. Nađeno: C, 42.94; H, 1.97; N, 4.08.
3,5-Diklor-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin
2,4-diklortiofenol + 3,4,5-triklornitrobenzen-4-nitro-2, 6-diklorfenil-(2', 4'-diklorfenil)-sulfid
Ovaj spoj je rekristaliziran kao slobodni amin da se dobije bijela krutina, talište 128-131°C, Rf 0,36 (EtAc/heptan 1:2). 1H-NMR (DMSO-d6) 6.33 (br s, 2H), 6.46 (d, J=8.5, 1H), 6.83 (s, 2H), 7.32 (d od d, J1=2.1, J2=8.5, 1H), 7.65 (d, J=2.2, 1H). MS (EI) m/z 337 (M+, 77). Analitički izračunato za C12H7Cl4NS: C, 42.51; H, 2.08; N, 4.13. Nađeno: C, 42.15; H, 2.10; N, 4.01.
2,3-Diklor-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin
2,4-diklortiofenol + 2,3,4-trinitrobenzen-2,3-diklor-4-(2,4-diklorfeniltio)-nitrobenzen
Ovaj spoj je pročišćen “flash” kromatografijom kao slobodni amin da se dobije bijela krutina, talište 116-119°C, Rf 0,33 (EtAc/heptan 1:4 s 1% TEA). 1H-NMR (DMSO-d6) 6.09 (s, 2H), 6.47 (d, J=8.7, 1H), 6.86 (d, J=8.7, 1H), 7.32 (d od d, J1=2.3, J2=8.7, 1H), 7.46 (d, J=8.7, 1H), 7.69 (d, J=2.2, 1H). MS (EI) m/z 337 (M+, 71). Analitički izračunato za C12H7Cl4NS: C, 42.51; H, 2.08; N, 4.13. Nađeno: C, 42.83; H, 2.02; N, 4.06.
B. Opća sintetska metoda B
Opća sintetska metoda B je dijagramom prikazana niže:
[image]
gdje je X halogen, poželjno klor:
Sljedeći spojevi su priređeni korištenjem opće sintetske metode B:
4-Nitro-2-klorfenil-(2',4'-dimetilfenil)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-(2',4'-dimetilfenil)-sulfid hidroklorid
4-Amino-2-klorfenil-(2'-metil-4'-klorfenil)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-(2',4'-difluorfenil)-sulfid hidroklorid
4-amino-2-klorfenil-(2',4',6'-triklorfenil)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-(2'-amino-4'-klorfenil)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-(3',4'-diklorfenil)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-2-(3-klor-5-trifluormetilpiridil)-sulfid
Bis-(4,4'-diamino-2,2'-diklorfenil)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid
2-Klor-4-amino-5-metilaminofenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid
2-Klor-4-amino-5-morfolinofenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid
4-Amino-2-trifluormetilfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid
4-Amino-2-fluorfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid
5-Amino-3-klorfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid
Početni stupanj opće sintetske metode B prikazan je priređivanjem intermedijernog spoja koje je niže opisano.
4-Nitro-2-klorfenol-(2',4'dimetilfenil)-sulfid
2,4-Dimetiltiofenol (1,0 g) i 3,4-diklornitrobenzen (1 ekv.) dodani su u 100 ml acetona koji sadrži K2CO3 (5 g). Smjesa je refluksirana 24 h. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, smjesa je filtrirana i aceton je uklonjen rotacijskim vakuumom. Dobivene rezidue su otopljene u malom volumenu CH2Cl2 i filtrirane. CH2Cl2 je zatim uklonjen pomoću rotacijskog vakuuma. Dobivene rezidue su tretirane metanolom (MeOH), što je izazvalo taloženje produkta. Žuti čvrsti produkt zatim je sakupljen filtriranjem i osušen na 40°C u vakuumu tijekom 24 h. Prinos produkta bio je 66%, a talište je bilo 128-130°C. Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
Sljedeći spojevi su priređeni koristeći početni stupanj sukladno gore prikazanom intermedijeru.
4-Amino-2-klorfenil-(2',4'-dimetilfenil)-sulfid hidroklorid
2-Klor-4-nitrofenil-(2',4'-dimetilfenil)-sulfid (0,85 g) i željezni prah u MeOH (300 ml) dodani su u 20 ml vodene otopine NH4Cl, u molarnom odnosu 1:3:5 za supstrat, željezni prah, odnosno NH4Cl. Smjesa je preko noći miješana mehanički pod refluksom. Otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Dobivene rezidue su otopljene u malom volumenu kloroforma i filtrirane. Produkt je dobiven korištenjem preparativne kromatografije primjenom otopljenih rezidua na malenu kolonu koja je napunjena silika-gelom (70-230 mesh), a zatim eluiranjem korištenjem sustava otapala kloroform:heksan (1:4). Frakcije koje sadrže produkt su spojene i otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Prljavobijela krutina je sakupljena filtriranjem i osušena na 50°C u vakuumu tijekom 24 h. Prinos produkta bio je 57%, a talište je bilo 180-185°C (raspad). Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
4-Amino-2-klorfenil-(2'-metil-4'-klorfenil-sulfid
4-Nitro-2-klorfenil-(2'-metil-4'-klorfenil)-sulfid (1,0 g) i željezni prah u MeOH (300 ml) dodani su u 5 ml vodene otopine NH4Cl, u molarnom odnosu 1:3:5 za supstrat, željezni prah, odnosno NH4Cl. Smjesa je preko noći miješana mehanički pod refluksom. Otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Dobivene rezidue su otopljene u malenom volumenu smjese kloroform:heksan (1:4) te filtrirane. Produkt je dobiven korištenjem preparativne kromatografije primjenom otopljenih rezidua na malenu kolonu koja je napunjena silika-gelom (70-230 mesh), a zatim eluiranjem korištenjem sustava otapala kloroform:heksan (1:1). Frakcije koje sadrže produkt su spojene i otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Bijeli čvrsti produkt je sakupljen filtriranjem i osušen na 60°C u vakuumu tijekom 24 h. Prinos produkta bio je 71%, a talište je bilo 91-93°C. Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
4-Amino-2-klorfenil-(2',4'-difluorfenil)-sulfid hidroklorid
4-Nitro-2-klorfenil-(2',4'-difluorfenil)-sulfid i željezni prah u MeOH (300 ml) dodani su u 20 ml vodene otopine NH4Cl, u molarnom odnosu 1:3:5 za supstrat, željezni prah, odnosno NH4Cl. Smjesa je preko noći miješana mehanički pod refluksom. Otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Dobivene rezidue su otopljene u malom volumenu kloroforma i filtrirane. Produkt je dobiven korištenjem preparativne kromatografije primjenom otopljenih rezidua na malenu kolonu koja je napunjena silika-gelom (70-230 mesh), a zatim eluiranjem korištenjem sustava otapala kloroform:heksan (1:5). Frakcije koje sadrže produkt su spojene i otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Bezbojni čvrsti produkt sakupljen je filtriranjem i osušen na 50°C u vakuumu tijekom 24 h. Prinos produkta bio je 88%, a talište je bilo 187-190°C. Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
4-amino-2-klorfenil-(2',4',6'-triklorfenil)-sulfid
4-Nitro-2-klorfenil-(2',4',6;-triklorfenil)-sulfid (0,6 g) i željezni prah u MeOH (250 ml) dodani su u 32 ml vodene otopine NH4Cl, u molarnom odnosu 1:3:5 za supstrat, željezni prah, odnosno NH4Cl. Smjesa je preko noći miješana mehanički pod refluksom. Otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Dobivene rezidue su otopljene u malom volumenu kloroforma i filtrirane. Produkt je dobiven korištenjem preparativne kromatografije primjenom otopljenih rezidua na malenu kolonu koja je napunjena silika-gelom (70-230 mesh), a zatim eluiranjem korištenjem sustava otapala kloroform:heksan (1:3). Frakcije koje sadrže produkt su spojene i otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Bijeli čvrsti produkt je sakupljen filtriranjem i osušen na 40°C u vakuumu tijekom 24 h. Prinos produkta bio je 72%, a talište je bilo 109-111°C. Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
4-Amino-2-klorfenil-(2'-amino-4'-klorfenil)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-(2'-nitro-4'-klorfenil)-sulfid (1,02 g) i željezni prah u MeOH (250 ml) dodani su u 60 ml vodene otopine NH4Cl, u molarnom odnosu 1:3:5 za supstrat, željezni prah, odnosno NH4Cl. Smjesa je preko noći miješana mehanički pod refluksom. Otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Dobivene rezidue su otopljene u malom volumenu kloroforma i filtrirane. Produkt je dobiven korištenjem preparativne kromatografije primjenom otopljenih rezidua na malenu kolonu koja je napunjena silika-gelom (70-230 mesh), a zatim eluiranjem korištenjem sustava otapala kloroform:heksan (3:7). Frakcije koje sadrže produkt su spojene i otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Prljavobijela krutina je sakupljena filtriranjem i osušena na 50°C u vakuumu tijekom 24 h. Prinos produkta bio je 59%, a talište je bilo 86-88ºC. Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
4-Amino-2-klorfenil-(3',4'-diklorfenil)-sulfid
4-Nitro-2-klorfenil-(3',4'-diklorfenil)-sulfid (1,0 g) i željezni prah u MeOH (250 ml) dodani su u 40 ml vodene otopine NH4Cl, u molarnom odnosu 1:3:5 za supstrat, željezni prah, odnosno NH4Cl. Smjesa je preko noći miješana mehanički pod refluksom. Otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Dobivene rezidue su otopljene u malom volumenu kloroforma i filtrirane. Produkt je dobiven korištenjem preparativne kromatografije primjenom otopljenih rezidua na malenu kolonu koja je napunjena silika-gelom (70-230 mesh), a zatim eluiranjem korištenjem sustava otapala kloroform:heksan (3:7). Frakcije koje sadrže produkt su spojene i otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Bezbojni čvrsti produkt je sakupljen filtriranjem i osušen na 70°C u vakuumu tijekom 24 h. Talište produkta je bilo 103-105°C. Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
4-Amino-2-klorfenil-2-(3-klor-5-trifluormetilpiridil-sulfid
4-Nitro-2-klorfenil-2-(3-klor-5-trifluormetilpiridil)-sulfid (1,5 g) i željezni prah u MeOH (250 ml) dodani su u 20 ml vodene otopine NH4Cl, u molarnom odnosu 1:3:5 za supstrat, željezni prah, odnosno NH4Cl. Smjesa je preko noći miješana mehanički pod refluksom. Otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Dobivene rezidue su otopljene u malom volumenu kloroforma i filtrirane. Produkt je dobiven korištenjem preparativne kromatografije primjenom otopljenih rezidua na malenu kolonu koja je napunjena silika-gelom (70-230 mesh), a zatim eluiranjem korištenjem sustava otapala kloroform:heksan (3:7). Frakcije koje sadrže produkt su spojene i otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Bezbojni čvrsti produkt je sakupljen filtriranjem i osušen na 60ºC u vakuumu tijekom 24 h. Prinos produkta bio je 97%, a talište je bilo 96-98°C. Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
Bis-(4,4'-diamino-2,2'-diklorfenil)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-(2'-klor-4'-nitrofenil)- i željezni prah u MeOH (250 ml) dodani su u 20 ml vodene otopine NH4Cl, u molarnom odnosu 1:3:5 za supstrat, željezni prah, odnosno NH4Cl. Smjesa je preko noći miješana mehanički pod refluksom. Otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Dobivene rezidue su otopljene u malom volumenu kloroforma i filtrirane. Produkt je dobiven korištenjem preparativne kromatografije primjenom otopljenih rezidua na malenu kolonu koja je napunjena silika-gelom (70-230 mesh), a zatim eluiranjem korištenjem sustava otapala kloroform:heksan (3:7). Frakcije koje sadrže produkt su spojene i otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Prljavobijeli produkt je sakupljen filtriranjem i osušen na 60°C u vakuumu tijekom 24 h. Prinos produkta bio je 66%, a talište je bilo 113-115 °C. Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
4-Amino-2-klorfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid
2-Klor-4-nitrofenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid i željezni prah u MeOH (250 ml) dodani su u 20 ml vodene otopine NH4Cl, u molarnom odnosu 1:3:5 za supstrat, željezni prah, odnosno NH4Cl. Smjesa je preko noći miješana mehanički pod refluksom. Otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Dobivene rezidue su otopljene u malom volumenu kloroforma i filtrirane, pa je otapalo uklonjeno iz filtrata rotacijskim uparivačem. Produkt je dobiven miješanjem rezidua sa 75 ml destilirane vode (dH2O). Bezbojni čvrsti talog je sakupljen filtriranjem. Prinos produkta bio je 83%, a talište je bilo 105-107°C. Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
4-Amino-2-klorfenil-(4'-acetamido-2'-klorfenil)-sulfid
4-Nitro-2-klorfenil-(4'-acetamido-2'-klorfenil)-sulfid i željezni prah u MeOH (250 ml) dodani su u 20 ml vodene otopine NH4Cl, u molarnom odnosu 1:3:5 za supstrat, željezni prah, odnosno NH4Cl. Smjesa je preko noći miješana mehanički pod refluksom. Otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Dobivene rezidue su otopljene u malom volumenu kloroforma i filtrirane. Produkt je dobiven korištenjem preparativne kromatografije primjenom otopljenih rezidua na malenu kolonu koja je napunjena silika-gelom (70-230 mesh), a zatim eluiranjem korištenjem sustava otapala kloroform-heksan (1:4). Frakcije koje sadrže produkt su spojene i otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Prljavobijela krutina sakupljena je filtriranjem i osušena na 60°C u vakuumu tijekom 24 h. Prinos produkta bio je 76%, a talište je bilo 170-175 °C. Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
4-Amino-2-klorfenil-(4'-dimetilamino-2'-florfenil-sulfid
4-Nitro-2-klorfenil-(4'-dimetilamino-2'-klorfenil)-sulfid (0.2 g) i željezni prah u MeOH (250 ml) dodani su u 20 ml vodene otopine NH4Cl, u molarnom odnosu 1:3:5 za supstrat, željezni prah, odnosno NH4Cl. Smjesa je preko noći miješana mehanički pod refluksom. Otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Dobivene rezidue su otopljene u malom volumenu kloroforma i filtrirane. Produkt je dobiven korištenjem preparativne kromatografije primjenom otopljenih rezidua na malenu kolonu koja je napunjena silika-gelom (70-230 mesh), a zatim eluiranjem korištenjem sustava otapala kloroform:heksan (2:3). Frakcije koje sadrže produkt su spojene i otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Blijedožuti čvrst produkt je sakupljen filtriranjem i osušen na 60°C u vakuumu tijekom 24 h. Prinos produkta bio je 58%. a talište je bilo 133-135°C. Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
2-Klor-4-amino-5-metilaminofenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid
2-Klor-4-nitro-5-metilaminofenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid (0.2 g) i željezni prah u MeOH (250 ml) dodani su u 20 ml vodene otopine NH4Cl, u molarnom odnosu 1:3:5 za supstrat, željezni prah, odnosno NH4Cl. Smjesa je preko noći miješana mehanički pod refluksom. Otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Dobivene rezidue su otopljene u malom volumenu kloroforma i filtrirane. Produkt je dobiven korištenjem preparativne kromatografije primjenom otopljenih rezidua na malenu kolonu koja je napunjena silika-gelom (70-230 mesh), a zatim eluiranjem korištenjem sustava otapala kloroform:heksan (1:4). Frakcije koje sadrže produkt su spojene i otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Smeđi čvrsti produkt je sakupljen filtriranjem i osušen na 50°C u vakuumu tijekom 24 h. Prinos produkta bio je 16%, a talište je bilo 65-70°C. Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
2-Klor-4-amino-5-N-morfolinofenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid
2-Klor-4-nitro-5-N-morfolinofenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid (0,9 g) i željezni prah u MeOH (250 ml) dodani su u 20 ml vodene otopine NH4Cl, u molarnom odnosu 1:3:5 za supstrat, željezni prah, odnosno NH4Cl. Smjesa je preko noći miješana mehanički pod refluksom. Otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Dobivene rezidue su otopljene u malom volumenu kloroforma i filtrirane. Produkt je dobiven korištenjem preparativne kromatografije primjenom otopljenih rezidua na malenu kolonu koja je napunjena silika-gelom (70-230 mesh), a zatim eluiranjem korištenjem sustava otapala kloroform:heksan (3:2). Frakcije koje sadrže produkt su spojene i otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Bijeli čvrsti produkt je sakupljen filtriranjem i osušen na 50°C u vakuumu tijekom 24 h. Talište produkta je bilo 153-155°C. Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
4-Amino-2-trifluormetilfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid
4-Nitro-2-trifluormetilfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid (0,6 g) i željezni prah u MeOH (250 ml) dodani su u 20 ml vodene otopine NH4Cl, u molarnom odnosu 1:3:5 za supstrat, željezni prah, odnosno NH4Cl. Smjesa je preko noći miješana mehanički pod refluksom. Otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Dobivene rezidue su otopljene u malom volumenu kloroforma i filtrirane. Produkt je dobiven korištenjem preparativne kromatografije primjenom otopljenih rezidua na malenu kolonu koja je napunjena silika-gelom (70-230 mesh), a zatim eluiranjem korištenjem sustava otapala kloroform:heksan (1:1). Frakcije koje sadrže produkt su spojene i otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Produkt je sakupljen filtriranjem i osušen na 50°C u vakuumu tijekom 24 h. Talište produkta nije određeno jer je produkt bezbojno ulje. Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
4-Amino-2-fluorfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid
4-Nitro-2-fluorfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid i željezni prah u MeOH (250 ml) dodani su u 20 ml vodene otopine NH4Cl, u molarnom odnosu 1:3:5 za supstrat, željezni prah, odnosno NH4Cl. Smjesa je preko noći miješana mehanički pod refluksom. Otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Dobivene rezidue su otopljene u malom volumenu kloroforma i filtrirane. Produkt je dobiven korištenjem preparativne kromatografije primjenom otopljenih rezidua na malenu kolonu koja je napunjena silika-gelom (70-230 mesh), a zatim eluiranjem korištenjem sustava otapala kloroform:heksan (1:1). Frakcije koje sadrže produkt su spojene i otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Blijedožut čvrsti produkt sakupljen je filtriranjem i osušen na 30°C u vakuumu tijekom 24 h. Prinos produkta bio je 55%, a talište je bilo 101-102°C. Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
5-Amino-3-klorfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid
3-Klor-5-nitrofenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid (1,0 g) i željezni prah u MeOH (250 ml) dodani su u 20 ml vodene otopine NH4Cl, u molarnom odnosu 1:3:5 za supstrat, željezni prah, odnosno NH4Cl. Smjesa je preko noći miješana mehanički pod refluksom. Otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Dobivene rezidue su otopljene u malom volumenu kloroforma i filtrirane. Produkt je dobiven korištenjem preparativne kromatografije primjenom otopljenih rezidua na malenu kolonu koja je napunjena silika-gelom (70-230 mesh), a zatim eluiranjem korištenjem sustava otapala kloroform:heksan (3:2). Frakcije koje sadrže produkt su spojene i otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Produkt je sakupljen filtriranjem i osušen na 25°C u vakuumu tijekom 24 h. Prinos produkta bio je 16%, a talište nije određeno jer je produkt bio smeđe ulje. Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
C. Opća sintetska metoda C
Niže je shematski, dijagramom, prikazana opća sintetska metoda C:
[image]
Općom sintetskom metodom C priređeni su sljedeći spojevi:
4-Amino-2-klorfenil-(2'-klor-4'-nitrofenil)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-(2'-nitro-4'-klorfenil)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-6-(5-nitrokinolino)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-(2'-klor-4'-nitrofenil)-sulfid
2-Klor-4-aminotiofenol (2,0 g) i 3,4-diklornitrobenzen (1 ekv.) dodani su u 300 m1 acetona koji sadrži K2CO3 (20 g). Smjesa je refluksirana 24 h na 60°C. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, smjesa je filtrirana i aceton je uklonjen rotacijskim vakuumom. Dobivene rezidue su otopljene u malom volumenu kloroforma i filtrirane. Kloroform je zatim uklonjen rotacijskim vakuumom. Dobivene rezidue su razmuljene s MeOH, što je izazvalo taloženje produkta. Talog je sakupljen filtriranjem i žuti čvrsti produkt je osušen na 80°C u vakuumu tijekom 24 h. Prinos produkta bio je 59%, a talište je bilo 135-136°C. Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
4-Amino-2-klorfenil-(2'-nitro-4'-klorfenil)-sulfid
2-Klor-4-aminotiofenol (2,0 g) i 2,5-diklornitrobenzen (1 ekv.) dodani su u 300 m1 acetona koji sadrži K2CO3 (20 g). Smjesa je refluksirana 24 h na 60°C. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, smjesa je filtrirana i aceton je uklonjen rotacijskim vakuumom. Dobivene rezidue su otopljene u malom volumenu CH2Cl2 i filtrirane. The CH2Cl2 je zatim uklonjen rotacijskim vakuumom. Dobivene rezidue su razmuljene s MeOH, što je izazvalo taloženje produkta. Talog je sakupljen filtriranjem i žuti čvrsti produkt je osušen na 60°u vakuumu tijekom 24 h. Prinos produkta bio je 57%, a talište je bilo 191-193°C. Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
4-Amino-2-klorfenil-6-(5-nitrokinolino)-sulfid
2-Klor-4-aminotiofenol (0,474 g) i 6-klor-5-nitrokinolin (1 ekv.) dodani su u 250 ml acetona koji sadrži K2CO3 (20 g). Smjesa je refluksirana 24 h na 60°C. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, smjesa je filtrirana i aceton je uklonjen rotacijskim vakuumom. Dobivene rezidue su otopljene u malom volumenu kloroforma i filtrirane. Zatim je uklonjen kloroform rotacijskim vakuumom. Dobivene rezidue su razmuljene s MeOH, što je izazvalo taloženje produkta. Produkt je dobiven korištenjem preparativne kromatografije primjenom otopljenih rezidua na malenu kolonu koja je napunjena silika-gelom (70-230 mesh), a zatim eluiranjem korištenjem sustava otapala kloroform:heksan (3:2). Frakcije koje sadrže produkt su spojene i otapalo je uklonjeno korištenjem rotacijskog vakuuma. Ćvrsti žuti produkt je sakupljen filtriranjem i osušen na 50°C u vakuumu tijekom 24 h. Prinos produkta bio je 62%, a talište je bilo 129-131°C. Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
D. Specifični sintetski postupci
Definirane su cjelovite metode priređivanja sljedećih spojeva:
1-Acetamido-3-klor-4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-benzen
3-Hidroksi-4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid
6-Klor-5-(2,4-diklorfenilsulfanil)-1H-benzimidazol.
1-Acetamido-3-klor-4-(2,3-diklorfenillsulfanil)-benzen
0,165 g (2,1 ekv., 1,35 mmol) 4-dimetilaminopiridina (4-DMAP) stavljeno je u suhu tikvicu u atomosferi dušika i otopljeno u 5 ml bezvodnog tetrahidrofurana (THF). Dodano je 2 ml acetanhidrida, a zatim 0,220 g (1 ekv., 0,643 nmol) 3-klor-4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorida. Miješano je 18 sati. Smjesa je zatim razrijeđena sa 75 ml etera i isprana zasićenom otopinom NaHCO3 (3×50 ml), 0,3 N otopinom HCl (3×30 ml) i zasićenom otopinom NaCl (2×30 ml), osušena iznad Na2SO4, filtrirana i otapalo je uklonjeno na rotacijskom uparivaču. “Flash” kromatografija (1,9×27 cm, EtAc/heptan (1:1)) dala je 0,135 g (61% prinos) bijele krutine, talište 167-169°C, Rf 0,25 (EtAc/heptan 1:1). 1H-NMR (DMSO-d6) 2.07 (s, 3H), 6.59 (d od d, J1=1.3, J2=7.9, 1H), 7.24 (t, J=8.1, 1H), 7.46 (d od d, J1=1.4, J2=8.1, 1H), 7.55 (m, 2H), 8.04 (d, J=1.9, 1H), 10.35 (s, 1H). MS (EI) m/z 345 (M+, 82). Analitički izračunato za C14H10Cl3NOS: C, 48.51; H, 2.91; N, 4.04. Nađeno: C. 48.29; H, 2.88; N, 3.92.
3-Hidroksi-4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid
0,19 g (0.67 mmol) 3-metoksi-4-(2,3-diklorfenilsulfanil) fenilamina stavljeno je u suhu tikvicu u atmosferi dušika, otopljeno u 10 ml suhog CH2Cl2 te ohlađeno na -78°. 0,32 ml (5 ekv., 3,3 mmol) bor-tribromida dodano je dokapavanjem, uz miješanje. Hladna kupelj je uklonjena i smjesa je ostavljena da reagira 20 sati. Otopina je ponovo ohlađena na -78°, te je dokapavanjem dodano 10 ml MeOH. Ostavljeno je da se zagrije na sobnu temperaturu i miješano je 1 sat. Otapalo je uklonjeno na rotacijskom uparivaču i dobiveno ulje je pokupljeno s 10 ml MeOH i opet je uklonjeno otapalo. Tvar je opet pokupljena s 10 ml MeOH i zatim je razrijeđena s 100 ml EtAc. Bijeli talog je uklonjen filtriranjem, pa je filtrat ispran zasićenom otopinom NaCl (3×50 ml), osušen iznad Na2SO4, filtriran, pa je otapalo uklonjeno rotacijskim uparivačem. Dobiveno ulje je pročišćeno “flash” kromatografijom (2,9×28 cm, EtAc/heptan (1:3)) pa je otopljeno u 25 ml etera i staloženo kao HCl sol dodatkom 5 ml 1 N HCl u eteru. Talog je sakupljen filtriranjem, ispran eterom, pa osušen (90ºC, 3 h, 0,3 mm Hg) da se dobije 0,17 g (80% prinos) bijele krutine, talište 222°C (raspad), Rf 0,49 (EtAc/heptan 1:1). 1H-NMR (DMSO-d6) 6.56-6.61 (m, 2H), 6.79 (d, J=1.9, 1H), 6.90 (br hump), 7.19 (t, J=8.1, 1H), 7.27 (d, J=8.2, 1H), 7.38 (d od d, J1=1.4, J2=8.1, 1H), 10.37 (br s, 1H). MS (EI) m/z 285 M+ [100]. Analitički izračunato za C12H9Cl2NOS·HCl: C, 44.67; H, 3.12; N, 4.34. Nađeno: C, 44.53; H, 2.91; N, 4.17.
6-Klor-5-(2,4-diklorfenilsulfanil-1H-benzimidazol
4-Klor-2-nitro-5-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin priređen je općim postupkom s izuzetkom da je pročišćen kao slobodan amin “flash” kromatografijom. 1,37 g (3,93 mmol) slobodonog amina je dodano u 10 ml DMF i 10 ml EtOH. 4,43 g (5 ekv., 19,7 mmol) kositrenog klorida dihidrata je dodano uz 10 ml koncentrirane HCl. Grijano je na 60°C tijekom 20 sati. Reakcijska smjesa je ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu, zatim je razrijeđena s 30 ml vode, te dovedena na pH 12 dodatkom 30 ml 5 N NaOH. Smjesa je zatim dva puta ekstrahirana sa 150 ml etera. Sjedinjeni organski slojevi isprani sa sa 100 ml zasićene otopine NaHCO3 i 2×100 ml zasićene otopine NaCl, osušeni iznad Na2SO4 i filtrirani. Dodano je 40 ml heptana, te je koncentrirano na rotacijskom uparivaču i osušeno u vakuumu (100°C, 2 sata, 0,3 mm Hg) da se dobije 1,06 g (82%) analitički čiste bijele krutine, talište 206-208°C, Rf 0,51 (CH2Cl2/MeOH (9:1) s 1% TEA). 1H-NMR (DMSO-d6) 6.63 (d, J=8.6, 1H), 7.28 (d od d, J1=2.2, J2=8.7, 1H), 7.69 (d, J=2.2; 1H), 7.86 (br s, 1H), 7.93 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 12.80 (s, 1H). MS (EI) m/z 328 (M+, 97). Analitički izračunato za C13H7Cl3N2S: C, 47.37; H, 2.14; N, 8.50. Nađeno: C, 47.40; H, 2.04; N, 8.32.
E. Specifični protokoli sinteze
Sljedeći spojevi priređeni su metodama koje su niže opisane:
4-Metilamino-2,2',4'-triklordifenilsulfid
4-Amino-2-klorfenil-(4'-acetamido-2'-klorfenil)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-(4'-dimetilamino-2'-klorfenil)-sulfid
4-Aminometil-2-klorfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid
4-Metilamino-2,2',4'-triklordifenilsulfid
4-Amino-2,2',4'-triklordifenil-sulfid (0,305 g, 1,0 mmol) dodan je u 15 ml mravlje kiseline. Smjesa je zatim miješana 8 sati, nakon čega je dodano 0,23 ml 37% formaldehida i smjesa je refluksirana 8 sati. Otapalo je aztim uklonjeno na rotacijskom uparivaču. Dobivene rezidue su primijenjene na malenu kolonu koja sadrži silika-gel (70-230 mesh). Produkt je zatim eluiran s kolone kloroformom. Otapalo je uklonjeno iz eluata na rotacijskom uparivaču i sakupljen je blijedožuti produkt. Prinos produkta je bio 44%, a talište je bilo 211°C. Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
4-Nitro-2-klorfenil-(4'-acetamido-2'-klorfenil)-sulfid
4-Amino-2,2'-diklor-4'-nitrodifenilsulfid (1,0 g, 3,17 mmol) zagrijan je u 15 ml acetanhidrida koji sadrži p-toluenesulfonske kisleine. Smjesa je ostavljena stajati 1 sat, nakon čega je uklonjeno otapalo na rotacijskom uparivaču. Rezidue su otopljene u EtAc i stavljene na malenu kolonu silika-gela (70-230 mesh). Filtrat je sakupljen, uparen do suhoga i rekristaliziran iz acetonitrila da se dobije žuti čvrsti produkt. Prinos produkta bio je 97%, a talište je bilo 163-165°C. Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
4-Nitro-2-klorfenil-(4'-dimetilamino-2'-klorfenil)-sulfid
4-Amino-2-klorfenil-(2'-klor-4'-nitrofenil)-sulfid (1,0 g, 3,17 mmol)dodan je u suspenziju 60% natrijeva hidrida (1,43 g) u 250 ml THF na 0°C. Zatim je dodan jodmetan (0,2 ml, u 20 m1 THF), te je smjesa miješana na sobnoj temperaturi 48 sati. Smjesa je zatim primijenjena na Analtech silika-gel ploče. Svaka ploča je bila debljine 1000 mikrona silika-gela. Dva reakcijska produkta, tj. 4-nitro-2-klorfenil-(4'-metilamino-2'-klorfenil)-sulfid i 4-nitro-2-klorfenil-(4'-dimetilamino-2'-klorfenil)-sulfid, eluirani su smjesom 1:1 CHCl3 i heksana. Sporija elucijska vrpca odgovara prvom produktu, a brža elucijska vrpca drugom produktu. Nakon sakupljanja vrpci, spojevi su otopljeni u CHCl3. Otapalo je uklonjeno rotacijskim uparavanjem da se dobije žuti čvrsti produkt. Prinos željenog produkta bio je 36%, a talište je bilo 138-139°C. Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
4-Aminometil-2-klorfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid
2-Klor-4-cijanofenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid (1,0 g, 3,18 mmol) dodan je u 200 ml THF pod dušikom na 0°C. Zatim je u otopinu u obrocima dodan litij-aluminijev hidrid (0,24 g). Smjesa je zatim ostavljena stajati 2 sata na 0°C, nakon čega je u smjesu dodan 1 ml 20% otopine NaOH, a zatim 1 ml dH2O. Otopina je zatim filtrirana, pa je otapalo uklonjeno na rotacijskom uparivaču. Dobivene rezidue su primijenjene na malenu kolonu koja sadrži silika-gel (70-230 mesh). Kolona je isprana s 1:1 smjesom kloroforma i heksana, pa je produkt eluiranjem korištenjem rotacijskog uparivača, a produkt je dobiven kao bezbojno ulje. Prinos produkta bio je 40%, a talište nije određeno. Za karakteriziranje spoja korištene su standardne analitičke tehnike, uključujući NMR spektroskopiju, elementarnu analizu i tankoslojnu kromatografiju.
F. Ostali spojevi
Sukladno općoj metodi sinteze sintetizirani su sljedeći spojevi:
Tablica II
4-Nitro-2-klorfenil-(2',4'-dimetilfenil)-sulfid
4-Nitro-2-klorfenil-(2'-metil-4'-klorfenil)-sulfid
4-Nitro-2-klorfenil-(2', 4'-difluorfenil)-sulfid
4-Nitro-2-klorfenil-(2', 4', 6'-triklorfenil)-sulfid
4-Nitro-2-klorfenil-(3', 4'-diklorfenil)-sulfid
4-Nitro-2-klorfenil-2-(3-klor-5-trifluormetilpiridil)-sulfid
2-Klor-4-nitrofenil-(2', 4'-diklorfenil)-sulfid
4-Nitro-2-klorfenil-(4'-acetamido-2'-klorfenil)-sulfid
4-Nitro-2-klorfenil-(4'-dimetilamino-2'-klorfenil)-sulfid
2-Klor-4-nitro-5-metilaminofenil-(2', 4'-dich1orofenil)-sulfid
2-Klor-4-nitro-5-morfolinofenil-(2', 4'-diklorfenil)-sulfid
4-Nitro-2-trifluormetilfenil-(2', 4'-diklorfenil)-sulfid
4-Nitro-2-fluorfenil-(2', 4'-diklorfenil)-sulfid
3-Klor-5-nitrofenil-(2', 4'-diklorfenil)-sulfid
4-Nitro-2-klorfenil-( 1-naftil)-sulfid
4-Nitro-2-metilfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid
4-Nitro-2-bromfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid
4-Nitro-2, 5-diklorfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid
4-Nitro-2, 6-diklorfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid
4-Nitro-2-klor-5-fluorfenil-(2', 4'-diklorfenil)-sulfid
4-Nitro-2, 3-diklorfenil-(2', 4'-diklorfenil)-sulfid
4-Nitro-2-klorfenil-(4'-klor-2'-aminofenil)-sulfid
4-Nitro-5-acetamido-2-klorfenil-(2', 4'-diklorfenil)-sulfid
4-Nitro-2-klorfenil-(4'-metilamino-2'-klorfenil)-sulfid
4-Nitro-2-klorfenil-(4'-benzilamino-2'-klorfenil)-sulfid
4-Nitro-2-klorfenil-(4'-dibenzilamino-2'-klorfenil)-sulfid
4-Nitro-5-fenilsulfo-2-klorfenil-(2', 4'-diklorfenil)-sulfid
3-Nitro-5-klorfenil-(2', 4'-diklorfenil)-sulfid
Primjer 4
Rezultati stanične analize
Spojevi ovog izuma pokazali su se aktivnima u staničnim analizama koje su prije opisane, te su navedeni u tablici III niže, u kojoj su navedene µM IC50 vrijednosti inhibiranja LFA-1 vezanja za ICAM-1 i ICAM-3 koje su ispitane. Sparene vrijednosti (X/Y) označuju inhibiranje u odsutnosti i prisutnosti IL-8. Višestruke sparene vrijednosti (W/X; Y/Z) označuju ponovljene eksperimente. Crtice (--,X) označuju da eksperiment nije izvršen. “NT” označuje da spoj nije ispitan u konkretnoj analizi.
Mada je ovaj izum prikazan specifičnim realizacijama, podrazumijeva se da su varijacije i modifikacije moguće za one koji poznaju ovo pdoručje. Prema tome, samo ona ograničenja poput onih u priloženim patentnim zahtjevima mogu se odnositi na ovaj izum.
Tablica III
[image] [image]

Claims (20)

1. Spoj, naznačen time što je odabran iz skupa kojega sačinjavaju: 3-Klor-4-(2-klorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 3-Klor-4-(2-naftilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 3-Klor-4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 3-Klor-4-(2,4,5-triklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 3-Klor-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 3-Metoksi-4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-fenilamin 5-Amino-2-(2,3-diklorfenilsulfanil)-acetofenon hidroklorid 4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-fenilamin 3-Klor-4-(1-naftilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 3-Metil-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 1-Acetamido-3-klor-4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-benzen 4-Metilamino-2,2',4'-triklordifenilsulfid 3-Brom-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 3-Hidroksi-4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 6-Klor-5-(2,4-diklorfenilsulfanil)-1 H-benzimidazole 4-Amino-2-klorfenil-(2'4'-dimetilfenil)-sulfid hidroklorid 2,5-Diklor-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 4-Amino-2-klorfenil-(2'-metil-4'-klorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(2',4'-difluorfenil)-sulfid hidroklorid 4-Amino-2-klorfenil-(2',4',6'-triklorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(2'-amino-4'-klorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(2'-klor-4'-nitrofenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(2'-nitro-4'-klorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(3',4'-diklorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-2-(3-klor-5-trifluormetilpiridil)-sulfid Bis-(4,4'-diamino-2,2'-diklorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(4'-acetamido-2'-klorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-6-(5-nitrokinolino)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(4'-dimetilamino-2'-klorfenil)-sulfid 2-Klor-4-amino-5-metilaminofenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid 2-Klor-4-amino-5-N-morfolinofenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid 4-Amino-2-trifluormetilfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid 4-Aminometil-2-klorfenil-(2', 4'-diklorfenil)-sulfid 4,5-Diklor-2-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin 3,5-Diklor-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin 2,3-Diklor-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin 4-Amino-2-fluorfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid 5-Amino-3-klorfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid 4-Nitro-2-klorfenil-(2’,4’-dimetilfenil)-sulfid 4-Nitro-2-klorfenil-(2’-metil-4’-klorfenil)-sulfid 4-Nitro-2-klorfenil-(2’,4’-difluorfenil)-sulfid 4-Nitro-2-klorfenil-(2’,4’,6’-triklorfenil)-sulfid 4-Nitro-2-klorfenil-(3’,4’-diklorfenil)-sulfid 4-Nitro-2-klorfenil-2-(3-klor-5-trifluormetilpiridil)-sulfid 2-Klor-4-nitrofenil-(2’,4’-diklorfenil)-sulfid 4-Nitro-2-klorfenil-(4’-acetamido-2’-klorfenil)sulfid 4-Nitro-2-klorfenil-(4’-dimetilamino-2’-klorfenil)sulfid 2-Klor-4-nitro-5-metilaminofenil-(2’,4’-diklorfenil)-sulfid 2-Klor-4-nitro-5-morfolinofenil-(2’,4’-diklorfenil)-sulfid 4-Nitro-2-trifluormetilfenil-(2’,4’-diklorfenil)-sulfid 4-Nitro-2-fluorfenil-(2’,4’-diklorfenil)-sulfid 3-Klor-5-nitrofenil-(2’,4’-diklorfenil)-sulfid 4-Nitro-2-klorfenil-(1-naftil)-sulfid 4-Nitro-2-metilfenil-(2’,4’-diklorfenil)-sulfid 4-Nitro-2-bromfenil-(2’,4’-diklorfenil)-sulfid 4-Nitro-2,5-diklorfenil-(2’,4’-diklorfenil)-sulfid 4-Nitro-2,6-diklorfenil-(2’,4’-diklorfenil)-sulfid 4-Nitro-2-klor-5-fluorfenil-(2’,4’-diklorfenil)-sulfid 4-Nitro-2,3-diklorfenil-(2’,4’-diklorfenil)-sulfid 4-Nitro-2-klorfenil-(4’-klor-2’-aminofenil)-sulfid 4-Nitro-5-acetamido-2-klorfenil-(2’,4’-diklorfenil)-aulfid 4-Nitro-2-klorfenil-(4’-metilamino-2’-klorfenil)-sulfid 4-Nitro-2-klorfenil-(4’-benzilamino-2’-klorfenil)-sulfid 4-Nitro-2-klorfenil-(4’-dibenzilamino-2’-klorfenil)-sulfid 4-Nitro-5-fenilsulfo-2-klorfenil-(2’,4’-diklorfenil)-sulfid 3-Nitro-5-klorfenil-(2’,4’-diklorfenil)-sulfid
2. Farmaceutska smjesa, naznačena time što sadrži spoj prema zahtjevu 1 i farmaceutski prihvatljivi nosač.
3. Farmaceutska smjesa, naznačena time što sadrži spoj koji je odabran iz skzpa kojega sačinjavaju: 3-Klor-4-(1-klor-naftalen-2-ilsulfanil)-fenilamin 1-(3-Nitro-4-fenilsulfanil-fenil)-etanon 1-(3-Nitro-4-fenilsulfanil-fenil)-etanon oksim 5-Trifluormetil-2-fenilsulfanil-benzonitril 1-(3,5-diklorfenil)-fenilsulfanil-pirolidin-2,5-dion Bis-2,4,6-Trinitrofenil-sulfid 2-Metil-1-(2-o-tolilsulfanil-fenil)-1H-pirol 3-[2-(4-Klor-2-nitro-fenilsulfanil)-fenilamino-3H-izobenzofuran-1-on 4-(Benzotiazol-2-ilsulfanil)-3-klor-fenilamin 2-Nitro-4-klorfenil-(2’-aminofenil)-sulfid 6-Amino-2-klorfenil-(4’-metilfenil)-sulfid 4-Nitrofenil-(2’-klorfenil)-sulfid 2,4-Dinitrofenil-(4’-klorfenil)-sulfid 4-Aminofenil-(2’-klorfenil)-sulfid 2,4-Diaminofenil)-(4’-izopropilfenil)-sulfid 4-Nitro-2-klorfenil-(2’,3’-diklorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-2-(5-nitro-3-brom)-piridin sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(2’-nitro-4’-klorfenil)-sulfid
4. Metoda za tretiranje upalne bolesti, naznačena time što obuhvaća stupanj primjene sisavcu određene količine farmaceutske smjese prema zahtjevu 2 ili 3, koja je dovoljna za inhibiranje vezanja LFA-1 za njegov prirodni ligand koja je u kompeticiji s ICAM-1 ili ICAM-3 za vezanje s LFA-1.
5. Metoda za inhibiranje LFA-1 vezanje sa ICAM koji veže LFA-1, naznačena time što uključuje dovođenje u dodir LFA-1 s diaril sulfidom.
6. Metoda prema zahtjevu 5, naznačena time što je diaril sulfid supstituiran.
7. Metoda prema zahtjevu 5, naznačena time što je diaril sulfid spoj koji je označen općom formulom (I): [image] (I) gdje su A i B, neovisno, arilne skiupine odabrane iz skupa kojega sačinjavaju 5- i 6-člani aormatski prsteni, uključujući i ne ograničavajući se samo na njih – fenil, tienil, furil, pirimidinil, imidazolil, pirazolil, piridil, pirazinil, pirolil i piridazinil; R1, R2 i R3 su neovisno odabrani iz skupa kojega sačinjavaju vodik, -Ra, gdje je Ra vodik ili alkilna skupina koja sadrži od jedan od šest lančastih ili razgranatih ugljikovih atoma (C1-6 alkil), -halogen, gdje je halogen Cl, F, Br ili I, -NRbRc, gdje su Rb i Rc neovisno H, C1-6 alkil ili –CH2-aril, -NO2, -C(=O)Ra, -CN, -perfluorRa, kao trifluormetil, -N-C(=O)Ra, -(CH2)n-NRbRc, gdje je n cijeli broj od 1 do 6, 5- ili 6-člani heterociklički prsten, bilo alifatski ili aromatski, koji sadrži jedan ili više O, N ili S, proizvoljno supstituiranih, kao što su morfolino, i –S-aril, gdje je aril 5- ili 6-člani aromatski prsten, proizvoljno supstituiran; a R4, R5 i R6, neovisno, odabrani su iz skupa kojega sačinjavaju vodik, -Ra, -O-Ra, -halo, -NRbRc, -NO2, -C(=O)Ra, -CN, -perfluorRa, -N-C(=O)Ra, -(CH2)n-NRbRc, i - 5- ili 6-člani heterociklički prsten, alifatski ili aromatski, koji sadrži jedan ili više O, N ili S, proizvoljno supstituiran, -S-aril, ili gdje R4 i R5 su uzeti zajedno da sačinjavaju 5- ili 6-člani aromatski prsten, koji proizvoljno sadrži jedan ili više O, N ili S u prstenu, proizvoljno supstituiran.
8. Metoda prema zahtjevu 7, naznačena time što je diaril sulfid odabran iz skupa kojega sačinjavaju: 3-Klor-4-(2-klorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 4-Nitro-2-klorfenil-(2,3-diklorfenil)-sulfid 3-Klor-4-(2-naftilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 3-Klor-4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 3-Klor-4-(2,4,5-triklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 3-Klor-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 4-(Benzotiazol-2-ilsulfanil)-3-klor-fenilamin 3-Klor-4-(1-klor-naftalen-2-ilsulfanil)-fenilamin 3-Metoksi-4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-fenilamin 5-Amino-2-(2,3-diklorfenilsulfanil)-acetofenon hidroklorid 4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-fenilamin 3-Klor-4-(1-naftilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 3-Metil-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 1-Acetamido-3-klor-4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-benzen 4-Metilamino-2,2',4'-triklordifenilsulfid 3-Brom-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 3-Hidroksi-4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 6-Klor-5-(2,4-diklorfenilsulfanil)-1 H-benzimidazole 4-Amino-2-klorfenil-(2',4'-dimetilfenil)-sulfid hidroklorid 2,5-Diklor-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 4-Amino-2-klorfenil-(2'-metil-4'-klorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(2',4'-difluorfenil)-sulfid hidroklorid 4-Amino-2-klorfenil-(2',4',6'-triklorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(2'-amino-4'-klorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(2'-klor-4'-nitrofenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(2'-nitro-4'-klorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(3',4'-diklorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-2-(3-klor-5-trifluormetilpiridil)-sulfid Bis-(4,4'-diamino-2,2'-diklorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(4'-acetamido-2'-klorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-6-(5-nitrokinolino)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(4'-dimetilamino-2'-klorfenil)-sulfid 2-Klor-4-amino-5-metilaminofenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid 2-Klor-4-amino-5-N-morfolinofenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid 4-Amino-2-trifluormetilfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-2-(5-nitro-3-brom)-piridin sulfid 4-Aminometil-2-klorfenil-(2', 4'-diklorfenil)-sulfid 4,5-Diklor-2-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin 3,5-Diklor-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin 2,3-Diklor-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin 4-Amino-2-fluorfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid 5-Amino-3-klorfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid 3-Klor-4-(1-klor-naftalen-2-ilsulfanil)-fenilamin 1-(3-Nitro-4-fenilsulfanil)-fenil)-etanon 1-(3-Nitro-4-fenilsulfanil)-fenil)-etanon oksim 5-Trifluormetil-2-fenilsulfanil-benzonitril 1-(3,5-diklorfenil)-3-fenilsulfanil-pirolidin-2,5-dion Bis-2,4,6-Trinitrofenil-sulfid 2-Metil-1-(2-o-tolilsulfanil-fenil)-1H-pirol 2-[2-(4-Klor-2-nitro-fenilsulfanil)-fenilamino-3H-izobenzofuran-1on 4-(Benzotiazol-2-ilsulfanil)-3-klor-fenilamin 2-Nitro-4-klorfenil-(2’-aminofenil)-sulfid 6-Amino-2-klorfenil-(4’-metilfenil)-sulfid 4-Nitrofenil-(2’-klorfenil)-sulfid 2,4-Dinitrofenil-(4’-klorfenil)-sulfid 4-Aminofenil-(2’-klorfenil)-sulfid 2,4-Diaminofenil-(4’-izopropilfenil)-sulfid 4-Nitro-2-klorfenil-(2’,3’-diklorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-2-(5-nitro-3-brom)-piridin-sulfid
9. Metode za tretiranje upalne bolesti koja nastaje zbog LFA-1 vezanja za njegov prirodni ligand koji kompetira s ICAM-1 ili ICAM-3 za vezanje na LFA-1, naznačena time što uključuje primjenu sisavcu kojemu je to potrebno spoja koji kompetira s 3-klor-4-(1-klor-naftalen-2-ilsulfanil)-fenilaminom za vezanje na LFA-1 u količini koja je dovoljna da inhibira vezanje prirodnog liganda za LFA-1.
10. Metoda prema zahtjevu 9, naznačena time što je spoj diaril sulfid.
11. Metoda prema zahtjevu 10, naznačena time što je diaril sulfid supstituiran.
12. Metoda prema zahtjevu 10, naznačena time što je diaril sulfid spoj označen općom formulom (I): [image] (I) gdje su A i B, neovisno, arilne skiupine odabrane iz skupa kojega sačinjavaju 5- i 6-člani aormatski prsteni, uključujući i ne ograničavajući se samo na njih – fenil, tienil, furil, pirimidinil, imidazolil, pirazolil, piridil, pirazinil, pirolil i piridazinil; R1, R2 i R3 su neovisno odabrani iz skupa kojega sačinjavaju vodik, -Ra, gdje je Ra vodik ili alkilna skupina koja sadrži od jedan od šest lančastih ili razgranatih ugljikovih atoma (C1-6 alkil), -halogen, gdje je halogen Cl, F, Br ili I, -NRbRc, gdje su Rb i Rc neovisno H, C1-6 alkil ili –CH2-aril, -NO2, -C(=O)Ra, -CN, -perfluorRa, kao trifluormetil, -N-C(=O)Ra, -(CH2)n-NRbRc, gdje je n cijeli broj od 1 do 6, 5- ili 6-člani heterociklički prsten, bilo alifatski ili aromatski, koji sadrži jedan ili više O, N ili S, proizvoljno supstituiranih, kao što su morfolino, i –S-aril, gdje je aril 5- ili 6-člani aromatski prsten, proizvoljno supstituiran; a R4, R5 i R6, neovisno, odabrani su iz skupa kojega sačinjavaju vodik, -Ra, -O-Ra, -halo, -NRbRc, -NO2, -C(=O)Ra, -CN, -perfluorRa, -N-C(=O)Ra, -(CH2)n-NRbRc, i - 5- ili 6-člani heterociklički prsten, alifatski ili aromatski, koji sadrži jedan ili više O, N ili S, proizvoljno supstituiran, -S-aril, ili gdje R4 i R5 su uzeti zajedno da sačinjavaju 5- ili 6-člani aromatski prsten, koji proizvoljno sadrži jedan ili više O, N ili S u prstenu, proizvoljno supstituiran.
13. Metoda prema zahtjevu 12, naznačena time što je diaril sulfid odabran iz skupa kojega sačinjavaju: 3-Klor-4-(2-klorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 4-Nitro-2-klorfenil-(2,3-diklorfenil)-sulfid 3-Klor-4-(2-naftilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 3-Klor-4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 3-Klor-4-(2,4,5-triklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 3-Klor-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 4-(Benzotiazol-2-ilsulfanil)-3-klor-fenilamin 3-Klor-4-(1-klor-naftalen-2-ilsulfanil)-fenilamin 3-Metoksi-4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-fenilamin 5-Amino-2-(2,3-diklorfenilsulfanil)-acetofenon hidroklorid 4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-fenilamin 3-Klor-4-(1-naftilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 3-Metil-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 1-Acetamido-3-klor-4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-benzen 4-Metilamino-2,2',4'-triklordifenilsulfid 3-Brom-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 3-Hidroksi-4-(2,3-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 6-Klor-5-(2,4-diklorfenilsulfanil)-1 H-benzimidazole 4-Amino-2-klorfenil-(2',4'-dimetilfenil)-sulfid hidroklorid 2,5-Diklor-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin hidroklorid 4-Amino-2-klorfenil-(2'-metil-4'-klorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(2',4'-difluorfenil)-sulfid hidroklorid 4-Amino-2-klorfenil-(2',4',6'-triklorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(2'-amino-4'-klorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(2'-klor-4'-nitrofenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(2'-nitro-4'-klorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(3',4'-diklorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-2-(3-klor-5-trifluormetilpiridil)-sulfid Bis-(4,4'-diamino-2,2'-diklorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(4'-acetamido-2'-klorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-6-(5-nitrokinolino)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-(4'-dimetilamino-2'-klorfenil)-sulfid 2-Klor-4-amino-5-metilaminofenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid 2-Klor-4-amino-5-N-morfolinofenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid 4-Amino-2-trifluormetilfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-2-(5-nitro-3-brom)-piridin sulfid 4-Aminometil-2-klorfenil-(2', 4'-diklorfenil)-sulfid 4,5-Diklor-2-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin 3,5-Diklor-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin 2,3-Diklor-4-(2,4-diklorfenilsulfanil)-fenilamin 4-Amino-2-fluorfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid 5-Amino-3-klorfenil-(2',4'-diklorfenil)-sulfid 3-Klor-4-(1-klor-naftalen-2-ilsulfanil)-fenilamin 1-(3-Nitro-4-fenilsulfanil)-fenil)-etanon 1-(3-Nitro-4-fenilsulfanil)-fenil)-etanon oksim 5-Trifluormetil-2-fenilsulfanil-benzonitril 1-(3,5-diklorfenil)-3-fenilsulfanil-pirolidin-2,5-dion Bis-2,4,6-Trinitrofenil-sulfid 2-Metil-1-(2-o-tolilsulfanil-fenil)-1H-pirol 2-[2-(4-Klor-2-nitro-fenilsulfanil)-fenilamino-3H-izobenzofuran-1on 4-(Benzotiazol-2-ilsulfanil)-3-klor-fenilamin 2-Nitro-4-klorfenil-(2’-aminofenil)-sulfid 6-Amino-2-klorfenil-(4’-metilfenil)-sulfid 4-Nitrofenil-(2’-klorfenil)-sulfid 2,4-Dinitrofenil-(4’-klorfenil)-sulfid 4-Aminofenil-(2’-klorfenil)-sulfid 2,4-Diaminofenil-(4’-izopropilfenil)-sulfid 4-Nitro-2-klorfenil-(2’,3’-diklorfenil)-sulfid 4-Amino-2-klorfenil-2-(5-nitro-3-brom)-piridin-sulfid
14. Metoda za inhibiranje vezanja LFA-1 za svoj prirodni ligand koja kompetira sa ICAM-1 ili ICAM-3 za vezanje sa LFA-1, naznačena time što obuhvaća dodir stanice koja vrši ekspresiju LFA-1 na svojoj površini saspojem koji kompetira s 3-klor-4-(1-klor-naftalen-2-ilsulfanil)-fenilaminom za vezanje s LFA-1 u količini koja je dovoljna za inhibiranje vezanja LFA-1 s prirodnim ligandom.
15. Metoda prema zahtjevu 9 ili 14, naznačena time što je ligand ICAM-1 ili ICAM-3.
16. Metoda za identificiranje negativnog regulatora LFA-1 vezanja sa svojim prirodnim ligandom koji kompetira s ICAM-1 ili ICAM-3 za vezanje s LFA-1, naznačena time što uključuje sljedeće stupnjeve: a) kontaktiranje LFA-1 s aktivatorom LFA-1 vezanja; b) mjerenje LFA-1 vezanja s prirodnim ligandom u prisutnosti i odsutnosti spoja koji se ispituje; i c) identificiranje spoja koji se ispituje kao negativni regulator kada se smanjeno vezanje LFA-1 za ligand uočava u prisutnosti spoja koji se ispituje.
17. Metoda prema zahtjevu 16, naznačena time što je aktivator kristalno ljubičasto (crystal violet).
18. Spoj koji je supstituirani diarilni sulfid ili njegova farmaceutski prihvatljiva sol ili prolijek, naznačen time što se veže za domenu I LFA-1 kao preferentnu u odnosu na ICAM.
19. Spoj koji je supstituirani diarilni sulfid formule (I): [image] (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva sol ili prolijek, naznačeni time što: A i B su, neovisno, arilne skupine odabrane iz skupa kojega sačinjavaju 5- i 6-člani aromatski prsteni, uključujući i ne ograničavajući se samo na njih – fenil, tienil, furil, pirimidinil, imidazolil, pirazolil, piridil, pirazinil, pirolil i piridazinil; R1, R2 i R3 su neovisno odabrani iz skupa kojega sačinjavaju vodik, -Ra, gdje je Ra vodik ili alkilna skupina koja sadrži od jedan od šest lančastih ili razgranatih ugljikovih atoma (C1-6 alkil), -halogen, gdje je halogen Cl, F, Br ili I, -NRbRc, gdje su Rb i Rc neovisno H, C1-6 alkil ili –CH2-aril, -NO2, -C(=O)Ra, -CN, -perfluorRa, kao trifluormetil, -N-C(=O)Ra, -(CH2)n-NRbRc, gdje je n cijeli broj od 1 do 6, 5- ili 6-člani heterociklički prsten, bilo alifatski ili aromatski, koji sadrži jedan ili više O, N ili S, proizvoljno supstituiranih, kao što su morfolino, i –S-aril, gdje je aril 5- ili 6-člani aromatski prsten, proizvoljno supstituiran; a R4, R5 i R6, neovisno, odabrani su iz skupa kojega sačinjavaju vodik, -Ra, -O-Ra, -halo, -NRbRc, -NO2, -C(=O)Ra, -CN, -perfluorRa, -N-C(=O)Ra, -(CH2)n-NRbRc, i 5- ili 6-člani heterociklički prsten, alifatski ili aromatski, koji sadrži jedan ili više O, N ili S, proizvoljno supstituiran, -S-aril, ili gdje R4 i R5 su uzeti zajedno da sačinjavaju 5- ili 6-člani aromatski prsten, koji proizvoljno sadrži jedan ili više O, N ili S u prstenu, proizvoljno supstituiran.
20. Metoda za tretiranje kliničkog stanja u sisavca, naznačena time što uključuje primjenu sisavcu terapeutski učinkovite količine spoja kao što je navedeno u zahtjevu 18 ili 19.
HR20010777A 1999-04-02 2001-10-23 INHIBITORS OF LFA-1 BINDING TO ICAMs AND USES THEREOF HRP20010777A2 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US28532599A 1999-04-02 1999-04-02
PCT/US2000/008840 WO2000059878A2 (en) 1999-04-02 2000-04-03 INHIBITORS OF LFA-1 BINDING TO ICAMs AND USES THEREOF

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HRP20010777A2 true HRP20010777A2 (en) 2002-12-31

Family

ID=23093752

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HR20010777A HRP20010777A2 (en) 1999-04-02 2001-10-23 INHIBITORS OF LFA-1 BINDING TO ICAMs AND USES THEREOF

Country Status (21)

Country Link
EP (1) EP1165504A2 (hr)
JP (1) JP2002541141A (hr)
KR (1) KR20020003559A (hr)
CN (2) CN1351588A (hr)
AU (2) AU774054B2 (hr)
BG (1) BG106019A (hr)
BR (1) BR0009421A (hr)
CA (1) CA2369005A1 (hr)
CZ (1) CZ20013524A3 (hr)
EA (1) EA200101017A1 (hr)
EE (1) EE200100514A (hr)
HR (1) HRP20010777A2 (hr)
HU (1) HUP0201904A3 (hr)
IL (1) IL145528A0 (hr)
IS (1) IS6096A (hr)
MX (1) MXPA01009915A (hr)
NO (1) NO20014768L (hr)
NZ (1) NZ515238A (hr)
PL (1) PL351323A1 (hr)
SK (1) SK14022001A3 (hr)
WO (1) WO2000059878A2 (hr)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6515124B2 (en) * 2000-02-09 2003-02-04 Hoffman-La Roche Inc. Dehydroamino acids
WO2002002539A1 (en) 2000-06-29 2002-01-10 Abbott Laboratories Aryl phenylheterocyclyl sulfide derivatives and their use as cell adhesion-inhibiting anti-inflammatory and immune-suppressive agents
US7064180B2 (en) 2000-07-31 2006-06-20 The General Hospital Corporation High affinity integrin polypeptides and uses thereof
US7153944B2 (en) 2000-07-31 2006-12-26 The General Hospital Corporation High affinity integrin polypeptides and uses thereof
US7323552B2 (en) 2000-07-31 2008-01-29 The General Hospital Corporation Variant integrin polypeptides and uses thereof
AU2001286403A1 (en) * 2000-07-31 2002-02-13 The General Hospital Corporation High affinity integrin polypeptides and uses thereof
UA81749C2 (uk) 2001-10-04 2008-02-11 Х. Луннбек А/С Фенілпіперазинові похідні як інгібітори зворотного захоплення серотоніну
CA2492035A1 (en) 2002-07-11 2004-01-15 Vicuron Pharmaceuticals, Inc. N-hydroxyamide derivatives possessing antibacterial activity
DE602004016316D1 (de) 2003-04-04 2008-10-16 Lundbeck & Co As H 4-(2-phenylsulfanyl-phenyl)-piperidin-derivate als serotonin-wiederaufnahme-hemmer
DE602004014190D1 (de) 2003-12-23 2008-07-10 Lundbeck As Valby H 2-(1h-indolylsulfanyl)-benzylaminderivate als ssri
ATE545413T1 (de) * 2004-03-15 2012-03-15 Lilly Co Eli Antagonisten des opioidrezeptors
AR052308A1 (es) 2004-07-16 2007-03-14 Lundbeck & Co As H Derivados de 2-(1h-indolilsulfanil)-arilamina y una composicion farmaceutica que contiene al compuesto
AR054393A1 (es) 2005-06-17 2007-06-20 Lundbeck & Co As H Derivados de benzo(b)furano y benzo(b)tiofeno, composiciones farmaceuticas que los contienen y su uso en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de enfermedades mediadas por la inhibicion de la reabsorcion de neurotransmisores de amina biogenicos.
US7629473B2 (en) 2005-06-17 2009-12-08 H. Lundbeck A/S 2-(1H-indolylsulfanyl)-aryl amine derivatives
JP2007008877A (ja) * 2005-06-30 2007-01-18 Sato Pharmaceutical Co Ltd ２−ピリドン誘導体を有効成分とする医薬組成物
KR20080056221A (ko) * 2005-10-18 2008-06-20 시그마타우 인두스트리에 파르마슈티케 리우니테 에스.피.에이. 베타 아밀로이드 응집의 나프틸 유도체 억제제
US8436025B2 (en) * 2008-09-19 2013-05-07 CompleGen Partners, Inc. Compounds and methods for PKC theta inhibition
US9884046B1 (en) * 2017-06-26 2018-02-06 Macau University Of Science And Technology Method of treating lung cancer
NL2026714B1 (en) 2020-10-20 2022-06-16 Lumicks Ca Holding B V Improved detection of lymphocyte - target cell interaction

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1493728A1 (de) * 1965-07-20 1969-08-28 Lauterbach Dr Rudolf Verfahren zur Herstellung von Aminophenylthioaethern
US3576872A (en) * 1968-05-03 1971-04-27 Exxon Research Engineering Co Herbicidal s-aryl arylamides
DE2313721A1 (de) * 1973-03-20 1974-10-03 Bayer Ag Neue 1-phenylsubstituierte 1,3,5triazine, verfahren zu ihrer herstellung, sowie ihre verwendung als arzneimittel
GR73690B (hr) * 1979-01-15 1984-04-02 Celamerck Gmbh & Co Kg
US4973599A (en) * 1989-03-14 1990-11-27 Hoffman-La Roche Inc. Phenylthioheterocyclic derivatives
GB9403408D0 (en) * 1994-02-23 1994-04-13 Wellcome Found Therapeutic benzonitriles
TW574214B (en) 1994-06-08 2004-02-01 Pfizer Corticotropin releasing factor antagonists
US6110922A (en) * 1998-12-29 2000-08-29 Abbott Laboratories Cell adhesion-inhibiting antiinflammatory and immune-suppressive compounds

Also Published As

Publication number Publication date
CZ20013524A3 (cs) 2002-06-12
EE200100514A (et) 2002-12-16
KR20020003559A (ko) 2002-01-12
BR0009421A (pt) 2002-03-26
BG106019A (en) 2002-06-28
WO2000059878A3 (en) 2001-08-09
AU2004205210A1 (en) 2004-09-23
CA2369005A1 (en) 2000-10-12
HUP0201904A2 (en) 2002-09-28
WO2000059878A2 (en) 2000-10-12
IL145528A0 (en) 2002-06-30
JP2002541141A (ja) 2002-12-03
NO20014768D0 (no) 2001-10-01
CN1351588A (zh) 2002-05-29
EP1165504A2 (en) 2002-01-02
NZ515238A (en) 2005-02-25
NO20014768L (no) 2001-11-29
IS6096A (is) 2001-09-28
HUP0201904A3 (en) 2003-04-28
CN1721401A (zh) 2006-01-18
AU4191900A (en) 2000-10-23
MXPA01009915A (es) 2003-08-20
SK14022001A3 (sk) 2002-03-05
PL351323A1 (en) 2003-04-07
EA200101017A1 (ru) 2002-04-25
AU774054B2 (en) 2004-06-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HRP20010777A2 (en) INHIBITORS OF LFA-1 BINDING TO ICAMs AND USES THEREOF
AU2005241073B2 (en) Adamantyl-acetamide derivatives as inhibitors of the 11-beta-hydroxysteroid dehydrogenase Type 1 enzyme
EP1051394B1 (en) Potassium channel inhibitors
AU629595B2 (en) Pyrimidines and their pharmaceutical acceptable salts thereof, and their use as medicines
US4560690A (en) 2-(N-substituted guanidino)-4-hetero-arylthiazole antiulcer agents
EP1343760B1 (en) Muscarinic antagonists
NO170883B (no) Fremgangsmaate for fremstilling av 2-amino-5-hydroksy-4-metylpyrimidin-derivater
JPH06501706A (ja) アミノスルホニルカルバメート
PL190498B1 (pl) Nowe pochodne N-glicylo-2-cyjanopirolidyny, sposób ich wytwarzania i ich zastosowanie oraz kompozycje farmaceutyczne zawierające te pochodne
CA2493660A1 (en) Process for preparing quinolin antibiotic intermediates
CZ296856B6 (cs) Aryl- nebo heteroarylthio-fenylcinnamid, zpusob jeho výroby a pouzití a farmaceutický prostredek najeho bázi
CA2259655C (en) 1,4-di-sustituted piperidines as muscarinic antagonists
BG65177B1 (bg) Инхибиращи клетъчната адхезия противовъзпалителнии имуноподтискащи съединения, използването им, фармацевтичен състав и метод за получаването им
EP1771432B1 (en) Non-imidazole heterocyclic compounds as histamine h3 receptor modulators
US6166050A (en) 3,4-diamino-3-cyclobutene-1,2-dione derivatives which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
KR100267883B1 (ko) 티아졸린 유도체
KR20150065718A (ko) 인돌린
EP0612730A1 (en) O-aryl ethers of morphinans
PT88543B (pt) Processo para a preparacao de compostos derivados de amidina
JP2003104971A (ja) 新規アニリド誘導体又はその塩及びこれを含有する医薬
HU202508B (en) Process for producing new 1,4-disubstituted piperazine derivatives and pharmaceutical compositions containing them as active components
MXPA02003136A (es) Antagonistas muscarinicos.
US5478945A (en) Thiazoline derivatives
SK279199B6 (sk) Diamidy n,n'-bis-/alkoxyalkyl/-pyridín-2,4-dikarbo
KR20000057268A (ko) 나프티리딘 유도체

Legal Events

Date Code Title Description
A1OB Publication of a patent application
OBST Application withdrawn