JPH01250350A - 循環器用剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 【産業上の利用分野】

本発明は、 ■次の一般式（ＩＩ）で表される化合物、その生理学的
に許容される酸付加塩、及びその四級塩■ノジリマイシ
ン及びその生理学的に許容される酸付加塩 ［３］１，４−ビス（３−モラノリノ−１−プロペニル
）ベンゼン及びその生理学的に許容される酸付加塩■カ
スタノスペルミン の上記■〜■で構成される群から選択される化合物を主
成分とする血栓溶解剤等に関する。 ここに、Ｒ２は、水素、アルキル、カルボキシアルキル
、アルキルオキシカルボニルアルキル、ヒドロキシアル
キル、シクロアルキルアルキル、置換若しくは無置換の
アリールアルキル、置換若しくは無置換のアリールオキ
シアルキル、アルケニル、ヒドロキシアルケニル、置換
若しくは無置換のアリールアルケニル、アリールオキジ
アルケニル又はアルキルカルバモイルアルキルを表す。

【従来の技術】

血管に物理的損傷ができた場合に生じる止血栓の生成に
は、血小板の凝集に続くフィブリンの析出が不可欠であ
る。一方正血栓は、血管内で血流を阻害し組織の虚血や
壊死を招来し、心筋梗塞、脳梗塞の原因となるため、生
体は血管内の過剰の血栓を除去するしくみを備えている
が、そのしくみの大きな役割を担うのがプラスミノゲン
・プラスミン系によるフィブリン分解作用である。 プラスミノゲンは、プラスミノゲン活性化因子により活
性化されてプラスミンとなり、プラスミンがフィブリン
を分解する（線溶）、この機構に異常が生じることによ
り、心筋梗塞、脳梗塞等の病弊が発生する。 これらの現代病の原因はさまざまであるが、その治療に
あたっては、生じた血栓を溶解し組繊の虚血状態を改善
する血栓熔解療法が有効であり、そのためウロキナーゼ
やストレプトキナーゼ等のプラスミノゲン活性化因子を
投与することが行われている。従って、ウロキナーゼの
分泌を促進する物質は、上記血栓溶解療法を行うに際し
て良好なる医薬品となる可能性があった。 さて、生体内には過剰な線溶に対してもそれを阻害する
機構が備わっていて、例えばプラスミン阻害物質である
α２−プラスミンインヒビタ−（以下「α、−ＰＩ　Ｊ
という）は、プラスミン作用を瞬時に阻害してフィブリ
ン分解を阻止することが判っている。αｔ−ＰＩは従っ
て、血栓溶解療法時には治療阻止因子として働き、また
一種の２．性朋蛋白質として手術後に発生して術後血栓
の原因の一つともなっている。

【発明が解決しようとする課題】

叙上のことから、α、−ＰＩの活性を低下させる薬剤が
あれば、血栓溶解療法の効果をより高め、また術後血栓
や血栓症の予防にも役立つことが示唆されていた。 従って本発明の目的は、心筋梗塞、脳梗塞治療に有効な
医薬品を創成するため、優れたα、−ＰＩ阻害剤を提供
することにあった。 また、ウロキナーゼがプラスミノゲン活性化因子である
ところから、ウロキナーゼの分泌を促進する物質を提供
することも、本発明の重要な目的であった。

【課題を解決するための手段】

上記した目的を達成するため、本発明者らは多くの化合
物群をスクリーニングしていたが、極めて特異な撓倖に
恵まれた結果、本発明に係る化合物が優れたα、−ｐｒ
活性低下作用及びウロキナーゼ分泌促進作用を有してい
ることを突き止め、またこれらの化合物がαｚ−ｐｔ活
性低下作用と同時にウロキナーゼによる血栓溶解効果時
においてその溶解促進効果をも有することを見出し、本
発明に到達することができた。 本発明化合物は、後に詳述するように、優れたα！−Ｐ
Ｉ低下作用及びウロキナーゼ分泌促進作用を有し、血栓
溶解治療剤として心筋梗塞、脳梗塞の治療のための医薬
品となるため、極めて重要である。 本発明化合物は、特許請求の範囲に記載した構造上の特
徴を有している。 一般式（１）、（ＩＩ）ニおけるＲ’　、Ｒ”　として
は、前記した置換基等を挙げることができる。 ここにアルキルとは炭素数１〜１０程度のものを挙げる
ことができるが、例えばメチル、エチル等の低級アルキ
ルが好ましい。 カルボキシアルキルとしては、例えば、カルボキシメチ
ル、カルボキシエチル、カルボキシプロピル等を挙げる
ことができるが、アルキルの炭素数がより大きいものも
本発明化合物に含まれるものである。 アルキルオキシカルボニルアルキルとしては、例えば、
メトキシカルボニルメチル、メトキシカルボニルエチル
、メトキシカルボニルプロピル、メトキシカルボニルブ
チル、エトキシカルボニルメチル、エトキシカルボニル
エチル、エトキシカルボニルプロピル、エトキシカルボ
ニルブチル等を挙げることができるが、アルキルの炭素
数がより大きいものも本発明化合物に含まれるものであ
る。 ヒドロキシアルキルとしては、例えば、ヒドロキシメチ
ル、ヒドロキシエチル、ヒドロキシプロピル、ヒドロキ
シブチル等を挙げることができるが、アルキルの炭素数
がより大きいものも本発明化合物に含まれるものである
。 シクロアルキルアルキルとしては、例えば、シクロプロ
ピルメチル、シクロブチルメチル、シクロペンチルメチ
ル等を挙げることができるが、アルキルの炭素数がより
大きいものも本発明化合物に含まれるものである。 アリールアルキルとしては、例えば、ベンジル、フェネ
チル、フェニルプロピル、フェニルブチル、フェニルペ
ンチル、ナフチルメチル、ナフチルエチル、ナフチルプ
ロピル、ナフチルブチル等を挙げることができるが、ア
ルキルの炭素数がより大きいものも本発明化合物に含ま
れるものである。 アリールオキシアルキルとしては、例えば、フェノキシ
メチル、フェノキシエチル、フェノキシプロビル、フェ
ノキシブチル、ナフチルオキシメチル、ナフチルオキシ
エチル、ナフチルオキシプロピル、ナフチルオキシブチ
ル等を挙げることができるが、アルキルの炭素数がより
大きいものも本発明化合物に含まれるものである。 アルケニルとしては、例えば、ビニル、プロペニル、ブ
テニル等を挙げることができるが、炭素数がより大きい
ものも本発明化合物に含まれるものである。 ヒドロキシアルケニルとしては、例えば、ヒドロキシビ
ニル、ヒドロキシプロペニル、ヒドロキシブテニル等を
挙げることができるが、炭素数がより大きいものも本発
明化合物に含まれるものである。 アリールアルケニルとしては、例えば、フェニルビニル
、フェニルプロペニル、フェニルブテニル、ナフチルビ
ニル、ナフチルプロペニル、ナフチルブテニル等を挙げ
ることができるが、炭素数がより大きいものも本発明化
合物に含まれるものである。 了り−ルオキシアルケニルとしては、例えば、フェノキ
シビニル、フェノキシプロペニル、フェノキシブテニル
、ナフチルオキシビニル、ナフチルオキシプロペニル、
ナフチルオキシブテニル等を挙げることができるが、炭
素数がより大きいものも本発明化合物に含まれるもので
ある。 アルキルカルバモイルアルキルとしては、例えば、メチ
ルカルバモイルメチル、メチルカルバモイルエチル、メ
チルカルバモイルプロピル等を挙げることができるが、
炭素数がより大きいものも本発明化合物に含まれるもの
である。 本発明化合物としては、上記したもののほか、モラノリ
ンの基本骨格における１位が０）１で置換されたノジリ
マイシン及びその誘導体（例えばＮ置換体）を挙げるこ
とができる。これらの化合物群もまた、モラノリンの誘
導体（Ｎ置換体）と同様の作用を有し、本発明化合物に
含まれるものである。 本発明化合物にはまた、モラノリン基本骨格をビス体と
して有する化合物も含まれる。これらもまた他の本発明
化合物と同様の薬理効果を有して゛いる。 これら化合物の代表例として、本発明化合物にはノジリ
マイシン及びその生理学的に許容される塩、及び、１．
４−ビス（３−モラノリノ−１−プロペニル）ベンゼン
及びその生理学的に許容される塩が含まれる。これらも
また、その他の本発明化合物と同様に、優れたα、−Ｐ
Ｉ低下作用及びウロキナーゼ分泌促進作用を有するもの
である。 本発明化合物は、公知の方法によって製造することがで
きる。例えば、Ｎ−ブチルモラノリンの製造例を以下に
掲げる。 〔製造例１〕 モラノリン５０ｇ　、　ｎ−ブチルブロマイド１２６ｇ
　。 炭酸カリウム１７０ｇをジメチルホルムアミド１３００
戚中に加え、室温で７日間攪拌し反応を完結させた。濾
過して不純物を除去後、溶媒を減圧下に留去し強酸性イ
オン交換樹脂ダウエックス５０Ｗ　Ｘ　２（＋（”　）
　１０００ｄを通過させ、充分水洗した後、ＩＮアンモ
ニア水で溶出した。溶出液を減圧下に？ａ縮した後、メ
タノール５０ｍ１を加え、室温に放置して生じた結晶（
４７ｇ　）を集めた。 これをメタノール５００ｍに熱時溶解後、室温まで冷却
した後、活性炭で処理し、約１００戚まで濃縮後、室温
に放置して析出した結晶４０　ｇを集めた。これをメタ
ノール２００−に熱時溶解後、軽く濃縮して室温に放置
して析出した結晶を集め、７０°Ｃ，減圧下で充分乾燥
して、目的物たるＮ−（ｎ−ブチル）モラノリン　３４
ｇを得た。収率５０．６％。 融点１２８〜１２９°Ｃ０ 元素分析値 計算値（％）　　Ｃ：５４．７８　Ｈ：９．６５　　Ｎ
　：６．３９実測値（％”）　　Ｃ：５４．５７　Ｈ：
９．６５　　Ｎ　：６．６０［α］　　−−１４，５９
°　（１％、水）’Ｈ−ＮＭＲ：　Ｑ、８８（３Ｈ，ｔ
、　ＪＩＩ７．２Ｈｚ、　ＣＨｘＣＨｚＣＨｚＣｌに−
）１１．１６〜１．５６（４Ｈ，ｒａ、−社器即ＣＨｓ
ＣＨｚＣＨｚＣＨｚ−）　。 ２．１７〜２．３６（２Ｈ，Ｉｌｌ、歩自翻勢ＣＨ＋Ｃ
ＨｚＣＨｚ板）。 ３．２２（ＩＨ，ｔ、　Ｊ＝９．Ｏ）！ｚ、　Ｈ−４）
。 ３．６６（ＩＨ，ｔ、　Ｊ−９，４Ｈｚ、　）ｌ−４）
。 ３．４４〜３．６０（１Ｂ、　ＩＩ、　Ｈ−２）。 ３．７４〜３．９６（ＨＸ２．　　ｄｄＸ２．　　Ｈ＆
、Ｈ＆、−）〔製造例２〕 モラノリン５ｇ　ｓ　ｎ−ブチルブロマイド１３ｇ、炭
酸カリウム１７ｇをジメチルホルムアミド１３０１ｄ中
に加え、１００℃で５時間反応した。製造例１と同様に
処理して、Ｎ−（ｎ−ブチル）モラノリン５．１ｇを得
た。収率７５．８％。 ［製造例３］ ５ｇのモラノリンを１００ｄのメタノール中に加え、室
温で攪拌しながら０．７ｇの塩化水素を溶かしたメタノ
ール５０ｄに２０ｄのｎ−ブチルアルデヒドを溶かした
溶液と３ｇのＮａＣＮＢ）！、を加え、終夜反応した。 反応後、減圧下に溶媒を除去し、沿いに溶かし、クロロ
ホルムで分配した。水層を２００ｒｄのダイアイオン５
Ａ−１１Ａ（ＯＨ−”）型のカラムに通過させ充分水洗
した０通過液と洗液とを合わせ、２００Ｉｄのダウエッ
クス５０ＷＸ２８Ｈ”　’）のカラムに通過させ、充分
水洗後ＩＮアンモニア水で溶出した。溶出液を減圧下で
溶媒を留去した後、エタノールより結晶化、エタノール
で再結晶して、５．１ｇのＮ−（ｎ−ブチル）モラノリ
ンを得た。収率７５．８％。 本発明化合物の典型的な例として、以下の化合物を挙げ
ることができる。 化合物番号１ モラノリン 化合物番号２ Ｎ−メチルモラノリン 化合物番号２ａ Ｎ−（ｎ−ブチル）モラノリン 化合物番号３ Ｎ−５−メトキシカルボニルペンチルモラノリントシレ
ート 化合物番号４ Ｎ−ハイドロキシエチルモラノリン 化合物番号５ （Ｎ−メトキシカルボニルブチル）モラノリン化合物番
号６ ノジリマイシン　バイサルファイド 化合物番号７ １．４−ビス（３−モチノリノー１−プロペニル）ベン
ゼン　ジヒドロクロライド 化合物番号８ Ｎ−へキシルモラノリン　トシレート 化合物番号９ Ｎ−イソプレニルモラノリン 化合物番号１Ｏ Ｎ−（２−ヒドロキシデシル）モラノリン　トシレート 化合物番号１１ Ｎ−１０−カルボシキデシルモラノリン　ナトリウム塩 化合物番号１２ Ｎ−（３−フェニルプロピル）モラノリン　トシレート 化合物番号１３ Ｎ−ベンジルモラノリン　トシレート 化合物番号１４ Ｎ−シンナミルモラノリン　塩酸塩 化合物番号１５ Ｎ−（４−フェニルブチル）モラノリン　トシレート 化合物番号１６ Ｎ−（２−フェノキシエチル）モラノリン化合物番号ｌ
７ Ｎ−（３−フェノキシプロピル）モラノリン　トシレー
ト 化合物番号１８ Ｎ−（５−フェニルペンチル）モラノリン　トシレート 化合物番号１９ Ｎ−（２−シクロペンチルエチル）モラノリン　トシレ
ート 化合物番号２Ｏ Ｎ−（３−（３−メトキシエトキシフェニル）−２−ブ
テニルコモラノリン 化合物番号２１ Ｎ、Ｎ−ジメチルモラノリン　アンモニウム　アイ゛オ
ダイド 化合物番号２２ トエチルモラノリン 化合物番号２３ Ｎ−シンナミルモラノリン 化合物番号２４ Ｎ−ゲラニルモラノリン　トシレート 化合物番号２５ Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−フェノキシプロピル）モラ
ノリン　トシレート 化合物番号２６ Ｎ−ファルネシルモラノリン　トシレート化合物番号２
７ Ｎ−１０−（Ｎ−メチルカルバモイル）デシルモラノリ
ン 化合物番号２８ Ｎ−（４−フェニル−３−ブテニル）モラノリン　トシ
レート 化合物番号２９ Ｎ−（３−フェニル−２−メチル−２−プロペニル）モ
ラノリン 化合物番号３Ｏ Ｎ−（３−ｏ−クロロフェノキシプロピル）モラノリン 化合物番号３１ Ｎ−（γ−メチルー４−ブロモシンナミル）モラノリン 化合物番号３２ Ｎ−（４−（３−フルオロ−４−メチルフェニル）ブチ
ル〕モラノ゛リン 化合物番号３３ Ｎ−（ｐ−エトキシシンナミル）モラノリン化合物番号
３４ Ｎ−（ｐ−イソプロポキシシンナミル）モラノリン化合
物番号３５ Ｎ−（γ−メチルーｍ−メチルシンナミル）モラノリン 化合物番号３６ Ｎ−（４−ｍ−メトキシフェニル−３−ペンテニル）モ
ラノリン 化合物番号３７ Ｎ−（ｐ−エトキシカルボニルフェノキシエチル）モラ
ノリン 〔エミグリティト　（ｅｍｉｇｌｉｔａｔｅ）　　）化
合物番号３８ カスタノスペルミン 本発明に係る化合物としては、前記に掲げるもののほか
、例えば以下のものを挙げることができる。 Ｎ−イソブチルモラノリン　トシレートＮ−ヒドロレキ
エチルモラノリン　トシレートＮ−アミノモラノリン　
ハイドロブロマイドＮ−メトキシエチルモラノリン　ト
シレートＮ−メトキシエトキシエチルモラノリン　トシ
レート Ｎ−デシルモラノリン　トシレート Ｎ−（２−ヒドロキシヘキサデシル）モラノリン　トシ
レート Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−ｐ−トリルオキシプロピル
）モラノリン　トシレート Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−ｐ−メトキシフェニルオキ
シプロピル）モラノリン　トシレート Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−ｐ−クロロフェニルオキシ
プロピル）モラノリン　トシレート Ｎ−３−カルバモイルプロピルモラノリンＮ−ノニルモ
ラノリン　トシレート Ｎ−ウンデシルモラノリン　トシレートＮ−（２−ヒド
ロキシテトラデシル）モラノリン　トシレート Ｎ−（４，４−ジフェニル−３−ブテニル）モラノリン
Ｎ−５−カルボキシペンチルモラノリンＮ−ファルネシ
ルモラノリン Ｎ−（ｒ−メチル−４−クロロシンナミル）モラノリン Ｎ−（γ−メチルー４−メチルシンナミル）モラノリン Ｎ−（４−ｐ−クロロフェニル−３−ペンテニル）モラ
ノリン Ｎ−（４−ｍ−クロロフェニル−３−ペンテニル）モラ
ノ゛リン Ｎ−（４−ｏ−クロロフェニル−３−ペンテニル）モラ
ノリン Ｎ−（４−ｐ−フェノキシフェニル−３−ペンテニル）
モラノリン Ｎ−（４−ｐ−エトキシフェニル−３−ペンテニル）モ
ラノリン Ｎ−（ｍ−メトキシシンナミル）モラノリンＮ−（３−
（３−クロロフェニル）−２−ブテニル〕モラノリン Ｎ−（４−（４−クロロフェニル）−３−ブテニルコモ
ラノリン Ｎ−（４−カルボキシシンナミル）モラノリン　ハイド
ロクロライド Ｎ−（３−カルボキシ−２−プロペニル）モラノリンＮ
−（ｍ−）リエチルアンモニオエトキシシンナミル）モ
ラノリン　ジビクレート Ｎ−イソプロピルモラノリン Ｎ−（ｐ−トリメチルアンモニオエトキシシンナミル）
モラノリンクロライド　塩酸塩 本発明化合物を医薬として投与する場合、本発明化合物
はそのまま又は医薬的に許容される無毒性かつ不活性の
担体中に、例えば０．１％〜９９．５％、好ましくは０
．５％〜９０％含有する医薬組成物として、人を含む動
物に投与される。 担体としては、固形、半固形、又は液状の希釈剤、充填
剤、及びその他の処方用の助剤一種以上が用いられる。 医薬組成物は、投与単位形態で投与することが望ましい
。本発明医薬組成物は、経口投与、静脈内投与等の組織
内投与、局所投与（経皮投与等）又は経直腸的に投与す
ることができる。これらの投与方法に適した剤型で投与
されるのはもちろんである０例えば、経口投与が特に好
ましい。 血栓溶解治療剤としての用量は、年齢、体重、等の患者
の状態、投与経路、病気の性質と程度等を考慮した上で
調製することが望ましいが、通常は、成人に対して本発
明の有効成分量として、１日あたり、５０〜３０００■
／ヒトの範囲が、好ましく゛は５００■〜１０００ｍｇ
／ヒトの範囲が一般的である。 場合によっては、これ以下でも足りるし、また逆にこれ
以上の用量を必要とすることもある。また１日２〜３・
回に分割して投与することが望ましい。 （以下次頁）

【実施例】

以下に本発明化合物のα、−ＰＩ低下作用、ウロキナー
ゼ分泌促進作用及び毒性について詳述し、本発明を更に
詳しく説明する。 試験例１　インビトロ（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）にお番る５
ヒト肝ガン由来ＨｅｐＧ２細胞は、α２−プラスミンイ
ンヒビタ−（α、−ＰＩ　）を合成し、分泌することが
知られている。このＨｅｐＧ２細胞２Ｘ１０’個をファ
ルコン社製プラスチック培養プレート（直径１００ｍｍ
）にまき、１０％の牛胎児血清を含むイーグル最小培地
を用いて培養した。 ３日後、プレート底面に付着した細胞をダルベツコ　リ
ン酸緩衝液で２回洗浄した後、本発明化合物被験検体を
２００μｇ７ｍｌ含む無血清イーグル培地（フェノール
レッド不合）８！Ｉｆｌを用いてさらに３〜４日間培養
した。培養後、培地７ｄを採取し、アミコン社製セント
リフロー（ＣＦ２５）を用い、約ｌｄに濃縮し、さらに
凍結乾燥した。 凍結乾燥したサンプルに塩酸モノメチルアミン８．１ｍ
ｇ／ＩＩｄｌを含む５０μｌ１Ｍトリス緩衝液０．１ｔ
ｒｄｌを加え溶解することにより約１０倍に濃縮した。 濃縮したサンプル１００μ２に５０μ２の１５ｍＣＵプ
ラスミン液を加え、さらに５０μｌの０．２５μモルＳ
−２２５１合成発色基質液を加え、３７℃で１０分間反
応させた。２％クエン酸溶液ｌ！ｌｉを加えることによ
り反応を停止し、０．０．４０５ｎｍでＳ−２２５１基
質から遊離するｐ−ニトロアニリドを測定した。 濃縮サンプルの代わりに上述のトリス緩衝液を用いて、
Ｓ−２２５１基質の分解を測定したものをプラスミン活
性１００％のコントロールとし、被験検体を加えずに培
養した濃縮サンプルをα、−ＰＩ活性１００％のコント
ロールとした。得られた結果は、次式に従って計算した
。 Ａ、は１００％コントロールの吸光度を、Ａ２は濃縮サ
ンプルを用いたときの吸光度を、またＡ、はα、−ＰＩ
活性１００％コントロールの吸光度を、それぞれ表す、
サンプル数は、おのおの３個であった。 結果は、表１に示した６本発明化合物がαｔ−ＰＩ活性
を低下させることは明白である。 （以下次頁） 表１ 投与対象動物として、雄性ピーグル大を、コントロール
群、投与群それぞれ３匹ずつ用いた。 被験検体（化合物番号２）は、０．１モルリン酸緩衝液
（ｐＨ７，２）を用いて０．１戚あたり１０ｍｇとなる
ように溶解した。溶解後、滅菌フィルター（ポアサイズ
０．２μｍ）を用いて濾過減面した後に、体重１ｋｇ当
たり０．３ｉ投与した（３抛ｇ／ｋｇ）、投与は右前肢
静脈より７日間行った。採取した血液は３．８％クエン
酸ナトリウム１容に対し血液９容となるように混合し、
３０００ｒｐａ＋、１５分間遠心分離して血漿を分離し
た。 α、−ＰＩ活性は、合成発色基質Ｓ−２２５１のプラス
ミン分解に対する阻害作用として測定した。測定結果は
被験検体投与前のプラスミン阻害活性を１００％として
、それに対する投与後の阻害活性の変化として示した（
表２）、各サンプル数は、３個であった。 α、−ＰＩ活性は、被験検体の３０ｍｇ／ｋｇ連続投与
により、明らかに低下した。 Ｃはコントロールを表し、検体は被験検体を表す。 試験例３　インビトロ（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）血栓溶解試
験被験検体（化合物番号２）を、３０ｍｇ／ｋｇの用量
でピーグル犬に対して１日１回連続投与し、投与前、投
与４日目、に血漿を前述のように分離した。 血漿中のαｚ−ＰＩ活性を測定するとともにその血漿を
用いてインビトロでフィブリン塊を作製し、血栓溶解剤
であるウロキナーゼを作用させたときの溶解度を、投与
前血漿と投与４日後血漿との間で比較した。 分離した血漿３００μ２に１２ｓｉ−フィブリノーゲン
（０，１＋ｓＣｉ／Ｉｎｉ、）を４０μ２加え、混合し
、これを５０μ２ずつ試験管に分注した。２５Ｕ／ｄト
ロンビン、０．５Ｍ塩塩化カルシウム台溶液を各試験管
に５μｌずつ加え、３７°Ｃで３０分間インキュベート
し、フィブリン塊を作製した。２％アルブミン溶液及び
この液にウロキナーゼを１５．３０Ｕ／ｄとなるように
溶解したものを、おのおの試験管に１ｍｉずつ加えた。 ３７°Ｃで１２時間インキエベートし、上清２５μ！を
ＲＡＩ用チューブに採取し、γ−カウンターで上清中に
遊離する＋ｚｓｌ−フィブリン分解物を測定した。サン
プル数は、それぞれ３個であった。 表３に示すように、被験検体の投与によりα２−ＰＩ活
性の低下した血漿を用いた場合、投与前血漿よりフィブ
リン塊の溶解が亢進したことは明らかである。 表３　フィブリン塊溶解率（％） ウロキナーゼ活性　　投与前　　　投与４日後ＯＵ　　
　　　　１Ｂ、１　　　　　２１．５１５　　Ｕ　　　
　　　３７．４　　　　　６３．８３０　　Ｕ　　　　
　　７０．０　　　　　９３．７誘導能を、ＣＰＡＥ　
（ウシ肺動脈血管内皮細胞Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａ）を用
いて検討した。 ＣＰＡＥ細胞は、大日本製薬ラボラトリ−プロダクツ部
より購入した。ＣＰＡＥ細胞は、２５ｃｄの培養フラス
コに１０％ＦＣＳ−Ｅａｇｌｅ　ＭＥＭ培地を用いて継
代し、継代時に分取した細胞懸濁液から０６１ｍ２を滅
菌したピペットで試験管に移した後、トリパンブルー溶
液０　、９　ｍｌで１０倍に希釈し、血球計算盤で細胞
数を計測し、細胞数が２Ｘ１０’　ｃｅｌｌｓ／ｍ１と
なるように１０％ＦＣ３−Ｅａｇｌｅ　ＭＥＭ培地で希
釈後、９６ウエルのマイクロタイタープレート（コーニ
ング社製）に各ウェル１００μ２ずつ、すなわち２×１
０’　ｃｅｌ１ｇ／ウェルとなるようにマイクロピペッ
トで注入した。プレートは、３７°Ｃ，５％Ｃ（ｈ中で
培養を開始した。 培養開始後２４時間めに、本発明化合物を０．２ｍｇ／
ｄとなるように培地で溶解し、溶解しないものは１％以
下のＤＭＳＯに溶解した溶液をフィルターを使って無菌
濾過し、その５μｉを滅菌したマイクロピペットでウェ
ルに加え、３７°Ｃ，５％ＣＯ□中で７２時間培養した
後、採取した培養上清を測定に供した。 測定は、フィブリンプレート（化工研究所製）のウェル
にプラスミノーゲンを５μ２注入し拡散するまで放置す
る。拡散後、培養上清を５μ！注入した後３７°Ｃの炭
酸ガス培養器中に入れ、４時間後に線溶による透明な溶
解面の形成をもって判定する。この時、同時にポジティ
ブコントロールとしてｔ−ＰＡを入れたウェルにおける
線溶による透明な円ができることを確認した。その透明
な円の径は９〜１０ｍｍであった。 本発明化合物を添加した培養上清の場合にも、４．５〜
８．５ｍｍの透明な溶解面が認められたが、本発明化合
物を添加しない細胞の培養上清の場合（コントロール）
には、何らの変化も認められなかった。４ｍｍ以上の溶
解面を形成した場合に、ＣＰＡＥ細胞の血栓溶解能を誘
導したものと判定した。 線溶活性のチエツクが終了した後、ウェルを最終濃度２
．５％グルタルアルデヒドで固定した後、液を捨て、Ｐ
ＢＳで洗浄し、洗浄後、水分を切って０．１％クリスタ
ルバイオレットを１００μ２入れて染色し、２〜３分間
放直後、流水で流す。余分の染色液を流去した後、水分
を切って１００μ２のメタノールで細胞に結合している
色素を溶出し、マルチスキャン（タイターチック）を用
いＡＢＳ法とマトリックス法による測定を波長５８０　
ｎｍで行い、細胞が障害を受けていないことを確認した
。 表４に溶解面の直径（＝）を示した０本発明化合物の血
栓溶解作用が明白である。 表４ の誘導能を有することが判明したが、この線溶活性がα
、−ＰＩ低下作用のほかにいかなる物質によって生じて
いるのかを確認するため、本発明化合物のうち化合物番
号２を加えた培養液についてフィブリンオートグラフィ
ーの手法を用いて解析した。 １０％ゲルを用いた５ＯＳ−ポリアクリルアミドゲルで
この培養液とｔ−ＰＡ（組織型プラスミノーゲンアクチ
ベータ）と、ウロキナーゼを電気泳動する。 泳動後、このゲルを２．５％トリトンＸ−１００で処理
し、フィブリノーゲン、トロンビン、及びプラスミノー
ゲンを加えた寒天平板上にのせ、３７°Ｃ１５％Ｃ（ｈ
の培養器に入れ、フィブリンの溶解位置を確認した。 その結果、本発明化合物添加培養上清では、ウロキナー
ゼ型のプラスミノーゲンアクチベータの分子量位置に大
きな・フィブリンの溶解が認められ、本発明化合物は、
ＣＰＡＥにおけるウロキナーゼ型のプラスミノーゲンア
クチベータの産生を強力に誘導していることが明らかに
なった。 急性毒性試験 ｄｄＹ系雄性マウス、６週令を、被験検体群当たり４匹
ずつ用いた。 実験方法 静脈内投与では、各検体を０．９％生理食塩水に溶解後
、尾静脈より投与した。腹腔内投与では、各検体を０．
５％ＣＭＣ−生理食塩水で懸濁させ、マウス体重１０ｇ
当たり、０　、１　ｍｆｌ　ＪＩＩ腔内投与した。経口
投与では、各検体を０．５％ＣＭＣ−生理食塩水で懸濁
させ、マウス体重１０ｇ当たり、０．２成経口投与した
。 投与直後から観察を行い、投与後１週間観察した後にク
ロロホルムで層殺し、剖検した。 各被験検体のＬＤ、。を次表にまとめた。本発明化合物
の安全性が明白である。 静脈内投与 腹腔内投与 実施例１ 本発明化合物（化合物番号２）に、−錠あたり以下の物
質を加え、常法に従って錠剤を得た。 −錠中（３０（ｂａｇ中） 本発明化合物（化合物番号２　）　　　　　　　２００
ｍｇ乳　　　　　　ｔＪ！　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　５０　ｍ　ｇトウモロコシデンプン　
　　　２０ｍｇ低ｉｌ　ｔＡ　度ヒドロキシプロピルセ
ルロース　　１５ｍｇヒドロキシプロピルセルロース　
　　　　　　５ｍｇ００ｍｇ 実施例２ 本発明化合物（化合物番号２）に、−管あたり以下の物
質を加え、常法に従って注射剤を得た。 −管中（１０ｄ中） 本発明化合物（化合物番号２　）　　　　　　　２００
ｍｇ塩　化　す　　ト　　リ　　ウ　　ム　　　　　　
　　　　　　　９０ｍｇ０ｍ２

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）［１］次の一般式〔 I 〕で表される化合物、そ
   の生理学的に許容される酸付加塩、及びその四級塩［２
   ］ノジリマイシン及びその生理学的に許容される酸付加
   塩 ［３］１，４−ビス（３−モラノリノ−１−プロペニル
   ）ベンゼン及びその生理学的に許容される酸付加塩［４
   ］カスタノスペルミン の上記［１］〜［４］で構成される群から選択される化
   合物を主成分とするα＿２−プラスミンインヒビター低
   下剤。 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕 ここに、Ｒ＾１は、水素、アルキル、カルボキシアルキ
   ル、アルキルオキシカルボニルアルキル、ヒドロキシア
   ルキル、シクロアルキルアルキル、アリールアルキル、
   アリールオキシアルキル、アルケニル、又は置換若しく
   は無置換のアリールアルケニルを表す。
2. （２）［１］次の一般式〔II〕で表される化合物、その
   生理学的に許容される酸付加塩、及びその四級塩［２］
   ノジリマイシン及びその生理学的に許容される酸付加塩 ［３］１，４−ビス（３−モラノリノ−１−プロペニル
   ）ベンゼン及びその生理学的に許容される酸付加塩［４
   ］カスタノスペルミン の上記［１］〜［４］で構成される群から選択される化
   合物を主成分とするウロキナーゼ分泌促進剤。 ▲数式、化学式、表等があります▼〔II〕 ここに、Ｒ＾２は、水素、アルキル、カルボキシアルキ
   ル、アルキルオキシカルボニルアルキル、ヒドロキシア
   ルキル、シクロアルキルアルキル、置換若しくは無置換
   のアリールアルキル、置換若しくは無置換のアリールオ
   キシアルキル、アルケニル、ヒドロキシアルケニル、置
   換若しくは無置換のアリールアルケニル、アリールオキ
   シアルケニル又はアルキルカルバモイルアルキルを表す
   。
3. （３）［１］次の一般式〔II〕で表される化合物、その
   生理学的に許容される酸付加塩、及びその四級塩［２］
   ノジリマイシン及びその生理学的に許容される酸付加塩 ［３］１，４−ビス（３−モラノリノ−１−プロペニル
   ）ベンゼン及びその生理学的に許容される酸付加塩［４
   ］カスタノスペルミン の上記［１］〜［４］で構成される群から選択される化
   合物を主成分とする血栓溶解剤。▲数式、化学式、表等
   があります▼〔II〕 ここに、Ｒ＾２は、水素、アルキル、カルボキシアルキ
   ル、アルキルオキシカルボニルアルキル、ヒドロキシア
   ルキル、シクロアルキルアルキル、置換若しくは無置換
   のアリールアルキル、置換若しくは無置換のアリールオ
   キシアルキル、アルケニル、ヒドロキシアルケニル、置
   換若しくは無置換のアリールアルケニル、アリールオキ
   シアルケニル又はアルキルカルバモイルアルキルを表す
   。