SE465109B - Antibakteriell komposition - Google Patents

Description

465 109 10 15 20 25 30 35 Human mjölk är en rik källa av fria oligosackarider och glyko- konjugat (12,13). Humanmjölk inhiberar vidhäftning bâde av §¿ pneumoniae och fl¿ influenzae till nasopharyngela epitelceller in vitro (3). Inhibitorer för pneumokockbinding identifierades i den fria oligosackaridfraktionen som väntat av dess innehåll av lakto-och neolaktotetraos med känd receptoraktivitet för pneumokocker (3).

Ytterligare komponenter med en molekylvikt av > 500 dalton men ej av immunoglobin natur samverkade också med bâde §¿ pneumo- niae och fl¿ influenzae (3). Föreliggande uppfinning beskriver identifieringen av dessa icke-immunoglobina komponenter i hög- molekylviktsfraktionen av humanmjölk såsom kaseiner.

Beskrivning av föreliggande uppfinning Det har nu överraskande visat sig möjligt att kunna förbättra den antibakteriella effekten mot infektioner förorsakade av §¿ pneumoniae och/eller fi¿ influenzae genom att administrera, pro- fylaktiskt eller terapeutiskt, en komposition omfattande ett kasein, förutom allmänt kända inerta accepterade fyllmedel och hjälpmedel eller näringsämnen.

Ytterligare karaktäristika för uppfinningen kommer att framgå av hithörande krav.

Föreliggande uppfinning kommer att beskrivas mera i detalj med hänvisning till exemplet givet nedan.

EXPERIMENT Bakterier §¿ pneumoniae (CCUG3114) och fl¿ influenzae (Hi198) användes ge- nomgâende i dessa försök. Dessa stammar isolerades ursprungli- gen från näshâlan hos barn med frekventa utbrott av akuta öron- inflammationer. CCUG3114 (kapseltyp 6A) användes tidigare som modellstam i studier för definition av oligosackaridbindning och receptorspecificitet hos pneumokockker (2). Stammar hölls lyofiliserade. Lyofilisaten överfördes till blodagar (CCUG3114) _ 2 _ 10 15 20 25 30 35 465 109 l/ä eller Levinthal medium agar plattor (Hi198) (18). CCUG3114 od- lades under 10 hrs vid 3700 i flytande medium (15), skördades genom centrifugering vid 1500 g under 1f min. och suspenderades i 1 ml 0,8% NaCL med 1% kolin. fl¿ influenzae Hi198 odlades un- der 4 hrs i ring och suspenderades i fosfatbuffert koksaltlösning, PBS, (Hi198). haemophilus medium (5), skördades genom centrifuge- Mjölk Ett förråd av humanmjölk frân friska mödrar användes dä den passerat datum för näringsändamâl. Bovinrâmjölk och v .lig bovin mjölk erhölls från mejeri. Vanlig mjölk centrifugerades vid 2500xg under 15 min och fettet avlägsnades.

Vidhäftningsinhibering Vidhäftning testades som tidigare beskrivits (1,22). I *:rthet, eptitelceller frän orofarynx hos friska donatorer (10E hl) blandades med bakteriesuspensioner (109/ml). Efter centrifuge- ring vid 400xg och inkubering av bakterier och epitelceller icke bundna bakterier genom upprepade centrifuge- elimin' des ringsc, ler vid 100xg och resuspendering i NaCL med 1% kolin.

Inhiberingsaktiviteten hos mjölk komponenterna testades genom preinkubering av bakterier under 30 min vid 37°C. Epitelceller tillsattes därefter och vidhäftningsförsöket fortsatte som be- skrivits. Antalet bakterier som häftat vid epitelcellerna räk- nades med interferenskontrastmikroskopi (0rtolux II, mikroskop med interferenskontrastutrustning TE Leitz, Wetslar, FRG). Vid- häftning gavs som medelantal bakterier/cell för 40 epitelcel- ler. ínhibering gavs i procent av värdet hos buffertkontrollen.

EID50 = effektiva inhiberande dosen som krävs för 50% inhibi- tion av vidhäftningen.

Statistisk analys Skillnaderna i vidhäftning mellan koksaltkontroll och mjölkpro- ver bestämdes med användning av chi-square test för meddiet.

Den inhiberande effekten hos mjölkkomponenterna definierades _ 3 - 465 109 10 15 20 25 30 35 med parvisa test av medelvärden för upprepade försök. Vidhäft- ningen till human nasofarynx epitelceller av §¿ pneumoniae och fl¿ influenzae inhiberades av matur human mjölk men inte av ma- tur bovin mjölk (Tabell 1). inhiberade också bovin râmjölk vidhäftningen av bâda arterna.

I motsats till matur bovin mjölk TABELL 1 Vidhäftningsinhibering av human och bovin mjölk Vidhåftning Bakterier per cell (Ä av koksaltkontroll) Pneumococci H. influenzae Inhibitor Medel Z p< Medel % p< Koksaltkontroll 51 100 98 100 Matur mjölk, bovin 55 108 ns 86 88 ns Matur mjölk, human 4 8 0,001 29 30 0,001 HMWF, human 6 12 0,001 42 43 0,01 LMWF, human 31 61 0,01 92 94 ns Medelvärden baserade på tvâ försök. p = jämförd med koksalt- kontroll.

Beskaffenheten hos de inhiberande komponenterna i human mjölk analyserades först genom separation enligt molekylvikt. Hel- mjölk och vasslefraktioner separerades i fraktioner omfattande hög- och lâgmolekylviktskomponenter genom passage över en G-25 SephadexR kolonn (gräns 5000 dalton molekylvikt, PD10, Phar- _macia AB, Uppsala, Sverige) varvid högmolekylviktsfraktionen (HMWE) (i 3,5 ml destillerat vatten) behandlades direkt. Som väntat frân tidigare studier hittades inhiberande aktivitet för §¿ pneumoniae i fraktionen gosackarider. LMHF påverkade emellertid inte vidhäftningen av §¿ influenzae (Tabell 1).

Kasein Kasein isqlerades genom metoden enligt t.ex. Mellander (19).

Till 0,5 L fettfri human mjölk sattes 13,5 ml 10% kaliumoxalat. -4- 10 15 20 25 30 35 .f 465 109 Efter inkubering över natt vid +4°C avlägsnades fällningen ge- nom centrifugering vid 25f“*g under 15 min. Destillerat vatten tillsattes och 0,5 mmol H* rördes långsamt ned i suspensionen till ett slutligt pH av 4,-. Lösningen värmdes till 30°C under 1 hr och lämnades därefter över natt vid ¥4°C. Efter centrifu- gering vid 2500xg under 15 min kastades supernatanten och fäll- ningen tvättades med 3-5 resuspenderingscykler i destillerat vatten och centrifugering. Beredningen användes färsk eller lyofiliserades.

Mjölken separerades vidare i kasein och vassle fraktioner. Vid en koncentration motsvarande den i mjölk (2 mg/ml), inhiberade kaseinfraktionen (HMHF) vidhäftningen både till §¿ pneumoniae och H. influenzae (Tabell 2).

TABELL 2 Vidhäftningsinhibition med k seinfraktion från human mjölk.

Vidhäftning Bakterier per cell (Z av koksaltkontroll) Pneumococci H. influenzae Inhibitor Medel % pä Medel % p< Koksaltkontroll 106 100 110 100 Human mjölk 4 4 0,001 35 38 0,001 Vasslefraktion 44 44 0,01 101 92 ns Kaseinfraktion 13 12 0,001 31 28 0,001 Bovin mjölk 100 91 ns 100 91 ns Vasslefraktion 115 108 ns 120 109 ns Kaseinjraktion 131 124 ns 90 85 ns Medelvärden baserade på tvâ försök. p = jämförd med koksalt- kontroll.

Den in? ,erande aktiviteten hos kaeinfraktionen bekräftad;; med renad, kommersiellt tillgängligt human kasein. kaseinfraktionen och det kommersiella fraktionen likvärdigt ak- Pâ viktbasis var tiva. Förhållandet mellan kaseinkoncetrationen och vidhäft- _ _ 5 _ 465 109 10 15 20 25 30 35 FIG. 2. Vid kaseinfraktionen pneumokockvidhäftning med 10 mg/ml minskade EID ningsinhibitionsgraden visas i mmer än 80%. 50 en liknande dosres- vid 10 mg/ml och var c:a 2 mg/ml. För §¿ influenzae erhölls ponskurva med en maximal inhibering av 86% EID50 värde på 2 mg/ml.

Artskillnaden i inhiberande aktivitet mellan matur human mjölk och bovin mjölk bekräftades för kasein och vasslefraktionerna frân bovin mjölk, varvid inte någon av dessa inhiberade vid- häftningen av §¿ pneumoniae och fi¿ influenzae (Tabell 2).

Den inhiberande aktiviteten för fi¿ influenzae begränsades till kaseinfraktionen från human mjölk; ingen aktivitet kvarstod i vassleiraktionen (Tabell 2). I motsats därtill inhiberades pneumokock vidhäftningen också av vasslefraktionen. Molekyl- storleken hos inhibitorerna i vasslefraktionen analyserades ei- ter separation i komponenter över och under 5000 dalton. Både den högre och den lägre molekylviktsfraktionen hade inhiberande aktivitet (Tabell 3).

Renade kommersiella komponenter från human mjölk; albumin, ka- sein, alfa-laktalbumin, och laktoferrin köptes från Sigma Che- mical Company, St. Louis, Mo. USA.

Kommersiellt tillgängliga vassleproteiner med humant och bovint ursprung hade inte någon inhiberande aktivitet pâ §¿ pneumoniae (Tabell 3) eller fl¿ influenzae. 10 15 20 25 30 35 TABELL 3 Kom:nnenter från vassle och anti-vidhäftningsaktivitet mot §¿ pneemoniae Vidhäftning Bakterier per cell (2 av koksaltkontroll) Inhibitor Medel Z p< Fraktioner av human mjölk Koksaltkontroll 48 100 Vassle, total 15 31 0,001 Vassle, HMNF 20 42 0,01 Vassle, LMWF 26 S4 0,01 Vassle, kokad 22 46 0,01 Kommersiella vassleproteiner Koksaltkontroll 72 100 Humant albumin 68 85 ns Humant alfa-laktalbumin 95 132 ns Humant laktoferrin 104 144 ns Bovint alfa-laktalbumin 131 185 ns Bovint laktoferrin 59 82 ns Medelvärden baserade på tvâ försök. p = jämförd med koksalt- kontroll. Koncentrationen av vasslekomponenter var hälften av den i mjölk. Koncentrationen av kommersiella vassleproteiner var 20 mg/ml. iEe fraktion rik pâ kappa-kasein glykopeptid erhölls med metoden enàigt Jollés et al enligt följande: chymosin (Sigma; enzymïsubstrat 1:2000) sattes till en 2% lösning av helt kasein i en 0,2 M pyridinzättikssyra buffert vid pH 5,5. Efter ned- brytning under 1,5 hrs vid 37°C tillsattes triklorättikssyra (slutlig koncentration 12%) och blandades försiktigt under 16 hrs vid +4°C. Supernatanten som erhölls efter centrifugering vid 14300xg under 2 hrs vid +4°C innehöll kappa-kasein glyko- peptid. Den senare tvåttades sex gånger med dietyleter, dia- lyserades mot destillerat vatten vid 4°C och lyofiliserades. -7_ 4655 10 15 20 25 30 35 1l)9 K Kaseinfraktionen huvudsakligen bestående av kappa-kasein be- fanns inhibera vidhäftningen av både §¿ pneumoniae och fi¿ in: fluenzae (FIG. 3). För §¿ pneumoniae var EID50 c:a 2 mg/ml, dvs jämförbar med oseparerad kaseinfraktion. I motsats därtill var den inhiberande aktiviteten mot fi¿ influenzae signifikant redu- cerad till et EID50 av c:a 10 mg/ml. Vid en koncentration av 10 mg/ml hade återstoden (alfa och beta kasein) inte någon inhibe- rande aktivitet.

Baktericid aktivitet hos kasein Den baktericida aktiviteten hos kaseinet testades enligt föl- jande: 1x109 bakterier/ml bestämt i en haemocytometer och ka- sein blandades och inkuberades vid 37°C under 30 min. Efter spädning till koncentrationer mellan 1x102 och 1x108 bakteri- er/ml odlades bakterierna pâ agarplattor över natt. Antalet bakteriekolonier pâ plattorna räknades och jämfördes med bak- terierna inkuberade med koksaltbuffert.

Antalet levande bakterier av §¿ pneumoniae (CCUG3114) efter behandling med humanmjölkkaseinfraktionen (2 mg/ml) bestämdes samt mängden levande bakterier av fi¿ influenzae (Hi198) och K88 positiva §¿ coli. Erhâllna resultat ges i Tabell 4 nedan.

TABELL Ål» Art Behandling Levande kolonier o- 1u' so' 120' s. pnaamanaaa kakaall 4,4k1o8 4,ok1o8 2,6x1o8 4,ox1o7 kaaaan s,ox1o8 s,2k1o8 <1,ox1o2 <1,ox1o2 H. influenzae kakaall 1,ok1o9 s,ok1o8 1,ox1o9 z,ux1o8 " kasein 2,ox1o8 2,ox1o8 z,ox1o8 1,ok1o8 E. coli k sa kaksal: 1,ok1o8 3,ok1o8 s,4x1o8 7,ox1o8 kasein s,ux1o8 4,ox1o8 1,zk1o9 1,nx1o8 10 15 20 25 30 35 9 465 109 Som framgår av TabeLL 4 ovan reduferades antaLet Levande bakte- rier betydligt då humanmjöLkskasein användes, vilket indikerar att humanmjölkskasein inte bara inhiberar vidhäftning utan ock- så besitter en baktericid effekt.

Vidhäftningsinhibitionen och den baktericida effekten befanns vara oberoende av varandra. Den vidhäftande aktiviteten hos §¿ pneumoniae och fi¿ infLuenzae kvarstod efter formalinfixering och kasein inhiberade ocksâ vidhäftning av fixerade bakterier.

Testresuttatet visas i TabeLL ” nedan.

TABELL 5 Vidhäftning Levandeförmâga Kasein Bakterier/cell Levande enheter Beredning Obehandlad FormaLin Obehandlad FormaLin S. pneumoniae køksamt 30 27 1,3x1o8 kasein 1 11 <1,ox1o2 H. inftuenzae k°ksaLt 43 44 3,ox1o9 kasein 19 5 z,ox1o8 Den baktericida och anti-vidhäftande komponenterna i kasein se- parerades i den organiska och vattenhaLtiga fasen. Erhâtlna re- suttat med avseende pâ inhibition av vidhäftning och övertevnad ges i/TabeLL 6 nedan. /0 465 109 10 15 20 25 30 35 TABELL 6 Z inhibition Inkub Levande Bakt/cell av kontroll Tid tal S. pneumoniae Nacl 51 100 30 1,3x109 Kasein 2 mg/ml 18 3s ' 30 1,0x103 kasefin, organisk fas 5 9 30 4,0x103 kasein, vatrenfas za 54 30 1,zx109 H. influenzae rss (kontroll) 48 100 30 3,0x109 kasefin 2 mg/ml 17 35 30 2,zx10° Kasein, organisk fas 49 102 30 4,0x109 Kasefin, vatrenfas 16 33 30 2,4x109 KOMMENTÅRER §¿ pneumoniae och fi¿ influenzae är viktiga orsaker till sjuk- lighet och dödlighet i alla åldersgrupper. Infektioner i and- ningsvägarna, t.ex. meningiter, otiter, och sinuiter förorsakas av bakterier som kommer in via nasopharynx. Kolonisering pâ denna plats kan sålunda vara en viktig determinant för sjukdo- men (11). Upptäokten att humant kasein och kasein frân bovin râmjölk inhiberar vidhäftningen av båda arterna öppnar möjlig- heten att förhindra kolonisering genom specifik interferens vid vidhäftning med användning av dessa strukturer. Den ytterligare upptäckten att kaseinfraktionen besitter en baktericid effekt mot åtminstone §¿ pneumoniae, skild från vidhâftningsinhibi- tionseffekten, ger en ytterligare dimension till denna uppfin- ning.

Som framgâræav visade data inhiberar kaseinfraktionen frân hu- man mjölk vidhäftningen av §¿ pneumoniae och fi¿ influenzae till epitelceller frân humana andningsvägar, in vitro.

Förmågan hos human mjölk att inhibera vidhäftningen har visats _10- fl 10 15 20 25 30 35 fl¿ influenzae, varvid inte någon fanns kvar i enzae kan baseras på denna specifika 1, 465 109 i flera system. Mjölk innehåller antikroppar mot bakteriella adhesiner, t.ex. fimbriae (3, 23). Den icke-immunoglobininne- hållande fraktionen inhiberade hemagglutinationen av !¿ cho- lerae och §¿ coli, vidhäftningen till tarmkanalen hos marsvin -och skyddade mot enterotoxininducerad diarré hos kanin (4, 11, 21). Fastän denna aktivitet har tillägnats glykoproteinerna och fria oligosackarider har den exakta strukturen hittills inte definierats. I motsats härtill, identifierades mjölkoligosacka- riderna vilka inhiberar vidhäftning av pneumokocker, som speci- fika fria oligosackarider av laktoserien (3). Den inhiberande aktiviteten hos mjölkoligosackariderna gjordes parallellt med syntetiska analoger och bakterie agglutinerade latex kulor ko- valent kopplade med syntetiska oligosackaridreceptorerna (2, 3).

Till skillnad från §¿ pneumoniae tycks föreliggande kaseinfrak- tion innehålla hela antividhäftningsaktiviteten hos mjölk mot lågmolekylvikts- Sålunda visade sig inte de fraktionen eller i vasslefraktionen. oligosackaridsekvenser som uppträder i gera som receptorer. På samma sätt som §¿ pneumoniae emeller- fri form i mjölken fun- tid, uppträdde den inhiberande aktiviteten i humanmjölk och bo- vin råmjölk men inte i matur bovin mjölk. Ytterligare studier med ändamål att identifiera receptorstrukturerna för fi¿ influ- skillnad.

APPLIKATIONER kaseiner med humant och/eller bovint i form~av en oral slemhinnedosenhet, en injicerbar komposition, ursprung kan administreras eller en topisk komposition. I varje fall administreras kasei- net normalt tillsammans med allmänt kända fyllmedel och/eller tillsatsmedel vilka är farmaceutiskt accepterbara.

I de fall kaseinet administreras i form av en lösning för to- pisk användning inrf'åller ösningen ett emulgeringsmedel för kaseinet tillsamma.; med ett spädningsmedel, vilka kan sprutas in i nasopharynx, eller kan inhaleras i form av en dimma i de _ 11 _ 465 109 'i 10 15 20 25 30 35 da. övre andningsvägarna.

Vid oral användning administreras kaseinet normalt tillsammans med en bärare, vilken kan vara fast, halvfast eller flytande spädningsmedel eller kapsel. Dessa farmaceutiska beredningar är ett ytterligare ändamål med föreliggande uppfinning. Vanligen år mängden aktiv förening mellan 0,1 till 99 vikt-Z av bered- ningen, företrädesvis 0,5-20 vikt-Z i berdningar för injektion och mellan 2-50 vikt-Z i beredningar för oral administrering.

I farmaceutiska beredningar innehållande ett kasein enligt fö- religgande uppfinning i form av dosenheter för oral administre- ring kan föreningen blandas med en fast pulverformig bärare, som t.ex. laktos, sackaros, sorbitol, mannitol, stärkelse, så- som potatisstärkelse, majsstärkelse, amylopektin, cellulosade- rivat eller gelatin, samt med ett antifriktionsmedel såsom mag- nesiumstearat, kalciumstearat, polyetylenglykolvaxer, eller lik-nande, och pressas till tabletter. Multipelenhetsdosgranu- ler kan också framställas. Tabletter och granuler av ovan an- givna kärnor kan beläggas med koncentrerade lösningar av soc- ker, osv. Kärnorna kan också beläggas med polymerer med växling av frisättningshastigheten i magtarmkanalen, såsom anjoniska polymerer med ett pka av över 5,5. Sådana polymerer är hydroxi- propylmetylcellulosaftalat, cellulosaacetatftalat, och poly- merer sålda under varumärket EUDRAGIT S100 och L100.

Vid beredning av gelatinkapslar kan dessa vara mjuka eller hår- I det förra fallet blandas den aktiva föreningen med en ol- ja, och i det senare fallet fylles multipelenhetsdosgranuler däri.

Flytande beredningar för oral administrering kan föreligga i form av siraper eller suspensioner, t.ex. lösningar innehållan- de från c:a 0,2 vikt-Z till c:a 20 vikt-Z av den visade aktiva föreningen och glycerol och propylenglykol. Om så önskas kan sådana beredningar innehålla färgämnen, smaksättningsmedel, sackarin, och karboximetylcellulosa som förtjockningsmedel. _ _ 12 _ 10 15 20 25 30 35 “ 465 109 Den dagliga dosen aktiv förening varierar och är beroende av typen av administrationssätt, men som en allmän regel är den 1- 100 mg/dos aktiv förening vid peroral administrering och 2-200 mg/dos vid topisk administrering. Antalet appliceringar per 24 hrs beror pâ administrationssättet men kan variera t.ex. i fal- Let topisk applicering i näsan från 3-8 ggr per 24 hrs, dvs be- roende pâ slemflödet som produceras av den behandlade kroppen vid terapeutisk användning. Vid profylaktisk behandling kan an- talet vara pâ den nedre sidan av det angivna omrâdet.

Den topiska formen kan företrädesvis användas i profylaktisk behandling företrädesvis i samband med en infektion förorsakad av en rhinitisvirus.

Kaseinet kan också användas som en tillsats i barnmat_ i syn- nerhet av profylaktiska skäl för att tillföra kaseinet pâ ett enkelt sätt till barnet. Barn avvisar vanligen läkemedel av olika skäl. Livsmedelsproduåsen kan sålunda vara i form av en pulverformig grötbas, vällingbas, mjölkersättningsbas eller mera sammansatt livsmedelsprodukt såsom kalops omfattande ve- getabilier och köttbitar, ofta i sönderdelad form.

I det fall kasein administreras till djur tillsättes de normalt till fodermedlet vilket förutom kaseinerna innehåller sedvan- ligt använda näringsämnen.

I enlighet med en ytterligare aspekt av föreliggande uppfinning 'anvisas en metod för att bestämma närvaro av §¿ pneumococci och fl¿ influenzae i prov som tagits frân andningsvägarna hos männi- ska eller djur. Denna metod är baserad pâ tekniken att bestämma graden interaktion mellan bakterier i provet och en komposition enligt föreliggande uppfinning. Sådan interaktion kan bestämmas genom inhibition eller induktion av vidhäftninsen av bakterier till celler eller andra ytor. _13.. 465 109 '” 10 15 20 25 30 35 REFERENSER 1. Andersson, B., Eriksson, B., Falsén, E., Fogh, A., Hanson, L.Ã., Nylén, 0., Peterson, H., Svanborg Edén, C., In- fect. Immun., §š:311-317 (1981). ' 2. Andersson, B., Dahmén, J., Frejd, T., LeffLer, H., Magnusson, G., Noori, G., Svanborg Edén, C., J. Exp. Med. 158:SS9-570 (1983). 3. Andersson, B., Porres, 0., Hanson, L.8., Lagergârd, T., Svanborg Edén, C., J. Infect. Dis. 1S3:232-237 (1986). 4. Ashkenazi, S., Miretman, D., Pedriatric Research, šâ:130-134 (1987). 5. Branefors-Helander, P., Acta Pathotogica, Microbiologica et Immunotogica Scandinavia (B), §Q:211-220 (1972) 6. Fiat, A.-M., JoLLés, J., Aubert, J.-P., Loucheux-Lefebvre, M.-H., Jotlés, P., Eur. J. Biochim. 111:333-339 (1980). 7. van HaLbeck, H., Dorland, L., Vliegenhart, J.F.G., Fiat, A.-M., Joltés, P., -Biochimica et Biophysica Acta. 623:295-300 (1980) 8. van Hatbeck, H., Vtiegenhart, J.F.G., Fiat, A.-M., JoLLés, P., FEBS 187:81-88 (1985). 9. van Heyningen, H.E., Carpenter, C.C.J., Pierce, N.F., Greenough, H.B., J. Infect. bis. 124:415-418 (1971). .'1'+: fi 10 15 '20 25 30 35 A? 465 109 10. van Heyningen, W.E., Nature, 249:41S-417 (1974) 11. Holmgren, J., Svennerholm, A.-M., Lindband, M., xnfecf. zmmun. gun-w. mess). 12. Jenness, R., Seminars in Perinatology, §:225-229 (1979). 13. Kobata, A., In: Horowitz MI and Pigman N (ads), The Glycoconjugates, Academic Press, New York, pp. 423-440 (1977). 14. Källenius, G., Möllby, R., Svensson, S.B., et al, FEMS Microbiological Letter, 1:29?-302 (1980). 15. Lacks, S., Hotchkiss, R.D., Biochim. Biophys. Acta, â§:508-517 (1060). 16. Leffler, H., Svanborg-Edén, C., FEMS Microbiol. Letter 8:12?-134 (1981). 17. Leffler, H., Svanborg Edén, C., In: Mirelman D (ed): Microbial Lectins, New York, John Wiley and Sons, pp. 84-96, (1986). 18. "~inthal, W., Zeit ift für Hygiene und Infektionskrankheiten, 76:1-24 .(191c,. 19. Mellander, L., Upsala Läkarefören. Förhandl. N.F. Bd LII, Häft. 3-4, (1947). 20. Mirelman Ed. L., John Wiley and Sons, Microbial Lectins and Agglutinins; properties and biological activities (1986). 21. Otnaess, A.B., Svennerholm, A.-M., Infect. Immun. â§:738-740 (1982). _ 15 _ /é 465 109 22. Porras, O., Svanborg Edén, C., Lagergârd, T., Hanson, L.ß., Eur. J. Clin. MicrobioL. 4:310-315 (1985). 23. Svanborg Edén, C., CarLsson, B., Hanson, L.B., Jann, B., 5 Jann, K., Korhcnen, T., Wadström, T., 10 15 20 25 30 35 Lancet ii:1245 (1979). _ 16 _

Claims (5)

10 15 20 25 30 35 ” 465 109 PATENTKRAV.

1. Användning av en kaseinfraktion med en undre molekylvikts- gräns av 5000 dalton och erhällen från mjölk för beredning av ett substrat för terapeutisk, profylaktisk och/eller diagnos- tiskt bruk vid infektioner i andningsvägarna förorsakade av §¿ pneumoniae och/eller fi¿ influenzae.

2. Användning enligt krav 1, vari kaseinet är en fraktion er- hållen från human mjölk och/eller bovin rämjölk med en undre molekylviktsgräns av 5000 dalton.

3. Farmaceutisk komposition omfattande en terapeutiskt aktiv mängd av en kaseinfraktion med en undre molekylviktsgräns av 5000 dalton erhâllen från human mjölk och/eller bovin råmjölk för terapeutisk och/eller profylaktisk behandling av infek- tioner i andningsvägarna förorsakade av §¿ pneumoniae och/eller EL influenzae.

4. Farmaceutisk komposition enligt krav 3 omfattande en tera- peutisk baktericid mängd av en kaseinfraktion med en undre molekylviktsgräns av 5000 dalton erhâllen från human mjölk och/eller bovin râmjölk för terapeutisk och/eller profylaktisk behandling av infektioner förorsakade av §¿ pneumoniae.

5. Livs-och fodermedel omfattande en aktiv mämngd av en kasein- fraktion med en undre molekylviktsgräns av 5000 dalton erhâllen från human mjölk och/eller bovin râmjölk för terapeutisk och/eller profylaktisk behandling av infektioner i andnings- vägarna förorsakade av S. pneumoniae och/eller fi¿ influenzae.