MXPA02005491A - Mezcla de oligosacaridos. - Google Patents

Mezcla de oligosacaridos.

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Abstract

Se proporciona una mezcla de oligosacaridos a base de oligosacaridos que se obtuvieron las leches de uno o varios animales, y que se componen de dos o mas unidades de monosacaridos. Esta mezcla de oligosacaridos se caracteriza porque comprende un minimo de dos fracciones de oligosacaridos que se componen en cada caso de un minimo de dos oligosacaridos diferentes, siendo que entre estos no se incluye la lactosa libre, porque el espectro total de los oligosacaridos existentes en la mezcla de oligosacaridos es diferente de aquel de la leche del animal o de las leches de los animales a partir de la (s) que se obtiene (n) las fracciones de oligosacaridos, y porque a) en cuanto los oligosacaridos se obtienen a partir de la leche de un solo animal, la proporcion de oligosacaridos neutrales a oligosacaridos acidos es de 90 - 60 : 10 - 40 % en peso, o b) , en cuanto los oligosacaridos se obtienen de las leches de un minimo de dos animales, los oligosacaridos obtenidos de las leches de dos animales diferentes constituyen respectivamente al menos 10 % en peso del total de oligosacaridos existentes en la mezcla de oligosacaridos. La mezcla de oligosacaridos segun la invencion se aproxima a la leche humana en lo referente a su efecto positivo y en particular en lo referente a su efecto anti-infeccioso.

Description

MEZCLA DE OLIGOSACARIDOS DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención se refiere a una mezcla de oligosacáridos a partir de oligosacáridos que se obtuvieron las leches de uno o varios animales, y que se compone de dos o mas unidades de monosacáridos, y al uso de esta mezcla de oligosacáridos para combatir los desórdenes de las funciones gastrointestinales. La concentración de oligosacáridos en la leche humana madura es de aproximadamente 10 g/1. En la leche humana se ha podido describir hasta ahora la estructura de aproximadamente 80 oligosacáridos diferentes, los cuales se componen de 3 - 13 monómeros; Ne burg, D. S. y Neubauer, S.
H. (1995) Carbohydrates in milk: Analysis, quantities and signifcance, en Handbook of Milk Composition, Jensen, R.
G., editor. Academic press, 273-349. En la diversidad estructural de estos oligosacáridos desempeña un papel muy importante la isomería de estructura y posición. La proporción de oligosacáridos, respectivamente estructuras oligosacáridas neutrales a siálicas (acidas) es de aproximadamente 10:1 en la leche humana madura. Los oligosacáridos desempeñan en el ser humano los siguientes papeles importantes en la defensa especifica y no especifica contra infecciones: 1. Los oligosacáridos de la leche humana constituyen una fuente de sustrato para bacterias bifidas . Con ello apoyan a la flora intestinal normal, necesaria para la función del tracto gastrointestinal, y rechazan gérmenes patógenos; Rose, C. S., Kuhn, R., Zilliken, F. y Gyórgy, P. (1954) Bididus factor. V. the activity of a-and ß-methyl-N-acetyl-D-glucosaminides, Arch. Biochem. Biophys. 49, 123-129. 2. Los oligosacáridos impiden la adhesión de los gérmenes patógenos y/o de sustancias como bacterias, toxinas y parásitos eucariotas al fungir como análogos de receptores específicos, mediante lo cual se impide el primer paso de una infección. En diversos ensayos in vitro se pudo demostrar un efecto antiadhesivo de los oligosacáridos frente a los mas diversos microorganismos patógenos; Kunz, C. y Rudloff, S. (1993) Biological functions of oligosaccharides in human mil, Acta paediatr. 82., 903-912. 3. Los oligosacáridos, mediante la influencia en diversas células de actividad inmunológica, promueven la capacidad defensiva frente a infecciones. La actividad inmunomoduladora de determinadas estructuras de oligosacáridos se pudo demostrar en el modelo animal debido a un incremento en la producción de interleuquin 10; Velupillai, P. y Harn, D. A. (1994) Oligosaccharide-specific instruction of interleukin 10 production by B 220+ cells from schistosome-infected mice: a mechanism for regularion of CD4+ T-cell subsets, Proc. Nati. Acad. Sci. 91, 1-2. La heterogenicidad de los oligosacáridos de la mayoría de las leches de mamíferos hasta ahora conocidas difiere en muchos aspectos de la de los oligosacáridos de la leche humana. Tanto cuantitativa como también cualitativamente existen numerosas diferencias en lo que respecta a la composición de los oligosacáridos. Las diferencias entre las especies en lo referente al contenido de oligosacáridos en las leches de mamíferos se relacionan primordialmente con diferencias de concentración, tanto de los componentes individuales como también de estructuras con características similares, asi como también a las estructuras básicas mismas. Tanto la secuencia de los monosacáridos como también el enlace difieren en comparación con los oligosacáridos de la leche humana. Además, la cantidad de la mayoría de los componentes individuales en la mayoría de las leches de animales es notablemente menor que en la leche materna humana. Se supone que estas diferencias están condicionadas por las demandas del tracto gastrointestinal del recién nacido a la composición de oligosacáridos de la leche. Estas demandas varian mucho en función de la especie. Y tales diferencias, en lo que se refiere a las demandas, no solo existen en la comparación de un niño recién nacido con un animal recién nacido, sino que también entre diferentes animales recién nacidos. Las diferencias residen en el estado de función del tracto gastrointestinal del recién nacido, en el grado de madurez del sistema inmunológico, en la preferencia alimenticia en función de la especie asi como en el medio germinal muy especifico de la especie correspondiente. Si se trata ahora de sustituir la leche humana por una leche sintética o una fórmula para infantes a base de leches de animales se confronta el problema de que, de acuerdo al estado de conocimiento actual, la leche de una sola especie animal no posee la diversidad estructural heterogénea con respecto a los oligosacáridos como la que se encuentra en la leche humana. El objeto de la presente invención es el de proporcionar una mezcla de oligosacáridos a partir de oligosacáridos que se obtuvieron de la(s) leche (s) de uno o varios animales cuyo efecto positivo, y en particular cuya actividad antiinfecciosa sea lo más análoga posible a la de los oligosacáridos de la leche humana. Esta tarea se soluciona mediante la mezcla de oligosacáridos de acuerdo a la enseñanza de las reivindicaciones.
Sorprendentemente se descubrió que mediante una nueva mezcla de oligosacáridos a partir de la leche de uno, pero también de diferentes animales, se incrementa el efecto antiinfeccioso y/o prebiótico de los oligosacáridos de la leche de animales. Por este motivo la mezcla de oligosacáridos de conformidad con la invención se compone de un minimo de dos fracciones de oligosacáridos que contienen respectivamente un minimo de dos oligosacáridos diferentes. Para esto las fracciones de oligosacáridos pueden provenir de la leche de un animal o también de las leches de varios animales. Aún cuando de hecho debiera holgar decirlo, se hace hincapié en que por leche de animal no se entiende la leche humana.- Cada una de las fracciones de oligosacáridos contiene un minimo de dos oligosacáridos dif rentes. Como oligosacáridos diferentes se consideran aquellos que se diferencian en a lo menos una característica. Asi, por ejemplo, se consideran oligosacáridos diferentes dos disacáridos que se componen de unidades de -monosacárido iguales pero enlazadas de manera diferente. Por lo tanto las diferencias pueden ser tanto de Índole estructural como también residir en la composición. Por consiguiente es una de los aspectos esenciales de la invención el componer nuevamente las fracciones de oligosacáridos de leche de animales de una especie, respectivamente varias especies, de manera que se obtiene un efecto biológico incrementado. Naturalmente que con esta nueva composición, respectivamente nueva mezcla, se debe tener cuidado de no obtener una mezcla que corresponda a la mezcla original existente en la leche de un animal o en las leches de varios animales. Por este motivo el espectro total de los oligosacáridos existentes en la mezcla de oligosacáridos debe ser diferente a aquel de la leche del animal o de las leches de los animales a partir de la(s) que se obtiene (n) las fracciones de oligosacáridos. Si, por ejemplo, la mezcla de oligosacáridos de conformidad con la invención se obtiene de una sola leche de animal, entonces mediante la última característica que se refiere al espectro total se expresa que la nueva composición, respectivamente mezcla de fracciones de oligosacáridos que se obtiene de esta única leche de animal no conduce nuevamente a la leche del animal original. Si la mezcla de oligosacáridos se obtiene de las leches de varios animales, entonces la nueva composición o nueva mezcla no debe conducir a que la mezcla de oligosacáridos obtenida sea análoga a una de las composiciones de oligosacáridos de las leches de los animales originalmente usadas. Si los oligosacáridos de la mezcla de oligosacáridos de conformidad con la invención se obtienen a partir de la leche de un solo animal, entonces además la proporción de oligosacáridos neutrales a oligosacáridos ácidos es de 90 - 60 : 10 - 40 % en peso. En otras palabras, coexisten una fracción de oligosacáridos neutral y una fracción de oligosacáridos acida. Ambas de estas fracciones contienen un mínimo de dos oligosacáridos diferentes. Mediante la variación en las proporciones de la fracción de oligosacáridos acida con respecto a la fracción de oligosacáridos neutral en comparación con las proporciones de oligosacáridos neutrales a oligosacáridos ácidos originalmente existentes en la leche del animal es posible obtener un notable incremento de su efectividad fisiológica . En cuanto los oligosacáridos se obtienen de diferentes, y por consiguiente de las leches de un mínimo de dos animales, la nueva composición, respectivamente la nueva mezcla deberá efecturase de manera que los oligosacáridos obtenidos de las leches de dos animales diferentes constituyan respectivamente al menos 10 % en peso del total de oligosacáridos existentes en la mezcla de oligosacáridos. Sí por consiguiente los oligosacáridos se obtienen a partir de las leches de dos animales, entonces los oligosacáridos obtenidos de la leche de un animal deben constituir a lo menos 10 % en peso, en tanto que los oligosacáridos obtenidos de la leche del otro animal deben constituir asimismo a lo menos 10 % en peso y 90 % como máximo, y viceversa. Si en cambio se obtienen oligosacáridos de leches de tres o más animales, entonces los oligosacáridos de las leches de solamente dos animales deben constituir un mínimo de 10 % en peso. Los oligosacáridos que se obtienen de las leches de los otros animales pueden constituir menos del 10 % en peso. Como fuente para la producción de la mezcla de oligosacáridos de conformidad con la invención es posible usar las leches de todos lo animales, siendo que se usan preferiblemente fracciones de leche de vacas, cabras, ovejas, yeguas, camellos y búfalos. El aislamiento de las fracciones de oligosacáridos se lleva a cabo con métodos de separación conocidos. Así, es posible llevar a cabo una separación mediante centrifugación por densidad utilizando un separador. Una separación de las proteínas se puede llevar a cabo mediante ultrafiltración, respectivamente 'precipitación mediante solventes (por ejemplo, etanol, acetona) . La lactosa se puede desconcentrar mediante uno o varios de los métodos siguientes: cristalización, métodos de filtración asi como métodos cromatográficos (cromatografía de intercambio de ligandos, filtración por gel, cromatografía de lixiviación, cromatografía de reciclado y cromatografía simulada de contraflujo (SMB)).
Las sustancias minerales se separan mediante electrodiálisis, nanofiltración, intercambio de iones y/u osmosis inversa. El fraccionamiento de los oligosacáridos a oligosacáridos neutrales y ácidos se lleva a cabo con uno de los métodos cromatográficos precedentemente mencionados y/o la cromatografía de intercambio de aniones así como alternativamente mediante métodos de filtración. De acuerdo con una modalidad preferida, la mezcla de oligosacáridos de conformidad con la invención, cuyos oligosacáridos se obtienen a partir de un minimo de las leches de dos animales se compone nuevamente de manera que también en este caso la relación de oligosacáridos neutrales a oligosacáridos ácidos es de 90 - 60 : 10 - 40 % en peso. Con la especificación de la proporción de 90 - 60 : 10 - 40 % en peso en los presentes documentos se abarcan y revelan por lo demás también a lo menos todos los valores intermedios de números enteros, por ejemplo, 89:11, 88:12, 87:13, ....85:15, 80:20, 79:21, 75:25, 74:26, 73:27, 72:28, ....68:32, 67:33, 66:34, 65:35, 64:36, 63:37, 62:38, 61:39. Preferiblemente los oligosacáridos de la mezcla de oligosacáridos de conformidad con la invención se componen de una varias de las siguientes unidades de monosacáridos: D-glucosa, D-galactosa, D-N-acetilglucosamina, D-N-acetilgalactosamina, L-fucosa, D-manosa, ácidos siálicos en forma D (por ejemplo, ácido D-N-acetilneurámico y ácido D-N-glicolilneurámico) , así como sus derivados O acetilados, sulfatados y fosforilados. La lactosa libre que se encuentra en grandes cantidades en las leches de animales no se incluye por cierto entre los oligosacáridos que se obtienen de las leches de los animales, los cuales constituyen las fracciones de oligosacáridos usadas de conformidad con la invención. Pero en la mezcla de oligosacáridos de conformidad con la invención efectivamente también puede existir lactosa libre además de las fracciones de oligosacáridos usadas de acuerdo a la invención. En otras palabras, la mezcla de oligosacáridos -de conformidad con la invención puede estar compuesta exclusivamente por las fracciones de oligosacáridos que contienen los oligosacáridos que se obtuvieron de las leches de uno o de varios animales, y que se componen de dos o más unidades de monosacáridos, siendo que la lactosa libre no se incluye entre ellas. Pero la mezcla de oligosacáridos puede efectivamente - como se mencionó -contener lactosa libre, ya sea que provenga ahora de la leche de animales o no. Además, la mezcla de oligosacáridos puede contener un oligosacárido o varios oligosacáridos que no proviene (n) de una leche de animal. Asi, por ejemplo, es posible mezclar la mezcla de oligosacáridos de conformidad con la invención con los sacáridos comunes que se usan para la preparación de alimentos, y en particular de alimentos para bebé. Adicionalmente es posible que en la mezcla de oligosacáridos de conformidad con la invención también se encuentren aquellos oligosacáridos que, durante la obtención de los oligosacáridos, respectivamente fracciones de oligosacáridos usados de conformidad con la invención fueron liberados a partir de glucolípidos y/o glucoproteinas mediante reacción química, enzimática y/o tecnológica. Cuando dentro del marco de los presentes documentos se trata de oligosacáridos, entonces este término se refiere en particular a aquellos oligosacáridos que se obtuvieron a partir de las leches de animales. Adicionalmente pueden existir también otros oligosacáridos, tal y como se expuso en lo precedente, siendo que esta circunstancia o bien se menciona o se deriva del contexto. Una fuente preferida para aislar oligosacáridos son los productos lácteos a los que se les separaron parcial y/o completamente tanto las fracciones de proteina como también la grasa. Es posible simplificar notablemente el acondicionamiento y fraccionamiento a partir de los productos como la fracción de lactosa y minerales que resulta de la obtención de la nata, la fracción de caseina y de las otras sustancias del contenido. El sobrenadante que se origina durante la preparación de lactosa farmacológica también constituye una fuente de partida adecuada para diversos oligosacáridos. En este caso es posible, antes de comenzar con el aislamiento propiamente dicho de las fracciones, mezclar en la proporción deseada la leche, respectivamente el suero de la leche de una especie animal o de varias especies animales, como es necesario para la composición de oligosacáridos efectiva de estructuras individuales o grupos de estructuras. La mezcla de oligosacáridos de conformidad con la invención se puede usar en forma altamente concentrada o pura en el caso de desórdenes de las funciones gastrointestinales en los que desempeñan un papel las disbacterias (es decir, transtornos de la flora gastrointestinal, por ejemplo, después de la administración de antibióticos u otros medicamentos que influyen en la flora intestinal, después de intolerancia a los alimentos, etc.), respectivamente las infecciones virales. También se puede usar para la profilaxis de este tipo de infecciones gastrointestinales. Para este propósito es posible incorporar la mezcla de oligosacáridos de conformidad con la invención a un alimento para bebés, a un alimento dietético o a una medicina.
La mezcla de oligosacáridos de conformidad con la invención también puede constituir un complemento a un alimento completo preparado. Tales alimentos son, por ejemplo, alimentos para lactantes, respectivamente fórmulas para infantes y preparaciones para la alimentación clínica entérica. Se puede usar además como aditivo a los alimentos normales para conservar las funciones gastrointestinales normales (en el sentido de una profilaxis), así como también para mejorar las funciones gastrointestinales después de transtornos en los que desempeñan un papel la composición microbiana o viral defectuosa del tracto gastrointestinal . La mezcla de oligosacáridos de conformidad con la invención se puede acondicionar como capsula, respectivamente polvo, o existir en forma diluida, como complemento para un alimento preparado por lo demás completo. La mezcla de oligosacáridos de conformidad con la invención se usa preferiblemente en una cantidad de a lo menos 10 mg/kg a 4 g/kg de peso corporal y dia, siendo que los valores en miligramos se refieren a aquellos oligosacáridos de la mezcla de oligosacáridos de conformidad con la invención que se obtuvieron de una leche de animal. Los otros oligosacáridos opcionalmente presentes, como lactosa y oligosacáridos que no provienen de una leche de animal no se toman en cuenta para esto. En particular se administran de preferencia aproximadamente 100 mg/kg y día. La invención se explica a continuación con más detalle en base a los ejemplos que describen las modalidades preferidas. Ejemplo 1 Se acondicionan 100 1 de leche de vaca de acuerdo al método siguiente: La separación de la grasa se lleva a cabo mediante centrifugado por densidad a una temperatura de 45°C. La leche descremada resultante se desproteiniza mediante una precipitación de etanol (concentración final: 66 % de etanol) . El sedimento precipitado se separa con el auxilio de un separador. El etanol y una parte del agua se eliminan por evaporación mediante un evasporador de flujo descendente, de manera que queda un volumen de 40 1. Dentro de este están contenidos aproximadamente 4 kg de lactosa, 1 kg de sustancias minerales y otros componentes solubles como vitaminas solubles en agua, urea o citrato. La proporción de oligosacáridos es de aproximadamente 10 g. La composición de la fracción de oligosacáridos la constituyen partes aproximadamente iguales de estructuras neutrales y siálicas. Mediante cromatografía de intercambio de aniones sobre AG 1 x 2 se lleva a cabo una separación en una fracción neutral (eluyente: agua desmineralizada) y una fracción acida (eluyente: 300 mM de acetato de amonio). A la fracción neutral se le eliminan hasta 60 % de lactosa mediante la técnica de cristalización. Mediante la cromatografía de gel sobre Toyopearl HW 40 (S) se logran obtener 5 g de una fracción de oligosacáridos neutral cuyo contenido residual de lactosa es de aproximadamente 10 %. La fracción de los oligosacáridos siálicos se libera mediante electrodiálisis del regulador de elución de intercambio de aniones (acetato de amonio) y se liofiliza al igual como la fracción de oligosacáridos neutral. De esta manera es posible obtener 4.5 g de una fracción de oligosacáridos siálica. Mediante una recomposición de 1 g de la fracción acida con 5 g de la fracción neutral se obtiene una mezcla más activa que la correspondiente a la composición natural. Ejemplo 2 Los sueros de leche de cabras, ovejas y vacas que resultan de la producción de queso se mezclan en una proporción de 3:1:1 antes de acondicionarlos, de manera que se tiene una cantidad total de 4000 1 de suero de tres especies animales diferentes. Mediante ultrafiltración con una membrana de polisulfona (corte en 20 kDa) se separan la grasa residual, el glicomacropéptido que se encuentra en solución, y las proteinas del suero. A continuación es posible concentrar el permeado a 900 1 mediante osmosis inversa. El procesamiento adicional es análogo al precedentemente descrito, siendo que primero tiene lugar la cristalización de la lactosa y a continuación la cromatografía de intercambio de aniones, con el propósito de separar los péptidos. La fracciones de las etapas de lixiviación con agua desmineralizada y 300 mM de acetato de amonio se reúnen, concentran, electrodializan y liofilizan. Es posible obtener una mezcla de oligosacáridos de tres especies diferentes en una cantidad de 570 g. Después de la separación adicional con filtración sobre gel y desalinización mediante electrodiálisis es posible obtener el producto diana mediante liofilización. El análisis con filtración sobre gel, HPAEC-PAD y MALDI-MS demuestra que de acuerdo a las leches empleadas y a la proporción de la mezcla, la proporción de oligosacáridos ácidos a neutrales es de 1:5. La proporción de galactosil lactosas puede ascender a 120 g debido a la elevada proporción de suero de leche de cabra. Como componente importante de los oligosacáridos ácidos, en la leche de oveja domina el ácido N-glicolilneurámico en comparación con el ácido N-acetilneurámico. Por este motivo se incrementa la proporción de oligosacáridos de glicolilneuraminilo en comparación con la leche de cabra y de vaca.
Ejemplo 3 Se acondicionan paralelamente las leches de yeguas y cabras . Se dispone respectivamente de 50 1 de leche. Se obtiene en cada caso una fracción de carbohidrato y sustancia mineral mediante centrifugado, precipitación etanólica de la proteina y separación. Mediante el uso de un evaporador rotativo las soluciones se reconcentran respectivamente a 8 1. Mediante la cromatografía de intercambio de ligandos sobre AG 501 x 8 (forma Ca2+) y elución con agua desmineralizada se obtiene por una parte la separación cromatográfica de la lactosa y de los monosacáridos y por otra parte un subfraccionamiento de los oligosacáridos. A partir de la leche de yeguas se recolecta entre la gama de elusión del volumen excluido y de los tetrasacáridos una fracción que se usa para una posterior recomposición de los oligosacáridos. La separación de la fracción de carbohidrato-sustancia mineral de la leche de cabra sobre la misma fase resulta en una fracción total de oligosacárido desconcentrada de lactosa y monosacárido. Después de llevar a cabo una desalinización y la simultánea reconcentración mediante nanofiltración de la fracción respectiva, se liofiliza. Ambas fracciones se mezclan en una proporción de mixtura de 2:5 (fracción de oligosacárido de yegua: fracción de oligosacárido de cabra).
Ejemplo 4 Se acondiciona la leche de cabra como se describe en el ejemplo 1. Mediante cromatografía de intercambio de aniones sobre AG 1 x 2 se obtiene una fracción acida cuyos componentes principales son 2,3'- y 2, 6' -sialil-lactosas así como 2,3'- y 2,6'-N-glicolilneuraminil-lactosa. Esta fracción se separa adicionalmente mediante una cromatografía sobre material de fase inversa, de manera que resulta una fracción que consta de 2,3'- y 2, 6 ' -glicolilneuraminil-lactosa. Esta se desaliniza mediante electrodiálisis, se seca por aspersión y queda disponible para mezclas psoteriores. A partir del suero de leche de vaca, mediante filtración sobre gel se logra el aislamiento de una fracción de seis trisacáridos neutrales: tres galactosil-lactosas isómeras, una lactosamina fucosilada y dos unidades de lactosa prolongadas con N-acetilgalactosamina respectivamente N-acetilglucosamina . La fracción acida de la leche de cabra, cuya estructura dominante forma el isómero 2,3, se mezcla en estado seco en la proporción de 1:7 con la fracción neutral de los trisacáridos de suero de leche de vaca, y queda disponible para ensayos de alimentación de animales.
Ejemplo 5 Con los métodos mencionados se aislan a partir de leche de yegua las estructuras lacto-N-neotetraosa y lacto-N-neo-hexaosa. Estos oligosacáridos también se encuentran presentes en la leche humana. A partir de leche de vaca se aisla mediante cromatografía y se liofiliza la diasilil-lactosa con los métodos mencionados. A partir de leche de cabra se aislan dos isómeros de posición de un tetrasacárido fucosilado con los métodos conocidos establecidos. Los oligosacáridos se mezclan en una proporción de la mezcla de 2:1:2 (oligosacáridos de leche de yegua; oligosacáridos de leche de vaca; oligosacáridos de leche de cabra) . Ejemplo 6 A partir del suero de leche de cabra es posible aislar una fracción de oligosacáridos neutrales cuya composición consta de las tetraosas ya descritas, y adicionalmente de penta respectivamente hexaosas con composición de monosacáridos hasta ahora desconocida (2 hexosaminas y 4 hexosas, respectivamente 2 hexosaminas y 4 hexosas así como 3 hexosaminas y 3 hexosas) . Del mismo acondicionamiento se deriva una fracción acida que con el auxilio de la cromatografía de intercambio de aniones se fracciona de manera que resulta una mezcla con una composición de las dos sialil-lactosas distintas y de las dos glicolilneuraminil-lactosas distintas . Tanto los oligosacáridos ácidos de cadena más larga como también las galactosil-lactosas neutrales no se usan para la nueva composición de una nueva mezcla de oligosacáridos. La fracción acida aislada y la fracción neutral se mezclan en una proporción de 2:1. Ejemplo 7 El suero de leche que se genera durante la producción del queso usualmente contiene además de los oligosacáridos libres también numerosos oligosacáridos ligados en forma de N y 0-glicanos. Así, el glicomacropéptido esta O-glicosilado y la lactoferrina esta N-glicosilada . Las estructuras de los glicanos correspondientes se encuentran en considerable medida sializadas. La proporción original de glicanos, respectivamente oligosacáridos ácidos a neutrales asciende aproximadamente a 1:1. Para desviar la proporción a favor de los oligosacáridos neutrales se lleva a cabo una cromatografía de intercambio de aniones. Todos los oligosacáridos ácidos sializados y ligados (fracción 2) se enlazan a la matriz de gel, y los oligosacáridos neutrales (fracción 1) se eluyen con agua desmineralizada. Todos los componentes cargados se lixivian con alta fuerza de iones (por ejemplo, NaCl 1 M) y se siguen procesando. Mediante condiciones de hidrólisis débil a pH 2.0 y 45°C durante varias horas se obtiene un desdoblamiento del ácido siálico. Esta fracción 2 se reúne con los oligosacáridos neutrales (fracción 1) después de la neutralización con una solución de NaOH. La proporción de los oligosacáridos neutrales a los oligosacáridos ácidos se desplaza a favor de los neutrales.

Claims (9)

  1. REIVINDICACIONES 1. Mezcla de oligosacáridos a base de oligosacáridos que se obtuvieron las leches de uno o varios animales, y que se componen de dos o mas unidades de monosacáridos, caracterizada porque comprende un mínimo de dos fracciones de oligosacáridos que se componen en cada caso de un mínimo de dos oligosacáridos diferentes, siendo que entre estos no se incluye la lactosa libre, porque el espectro total de los oligosacáridos existentes en la mezcla de oligosacáridos es diferente de aquel de la leche del animal o de las leches de los animales a partir de la(s) que se obtiene (n) las fracciones de oligosacáridos, y porque a) en cuanto los oligosacáridos se obtienen a partir de la leche de un solo animal, la proporción de oligosacáridos neutrales a oligosacáridos ácidos es de 90 -60 : 10 - 40 % en peso, ó b) , en cuanto los oligosacáridos se obtienen de las leches de un minimo de dos animales, los oligosacáridos obtenidos de las leches de dos animales diferentes constituyen respectivamente al menos 10 % en peso del total de oligosacáridos existentes en la mezcla de oligosacáridos .
  2. 2. Mezcla de oligosacáridos según la reivindicación 1, caracterizada porque en cuanto los oligosacáridos se obtienen a partir de las leches de un mínimo de dos animales, la proporción de oligosacáridos neutrales a oligosacáridos ácidos es de 90 - 60 : 10 - 40 % en peso.
  3. 3. Mezcla de oligosacáridos según la reivindicación 1 ó 2, caracterizada porque los oligosacáridos se componen de una varias de las siguientes unidades de monosacáridos: D-glucosa, D-galactosa, D-N-acetilglucosamina, D-N-acetilgalactosamina, L-fucosa, D-manosa, ácidos siálicos en forma D, como ácido D-N-acetilneurámico y ácido D-N-glicolilneurámico, así como sus derivados O acetilados, sulfatados y fosforilados.
  4. 4. Mezcla de oligosacáridos según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque los oligosacáridos se obtienen a partir de una o varias de las leches de los animales siguientes: leche de vacas, de cabras, de ovejas, de yeguas, de camellos y de búfalos.
  5. 5. Mezcla de oligosacáridos según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque los oligosacáridosse obtienen a partir de leche o suero de leche no combinados o combinados, o productos lácteos no combinados o combinados de una o varias especies de animales .
  6. 6. Mezcla de oligosacáridos según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque además de los oligosacáridos, respectivamente fracciones de oligosacáridos que se obtienen de la leche de un animal también se encuentran presentes lactosa, la cual puede provenir de la leche de un animal o las leches de varios animales a partir de la(s) cual (es) se obtuvieron los oligosacáridos, uno o varios oligosacárido (s) que no proviene (n) de la leche de un animal, y/o los oligosacáridos que son liberados a partir de glucolípidos y/o glucoproteinas mediante reacción química, enzimática y/o tecnológica durante la obtención de los oligosacáridos.
  7. 7. Mezcla de oligosacáridos según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque se incorpora a un alimento para bebé, a un alimento dietético o a una medicina, o porque consituye un aditivo de un alimento por lo demás preparado.
  8. 8. Uso de una mezcla de oligosacáridos según una de las reivindicaciones 1 a 5 para combatir desórdenes de las funciones gastrointestinales ocasionadas por una colonización bacteriana o viral del tracto gastrointestinal, o para la conservación de las funciones gastrointestinales .
  9. 9. Uso según la reivindicación 8, caracterizado porque la mezcla de oligosacáridos se aplica en una cantidad de 10 mg/kg a 4 g/kg de peso corporal y dia.
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