SE453509B - D-fenylalanyl-l-prolyl-l-arginin-aldehydsulfat och farmaceutisk komposition innehallande detsamma - Google Patents

D-fenylalanyl-l-prolyl-l-arginin-aldehydsulfat och farmaceutisk komposition innehallande detsamma

Info

Publication number
SE453509B
SE453509B SE8200135A SE8200135A SE453509B SE 453509 B SE453509 B SE 453509B SE 8200135 A SE8200135 A SE 8200135A SE 8200135 A SE8200135 A SE 8200135A SE 453509 B SE453509 B SE 453509B
Authority
SE
Sweden
Prior art keywords
phenylalanyl
prolyl
aldehyde
arginine
sulphate
Prior art date
Application number
SE8200135A
Other languages
English (en)
Other versions
SE8200135L (sv
Inventor
S Bajusz
E Szell
E Barabas
D Bagdy
Original Assignee
Richter Gedeon Vegyeszet
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Richter Gedeon Vegyeszet filed Critical Richter Gedeon Vegyeszet
Publication of SE8200135L publication Critical patent/SE8200135L/sv
Publication of SE453509B publication Critical patent/SE453509B/sv

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

453 509 10 15 20 25 30 35 40 aldehyder, som även uppvisar antikoagulerande verkan; i motsats till ovan angivna medel ingår de emellertid direkt reaktion med trombin och inhiberar dess proteo- lytiska reaktioner även i frånvaro av antitrombin III.
D-fenylalanyl-L-prolyl-L-arginin-aldehydacetat, som be- skrivs i den ungerska patentskriften 169.870, liksom D-fenylalanyl-L-prolyl-NG-karboxi-L-arginin-aldehyd, som beskrivs i belgiska patentskriften 880.844, är båda potenta trombininhibitorer.
Det har konstaterats att antitrombinpotensen hos ovan angivna syntetiska arginin-peptid-aldehydsa1- ter - speciellt hos föreningar med en fri ändstående aminogrupp, dvs D-fenylalanyl-L-prolyl-L-arginin-alde- hydacetat och -hydroklorid, varierar och snabbt avtar vid förvaring av dessa salter i vattenlösning, vilket gör en terapeutisk användning därav omöjlig. Ehuru NG- -karboxiderivatet av de fria tripeptid-aldehyderna, dvs D-fenylalanyl-L-prolyl-NG-karboxi-L-arginin-aldehyd, bibehåller sin aktivitet i en buffertvattenlösning un- der 20-24 timmar kan man emellertid efter flera dagar konstatera en signifikant reduktion av potensen och efter flera månader konstateras förlust av den urspung- liga aktiviteten till och med i fast form.
Uppfinningen avser ett nytt salt av D-fenyl- alanyl-L-prolyl-L-arginin-aldehyd, som i motsats till hit- tillskändaprodukterärstabiltâven i vattenlösning,samt enantikoagulerandekompositioninnehållande detsamma.
Det har visat sig att stabiliteten hos diver- se salter av D-fenylalanyl-L-prolyl-L-arginin-aldehyd varierar i vattenlösning, dvs i isotonisk saltlösning, i betydande grad. Vid av oss utförda försök upplöstes peptiderna i koncentrationer av 10 mg/ml och förvarades vid SOC och den resulterande ändringen i antitrombin- aktivitet registrerades under 180 dagar. Potensen ut- värderades i ett system, som innehöll följande kompo- nenter: 0,2 ml 0,5% bovin-fibrinogen i en 0,9% lösning av natriumklorid, 0,1 ml tris(hydroximetyl)-amino-metanhydroklorid - klorvätesyrabuffert (pH 7,2) innehållande 10 15 20 25 30 35 40 453 509 peptidlösningen, US Standard Human Thrombin (NIH, Bethesda, Maryland, USA), 10 enhter/ml lösning.
Trombintiden hos det peptidfria systemet är 15 sekunder, uppmätt i en “Schníther-Gross Coagulometer“.
Aktiviteten hos tripeptid-aldehydlösningen sattes godtyckligt till 100 om reaktionsblandningen inducerade en i förhållande till trombin femfaldig tid vid en slutkoncentration av 3,5 x 10_7M (i fallet tri- peptid-aldehydsulfat vid 0,175 ug/ml).
Försöksdata återges i tabell I nedan. Därav framgår att, ehuru aktiviteten hos motsvarande hydro- klorid i isotonisk saltlösning började avta efter 5 0,1 ml dagar och aktiviteten hos acetatet, citratet, tartra- tet och tosylatet redan efter flera dagar (i likhet med NG-karboxiderivatet av den fria tripeptid-aldehy- den med besläktade egenskaper), D-fenylalany1-L-prolyl- -L-arginin~aldehydsulfatet bibehåller sin antitrombin- aktivitet under 90 dagar. Vid utsträckta stabilitets- provningar visade sig D-fenylalanyl-L-prolyl-L-arginin- -aldehydsulfat vara stabilt även under 180 dagar i vat- tenhaltigt medium och i fast form förlorade det likale- des icke aktivitet under 6 månader. .mcflcnwmmmø wøcmmmfiawumm umflflcw umflcmumwuwu umawwmš wfifiwumëmuw uxøwoum .ävm-Omm CUUMHHXWUCÜUMQ. NXWMÜHÜD WS-MHVÜWÜQ ECM ÜUCNHNMMÛW ÜÜÜ HÜHHCÜ .mußhmumfiümflrfwm HvÉamuOHnw .uwumumum mos Gmumufl>fluxm Eøw mnfiuwfimuww mv ncmcxfifi cm ummfl>mmø umflæwou :oo umnunmu .umuuflo wfl:mHm>mu0E won :wuwufl>fluMm:flQE0Huflu:< .mH>w Sw >m Umcwë u:wHm>fl>xm cm >m oum>um: H m|.NVmn<|oHm|m:m|Q|N >m wæfiocwmouwæß Eocwm cwfiflwsum uxøwoum .ooP >w umufl>fluxm:flnEoua«ucm nw um: cwmcficwcmflnwcofluxmwu fl 2ß|oP N m_m >m coflvmuucwucøxuøflm cm øfl> man mfluflmwëww cflnšouu fiflfiu wøcmfifimsnmw a cm Hmnmøøwcfl Eom whnwwfimnflfiumwm :wa . .Hwmmsumsflcfimum| uqlaaconumxfixofiæmcmnnwz w>fiuxmmmwn ufixonumxxuz nwumucmmwummu ^N.mH< sno ^m0OU.mu< :oo Hæconumxfixofixmcmn umcxumwwn N ©fi>um> .Aßßm \wßm«\ www .Ewso .Hoflm .h mfi>HwmEmxm mm. cwusumumuufifi Eofifl mwcw>:m Eow mn øwš wmHmEEmumw:wuw>n fl um mnummcflcuuoxnww mwcw>:m wo oo- oo? oo, cor o°_ oo? co, w,om~m.m|mu<|oHm|w:m|n ON mm om Om om om oo. wm|^moou.mu<»øHm|w:m|a Qm|°« om|om ovløw o«|o> om|ow owfcm omfom uHum~.m|mu<|oum|w=m|a owlom m~|mm ømlov omnøw omlcw o@|ow om1o> øumooummu ~.m|mH<»oHm|wnm|o Hmmmø om cv ON mf of m O mu>:wøHm|øH»mwm mw uw»ww »w»H>flwxm >«umHwm :J va mw .mcficwwflßfimw xwflcopowfi « »wpH@mw>:wcHm|øfi»@w@«H» wo; »w@H>H@xmnfineoH»fi»:< P Hawnmä 10 15 20 25 30 35 40 453 509 I syfte att simulera fysiologiska betingelser testades antitrombinaktiviteten hos tripeptid-aldehyd- salterna liksom hos karbaminsyraderivaten även på human- plasma i följande system: 0,2 ml citrathumanplasma, 0,1 ml tris(hydroximetyl)-amino-metanhydroklorid - klorvätesyrabuffertlösning (pH 7,2) innehål- lande peptidlösningen, och 0,1 ml US Standard Human Thrombin (NIH, Bethesda Ma- ryland, USA), 10 enheter/ml lösning.
Trombintiden hos det peptidfria systemet var 15 sekun- der, uppmätt i en "Schnither-Gross Coagulometer".
Tabell 2 Antitrombinaktivitet hos tripeptid-aldehyd- derivat i humanplasma.
Mängd peptid (pg/ml+) som krävs för att Peptid-aldehyd öka trombintiden två- Relativ faldigt omedelbart aktivi- efter upplösning av tet peptiden D-Phe-Pro-Arg-H.H¿SO~ 0,020 100 D-Phe-Pro-Arg(COOH)-H 0,042 45 D~Phe-Pro-Arg-H.2 CH3COOH 0,065 - 0,140 35 - 14 D-Phe-Pro-Arg-H.2 HCl 0,060 - 0,130 33 - 15 Heparina 0,105 19 a Värde uppmätt med kommersiellt heparin (132,2 enheter/mg, U.S. Ph. XVII).
+ Mängd peptid i reaktionsblandningen.
Data i tabell 2 visar klart att den mängd pep- tid som krävs för att uppnå en tvåfaldig trombintids- ökning jämfört med kontrollprovet varierar alltefter den sats som används av acetat~ och hydrokloridsalterna och är många gånger större - tvâfaldig när det gäller karba- 10 15 20 25 30 35 40 453 509 minsyraderivatet - än den mängd som krävs av tripeptid- aldehydsulfatet.
In vivo-försök med tripeptid-aldehydderivaten återges i tabell 3 nedan. D-fenylalanyl-L-prolyl-L-argi~ nin-aldehydsulfat har en signifikant antitrombinpotens in vivo. Vid intravenös och subkutan administrering är dess effektivitet i nivå med verkan av heparin, som allmänt används inom terapin, men uppvisar i förhållan- de till heparin en avgjord fördel. Medan heparin vid oral administrering är inaktivt kan terapeutisk effekt uppnås med orala doser om 25 mg/kg av tripeptid-alde- hydsulfatet (men endast 50 mg/kg av karbaminsyraderiva- tet).
Tabell 3 Försök in vivo Erforderlig dos för terapeutisk effekta Peptid-aldehyd mg/kg/tim. mg/kg intravenös infusion kanin hund kanin hund kanin hund subkutant oralt D-Phe-Pro-Arg-H.2 CH3COOH - - - - 100 100 D-Phe-Pro-Arg-H.2 HCl - - - - - 100 D-Phe-Pro-Arg(CO0H)-H - 3,0 10,0 6,0 50 50 D-Phe-Pro-Arg-H.H2SOq 1,0 0,5 6,0 6,0 25 25 Heparin 0,6 0,5 5,0 2,0 - - a Den terapeutiska effekten utmärks av att den dos som krävs för att förlänga trombintiden i helblod är 1,5 - 2,5-faldig (Nies, A.S. /1978/ i Clinical Pharmacology/ Melmon, K.L. och Morrelli, F.F. Eds./ 2:a uppl. sid. 303 - 306, Macmillan Publ. Co. Inc. New York; och Versraete, M. och Verwilghen, R /1980/ i Drug Treat- ment, Principles and Practice of Clinical Pharmacolo- gy and Therapeutics, 2:a uppl., Avery G.S. Ed. /1980/ sid. 889 ~ 952, Edingburgh och London).
Toxicitetsdata för D-fenylalanyl-L-prolyl-L- -arginin-aldehydsulfat är även mera fördelaktiga än mot- H 10 15 20 25 30 35 40 453 509 svarande data för acetatet och karbaminsyraderivatet.
Data över den akuta toxiciteten återges i tabell 4 nedan. För tripeptid-aldehydsulfatet uppgick den aku- ta toxiciteten vid oral administrering till 2 g/kg.
Tabell 4 Data över akut toxicitet hos möss LDso mg/X9 Peptid-aldehyd intrav. intra- sub- oralt bolus per. kut. o-phe-Pra-Arg-n . zcn gcoon 9 30 - 960 o-Phe-Pro-Arg (coon) -na - - - 1200 0-Phe-Pro-Arg-n.H2so~ 4sb 230 1800 >2o0o Heparin Inga litteraturdata tillgängliga a Till följd av låg löslighet är toxicitetsdata erhållna vid andra administreringssätt än oral administrering relativt osäkra. b Vid intravenös infusion uppgick LDSÛ till 58 mg/kg hos kanin.
Om man betraktar den låga toxiciteten och hö- ga potensen hos D-fenylalanyl-L-prolyl-L~arginin-aldehyd- sulfat är det terapeutiska indexet, som innefattar båda och är den mest utmärkande indikatorn på det terapeutis- ka värdet av ett läkemedel, gynnsammare än för de övri- ga tripeptid~aldehydderivaten.
På basis av försök omfattande intravenös infu- sion pâ hundar fastställdes dosen för intravenös infusion till människa till 1 - 2 mg/kg/timme.
Det har visat sig att D-fenylalanyl-L-prolyl- -L-arginin-aldehydsulfat kan framställas medelst ett i och för sig känt förfarande genom att man underkastar bensyloxikarbonyl-D-fenylalanyl-L-prolyl-NG-bensyloxi- karbonyl-L-arginin-aldehyd (Z-D-Phe-Pro-Arg(Z)-H) hyd- rogenolys i närvaro av ekvivalenta mängder av svavelsy- ra. Vidare kan föreningen enkelt framställas med till- räcklig renhet utgående från dess syrakänsliga derivat 453 509 10 15 20 25 30 35 40 innehållande trifenylmetyl- eller t-alkyloxikarbonyl- skyddsgrupper, dvs utgående från t-butyloxikarbonyl-D- -fenylalanyl-L-prolyl-L-arginin-aldehydhemisulfat el- ler t-butyloxikarbonyl-D-fenylalanyl-L-prolyl-NG-kar- boxi-L-arginin-aldehyd med 1 - 12 N svavelsyra. Samti- digt har följande i och för sig kända metoder icke givit tillfredsställande resultat: a) Acidolys av t-butyloxikarbonylgruppen med svavelsyra upplöst i ättiksyra (Beyerman o.a.: Pep- tides, 1970 /Ed.; H. Nesvadba/, sid. 138, North Hol- land, Amsterdam, 1973). b) Direkt omvandling av D-Phe-Pro-Arg(CO0H)-H - karbaminsyraderivatet enligt belgiska patentskriften 880.844 med svavelsyra till det oskyddade tripeptid- -aldehydsulfatet. c) Omvandling av diverse andra oskyddade tri- peptid-aldehydsalter, exempelvis D-fenylalanyl-L-pro- lyl-L-arginin-aldehydacetatet enligt den ungerska pa- tentskriften 169.870, till motsvarande sulfat antingen med jonbytarharts eller med svavelsyra.
De produkter som erhålles med någon av me- toderna a-c ovan har visat sig uppvisa låg homogeni- tet och/eller stabilitet i vattenlösning.
Baserat på det ovan sagda avser uppfinningen D-fenylalanyl-L-prolyl-L-arginin-aldehydsulfat, som framställs utgående från D-fenylalanyl- -L-prolyl-L-arginin-aldehydhemisulfat eller D-fenylalany1-L-prolyl-NG-karboxi-L-argininaldehyd in- nehållande en syrakänslig skyddsgrupp vid den ändstâen- de aminogruppen, varvid den syrakänsliga ändstâende aminoskyddsgruppen eller eventuellt NG-karboxigruppen avlägsnas med 1 - 12 N svavelsyra, som används i 1 - 12 ekvivalenta mängder, och det erhållna fria tripeptid- -aldehydsulfatet isoleras.
Vid ett föredraget förfarande kondenseras L-argininlaktam, vars guanidinogrupp är skyddad med en bensyloxikarbonylgrupp, med t-butyl- oxikarbonyl-D-fenylalanyl-L-prolin, den erhållna bloc- kerade tripeptidlaktamen reduceras och bensyloxikarbo- nylgruppen vid guanidinogruppen i den erhållna skydda- l/II 1.1' 10 15 20 25 30 35 40 453 509 de tripeptid-aldehyden underkastas hydrogenolys i eta- nol eller tetrahydrofuran innehållande 30 - 40 % vat- ten, i närvaro av en ekvivalent mängd svavelsyra. Det erhållna tripeptid-aldehydhemisulfatet, som fortfaran- de är skyddat vid sin ändstående aminogrupp, upplöses i 8 - 12 ekvivalenter, företrädesvis 10 ekvivalenter, 4 - 6 N, företrädesvis 5 N svavelsyra, och upphettas zo - 40 minuter, företrädesvis ao minuter, vid 40 - 6o°c, företrädesvis SOOC, och lösningen neutraliseras däref- ter med kalciumkarbonat, filtreras och frystorkas före- trädesvis.
Den på så sätt framställda produkten kan eventuellt innehålla 4 - 6 % kalciumsulfat, vilket emellertid varken påverkar produktens biologiska akti- vitet eller dess terapeutiska användning.
Uppfinningen åskådliggörs närmare med dess följande utföringsexempel, RF-värdena i exemplen har fastställts medelst silikagel-tunnskiktskromatografi (Kieselgel G, Reanal, Budapest) i följande system: 1. Etylacetat-pyridin~ättiksyra-vatten - 480:20:6:11 2. Etylacetat-pyridin-ättiksyra-vatten - 60:20:6:11 3. Etylacetat-pyridin~ättiksyra-vatten - 30:20:6:11 Exempel 1 D-fenylalanyl-L-prolyl-L-arginin-aldehyd: sulfat 2,74 g (5 mmol) t-butyloxikarbonyl-D-fenyl- alanyl-L-prolyl-L-arginin-aldehydhemisulfat upplöstes i 5 ml vatten, 5 ml 10 N svavelsyra tillsattes under konstant omrörning och blandningen upphettades till SOOC. Lösningen omrördes 15 minuter vid 50°C, späddes därefter med 25 ml isvatten och dess pH inställdes på 6,5 med kalciumkarbonat (ca 2,25 g) under iskylning.
Det utfällda kalciumsulfatet avfiltrerades och tvätta- des två gånger med 5 ml vatten. Filtratet extraherades tvâ gånger med 10 ml 1 N butanol, koncentrerades till ca 30 ml, filtrerades, om så krävdes, och frystorkades. 10 15 20 25 30 35 40 10 453 509 Utbytet var 2,25 g (79%) av den i rubriken angivna pro- dukten innehållande 4,8% kalciumsulfat.
RF = 0,35 - 0,40 LaJ§° = -117 1 1 Analys: beräknat för C20H30O3N5.H2SO~.3 H2O.O,2CaSO~ (565,85) Beräknat: % C % H % N % SO~ % Ca % H20 42,45 6,77 14,85 20,37 1,41 9,55 Funnet: 42,2 6,9 14,85 19,8 1,3 9,75 Utgångsmaterialen syntetiserades enligt följan- O (c = 1, vatten) de förfarande: Steg 1 t-butyloxikarbonyl-D-fenylalanyl-L-prolyl- -NG-bensyloxikarbonyl-L-argininlaktam 8,6 g (22 mmo1) t-bucyloxikarbonyl-NG-bensyl- oxikarbonyl-L-argininlaktam (belgiska patentskriften 880.844) suspenderades i 20 ml etylacetat och vid 5°C och konstant omrörning tillsattes en lösning av 40 ml 4 M klorvätesyra i etylacetat. Reaktionsblandningen om- rördes 30 minuter under iskylning och späddes med 100 ml kallt etylacetat, den bildade fällningen avfiltrerades, tvättades med etylacetat och torkades under reducerat tryck i en exsickator över kaliumhydroxid. Den erhåll- na NG-bensyloxikarbonyl-L-arginin-laktamhydrokloriden upplöstes i 20 ml dimetylformamid och vid -1000 till- sattes 6,2 ml (44 mmol) trietylamin. Den bildade sus- pensionen sattes till följande blandanhydrid. 7,25 ml (20 mmol) t-butyloxikarbonyl-D-fe- nylalanyl-L-prolin (U. Ludescher och R. Schwyzer: selv. chim. Acta ss, 2052 /1972/) och 2,22 ml (20 mmol) N-metyl-morfolin upplöstes i 20 ml dimetylform- amid. Lösningen kylaes till -1s°c, 2,64 m1 (20 mmol) klormyrsyraisobutylester tillsattes under omrörning och därefter tillsattes efter 5 minuter ovan angivna lösning i dimetylformamid. Omrörningen fortsattes 1 timme vid -15°C och under 1 timme vid OOC och däref- ter späddes reaktionsblandningen med 30 ml bensen, de utfällda salterna avfiltrerades och tvättades två gånger med|10 ml bensen. Lösningen av bensen-dimetyl- formamid späddes med 50 ml vatten och faserna separe- /Jß IJ) f? 10 15 20 25 30 35 40 11 453 509 rades. Vattenskiktet extraherades två gånger med 10 ml bensen och därefter tvättades de kombinerade bensenex- trakten tre gånger med 30 ml av en 10% lösning av nat- riumkarbonat, 30 ml vatten, tre gånger med 30 ml 0,5 N svavelsyra och två gånger med 30 ml vatten och lösning- en indunstades under reducerat tryck och torkades där- efter över vattenfritt natriumsulfat. Indunstningsåter- stoden homogeniserades med petroleumeter, filtrerades, tvättades med petroleumeter och lufttorkades. Utbyte: 9,65 g (76%) av den i rubriken angivna produkten.
RF = 0,81 - 0,89.
Steg 2 t-butyloxikarbonyl-D-fenylalanyl-L-pro1yl- -NG-bensyloxikarbonyl-L-argininaldehyd 9,52 g (15 mmol) av tripeptidlaktamen från steg 1 upplöstes i 45 ml tetrahydrofuran och vid -20°C och under kraftig omrörning tillsattes 11,25 mmol li- tiumaluminiumhydrid i tetrahydrofuran (ca 28 ml av en 0,4 M lösning). Reduktionsförloppet följdes genom tunnskiktskromatografering CR; = 0,71 - 0,77 (laktam) och R; = 0,31 - 0,39 (aldehyd)]. Om så krävdes till- sattes en ytterligare portion av hydridlösningen. När reaktionen var avslutad surgjordes tetrahydrofuranlös- ningen försiktigt med 0,5 N svavelsyra till pH 3 och späddes därefter på ett sådant sätt att någon fällning icke erhölls (ca 100 ml). Vattenlösningen av tetrahyd- rofuran extraherades tre gånger med 75 ml metylenklo- rid och de kombinerade metylenkloridextrakten tvätta- des tre gånger med 10 ml av en 10% lösning av natrium- karbonat och därefter två gånger med 10 ml vatten. Me- tylenkloridlösningen torkades därefter över vattenfritt natriumsulfat och indunstades under reducerat tryck.
Indunstningsåterstoden upplöstes i 50 ml bensen och lösningen indunstades upprepade gånger under reducerat tryck. Därefter upprepades upplösningen och indunst- ningen ånyo. Indunstningsåterstoden upparbetades med eter, filtrerades, tvättades med dietyleter och luft- torkades. Utbyte: 6,9 g (72%) av den i rubriken angivna produkten. n; = 0,3 - 0,4. 10 15 20 25 30 35 40 12 453 509 Steg 3: t-butyloxikarbonyl-D-fenylalanyl-L-pro1yl-L- w -arginin-aldehydhemisulfat 6,4 g (10 mmol) skyddad tripeptidaldehyd från steg 2 upplöstes i en blandning av 50 ml vatten, 50 ml tetrahydrofuran och 10 ml 1 N svavelsyra och underkas- tades hydrogenolys i närvaro av 1 g av en 10% palladium- -träkolkatalysator. Reaktionsförloppet följdes medelst tunnskiktskromatografering ERÉ = 0,95 - 1,0 (tripeptid- aldehyden skyddad vid sin guanidinogrupp) och R; = 0,45 - 0,54 (oskyddad tripeptid-aldehyd)J. Efter full- bordad reaktion avfiltrerades katalysatorn och tvätta- des med 30 ml av en 50% vattenlösning av tetrahydrofu- ran och de kombinerade filtraten koncentrerades under reducerat tryck till ca 60 ml. Återstoden extraherades fyra gånger med n-butanol. n-butanolskikten kombinera- des och indunstades till torrhet under reducerat tryck.
Indunstningsåterstoden upparbetades med en blandning av dietyleter och diisopropyleter (1:1), filtrerades, tvättades med ovan angivna blandning och torkades där- efter under reducerat tryck i en exsickator. Utbyte: 4,4 g (80%) av den i rubriken angivna föreningen.
R; = 0,45 - 0,54 m? = -es i 1° Analys: beräknat för C25H38O5N5.0,5 H¿SO~ (c = 1, vatten). (551,64) Beräknat: % C % H % N % SOQ 54,43 7,13 15,23 8,71 Funnet: 54,5 7,3 15,2 8,7 Exemgel 2 D-fenylalanyl-L-prolyl-L-arginin-aldehyd- sulfat 2,85 g (5 mmol) t-butyloxikarbonyl-D-fenyl- alanyl-L-prolyl-NG-karboxi-L-argininaldehyd upplöstes i 5 ml vatten och 5 ml 10 N svavelsyra tillsattes och blandningen upphettades till 50°C. Lösningen omrördes 15 minuter vid 50°C och späddes därefter med 25 ml is- vatten och dess pH inställdes på 6,5 med ca 1,6 g fast L! Ü.) kalciumhydroxid under iskylning. Det utfällda kalcium- 10 15 20 25 30 35 40 13 453 509 sulfatet avfiltrerades och tvättades två gånger med 5 ml vatten. Filtratet extraherades två gånger med 10 ml n-butanol, koncentrerades under reducerat tryck till ca 30 ml, filtrerades, om så krävdes, och frystorka- des därefter. Utbyte: 2,3 g (81%) av den i rubriken angivna föreningen innehållande 4,9% kalciumsulfat.
R; = 0,35 - 0,40 LuJÉ° = -117 1 1 Utgângsmaterialet framställdes genom följan- ° (c = 1, vatten). de förfarande: 6,4 g (10 mmol) t-butyloxikarbonyl-D-fenyl- alanyl-L-prolyl-NG-bensyloxikarbonyl-L-argininaldehyd från exempel 1, steg 2, upplöstes i 100 ml av en 75% vattenlösníng av etanol och underkastades hydrogenolys i närvaro av 1 g av en 10% palladium-träkolkatalysator.
Reaktionsförloppet följdes medelst tunnskiktskromato-' grafering [RÉ = 0,90 - 0,95 (skyddad tripeptid-alde- nya) och 0,45 - o,ss (NG-karboxiaerivat)J. mot slutet av reaktionen avfiltrerades katalysatorn och tvätta- des med 30 ml vatten och filtratet koncentrerades till 30 - 40 ml under reducerat tryck. Återstoden späddes med 100 ml vatten, extraherades två gånger med 20 ml metylenklorid och frystorkades. Utbyte 5,1 g (85%) av den i rubriken angivna píodukten.
R; = 0,45 - 0,55.
Aminosyraanalys: Phe = 0,96; Pro = 1 (referensaminosyra).
Molvikt enligt aminosyraanalysen: 570 Exemgel 3 Framställning av en farmaceutisk komposition Ett 2-ampullpreparat lämpligt för 6 eller 12 timmars intravenös infusion framställdes enligt följan- de: 420 - 840 mg D-fenylalanyl-L-prolyl-L-arginin- -aldehydsulfat och 40 - 80 mg humanalbumin underkastades gemensam frystorkning. Innehållet i den frystorkade am- pullen upplöstes före användning i steril, bakteriefri isotonisk saltlösning (100 - 200 ml).

Claims (2)

1. 453 509 1% Patentkrav l. I vattenlösning synnerligen stabilt D-fenylalanyl-L- propyl-L-arginín-aldehydsulfat.
2. Antikoagulerande farmaceutisk komposition, k ä n n e - t e c k n a t a v att den innefattar D-fenylalanyl-L- prolyl-L-arginin-aldehydsulfat som aktiv beståndsdel till- sammans med farmaceutiska bärare. “fb
SE8200135A 1981-01-13 1982-01-12 D-fenylalanyl-l-prolyl-l-arginin-aldehydsulfat och farmaceutisk komposition innehallande detsamma SE453509B (sv)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HU8170A HU184368B (en) 1981-01-13 1981-01-13 Process for preparing d-phenyl-alanyl-l-propyl-l-arginine-ald ehyde-shulphate

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SE8200135L SE8200135L (sv) 1982-07-14
SE453509B true SE453509B (sv) 1988-02-08

Family

ID=10947750

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE8200135A SE453509B (sv) 1981-01-13 1982-01-12 D-fenylalanyl-l-prolyl-l-arginin-aldehydsulfat och farmaceutisk komposition innehallande detsamma

Country Status (23)

Country Link
US (2) US4399065A (sv)
JP (1) JPS57181046A (sv)
AT (1) AT383352B (sv)
AU (1) AU544492B2 (sv)
BE (1) BE891708A (sv)
CA (1) CA1182111A (sv)
CH (1) CH649305A5 (sv)
DE (1) DE3200812C2 (sv)
DK (1) DK151341C (sv)
ES (1) ES8301205A1 (sv)
FI (1) FI74024C (sv)
FR (1) FR2497799B1 (sv)
GB (1) GB2091270B (sv)
HU (1) HU184368B (sv)
IL (1) IL64761A (sv)
IT (1) IT1210842B (sv)
MX (1) MX156383A (sv)
NL (1) NL8200105A (sv)
NO (1) NO158021C (sv)
PL (1) PL133451B1 (sv)
PT (1) PT74268B (sv)
SE (1) SE453509B (sv)
SU (1) SU1442078A3 (sv)

Families Citing this family (64)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HU184368B (en) * 1981-01-13 1984-08-28 Gyogyszerkutato Intezet Process for preparing d-phenyl-alanyl-l-propyl-l-arginine-ald ehyde-shulphate
AU573735B2 (en) * 1983-02-07 1988-06-23 Aktiebolaget Hassle Peptide analogue enzyme inhibitors
EP0124317B1 (en) * 1983-04-27 1990-04-11 Ici Americas Inc. Proline derivatives
HU192646B (en) * 1984-12-21 1987-06-29 Gyogyszerkutato Intezet Process for preparing new n-alkyl-peptide aldehydes
DE3505555A1 (de) * 1985-02-18 1986-09-11 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Neue oligopeptidylargininolderivate und deren homologe, verfahren zu deren herstellung, deren verwendung und diese enthaltende mittel
DE3606480A1 (de) * 1986-02-28 1987-09-03 Behringwerke Ag Oligopeptidylnitrilderivate, diese enthaltende mittel, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
US5023236A (en) * 1988-04-07 1991-06-11 Corvas, Inc. Factor VII/VIIA active site inhibitors
US5332726A (en) * 1989-09-29 1994-07-26 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Antithrombotic peptides and pseudopeptides
US5064814A (en) * 1990-04-05 1991-11-12 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Anti-thrombotic peptide and pseudopeptide derivatives
GB2244994B (en) * 1990-06-12 1994-01-19 Richter Gedeon Vegyeszet Improved process for the preparation of tripeptide aldehydes
US5430023A (en) * 1990-09-28 1995-07-04 Eli Lilly And Company Tripeptide antithrombotic agents
CA2075154A1 (en) * 1991-08-06 1993-02-07 Neelakantan Balasubramanian Peptide aldehydes as antithrombotic agents
US5252566A (en) * 1991-11-12 1993-10-12 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5416093A (en) * 1991-11-12 1995-05-16 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5250660A (en) * 1991-11-12 1993-10-05 Eli Lilly And Company Peptide purification process
US5492895A (en) * 1992-02-14 1996-02-20 Corvas International, Inc. Inhibitors of thrombosis
DK0629212T3 (da) * 1992-03-04 1998-05-25 Gyogyszerkutato Intezet Antikoagulerende peptidderivater og farmaceutiske præparater indeholdende disse samt fremgangsmåde til fremstilling deraf.
US5582762A (en) * 1992-08-14 1996-12-10 The Procter & Gamble Company Liquid detergents containing a peptide trifluoromethyl ketone
US5576283A (en) * 1992-08-14 1996-11-19 The Procter & Gamble Company Liquid detergents containing a peptide aldehyde
DE69217934T2 (de) * 1992-08-14 1997-09-04 Procter & Gamble Peptidaldehydhaltige flüssige Waschmittel
US5371072A (en) * 1992-10-16 1994-12-06 Corvas International, Inc. Asp-Pro-Arg α-keto-amide enzyme inhibitors
IL108031A0 (en) * 1992-12-22 1994-04-12 Procter & Gamble Difluoro pentapeptide derivatives and pharmaceutical compositions containing them
CA2143533A1 (en) * 1994-03-04 1995-09-05 Kenneth D. Kurz Antithrombotic agents
US5602101A (en) * 1994-03-04 1997-02-11 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5439888A (en) * 1994-03-04 1995-08-08 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5885967A (en) * 1994-03-04 1999-03-23 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5488037A (en) * 1994-03-04 1996-01-30 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
ZA951618B (en) * 1994-03-04 1996-08-27 Lilly Co Eli Antithrombotic agents
US5726159A (en) * 1994-03-04 1998-03-10 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5705487A (en) * 1994-03-04 1998-01-06 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5484772A (en) * 1994-03-04 1996-01-16 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5436229A (en) * 1994-03-04 1995-07-25 Eli Lilly And Company Bisulfite adducts of arginine aldehydes
US5707966A (en) * 1994-03-04 1998-01-13 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5932733A (en) * 1994-06-17 1999-08-03 Corvas International, Inc. 3-amino-2-oxo-1-piperidineacetic derivatives containing an arginine mimic as enzyme inhibitors
US5656645A (en) * 1994-12-13 1997-08-12 Corvas International, Inc. Aromatic heterocyclic derivatives as enzyme inhibitors
US5658930A (en) * 1994-12-13 1997-08-19 Corvas International, Inc. Aromatic heterocyclic derivatives as enzyme inhibitors
US5914319A (en) * 1995-02-27 1999-06-22 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5710130A (en) * 1995-02-27 1998-01-20 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US6069130A (en) * 1995-06-07 2000-05-30 Cor Therapeutics, Inc. Ketoheterocyclic inhibitors of factor Xa
US5919765A (en) * 1995-06-07 1999-07-06 Cor Therapeutics, Inc. Inhibitors of factor XA
US5721214A (en) * 1995-06-07 1998-02-24 Cor Therapeutics, Inc. Inhibitors of factor Xa
US6022861A (en) * 1995-06-07 2000-02-08 Cor Therapeutics, Inc. Ketoheterocyclic inhibitors of factor Xa
US6046169A (en) * 1995-06-07 2000-04-04 Cor Therapeutics, Inc. Inhibitors of factor XA
US6069232A (en) * 1995-10-02 2000-05-30 Hoechst Marion Roussel, Inc. Polyfluoroalkyl tryptophan tripeptide thrombin inhibitors
DE19605039A1 (de) 1996-02-12 1997-08-14 Hoechst Ag Verfahren zur Herstellung von Oligopeptid-Aldehyden
US5739354A (en) * 1996-03-26 1998-04-14 Hoechst Marion Roussel, Inc. Process for the preparation of N-methyl-D-phenylalanyl-N- 1- 3- (aminoiminomethyl)amino!propyl!-3,3-difluoro-2-oxohexyl!-L-prolinamide
US6245743B1 (en) 1996-06-05 2001-06-12 Cor Therapeutics, Inc. Inhibitors of factor Xa
IT1283467B1 (it) * 1996-07-19 1998-04-21 Menarini Farma Ind Derivati di cicloalcani 1,2 sostituiti come inibitori della trombina, procedimento per la loro preparazione e loro impiego in formulazioni
US6165966A (en) * 1996-09-24 2000-12-26 The Procter & Gamble Company Liquid detergents containing proteolytic enzyme and protease inhibitors
BR9712114A (pt) 1996-09-24 1999-08-31 Procter & Gamble Composições detergente líquidas para lavanderia contendo enzima proteolítica e inibidores de protease.
US6162783A (en) * 1996-09-24 2000-12-19 The Procter & Gamble Company Liquid detergents containing proteolytic enzyme and protease inhibitors
US7090455B2 (en) * 1998-11-13 2006-08-15 Pneutools, Incorporated Stacked assembly of roofing caps
EP2224949B1 (en) * 2007-11-30 2012-10-17 University of Debrecen Use of urokinase type plasminogen activator inhibitors for the treatment of corneal disorders
EP2343310A1 (en) * 2010-01-08 2011-07-13 Novozymes A/S Serine hydrolase formulation
KR101956895B1 (ko) 2011-07-01 2019-03-12 노보자임스 에이/에스 안정화된 서브틸리신 조성물
US20170121646A1 (en) 2014-07-03 2017-05-04 Novozymes A/S Improved Stabilization of Non-Protease Enzyme
DE102015208655A1 (de) 2015-05-11 2016-11-17 Henkel Ag & Co. Kgaa Enzymstabilisatoren
DE102015210828A1 (de) 2015-06-12 2016-12-15 Henkel Ag & Co. Kgaa Phosphatfreies flüssiges Geschirrspülmittel
DE102016209406A1 (de) 2016-05-31 2017-11-30 Henkel Ag & Co. Kgaa Stabilisierte Enzym-haltige Wasch- und Reinigungsmittel
DE102017219993A1 (de) 2017-11-09 2019-05-09 Henkel Ag & Co. Kgaa Enzymhaltiges Wasch- oder Reinigungsmittel
DE102018129277A1 (de) 2018-11-21 2020-05-28 Henkel Ag & Co. Kgaa Mehrkomponenten Wasch- oder Reinigungsmittel enthaltend eine Chinon-Oxidoreduktase
CN114008068A (zh) 2019-07-01 2022-02-01 巴斯夫欧洲公司 稳定酶的肽缩醛
EP3770237A1 (de) 2019-07-22 2021-01-27 Henkel AG & Co. KGaA Wasch- und reinigungsmittel mit verbesserter enzym-stabilität
JP2023544111A (ja) 2020-09-22 2023-10-20 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 第二の酵素を含む、プロテアーゼとプロテアーゼ阻害薬との改善された組合せ

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3826793A (en) * 1968-10-21 1974-07-30 Bofors Ab Anticoagulant peptides related to fibrino peptides
HU169870B (sv) * 1974-06-14 1977-02-28
HU177098B (en) * 1979-01-04 1981-07-28 Gyogyszerkutato Intezet Process for producing new peptidyl-n-carboxy-l-arginin-a
HU184368B (en) * 1981-01-13 1984-08-28 Gyogyszerkutato Intezet Process for preparing d-phenyl-alanyl-l-propyl-l-arginine-ald ehyde-shulphate

Also Published As

Publication number Publication date
AT383352B (de) 1987-06-25
FR2497799A1 (fr) 1982-07-16
BE891708A (fr) 1982-07-07
IT1210842B (it) 1989-09-29
DE3200812C2 (de) 1986-09-18
PT74268A (en) 1982-02-01
GB2091270A (en) 1982-07-28
PT74268B (en) 1983-06-27
JPS57181046A (en) 1982-11-08
GB2091270B (en) 1984-08-22
PL234696A1 (sv) 1982-09-13
JPH0251920B2 (sv) 1990-11-08
US4478745A (en) 1984-10-23
FR2497799B1 (fr) 1985-06-28
FI74024B (fi) 1987-08-31
AU544492B2 (en) 1985-05-30
AU7944682A (en) 1982-07-22
CH649305A5 (de) 1985-05-15
NL8200105A (nl) 1982-08-02
US4399065A (en) 1983-08-16
DK151341B (da) 1987-11-23
DK9382A (da) 1982-07-14
SE8200135L (sv) 1982-07-14
DE3200812A1 (de) 1982-08-12
ES508637A0 (es) 1982-11-16
ES8301205A1 (es) 1982-11-16
NO820083L (no) 1982-07-14
PL133451B1 (en) 1985-06-29
IL64761A0 (en) 1982-03-31
HU184368B (en) 1984-08-28
MX156383A (es) 1988-08-16
ATA9782A (de) 1986-11-15
SU1442078A3 (ru) 1988-11-30
IL64761A (en) 1985-01-31
IT8219074A0 (it) 1982-01-12
NO158021B (no) 1988-03-21
CA1182111A (en) 1985-02-05
FI74024C (sv) 1987-12-10
FI820086L (fi) 1982-07-14
NO158021C (no) 1988-06-29
DK151341C (da) 1988-05-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SE453509B (sv) D-fenylalanyl-l-prolyl-l-arginin-aldehydsulfat och farmaceutisk komposition innehallande detsamma
US4388304A (en) Angiotensin-II analogues with antagonizing effects, containing an ester group in position 8, and a process for the preparation thereof
US4316889A (en) Novel peptidyl-arginine aldehyde derivatives and process for the preparation thereof
US4024248A (en) Peptides having LH-RH/FSH-RH activity
US4612365A (en) Medicaments containing alpha 1-thymosin and having an immuno regulatory action and alpha 1-thymosin fragments
US4910296A (en) Medicaments containing alpha 1 thymosin fragments and having an immunostimulant action, and fragments of alpha 1 thymosin
EP0112656B1 (en) Peptide compounds
US3345354A (en) Intermediate in the synthesis of alpha1-24 acth
SE452326B (sv) Salter av agmatinderivat och farmaceutiska preparat innehallande desamma
US3479333A (en) D-phe**7-alpha**1-10-a.c.t.h. and derivatives and complexes thereof
EP0249169B1 (de) Peptide mit Einfluss auf die Diurese und Natriurese, Verfahren zu ihrer Herstellung, diese enthaltende Mittel und ihre Verwendung
US4371466A (en) Mammalian collagenase inhibitors
US4209442A (en) Angiotensin II analogs and process for the preparation thereof
US3422083A (en) Carbazoyl peptides
IE42369B1 (en) Peptide derivatives having an antihypertensive effect and process for their manufacture
US3770715A (en) Acth active peptides having d serine as first aminoacid from n terminus and l ornithine as11 aminoacid
US4330532A (en) Angiotensin-II analogues with antagonizing effects, containing an α-hydroxycarboxylic acid residue in position 8, and a process for the preparation thereof
SE469032B (sv) Gonadoliberinderivat och farmaceutisk komposition innehaallande dessa
US4405607A (en) Novel pentapeptides, processes for their production, pharmaceutical compositions comprising said pentapeptides and their use
US4487764A (en) New peptides and a process for their preparation
US3247182A (en) Heneicosapeptides and intermediates for the manufacture thereof
US4117117A (en) Tridecapetide having gastrin effect
US3755286A (en) Gly{11 {11 -achth-active peptides
DE1493559C3 (de) Neue Peptide mit adrenocorticotroper Wirkung und Verfahren zu ihrer Herstellung
Mezö et al. New Gaba-containing analogues of human Growth Hormone-Releasing Hormone (1–30)-amide: I. Synthesis and in vitro biological activity

Legal Events

Date Code Title Description
NAL Patent in force

Ref document number: 8200135-5

Format of ref document f/p: F

NUG Patent has lapsed

Ref document number: 8200135-5

Format of ref document f/p: F