CZ20013524A3 - Inhibitory navázání LFA-1 na ICAM a jejich pouľití - Google Patents

Inhibitory navázání LFA-1 na ICAM a jejich pouľití Download PDF

Info

Publication number
CZ20013524A3
CZ20013524A3 CZ20013524A CZ20013524A CZ20013524A3 CZ 20013524 A3 CZ20013524 A3 CZ 20013524A3 CZ 20013524 A CZ20013524 A CZ 20013524A CZ 20013524 A CZ20013524 A CZ 20013524A CZ 20013524 A3 CZ20013524 A3 CZ 20013524A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
sulfide
chlorophenyl
amino
chloro
dichlorophenyl
Prior art date
Application number
CZ20013524A
Other languages
English (en)
Inventor
Kerry Fowler
Mark Orme
Donald E. Staunton
Janet Adolphson
Original Assignee
Icos Corporation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Icos Corporation filed Critical Icos Corporation
Publication of CZ20013524A3 publication Critical patent/CZ20013524A3/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/36—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D207/40—2,5-Pyrrolidine-diones
    • C07D207/416—2,5-Pyrrolidine-diones with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to other ring carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/01—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and halogen atoms, or nitro or nitroso groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/09—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and halogen atoms, or nitro or nitroso groups bound to the same carbon skeleton having sulfur atoms of thio groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/23—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/31—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton
    • C07C323/33—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton having at least one of the nitrogen atoms bound to a carbon atom of the same non-condensed six-membered aromatic ring
    • C07C323/35—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton having at least one of the nitrogen atoms bound to a carbon atom of the same non-condensed six-membered aromatic ring the thio group being a sulfide group
    • C07C323/37—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton having at least one of the nitrogen atoms bound to a carbon atom of the same non-condensed six-membered aromatic ring the thio group being a sulfide group the sulfur atom of the sulfide group being further bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/23—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/39—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton at least one of the nitrogen atoms being part of any of the groups, X being a hetero atom, Y being any atom
    • C07C323/40—Y being a hydrogen or a carbon atom
    • C07C323/41—Y being a hydrogen or an acyclic carbon atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D213/70—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/36—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D235/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings
    • C07D235/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D235/04—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles
    • C07D235/06—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/60—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D277/62—Benzothiazoles
    • C07D277/68—Benzothiazoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached in position 2
    • C07D277/70—Sulfur atoms
    • C07D277/74—Sulfur atoms substituted by carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/04—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms
    • C07D295/08—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly bound oxygen or sulfur atoms
    • C07D295/096—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly bound oxygen or sulfur atoms with the ring nitrogen atoms and the oxygen or sulfur atoms separated by carbocyclic rings or by carbon chains interrupted by carbocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/04—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms
    • C07D295/12—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly or doubly bound nitrogen atoms
    • C07D295/135—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly or doubly bound nitrogen atoms with the ring nitrogen atoms and the substituent nitrogen atoms separated by carbocyclic rings or by carbon chains interrupted by carbocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/77—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D307/87—Benzo [c] furans; Hydrogenated benzo [c] furans
    • C07D307/90—Benzo [c] furans; Hydrogenated benzo [c] furans with an oxygen atom in position 1 and a nitrogen atom in position 3, or vice versa

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Quinoline Compounds (AREA)
  • Thiazole And Isothizaole Compounds (AREA)
  • Furan Compounds (AREA)
  • Control Of El Displays (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Description

Inhibitory navázání LFA-1 na ICAM a jejich použití
Oblast techniky:
Jsou popsány nové sloučeniny, které inhibují vázání LFA-1 na ligand přirozeného vazebného partnera. Rovněž je popsáno použití těchto sloučenin.
Dosavadní stav techniky:
Antigen (LFA-1, CDlla/CD18) spojený s funkcí leukocytů je leukocyt-specifický β2 integrin, který participuje na adhezi buňka / buňka. Vazebná aktivita LFA-1 je esenciální k extravazátu leukocytů z cirkulace do místa poranění při protizánětlivé odezvě. Jsou známy tři základní ligandy, které vážou LFA-1, ICAM-1, ICAM-2 a ICAM-3, které jsou intercelulárními adhezními molekulami, které hrají důležitou roli při lokalizaci adheze leukocytů na endotelové buňky v místě poranění. ICAM-4 a ICAM-5 jsou rovněž označovány, že vážou LFA-1. Většina leukocytů podstatně exprimuje LFA-1, ale vázání ligandů vyžaduje aktivaci, a předpokládá se, že indukují změnu konformace a zvýšenou aviditu pro vázání ligandů. Například ICAM-1 je běžně exprimován v nízkých hladinách na endotelu, nicméně zraněním indukované protizánětlivé mediátory promotují na povrchu zvýšenou expresi v buňkách na místě poranění, které, naopak, promotují adhezi lokalizovaných leukocytů přes navázání s aktivním LFA-1.
Struktura LFA-1 indukuje rozhodné intracelulární a extracelulární domény, které se, jak se předpokládá, účastní a/nebo regulují ICAM vazbu. Ve zvláštním zájmu je oblast v ctt řetězci přibližně 200 aminokyselin, označených I doména, která je nalezena ve všech integrinech, stejně jako v mnoha dalších proteinech. Důkazy potvrzují, * 4 * ·
4 ·
«4 V
I «444*4 · * J · · · • 4 * «4 ·· ·· ·!
že 1 doména je esenciální pro LFA-1 vazbu na ICAM-1 a 3. Například anti-LFA-1 blokovací monoklonální protilátky byly vyznačeny na epitopcch v I doméně. Dále bylo nalezeno, že rekombinantní I doménové polypeptidové fragmenty inhibují integrinem zprostředkovanou adhezi a vázání ICAM-1. V I doméně LFA-1 (a dalších proteinech) je jediné místo, na iontu kovu závislé adheze, „ (MIDAS), které přednostně váže ionty manganu a hořčíku. Vázání jejich kationtů je vyžadováno pro interakci ligandů a předpokládá se, že indukují změny konformace v LFA-1, nezbytné pro vázání. Vázání kationtů tedy může být regulačním mechanismem, které zodpovídá za 1* změny v prostředí extracelulárních leukocytů. Tato hypotéza je w podpořena pozorováním, že vázání vápenatých iontů skutečně inhibuje
LFA-1 interakci s ICAM-1. Skutečně bylo navrženo, že neaktivní konformace LFA-1 rezultuje z vázání vápníku, a že nahrazení vápenatého iontu manganatým nebo hořečnatým iontem je krokem požadovaným pro LFA-1 aktivaci [Griggs, a kol., J. Biol. Chem. 273: 221 1 3-221 1 9 (1998)]. Byly prokázány další faktory, které indukují LFA-1 aktivaci, včetně obsazení receptorů T buněk, stimulace cytokinů a in vitro PMA stimulace.
V praktických údajích poskytuje identifikace LFA-l/ICAM «
vazebných míst cíle pro modulování protizánětlivých reakcí leukocytů. » ► Byla izolována řada protilátek, které jsou schopné indukovat LFA-1 aktivaci (viz, například, Landis, a kol., J. Cell Biol. 120:1 5 1 9-1 527)), nebo například bránění ICAM-1 interakce (viz například Randi a Hogg, J. Biol. Chem, 269\ 1 23 95-1 2398 (1 994)). Předchozí identifikace antiLFA-1 aktivačních protilátek, která rozpozná násobné a rozdílné extracelulární epitopy, předpokládá existenci více než jedné regulační oblasti, pravděpodobně nezávislé na cytoplasmickém signálu. Lokalizace míst LFA-1, které vážou ICAM-1, byla zkoumána prostřednictvím použití chimérních LFA-1 a. podjednotek proteinů obsahujících lidské a myší složky (Huartg a Springer, J. Biol. Chem. 270\ 19008-1 90 16 (1995)). Studie udávají, že zbytky vazeb koordinačního kationtu a zbytky proximální k místu, jsou esenciální pro vázání ICAM-1 na relativně plochém rozhraní. Přesnější oddělení extracelulární regulační oblasti(í) a kontaktních bodů pro ICAM-1 vazbu umožní označení účinných modulátorů.
Proto tedy existuje potřeba ve stavu techniky přesně identifikovat regulační oblast pro proteiny, které se účastní v protizánětlivé odezvě, a konkrétně LFA-1 a ICAM, které vážou LFA-1. Determinace terciární (nebo kvarterní) struktury proteinu může identifikovat potenciální regulační oblasti pro umožnění rozumného označení malých biologicky kompatibilních molekul pro terapeutickou a profylaktickou intervenci pro zánětlivá onemocnění. Dále existuje potřeba ve stavu techniky identifikovat sloučeniny, které mohou inhibovat LFA-1 vazbu na ICAM, které mohou být použity při léčení zánětlivých onemocnění.
Podstata vynálezu:
Předložený vynález je veden na sloučeniny, které se vážou na nová regulační místa v I doméně LFA-1, a tudíž inhibují LFA-1 vazbu na ICAM, které vážou LFA-1. Předložený vynález tedy poskytuje metody pro regulaci adheze leukocytů na endotelové buňky. Sloučeniny podle vynálezu jsou vhodné pro léčení chorobných procesů, jako jsou ty, které jsou spojené se zánětlivými chorobami, poruchami autoimunity, nádorovými metastázami, odmítáním aloimplantátu a reperfúzním poraněním. Konkrétně se předložený vynález týká diarylsulfidů obecného vzorce (I), jejich farmaceuticky přijatelné soli nebo proléčiva, a použití diarylsulfidů, a zvláště sloučenin vzorce (I), pro inhibici LFA-1 vazby na ICAM, který váže LFA-1.
kde A a B jsou, nezávisle, arylové skupiny zvolené ze skupiny sestávající z 5- a 6-členných aromatických kruhů, zahrnující, ale neomezující se na ně, fenyl, thienyl, furyl, pyrimidinyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrrolyl, a pyridazinyl;
Ri, R2 a R3 jsou nezávisle zvoleny ze skupiny sestávající z vodíku,
-Ra, kde Raje vodík nebo alkylová skupina obsahující jeden až šest uhlíků atomů v nasycených přímých nebo větvených řetězcích (Ci_ 6alkyl),
-O-Ra,
-halogenu, kde halogenem je Cl, F, Br nebo I,
-NRbRc, kde Rb a Rc nezávisle jsou H, Ci.galkyl, nebo -CH2-aryl, -NO2,
-C(=O)Ra,
-CN,
-perfluorRa, jako je trifluormethyl,
-N-C(=O)Ra,
-(CH2)a-NRbRc, kde n je celé číslo 1 až 6,
-5- nebo 6-členného heterocyklického kruhu, buď alifatického nebo aromatického, obsahujícího jeden nebo více O, A nebo S, popřípadě substituovaných, jako je morfolin, a
-S-arylu, kde aryl je 5- nebo 6-členný aromatický kruh, popřípadě substituovaný;
a R4, R5 a R6 nezávisle jsou zvoleny ze skupiny sestávající z vodíku, k3.
-O-Ra,
-halogenu,
-NRbRc,
-NO2,
-C(=O)Ra,
-CN,
-perfluorRa,
-N-C(=O)Ra,
-(CH2)a-NRbRc, a
-5- nebo 6-členného heterocyklického kruhu, alifatického nebo aromatického, obsahující jeden nebo více O, N nebo S, popřípadě substituovaných,
-S-arylu, nebo kde
R4 a R5 vzaty dohromady tvoří 5- nebo 6-členný aromatický kruh, popřípadě substituovaný.
Příklady nových negativních regulátorů LFA-1 vazby na ICAMy zahrnují, ale neomezují se na ně, sloučeniny uvedené v tabulce I.
Tabulka 1
Příkladné negativní regulátory
3- Chlor-4-(2-chlorfenylsulfanyl)-fenylamin hydrochlorid
4- NÍtro-2-chlorfenyl-(2',3'-dichlorfenyl)-sulfid
3-Chlor~4-(2-na fy lsul fa nyl)-feny lamin hydrochlorid
- Chlor-4-(2,3 -dichlorfenylsulfanyl)-fenyl amin hydrochlorid
3- Chlor-4-(2,4,5-trichlorfenylsulfanyl)-fenylamin hydrochlorid
-Chlor-4-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-fenylamin hydrochlorid
4- (Benzothiazol-2-ylsulfanyl)-3 - chlor-feny lamin
3-Chlor-4-(l-chlor-naftalen-2- ylsulfanylj-fenylamin • · ♦ ·»· • * ·«*»·· * ··· · ♦ « «·»· ♦ · · φ ·* *· ·♦ <··
3- Methoxy-4-(2,3-dichlorfenylsu!fanyl)-fenylamin
5- Amino-2-(2,3-dichlorfenylsulfanyl)-acctofenon hydrochlorid
4- (2,3-dichlorfenylsulfanyl)-fenylamin
3-Chlor-4-(l-naftylsulfanyl)fenylamÍn hydrochlorid
3- Methyl-4-(2,4-dichlorfenylsulf'anyl)-fenylamin hydrochlorid
1- Acetamido-3-chlor-4-(2,3-dichlorfenylsulfanyl)-benzen
4- Methylamino-2,2',4'-trichlorfenylsulfid
3-Brom-4-(2J4-dichlorfenylsulfanyl)-fenylamin hydrochlorid
3- Hydroxy-4-(2,3-dichlorfenylsulfanyl)-fenylamin hydrochlorid
6- Chlor-5-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)- lH-benzimidazol
4- Amino-2-chlorfenyl-(2',4'-dimethylfenyl)-sulfid hydrochlorid
2.5- Dichlor-4-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-fenylamin hydrochlorid
4-Amino-2-chlorfenyl -(2 '-methyl-4'-chlorfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlorfenyl-(2 ',4'-difluorfenyl)-sulfid hydrochlorid
4-Amino-2~chlorfenyl-(2';4',6'-trichlorfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlorfenyl-(2 '-amino-4'-chlorfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlorfenyl-(2 '-chlor-4'-nitrofenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlorfenyl-(2 '-nitro-4'-chlorfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlorfenyl-(3',4'-dichlorfenyl)-sulfid 4-Amino-2-chlorfenyl-2-(3-chlor-5-trifluormethylpyridyl)-sulfid Bis-(4,4'-diamino-2,2'-dichlorfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chIorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid 4-Arnino-2-chlorfenyl-(4'-acetamindo-2'-chlorfenyl)-sulfid 4-Amino-2-chlorfenyl-6-(5-nitrochinolin)-sulfid 4-Amino-2-chlorofenyl-(4'-dimethylamino-2'-chlorfenyl)-sulfÍd
2- Chlor-4-amino-5-methylaminofenyl-(2 ',4'-dichlorfenyl)-sulfid
2-Chlor-4-amino-5-N-morfolinfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid 4-Amino-2-triflu ořme thylfeny l-(2',4'-dichlor feny l)-sulfid 4-Amino-2-chlorfenyl-2-(5-nitro-3-brom)-pyrridin sulfid 4-Aminomethyl-2-chlorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfÍd
4.5- Dichlor-2-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-fenylamin
3.5- Dichlor-4-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)- feny lamin
2.3- Dichlo r-4-(2,4-dichlorfeny!sulfanyl)-feny lamin
4- Amino-2-fluorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid
5- Amino-3-chlorfcnyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid
3-Chlor-4-( 1 - chl o r-naftalen-2-ylsulfanyl)-feny lamin l-(3-Nitro-4-fenylsulfanyl-fenyl)-ethanon l-(3-Nitro-4-fcnylsufanyl-fenyl)-ethanon oxim
-Trifluormethyl-2-fenylsulfanyl-benzonitr i 1
1- (3,5-díchlorfenyl)-3-fenylsulfanyl-pyrrolidin-2,5-dion Bis-2,4,6-Trinitrofenyl-sulfid
2- Methyl -1 - (2-o-tolylsulfanyl-fenyl)-1 H-pyrrol
3- [2-(4-Chlor-2-nitro-fenylsulfanyl)-fenylamino-3H-isobenzofuran-lon
4- (Benzothiazol-2-ylsulfanyl)-3 - chlor-feny lamin 2-Nitro-4-chlorfenyl-(2 '-amino fenyl)-sulfid
6- Amino-2-chlorfenyl- (4 '-methyl fenyl)-sulfid
4-Nitrofenyl-(2'-chlorfenyl)-sulfid
2.4- Dinitrofenyl-(4'-chlorfenyl)-sulfid 4-Aminofenyl-(2'-chlorfenyl) -sulfid
2.4- Diaminofenyl-(4 '-isopropylfenyl)-sulfid 4-Nitro-2-chlorfenyl-(2',3'-dichlorfenyl)-sulfid 4-Amino-2-chlorofenyl-2-(5-nitro-3-brom)-pyridin-sulfid
Sloučeniny, jak jsou reprezentovány strukturním vzorcem (I), mohou být připraveny syntetickými postupy nebo metabolickými postupy. Příprava sloučeniny metabolickými postupy zahrnuje jak in vivo, tak in vitro postupy. Rovněž se předpokládají farmaceutické prostředky obsahující sloučeniny podle vynálezu.
Vynález rovněž poskytuje metody inhibice LFA-1 vazby na ICAMy, které vážou LFA-1, zahrnující krok uvedení LFA-1 do kontaktu s diarylsulfidem, a přednostně sloučeninou strukturního vzorce (I). Obdobně popisuje vynález metody inhibice adheze leukocytů na endotelové buňky, zahrnující krok uvedení do kontaktu leukocytů o *
exprimuj ících LFA-1 s diarylsuifidem, a přednostně sloučeninou strukturního vzorce (I). Vynález rovněž zahrnuje metody léčení zánětlivých onemocnění, zahrnující kroky podávání savci farmaceutického prostředku podle vynálezu v množství, postačujícím k inhibici navázání LFA-1 na jeho vlastní ligand, který soupeří s ICAM-1 nebo ICAM-3 o vazbu na LFA-1. Vynález také zahrnuje metody léčení zánětlivého onemocnění vycházejících z LFA-1 vazby na přirozený ligand, který soupeří s ICAM-1 nebo ICAM-3 o vazbu na LFA-1, zahrnující podávání savci, který to potřebuje, sloučeniny, která soupeří s 3-chIor-4-(l-chlornaftalen-2-ylsulfanyl)-fenylaminem o vazbu na LFA-1 v množství postačujícím k inhibici vazby přirozeného ligandu na LFA-1. Dále vynález poskytuje metody zlepšování patologického stavu spojeného s vázáním LFA-1 na ICAM, který váže LFA-1, zahrnující podávání jednotlivci, který to potřebuje, účinného množství diarylsulfidů, a přednostně sloučeniny strukturního vzorce (I), pro inhibici vázání LFA-1 na ICAM.
Příklady inhibitorů podle předloženého vynálezu zahrnují, ale neomezují se na ně, sloučeniny uvedené v tabulce I.
Vynález také poskytuje použití sloučeniny podle vynálezu při výrobě léčiva pro léčení patologických stavů spojených s LFA-1 vazbou na ICAM-1.
Vynález také poskytuje způsoby identifikace negativního regulátoru LFA-1 vazby na jeho přirozený ligand, který soupeří s ICAM-1 nebo ICAM-3 o vazbu na LFA-1, zahrnujících kroky: a) kontaktování LFA-1 s aktivátorem LFA-1 vazby; b) měření LFA-1 vazby s přirozeným ligandem za přítomnosti a absenci testované sloučeniny ; a c) identifikaci testované sloučeniny jako inhibitoru, kde snížená LFA-1 vazba na ligand je detekována za přítomnosti testované sloučeniny. V jednom provedení je aktivátorem krystalová violeť.
• *· · t · « 0 0 · · · « · » * 00 * · < · · · · 0
Podrobný popis vynálezu:
Hodnota IC50 sloučeniny je definována jako koncentrace sloučeniny požadovaná pro produkci 50% inhibice zkoumané biologické aktivity. Jak se zde používá, negativní regulátor je definován j ako sloučenina charakterizovaná hodnotou IC50 pro inhibici navázání LFA1 na přirozený ligand. Negativní regulátory navázání LFA-1 jsou definovány, že mají IC50 menší než asi 200 μΜ, méně než asi 100 μΜ, méně než asi 50 μΜ, a přednostně od asi 0,05 μΜ do 40 μΜ.
Termín „farmaceuticky přijatelný nosič,,, jak se zde používá, označuje ta proléčiva sloučenin podle vynálezu, která jsou vhodná pro použití v kontaktu s živočišnými příjemci a mající vnitřní toxicitu, dráždivost, alergickou odezvu odpovídající - přiměřenou- rozumnému poměru zisk/riziko, a účinnost pro předpokládané použití.
Termín „proléčivo,,, jak se zde používá, označuje sloučeniny, které jsou rychle transformovány in vivo na mateřskou sloučeninu výše uvedeného vzorce, například hydrolýzou. Diskuse je uvedena v Hiruchi, a kol., Prodrugs as Novel Delivery Systems, sv. 14 z A.C.S.D. Symposium Series, a v Roche (vyd.), Bioreversible Carriers in Drug Design, Američan Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987, oba jsou zde zařazeny jako odkaz. Označení proléčiv je obecně diskutováno v Hardma, a kol., (vyd.) Goodman & Gilmanš The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9.Vydání, New York, New York (1996), str. 11-16. Stručně, podávání léčívaje následováno vyloučením z těla nebo určitou biotransformací, přičemž biologická aktivita léčiva je redukována nebo eliminována. Alternativně může vést proces biotransformace k metabolickému vedlejšímu produktu, který je sám o sobě více aktivní nebo odpovídajícím způsobem aktivní ve srovnání s původně podaným léčivem. Zlepšení pochopení těchto biotransformačních procesů umožní označení na takzvaná „proléčiva,,, « * » · ·» < · * ** ίο ··»···«*♦ ·«*··»«· · W · ·* » « · k · * ··
444 « « · · · · · · · · která se, po biotranformaci, stávají fyziologicky aktivnějšími v upraveném stavu. Proléčiva jsou tedy farmakologicky inaktivní sloučeniny, které jsou konvertovány na biologicky aktivní metaboiity. V některých formách jsou proléčiva poskytována jako farmakologicky aktivní pomocí hydrolýzy, například, esterové nebo amidové vazby, častokrát zaváděním nebo vystavěním funkční skupiny do proléčiva. Takto modifikované léčivo může také reagovat s endogenní sloučeninou za tvorby ve vodě rozpustného konjugátu, který dále zvyšuje farmakologické vlastnosti sloučeniny, například jako výsledek zvýšeného poločasu oběhu.
Jako jiná alternativa mohou být proléčiva označena, že jsou podrobena kovalentní modifikaci funkční skupiny s, například, kyselinou glukuronovou, sulfátem, glutathionem, aminokyselinami nebo acetátem. Výsledný konjugát může být inaktivován a vyloučen v moči, nebo poskytnou silnější sloučeninu než je mateřská sloučenina. Vysokomolekulární konjugáty mohou být rovněž vyloučeny do žluči, podrobeny enzymatickému štěpení a uvolněny zpět do oběhu, čímž se účinně zvýší biologický poločas původně podané sloučeniny.
Sloučeniny podle vynálezu mohou existovat jako stereoisomery, kde jsou přítomna asymetrická nebo chirální centra. Stereoisomery jsou označeny buď „S„ nebo „R„ v závislosti na uspořádání substituentů okolo chirálního uhlíkového atomu. Směsi stereoisomerů jsou zahrnuty do vynálezu. Stereoisomery zahrnují enantiomery, diastereomery a směsi obou. Jednotlivé stereoisomery sloučenin podle vynálezu mohou být připraveny synteticky z komerčně dostupných výchozích materiálů, které obsahují asymetrická nebo chirální centra, nebo přípravou racemických směsí, následně separací nebo resolučními technikami známými ze stavu techniky. Metody resoluce zahrnují (1) připojení směsi enantiomerů na chirální pomocný prvek, separaci získané směsi rekrystalizací nebo chromatografií a uvolnění opticky čistého produktu z pomocného prvku; (2) vytvoření soli využívající opticky aktivního *·· * ·· · 4· ·44* štěpícího činidla, a (3) přímou separaci směsi optických enantiomerů na chirálních chromatografických kolonách.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu zahrnují, ale neomezují se na ně, ty sloučeniny spadající do obecného strukturního vzorce (I) výše a sloučeniny uvedené v tabulce I.
Vynález také poskytuje farmaceutické prostředky zahrnující jednu nebo více sloučenin podle vynálezu, přednostně dále zahrnují farmaceuticky přijatelný nosič nebo ředidlo.
Vynález dále poskytuje metody inhibice vázání LFA-1 na ICAM, který váže LFA-1, zahrnující krok kontaktování LFA-1, nebo jeho fragmentu vázajícího ICAM, se sloučeninou negativního regulátoru; uvedený negativní regulátor vazebný LFA-1 cti, polypeptid, nebo jeho fragment, na místě zvoleném ze skupiny sestávající z uspořádání, které váže diarylsulfid nebo vazebné místo definované Ile259, Leu29 8 , lle235, Val 157, Leu 161 a Ile306 lidského polypeptidu LFA-1 cíl a domény LFA-
1, která váže 3-chlor-4-( 1 -chlornaftalen-2-ylsulfanyl)fenylamin mající strukturu popsanou výše. Alternativně je negativní regulátor vazebný na místo na LFA-1 definován zbytky aminokyselin Ile259, Leu298 , Ile23 5 , Val 157, Leu 16í, Ile306 , Leu302 , Tyr2 5 7 , Leu132, Val233 , Val130 a Tyr166. V ještě další alternativě je negativní regulátor vazebný na místo na LFA-1 definován zbytky aminokyselin Lys 2 8 7 , Ile2 5 9, Leu29 8 , lle23 5 , Val157, Leu161, Ile306 , Leu3 02 , Tyr2 5 7 , Leu132, Val 2 3 3 , Val130, Lys3 05 , Ile25 5 , Tyr166, Phe134, Phe168, Phe153, Tyr3 07 , Val3 08 , Ile3 09, Thr231, Glu2 8 4 , Phe285, Glu301, Met154, Ile2 3 7 , Ile150 a Leu295. Regulátor vazebného místa LFA-1 je popsán v související US patentové přihlášce s názvem „LFA-1 Regulátory Binding Site and Uses Thereof,,, podané
2. dubna 1 999 pod číslem 09/285,477, která je zde začleněna jako odkaz jako celek. V jednom provedení zahrnují metody podle vynálezu použití buněk exprimuj ících buď LFA-1 nebo ICAM. V těchto metodách jeden nebo více vazebných partnerů je exprimováno v buňce, další •99*9« * 9 · 9 9* «99* · ··
Μ· · ·· *· 9*999* vazebný partner je buď purifikován a izolován, v tekutém vzorku (purifikovaný, částečně purifikovaný nebo surový) odebrán jednotlivě nebo v buněčném lysátu. Vynález také zahrnuje metody, kde LFA-1 i ICAM jsou exprimovány v buňkách. LFA-1 a ICAM vazebné partnery mohou být exprimovány na stejném buněčném typu nebo různých buněčných typech. Přednostně je polypeptid LFA-1 exprimován na leukocytech, např. lymfocytech, monocytech nebo granulocytech, a polypeptid ICAM je exprimován na endotelových buňkách.
Vynález také poskytuje metody pro inhibici adheze leukocytů na endotelové buňky zahrnující krok kontaktování uvedeného leukocytu s negativním regulátorem LFA-1 vazby na ICAM, který váže LFA-1, a uvedený negativní regulátor vazby místa regulátoru LFA-1 je zvolený ze skupiny sestávající z uspořádání, které váže diarylsulfid, nebo vazebného místa definovaného Ile259, Leu298 , Ile235, Val157, Leu161 a Ile306 z lidského polypeptidu LFA-1 cíl nebo domény LFA-1, která váže 3-chlor-4-(l-chlornaftalen-2-ylsulfanyl)fenylamin. Alternativně vazebná konformace diaryisulfidu je definována aminokyselinovými zbytky, jak je popsáno výše. Jsou předpokládány metody in vivo a in vitro.
Vynález také popisuje metody pro zlepšení patologie vycházející z LFA-1 vazby na ICAM, zahrnující krok podávání jednotlivci, který to potřebuje, negativního regulátoru LFA-1 vazby na ICAM v množství účinném pro inhibici LFA-1 vazby na ICAM, přičemž uvedený negativní regulátor vazby na LFA-1 regulátorové místo je zvolený ze skupiny sestávající z uspořádání, které váže diarylsulfid na místo definované Ile 259, Leu298 , ILE 23 5 , Val 157> Leu 161, a Ile 3 06 z lidského LFA-1 nebo domény LFA-1, která váže sloučeninu 3-chlor-4-(l-chlornaftalen-2-yl-sulfanyl) feny lamin.
Ve výhodném povedení zahrnují metody podle vynálezu použití diarylsulfidové sloučeniny pro inhibici LFA-1 na ICAM. Výhodná • « ·»*· · · · ··· · ·« ·· «··· metoda zahrnuje použití sloučeniny obecného strukturního vzorce (I), farmaceuticky přijatelné soli, nebo jeho proléčiva popsaných výše.
Léčebné metody
V daném rámci, že adheze leukocytů na endotelové buňky způsobuje patologické poruchy, poskytuje vynález metody zlepšení patologií spojených s akumulací leukocytů vyplývající z vázání LFA-1 na ICAM, který váže LFA-1, zahrnující krok podávání jednotlivci, který to potřebuje, množství inhibitoru LFA-1 vazby na ICAM, účinného pro inhibici LFA-1 vázání na ICAM, uvedeným inhibitorem vázání na LFA-1 na místě, reprezentovaném zbytky aminokyselin Ile 259, Leu 29S, Ile23 5 , Val157, Leu161 a Ile3 0 6. Příkladné stavy léčení zahrnují, bez omezení se na ně, zánětlivá onemocnění, autoimunitní choroby, reperfúzní zranění, infarkt myokardu, mrtvici, hemorargický šok, transplantaci orgánů a podobné. Metody podle vynálezu dále poskytují zlepšení řady patologií, včetně například, ale bez omezení se na ně, syndromu respirační úzkosti u dospělých, syndromu vícenásobného poškození orgánů sekundárního k septikémii, syndromu vícenásobného poškození orgánů sekundárního k traumatu, reperfúzního poranění tkáně, akutní glomerulonefritidy, reaktivní artritidy, dermatosy s akutními zánětovými složkami, mrtvice, tepelných poranění, Krohnovy nemoci, nekrotizující enterokolitidy, syndromu spojeného s transfuzí granulocytů, toxicity indukované cytokiny a nemoci vyvolané T buňkami.
Zánětlivá aktivace buněk a excesivní nebo neregulovaná produkce cytokinů (jako TNFa a IL-Ιβ) jsou také zahrnuty do chorob, jako je revmatická artritida, osteoartritida, artritida spojená s dnou, spondylitida, oftalmopatie spojená s tyroidem, Behcetova choroba, sepse, septický šok, endotoxický šok, gramnegativní sepse, grampozitivní sepse, syndrom toxického šoku, astma, chronická bronchitida, alergický syndrom respirační úzkosti, chronické plicní * · · ·♦·· · ·
zánětlivé onemocnění, jako je chronická obstrukční plicní choroba, silikóza, plicní sarkoidóza, reperfúzní poškození myokardu, mozku a končetin, fibróza, cystická fibróza, vznik keloidu, vznik jizvy, ateroskleróza, nemoci z odmítnutí transplantátu, jako je odhojení štěpu vs. reakce hostitele a odmítnutí aloimplantátu, chronická glamerulonefritida, lupus, zánětlivá střevní onemocnění, jako je vředová kolitida, nemoci spojené s proliferací lymfocytů, jako je leukémie, a zánětlivé dermatózy, jako je atopická dermatitida, lupénka, kopřivka, uveitida.
Další stavy charakterizované zvýšenými hladinami cytokinů zahrnují poškození mozku v důsledku mírného úrazu (viz J. Neurotrauma, 12, str. 1035- 1 043 (1995).; J. Clin. Invest., 91, str. 1421-1428 (1 993)), kardiomyopatii, jako je kognestivní selhání srdce (viz Circulation, 97, str. 1340-1341 (1998)), kachexii (sešlost), kachexii sekundární k infekci nebo zhoubnému bujení, kachexii sekundární k syndromu získané imunitní nedostatečnosti (AIDS), ARC (k AIDS vztažený komplex), horečnaté bolesti svalů v důsledku infekce, cerebrální malárii, osteoporózu a poruchy kostní resorpce, tvorbu keloidů, tvorbu jizev tkání a pyrexii.
Schopnost negativních regulátorů podle vynálezu léčit artritidu může být doložena na myším modelu s kolagenem indukovanou artritidou [Kakimoto, a kol., Cell Immunol 142·. 326-337 (1992)], na krysím modelu s kolagenem indukovanou artritidou [Knoerzer, a kol., Toxical Pathol. 2 5: 13-19 (1997)], na krysím modelu adjuvans artritidy [Halloran, a kol., Arthitis Rheum 39: 810-819 (1 996)] na krysím modelu s artritidou indukovanou streptokokovými buněčnými stěnami [ Schimmer, a kol. J. Immunol 160'. 1466-1477 ( 1 998)], nebo na modelu SCID-myši lidské revmatické artritidy [Oppenheimer-Marks a kol., J. Clin. Invest 101·. 1261-1272 (1998)].
···»·· · · e · * • · · · · · ·«· *«· « ·♦ ·· ·· ····
Schopnost negativních regulátorů léčit Lymskou artritidu může být demonstrována podle metody Grosse a kol., Science, 2/5:703-706, (1998).
Schopnost negativních regulátorů léčit astma může být demonstrována na myším modelu alergického astma podle metody Wegner a kol., Science 247 :459-459, (1990), nebo na myším modelu nealergického astma podle metody Bloemen a kol., Am. J. Respir. Crit. Care Med. 753: 521 -529, (1996).
Schopnost negativních regulátorů léčit zánětlivé plicní onemocnění může být doložena na myším modelu kyslíkem indukovaného plicního poškození podle metody Wegner a kol., Lung 170: 267-279, (1992), na myším modelu s plicním poškozením indukovaným imunním komplexem podle metody Mullinghan a kol. J. Immunol 154'. 1 350-1 363, (1995) , nebo na myším modelu plicního poškození indukovaného kyselinou podle metody Nagase, a kol., Am. J. Respir. Crit. Care Med. 154: 504-510, (1996).
Schopnost negativních regulátorů léčit zánětlivé onemocnění střev může být doložena na krysím modelu chemicky indukované kolitidy podle metody Bennet a kol., J. Pharmacol. Exp, Ther. 280: 988-1 000, (1997).
Schopnost negativních regulátorů léčit autoimunní diabetes může být doložena na NOD myším modelu podle metody Hasagawa a kol., Int. Immunol. 6: 83 1-838, (1 994), nebo na myším modelu diabetes indukovaného streptozotocinem podle metody Herrold a kol. Cell Immunol. 157; 489-500, (1994).
Schopnost negativních regulátorů léčit zánětlivé onemocnění jater může být doložena na myším modelu poškození jater podle metody Tanaka a kol., J. Immunol. 151: 5088-5095, (1993).
·· ·*·* »·
Schopnost negativních regulátorů léčit zánětlivé glomerulární poranění může být doložena na krysím modelu nefrotické sérové nefritidy podle metody Kawasaki, o kol., J. Immunol. 150'. 1047-1 083, (1993).
Schopnost negativních regulátorů léčit ozářením indukovanou enteritidu může být doložena na krysím modelu abdomimálního ozáření podle metody Panes a kol., Gastroenterology 108: 1 761-1769, ( 1 995).
Schopnost negativních regulátorů léčit pneumonitidu z ozáření může být doložena na myším modelu plicního ozáření podle metody Hallahan a kol., Proč. Nati. Acad. Sci (USA), 94: 6432-6437, (1997).
Schopnost negativních regulátorů léčit reperfúzní onemocnění může být doložena na izolovaném krysím srdci podle metody Tamiya a kol., Immunopharmacology 29(1): 53-63, (1995), nebo na psu pod anestezií podle modelu Hartman a kol., Cardiovasc. Pes. 30(1): 47-54, (1 995).
Schopnost negativních regulátorů léčit plicní reperfúzní onemocnění může být doložena na krysím modelu aloimplantátového reperfúzního poškození podle metody DeMeester a kol., Transplantation 62(1 0): 1 477-1485, (1996), nebo na krysím modelu plicního edemu podle metody Horgan a kol., Am. J. Physiol. 261(5): H1 578-H 1 584, (1991).
Schopnost negativních regulátorů léčit mrtvici může být doložena na krysím modelu mrtvice-cerebrální embolle podle metody Bowes a kol., Exp. Neurol. 1 1 9(2): 21 5-21 9, (1 993), na krysím modelu s ischemií-reperfusí střední cerebrální arterie podle metody Chopp a kol., Stroke 25{A\. 869-875, (1994), nebo na králičím modelu reversibilní ischemie míchy podle metody Clark a kol., Neurosurg
75(4): 623-627, (1991). Schopnost negativních regulátorů léčit cerebrální vasospasmus může být doložena na krysím experimentálním modelu vasospasmu podle metody Oshiro a kol., Stroke, 28:203 1 -203 8 (1997).
♦ 444 ··♦· ♦··· • · · · · · · • · · 9 # 4· • · * 4 4 4· · 4 4 44····
Schopnost negativních regulátorů léčit okluzí periferní arterie může být doložena na krysím modelu skeletní svalové ischemie/ reperfuse podle metody Gute a kol., Mol. Cell. Biochem. 179: 1 69-1 87, (1998).
Schopnost negativních regulátorů léčit odmítnutí štěpu může být doložena na myším modelu odmítnutí srdečního aloimplantátu podle metody Isobe a kol., Science 255: 1 125- 1 127, (1 992), na myším modelu ledvinové kapsle štítné žlázy podle metody Talento a kol. Transplantation 55: 41 8-422, (1993), na modelu opice cynomolgus s renálním aloimplantátem podle metody Cosimi a kol., J. Immunol. 144: 4604-4612, (1990), na krysím modelu nervového aloimplantátu podle metody Nakao a kol., Muscle Nerve 18: 93-102, (1995), na myším modelu s kožním aloimplantátem podle metody Gorczynski a Wojcik, J. Immunol. 152: 201 1-20 19, (1994), na myším modelu aloimplantátu rohovky podle metody He a kol., Opthalmol. Vis. Sci. 35: 32 1 8-3225, (1994), nebo modelu transplantace xenogenních buněk pankreatického ostrůvku podle metody Zeng a kol., Transplantation 58: 681 -689, (1994).
Schopnost negativních regulátorů léčit onemocnění štěp-vs.hostitel (GVHD) může být doložena na myším letálním GVHD modelu podle metody Harning a kol., Transplantation 52: 842-845, (1991).
Schopnost negativních regulátorů léčit rakovinu může být doložena na modelu lidské metastázy lymfomu (v myši) podle metody Aoudjit a kol., J. Immunol. 161: 2332-2338, (1998).
• • 9 « ·♦ · ·· 9«
♦ 9 · • • 9 • *
• 9 · · · • 9 • · 9 · •
• * · • · • 9 •
• 9 • · • · • 9 • •9 i
Farmaceutické prostředky
Předložený vynález dále popisuje farmaceutické prostředky, které obsahují diarylsulfid formulovaný společně s jedním nebo více farmaceuticky přijatelnými nosiči.
Farmaceutické prostředky podle tohoto vynálezu mohou být podávány lidem nebo jiným živočichům jakoukoliv vhodnou cestou. Například mohou být prostředky podávány orálně, rektálně, parenterálně, intracisternálně, intravaginálně, intraperitoneálně, topicky (jako prášky, masti nebo kapky), bukálně nebo nasálně. Termín „parenterální,, podávání, jak se zde používá, označuje typy podávání, které zahrnují intravenosní, intraarteriální, intramuskulární, intraperitoneální, intratekální, intrasternální, subkutánní a intraartikulární injekce a infuse.
Farmaceutické prostředky podle tohoto vynálezu pro parenterální injekce zahrnují farmaceuticky přijatelné sterilní vodné a nevodné roztoky, disperze, suspenze nebo emulze, stejně jako sterilní prášky pro vytvoření sterilních inj ikovatelných roztoků nebo disperzí těsně před použitím. Příklady vhodných vodných a nevodných nosičů, ředidel, rozpouštědel nebo nosičů zahrnují vodu, ethanol, polyoly (jako je glycerol, propylenglykol, polyethylenglykol a podobné) a jejich vhodné směsi, rostlinné oleje (jako je olivový olej) a injikovatelné organické estery, jako je ethyloleát. Vlastní fluidita může být udržována například použitím potahových materiálů, jako je lecitin, udržováním požadované velikosti částic v případě disperzí a použitím povrchově aktivních látek.
Tyto prostředky mohou rovněž obsahovat adjuvans, jako jsou konzervační látky, zvlhčovadla, emulgátory a dispergační prostředky. Prevence proti působení mikroorganismů může být zajištěna zavedením
Φ • ·· • • • • ♦ * ·
• • « • · • •
• • • • · • •
• 9 · • « • ·♦ ·
různých antibakteriálních a protiplí snových činidel, např. jako je paraben, chlor butanol, fenolsorbová kyselina a podobné. Rovněž může být žádoucí zahrnout do prostředků isotonická činidla jako jsou cukry, chlorid sodný a podobné. Prodloužená absorpce inj ikovatelné farmaceutické formy může být způsobena začleněním látek, které zpožďují absorpci, jako je aluminium-monostearát a želatina.
V některých případech, aby se prodloužil účinek léčiva, je vhodné zpomalit absorpci léčiva ze subkutánní nebo intramuskulární injekce. To může být doplněno použitím kapalné suspenze krystalického nebo amorfního materiálu se slabou rozpustností ve vodě. Rychlost absorpce léčiva potom bude záviset na jeho rychlosti rozpouštění, které, naopak, může záviset na velikosti krystalu a na krystalické formě. Alternativně je prodloužené absorpce parenterálně podávané formy léčiva dosaženo rozpuštěním nebo suspendováním léčiva v olejovém nosiči.
Injekční depotní formy jsou vyrobeny vytvořením mikroopouzdřených matricí léčiva v biodegradovatelných polymerech, jako je polylaktid-polyglykolid. V závislosti na použitém poměru léčiva k polymeru a povaze konkrétního polymeru může být regulována rychlost uvolňovaného léčiva. Příklady dalších biodegradovatelných polymerů zahrnují poly(ortoestery) a polyanhydridy. Depotní injekční prostředky jsou také připraveny zachycením léčiva v liposomech nebo mikroemulzích, které jsou kompatibilní s tělesnou tkání.
Injekční prostředky mohou být sterilizovány například filtrací přes filtr zachytávající bakterie nebo viry, nebo vnesením sterilizujících látek ve formě sterilní pevné kompozice, která může být rozpuštěna nebo dispergována ve sterilní vodě nebo jiném sterilním injekčním mediu těsně před použitím.
Pevné dávkové formy pro orální podávání zahrnují kapsle, tablety, pilule, prášky a granule. V těchto pevných dávkových formách je účinná sloučenina smísena s alespoň jedním inertním, farmaceuticky • · ·»·*
9· ·« * * · · · · • ·♦♦♦ ·«« * · * · « • · ···· · · « •·· · ·♦ ·· ♦ · ···· přijatelným excipientcm nebo nosičem, jako je citrát sodný nebo fosforečnan vápenatý, a/nebo plniva nebo nastavovadla jako jsou škroby, laktosa, sacharosa, glukosa, mannitol a kyselina křemičitá, (b) pojivá, jako je například karboxymethylcelulosa, gumy (jako algináty, arabská guma), želatina, polyvinylpyrrolidon a sacharosa, (c) zvlhčovadla, jako jc glycerol, (d) dezintegrační prostředky, jako je agar-agar, uhličitan vápenatý, bramborový nebo tapiokový škrob, kyselina alginová, některé silikáty a uhličitan sodný, (e) látky pro zpoždění rozpouštění, jako je parafin, (f) urychlovače absorpce, jako jsou kvartérní amonné sloučeniny, (g) zvlhčovadla, jako je například cetylalkohol a glycerol-monostearát, (h) absorbenty, jako je kaolin a bentonitová hlína, a (1) mazadla, jako je talek, stearát vápenatý, stearát hořečnatý, pevné polyethylenglykoly, laurylsulfát sodný, a jejich směsi. V případě kapslí, tablet a pilulek mohou také dávkové formy obsahovat pufrovací činidla.
Pevné prostředky podobného typu mohou být také použity jako plniva v měkkých a tvrdých plněných želatinových kapslích, použitím takových excipientů, jako je laktosa nebo mléčný cukr, stejně jako vysokomolekulárních polyethylenglykolů a podobných.
Pevné dávkové formy tablet, dražé, kapslí, pilulek a granulí mohou být připraveny s povlaky a pouzdry, jako jsou enterické povlaky a jiné povlaky, dobře známé ze stavu techniky týkajícího se farmaceutických formulací. Mohou popřípadě obsahovat zakalující látky a rovněž mohou být z prostředků, které uvolňují pouze účinnou složku (složky), nebo výhodně v určité části trávícího traktu, popřípadě ve formě zpožděného uvolňování. Příkladné materiály zahrnují polymery mající rozpustnost citlivou na pH, jako materiály dostupné jako Eudragit®. Příklady zapouzdřujících substancí, které mohou být použity, zahrnují polymerní látky a vosky.
* ·· ♦ ··· • 4 « «
• • • 4 • 9 • ·
* · i · • · * • • 4 • •
• • • * · * • *
• • »· ♦ · • · · «
Účinné sloučeniny mohou také být v mi kro-zapouzdřené formě, pokud je to vhodné, s jedním nebo více z výše zmíněných excipientů.
Kapalné dávkové formy pro orání podávání zahrnují farmaceuticky přijatelné emulze, roztoky, suspenze, sirupy a elixíry. Spolu s aktivními sloučeninami mohou kapalné dávkové formy obsahovat inertní ředidla běžně používaná ve stavu techniky, jako jsou například voda a jiná rozpouštědla, solubilizační látky a emulgátory jako je ethylalkohol, isopropylalkohol, ethylkarbonát, ethylacetát, benzylalkohol, benzyl-benzoát, propylenglykol, 1,3-butylenglykol, dimethylformamid, oleje (konkrétně z bavlníkových semen, podzemnice olejně, kukuřičný olej, olej z klíčků, olivový, ricínový a sezamový olej), glycěrol, tetrahydrofurfurylalkohol, polyethylenglykoly a estery mastných kyselin sorbitanu, a jejich směsi.
Kromě inertních ředidel mohou také orální kompozice zahrnovat adjuvans, jako jsou zvlhčovadla, emulgátory a suspendační činidla, sladidla, ochucovadla a parfemační látky.
Suspenze, spolu s účinnými sloučeninami, mohou obsahovat suspendační činidla, jako jsou například ethoxylované isostearylalkoholy, polyoxyethylensorbitol a sorbitanové estery, mikrokrystalická celulosa, metahydroxid hlinitý, bentonit, agar-agar a tragakant, a jejich směsi.
Prostředky pro rektální nebo vaginální podávání jsou přednostně čípky, které mohou být připraveny smísením sloučenin podle vynálezu s vhodnými nedráždivými excipienty nebo nosiči, jako je kakaové máslo, polyethylenglykol nebo čípkový vosk, které jsou pevné při teplotě místnosti ale kapalné při tělesné teplotě a tudíž tají v rektální nebo děložní dutině a uvolňují účinnou sloučeninu.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být také podávány ve formě liposomů. Jak je známo ze stavu techniky, liposomy jsou obecně odvozeny od fosf o lipidů nebo jiných lipidových substancí. Liposomy jsou tvořeny mono- nebo multilamelárními hydratovánými tekutými krystaly, které jsou dispergovány ve vodném prostředí. Použit může být jakýkoliv netoxický, fyziologicky přijatelný a metabolizovatelný lipid schopný tvorby liposomů. Předložené prostředky v liposomové formě mohou obsahovat, spolu se sloučeninou podle předloženého vynálezu, stabilizátory, konzervační prostředky, excipienty a podobné. Preferovanými lipidy jsou fosfolipidy a fosfatidyl-choliny (lecitiny), jak v přírodní tak syntetické formě. Metody tvoření liposomů jsou ze stavu techniky známé. Viz například Prescott, Ed., Methods in Cell Biology, Volume XIV, Academie Press, New York, N.Y. (1976), str.33 a dále.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být použity ve formě farmaceuticky přijatelných solí odvozených z anorganických nebo organických kyselin. „Farmaceuticky přijatelnými solemi,, jsou míněny ty soli, které jsou v rozsahu znění medicínských nařízení vhodné pro použití v kontaktu s lidskými tkáněmi a tkáněmi nižších živočichů bez vzniku toxicity, podrážděni, alergické odezvy a podobně a jsou spojeny s výhodným poměrem výhody/zisku. Farmaceuticky přijatelné soli jsou velmi dobře známé ze stavu techniky. Například S. M. Berge, a kol., popisují farmaceuticky přijatelné soli v detailech v J. Pharmaceutical Sciences, 66:1 (1 977). Soli mohou být připraveny in šitu v průběhu konečné izolace a purifikace sloučenin podle vynálezu nebo samostatně reakcí funkce volné báze s vhodnou kyselinou. Příkladné soli adičnich solí kyselin zahrnují, ale neomezují se na ně, acetát, adipát, alginál, citrát, aspartát, benzoát, benzensulfonát, bisulfát, butyrát, kafrát, kafrosulfonát, diglukonát, glycerofosfát, hemisulfát, heptanoát, hexanoát, fumarát hydrochlorid, hydrobromid, hydrojodid, 2-hydroxy-ethansulfonát (isethionát), laktát, maleát, methansulfonát, nikotinát, 2-naftalensulfonát, oxalát, pamoát, pektinát, »· ·0 ·♦ · · · a ··*· ♦ * · · · · · * · ··<···♦ « «»* · 0 · · 0 ♦ · * 0 · ··· « 00 «· ·0 ··*· persulfát, 3-fcnyl-propionát, pikrát, pivalát, propionát, s u k c i n á t, tartrát, thiokyanát, fosfát, glutamát, bikarbonát, p-toluensulonát a undekanoát. Příklady kyselin, ktcrc mohou být použity pro tvorbu farmaceuticky přijatelných adičních kyselinových solí zahrnují anorganické kyseliny jako je kyselina bromovodíková, kyselina chlororvodíková, kyselina sírová a fosforečná kyselina a takové organické kyseliny, jako je kyselina šťavelová, kyselina maleinová, jantarová kyselina a kyselina citrónová.
Také skupiny obsahující bázický dusík mohou být kvarternizovány s takovými látkami, jako jsou halogenidy nižších alkylů jako methyl-, ethyl-, propyl- a butylchloridy, bromidy a jodidy; dialkylsulfáty jako dimethyl-, diethy 1-, dibutyl- a diamylsulfáty; halogenidy s dlouhými řetězci jako decyl-, lauryl-, myristyl- nebo stearylchloridy, bromidy a jodidy; arylalkylhalogenidy jako benzyl- a fenethylbromidy a další. Jsou tedy získány produkty rozpustné nebo dispergovatelné ve vodě nebo v oleji.
Bázické adiční soli mohou být připraveny in šitu v průběhu konečné isolace a purifikace sloučenin podle vynálezu reakcí části obsahující karboxylovou kyselinu s vhodnou bází jako je hydroxid, uhličitan nebo hydrogenuhličitan farmaceuticky přijatelného kationtu kovu nebo s amoniem nebo organickým primárním, sekundárním nebo terciárním aminem. Farmaceuticky přijatelné bázické adiční soli zahrnují kationty na bázi alkalických kovů nebo kovů alkalických zemin, jako jsou soli lithné, sodné, draselné, vápenaté, hořečnaté a hlinité a podobně, a netoxické kvarterní amonné a aminové kationty včetně amonia, tetramethylamonia, tetraethylamonia, methylaminu, dimethylaminu. trimethvlaminu, triethylaminu, diethvlaminu, ethylaminu a podobně. Další organické aminy vhodné pro vytvoření adičních solí s bázemi zahrnují ethylendiamin, ethanolamin, diethanolamin, piperidin, piperazin a podobné.
• * ·♦ φφ·* ···♦ »·· · * φ · · φφ • φ · · φ ♦ φ φφ φ ·♦·· φ«· · · φ «· φ · · · · · φ φφ »·· φ ·· φφ *· φφφφ
Dávkové formy pro topické podávání sloučenin podle vynálezu zahrnují prášky, spreje, mastě a inhalační přípravky. Účinná sloučenina je smísena za sterilních podmínek s farmaceuticky přijatelným nosičem a potřebnými konzervačními prostředky, pufry nebo propelanty, které lze vyžadovat. Oftalmické formulace, oční masti, prášky a roztoky jsou také uvažovány do rozsahu tohoto vynálezu.
Skutečná dávkovaná množství účinných složek ve farmaceutických prostředcích podle tohoto vynálezu se mohou měnit tak, aby se získalo množství účinné sloučeniny (sloučenin), které je účinné pro dosažení požadované terapeutické odezvy pro konkrétního pacienta, prostředky a typ podávání. Zvolená dávka bude záviset na účinnosti konkrétní sloučeniny, cestě podávání, závažnosti stavu, který se má léčit, a na stavu a předchozí léčbě pacienta, který má být léčen. Nicméně je to na odborníkovi znalém stavu techniky zahájit s dávkami sloučeniny v množstvích nižších než je požadováno pro dosažení požadovaného léčebného účinku a postupně zvyšovat dávku až do dosažení požadovaného účinku.
Obecně jsou hladiny dávek od asi 0,1 do asi 1000 mg, asi 0,5 až asi 500 mg, asi 1 až asi 250 mg, asi 1,5 až asi 100, a výhodně asi 5 až asi 20 mg účinné látky na kilogram tělesné hmotnosti na den podávány orálně nebo intravenosně pacientům-savcům. Pokud je to potřebné, mohou být účinné denní dávky rozděleny na několik dávek za účelem podávání, jako např. na dvě až čtyři samostatné dávky na den.
Příklady provedení vynálezu
Předložený vynález bude dále ilustrován následujícími příklady. Příklad 1 popisuje vysoce výkonný test pro negativní regulátory LFA-1 vazby na ICAM, který váže LFA-1. Příklad 2 se týká testu vazebnosti ke zhodnocení schopnosti různých sloučenin inhibovat LFA-1 vazbu na
10AM. Příklad 3 popisuje syntézu negativních regulátorů. Příklad 4 poskytuje výsledku testů založených na buňkách za použití negativních regulátorů.
Příklad 1
Vysoce výkonný screening inhibitorů navázání LFA-l/ICAM
Pro účely identifikace inhibitorů LFA-l/ICAM-1 vazby byl pro efektivní testovaní velkého počtu chemických sloučenin z chráněné knihovny určen test vysoce výkonného screeningu (HTS) následným způsobem.
Předběžné experimenty se prováděly proto, aby se definovalo lineární rozmezí interakce LFA-1 /ICAM-1. Byl připraven rekombinantní ICAM-1/IgGl fuzní protein (obsahující plnou délku ICAM-1), jak je popsáno v amerických patentech US 5 770 686, 5 837 478 a 5 869 262, každý z nich je zde začleněn jako odkaz. Fúzní protein byl biotinylován použitím kitu získaného z Pierce Chemical (Rockford, IL). Koncentrace biotinylovaného proteinu (BiolglCAM-1) byla stanovena měřením absorbance při 280 nm, a dále byla připravena řada ředění, aby se získalo finální rozmezí koncentrace 50 pg/ml až 0,008 pg/ml. Prováděla se titrace BiolgICAM-l s proteinem nejprve . rozděleným do misek na testovací plotně. Do každé misky byl přidán rekombinantní LFA-1 o stejné koncentraci a experiment (jak bude popsáno dále) probíhal do ukončení. Obsah vazeb byl stanoven pro každou misku, a z postupného grafického záznamu výsledků byla pro další experimenty zvolena jediná koncentrace BiolgICAM-l. Podobným způsobem byla titrována LFA-1 použitím koncentrace BiolgICAM-l zvolené, jak bylo popsáno výše.
Dne 1 postupu HTS byla záchytová protilátka , např. neblokující anti-LFA-l monoklonální protilátka (TS2/4,1; ATCC&HB244), zředěna na plotně pufrem pro povlékání (50 mM uhličitanu sodného/
9··«·· 9 · · · 9 · • · · · · · · · • « « ♦♦ · · · · · ♦ hydrogcnuhličitan, 0,05% ProClin® 300, pH 9,6) na finální koncentraci 2 pg/ml. Imminol® 4 (Dynex Technologies, Chantilly, VA) misky v plotnách byly potaženy 100 μΐ roztoku zředěné protilátky na misku a inkubace probíhala přes noc při 4 °C, Dne 2 byly plotny ohřátý na teplotu místnosti a promyty dvakrát promývacím pufrem (vápníku a hořčíku prostý fosfátový pufrovací fyziologický roztok, CMF-PBS) s 0,05% Twcen®-20). Do každé misky bylo přidáno 200 μΐ blokovacího roztoku ( 5% želatina z rybí kůže v CMF-PBS s 0,05% ProClin® 300) a inkubace blokování probíhala při teplotě místnosti po 30 min.
Blokovací roztok byl odstraněn odsátím a plotny nebyly promyty. LFA1 byla zředěna na finální koncentraci 1 pg/ml v testovacím pufru (1% želatina z rybí kůže a 2 mM MgCh v CMF-PBS) a do každé misky bylo přidáno 100 μΐ. Inkubace se prováděla po jednu hodinu a plotny byly promyty dvakrát promývacím pufrem.
Byl připraven 2X zásobní roztok BiolgICAM-l obsahující 0,1 μ g/ml BiolgICAM-l a 4 μΜ krystalické violeti (zjištěno, že je aktivátorem LFA-l/ICAM-1 vazby) v testovacím pufru (EG&G Wallac, Gaithersburg, MD). Podíly (50 μΐ) sdružených chemikálií (22 sloučenin/spojeno ve 100% DMSO) z knihovny chemikálií byly přidány do misek, následovalo přidání 50 μΐ 2X zásobního roztoku BioIglCAM1 za získání finálního objemu pro testování 100 μΐ (obsahujícího 2% DMSO). Plotny byly inkubovány po jednu hodinu při teplotě místnosti a promyty jednou promývacím pufrem. Streptavidin značený europiem (Eu-SA; #1244-360, EG&G Wallac) byl zředěn 1:500 v testovacím pufru, 100 μΐ zředěného Eu-SA bylo přidáno do každé misky, a plotny byly inkubovány při teplotě místnosti po jednu hodinu.
Plotny byly promyty osmkrát promývacím pufrem, do každé misky bylo přidáno 100 μΐ DELFIA® roztoku pro zvýšení účinnosti (EG&G Wallac) zředěného 1:2, a plotny byly protřepávány po dobu 5 minut použitím Wallacovy třepačky nejvyšší rychlostí. Plotny byly sečteny použitím fluorescenčního čítače (fluorimetru) Wallac DELDIA *. Kontrolní vzorky zahrnovaly jak pozitivní, tak negativní misky a misky s 50% navázáním stanovené za použití blokovacích protilátek např. anti-LFA-1 monoklonální protilátky (TSl/22,1, ATCC&HB202) nebo anti-ICAM-1 monoklonální protilátky. Byly identifikovány soubory chemikálií v miskách, vykazující 50% nebo vyšší inhibici LFA-1 vazeb na ICAM a experiment byl opakován s použitím jednotlivých chemikálií z těchto souborů. Byly identifikovány inhibitory LFA-l/ICAM-1 vazeb, a další testování se provádělo za účelem stanovení závislosti dávky inhibiční aktivity. Další studie vybraných sloučenin byla prováděna použitím biochemických a buněčných testovacích technik.
Sloučeniny byly shrnuty do skupin podle běžných strukturních znaků a bylo zjištěno, že podskupina (uvedená níže) sloučenin zahrnovala charakteristickou diarylsulfidovou strukturu.
3-Chlor-4-(l- chlor-naftalen-2-ylsulfanyl)-fenylamin
- (3-Nitr o-4-fenyl sulfanyl-feny l)ethanon l-(3-Nitro-4-fenylsulfanyl-fenyl)-ethanonoxim
5- Trifluoromethyl-2-fenylsulfanyl-benzonitril
1- (3,5-dichlorofenyl)-3-fenylsulfanyl-pyrrolidin-2,5-dion Bis-2,4,6-Trinitrofenyl-sulfid
2- Methyl-l-(2-o-tolylsulfanyl-fenyl)-lH-pyrrol
3- [2-(4-Chlor-2-nitro-fenylsulfanyl)-fenylamino-3H-isobenzofuran-lon
4- (Benzothiazol-2-yl sulfanyl)-3-chlor-fenylamin
2-N itro-4-chlorfenyl-(2 'amino fenyl)-sulfid
6- Amino-2-chlorfenyl-(4'-methylfenyl)-sulfid
4-Nitrofenyl-(2'-chlorfenyl)-sulfid 2,4-Dinitrofenyl-(4'-chlorfenyl)-sulfid 4-Aminofenyl-(2'-chlorfenyl)-sulfid · · * · · · · ·♦ • · · · · · · · · • · 4 · · · • · · · · · · 4* 4 · · · · ·
2, 4 -Diaminofenyl-(4'-isopropylfenyl)-sulfid
Za účelem optimalizace kapacity negativních regulátorů identifikovaných sloučenin byly různé diaryl sulfidové deriváty zkoumány, jak je popsáno dále v příkladu 3. Další diarylsulfidové deriváty jsou popsány v související patentové přihlášce o názvu „Cell Adhesion-Inhibiting Antiinflamatory and Immune Suppressive Compounds,, podané 2. dubna 1999 pod číslem 09/286 645, která je zde celá začleněna jako odkaz.
Příklad 2
A. Test biochemické interakce ICAM-l/LFA-1
Sloučeniny, které antagonizují interakci mezi ICAM-1 a LFA-1 mohou být identifikovány, a jejich aktivity kvantifikovány, použitím biochemických testů a testů na bázi buněk. Primární biochemický test měří schopnost sloučeniny z hlediska blokování interakce mezi LFA-1 a jeho adhezním partnerem ICAM-1, jak je popsáno dále.
V tomto biochemickém testu se použije 100 μΐ potilátky antiLFA-1 ve spojení s 5 pg/ml Dulbeccově solném roztoku pufrovaném fosfátem (D-PBS) k potažení misek 96miskové mikrotitrační desky přes noc při 4 °C. Potom byly misky promyty dvakrát promývacím pufrem (CMF-PBS, 0,05% Tween® 20) a blokovány přidáním 200 μΐ DPBS obsahujícím 5% želatinu z rybí kůže. Potom byl do každé misky přidán rekombínantní LFA-1 (100 μΐ z 0,7 pg/ml) v D-PBS. Inkubace pokračovala po 1 hodinu při teplotě místnosti a misky byly promyty dvakrát promývacím pufrem. Postupné zřeďování sloučenin zkoumaných jako ICAM-l/LFA-1 negativní regulátory, připravené jako lOmM zásobní roztoky v DMSO, byly zředěny v D-PBS, 2 mM MgCb , 1% rybí želatině a 500 μΐ každého zředění bylo přidáno do každé misky, následovalo přidávání 50 μΐ 0,8 pg/ml BiolgICAM-l do misky, a
desky byly inkubovány při teplotě místnosti po 1 hodinu. Potom byly misky pro my ty dvakrát vodným pufrcm a 100 μΐ eur opiem značeného Streptavidinu Eu-SA (EG&G Wallac) zředěného 1:100 v Delfia® testovacím pufru (EG&G Wallac) bylo přidáno do misek. Inkubace probíhala po 1 hodinu při teplotě místnosti. Misky byly promyty osmkrát vodným pufrem a do každé misky bylo přidáno 100 μΐ zesilujícího roztoku (EG&G Wallac). Inkubace probíhala po 5 minut za konstantního míchání. Časově rozložená fluorimetrická měření byla prováděna použitím Victor 1420 víceznačkového čítače (EG&G Wallac) a procentuální inhibice každé uvedené sloučeniny je vypočtena použitím následující rovnice:
Průměr OD hm. /sloučeniny minus základ % inhibice = 100 x { 1 - -------------------------------------- jprůměr OD hm. fo. sloučeniny minus základ kde „základ,, označuje misky, které nejsou potaženy protilátkou antiLFA-1.
B. Test adheze ICAM-l/JY-8 buněk
Biologicky odpovídající aktivita sloučenin podle tohoto vynálezu je potvrzena použitím testu adheze na bázi buněk, který měří jejich schopnost blokovat přilnavost JY-8 buněk (lidská EBV- transformovaná B buněčná linie exprimující LFA-I na svém povrchu) k imobilizovaným ICAM-1, a to následujícím postupem. Tento test se může provádět s nebo bez přidání IL-8. Pro IL8 stimulaci standardních JY-8 buněk bylo přidáno 30 ng/ml IL-8 ve 30 minutové inkubaci při 37 °C s buňkami.
Pro měření inhibiční aktivity v testu adheze na bázi buněk byly 96-miskové mikrotitrační desky potaženy 70 μΐ rekombinantního ICAM-I/Ig při koncentraci 5 pg/m v CMF-PBS přes noc při 4 °C. Potom byly misky promyty dvakrát s D-PBS a blokovány přidáním 200 μΐ D-PBS , 5% želatinou z rybí kůže inkubací po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Fluorescenčně značené JY-8 buňky (50 μΐ při 2 x 10č buněk/ml v RPMI- 1 640/1% fetálního bovinního séra(FBS)) byly vloženy do misek. Pro fluorescenční označení JY-8 buněk bylo 5 x 106 buněk promytých jedenkrát v RPMI- 1640 resuspendováno v 1 ml RPMI 1640 obsahujícím 2 μΜ Calcein AM (Molekulární sonda, OR), byly inkubovány při 37 °C po 30 minut a promyty jedenkrát s RPMI1640/1% fetálním bovinním sérem (FBS). Zředění sloučenin, které mají být testovány na ICAM-l/LFA-1 antagonistickou aktivitu, byly připraveny v RPMI-1640/1% FBS z 10 mM zásobních roztoků v DMSO, a 50 μΐ podíly byly přidány duplicitně do misek. Mikrotitrační desky byly inkubovány po 45 minut při teplotě místnosti a misky byly jedenkrát jemně promyty s RPMI -1640/1% FBS. Fluorescenční intenzita byla měřena v odečítači fluorescenční desky s excitací vlnové délky při 495 nm a vlnovou délkou emise při 530 nm. Procentická inhibice zkoumané sloučeniny při dané koncentraci byla vypočtena použitím následující rovnice:
průměr OD hm/sloučeninu % inhibice = 1 00 x { 1 průměr OD hm/o sloučeniny
C. Test adheze ICAM-3/JY-8 buněk
U sloučenin podle předloženého vynálezu bylo doloženo, že působí prostřednictvím interakce s integrinem LFA-1, konkrétně ·* • ·♦· «· · · vázáním na ctl doménu, o které je známo, že je podstatná pro adhezi LFA-1 na řadu buněčných adhezních molekul. Očekává se, že tyto sloučeniny by měly blokovat interakci LFA-1 s dalšími CAMy. Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být zhodnoceny pro jejich schopnost blokovat adhezi buněk JY-8 k imobilizovaným ICAM3, a to následujícím postupem:
Pro měření inhibiční aktivity v testu adheze na bázi buněk byly 96-miskovc mikrotitrační desky potaženy 50 ICAM-3/Ig při koncentraci 10 pg/ml v CMF-PBS přes noc při 4 °C. Potom byly misky promyty dvakrát s D-PBS a blokovány přidáním 100 μΐ D-PBS, l%albuminu bovinního séra (BSA) inkubací po jednu hodinu při teplotě místnosti, a promyty jedenkrát RPMI-1640 / 5% tepelně inaktivováným FBS (adhezní pufr). Zředění sloučenin, které mají být testovány na ICAM3/LFA-l antagonistickou aktivitu, byla připravena v adhezním pufru z 10 mM zásobních roztoků v DMSO, a podíly 100 μΐ byly přidány duplicitně do misek. JY-8 buňky (100 μΐ při 0,75 x 106 buněk/ml v adhezním pufru) potom byly vloženy do misek (s nebo bez 30 ng/ml IL-8). Mikrotitrační desky byly inkubovány po 30 minut při teplotě místnosti; buňky, které přilnuly, potom byly fixovány s 50 μΐ 14% glutaraldehyd/D-PBS a inkubace probíhala dalších 90 minut. Misky byly jemně promyty dlbO; bylo přidáno 50 μΐ dH2O, následovalo 50 μΐ 1% krystalové violeti. Po pěti minutách byly desky promyty dvakrát dH2O a do každé misky byly přidáno 225 μΐ ethanolu, aby se z buněk extrahovala krystalová violeť. Absorbance byla měřena při 570 nm v deskovém čítači ELISA. Procentická inhibice zkoumané sloučeniny je vypočtena použitím následující rovnice:
% inhibice = 100 x průměr OD hm/sloučeními
průměr OD hm/o sloučeniny
Příklad 3
Syntéza negativních regulátorů
Syntéza různých diarylsufidových sloučenin podle vynálezu je popsána dále.
Obecné postupy a výchozí materiály
Obecně řečeno, rozpouštědla byla zakoupena bezvodá a nebyla dále sušena nebo purifikována, a výchozí materiály byly dobře komerčně dostupné. Tenkovrstvá chromatografie (TLC) byla provedena za použití.E. Měrek., silikagel 60 F254, 0,25 mm, skleněné nebo hliníkové potažené plotny, nebo silikagelové Analtech uniplotny (250 mikronů siliky). Vizualizace bylo dosaženo použitím UV. Uvedená Rf indikují jedinou detekovanou skvrnu. Mžiková chromatografie se prováděla na E. Měrek silikagelu 60, 230-400 mesh. Spektra nukleární magnetické rezonance (NMR) byla zaznamenávána na spektrometrech Bruker DPX 300 nebo Varian 300 Gemini 2000. Chemické konverze jsou uváděny v dílech na milion dílů (ppm - parts per million) ve směru klesajícího pole z trimethylsilanu (TMS). Kuplovací konstanty jsou v Hz. V jiných případech byla NMR spektra zaznamenávána použitím spektrometru Unity XL-200. Hmotová spektra byla zaznamenávána na buď VG 70 SEG zařízení na Universitě ve Washingtonu, Department of Medicinal Chemistry, Mass Spectrometry Facility (vysoká resoluce) nebo na spektrometru Finnigan Mat TSQ 70 (nízká resoluce). Jsou zaznamenány pouze molekulární ionty. Elementární analýzy byly uskutečňovány Quantitative Technologies, lne.
} ) · ···· ··♦ ···· · ·······«· v·· « ·· ·♦ ·· ··♦·
A. Obecná syntéza-mctoda A: Aminodiarylsulfidy .____Obecný popis syntézy metody A
Jeden molární ekvivalent (ekv.) požadovaného thiolfenolu a 1 molární ekvivalent konkrétní nitroarylové sloučeniny byly vloženy do suché baňky pod dusíkem a rozpuštěny v suchém acetonu. Byl přidán jeden a půl molárního ekvivalentu bezvodého uhličitanu draselného (K2CO3) a směs byla intenzivně míchána přes noc. Potom byla reakční směs zředěna etherem, promyta nasyceným NaHCOa, 3% NaHSO4 a nasyceným NaCl. Organické vrstvy byly sušeny nad Na2SO4 a filtrovány. Potom byl přidán heptan a roztok byl koncentrován varem, až byla většina etheru odstraněna. Během chlazení krystalizoval nitrodiarylsulfid.
Produkt byl shromážděn filtrací, promyt pentanem a sušen ve vakuu.
Jeden molární ekvivalent diarylsulfidu a 5 molárních ekvivalentů chloridu cínu dihydrátu bylo rozpuštěno v ethanolu (10 až 30 objemů). Směs byla zahřívána na 60 °C v olejové lázni a byla přidána koncentrovaná HC1 (10 až 30 objemů). Po třech hodinách byla reakční směs ponechána ochladit a bylo přidáno 20 až 60 objemů ledu. Směs byla neutralizována na pH 10-12 přidáním 5 N NaOH. Směs byla extrahována dvakrát etherem a spojené etherové extrakty byly promyty nasyceným NaHCCh a nasyceným NaCl. Organická vrstva byla sušena nad Na2SO4, filtrována a rozpouštědlo bylo stripováno rotační odparkou, Výsledná pevná látka nebo olej byly odebrány v etheru a přibližně 5 molárních ekvivalentů 1 N PICÍ v etheru bylo přidáno po kapkách. Získaná pevná látka byla spojena filtrací, promyta etherem a sušena ve vakuu.
Obecná metoda syntézy A je znázorněna schématicky dále, kde Xje halogen, např. chlor.
2. Konkrétní příklad metody A obecně syntézy
Metoda A obecné syntézy byla použita, jak je konkrétně popsáno * dále, s tou výjimkou, že byly použity granule cínu namísto preferovaného dihydrátu chloridu cínu, uvedeného ve schématu výše.
2,4-Dichlorfenyl-(2'-chlor-4'-nitrofenyl)-sulfid
1,54 g (8,60 mmol) 2,4-dichlorthiofenolu a 1,65 g (1 ekv., 8,60 mmol) 3,4-dichlornitrobenzenu bylo vloženo do suché baňky pod atmosférou dusíku a rozpuštěno ve 20 ml suchého acetonu. Bylo přidáno 1,78 g (1,5 ekv., 12,9 mmol) bezvodého uhličitanu draselného (K2CO3) a směs byla magneticky míchána po 20 hodin. Reakční směs potom byla zředěna 150 ml etheru a potom byla promyta nasyceným ·· ···· ·· ·· • · 9 · · · 9
NaHCO3 (2 x 75 ml), 3% NaHSO4 (2 x 75 ml) a nasyceným NaCl (2 x ml). Organická fáze potom byla opět sušena nad bezvodým Na2SO4 a filtrována. Potom bylo přidáno 50 mi heptanu a roztok byl koncentrován na přibližně 50 ml varem v parní lázni. Během ochlazování se tvořily krystaly o vysoké kvalitě. Tyto pak byly spojeny
999 9 *· *· »9 ···· filtrací, promyty třemi podíly pentanu a sušeny ve vakuu (70 °C, 0,05 mm Hg, 2 hodiny). Bylo získáno 1,43 g (50% výtěžek) žlutých krystalů,
t.t. 145-146 °C, Rf 0,37 (Ethylacetát [EtAc]/Heptan, 1:20).
'H NMR (CDCb) 6,71 (d, J = 8,9, 1H), 7,38 (ds z d, J, = 2,2, J2 = 8,2, 1H), 7,59 (d, J = 8,2, 1H), 7,63 (d, J = 2,2, 1H), 7,94 (d zd, J, = 2,2, J2 = 8,9, 1H), 8,26 (d, J = 2,5, 1H). MS (El) m/z 333 (M + , 98). Anal. vypočteno pro C12H6C13NO2S: C, 43,08; H, 1,81; N, 4,19. Nalezeno: C, 43,06; H, 1,77; N, 4,02.
3-Chlor-4-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-fenyiamin hydrochlorid
0,680 g (2,03 mmol)
2,4-Dichlorfenyl-(2 '-chlor-4'-nÍtrofenyl)sulfid a 0,844 g (3,5 ekv., 7,44 mmol) cínových granulí bylo suspendováno ve 20 ml koncentrované HC1. Za intenzivního míchání bylo vše zahříváno k refluxu po dva dny. Směs byla ponechána ochladit na teplotu místnosti a potom byla zředěna 50 ml ledu. Za míchání byla tato směs neutralizována na pH 10 přidáním přibližně 80 ml 5 N NaOH. Ta byla potom extrahována etherem (2 x 100 ml). Spojené organické extrakty byly promyty 100 ml nasyceného NaHCO3 a 2 x 100 ml nasyceného NaCl. Tyto byly potom sušeny nad Na2SO4 a filtrovány. Potom byly koncentrovány na rotační odparce za získání hnědého oleje. Olej byl odebrán v 50 ml etheru a potom byly přidány 4 ml IN HC1 v etheru, po kapkách, za získání bílé pevné látky. Ta byla spojena filtrací, promyta několika podíly etheru a sušena (90 °C, 3 hodiny, 0,05 mm Hg). Bylo získáno 0,548 g (79% výtěžek) bílé pevné látky, t.t. 1 83-1 85 °C, Rf 0,33 (EtAc/Heptan 1:2 Hm/ 1% TEA). ’H NMR (DMSO-d6) 6,55 (d, J = 8,6, 1H), 6,66 (d z d, Ji = 2,5, J2 = 8,6, 1H), 6,89 (br s, 3H), 6,89 (d, J • ·· ···» 9··· • 9*99*9« ·*·· · ♦ · « « 9 9· ····99· «9* 9 ·· ·· ····♦·
- 2,5, 1Η), 7,29 (d, J - 2,2, 1H), 7,32 (d, J = 2,2, 1H), 7,62 (d, J -
2,2, III). MS (El) m/z 303 M + [100]. ). Anal. vypočteno pro C12HrC1:JNS. HC1: C, 42,26; H, 2,66; N, 4,11. Nalezeno: C, 42,39; H, 2,57; N, 4,14.
4.____Další příklady sloučenin připravených metodou A obecné syntézy
Následující sloučeniny byly připraveny z komerčně dostupných reagens použitím metody A obecné syntézy. Jsou poskytnuty výchozí thiolové a nitroarylové sloučeniny, spolu s meziproduktem (thiol + nitroaryl —> meziprodukt)
3-Chloro-4-(2-chiorofenylsulfanyl)-fenylamin hydrochlorid
2- chlorthiofenol + 3,4-dichlornitrobenzen —> 4-nitro-2-chlorfenyl-(2 rchlorfenyl)-sulfid
Šedá pevná látka, t.t. 197-198 °C, Rf 0,16 (EtAc/Heptan 1:4 hm/ 1% TEA). ‘H NMR (DMSO-d6) 6,61 (d z d, J, = 1,9, J2 = 7,3, 1H), 6,70 (d z d, Ji = 2,4, J2 = 8,4, 1H), 6,94 (d, J = 2,5, 1H), 7,18 (m, 2H), 7,28 (d, J - 8,9, 1H), 7,45 (d z d, JI = 1,6, J2 = 7,6, 1H), 7,78 (br s, 3H). MS (El) m/z 269 M + [100]. ). Anal. vypočteno pro Ci2HioC13NS.
HC1: C, 47,22; H, 3,30; N, 4,59. Nalezeno: C, 47,34; H, 3,15; N, 4,45.
3- Chlor-4-(2-naphtylsulfanyl)-fenylamin hydrochlorid
2-naftalenthiol + 3,4-dichlornitrobenzen —> 4-nitro-2-chlorfenyl-2naftyl-sulfid
Téměř bílá pevná látka, t.t. 188 °C, Rf 0,16 (EtAc/Heptan 1:4 hm/ 1% TEA). !H NMR (DMSO-d6) 6,08 (br s, 3H), 6,60 (d z d, Ji= 2,4, J2= 8,4, 1H), 6,90 (d, J = 2,5, 1H), 7,20 (d z d, J,= 1,9, J2= 8,6, 1H), 7,30 (d, J = 8,6, 1H), 7,45 (m, 2H), 7,53 (s, 1H), 7,76 (m, 1H), 7,83
4* «· • 444♦· • Φ φ 4 4 4 ♦ · ·· □7 4Φ· ♦♦··*·
J f ······*· 4 · · ♦· • 4 4 4 4 4·Φ·
4·· 4 ♦ · ·· *· 444« (m, 2Η). MS (El) m/z 285 M + [100J. Anal. vypočteno pro Ci6II12C1NS. HC1: C, 59,64; H, 4,07; N, 4,53. Nalezeno: C, 59,59; H, 4,07; N, 4,09.
3-Chlor-4-(2,3-dichlorfenylsulfanyl)-fenylamin hydrochlorid
2,3-dichlorthiofenol + 3,4-dichlornitrobenzen -> 4-nitro-chlorfcriyl(2',3'-dichlorfenyl)-sulfid
Téměř bílá pevná látka, t.t. 207-209 °C, Rf 0,33 (EtAc/Heptan 1:2 hm/ 1% TEA). NMR (DMSO-d6) 6,45 (d z d, Ji = 1,4, J2 = 8,1, 1H), 6,62 (d z d, J! = 2,2, J2 = 8,6, 1H), 6,79 (br s, 3H), 6,86 (d, J = 2,5, 1H), 7,21 (t, J = 7,9, 1H), 7,33 (d, J = 8,2, 1H), 7,38 (d z d, J, = 1,4, J2 = 8,1, 1H). MS (El) m/z 303 (M + , 93). Anal. vypočteno pro Ci2HsC13NS. HC1: C, 42,26; H, 2,66; N, 4,11. Nalezeno: C, 42,49; H, 2,56; N, 4,10.
3-Chlor-4-(2,4,5-trichlorfenylsulfanyl)-fenylamin hydrochlorid
2,3 ,4-trichlorthiofenol + 3,4-dichlornitrobenzen -y 4-nitro-2-chlorfenyl-(2',4',5'-tnchlorfenyl)sulfid
Téměř bílá pevná látka, t.t. 192-194 °C, Rf 0,33 (EtAc/Heptan 1:2 hm/ 1% TEA). lH NMR (DMSO-d6) 6,46 (br s, 3H), 6,53 (s, 1H), 6,65 (d z d, Ji= 2,3, J2= 8,4, 1H), 6,89 (d, J = 2,2, 1H), 7,35 (d, J = 8,6, 1H), 7,88 (s, 1H). MS (El) m/z 337 (M + ,73). Anal. vypočteno pro C12H7CI4NS. HC1: C, 38,38; H, 2,15; N, 3,73. Nalezeno: C, 38,73; H, 2,07; N, 3,60.
3-Methoxy-4-(2,3-dichlorfenylsulfanyI)-feny lamin
2,3-dichlorthiofenol + 2-brom-5-nitroanisol -> 4-nitro-2-methoxyfenyl-(2',3'-dichlorfenyl)sulfid
Tato sloučenina byla izolována krystalizací z etheru spíše než z vytvořené HC1 soli. Byly získány téměř bílé krystaly, t.t. 166-167 CC, Rf 0,17 (EtAc/Heptan 1:2 hm/ 1% TEA). ‘H NMR (DMSO, d6) 3,67 • *« ♦··· ·· ·· • · · * · · · · • ·«·· · · · · · · · · • · · · · · · · ♦ »4« 9 ·♦ ·· Ο· ♦ ··· (s, 311), 5,75 (br s, 2H), 6,26 (d z d, J, = 1,9, J2 = 8,3, 1H), 6,37 (d, J = 1,9, 1H), 6,46 (d, J = 7,9, III), 7,13 (d, J = 8,2, 1H), 7,16 (t, J - 8,1, 1H), 7,31 (d, J = 7,9, III). MS (El) m/z 299 M + [100]. Anal. vypočteno pro C13II] jChNOS: C, 52,01; H, 3,69; N, 4,67. Nalezeno: C, 51,97; H, 3,59; N, 4,67.
5-Amino-2-(2,3-dichlorfenylsulfanyl)-acetofenon hydrochlorid
2,3-dichlorthiofenol + 2-chlornitroacetofenon 4-nitro-2-acetylfenyl-(2',3'-dichlorfenyl)sulfid
Žlutá pevná látka, t.t. 151-153 °C, Rf 0,35 (EtAc/Heptan 1:1 hm/ 1% TEA). *H NMR (DMSO-d6) 2,51 (s, 3H), 7,00 - 7,09 (m, 3H), 7,34 (t, J = 7,9, 1H), 7,41 (br s, 1H), 7,44 (br s, 3H), 7,58 (d, J - 7,9, 1H).
MS (El) m/z 311 M+ [100], Anal. vypočteno pro C j 3H11 C13NO S . HCI: C, 48,23; H, 3,47; N, 4,02. Nalezeno: C, 47,78; H, 3,43; N, 3,79.
4-(2,3-dichlorfenylsulfanyl)-fenyIamin
2,3-dichlorthiofenol + 4-bromnitrofenol -> 4-nitrofenyl-(2' ,3 '-dichlorfenyl)-sulfid
Téměř bílá pevná látka, t.t. 175 °C, Rf 0,31 (EtAc/Heptan 1:2 hm/
1% TEA). rH NMR (DMSO-d6) 7,13 (d, J = 8,2, 2H), 7,26 (t, J = 7,8, . 1H), 7,42 (d, J = 8,6, 2H), 7,47 (d z d, J1 = 1,9, J2 = 7,8, 1H), 7,76 (d z d, Ji = 1,3, J2 = 7,9, 1H), 8,04 (br s, 3H). MS (El) m/z 269 M + [100J. Anal. vypočteno pro Ci2H9Cl2NS. HCI: C, 47,00; H, 3,29; N, 4,57. Nalezeno: C, 46,92; H, 3,36; N, 4,27.
3-Chlor-4-(l-naftylsulfanyt)-fenylamin hydrochlorid
1-naftalenthiol + 3 ,4-dichlornitrobenzen —> 4-nitro-2-chlorfenyl-( 1 naftyl)-sulfid
Téměř bílá pevná látka, t.t. 1 92-194 °C, Rf 0,37 (EtAc/Heptan 1:2 hm/
1% TEA). NMR (DMSO-d6) 6,84 (m, 2H), 7,20 (d, J = 1,9, 1H), • *« ♦·»» ·· ·♦ • *· · · · · 4 ·«:* · · · · · · · · • · · · · · · · * ·· ·· ·· ···♦
7,40 (d, J - 7,0, Π-Ι), 7,50 (t, J = 7,8, 1H), 7,56 - 7,61 (m, 2H), 7,94 (d, J = 8,2, 1H), 7,99 (m,lH), 8,12 - 8,15 (m, 5H). MS (El) m/z 285
Mt- [100], Anal. vypočteno pro C16H12CINS. HC1: C, 59,64; H, 4,07; N,
4,35. Nalezeno: C, 59,59; H, 4,19; N, 4,11.
3-Methyl-4-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-fenylamin hydrochlorid
2,4-dichlorthiofenol + 2-brom-5-nitrotoluen -> 4-nitro-2-methylfenyl- 2',4'-dichlorfenyl)-sulfid
Téměř bílá pevná látka, t.t. 1 95-197 °C, Rf 0,41 (EtAc/Heptan 1:2 hm/ 1% TEA). NMR (DMSO-d6) 2,22 (s, 3H), 6,62 (d, J = 8,6, 1H), 6,94 (d, J = 8,2, 1H), 7,04 (br s, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,66 (d, J =
2,2, 1H), 7,89 (br s, 3H). MS (El) m/z 283 M+ [100]. Anal. vypočteno pro Ci3HhC12NS. HC1: C, 48,69; H, 3,77; N, 4,37. Nalezeno: C, 48,87;
H, 3,73; N, 4,34.
3-Brom-4-(2,4 -dichlorfeny lsulfanyl)-fenylamin hydrochlorid
2.4- dichlorthiofenol + 3-brom-4-chlornitrobenzen -> 4-nitro-2-bromfenyl-(2 ',4 '-di chlor fenyl-sulfid
Téměř bílá pevná látka, t.t. 171-173 °C, Rf 0,69 (EtAc/Heptan 1:2 hm/ 1% TEA). lH NMR (DMSO-d6) 6,66 (d, J - 8,6, 1H), 6,81 (d z d, Jj =
2,2, J2 = 8,4, 1H), 7,19 (d, J = 2,2, 1H), 7,29 (d, J = 8,2, 1H), 7,32 (d z d, Jl= 2,2, J2= 8,6, 1H), 7,64 (d, J = 2,2, 1H), 7,92 (br s, 3H). MS (El) m/z 347 (M + , 60). Anal. vypočteno pro Ci2H8BrCl2NS. HC1: C, 37,39;
H, 2,35; N, 3,63. Nalezeno: C, 37,78; H, 2,28; N, 3,61.
2.5- Dichlor-4-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-fenylamin hydrochlorid
2,4-Dichlorthiofenol + 2,4,5-trichlornitrofenol —> 4-nitro-2,5-dichlorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid.
Téměř bílá pevná látka, t.t. 168- 1 76 °C, Rf 0,39 (EtAc/Heptan 1:2 hm/ 1% TEA). !H NMR (DMSO-d6) 6,57 (d, J = 8,6, 1H), 6,83 (br s, 3H), φφ φφφφ
ΦΦΦΦ φ φ · φ φ φ · • φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ · φ φ φ φ φ φ φ φ
ΦΦ 90 Φ* ΦΦ Φ Φ
7,06 (s, 111), 7,30 (d d, Jj- 2,2, J2= 8,6, 1H), 7,55 (s, 1 H), 7,63 (d, J =
2,2, 1H). MS (El) m/z 347 (M + , 60). Anal. vypočteno pro CAH7CI4NS.
0,75 HC1: C, 39,34; H, 2,13; N, 3,82. Nalezeno: C, 39,34; H, 2,11; N, 3,71.
4,5-DichIor-2-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-fenylamin
2.4- dichlorthiofenol + 3,4-dichlor -2-fluornitrobenzen —> 4-nitro-2- chlor-5-fluorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid
Při zahájení s 3,4-dichIor-2-fluornitrobenzenem je fluorid vytěsněn za získání 2-sulfanylové sloučeniny. Tato sloučenina byla purifikována mžikovou chromatografií jako volný amin, téměř bílá pevná látka, t.t. 119-122 °C, Rf 0,20 (EtAc/Heptan 1:20). [Η NMR (DMSO-d6) 5,93 (s, 2H), 6,61 (d, J = 8,6, 1H), 7,08 (s, 1H), 7,31 (d z d, Jt - 2,1, J2 = 8,5, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,65 (d, J = 1,9, 1 H). MS (El) m/z 337 (M + , 75). Anal. vypočteno pro CAPbCUNS: C, 42,51; H, 2,08; N, 4,13. Nalezeno: C, 42,94; H, 1,97; N4,08.
3.5- Dichlor-4-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-fenylamin
2,4-dichlorthiofenol + 3,4,5-trichlornitrobenzen —> 4-nitro-2,6di chlor- feny l-(2' ,4 '-dichlor fenyl)- sulfid
Tato sloučenina rekrystalizovala jako volný amin za získání bílé pevné látky, t.t. 128-131 °C, Rf 0,36 (EtAc/Heptan 1:2), TH NMR (DMSO-d6) 6,33 (br s, 2H), 6,46 (d, J = 8,5, 1H), 6,83 (s, 2H), 7,32 (d z d, Ji = 2,1, J2 = 8,5, 1H), 7,65 (d, J = 2,2, 1H). MS (El) m/z 337 (M + , 77). Anal. vypočteno pro C12H7CI4NS: C, 42,51; H, 2,08; N, 4,13. Nalezeno: C, 42,15; H, 2,10; N 4,01.
2.3- Dichlor-4-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-fenylamin
2.4- dichlorthiofenol + 2,3,4-trinitrobenzen —> 2,3-dichlor-4-(2,4-dichlorfenyl thio)-nitrobenzen
• • • *· * «
• • • *
k i • • ♦ Φ •
• • • 9 ·· • * ·· 9 • • Φ ♦
Tato sloučenina byla purifikována mžikovou chromatografií jako volný amin za získání bílé pevné látky. T.t. 116-119 °C, Rf 0,3 3 (EtAc/Heptan 1:4 hm/ 1% TEA). ’H NMR (DMSO-d6) 6,09 (s, 2H), 6,47 (d, J = 8,7, 1H), 6,86 (d, J = 8,7, 1H), 7,32 (d zd, J, = 2,3, J2 = 8,7, 1H), 7,46 (d, J = 8,7, 1 H), 7,69 (d, J = 2,2, 1H). MS (El) m/z 337 (M + , 71). ). Anal. vypočteno pro C12H7CI4NS: C, 42,51; H, 2,08; N, 4,13. Nalezeno: C, 42,83; H, 2,02; N4,06.
B. Metoda B obecné syntézy
Metoda B obecné syntézy je schématicky znázorněna dále:
K2CO3
Acetone reflux
kde X je halogen, přednostně chlor.
Následující sloučeniny byly připraveny použitím metody B obecné syntézy:
4-Nitro-2-chlorfenyl-(2',4'-dimethylfenyl)-sulfid
* « ···* ·· ··
·· ♦ * ♦ • · • ·
a * • · 9 • ·
a ·*·· • · · • • « ·
a • * * • · a * •
··· • ··
4-Amino-2-chlorfenyl-(2',4'-dimethylfenyl)-sulfid hydrochlorid 4-Amino-2-chlorfenyl-(2'-methyl-4'-chlorfenyí)-sulfid 4-Amino-2-chlorfenyl-(2',4'-difluorfenyl)-suífid hydrochlorid
4- Ami no - 2 -c hl orfeny 1 - (2 ' ,4 ', 6 ' -trich 1 or fen y 1)- s ul fi d 4-Amino-2-chlorfenyl-(2 '-amino-4 '-chlorfenyl)-sulfid 4-Amino-2-chlorfenyl-(3',4'-dichlorfenyl)-sulfid 4-Amino-2-chlor feny 1-2-(3-chlor-5-tr i fluormethylpyridyl)-sulfid Bis-(4,4 '-diamino-2,2 '-dichlorfenyl)-sulfid 4-Amino-2-chlorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid 2-Chlor-4-amino-5-methylaminofenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid 2-Chlor-4-amino-5-morfolinofenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid 4-Amino-2-trifluormethyfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid
4- Amino-2-fluorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid
5- Amino-3-chlorfenyl’(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid
Výchozí krok metody B obecné syntézy je ilustrován přípravou sloučeniny meziproduktu popsanou bezprostředně dále.
4-Nitro-2-chlorfenyl-(2',4'-dimethylfenyl)-sulfid
2,4-Dimethylthiofenol (1,0 g) a 3,4-dichlornitrobenzen (1 ekv.) byly*přidány do 100 ml acetonu obsahujícího K2CO3 (5 g). Směs byla refluxována po 24 hodiny. Po ochlazení na teplotu místnosti byla směs filtrována a aceton byl odstraněn na rotační odparce. Získaný zbytek byl rozpuštěn v malém objemu CH2CI2 a filtrován. Potom byl CH2CI2 odstraněn použitím rotačního vakua. Získaný zbytek byl zpracován s methanolem (MeOH), který způsobí, že se produkt vysráží. Potom byl žlutý pevný produkt spojen filtrací a sušen při 40 °C ve vakuové peci po 24 hodiny. Výtěžek produktu byl 66 % a teplota tání byla 128130 °C. Standardní analytické techniky, včetně protonové NMR spektroskopie, elementární analýzy a tenkovrstvé chromatografle byly použity k charakterizaci produktu.
4 4 4 • 4 • 4
444444 · 444 · · · 4 4 · 4 ® 4 4 · ·♦ · · · · · · ·
Následující sloučeniny byly připraveny použitím iniciačního kroku v souladu s výše doloženým meziproduktem.
4-Amino-2-chlorfenyl-(2',4'-dimethylfenyl)-sulfid hydrochlorid
2-Chlor-4-nitrofenyl-(2',4'-dimethylfenylj-sulfid (0,85 g) a práškové železo v MeOFI (300 ml) byly přidány do 20 ml vodného roztoku NH4C1 v molárním poměru 1:3:5 pro substrát, práškové železo resp. NH4CI. Směs byla mechanicky míchána za refluxních podmínek přes noc. Rozpouštědlo bylo odstraněno použitím rotačního vakua. Získaný zbytek byl rozpuštěn v malém objemu chloroformu a filtrován. Produkt byl získán použitím preparativní chromatografie použitím rozpuštěného zbytku v malé koloně vyplněné silikagelem (70-230 mesh), následně promýváním použitím rozpouštědlového systému chloroform-hexan (1:4). Frakce obsahující produkt byly spojeny a rozpouštědla odstraněna použitím rotačního vakua. Téměř bílý produkt byl spojen filtrací a sušen při 50 °C ve vakuové peci po 24 hodin. Výtěžek produktu byl 57 %, a teplota tání byla 1 80-1 85 °C (rozklad). Standardní analytické techniky, včetně protonové NMR spektroskopie, elementární analýzy a tenkovrstvé chromatografie byly použity k charakterizaci produktu.
4-Amino-2-chlorfenyl-(2'-methyI-4'-chlorfenyl)-sulfid
4-Nitrofenyl-(2-chlorfenyl)-(2'-methyl-4'-chlorfenyl)-sulfid (1,0 g) a práškové železo v MeOH (300 ml) byly přidány do 5 ml vodného roztoku NH4CI v molárním poměru 1:3:5 pro substrát, práškové železo resp. NH4CI. Směs byla mechanicky míchána za refluxních podmínek přes noc. Rozpouštědlo bylo odstraněno použitím rotačního vakua. Získaný zbytek byl rozpuštěn v malém objemu chloroformu:hexanu (1:4) a filtrován. Produkt byl získán použitím preparativní chromatografie použitím rozpuštěného zbytku v malé koloně vyplněné ·
· • · τ · · · * J ·ΐ·ϊ···* ····· ί · · · · · · · · ««· 9 ·· ·♦ ······ silikagelem (70-230 mesh), následně promýváním použitím rozpouštědlového systému chloroform-hexan (1:1). Frakce obsahující produkt byly spojeny a rozpouštědla odstraněna použitím rotačního vakua. Bílý produkt byl spojen filtrací a sušen při 60 °C ve vakuové peci po 24 hodin. Výtěžek produktu byl 71 %, a teplota tání byla 91-93 °C. Standardní analytické techniky, včetně protonové NMR spektroskopie, elementární analýzy a tenkovrstvé chromatografie byly použity k charakterizaci produktu.
4-Amino-2-chlorfenyl-(2',4'-difluorfenyl)-sulfid hydrochlorid
4-Nitro-2-chlorfenyl-(2 ',4 '-difluorfenyl)-sulfid a práškové železo v MeOH (300 ml) byly přidány do 20 ml vodného roztoku NH4CI v molárním poměru 1:3:5 pro substrát, práškové železo resp. NH4C1. Směs byla mechanicky míchána za refluxních podmínek přes noc. Rozpouštědlo bylo odstraněno použitím rotačního vakua. Získaný zbytek byl rozpuštěn v malém objemu chloroformu a filtrován. Produkt byl získán použitím preparativní chromatografie použitím rozpuštěného zbytku v malé koloně vyplněné silikagelem (70-230 mesh), následně promýváním použitím rozpouštědlového systému chloroform-hexan (1:5). Frakce obsahující produkt byly spojeny a rozpouštědla odstraněna použitím rotačního vakua. Bezbarvý pevný produkt byl spojen filtrací a sušen při 50 °C ve vakuové peci po 24 hodin. Výtěžek produktu byl 88 % a teplota tání byla 1 87-190 °C. Standardní analytické techniky, včetně protonové NMR spektroskopie, elementární analýzy a tenkovrstvé chromatografie byly použity k charakterizaci produktu.
4-Amino-2-chlorfenyl-(2',4',6'-trichlorfenyl)-sulfid hydrochlorid
4-Nitro-2-chlorfenyl-(2',4',6'-trÍchlorfenyl)-sulfid (0,6 g) a práškové železo v MeOH (250 ml) byly přidány do 32 ml vodného roztoku NH4CI v molárním poměru 1:3:5 pro substrát, práškové železo ·
· · ♦ • 4 i · · · · « · 4 4 ·· · · resp. NH4CI. Směs byla mechanicky míchána za refluxních podmínek přes noc. Rozpouštědlo bylo odstraněno použitím rotačního vakua. Získaný zbytek byl rozpuštěn v malém objemu chloroformu a filtrován. Produkt byl získán použitím preparativní chromatografie použitím rozpuštěného zbytku v malé koloně vyplněné silikagelem (70-230 mesh), následně promýváním použitím rozpouštědlového systému chloroform-hexan (1:3). Frakce obsahující produkt byly spojeny a rozpouštědla odstraněna použitím rotačního vakua. Bílý produkt byl spojen filtrací a sušen při 40 0C ve vakuové peci po 24 hodiny. Výtěžek produktu byl 72 % a teplota tání byla 109-111 °C (rozklad). Standardní analytické techniky, včetně protonové NMR spektroskopie, elementární analýzy a tenkovrstvé chromatografie byly použity k charakterizaci produktu.
4-Amino-2-chlorfenyl-(2'-amino-4r-chlorfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlorfenyl-(2',-nitro-4'-chlorfenyl)-sulfid (1,02 g) a práškové železo v MeOH (250 ml) byly přidány do 60 ml vodného roztoku NH4CI v molárním poměru 1:3:5 pro substrát, práškové železo resp. NH4CI. Směs byla mechanicky míchána za refluxních podmínek přes noc. Rozpouštědlo bylo odstraněno použitím rotačního vakua. Získaný zbytek byl rozpuštěn v malém objemu chloroformu a filtrován. Produkt byl získán použitím preparativní chromatografie použitím rozpuštěného zbytku v malé koloně vyplněné silikagelem (70-230 mesh), následně promýváním použitím rozpouštědlového systému chloroform-hexan (3:7). Frakce obsahující produkt byly spojeny a rozpouštědla odstraněna použitím rotačního vakua. Téměř bílý produkt byl spojen filtrací a sušen při 50 °C ve vakuové peci po 24 hodiny. Výtěžek produktu byl 59 %, a teplota tání byla 86-88 °C. Standardní analytické techniky, včetně protonové NMR spektroskopie, elementární analýzy a tenkovrstvé chromatografie byly použity k charakterizaci produktu.
* ·
- A m i n o - 2 - c h I o r f e n yl - (3', 4' - d i c h 1 o r f e n y 1) - s u 1 f i d
4-N itrofenyl-2-chlorfenyl-(3 ' ,4 '-dichlorfenyl)-sulfid (1,0 g) a práškové železo v MeOH (250 ml) byly přidány do 40 ml vodného roztoku NH4CI v molárním poměru 1:3:5 pro substrát, práškové železo resp. NH4CI. Směs byla mechanicky míchána za refluxních podmínek přes noc. Rozpouštědlo bylo odstraněno použitím rotačního vakua. Získaný zbytek byl rozpuštěn v malém objemu chloroformu a filtrován. Produkt byl získán použitím preparativní chromatografie použitím rozpuštěného zbytku v malé koloně vyplněné silikagelem (70-230 mesh), následně promýváním použitím rozpouštědlového systému chloroform-hexan (3:7). Frakce obsahující produkt byly spojeny a rozpouštědla odstraněna použitím rotačního vakua. Bezbarvý pevný produkt byl spojen filtrací a sušen při 70 °C ve vakuové peci po 24 hodiny. Teplota tání produktu byla 103-105 °C. Standardní analytické techniky, včetně protonové NMR spektroskopie, elementární analýzy a tenkovrstvé chromatografie byly použity k charakterizaci produktu.
4-Amino-2-chIorfenyl-2-(3-chlor-5-trifluormethylpyridyl)-sulfid
4-Nitro-2-chlorfenyl-2-(3-chlor-5-trifluormethylpyridyl)-sulfid (1,5 g) a práškové železo v MeOH (250 ml) byly přidány do 80 ml vodného roztoku NH4CI v molárním poměru 1:3:5 pro substrát, práškové železo resp. NH4CI. Směs byla mechanicky míchána za refluxních podmínek přes noc. Rozpouštědlo bylo odstraněno použitím rotačního vakua. Získaný zbytek byl rozpuštěn v malém objemu chloroformu a filtrován. Produkt byl získán použitím preparativní chromatografie použitím rozpuštěného zbytku v malé koloně vyplněné silikagelem (70-230 mesh), následně promýváním použitím rozpouštědlového systému chloroform-hexan (3:7). Frakce obsahující produkt byly spojeny a rozpouštědla odstraněna použitím rotačního vakua. Bezbarvý pevný produkt byl spojen filtrací a sušen při 60 °C ve vakuové peci po 24 hodiny. Výtěžek produktu byl 97 % a teplota tání •·»Φ ·* ·· * Α » ·
byla 96-98 °C. Standardní analytické techniky, včetně protonové NMR spektroskopie, elementární analýzy a tenkovrstvé chromatografie byly použity k charakterizaci produktu.
Bis-(4,4'-diamino-2,2'-dichlorfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlorfenyl-(2 '-chlor-4 '-nitrofenyl)-sulfid a práškové železo v MeOH (125 ml) byly přidány do 20 ml vodného roztoku NH4C1 v molárním poměru 1:3:5 pro substrát, práškové železo resp. NH4CI. Směs byla mechanicky míchána za refluxních podmínek přes noc. Rozpouštědlo bylo odstraněno použitím rotačního vakua. Získaný zbytek byl rozpuštěn v malém objemu chloroformu a filtrován. Produkt byl získán použitím preparativní chromatografie použitím rozpuštěného zbytku v malé koloně vyplněné silikagelem (70-230 mesh), následně promýváním použitím rozpouštědlového systému chloroform-hexan (3:7). Frakce obsahující produkt byly spojeny a rozpouštědla odstraněna použitím rotačního vakua. Téměř bílý pevný produkt byl spojen filtrací a sušen při 60 °C ve vakuové peci po 24 hodin. Výtěžek produktu byl 66 % a teplota tání byla 113-115 °C. Standardní analytické techniky, včetně protonové NMR spektroskopie, elementární analýzy a tenkovrstvé chromatografie byly použity k charakterizaci produktu.
4-Amino-2-chlorfenyl-(2',4'-dichlorfenyI)-suIfid
2-Chlor-4-nitrofenyl-(2 ' ,4'-dichlorfenyl)-sulfid a práškové železo v MeOH (50 ml) byly přidány do 50 ml vodného roztoku NH4CI v molárním poměru 1:3:5 pro substrát, práškové železo resp. NH4C1. Směs byla mechanicky míchána za refluxních podmínek přes noc. Rozpouštědlo bylo odstraněno použitím rotačního vakua. Získaný zbytek byl rozpuštěn v malém objemu chloroformu a filtrován, a rozpoutědlo potom bylo odstraněno z filtrátu rotační odparky. Produkt byl získán mícháním zbytku se 75 ml destilované vody (dFhO). Bezbarvá pevná sraženina byla spojena filtrací. Výtěžek produktu byl • ·«·««· ♦ · ♦ · « · · · · · «·· · ·· · · % a teplota tání byla 1 05- 1 07 °C. Standardní analytické techniky, včetně protonové NMR spektroskopie, elementární analýzy a tenkovrstvé chromatografie byly použity k charakterizaci produktu.
4-Amino-2-chlorfenyl-(4'-acetaniido-2r-chlorfenyl)-sulfid
4-NÍtro-2-chlorfenyl-(4 '-acetamido-2 '-chlorfenyl)-sulfid a práškové železo v MeOH (250 ml) byly přidány do 20 ml vodného roztoku NH4CI v molárním poměru 1:3:5 pro substrát, práškové železo resp. NH4CI. Směs byla mechanicky míchána za refluxních podmínek přes noc. Rozpouštědlo bylo odstraněno použitím rotačního vakua. Získaný zbytek byl rozpuštěn v malém objemu chloroformu a filtrován. Produkt byl získán použitím preparativní chromatografie použitím rozpuštěného zbytku v malé koloně vyplněné silikagelem (70-230 mesh), následně promýváním použitím rozpouštědlového systému chloroform-hexan (1:4). Frakce obsahující produkt byly spojeny a rozpouštědla odstraněna použitím rotačního vakua. Téměř bílý produkt byl spojen filtrací a sušen při 60 °C ve vakuové peci po 24 hodiny. Výtěžek produktu byl 76 % a teplota tání byla 170- 175 °C. Standardní analytické techniky, včetně protonové NMR spektroskopie, elementární analýzy a tenkovrstvé chromatografie byly použity k charakterizaci produktu.
4-Amino-2-chlorfenyl-(4'-dimethylamino-2'-chlorfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-chlorfenyl-(4 '-dimethylamino-2 '-chlorfenylj-sulfid (0,2 g) a práškové železo v MeOH (250 ml) byly přidány do 20 ml vodného roztoku NH4CI v molárním poměru 1:3:5 pro substrát, práškové železo resp. NH4CI. Směs byla mechanicky míchána za refluxních podmínek přes noc. Rozpouštědlo bylo odstraněno použitím rotačního vakua. Získaný zbytek byl rozpuštěn v malém objemu chloroformu a filtrován. Produkt byl získán použitím preparativní chromatografie použitím rozpuštěného zbytku v malé koloně vyplněné si 1 ikageiem (70-2 3 0 mesh), následně promýváním použitím rozpouštědlového systému chloroform-hexan (2:3). Frakce obsahující produkt byly spojeny a rozpouštědla odstraněna použitím rotačního vakua. Bledě žlutý pevný produkt byl spojen filtrací a sušen při 60 °C ve vakuové peci po 24 hodiny. Výtěžek produktu byl 58 % a teplota tání byla 1 33-1 35 °C . Standardní analytické techniky, včetně protonové NMR spektroskopie, elementární analýzy a tenkovrstvé chromatografie byly použity k charakterizaci produktu.
2-Chlor-4-amino-5-methylaminofenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid
2-Chlor-4-nitrofenyl-5-methylaminofenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-. sulfid (0,2 g) a práškové železo v MeOH (250 ml) byly přidány do 20 ml vodného roztoku NH4C1 v molárním poměru 1:3:5 pro substrát, práškové železo resp. NH4C1. Směs byla mechanicky míchána za refluxních podmínek přes noc. Rozpouštědlo bylo odstraněno použitím rotačního vakua. Získaný zbytek byl rozpuštěn v malém objemu chloroformu a filtrován. Produkt byl získán použitím preparativní chromatografie použitím rozpuštěného zbytku v malé koloně vyplněné silikagelem (70-230 mesh), následně promýváním použitím rozpouštědlového systému chloroform-hexan (1:4). Frakce obsahující produkt byly spojeny a rozpouštědla odstraněna použitím rotačního vakua. Hnědý pevný produkt byl spojen filtrací a sušen při 50 °C ve vakuové peci po 24 hodiny. Výtěžek produktu byl 16 % a teplota tání byla 65-70 °C. Standardní analytické techniky, včetně protonové NMR spektroskopie, elementární analýzy a tenkovrstvé chromatografie byly použity k charakterizaci produktu.
2-Chlor-4-amino-5-N-morfolinofenyl-(2r,4'-dihlorfenyl)-sulfid
2-Chlor-4-nitro-5-Nmorfolinofenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid (0,9 g) a práškové železo v MeOH (250 ml) byly přidány do 20 ml • φ « ♦ • · • · · · · Φ «φφ t ·· ·· vodného roztoku NH4C1 v molárním poměru 1:3:5 pro substrát, práškové železo resp. NH4CI. Směs byla mechanicky míchána za refluxních podmínek přes noc. Rozpouštědlo bylo odstraněno použitím rotačního vakua. Získaný zbytek byl rozpuštěn v malém objemu chloroformu a filtrován. Produkt byl získán použitím preparativní chromatografie použitím rozpuštěné směsi v malé koloně vyplněné silikagelem (70-230 mesh), následně promýváním použitím rozpouštědlového systému chloroform-hexan (3:2). Frakce obsahující produkt byly spojeny a rozpouštědla odstraněna použitím rotačního vakua. Téměř bílý produkt bl spojen filtrací a sušen při 50 °C ve vakuové peci po 24 hodiny. Teplota tání byla 1 53-1 55 °C. Standardní analytické techniky, včetně protonové NMR spektroskopie, elementární analýzy a tenkovrstvé chromatografie byly použity k charakterizaci produktu.
- A m i n o - 2 -1 r i fl u o r m e t h y 1 f e n y 1 - (2', 4' - d i c h 1 o r f e n y l) - s u 1 f i d
4-Nitro-2-trifluormethylfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid (0,6 g) a práškové železo v MeOH (250 ml) byly přidány do 20 ml vodného roztoku NH4CI v molárním poměru 1:3:5 pro substrát, práškové železo resp. NH4CI. Směs byla mechanicky míchána za refluxních podmínek přes noc. Rozpouštědlo bylo odstraněno použitím rotačního vakua. Získaný zbytek byl rozpuštěn v malém objemu chloroformu a filtrován. Produkt byl získán použitím preparativní chromatografie použitím rozpuštěného zbytku v malé koloně vyplněné silikagelem (70-230 mesh), následně promýváním použitím rozpouštědlového systému chloroform-hexan (1:1). Frakce obsahující produkt byly spojeny a rozpouštědla odstraněna použitím rotačního vakua. Téměř bílý produkt byl spojen filtrací a sušen při 50 °C ve vakuové peci po 24 hodiny. Teplota tání nebyla stanovena, protože to byl bezbarvý olej. Standardní analytické techniky, včetně protonové NMR spektroskopie, elementární analýzy a tenkovrstvé chromatografie byly použity k charakterizaci produktu.
• 4
W ····· * * • · · · · · ·
.......
..·.·.·· · · · • « · · · · »»· · v · · · ·· »····
4- Aniino-2-fluorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-fluorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid a práškové železo v MeOH (250 ml) byly přidány do 20 ml vodného roztoku NH4C1 v molárním poměru 1:3:5 pro substrát, práškové železo resp. NH4CI. Směs byla mechanicky míchána za refluxních podmínek přes noc. Rozpouštědlo bylo odstraněno použitím rotačního vakua. Získaný zbytek byl rozpuštěn v malém objemu chloroformu a filtrován. Produkt byl získán použitím preparativní chromatografie použitím rozpuštěného zbytku v malé koloně vyplněné silikagelem (70-230 mesh), následně promýváním použitím rozpouštědlového systému chloroform-hexan (1:1). Frakce obsahující produkt byly spojeny a rozpouštědla odstraněna použitím rotačního vakua. Bledě žlutý pevný produkt byl spojen filtrací a sušen při 30 °C ve vakuové peci po 24 hodiny.
Výtěžek produktu byl 55 % a teplota tání byla 101-102 °C. Standardní analytické techniky, včetně protonové NMR spektroskopie, elementární analýzy a tenkovrstvé chromatografie byly použity k charakterizaci produktu.
5- Amino-3-clilorfenyl-(2 ',4 -dichlorfenyl)-sulfid
3-Chlor-5-nitrofenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid (1,0 g) a práškové železo v MeOH (250 ml) byly přidány do 20 ml vodného roztoku NH4CI v molárním poměru 1:3:5 pro substrát, práškové železo resp. NH4CI. Směs byla mechanicky míchána za refluxních podmínek přes noc. Rozpouštědlo bylo odstraněno použitím rotačního vakua. Získaný zbytek byl rozpuštěn v malém objemu chloroformu a filtrován. Produkt byl získán použitím preparativní chromatografie použitím rozpuštěného zbytku v malé koloně vyplněné silikagelem (70-230 mesh), následně promýváním použitím rozpouštědlového systému chloroform-hexan (3:2). Frakce obsahující produkt byly spojeny a rozpouštědla odstraněna použitím rotačního vakua. Produkt byl spojen filtrací a sušen pří 25 °C ve vakuové peci po 24 hodin. Výtěžek produktu byl 16 % a teplota tání nebyla stanovena, protože to byl hnědý olej. Standardní analytické techniky, včetně protonové NMR spektroskopie, elementární analýzy a tenkovrstvé chromatografie byly použity k charakterizaci produktu.
C. Metoda C obecné syntézy
Metoda C obecné syntézy je schématicky znázorněna dále:
Následující sloučeniny byly připraveny metodou C obecné syntézy:
4-Amino-2-chlorfenyl-(2'-chlor-4'-nitrofenyl)-sulfid 4-Amino-2-chlorfenyl-(2'-nitro-4'-chlorfenyl)-sulfid 4-Amino-2-chlorfenyl-6-(5-nitrochinolino)-sulfÍd
4-Amino-2-chlorfenyI-(2'-chIor-4'-nitrofenyl)-sulfid
2-Chlor-4-aminothiofenol (2,0 g) a 3,4-dichlornitrobenzen (1 ekv.) byly přidány do 300 ml acetonu obsahujícího K2CO3 (20 g). Směs byla refluxována po 24 hodiny při 60 °C. Po ochlazení na teplotu místnosti byla směs filtrována a aceton byl odstraněn použitím rotačního vakua. Získaný zbytek byl rozpuštěn v malém objemu chloroformu a filtrován. Potom byl chloroform odstraněn použitím rotačního vakua. Získaný zbytek byl triturován s MeOH, což způsobilo
vysrážení produktu. Sraženina byla spojena filtrací a žlutý pevný produkt byl sušen při 80 °C ve vakuové peci po 24 hodiny. Výtěžek produktu byl 59 % a teplota tání byla 1 3 5- 1 3 6 °C. Standardní analytické techniky, včetně protonové NMR spektroskopie, elementární analýzy a tenkovrstvé chromatografie byly použity k charakterizaci produktu.
4-Amino-2-chlorfenyl-(2'-nitro-4r-chlorfenyl)-sulfid
2-Chlor-4-aminothiofenol (2,0 g) a 2,5-dichlornitrobenzen (1 ekv.) byly přidány do 300 ml acetonu obsahujícího K2CO3 (20 g). Směs byla refluxována po 24 hodiny při 60 °C. Po ochlazení na teplotu místnosti byla směs filtrována a aceton byl odstraněn použitím rotačního vakua. Získaný zbytek byl rozpuštěn v malém objemu chloroformu a filtrován. Potom byl chloroform odstraněn použitím rotačního vakua. Získaný zbytek byl triturován s MeOH, což způsobilo vysrážení produktu. Sraženina byla spojena filtrací a žlutý pevný produkt byl sušen při 60 °C ve vakuové peci po 24 hodiny. Výtěžek produktu byl 57 % a teplota tání byla 191-193 °C. Standardní analytické techniky, včetně protonové NMR spektroskopie, elementární analýzy a tenkovrstvé chromatografie byly použity k charakterizaci produktu.
4-Amino-2-chlorfenyl-6-(5-nitrochinolino)-sulfid
2-Chlor-4-aminothiofenol (0,474 g) a 6-chlor-5-nitrochinolin (1 ekv.) byly přidány do 250 ml acetonu obsahujícího K2CO3 (20 g). Směs byla refluxována po 24 hodiny při 60 °C. Po ochlazení na teplotu místnosti byla směs filtrována a aceton byl odstraněn použitím rotačního vakua. Získaný zbytek byl rozpuštěn v malém objemu chloroformu a filtrován. Potom byl chloroform odstraněn použitím rotačního vakua. Získaný zbytek byl triturován s MeOH, což způsobilo vysrážení produktu. Produkt byl získán použitím preparativní
· · • * a · · 9 chromatografie použitím rozpuštěného zbytku v male koloně vyplněné silikagelem (70-230 mesh), následně pro mýváním použitím rozpouštědlového systému chloroform-hexan (3:2). Frakce obsahující produkt byly spojeny a rozpouštědla odstraněna použitím rotačního vakua. Žlutý pevný produkt byl spojen filtrací a sušen při 50 °C ve vakuové peci po 24 hodiny. Výtěžek produktu byl 62 % a teplota tání byla 129-131 °C. Standardní analytické techniky, včetně protonové NMR spektroskopie, elementární analýzy a tenkovrstvé chromatografie byly použity k charakterizaci produktu.
D. Specifické postupy syntézy
Preparativní metody jsou poskytnuty pro následující sloučeniny:
l-Acetamido-3-chlor-4-(2,3-dichlorfenylsulfanyl)-benzen
3-Hydroxy-4-(2,3-dichlorfenylsulfanyl)-fenylamin hydrochlorid 6-Chlor-5-(2,4-dichIorfenylsulfanyl)-lH-benzÍmidazol l-Acetamid-3-chloro-4-(2,3-dichlorofenyIsulfanyI)-benzen
0,165 g (2,1 ekv., 1,35 mmol) 4-dimethylaminopyridinu (4DMPA) bylo vloženo do suché baňky pod atmosférou dusíku a rozpuštěno v 5 ml bezvodého tetrahydrofuranu (THF). Byly přidány 2 ml acetanhydridu, následovalo 0,221 g (1 ekv., 0,643 mmol) 3-chlor-4-(2,3-dichlorfenylsulfanyl)-fenylaminu hydrochloridu. To bylo mícháno po 18 hodin. Směs byla zředěna 75 ml etheru a promyta nasyc. NaHCOí (3 x 50 ml), 0,3 N HC1 (3 x 30 ml) a nasyceným NaCl (2 x 30 ml), sušena nad NajSOzj, filtrována a rozpouštědlo bylo stripováno na rotační odparce. Mžiková chromatografie (1,9 x 27 cm, EtAc/Heptan (1:1)) poskytla 0,135 g (61% výtěžek) bílé pevné látky, t.t. 167-169 °C, Rf 0,25 (EtAc/Heptan 1:1). TH NMR (DMSO-d6) 2,07 (s, 3H), 6,59 (d z d, J = 1,3 , J = 7,9, 1H), 7,24 (t, J = 8,1, 1H), 7,46 (d 2 d, J( = 1,4, J2 = 8,1, 1 H), 7,55 (m, 2H), 8,04 (d, J = 1,9, 1H), 10,35 (s, 1H).
··
MS (El) m/z 345 (M + , 82). Anal. vypočteno pro C i 4ΙΪ1 oCl 3N O S : C, 48,51; H, 2,91; N, 4,04; Nalezeno: C, 48,29; H, 2,88; N, 3,92.
3-Hydroxy-4-(2,3-dichlorfenylsuIfanyl)-fenylamin hydrochlorid
0,19 g (0,67 mmol) 3-Methoxy-4-(2,3-dichlorfenylsul fany 1) fenylaminu bylo vloženo do suché baňky pod atmosférou dusíku, rozpuštěno v 10 ml suchého CH2CI2 a ochlazeno na -78 °C. Po kapkách bylo přidáno 0,32 ml (5 ekv., 3,3 mmol) bromidu boritého za míchání. Chladicí lázeň byla odstraněna a směs byla ponechána reagovat po 20 hodin. Roztok byl opět ochlazen na -78 °C a potom bylo přidáno 10 ml MeOH po kapkách. Potom byla ponechána ohřát na teplotu místnosti a byla míchána po 1 hodinu. Rozpouštědlo bylo odstripováno na rotační odparce a získaný olej byl dvakrát odebrán v 10 ml MeOH a opět stripován. Materiál byl opět odebrán do 10 ml MeOH a potom zředěn 100 ml EtAc. Bílá sraženina, která byla vytvořena, byla odebrána filtrací a filtrát byl promyt nasyceným NaCl (3 x 50 ml), sušen nad Na2SO4, filtrován a rozpouštědlo bylo odstripováno rotačním odpařením. Získaný olej byl purifikován mžikovou chromatografií (2,9x 28 cm, EtAc/Heptan (1:3)) a potom byl rozpuštěn ve 26 ml etheru a vysrážen jako HC1 sůl přidáním 5 ml 1 N HC1 v etheru. Ten byl odstraněn filtrací, promyt etherem a sušen (90 °C, 3 hodiny, 0,3 mm Hg) za získání 0,17 g (80% výtěžek) téměř bílé pevné látky, t.t. 222 °C, Rf 0,49 (EtAc/Heptan 1:1). Ή NMR (DMSO-d6) 6,56- 6,61 (m, 2H), 6,79 (d, J = 1,9, 1H), 6,90 (br hump), 7,19 (t, J= 8,1, 1H), 7,27 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,38 (d z d, Ji = 1,4, J2= 8,1, 1H), 10,37 (br s,
1H), MS (El) m/z285 M+ (100). Anal.vypočteno pro C 12H9CI2NOS .HC1: C, 44,67; H, 3,12; N, 4,34; Nalezeno: C, 44,53; H, 2,91; N, 4,17.
6-Chlor-5-(2,4-dichlorfenylsulfanyI)-lH-benzimidazol
4-Chlor-2-nitro-5- (2,4-dichlorfenylsulfanyl)-fenylamin byl připraven obecným postupem s výjimkou, že je purifikován jako volný
amin mžikovou chromatografií. 1,37 g (3,93 mmol) volného aminu bylo přidáno do 10 ml DMF a 10 ml EtOH. Bylo přidáno 4,43 g (5 ekv., 19,7 mmol) chloridu cínu -dihydrátu, následovalo 10 ml koncentrovaného HCl. To bylo zahřáto na 60 °C po 20 hodin. Reakce byla ponechána ochladit na teplotu místnosti a potom byla zředěna 30 ml vody a upravena na pH 12 přidáním 30 ml 5 N NaOH. Tato směs byla dvakrát extrahována 150 ml etheru. Spojené organické extrakty byly promyty 100 ml nasyc. NaHCO3 a 2 x 100 ml nasyc. NaCl, sušeny nad Na2SO4 a filtrovány. Potom byLo přidáno 40 ml heptanu a pak byla směs koncentrována na rotační odparce a sušena ve vakuu (100 °C, 2 hodiny, 0,3 mm Hg) za získání 1,06 g (82 %) analyticky čisté bílé pevné látky, t.t. 206-208 1 C, Rf 0,51 (CH2Cl2/MeOH (9:1) hm./ 1% TEA). !H NMR (DMSO-d6) 6,63 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,28 (d z d, Jt = 2,2, J2 = 8,7, 1H), 7,69 (d, J = 2,23, 1H), 7,86 (br s, 1H), 7,93 (s, 1H), 8,38 (s, 1H), 12,80 (s, 1H). MS (El) m/z 328 (M+, 97). Anal.vypočteno pro C13H7C13N2S: C, 47,37; H, 2,14; N, 8,50; Nalezeno: C, 47,40; H, 2,04; N, 8,32.
E. Protokoly specifických syntéz
Následující sloučeniny byly připraveny metodami popsanými dále.
4-Methylamino-2,2',4'-trichlordifenylsulfid
4-Amino-2-chlorfenyl-(4'-acetamido-2'-chlorfenyl)-sulfid
4- Amino-2-chlor fenyl -(4 '-di methy lamin o-2 '-chlor fenyl)- sulfid
4-Aminomethyl-2-chlorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)sulfid
4-Methylamino-2,2',4'-trichlordifenylsulfid
4-Amino-2,2',4'-trichlordifenylsulfid (0,305 g, 1,0 mmol) byl přidán do 15 ml kyseliny mravenčí. Směs byla míchána po 8 hodin, potom bylo přidáno 0,23 ml 37% formaldehydu a směs byla refluxována po 8 hodin. Potom bylo rozpouštědlo odebráno použitím rotační odparky. Získaný zbytek potom byl použit v malé koloně vyplněné silikagelem (70-230 mesh). Potom byl produkt prmýván z kolony
9«
Φ · * ·· ···· použitím chloroformu. Rozpouštědlo bylo odstraněno z eluátu použitím rotační odparky a bledě žlutý pevný produkt byl spojen. Výtěžek produktu byl 44 % a teplota tání byla 211 °C. Standardní analytické techniky, včetně protonové NMR spektroskopie, elementární analýzy a tenkovrstvé chromatografie byly použity k charakterizaci produktu.
4-Nitro-2-chlorfenyl-(4'-acetamido-2'-chlorfeny])-sulfid
4-Amino-2,2 '-dichlor-4 '-nitrodifenylsulfid (1,0 g, 3,17 mmol) byl ohřát v 15 ml acetanhydrídu obsahujícím stopy p-toluensulfonové kyseliny. Směs byla ponechána stát 1 hodinu, potom bylo rozpouštědlo odstraněno použitím rotační odparky. Zbytek byl rozpuštěn v EtAc a přelit přes malou kolonu silikagelu (70-230 mesh). Filtrát byl spojen, odpařen do sucha, a rekrystalizoval z acetonitrilu za získání žlutého pevného produktu. Výtěžek produktu byl 97 % a teplota tání byla 163165 °C. Standardní analytické techniky, včetně protonové NMR spektroskopie, elementární analýzy a tenkovrstvé chromatografie byly použity k charakterizaci produktu.
4-Nitro-2-chlorfenyl-(4'-dimethylamino-2'-chIorfenyl)-sulfid
4-Amino-2-chlorfenyl-(2 '-chlor-4'-nitrofenyl)sulfid (1,0 g, 3,17 mmol) byl přidán do suspenze 60% hydridu sodného (1,43 g) ve 250 ml THF při 0 °C. Potom byl přidán jodmethan (0,2 ml, ve 20 ml THF) a směs byla míchána při teplotě místnosti po 48 hodin. Směs potom byla nanesena na silikagelové desky Analtech. Každá deska měla tloušťku 1000 mikronů siliky. Dva produkty reakce, tedy 4-nitro-2-chlorfenyl-(4 '-methylamino-2 '-chlorfenyl)-sulfid a 4-nitro-2-chlorfenyl-(4'-dimethylamino-2'-chlorfenylj-sulfid byly promývány použitím směsi 1:1 CHCI3 a hexanu. Pomaleji vymývaný pás odpovídal tomu prvnímu a rychleji vymývaný pás odpovídal tomu druhému. Po spojení dávek byly sloučeniny rozpuštěny v CHCI3 . Rozpouštědlo bylo odstraněno rotační odparkou za získání žlutého pevného produktu. Výtěžek produktu byl 36 % a teplota tání byla 1 38-1 39 °C. Standardní analytické techniky,
fr · • · · · • · · • · * • · · * · · · · · včetně protonové NMR spektroskopie, elementární analýzy a tenkovrstvé chromatografie byly použity k charakterizaci produktu.
4-Aniinomethyl-2-chlorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid
2-Chlor-4-kyanofenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid (1,0 g, 3,18 mmol) byl přidán do 200 ml THF pod dusíkem při 0 °C. Potom byl přidán do roztoku hydrid hlinito-lithný (0,24 g) po částech. Potom byla směs ponechána stát po 2 hodiny při 0 °C, potom byl do směsi přidán 1 ml 20% NaOH, následně 1 ml dH2O. Potom byl roztok filtrován a rozpouštědla byla odstraněna použitím rotační odparky. Získaný zbytek byl potom použit v malé koloně obsahující silikagel (70-230 mesh). Kolona byla promyta směsí chloroformu a hexanu 1:1. Potom byl produkt promyt použitím rotační odparky, a produkt byl získán jako bezbarvý olej. Výtěžek produktu byl 40 % a teplota tání nebyla stanovena. Standardní analytické techniky, včetně protonové NMR spektroskopie, elementární analýzy a tenkovrstvé chromatografie byly použity k charakterizaci produktu.
G. Další sloučeniny
Další sloučeniny syntetizované podle obecných metod syntézy zahrnují následující:
Tabulka II
4-Nitro-2-chlorfenyl-(2',4'-dimethylfenyl)-sulfid 4-Nitro-2-chlorfenyl-(2'-methyl-4-chlorfenyl)sulfid 4-Nitro-2-chlorfenyl-(2',4'-difluorfenyl)sulfid 4-Nitro-2-chlorfenyl-(2',4',6'-trichlorfenyl)sulfid 4-Nitro-2-chlorfenyl-(3',4'-dichlorfenyl)sulfÍd
4-Nitr o-2-chlor feny 1-2-(3 -chlor-5-trifluormethylpyridyl) sulfid
2-Chlor-4-nitrofenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-chlorfeny 1-(4 '-acetamido-2' - chlorfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-chlorfenyl-(4'-dimethylamÍno-2'-chlorfenyl)-sulfid
2-Chlor-4-nitro-5-methylaminofenyl-(2',4'-dichloifenyl)-sulfid
2- Chlor-4-nitro-5-morfolinofenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid 4-Nitro-2-trifluormethylfenyl-.(2', 4'-dichlorfenyl)-sulfid 4-Nitro-2-fluorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid
3- Chlor-5-nitrofenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid
4- Nitro-2-chlorf enyl-(1 -naftyl)· sulfid
4-Nitro-2-methylfenyl-(2 ',4 '-dichlorfenyl)-sulfid 4-Nitro-2-bromfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid 4-Nitro-2,5-dichlorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid 4-Nitro-2,6-dichlorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid 4-Nitro-2-chlor-5-fluorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid 4-Nitro-2,3-dichlorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-chlorfenyl-(4'-chlor-2 '-amino fenyl) -sulfid 4-Nitro-5-acetamido-2-chlorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid
4-Nitro-2-chlorfenyl-(4 '-methylamino-2 '-chlorfeny 1)-sulfid
4-Nitro-2-chlorfenyl-(4 '-benzylamino-2 '-chlorfenyl)-sulfid 4-Nitro-2-chlorfenyl-(4 '-dibenzylamino-2 '-chlorfenyl)-sulfid 4-Nitro-5-fenylsulfo-2-chlorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid
3-Nitro-5-chlorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfid
Příklad 4
Výsledky testů na bázi buněk
Sloučeniny podle vynálezu vykazují aktivitu v testech na bázi buněk, popsaných výše, a jak je uvedeno dále v tabulce III, která uvádí hodnoty μΜ ICso pro inhibici LFA-1 vazby na ICAM-1 a ICAM-3, které byly testovány. Párové hodnoty (X/Y) označují inhibici za absence a přítomnosti IL-8. Násobné párové hodnoty (W/X; Y/Z) označují opakované experimenty. Pomlčky (--/X) označují, že se experiment ©«« • ·♦ · *
neuskutečnil. „NT„ označuje, že sloučenina nebyla testována v konkrétní zkoušce.
Ačkoliv byl předložený vynález popsán v termínech konkrétních provedení, je zřejmé, že odborník znalý stavu techniky nalezne obměny a úpravy. Proto mají být na vynález kladena pouze taková omezení, která vyplývají z připojených nároků.
ΦΦ ···« ο rň
CQ ύύ·
JO «
H
oq z
« e • M e <υ >«j s o cn o «t —
ZZ-^Z-ZZZZZZZZZZZ — Z Z Z Z
CAo
04oí ř— ín H f- ~ř~
Z r4 Z Z Z mZ p M oi , - » e. .» V) . * r- 04 o- σ\ t š T é <O oo —. i/> \q o* r* ·—1 o* *— p
r£
*—* rn p rn p p ví O ΓΊ c? Ό S 04 p
o CS CS O CA o 00 o p Ό p . R p v> O
tT Λ ΙΛ -T rň oi r- 04 * r· 00 p ó r^. σί
A w * A 04 04 oi m rO m ζ 04
<z. p £ cs co 3 rn xt p p o c p p ρ
o •J [< Ol p oS <6 p C?\ o Γ- OÍ p ví δ
m 'Ť *—· 04 *—1 rS cd 04 — cí ΓΊ <> *—·
·* ··*· ··
-* Γ- ΟΟ
m οι C 5 Α Ο c ', r-A ο ο r— η
Ό
ρ tn Cs . r. p p
p co trí rn ο S CM OS CM m m od tn ó Tt
νο ο <η tří tn un oo δ δ cn ť^>
tn ΧΤ Ο\ Γ-4 OÓ o p C< xr
S Λ cn Η CM Xt m CM Λ

Claims (20)

  1. «· «· «4 ····
    PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Sloučenina zvolená ze skupiny sestávající z:
    4- Nitro-2-chlorfenyl-(2',3'-dichlorfenyl)-sulfidu
    3-Chlor-4-(2-naftylsulfanyl)-fenylamin hydrochloridu
    3-Chlor-4-(2,3-dichlor feny lsulfanyl)-feny lamin hydrochloridu
    3-Chlor-4-(2,4,5 -trichlor feny lsulfanyl)- feny lamin hydrochloridu
    3-Chlor-4-(2,4-dichlor feny lsulfanyl)-feny lamin hydrochloridu
    3- Methoxy-4-(2,3 - dichlorfenyl sul fanyl)-f enyl aminu
    5- Amino-2-(2,3-dichlorfenylsulfanyl)-acetofenon hydrochloridu
    4- (2,3- dichlorfenyl sulf anyl)-fenylaminu
    3-Chlor-4-(l-naftylsulfanyl)fenylamin hydrochloridu
    3- Methyl-4-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-fenylamin hydrochloridu
    1 - Acetam i do-3-chl o r-4- (2,3 - dichlor feny lsulfanyl)- benzenu
    4- Methylamino-2,2',4'-trichlorfenyl sulfidu
    3- Brom-4-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-fenylamin hydrochloridu
    3 - Hydroxy-4-(2,3 - dichlorfenyl sulf anyl)-feny lamin hydrochloridu
    6- Chlor-5 - (2,4-dichlor feny lsulfanyl) - lH-benzimidazolu
    4- Amino-2-chlorfenyl-(2',4'-dimethylfenyl)-sulfid hydrochloridu
  2. 2,5-D i chlor-4-(2,4-dichlor feny lsulfanyl)-feny lamin hydrochloridu
    4-Amino-2-chlorfenyl-(2'-methyl-4'-chlorfenyl)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfenyl-(2',4'-difluorfenyl)-sulfid hydrochloridu
    4-Amino-2-chlorfenyI-(2 ',4 ',6 '-trichlorfenyl)-sulfidu • · ···· *
    • · ·
    9 * « «
    64 ·;
    *
    4-Amino-2-chlorfenyl-(2'-amino-4'-chlorfenyl)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfenyl-(2'-chlor-4'-nitrofenyl)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfenyl-(2'-nitro-4'-chlorfenyl)-sulfidu 4-Arriino-2-chlorfenyl-(3',4'-dichlorfenyl)-sulfidu 4-Amino-2-chlorfenyl-2-(3-chlor-5-trifluormethylpyridyl)-sulfidu
    Bis-(4,4'-diamino-2,2'-dichlorfenyl)-sulfidu 4-Amino-2-chlorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfidu 4-Amino-2-chlorfenyl-(4 '-acetamindo-2 '-chlorfenyl)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfenyl-6-(5-nitrochinolino)-sulfidu
    4 -Amino-2-chlorofenyl- (4 '-di methylamino -2 '-chlorfenyl)-sulfidu
    2-Chlor-4-amino-5-methylamino fenyl-(2 ',4'-dichlorfenyl)-sulfidu
    2-Chlor-4-amino-5-morfolinofenyl-(2 ',4'-dichlorfenyl)-sulfidu 4-Amino-2-trifluormethylfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfidu 4-Aminomethyl-2-chlorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfidu
    4.5- Dichlor-2-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-fenylaminu
  3. 3.5- Dichlor-4-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-fenylaminu
    2,3-Dichlor-4-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-fenylaminu
  4. 4- Amino-2-fluorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfidu
  5. 5- Amino-3-chlorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfidu
    4-Nitro-2-chlorfenyl-(2',4'-dimethylfenyl)-sulfidu
    4-Nitro-2-chlorfenyl-(2'-methyl-4-chlorfenyl)sulfidu 4-Nitro-2-chlorfenyl-(2'54'-difluorfenyl)sulfidu 4-Nitro-2-chlorfenyl-(2',4',6'-trichlorfenyl)sulfidu
    4-Nitro-2-chIorfenyl-(3',4'-dichlorfenyl)sulfidu • · ··.··*:
    «· « · · · • · · ·? · • ·♦·· · · · *♦ • · ·· · · · ·· ·<
    ·· *·
    4 · ·4 •· · •· · • ·· »· ····
    4-NÍtro-2-chlorfenyl-2-(3-chlor -5-trifluormethylpyridyl)sulfídu
    2-Chlor-4-nitrofenyl-(2 ',4 ' - dichlorfenyl)-sul fidu
    4-Nitro-2-chlorfenyl-(4'-acetamido-2'-chlorfenyl)-sulfidu
    4-Nitro-2-chlorfenyl-(4'-dimethylaniino-2'-chlorfenyl)-sulfidu
    2-Chlor-4-nitro-5 -methylaminofenyl-(2 ',4 '-dichlorfenyl)-sulfidu
    2-Chlor-4-nitro - 5 - morfolinofenyl-(2 ',4 '-dichlorfenyl)-sulfidu
    4-Nitro-2-trifluormethylfenyl-(2', 4 '-dichlorfenyl)-sulfidu
    4-Nitr0-2-fluorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfidu
    3-Chlor-5-nitrofenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfidu
    4-Nitro-2-chlorfenyl-(l - naftyl)-sulfidu
    4-Nitro-2-methylfenyl-(2' ,4 '-dichlorfenyl)-sulfidu
    4-Nitro-2-bromfenyl-(2 ',4'-dichlor fenyl)-sul fidu
    4-Nitro-2,5-dichlorfenyl-(2 ',4'-dichlorfenyl)-sulfidu
    4-Nitro-2,6-dichlorfenyl-(2',4 '-dichlorfenyl)-sulfidu
    4-Nitro-2-chlor-5-fluorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfidu
    4-Nitro-2,3 -dichlorfenyl-(2', 4 '-dichlor fenyl) -sul fidu
    4-Nitro-2-chlorfenyl-(4 '-chlor-2 '-aminofenyl)-sulfidu
    4-Nitro-5-acetamido-2-chlorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfidu
    4-Nitro-2-chlorfenyl-(4 '-methylamino-2 '-chlorfenyl)-sulfidu 4-Nitro-2-chlorfenyl-(4 '-benzylamino-2 '-chlorfenyl)-sulfidu 4-Nitro-2-chlorfenyl-(4'-dibenzylamino-2' -chlor fenyl)-sulfidu
    4-Nitro-5-feny lsulfo-2-chlorfenyl-(2 ',4 '-dichlorfenyl)-sul fidu
    3-Nitro-5-chlorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfÍdu.
    66 *· 1 » • · · · * · • ♦ · ·
    2. Farmaceutický prostředek vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle nároku 1 a farmaceuticky přijatelný nosič.
    3. Farmaceutický prostředek vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu zvolenou ze skupiny sestávající z:
    3 -Chlor-4-(l-chlor-naftalen-2-ylsulfanyl)-feny laminu
    1 - (3 -Nitr o-4-fenylsulfanyl-fenyl)-ethanonu
    1 - (3 -N i tr o -4 - feny 1 suf any 1 - feny 1)- ct h ano nox imu
    5 - Tr i fluo r methy 1-2 -fenyl sul fany 1-benzo nitr ilu
    1- (3,5-dichlorfenyl)-3-fenylsulfanyl-pyrrolidin-2,5-dionu
    Bis-2,4,6-Trinitrofenyl-sulfidu
    2- Methyl -1 -(2-o-tolylsulfanyl-fenyl)- lH-pyrrolu
    3- [2-(4-Chlor-2-nitro-fenylsulfanyl)-fenylamino-3H-isobenzofuran - í -onu
    4- (Benzothiazol-2-yl sul fany l)-3-chlor-fenyl aminu
    2-Nitro-4-chlorfenyl-(2'-aminofenyl)-sulfidu
  6. 6-Amino-2-chlorfenyl-(4'-methylfenyl)-sulfidu
    4-Nitrofenyl-(2'-chlorfenyl)-sulfidu
    2.4- Dinitrofenyl-(4'-chlorfenyl)-sulfidu
    4-Aminofenyl-(2'-chlorfenyl) -sulfidu
    2.4- Diaminofenyl-(4'-isopropylfenyl)-sulfidu
    4-Nitro-2-chlorfenyl-(2',3'-dichlorfenyl)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfenyl-2-(5-nitro-3-brom)-pyridin-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfenyl-(2'-nitro-4'-chlorfenyl)-sulfidu.
    • ··♦·
    Λ, Způsob léčení zánětlivých onemocnění vyznačujíci se tím, že zahrnuje krok podávání savci množství farmaceutického prostředku podle nároku 2 nebo 3 postačující k inhibici navázání LFA-1 na jeho přirozený ligand, který soutěží s ICAM-1 nebo ICAM-3 o navázání na LFA-1.
    5. Způsob inhibice LFA-1 vazby na ICAM, který váže LFA-1, zahrnující krok uvedení do kontaktu LFA-1 s diarylsulfidem.
    6. Způsob podle nároku 5, kde diarylsulfid je substituovaný.
  7. 7. Způsob podle nároku 5, kde diarylsulfid je sloučenina reprezentovaná obecným strukturním vzorcem (I):
    (I), kde A a B jsou, nezávisle, arylové skupiny zvolené ze skupiny sestávající z 5- a 6-členných aromatických kruhů, zahrnující, ale neomezující se na ně, fenyl, thienyl, furyl, pyrimidinyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrrolyl, a pyridazinyl;
    Ri, R2 a R3 jsou nezávisle zvoleny ze skupiny sestávající z vodíku,
    -Ra, kde Raje vodík nebo alkylová skupina obsahující jeden až šest uhlíků atomů v nasycených přímých nebo větvených řetězcích (Ci.6alkyl), ··
    -O-Ra,
    -halogenu, kde halogenem je Cl, F, Br nebo I,
    -NRbRc, kde Rb a Rc nezávisle jsou H, Ci.6alkyl, nebo -CII2-aryl, -NO2,
    -C( = O)Ra,
    -CN,
    -perfluorRa, jako je trifluormethyl,
    -N-C(=O)Ra,
    -(CH2)a-NRbRc, kde n je celé číslo 1 až 6,
    -5- nebo 6-čIenného heterocyklického kruhu, bud’ alifatického nebo aromatického, obsahujícího jeden nebo více O, N nebo S, popřípadě substituovaných, jako je morfolin, a
    -S-arylu, kde aryl je 5- nebo 6-členný aromatický kruh, popřípadě substituovaný;
    a R4, Rs a Rg nezávisle jsou zvoleny ze skupiny sestávající z vodíku,
    -Ra,
    -O-Ra,
    -halogenu,
    NRbRc,
    -NO2,
    -C(=O)Ra,
    -CN,
    -perfluorRa,
    -N-C(=O)Ra,
    -(CH2)a-NRbRc, a
    -5- nebo 6-členného heterocyklického kruhu, alifatického nebo aromatického, obsahující jeden nebo více O, N nebo S, popřípadě substituovaných,
    -S-arylu, nebo kde ·· · · • ·
    R4 a R5 vzaty dohromady tvoří 5- nebo 6-členný aromatický kruh, popřípadě obsahující jeden nebo více O, N nebo S, popřípadě substituované.
  8. 8. Způsob podle nároku 7, kde diarylsulfid je zvolen ze skupiny sestávající z:
    3- Chlor-4-(2-chlorfenylsulfanyl)-fenylamin hydrochloridu
    4- Nitro-2-chlorfenyl-(2',3'-dichlorfenyl)-sulfidu
    3 - Chlor-4-(2-nafty lsulfanyl)-feny lamin hydrochloridu
    3-Chlor-4 - (2,3-dichlorfeny lsulfanyl)-feny lamin hydrochloridu
    3-Chlor-4-(2,4,5- trichlorfenylsulfanyl)-fenylamin hydrochloridu
    3 -Chlor-4-(2,4-di chlor feny lsulfanyl)-feny lamin hydrochloridu
    4 - (B enzo thi azo 1-2-y lsulfanyl)-3-chlor-feny lam inu
    3-Chlor-4-(l - chlor-naftalen-2-y lsulfanyl)- feny laminu
    3- Methoxy-4-(2,3 - dichlorfeny lsulfanyl)-feny lam inu
    5- Amino-2-(2,3-dichlorfenylsulfanyl)-acetofenon hydrochloridu
    4- (2,3-dichlorfenylsulfanyl)-feny laminu
    3-ChIor-4-(l - nafty lsulfanyl) feny lamin hydrochloridu
    3- Methyl-4-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-fenylamin hydrochloridu
    1 -Acetamido-3-chlor-4-(2,3-dichlorfenylsulfanyl)-benzenu
    4- Methylamino-2,2',4'-trichlorfenylsulfidu
    3-Brom-4-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-fenylamin hydrochloridu
    3-Hydroxy-4-(2,3-dichlorfenylsulfanyl)-fenylamin hydrochloridu
    6- ChIor-5-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-lH-benzimidazolu • · · · • · ·· : :·;· · : : . : : · · .:. : ·.· ........
    4-Amino-2-chlorfenyl-(2',4'-dimethylfenyl)-sulfid hydrochloridu
    2.5- Dichlor-4-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-fenylamin hydrochloridu
    4-Amino-2-chlorfenyl-(2 '-methyl - 4 '-chlorfenyl)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfenyl-(2',4'-difluorfenyl)-sulfid hydrochloridu
    4-Amino-2-chlorfenyl-(2',4',6'-trichlorfenyl)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfenyl-(2'-amino-4'-chlorfenyl)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfenyl-(2'-chlor-4 '-nitrofenyl)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfenyl-(2'-nitro-4'-chlorfenyl)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfenyl-(3 ',4 '-dichlorfenyl)-sulfidu
    4 -Ami no -2-chlor feny 1-2-(3 -chlor- 5 - trifluormethy lpyr i dyl)- sulfidu
    Bis-(4,4'-diamino-2,2 '-dichlorfenyl)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfenyl-(2 ',4'-dichlorfenyl)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfenyl-(4 '-acetamindo-2 '-chlor feny l)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfenyl-6-(5-nitrochinolino)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorofenyl-(4'-dimethylamino-2'-chlorfenyl)-sulfidu
    2-Chlor-4-amino-5 - methylaminofenyl-(2 ',4'-dichlorfenyl)-sulfidu
    2-Chlor-4-amino-5-morfolinofenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfidu
    4-Amino-2-trifluormethylfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfenyl-2-(5-nitro-3-brom)-pyridin-sulfidu
    4-Aminomethyl-2-chlorfenyl-(2',4'-dichlorfeny!)-sulfidu
    4.5- Dichlor-2-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-feny laminu
    3.5- Dichlor-4-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-fenylaminu
    2,3 - D i chlor-4-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-fenylaminu
    4-Amino-2-fluorfenyl-(2',4'-dichlorťenyl)-sulfidu ··
    5-Amino-3-chlorfenyl-(2 ',4 '-di chlor feny 1)-sulfidu
    3-Chlor-4-( 1 -chlor-naftalen-2yl sul fanyl)-feny laminu l-(3-Nitro-4-fenylsulfanyl-fenyl)-ethanonu l-(3-Nitro-4-fenylsufanyl-fenyl)-ethanonoximu
    5-Trifluormethyl-2-fenylsulfanyl-benzonitrilu
    1 -(3,5 -dichlorfenyl)-3 - feny 1 sul fanyl -pyrrol idin-2,5 - di onu
    Bis-2,4,6-Trinitrofenyl-sulfidu
    2-Methyl -1 -(2-o-tolylsulfanyl-fenyl) -1 H-pyrrolu
    3-[2-(4-Chlor-2-nitro-fenylsulfanyl)-feny lamino-3H-isobenzofuran-l
    -onu
    4- (Benzothiazol-2-ylsulfanyl)- 3 - chlor- feny laminu
    2-Nitro-4-chlorfenyl-(2'-aminofenyl)-sulfidu
    6-Amino-2-chlorfenyl-(4'-methylfenyl)-sulfidu
    4-Nitrofenyl-(2 ' - chlorfenyl)-sulfidu
    2.4- Dinitrofenyl-(4 '-chlor fenyl)-sulfidu
    4-Aminofenyl-(2'-chlorfenyl)-sulfidu
    2.4- Diaminofenyl-(4'-isopropylfenyl)-sulfidu
    4-Nitro-2-chlorfenyl-(2',3'-dichlorfenyl)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfenyl-(2'-nitro-4'-chlorfenyl)-sulfidu.
  9. 9. Způsob léčení zánětlivých onemocnění vycházejících z LFA-1 vazby na jeho přirozený ligand, který soupeří s ICAM-1 nebo ICAM-3 o vazbu na LFA-1, zahrnující podávání savci, který to potřebuje, sloučeniny, která soupeří s 3-chlor-4-(l-chlornaftalen-2-ylsulfanyl)fenylaminem o vazbu na LFA-1 v množství postačujícím k inhibici vazby přirozeného ligandu na LFA-1.
  10. 10. Způsob podle nároku 9, kde sloučeninou je di arylsulfid.
  11. 11. Způsob podle nároku 10, kde diarylsulfid je substituován.
  12. 12. Způsob podle nároku 10, kde diarylsulfid j e sloučenina reprezentovaná obecným strukturním vzorcem (I): kde A a B jsou, nezávisle, arylové skupiny zvolené ze skupiny sestávající z 5- a 6-členných aromatických kruhů, zahrnující, ale neomezující se na ně, fenyl, thienyl, furyl, pyrimidinyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrrolyl, a pyridazinyl;
    Ri, R2 a R3 jsou nezávisle zvoleny ze skupiny sestávající z vodíku,
    -Ra, kde Raje vodík nebo alkylová skupina obsahující jeden až šest uhlíků atomů v nasycených přímých nebo větvených řetězcích (C i _6alky 1),
    -O-Ra,
    -halogenu, kde halogenem je Cl, F, Br nebo I,
    -NRbRc, kde Rb a Rc nezávisle jsou H, Ci-óalkyl, nebo -CH2-aryl, -NO2,
    -C( = O)Ra,
    -CN,
    -perfluorRa, jako je trifluormethyl,
    -N-C(=O)Ra,
    -(CH2)a-NRbR-c, kde n je celé číslo 1 až 6,
    -5- nebo 6-členného heterocyklického kruhu, buď alifatického nebo aromatického, obsahujícího jeden nebo více O, N nebo S, popřípadě substituovaných, jako je morfolin, a
    -S-arylu, kde aryl je 5- nebo 6-členný aromatický kruh, popřípadě substituovaný;
    a R4, R5 a Rb nezávisle jsou zvoleny ze skupiny sestávající z vodíku,
    -Ra,
    -O-Ra,
    -halogenu,
    -NRbRc,
    -NO2,
    -C( = O)Ra,
    -CN,
    -perfluorRa,
    -N-C(=O)Ra,
    -(CH2)a-NRbRc, a
    -5- nebo 6-členného heterocyklického kruhu, alifatického nebo aromatického, obsahující jeden nebo více O, N nebo S, popřípadě substituovaných,
    -S-arylu, nebo kde
    R4 a R5 vzaty dohromady tvoří 5- nebo 6-členný aromatický kruh, popřípadě obsahující jeden nebo více O,N nebo S v kruhu, popřípadě substituované.
  13. 13. Způsob podle nároku 12, kde diarylsulfid je zvolen ze skupiny sestávající z:
    3-Chlor-4-(2-chlorfenylsulfanyl)-fenylamin hydrochloridu • ♦· · • ···· · · ’ Σ· · · .:. : ......
    4-Nitro-2-chlorfenyl-(2',3'-dichlorfenyl)-sulfidu
    3-Chlor-4-(2-naftylsulfanyl)-fenylamin hydrochloridu
    3-Chlor-4-(2,3-dichlorfenylsulfanyl)-fenylamin hydrochloridu
    3- Chlor-4-(2,4,5-tri chlor feny Isulfanyl)-feny lamin hydrochloridu
    3 - Chlor-4-(2,4-dichlor feny isulfanyl)-feny lamin hydrochloridu
    4- (Benzothiazol-2-ylsulfanyl)-3-chlor-feny laminu
    3-Chlor-4-(l-chlor-naftalen-2-ylsulfanyl)-fenylaminu
    3- Methoxy-4-(2,3-dichlor feny Isulfanyl)-feny laminu
    5 - Amino-2-(2,3 -di chlor feny lsulfanyl)-acetofenon hydrochloridu
    4- (2,3-dichlorfenylsulfanyl)-fenylaminu
    3-Chlor-4-(l-naftylsulfanyl)fenylamin hydrochloridu
    3- Methy 1-4-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-fenylamin hydrochloridu
    1 - Acetami do-3 - chlor-4- (2,3 -dichlor feny Isulfanyl) -benzenu
    4- Methylamino-2,2',4'-trichlorfenylsulfidu
    3 - Brom-4-(2,4-dichlor feny Isulfanyl)-feny lamin hydrochloridu
    3- Hydroxy-4-(2,3- dichlorfenyIsulfanyl)-fenylamin hydrochloridu
    6-Chlor-5-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-lH-benzimidazolu
    4- Amino-2-chlorfenyl-(2',4'-dimethylfenyl)-sulfid hydrochloridu
    2,5-Dichlor-4-(2,4-dichlorfenyIsulfanyl)-fenylamin hydrochloridu
    4-Amino-2-chlorfenyl-(2'-methyl-4'-chlorfenyl)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfenyl-(2',4'-difluorfenyl)-sulfid hydrochloridu
    4-Amino-2-chlorfenyl-(2',4',6'-trichlorfenyl)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfenyl-(2'-amino-4'-chlorfenyl)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfenyl-(2'-chIor-4'-nitrofenyl)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfenyl-(2'-nitro-4'-chlorfenyl)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfenyl-(3 ',4'-dichlorfenyl)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfenyl-2-(3-chlor-5-trifluormethylpyridyl)-sulfidu
    Bis-(4,4'-diamino-2,2'-dichlorfenyl)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfidu
    4-Arnino-2-chlorfenyl-(4'-acetamindo-2 '-chlor fenyl)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfe ny 1-6-(5- ni trochinolino)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorofenyl-(4'-dimethylamino-2'-chlorfenyl)-sulfidu
    2-Chlor-4-amino-5-methylaminofenyl-(2',4 '-dichlorfenyl)-sulfidu
    2- Chlor-4-amino-5-morfolinofenyl-(2 ',4 '-dichlorfenyl)-sulfidu 4-Amino-2-trifluormethylfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfidu 4-Amino-2-chlorfeny 1-2-(5- ni tr o-3- brom)-pyridin-sulfidu 4-Aminomethyl-2-chlorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfidu
    4.5- Dichlor-2-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-fenylaminu
    3.5- Dichlor-4-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-fenylaminu
    2,3-Dichlor-4-(2,4-dichlorfenylsulfanyl)-fenylaminu
    4- Amino-2-fluorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfidu
    5- Amino-3-chlorfenyl-(2',4'-dichlorfenyl)-sulfidu
    3- Chlor-4-(l-chlor-naftalen-2ylsulfanyl)-fenylaminu l-(3-Nitro-4-fenylsulfanyl-fenyl)-ethanonu l-(3-Nitro-4-fenylsufanyl-fenyl)-ethanonoximu
    5-Trifluormethyl-2-fenylsulfanyl-benzonitrilu
    1- (3,5-dichlorfenyl)-3-fenylsulfanyl-pyrrolidin-2,5-dionu
    Bis-2,4,6-Trinitrofenyl-sulfldu
    ΦΦ
    Φ 9
    Φ ♦ Φ>
    Φ
    Φ·
    2-Methyl -1 -(2-o-tolylsul fanyl-feny 1) -1 H-pyrr o lu
    3_[2-(4-Chlor-2-nitro-fenylsulfanyl)-fenylamino-3H-isobenzofuran-l-onu
    4-(Benzothiazol-2-ylsulfanyl)-3-chlor-fenylaminu
    2-Nitro-4-chlorfenyl-(2 '-aminofenyl)-sulfidu
    6-Amino-2-chlor fenyl-(4'-methylfenyl)-sulfidu
    4-Nitrofenyl-(2'-chlorfenyl) -sulfidu
    2.4- Dinitrofenyl-(4'-chlorfenyl)-sulfidu
    4-Aminofenyl-(2'-chlorfenyl)-sulfidu
    2.4- Diaminofenyl-(4'-isopropylfenyl)-sulfidu
    4-Nitro-2- chlor feny 1 - (2' ,3 '-dichlorfenyl)-sulfidu
    4-Amino-2-chlorfenyl-(2'-nitro-4'-chlor fenyl)-sulfidu.
  14. 14. Způsob inhibice vazby LFA-1 na jeho přirozený ligand, který soupeří s ICAM-1 nebo ICAM-3 o vazbu na LFA-1, zahrnující uvedení do kontaktu buňky, která exprimuje LFA-1 na svém povrchu se sloučeninou, která soupeří s 3-chlor-4-( 1 -chlornaftalen-2-ylsulfanyl)fenylaminem o vazbu na LFA-1 v množství postačujícím k inhibici > - vazby LFA-1 na přirozený ligand.
  15. 15. Způsob podle nároku 9 až 14, kde ligandem je ICAM-1 nebo ICAM -3.
  16. 16. Způsob identifikace negativního regulátoru LFA-1 vazby na jeho přirozený ligand, který soupeří s ICAM-1 nebo ICAM-3 o vazbu na LFA-1, zahrnujících kroky:
    a) kontaktování LFA-1 s aktivátorem LFA-1 vazby;
    b) měření LFA-1 vazby s přirozeným ligandem za přítomnosti a absence testované sloučeniny ; a
    c) identifikaci testované sloučeniny jako inhibitoru, kde snížená LFA-1 vazba na ligand je detekována za přítomnosti testované sloučeniny.
    *
  17. 17. Způsob podle nároku 16, kde aktivátorem je krystalová violeť.
    NOVÉ PŘIPOJENÉ NÁROKY
  18. 18. Substituovaná diarylsulfidová sloučenina nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo proléčivo, které se váže na doménu LFA-1 přednostně před ICAM.
  19. 19.Substituovaná diarylsulfidová sloučenina vzorce (I) (I) nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo proléčivo, kde:
    kde A a B jsou, nezávisle, arylové skupiny zvolené ze skupiny sestávající z 5- a 6-členných aromatických kruhů, zahrnující, ale neomezující se na ně, fenyl, thienyl, furyl, pyrimidinyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrrolyl, a pyridazinyl;
    ·· ····
    Ri, R2 a R3 jsou nezávisle zvoleny ze skupiny sestávající z vodíku,
    -Ra, kde Ra je vodík nebo alkylová skupina obsahující jeden až šest uhlíků atomů v nasycených přímých nebo větvených řetězcích (Ci.ealkyl),
    -O-Ra,
    -halogenu, kde halogenem je Cl, F, Br nebo I,
    -NRbRc, kde Rb a Rc nezávisle jsou H, Ci.galkyl, nebo -CH2-aryl, -NO2,
    -C(=O)Ra,
    -CN,
    -perfluorRa, jako je trifluormethyl,
    -N-C(=O)Ra,
    -(CH2)a-NRbRc, kde n je celé Číslo 1 až 6,
    -5- nebo 6-členného heterocyklického kruhu, buď alifatického nebo aromatického, obsahujícího jeden nebo více O, N nebo S, popřípadě substituovaných, jako je morfolin, a
    -S-arylu, kde aryl je 5- nebo 6-členný aromatický kruh, popřípadě substituovaný;
    a R4, R5 a Re nezávisle jsou zvoleny ze skupiny sestávající z vodíku,
    -Ra,
    -O-Ra,
    -halogenu,
    -NRbRc,
    -NO2,
    -C(=O)Ra,
    -CN,
    -perfluorRa, ·· ····
    -N-C( = O)Ra,
    -(CII2)a-NRbRc, a
    -5- nebo 6-členného heterocyklického kruhu, alifatického nebo aromatického, obsahující jeden nebo více O, N nebo S, popřípadě substituovaných,
    -S-aryl, nebo kde R4 a R5 vzaty dohromady tvoří 5- nebo 6-členný aromatický kruh, popřípadě obsahující jeden nebo více O,N nebo S v kruhu, popřípadě substituované.
  20. 20. Použití sloučeniny podle nároků 18 nebo 19 pro výrobu léčiva pro léčení klinických stavů u savce, které zahrnuje podávání savci terapeuticky účinného množsví sloučeniny.
CZ20013524A 1999-04-02 2000-04-03 Inhibitory navázání LFA-1 na ICAM a jejich pouľití CZ20013524A3 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US28532599A 1999-04-02 1999-04-02

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ20013524A3 true CZ20013524A3 (cs) 2002-06-12

Family

ID=23093752

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20013524A CZ20013524A3 (cs) 1999-04-02 2000-04-03 Inhibitory navázání LFA-1 na ICAM a jejich pouľití

Country Status (21)

Country Link
EP (1) EP1165504A2 (cs)
JP (1) JP2002541141A (cs)
KR (1) KR20020003559A (cs)
CN (2) CN1351588A (cs)
AU (2) AU774054B2 (cs)
BG (1) BG106019A (cs)
BR (1) BR0009421A (cs)
CA (1) CA2369005A1 (cs)
CZ (1) CZ20013524A3 (cs)
EA (1) EA200101017A1 (cs)
EE (1) EE200100514A (cs)
HR (1) HRP20010777A2 (cs)
HU (1) HUP0201904A3 (cs)
IL (1) IL145528A0 (cs)
IS (1) IS6096A (cs)
MX (1) MXPA01009915A (cs)
NO (1) NO20014768L (cs)
NZ (1) NZ515238A (cs)
PL (1) PL351323A1 (cs)
SK (1) SK14022001A3 (cs)
WO (1) WO2000059878A2 (cs)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6515124B2 (en) * 2000-02-09 2003-02-04 Hoffman-La Roche Inc. Dehydroamino acids
AU6871801A (en) 2000-06-29 2002-01-14 Abbott Lab Aryl phenylheterocyclyl sulfide derivatives and their use as cell adhesion-inhibiting anti-inflammatory and immune-suppressive agents
US7153944B2 (en) 2000-07-31 2006-12-26 The General Hospital Corporation High affinity integrin polypeptides and uses thereof
US7323552B2 (en) 2000-07-31 2008-01-29 The General Hospital Corporation Variant integrin polypeptides and uses thereof
US7064180B2 (en) 2000-07-31 2006-06-20 The General Hospital Corporation High affinity integrin polypeptides and uses thereof
AU2001286403A1 (en) * 2000-07-31 2002-02-13 The General Hospital Corporation High affinity integrin polypeptides and uses thereof
UA81749C2 (uk) 2001-10-04 2008-02-11 Х. Луннбек А/С Фенілпіперазинові похідні як інгібітори зворотного захоплення серотоніну
CA2492035A1 (en) 2002-07-11 2004-01-15 Vicuron Pharmaceuticals, Inc. N-hydroxyamide derivatives possessing antibacterial activity
AU2004226838B8 (en) 2003-04-04 2009-06-11 H. Lundbeck A/S 4-(2-phenylsulfanyl-phenyl)-piperidine derivatives as serotonin reuptake inhibitors
BRPI0417858B1 (pt) 2003-12-23 2017-10-10 H. Lundbeck A/S Derivative compounds of aniline and pharmaceutical composition that understand it
US7378448B2 (en) 2004-03-15 2008-05-27 Eli Lilly And Company Diphenylether amide derivatives as opioid receptor antagonists
AR052308A1 (es) 2004-07-16 2007-03-14 Lundbeck & Co As H Derivados de 2-(1h-indolilsulfanil)-arilamina y una composicion farmaceutica que contiene al compuesto
AR054393A1 (es) 2005-06-17 2007-06-20 Lundbeck & Co As H Derivados de benzo(b)furano y benzo(b)tiofeno, composiciones farmaceuticas que los contienen y su uso en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de enfermedades mediadas por la inhibicion de la reabsorcion de neurotransmisores de amina biogenicos.
US7629473B2 (en) 2005-06-17 2009-12-08 H. Lundbeck A/S 2-(1H-indolylsulfanyl)-aryl amine derivatives
JP2007008877A (ja) * 2005-06-30 2007-01-18 Sato Pharmaceutical Co Ltd ２−ピリドン誘導体を有効成分とする医薬組成物
BRPI0617423A2 (pt) * 2005-10-18 2011-07-26 Sigma Tau Ind Farmaceuti inibidores de derivados de naftila da agregaÇço de beta-amilàides
WO2010033655A1 (en) * 2008-09-19 2010-03-25 Complegen, Inc. Compounds and methods for pkc theta inhibition
US9884046B1 (en) * 2017-06-26 2018-02-06 Macau University Of Science And Technology Method of treating lung cancer
NL2026714B1 (en) 2020-10-20 2022-06-16 Lumicks Ca Holding B V Improved detection of lymphocyte - target cell interaction

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1493728A1 (de) * 1965-07-20 1969-08-28 Lauterbach Dr Rudolf Verfahren zur Herstellung von Aminophenylthioaethern
US3576872A (en) * 1968-05-03 1971-04-27 Exxon Research Engineering Co Herbicidal s-aryl arylamides
DE2313721A1 (de) * 1973-03-20 1974-10-03 Bayer Ag Neue 1-phenylsubstituierte 1,3,5triazine, verfahren zu ihrer herstellung, sowie ihre verwendung als arzneimittel
GR73690B (cs) * 1979-01-15 1984-04-02 Celamerck Gmbh & Co Kg
US4973599A (en) * 1989-03-14 1990-11-27 Hoffman-La Roche Inc. Phenylthioheterocyclic derivatives
GB9403408D0 (en) * 1994-02-23 1994-04-13 Wellcome Found Therapeutic benzonitriles
TW530047B (en) 1994-06-08 2003-05-01 Pfizer Corticotropin releasing factor antagonists
US6110922A (en) * 1998-12-29 2000-08-29 Abbott Laboratories Cell adhesion-inhibiting antiinflammatory and immune-suppressive compounds

Also Published As

Publication number Publication date
AU2004205210A1 (en) 2004-09-23
SK14022001A3 (sk) 2002-03-05
EE200100514A (et) 2002-12-16
CN1721401A (zh) 2006-01-18
NZ515238A (en) 2005-02-25
CA2369005A1 (en) 2000-10-12
EA200101017A1 (ru) 2002-04-25
BR0009421A (pt) 2002-03-26
EP1165504A2 (en) 2002-01-02
NO20014768L (no) 2001-11-29
BG106019A (en) 2002-06-28
HUP0201904A3 (en) 2003-04-28
CN1351588A (zh) 2002-05-29
AU4191900A (en) 2000-10-23
WO2000059878A3 (en) 2001-08-09
IL145528A0 (en) 2002-06-30
AU774054B2 (en) 2004-06-17
HUP0201904A2 (en) 2002-09-28
NO20014768D0 (no) 2001-10-01
WO2000059878A2 (en) 2000-10-12
HRP20010777A2 (en) 2002-12-31
MXPA01009915A (es) 2003-08-20
KR20020003559A (ko) 2002-01-12
IS6096A (is) 2001-09-28
PL351323A1 (en) 2003-04-07
JP2002541141A (ja) 2002-12-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ20013524A3 (cs) Inhibitory navázání LFA-1 na ICAM a jejich pouľití
JP6916795B2 (ja) Ｌｓｄ１阻害剤
US10059668B2 (en) LSD1 inhibitors
CA2465978C (en) Inhibitors of histone deacetylase
TWI505829B (zh) 三衍生物、其用途及含有其之具有鎮痛作用的醫藥組成物
AU728151B2 (en) Novel cyclic diamine compounds and medicine containing the same
CA2559733C (en) Inhibitors of histone deacetylase
CZ296856B6 (cs) Aryl- nebo heteroarylthio-fenylcinnamid, zpusob jeho výroby a pouzití a farmaceutický prostredek najeho bázi
NZ211909A (en) Guanidino-thiazoles and pharmaceutical compositions
CZ292625B6 (cs) Derivát triazolu, způsob jeho přípravy, farmaceutický prostředek s jeho obsahem a použití
CZ20012412A3 (cs) Sloučeniny inhibující adhezi buněk vykazující protizánětlivé a imunosupresivní účinky
WO2010142735A1 (en) Pyridinyl derivatives as inhibitors of enzyme nicotinamide phosphoribosyltransferase
NZ243580A (en) Oxy or hydroxy substituted piperidine derivatives and medicaments
AU2002346724A1 (en) Human adam-10 inhibitors
AU709611B2 (en) Histamine h3 receptor ligands
TW580498B (en) A novel amide compound and a pharmaceutical composition containing the same
US6969711B2 (en) Cyclic diamine compounds and medicine containing the same
WO2009156724A2 (en) Novel compounds
US6765003B1 (en) 3-Arylsulfonyl-2 (substituted methyl) propanoic acid derivatives as matrix metalloproteinase inhibitors
US7906511B2 (en) Cyclic compound having pyrimidinylalkylthio group
CS268189B2 (en) Method of quinazolinediones and pyridopyrimidinodiones production
NZ201696A (en) 2-arylazo and 2-arylhydrazino-2-thiazoline derivatives and ecto-and endo-parasiticidal compositions
KR20160043047A (ko) N형 칼슘 채널 차단제로서의 치환된 이미다졸
HU188742B (en) Process for producing substituted 3,4-diamni-1,2,5-thiadiazoles and pharmaceutical compositions of hystamine-h2-receptor antagonistic aczivity containing them as active agents
KR100445629B1 (ko) 비치환및치환된n-(피롤-1-일)피리딘아민의항경련제로서의용도