JPH05238947A - 細菌毒素中和剤 - Google Patents
細菌毒素中和剤Info
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- JPH05238947A JPH05238947A JP4075778A JP7577892A JPH05238947A JP H05238947 A JPH05238947 A JP H05238947A JP 4075778 A JP4075778 A JP 4075778A JP 7577892 A JP7577892 A JP 7577892A JP H05238947 A JPH05238947 A JP H05238947A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 β−ラクトグロブリン、α−ラクトアルブミ
ン、牛血清アルブミンもしくは乳カゼインを乳糖と共に
加熱することにより得られる糖タンパク質系反応生成物
を有効成分とする細菌毒素中和剤。 【効果】 長期間服用もしくは飲食物と共に摂取しても
副作用のおそれが無く、細菌毒素による中毒症の予防と
治療に有効である。
ン、牛血清アルブミンもしくは乳カゼインを乳糖と共に
加熱することにより得られる糖タンパク質系反応生成物
を有効成分とする細菌毒素中和剤。 【効果】 長期間服用もしくは飲食物と共に摂取しても
副作用のおそれが無く、細菌毒素による中毒症の予防と
治療に有効である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、病原性大腸菌毒素など
細菌性のエンテロトキシンによる中毒症状の予防・治療
に有効な細菌毒素中和剤に関するものである。
細菌性のエンテロトキシンによる中毒症状の予防・治療
に有効な細菌毒素中和剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】病原性大腸菌毒素、コレラ毒素等の細菌
性エンテロトキシンが下痢等の中毒症をひき起こすメカ
ニズムとしては、最初に、毒素が腸上皮細胞膜上に存在
するレセプターと結合することが必要であると考えられ
ている。そこで、中毒症を起こす細菌の感染が予想され
る場合にあらかじめレセプターそのもの、もしくはレセ
プターと類似の構造を有する物質を経口投与しておき、
それを毒素と結合させることによって、毒素が腸管レセ
プターに結合するのを阻止し中毒症の発症を予防する方
法が考えられた。
性エンテロトキシンが下痢等の中毒症をひき起こすメカ
ニズムとしては、最初に、毒素が腸上皮細胞膜上に存在
するレセプターと結合することが必要であると考えられ
ている。そこで、中毒症を起こす細菌の感染が予想され
る場合にあらかじめレセプターそのもの、もしくはレセ
プターと類似の構造を有する物質を経口投与しておき、
それを毒素と結合させることによって、毒素が腸管レセ
プターに結合するのを阻止し中毒症の発症を予防する方
法が考えられた。
【０００３】このような観点から、例えば、コレラ毒素
のレセプターであるＧＭ１ガングリオシドをチャコール
に結合させ、これをコレラ中毒患者に投与して毒素を吸
着しようとする試みがなされた（ストールら；ランセッ
トII．p.888-891(1980)）。本発明者らも、細菌毒素中和
作用がありしかも安全性の点でも問題のない物質の探索
を広範囲に行い、その結果、獣乳の脂肪球皮膜の熱処理
物がガングリオシドをレセプターとする毒素に対して優
れた中和活性を有することを確認し、この化合物を有効
成分とする細菌毒素中和剤の発明につきすでに特許出願
した（特開昭６０−７２８９１号）。
のレセプターであるＧＭ１ガングリオシドをチャコール
に結合させ、これをコレラ中毒患者に投与して毒素を吸
着しようとする試みがなされた（ストールら；ランセッ
トII．p.888-891(1980)）。本発明者らも、細菌毒素中和
作用がありしかも安全性の点でも問題のない物質の探索
を広範囲に行い、その結果、獣乳の脂肪球皮膜の熱処理
物がガングリオシドをレセプターとする毒素に対して優
れた中和活性を有することを確認し、この化合物を有効
成分とする細菌毒素中和剤の発明につきすでに特許出願
した（特開昭６０−７２８９１号）。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、腸上皮
細胞膜上の細菌毒素レセプターは単純ではなく、このた
め、糖脂質系化合物を投与するだけでは中毒症状を抑制
できない場合もあることが報告されている。そこで本発
明は、糖脂質系化合物からなるレセプターの投与では効
果がない細菌毒素にも有効な、新規な細菌毒素中和剤を
提供しようとするものである。
細胞膜上の細菌毒素レセプターは単純ではなく、このた
め、糖脂質系化合物を投与するだけでは中毒症状を抑制
できない場合もあることが報告されている。そこで本発
明は、糖脂質系化合物からなるレセプターの投与では効
果がない細菌毒素にも有効な、新規な細菌毒素中和剤を
提供しようとするものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前述のよ
うに獣乳の脂肪球皮膜からレセプターとなり得る物質を
見いだした経験に基づき、獣乳由来の物質についてさら
に探索を進めた。その結果、獣乳やその乳清を加熱した
とき生じるプロテオース・ペプトンに優れた細菌毒素中
和作用があることを見いだした。また、プロテオース・
ペプトン中の有効成分についても研究を進め、それが幾
つかの糖タンパク質であることを確認した。
うに獣乳の脂肪球皮膜からレセプターとなり得る物質を
見いだした経験に基づき、獣乳由来の物質についてさら
に探索を進めた。その結果、獣乳やその乳清を加熱した
とき生じるプロテオース・ペプトンに優れた細菌毒素中
和作用があることを見いだした。また、プロテオース・
ペプトン中の有効成分についても研究を進め、それが幾
つかの糖タンパク質であることを確認した。
【０００６】本発明は、上記知見に基づき、 プロテオース・ペプトンを有効成分として含有する
ことを特徴とする細菌毒素中和剤；および β−ラクトグロブリンと乳糖との結合物、α−ラク
トアルブミンと乳糖との結合物、牛血清アルブミンと乳
糖との結合物、および乳カゼインと乳糖との結合物から
なる群から選ばれた１種または２種以上の糖タンパク質
を有効成分として含有することを特徴とする細菌毒素中
和剤；を提供するものである。
ことを特徴とする細菌毒素中和剤；および β−ラクトグロブリンと乳糖との結合物、α−ラク
トアルブミンと乳糖との結合物、牛血清アルブミンと乳
糖との結合物、および乳カゼインと乳糖との結合物から
なる群から選ばれた１種または２種以上の糖タンパク質
を有効成分として含有することを特徴とする細菌毒素中
和剤；を提供するものである。
【０００７】
【作用】以下、本発明による細菌毒素中和剤について詳
細に説明する。本発明による細菌毒素中和剤の有効成分
の一つであるプロテオース・ペプトンは、牛乳等の獣乳
を約９０〜１００℃で約２０〜３０分間加熱処理し、そ
の後、pＨを４.６前後に調整して遠心分離したとき得ら
れる上清部分に存在する。プロテオース・ペプトンは、
獣乳のほかにも、獣乳を遠心分離処理してクリームを分
離した後のスキムミルク、獣乳を原料とするチーズ製造
や酸カゼイン製造時の副産物であるホエー等を原料とし
ても、同様の熱処理によって生成させることができる。
細に説明する。本発明による細菌毒素中和剤の有効成分
の一つであるプロテオース・ペプトンは、牛乳等の獣乳
を約９０〜１００℃で約２０〜３０分間加熱処理し、そ
の後、pＨを４.６前後に調整して遠心分離したとき得ら
れる上清部分に存在する。プロテオース・ペプトンは、
獣乳のほかにも、獣乳を遠心分離処理してクリームを分
離した後のスキムミルク、獣乳を原料とするチーズ製造
や酸カゼイン製造時の副産物であるホエー等を原料とし
ても、同様の熱処理によって生成させることができる。
【０００８】これらプロテオース・ペプトンを含有する
上清を水に対して透析し、低分子量成分を除去すると、
プロテオース・ペプトン画分を得ることができる。プロ
テオース・ペプトン画分は、後述する毒素性大腸菌易熱
性毒素（ＬＴ）を用いる毒素結合活性検索試験により、
細菌毒素結合活性を有することが確認された。プロテオ
ース・ペプトン画分は、細菌毒素結合活性とは無関係の
成分も含んでいるが、その活性を利用するのに不都合な
物質は含んでいないので、そのまま細菌毒素中和剤とし
て用いることができる。
上清を水に対して透析し、低分子量成分を除去すると、
プロテオース・ペプトン画分を得ることができる。プロ
テオース・ペプトン画分は、後述する毒素性大腸菌易熱
性毒素（ＬＴ）を用いる毒素結合活性検索試験により、
細菌毒素結合活性を有することが確認された。プロテオ
ース・ペプトン画分は、細菌毒素結合活性とは無関係の
成分も含んでいるが、その活性を利用するのに不都合な
物質は含んでいないので、そのまま細菌毒素中和剤とし
て用いることができる。
【０００９】また、プロテオース・ペプトン画分中の有
効成分を確認するため、プロテオース・ペプトン画分を
さらに硫酸アンモニウム塩析およびゲル濾過処理等によ
り精製した。その結果、活性成分として、ＳＤＳ−ポリ
アクリルアミドゲル電気泳動で分子量が約１万６０００
の、α−ラクトアルブミン由来の糖タンパク質、およ
び、分子量約２万の、β−ラクトグロブリン由来の糖タ
ンパク質を得た。
効成分を確認するため、プロテオース・ペプトン画分を
さらに硫酸アンモニウム塩析およびゲル濾過処理等によ
り精製した。その結果、活性成分として、ＳＤＳ−ポリ
アクリルアミドゲル電気泳動で分子量が約１万６０００
の、α−ラクトアルブミン由来の糖タンパク質、およ
び、分子量約２万の、β−ラクトグロブリン由来の糖タ
ンパク質を得た。
【００１０】これらの糖タンパク質は、過ヨウ素酸処理
またはβ−ガラクトシダーゼ処理によって毒素との結合
活性が失われることなどから、末端がガラクトース残基
である糖鎖を持つと推察された。その他種々の試験およ
び分析を行なった結果から、これらはα−ラクトアルブ
ミンまたはβ−ラクトグロブリンと乳糖から形成された
アミノカルボニル反応化合物であると推定された。この
ことは、α−ラクトアルブミンまたはβ−ラクトグロブ
リンを乳糖と加熱下に反応させることにより生成させた
標品との比較で確認された。そして、さらに研究を進め
た結果、牛血清アルブミンや乳カゼインを乳糖と共に加
熱することによっても、同様の細菌毒素結合活性を有す
る物質が得られることが確認された。
またはβ−ガラクトシダーゼ処理によって毒素との結合
活性が失われることなどから、末端がガラクトース残基
である糖鎖を持つと推察された。その他種々の試験およ
び分析を行なった結果から、これらはα−ラクトアルブ
ミンまたはβ−ラクトグロブリンと乳糖から形成された
アミノカルボニル反応化合物であると推定された。この
ことは、α−ラクトアルブミンまたはβ−ラクトグロブ
リンを乳糖と加熱下に反応させることにより生成させた
標品との比較で確認された。そして、さらに研究を進め
た結果、牛血清アルブミンや乳カゼインを乳糖と共に加
熱することによっても、同様の細菌毒素結合活性を有す
る物質が得られることが確認された。
【００１１】本発明の細菌毒素中和剤は、上述のような
プロテオース・ペプトン画分、またはβ−ラクトグロブ
リンと乳糖との結合物、α−ラクトアルブミンと乳糖と
の結合物、牛血清アルブミンと乳糖との結合物、および
乳カゼインと乳糖との結合物からなる群から選ばれた１
種または２種以上の糖タンパク質を、経口投与に適した
任意の形態の製剤とすることにより製造することができ
る。上記糖タンパク質は、プロテオース・ペプトン画分
を分画することにより製造してもよく、また、相当する
タンパク質を乳糖と共に約７０〜９５℃で３０分〜数時
間加熱して反応させることにより製造したものであって
もよい。製剤中には、必要に応じてほかに安定剤、賦形
剤、増量剤等を適宜含有させることができる。
プロテオース・ペプトン画分、またはβ−ラクトグロブ
リンと乳糖との結合物、α−ラクトアルブミンと乳糖と
の結合物、牛血清アルブミンと乳糖との結合物、および
乳カゼインと乳糖との結合物からなる群から選ばれた１
種または２種以上の糖タンパク質を、経口投与に適した
任意の形態の製剤とすることにより製造することができ
る。上記糖タンパク質は、プロテオース・ペプトン画分
を分画することにより製造してもよく、また、相当する
タンパク質を乳糖と共に約７０〜９５℃で３０分〜数時
間加熱して反応させることにより製造したものであって
もよい。製剤中には、必要に応じてほかに安定剤、賦形
剤、増量剤等を適宜含有させることができる。
【００１２】本発明の細菌毒素中和剤は、食品である獣
乳、特に牛乳を原料として、基本的には熱処理を施すだ
けで製造可能であり、非常に安全性に優れたものである
から、長期間服用しても副作用の恐れは無い。したがっ
て、細菌毒素による汚染の可能性のある食品、飲料等に
添加しておくことにより飲食と同時に摂取されるように
してもよい。
乳、特に牛乳を原料として、基本的には熱処理を施すだ
けで製造可能であり、非常に安全性に優れたものである
から、長期間服用しても副作用の恐れは無い。したがっ
て、細菌毒素による汚染の可能性のある食品、飲料等に
添加しておくことにより飲食と同時に摂取されるように
してもよい。
【００１３】本発明の細菌毒素中和剤の服用量は、有効
成分が副作用のない物質であるので特に上限はないが、
成人１日１人あたり１０mg以上、好ましくは５０mg以上
である。また、食品に添加する場合は、食品重量に対し
０.１重量％以上、好ましくは０.５重量％以上とする。
成分が副作用のない物質であるので特に上限はないが、
成人１日１人あたり１０mg以上、好ましくは５０mg以上
である。また、食品に添加する場合は、食品重量に対し
０.１重量％以上、好ましくは０.５重量％以上とする。
【００１４】
【実施例】以下、実施例によって、さらに詳細に本発明
を説明する。なお、プロテオース・ペプトン画分等の分
画過程においては下記の方法で毒素結合活性を調べた。
を説明する。なお、プロテオース・ペプトン画分等の分
画過程においては下記の方法で毒素結合活性を調べた。
【００１５】毒素結合活性の検索 毒素結合活性の検索は、細菌毒素とレセプターの直接結
合を視覚化できる方法として、酵素抗体染色法（高見沢
ら；フエブスレター，２０１，２２９（１９８６）参
照）を応用して行なった。対象とする細菌毒素としては
ＬＴを用いた。まず、試験検体となる各種糖タンパク質
成分をラエムリらの方法（ネイチャー，２２７，６８０
８（１９７０））でＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電
気泳動に付し、次にミニトランスブロット装置（ＢＩＯ
−ＲＡＤ社）を用いてブロッティング（１９２mMグリシ
ン, ２０％メタノールを含む２５mMトリス緩衝液で４０
Ｖ，２０時間）を行い、タンパク質をポリフッ化ビニリ
デン膜（MILLIPORE社）に転写させた。
合を視覚化できる方法として、酵素抗体染色法（高見沢
ら；フエブスレター，２０１，２２９（１９８６）参
照）を応用して行なった。対象とする細菌毒素としては
ＬＴを用いた。まず、試験検体となる各種糖タンパク質
成分をラエムリらの方法（ネイチャー，２２７，６８０
８（１９７０））でＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電
気泳動に付し、次にミニトランスブロット装置（ＢＩＯ
−ＲＡＤ社）を用いてブロッティング（１９２mMグリシ
ン, ２０％メタノールを含む２５mMトリス緩衝液で４０
Ｖ，２０時間）を行い、タンパク質をポリフッ化ビニリ
デン膜（MILLIPORE社）に転写させた。
【００１６】転写後、ポリフッ化ビニリデン膜を１５０
mM塩化ナトリウムを含む２０mMトリス塩酸緩衝液（pＨ
７.４，緩衝液Ａ）で洗浄後、１.５％ウシ血清アルブミ
ンと１５０mM塩化ナトリウムを含む２０mMトリス塩酸緩
衝液（pＨ７.４、緩衝液Ｂ）で４５分間ブロッキングを
行なった。次いで、１０mlの緩衝液Ａに溶解した３μｇ
のヒト型ＬＴを加え、３７℃で１時間反応させた後、緩
衝液Ａで洗浄し、さらに緩衝液Ｂで１５分間ブロッキン
グを行なった。その後、緩衝液Ｂで２００倍に希釈した
抗ＬＴ抗体を加え、３７℃で１時間反応させた後、０.
０５％tween２０を含む緩衝液Ａで洗浄し、緩衝液Ｂで
２５０倍に希釈したペルオキシダーゼ標識抗ウサギＩg
Ｇ抗体を加え、３７℃で１時間反応させた。さらに、
０.０５％tween２０を含む緩衝液Ａで洗浄後、ポリフッ
化ビニリデン膜上で酵素反応を行った。
mM塩化ナトリウムを含む２０mMトリス塩酸緩衝液（pＨ
７.４，緩衝液Ａ）で洗浄後、１.５％ウシ血清アルブミ
ンと１５０mM塩化ナトリウムを含む２０mMトリス塩酸緩
衝液（pＨ７.４、緩衝液Ｂ）で４５分間ブロッキングを
行なった。次いで、１０mlの緩衝液Ａに溶解した３μｇ
のヒト型ＬＴを加え、３７℃で１時間反応させた後、緩
衝液Ａで洗浄し、さらに緩衝液Ｂで１５分間ブロッキン
グを行なった。その後、緩衝液Ｂで２００倍に希釈した
抗ＬＴ抗体を加え、３７℃で１時間反応させた後、０.
０５％tween２０を含む緩衝液Ａで洗浄し、緩衝液Ｂで
２５０倍に希釈したペルオキシダーゼ標識抗ウサギＩg
Ｇ抗体を加え、３７℃で１時間反応させた。さらに、
０.０５％tween２０を含む緩衝液Ａで洗浄後、ポリフッ
化ビニリデン膜上で酵素反応を行った。
【００１７】反応基質としては４-クロロ-１-ナフトー
ル／過酸化水素溶液（４-クロロ-１-ナフトール１５mg
をメタノール５mlに溶解し、緩衝液Ａ２５mlで希釈し、
３１％過酸化水素水１０μlを加えたもの）を用い、室
温で反応させて発色させた。プロテオース・ペプトン画
分、およびα−ラクトアルブミン、β−ラクトグロブリ
ン、乳カゼイン、牛血清アルブミン等のタンパク質と乳
糖との結合物は、いずれも上記試験において毒素ＬＴと
強く結合することを示した。
ル／過酸化水素溶液（４-クロロ-１-ナフトール１５mg
をメタノール５mlに溶解し、緩衝液Ａ２５mlで希釈し、
３１％過酸化水素水１０μlを加えたもの）を用い、室
温で反応させて発色させた。プロテオース・ペプトン画
分、およびα−ラクトアルブミン、β−ラクトグロブリ
ン、乳カゼイン、牛血清アルブミン等のタンパク質と乳
糖との結合物は、いずれも上記試験において毒素ＬＴと
強く結合することを示した。
【００１８】１．プロテオース・ペプトン画分の製造 生牛乳１０００mlを３０００rpmで１５分間遠心分離し
て得られるスキムミルクを９５〜１００℃に３０分間加
熱した後、２５〜３０℃まで冷却した。次いで攪拌しな
がら６Ｎ塩酸を徐々に滴下し、pＨを４.６に調整した。
さらに３０００rpmで１５分間遠心分離して、プロテオ
ース・ペプトン画分を上清部分に得た。この上清部分を
分画分子量５０００の限外濾過膜で濾過して低分子成分
を除去したのち凍結乾燥すると、プロテオース・ペプト
ン画分乾燥粉末１.５ｇが得られた。
て得られるスキムミルクを９５〜１００℃に３０分間加
熱した後、２５〜３０℃まで冷却した。次いで攪拌しな
がら６Ｎ塩酸を徐々に滴下し、pＨを４.６に調整した。
さらに３０００rpmで１５分間遠心分離して、プロテオ
ース・ペプトン画分を上清部分に得た。この上清部分を
分画分子量５０００の限外濾過膜で濾過して低分子成分
を除去したのち凍結乾燥すると、プロテオース・ペプト
ン画分乾燥粉末１.５ｇが得られた。
【００１９】２．プロテオース・ペプトン画分の分画 前項と同様にしてスキムミルクから得られたプロテオー
ス・ペプトン含有上清を、硫安分画、ゲル濾過等により
精製・分画した。すなわち、プロテオース・ペプトン含
有上清に硫酸アンモニウムを加え、５５％飽和とし、室
温で２時間攪拌した。次いで遠心分離（３５００rpm，
２０分）を行い、得られた上清に硫酸アンモニウムを加
えて９０％飽和とし、生成した沈澱物を集めて透析後、
凍結乾燥した。
ス・ペプトン含有上清を、硫安分画、ゲル濾過等により
精製・分画した。すなわち、プロテオース・ペプトン含
有上清に硫酸アンモニウムを加え、５５％飽和とし、室
温で２時間攪拌した。次いで遠心分離（３５００rpm，
２０分）を行い、得られた上清に硫酸アンモニウムを加
えて９０％飽和とし、生成した沈澱物を集めて透析後、
凍結乾燥した。
【００２０】上記精製により得られた画分４４０mgを、
０.１５Ｍ塩化ナトリウムを含む１５mMリン酸緩衝液１
０mlに溶解後、トヨパールＨＷ−５５でゲル濾過を行い
（カラム：２.５mm×９０mm，流速０.２５ml/分）、Ｌ
Ｔと結合するフラクションを回収した。このＬＴと結合
するフラクションをさらに逆相カラム（μBondasphere
C18，３.９mm×１５０mm，Waters社）およびゲル濾過カ
ラム（TSK G2000SWXL.，７.８mm×３００mm，TOSHO社）
を用いた高速液体クロマトグラフィーで分画し、２種類
の糖タンパク質成分を単離した。
０.１５Ｍ塩化ナトリウムを含む１５mMリン酸緩衝液１
０mlに溶解後、トヨパールＨＷ−５５でゲル濾過を行い
（カラム：２.５mm×９０mm，流速０.２５ml/分）、Ｌ
Ｔと結合するフラクションを回収した。このＬＴと結合
するフラクションをさらに逆相カラム（μBondasphere
C18，３.９mm×１５０mm，Waters社）およびゲル濾過カ
ラム（TSK G2000SWXL.，７.８mm×３００mm，TOSHO社）
を用いた高速液体クロマトグラフィーで分画し、２種類
の糖タンパク質成分を単離した。
【００２１】両成分は分子量（ＳＤＳ−ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動による）がそれぞれ約１６０００と約
２００００であり、α−ラクトアルブミンおよびβ−ラ
クトグロブリン由来のものであった。両成分は、β−ガ
ラクトシダーゼ処理または過ヨウ素酸処理により毒素中
和活性を失なった。このことから、これらは末端にガラ
クトース残基を有することがわかった。
ミドゲル電気泳動による）がそれぞれ約１６０００と約
２００００であり、α−ラクトアルブミンおよびβ−ラ
クトグロブリン由来のものであった。両成分は、β−ガ
ラクトシダーゼ処理または過ヨウ素酸処理により毒素中
和活性を失なった。このことから、これらは末端にガラ
クトース残基を有することがわかった。
【００２２】３．α−ラクトアルブミンおよびβ−ラク
トグロブリンと乳糖からの糖タンパク質の製造 前項の毒素中和物質の構造を確認するため、α−ラクト
アルブミンと乳糖およびβ−ラクトグロブリンと乳糖を
それぞれ加熱下に反応させて得られた反応生成物との比
較を行なった。
トグロブリンと乳糖からの糖タンパク質の製造 前項の毒素中和物質の構造を確認するため、α−ラクト
アルブミンと乳糖およびβ−ラクトグロブリンと乳糖を
それぞれ加熱下に反応させて得られた反応生成物との比
較を行なった。
【００２３】すなわち、pＨ６.５の５０mMリン酸緩衝液
中に乳糖１０％とα−ラクトアルブミンまたはβ−ラク
トグロブリン１％を溶解し、６０℃で２０時間反応させ
た。次いで反応液を水に対して透析したのち凍結乾燥
し、各タンパク質と乳糖との結合物を得た。得られた反
応生成物は、前記プロテオース・ペプトン画分から単離
された２成分と電気泳動で同定された。
中に乳糖１０％とα−ラクトアルブミンまたはβ−ラク
トグロブリン１％を溶解し、６０℃で２０時間反応させ
た。次いで反応液を水に対して透析したのち凍結乾燥
し、各タンパク質と乳糖との結合物を得た。得られた反
応生成物は、前記プロテオース・ペプトン画分から単離
された２成分と電気泳動で同定された。
【００２４】４．乳カゼインおよび牛血清アルブミンの
乳糖結合体の製造 乳中の主要タンパク質である乳カゼインおよび牛血清ア
ルブミンについて、α−ラクトアルブミンと乳糖を反応
させた場合と同様の方法で乳糖と反応させ、乳糖結合体
を製造する実験を行なった。上記により得られたプロテ
オース・ペプトン画分および糖タンパク質について、後
記方法で毒素中和活性を調べた結果を表１に示す。各試
料の添加により細胞の形態変化は顕著に抑制され、毒素
が中和されたことがわかる。
乳糖結合体の製造 乳中の主要タンパク質である乳カゼインおよび牛血清ア
ルブミンについて、α−ラクトアルブミンと乳糖を反応
させた場合と同様の方法で乳糖と反応させ、乳糖結合体
を製造する実験を行なった。上記により得られたプロテ
オース・ペプトン画分および糖タンパク質について、後
記方法で毒素中和活性を調べた結果を表１に示す。各試
料の添加により細胞の形態変化は顕著に抑制され、毒素
が中和されたことがわかる。
【００２５】
【表１】
【００２６】毒素中和活性の試験 チャイニーズハムスターの卵巣細胞（ＣＨＯ−Ｋ１細
胞）の形態変化に基づく方法によった。すなわち、ヒト
由来のＬＴ（濃度２０ng／ml，０.２５ml）に試料（ハ
ムＦ−１２培地に溶解したもの）０.２５mlを加え、３
７℃で２時間放置した後、ＣＨＯ-Ｋ１細胞（あらかじ
めNunc社製チャンバースライド〔Lab-Tek，８チャンバ
ー〕にウエル当り７×１０3/mlになるようにＣＨＯ−Ｋ
１細胞をまき、５％ＣＯ2インキュベーター中で３７℃
で３時間放置後、スライド表面に付着させておいたも
の）に加える。細胞の培養を上記条件でさらに１夜行な
った後、細胞をギムザ染色（Merck社製）し、毒素によ
り形態が卵円型から紡錘型へ変化した細胞を顕微鏡観察
により数える（一試料につき４００個の細胞を観察対象
とする）。試験試料の代わりにハムＦ−１２培地のみを
用いた場合を対照群として変形細胞の計数値を補正し、
細胞形態変化率を算出する。
胞）の形態変化に基づく方法によった。すなわち、ヒト
由来のＬＴ（濃度２０ng／ml，０.２５ml）に試料（ハ
ムＦ−１２培地に溶解したもの）０.２５mlを加え、３
７℃で２時間放置した後、ＣＨＯ-Ｋ１細胞（あらかじ
めNunc社製チャンバースライド〔Lab-Tek，８チャンバ
ー〕にウエル当り７×１０3/mlになるようにＣＨＯ−Ｋ
１細胞をまき、５％ＣＯ2インキュベーター中で３７℃
で３時間放置後、スライド表面に付着させておいたも
の）に加える。細胞の培養を上記条件でさらに１夜行な
った後、細胞をギムザ染色（Merck社製）し、毒素によ
り形態が卵円型から紡錘型へ変化した細胞を顕微鏡観察
により数える（一試料につき４００個の細胞を観察対象
とする）。試験試料の代わりにハムＦ−１２培地のみを
用いた場合を対照群として変形細胞の計数値を補正し、
細胞形態変化率を算出する。
【００２７】
【発明の効果】本発明細菌毒素中和剤は、上述のように
乳糖とタンパク質の結合物を有効成分とし、かつ少量で
有効なものであるから、長期間服用もしくは飲食物と共
に摂取しても副作用のおそれは無く、細菌毒素による中
毒症の予防と治療にきわめて有効なものである。
乳糖とタンパク質の結合物を有効成分とし、かつ少量で
有効なものであるから、長期間服用もしくは飲食物と共
に摂取しても副作用のおそれは無く、細菌毒素による中
毒症の予防と治療にきわめて有効なものである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 高見沢 康太郎 東京都港区東新橋１−１−19 株式会社ヤ クルト本社内
Claims (4)
- 【請求項１】 β−ラクトグロブリンと乳糖との結合
物、α−ラクトアルブミンと乳糖との結合物、牛血清ア
ルブミンと乳糖との結合物、および乳カゼインと乳糖と
の結合物からなる群から選ばれた１種または２種以上の
糖タンパク質を含有することを特徴とする細菌毒素中和
剤。 - 【請求項２】 β−ラクトグロブリン、α−ラクトアル
ブミン、牛血清アルブミンおよび乳カゼインからなる群
から選ばれた１種または２種以上のタンパク質と乳糖を
混合して加熱することにより得られる反応生成物を含有
することを特徴とする細菌毒素中和剤。 - 【請求項３】 糖タンパク質が乳糖とタンパク質のアミ
ノカルボニル反応化合物であることを特徴とする請求項
１記載の細菌毒素中和剤。 - 【請求項４】 プロテオース・ペプトンを含有すること
を特徴とする細菌毒素中和剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4075778A JPH05238947A (ja) | 1992-02-28 | 1992-02-28 | 細菌毒素中和剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4075778A JPH05238947A (ja) | 1992-02-28 | 1992-02-28 | 細菌毒素中和剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05238947A true JPH05238947A (ja) | 1993-09-17 |
Family
ID=13586020
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4075778A Pending JPH05238947A (ja) | 1992-02-28 | 1992-02-28 | 細菌毒素中和剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05238947A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003063886A1 (fr) * | 2002-01-28 | 2003-08-07 | Nisshin Pharma Inc. | Inhibiteur d'adhesion d'helicobacter pylori |
| JP2007055979A (ja) * | 2005-08-26 | 2007-03-08 | Gifu Univ | ロタウイルス感染による下痢からの回復促進剤 |
| WO2008136397A1 (ja) * | 2007-04-27 | 2008-11-13 | Nisshin Pharma Inc. | 消化性潰瘍を予防および／または治療するための組成物 |
| JP2013515004A (ja) * | 2009-12-18 | 2013-05-02 | エクソドス ライフ サイエンシーズ リミテッド パートナーシップ | 安定な液体薬剤のための方法および組成物 |
-
1992
- 1992-02-28 JP JP4075778A patent/JPH05238947A/ja active Pending
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003063886A1 (fr) * | 2002-01-28 | 2003-08-07 | Nisshin Pharma Inc. | Inhibiteur d'adhesion d'helicobacter pylori |
| KR100702885B1 (ko) * | 2002-01-28 | 2007-04-04 | 닛신 파마 가부시키가이샤 | 헬리코박터 파이로리 접착 저해제 |
| JP2007055979A (ja) * | 2005-08-26 | 2007-03-08 | Gifu Univ | ロタウイルス感染による下痢からの回復促進剤 |
| WO2008136397A1 (ja) * | 2007-04-27 | 2008-11-13 | Nisshin Pharma Inc. | 消化性潰瘍を予防および／または治療するための組成物 |
| JP2013515004A (ja) * | 2009-12-18 | 2013-05-02 | エクソドス ライフ サイエンシーズ リミテッド パートナーシップ | 安定な液体薬剤のための方法および組成物 |
| US9629920B2 (en) | 2009-12-18 | 2017-04-25 | Exodos Life Sciences Limited Partnership | Methods and compositions for stable liquid drug formulations |
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