SE426697B - Forfarande for framstellning av nya terapeutiskt aktiva derivat av azetiden-2-karboxylsyra, prolin och pipekolinsyra - Google Patents

Description

8104660-9 Uppfinningen omfattar inom sina vidare aspekter prolin och därmed besläktade derivat med formeln I. Inom denna breda grupp är med hänsyn till egenskaperna vid undergrupper vissa lämpligare än andra.

Stereoisomerer vari prolinen föreligger i L-formen är speciellt lämpliga.

De lägre alkylgrupperna representerade av någon av vari- ablerna omfattar raka och grenade kolvätegrupper från metyl till heptyl, exempelvis metyl, etyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, t-butyl, pentyl, isopentyl och liknande. De lägre alkoxigrupperna är av samma typ med l-7 kolatomer bundna vid syre, exempelvis metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, isobutoxi, t-butoxi och liknande.

Cl-C4-grupperna, särskilt Cl-C2-grupperna av båda typerna är lämpliga.

Fenylmetyl är den lämpligaste fenyl-(lägre alkyl)-gruppen.

Amino-karboxi-(lägre alkyl)-grupperna uppvisar en amino- och en karboxigrupp på en lägre alkylgrupp, såsom de ovan beskrivna, företrädesvis på en och samma kolatom, exempelvis på kolatomen i ändställningen, såsom i den föredragna 2-amino-2-karboxietyl-gruppen, Produkterna med formeln I och de lämpligaste undergrup- perna kan framställas enligt olika syntesmetoder.

Produkterna enligt uppfinningen framställes genom acylering av en förening med formeln 3 I HZC-fl (CIUm l l HN __ CH-- COR med en syra med formeln R Rl V* I Y _- s - (c11)n- cn - coon eller en därmed likvärdig kemisk förening, vari Y är en skyddande grupp av standardtyp, som efteråt avlägsnas enligt konventionella metoder för att regenerera väteatomen. De skyddande grupperna som kan användas är välkända och innefattar bl.a. lägre alkanoyl, fenyl- (lägre alkanoyl), bensoyl, bensyl, metoxibensyl, trifenylmetyl, tetrahydropyranyl, acetamidometyl eller andra svavelskyddande grupper. Avlägsnandet av den skyddande gruppen kan ske på konventio- 8104660-9 nellt sätt såsom genom behandling med het trifluorättisyra, kall trifluormetansulfonsyra, kvicksilveracetat, natrium i flytande ammoniak, zink och saltsyra, eller liknande. En översikt av meto- derna framgår av "Methoden der Organischen Chemie“ (Houben-Weyl), vol. XV, del I, sid. 736 ff. (1974). Vanligtvis är den skyddande gruppen Y en lägre alkanoyl- eller bensoylgrupp, och avlägsnandet sker genom standardhydrolys, såsom exempelvis ammonolys med alko- holhaltig ammoniak eller koncentrerad ammoniumhydroxidlösning, eller alkalisk hydrolys med en vattenhaltig metallhyroxid såsom natriumhydroxid.

Produkter med formeln I uppvisar en eller flera asymmetriska kolatomer. När Rl, R3 och R4 icke är väte, är den kolatom vid vilken nämnda substituent är bunden asymmetrisk, Dessa kolatomer indikeras med en asterisk i formeln I. Föreningarna existerar således i ste- reoisomera former i racemiska blandningar därav. Samtliga dessa lig- ger inom ramen för uppfinningen. Vid nämnda syntes kan man använda racematet eller någon av enantiomererna såsom utgângsmaterial. När det racemiska utgångsmaterialet användes vid den syntetiska proce- duren, kan de i produkten erhållna stereoisomererna separeras enligt konventionella kromatografiska eller fraktionella kristallisations- metoder. I allmänhet utgör L-isomeren med avseende på kolatomen i aminosyran den lämpligaste isomera formen. Även D-isomeren med av- seende på alfa-kolatomen i acylsidokedjan (dvs. den kolatom som uppbär Rl) är lämplig.

Föreningarna enligt uppfinningen bildar basiska salter med olika oorganiska och organiska baser, vilka även ligger inom ramen för uppfinningen. Sådana salter omfattar ammoniumsalter, alkalime- tallsalter, såsom natrium- och kaliumsalter, jordalkalimetallsalter, såsom kalcium- och magnesiumsalter, salter med organiska baser, såsom dicyklohexylaminsalt, bensatin, N-metyl-D-glukamin, hydrabamin- salter, salter med aminosyror, såsom arginon, lysin och liknande.

De icke-toxiska, fysiologiskt godtagbara salterna är särskilt lämp- liga, ehuru andra salter även är användbara, såsom för isolering eller rening av produkten, vilket åskådliggöres i exemplen beträf- fande dicyklohexylaminsaltet.

Salterna bildas på konventionellt sätt genom omsättning av den fria syraformen av produkten med en eller flera ekvivalenter av ifrågavarande bas, som tillhandahåller den önskade katjonen i ett lösningsmedel eller medium vari saltet är olösligt, eller i vatten och eliminering av vattnet genom frystorkning. Genom neutralisering av 8104660-9 saltet med en olöslig syra såsom ett katjonbytarharts i väteformen (såsom polystyrensulfonsyraharts, exempelvis DowexR 50, eller med en vattenhaltig syra och extraktion med ett organiskt lösningsmedel, såsom etylacetat, diklormetan eller liknande, kan man erhålla den fria syraformen och eventuellt ett annat salt.

Ytterligare experimentella detaljer finner man i exemplen, vilka visar de lämpligaste utföringsformerna och även utgör model- ler för framställningen av andra föreningar inom klassen.

Föreningarna enligt uppfinningen inhiberar överföringen av dekapeptiden angiotensin I till angiotensin II och är därför användbar för reduktion eller lindring av angiotensin-beroende hy- pertension. Verkan av enzymet renin på angiotensinogen, ett pseudo- globulin i blodplasma, ger angiotensin I. Detta överföres med angio- tensinöverförande enzym (ACE) till angiotensin II. Detta är en aktiv pressorsubstans, som förmodats utgöra det förorsakande medlet vid olika former av hypertension hos olika däggdjursarter, såsom råtta och hund. Föreningarna enligt uppfinningen ingriper i sekvensen angiotensin (renin)-à angiotensin I -% angiotensin II genom att in- hibera angiotensinöverförande enzym och reduktion eller eliminering av bildningen av pressorsubstansen angiotensin II. Genom administra- tion av komposition, innehållande en av eller en kombinaiton av för- eningarna med formeln I eller ett fysiologiskt godtagbart salt därav kan man således lindra angiotensinberoende hypertension hos däggdjur vilka lider därav. En enkeldos eller företrädesvis 2-4 delade doser, tillhandahållna på en basis av ungefär 0,1-100 mg per kg och dag, företrädesvis ungefär l-50 mg per kg och dag är lämplig för reduk- tion av blodtrycket på vid djurmodellförsök indikerat sätt; se S L Engel, T R Schaeffer, M H Waugh och B Rubin, Proc. Soc. Exp. Biol.

Med. l43, 483 (1973). Substansen administreras företrädesvis oralt, men parenterala administrationsvägar, såsom subkutan, intramuskulär, intravenös eller intraperitoneal administration kan även tillämpas.

Föreningarna kan användas för reduktion av blodtrycket genom att beredas i form av kompositioner, såsom tabletter, kapslar eller tinkturer och mixturer för oral administration eller i sterila lösningar eller suspensioner för parenteral administration. Ungefär 10-500 mg av en förening eller blandning av föreningar med formeln I eller ett fysiologiskt godtagbart salt därav blandas med en fysiolo- giskt godtagbar bärare, excipient, bindemedel, konserveringsmcdel, stabilisator, smaksättningsmedel, etc., i en enhetsdoseringsform en- ligt vedertagen farmaceutisk praxis. Mängden aktiv substans i dessa 8104660-9 kompositioner eller preparat är sådan att en lämplig dosering inom det angivna intervallet erhålles.

Exempel på adjuvanter som kan införlivas i tabletter är: ett bindemedel, såsom dragant, akacia, majsstärkelse eller gelatin, en excipient, såsom dikalciumfosfat, ett desintegreringsmedel, såsom majsstärkelse, potatisstärkelse, alginsyra och liknande, ett smörj- medel, såsom magnesiumstearat, ett sötningsmedel, såsom sackaros, laktos eller sackarin, ett smaksättningsmedel, såsom pepparmyntolja, olja från vintergröna eller körsbär. När doseringsenheten utgöres av en kapsel kan den förutom material av nämnda typ innehålla en fly- tande bärare, såsom en fet olja. Olika andra material kan vara när- varande såsom beläggningar eller för att på annat sätt modifiera den fysikaliska formen av doseringsenheten. Således kan exempelvis tab- letter beläggas med shellack, socker eller bådadera. En syrup, tinktur eller mixtur kan innehålla den aktiva föreningen, sackaros såsom söt- ningsmedel, metyl- och propylparabener såsom konserveringsmedel, ett färgämne och smaksättningsmedel, såsom körsbärs- eller apelsinarom.

Sterila kompositioner för injektion kan beredas enligt kon- ventionell farmaceutisk praxis genom upplösning eller suspendering av den aktiva substansen i en bärare, såsom vatten för injektion, en vegetabilisk olja, kokosolja, jordnötsolja, bomullsfröolja, etc., el- ler en syntetisk, fettartad bärare, såsom etyloleat eller liknande.

Buffertmedel, konserveringsmedel, antioxidanter och liknande kan in- förlivas efter behov.

Uppfinningen åskådliggöres närmare medelst följande exempel, vari de angivna temperaturerna avser Celsius-grader.

Exempel l -(2-bensoyltioacetyl)-L-prolin 5,75 g L-prolin löses i 50 ml lN natriumhydroxid och lös- ningen kyles i ett isvattenbad. 26 ml 2N natriumhydroxid och 5,65 g kloracetylklorid tillsättes och blandningen omröres kraftigt tre tim- mar vid rumstemperatur. En suspension av 7,5 g tiobensoesyra och 4,8 g kaliumkarbonat i 50 ml vatten tillsättes. Efter 18 timmars omrörning vid rumstemperatur surgöres reaktionsblandningen och extrahcras med etylacetat. Etylacetatskiktet tvättas med vatten, torkas över mag- nesiumsulfat och koncentreras till torrhet i vakuum. Återstoden (l4,6 g) löses i 150 ml etylacetat och ll ml dicyklohexylamin till- sättes. Kristallerna avfiltreras och omkristalliseras ur etylacetat, utbyte 5,7 g, smältpunkt 151-1520. För överföring av saltet till sy- ran löses kristallerna i en blandning av 100 ml 5%-igt kaliumvätesul- fat i vattenlösning och 300 ml etylacetat. Den organiska fasen tvättas _L-prolinen i exempel l erhåller man titelföreningen._ 8104660-9 en gång med vatten, torkas över magnesiumsulfat och koncentreras till torrhet i vakuum, utbyte 3,45 g.

Bxemnel 2 1-(2-merkantoacetyl)-L-prolin _ 3,4 g l-(2-bensoyltioacetyl)-L-prolin löses i en blandning av l0,5 ml vatten och 6,4 ml koncentrerad ammoniak. Efter en timme utspädes reaktionsblandningen med vatten och filtreras. Filtratet extraheras med etylacetat och surgöres därefter med koncentrerad saltsyra, mättas med natriumklorid och extraheras två gånger med etylacetat. Etylacetatextrakten tvättas med mättad natriumklorid- lösning och koncentreras till torrhet, utbyte l,5 g. Titelföreningen kristalliseras ur etylacetat, smältpunkt 133-l35°.

Exempel 3 l-(2-bensoyltioacetyl)-L-prolinmetylester l-(2-bensoyltioacetyl)-L-prolin, erhâllen i exempel l, löses i metanol och en eterlösning av diazometan tillsättes, tills en permanent gul färg erhålles. Efter 15 minuter tillsättes nâgra få droppar ättiksyra och lösningsmedlet avlägsnas i vakuum för bild- ning av titelföreningen.

Exemoel 4 l-(2-merkaptoacetyl)-L-prolinamid Produkten från exempel 3 löses i 10%-ig ammoniak i meta- nol och lösningen förvaras vid rumstemperatur i en tryckflaska. När tunnskiktskromatografisk analys indikerar att två esterfunktioner har ammonolyserats, koncentreras reaktionsblandningen till torrhet för bildning av titelföreningen.

Exempel 5 l-(2-bensovltioacetyl)-L-hydroxiprolin Genom att använda L-hydroxiprolin i stället för L-prolinen i exempel l erhåller man titelföreningen.

Exemoel 6 l-(2-merkaptoacetyl)-L-hydroxiprolin Genom att blanda produkten från exempel 5 med ammoniak en- ligt exempel 2 erhåller man titelföreningen.

Exempel 7 I l-(2-bensovltioacetyl)-L-azetidin-2-karboxylsyra Genom att använda L-azetidin-2-karbonsyra i stället för 8104660-9 Exempel 8 1-(2-merkaotoacetvl)-L-azetidin-2-karboxvlsyra Genom att behandla produkten från exempel 7 med ammoniak enligt exempel 2 erhåller man titelföreningen.

Exempel 9 l-(2-bensoyltioacetyl)-L-pipekolinsyra Genom att använda L-pipekolinsyra i stället för L-prolinen i exempel l erhåller man titelföreningen.

Exempel 10 l-(2-merkaptoacetyl)-L-pipekolinsyra Genom att behandla produkten från exempel 9 med ammoniak enligt exempel 2 erhåller man titelföreningen.

Exempel l_]¿ l-(2-bensoyltiopropanoyl)-L-prolin 5,75 g L-prolin löses i 50 ml lN natriumhydroxid i vatten coh lösningen kyles i ett isbad under omrörning. 25 ml 2N natrium- hydroxid och 8,57 g 2-brompropionylklorid tillsättes i nämnd ord- ningsföljd och blandningen avlägsnas från isbadet och omröres en timme vid rumstemperatur. En blandning av 7,5 g tiobensoesyra och 4,8 g kaliumkarbonat i 50 ml vatten tillsättes och blandningen om- röres över natten vid rumstemperatur. Efter surgöring med koncentre- rad saltsyra extraheras vattenlösningen med etylacetat och den orga- niska fasen tvättas med vatten, Äterstoden (l4,7 g) kromatograferas på en pelare av 440 g silikagel med en blandning av bensen/ättiksyra (7:l). De fraktioner som inne- håller det önskade materialet sammanföres, koncentreras till torr- het och återstoden utfälles två gånger med eter/hexan och överföres till dicyklohexylaminsalt i eter/hexan, utbyte 9,4 g, smältpunkt (l42O), 148-l56°. Dicyklohexylaminsaltet överföres åter till syran enligt exempel l, utbyte 5,7 g.

Exempel 12 l-(2-merkaptopropanoyl)-L-prolin 5,7 g l-(2-bensoyltiopropanoyl)-L-prolin löses i en bland- ning av 12 ml vatten och 9 ml koncentrerad ammoniumhydroxid under omrörning. Efter en timme utspädes blandningen med l0 ml vatten och filtreras. Filtratet extraheras två gånger med etylacetat, koncen- treras till l/3 av den ursprungliga volymen, surgöres med koncen- trerad saltsyra och oxtraheras med etylacctat. Den organiska fasen tvättas med mättad natriumklorid, torkas och koncentreras till torr- het i vakuum. Återstoden, l-(2-merkaptopropanoyll-L-prolin, kristal- liseras ur etylacetat/hexan, utbyte 3 g, smältpunkt (1050), llß-1200. torkas och koncentreras till torrhet. 8104660-9 Exemgel l3 l-(3-acetyltiopropanovl)-L-orolin-tert.-butylester 5,13 g L-prolin-tert.-butylester löses i 40 ml diklormetan *och lösningen kyles i isvatten. En lösning av 6,l8_g dicyklohexyl- karbodiimid i 20 ml diklormetan tillsättes, omedelbart följd av 4,45 g- 3-acetyltiopropibnsyra. Efter 15 minuters omrörning i ett isvattenbad och 16 timmar vid rumstemperatur avfiltreras fällningen och filtratet koncentreras till torrhet i vakuum. Återstoden löses i etylacetat och tvättas till neutral reaktion. Det organiska skiktet torkas över magnesiumsulfat och koncentreras till torrhet i vakuum för bildning av 9,8 g av titelföreningen.

Exemgel 14 l-(3-acetvltiopropanoyl)-L-prolin 4,7 g l-(3-acetyltiopropanoyl)-L-prolin-t-butylester löses i en blandning av 34 ml anisol och 68 ml trifluorättiksyra och bland- ningen upprätthålles en timme vid rumstemperatur. Lösningsmedlen av- lägsnas i vakuum och återstoden utfälles flera gånger ur eter/hexan. Återstoden (3,5 g) löses i 25 ml acetonitril och 2,8 ml dicyklohexyl- amin tillsättes. Det kristallina saltet avfiltreras och omkristalli- seras ur isopropanol. Utbyte 3,8 g, smältpunkt 176-1770. Saltet över- föres åter till l-(3-acetyltiopropanoyl)-L-prolin enligt exempel l, utbyte 1,25 g, smältpunkt 89-900 (etylacetat/hexan).

Exemoel 15 l-(3-merkaptopronanovl)-L-orolin-tert.-butylester En lösning av 3,42 g L-prolin-tert.-butylester i l0 ml torr tetrahydrofuran, kyld i ett isbad, försättes med 1,76 g propi0~ tiolakton. Efter fem minuters vila i isbadet och tre timmar vid rums- temperatur utspädes reaktionsblandningen med 200 ml etylacetat och tvättas med 5%-igt kaliumvätesulfatlösning och vatten. Det organiska skiktet torkas över magnesiumsulfat och koncentreras till torrhet i vakuum. Återstoden, titelföreningen, kristalliseras ur eter/hexan, utbyte 3,7 q, smz-alupunkt 57-589 Exemgel 16 l-(3-merkaptopropanoyl)-L-prolin Metod A. 4,9 g l-(3-bensoyltiopropanoyl)-L-prolin löses i en bland- ning av 8 ml vatten och 5,6 ml koncentrerad ammoniumhydroxid och lös- ningen förvaras en timme under omrörning i argonatmosfär. Reaktions- blandningen utspädes med vatten, filtreras och filtratet extraheras med etylacetat. Vattenfasen surgöres med koncentrerad saltsyra, mät- tas med natriumklorid och extraheras med etylacetat. De organiska skikten tvättas med magnesiumsulfat och koncentreras till torrhet i vakuum. Återstoden, titelföreningen, kristalliseras ur etylacetat/ 8104660-9 hexan, utbyte 2,5 g, smältpunkten 68-700.

Metod B. 0,8 g l-(3-acetyltiopropanoyl)-L-prolin löses i 5 ml 5,5N ' ammoniak i metanol och lösningen upprätthålles under argon vid rums- temperatur. Efter två timmar avlägsnas lösningsmedlet i vakuum, åter- stoden löses i vatten och påföres en jonbytarpelare i H+-cyklen (DowexR 50, analytisk kvalitet) och elueras med vatten. De fraktio- ner som ger positiv tiolreaktion sammanfäres och koncentreras till torrhet, utbyte 0,6 9. Denna produkt kristalliseras ur etylacetat/ hexan enligt metod D för bildning av titelföreningen.

Exempel 17 1-(3~merkaptopropanoyl)~L~hydroxiprolin Genom att använda L~hydroxiprolin i stället för L-prolinen i exempel ll och behandla produkten enligt metod A i exempel 16 er- håller man 1-(3-bensoyltiopropanoyl)-L-hydroxiprolinresp.1-(3-merkapto- propanoyl)-L-hydroxiprolin. _ I Exempel 18 1-(3-merkaotooróbanovl)-L-azetidin-2-karboxylsvra Genom att använda L-azetidin-2-karboxylsyratertbutylester i stället för L-prolin-tert.butylestern i exempel 13, behandla pro- dukten enligt exempel 14 och den erhållna l-(3-acetyltiopropanoyl)-L- -azetidin-2-karboxylsyran från metod B i exempel 16 erhåller man 1-(3-acetyltiopropanoyl)-L-azetidin-2-karboxylsyratert-butylester.resp. l-(3-merkaptopropanoyl)-L-azetidin-2-karboxylsyra. K Exempel 19 1-(3-merkaptopropanoyl)-4-metyl-L-prolin Genom att använda 4-metyl-L-prolin i stället för L-prolin och behandla produkten enligt metod A i exempel 16 erhåller man 1-(3-bensoyltiopropanoyl)-4-metyl-L-prolin och 1-(3-merkaptopropanoyl)- -4-metyl-L~prolin.

Exempel 20 1-(3-merkaptopropanoyl)-5-hydroxi-L-pipekolinsyra Genom att använda 5-hydroxi-L-pipekolinsyra i stället för L-prolin och behandla produkten enligt metod A i exempel 16 erhåller man l-(3-bensoyltiopropanoyl)-5-hydroxi-L-pipekolin och l-(3-merkapto- propanoyl)-5-hydroxi-L-pipekolinsyra. _l-,'xempeul__z_t_l_ 1-(3-merkaptopropanoyl)-D-prolin Genom att använda D-prolin och behandla produkten enligt metod A i exempel 16 erhåller man l-(3-bensoyltiopropanoyl)-D-prolin och 1-(3-merkaptopropanoyl)-D-prolin med smältpunkten 68-700C. 8104660-9 f lQ Exemoel 22 7 l-(3-acetvltio-2-metylnropanoyl)-L-prolin-tert.butylester 5,l g L-prolin-tert.butylester löses i 40 ml diklormetan och lösningen omröres och kyles i ett isbad. 6,2 g dicyklohexylkar- bodiimid löst i 15 ml diklormetan tillsättes, omedelbart följt av en lösning av 4,9 g 3-acetyltio-2-metylpropansyra i 5 ml diklormetan.

Efter l5 minuters omrörning i isbadet och 16 timmar vid rumstempera- tur avfiltreras fällningen och filtratet koncentreras till torrhet i vakuum. Återstoden löses i etylacetat och tvättas till neutral re- aktion. Den organiska fasen torkas över magnesiumsulfat och koncen- treras till torrhet i vakuum. Återstoden, titelföreningen, renas ge- nom pelarkromatografering (silikagel/kloroform), utbyte 7,9.

Exemgel 23 l-(3-acètyltio-2-metylpropanovl-L-prolin Metod A. 7,8 g av l-(3-acetyltio-2-metylpropanoyl)-L-prolin-tert.bu- tylestern löses i en blandning av 55 ml anisol och llO ml trifluorät- tiksyra. Efter en timmes förvaring vid rumstemperatur avlägsnas lös- ningsmedlet i vakuum och återstoden utföres flera gånger ur eter/hexan. 6,2 g av återstoden löses i 40 ml acetonitril och 4,5 ml dicyklohexyl- amin tillsättes. Kristallinsaltet kokas tillsammans med 100 ml färsk acetonitril, kyles till rumstemperatur och filtreras, utbyte 3,8 g, smältpunkt (1650), 187-1880. Detta material omkristalliseras ur iso- propanol ¿alfa7D-670 (C l,4, EtOH)- Det kristallina dicyklohexylamin- saltet suspenderas i en blandning av 5%-igt kaliumvätesulfat i vatten och etylacetat. Den organiska fasen tvättas med vatten och koncentre- ras till torrhet. Återstoden kristalliseras ur etylacetat/hexan för bildning av l-(3-acetyltio-2-metylpropanoyl-L-prolin, smältpunkt 83- ss° ¿å1f§2š5 -1e2(c,1,7, ston).

Metod B. 8,1 g 3-acetyltio-2-metylpropansyra och 7 g tionylklorid blandas och suspensionen omröres 16 timmar vid rumstemperatur. Re- "aktionsblandningen koncentreras till torrhet och destilleras i vakuum (kokpunkt 800). 5,4 g av denna 3-acetyltio-2-metylpropansyra och 15 ml 2N natriumhydroxid sättes till en lösning av 3,45 g L-prolin i 30 ml lN natriumhydroxid, kyld i ett isvattenbad. Efter tre timmars omrör- ning vid rumstemperatur extraheras blandningen med eter, vattenfasen surgörcs och oxtraheras med etylacetat. Den organiska fasen torkas över magnesiumsulfat och koncentreras till torrhet för bildning av titelföreningen.

Metod C. 4,16 g metakroylklorid sättes till en lösning av 3,45 g L-prolin i en blandning av 100 ml vatten och 12 g natriumvätekarbo- nat, kyld i ett isvattenbad, under kraftig omrörning. När tillsatsen 8104660-9 ll är avslutad, omröres blandningen två timmar vid rumstemperatur och extraheras med eter. Vattenfasen surgöres med lN saltsyra och extra- heras med etylacetat. Den organiska fasen koncentreras till torrhet i vakuum, återstoden blandas med 3,5 g tiolättiksyra, nâgra få kris- taller azobisisobutyronitril tillsättes och blandningen upphettas två timmar på ett ångbad. Reaktionsblandningen löses i bensen/ättiksyra (75:25) och påföres en pelare av silikagel. Eluering med samma lös- ningsmedelsblandning ger titelföreningen.

Exempel 24 l-(3-bensovltio-2-metylpropanoyl)-L-prolin Genom att använda l-(3-bensoyltio-2-metylpropanoyl)-L-pro- lin-tert.butylester i stället för 1-(3-acetyltio)-2-metylpropanoyl)- l-prolin-tert.butylester i metod A i exempel 23, erhåller man titel- föreningen.

Exempel 25 l-(3-fenylacetyltio-2-metvlpropanoyl)-L-prolin Genom att använda l-(3-fenylacetyltio-2-metylpropanoyl)-L- prolin-tert.butylester i stället för l-(3-acetyltio-2-metylpropanoyl)- L-prolin-tert.butylester i metod A i exempel 23, erhåller man titel- föreningen.

Exemnel 26 l-(3-merkapto-2-D-metvlnropanoyl)-L-prolin Denna förening erhålles genom att man behandlar produkten från exemplen 23, 24 och 25 på följande sätt: 0,85 g av tioestern löses i 5,5N ammoniak/metanol och lös- ningen förvaras två timmar vid rumstemperatur. Lösningsmedlet av- lägsnas i vakuum och återstoden löses i vatten, påföres en jonbytar- pelare i H+-cyklen (DowexR 50, analytisk kvalitet) och elueras med vatten. De fraktioner som ger positiv tiolreaktion sammanföres och frystorkas. Återstoden kristalliseras ur etylacetat/hexan, utbyte 0,3. Titelföreningen erhålles med en smältpunkt av 103-1040, ¿ålfa7D- l3l (C,2,EtOH).

Exemnel 27 l-(3-merkapto-2-bensylprODäfl0Y1)'L'Pr°lin l-(3-acetyltio-2-bensylpropanoyl)-L-prolin behandlas med ammoniak/metanol enligt exempel 26 för bildning av titelföreningen i form av en olja, Rf = 0,47 (silikagel, bensen/ättiksyra 75:25). 8104660-9 12 Exempel 28 l-(3-merkapto-2-metylpropanoyl)-L-hydroxi-prolin Genom att använda L-hydroxiprolin-tert.butylester-tert. butyleter enligt exempel 22, behandla produkten enligt metod A i exempel 23 och därefter förfara enligt exempel 26 erhåller man 1- 3-acetyltio-2-metylpropanoyl)-L-hydroxiprolin-tert.butylester-tert. butyleter, l-(3-acetyltio-2-metylpropanoyl)-L-hydroxiprolin resp. l-(3-merkapto-2-metylpropanoyl)-L-hydroxiprolin.

Exempel 29 l-(3-merkapto-2-metylpropanoyl)-L-azetidin-2-karboxvlsyra Genom att använda L-azetidin-2-karboxylsyra-tert.butyl- ester enligt exempel 22, behandla produkten enligt metod A i exem- pel 23 och förfara enligt exempel 26 erhåller man l-(3-acetyltio-2- metylpropanoyl)-L-azetidin-2-karboxylsyra-tert.butylester, l,3-ace- tyltio-2-metylpropanoyl)-L-azetidin-2-karboxylsyra och l-(3-merkapto- 2-metylpropanoyl-L-azetidin-2-karboxylsyra.

Exempel 30 l-(3-merkapto-2-metylpropanoyl)-L-pipekolinsyra Genom att använda L-pipekolinsyra enligt exempel 22, be- handla produkten enligt metod A i exempel 23 och förfara enligt exempel 26 erhåller man l-(3-acetyltio-2-metylpropanoyl)-L-pipeko- linsyra-tert.butylester, l-(3-acetyltio-2-metylpropanoyl)-L-pipe- kolinsyraresp.l-(3-merkapto-2-metylpropanoyl)-L-pipekolinsyra.- Exempel 31 l-(4-bensoyltiobutanoyl)-L-prolin En lösning av 2,88 g L-prolin i 12,5 ml lN natriumhyd- roxidlösning, kyld i ett isbad, försättes med 3,5 g 4-klorbutyryl- klorid. Reaktionsblandningen omröres 3,5 timmar vid rumstemperatur och en suspension av 3,75 g tiobensoesyra och 2,4 g kaliumkarbonat i 25 ml vatten tillsättes. Efter omrörning över natten vid rums- temperatur; surgöres reaktionsblandningen med koncentrerad salt- syra och extraheras med etylacetat. Det organiska skiktet torkas över magnesiumsulfat och koncentreras till torrhet i vakuum. Åter- stoden kromatograferas på en pelare av silikagel med bensen/ättik- syra (7:l). De fraktioner som innehåller det önskade materialet kom- bineras och koncentreras till torrhet, utbyte 1,35 g. En liten mängd av detta material löses i etylacetat och dicyklohexylamin tillsättes, tills pH är 8-10 (på ett vått pH-papper). Dicyklohexylaminsaltet ut- kristalliseras omedelbart, smältpunkt 159-1610. lsyra och extraheras med 13 8104660-9 Exempel 32 l-(4-merkactobutanovl)-L-prolin 1,08 g l~(4-bensyltiobutanoyl)-L-prolin löses i en bland- ning av 4 ml vatten och 2,7 ml koncentrerad ammoniak. Efter en tim- mes omrörning vid rumstemperatur utspädes blandningen med vatten, filtreras, extraheras med etylacetat och vattenfasen koncentreras i vakuum. Detta ammoniumsalt av l-(4-merkaptobutanoyl)-L-prolin renas genom jonbyteskromatografering på en pelare av dietylamino- etyl-SephadexR (tvärbundet dextran) med en gradient av ammonium- vätekarbonat, utbyte 0,7 g. Ammoniumsaltet löses i 2 ml vatten och påföres en pelare av DowexR 50-sulfonsyraharts av analytisk kvali- tet i väteform och den fria syran elueras med vatten. De fraktioner som innehåller det önskade materialet (sulfhydrylreagenset och kar- boxireagens positiva) sammanföres och frystorkas för bildning av titelföreningen. Dicyklohexylammoniumsaltet erhålles enligt exempel 44, smaitpunkt 1s7-1ss°.

Exempel 33 l-(4-bensoyltio-2-metylbutanoyl)-L-prolin a) 8 g 4-brom~2-metylbutanosyra och 7 g tionylklorid blan- das och blandningen omröres 16 timmar vid rumstemperatur. Reaktions- blandningen koncentreras till torrhet och destilleras i vakuum. b) En lösning av 2,88 g L-prolin i 25 ml lN natriumhyd- roxid, kyld i ett isbad, försättes med 12,5 ml natriumhydroxid och 3,9 g av 4-brom-2-metylbutanosyrakloriden erhållen i moment a) tillsattes. Reaktionsblandningen omröres 3,5 timmar vid rumstempe- ratur och en suspension av 3,75 g tiobensoesyra och 2,4 g kalium- karbonat i 25 ml vatten tillsättes. Efter omrörning över natten vid reaktionsblandningen med koncentrerad salt- etylacetat. Det organiska skiktet torkas rumstemperatur surgöres över magnesiumsulfat och koncentreras till torrhet i vakuum. Åter- stoden kromatograferas på en pelare av silikagel med bensen/ättik- syra (7:l). De fraktioner som innehåller den önskade produkten sam- manföres och koncentreras i vakuum till torrhet.

Exempel 34 1-(4-merkapto-2-metvlbutanoyl)-L-prolin Genom att använda l-(4-bensoyltio-2-metylbutanoyl)-L-pro- lin i stället för l-(4-bensoyltiobutanoyl)-L-prolinen enligt exem- pel 32 erhåller man titelföreningen. 8104660-9 l4 Exempel 35 l-(4-bensovltio-2-bensylbutanoyl)-L-prolin Genom att använda 4-brom-2-bensylbutanosyra i stället för 4-brom-2-metylbutanosyra enligt exempel 33 erhåller man titelföre~ ningen.

Exempel 36 l-(4-merkapto-2-bensylbutanoyl)-L-prolin Genom att använda 1-(4-bensoyltio-2-bensylbutanoyl)-L- prolin i stället för l-(4-bensoyltiobutanoyl)-L-prolin enligt exem- pel 32 erhåller man titelföreningen.

Exempel 37 l-(4-merkaptobutanoyl)-L-hydroxinrolin Genom att använda L-hydroxiprolin i stället för L-proli- nen enligt exempel 31 erhåller man l-(4-bensoyltiobutanoyl)-L-hyd- roxiprolin resp. l-(4-merkaptobutanoyl)-L-hydroxiprolin.

Exempel 38 l-(4-merkantobutanoyl)-L~azetidin-2-karboxylsyra Genom att använda L-azetidin-2-karboxylsyra i stället för L-prolinen enligt exempel 31 erhåller man 1-(4-bensoyltiobutanoyl)- L-azetidin-2-karboxylsyra resp. l-(4-merkaptobutanoyl)-L-azetidin- 2-karboxylsyra.

Exempel 39 l-(4-merkantobutanoyl)-L-pipekolinsyra Genom att använda L-pipekolinsyra i stället för L-prolincn enligt exempel 31 erhåller man l-(4-bensoyltiobutanoyl)-L-pipekolin- syra resp. l~(4-merkaptobutanoyl)-L-pipekolinsyra.

Exempel 40 I l-(3-acetyltiobutanovl)-L-nrolin-tert.butylester 6,2 g dicyklohexylkarbodiimid och 4,86 g 3-acetyltiosmör- syra sättes till en lösning av 5,1 g L-prolin-tert.butylester i 60 ml diklormetan och omröres i ett isbad. Efter 15 minuter avlägsnas is- badet och blandningen omröres 16 timmar vid rumstemperatur. Fällningen avfiltreras, filtratet koncentreras till torrhet och återstoden kro- matograferas på en pelare av silikagel med kloroform för bildning av titelföreningen, utbyte 5,2 g.

Exempel 41 l-(3-acetyltiobutanoyl)-L-prolin 5,2 g av l-(3-acetyltiobutanoyl)-L-prolin-tert.butylestern från exempel 40 löses i en blandning av 60 ml trifluorättiksyra och 30 ml anisol och lösningen upprätthâlles en timme vid rumstemperatur.

Lösningsmedlen avlägsnas i vakuum och den kvarvarande l-(3-acetyltio- 8104660-9 15 butanoyl)-L-prolinen utfälles åter flera gånger ur eter/hexan, utbyte 4 g. Dicyklohexylaminsaltet framställes enligt exempel 44, smältpunk- ten 175-176°.

Exemoel 42 1-(3-merkaptohutanovl)-L-prolin 0,86 g av 1-(3-acetyltiobutanoyl)-L-prolinen från exempel 41 löses i 20 ml 5,5N ammoniak/metanol och reaktionsblandningen för- varas två timmar vid rumstemperatur. Lösningsmedlet avlägsnas i vakuum och återstoden kromatograferas på en jonbytarpelare (DowexR 50) med vatten. De fraktioner som innehåller titelföreningen sammanföres och lyofiliseras, utbyte 0,6 g. Dicyklohexylaminsaltet erhålles en- ligt exempel 44, smältpunkt 183-1840.

Ešgmoel 43 l-(3-merkapto-2-fenvlpropanoyl)-L-prolin Genom att använda l-(3-acetyltio-2-fenylpropanoyl)-L- prolin-tert.butylester i stället för l-(3-acetyltio-2-metyl-pro- panoyl-L-prolin-tert.butylestern enligt exempel 23 och underkasta produkten ammonolys enligt exempel 26 erhåller man titelföreningen.

Exempel 44 l-/§-(acetyltio)-DL-Dropanoylfpipekolinsvra 6,5 g pipekolinsyra suspenderas I 200 ml dimetylacetamid.

U8,3 g 3-acetyltiopropanoylklorid sättes vid 230 droppvis till sus- pensionen. En klar lösning bildas och temperaturen stiger till 280.

Denna klara lösning försättes med 10,1 g N-metylmoríolin. En fäll- ning bildas omedelbart och temperaturen stiger till 340. Blandningen upphettas en timme på ett ångbad, varvid en klar lösning bildas.

Efter kylning filtreras den fasta substansen för bildning av 5,1 g l-Åš-(acetyltio)-DL-propanoyl7pipekolinsyra med smältpunkten l90- 2000. Lösningsmedlet avlägsnas och den viskösa återstoden triture- ras med isopropyleter för bildning av 7,8 g av produkten med smält- punkten 98-l0lo. Omkristallisation ur aceton/hexan ger en konstant smäitpunkt, 102-1o4°, Rf 0,72 ¿ši1ikage1, bensen, ätriksyra (7=2¿7.

Eïëmšfllíä DL-l-(3-merkaptopropanovl)pipekolinsyra 12 ml koncentrerad ammoniumhydroxid omröres ungefär 15 minuter under kväve vid l0°, varefter 6,6 g fast l-¿É-(acetyltio)- DL-propanoyl7-pipekolinsyra tillsättes vid 5-l0O. En klar lösning bildas efter 2-3 minuter. Isbadet avlägsnas och lösningen omröres 45 minuter vid rumstemperatur under kväve. Lösningen göres starkt sur med 20%-ig HCl (kylning) och den utfällda oljan extraheras med 3 x 150 ml etylacetat. Etylacetatextrakten torkas över magnesium- sulfat och lösningsmedlet avlägsnas för bildning av 6,0 g DL-l-(3- 8104-660-9 " 16 merkaptopropanoyl)pipekolinsyra, Rf 0,77 Åšilikagel, bensen, ättik- syra (7;1¿7.

Exempel 46 l-(3-merkaptoprooanoyl)-L-pinekolinsyra Genom att använda L-pipekolinsyra i stället för DL-pipe- kolinsyran enligt exempel 44 och därefter underkasta produkten pro- ceduren enligt exempel 45 erhåller man l-¿§-(acetyltio)propanoyl7- L-pipekolinsyra och l-(3-merkaptopropanoyl)-L-pipekolinsyra, Rf 0,80 ¿ši11kage1, bensen, ättiksyra (7=1¿7, ¿â1f§7â° -51,5 (C, 1,ø ans. etanol). - Exemnel 47 l-/É-(acetvltio)-2-metylpropanoyl-DL-pipekolinsvra 6,5 g (0,05 mol) pipekolinsyra suspenderas i 200 mg di- metylacetamid, 9,0 g (0,05 mol) 3-acetyltio-2-metylpropanoylklorid tillsättes droppvis. Temperaturen stiger till 290 och en klar lös- ning bildas. Därefter tillsättes lO,l g N-metylmorfolin på en gång och temperaturen stiger till 340. Blandningen upphettas en timme på ett ångbad, varvid en klar lösning bildas. Denna förvaras över nat- ten och den fasta substans som utfaller avfiltreras för bildning av 6,1 g, smältpunkt 203-2040. Lösningsmedlet avlägsnas och den viskösa återstoden tritureras med vatten och 20%-ig HCl. Den gula oljan ext- raheras med 3 x l50 ml etylacetat. Etylacetatextrakten torkas över magnesiumsulfat och avlägsnas för bildning av 14 g av titelföreningen i form av en viskös olja.

Exempel 48 l-(3-merkapto-2-metvlpropanovl)-DL-pipekolinsyra Vattenhaltig NH4OH (30 ml vatten och 20 ml koncentrerad NH4OH) omröres 15 minuter under kväve vid 100. Blandningen sättes till l3,0 g (0,05 mol) l-(3-acetyltio)-2-metylpropanoyl)-DL-pipe- kolinsyra och den bildade lösningen omröres 10 minuter under kväve och därefter 50 minuter vid rumstemperatur. Den behandlas därefter mod vatten och 20%-ig HCl och den gula oljan extraheras med 3 x l50ml etylacetat. Etylacetatextraktet torkas över magnosiumsulfat och av- lägsnas för bildning av ll,l g av titelföreningen i form av en vis- kös olja. Rf 0,62 Åšilikagel, bensen, ättiksyra (7:2l7.

ExemDel 49 3-/Y4-metoxifenyl)metyltio7-2-metylpropansyra 7 l5,4 g (0,1 mol) p-metoxi-alfa-toluentiol sättes till en lösning av 8,6 g (0,1 mol) metakrylsyra i 50 ml 2N natriumhydroxid.

Blandningen upphettas tre timmar på ett ångbad, återflödesupphettas två timmar och kyles. Blandningen extraheras med eter, vattenskiktet 8104660-9 17 surgöres med koncentrerad HCl och extraheras med diklormetan. De sura extrakten tvättas med koncentrerad natriumkloridlösning, torkas över magnesiumsulfat och indunstas i vakuum. Den erhållna halvfasta sub- stansen upptaqes i 50 ml diklormetan, utspädes med 50 ml hexan och kyles. Man tillvaratager titelföreningen i form av en vit, kristallin substans med smältpunkten 74-820 (5,5 g).

Exemnel 50 l-/É-(4-metoxifenyl)metyltio7-2-metylpronanoyl-L-prolin-tert.butylester 3,6 g (0,0l5-mol) 3-¿(4-metoxifenyl)metyltig7-2-metylpro- pansyra, 2,6 9 (0,0l5 mol) L-prolin-tert.butylester och 3,1 g (0,0l5 mol) dicyklohexylkarbodiimid löses i 50 ml diklormetan och omröres 30 minuter vid 00. Kylbadet avlägsnas och blandningen om- röres över natten (16 timmar). Den erhållna suspensionen filtreras och riltratet tvättas med 5%-íg kaliumvätesulfatlösning, mättad natrinmvätekarbonatlösning och koncentrerad natriumkloridlösning, torkas över magnesiumsulfat och indunstas i vaknum. Den erhållna klara oljan påföres en 250 ml silikagelpelare och kromatograferas med användning av 20%-igt etylacetat i hexan såsom elueringsmedel.

HUVUåfrfiktiOnên (Rf = 0,70, silikagel, etylacetat) indunstas till 5,5 g (93%) av titelföreningen i form av en klar olja. Rf = 0,70 (silikäqfil. etylacetat), Rf = 0,60 (silikagel, eter). Éxempel 5; l-(3-merkaoto-2-metvlprooanoyl)-L-prolin l,2 g (0,003 mol) av estern från exempel 50, 5 ml ani- sol och 0,5 ml trifluormetansulfonsyra löses i 20 ml triíluorättik- syra under kväve och den bildade röda lösningen förvaras en timme vid rumstemperatur. Lösningen indunstas i vakuum till en röd åter- stod, vilken upptages i etylacetat och tvättas med vatten och kon- centrerad natriumklorid, torkas över magnesiumsulfat och indunstas. Återstoden tritureras med hexan och den kvarvarande hexanen indon- stas; den oljeartade återstoden utgör 0,4 g. En portion om 800 mg av detta material underkastas preparativ tunnskiktskromatografnrinq på 2 mm silikagelplattor med användning av benson/ättiksyra (75:25) såsom elueringsmedeš. Det nitroprussid-positiva huvudbandet (Rf = 0,43) Lillvaratages, varvid man erhåller 135 mg av titelföreningen i form av en olja. TLC med användning av bensen/ättiksyra (75:25) ger Rf = 0,40 och k1oroform/metanol/ättiksyra (50:40:l0) ger Pf = 0,62. 8104660--9 l8 Exemgel 52 7 1-(3-merkapto-2-D-metvlnropanoyl)-L-prolin Under en ridå av argon uppslammas 10,0 g l-¿š-(acetyltio- 2-D-metylpropanoyl7-L-prolin i 150 ml vatten vid 100. Denna bland- ning försättes med SN natriumhydroxid och pH i lösningen upprätt- hålles 1,5 timmar vid 13. När upptagningen av natrinmhydroxid upp- hört, surgöres lösningen till pH 2,0 med koncentrerad svavelsyra.

Vattenlösningen extraheras tre gånger med 3 x 150 ml me- tylenklorid och de kombinerade metylenkloridfraktionerna koncentre- ras till en olja. Koncentratet upptages i etylacetat och filtreras och filtratet utspädes med 30 ml hexan. En ytterligare mängd hexan tillsättes efter 30 minuter och blandningen kyles en timme till 100.

Kristallerna avfiltreras och tvättas med 2 x 25 ml hexan och torkas till konstant vikt för bildning av titelföreningen, 6,26 g, snvältpunkc 1oo-1oz°.

Exemgel 53 l-/§-tosyloxi-2-metylnroDanoy17-L-prolin Genom att använda 3-tosyloxi-2-metylpropansyraklorid i stället för 3-acetyltic-2-metylpropansyrakloriden enligt exempel 23b erhåller man titelföreningen.

Exemgel 54 l-/§-acetvltio-2-metylpropanoyl7-L-prolin 3,5 g l-¿§-tosyloxi-2-mety1propanoyl7-L-prolin sättes till en lösning av l,l4 g tiolättiksyra och 3,5 ml trietylamin i 20 ml etylacetat. Lösningen upprätthålles tre timmar vid 500, kyles, utspädes med 100 ml etylacetat och tvättas med utspädd saltsyra.

Det organiska skiktet torkas och koncentreras till torrhet i vakuum. Återstoden löses i acetonitril och dicyklohexylamin tillsättes. Den kristallina fällningen omkristalliseras ur isopronanol för bildning av l-¿§-acetyltio-2-D-metyl-propanoyl)-L-prolindicyklohexaminsa1tet maa smäitpunkten 1a7-1ss°, ¿â1f.-¿17â5 -67 (c 1,4, Ewa). Detta salt överföras till den fria syran med smältpunkten 83-850 (en isomorf form med smältpunkten 104-1050 erhålles, om den kristallisations- lösningen ympas med material med hög smältpunkt.

Exemgel 55 1-(3-merkaptopropanoyl)-L-prolin En lösning av 75 mg (0,27 mmol) 1-[Ü-Äzïetylamino)karbonyl7 tig7propanoyl7-L-prolin i l ml av vardera av koncentrerad ammonium- hydroxid och vatten förvaras 18 timmar vid rumstemperatur under argon.

Lösningen utspädes med en ringa mängd vatten och extraheras med eter.

Vattenskiktet surgöres med kall, koncentrerad saltsyra och extrahe- 8104660-9 19 ras med etylacetat. De kombinerade extrakten torkas och koncentreras i vakuum för bildning av en förening, identisk med produkten från exempel 16. TLC (silikagel; bensen/ättiksyra 7:3), Rf 0,4.

Exemgel 56 l-(3-merkapto-2-metylpropanoyl)-L-prclin 10,0 g zinkpulver sättes till en uppslamning av l-[ditio- bis-(2-metyl-3-propanoylL]-bis-L-prolin (5,0 g) i 100 ml l,ON svavel- syra och blandningen omröres 4 timmar vid 180 under en ridâ av kväve.

Lösningen filtreras, zinket tvättas med 20 ml vatten och de kombinerade filtraten extraheras med 3 x 75 ml metylenklorid. Metylenkloridvätskor- na extraheras med 25 ml vatten och den organiska lösningen koncentre- ras till en olja. Denna upptages i 20 ml etylacetat och filtreras. l5 ml hexan sättes till filtratet och blandningen omröres 15 minuter.

Man tillsätter därefter en ytterligare volymmängd hexan (30 ml) och lösningen kyles en timme till 50. Blandningen filtreras och produkten tvättas med 2 x 100 ml hexan och torkas för bildning av 4,17 g vita kristaller av produkten, som utgöres av titelföreningen. TLC, Rf = 0,60 (lösningsmedelssystem: bensen/ättiksyra 75:25).

Exemgel 51 3-bensvltio-2-metylpropanosvra Genom att använda alfa-toluentiol i stället för p-metoxi- alfa-toluentiolen i exempel 49 erhåller man titelföreningen. gëgmpel 58 l-15-(bensyltio)-2-metvlnropanoyl7-L-prolin-tert.butylester Genom att använda 3-bensyltio-2-metylpropanosyra i stäl- let för 3-ÅY4-metoxifenyl)metyltig?-2-metylpropanosyra enligt ex- empel 50 erhåller man t telföreningen.

EëêEEsf-:Lâfii l-/§-(bensyltio)-2-metvlnropanoyl7-L-prolin 7,8 g l-¿§-(bensyltio)-2-metylpropancyl7~L~pr01in-tgrt_ butylester löses i en blandning av 55 ml anisol och 110 ml trifluor- ättiksyra. Efter en timmes förvaring vid rumstemperatur avlägsnas lösningsmedlet i vakuum och återstoden löses i eter, tvättas flera gånger med mättad natriumklorid, torkas över magnesiumklorid och in- dunstas till torrhet i vakuum för bildning av titelföreningen. Rf = 0,5 (silikagel, bensen/ättiksyra 3:l); Rf = 0,5 (silikagel, metyl- etylketon/ättiksyra/pyridin/vatten l4:l:2:l). ëëgmpel 60 ' 1-(3-merkapto-2-metvlnropanoyl)-L-prolin 0,1 g l-15-(bensyltio)-2-metylpropanoyl7~L-prolin suspen- deras i lö ml kokande ammoniak och små natriumbitar tillsättes un- der omrörning tills en permanent blå färg erhålles. Färgen elimine- 8104660-9 20 ras med några få kristaller av ammoniumsulfat och ammoniaken indun- stas under ett kväveflöde. Återstoden löses i en blandning av ut- spädd saltsyra och etylacetat. Det organiska skiktet torkas och kon- centreras till torrhet i vakuum för bildning av titelföreningen.

Rf = 0,35 (silikagel, bensen/ättiksyra 3:1), Rf = (silikagel, metyl- etylketon/ättiksyra/pyridin/vatten l4:l:2:l) identisk med föreningen från exempel 26.

Exemoel 61 3-trifenvlmetyltio-2-metylpropanosyra En lösning av l,2 g 3-merkapto-2-metylpropanosyra och 2,9 g tritylklorid i 50 ml metylenklorid upprätthålles två timmar vid rums- temperatur. Blandningen uppvärmes 20 minuter på ett ångbad och indun- stas till torrhet i vakuum och återstoden löses i mättad natriumväte- karbonatlösning och lösningen tvättas med etylacetat. Vattenfasen sur- göres till pH 3 och extraheras med etylacetat. Det organiska skiktet torkas och koncentreras till torrhet för bildning av titelföreningen.

Rf = 0,8 (silikagel, bensen/ättiksyra 3§l), Exemoel 62 l-/š-(trifonylmetvltio)-2-metylpropanovl7-L~prolin, t-butvlester Genom att använda 3-trifenylmetyltio-2-metyl-propanosvra i stället för 3-[få-metoxifenyl)metyltig?-2-metylpropanosyra enligt exempel 50 erhåller man titelföreningen.

Exempel 63 f l-/É-(trifenylmetvltio)-2-metylpronanoyl7-L-orolin l,8 g 3-trifenylmetyltio-2-metylpropanosyra och 0,8 g N,N'- karbonyldiimidazol löses i l0 ml tetrahydrofuran under omrörning vid rumstemperatur. Efter 20 minuter sättes lösningen.til1 en blandning av 0,6 g L-prolin och l g N-metylmorfolin i 20 ml dimetylacetamid.

Den erhållna blandningen omröres över natten vid rumstemperatur, kon- centreras till torrhet och återstoden löses i en blandning av etyl- aceLat och 10%-ig kaliumvätesulfatlösning. Det organiska skiktet av- skiljes och torkas och koncentreras till torrhet i vakuum för bild- ning av titelföreningen. Rf = 0,4 (silikagel, bensen/ättiksyra 3:1), Rf = l,0 (silikagel, metyletylketon/ättiksyra/pyridin/vatten l4:l:2:l).

Exemgel 64 1-/§-merkapto-2-metylpropanovl)-L-prolin 5 g l-[ä-(trifenylmetyltio)-2-metylpropanoyl7-L-prolin- tert.butylester löses i en blandning av 55 ml anisol och ll0 ml tri- fluorättiksyra. Efter en timmes förvaring vid rumstemperatur avlägs- nas lösningsmedlen i vakuum och återstoden påföres en pelare av si- likagcl, jämviktsinställd med bensen/ättiksyra (75:25) och elueras med samma lösningsmedel. De fraktioner som motsvarar komponenten med 8104660-9 Zl RE = 0,40 (TLC, silikagel med samma system) sammanföres och koncen- treras till torrhet för bildning av titelföreningen. Rf = 0,62 (si- likagel, kloroform/metanol/ättiksyra/vatten 50:40:10), identisk med föreningen från exempel 26.

I3>:omr>c-_l__§_§ 3-(tetrahvdropyran-2-yltio)-2-metylpropanosyra En lösning av 2,4 g 3-merkapto-2-metylpropansyra och 1,9 g nydestillerad 2,3-dihydro-4H-pyran i 60 ml bensen försattes med 2,8 g bortrifluorideterat. Efter två timmar tillsättes 4 g kalium- karbonat och blandningen omröres och filtreras. Filtratet koncentre- ras till torrhet för bildning av titelföreningen.

Exempel 66 l-/3-(tetrahydropyran-2-yltio)-2-metylnropanovl7-L-Drolin Genom att använda 3-(tetrahydropyran-2-yltio)-2-metylpro- pansyra i stället för 3-trifenylmetyltio-2-metylpropansyra enligt exempel 63 erhåller man titelföreningen. Rf = 0,8 (silikagel, ben- sen/ättiksyra 3:1); Rf = 0,75 (silikagel, metyletylketon/ättiksyra/ pyridin/vatten l4:l:2:l).

Exemwelu§] 1-(3-merkanto-2-metylpropanovl)-L-prolin En lösning av l g l-¿3-(tetrahydropyran-2-yltio)-2-metyl- propanoyl)-L~prolin i en blandning av 25 ml metanol och 25 ml kon- centrerad saltsyra förvaras 30 minuter vid rumstemperatur. Lösnings- medlen avlägsnas i vakuum för bildning av titelföreningen. Rf = 0,35 (silikagel, bensen/ättiksyra 3:1) , Rf = 0,5 (silikagel, metyletç§ylke- ton/ättiksyra/pyridin/vatten l4:l:2:l) identisk med föreningen från exempel 26- 3-acetamidometyltio-2-metylpropansyra 2,4 g 3-merkapto-2-metylpropansyra och 1,8 g N-hydroxime- tylacetamid löses i trifluorättiksyra och lösningen förvaras en timme vid rumstemperatur. Trifluorättiksyran avlägsnas i vakuum och åter- stoden torkas i vakuum över kaliumhydroxid för bildning av titulför- eningen.

Exemoel 69 l-/3-(acetamidometyltio)-2-metylnronanov17-L-nrolin Genom att använda 3-acetamidomctyltio-2-metylpropnnsvra 1 stället för 3-(tetrahydropyran-2-yltio)-2-metylpropansyra enligt exempel 65 erhåller man titelföreningen. Rf = 0,2 (silikagel, ben- sen/ättiksyra 3:1); Rf = 0,3 (silikagel, metyletylketon/ättiksyra/ pyridin/vatten l4:l:2:l). 8104660-9 22 Exemoel 70 1-(3-merkapto-2-metylpropanoyl)-L-prolin 1,4 g l-áš-(acetamidometyltio)-2-metylpropanoyl/-L~prolin och 1,93 g kvicksilver(II)acetat löses i en blandning av 25 ml ät- tiksyra och 25 ml vatten. Efter en timmes omrörning på ångbadet ge- nombubblas svavelväte, tills någon ytterligare fällning av kvicksil- ver(II)sulfid icke observeras. Blandningen filtreras, fällningen tvättas med alkohol och filtratet koncentreras i vakuum för bild- ning av titelföreningen. Rf = 0,35 (silikagel, bensen/ättiksyra 3:l); Rf = 0,5 (silikagel, metyletylketon/ättiksyra/pyridin/vatten l4:l:2:l), identisk med föreningen från exempel 26.

Exemnel 71 1000 tabletter innehållande 100 mg l-(2-merkaptopropanoyl)- L-prolin framställes ur följande komponenter: l-(2-merkaptopropanoyl)~L-prolin 100 g Majsstärkelse 50 g Gelatin 7,g g "Avicel" (mikrokristallincellulosa) 25 g Magnesiumstearat 2,5 g l-(2-merkaptopropanoyl)-L-prolinen och majsstärkelsen blandas med en vattenlösning av gelatinet. Blandningen torkas och males till ett fint pulver. "Avicel“ och magnesiumstearatet blandas under granulering. Blandningen pressas till 1000 tabletter, vardera innehållande 100 mg aktiv komponent.

Exemgel 72 _ Genom att använda 100 g l-(3-merkapto-2-D-metylpropanoyl)- L-prolin i stället för l~(2-merkaptopropanoyl)-L¥prolinen enligt exempel 177 erhåller man 1000 tabletter, vardera innehållande 100 mg av nämnda aktiva komponent.

Exempel 73 1000 tabletter, vardera innehållande 200 mg l-(2-merkapto- acetyl)-L-prolin erhålles ur följande komponenter: * l-(2~merkaptoacety1)-L-prolin 200 9 Laktos l0O g "Avicel" ' 150 q Majsstärkelse 50 g Magnesiumstearat 5 g l-(2-merkaptoacetyl)-L-prolinen, laktosen och "Avicel" blandas, varefter man inblandar majsstärkelsen. Magnesiumstearat tillsättes. Den torra blandningen pressas för bildning av 1000 tabletter om 505 mg, vardera innehållande 200 mg av den aktiva komponenten. Tabletterna belägges med en lösning av "Methocel E 15" (metylcellulosa), inkl. en färg, innehållande gul färg nr 6. 8104660-9 23 Exemnel 74 Dubbla gelatinkapslar av storlek l, vardera innehållande 250 mg 1-(2-merkaptopropanoyl)-L-prolin, fylles med en blandning av följande komponenter: l-(2-merkaptopropanoyl)-L-prolin 250 mg Magnesiumstearat 7 mg Laktos (USP) 193 mg Exemnel 75 En injicerbar lösning framställes på följande sätt: l-(2-merkaptopropanoyl)~L~prolin 500 mg Metylparaben 5 9 Propylparaben l g Natriumklorid 25 g Vatten till 5 l Den aktiva komponenten, konserveringsmedlen och natrium- kloriden löses i 3 liter vatten för injektion och volymen inställes på 5 liter. Lösningen filtreras genom ett sterilt filter och fylles aseptiskt i på förhand steriliserade vialer, vilka därefter tillslu- tes med på förhand steriliserade gummiproppar. Varje vial innehåller 5 ml lösning i en koncentration av 100 mg aktiv komponent per ml lös- ning för injektion. 8104660-9 24 Exempel A l-(3-merkapto-2-metylpropanoyl)-L-piperidin~2-karboxylsyra Enligt förfarandet i exempel 22 och genom att använda L-piperidin-2-karboxylsyra, t-butylester, i stället för L~prolin, t-butylester, erhäller man 1-(3-acetyltio-2-metylpropanoyl)-L-piperi- dinkarboxylsyra som avskiljes enligt förfarandet i exempel 23, och genom att fortsätta enligt exempel 26 erhålles 2-D-metylisomeren, smältpunkt 85-9000; Ååfšs -880 (C=l, etanol) och 2-L-metylisomeren som en viskös substans ¿Q]š5 -330 (C=l, etanol).

Isomerseparation skedde vid det racemiska l-(3-acetyltio-2- -D,L-metylpropanoyl)-L-piperidin-2-karboxylsyrasteget genom att dicyklo- hexylaminsaltet bildades i acetonitril, varpå 2-D-metylisomeren ut- fälldes, smältpunkt l63-1650 som dicyklohexylaminsalt; och 2-L-metyl- isomeren tillvaratogs från acetonitrilfiltratet som en viskös återstod.

Båda isomererna överfördes därefter åter till syran och hydrolyserades och gav de ovan definierade D- och L-isomererna. l-(3-merkapto-l-oxo-2-fcnylpropyl)-L-prolin (a) l-/13-acetyltio)-l-oxo-2-fenylpropyl-L-prolin, t-butylcster 8,3 g (0,037 M) (+)-u~[Yacetyltio)metylfbensenättiksyra 5,0 g (0,037 M) hydroxibenstriazol 7,6 g (0,037 M) dicyklohexylkarbodiimid 6,3 g (0,037 M) L-prolin, t-butylester dñydroxibenstriazolen och bensenättiksyrareaktanten upplöstes i 200 cm3 etylacetat. En lösning av dicyklohexylkarbodiimiden i 50 cm etylacetat tillsattes och reaktionsblandningen omrördes i tvâ timmar vid rumstemperatur. L-prolinestern i 25 cm3 etylacetat tillsattes där- efter och reaktionsblandningen omrördes över natten vid rumstemperatur.

Utfälld dicyklohexylkarbamid (7,8 g) avfiltrerades därefter, och efter att successivt ha tvättats med 5%-ig natriumbikarbonatlösning, mättad natriumkloridlösning, 5%-ig HCl-lösning och mättad natriumkloridlösning och torkats över magnesiumsulfat indunstades filtratet till torrhet och gav 13 g produkt.

Analys beräknad för Cl9H27NO4S: N, 3,83; C, 62,44; H, 7,45 Funnet: N, 4,17; C, 62,65; H, 7,23 (b) l-¿§-(acetyltio)-l-oxo-2-fenylpropyl7~L-prolin l2,5 g (0,034 M) produkt (a) 125 cm3 trifluorättiksyra 5 cm3 anisol Ovannämnda lösning omrördes vid rumstemperatur under NZ i 8104660-9 25 ungefär 2 timmar. Lösningen koncentrerades till en viskös återstod, som motstod kristallisation. Denna upplöstes i 75 cm3 i eter och en lösning av 7,24 g (0,04 M) dicyklohexylamin i 25 cm3 eter tillsattes.

En kristallin fast substans utfälldes omedelbart, åtföljt av en temperaturökning. Blandningen fick kallna i flera timmar och den fasta substansen avfiltrerades och gav 7,4 g trifluorättiksyra.

Eterfiltratet koncentrerades till torrhet och gav 12,5 g viskös återstod, som utgjorde det orena dicyklohexylaminsaltet av produkten.

Detta upplöstes i 750 cm3 etylacetat och behandlades med 200 cm3 10%-ig KHSO . Vattenskiktet extraherades med ytterligare 75 cm3 4 .etylacetat, och de kombinerade organiska skikten tvättades med mättad NaCl och torkades över MgSO4. Lösningsmedlet avlägsnades och man erhöll 9,5 g (87%) produkt.

Analys beräknad för Cl6Hl9N04S: N, 4,36; C, 59,79; H, 4,36; S, 9,98 Funnet: N, 4,46; C, 59,99; H, 4,46; S, 9,92 fig/b = +2,3° (c=1, Eros). (c) l-(3-merkapto-l-oxo-2-fenylpropyl)-L-prolin 8,7 g (0,027 M) produkt (b) 125 cm3 H20 50 cm3 konc. NH4OH Den ovan angivna blandningen omrördes vid l0° och rumstempe- ratur i ungefär 3 timmar och extraherades därefter med etylacetat som kastades. Vattenlösningen gjordes starkt sur med 20%-ig HCl och den utfällda vita oljan extraherades med 2 x 250 cm3 etylacetat. Det organiska skiktet tvättades med l x 200 cm3 mättad NaCl-lösning och torkades över MgS04. Lösningsmedlet avlägsnades, och den skummiga återstoden sönderdelades med 200 cm3 hexan och gav 4 g (53%) produkt, smältpunkt 49-520.

Analys beräknad för Cl4Hl7NO3S: N, 5,01; C, 60,19; H, 6,14; S, 11,48; HS 100% Funnet: N, 5,20; C, 60,18; H, 6,06; S, ll,l4; HS 99,5% Åïfi = +2,5° (c=1, mon) ëëemgel C 1»(3-merkaptof2-metyl-1-oxopropyl)-4~CiS-metVl*L~pr0lin (a) ln(3-acetyltio-2-metyl~l-oxopropyl)-4~cis-metvl-L-prolin Till en iskyld lösning av 4~cis-metyl-L-prolinhydroklorid (2,87 g, 17,4 mmol) i natriumkarbonat (3,2 N, 10,8 ml) sattes en lös- ning av 3~acetyltio-2-metylpropionylklorid (2,88 g, 16 mmol) i eter (3 ml). Blandningen omrördes kraftigt i 35 minuter, under det att pH hölls vid 8,5 med användning av natriumkarbonat (4 N, 12 ml). Efter 8104660-9 26 omrörning i ytterligare en timme vid rumstemperatur extraherades blandningen med eter och vattenlösningen surgjordes med koncentre- rad HCl (4,5 ml). Den surgjorda lösningen extraherades noggrant med etylacetat, etylacetatet avlägsnades i vakuum och återstoden kromatograferades på silikagel (E. Merck, 175 g) under tryck (1,2 pm/ cmz) med användning av bensen:ättiksyra (lO:l) för eluering. Före- ningen renades ytterligare över dicyklohexylaminsaltbildning i etyl- acetat. Den rena önskade produkten erhölles därefter som en olja genom regeneration av dicyklohexylaminsaltet. Utbyte 1,8 g, 42%. ßg/šs = -171,5° syra, 7:3). Ett analytiskt prov av dicyklohexylaminsaltet erhölls genom omkristallisation ur acetonitril. ÅQ/äs = -69,30 (C = l,76, cHc13), smältpunkt 182-1s4°.

Analys beräknad för Cl2Hl9NO4S-dicyklohexylamin: C, 63,40; H, 9,31; N, 6,16; S, 7,05 Funnet: C, 63,30; H, 9,37; N, 6,19; S, 7,03 (b) l-(3-merkapto-2-metvl-l-oxopropyl)-4-cis-metyl-L-prolin Till en lösning av (a) (l,67 g, 6,1 mmol) i metanol (10 ml) sattes vattenhaltig NaOH (l N, 15,25 ml), och reaktionsblandningen fick stå under argonatmosfär vid rumstemperatur i 15 minuter. Lös- ningen centrifugerades för att avlägsna en liten mängd suspundcrnd fast substans, och metanolen avlägsnades från den överstående vätskan i vakuum. Den kvarvarande vattenhaltiga lösningen surgjordes med HCl (3 N, 5 ml) och extraherades noggrant med etylacetat. Etylacetatet avlägsnades i vakuum, och återstoden kromatograferades över silikagel (E. Merck, 70 g) under tryck (1,4 kp/cmz) med användning av bensen: ättiksyra (7:3) för eluering. Materialet som erhölls från kolonnen återlöstes i kloroform i kloroform, lösningen filtrerades och kloro- formen avlägsnades i vakuum och gav den önskade produkten som en viskös olja. Utbyte sso mg, (67%), ¿Q]å5= -139,7° (c=1,ze, cac13). af = o,s4 (silikagel; bensenzättiksyra, 7:3). Dicyklohexylaminsaltet av före- ningen erhölls med användning-av etylacetat som lösningsmedel.

¿Q7š5 = -az, ° (c= 1,07, cnc13), smäitpunkt (17s°) 177-179°.

Analys beräknad för CloHl7NO3S dicyklohexylamin ~ C,64,04; H, 9,77; N, 6,79; S, 7,77 Funnet: C,63,67; H, 9,98; N, 6,74; S, 7,74 HS: 99,4% ~ 8104660-9 Exemnel D l-(3-merkapto-2-D-metyl-l-oxopropyl)-4-cis-heptyl-L-prolin (a) 1-15-(acetyltio)-2-D-metyl-1-oxopropylf-4-cis-heptyl-L-urolin En omrörd suspension av 3,0 g (0,0l3 mol) cis-4-heptyl~L- -prolin i en lösning av l g Na2CO3 i 50 ml vatten kyldes till.l0O och behandlades porticnsvis med en lösning av 2,6 g (0,0l4 mol) D-3-acetyltio-2-metylpropionylklcrid i 5 ml eter under 10 minuter.

Ytterligare 2,5 g Na2CO3 sattes (portionsvis) till blandningen under denna tidsperiod för att hålla pH vid ungefär 8. En klar lösning erhölls. Isbadet avlägsnades, lösningen omrördes i 90 minuter vid rumstemperatur, kyldes, 50 ml EtOAc tillsattes och blandningen surgjordes med 10 ml 6 N saltsyra. Faserna avskildes och vattenfasen extraherades med 25 ml EtOAc. De organiska faserna kombinerades, torkades (MgS04), filtrerades och lösningsmedlet indunstades i vakuum och gav 5,5 g nästan färglös viskös återstod. Denna upplöstes i 25 ml EtOAc och behandlades med en lösning av 2,7 g dicyklohexyl- amin i 5 ml EtOAc. Den erhållna lösningen ympades och dicyklohexyl- aminsaltet kristalliserade snabbt. Efter kylning över natten vägde den nästan färglösa fasta substansen 6,0 g (79%); smältpunkt 157-1590 1510). Efter omkris-:ailisation ur ao m1 cH3cN vägde den färglösa fasta substansen 5,4 g (7l%); smältpunkt l6l-1630; fiàfšs = -64,50 1% i CHCILB) .

Analys beräknad för Cl8H3lN04S-Cl2H23N: C, 66,87; H, 10,10; N, 5,20; S, 5,95 Funnet: C, 66,68; H, 10,06; N, 5,20; S, 5,98 Det ovan angivna dicyklohexylaminsaltet (5,35 g) överfördes till den fria syran genom suspendering i 60 ml EtOAc och portionsvis behandling med 60 ml 10%-ig KHSO¿-lösning. Skikten avskildes och vattenfasen extraherades med 30 ml EtOAc (2 ggr). De organiska faserna kombinerades, torkades (MgSO4), filtrerades och lösnings- medlet indunstades och gav 3,6 g (74%) av en nästan färglös sirap. Ååfšs = ~l05o (l% i EtOH). Rf = 0,26 (85 % toluen - l5% ättiksyra på silikagel). (b) 1-(3-merkapto-2-metyl-l-oxopropvl)-4-cis-heptyl-L-prolin Produzten enligt (a) (3,3 g) under argonatmosfär behandlades med en kall lösning av l0 ml koncentrerad NH3 i 25 ml vatten. Den Omrörda blandningen blev en lösning efter flera minuter, fick därefter stå i 2 timmar vid rumstemperatur, kyldes och extraherades med 20 ml EtOAc (2 ggr). Vattenfasen omrördes, skiktades med 20 ml EtOAc, sur- gjordes med 6 N saltsyra och skikten separerades. Vattenfasen extra- herades med Et0Ac (2 ggr), De organiska faserna kombincrades, torka- 8104660-9 28 des (MgSO4), filtrerades och lösningsmedlet indunstades och gav 2,87 g (98%) av en nästan färglös sirap; ¿Q]š5 = -740 (l% i EtOH); Rf = 0,22 (85% toluen ~ 15% ättiksyra på silikatgel); Rf = 0,72 (95:5:5 CH2Cl2-MeOH-AcOH på silikagel).

Analys beräknad för Cl6H29NO3S-O-25 H20: C, 60,05; H, 9,45; N, 4,38; S, 10,02; SH, 10,33 Funnet: C, 60,44; H, 9,36; N, 4,48; S, 10,12; SH, 10,40 1-adamantanaminsaltet av detta material smälte vid 177-1790 (ur EtOAc).

Exempel E _ l-¿2-(merkaptometyl)-l-oxo-9-fenylnony1]¥L-orolin (a) 1-12-(acetyltiometyl)-l-oxo-9-fenylnonylï-L-prolin 5,0 g 3-(acetyltio)-(2-fenyl-n-heptyl)-propionsyra och 2,38 g hydroxibensotriazol i 23 ml tetrahydrofuran omrördes under kyl- ning i isbad. Till denna produkt sattes 3,2 g dicyklohexylkarbodiimid, följt av 2,65 g L-prolin, t-butylester i 100 cm3 tetrahydrofuran.

Reaktionsblandningen omrördes över natten vid rumstemperatur; biprodukt- karbamiden avfiltrerades, filtratet koncentrerades till torrhet i vakuum, återstoden upptogs i etylacetat och tvättades neutral med 10%-ig KHSO4 och mättad NaHCO3; etylacetatet avlägsnades och åter- stoden kromatograferades på en silikagelkolonn med användning av kloro- form-etylacetat (9:l) som eluent och gav 5 g produkt som t-butylestern, vilken överfördes till syran genom behandling med ll,5 cm3 anisol och 25 cm3 trifluorättiksyra och gav titelprodukten (4,2 g). (b) 1-12-(merkaptometyl)-l-oxo-9-fenylnonyl7-L-prolin Produkten från del (a) upptogs i 15 cm3 kall metanol under argonatmosfär. Därtill sattes 15 cm3 kall koncentrerad ammoniumhydroxid.

Efter 30 minuter surgjordes reaktionsblandningen med koncentrerad HC1 och extraherades i etylacetat och gav 4 g klar olja (smältpunkt l04-ll0°) som adamantylaminsaltet framställt i eter-hexan.

Exempel F _ 3-heptyl-l-(3-merkapto-l-oxopropyl)-2-azetidin-karboxylsyra (a) 3~heptyl-l-(3-acetyltio-1-oxo~propyl)-2-acetídin~karboxylsyra 3-heptylf2-acetidinkarboxylsyra och 3-acetyltiopropionyl- klorid fick reagera enligt förfarandet i exempel D, del (a) och gav titelprodukten som en olja, TLC, Rf = 0,21, silikagel, toluen-ättik- syra (9:l). _ (b) 3-heptyl~l-(3-merkapto4l~oxopropyl)-2-acetidin-karboxylsyra 174 mg av produkten enligt del (a) upplöstes i 5 ml vatten och l ml koncentrerad ammoniak under argonatmosfär och omrördes i en timme, surgjordes därefter med koncentrerad UCI och extrahe- 8104660-9 29 rades i eter. Eterextrakten tvättades med saltlake, torkades över HgSO4 och indunstades och gav ll8 mg produkt som en olja, som upptogs i etylacetat och överfördes till adamantylaminsaltet, smältpunkt 164-1s7°.

Exempel G l-[É-(merkaptometyl)~l~oxononyl7-L-prolin (a) l-ÅÉ-(acetyltiometyl)-l~oxononyl]¥L-prolin 3-acetyltio-2-n-heptyl-propionsyra (2,46 g) och 1,53 g hydroxibensotriazol upptogs i 15 ml tetrahydrofuran under omrörning i isbad. Därtill sattes 2,06 g dicyklohexylkarbodiimid, följt av 1,71 g L-prolin, t-butylester i 5 ml tetrahydrofuran. Efter 15 minuter av- lägsnades isbadet och reaktionsblandningen omrördes över natten vid rumstemperatur. Karbamidbiprodukten avfiltrerades och filtratet indunstades till torrhet, upptogs i etylacetat och tvättades neutral med 10%-ig KHSO4ochnättad NaHCo3, och etylacetatet avlägsnades och gav 3,9 g produkt som t-butylestern. Esterprodukten upptogs i 11,3 ml anisol och 20 ml trifluorättiksyra och fick stå i en timme samt koncen- trerades till torrhet i vakuum till bildning av en olja, som kromato~ graferades på en silikagelkolonn med bensen-etylacetat (7:l) som eluent och gav 1,8 g av titelföreningen. (b) l-¿2-(merkaptometyl)-l-oxononylf-L-prolin 1,7 g av produkten från del (a) upptogs i 8 ml kall metanol under argonatmosfär och behandlades med 8 ml kall koncentrerad ammoniak.

Efter 30 minuter kyldes reaktionsblandningen, surgjordes med koncen- trerade HCl och extraherades i etylacetat som vid indunstning gav 1,5 g produkt som en olja ísmältpunkt 159-1620 som adamantylaminsalt). §ëÉERÉl.É 1-(3-merkapto~l-oxodecyl)~L'Prolin (a) 3~¿Éacetyltio)-1-oxodecyl/¥L-prolin, t-butylester 6,75 g (0,05 M) hydroxibenstriazol, HOBT 10,3 g (0,05 M) dicyklohexylkarbodiimid, DCC 8,6 g (0,05 M) L-prolin, t-butylester 12,3 (0,05 M) (i)~3-(a:etyltio)dekansyra UJKQ 500 cm etylacetat HOBT upplöstes i etylacetat vid 500 och kyldes till rums- temperatur. Den ovannämnda dekansyrareaktanten tillsattes, följt av DCC. Efter nägra minuter började en kristallin fast substans att utfällas. Reaktionsblandningen omrördes vid rumstemperatur i 2 1/2 tim- mar; därefter tillsattes L-prolin, t-butylestern och blandningen om- rördes över natten vid rumstemperatur. Den fasta substansen avfiltre- rades och gav 9,6 g dic'klohexylkarbamid. Etylacetatfiltratet tvät~ 8104660-9 30- tades med 2 x 200 cm3 5%-ig NaHCO , 1 x 200 cm3 mättad NaCl, 2 x 200 cm3 5%-ig HC1, 1 x 200 cmå mättad NaC1 och torkades över MgSO4. Lösningsmedlet avlägsnades och man erhöll 17,8 g (89%) produkt.

Analys beräknad för C2lH37NO4S: C, 63,12; H, 9,33; N, 3,51 Funnet: C, 64,01; H, 9,66; N, 3,94 (b) l-[§-(acetyltio)-1-oxodecyl7¥L-prolin 17,3 g (0,043 M) (1)-3¿(acety1tio)-l-oxodecylf-L-prolin, t-butylester från del (a) 135 cm3Wtrif1uorätriksyra 6 cm3 anisol Ovannämnda lösning omrördes vid rumstemperatur under N2 i ungefär 4 timmar. Överskottet trifluorättiksyra avlägsnades vid 400 och 3 mm och gav en viskös återstod med vikten 25,6 g (teoretiskt = 14,8 g). Återstoden upplöstes i 150 cm3 eter och en eterlösning av 10 g dicyklohexylamin i 50 cm3 eter tillsattes. En vit kristallin fällning bildades omedelbart åtföljt av en temperaturökning. Efter kylning filtrerades den fasta substansen och gav 15 g (smältpunkt 225-2300) dicyklohexylaminsalt av trifluorättiksyra. Filtratet fördelades mellan 10%-ig KHSO4 och vatten, och det organiska skiktet tvättades med mättad NaCl och torkades över MgSO4. Lösningsmedlet avlägsnades och man erhöll 15 g mörk viskös återstod.

Analys beräknad för Cl7H29NO4S: C, 59,44; H, 8,51; N, 4,08; S, 9,33 Funnet: C, 59,64; H, 8,60; N, 3,81; S, 9,56 (c) 1-(3-merkapto-1-oxodecyl)-L-prolin, Ka2963 15 g (o,o43 M) (i)-1-¿R3-acetyltio)-1-øxodecy;]>L-pralin från del (b) 160 cm3 vatten 65 cm3 hona. NH4oH Den ovan angivna blandningen omrördes under N2 vid rumstempe- ratur i ungefär 3 timmar. Alkaliolösligt material extraherades med etylacetat. Det ljusgula vattenskiktet vattenskiktet täcktes med etylacetat och gjordes starkt surt med 20%-ig HC1. Skikten avskildes och vattenskiktet extraherades med ytterligare 200 cm3 etylacetat.

De kombinerade organiska skikten tvättades med mättad NaCl och torka- des över MgSO4. Lösningsmedlet avlägsnades och gav en återstod av 8,7 g (67%) som gav ett starkt SH-test. Denna upplöstes i 200 cm3 bensen och frystorkades och gav 8,4 g (62%) av titelprodukten som en viskös vätska.

Analys beräknad för Cl5H27NO3S-0,5 M H20: C, 58,02; H, 9,09; S, 10,33; N, 4,51; SH, 100% Funnflt: C, 57,77; H, 9,37; S, 10,24; N, 4,47; SH, 98,9 8104660-9 31 Exempel I 5-butyl-l-(3-merkapto-l-oxopropyl)-2-pineridin-karboxylsyra (a) 5-butyl-l-(3-acetyltio-l~oxopropvl)-2-piperidinkarboxylsvra Till en lösning av 3,0 g (0,0l5 mol) 5~butylpipekolinsyra i 15 ml l N NaOH skiktad med 15 ml EtOAc sattes på en gång 15 ml l N NaOH och 2,4 g 3-acetyltiopropionylklorid i 15 ml Et0Ac och blandningen omrördes vid rumstemperatur i 3,0 timmar. EtOAc~skiktet kastades och vattenskiktet extraherades två gånger med EtOAc innan pH sänktes till pH 4 med koncentrerad HCl. Den erhållna oljan extra- herades med EtOAc. De organiska skikten kombinerades, torkades (MgSO4) och indunstades och gav en olja, som kromatograferades på en kiselkolonn (toluen-HOAC 9:1) och gav 4,3 g ren förening. 0,2 g överfördes till dicyklohexylaminsaltet, smältpunkt 128-l30oC.

Analys beräknad för Cl5H25NO4S-Cl2H23N: C, 65,28; H, 9,73; N, 5,64 Funnet: C, 65,18; H,l0,ll; N, 5,59 íb) 5-butyl-l-(3-merkapto-l-oxopropyl)-2-piperidinkarboxylsyra En iskall blandning av 4,0 g (0,0l3 mol) av föreningen från del (a) och 20 ml 6,5 N NH4OH omrördes under argonatmosfär i en timme, varvid lösningen fick uppvärmas till rumstemperatur. Blandningen surgjordes därefter med HCl, och den erhållna oljan extraherades med EtOAc. De organiska skikten kombinerades, torkades (MgSO4) och in- dunstades och gav 2,3 g av en färglös olja, som renades via ett dicyklo- hexylaminsalt, smältpunkt l80~1820.

Analys beräknad för Cl3H23NO35'Cl2H23N: C, 66,04; H, 10,20; N, 6,l6 Funnet: C, 66,07; H, 10,53; N, 6,12 Dicyklohexylaminsaltet behandlades med 10%-ig KHSO4 (aq.) och den erhållna oljan extraherades med Et0Ac. De organiska skikten kombinerades, torkades och indunstades och gav 2,1 g färglös olja.

TLC: Rf = 0,4 (toluen-HOAC 9:1) silikagel.

Claims (6)

8104660-9 32 PATENTK RAV

1. l. Förfarande för framställning av nya derivat av azetidin~ -2-karboxylsyra, prolin och pipekolinsyra med formeln Rs H c ' (ca) 2 m R4 Rl Hs- (CH) n-cH-co-N cn-coofi vari 1 och R4 vardera är väte, Cl-C7-alkyl, fenyl eller fenyl-Cl-C7- alkyl, är väte, hydroxi eller Cl-C7-alkyl, m är l, 2 eller 3, och n är 0, l eller 2; k ä n n e t e c k n a t därav, att man från en förening med formeln Rs R 4 Rl H2? (CH) m I Y-S- (CH) n-CIiI-CO-"N CH-COOH vari Y är en skyddande grupp och Rl, R3 och R4 har ovan angiven betydelse, avlägsnar den skyddande gruppen (Y) enligt konventionella metoder.

2. Förfarande enligt patentkravet l, k ä n n e t e c k - n a t därav, att den skyddande gruppen har formeln R5C0-, vari R5 är Cl-C7-alkyl, fenyl eller fenyl-Cl-C7-alkyl.

3. Förfarande enligt patentkraven l och 2, k ä n n e - t e c k n a t därav, att produkten har formeln 33 8104660-9 R R4 l :is- (cH) n--CH~*C°'_N C00” vari Rl och R4 vardera är väte, Cl~C7-alkyl eller fenyl-Cl-C7- alkyl; R3 är väte, hydroxi eller Cl-C7-alkyl och n är 0, l eller 2.

4. Förfarande enligt patentkraven l-3, k ä n n e t e c k - n a t därav, att produkten är 1-(3-merkapto-2-D-metylpropanoyl)-L- prolin.

5. Förfarande enligt patentkraven l-4, k ä n n e t e c k - n a t därav, att l-(3-bensoyltio-2-D-metylpropanoyl)-L-prolin eller l-(3-acetyltio-2-D-metylpropanoyl)-L~prolin underkastas ammonolys till bildning av l-(3-merkapto-2-D-metylpropanoyl)-L-prolin.

6. Förfarande enligt patentkravet l, k ä n n e t e c k - n a t därav, att den skyddande gruppen har formeln RSCO-, vari R5 är Cl-C7-alkyl, fenyl eller fenyl-Cl-C7-alkyl, och att den avlägsnas genom ammonolys. 8104660-9 Sammandrag i Förfarande för framställning av föreningar med formeln Rs Hzc (cmm R4 Rl Hs- (CH) n-cH-co-N cH-coon vari Rl och R4 vardera är väte, lägre alkyl, fenyl eller fenyl- -(lägre alkyl); R3 är väte, hydroxi eller lägre alkyl; n är 0, l eller 2 och m är 1, 2 eller 3; genom att från en förening med formeln Ra 114 al H21: (icmm Y-S-- C CH) n-cH-co-N cH-coon vari Y är en skyddande grupp och Rl, R3 och R4 har ovan angiven betydelse, den skyddande gruppen (Y) avlägsnas enligt konventio- nella metoder.