JP2003516412A - オリゴ糖混合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、一または幾つかの動物ミルクから製造され、２またはそれ以上の単糖ユニットから構成されるオリゴ糖に基づくオリゴ糖混合物に関するものである。当該オリゴ糖混合物は、それぞれが少なくとも２種の異なるオリゴ糖から構成される少なくとも２種のオリゴ糖画分を有することを特徴とする。本発明はさらに、ラクトースがこれに含まれず、オリゴ糖混合物中に存在するオリゴ糖の全スペクトルが、これからオリゴ糖画分が抽出される、一の動物ミルクまたは複数の動物ミルク中に存在するものとは異なり、さらにａ）当該オリゴ糖が一の動物ミルクのみから抽出される際には、酸性オリゴ糖に対する中性オリゴ糖の割合が９０〜６０：１０〜４０重量％である、またはｂ）当該オリゴ糖が少なくとも２種の動物ミルクから抽出される際には、２種の異なる動物ミルクから抽出されるオリゴ糖がそれぞれオリゴ糖混合物中に存在するオリゴ糖の全量の１０重量％を構成することを特徴とする。本発明に係るオリゴ糖混合物は、そのポジティブな性質及び特にその抗感染活性に関してヒトミルクに近い。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本発明は、一または幾つかの動物ミルクから得られ、２またはそれ以上の単糖
ユニットから構成されるオリゴ糖のオリゴ糖混合物に、および胃腸機能の疾患を
解消するための当該オリゴ糖混合物の使用に関するものである。

【０００２】 成熟ヒトミルクにおけるオリゴ糖の濃度は、約１０ｇ／ｌになる。今日まで、
３〜１３モノマーから構成される、ヒトミルク中に存在する約８０種の異なるオ
リゴ糖がそれらの構造で記載されうる：Newburg, D.S. and Neubauer, S.H. (19
95) Carbohydrates in milk; Analysis, quantities and significance, in: Ha
ndbook of Milk Composition, Jensen, R.G., editor. Academic press, 273-34
9。これらのオリゴ糖の様々な構造において、構造上の及び位置的な異性が重要
な働きを果たす。アシル化（酸性）に対する中性のオリゴ糖またはオリゴ糖構造
物の関係は、成熟ヒトミルクにおいて約１０：１である。

【０００３】 オリゴ糖は、感染に対する特異的な及び非特異的な防御についてヒトにおいて
下記のような重要な役割を果たす： １．ヒトミルク由来のオリゴ糖は、ビフィドバクテリウム属の基質源を構成す
る。ゆえに、これらは、胃腸管の機能に必要な正常な腸内細菌叢を支持し、病原
菌を抑制する；Rose, C.S., Kuhn, R., Zilliken, F. und Gyorgy, P. (1954),
Bifidus factor. V. the activity of alpha- and beta-methyl-N-acetyl-D-glu
cosaminides, Arch. Biochem. Biophys. 49, 123-129。

【０００４】 ２．オリゴ糖は、特異的なレセプター等価物として作用して、感染の第一段階
がこれにより防止される点で、細菌、毒素及び真核寄生生物等の病原菌および／
または物質の付着を防止する。様々なインビトロのアッセイにおいて、最も多様
な病原性微生物に対するオリゴ糖の付着防止作用が示されうる；Kunz, C. and R
udioff, S. (1993) Biological functions of oligosaccharides in human milk
, Acta paediatr. 82, 903-912。

【０００５】 ３．様々な免疫学的に活性のある細胞に影響を及ぼすことによって、オリゴ糖
は、感染に対する防御を促進する。特定のオリゴ糖構造物の免疫調節作用は、イ
ンターロイキン１０産生量の増加によって動物での試験において示されうる；Ve
lupillai, P. and Harn, D.A. (1994) Oligosaccharide-specific instruction
of interleukin 10 production by B 220+ cells from schistosome-infected m
ice: a mechanism for regulation of CD4+ T-cell subsets, Proc. Natl. Acad
. Sci. 91, 1-2。

【０００６】 今日まで知られているほとんどの哺乳動物のミルク由来のオリゴ糖の不均質性
は、ヒトミルクオリゴ糖から多くの点で逸脱している。定量的には、さらには定
性的には、オリゴ糖組成物が関係する限り数多くの相違が存在する。哺乳動物の
ミルクのオリゴ糖含量の種に特異的な相違は、個々の成分の濃度の相違に、さら
には同等の特徴を有する構造物に、およびまた、それ自体基礎的な構造物に圧倒
的に関係する。単糖の配列、さらには結合は、ヒトミルクのオリゴ糖と比較する
と相違する。加えて、ほとんどの動物のミルクにおけるほとんどの個々の成分の
量は、ヒトの母親のミルクにおけるのに比して有意に少ない。

【０００７】 これらの相違はミルクのオリゴ糖組成に関して新生児の胃腸管の要求によって
左右されると考えられる。これらの要求は異なる種によって非常に強く変わる。
このような要求に左右される相違は、新生児(newborn child)及び生まれたばか
りの動物間のみならず、様々な生まれたばかりの動物間での比較でも異なる。こ
の相違は、新生児の胃腸管の機能的な条件に、免疫系の成熟度合いに、種に依存
する好ましい栄養に、さらにはそれぞれの種の非常に特異的な細菌培地に帰する
ものである。

【０００８】 動物ミルクに基づいてヒトミルクの代わりに人工ミルクまたは乳児用調製粉乳
を使用しようとすると、現在までの知見によると、単一の動物種のミルクは、ヒ
トミルクで見られるような、オリゴ糖に関する不均質な構造上の多様性を持たな
いという問題に直面する。

【０００９】 本発明の目的は、そのポジティブな活性及び特にその抗感染活性が可能な限り
最大限にヒトミルク由来のオリゴ糖と一致する、一または幾つかの動物ミルクか
ら得られるオリゴ糖のオリゴ糖混合物を提供することである。

【００１０】 この課題は、特許請求の範囲の示唆に従ってオリゴ糖混合物によって解決され
る。

【００１１】 驚くべきことに、一のさらには幾つかの動物ミルク由来のオリゴ糖の新規な混
合物によって、動物ミルクのオリゴ糖の抗感染および／または前生物的(prebiot
ic)活性が促進されることが見出された。この理由により、本発明のオリゴ糖混
合物は、それぞれが少なくとも２種の異なるオリゴ糖を含む、少なくとも２種の
オリゴ糖画分から構成される。これにより、オリゴ糖画分は、一の動物ミルク由
来であってもあるいは幾つかの動物ミルク由来であってもよい。それ自体いうま
でもないことではあるが、動物ミルクとしては、ヒトミルクは考えられないとい
う事実を参考する。

【００１２】 それぞれのオリゴ糖画分は、少なくとも２種の異なるオリゴ糖を含む。このよ
うなオリゴ糖は、異なっていると考えられ、これは少なくとも一の特性に関して
相違する。ゆえに、例えば、同じ単糖ユニットから構成されるが異なって結合す
る２種の２糖は、異なるオリゴ糖であると考えられるであろう。ゆえに、この相
違は、構造上のものでありえるが、組成によるものであってもよい。

【００１３】 本発明の必須の態様の一は、増加した生物学的効果が達成されるように、新規
な方法で一の種のまたは様々な種の動物ミルク由来のオリゴ糖画分から構成され
ることにある。当然、新規な組成または混合方法において保証されなければなら
ず、一の動物ミルクに存在するまたは幾つかの動物ミルクに存在する元の混合物
と一致する混合物は存在しない。この理由により、オリゴ糖混合物中に存在する
オリゴ糖の全スペクトルは、これからオリゴ糖画分が得られる、一動物ミルクま
たは複数の動物ミルクのものとは異なるものでなければならない。本発明のオリ
ゴ糖混合物が、例えば、一の動物ミルクのみから得られる場合には、これは全ス
ペクトルに関する後者の特性によって表わされなければならず、当該単一の動物
ミルクから得られるオリゴ糖画分の新規な組成物または混合物は元の動物ミルク
を再度生じるものではない。オリゴ糖混合物が幾つかの動物ミルクから得られる
場合には、新規な構成または混合方法によって、得られたオリゴ糖混合物が元に
使用された動物ミルクのオリゴ糖組成の一と一致するようにはならならい。

【００１４】 本発明のオリゴ糖混合物のオリゴ糖がちょうど一の動物ミルクから得られる場
合には、酸性オリゴ糖に対する中性オリゴ糖の関係は、９０〜６０：１０〜４０
重量％である。換言すると、中性のオリゴ糖画分は、酸性のオリゴ糖画分と共に
存在する。これらの画分は双方とも、少なくとも２種の異なるオリゴ糖を含む。
酸性オリゴ糖に対する中性オリゴ糖の動物ミルク中に元々存在する割合に比べた
場合の中性オリゴ糖画分に対する酸性オリゴ糖画分の割合を修飾することにより
、特有の効率の向上がこれらの生理的作用において達成されうる。

【００１５】 オリゴ糖が異なるものから及びゆえに少なくとも２種の動物ミルクから得られ
る際には、新規な組成または新規な混合は、２種の異なる動物ミルクから得られ
るオリゴ糖がそれぞれオリゴ糖混合物中に全体に存在するオリゴ糖の少なくとも
１０重量％に達するように行なわれなければならない。ゆえに、オリゴ糖が２種
の動物ミルクから得られる場合には、一の動物ミルクから得られるオリゴ糖は少
なくとも１０重量％に達するのに対して、他の動物ミルクから得られるオリゴ糖
も同様に少なくとも１０重量％及び最大９０重量％に達し、この際、逆もまた同
様である。しかしながら、オリゴ糖が３またはそれ以上の動物ミルクから得られ
る場合には、２種の動物ミルクのみのオリゴ糖が少なくとも１０重量％にならな
ければならない。他の動物ミルクからのオリゴ糖は１０重量％未満であってもよ
い。

【００１６】 本発明のオリゴ糖混合物の調製のための源としては、すべての動物ミルクが使
用でき、この際、ウシ、ヤギ、ヒツジ、雌ウマ、ラクダ及びバッファローミルク
の画分が好ましく使用される。

【００１７】 オリゴ糖画分の単離は、既知の分離方法を用いて行なわれる。ゆえに、脂肪の
抽出は、セパレーターを用いた密度遠心によって行なわれてもよい。タンパク質
の分離は、限外瀘過または溶剤（例えば、エタノール、アセトン）による沈殿に
よって行なわれてもよい。ラクトースは、下記方法：結晶化、瀘過プロセス、さ
らにはクロマトグラフィー方法（リガンド交換クロマトグラフィー、ゲル瀘過、
溶出クロマトグラフィー、リサイクリングクロマトグラフィー、及び誘導向流ク
ロマトグラフィー（ＳＭＢ））の一または幾つかによって分解されうる。無機物
質は、電気透析、ナノ瀘過、イオン交換および／または逆浸透によって分離され
る。オリゴ糖の中性または酸性オリゴ糖への分画は、上記クロマトグラフィー方
法および／またはアニオン交換クロマトグラフィーの一、さらには、または、瀘
過方法を用いて行なわれる。

【００１８】 好ましい実施態様によると、そのオリゴ糖が少なくとも２種の動物ミルクから
得られるものである、本発明のオリゴ糖混合物は、この場合もまた、酸性オリゴ
糖に対する中性オリゴ糖の割合が９０〜６０：１０〜４０重量％であるように、
新たに構成される。

【００１９】 割合が本明細書において９０〜６０：１０〜４０重量％と示される際、少なく
ともすべての積分中間値もまた、カバー、開示され、例えば、８９：１１、８８
：１２、８７：１３、８５：１５、８０：２０、７９：２１、７５：２５、７４
：２６、７３：２７、７２：２８、６８：３２、６７：３３、６６：３４、６５
：３５、６４：３６、６３：３７、６２：３８、６１：３９がある。

【００２０】 本発明のオリゴ糖混合物のオリゴ糖は、好ましくは、下記単糖ユニット：Ｄ−
グルコース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−Ｎ−アセチル−グルコサミン、Ｄ−Ｎ−ア
セチル−ガラクトサミン、Ｌ−フコース、Ｄ−マンノース、Ｄ−体のシアル酸（
例えば、Ｄ−Ｎ−アセチルノイラミン酸及びＤ−Ｎ−グリコリルノイラミン酸）
ならびにこれらのＯ−アセチル化、硫酸化及びリン酸化誘導体の一または幾つか
によって構成される。

【００２１】 残りの、大量に動物ミルク中に存在する遊離ラクトースは、本発明に従って使
用されるオリゴ糖画分を構成する動物ミルクから得られるオリゴ糖の中にカウン
トされない。しかしながら、遊離ラクトースは、本発明に従って使用されるオリ
ゴ糖画分とは別に、本発明のオリゴ糖混合物中に存在してもよい。

【００２２】 換言すると、本発明のオリゴ糖混合物は、一のまたは幾つかの動物ミルクから
得られ、２または幾つかの単糖ユニットから構成されるオリゴ糖画分からのみ構
成されてもよく、この際、遊離ラクトースはこれに含まれない(pertain to)。し
かしながら、上述したように、オリゴ糖混合物は、動物ミルク由来であるまたは
由来でないにかかわらず、遊離ラクトースを含んでもよい。さらに、オリゴ糖混
合物は、動物ミルク由来でない一のオリゴ糖または幾つかのオリゴ糖を含んでい
てもよい。ゆえに、本発明のオリゴ糖混合物は、例えば、食品の及び特に乳児用
調製粉乳の調製を目的として使用される一般的な糖と混合されてもよい。加えて
、このようなオリゴ糖はまた本発明のオリゴ糖混合物中に存在してもよく、これ
らは、化学的、酵素的および／または技術的変換によって本発明で使用されるオ
リゴ糖またはオリゴ糖画分を得る際に糖脂質および／または糖タンパク質から放
出される。

【００２３】 本明細書の構成において、オリゴ糖の問題である場合には、このことばは、特
に動物ミルクから得られる上記オリゴ糖を意味する。これとは別に、他のオリゴ
糖が、同様に、上記で説明したように、存在してもよく、これによりこの環境が
記載されるまたは本明細書から生じる。

【００２４】 オリゴ糖の単離のための好ましい源は、タンパク質画分、さらには脂肪が一部
および／または完全に除去された乳製品である。加工及び分画は、クリームを得
ることにより生じるラクトース無機画分、カゼイン画分及び含まれる他の成分な
どの生成物を用いるとかなり簡単にできる。医薬品ラクトースの調製から得られ
る過剰分もまた様々なオリゴ糖の適当な出発源を構成する。画分の実際の単離を
行なう前に、一の動物種のまたは様々な動物種由来のミルクまたはラクトシーラ
ム(lactoserum)を、単一の構造または構造群を有する活性のあるオリゴ糖組成に
必要であるなどのように、オリゴ糖の分画の前に所望の割合で混合してもよい。

【００２５】 本発明のオリゴ糖混合物は、腸内細菌叢における細菌種のインバランス（即ち
、例えば、食物不耐性後の抗生物質または腸内細菌叢に影響を与える他の薬剤の
投与後の、腸内細菌叢の疾患など）またはウィルス感染が役割を果たす胃腸機能
の疾患の場合において非常に濃縮されたまたは純粋な形態で使用されうる。本発
明のオリゴ糖混合物はまた、このような胃腸の感染症に対する予防に使用されて
もよい。これを目的として、本発明のオリゴ糖混合物は、乳児用調製粉乳、食事
療法食または薬剤中に混合されてもよい。

【００２６】 本発明のオリゴ糖混合物はまた、食品完全物(food complete)自体への添加物
を構成するものであってもよい。このような食品としては、例えば、ベビーフー
ドまたは乳児用調製粉乳および完全な臨床栄養の調製物がある。さらに、これは
、正常な胃腸機能を保持する（予防の意味で）ために、さらには胃腸管の悪い細
菌またはウィルスの集落化(colonization)が役割を果たす疾患後の胃腸機能の改
善のために、一般的な食料への添加物として使用されてもよい。

【００２７】 本発明のオリゴ糖混合物は、カプセルまたは粉末として調製されてもよく、ま
た、即席食品の完全物への添加物として希釈形態で存在してもよい。

【００２８】 本発明のオリゴ糖混合物は、好ましくは、１日当たり少なくとも１０ｍｇ／ｋ
ｇ〜４ｇ／ｋｇ体重の量で適用され、これらのミリグラム値は動物ミルクから得
られた本発明のオリゴ糖混合物におけるこれらのオリゴ糖に関するものである。
このため、ラクトース及び動物ミルク由来でないオリゴ糖などの、場合によって
は、存在する他のオリゴ糖は、考慮に入れられていない。特に好ましくは、約１
００ｍｇ／ｋｇが、１日に、体重当たり投与される。

【００２９】 本発明を、好ましい実施態様を記載する実施例によって以下に説明するであろ
う。

【００３０】 実施例１ １００ｌのウシミルクを下記方法に従って加工する。

【００３１】 脂肪の分離を、４５℃の温度で密度遠心によって行なう。得られた脂肪を含ま
ないミルクをエタノール沈殿（最終濃度：６６％エタノール）によって除蛋白す
る。沈殿物をセパレーターで分離する。エタノール及び水の一部を、４０ｌの容
積が得られるように、ダウンフローエバポレーター(downflow evaporator)によ
って蒸発させる。ここに、約４０ｋｇのラクトース、１ｋｇの無機物質及び水溶
性ビタミン、尿素またはクエン酸塩等の他の可溶性成分を含ませる。オリゴ糖の
割合は約１０ｇに達する。オリゴ糖画分の組成は、およそ等しい部分の中性及び
アシル化構造物から構成される。ＡＧ １×２によるアニオン交換クロマトグラ
フィーによって、中性（溶出手段：脱イオン水）及び酸性画分（溶出手段：３０
０ｍＭ酢酸アンモニウム）への分離を行なう。中性画分を、結晶化方法によって
６０％のラクトースに分解する。Toyopearl HW 40(S)によるゲルクロマトグラフ
ィーによって、５ｇの中性オリゴ糖画分が得られ、その残存ラクトース含量は約
１０％である。アシル化オリゴ糖の画分を、電気透析によってアニオン交換溶出
バッファー（酢酸アンモニウム）から遊離し、中性オリゴ糖画分と同様にしてフ
リーズドライする。これにより、４．５ｇのアシル化オリゴ糖画分が得られる。
新たな１ｇの酸性画分を５ｇの中性画分と構成することによって、天然の組成と
一致するものに比べてより高い活性を有する混合物が得られる。

【００３２】 実施例２ チーズの製造から得られるヤギ、ヒツジ及びウシミルクのラクトシーラム(lac
toserum)を、４０００ｌの全ラクトシーラム量が３種の異なる動物種由来で利用
できるように、加工する前に３：１：１の割合で混合する。ポリスルホン膜（カ
ットオフ ２０ｋＤａ）による限外瀘過によって、残存脂肪、溶液中に存在する
グリコマクロペプチド(glycomacropeptide)、及びラクトシーラムタンパク質を
分離する。次に、透過物を９００ｌにまで逆浸透によって濃縮してもよい。上記
したのと同様にさらに加工することによって、ラクトース結晶化をまず行ない、
さらにターゲットによるアニオン交換クロマトグラフィーによってペプチドを分
離する。溶出段階の画分、脱イオン水及び３００ｍＭ酢酸アンモニウムを合わせ
、濃縮し、電気透析し、フリーズドライする。３種の異なる種のオリゴ糖混合物
が、５７０ｇの量で得られる。ゲル瀘過及び電気透析による脱塩を用いたさらな
る分離によって、ターゲット生成物がフリーズドライによって得られる。ゲル瀘
過、ＨＰＡＥＣ及びＭＡＬＤＩ−ＭＳによる分析によって、使用されたミルクに
及び混合比によって、中性に対する酸性オリゴ糖の割合は１：５であることが示
される。ガラクトシルラクトースの部分は、ヤギのラクトシーラムの高い割合に
より、１２０ｇであると示される。ヒツジのミルクでは、Ｎ−グリコリルノイラ
ミン酸が、酸性オリゴ糖の重要な成分としてＮ−アセチルノイラミン酸に比して
勝っている。したがって、グリコリルノイラミニルオリゴ糖(glycolyl neuramin
yl oligosaccharide)の割合がヤギまたはウシミルクに比べて増加する。

【００３３】 実施例３ 雌ウマ及びヤギのミルクを平行して加工する。それぞれの場合において、５０
ｌのミルクを使用する。遠心、エタノールによるタンパク質沈殿及び分離による
炭水化物−無機物質画分を、それぞれの場合で得る。ロータリーエバポレーター
を使用することによって、溶液をそれぞれ８ｌに強化する(fortify)。ＡＧ ５
０１×８（Ｃａ²⁺形態）によるリガンド交換クロマトグラフィー及び脱イオン水
による溶出によって、一方では、ラクトース及び単糖のクロマトグラフィーによ
る分離、ならびに他方では、オリゴ糖のサブ分画を良好に行なう。排除容積及び
４糖の溶出範囲の間で、雌ウマ由来の画分を集めて、これをオリゴ糖の後の(ult
erior)新規な組成に使用するであろう。同相におけるヤギミルク由来の炭水化物
−無機物質画分の分離によって、ラクトースが分解されかつ単糖が分解された全
オリゴ糖画分が得られる。それぞれの画分の脱塩及びナノ瀘過による同時の強化
後、フリーズドライを行なう。２種の画分を２：５（雌ウマオリゴ糖画分：ヤギ
オリゴ糖画分）の混合比で混合する。

【００３４】 実施例４ ヤギミルクを実施例１に記載されるのと同様にして加工する。ＡＧ １×２に
よるアニオン交換クロマトグラフィーによって、酸性画分を得、これの主成分は
２，３’−及び２，６’−シアリルラクトース及び２，３’−及び２，６’−Ｎ
−グリコリルノイラミニルラクトースである。得られた画分が２，３’−及び２
，６’−グリコリルノイラミニルから構成されるように、この画分をさらに逆相
材料によるクロマトグラフィーによって分離する。これを、電気透析によって脱
塩し、噴霧乾燥し、後の混合に使用するために用意する。

【００３５】 ゲル瀘過によって、ウシラクトシーラムから６種の中性３糖：３種の異性ガラ
クトシルラクトース、１種のフコシル化ラクトサミン及びそれぞれ、Ｎ−アセチ
ルガラクトサミン及びＮ−アセチルグルコサミンによって拡張される２種のラク
トースユニットの画分の単離を良好に行なう。

【００３６】 その優勢な構造が２，３−異性体を構成する、酸性のヤギミルク画分を、乾燥
状態のウシラクトシーラム由来の３糖の中性画分と１：７の比で混合し、給餌試
験を目的として用意する。

【００３７】 実施例５ 構造物、ラクト−Ｎ−ネオ−テトラオース(lacto-N-neo-teraose)及びラクト
−Ｎ−ネオ−ヘキサオース(lacto-N-neo-hexaose)を、上記方法を用いて雌ウマ
から単離する。これらのオリゴ糖はヒトミルク中でも存在する。

【００３８】 ジシアリルラクトースを、上記方法を用いてウシミルクからクロマトグラフィ
ーによって単離し、フリーズドライする。

【００３９】 ヤギミルク由来のフコシル化４糖の２位置の異性体を既知の確立された方法を
用いて単離する。

【００４０】 これらのオリゴ糖を、２：１：２（雌ウマミルクＯＳ：ウシミルクＯＳ：ヤギ
ミルクＯＳ）の混合比で混合する。

【００４１】 実施例６ 中性オリゴ糖の画分がヤギのラクトシーラムから単離でき、その組成は前記し
たテトラオースおよび、さらに単糖組成が今日まで不明であるペンタオース及び
ヘキサオース（２種のヘキソサミン及び４種のヘキソースまたは２種のヘキソサ
ミン及び４種のヘキソースならびに３種のヘキソサミン及び３種のヘキソース）
から構成される。

【００４２】 同様の加工によって酸性画分が得られ、これを、２種の異なるシアリルラクト
ース及び２種の異なるグリコリルノイラミニルラクトースから構成される組成を
有する混合物が得られるように、アニオン交換クロマトグラフィーによって分画
する。より長い鎖長を有する酸性オリゴ糖、さらには中性ガラクトシルラクトー
スは、新規なオリゴ糖混合物の新たな組成に使用されない。この単離された酸性
及び中性画分を２：１の比で混合する。

【００４３】 実施例７ チーズの製造で得られるラクトシーラムは、一般的に、遊離オリゴ糖とは別に
、Ｎ−及びＯ−グリカンの形態の数多くの結合オリゴ糖をも含む。ゆえに、グリ
コマクロペプチドはＯ−グリコシル化され、ラクトフェリンはＮ−グリコシル化
される。相当するグリカン構造物は、かなりアシル化される。中性に対する酸性
グリカンまたはオリゴ糖の元の割合は、約１：１と示される。中性オリゴ糖の方
に割合がシフトするように、アニオン交換クロマトグラフィーを行なう。すべて
のアセチル化及び結合酸性オリゴ糖（画分２）はゲルマトリックスに結合し、中
性オリゴ糖（画分１）は脱イオン水で溶出される。すべての荷電成分は、高いイ
オン強度で溶出され（例えば、１Ｍ ＮａＣｌ）、さらに加工される。ｐＨ ２
．０及び４５℃で数時間、弱い加水分解条件することによって、シアル酸の分離
が達成される。ＮａＯＨ溶液で中和後、当該画分２を中性オリゴ糖（画分１）と
合わせる。次に、酸性に対する中性オリゴ糖の割合を、中性オリゴ糖の方にシフ
トさせる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＡＬ，Ａ Ｕ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＨＵ，ＩＮ，ＪＰ，ＬＴ ，ＬＶ，ＭＫ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＳＧ， ＳＩ，ＳＫ，ＴＲ，ＵＳ，ＺＡ (72)発明者 フィンケ，ベルント ドイツ，オーベル−メルレン 61239，ア ダム−ゲック−ストラーセ 32 (72)発明者 ゲオルギ，ギルダ ドイツ，フリードリッヒスドルフ 61381， プランテーション エヌアール． 24 (72)発明者 ジェリネック，ジュルゲン ドイツ，ロスバッハ 61191，アム ロス バッハ 30アー (72)発明者 シュミット，ジョアチム，ジェー． ドイツ，ヘスバッハ 63768，アシャフス トラーセ 10 Ｆターム(参考） 4B018 MD31 MD71 ME11 MF02 4C057 AA05 BB01 BB04 4C086 AA01 AA02 AA03 EA01 MA01 MA04 ZA66 ZA73

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 オリゴ糖混合物が遊離ラクトースがこれに属しない少なくと
   も２種の異なるオリゴ糖によって構成される少なくとも２種のオリゴ糖画分を含
   み、 オリゴ糖混合物中に存在するオリゴ糖の全スペクトルがこれからオリゴ糖画分が
   得られる一動物ミルクまたは複数の動物ミルクのものとは異なり、さらに ａ）オリゴ糖が一の動物ミルクのみから得られる際には、酸性オリゴ糖に対する
   中性オリゴ糖の割合が９０〜６０：１０〜４０重量％である、または ｂ）オリゴ糖が少なくとも２種の動物ミルクから得られる際には、２種の異なる
   動物ミルクから得られるオリゴ糖がそれぞれオリゴ糖混合物中に存在するオリゴ
   糖の全量の少なくとも１０重量％に達することを特徴とする、 一または幾つかの動物ミルクから得られ、２またはそれ以上の単糖ユニットから
   構成されるオリゴ糖を基礎とするオリゴ糖混合物。
2. 【請求項２】 オリゴ糖が少なくとも２種の動物ミルクから得られる際には
   、酸性オリゴ糖に対する中性オリゴ糖の割合が９０〜６０：１０〜４０重量％で
   あることを特徴とする、請求項１に記載のオリゴ糖混合物。
3. 【請求項３】 オリゴ糖は、下記単糖ユニット：Ｄ−グルコース、Ｄ−ガラ
   クトース、Ｄ−Ｎ−アセチル−グルコサミン、Ｄ−Ｎ−アセチル−ガラクトサミ
   ン、Ｌ−フコース、Ｄ−マンノース、Ｄ−体のシアル酸（Ｄ−Ｎ−アセチルノイ
   ラミン酸及びＤ−Ｎ−グリコリルノイラミン酸）ならびにこれらのＯ−アセチル
   化、硫酸化及びリン酸化誘導体の一または幾つかによって構成されることを特徴
   とする、請求項１または２に記載のオリゴ糖混合物。
4. 【請求項４】 オリゴ糖は、下記動物ミルク：ウシ、ヤギ、ヒツジ、雌ウマ
   、ラクダ及びバッファローミルクの一または幾つかから得られることを特徴とす
   る、請求項１〜３のいずれか１項に記載のオリゴ糖混合物。
5. 【請求項５】 オリゴ糖は、貯留されない若しくは貯留されたミルク若しく
   はラクトシーラムからまたは一若しくは幾つかの動物種の貯留されない若しくは
   貯留されたミルク製品から得られることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか
   １項に記載のオリゴ糖混合物。
6. 【請求項６】 オリゴ糖またはオリゴ糖画分とは別に、これからオリゴ糖が
   得られる一動物ミルクまたは複数の動物ミルク由来でありえる、ラクトースがま
   た存在し、一動物ミルク由来でない一のまたは幾つかのオリゴ糖が存在するおよ
   び／または糖タンパク質および／または糖脂質から放出されるオリゴ糖の化学的
   、酵素的および／または技術的反応によってオリゴ糖を得る際に存在することを
   特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載のオリゴ糖混合物。
7. 【請求項７】 オリゴ糖混合物は乳児用調製粉乳、食事療法食若しくは薬剤
   中に含まれるまたは栄養完全物自体への添加物を構成することを特徴とする、請
   求項１〜６のいずれか１項に記載のオリゴ糖混合物。
8. 【請求項８】 胃腸管の細菌若しくはウィルス集落化によって引き起こされ
   る胃腸管機能の疾患を解消することを目的とする、または正常な胃腸機能を維持
   することを目的とする請求項１〜５のいずれか１項に記載のオリゴ糖混合物の使
   用。
9. 【請求項９】 オリゴ糖混合物が１日当たり１０ｍｇ／ｋｇ〜４ｇ／ｋｇ体
   重の量で適用される、請求項８に記載の使用。