SK12722000A3

SK12722000A3 - Deriváty indolu a farmaceutické prostriedky, ktoré ich obsahujú

Info

Publication number: SK12722000A3
Application number: SK1272-2000A
Authority: SK
Inventors: Makio Kitazawa; Toshiaki Yamaguchi; Hiroshi Miyata; Yukiyoshi Ajisawa
Original assignee: Kissei Pharmaceutical Co., Ltd
Priority date: 1998-02-27
Filing date: 1999-02-19
Publication date: 2001-03-12
Also published as: WO1999043652A1; ATE264841T1; KR20010041403A; NO20004277D0; TWI241293B; CA2321547A1; JP4342101B2; HUP0100680A2; CA2321547C; NZ506497A; CN1157375C; AR014964A1; US6310086B1; DE69916586D1; HK1036974A1; DK1057813T3; NO317257B1; RU2212404C2; EP1057813A1; KR100576207B1

Description

Deriváty indolu a farmaceutické prostriedky, ktoré ich obsahujú

Oblasť vynálezu

Vynález sa týka nových derivátov indolu a ich farmaceutický prijatelných soli, ktoré sú použiteľné ako liečivo.

Doterajší stav techniky

Až dosial sú napríklad timolol maleát a izopropylunoproston známe ako zlúčeniny, ktoré sú použiteľné ako látky znižujúce vnútroočný tlak.

Nedávno bol vyvinutý bunazosín hydrochlorid, ktorý má účinok blokujúci αι-adrenoceptor (ďalej uvádzané ako αι-blokujúci účinok) celkom odlišný od účinku týchto zlúčenín, ako prostriedok na liečenie glaukómu a bol o neho prejavený záujem verejnosti. Avšak bunazosin hydrochlorid bol primárne vyvinutý ako látka na liečenie hypertezie. Pretože bunazosin hydrochlorid je veľmi účinný na krvný tlak, je obava, že môže vyvolávať vedľajšie účinky, ako je hypotenzia a ortostatická hypotenzia.

Obecne sa prevažná časť látok znižujúcich vnútroočný tlak aplikuje topicky vo forme očných kvapiek. Aj v tomto prípade sa aktívna látka distibuuje do celého tela krvným prietokom a dá sa očakávať, že vykazuje systematický účinok. Je preto žiaduce, aby tieto systematické vedľajšie účinky boli minimalizované aj pri topických aplikáciách.

Zlúčeniny, ktoré sa absorbujú do očí ihneď po aplikácii a pôsobia dlhú dobu sú najvýhodnejšie, pretože pôsobia čo najviac topicky.

Preto zlúčeniny, ktoré majú silný znižujúci účinok na vnútroočný tlak s minimalizovaným výskytom vedľajších účinkov, ako je hypotenzia a ortostatická hypotenzia, sa rýchlo absorbujú do očí po nakvapkaní a pôsobia dlhú dobu, a doporučujú sa prevažne ako látky na znižovanie vnútroočného tlaku.

Podstata vynálezu

Predložený vynález sa týka derivátov indolu všeobecného vzorca I

(I) (kde R znamená etylovú skupinu alebo 2,2,2-trifluóretylovú skupinu, Y znamená hydroxyskupinu alebo pivaloyloxyskupinu, s tou výhradou, že keď R znamená 2,2,2-trifluóretylovú skupinu, Y znamená pivaloyloxyskupinu, a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R)-konfigurácii) alebo ich farmaceutický prijateľných solí.

Predložený vynález sa prostriedku, ktorý obsahuje vzorca I tiež týka farmaceutického derivát indolu všeobecného

(kde R znamená etylovú skupinu alebo 2,2,2-trifluóretylovú skupinu, Y znamená hydroxyskupinu alebo pivaloyloxyskupinu, s tou výhradou, že keď R znamená 2,2,2-trifluóretylovú skupinu, Y znamená pivaloyloxyskupinu, a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R)-konfigurácii) alebo jeho farmaceutický prijateľnú sol.

Predoložený vynález sa ďalej týka látky na znižovanie vnútroočného tlaku, ktorá ako účinnú látku obsahuje derivát indolu všeobecného vzorca I

(kde R znamená etylovú skupinu alebo 2,2,2-trifluóretylovú skupinu, Y znamená hydroxyskupinu alebo pivaloyloxyskupinu, a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R)— konfigurácii) alebo jeho farmaceutický prijateľnú sol.

Predložený vynález sa ďalej týka látky na prevenciu alebo liečenie glaukómu alebo očnej hypertenzie, ktorá obsahuje ako účinnú zložku derivát indolu všeobecného vzorca I

(I) (kde R znamená etylovú skupinu alebo 2,2,2-trifluóretylovú skupinu, Y znamená hydroxyskupinu alebo pivaloyloxyskupinu, a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R)— konfigurácii) alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ.

Predložený vynález sa ďalej týka spôsobu prevencie alebo liečenia glaukómu alebo očnej hypertenzie, ktorý spočíva v tom, že sa podáva terapeuticky účinné množstvo derivátu indolu všeobecného vzorca I

(kde R znamená etylovú skupinu alebo 2,2,2-trifluóretylovú skupinu, Y znamená hydroxyskupinu alebo pivaloyloxyskupinu, a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R) konfigurácii) alebo jeho farmaceutický prijatelné soli.

Predložený vynález sa tiež týka použitia derivátu indolu všeobecného vzorca I

(kde R znamená etylovú skupinu alebo 2,2,2-trifluóretylovú skupinu, Y znamená hydroxyskupinu alebo pivaloyloxyskupinu, a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R)konfigurácii) alebo jeho farmaceutický prijatelné soli na prípravu farmaceutického prostriedku na prevenciu alebo liečenie glaukómu alebo očnej hypertenzie.

(kde R znamená etylovú skupinu alebo 2,2,2-trifluóretylovú skupinu, Y znamená hydroxyskupinu alebo pivaloyloxyskupinu, a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R) — konfigurácii) alebo jeho farmaceutický prijatelné soli ako látky na prevenciu alebo liečenie glaukómu alebo očnej hypertenzie.

Ďalej sa predložený vynález týka spôsobu prípravy farmaceutického prostriedku na prevenciu alebo liečenie glaukómu alebo očnej hypertenzie, ktorý spočíva v použití

(kde R znamená etylovú skupinu alebo 2,2,2-trifluóretylovú skupinu, Y znamená hydroxyskupinu alebo pivaloyloxyskupinu, a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R) konfigurácii) alebo jeho farmaceutický prijateľné soli ako účinné zložky uvedeného farmaceutického prosrtiedku.

Vynálezcovia hľadali liečivá, ktoré majú silný predĺžený αι-blokujúci účinok s menšími vedľajšími účinkami, ako je hypotenzia a ortostatická hypotenzia, a s vyššou permeabilitou v očiach. Bolo zistené, že (R)-1-(3hydroxypropyl)-5-[2-[[2-[2-(2,2,2-trifluóretoxy)fenoxy] etyl]amino]propyl]-lH-indol-7-karboxamid (tu označovaný ako zlúčenina A), jeden z derivátov indolu, ktorý bol pred tým vyvinutý ako látka na liečenie dysurie majúci selektívny supresívny účinok na uretrálne kontrakcie s menším ovplyvnením krvného tlaku (publikovaná japonská patentová prihláška (Kokai) č. Hei 7-330726) a (R)-5-[2-[[2-(2etoxyfenoxy)etyl]amino]propyl]-1-(3-hydroxypropyl)-1Hindol-7-karboxamid (tu označovaný ako zlúčenina B) hydrochlorid, majú extrémne silný aj-blokujúci účinok, viac než sedemdesiat krát silnejší než Bunazosin hydrochlorid, s menším výskytom vedľajších účinkov, ako je hypotenzia a ortostatická hypotenzia, a očakáva sa teda, že tieto zlúčeniny pôsobia po dlhšiu dobu, pretože majú nízku vylučovaciu rýchlosť po preniknutí do očí a že sú použiteľné ako výhodné látky na znižovanie vnútroočného tlaku.

Ďalej, pretože zlúčeniny A a B majú malú permeabilitu membránami, ako je rohovka, vynálezcovia hľadali deriváty, ktoré majú vysokú permeabilitu membránami a rýchlo sa po permeácii konvertujú do zlúčenín A alebo B, ktoré majú zlú permeabilitu membránami. Výsledkom bolo prekvapivé zistenie, že deriváty esteru pivalovej kyseliny všeobecného vzorca la

(la) (kde R znamená etylovú skupinu alebo 2,2,2-trifluóretylovú skupinu, Y znamená hydroxyskupinu alebo pivaloyloxyskupinu, a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R)konfigurácii) majú extrémne vysokú memránovú permeabilitu, rýchlo sa hydrolázou po permeácii konvertujú na zlúčeninu A alebo B, ktorá má malú membránovú permeabilitu a sú extrémne stabilné vo vodnom roztoku, čo je normálna forma očných kvapiek, a tak tvoria podstatu predloženého vynálezu.

Vynálezcovia zistili, že zlúčeniny A a B majúce silný αι-blokujúci účinok sú výhodnými zlúčeninami ako látky na znižovanie vnútroočného tlaku. Avšak tieto zlúčeniny majú malú permeabilitu rohovkou a ich koncentrácia vo vodnom moku prednej komory očnej je celkom nízka, ak sa aplikujú tieto zlúčeniny topicky ako očné kvapky. Preto vynálezcovia rozsiahle hladali cestu na získanie plnej koncentrácie liečiva vo vodnom moku prednej komory očnej po aplikácii očných kvapiek.

Po nájdení derivátov zlúčeniny A alebo B, ktoré by sa lahko previedli na zlúčeninu A alebo B v prípade permeácie rohovkou alebo vo vodnom moku prednej komory očnej a vykazovali rýchly účinok, vynálezcovia previedli zlúčeninu A alebo B na množstvo derivátov a stanovovali ich schopnosť štiepenia endogénnou hydrolázou meraním časovej závislosti rýchlosti konverzie na zlúčeninu A alebo B v krvi. Napríklad bolo s prekvapením zistené, že rýchlosti konverzie niektorých esterov zlúčeniny A na zlúčeninu A po 30 minútach v krvi sú extrémne nízke, asi 12 % v prípade zodpovedajúceho 2-etylbutyrátu, asi 4 % v prípade zodpovedajúceho 2,2-dimetylvalerátu, asi 2 % v prípade zodpovedajúceho α,α-dimetylfenylacetátu a asi 6 % v prípade zodpovedajúceho 2,2-dimetylbutyrátu. Zatial čo odpovedajúci pivalát bol už prevedený na zlúčeninu A po 30 minútach v krvi asi zo 67 % a po 2 hodinách takmer úplne. Vynálezcovia zistili, že pivaláty všeobecného vzorca la podľa predloženého vynálezu sa líšia od ostatných karboxylátov a sú špecifickými zlúčeninami, ktoré sa ľahko prevedú na zlúčeninu A alebo B endogénnou hydrolázou v rohovke alebo vo vodnom moku prednej komory očnej.

Vynálezcovia merali časovú závislosť koncentrácie liečiva vo vodnom moku prednej komory očnej po nakvapkaní do očí králikom pre potvrdenie permeability tohoto pivalátu rohovkou. Napríklad v prípade nakvapkania pivalát hydrochloridu zlúčeniny B do oči, koncentrácia zlúčeniny B vo vodnom moku prednej komory očnej bola asi 70krát vyššia po 20 minútach a asi 27krát vyššia po 2 hodinách než v prípade nakvapkania hydrochloridu zlúčeniny B. Takže pivaláty vyššie uvedeného všeobecného vzorca la podlá predloženého vynálezu sú extrémne výbornými zlúčeninami s permeabilitou rohovkou a tiež sú dlho-pôsobiacimi zlúčeninami.

Okrem toho vo vyššie uvedenom pokuse sa pivalát zlúčeniny B rýchlo prevádza na zlúčeninu B v prípade permeácie rohovkou alebo vo vodnom moku prednej komory očnej a nemôže byť vôbec detekovaný vo vodnom moku prednej komory očnej už po 20 minútach. Teda pivaláty vyššie uvedeného všeobecného vzorca la podľa predloženého vynálezu sú permeabilné rýchlo a úspešne rohovkou a sú ľahko rýchlo preveditelné na zlúčeninu A alebo B. Preto sú veľmi výhodnými zlúčeninami, ktoré odhaľujú účinok zlúčeniny A alebo B spoľahlivo a rýchlo. Je teda v pokuse s králikmi potvrdené, že pivaláty vyššie uvedeného všeobecného vzorca la vykazujú veľmi silný a predĺžený účinok znižovania vnútroočného tlaku. Preto sú pivaláty vyššie uvedeného všeobecného vzorca la výborne použiteľnými zlúčeninami ako očné kvapky na prevenciu alebo liečenie glaukómu alebo očnej hypertenzie.

Ďalej sa pivaláty vyššie uvedeného všeobecného vzorca la podľa predloženého vynálezu skoro vôbec nerozkladajú v stave očných kvapiek za vyššej teploty a sú teda extrémne stabilnými zlúčeninami. Napríklad ak sa nechá stáť pivalát zlúčeniny A po dobu asi 1 mesiaca pri teplote 40°C vo forme vodného roztoku, len asi 0,1 % tejto zlúčeniny sa rozloží na zlúčeninu A. Podobne asi 1,1 % tejto zlúčeniny sa rozloží na zlúčeninu A pri teplote 70°C. Takže pivaláty vyššie uvedeného všeobecného vzorca la podľa predloženého vynálezu sú extrémne stabilnými zlúčeninami vo forme vodného roztoku a očné kvapky obsahujúce tieto zlúčeniny sú výborne stabilné pri dlhom skladovaní. Preto sú pivaláty vyššie uvedeného všeobecného vzorca ľa podľa predloženého vynálezu veľmi vhodnými zlúčeninami na topické aplikácie ako očné kvapky.

Zlúčeniny vyššie uvedeného všeobecného vzorca I podľa predloženého vynálezu je možné napríklad pripraviť ochranou sekundárneho atómu dusíka derivátu indolínu všeobecného vzorca II

OR

(II) (kde R a atóm uhlíka označený (R) majú vyššie uvedené významy), ochraňujúcou skupinou, ako je terc. butoxykarbonylová skupina, obvyklým spôsobom, indolinový kruh vzniknutej zlúčeniny sa nechá oxidovať v prítomnosti kovového katalyzátora, ako je paládium na uhlie, a amóniumformiátu za vzniku derivátu indolu všeobecného vzorca

OR (III) (kde P znamená skupinu ochraňujúcu aminoskupinu, a R a atóm uhlíka označený (R) majú vyššie uvedený význam), tento derivát sa nechá reagovať s pivaloylhalogenidom v prípade potreby v prítomnosti bázy a ochraňujúca skupina sa odstráni zvyčajným spôsobom.

Zo zlúčenín vyššie uvedeného všeobecného vzorca I podía vynálezu je možné pivaláty všeobecného vzorca la tiež pripraviť ochranou sekundárneho atómu dusíka derivátu indolínu všeobecného vzorca II ochrannou skupinou, ako je terc. butoxykarbonylová skupina, zvyčajným spôsobom, vzniknutá zlúčenina sa nechá reagovať s pivaloylhalogenidom za prítomnosti bázy, čím sa pripravý derivát indolinu

predloženého farmaceutický (kde P, R a atóm uhlíka označený (R) majú vyššie uvedené významy), indolínový kruh vzniknutej zlúčeniny sa nechá oxidovať za prítomnosti kovového katalyzátora, ako je paládium na uhlie, a amóniumformiátu, po čom sa ochranná skupina odstráni zvyčajným spôsobom.

Deriváty indolu všeobecného vzorca I podľa vynálezu je možné previesť na ich prijateľné soli zvyčajným spôsobom. Ako príklady týchto solí je možné uviesť soli s minerálnymi kyselinami (napríklad s kyselinou chlorovodíkovou, kyselinou brómovodíkovou, kyselinou jódovodíkovou, kyselinou sírovou, kyselinou dusičnou, kyselinou fosforečnou (napríklad kyselinou kyselinou kyselinou a podobne) a soli s organickými kyselinami s kyselinou mravčou, kyselinou octovou, metansulfonovou, kyselinou benzénsulfonovou, p-toulénsulfonovou, kyselinou propiónovou, citrónovou, kyselinou jantárovou, kyselinou vinnou, kyselinou fumarovou, kyselinou maslovou, kyselinou oxalovou, kyselinou malonovou, kyselinou maleinovou, kyselinou mliečnou, kyselinou jablčnou, kyselinou salicylovou, kyselinou benzoovou, kyselinou adipovou, kyselinou uhličitou, kyselinou glutamovou, kyselinou aspartovou a podobne).

Ak sa používajú deriváty indolu všeobecného vzorca I podía predloženého vynálezu a ich farmaceutický prijatelné soli pri praktickom ošetrovaní, sú aplikovateľné v rôznych aplikačných formách. Z týchto foriem je výhodné topické podávanie za použitia očných kvapiek a podobne. Očné kvapky je možné vhodne pripraviť bežnými spôsobmi. Napríklad očné kvapky je možné pripraviť pridaním pivalátu všeobecného vzorca la podľa predloženého vynálezu do sterilné čistenej vody, rozpustením pridaním vhodných farmaceutický prijateľných aditív, ako sú antiseptické látky, izotonické látky a pufre, v prípade potreby za zahrievania a filtrácie na odstránenie prachu a/alebo mikróbov.

Dávky sa určujú v závislosti na pohlaví veku, telesnej hmotnosti, stupňa symptómov a podobne pre každého pacienta, ktorý má byť ošetrený. Napríklad v prípade očných kvapiek je výhodné nakvapkanie roztoku do očí v rozmedzí od 0,001 až 0,5 % raz až trikrát denne.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Predložený vynález je ďalej bližšie objasnený v nasledujúcich porovnávacích príkladoch, príkladoch a testovacích príkladoch.

Porovnávací príklad 1 (R)-3-[7-kyan-5[2-[[2-(2-etoxyfenoxy)etyl]aminoIpropyl]2,3-dihydro-lH-indol-l-yl]propyl]benzoát

K roztoku uhličitanu draselného (32,3 g) v destilovanej vode (120 ml) sa pridá etylacetát (120 ml) a ku zmesi sa za miešania pridá po častiach (R)-3-[5-(2aminopropyl)-7-kyan-2,3-dihydro-lH-indol-l-yl]propylbenzoát L-tartarát (12,0 g). Po 1 hodine reakcie sa reakčná zmes extrahuje etylacetátom, etylacetátová vrstva sa premyje 10 % vodným roztokom uhličitanu draselného a potom roztokom chloridu sodného a vysuší sa bezvodým síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa (R)-3-[5-(2-aminopropyl)-7-kyan-2,3-dihydro-lH-indol-lyl]propylbenzoát (8,98 g) vo forme hnedého oleja.

Vzniknutý (R)-3-[5-(2-aminopropyl)-7-kyan-2,3-dihydrolH-indol-l-yl]propylbenzoát (8,98 g) sa rozpustí v terc. butanole (43 ml). K roztoku sa pridá 2-(2etoxyfenoxy)etylmetan-sulfonát (7,02 g) a uhličitan sodný (2,86 g) a zmes sa zahrieva k varu pod spätným chladičom cez noc. Reakčná zmes sa zahustí za zníženého tlaku, ku zvyšku sa pridá nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného a zmes sa extrahuje etylacetátom. Etylacetátová vrstva sa premyje nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a potom roztokom chloridu sodného a vysuší sa bezvodým síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí chromatografiou na kolóne silikagélu (elučné činidlo: etylacetát a etylacetát/metanol = 100/6). Azeotropickým zahustením vzniknutej olejovej látky sa získa (R)-3-[7kyan-5[2-[[2-(2-etoxyfenoxy)etyl]amino]propyl]-2,3-dihydrolH-indol-l-yl]propyl]benzoát (7,46 g) vo forme hnedého oleja.

¹H-NMR (CDCla) δ ppm: 1,04 (d, J=6,0 Hz, 3H) , 1,41 (t, J=6,9 Hz, 3H), 2,10-2,20 (m, 2H), 2,42 (dd, J=13,6, 6,9 Hz, 1H), 2,63 (dd, J=13,6, 6,0 Hz, 1H) , 2,80-3,10 (m, 5H) ,

3,50-3, 60 (m, 2H) , 3,75 (t, J=7,3 Hz, 2H) , 4,00-4,15 (m, 4H), 4,40-4,50 (m, 2H) , 6, 85-7,00 (m, 6H) , 7,40-7,50 (m, 2H), 7, 50-7,60 (m, 1H) , 8,00-8,10 (m, 2H) .

Špecifická rotácia: [a]p“^/= -14,8° (c = 1,04, metanol).

Porovnávací príklad 2 (R)—5—[2—[[2—(2-etoxyfenoxy)etyl]amino]propyl]-1-(3hydroxypropyl)-2,3-dihydro-lH-indol-7-karbonitril (R) -3-[7-kyan-5-[2-[[2-(2-etoxyfenoxy)etyl]amino]propyl]-2,3-dihydro-lH-indol-l-yl]propyl]benzoát (7,23 g) sa rozpustí v metanole (46 ml) a vzniknutý roztok sa pridá k roztoku hydroxidu draselného (1,54 g) v destilovanej vode (9,2 ml). Po zahrievaní k teplote varu pod spätným chladičom po dobu 1 hodiny sa reakčná zmes zahustí za zníženého tlaku. Ku zvyšku sa pridá destilovaná voda (100 ml) a vzniknutá zmes sa extrahuje etylacetátom. Etylacetátová vrstva sa premyje nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a roztokom chloridu sodného a vysuší sa bezvodým síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa rozpustí v touléne (30 ml) a toulén sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa (R)-515 [2-[[2-(2-etoxyfenoxy)etyl]amino]propyl]-1-(3hydroxypropyl)-2,3-dihydro-lH-indol-7-karbonitril (6,06 g) vo forme svetle hnedého oleja.

¹H-NMR (CDC1₃) δ ppm: 1,05 (d, J=6,0 Hz, 3H), 1,41 (t,

J=6,9 Hz, 3H) , 1, 50-1,90 (m, 1H) , 1,85-2,00 (m, 2H) , 2,43 (dd, J=13,6, 6,9 Hz, 1H) , 2,63 (dd, J=13,6, 6,3 Hz, 1H) ,

2,80-3,10 (m, 5H) , 3,50-3, 60 (m, 2H) , 3,67 (t, J=7,3 Hz, 2H), 3,75-3,85 (m, 2H), 4,00-4,15 (m, 4H), 6,85-7,30 (m, 6H) .

Špecifická rotácia: [a]_D ²⁷= -19,4° (c = 1,06, metanol).

Porovnávací príklad 3 (R)-5-[2-[[2-(2-etoxyfenoxy)etyl]amino]propyl]-1-(3hydroxypropyl)-2,3-dihydro-lH-indol-7-karboxamid (R)-5-[2-[[2-(2-etoxyfenoxy)etyl]amino]propyl]-1-(3hydroxypropyl)-2,3-dihydro-lH-indol-7-karbonitril (5,95 g) sa rozpustí v dimetylsulfoxide (16,4 ml) a k roztoku sa pridá 5N roztok hydroxidu sodného (0,25 ml). Ku zmesi sa pridá 30 % peroxid vodíka (1,55 ml), pričom sa udržuje vnútorná teplota pod 25°C a zmes sa mieša cez noc pri vnútornej teplote 25 až 30°C. K reakčnej zmesi sa pridá roztok siričitanu sodného (2,39 g) v destilovanej vode (82 ml) a zmes sa extrahuje etylacetátom. Etylacetátová vrstva sa premyje nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného, destilovanou vodou a roztokom chloridu sodného a vysuší sa bezvodým síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa prekryštalizuje z etylacetátu, čím sa získa (R)-5-[2-[[2(2-etoxyfenoxy) etyl] amino]propyl] -1- (3-hydroxypropyl) -2,3dihydro-lH-indol-7-karboxamid (4,27 g).

^-NMR (CDC1₃) 5 ppm: 1,07 (d, J=6,2 Hz, 3H), 1,37 (t,

J=7,0 Hz, 3H) , 1, 60-1,85 (m, 3H) , 2,54 (dd, J=13,6, 6,6 Hz,

IH), 2,68 (dd, J=13, 6, 6,4 Hz, IH) , 2,85-3,10 (m, 6H) , 3,19 (t, J=6,6 Hz, 2H), 3,35-3, 45 (m, 2H), 3,75 (t, J=5,4 Hz,

2H) , 3,95-4,20 (m, 4H) , 5,70 (široký s, IH) , 6,66 (široký s, IH) , 6,80-6, 95 (m, 4H) , 7,02 (s, IH) , 7,16 (s, IH) . Špecifická rotácia: [cc]d²⁷= -15,3° (c = 0,98, metanol).

Porovnávací príklad 4

Terc. butyl-(R)-N-[2-[7-karbamoyl-l-(3-hydroxypropyl) -2,3dihydro-lH-indol-5-yl]-1-metyletyl]-N-[2-(2-etoxyfenoxy) etyl]karbamát (R) -5-[2-[[2-(2-etoxyfenoxy)etyl]amino]propyl]-1-(3hydroxypropyl)-2,3-dihydro-lH-indol-7-karboxamid (10,9 g) sa rozpustí v metylénchloride (100 ml) a k roztoku sa pridáva po kvapkách za miešania a chladenia ladom roztok di-terc.butyldikarbonátu (5,87 g) v metylénchloride (25 ml) . Reakčná zmes sa mieša za rovnakých podmienok po dobu 30 minút a potom sa mieša pri teplote miestnosti po dobu 10 hodín. Reakčná zmes sa zahustí za zníženého tlaku a zvyšok sa rozpustí v etylacetáte (150 ml). Roztok sa premyje 10 % vodným roztokom kyseliny citrónovej, nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a roztokom chloridu sodného a vysuší sa bezvodým síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa svetlo hnedý amorfný Terc. butyl-(R)-N-[2-[7-karbamoyl-l(3-hydroxypropyl)-2,3-dihydro-lH-indol-5-yl]-1-metyletyl]N-[2-(2-etoxyfenoxy)-etyl]karbamát (10,2 g).

¹H-NMR (CDCla) δ ppm: 1,20-1,50 (m, 15H), 1,70-1, 85 (m,

2H) , 2,50-4,40 (m, 18H) , 5,75 (široký s, 1H) , 6,63 (široký s, 1H), 6,80-7,20 (m, 6H).

Špecifická rotácia: [a]_D ²⁷= -50 , 4° (c = 1,27, metanol).

Príklad 1 (R)-5-[2-[[2-(2-etoxyfenoxy}etyl]amino]propyl]-1- (3hydroxypropyl)-lH-indol-7-karboxamid (zlúčenina B)

Terc. butyl- (R) -N- [2- [7-karbamoyl-l- (3-hydroxypropyl) 2,3-dihydro-lH-indol-5-yl]-1-metyletyl]-N-[2-(2etoxyfenoxy)-etyl]karbamát (4,93 g) sa rozpustí v metanole (150 ml) a k roztoku sa pridá 10% paládiun na uhlie (490 mg) a amóniumformiát (2,96 g). Zmes sa zahrieva k varu pod spätným chladičom po dobu 36 hodín, ochladí sa a nerozpustná látka sa odfiltruje. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa rozpustí v metanole (150 ml). K roztoku sa pridá 10 % paládium na uhlie (490 mg) a amóniumformiát (2,96 g). Zmes sa zahrieva k varu pod spätným chladičom po dobu 24 hodín, ochladí sa a nerozpustná látka sa odfiltruje. Filtrát sa zahustí za zníženého tlaku a zvyšok sa rozpustí v etylaceráte. Roztok sa premyje vodou a roztokom chloridu sodného a vysuší sa bezvodým síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa biely amorfný Terc. butyl(R) -N- [2- [7-karbamoyl-l- (3-hydroxypropyl) -lH-indol-5-yl] -1metyletyl]-N-[2-(2-etoxyfenoxy)etyl]karbamát (4,55 g). ^XH-NMR (CDCI3) δ ppm: 1,05-1, 50 (m, 15H) , 1,90-2,10 (m,

2H) , 2,70-3, 00 (m, 3H) , 3, 30-3,75 (m, 4H) , 3, 80-4,65 (m,

7H) , 5,75-5,95 (m, 1H) , 6, 40-6, 65 (m, 2H) , 6,75-7,55 (m, 7H),

Špecifická rotácia: [a]_D ³⁰= -47,8°(c = 1,05, metanol).

Terc. butyl-(R)-N-[2-[7-karbamoyl-l-(3-hydroxypropyl)lH-indol-5-yl]-1-metyletyl] -N-[2-(2-etoxyfenoxy)etyl]karbamát (4,55 g) sa rozpustí v izopropanole (50 ml) a k roztoku sa za miešania a chladenia ladom pridáva po častiach koncentrovaná kyselina chlorovodíková (25 ml) . Zmes sa mieša pri teplote miestnosti po dobu 3 hodín, k reakčnej zmesi sa za chladenia ladom pridá nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného a zmes sa extrahuje etylacetátom. Etylacetátová vrstva sa premyje roztokom chloridu sodného a vysuší sa bezvodým síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí chromatograficky na kolóne aminopropylsilikagelu (elučné činidlo: metylénchlorid/metanol = 20/1), čím sa získa biely amorfný (R)-5-[2-[(2-(2-etoxyfenoxy)etyl]amino]propyl]-1-(3-hydroxypropyl)-lH-indol-7-karboxamid (1,27 g). Nevyčistená zmes sa ďalej čistí chromatograficky na kolóne aminopropylsilikagelu (elučné činidlo: etylacetát/etanol = 7/1) a vyčistený produkt sa spojí s predchádzajúcim vyčisteným produktom, čím sa získa biely amorfný (R)-5-[2-([2-(2-etoxyfenoxy}etyl]amino]propyl]-1(3-hydroxypropyl)-lH-indol-7-karboxamid (2,39 g).

^XH-NMR (CDC1₃) δ ppm: 1,11 (d, J=6,3 Hz, 3H) , 1,25 (t,

J=7,0 Hz, 3H) , 1,95-2,10 (m, 2H) , 2,70-3,20 (m, 6H) , 3,52 (t, J=5,6 Hz, 2H), 3,93 (q, J=7,0 Hz, 2H) , 4,00-4,20 (m,

2H) , 4,38 (t, J=7,0 Hz, 2H) , 5,90 (široký s, 1H) , 6,38 (široký s, 1H), 6,49 (d, J=3,2 Hz, 1H), 6,75-6,95 (m, 4H),

7,11 (d, J=3,2 Hz, 1H), 7,19 (d, J=l,5 Hz, 1H) , 7,53 (d,

J=l,4 Hz, 1H).

Špecifická rotácia: [a]_D ³°= -15,5° (c = 1,02, metanol).

Príklad 2 (R)-5-[2-[[2-(2-etoxyfenoxy)etyl]amino]propyl]-1-(3-hydroxypropyl)-lH-indol-7-karboxamid hydrochlorid (hydrochlorid zlúčeniny B).

(R) -5-[2-[[2-(2-etoxyfenoxy}etyl]aminojpropyl]-1-(3hydroxypropyl)-lH-indol-7-karboxamid (862 mg) sa rozpustí v etanole (5 ml) a k roztoku sa pridá 2 N kyselina chlorovodíková (985 μΐ) . Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, zvyšok sa rozpustí v etanole (3 ml) a k roztoku sa pridá etylacetát (12 ml). Zmes sa nechá stáť a vzniknuté kryštály sa odoberú filtráciou, čim sa získa (R) —

5-[2-[[2-(2-etoxyfenoxy)etyl]amino]propyl]-1-(3-hydroxypropyl)-lH-indol-7-karboxamid hydrochlorid (821 mg).

^XH-NMR (CDC1₃) 8 ppm: 1,19 (d, J=6,4 Hz, 3H) , 1,26 (t, J=7,0 Hz, 3H) , 1,70-1,85 (m, 2H) , 2, 65-2,80 (m, 1H) , 3,203,55 (m, 5H) , 3,64 (široký s, 1H) , 4,02 (q, J=7,0 Hz, 2H) , 4,20-4,40 (m, 4H) , 4,55 (t, J=5,0 Hz, 1H) , 6,45 (d, J=3,l Hz, 1H) , 6,85-7,15 (m, 5H) , 7,36 (d, J=3,l Hz, 1H), 7,49 (d, J=l,3 Hz, 1H) , 7,60 (široký s, 1H) , 7,99 (široký s,

1H) , 9, 05-9, 30 (m, 2H) .

Špecifická rotácia: [a]_n ³⁰= -7,8°(c = 1,16, metanol).

Príklad 3 (R) -3-[7-karbamoyl-5-[2-[[2-(2-etoxyfenoxy)etyl]amino]propyl]-ΙΗ-indol-l-yl]propylpivalát (zlúčenina C)

Terc. butyl-(R)-N-[2-[7-karbamoyl-l-(3-hydroxypropyl)2, 3-dihzdro-lH-indol-5-yl]-1-metyletyl]-N-[2-(2-etoxyfenoxy) etyl]-karbamát (6,24 g) sa rozpustí v bezvodom pyridíne (9,4 ml) a k roztoku sa pridá pivaloylchlorid (1,54 ml). Zmes sa mieša pri teplote miestnosti cez noc a k reakčnej zmesi sa pridá nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného. Zmes sa extrahuje etylacetátom, _t etylacetátová vrstva sa premyje nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a roztokom chloridu sodného a * vysuší sa bezvodým síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí chromatografiou na kolóne aminopropylsilikagelu (elučné činidlo:

hexan/etylacetát = 1/1), čím sa získa bezfarbý amorfný (R)—

3-[5-[2-[N-(terc.butoxykarbonyl)-N-[2-(2-etoxyfenoxy)etyl]aminolpropyl]-7-karbamoyl-2,3-dihydro-lH-indol-l-yl]propylpivalát (4,30 g).

¹H-NMR (CDC1₃) δ ppm: 1,15-1,50 (m, 24H) , 1,85-2, 00 (m,

2H) , 2,55-3,20 (m, 6H) , 3, 30-3, 60 (m, 4H) , 3, 85-4,40 (m,

7H) , 5,52 (široký s, 1H) , 6, 80-7,40 (m, 7H) .

Špecifická rotácia: [a]p^?7= -38,3°(c = 1,03, metanol).

(R)-3-[5-[2-[N-(terc.butoxykarbonyl)-N-[2-(2etoxyfenoxy)-etyl]amino]propyl]-7-karbamoyl-2,3-dihydro-lHindol-l-yl]-propylpivalát (8,53 g) sa rozpustí v metanole (280 ml) a k roztoku sa pridá 10 % paládium na uhlie (853 mg) a amóniumformiát (3,97 g). Zmes sa zahrieva k varu pod spätným chladičom po dobu 13 hodín a katalyzátory sa » odfiltrujú. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa svetlo zelený amorfný (R)-3-[5-[2-[N(terc.butoxykarbonyl)-N-[2-(2-etoxyfenoxy)etyl]aminolpropyl] -7-karbamoyl-lH-indol-l-yl]propylpivalát (8,20 g). ¹H-NMR (CDCI3) δ ppm: 1,05-1,50 (m, 24H) , 1,90-2,10 (m,

2H), 2,70-3, 05 (m, 2H) , 3,30-3,75 (m, 2H), 3, 85-4,70 (m, 9H) , 5,66 (široký s, 1H) , 6, 35-6,50 (m, 2H) , 6,75-7,55 (m, 7H) .

Špecifická rotácia: [ot] d²⁷= -44,5° (c = 1,06, metanol).

(R)-3-[5-[2-[N-(terc.butoxykarbonyl)-N-[2-(2etoxyfenoxy)etyl]amino]propyl]-7-karbamoyl-lH-indol-lyl]propylpivalát (7,81 g) sa rozpustí v izopropanole (78 ml) a k roztoku sa v priebehu 10 minút za miešania a chladenia ladom pridáva po kvapkách koncentrovaná kyselina chlorovodíková (39 ml) . Zmes sa mieša pri teplote miestnosti po dobu 4 hodín a potom sa reakčná zmes za chladenia ľadom a miešania upraví pridaním práškového hydrogénuhličitanu sodného na pH 8. Zmes sa zriedi vodou (200 ml) a extrahuje sa etylacetátom. Etylacetátová vrstva sa premyje nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného, potom vodou a roztokom chloridu sodného a vysuší sa bezvodým síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí chromatografiou na kolóne aminopropylsilikagelu (elučné činidlo: etylacetát) a prekryštalizuje sa zo zmesi dietyléteru a hexánu (2/1), čím sa získa (R)-3-[7-karbamoyl-5-[2-[[2-(2etoxyfenoxy)etyl]amino]-propyl]-lH-indol-l-yl]propylpivalát (5,21 g) vo forme bezfarebných kryštálov.

^XH-NMR (CDC1₃) δ	ppm:	1, 11 (d, J=6,2 Hz, 3H) , 1,	21 (s,	9H) ,
1,27 (t, J=7,0	Hz,	3H), 1,95-2,10 (m, 2H),	2,75	(dd,
J=13,6, 6,4 Hz,	IH) ,	2,85 (dd, J=13,6, 6,6 Hz,	IH) ,	2,95-
3,10 (m, 3H), 3	, 85-4	,00 (m, 4H), 4,00-4,20 (m,	2H) ,	4,35-

4,45 (m, 2H), 5,55-5, 65 (široký s, IH) , 6, 05-6,20 (široký

S, IH), 6,47 (d, J=3,2 Hz, IH) , 6,75-6, 95 (m, 4H) , 7,06 (d, J=3,2 Hz, IH) , 7,21 (d, J=l,5 Hz, IH) , 7,54 (d,

J=l,5 Hz, IH).

Špecifická rotácia: [a]_D ^z7= -15,8° (c = 1,06, metanol).

Príklad 4

Nasledujúca zlúčenina sa pripraví podobným spôsobom, ako je popísané v príklade 3, za použitia Terc. butyl-(R)N-[2-[7-karbamoyl-l-(3-hydroxypropyl)-2,3-dihydro-lH-indol5-yl]-1-metyletyl]-N-[2-[2-(2,2,2-trifluóretoxy)fenoxy]etyl]-karbamátu namiesto Terc. butyl-(R)-N-[2-[7-karbamoyl1-(3-hydroxypropyl)-2,3-dihzdro-lH-indol-5-yl]-1metyletyl]-N-[2-(2-etoxyfenoxy)etyl]-karbamátu.

(R)-3-[7-karbamoyl-5-[2-[[2-[2-(2,2,2-trifluóretoxy)fenoxy] -etyl]amino]propyl]-lH-indol-l-yl]propylpivalát (zlúčenina D).

’R-NMR (CDC1₃) δ ppm: 1,11 (d, J=6,2 Hz, 3H) , 1,21 (s, 9H) , 2,00-2,10 (m, 2H) , 2,73 (dd, J=13,5, 6,5 Hz, IH), 2,84 (dd, J=13,5, 6,8 Hz, IH) , 2,95-3,15 (m, 3H) , 3, 90-4,00 (m, 2H) , 4,00-4,30 (m, 4H) , 4,35-4,45 (m, 2H), 5,73 (široký s, IH), 6,10 (široký s, IH), 6,47 (d, J=3,2 Hz, IH), 6, 80-7, 05 (m, 4H) , 7,07 (d, J=3,2 Hz, IH) , 7,19 (d, J=l,4 Hz, IH) , 7,54 (d, J=l,4 Hz, IH).

Špecifická rotácia: [a] _D ^z7= -17,5° (c = 0,79, metanol).

Príklad 5 (R)-3-[7-karbamoyl-5-[2-[[2-(2-etoxyfenoxy)etyl] amino] propyl]-ΙΗ-indol-l-yl]propylpivalát hydrochlorid (zlúčenina C hydrochlorid)

K roztoku (R)-3-[7-karbamoyl-5-[2-[[2-(2-etoxyfenoxy) etyl]amino]-propyl]-ΙΗ-indol-l-yl]propylpivalát (6,07 g) v etanole (58 ml) sa za miešania a chladenia ľadom pridáva po kvapkách 1 N kyselina chlorovodíková (11,6 ml) a zmes sa mieša za tých istých podmienok po dobu 15 minút. Reakčná zmes sa zahustí za zníženého tlaku a ku zvyšku sa pridá etanol. Po azeotropickom odstránení vody sa zvyšok rozpustí v etanole (6 ml) a k roztoku sa pridá etylacetát (60 ml) . Zmes sa nechá stáť pri teplote miestnosti po dobu 16 hodín a získajú sa bezfarebné surové kryštály (5,14 g). Kryštály sa spoja s ďalšími surovými kryštálmi získanými obdobným spôsobom, spojené kryštály (8,12 g) sa prekryštalizujú zo zmesi etanolu a etylacetátu (15/1), čím sa (R)—3—[7— karbamoyl-5-[2-[[2-(2-etoxyfenoxy)etyl]amino]-propyl]-1Hindol-l-yl]propylpivalát hydrochlorid (7,46 g) vo forme bezfarebných kryštálov.

¹H-NMR (CDC1₃) δ ppm: 1,21 (s, 9H) , 1,29 (t, J=7,0 Hz, 3H) , 1,45 (d, J=6,5 Hz, 3h) , 1,95-2,10 (m, 2H) , 3,12 (dd,

J=14,0, 7,2 Hz, 1H), 3, 30-3, 60 (m, 3H) , 3, 85-4,05 (m, 5H) ,

4,30-4,50 (m, 4H) ,	5, 87	(S,	1H) ,	6,40 (d,	J=3,2	Hz, 1H) ,
6, 80-7,00 (m, 4H) ,	7,05	(d,	J=3, 2	Hz, 1H),	7,33	(d, J=l,5
Hz, 1H) , 7,36 (s,	1H), 7	, 50	(d,	J=l,5 Hz,	1H) ,	9, 10-9,30

(široký s, 1H), 9,50-9,65 (široký s, 1H) .

Špecifická rotácia: [α]_Β^’= -7,0° (c = 1,22, metanol).

Porovnávací príklad 5 (R)-3-[7-karbamoyl-5-[2-[[2-[2-(2,2,2-trifluóretoxy) fenoxy] etyl]amino]propyl]-lH-indol-1-yl]propyl-2-etylbutyrát (zlúčenina a)

K roztoku (R)-5-[2-[[2-[2-(2,2,2-trifluóretoxy)fenoxy]etyl]amino]propyl]-1-(3-hydroxypropyl)-2,3-dihydrolH-indol-7-karboxamidu (3,0 g) v metylénchloride (50 ml) sa pridá za chladenia ľadom diterc. butyldikarbonát (1,32 g) a zmes sa mieša za chladenia ľadom po dobu 30 minút a potom cez noc pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa zahustí za zníženého tlaku a zvyšok sa rozpustí v etylacetáte (50 ml). Roztok sa premyje 10% vodným roztokom kyseliny citrónovej, nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a potom roztokom chloridu sodného a vysuší sa bezvodým síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa svetlo hnedý amorfný Terc. butyl-(R)-N-[2-[7karbamoyl-1-(3-hydroxypropyl)-2,3-dihydro-lH-indol-5-yl]-1metyletyl]-N-[2-[2-(2,2,2-trifluóretoxy)fenoxy]etyl] karbamát (2,99 g).

¹H-NMR (CDC1₃) δ ppm: 1,20-1,50 (m, 12H) , 1,70-1, 85 (m,

2H), 2,50-4,50 (m, 18H), 5,89 (široký s, 1H), 6,69 (široký s, 1H), 6,80-7,20 (m, 6H).

Špecifická rotácia: [α]_ΓΛ^:- -41, 6° (c = 1,12, metanol).

Terc. butyl-(R)-N-[2-[7-karbamoyl-l-(3-hydroxypropyl)2, 3-dihydro-lH-indol-5-yl]-1-metyletyl]-N-[2-[2-(2,2,2trifluóretoxy)fenoxy]etyl]karbamát (12,0 g) a amóniumformiát (12,7 g) sa rozpustí v metanole (300 ml) a k roztoku sa opatrne pridá 10% paládium na uhlie (1,20 g). Zmes sa zahrieva cez noc k varu pod spätným chladičom a rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku. Ku zvyšku sa pridá voda a zmes sa extrahuje etylacetátom. Etylacetátová vrstva sa premyje roztokom chloridu sodného a vysuší sa bezvodým síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku, čím sa získa amorfný Terc. butyl-(R)-N-[2[7-karbamoyl-l-(3-hydroxypropyl)-lH-indol-5-yl]-1metyletyl]-N-[2-[2- (2,2,2-trifluóretoxy)fenoxy]etyl] karbamát (12,2 g).

¹H-NMR (CDCI3) δ ppm: 1,1-1,4 (m, 12H) , 1,95-2,1 (m, 2H) ,

2,7-3,0 (m, 2H) , 3,25-3,7 (m, 4H) , 3,8-4,2 (m, 3H) , 4,3-4,6 (m, 4H) , 5,91 (široký s, 1H) , 6,45-6,6 (m, 2H) , 6,75-7,6 (m, 7H) .

Špecifická rotácia: [a]_n ²⁷= -44,5° (c = 1,11, metanol).

Terc. butyl-(R)-N-[2-[7-karbamoyl-l-(3-hydroxypropyl)lH-indol-5-yl]-1-metyletyl]-N-[2-[2-(2,2,2-trifluóretoxy) fenoxy]etyl]karbamát (2,00 g) sa rozpustí v bezvodom pyridíne (3 ml) ak roztoku sa pridá 2-etylbutyrylchlorid (0,54 g) pripravený z 2-etylmaslovej kyseliny a oxalylchloridu. Zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti, k reakčnej zmesi sa pridá nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného a zmes sa extrahuje etylacetátom. Etylacetátová vrstva sa premyje nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a potom roztokom chloridu sodného a vysuší sa bezvodým síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí chromatografiou na kolóne silikagélu (elučné činidlo hexan/etylacetát = 2/1), čím sa získa biely amorfný (R)—3— [5-[2-[N-(terc.butoxykarbonyl)-N-[2-[2-(2,2,2-trifluóretoxy)fenoxy]etyl]amino]propyl]-7-karbamoyl-lH-indol-l-yl]propyl)-2-etylbutyrát (1,66 g).

^-NMR (CDC1₃) δ ppm: 0,90 (t, J=7,4 Hz, 6H) , 1,10-1,40 (m, 12H), 1,45-1,70 (m, 4H) , 1,90-2,10 (m, 2H) , 2,15-2,30 (m, 1H), 2,70-3, 00 (m, 2H) , 3,30-3,70 (m, 2H) , 3, 80-4,70 (m,

7H) , 4,36 (q, J=8,4 Hz, 2H) , 5,62 (široký s, 1H) , 6,40-6,50 (m, 2H) , 6, 85-7, 40 (m, 6H) , 7,45-7,55 (m, 1H) .

Špecifická rotácia: [a]_D ³¹⁼ -41,8° (c = 0,99, metanol).

(R)-3-[5-[2-[N-(terc.butoxykarbonyl)-N-[2-[2-(2,2, 2trifluór-etoxy) fenoxy] etyl] amino]propyl] -7-karbamoyl-lHindol-l-yl]-propyl)-2-etylbutyrát (1,56 g) sa rozpustí v izopropanole (10 ml) a k roztoku sa za miešania a chladenia ľadom pridáva po kvapkách koncentrovaná kyselina teplote chlorovodíková (5,0 ml). Zmes sa mieša pri miestnosti po dobu 4 hodín, k reakčnej zmesi sa za chladenia ľadom pridá nasýtený vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného a zmes sa extrahuje etylacetátom. Etylacetátová vrstva sa premyje roztokom chloridu sodného a vysuší sa bezvodým síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a zvyšok sa čistí chromatografiou na kolóne silikagélu (elučné činidlo: metylénchlorid/metanol = 20/1) a prekryštalizuje sa zo zmesi dietyléteru a hexánu, čím sa získa (R)-3-[7karbamoyl-5-[2-[[2-[2-(2,2,2-trifluóretoxy)fenoxy]etyl] amino]propyl]-lH-indol-l-yl]propyl-2-etylbutyrát (1,10 g) vo forme bielych kryštálov.

^XH-NMR (CDC1₃) δ ppm: 0,90 (t, J=7,4 Hz, 6H) , 1,11 (d,

J=6,2 Hz, 3H), 1,45-1,70 (m, 4H), 2,00-2,10 (m, 2H), 2,152,25 (m, 1H), 2, 65-2,90 (m, 2H) , 2,95-3,15 (m, 3H), 3,99 (t, J=6,3 Hz, 2H), 4,00-4,30 (m, 4H) , 4,41 (t, J=6,9 Hz,

2H) , 5,64 (široký s, 1H), 6,07 (široký s, 1H), 6,47 (d,

J=3,2 Hz, 1H), 6, 80-7,05 (m, 4H) , 7,08 (d, J=3,2 Hz, 1H) , 7,19 (d, J=l,6 Hz, 1H, , 7,54 (d, J=l,6 Hz, 1H) .

Špecifická rotácia: [a]_D ³°= -16,4° (c = 1,00, metanol).

Porovnávací príklad 6

Nasledujúce zlúčeniny sa pripravia podobným spôsobom ako v porovnávacom príklade 5 za použitia odpovedajúceho halogenidu kyseliny miesto 2-etylbutyrylchloridu.

(R)-3-[7-karbamoyl-5-[2-[[2-[2-(2,2,2-trifluóretoxy)fenoxy] etyl]amino]propyl]-ΙΗ-indol-l-yl]propyl)-2,2-dimetylvalerát (zlúčenina b) ^XH-NMR (CDC1₃) δ ppm: 0,90 (t, J=7,3 Hz, 3H) , 1,11 (d, J=6,2 Hz, 3H) , 1,18 (s, 9H) , 1,19-1,28 (m, 2H) , 1,49-1,53 (m, 2H), 2,03-2,06 (m, 2H) , 2,73 (dd, J=13,5, 6,5 Hz, IH) , 2,84 (dd, J=13,5, 6,8 Hz, IH) , 3,00-3,10 (m, 3H) , 3,96 (t, J=6,2 Hz, 2H) , 4, 07-4,23 (m, 4H) , 4,40 (t, J=6,9 Hz, 2H), 5,66 (široký s, IH), 6,09 (široký s, IH), 6,47 (d, J=3,2

Hz, IH), 6,84-7,03 (m, 4H) , 7,07 (d, J=3,2 Hz, IH) , 7,19 (d, J=l,6 Hz, IH) , 7,54 (d, J=l,6 Hz, IH) .

Špecifická rotácia: [a]_D ³⁰= -16,2°(c = 0,82, metanol).

(R)-3-[7-karbamoyl-5-[2-[[2-[2-(2,2,2-trifluóretoxy)fenoxy] etyl]amino]propyl]-lH-indol-l-yl]propyl-α, a-dimetylfenylacetát (zlúčenina c) ¹H-NMR (CDCI3) δ ppm: 1,10 (d, J=6,2 Hz, 3H), 1,60 (s, 6H), 1,80-1,96 (m, 2H) , 2,71 (dd, J=13,7, 6,4 Hz, IH) , 2,82 (dd, J=13,5, 6,7 Hz, IH), 2,96-3,10 (m, 3H), 3,90 (t, 2H), 4,034,28 (m, 6H) , 5,58 (široký s, IH) , 6,00 (široký s, IH), 6,37 (d, J=3,l Hz, IH), 6, 84-7, 03 (m, 4H) , 6,68 (d, J=3,2 Hz, IH), 7,19 (d, J=l,6 Hz, IH) , 7,54 (d, J=l,6 Hz, IH) . Špecifická rotácia: (a]_D ²⁹= -13,7° (c = 1,15, metanol).

(R)-3-[7-karbamoyl-5-[2-[[2-[2-(2,2,2-trifluóretoxy)fenoxy] etyl]amino]propyl]-lH-indol-l-yl]propyl-2,2-dimetylbutyrát (zlúčenina d)

	¹H-NMR (CDCI3)	δ ppm: 0,85	(t,	J=7,5 Hz, 3H) , 1,12 (d,
	J=6,2 Hz, 3H) ,	1,17 (s, 6H),	1,57	(q, J=7,5	Hz, 4H), 2,00-
•	2,10 (m, 2H) ,	2,70-2,90 (m,	2H) ,	2,95-3,15	(m, 3H), 3,97
	(t, J=6,2 Hz,	2H), 4,00-4,40	(m,	4H) , 4,40	(t, J=7,0 Hz,

2H), 5,70 (široký s, IH), 6,12 (široký s, IH), 6,47 (d, J=3,2 Hz, IH), 6,80-7,05 (m, 4H), 7,07 (d, J=3,2 Hz, IH), 7,19 (d, J=l,6 Hz, IH), 7,54 (d, J=l,5 Hz, IH).

Špecifická rotácia: [α]ο³¹⁼ -15,4°(c = 1,00, metanol).

Testovací príklad 1

Test merania blokujúceho účinku ai-adrenoceptora

Vývod deferenses (asi 1,5 cm zo strany varlát) sa izoluje zo samcov Wistar krýs (asi 300 až 350 g telesnej hmotnosti). Po odstránení krvnej cievy a spojovacieho tkaniva sa každý preparát vertikálne suspenduje v Magnusovom kúpeli obsahujúcom 10 ml Krebs-Henseleitovho roztoku udržovaného na 37°C a preplachovaného zmesou 95% kyslíka a 5% oxidu uhličitého a upraví sa na napetie 1 g. Do Magnusovho kúpela sa pridá roztok zmesi obsahujúci propranorol a yohimbin (konečná koncentrácia: propranorolu μΜ a yohimbinu 0,1 μΜ) . Po 30 minútach sa do Magnusovho kúpela pridá norepinefrin do konečnej koncentrácie 10 μΜ a akonáhle sa dosiahne maximálna koncentrácia, každý preparát sa premyje. Tento postup sa opakuje niekoľkokrát, až sú výšky kontrakcií stabilné. Každý preparát sa 30 minút vopred spracuje roztokom obsahujúcim testovanú zlúčeninu a potom sa meria koncentrácia po aplikácii 10 μΜ norepinefrinu. Kontrakcia každého preparátu bez predspracovania testovanou zlúčeninou sú vyjadrené ako 100 %. Blokujúci účinok na αι-adrenoceptor testovanej zlúčeniny sa vyjadruje ako molárna koncentrácia zlúčeniny nutná pre 50 % inhibíciu kontrakcie pred pridaním norepinefrinu (t.j. IC₅o hodnota). Výsledky sú uvedené v tabulke 1.

Tabuľka 1

testovaná zlúčenina	ICso (nM)
zlúčenina A	2,7
zlúčenina B hydrochlorid	4,3
bunazosin hydrochlorid	315

Testovací príklad 2

Test na meranie koncentrácie drogy vo vodnom moku (1) (1) Metóda ’

Po nakvapkaní 0,1 roztoku (R)-5-[2-[[2-(2etoxyfenoxy)etyl]amino]propyl]-1-(3-hydroxypropyl)-1Hindol-7-karboxamid hydrochloridu (hydrochlorid zlúčeniny B) (50 μΐ) do oka japonských bielych králikov (asi 3 kg telesnej hmotnosti, Japan SLC), načo sa v časových intervaloch odoberá očný mok. K odoberanému vodnému očnému moku (0,1 ml) sa ako vnútorný štandard pridá (R)-3-chlór-l(3-hyroxypropyl)-5-[2-[[2-[2-(2,2,2-trifluóretoxy) -fenoxy]etyl]amino]propyl]-lH-indol-7-karboxamid (10 ng) a ku zmesi sa pridá 0,1 M fosfátový pufer (pH 7,6) a chlorid sodný (asi 1 g). Vzniknutá zmes sa extrahuje dietyléterom (5 ml) a dietyléterová vrstva sa zahustí pod prúdom dusíka. Vzniknutý odparok sa rozpustí v mobilnej fáze (200 μΐ), po čom sa 100 μΐ roztoku injikuje do kvapalinového chromatografu s vysokou rozlišovacou schopnosťou (HPLC) a stanovuje sa zlúčenina B za nasledujúcich podmienok. Výsledky sú uvedené v tabuľke 2.

(2) Podmienky HPLC

Analytická kolóna: Inertsil ODS-3 (4,6 x 250 mm)

Mobilná fáza: acetonitril/0,1 % kyselina fosforečná + 2mM laurylsulfát sodný = 1/1

Teplota kolóny 50°C

Rýchlosť prietoku: 1,0 ml/minúta

Fluórometria: excitačná vlnová dĺžka 270 nm, emisná vlnová dĺžka 435 nm

Tabuľka 2

testovaná zlúčenina	koncentrácia liečiva(ng/ml)
20 minút po	2 hodiny po	6 hodín po
zlúčenina B	2	20	8

Testovací príklad 3

Test rýchlosti hydrolýzy endogénnym enzýmom (1) Metóda

K celkovej krvi (0,5 ml) odoberanej samcom Wistar krýs vo forme heparisovanej krvi sa pridá vždy ester (R)-1-(3hyroxypropyl)-5-[2-[[2-[2-(2,2,2-trifluóretoxy)fenoxy]etyl] amino]propyl]-lH-indol-7-karboxamidu (zlúčenina A) a vnútorný štandard (R)-3-chlór-l-(3-hyroxypropyl)-5-[2-[[2[2-(2,2,2-trifluóretoxy)-fenoxy]etyl]amino]propyl]-lHindol-7-karboxamid (1 gg) a zmes sa inkubuje pri 37°c. Po 15 minútach, 30 minútach, 1 hodine a 2 hodinách sa reakcia zastaví tak, že sa do každej vzorky pridá 0,7 M vodný roztok fluoridu sodného (0,5 ml) ako inhibítora esterázy. Ku zmesi sa pridá 0,1 M fosfátový pufer (pH 7,6) a chlorid sodný (asi 1 g) a vzniknutá zmes sa extrahuje dietyléterom (5 ml) . Dietyléterová fáza sa potom zahustí pod prúdom dusíka. Odparok sa rozpustí v mobilnej fáze (300 μΐ), 10 μΐ roztoku sa injikuje do kvapalinového chromatografu s vysokou rozlišovacou schopnosťou a testovaná zlúčenina a zlúčenina A sa stanovia za nasledujúcich podmienok. Výsledky sú uvedené v tabulke 3.

(2) Podmienky HPLC

Analytická kolóna: Inertsil ODS-3 (4,6 x 250 mm)

Mobilná fáza: acetonitril/20 mM acetátový pufer (pH 5,0) = 40/60

Teplota kolóny 50°C

Rýchlosť prietoku: 1,0 ml/minúta

Tabuľka 3

testovaná		rýchlosť	rozkladu	(%)
zlúčenina	15 minút po	30 minút po	1 hodina po	2 hodiny po
zlúčenina D	54,8	67,1	86,5	98, 6
zlúčenina a	8,4	12	12, 6	25,2
zlúčenina b	2,2	3, 8	7,5	10,2
zlúčenina c	0, 6	1,6	3,2	3,7
zlúčenina d	2,1	5, 6	8,4	21,7

Testovací príklad 4

Test merania koncentrácie liečiva vo vodnom moku (2) (1) Metóda

Japonským bielym králikom (asi 3 kg telesnej hmotnosti, Japan SLC) sa do očí nakvapká 0,1% roztok (R)-3[7-karbamoyl-5-[2-[[2-(2-etoxyfenoxy)etyl]amino]propyl] -1Hindol-l-yl]propylpivalát hydrochloridu (hydrochlorid zlúčeniny C) a vodný mok sa odoberá v časových intervaloch. K odoberanému očnému moku sa (0,1 ml) pridá vnútorný štandard, [(R)-3-chlór-l-(3-hyroxypropyl)-5-[2- [ [2- [232 (2,2,2-trifluóretoxy)-fenoxy]- etyl]amino]propyl]-lH-indol7-karboxamid] (10 ng) a ku zmesi sa pridá 0,1 M fosfátový pufer (pH 7,6) a chlorid sodný (asi 1 g). Vzniknutá zmes sa extrahuje dietyléterom (5 ml) a dietyléterová vrstva sa zahusti pod prúdom dusíka. Odparok sa rozpustí v mobilnej fáze (200 μΐ), a 100 μΐ roztoku sa injikuje do kvapalinového chromatografu s vysokou rozlišovacou schopnosťou a testovaná zlúčenina a zlúčenina C a (R)-5-[2[[2-(2-etoxyfenoxy)etyl]amino]propyl]-1-(3-hydroxypropyl)lH-indol-7-karboxamid (zlúčenina B) sa stanovia za nasledujúcich podmienok. Výsledky sú uvedené v tabulke 4.

(2) Podmienky HPLC

Analytická kolóna: Inertsil ODS-3 (4,6 x 250 mm)

Teplota kolóny 50°C

Rýchlosť prietoku: 1,0 ml/minúta

Tabuľka 4

testovaná zlúčenina	koncentrácia liečiva(ng/ml)
20 minút po	2 hodiny po	6 hodín po
zlúčenina B	140	546	136
zlúčenina C	<1	<1	<1

Testovací príklad 5

Stabilný test

Testované zlúčeniny sa rozpustia v 0,1 M acetátovom pufre (pH 5,0) a pripravia sa 0,1 % roztoky. Každý 0,1 % roztok sa nechá stáť v temnote po dobu 28 dní pri teplote 40°C, 50°C, 60°C a 70°C. Výsledky sú uvedené v tabulke 5.

Tabulka 5

testovaná zlúčenina	pomer	zvyšku (%)
40°C	50°C	60°C	70°C
zlúčenina D	99, 9	99,7	99, 5	98, 9
zlúčenina A	0,1	0, 3	0, 5	1,1

Testovací príklad 6

Akútny toxický stav

Samce SD krýs staré 7 týždňov (n=5, 190-210 g telesnej hmotnosti) sa nechajú vyhladovať po dobu 18 hodín. (R)-3[7-karbamoyl-5-[2-[[2-(2-etoxyfenoxy)etyl]amino]propyl]-1Hindol-l-yl]propylpivalát hydrochlorid sa suspenduje v 0,5% vodnom roztoku metylcelulózy na koncentráciu 100 mg/ml a orálne sa aplikuje krysám v dávke 1000 mg/kg. 24 hodín po aplikácii nedošlo k žiadnemu uhynutiu krýs.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Derivát indolu všeobecného vzorca

Y (kde R znamená etylovú skupinu alebo 2,2,2-trifluóretylovú skupinu, Y znamená hydroxyskupinu alebo pivaloyloxyskupinu, s tou výhradou, že keď R znamená 2,2,2-trifluóretylovú skupinu, Y znamená pivaloyloxyskupinu, a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R)-konfigurácii) alebo jeho farmaceutický prijatelná soľ.
2. Derivát indolu podľa nároku 1, všeobecného vzorca

O

O (kde R znamená etylovú skupinu alebo 2,2,2-trifluóretylovú skupinu a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R)-konfigurácii) alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.

35
3. Derivát indolu podľa nároku 1, všeobecného vzorca (kde atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R)konfigurácii) alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
4. Farmaceutický prostriedok, vyznačuj úci sa tým, že obsahuje derivát indolu všeobecného vzorca (kde R znamená etylovú skupinu alebo 2,2,2-trifluóretylovú skupinu, Y znamená hydroxyskupinu alebo pivaloyloxyskupinu, s tou výhradou, že keď R znamená 2,2,2-trifluóretylovú skupinu, Y znamená pivaloyloxyskupinu, a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R)-konfigurácii) alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ.
5. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 4, vyznačujúci sa tým, že obsahuje derivát indolu všeobecného vzorca

Ο

Ο (kde R znamená etylovú skupinu alebo 2, 2,2-trifluóretylovú skupinu a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R)-konfigurácii) alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ.
6. Prostriedok na znižovanie vnútroočného tlaku, vyznačujúci sa tým, že ako účinnú látku obsahuje derivát indolu všeobecného vzorca

Y (kde R znamená etylovú skupinu alebo 2,2,2-trifluóretylovú skupinu a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R)-konfigurácii) alebo jeho farmaceutický prijateľnú sol.
7. Prostriedok na znižovanie vnútroočného tlaku podľa nároku 6, vyznačujúci sa tým, že ako účinnú látku obsahuje derivát indolu všeobecného vzorca (kde R znamená etylovú skupinu alebo 2,2,2-trifluóretylovú skupinu a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R)-konfigurácii) alebo jeho farmaceutický prijateľnú sol.
8. Prostriedok na prevenciu alebo liečenie glaukómu alebo očnej hypertenzie, vyznačujúci sa tým, že ako účinnú látku obsahuje derivát indolu všeobecného vzorca (kde R znamená etylovú skupinu alebo 2,2,2-trifluóretylovú skupinu a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R)-konfigurácii) alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ.
9. Prostriedok na prevenciu alebo liečenie glaukómu alebo očnej hypertenzie podľa nároku 8, vyznačujúci sa tým, že ako účinnú látku obsahuje derivát indolu všeobecného vzorca

Ο

Ο (kde R znamená etylovú skupinu alebo 2,2,2-trifluóretylovú skupinu a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R)-konfigurácii) alebo jeho farmaceutický prijatelnú sol.
10. Spôsob prevencie alebo liečenia glaukómu alebo očnej hypertenzie, vyznačujúci sa tým, že sa podáva terapeuticky účinné množstvo derivátu indolu všeobecného vzorca

CONH_Z (kde R znamená etylovú skupinu alebo 2,2,2-trifluóretylovú skupinu a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R)-konfigurácii) alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli.
11. Spôsob prevencie alebo liečenia glaukómu alebo očnej hypertenzie podlá nároku 10, vyznačuj úci sa tým, že sa podáva terapeuticky účinné množstvo (kde R znamená etylovú skupinu alebo 2,2,2-trifluóretylovú skupinu a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R)-konfigurácii) alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli.
12. Použitie derivátu indolu všeobecného vzorca (kde R znamená etylovú skupinu alebo 2,2,2-trifluóretylovú skupinu a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R)-konfigurácii) alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli na prípravu farmaceutického prostriedku na prevenciu alebo liečenie glaukómu alebo očnej hypertenzie.

(kde R znamená etylovú skupinu alebo 2, 2,2-trifluóretylovú skupinu a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R)-konfigurácii) alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli na prípravu farmaceutického prostriedku na prevenciu alebo liečenie glaukómu alebo očnej hypertenzie.
14. Použitie derivátu indolu všeobecného vzorca (kde R znamená etylovú skupinu alebo 2,2,2-trifluóretylovú skupinu a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R)-konfigurácii) alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli ako prostriedku na prevenciu alebo liečenie glaukómu alebo očnej hypertenzie.
15. Použitie derivátu indolu podľa nároku 14, všeobecného vzorca

Ο

Ο (kde R znamená etylovú skupinu alebo 2,2,2-trifluóretylovú skupinu a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R)-konfigurácii) alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli ako prostriedku na prevenciu alebo liečenie glaukómu alebo očnej hypertenzie.
16. Spôsob prípravy farmaceutického prostriedku na prevenciu alebo liečenie glaukómu alebo očnej hypertenzie, vyznačujúci sa tým, že sa ako účinná látka tohoto farmaceutického prostriedku použije derivát indolu všeobecného vzorca conh₂ (kde R znamená etylovú skupinu alebo 2,2,2-trifluóretylovú skupinu, Y znamená hydroxyskupinu alebo pivaloyloxyskupinu a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R) — konfigurácii) alebo jeho farmaceutický prijateľná sol.
17. Spôsob prípravy farmaceutického prostriedku na prevenciu alebo liečenie glaukómu alebo očnej hypertenzie podlá nároku 16, vyznačujúci sa tým, že sa ako účinná látka tohoto farmaceutického prostriedku použije derivát indolu všeobecného vzorca (kde R znamená etylovú skupinu alebo 2,2,2-trifluóretylovú skupinu a atóm uhlíka označený (R) znamená atóm uhlíka v (R)-konfigurácii) alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.