JP3694319B2 - 多量体アルファ−ラクトアルブミンを含有する抗菌組成物 - Google Patents
多量体アルファ−ラクトアルブミンを含有する抗菌組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP3694319B2 JP3694319B2 JP50722496A JP50722496A JP3694319B2 JP 3694319 B2 JP3694319 B2 JP 3694319B2 JP 50722496 A JP50722496 A JP 50722496A JP 50722496 A JP50722496 A JP 50722496A JP 3694319 B2 JP3694319 B2 JP 3694319B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- lactalbumin
- alpha
- protein complex
- protein
- casein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 title claims abstract description 44
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 title claims abstract description 44
- 235000021241 α-lactalbumin Nutrition 0.000 title claims abstract description 43
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 17
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 title description 15
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 23
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 claims abstract description 11
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims abstract description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 47
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 47
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 45
- 101000946384 Homo sapiens Alpha-lactalbumin Proteins 0.000 claims description 24
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 24
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 24
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 23
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 23
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims description 14
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 claims description 11
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 claims description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims description 9
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 claims description 4
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 4
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 claims description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 4
- 239000013638 trimer Substances 0.000 claims description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 3
- 239000000539 dimer Substances 0.000 claims description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 2
- 208000020029 respiratory tract infectious disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 10
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 abstract description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 3
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 abstract 2
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 abstract 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 abstract 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 abstract 1
- 230000000181 anti-adherent effect Effects 0.000 description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 24
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 description 20
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 20
- 101000946377 Bos taurus Alpha-lactalbumin Proteins 0.000 description 13
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 12
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 12
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 12
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 7
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 229940047650 haemophilus influenzae Drugs 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100033468 Lysozyme C Human genes 0.000 description 4
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 4
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 4
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 208000022760 infectious otitis media Diseases 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 4
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 4
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 4
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 230000037230 mobility Effects 0.000 description 4
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 238000004147 desorption mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 3
- 210000001989 nasopharynx Anatomy 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 241000606790 Haemophilus Species 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 108010070158 Lactose synthase Proteins 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 2
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 2
- 230000000922 anti-bactericidal effect Effects 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 2
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 108010037896 heparin-binding hemagglutinin Proteins 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 238000004989 laser desorption mass spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000011403 purification operation Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGZSVBBLLGZHSF-UHFFFAOYSA-N 4,4-diethylpiperidine Chemical compound CCC1(CC)CCNCC1 DGZSVBBLLGZHSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100036774 Afamin Human genes 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 229920000945 Amylopectin Polymers 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229920000623 Cellulose acetate phthalate Polymers 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 101100001673 Emericella variicolor andH gene Proteins 0.000 description 1
- 229920003139 Eudragit® L 100 Polymers 0.000 description 1
- 229920003141 Eudragit® S 100 Polymers 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108060003306 Galactosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 102000030902 Galactosyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 206010017964 Gastrointestinal infection Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 102000004366 Glucosidases Human genes 0.000 description 1
- 108010056771 Glucosidases Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010445 Lactoferrin Human genes 0.000 description 1
- 108010063045 Lactoferrin Proteins 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 102000010750 Metalloproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010063312 Metalloproteins Proteins 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N N-acetyl-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- 208000005141 Otitis Diseases 0.000 description 1
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 230000010799 Receptor Interactions Effects 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000003916 acid precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 108010090535 alpha-albumin Proteins 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003277 amino acid sequence analysis Methods 0.000 description 1
- 229920006318 anionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000003831 antifriction material Substances 0.000 description 1
- 235000008452 baby food Nutrition 0.000 description 1
- 230000010065 bacterial adhesion Effects 0.000 description 1
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L calcium stearate Chemical compound [Ca+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000013539 calcium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008116 calcium stearate Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 238000012511 carbohydrate analysis Methods 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940081734 cellulose acetate phthalate Drugs 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 238000004042 decolorization Methods 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 235000013681 dietary sucrose Nutrition 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 208000019258 ear infection Diseases 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011544 gradient gel Substances 0.000 description 1
- 229920003132 hydroxypropyl methylcellulose phthalate Polymers 0.000 description 1
- 229940031704 hydroxypropyl methylcellulose phthalate Drugs 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N l-phenylalanyl-l-lysyl-l-cysteinyl-l-arginyl-l-arginyl-l-tryptophyl-l-glutaminyl-l-tryptophyl-l-arginyl-l-methionyl-l-lysyl-l-lysyl-l-leucylglycyl-l-alanyl-l-prolyl-l-seryl-l-isoleucyl-l-threonyl-l-cysteinyl-l-valyl-l-arginyl-l-arginyl-l-alanyl-l-phenylal Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N 0.000 description 1
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 1
- 235000021242 lactoferrin Nutrition 0.000 description 1
- 229940078795 lactoferrin Drugs 0.000 description 1
- 150000002597 lactoses Chemical class 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003595 mist Substances 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000003300 oropharynx Anatomy 0.000 description 1
- -1 pH 7.0 Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- YHHSONZFOIEMCP-UHFFFAOYSA-O phosphocholine Chemical compound C[N+](C)(C)CCOP(O)(O)=O YHHSONZFOIEMCP-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 229950004354 phosphorylcholine Drugs 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 235000019204 saccharin Nutrition 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940081974 saccharin Drugs 0.000 description 1
- 239000000901 saccharin and its Na,K and Ca salt Substances 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 201000009890 sinusitis Diseases 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000011800 void material Substances 0.000 description 1
- 235000021119 whey protein Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
- A23J1/20—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from milk, e.g. casein; from whey
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J3/00—Working-up of proteins for foodstuffs
- A23J3/04—Animal proteins
- A23J3/08—Dairy proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J3/00—Working-up of proteins for foodstuffs
- A23J3/04—Animal proteins
- A23J3/08—Dairy proteins
- A23J3/10—Casein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/142—Amino acids; Derivatives thereof
- A23K20/147—Polymeric derivatives, e.g. peptides or proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
- A23L33/19—Dairy proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/38—Albumins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/18—Ion-exchange chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/24—Extraction; Separation; Purification by electrochemical means
- C07K1/26—Electrophoresis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/76—Albumins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
- G01N33/56944—Streptococcus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
- G01N2333/285—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Pasteurellaceae (F), e.g. Haemophilus influenza
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/76—Assays involving albumins other than in routine use for blocking surfaces or for anchoring haptens during immunisation
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Electrochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Microbiology (AREA)
Description
本発明は新規な抗菌性タンパク質、及びこのタンパク質を含有する医薬組成物、人間用食品組成物及び動物飼料の形の、細菌、特に肺炎球菌(Streptococcus pneumoniae)及び/又はインフルエンザ菌(Haemophilusinfluenzae)によって起こる感染の治療及び/又は予防の処置に使用される組成物、並びに前記細菌によって起こる感染を診断する方法に関する。
本発明の目的は細菌、特に肺炎球菌及びインフルエンザ菌によって起こる上気道における感染、耳鼻及び咽喉の感染、のみならず下気道例えば肺における感染を、これらの細菌の接着を防ぐことによる及び/又は殺菌作用を引き起こすことによる予防的及び/又は治療的処置のためのタンパク質、及び前記タンパク質を含有する組成物を得ることである。さらに別の目的はこれらの細菌によって起こる感染の診断を可能にすることである。
発明の背景
天然の抗菌性化合物は免疫及び非免疫起源で細胞内だけでなく分泌された形態で存在する。
人乳はそのような化合物を精製取得するための供給源として使用されてきた。これらの従来から知られている化合物は微生物表面構造に対する特異的抗体、カゼイン、リゾチーム、及びオリゴ糖を含有する。その作用機構は抗菌性分子の群の間で異なる。抗体及び受容体類似物質は微生物が粘膜表面に接着するのを妨げ、リゾチームは細胞壁を攻撃するなどである。
細胞接着なる用語は細菌の粘膜表面への結合を意味する。この機械的結合は生物にとって体液による排除に抵抗し、そして適当な受容体が発現される部位において個体群を確立するための手段である。付着の構造が確認されている大部分の場合において、それは特異的な過程である。一般にアドヒジンと呼称される細菌リガンドが宿主受容体に結合する。グラム陰性細菌においては、アドヒジンは細菌が複雑な細胞表面において適当な受容体に到達するのを助ける強靭な表面オルガネラである線毛に随伴している。線毛はレクチンとして機能し、すなわちそれらは宿主複合糖質のオリゴ糖配列として現れる受容体エピトープに対して特異性を示す(13)。一方、グラム陽性細菌の場合、アドヒジンは表面オルガネラとして発現されることはなく、むしろ細胞壁成分及びリポテイコ酸と結合している。(21,22)。グラム陽性細菌の場合の受容体エピトープはオリゴ糖からなることがあるが、しかしながら、例えば結合組織タンパク質中にペプチドとして現れることもある(10)。
接着の機能的結果は細菌株の毒性及び受容体の形態に依存する。細胞に結合している場合、リガンドと受容体の相互作用は集落形成及び組織攻撃を容易にする(8)。分泌される場合、受容体分子はアドヒジンを占拠し、そして相当する細胞に結合した受容体への接着を競合的に阻害するであろう。人乳はそのような競合性可溶性受容体分子の豊富な供給源である。
結合を阻害する特異的抗体の能力は十分に確認されている。これはコレラ菌(Vibrio cholera)及び口腔連鎖状球菌により初めて証明された。抗接着抗体は二つの方法のいずれかにより作用することができ、すなわち
1)受容体のアドヒジン結合部位に対する抗体は受容体相互作用を競合的に阻害し、又は2)接着に直接関与しない細菌表面分子に対する抗体は細菌を凝集し、それにより結合に有効な微生物の数を減らす。
上述の場合のいずれにおいても、抗体の抗接着活性は抗原結合部位の特異性に帰せられる。最近、レクチン−炭水化物相互作用に基づく分泌性IgAと大腸菌との間の相互作用の代替的機構が確認された。
人乳はヒト鼻咽頭上皮細胞への肺炎球菌及びインフルエンザ菌の結合を強く阻害する。それはこれらの微生物の多数の表面抗原、例えば肺炎球菌のホスホリルコリン及び莢膜多糖類、インフルエンザ菌のリポ多糖及び外膜タンパク質の対する抗体を含有する。従って、乳汁中の抗接着活性のいくつかは免疫グロブリン画分に存在する。
乳汁の非免疫グロブリン画分中の残りの抗接着活性は2つの型の分子、遊離オリゴ糖及びカゼイン画分中の糖タンパク質により説明することができる。
人乳はその複合炭水化物の含量の点で独特である。乳汁の遊離オリゴ糖画分はラクトース系(lactoseries)が優位を占めており、そして炭水化物の単離及び特徴把握の改良された方法により、分子当たり20までの単糖を含む130を超えるオリゴ糖が確認された。乳汁の低分子画分(<5kDa)にある肺炎球菌に対する抗接着活性は遊離オリゴ糖であることが明らかにされた。対照的にインフルエンザ菌に対してはそのような作用は認められなかった(15)。
乳汁の高分子成分の抗接着活性はカゼイン画分に局在していた。ヒトカゼインは肺炎球菌及びインフルエンザ菌両方の接着を強烈に減少させた(15)。この作用は種特異的であった。
アルファ−ラクトアルブミンは金属タンパク質であり、Ca(II)飽和及び/又はグリコシル化によりある程度の不均一性を示す(1)。アルファ−ラクトアルブミンはラクトース合成酵素系における特異化タンパク質(specifier protein)として作用する。授乳の間、アルファ−ラクトアルブミンが乳腺に形成され、そしてこれがN−アセチルグルコサミン(GlcNAc)からグルコース(Glc)へのガラクトシルトランスフェラーゼ酵素の基質特異性を変え、ラクトース合成が起こるのを可能にする。
多重形態のウシ、ブタ、ヒツジ及びヤギのアルファ−ラクトアルブミンが単離され、詳しく特徴が把握されている(2,3)。これらの多重形態は少数のアミノ酸残基において又はジスルフィド結合の数の点で異なるが(4,5)、すべてがラクトース合成酵素系において活性である。これらの種々な形態のアルファ−ラクトアルブミンの生理学的な意識又は機能は知られていない。アルファ−ラクトアルブミンは高い割合の進化的な変化を受けてきており、そしてリゾチームとの相同性を示す(1)。これらの2つのタンパク質は同じ祖先タンパク質に由来すると考えられている。リゾチームは抗菌剤として知られているが、アルファ−ラクトアルブミンに抗菌的機能はまだ見出されていない。
発明の説明
本発明は乳汁からの新しい抗菌性のタンパク質又はタンパク質の群の確認について開示する。このタンパク質は多量体形態のアルファ−ラクトアルブミンからなる。
以下においては、このタンパク質又はタンパク質の群を抗接着性ラクトアルブミン様タンパク質、略語ALLPと呼称する。
本発明に関連して使用される用語、抗微生物性又は抗菌性タンパク質は、この場合及び以下において微生物の組織への接着を阻害する、及び/又は微生物に対して抗菌効果を示すタンパク質を意味する。
さらなるその他の本発明の特徴は添付の請求の範囲から明らかになるであろう。
本発明は以下に示す実施例に関連していっそう詳しく説明する。
実験
活性の抗接着性及び抗菌性タンパク質(ALLP)の精製
授乳中の婦人からの乳汁試料を、肺炎球菌及びインフルエンザ菌に対する抗接着活性について選別した。高い抗接着活性を有する母乳約50lを一人の健康な提供者から集め、ALLPの精製に使用した。約5lの乳汁を一度に解凍し、遠心分離して脂肪を除いた。pH4.6における酸沈殿により脱脂乳からカゼインを調製した。ALLPを以下に説明するように精製した。
(i)カゼインのイオン交換クロマトグラフィー
カゼインの画分を、FPLC(Pharmacia, Sweden)に付着させたDEAE−トリス−アクリルM(LKB, Sweden)を充填したイオン交換カラム(14cm×1.5cm)を使用し、NaClグラジエントを使用して実行した。100mgの凍結乾燥したカゼインを10mlの0.01Mトリス−HCl,pH8.5に溶解した。遠心分離後、試料を直接カラムに加え、次の条件で展開を行なった。緩衝液A:0.01Mトリス−HCl,pH8.5、緩衝液B:1M NaCl/lを含有する緩衝液A、グラジエントプログラム:0〜3ml 100%A、3〜60ml 15%B、60〜85ml 25%B、85〜87ml 100%B、87〜89ml 100%Bで2分間、89〜120ml 100%A。グラジエントは線形ではなく、よりよく分離するため各ピークの溶離のとき中断した。流速:1ml/分、記録計0.2cm/分。緩衝液は脱気し、使用前0.22umのフィルターでろ過した。ピークを280nmで監視し、画分のサイズは3mlであった。画分は図(図1A)のようにプールした。次にプール(I〜VI)を蒸溜水に対して少なくとも48時間の透析(膜カットオフ3.5kD)により脱塩し、凍結乾燥し、そして抗接着活性を試験した。
(ii)プールVIのゲルクロマトグラフィー
カゼインの反復するFPLC分画により得られた活性のプールVI 100mgを7mlの0.06Mリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.0に溶解し、そしてセファデックスRG-50(Pharmacia, Sweden)のカラム(93cm×2.5cm)に加えた。流速は30ml/時間、ピークを280nmで監視し、3mlの画分を集め、そして図(図2A)のように合わせた。プールは透析により脱塩し、凍結乾燥し、組成及び抗接着活性を試験した。
市販のアルファ−ラクトアルブミンのイオン−交換クロマトグラフィー
市販の(Sigma)ヒトまたはウシのアルファ−ラクトアルブミン20mgを、0.01Mトリス−HCl(pH8.5)2mlに溶解した。アルファ−ラクトアルブミンのイオン−交換クロマトグラフィーは、カゼインの分別に対して上述したと同様な条件下で行なった。NaCl勾配は線状(中断しない)であり、流速は1ml/分であり、3mlづつのフラクションを図1Bに示したように集めそしてプールした。これらのプールを透析し(膜カットオフ3.5KD)、凍結乾燥し、必要な濃度に再懸濁しそして抗接着(anti-adhesive)活性について試験した。
市販のアルファ−ラクトアルブミンのゲルクロマトグラフィー
市販のヒトまたはウシのアルファ−ラクトアルブミン(Sigma)約8〜10mgを、0.06M燐酸ナトリウム緩衝液(pH7.0)3mlに溶解しそして上述したようにセファデックスRG-50カラム上で分別した。流速は30ml/時間であり、ピークは280nmにおいて監視し、3mlづつのフラクションを図2Bに示したように集めそしてプールした。これらのプールを少なくとも48時間の蒸留水に対する透析によって脱塩し(膜カットオフ3.5KD)、凍結乾燥し、組成および抗接着活性について試験した。アルファ−ラクトアルブミンのイオン−交換クロマトグラフィー中1M NaCl後に溶離しそして保持された物質6〜8mgを、上述したように0.06M燐酸ナトリウム緩衝液(pH7.0)5mlに溶解しそしてG-50カラム上のゲルクロマトグラフィー処理に付した。3mlづつのフラクションを集めそしてプールした(図3)。これらのプールを脱塩し、凍結乾燥しそして抗接着活性について試験した。
ポリアクリルアミド勾配ゲル電気泳動(PAGGE)
Bio-Rad Mini Protean IIセルに対して4〜20%のポリアクリルアミドプレキャストゲル(Bio-Rad, Richmond, CA)を使用して、分析的PAGGEを遂行した。凍結乾燥したフラクションのそれぞれ10μl(5〜10mg/ml)に、試料緩衝液(0.5M トリス−HCl(pH6.8)13.1%、グリセロール10.5%、SDS 1.2%およびブロモフェノールブルー0.05%)の等容量を加えた。それから、それぞれの20μlを、ゲルに負荷し、これを200Vの一定の電圧で約40分SDS 0.1%を有するトリス−グリシン緩衝液(pH8.3)中で流動した。蛋白質の着色は、ゲルをクーマシーブルー(Coomassie Blue)溶液(40%のメタノール、10%の酢酸中0.1%)に約0.5時間浸漬することによって行なった。脱着色は、透明な背景が得られるまで40%のメタノール、10%の酢酸中の若干の変化によって行なった。
イオン脱着質量分析法
ALLPおよび市販のアルファ−ラクトアルブミンを、イオン脱着質量分析法によって分析した。
細 菌
S.pneumoniae(CCUG 3114および10175)およびH.influenzae(Hi 198)を、実験を通して使用した。これらの菌株は、試験管内においてヒトの鼻咽頭上皮細胞によく接着することが知られている。これらの菌株は、はじめに頻繁な急性中耳炎の疾患の子供の鼻咽頭から単離された。これらの菌株を、凍結乾燥しそして血液寒天プレート(10175)またはレビンタル(Levinthal)培地寒天プレート(Hi 198)に移した。S.pneumoniaeは、液状培地(17)中で37℃で9時間培養し、遠心分離によって取り出しそしてコリン1%を含有する0.9%NaCl 1mlに懸濁した。H.influenzae Hi 198は、ヘモフィラス培地(18)中で4時間培養し、遠心分離によって取出しそして燐酸塩緩衝液サリン(PBS)に懸濁した。
接着阻害
接着および接着の阻害は、これまで報告されている(15,19)ようにして試験した。要約すると、健康な供与者の口腔咽頭からの上皮細胞(105/ml)を、細菌懸濁液(109/ml)と混合した。細菌および上皮細胞の培養後、結合しない細菌を、遠心分離およびコリン1%を含有するNaCl(10175)またはPBS(Hi 198)中の再懸濁の反復サイクルによって除去した。
上皮細菌の添加前に、細菌を37℃で30分予備培養することによって、種々なフラクションの阻害活性を試験した。結合した上皮細胞の数は、干渉コントラスト顕微鏡(干渉コントラスト装置TE Leitzを有するOrtolux II 顕微鏡、Wetzlar)の助けによって計算した。接着は、40の上皮細胞に対する細菌/細胞の平均数として与えた。阻害は、緩衝液比較対照の値の%で与えた。
結 果
ALLPの性質
ALLPは、イオン−交換クロマトグラフィーによるカゼインの分別およびゲルクロマトグラフィーによる1M NaCl後に溶離したプールの分別によって、ヒトのミルクから精製した。カゼインのイオン−交換分別プロフィルは、図1Aに示される通りである。溶離したフラクションを、上述したようにプールしそして抗接着活性について試験した。プールVIは、カゼインの抗接着活性を保持する。このプールは、比較対照の80%以上S.pneumoniaeおよびH.influenzaeの結合を阻害した(表3)。残りのフラクションは、不活性でありそしてさらに分析しなかった。
プールVIは、セファデックスRG-50カラム上のゲルクロマトグラフィーによって分別した。分別プロフィルは、2つの明瞭によく分離したピークを示す(図2A)。溶離したフラクションを上述したようにプールし、脱塩しそして抗接着活性について試験した。プールKは、S.pneumoniaeに対する抗接着活性の98%およびH.influenzaeに対する活性の91%を保持した。プールLは、不活性であった(表3)。
プールKの分析的PAGGEは、14-15KD領域におけるバンド、30KDの領域における一つのバンドおよび100KD領域において着色した二つのバンドの存在を示す。プールLは、14-15KDにおいて一つのバンドのみの存在を示す(図2A)。N−末端アミノ酸配列分析は、プールKのバンドが、ヒトのアルファ−ラクトアルブミンのN−末端配列と同様でありそして同一であることを示す。プールKにおける活性な抗接着蛋白質は、抗接着ラクトアルブミン様蛋白質(ALLP)と称した。ALLPは、1mg/mlの濃度において約60%までS.pneumoniaeおよびH.influenzaeの結合を減少する。
ALLPの質量分析法
分析的PAGGEからの結果は、ALLPは、多分多量体形態で存在するであろうということを示唆する。イオンレーザー脱着質量分析法によって、ALLPは、それぞれ14128.7m/z、28470.5m/zおよび42787.8m/zにおける三つの明瞭な質量フラグメント(1、2および3)を示す(図4)。これらのフラグメントは、蛋白質の単量体(14m/z)、二量体(28m/z)および三量体(42m/z)質量範囲と一致する。
ALLPおよび市販のアルファ−ラクトアルブミンの比較
抗接着活性について試験した場合、商業的なアルファ−ラクトアルブミンは、10mg/mlの濃度においてさえも、S.pneumoniaeまたはH.influenzae接着を阻害しない(表4)。ALLPは、14-15KD、30KDおよび100KD領域において着色されたバンドを示すが、市販のアルファ−ラクトアルブミンは、14-15KD領域において着色された一つのバンドのみを示す。ALLPのN−末端アミノ酸配列は、ヒトのアルファ−ラクトアルブミンの配列と完全な相同性を示す。
ALLPと比較した場合の市販のアルファ−ラクトアルブミンの抗接着活性の欠乏は、恐らく分子形態の相違による。それ故に、市販のヒトのアルファ−ラクトアルブミンをイオンレーザー脱着質量分析法にうけせしめた。スペクトルは、アルファ−ラクトアルブミンの単量体形態に相当する14128.7m/zにおける一つの質量フラグメント(計算した分子質量=14.079KD)のみを示す。すなわち、市販のヒトのアルファ−ラクトアルブミンは、単量体形態にありそして抗接着活性に欠けている。これに反して、ALLPは、多量体形態にありそして試験管内におけるヒトの口腔咽頭細胞に対するS.pneumoniaeおよびH.influenzaeの結合を阻害することが見出された。
ヒトのアルファ−ラクトアルブミンのイオン−交換クロマトグラフィー
市販のヒトのアルファ−ラクトアルブミンの抗接着作用に対するイオン−交換クロマトグラフィーの作用を試験するために、市販の試料20mgをトリス−アクリルカラムに適用した。イオン−交換プロフィルは、図1Bに示される通りである。適用した物質の約50%をカラム上に保持しそして1M NaClの適用後に溶離した(図1B)。異なるフラクションを上述したようにプールした。脱塩および凍結乾燥後に、フラクションを約5〜10mg/mlの濃度に再構成しそして抗接着活性について試験した。
イオン−交換クロマトグラフィー後のヒトのアルファ−ラクトアルブミンの抗接着作用
イオン−交換クロマトグラフィー前の市販のヒトのアルファ−ラクトアルブミンは、抗接着活性に欠けている(表4)。それをイオン−交換クロマトグラフィーにうけせしめた後においては、1M NaClで溶離したプール(図1B、プールLA2)は、比較対照の値の95%以上S.pneumoniaeおよびH.influenzaeの結合を阻害する(表4)。得られた他のプール(LA1)は、不活性であった。
イオン−交換クロマトグラフィーの前および後のヒトのアルファ−ラクトアルブミンのゲルクロマトグラフィー
市販のヒトのアルファ−ラクトアルブミンの約50%がイオン−交換クロマトグラフィー後に活性になったので、ゲルクロマトグラフィーに対するアルファ−ラクトアルブミンおよびプールLA2の移動性を検討することを決定した。
イオン−交換クロマトグラフィー前のヒトのアルファ−ラクトアルブミンのG-50ゲルクロマトグラフィープロフィルは、図2Bに示される通りである。アルファ−ラクトアルブミンは、単一のピークとして溶離されたそしてこれはPAGGE分析に対して単一のバンド(14-15KD)を与えた(図2B)。このプールLAは、抗接着活性について試験した場合に不活性であることが見出された(表4)。
アルファ−ラクトアルブミンのイオン−交換クロマトグラフィー後に得られた活性プールLA2のゲルクロマトグラフィープロフィルは、図3に示される通りである。このプールは、カゼインのピークKおよびL(図2A)の溶離液容量に相当する二つのよく分離したピーク(図3、1および2)として溶離された。抗接着活性について試験した場合、プール1はS.pneumoniaeおよびH.influenzaeに対する活性を保持しそしてこれに反してプール2は不活性であった(表4)。
プール1を分析的PAGGEによって分析した場合、ALLPのパターンと同様なパターンが得られた。14-15KD領域、30KD領域において着色されたバンドおよび100KD領域において二つの着色されたバンドを示す。プール2は、単量体アルファ−アルブミン(図3)に相当する14-15KDにおける単一のバンドを与えた。
市販のウシのアルファ−ラクトアルブミンの性質
市販のヒトのアルファ−ラクトアルブミンをイオン−交換クロマトグラフィーによって活性な多量体形態に変換することができたので、ウシのアルファ−ラクトアルブミンの活性を試験しそしてイオン−交換およびゲルクロマトグラフィーに対するその移動性を試験することに決定した。抗接着活性について試験した場合、ウシのアルファ−ラクトアルブミンは、S.pneumoniaeおよびH.influenzaeの阻害において不活性であることが見出された(表5)。
ウシのアルファ−ラクトアルブミン20mgを、ヒトのアルファ−ラクトアルブミンに対して上述したと同様な条件下において、イオン−交換クロマトグラフィーにうけせしめた。カラムに適用された物質の50%を、保持しそして1M NaCl後に溶離した。溶離パターンは、ヒトのアルファ−ラクトアルブミンに対して得られたパターンと同様であった(図1B)。ヒトのアルファ−ラクトアルブミンのプールLA2の溶離液容量に相当するウシのアルファ−ラクトアルブミンのプールBL2(図1B)は、比較対照の値の95%以上のS.pneumoniaeの結合を阻害しそして比較対照の値の80%以上のH.influenzaeの結合を阻害する(表5)。
上述したようなG-50カラム上のゲルクロマトグラフィーにうけせしめた場合、ウシのアルファ−ラクトアルブミンは、ヒトのアルファ−ラクトアルブミンの溶離液容量に相当する単一のピークとして溶離された(図2B)。これに反してプールBL2中の物質は、ヒトのアルファ−ラクトアルブミンに対して得られたプール1および2(図3)に相当する二つの明瞭なピークに分割された。カラムのボイド容量直後に溶離したプール(プール1に相当する)は、抗接着活性を保持しそしてこれに反して他のプールは不活性であった。活性なプールはALLPのパターンと同様なPAGGEパターンを有している。これに反して、不活性なプールは、14-15KD領域において着色された一つのバンドのみを示す。
すなわち、市販のウシのアルファ−ラクトアルブミンの部分もまたイオン−交換クロマトグラフィーによって活性な多量体形態に変換された。
殺菌作用
本発明のALLPを、抗生物質に耐性であることが知られているS.pneumoniaeの種々な菌株およびStreptococcusの若干の他の菌株、E.coli,H.influenzaeおよびM.cathに対する殺菌作用に関して試験した。
そのために、種々な濃度のALLPを使用してインキュベーションした後に種々な細菌菌株を増殖ブレート上に接種した。接種後、それぞれ0.5時間、2時間および4時間の培養において生菌数(CFU)を測定した。以下の表1は、比較対照と比較したALLP 10mg/mlを含有する培地に接種した後の生菌数を示す。
比較対照(添加しない)と比較したALLPの種々な投与レベルにおけるS.pneumoniae 10175に対する殺菌作用を基にして用量反応曲線を得た。ALLPは、それぞれ0.1mg/ml、0.5mg/mlおよび1.0mg/mlで投与した。得られたグラフは、図5に示す通りである。これから証明されるように、0.1mg/mlのような小量のALLPがS.pneumoniaeに対して殺菌作用を示す。
さらに、生菌数は、種々な比較対照蛋白質、すなわち10mg/mlの濃度のウシの血清アルブミン(BSA)、アルファ−ラクトアルブミン(ウシ源)、ラクトフェリン(ウシ源)および比較対照(蛋白質なし)を使用して測定した。図6から明らかであるように、これらの蛋白質は、S.pneumoniae 10175に対して殺菌作用を有していない。
すなわち、呼吸器病原体S.pneumoniaeおよびH.influenzaeに対して抗接着活性および殺菌作用を有する新規な形態のアルファ−ラクトアルブミン(ALLP)は、ヒトのミルク試料から単離されそして特徴づけられる。市販のヒトまたはウシのアルファ−ラクトアルブミンは、検査系における抗接着活性に欠けている。市販のヒトおよびウシのアルファ−ラクトアルブミンの一部を、イオン−交換クロマトグラフィーによって活性形態に変換した。アルファ−ラクトアルブミンの活性および非活性形態は、ゲルクロマトグラフィーに対して異なる移動性を示しそしてゲル電気泳動に対する着色パターンもまた異なっている。イオン−脱着質量分析法によって、ALLPは三量体形態にありそしてこれに対して、市販のアルファ−ラクトアルブミンは単量体形態にあることが見出された。活性化形態の市販のヒトおよびウシのアルファ−ラクトアルブミンは、三量体形態と同様なゲルパターンを示す。単量体形態のアルファ−ラクトアルブミンの部分を多量体形態から分離しそしてS.pneumoniaeおよびH.influenzaeの接着の阻害において不活性であることが見出された。イオン−交換クロマトグラフィー後、三つの形態のアルファ−ラクトアルブミン(モノ、ジおよびトリ)がある種の平衡において存在しそして相互からうまく分離することができない。これは、活性な抗接着アルファ−ラクトアルブミン(ALLP)がヒトのミルク中においてこれまで確認されていない多量体形態であることを提唱する。
従来のカゼイン製剤中におけるALLPの確認は、生物学的活性により監視されるその精製の結果であった(16)。それは、カゼインのすべての抗接着活性を保持しそして精製操作中続くことができる。この形態のアルファ−ラクトアルブミンは、これまでヒトのミルク中に存在することが開示されていない。本発明の初期の研究はS.pneumoniaeおよびH.influenzaeに対するヒトのミルクの抗接着作用は、特異的抗体活性とは無関係でありそしてカゼインフラクション中で濃縮されることを示す(15)。しかしながら、カゼインは殺菌作用および抗接着作用の両方を有することが見出された。殺菌作用が存在しそしてS.pneumoniaeおよびH.influenzaeに対して非常に顕著であることが見出された。抗接着活性は、カゼインからの脂肪酸の除去後完全に残留する。ALLPの接着阻害の機構は、炭水化物とは無関係であることが見出された。ALLPの炭水化物分析は、分子と一緒になった1個の単糖類単位のみの存在を示す。グルコシダーゼ処理によるこの単糖類単位の除去は、ALLPの抗接着作用を変化しない。また、市販の形態のヒトおよびウシのアルファ−ラクトアルブミンはイオン−交換クロマトグラフィーによって活性化することができるので、炭水化物が生物学的分析系により試験したALLPの抗接着作用または殺菌作用において何れかの役割を果すということは非常に考えられない。
主として乳漿蛋白質であるので、アルファ−ラクトアルブミンは、普通乳漿のアルファ−ラクトアルブミンに富んだフラクションから精製される。単量体形態および多量体形態はゲルクロマトグラフィーに対して異なる移動性を有するので、活性な多量体形態は精製操作中に損失する。すなわち、アルファ−ラクトアルブミンの市販の製剤が、本発明の系において抗接着性を欠いているということは驚くことではない。アルファ−ラクトアルブミンの遺伝学的変体が、ウシを包含する他の哺乳動物のミルクから単離された。これらの形態の大部分は、4個のジスルフィド結合からなりそして3個のジスルフィド結合を有するウシのアルファ−ラクトアルブミンの形態もまた単離された(15)。これらの異なる形態のアルファ−ラクトアルブミンの生理学的役割は知られていない。本発明のデータは、単量体状のアルファ−ラクトアルブミンは、本発明の系における生物学的活性を完全に欠いていることを証明する。それ故に、凝集および重合は、S.pneumoniaeおよびH.influenzaeに対する抗接着活性において重要な事象である。
本発明のデータは、多量体形態のアルファ−ラクトアルブミンが呼吸器病原体の接着阻害に活性でありそしてその結果、呼吸系および胃腸感染に対する保護において役割を果すことができるということを証明する。それは、また、抗生物質に抵抗性であり得る細菌を包含する少なくともS.pneumoniaeに対する殺菌剤としても活性である。
備 考
S.pneumoniaeおよびH.influenzaeは、すべての年令のグループにおける罹病および死亡の重要な原因である。呼吸器感染、例えば髄膜炎、耳炎および副鼻膜炎は、鼻咽頭を経て入る殺菌によって起こる。かかる部位における集落形成は、疾患の重要な決定因子であり得る(18)。ヒトならびにウシのミルクから誘導された特異的なアルファ−ラクトアルブミンが両方の菌の結合を阻害するという知見は、これらの構造を使用した結合の特異的妨害によって集落形成を阻止する可能性を開く。殺菌作用も同様に重要である。
抗菌分子の重要性は、乳房−供給乳児にみられる感染に対する保護基によって証明される。乳房−供給乳児は、減少された頻度の下痢、上部呼吸器感染および急性中耳炎(AOM)を有している。この適用において論じられる細菌は、AOMのもっとも頻繁な細菌原因、すなわち、Haemophilus influenzaeおよびStreptococcus pneumoniaeである。
データから明らかであるように、ヒトまたはウシのミルクから得られたアルファ−ラクトアルブミンは、試験管においてヒトの呼吸器上皮細胞に対するS.pneumoniaeおよびH.influenzaeの結合を阻害する。
適 用
本発明のアルファ−ラクトアルブミンは、経口用の粘膜使用単位、注射可能な組成物または局所用の組成物の形態で投与することができる。何れの場合においても、蛋白質は、普通、医薬的に許容し得る既知の担体、増量剤および(または)賦形剤と一緒に投与される。
蛋白質を局所的に使用される溶液の形態で投与する場合においては、溶液は鼻咽頭にスプレーすることのできる希釈剤と一緒に蛋白質に対する乳化剤を含有するまたは上部呼吸気道に霧の形態で吸入することができる。
経口的使用においては、蛋白質は、普通担体と一緒に投与される。担体は、固体、半固体または液状の希釈剤またはカプセルであることができる。これらの医薬製剤は、本発明の他の目的である。普通、活性化合物の量は、製剤の0.1〜99重量%、好ましくは注射用の製剤においては0.5〜20重量%そして経口投与用の製剤においては2〜50重量%の間にある。
経口投与用の使用単位の形態の本発明の蛋白質を含有する医薬製剤においては、化合物を、固体の粉末状担体、例えばラクトース、サッカロース、ソルビトール、マンニトール、澱粉、例えば馬鈴薯澱粉、とうもろこし澱粉、アミロペクチン、セルロース誘導体またはゼラチン、ならびに抗摩擦剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ポリエチレングリコールワックスなどと混合しそして圧縮して錠剤にする。多−単位−使用顆粒も同様に製造することができる。錠剤および上記芯の顆粒は、糖などの濃厚溶液で被覆することができる。芯は、また胃腸管内の溶解速度を変化する重合体、例えば5.5以上のpKaを有する陰イオン性重合体で被覆することもできる。このような重合体は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、セルロースアセテートフタレートおよびEudragit S100およびL100の商品名で販売されている重合体である。
ゼラチンカプセルの製剤においては、これらは軟質または硬質であることができる。前者の場合においては、活性化合物を油と混合するそして後者の場合においては、多−単位−使用顆粒をその中に充填する。
経口投与用の液状製剤は、シロップまたは懸濁液の形態、例えば開示した活性化合物約0.2〜約20重量%およびグリセロールおよびプロピレングリコールを含有する溶液の形態で与えることができる。必要な場合は、このような製剤は、着色剤、風味剤、サッカリンおよび濃化剤としてのカルボキシメチルセルロースを含有することができる。
活性化合物の一日当りの投与量は変化されるそして投与方法の型に依存する。しかしながら、一般に、それは、経口的投与においては1回の投与当り活性化合物1〜100mgでありそして局所投与においては1回の投与当り2〜200mgである。24時間当りの適用の回数は、投与方法に依存する。しかしながら、例えば鼻内における局所適用の場合においては、24時間当り3〜8回に変化することができる、すなわち治療的使用において処理される身体によって生成される粘液質の流れに依存する。予防的使用においては、回数は、上述した範囲の低い側において行なう。
局所形態は、好ましくは鼻炎ウイルスにより起こる感染に関連して、予防的処理において使用することができる。
蛋白質は、また、特に予防的な理由で、カゼインを子供に容易な方法で供給するために、乳児食品中における添加剤として使用することもできる。乳児は、普通種々な理由で医薬品を拒絶する。そのために、食品は、粉末状かゆ基剤、粥基剤、ミルク基質基剤の形態またはしばしば崩壊した形態の野菜および肉片からなるスコッチコロップスのようなより複雑な食品の形態にあることができる。
動物に対する蛋白質投与の場合においては、蛋白質は、普通蛋白質以外に普通使用される栄養物を含有する飼料に加えられる。
本発明の他の見地によれば、動物またはヒトの呼吸器からとり出された試料中のS.pneumococciおよびH.influenzaeの存在を測定する方法を提供する。この方法は、試料の細菌と本発明の組成物との間の相互作用の程度を測定する技術に基づくものである。このような相互作用は、細胞または他の表面に対する細菌の接着の阻害または誘発によって測定することができる。
Claims (17)
- 多量体形態のアルファ−ラクトアルブミンを含有するタンパク質複合体。
- 多量体ヒトアルファ−ラクトアルブミンを含有する請求項1記載のタンパク質複合体。
- 単量体、二量体及び三量体の形態の混合物の形態で存在する請求項1又は2に記載のタンパク質複合体。
- 単量体、二量体及び三量体の形態が15〜7:5〜2:1の重量比で存在する請求項3記載のタンパク質複合体。
- 単量体、二量体及び三量体の形態が10:3:1の重量比で存在する請求項4記載のタンパク質複合体。
- 多量体形態が、分子量14〜15kD、30kD及び100kDの部分を有する請求項1記載のタンパク質複合体。
- カゼインを1MのNaClグラジエントの存在下でイオン交換カラムに通過させることにより得られるカゼインフラクションであって、その複合体は1ml/分の流速を用いる場合に得られる第6フラクションであるフラクション中に存在し、そのフラクションは、in vitroで試験する場合、肺炎球菌(S.pneumoniae)及びインフルエンザ菌(H.influenzae)の接着を阻止することができる上記フラクション。
- 請求項7記載のカゼインフラクションから、ゲルクロマトグラフィーによる分画化、次いでPAGGEにより分析すると少なくとも3つのタンパク質バンドを示すプールの単離によって得られるタンパク質複合体。
- PAGGEによる分析が、14〜15kD、30kD及び100kDの領域にあるタンパク質バンドを示す請求項8記載のタンパク質複合体。
- カゼインが、ヒトミルクから誘導される請求項8又は9に記載のタンパク質複合体。
- 請求項1〜6又は8〜10のいずれか一項に記載のタンパク質複合体を医薬的に許容し得る担体と共に含有する、細菌により惹起される感染症の治療的及び/又は予防的処置用医薬組成物。
- 気道の感染症の治療のための請求項11記載の組成物。
- 細菌がS.pneumoniae及び/又はH.Influenzaeである請求項11又は12に記載の組成物。
- 単量体アルファ−ラクトアルブミンをイオン交換クロマトグラフィーにかけることからなる、請求項1〜6のいずれか一項に記載のタンパク質複合体の製造方法。
- イオン交換クロマトグラフィーをDEAE−トリス−アクリルゲルで実施する請求項14記載の方法。
- 溶離剤が、線形グラジエントを有するNaClからなる請求項14又は15に記載の方法。
- 請求項1〜6又は8〜10のいずれか一項に記載のタンパク質複合体を含有する食品および飼料。
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PCT/SE1994/000742 WO1996004929A1 (en) | 1994-08-16 | 1994-08-16 | Antibacterial composition containing multimeric alpha-lactalbumin |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH10504547A JPH10504547A (ja) | 1998-05-06 |
JP3694319B2 true JP3694319B2 (ja) | 2005-09-14 |
Family
ID=20393168
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP50722496A Expired - Lifetime JP3694319B2 (ja) | 1994-08-16 | 1994-08-16 | 多量体アルファ−ラクトアルブミンを含有する抗菌組成物 |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US6599874B1 (ja) |
EP (1) | EP0776214B1 (ja) |
JP (1) | JP3694319B2 (ja) |
AT (1) | ATE182470T1 (ja) |
AU (1) | AU7792294A (ja) |
CA (1) | CA2197659C (ja) |
DE (1) | DE69419782T2 (ja) |
DK (1) | DK0776214T3 (ja) |
ES (1) | ES2136206T3 (ja) |
GR (1) | GR3031078T3 (ja) |
WO (1) | WO1996004929A1 (ja) |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5968901A (en) * | 1989-10-30 | 1999-10-19 | Andersson; Bengt | Antibacterial composition |
GB9724725D0 (en) * | 1997-11-21 | 1998-01-21 | Svanborg Catharina | Protein production process |
JP2001524491A (ja) * | 1997-11-21 | 2001-12-04 | カタリーナ・スヴァンボルイ | ラクトアルブミン生産方法 |
GB9725126D0 (en) | 1997-11-27 | 1998-01-28 | Svanborg Catharina | Therapeutic agents |
JP3756449B2 (ja) * | 1999-07-28 | 2006-03-15 | 森永乳業株式会社 | 抗潰瘍剤、抗潰瘍剤の製造方法、α−ラクトアルブミンの使用、及び潰瘍の治療方法 |
KR100907959B1 (ko) * | 2001-08-23 | 2009-07-16 | 웨스트게이트 바이올로지컬 리미티드 | 미생물 또는 바이러스 감염의 예방 또는 치료에 있어서유청 아포단백질의 용도 |
GB0210464D0 (en) | 2002-05-08 | 2002-06-12 | Svanborg Catharina | Therapeutic treatment |
CN102590413B (zh) * | 2012-01-18 | 2013-12-25 | 浙江省疾病预防控制中心 | 一种牛α-乳白蛋白的定量检测方法 |
PL2882446T3 (pl) | 2012-08-09 | 2018-10-31 | Hamlet Pharma Ab | Terapia profilaktyczna i nutraceutyczna |
WO2024075003A1 (en) | 2022-10-03 | 2024-04-11 | Linnane Pharma Ab | A complex comprising a alpha-lactalbumin and a fatty acid or lipid for use in the treatment or prevention of cancer |
GB202303177D0 (en) | 2023-03-03 | 2023-04-19 | Linnane Pharma Ab | Method of predicting response to treatment |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2459619B1 (fr) * | 1979-06-26 | 1983-07-29 | Agronomique Inst Nat Rech | Procede pour l'obtention a partir de lactoserum, d'un produit enrichi en alpha-lactalbumine et applications dudit procede |
JPS57500609A (ja) | 1980-05-09 | 1982-04-08 | ||
FI892006A (fi) * | 1988-04-29 | 1989-10-30 | Phil Gold | Lactalbumin saosom tillaeggsaemne i mat. |
US5968901A (en) * | 1989-10-30 | 1999-10-19 | Andersson; Bengt | Antibacterial composition |
US5795611A (en) | 1989-12-20 | 1998-08-18 | Slattery; Charles W. | Human infant formulas containing recombinant human alpha-lactalbumin and beta-casein |
JP2961625B2 (ja) * | 1991-01-21 | 1999-10-12 | 雪印乳業株式会社 | α−ラクトアルブミン含有量の高い組成物の製造方法 |
-
1994
- 1994-08-16 EP EP94928519A patent/EP0776214B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-08-16 AT AT94928519T patent/ATE182470T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-08-16 ES ES94928519T patent/ES2136206T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-08-16 DE DE69419782T patent/DE69419782T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-08-16 CA CA002197659A patent/CA2197659C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-08-16 JP JP50722496A patent/JP3694319B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1994-08-16 DK DK94928519T patent/DK0776214T3/da active
- 1994-08-16 WO PCT/SE1994/000742 patent/WO1996004929A1/en active IP Right Grant
- 1994-08-16 AU AU77922/94A patent/AU7792294A/en not_active Abandoned
-
1999
- 1999-08-26 GR GR990402161T patent/GR3031078T3/el unknown
-
2000
- 2000-08-17 US US09/639,938 patent/US6599874B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2003
- 2003-07-11 US US10/617,093 patent/US7144855B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ES2136206T3 (es) | 1999-11-16 |
GR3031078T3 (en) | 1999-12-31 |
EP0776214B1 (en) | 1999-07-28 |
ATE182470T1 (de) | 1999-08-15 |
WO1996004929A1 (en) | 1996-02-22 |
CA2197659A1 (en) | 1996-02-22 |
AU7792294A (en) | 1996-03-07 |
DE69419782T2 (de) | 1999-12-23 |
US6599874B1 (en) | 2003-07-29 |
JPH10504547A (ja) | 1998-05-06 |
US7144855B2 (en) | 2006-12-05 |
CA2197659C (en) | 2009-11-10 |
EP0776214A1 (en) | 1997-06-04 |
US20040106541A1 (en) | 2004-06-03 |
DE69419782D1 (de) | 1999-09-02 |
DK0776214T3 (da) | 1999-11-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Brody | Biological activities of bovine glycomacropeptide | |
US5505955A (en) | Anti-diarrheic product and method of treating rotavirus-associated infection | |
Chierici | Antimicrobial actions of lactoferrin | |
RU2579661C2 (ru) | Способ производства лактоферрина, фракция, содержащая лактоферрин, и ее применения | |
JP2004517067A (ja) | 初乳基材組成物 | |
JP3694319B2 (ja) | 多量体アルファ−ラクトアルブミンを含有する抗菌組成物 | |
US5330975A (en) | Bacterial toxin neutralizer | |
EP0454813B1 (en) | A casein fraction for therapeutic, prophylactic and/or diagnostic use in infections of the respiratory tract | |
Schroten et al. | Inhibition of adhesion of S‐fimbriated E. coli to buccal epithelial cells by human skim milk is predominantly mediated by mucins and depends on the period of lactation | |
Teraguchi et al. | Glycans of bovine lactoferrin function as receptors for the type 1 fimbrial lectin of Escherichia coli | |
JP2001294600A (ja) | ヘリコバクター・ピロリ定着阻害作用を有する糖タンパク質 | |
JP3163171B2 (ja) | IgA産生促進剤 | |
US5968901A (en) | Antibacterial composition | |
WO2008040059A1 (en) | Anti-bacterially active agents and related methods | |
JPH04275232A (ja) | 胃炎,胃または十二指腸潰瘍予防食品 | |
JP3207647B2 (ja) | IgGおよびIgMクラスの抗体産生を促進する免疫賦活剤 | |
JP3255161B2 (ja) | ヘリコバクター・ピロリ定着阻害剤 | |
JP3794722B2 (ja) | ウイルス感染防御作用を有するウシ乳清由来の高分子糖蛋白質混合物、その用途及びその製造法 | |
MXPA94006245A (en) | Antibacterial composition | |
JPH05238947A (ja) | 細菌毒素中和剤 | |
JP2001502309A (ja) | 溶血性尿毒性症候群を予防するための経口投与薬剤を製造するために免疫グロブリン製剤を使用する方法 | |
JP4306828B2 (ja) | 病原性細菌感染防御剤 | |
JP4767382B2 (ja) | IgE産生抑制剤 | |
JP2002128797A (ja) | バターミルク由来抗ウイルス性ペプチド及びそれを含有する機能性食品 | |
JPH0733679A (ja) | 細菌毒素中和剤 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20050426 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20050523 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20050624 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20050829 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313117 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
R360 | Written notification for declining of transfer of rights |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R360 |
|
R370 | Written measure of declining of transfer procedure |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R370 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080701 Year of fee payment: 3 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313117 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080701 Year of fee payment: 3 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313117 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080701 Year of fee payment: 3 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080701 Year of fee payment: 3 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090701 Year of fee payment: 4 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100701 Year of fee payment: 5 |