SE502110C2 - Användning av en moranolinförening, nojirimycin eller castanospermin för framställning av en sammansättning med trombolytisk verkan. - Google Patents
Användning av en moranolinförening, nojirimycin eller castanospermin för framställning av en sammansättning med trombolytisk verkan.Info
- Publication number
- SE502110C2 SE502110C2 SE8804436A SE8804436A SE502110C2 SE 502110 C2 SE502110 C2 SE 502110C2 SE 8804436 A SE8804436 A SE 8804436A SE 8804436 A SE8804436 A SE 8804436A SE 502110 C2 SE502110 C2 SE 502110C2
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- compound
- acid addition
- physiologically acceptable
- acceptable acid
- addition salt
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7004—Monosaccharides having only carbon, hydrogen and oxygen atoms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
- A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Hydrogenated Pyridines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
502 110 2 10 15 20 25 30 35 40 trombus eller bildningen av trombus.
Således avser föreliggande uppfinning användning av, vid framställning av en farmaceutisk sammansättning som har en trombolytisk verkan, (1) en förening enligt formeln (II) nedan eller ett fysiologiskt acceptabelt syraadditionssalt eller kvartärsalt därav; (2) nojirimycin eller ett fysio- l,4-bis (3- moranolin-l-propenyl)bensen eller ett fysiologiskt godtagbart logiskt acceptabelt syraadditionssalt därav; (3) syraadditionssalt därav, eller (4) castanospermin; oH HQ OH N CH - DH nz 2 R där R2 är en väteatom eller en amino-, metoxietyl-, metoxi- etoxietyl-, 2-hydroxitetradekyl-, 3-karbamoylpropyl-, unde- kyl-, 3-karboxi-2-propenylgrupp, eller en alkyl-, karboxi- alkyl-, cykloalkyl- alkyl-, substituerad eller osubstituerad arylalkyl-, tuerad eller osubstituerad aryloxialkyl-, alkenyl-, hydroxi- alkyloxikarbonylalkyl-, hydroxialkyl-, substi- alkenyl-, substituerad eller osubstituerad arylalkenyl-, aryloxialkenyl- eller alkylkarbamoylalkylgrupp (där alkyl- eller alkenylgruppen innehåller upp till 10 kolatomer och lägre alkylgrupper, som t.ex. metyl- eller etylgrupper, föredrages).
Sammansättningarna enligt uppfinningen kan t.ex. ha for- men av GQ-plasminlugnande sammansättningar (i vilket fall R2 är en väteatom eller en alkyl, karboxialkyl, alkyloxikarbo- nylalkyl, hydroxialkyl, cykloalkylalkyl, arylalkyl, aryloxi- alkyl, loxialkenylgrupp), alkenyl, eller substituerad eller osubstituerad ary- accelererad (i vilken R2 eller en urokinasutsöndrande, sammansättning eller trombolytisk sammansättning har den första breda definitionen som noterats ovan).
Exempel pà karboxialkylsubstituenter innefattar karboxi- metyl, karboxietyl och karboxipropylgrupper, men högre alkyl- grupper kan vara närvarande.
Exempel pá alkyloxikarbonylalkylsubstituenter inne- fattar metoxikarbonylmetyl-, metoxikarbonyletyl-, metoxi- karbonylpropyl-, metoxikarbonylbutyl-, etoxikarbonylmetyl-, etoxikarbonyletyl-, etoxikarbonylpropyl- och etoxikarbo- 10 15 20 25 30 35 HU 3 502 110 nylbutylgrupper men alkyloxikarbonylalkylgrupper med större antal kolatomer innefattas också i uppfinningen. Exempel på hydroxialkylsubstituenter inne- fattar hydroximetyl, hydroxietyl, hydroxipropyl och hydroxibutylgrupper men hydroxyalkylgrupper innehållande fler kolatomer i alkylkedjan innefattas också i uppfinningen. Exempel på cykloalkylalkylsubstituenter är cyklopropyl- metyl, cyklobutylmetyl och cyklopentylmetylgrupper men cykloalkylalkyler med fler kolatomer i alkylgruppen innefattas i uppfinningen.
Exempel på arylalkylgrupper är bensyl-, fenetyl-, fenylpropyl-, fenyl- butyl-, fenylpentyl-, naftylmetyl-, naftyletyl-, naftylpropyl- och naftylbutylgrupper. Arylalkylgrupper med fler kolatomer i alkylen innefattas i uppfinningen. Exempel på aryloxialkylsubstituenter är fenoximetyl-, fenoxietyl-, fenoxipropyl-, fenoxibutyl-, naftyloximetyl-, naftyloxietyl-, naftyloxipropyl- och naftyloxibutylgrupper. Grupper med fler kolatomer i alkylen innefattas också i uppfinningen.
Exempel på alkenylsubstituenter är vinyl-, propenyl- och butenylgrupper men högre alkenylgrupper innefattas också i uppfinningen. Exempel på hydroxi- alkenylsubstituenter är hydroxivinyl-, hydroxipropenyl- och hydroxibutenyl- grupper. Återigen innefattas högre alkenylgrupper i uppfinningen. Exempel på arylalkenylsubstituenter innefattar fenylvinyl, fenylpropenyl, fenylbutenyl, naftylvinyl, naftylpropenyl och naftylbutenyl. Högre arylalkenylgrupper inne- fattas i uppfinningen.
Föreningarna enligt föreliggande uppfinningen kan förutom de som be- skrivits ovan bestå av nojirimycin som erhållits genom att ersätta UH vid 1-läget av basstrukturen av moranolin och derivat därav (t.ex. N-substitue- rade derivat). En grupp av dessa föreningar uppvisar också liknande aktivi- teter som de hos moranolinderivaten (N-substituerade derivat) och innefattas i föreningarna enligt föreliggande uppfinning. I Föreningar med moranolinbasstruktur som en bis-form innefattas också i föreliggande uppfinning. Dessa föreningar uppvisar också liknande farmako- logisk verkan gentemot den hos andra föreningar enligt föreliggande upp- finning.
Representativa exempel på dessa andra föreningar i enlighet med före- liggande uppfinning innefattar nojirimycin och farmakologiskt godtagbara salter därav, 1,4-bis-(3-moranolin-1-propenyl)bensen och farmakologiskt god- tagbara salter därav. Dessa föreningar uppvisar också en god az-PI-sänkande aktivitet och en accelerande aktivitet vad beträffar urokinasutsöndring.
Föreningarna enligt föreliggande uppfinning kan framställas på ett kon- ventionellt sätt. Ett förfarande för att t.ex. framställa N-butylmoranolin exemplifieras nedan.
Typiska exempel på föreningar i enlighet med uppfinningen innefattar 10 15 20 25 30 35 40 502 110 följande.
Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening Förening HI' HI' HI' HI' HI' HI' HI' HI' H1' HI HI' HI' HI' HI' HI' HI' HI' HI' HI' HI' HI' HI' H1' HI' HI' HI' HI' HI' HI' HI' HI' HI' HI' HI' HI' HI' HI' HI' HI' 1 2 2a \OCD\IO\V1J> 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 Moranolin N-metylmoranolin N-(n-butyl)moranolin N-5-metoxikarbonylpentylmoranolintosylat N-hydroxietylmoranolin (N-metoxikarbonylbutyl)moranolin Nojirimycinbisulfit 1,4-bis-(3-moranolin-1-propenyl)bensendiväteklorid N-hexylmoranolintosylat N-isoprenylmoranolin N-(2-hydroxidekyl)morano1intosylat N-10-karboxidekylmoranolinnatríumsalt N-(3-fenylpropyl)moranolintosylat N-bensylmoranolintosylat N-cinnamylmoranolinväteklorid N-4-fenylbutylmoranolintosylat N-(2-Fenoxietyl)moranolin N-(3-fenoxipropyl)moranolintosylat N-5-(fenylpentyl)moranolintosylat N-(2-cyklopentyletyl)moranolintosylat N-Å3-(3-metoxietoxifenyl)~2-butenyiyhoranolin N,N-dimetylmoranolinammoniumjodid N-etylmoranolin N-cinnamylmoranolin N-geranylmoranolintosylat N-(2-hydroxi-3-fenoxipropyl)moranolintosylat N-Farnesylmoranolintosylat N-10-(N-metylkarbamoyl)dekylmoranolin N-(4-fenyl-3-butenyl)moranolintosylat N.(3-Fenyl-2-metyl-2-propenyl)moranolin N-(3-0-klorfenoxipropyl)moranolin N-(Y-metyl-4-bromcinnamyl)moranolin N-ZZ-(3-fluor-4-metylfenyl)butyi7moranolin N-(p-etoxicinnamyl)moranolin N-(p-isopropoxicinnamyl)moranolin N-(Y-metyl-m-metylcinnamyl)moranolin N-(4-m-metoxiFenyl-3-pentenyl)moranolin N-(p-etoxikarbonylfenoxietyl)moranolin¿gmiglita57 Castanospermin 10 15 20 25 30 35 40 5 502 110 Förutom de som beskrivits ovan innefattar föreningarna i enlighet med föreliggande uppfinning följande föreningar: N-isobutylmoranolintosylat N-hydroxietylmoranolintosylat N-amimoranolinvätebromid N-metoxietylmoranolintosylat N-metoxietoxietylmoranolintosylat N-dekylmoranolintosylat N-(2-hydroxihexadekyl)moranolintosylat N-(2-hydroxi-3-p-tolyloxipropyl)moranolintosylat N-(2-hydroxi-3-p-metoxifenyloxipropyl)moranolintosylat N-3-karbamoylpropylmoranolin N-nonylmoranolintosylat N-undekylmoranolintosylat N-(2-hydroxitetradekyl)moranolintosylat N-(4,4-difenyl-3-butenyl)moranolin N-5-karboxipentylmoranolin N-farnesylmoranolin N-(Y-metyl-4-klorcinnamyl)moranolin N-(Y-metyl-4-metylcinnamyl)moranolin N-(4-p-klorfenyl-3-pentenyl)moranolin N-(4-m-klorfenyl-3-pentenyl)moranolin N-(4-o-klorfenyl-3-pentenyl)morano1in N-(4-p-fenoxifenyl-3-pentenyl)moranolin N-(4-p-etoxifenyl-3-pentenyl)moranolin N-(m-metoxicinnamyl)moranolin Nïíš-(3-klorfenyl)-2-butenyl moranolin N-¿Ã-(4-klorfenyl)-3-butenyl/moranolin N-(4-karboxylcinnamyl)moranolinväteklorid N-(3-karboxi-2-propenyl)moranolin N-(m-trietylammoniumetoxicinnamyl)moranolindipikrat N-isopropylmoranolin N-(p-trimetylammoniumetoxicinnamyl)moranolinkloridväteklorid När föreningarna enligt uppfinningen administreras som mediciner kan de administreras till djur, inklusive människor, så som de är eller som medicinska sammansättningar innehållande t.ex. 0,1-99,5 %, företrädesvis 0,5-90 % av den aktiva föreningen tillsammans med en farmaceutiskt godtagbar, icke-toxisk tilläggsbärare. 10 15 20 25 30 35 40 110 6 Som bärare kan ett fast, halvfast eller flytande utspädningsmedel, fyll- 502 medel eller annat hjälpmedel för bildningen användas. Den farmaceutiska sammansättningen administreras önskvärt i enhetsdoser. Den farmaceutiska sammansättningen kan administreras oralt eller intravenöst in i vävnaden, etc. topiskt (subkutant, etc.) eller intrarektalt, etc. Den farmaceutiska sammansättningen administreras självfallet i en form som är lämpligt för dessa administreringssätt. 0ral administrering föredrages särskilt.
Dosering som ett fibrinolytiskt medel kontrolleras önskvärt beroende på betingelserna hos patienten såsom ålder, kroppsvikt, etc. administreringsväg, egenskaper och graden av sjukdom, etc. men sammansättningen kommer allmänt att administreras till vuxna människor som den effektiva ingrediensen enligt föreliggande uppfinning i en daglig dos som sträcker sig från 50-3000 mg/person, företrädesvis från 500-1000 mg/person. Beroende på fallet kan lägre doser också vara effektiva och motsatt kan en större dos krävas. Det är också önskvärt att administrera sammansättningen två eller tre gånger per dag i uppdelade doser.
Härefter beskrives den az-PI-sänkande aktiviteten liksom den accelererande aktiviten vad beträffar utsöndring av urokinas och toxiciteten hos föreningarna enligt uppfinningen i detalj.
För att uppfinningen skall förstås bra ges följande exempel endast såsom illustrering.
Förberedande exempel 1 Moranolin (S0 g), 126 g n-butylbromid och 170 g kaliumkarbonat till- sattes 1300 ml dimetylformamid. Blandningen omrördes vid rumstemperatur under 7 dagar för att slutföra reaktionen. Efter det att föroreningarna avlägsnats genom filtrering destillerades lösningsmedlet bort under reducerat tryck och 1000 ml av ett starkt surt jonutbytesharts Dowex 50W x 2 (H+) passerades.
Efter noggrann tvättning med vatten utfördes eluering med 1N ammoniakvatten.
Eluatet koncentrerades under reducerat tryck. Sedan tillsattes 50 ml metanol till koncentratet. Blandningen tilläts att stå vid rumstemperatur och de bildade kristallerna (47 g) uppsamlades.
Kristallerna upplöstes i 500 ml metanol genom upphettning, lösningen kyldes sedan till rumstemperatur och behandlades sedan med aktiverat träkol.
Efter koncentrering till ca 100 ml tilläts koncentratet att stå vid rums- temperatur och 40 g av de utfällda kristallerna uppsamlades. Kristallerna upplöstes i 200 ml metanol medelst upphettning och lösningen koncentrerades försiktigt. Koncentratet tilläts att stå vid rumstemperatur och kristallerna som utfälldes uppsamlades. Kristallerna torkades noggrant vid 70°C under reducerat tryck för att ge 34 g N-(n-butyl)moranolin. Utbyte: 50,6 %, smält- 10 15 20 25 30 35 40 7 502 110 punkt: 128-129°c.
Elementanalys: Beräknad (%): C: Funnen (%) : C: ¿fià]24 _ 14,59 (1 1H-NMR= 0,88 (BH, t, J=7,2 Hz, g53cH2cH2cH2), 1,16-1,56 (4H, m, J=7,2 Hz, cH3ç52çg2cH2-), 2,17-2,36 (2H, m, J=7,2 Hz, cH3cH2cH2ç52-), 2,49-2,82 (2H, m, H-1a, H-5), 3,02 (1H, ad, J=s,1, 11-a Hz, H-4). 3,22 (1H, t, J=9,0 Hz, H-4), 3,66 (1H, t, J=9,4 Hz, H-4), 3,44-3,6 (1H, m, H-2), 3,74-3,96 (H x 2, du X 2, H6, H6->. 54,78, H: 54,57, H: %, vatten) 9,65, N: 9,65, N: 6,39 6,60 Förberedande exempel 2 Moranolin (5 g), 13 g n-butylbromid och 17 g kalíumkarbonat tillsattes 130 ml dimetylformamid. Blandningen reagerades vid 10000 under 5 timmar.
Sedan behandlades reaktionsblandningen på ett liknande sätt som i det för- beredande exemplet 1 för att ge 5,1 g N-(n-butyl)moranolin. Utbyte: 75,8 %.
Förberedande exempel 3 Till 100 ml metanol tillsattes 5 g moranolin. Under omröring vid rums- temperatur tillsattes en lösning av 20 ml n-butylaldehyd i 50 ml metanol med en upplösning däri av 0,7 g väteklorid och 3 g NaCNCH} till blandningen.
Reaktionen utfördes över natten. Efter slutföríng av reaktionen avlägsnades lösningsmedlet under reducerat tryck. Återstoden upplöstes, följt av delning med kloroform. Den vattenhaltiga fasen fick passera genom en kolonn av 200 ml Diaion SA-11A (0H_)-slaget, följt av noggrann tvättning med vatten. Den passerande vätskan kombinerades med tvättvätskan. Blandningen fick passera genom en kolonn av 200 ml Dowex 50W x 28 (H+)-slaget. Efter noggrann tvättning utfördes en eluering med 1N ammoniakvatten. När lösningsmedlet destillerats bort under reducerat tryck kristalliserades eluatet från etanol. Återkristallisation från etanol gav 5,1 g N-(n-butyl)moranolin. Utbyte: 75,8 D' Iflo Provexempel 1 Aktivitet in vitro Det är känt att mänskliga hepatiska cancerhärledda HepG2-celler synte- tiserar och utsöndrar az-plasminhibitor (az-PI). HepG2-cellerna, 2 x 106 ympades på en plastodlingsplatta (med en diameter av 100 mm) gjord av Falcon Inc. och odlades i ett Eagles minimummedium innehållande 10 % bovinfosterserum. 10 15 20 25 30 35 40 502 110 e Tre dagar därefter tvättades celler som vidhäftade bottnen av plattan två gånger med Dulbeccos fosfatbuffert följt av odling i 8 ml serumfritt Eagles medium (utan något innehåll av fenolrött) innehållande 200 pg/ml av ett prov av föreningen enligt föreliggande uppfinning under ytterligare 3-4 dagar. Efter odling uppsamlades 7 ml av mediet och koncentrerades till ca 1 ml med användning av en Centriflow (CF25) tillverkad av Falcon Inc. Koncen- tratet frystorkades ytterligare.
Till det frystorkade provet tillsattes 0,7 ml 59 mM tris-buffert inne- hållande 8,1 mg/ml monometylaminväteklorid för att upplösas däri, varvid lösningen koncentrerades tiofaldigt.
Till 100 ul av det koncentrerade provet tillsattes 50 ul 15 mCU plasmin- lösning och ytterligare 50 ul 0,25 umol S-2251 syntetisk kromogensubstrat- lösning tillsattes därtill följt av reaktion vid 3700 under 10 min. Genom tillsats av 1 ml 2& citratlösning stannades reaktionen. p-nitroanilid som frigjorts från 5-2251-substratet mättes till en yttre diameter av 405 nm.
Ett prov i vilket sönderdelningen av S-2251-substratet mättes med an- vändning av förutnämnda tris-buffert i stället för det koncentrerade provet gjordes genom en kontroll som uppvisade 100 % plasminaktivitet och det kon- centrerade provet som odlats utan tillsats av en provförening undergick en kontroll som uppvisade 100 % oz-PI-aktivitet. Resultaten beräknades i enlighet med följande ekvation.
-PI-aktivitet (%) = X 100 “z där A1, A2 och A3 representerar absorption i 100 % kontroll, absorption när det koncentrerade provet användes respektive absorption i u2-PI-akti- vitet i 100 % kontroll. Antalet prov var 3. Resultaten visas i tabell 1. Det är uppenbart att föreningarna enligt föreliggande uppfinning kan sänka az- PI-aktiviteten. 5 10 15 20 25 30 35 &0 9 502 110 Tabell 1 Prov az-PI-aktivitet Prov az-PI-aktivitet Förening nr % Förening nr % Kontroll 100 11 88 1 64 12 50 2 62 13 80 ZA 59 3 70 14 51 4 70 15 39 5 _ 79 16 7A 6 67 17 65 7 86 18 20 8 56 19 63 9 55 20 37 Provexempel 2 Aktivitet in vivo Tre (3) hanhundar av rasen Beagle användes för kontrollgruppen respek- tive den administrerade gruppen av djur som skall administreras.
Ett testprov (Förening nr 2) upplöstes i en koncentration av 10 mg 0,1 ml med användning av 0,1 M Fosfatbuffert (pH 7,2).
Efter upplösning steriliserades lösningen genom filtrering genom ett sterilt Filter (porstorlek 0,2 pm) och sedan administrerades 0,3 ml av lös- ningen per 1 kg kroppsvikt (30 mg/kg). Administreringen gjordes genom den högra framlemsvenen under på varandra Följande 7 dagar. Uppsamlat blod blandades med 3,8 % natriumcitrat i ett förhållande av 1:9 per volym. Genom centrifugering vid 3000 varv per minut under 15 min. isolerades plasma. az-PI-aktiviteten mättes som en inhiberingsaktivitet mot sönderdelning av plasmin med det syntetiska kromogensubstratet S-2251. Resultaten av mät- ningen visas som förändring av inhiberingsaktivitet efter administrering baserad på 100 % av plasmininhiberingsaktiviteten före administreringen av testprovet (tabell 2). Antalet prov i varje grupp var 3 prov. az-PI-aktiviteten var tydligen försämrad genom på varandra följande administrering av provföreningen i en dos av 30 mg/kg. 10 15 20 25 30 35 40 502 110 10 Tabell 2 [åz-PI-aktivitet Om] _5103 P. l .2_ 2 i 2 á l C 100 98 92 94 96 98 100 106 Prov 100 95 83 84 76 75 86 89 C : kontroll Prov : testprov Provexempel 3 Prov på fibrinolys in vitro Ett testprov (Förening nr 2) administrerades i följd till hundar av rasen Beagle i en dos av 30 mg/kg en gång per dag. Plasma isolerades före ad- ministrering samt 4 dagar därefter. az-PI-aktiviteten i plasma mättes och vid samma tidpunkt bildades fibrinklumpar in vitro med användning av plasman.
När urokinas som ett trombylitiskt medel verkade på fibrinklumpen jämfördes lysisgraden mellan plasman före administreringen och plasman 4 dagar efter administreringen.
Till 300 pl isolerad plasma tillsattes 40 pl 1251-fibrinogen (0,1 mCi/kl) och 50 ul vardera av blandningen fördelades i ett provrör. Vardera 5 ul av lösningsblandningen av 25 U/ml trombin och 0,5 M kalciumklorid tillsat- tes varje provrör som inkuberades vid 3700 under 30 min. för att framställa fibrinklumpar. Lösningar av 15 och 30 U/ml urokinas i 2 % albuminlösning och den resulterande lösningen laddades i varje teströr med 1 ml vardera.
Efter inkubering vid 3700 under 12 timmar uppsamlades 26 pl av den överliggande vätskan i ett RAI-rör och 125 I-fibrinnedbrytningsprodukterna isolerade i den överliggande vätskan mättes med en Y-räknare. Antalet prov var 3 i varje grupp.
Såsom visas i tabell 3 är det tydligt att när plasman med sänkt a2-PI- aktivitet används accelererades lysis av fibrinklumparna genom administrering av provföreningen vid jämförelse med plasman före administreringen.
Tabell 3 Lysisgrad av fibrinklump (%) Urokinas- Före 4 dagar efter aktivitet administrering administrering 0 U 18,1 21,5 15 U 37,4 63,8 30 U 70,0 93,7 10 15 20 25 30 35 40 11 502 110 Provexempel 4 Trombolytisk test in vitro Trombolytisk aktivitetsinducerande förmåga i det etablerade vaskulära endoteliella cellodlingssystemet undersöktes med användning av CPAE (kalv- lungsartärendotelia)).
EPAE-celler förvärvades från Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd., Department of Laboratory Products. CPAE-celler odlades i subkultur i 10 % F05-Eagle MEM-medium laddad i en odlingsflaska av 25 cmz. Från cellsuspen- sionen som fraktioner vid odling i subkultur, överfördes 0,1 ml till ett provrör med en steriliserad pipett. Sedan utspäddes cellsuspensionen tiofaldigt med 0,9 ml Trypan Blue-lösning och en cellräkning gjordes med en cellräknare. Efter utspädning med 10 % F05-Eagle MEM-medium för att ha en cellräkning av 2 x 105 celler/ml, dispenserades 100 ul per brunn, nämligen 2 x 204 celler/brunn av lösningen i en mikrotiterplatta med 96 brunnar (tillverkad av Corning) med en mikropipett. Plattan inkuberades vid 3700 i 5 % 002.
Föreningen enligt föreliggande uppfinning upplöstes i ett medium i 0,2 mg/ml, föreningen som var olöslig i mediet upplöstes i mindre än 1 % DMSO och den resulterande lösningen filtrerades aseptiskt genom ett filter; 5 ul av lösningen tillsattes brunnen med en steriliserad mikropipett 24 timmar efter påbörjandet av inkuberingen. Efter odling vid 3700 under 72 timmar i 5 % 002 mätning. tillhandahölls den uppsamlade överliggande vätskan från odlingen för Mätningen utfördes såsom följer. 5 ul plasminogen laddades i ett kärl av fibrinplatta (tillverkad av Kitazato Institute), vilken tilläts stå tills diffusionen var slutförd. Efter diffusion laddades 5 pl av den överliggande vätskan och sattes sedan i en koldioxidgasinkubator vid 3700. Fyra timmar därefter gjordes utvärdering genom bildning av en genomskinlig lysiscirkel genom fibrinolys. I detta fall bekräftades det att en genomskinlig cirkel bildades på liknande sätt genom fibrinolys i ett kärl laddat med t-PA som en positiv kontroll. En diameter hos den genomskinliga cirkeln var 9-10 mm. Även när den överliggande vätskan tillsatts föreningen enligt före- liggande uppfinning noterades en genomskinlig cirkel beroende på fibrinolys med en diameter av 4,5-8,5. Emellertid noterades ingen förändring då den överliggande vätskan ej satts till någon förening enligt föreliggande uppfinning (kontroll. I det fall en cirkel bildades av 4 mm eller mer, beroende på fibrinolys, bedömdes det att trombolytisk förmåga hos CPÅE-celler inducerats.
När den fibrinolytiska aktiviteten hade kontrollerats fixerades kärlet 10 15 20 25 30 35 40 502 110 12 med 2,5 % glutaraldehyd i en slutlig koncentration. Sedan kasserades lös- ningen och systemet tvättades med PBS. Efter tvättning avlägsnades fukten.
Efter nedfläckning av systemet med 100 ul av 0,1 % kristallviolett och efter att ha tillåtit det att stå under 2-3 min. tvättades det med rinnande vatten.
När ett överskott av nedfläckningslösningen tvättats ur avlägsnades fukten och färgämnet som var bundet till cellerna eluerades med 100 ul metanol. Med användning av ett flersvepsförfarandande (Titertech) gjordes mätningar vid en våglängd av 580 nm i enlighet med ABS-förfarandet och matrisförfarandet för att bekräfta att cellerna inte var skadade.
En diameter (nm) av cirkeln beroende på fibrinolys visas i tabell 4. Det ses tydligt att föreningarna enligt föreliggande uppfinning visade den trombolytiska aktiviteten.
Tabell 4 Diameter (nm) Förening nr Diameter (nm) Förening nr 2 7,9 25 4,1 8 6,3 26 5,7 9 8,2 27 8,5 10 4,5 28 8,3 12 5,9 29 7,1 14 5,9 30 7,6 15 6,3 31 7,9 17 7,5 32 7,5 18 6,8 33 7,8 19 5,8 34 7,6 20 8,0 35 7,8 21 5,6 36 7,6 22 6,5 37 6,9 23 8,11 38 6,9 24 7,6 za 7,5 Provexempel 5 Trombolytisk aktivitet in vitro Det har klargjorts att föreningarna enligt föreliggande uppfinning är i stånd att inducera fibrinolytisk aktivitet i CPAE-celler. För att bestyrka vilket ämne som denna fibrinolytiska verkan induceras till förutom o2-PI- sänkande aktivitet gjordes analys på odlingslösningen som tillsatts med 10 15 20 25 30 35 40 11 502 110 förening nr 2 ur föreningarna enligt föreliggande uppfinning medelst fibrin autografi.
Genom SDS-polyakrylamidgel som använder 10 % gel utsättes denna odlings- lösning och t-PA (vävnadsplasminogen aktivator) och urokinas för elektro- fores. Efter elektroforesen behandlades gelen med 2,5 % Triton X-100 som ympades på en agarplatta tillsatt med fibronogen, trombin och plasminogen. En placering av fibrin som orsakade lysis bekräftades i en inkubator vid 3700 i 5 % C02.
Som ett resultat noterades stor fibrinolys i odlingens överliggande vätska som tillsatts föreningen enligt föreliggande uppfinning vid läget av molekylvikten för den plasminogena aktivatorn av urokinastyp. Det klargjordes att föreningen enligt föreliggande uppfinning starkt inducerade produktion av plasminogenaktivator av urokinastyp i CPAE. Prov på akut toxicitet: Fyra (4) hanmöss av härkomsten ddY i en ålder av 6 veckor användes för varje grupp av testprovet.
Förfarande: Vid intravenös administrering upplöstes varje prov i 0,9 % fysiologiskt salin och lösningen administrerades genom svansvenen. Vid intraperitoneal administrering suspenderades varje prov i 0,5 % CMC-fysiologiskt salin och 0,1 ml av suspensionen per 10 mg av musens kroppsvikt administrerades intra- peritonealt. Vid oral administrering suspenderades varje prov i 0,5 % CMC- fysiologiskt salin och 0,2 ml av suspensionen per 10 mg av musens kroppsvikt administrerades oralt. Ûbservation gjordes genast efter administreringen. Efter observation under 1 vecka efter administreringen avlivades mössen med kloroform och utsattes för obduktion.
LDSÛ av varje prov summeras i följande tabell. Säkerhet hos före- ningarna enligt föreliggande uppfinning visas tydligt. Intravenös administre- ring: (Förening nr) LQSÛ (mg/kg) 1 3235 2 5091 Intraperitoneal administrering: (Förening nr) LQ50 (mg/kg) 1 5.000 2 10.000 502 110 14 0ral administrering: (Förening nr) LQ5Û(mg/kg) 1 7.500 5 2 10.000 Exempel 1 Per 1 tablett tillsattes följande föreningar till föreningen (förening nr 2) enligt föreliggande uppfinning och tabletter erhölls på ett konven- 10 tionellt sätt.
Per tablett (i 300 mg) Förening enligt föreliggande uppfinning (Förening nr 2) 200 mg 15 Laktos 50 mg Majsstärkelse 20 mg Hydroxipropylcellulosa av låg substitutionsgrad 15 mg Hydroxipropylcellulosa 5 mg 20 Magnesiumstearat 10 mg 300 mg Exempel 2 25 Per 1 ampull tillsattes följande föreningar till föreningen (förening nr 2) enligt föreliggande uppfinning och ampuller för injicering erhölls på ett konventionellt sätt.
Per ampull (i 10 ml) 30 Förening enligt föreliggande uppfinning (Förening nr 2) 200 mg Natriumklorid 90 mg Destillerat vatten för injicering q.s. 10 ml
Claims (3)
1. -prcpenyl)bensen eller ett fysiologiskt godtagbart syraadditionssalt därav, eller (4) castanospermin; OH H0 g 'OH CHZ- UH (II) N I R2 där R2 är en väteatom eller en amino-, metoxietyl-, metoxi- etoxietyl-,
2. -hydrøxitetradekyl-, 3-karbamoylpropyl-, undekyl-,
3. -karboxi-2-propenylgrupp, eller en alkyl-, karboxiäïkyl-, alkyloxikarbonylalkyl-, hydroxialkyl-, cykloalkylalkyl-, sub- stituerad eller osubstituerad arylalkyl-, substituerad eller osubstituerad aryloxialkyl-, alkenyl-, hydroxialkenyl-, sub- stituerad eller osubstituerad arylalkenyl-, aryloxialkenyl- eller alkylkarbamoylalkylgrupp (där alkyl- eller alkenylgruppen innehåller upp till 10 kolatomer).
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP31134887 | 1987-12-09 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SE8804436D0 SE8804436D0 (sv) | 1988-12-08 |
| SE8804436L SE8804436L (sv) | 1989-06-10 |
| SE502110C2 true SE502110C2 (sv) | 1995-08-21 |
Family
ID=18016066
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SE8804436A SE502110C2 (sv) | 1987-12-09 | 1988-12-08 | Användning av en moranolinförening, nojirimycin eller castanospermin för framställning av en sammansättning med trombolytisk verkan. |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0319986B1 (sv) |
| KR (1) | KR960009417B1 (sv) |
| AT (1) | ATE149836T1 (sv) |
| BE (1) | BE1004874A4 (sv) |
| CA (1) | CA1316831C (sv) |
| CH (1) | CH677610A5 (sv) |
| DE (1) | DE3855824T2 (sv) |
| FR (1) | FR2626470B1 (sv) |
| GB (2) | GB8827701D0 (sv) |
| IL (1) | IL88573A (sv) |
| SE (1) | SE502110C2 (sv) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0430983B1 (en) * | 1988-08-10 | 1994-04-20 | The Australian National University | Use of castanospermine as an anti-inflammatory and immunosuppressant agent |
| WO1998006264A1 (en) * | 1996-08-14 | 1998-02-19 | Myung Hee Chun | Plasmin-depletion therapy |
| EP1903034A1 (en) * | 2006-09-19 | 2008-03-26 | Technische Universität Graz | Iminosugar glycoconjugates |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS54106477A (en) * | 1978-02-03 | 1979-08-21 | Nippon Shinyaku Co Ltd | Moranoline derivative |
| JPS5943946B2 (ja) * | 1978-04-28 | 1984-10-25 | 日本新薬株式会社 | Ｎ−アルケニルモラノリン誘導体 |
| GB2020278B (en) * | 1978-05-03 | 1983-02-23 | Nippon Shinyaku Co Ltd | Moranoline dervitives |
| JPS5943947B2 (ja) * | 1978-05-03 | 1984-10-25 | 日本新薬株式会社 | Ｎ−置換モラノリン誘導体 |
| JPS6026387B2 (ja) * | 1979-01-20 | 1985-06-24 | 日本新薬株式会社 | シンナミルモラノリン誘導体 |
| JPS5943949B2 (ja) * | 1978-09-29 | 1984-10-25 | 日本新薬株式会社 | モラノリンのｎ−置換誘導体 |
| DE2925943A1 (de) * | 1979-06-27 | 1981-01-29 | Bayer Ag | 1-alkadien-2,4-yl-2-hydroxymethyl3,4,5-trihydroxypiperidine, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als arzneimittel |
| JPS56108767A (en) * | 1980-01-28 | 1981-08-28 | Nippon Shinyaku Co Ltd | Bismoranoline derivative |
| DE3007078A1 (de) * | 1980-02-26 | 1981-09-10 | Bayer Ag, 5090 Leverkusen | Neue derivate von 3,4,5-trihydroxypiperidin, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als arzneimittel sowie in der tierernaehrung |
| JPS60224675A (ja) * | 1984-04-24 | 1985-11-09 | Meiji Seika Kaisha Ltd | 新規１−デオキシノジリマイシン誘導体およびそれを含有する血中脂質低下剤 |
| CA1327970C (en) * | 1985-05-24 | 1994-03-22 | Paul S. Liu | Isolation of castanospermine and its use as an antidiabetic agent |
| DE3650377T2 (de) * | 1985-12-23 | 1996-02-22 | Hutchinson Fred Cancer Res | Regulierung der retroviralen replikation, infektion und pathogenese. |
| ZA883925B (en) * | 1987-06-08 | 1989-02-22 | Merrell Dow Pharma | Inhibitors of glycoprotein processing having anti-retroviral activity |
-
1988
- 1988-11-28 GB GB888827701A patent/GB8827701D0/en active Pending
- 1988-11-30 GB GB8827927A patent/GB2213374B/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-12-04 IL IL8857388A patent/IL88573A/xx not_active IP Right Cessation
- 1988-12-07 CH CH4527/88A patent/CH677610A5/fr not_active IP Right Cessation
- 1988-12-07 FR FR8816071A patent/FR2626470B1/fr not_active Expired - Fee Related
- 1988-12-08 SE SE8804436A patent/SE502110C2/sv not_active IP Right Cessation
- 1988-12-08 AT AT88120564T patent/ATE149836T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-12-08 EP EP88120564A patent/EP0319986B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-12-08 BE BE8801375A patent/BE1004874A4/fr not_active IP Right Cessation
- 1988-12-08 DE DE3855824T patent/DE3855824T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1988-12-09 KR KR1019880016362A patent/KR960009417B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1988-12-09 CA CA000585530A patent/CA1316831C/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR890009399A (ko) | 1989-08-01 |
| GB8827927D0 (en) | 1989-01-05 |
| KR960009417B1 (ko) | 1996-07-19 |
| FR2626470A1 (fr) | 1989-08-04 |
| SE8804436D0 (sv) | 1988-12-08 |
| GB2213374B (en) | 1992-01-29 |
| FR2626470B1 (fr) | 1994-12-09 |
| GB8827701D0 (en) | 1988-12-29 |
| IL88573A (en) | 1994-05-30 |
| ATE149836T1 (de) | 1997-03-15 |
| CA1316831C (en) | 1993-04-27 |
| EP0319986A3 (en) | 1992-09-30 |
| CH677610A5 (sv) | 1991-06-14 |
| EP0319986A2 (en) | 1989-06-14 |
| EP0319986B1 (en) | 1997-03-12 |
| DE3855824D1 (de) | 1997-04-17 |
| DE3855824T2 (de) | 1997-10-16 |
| SE8804436L (sv) | 1989-06-10 |
| GB2213374A (en) | 1989-08-16 |
| BE1004874A4 (fr) | 1993-02-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5192772A (en) | Therapeutic agents | |
| US4690918A (en) | Use of trichostatin compounds for treating tumor cells | |
| EP2818169B1 (en) | Conjugate of polyethylene glycol and naloxone, pharmaceutical composition and use thereof | |
| AU618997B2 (en) | Pharmaceutical compositions with anti-cancer activity and method for the treatment of cancer | |
| EP0296811A2 (en) | Carbamates of 4-hydroxyanisole as prodrugs for chemotherapy of melanoma | |
| JPS63250341A (ja) | 芳香族アルデヒドおよびその誘導体 | |
| Jondorf et al. | Increased lifespan of leukemic mice treated with drugs related to (–)-emetine | |
| EP0491041A1 (en) | Antiviral drug | |
| SE502110C2 (sv) | Användning av en moranolinförening, nojirimycin eller castanospermin för framställning av en sammansättning med trombolytisk verkan. | |
| JP3102945B2 (ja) | 肝炎治療剤 | |
| EP0485219B1 (en) | Medicaments for preventing and treating circulatory organ diseases containing spiro-3-heteroazolidine compounds | |
| EP1740176A2 (en) | Pharmaceutical compositions comprising anti-inflammatory quinazolinecarboxamide derivatives | |
| EP0409499A2 (en) | Pharmaceutical compositions | |
| JPH05504550A (ja) | 免疫抑制剤として有用なピリミジン生合成インヒビター | |
| US20070191400A1 (en) | Pharmaceutical compositions comprising anti-inflammatory quinazolinecarboxamide derivatives | |
| JPH02304058A (ja) | キサントシリンｘモノメチルエーテル誘導体及びそれを含有する抗腫瘍剤 | |
| JPH01250350A (ja) | 循環器用剤 | |
| SE437931B (sv) | Lekemedelspreparat med antitumorverkan innehallande fosfat av polyhexametylenguanidin med angiven formel | |
| US4822783A (en) | Method for treating HTLV-I using streptovaricin C compounds | |
| JPH11228422A (ja) | 抗マラリア剤 | |
| JPH06345644A (ja) | 自己免疫性疾患治療剤 | |
| CN103232394B (zh) | 含吡唑类化合物、其制备方法和用途 | |
| JPS62195328A (ja) | ２−ヒドロキシ−３−イソプロピル−５，６−ジメチルピラジンからなる循環・代謝改善剤 | |
| HU207223B (en) | Process for producing pharmaceutical compositions containing diterpene derivatives | |
| JPH02142724A (ja) | チロシンキナーゼ阻害剤及び制癌剤 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| NUG | Patent has lapsed |
Ref document number: 8804436-7 Format of ref document f/p: F |