SA519401906B1 - أجسام مضادة ومتعددات ببتيد موجهة ضد cd127 - Google Patents

Abstract

يتعلق مجال الاختراع بالأجسام المضادة المفيدة في التطبيقات العلاجية والتشخيصية التي تستهدف CD127، الذي يمثل سلسلة ألفا لمستقبلة IL7، ويوفر الاختراع بشكل خاص أجسام مضادة أحادية النسيلة مؤنسنة ضد CD127، وخاصة CD127 بشري، واستخداماتها العلاجية، وتطبيقاتها التشخيصية.

Description

أجسام مضادة ومتعددات ببتيد موجهة ضد ‎CD127‏ ‎ANTIBODIES AND POLYPEPTIDES DIRECTED AGAINST 7‏ الوصف الكامل خلفية الاختراع يكمن مجال الاختراع في متعددات الببتيدات أو الأجسام المضادة المفيدة في التطبيقات العلاجية والتشخيصية التي تستهدف 00127؛ الذي يمثل سلسلة ألفا لمستقبلة 7ااء ويوفر الاختراع بشكل خاص أجسام مضادة أحادية النسيلة مؤنسنة ضد ‎(CD127‏ وخاصة 00127 ‎(gyi‏ ‏5 واستخداماتها العلاجية؛ وتطبيقاتها التشخيصية. تم الكشف عن الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ضد 1-788 التي لها خصائص مضادة تجاه 1-7548 في نشرة الطلب الدولي رقم ‎WO2010/017468‏ وأشكالها المؤنسنة في الطلب الدولي رقم ‎WO2011/094259‏ بهدف علاج أمراض المناعة الذاتية ‎Jie‏ التصلب المتعدد. وقد ذكر أن الأجسام المضادة الموصوفة تكون مضادة لربط 7-اا بمستقبلته؛ وفعالة ضد تمدد خلايا 0 11117 و1111 ‎ily‏ على قيد الحياة والتي تتطلب تفاعل ‎IL-7‏ مع مستقبلته 00127. لم يؤخذ في الاعتبار تأثير هذه الأجسام المضادة على نضوج الخلايا المناعية؛ وخاصة الخلايا المتغصنة. إلى جانب ذلك؛ ذكر إن هذه الأجسام المضادة لا تثبط إنتاج ‎TARC‏ المستحث ب ‎TSLP‏ (صفحة 107 من الطلب الدولي رقم 2011/094259). وبالمثل؛ لم يتم تناول الأجسام المضادة ل 00127 المذكورة في طلب براءة الاختراع الدولي رقم 2011/104687 أو في طلب براءة الاختراع الدولي رقم 2013/056984 التي من المزمع استخدامها في معالجة داء السكري؛ الذئبة؛ التهاب المفاصل الروماتويدي وأمراض المناعة الذاتية الأخرى من حيث تأثيرها المحتمل على نضج ‎DAY‏ التغصنية ولم يتم ذكر تفاعلها مع مسار التأشير المستحث بواسطة ‎TSLP‏ ‏بالإضافة إلى ذلك؛ كما تم نشره بواسطة ‎Kern et al (Kern et al., 2013; Kern et al.,‏ )2015 وكما هو موضح ‎(lia‏ تحث الأجسام المضادة التي تعمل ضد 0127© وفقا للفن السابق استبطان المستقبل. ونظراً لأن الأجسام المضادة التي تعمل ضد 60127 التي تحث أيضاً استبطان 60127 لم تسيطر على فرط الحساسية الجلدي من النوع الرابع بينما الأجسام المضادة

التي تعمل ضد 00127 التي لا تحث الاستبطان سيطرت عليه؛ فقد يبدو أن عملية الاستبطان ‎lads‏ مسار التأشير مما يعمل على تخفيف التأثير المضاد للأجسام المضادة. وأخيراً» تتعرف الأجسام المضادة وفقاً للتقنية السابقة على حاتمة لا تشتمل على أي سياق من الموقع 2ب ل 7 (أي على وجه الخصوص من الأحماض الأمينية 180-109 من سياق برقم التعريف: 22؛ أو بشكل خاص من الأحماض الأمينية 173-109 من سياق برقم التعريف: 22؛ أو على وجه الخصوص من الأحماض الأمينية 180-113 من سياق برقم التعريف: 22؛ أو بشكل خاص من الأحماض الأمينية 173-113 من سياق برقم التعريف: 22)؛ ‎alg‏ يثبت أنه يعطل ارتباط 10127 بسلسلة ‎IL7 R J gc‏ ولقد سعى المخترعون إلى الحصول على أجسام مضادة مؤنسنة محسّنة عند مقارنتها 0 بالأجسام المضادة ‎N13B2-h3 5 N13B2-h2 (N13B2-h1‏ التي تم الكشف عنها في طلب براءة الاختراع الدولي رقم 2015/189302. ومع أنه من المعروف أن بعض الشقات في السياقات الهيكلية للنطاق المتغيرء ‎Le‏ في ذلك الشقات في منطقة فيرنييه ‎Vernier‏ والشقات القانونية؛ و الشقات في السطح البيني ل ‎HVE‏ وما إلى ذلك؛ تعتبر ضرورية في بنية الجسم المضاد ويجب عدم تحويرها من أجل الحفاظ على النشاط البيوكيميائي والبيولوجي للجسم المضاد؛ فقد اكتشف 5 المخترعون بشكل مدهش أن بعض الطفرات ضمن السياق الهيكلي للنطاق المتغير للسلسلة الخفيفة لا 801382 ‎Le‏ في ذلك بعض الشقات المهمة من هذه الشقات؛ تسمح بزيادة محتوى الشقات البشرية (أعلى من 111382-13 وتصل نسبتها إلى 786.3( وتحسين الإنتاج (أعلى ب 4 مرات كحد أقصى من ‎(N13B2-h3‏ مع الحفاظ على جميع السمات الوظيفية. الوصف العام للاختراع شار إلى سلسلة ألفا ‎alpha chain‏ (أو الوحدة الفرعية ‎(subunit‏ لمستقبلة انترلوكين -7 ‎(IL-7) interleukin?‏ ب 60127 أو 7-اا ‎p90‏ أو ‎IL-7Ralpha‏ أو ‎IL-7Ra‏ (يشار إليها ‎Lad‏ أحيانًا ب 78-). وفي جانب محدد؛ تكون الأجسام المضادة ‎antibodies‏ وخاصة الأجسام المضادة أحادية النسيلة ‎antibodies‏ 0100001008 المزودة هنا موجهة ضد سلسلة ألفا لمستقبلة ‎IL-7‏ البشري المعبر عنه في ‎WA‏ بشرية. وفي جانب ‎carne‏ فإن الأجسام المضادة 5 المزودة هنا لها خصائص مضادة ‎antagonist‏ لتفاعل ‎(IL-7-IL-7R‏ وقد تظهر نشاطاً ساماً

للخلايا ‎cytotoxic activity‏ ضد الخلايا الإيجابية لل 000127 ولكن لا تزيد من نضج ‎LIAL maturation‏ التغصنية ‎(DCs) dendritic cells‏ المستحث بواسطة ‎Thymic‏ ‎TSLP Stromal Lymphopoietin‏ . وبصفة محددة؛ تتعريف الأجسام المضادة المزودة هنا على حاتمة ‎CD127 epitope‏ بشرية تشتمل على سياقات من الموقع 2ب لذ 000127؛ وتشتمل

الحاتمة على ‎dag‏ الخصوص على سياقات ‎sequences CD127‏ بشربة للنطاق ‎D1 domain‏ وللموقع 2ب لذ 00127 وتشتمل الحاتمة تحديداً على سياق واحد على الأقل من 01 وسياق واحد على الأقل من الموقع 2ب ويفضل من صفيحة بيتا ‎beta sheet‏ الثالثة للموقع 2ب لل 7. وعلى نحو بديل؛ أو بالإضافة إلى ذلك؛ في جانب محدد؛ لا تحث الأجسام المضادة المزودة هنا استبطان ‎internalization‏ 0127© و/أو ‎inhibit Lis‏ الاستبطان المستحث ب ‎IL7‏

0 لذ 00127. وفي جانب محدد؛ تكون الأجسام المضادة المزودة هنا مؤنسنة ‎humanized‏ ‏وتشتمل على 780 على الأقل ‎diag‏ 784 على الأقل أو 785 على الأقل من الشقات البشرية. ‎Ag‏ جانب محدد؛ يكون للأجسام المضادة المزودة هنا تأثير سريع على خلايا ‎T‏ الذاكرة والمستفعلة ‎effector memory‏ وتأثير طويل الأمد ‎long-lasting effect‏ على خلايا ‎T‏ الذاكرة والمستفعلة؛ أو على نحو مفضل؛ تأثير سريع وطويل الأمد على خلايا 1 الذاكرة والمستفعلة. وفي

5 جانب معين؛ تسمح الأجسام المضادة المزودة هنا بالإنتاج الفعال. ‎(By‏ جانب معين؛ يمكن قياس مستويات التعبير ‎expression levels‏ عن ‎«CD127‏ 7-اا و/أو ‎TSLP‏ لتقييم احتمال الاستجابة؛ وخاصة باستخدام الأجسام المضادة الموجهة ضد 00127 المزودة هنا. وبالإضافة إلى الأجسام المضادة المزودة هناء خاصة كأدوات لإنتاج الأجسام المضادة و/أو لاستخدامات مشابهة لاستخدامات الأجسام المضادة المذكورة؛ تكمن متعددات الببتيدات ‎«polypeptides‏

0 وخاصة نطاقات متغيرة للسلاسل الخفيفة للجسم المضاد ‎antibody light chain variable‏ 5 أو سلاسل خفيفة للجسم المضادء شدفات ارتباط ‎Mga‏ المضاد ‎antigen-binding‏ ‏5 وجزيئات محاكية للأجسام المضادة ‎antibody mimetic molecu‏ من هذه الأجسام المضادة ومتعددات النيوكليوتيدات 01001601065/ا0م.

وتتكون هذه الطفرات ‎mutations‏ من 16 استبدال للحمض الأميني ‎aminoacids‏ ‏5 ضمن السياق الهيكلي للنطاق ‎domain framework sequence‏ المتغير للسلسلة الخفيفة من

2 وبشكل خاص ‎Lead‏ في استبدال شق ال ‎valine‏ في الموقع 48 بشق ‎residue‏ ‎(V48L) leucine‏ و/أو في استبدال شق ال ‎phenylalanine‏ في الموقع 87 بشق ‎tyrosine‏ ‎.(FBTY)‏ وبتم توفير هذه المواقع وأي مواقع للأحماض الأمينية في سلاسل الأجسام المضادة المزودة هناء ما لم يذكر خلاف ذلك؛ باستخدام ترقيم ‎(Kabat‏ وتزود هنا النطاقات المتغيرة

اللسلسلة الخفيفة للجسم المضاد المحسنة التي تتكون من السياقات التالية: سياق برقم تعريف ‎ID NO‏ 556: 9 (يشتمل على استبدالات الأحماض الأمينية الستة عشر المذكورة - ‎SLE‏ إلى النطاق المتغير للسلسلة الخفيفة للجسم المضاد المذكور فيما يلى ب ‎¢(N13B2-hVL3‏ ‏سياق برقم تعريف: 10 (يشتمل على استبدالات الأحماض الأمينية الستة عشر المذكورة بالإضافة

0 إلى الطفرة ا48/ - ‎ling‏ إلى النطاق المتغير للسلسلة الخفيفة للجسم المضاد المذكور فيما يلي ب ‎¢(N13B2-hVL4‏ ‏سياق برقم تعريف: 11 (يشتمل على استبدالات الأحماض الأمينية الستة عشر المذكورة بالإضافة إلى الطفرة 877 - ويشار إلى النطاق المتغير للسلسلة الخفيفة للجسم المضاد المذكور فيما يلى ب ‎¢(N13B2-hVL5‏ و

5 سياق برقم تعريف: 12 (يشتمل على استبدالات الأحماض الأمينية الستة عشر المذكورة بالإضافة إلى الطفرتين ا48/ و 5877 - ‎slag‏ إلى النطاق المتغير للسلسلة الخفيفة للجسم المضاد المذكور ‎lad‏ يلي ب ‎(N13B2-hVL6‏ ‏ويالتالي؛ يشتمل النطاق المتغير للسلسلة الخفيفة للجسم المضاد المشار إليه هنا ب ‎NI3B2-‏ ‏3 على ‎CDRs‏ ل ‎N13B2-h3‏ واستبدالات الأحماض الأمينية الستة عشر المذكورة

والشقات الأصلية لذ ‎NI3B2‏ في المواقع المهمة 48 و 87 (أي؛ على التوالي ‎١/‏ و ‎(F‏ ضمن السياقات الهيكلية البشرية وبشتمل على السياق برقم التعريف: 9. ويتكون النطاق المتغير للسلسلة الخفيفة للجسم المضاد المحسن المفضل المزود ‎clin‏ المشار إليه ب 811382-11/1-6؛ المشتمل أيضاً على الطفرتين ا1/48 و ‎FBTY‏ من السياق المذكور في السياق برقم التعريف: 12.

ولم يكن الشخص المتمرس يتوقع أن الطفرات المذكورة؛ لا سيما في هذه المواقع في المناطق الهيكلية للنطاق المتغير للسلسلة الخفيفة لن ‎jig‏ على ألفة الجسم المضاد مع ‎٠/48 :CD127‏ عبارة عن شق قانوني و 787 يقع في السطح البيني ل 7/11/1/1؛ ومن المتوقع أن تؤثر طفرة هذه الشقات؛ كما هو معروف للشخص المتمرس وموصوف فيء مثلاً؛ المرجع 2014 ‎Clark,‏ على ألفة و/أو ثبات الجسم المضاد. وكما هو مستخدم ‎(ba‏ يشير المصطلح شق "قانوني ‎‘canonical‏ ‏إلى شق في المنطقة المحددة التكميلية ‎(CDR) complementarity—determining region‏ أو هيكل يحدد بنية ‎CDR‏ قانونية محددة كما حددت في المرجع ‎Chothia et al., J.

Mol.‏ ‎Biol. 196:901- 907 (1987); Chothia et al., J.

Mol.

Biol. 227:799 (1992).‏ ووفقاً لما جاء عن ‎«Chothia et al‏ يكون للأجزاء الهامة من ‎CDRs‏ للعديد من الأجسام 0 المضادة تقريباً أشكال دعامية ببتيدية مماثلة على الرغم من التنوع الكبير على مستوى سياق الأحماض الأمينية. وتحدد كل بنية قانونية بشكل أساسي مجموعة زوايا التواء الدعامة الببتيدية ‎peptide backbone torsion angles‏ لجزء متجاور ‎contiguous‏ من شقات أحماض أمينية تشكل حلقة ‎aly loop‏ يكن من المتوقع أن يؤدي إدخال الطفرات التي تم الكشف عنها في كلا الموقعين إلى تحسين الإنتاج مع الحفاظ على سمات الارتباط وسمات وظيفية أخرى مفيدة للأجسام 5 المضادة. ووفقاً لذلك؛ يزود هنا متعدد ببتيد مفيد تحديداً لإنتاج هذه الأجسام المضادة ولا سيما نطاق متغير للسلسلة الخفيفة للجسم المضاد أو سلسلة خفيفة للجسم المضاد؛ يتكون من سياق ولا سيما سياق يشتمل على ما لا يزيد عن 250 حمض أميني؛ يشتمل على أو يتكون من السياق المذكور في السياق برقم التعريف: 9؛ السياق برقم التعريف: 10؛ أو السياق برقم التعريف: 11( أو السياق 0 برقم التعريف: 12( أو شدفة ارتباط بمولد مضاد أو جزيء محاكٍ للجسم المضاد منه كما هو محدد ‎Lad‏ يلي. وفي جانب محدد؛ يتعلق الاختراع بأجسام مضادة أو شدفة ارتباط بمولد مضاد منهاء كما هو مزود هناء ولا سيما أجسام مضادة أحادية النسيلة مؤنسنة؛ ‎dag eg‏ الخصوص ترتبط ب ‎CD127‏ وخاصة 010127 بشري؛ وتشتمل على:

سلسلة خفيفة للجسم المضاد تشتمل على أو نطاق متغير للسلسلة الخفيفة للجسم المضاد يتكون من سياق يختار من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف: 9؛ سياق برقم تعريف: 10؛ سياق برقم تعريف: 11؛ سياق برقم تعريف: 12؛ وبالأخص سياق برقم تعريف: 12؛ و نطاق متغير للسلسلة الثقيلة للجسم المضاد يشتمل على مناطق ‎CDR‏ الثلاث التي تتكون من السياقات كما حددت في سياق برقم تعريف: 1؛ سياق برقم تعريف: 2« وسياق برقم تعريف: 3؛ وبالأخص نطاق متغير للسلسلة الثقيلة للجسم المضاد يتكون من السياق المحدد في السياق برقم تعريف: 7. وفي تجسيد مفضل» يتعلق الاختراع بأجسام مضادة أو شدفات ارتباط بمولد مضاد منهاء كما زودت هناء وبخاصة أجسام مضادة أحادية النسيلة ‎monoclonal‏ مؤنسنة ترتبط بشكل ‎est‏ ب 0 00127 ولا سيما 00127 بشري؛ وتشتمل على: نطاق متغير للسلسلة الخفيفة يتكون من سياق يختار من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف: 9< سياق برقم تعريف: 10( سياق برقم تعريف: 11 وسياق برقم تعريف: 12؛ وبالأخص سياق برقم تعريف: 12؛ و نطاق متغير للسلسلة الثقيلة يشتمل على مناطق ‎CDR‏ الثلاث التى تتكون من السياقات كما 5 حددت في سياق برقم تعريف: 1( سياق برقم تعريف: 2؛ وسياق برقم تعريف: 3 وبالأخص نطاق متغير للسلسلة الثقيلة يتكون من السياق المحدد في السياق برقم تعريف: 7. ‎J‏ جانب محدد؛ يشتمل الجسم المضاد المزود هنا على سلسلة خفيفة ذات نطاق متغير كما هو مذكور أعلاه ونطاق ثابت يتكون من سياق يتم اختياره من بين سياق برقم تعريف: 27 أو 28 وبفضل سياق برقم تعريف: 27 وسلسلة ثقيلة ‎cold‏ نطاق متغير كما هو مذكور أعلاه ونطاق ثابت 0 يتكون من السياق المحدد في سياق برقم تعريف: 26. وتم هنا أيضاً تزويد متعدد ببتيد معزول يتكون من سياق به ما لا يزيد عن 250 حمض أميني؛ ‎(Sig‏ محدد به ما لا يزيد عن 217 حمض أميني؛ ما لا يزيد عن 214 حمض أميني؛ ما لا يزيد عن 211 حمض أميني؛ والأكثر تحديداً به ما لا يزيد عن 200 حمض أميني؛ ما لا يزيد عن 175 حمض أميني؛ ما لا يزيد عن 150 حمض أميني؛ ما لا يزيد عن 135 حمض أميني؛

ما لا يزيد عن 120 حمض أميني؛ ما لا يزيد عن 107 حمض ‎«el‏ والأكثر تحديداً كذلك به ما لا يزيد عن 100 حمض أميني؛ ما لا يزيد عن 90 حمض أميني؛ ما لا يزيد عن 80 حمض أميني؛ ما لا يزيد عن 74 حمض أميني؛ ما لا يزيد عن ‎TO‏ حمض أميني؛ ما لا يزيد عن 60 حمض أميني؛ حيث يشتمل السياق المذكور أو يتكون من سياق يتم اختياره من المجموعة المكونة من:

سياق برقم تعريف: 9 ‎CDRS)‏ لل 111382-03 ضمن السياقات الهيكلية البشرية ‎human‏ ‎¢(framework sequences‏ سياق برقم تعريف: 10 ‎CDRS)‏ لذ ‎N13B2-h3‏ ضمن السياقات الهيكلية البشرية؛ بما في ذلك الطفرة ‎((VASL‏

0 سياق برقم تعريف: 11 ‎CDRS)‏ لا ‎N13B2-h3‏ ضمن السياقات الهيكلية البشرية؛ بما فى ذلك الطفرة 5871)؛ سياق برقم تعريف: 12 ‎CDRS)‏ لذ 111382-13 ضمن السياقات الهيكلية البشرية؛ بما في ذلك الطفرتين ا1/48 و 877)؛ و شدفة ارتباط بمولد مضاد منها حيث تشتمل الشدفة المذكورة بصفة خاصة على مناطق ‎CDR‏

5 الثلاث المتكونة من السياقات المحددة في سياق برقم تعريف: 4؛ سياق برقم تعريف: 5؛ وسياق برقم تعريف: 6؛ ‎JS‏ أخص شدفة تشتمل على 74 حمض أميني على الأقل تتكون من الأحماض الأمينية 24 إلى 97 من سياق برقم تعريف: 12. وتم هنا أيضاً تزويد متعددات نيوكليوتيدات تحمل شيفرة متعددات الببتيد المزودة هناء وبخاصة الأجسام المضادة أو شدفات الارتباط بمولد المضاد منها وفقاً للاختراع. وتحمل متعددات

0 الننيوكليوتيدات هذه تحديداً شيفرة متعددات ببتيد تشتمل على أو تتكون من سياق يتم اختياره من بين المجموعة المكونة من السياقات بأرقام التعريف: 9 إلى 12؛ وتحمل أيضاً شيفرة متعددات ببتيد تشتمل على أو تتكون من سياقات يتم اختيارها من بين السياقات بأرقام التعريف: 1 إلى 3؛ وبخاصة سياق برقم تعريف: 7 وقد تحمل أيضاً شيفرة متعددات ببتيد تشتمل على أو تتكون من سياقات يتم اختيارها من المجموعة التي تتكون من السياقات بأرقام التعريف 26 إلى 28. وبصفة

محددة» تشتمل متعددات النيوكليوتيدات المذكورة على أو تتكون » بشكل متوالف»؛ من سياقى حمض نووي (جزيئين) معزولين ‎isolated nucleic acid sequences‏ اثنين على ‎«(JN‏ جزيء حمض نووي معزول أول يشتمل على أو يتكون من سياق يتم اختياره من بين المجموعة المكونة من السياقات بأرقام التعريف: 15 إلى 18؛ وبالأخص سياق برقم تعريف: 18؛ وتشتمل التوليفة المذكورة كذلك أو تتكون من جزيء حمض نووي معزول ‎OB‏ يشتمل على أو يتكون من سياق يتم اختياره من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف: 13 وسياقات بأرقام التعريف: 29 إلى 31؛ وبالأخص سياق برقم تعريف: 13. ود ‎ddan‏ محددة؛ ‎So‏ بشتمل متعدد الببتيد وفقاً للاختراع على نطاق 3 متغير للسلسلة الخة )2 ‎deal‏ ‏للجسم المضاد أو سلسلة خفيفة للجسم المضاد؛ ويشتمل متعدد الببتيد المذكور على 784 على 0 الأقل والأكثر تحديداً 785 على الأقل من الشقات البشرية. وقد يكون متعدد الببتيد المذكور عبارة عن شدفة ارتباط بمولد مضاد و/أو جزيء ‎dias‏ للجسم المضاد من الجسم المضاد الذي تم الكشف عنه هنا. وتم هنا ‎Load‏ تزويد تراكيب تشتمل على متعددات الببتيد المذكورة؛ وبالأخص نطاقات متغيرة للسلسلة الخفيفة للجسم المضاد أو سلاسل خفيفة للجسم المضاد؛ أجسام مضادة؛ شدفة 5 ارتباط بمولد مضاد أو جزيء محاك للجسم المضاد منها وطرق للحصول على الأجسام المضادة المذكورة؛. جزيئات حمض نووي تحمل شيفرة متعددات الببتيد والأجسام المضادة المذكورة واستخدامات متعددات الببتيد والأجسام المضادة والتراكيب المذكورة. ووفقاً ‎(SU‏ قد تكون متعددات الببتيدات؛ النطاقات المتغيرة للسلاسل الخفيفة للجسم المضاد؛ السلاسل الخفيفة للجسم المضاد؛ الأجسام المضادة؛ شدفات الارتباط بمولد المضاد؛ الجزيئات 0 المحاكية للجسم المضاد والتراكيب المزودة هنا مخصصة و/أو ملائمة للاستخدام لعلاج حالة مرضية تم تشخيصها في مريض بشري ناتجة من النشوء المرضي المرتبط بتكوّن اللمفاويات ‎dlymphopoiesis‏ عندما تسهم مسارات تأشير ‎IL-7 signalling pathways‏ بالنشوء المرضي ‎«Saal pathogenesis‏ وخاصة عندما تكون الزيادة في الطفرة؛ وبشكل أدق تنظيم تزايدي 0 لجزيئات التحفيز المشترك ‎(costimulatory molecules‏ للخلايا التغصنية غير 5 مرغوية.

— 0 1 — شرح مختصر للرسومات الشكل 1. يوضح سياقات الحمض الأميني للأجسام المضادة المزودة هنا اللوحة أ. توضح سياق السلسلة الثقيلة ‎.(VH) heavy chain‏ وتظهر مناطق ‎CDR‏ بأحرف غامقة. اللوحة ب. توضح سياق السلاسل الخفيفة ‎(LH) light chains‏ المؤنسنة ‎humanized‏

المشتقة من 1811382. وتظهر مناطق ‎CDR‏ بأحرف غامقة. وبشتمل ‎N13B2-VL3‏ على شقات هيكلية أصلية من ‎N13B2-h3‏ في المواقع 48 و 87 (تحتها خط)؛ ويشتمل ‎N13B2-VL4-‏ ‏ا48/ و ‎N13B2-VL5-F87Y‏ على الشق الهيكلي المؤنسن المقابل وبشتمل ‎N13B2-‏ ‎VEL6-V48L-FTY‏ على كلا الشقين الهيكليين المؤنسنين.

0 الشكل 2. يوضح إنتاج الأجسام المضادة - ‎zed‏ تحويلي ‎transfection‏ ثابت نفذت ثلاث دفعات إنتاجية مختلفة لكل من الأجسام المضادة المذكورة في خلايا ‎CHO-M‏ وفقاً للطرق الشائعة باستخدام أوساط خالية من المصل متوفرة تجارياً وثينت في الشكل العيارات التي تم الحصول عليها فى تجارب ‎Landsat‏ والمقاسة بواسطة معايرة ‎(ELISA‏ ويمثل المحور الأفقى زمن الزراعة بالأيام بينما يمثل المحور العمودي عيارات الأجسام المضادة التى تم الحصول عليها بوحدة

5 ميكروغرام/مل. الشكل 3 ‎as‏ الارتباط مع ‎CD127‏ ‏تم معايرة ارتباط الأجسام المضادة المشار إليها مع 001727 مأشوب بواسطة معايرة ‎ELISA‏ وفقاً للطريقة المذكورة بالتفصيل في المثال 3. ويمثل المحور ‎BY)‏ تركيز الجسم المضاد بوحدة نانوغرام/مل ويمثل المحور العمودي الكثافة البصرية عند 450 نانومتر؛ بوحدات اختيارية.

0 الشكل 4. يوضح تثبيط فسفرة ‎STATS‏ ‏تم معايرة تثبيط فسفرة ‎STATS‏ بواسطة الأجسام المضادة المشار إليها عن طريق قياس الفلورة الخلوية وفقاً للطريقة المذكورة بالتفصيل فى المثال 5. ودونت النسبة المئوية للخلايا +603 التى

— 1 1 — صبغت بأجسام مضادة ل ‎pSTATS‏ فى اللوحة أ (المحور الأفقي: تركيز الجسم المضاد بوحدة نانوغرام/مل) ومتوسط شدة التفلور ‎(MFI)‏ (بوحدات اختيارية) لإشارة ‎pSTATS‏ للخلايا +603 فى اللوحة ب. الشكل 5. يوضح التأثير على خلايا 1 الذاكرة اللوحة أ. تمثل استجابة ‎DTH‏ (المساحة تحت المنحنى لمنحنيات الاحمرار الجلدي) في البابون

بعد حقن ‎N13B2‏ ‏تمت معايرة فرط الحساسية من النوع المتأخر استجابةً لاختبار التحدي بتوبركولين في البابون المُلقح بعد إعطاء 2 ‎=n)‏ 7 بابون) أو سواغ ‎=n)‏ 4 بابون)؛ عن طريق قياس التفاعل الجلدي وفقًا للطريقة المفصلة في المثال 6. ‎Jiang‏ المحور العمودي المساحة تحت المنحنى

0 للاحمرار الجلدي بوحدات اختيارية. ودُونت القيم للتفاعلات داخل الأدمة التي أجريت عند النقاط الزمنية المحددة المشار إليها بالأيام على المحور الأفقي قبل أو بعد إعطاء ‎N13B2‏ أو السواغ (المعطى في اليوم صفر). ‎judg‏ "بعد-906' إلى نتائج التفاعل الجلدي بعد تلقيح جديد ب ‎BCG‏ ‎nd)‏ = غير محدد). ‎alg‏ يتم تحديد قيم المادة الضابطة من السواغ في الأيام 150 و 180 و'بعد-806" (00).

5 اللوحة ب ‎Jia‏ استجابة ‎DTH‏ (المساحة تحت المنحنى لمنحنيات الاحمرار الجلدي) في بابون بعد حقن 2 مؤنسن. تمت معايرة فرط الحساسية من النوع المتأخر استجابةً لاختبار التحدي بتوبركولين في البابون المُلقح؛ بعد إعطاء ‎N13B2‏ مؤنسن (889288» 32257 ‎V915GQ‏ 33874( أو محلول

0 منظم؛ عن طريق قياس التفاعل الجلدي ‎Gy‏ للطريقة المفصلة في المثال 6. ويمثل المحور العمودي المساحة تحت منحنى الاحمرار الجلدي بوحدات اختيارية. ودونت القيم للتفاعلات داخل الأدمة قبل إعطاء 11382 المؤنسن أو المحلول المنظم "10141 العمود الأول من اليسار لكل بابون)؛ بعد 4 ساعات من إعطاء 801382 المؤنسن أو المحلول المنظم 10427" العمود الثاني

من اليسار)؛ وبعد ‎«gd‏ شهرين و 3 أشهر 1043-5 العمود الثالث إلى الخامس من اليسار) وبعد 4 أشهر 10867 العمود السادس من ‎jl)‏ ل ‎VOISGA‏ فقط) من إعطاء 11382 المؤنسن أو المحلول المنظم وبعد تلقيح جديد ب ‎BCG‏ 0]477! العمود الأخير من اليسار). اللوحة ج تم إجراء ‎IFNy JELISPOT‏ على خلايا أحادية النواة من دم محيطي ‎(PBMC)‏ مستخلصة من

دم بابون ‎mile‏ ب ‎BCG‏ تم اختباره بتويركولين ومعالجته باستخدام 11382 مؤنسن. وتمت معايرة تواتر خلايا آ المتخصصة بمولد المضاد بعد اختبار تويركولين في البابون المُلقح؛ بعد إعطاء ‎N13B2‏ مؤنسن ‎(A892BB)‏ 32251 ©9156/ 33874) أو محلول منظم؛ عن طريق معايرة ‎ELISPOT‏ ل ‎IFNy‏ وفقًا للطريقة المفصلة في المثال 6. ويمثل المحور

0 العمودي تواتر البقع ل 100000 خلية. ودونت القيم ل ‎Elispot‏ بدون ‎Age‏ مضاد (بدون ‎Ag‏ ‏الأعمدة جهة اليسار) أو باستخدام مولد مضاد من توبركولين (الأعمدة جهة اليمين) قبل إعطاء 2 مؤنسن أو محلول منظم (العمود الأول من جهة اليسار لكل مجموعة من الأعمدة)؛ بعد 4 أيام من إعطاء 801382 المؤنسن أو المحلول المنظم ‎(('IDRYY)‏ بعد شهرء شهرين و 3 أشهر ‎('IDR3-5")‏ وبعد 4 أشهر 1056 ل 9156/8/ فقط) من إعطاء 11382 المؤنسن أو

5 المحلول المنظم وبعد تلقيح جديد ب ‎BCG‏ (العمود الأخير من ‎lad)‏ مخطط). الشكل 6. يوضح التعبير عن ‎«IL-7‏ 0100127 و 1510 في مرضى مصابين بمرض التهاب الأمعاء ‎(IBD) Inflammatory bowel disease‏ تم قياس مستويات التعبير عن ‎(IL-7 JMRNA‏ 60127 (شكل قابل للذويان من ‎(IL-TRa‏ و ‎TSLP‏ (كامل الطول) وفقاً للطريقة المفصلة في المثال 7 في عينات نسيجية مأخوذة من أفراد

0 ضابطين أصحاء (ضابط غير مصاب بمرض التهاب الأمعاء)؛ عينات خزعة من القولون سليمة ومريضة (ملتهبة) من مرضى مصابين بالتهاب قولون تقرحي فعال ‎(UC)‏ ممن لم يستجيبوا (أو لم يعودوا يستجيبون) للعلاج المضاد للالتهاب وفي عينات من مرضى يعانون من التهاب القولون التقرحي في فترة سكون المرض - أي تم شفاؤهم أو بمرحلة تعافي وقت أخذ العينات (مستجيبين). ‎Sia‏ المحور العمودي وحدات التفلور النسبية. ويتم تمثيل القيمة لكل عينة في مجموعة محددة؛

— 3 1 — ويمثل الشربط الأفقي متوسط القيم للمجموعة وتمثل أشرطة ‎Und‏ الانحراف المعياري. وتشير '*" إلى قيمة م > 0.05؛؛ وتشير "**" إلى ‎dad‏ 0 > 0.01؛ وتشير '* ***' إلى قيمة م < 1.... الشكل 7. يوضح تثبيط مسارات تأشير 60127

تم تقييم تأثير أجسام مضادة مختلفة تعمل ضد 000127 بشري على تنشيط مسارات التأشير بواسطة لطخة ويستيرن على النحو المفصل في المثال 8. ويمثل الشكل نتائج تمثيلية من 6 متبرعين مختلفين. ‎"No IL-7" dug‏ إلى عينة لم يتم تحفيزها بواسطة 7اا. ‎dug‏ 0 إلى عينة ضابطة تم تحفيزها ب ‎IL-7‏ فى عدم وجود جسم مضاد يعمل ضد ‎.CD127‏ وتمثل الخطوط الأفقية يسار اللطخة انتقال واسم الوزن الجزيئي المشار إليه. وتشير الأسهم على يمين

0 اللطخة انتقال ‎tyrosine 199-phosphorylated <tyrosine—phosphorylated STATS‏ ‎phosphorylated ERK 2 «phosphorylated Akt (PI13-k p55‏ و ‎GAPDH‏ كمرجع الشكل 8. يوضح إخماد إطلاق سيتوكينات خلايا 1 من خزعات المرضى المصابين بالتهاب القولون التقرحي ‎(UC) Ulcerative colitis‏

‎Ja 5‏ اللوحة أ إنتاج ‎IFNy‏ بواسطة عينات الخزعة المأخوذة من المرضى المصابين بالتهاب قولون تقرحي ‎(UC)‏ التي زرعت خارج الجسم الحي . وتمثل اللوحة ب إنتاج ‎IFNy‏ بواسطة عينات الخزعة المأخوذة من المرضى المصابين بمرض كرون ‎(CD) Crohn's disease‏ التي زرعت خارج الجسم الحي. وفي كلتا اللوحتين ¢ تم الحصول على العينات ومعالجتها على النحو المفصل في المتال 9. ‎Siang‏

‏0 كل رمز عينة واحدة من المريض» زُرعت مع ‎aa’) 19G‏ مضاد ضابط ‎Ab)‏ 011)) أو مع جسم مضاد يعمل ضد 010127 (400ا77-ا80). والرموز المتصلة هي عينات مزدوجة من نفس المريض. ** تشير إلى أن م > 0.01 باستخدام اختبار وبلكوكسون للأزواج المتوافقة. وتم تثبيط إنتاج ‎IFNy‏ بشكل كبير بواسطة ‎MAD‏ المضاد ل ‎LTR‏ وتم ملاحظة نتائج مشابهة لعينات الخزعة المأخوذة من المرضى المصابين بمرض كرون ‎(CD)‏

الشكل 9. يوضح تأثير ‎MAbs‏ المضادة ل ‎IL=TRa‏ البشري وإشارات الشادة تم تقييم تأثير أجسام مضادة مختلفة تعمل ضد 000127 بشري على تنشيط مسارات تأشير 0136 و ‎ERK‏ بواسطة لطخة ويستيرن كما هو موضح بالتفصيل في المثال 11. وببين الشكل 19 خلايا من متبرع واحد من أصل 7 متبرعين مختلفين في عدم وجود ‎ILT‏ بشري مأشوب 5 خارجي. وفي اللوحة أ يشير 'وسط' إلى عينة بدون أي جسم مضاد يعمل ضد 00127 بشري. وبقصد ب "117 ‎NO‏ " أن الأربع عينات لم يتم تحفيزها ب 7-اا. وتم ‎dallas‏ 3 عينات مسبقاً ب 10 ميكروغرام/مل من ‎MAD‏ واحد يعمل ضد ‎N13B2-hVL6) IL-TRat‏ أو 100707-13-64 أو 1811-6[1). وتبين اللوحة ب. قياس كمية ‎pI3K‏ و ‎PERK‏ المصحح وفقاً لتعبير ‎GAPDH‏ والمعاير وفقاً 0 لظروف وسط ضابط ‎=N)‏ 7 متبرعين مختلفين). ويمثل المحور العمودي التعبير المعاير وفقاً للضابط. ‎alg‏ تمثيل القيم لكل عينة في مجموعة مفردة؛ ويمثل ‎Jail)‏ الأفقي القيمة المتوسطة للمجموعة وتمثل أشرطة الخطأً الانحراف المعياري. الشكل 10. . يوضح تأثير 01/805 تعمل ضد ‎IL7T-Ra‏ بشري على تنشيط مسار ‎IL7‏ ‏تم تصحيح قياس إشارة 110-51/75م0105 وفقاً لتعبير 60011 وعويرت وفقاً لظروف وسط 5 ضابط. وعولجت ‎PBMCS‏ مسبقاً ب 10 ميكروغرام/مل من ‎MAD‏ واحد يعمل ضد ‎IL7-Rat‏ ‎N13B2-hVL6)‏ أو 100707-13-64 أو 1811) ثم حضنت لمدة 10 دقائق عند 7م مع 5 نانوغرام/مل من 7اا بشري. وتم تصحيح قياسات إشارة ‎phospho-STATS‏ وفقاً لتعبير ‎=N) GAPDH‏ 7 متبرعين مختلفين). ويمثل الخط المنقط الوضع في حالة الوسط لوحده بدون معالجة. وبتم تمثيل القيم لكل عينة في مجموعة مفردة؛ ‎Jiang‏ الشربط الأفقي القيمة 0 المتوسطة للمجموعة وتمثل أشرطة الخطأً الانحراف المعياري. وبشير "*" إلى قيمة م < 0.05 بين المجموعات المشار إليها. الشكل 11 يوضح ‎MADS‏ تعمل ضد 40ا-7اا ذات خواص شادة/مضادة مزدوجة تحث التعديلات الانتساخية

— 5 1 — يمثل الشكل تحليل سياقات ‎RNA‏ ل ‎PBMCs‏ بشرية ‎=n)‏ 7( التي حضتت لمدة 3.5 ساعة )1( مع 5 ناتوغرام/مل من ‎ILT‏ بشري؛ (2) بدون ‎(LT‏ )3 ¢4 5) مع 5 نانوغرام/مل من ‎ILT‏ بشري ‎MADS‏ مختلفة تعمل ضد ‎ILT-Rat‏ بشري ((3): 10 ميكروغرام/مل من ‎¢tN13B2-hVL6‏ ‏(4): 10 ميكروغرام/مل من 94ا-10707-13/ا؛ (5): 10 ميكروغرام/مل من 1811). اللوحة أ. توضح مخطط حراري للتعبير عن ال 93 جين المعبر عنها تفاضلياً بأقصى درجة (معدل الاكتشاف الخاطئ ‎(FDR) False Discovery Rate‏ 725 التغير المضاعف ‎Fold change‏ ‎(FD)‏ > 2( بين تحفيز ‎ILT‏ والظروف الضابطة. اللوحة ب. تمثل تحديد الجانبية المتوسطة للمجموعات الثلاث المستحثة ب ‎ILT‏ فى حالات محفزة ب 7 ضابطة و ‎mAbs‏ ضد ‎ILT-Ra‏ بشري و ‎ALT‏ ‏0 1 اللوحة ج توضح مخطط فن لتحليل سياقات ‎PBMCs 1 RNA‏ بشرية ‎=n)‏ 7( التى حضنت بدون 7-اا لمدة 3.5 ساعة مع ‎MADS‏ مختلفة تعمل ضد 1-7140 بشري (10 ميك روغرام/مل 1382-6 10 ميكروغرام/مل 194#1ا-1/010707-13 أو 10 ميكروغرام/مل 1811). وبقارن مخطط فن ال 481 جين المعبر عنها تفاضلياً ‎MAbs (1.5 > FC 75 FDR)‏ التي تعمل ‎I L-7Ra Ja‏ بشري وظروف من وسط ضابط. ويتناسب حجم الدائرة مع عدد الجينات لكل 5 فنة. الوصف التفصيلي: الكيمياء البيولوجية ‎Biochemistry‏ ‏يعتبر 00127 شائعاً في مستقبلة 7-اا (4ا7-اا) وفي مستقبلة ‎.(TSLPR) TSLP‏ وتتكون 4ا7-اا من ديمر مغاير ‎heterodimer‏ من ‎CD127‏ وسلسلة غاما ‎gamma chain‏ 0 المشتركة ‎(ye)‏ لمستقبلات إنترلوكين ‎receptors‏ 610انا1016016. ‎HWE‏ إلى سلسلة غاما المشتركة ‎bbl ye‏ هنا وفي النشرات ب ‎.CD132‏ وتكون ‎IL-TR‏ مرتبطة ب إنترلوكين 7. وتكون مستقبلة ‎TSLP‏ عبارة عن ديمر مغاير من ‎CD127‏ وعامل شبيه بمستقبلة سيتوكين-2 ‎cytokine‏ ‎.(CRLF2) receptor-like factor‏ وتكون مستقبلة ‎TSLP‏ مرتبطة ب 0ا15. وفي النشراتء

تستخدم ‎TSLPR‏ أحياناً لتشير إلى كل من سلسلة 612 للمستقبلة والمعقد ‎.CD127/CRLF2‏ ولتفادي اللبس؛ ‎sale‏ تشير ‎TSLPR‏ فيما يلي إلى المعقد. وقد يتواجد 00127 (برقم حيازة 016871 وفقاً ل ‎(Swiss Prot‏ بأربعة أشكال إسوية. ويكون الشكل الإسوي القانوني ‎«canonical isoform‏ الذي يسمى أيضاً ‎H20‏ (برقم حيازة 1. 016871 وفقاً ل ‎(Swiss Prot‏ عبارة عن بروتين عبر غشائي أحادي التمرير ‎single—‏ ‎pass transmembrane protein‏ ويشتمل على 459 حمض أميني ‎calli‏ من الطرف ‎terminal‏ لا إلى ؛ من ببتيد إشارة يه 20 حمض أميني؛ نطاق خارج الخلية ‎extracellular‏ ‏7 به 219 حمض أميني؛ نطاق عبر الغشاء ‎transmembrane domain‏ به 25 حمض أميني ونطاق داخل الخلية ‎intracellular domain‏ به 195 حمض أميني. وتشترك 0 الأشكال الإسوية ‎isoforms‏ الأخرى بسياق كل (أو معظم) النطاق خارج الخلية ‎H20‏ وتظهر سياقات متغيرة عند الطرف 0. ونُفرز الشكلان الإسويان 2 و 4 (برقمي حيازة 4- 016871 و 3- 016871 وفقاً ل ‎(Swiss Prot‏ بينما يكون الشكل الإسوي 3 (برقم ‎sles‏ 1. 016871 وفقاً ل ‎Lad (Swiss Prot‏ عبارة عن بروتين عبر غشائي ‎transmembrane‏ وتفيد المعلومات أن 00127 يشتمل على سياق برقم التعريف: 21 وبشتمل نطاقه خارج الخلية؛ عندما يتم إزالة 5 ببتيد الإشارة؛ على سياق برقم التعريف: 22. وما لم يذكر خلاف ذلك؛ يكون الترقيم المستخدم هنا للأحماض الأمينية ل 601727 هو الترقيم من السياق برقم التعريف: 22. ويكون 0100127 عبارة عن مستقبلة من الفئة | لتماثل مستقبلات السيتوكين ‎Cytokine‏ ‎١( Receptor Homology‏ 6501). وكما هو معروف جيداً في التقنية؛ يتكون النطاق خارج الخلية لهذه المستقبلات من نطاقين من فبرونيكتين ‎fibronectin‏ 3؛ يطلق عليهما 01ا و 02. 0 ولقد تم نشر البنية البلورية الدقيقة ل 010127 ووصفها في؛ على سبيل المثال» المراجع ‎McElroy et al., 2009; McElroy et al., 2012 and Walsh, 2012‏ ولقد تم الكشف عنها بشكل خاص كبيانات بنية بروتينية في قاعدة بيانات بنك بيانات البروتين لمؤسسة الأبحاث التعاونية للمعلوماتية الحيوية البنيوية ‎Research Collaboratory for Structural‏ ‎(RCSB PDB) Bioinformatics Protein Data Bank‏ برقم حيازة ‎accession number‏ 5 30001. ويعتبر 01 عموماً مشاركاً في الارتباط مع ‎IL-7‏ بينما يعتبر 02 مشاركاً في الارتباط

مع سلسلة 70 (وأيضاً مع 7-ا). والمهم هو أن الموقع 2ب للنطاق 02 يشتمل على 3 صفائح ‎by‏ تشمل السياقات التالية: سياق برقم تعريف: 32 ‎¢(FDLSVIYRE)‏ سياق برقم تعريف: 33 ‎(NDFVVTENTS)‏ وسياق برقم تعريف: 34 (1141111-05). ولذلك يكون الموقع 2ب للنطاق 2 موجوداً بين الأحماض الأمينية 109 و 180 للسياق برقم التعريف: 22 (انظر المراجع ‎.(Walsh, 2012; Verstraete, K. et al., Nature Com 2017 5‏ ويمكن أيضاً تحديد الموقع 2ب للنطاق ‎D2‏ على أنه موجود بين الأحماض الأمينية 109 و 173 للسياق برقم التعريف: 22. ويمكن أيضاً تحديد الموقع 2ب للنطاق 02 على أنه موجود بين الأحماض الأمينية 113 و 180 للسياق برقم التعريف: 22. ويمكن أيضاً تحديد الموقع 2ب للنطاق ‎D2‏ ‏على أنه موجود بين الأحماض الأمينية 113 و 173 للسياق برقم التعريف: 22. وبصفة محددة؛ 0 يشتمل الموقع 2ب للنطاق 02؛ وبشكل خاص يتكون بشكل أساسي من؛ الأحماض الأمينية 109 إلى 133 للسياق برقم التعريف: 22؛ وبالأخص 109 إلى 127؛ حيث توجد أول صفيحتين من صفائح بيتا؛ والأحماض الأمينية 166 إلى 180 للسياق برقم التعريف: 22؛ حيث توجد صفيحة بيتا الثالثة. وعلى وجه التحديد؛ يتكون الموقع 2ب بشكل أساسي من الأحماض الأمينية 113 إلى 3.؛ وبشكل خاص الأحماض الأمينية 113 إلى 127 للسياق برقم التعريف: 22 والأحماض الأمينية 166 إلى 180 للسياق برقم التعريف: 22. وبشكل أكثر تحديداً؛ يتكون الموقع 2ب بشكل أساسي من الأحماض الأمينية 109 إلى 133؛ وبشكل خاص الأحماض الأمينية 109 إلى 127 للسياق برقم التعريف: 22 والأحماض الأمينية 166 إلى 173 للسياق برقم التعريف: 22. وبشكل أكثر تحديداً؛ يتكون الموقع 2ب بشكل أساسي من الأحماض الأمينية 113 إلى ¢133 وبشكل خاص الأحماض الأمينية 113 إلى 127 للسياق برقم التعريف: 22 والأحماض الأمينية 166 0 إلى 173 للسياق برقم التعريف: 22. ويكون الموقع 2ب للنطاق 02 ‎lage‏ لتفاعل ©-00127؛ ويشكل خاص للسماح ب أو زيادة ارتباط 0600127 مع ‎YC‏ في وجود 7-اا. وبصفة محددة؛ ‎Sing‏ ‏أن الطفرات عند 0112 و ‎(L115‏ والتي تم تحديدها في المرضى الذين يعانون من العوز المناعي المشترك الشديد ‎(SCID)‏ تخل باستقرار اللب الكاره للماء للنطاق 02 والذي من المحتمل أن يؤدي إلى خاصية مرضية. وكما ذكر أعلاه؛ يتكون الموقع 2ب بشكل أساسي من الأحماض 5 الأمينية 109 إلى 180 للسياق برقم التعريف: 22؛ أو يتكون بشكل أساسي من الأحماض الأمينية 109 إلى 173 للسياق برقم التعريف: 22؛ أو يتكون بشكل أساسي من الأحماض

الأمينية 113 إلى 180 للسياق برقم التعريف: 22؛ أو يتكون بشكل أساسي من الأحماض الأمينية 113 إلى 173 للسياق برقم التعريف: 22. وسيُدرك الشخص المتمرس أنه قد لا يتم بالضرورة تحديد أطراف هذا النطاق على نحو واضح ‎unambiguously‏ بدقة للقاعدة الواحدة ‎single-base precision‏ وأنه قد يكون من المفهوم أن الموقع 2ب يشتمل؛ عند أحد أو كلا

طرفي السياق المذكور (السياقات المذكورة) على حمض أميني ‎candy‏ اثنين أو 3 أو أكثر أو أقل. ولذلك؛ عند الإشارة هنا إلى الموقع 2ب ل 00127؛ يجب أن يكون مفهوماً أنه يشير إلى سياق ‎fan CD127‏ عند الموقع 6 + 108 109 110 111 112 أو 3 وبنتهي عند الموقع 173( 174 175 176« 177 178( 179 أو 180 للسياق برقم التعريف: 22؛ وبصفة خاصة لذلك السياق الذي يُعتقد أو يتبين أنه يشكل موقع ارتباط أساسي مع سلسلة 176ل

‎IL7T-R 0‏ وخاصة في وجود 7-اا. وبشكل أكثر تحديداً؛ عند الإشارة هنا إلى الموقع 2ب ل ‎«CD127‏ يجب أن يكون مفهوماً أنه يشير إلى سياق من 60127 يبدا عند الموقع 106 107؛ 108 109< 110 ¢111 112 أو 113 ‎ging‏ عند الموقع 124 ¢125 ¢126 127(

‏8 129 130« 131 132 أو 133 من السياق برقم التعريف: 22؛ ولكن أيضاً إلى سياق من 60127 يبدأ عند الموقع 162 163 164؛ 165 أو 166 وبنتهي عند الموقع 173؛

‏5 175174 176 177« 178 179 أو 0 من السياق برقم التعريف: 22. وينبغي ملاحظة أن صفائح بيتا الثلاث كما هو محدد هنا قد تشتمل على سياقات حاتمة خاصة بأجسام مضادة أو شدفات ارتباط بمولد مضاد أو محاكيات للارتباط بمولد المضاد وفقاً للاختراع. وقد تكون الأجسام المضادة؛ شدفات الارتباط بمولد المضاد ومحاكيات الارتباط بمولد المضاد وفقاً للاختراع قادرة على الارتباط نوعياً بسياق برقم تعريف: 32؛ سياق برقم تعريف: 33؛ و/أو سياق برقم

‏0 تعريف: 34. علاوة على ذلك؛ قد يكون سياق حمض أميني يشتمل على ‎ga‏ على الأقل من صفيحة بيتا واحدة وبعض الأحماض الأمينية المتجاورة الموجودة عند أحد طرفي أي صفيحة من صفائح بيتا ‎Lad‏ عبارة عن سياق حاتمة خاص بجسم مضاد ‎hy‏ للاختراع. وكمثال؛ يشتمل السياق برقم التعريف: 35 (111081/4100//1/77) على آخر خمسة أحماض أمينية من صفيحة بيتا الثالثة وعشرة أحماض أمينية إضافية موجودة خارج صفيحة بيتا الثالثة. وكمثال ‎OAT‏

‏5 يشتمل السياق برقم التعريف: 96 ‎(RKLQPAAM)‏ على حمض أميني واحد موجود ضمن صفيحة بيتا الثالثة وسبعة أحماض أمينية إضافية موجودة خارج صفيحة بيتا الثالثة. وبصفة

محددة؛ قد يرتبط الجسم المضاد أو شدفة الارتباط بمولد المضاد منه أو محاكي الارتباط بمولد المضاد وفقاً للاختراع نوعياً ب ‎R173‏ للسياق برقم التعريف: 22. وبصفة محددة؛ قد يرتبط الجسم المضاد أو شدفة الارتباط بمولد المضاد منه أو محاكي الارتباط بمولد المضاد وفقاً للاختراع نوعياً بسياق واحد على الأقل يتم اختياره من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف: 32؛ سياق برقم تعريف: 33؛ سياق برقم تعريف: 34 سياق برقم تعريف: 35 و ‎Blas‏ برقم تعريف: 96. وبصفة محددة؛ قد يرتبط الجسم المضاد أو شدفة الارتباط بمولد المضاد منه أو محاكي الارتباط بمولد المضاد وفقاً للاختراع نوعياً بسياق واحد على الأقل يتم اختياره من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف: 36 ‎¢(LVEVKCLNFR)‏ سياق برقم تعريف: 37 ‎(ICGALVEVKCLNFR)‏ و سياق برقم تعريف: 38 (1/1401107516/ا). وبشكل بديل أو إضافيء قد يرتبط الجسم المضاد 0 أو شدفة الارتباط بمولد المضاد منه أو محاكي الارتباط بمولد المضاد وفقاً للاختراع نوعياً بسياق واحد على الأقل يتم اختياره من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف: 39 ‎((KKFLLIG)‏ ‏سياق برقم تعريف: 40 ‎(KKFLLIGKSNI)‏ و سياق برقم تعريف: 41 ‎(FIETKKFLLIG)‏ ‏وتتمركز السياقات بأرقام التعريف: 36 إلى 41 ضمن النطاق 01 ل 00127 وهي عبارة عن سياقات حاتمة يتم التعرف عليها من قبل الجسم المضاد أو شدفة الارتباط بمولد المضاد منه أو 5 الجزيء المحاكي للجسم المضاد وفقاً للاختراع. ‎By‏ تجسيد بديل أو إضافي للاختراع؛ قد يرتبط الجسم المضاد أو شدفة الارتباط بمولد المضاد ‎die‏ أو الجزيء المحاكي للجسم المضاد وفقاً للاختراع نوعياً بسياق واحد على الأقل يتم اختياره من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف: ‎(CLNFR) 42‏ وسياق برقم تعريف: 43 ‎(FIETKKF)‏ ويكون هذان السياقان عبارة عن سياقات حاتمة متمركزة ضمن النطاق 101 ل 010127. وفي تجسيد محدد للاختراع؛ قد يرتبط الجسم 0 المضاد أو شدفة الارتباط بمولد المضاد منه أو محاكي الارتباط بمولد المضاد وفقاً للاختراع نوعياً بسياق واحد على الأقل يتم اختياره من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف: 32؛ سياق برقم تعريف: 33؛ سياق برقم تعريف: 34 سياق برقم تعريف: 35 و سياق برقم تعريف: 96؛ وبصفة محددة من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف: 34؛ سياق برقم تعريف: 35 وسياق برقم تعريف: 96؛ وسياق واحد على الأقل يتم اختياره من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف: 5 36؛ سياق برقم تعريف: 37؛ سياق برقم تعريف: 38؛ سياق برقم تعريف: 39؛ سياق برقم تعريف: 40؛ سياق برقم تعريف: 41؛ سياق برقم تعريف: 42 وسياق برقم تعريف: 43؛ ويشكل

محدد يتم اختياره من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف: 42 وسياق برقم تعريف: 43. وفي تجسيد مفضل للاختراع؛ قد يرتبط الجسم المضاد أو شدفة الارتباط بمولد المضاد ‎die‏ أو محاكي الارتباط بمولد المضاد نوعياً بسياق برقم تعريف: 34 وسياق واحد على الأقل يتم اختياره من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف: 42 وسياق برقم تعريف: 43؛ وبشكل خاص بسياق برقم تعريف: 42 وسياق برقم تعريف: 43؛ وفي تجسيد مفضل للاختراع؛ قد يرتبط الجسم المضاد أو شدفة الارتباط بمولد المضاد منه أو محاكي الارتباط بمولد المضاد نوعياً بسياق برقم تعريف: 35 وسياق واحد على الأقل يتم اختياره من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف: 42 وسياق برقم تعريف: 43؛ ‎(Sy‏ خاص بسياق برقم تعريف: 42 وسياق برقم تعريف: 43. وفي تجسيد مفضل للاختراع؛ قد يرتبط الجسم المضاد أو شدفة الارتباط بمولد المضاد منه أو الجزيء محاكي 0 الارتباط بمولد المضاد نوعياً بسياق برقم تعريف: 96 وسياق واحد على الأقل يتم اختياره من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف: 42 وسياق برقم تعريف: 43؛ وبشكل خاص بسياق برقم تعريف: 42 وسياق برقم تعريف: 43. وفي تجسيد مفضل للاختراع؛ قد يرتبط الجسم المضاد أو شدفة الارتباط بمولد المضاد أو محاكي الارتباط بمولد المضاد نوعياً بكل من السياق برقم تعريف: 5 و السياق برقم تعريف: 96. وفي تجسيد مفضل للاختراع؛ قد يرتبط الجسم المضاد أو شدفة 5 الارتباط بمولد المضاد أو محاكي الارتباط بمولد المضاد نوعياً بكل من السياق برقم تعريف: 42 والسياق برقم تعريف 43. وفي تجسيد محدد للاختراع؛ قد يتعرف الجسم المضاد أو شدفة الارتباط بمولد المضاد أو محاكي الارتباط بمولد المضاد ‎Gy‏ للاختراع نوعياً على صفيحة بيتا ‎IE‏ على الأقل للموقع 2ب للنطاق 02 لذ 00127. وبتم تحديد صفيحة بيتا الثالثة بشكل مفضل على أنها متمركزة بين الأحماض الأمينية 166 و 173 من السياق برقم التعريف: 22« ‎lly‏ تطابق السياق 0 برقم التعريف: 34؛ وعلى ‎ang‏ التحديد صفيحة بيتا الثالثة التي تطابق السياق برقم التعريف: 34. وفي تجسيد أكثر تحديداً ‎pla‏ قد يتعرف الجسم المضاد أو شدفة الارتباط بمولد المضاد أو محاكي الارتباط بمولد المضاد وفقاً للاختراع نوعياً على صفيحتين اثنتين على الأقل من صفائح بيتا المتمركزة في الموقع 2ب للنطاق 02؛ ‎og‏ وجه التحديد؛ قد يتعرف الجسم المضاد أو شدفة الارتباط بمولد المضاد أو محاكي الارتباط بمولد المضاد وفقاً للاختراع نوعياً على صفائح بيتا 5 الثلاث المتمركزة في الموقع 2ب للنطاق 02 كما هو محدد أعلاه. وفي تجسيد أكثر تحديداً للاختراع؛ قد يتعرف الجسم المضاد أو شدفة الارتباط بمولد المضاد أو محاكي الارتباط بمولد

المضاد نوعياً على صفيحة بيتا واحدة على الأقل متمركزة في الموقع 2ب للنطاق 02؛ وبصفة خاصة صفيحة بيتا الثالثة التي تطابق السياق برقم التعريف: 34 ويرتبط بسياق واحد على الأقل يتم اختياره من المجموعة المكونة من سياق برقم التعريف: 36؛ سياق برقم التعريف: 37؛ سياق برقم التعريف: 38؛ سياق برقم التعريف: 39؛ سياق برقم التعريف: 40؛ سياق برقم التعريف:

41؛ سياق برقم التعريف: 42 وسياق برقم التعريف: 43. وفي تجسيد مفضل للاختراع؛ قد يتعرف الجسم المضاد أو شدفة الارتباط بمولد المضاد أو محاكي الارتباط بمولد المضاد نوعياً على صفيحة بيتا الثالثة على الأقل التي تطابق السياق برقم التعريف: 34 وسياق واحد على الأقل يتم اختياره من المجموعة المكونة من سياق برقم التعريف: 42 وسياق برقم التعريف: 43؛ ويشكل خاص سياق برقم التعريف: 42 وسياق برقم التعريف: 43. وفي تجسيد أكثر تحديداً للاختراع؛ قد

0 يتعرف الجسم المضاد أو شدفة الارتباط بمولد المضاد أو محاكي الارتباط بمولد المضاد نوعياً على ببتيد خطي أو حاتمة خطية تتكون من الأحماض الأمينية للسياق برقم التعريف: 35. ويشكل بديل أو إضافي؛ قد يتعرف الجسم المضاد أو شدفة الارتباط بمولد المضاد أو محاكي الارتباط بمولد المضاد نوعياً على ببتيد هيئي أو حاتمة هيئية تتكون من الأحماض الأمينية للسياق برقم التعريف: 96. وفي تجسيد أكثر تحديداً؛ قد يتعرف الجسم المضاد أو شدفة الارتباط بمولد المضاد

5 أو محاكي الارتباط بمولد المضاد نوعياً على حاتمة خطية أو ببتيد خطي لسياق الأحماض الأمينية برقم التعريف: 35 وحاتمة هيئية ‎conformational‏ أو ببتيد هيئي لسياق برقم التعريف: 96

تأشير 4ا7-اا. يحفز ارتباط 7-اا ب ‎IL-TR‏ تنشيط مسارات عديدة للتأشير بما في ذلك ‎(JAK) Janus kinases‏ -1 و -3,؛ ‎Jil‏ الإشارة ومنشط الانتساخ 5 ‎(STATS)‏ و

‎.(PI13-k) phosphatidylinostol 3-0356 0‏ ولقد ورد أنه يتم تنشيط مسارات ‎signalling‏ ‎STATI pathways‏ و 51873 مع أنه لا يبدو أنها المسارات الرئيسية. ويلزم تنشيط مسار 5 لحث البروتين المضاد للموت الخلوي المبرمج 80-2 ومنع دخول البروتين المسبب للموت الخلوي المبرمج ‎Bax pro-apoptotic protein‏ في الميتوكوندريا ‎mitochondrion‏ ‏وبالتالي ‎sla‏ سلائف خلايا 1 التيموسية النامية ‎thymic developing T cell precursors‏

ويؤدي تنشيط مسار 013-16 إلى فسفرة ‎phosphorylation‏ واحتجاز سيتوبلازمي ‎cytoplasmic retention‏ للبروتين المسبب للموت الخلوي المبرمج ‎Bad‏ ‏تأشير ‎TSLPR‏ يعتبر اللمفوبويتين السدوي التيموسي ‎Thymic Stromal‏ ‎(TSLP) Lymphopoietin‏ سيتوكين خلية ظهارية ‎epithelial Cell Cytokine‏ فعال في تكون اللمفاويات ‎lymphopoiesis‏ وبالأخص يساهم في تنظيم نمو خلايا الجهاز المناعي ‎immune‏ ‎Jig System‏ التنظيم المذكور ‎immune system‏ تحديداً في نضج الخلايا المذكورة ‎.maturation of said cells‏ ويعتبر ‎TSLP‏ البشري (برقم حيازة 8338732 في بنك الجينات) عامل يمارس استقطاب ‎WAY‏ التغصنية ‎polarization of dendritic cells‏ ويحفز تكاثر وتمايز ‎T LIA proliferation‏ و 8. كما ‎TSLP aia‏ إنتاج ‎Treg WIA‏ (انظر المرجع ‎(Lei etal, 2011 0‏ لقد تبين أن مسارات التأشير المستحث بواسطة 1510 مختلفة؛ على المستوى الجزيئي؛ عن المسارات المستحثة بواسطة 7-اا. وبشكل ‎case‏ رغم أن ارتباط ‎TSLP‏ بمستقبلته ينشط ‎Jak—1 Lead‏ فإنه لا ينشط ‎Jak-3‏ إنما ينشط ‎Jak—2‏ وهذه الاختلافات تتوافق مع الملاحظة التي تتمثل ‎ob‏ 816-1ل يرتبط مع 00127؛ الذي تشترك به كلتا المستقبلتين بينما يرتبط ‎Jak-2‏ ‏5 مع ‎CRLF2‏ و ‎Jak-3‏ مع ‎YC‏ (انظر المرجع 2010 ‎.(Rochman et al.,‏ ولقد ورد ‎Lad‏ ‏تنشيط مسار ‎Lad STATS‏ يخص التأشير المستحث بواسطة ‎TSLP‏ (انظر المرجع ‎Zhong et‏ 4 ,.21). ويتمثل أحد التأثيرات الرئيسية ل ‎TSLP‏ في أنه يؤدي إلى تنشيط الخلايا التغصنية؛ حث فرط التعبير عن جزيئات التحفيز المشترك ‎Jie‏ 6080 مما يؤدي إلى تحفيز الاستجابات الالتهابية التي يتوسطها 11-2 (انظر المرجع 2001 ‎.(Reche et al.,‏ 0 البيولوجيا الخلوية ‎Cellular biology‏ يتشير المصطلح "خلايا إيجابية لذ 010127" إلى ‎pai WA‏ عن 000127 على سطحها الخلوي. وفي معظم الحالات؛ ‎Jui‏ الخلايا الإيجابية لل 010127 عن 0100127 في معقد ‎IL-TR Ji complex‏ (خلايا إيجابية لا ‎(IL-7TR‏ و/أو في معقد يشكل ‎TSLPR‏ (خلايا إيجابية لل ‎(TSLPR‏ ويتم التعبير عن ‎CD127‏ بواسطة خلايا مختلفة؛ ‎Loy‏ في ذلك بواسطة ‎JS‏

من ‎WIS‏ 1 الساذجة والذاكرة. ويتم التعبير عن ‎CD127‏ بشكل خاص بواسطة ‎T WIS‏ المستفعلة (167)؛ بما في ذلك خلايا 1 الذاكرة والمستريحة وبواسطة خلايا 8 غير الناضجة؛ ولكن لا يتم التعبير عنها بشكل خاص بواسطة ‎T WIA‏ المنظمة الطبيعية المستريحة ‎Treg)‏ الطبيعية). ويعتبر ‎CD127‏ ضرورياً لتعزيز تمايز الخلايا التيموسية ‎thymocyte differenciation‏ والتوسع النسيلي للخلايا اللمفاوية ‎.clonal expansion of lymphocytes‏ وتم التأكيد على أهمية مسار ‎IL7-CD127‏ لتوازن خلايا ‎T‏ الساذجة ‎naive T-cell‏ 5 من خلال العديد من الدراسات الحديثة التي توضح أن مستويات التعبير عن 7 المرتبط بالأغشية على ‎Lael) 004+ T WIA‏ ترتبط بتواترات خلايا ‎CD4+T‏ ‏المهاجرة التيموسية الحديثة ‎(RTE) frequencies of recent thymic emigrant‏ في الأفراد 0 السليمين والمرضى المصابين بفيروس نقص المناعة البشرية ‎(HIV)‏ وكذلك في المرضى الذين يعانون من التصلب المتعدد (1/5)(انظر المرجع 2007 ‎Broux et )(Albuquerque et al.,‏ ‎(al, 2010‏ ويعتبر 60127 أيضاً أحد مكونات مستقبلة ‎TSLP receptor‏ .235 اتضح أن إفراز ‎TSLP‏ بواسطة جسيمات ‎corpuscles‏ هاسال ‎(Hassall‏ وهي بنيات مكونة من الخلايا الظهارية في لب الغدة التيموسية ‎thymic medulla‏ يعمل على تهيئة الخلايا التغصنية النقوية ‎CD11c+ (MDCs) myeloid dendritic cells 5‏ لحث تمايز الخلايا التيموسية إلى ‎Treg‏ ‏(انظر المرجع 20058 ‎(Watanabe et al.,‏ ووفقاً لذلك» هناك حاجة إلى إشارات من مستقبلة 7-اا لنشوء ‎Treg‏ كما يتبين في الفئران المعطلة بالنسبة ل 000127 (انظر المرجع ‎-(Mazzucchelli et al., 2008‏ وفي مرجع )2011 ‎(Haas et al.,‏ أظهر المؤلفون تعبيراً مخفضاً ل ‎CD127‏ على خلايا ‎T‏ التقليدية ومستويات متزايدة التنظيم من 7-اا في البلازما مع 0 اتخفاض تواترات 1169-الخلايا المهاجرة التيموسية الحديثة ووظيفة ‎Treg‏ في ‎MS‏ بدون تأثير جيني واضح (انظر مرجع 2011 ‎.(Haas et al.,‏ ويعتبر تحليل ‎Dissecting‏ كيف ينظم 7-اا المرور الغشائي لمستقبلته ذات الصلة ‎cognate receptor membrane trafficking‏ مهماً للفهم المتعمق لدور ‎IL=T7/IL=TR‏ في وظيفة الخلايا اللمفاوية. وقد أشارت الدراسات السابقة إلى أن تحفيز 7-اا ‎TWAT‏ يؤدي إلى 5 تعديل خافض ل 010127 على السطح خلال 30 دقيقة؛ ريما بسبب استبطان المستقبلات. وعند

نقاط زمنية لاحقة (6-2 ساعات)؛ تبين أن 7-اا يحث التنظيم التقليلي الانتساخي ل 00127. ومع ذلك؛ لا يزال يتعين توضيح الديناميات الفعلية لاستبطان 000127 وتنظيم آليات المرور بواسطة 7-اا (انظر المرجع ‎Henriques et al., 2010 transcriptional down—‏ ‎(regulation‏ وأشير كذلك أن التأشير المستحث بواسطة ‎IL-7‏ يعتمد على استبطان ‎CD127‏ ‏5 وأن انحلال المستقبلة لاحقاً يعتمد على نشاط ‎JAKS‏ ويتوسطه كل من جسيمات تحطيم البروتين ‎proteasomes‏ والجسيمات الحاثئة 505017765لرا. الباثولوجيا الوظيفية ‎Physiopathology‏ ‏تعبّر الخلايا التغصنية عن المستويات العالية من جزيئات التحفيز المشترك ‎costimulatory‏ بعد النضج؛ ‎«CD80 Jie‏ الذي يعزز الاستجابات المناعية بوساطة الخلايا 1. 0 كما أنها تنتج السيتوكين ‎TARC cytokine‏ (601-17)؛ الذي يحفز الانجذاب الكيميائي في خلايا 1. ولذلك؛ تسهم الخلايا التغصنية الناضجة في الباثولوجيا الوظيفية للعديد من الأمراض الناتجة عن اضطراب المناعة التي تلعب فيها استجابات الخلايا ‎T‏ دوراًء كما هو ‎Me (Jal‏ في الريو ‎casthma‏ التهاب المفاصل الروماتويدي ‎rheumatoid arthritis‏ التهاب القولون ‎«colitis‏ ‏التصلب المتعدد ‎multiple sclerosis‏ والتهاب العنبية 0761115. كما تلعب الخلايا التغصنية الناضجة دوراً رئيسياً في عملية رفض الطعوم الخيفية ‎allografts‏ من الخلايا ‎cells‏ ؛ الأنسجة ‎tissues‏ أو الأعضاء ‎organ‏ ولذلك؛ تهدف العديد من الاستراتيجيات العلاجية إلى منع نضج الخلايا التغصنية. وإن وجود أو عدم وجود جزيئات التحفيز المشترك على ‎Algal delice WIA‏ المضاد ‎(APCs)‏ مثل الخلايا التغصنية ‎fig‏ بشكل كبير على الطبيعة النوعية والكمية للاستجابة 0 المناعية. ويسبب التعبير المفرط ل 01060 بواسطة الخلايا التغصنية نضج ‎DC‏ ويزيد تنشيط خلايا 1 الذاكرة (انظر المرجع 2011 ‎et al.,‏ 01080ل-07ا80). وميكانيكياً؛ يشغل تفاعل 8 مع 010080 العنقود المركزي للمشبك المناعي ‎the central cluster of the‏ ‎immunological synapse‏ ويتمركز ‎colocalized‏ بشكل مشترك مع ‎TOR‏ المرتبطة؛ مما يؤدي إلى تثبيت المشبك المناعي ‎immune synapse‏ (انظر المرجع ‎Dustin and Shaw,‏

‎Grakoui et al., 1999)(1999‏ ). ويولد التفاعل بين ‎CD28‏ و 6080 فعلياً الحيز المناسب ل ‎TCR‏ ليتفاعل بشكل فعال مع جزيئات ‎HLA‏ (انظر المرجع 1997 ‎.(Shaw and Dustin,‏ يعتبر التصلب المتعدد ‎(MS) Multiple sclerosis‏ مرض التهابي مزيل للميالين ‎inflammatory demyelinating disease‏ في الجهاز العصبي المركزي ‎central‏ ‎(CNS) nervous system 5‏ ويرتبط ظهور بقع من إزالة الميالين في الجهاز العصبي المركزي للمرضى الذين يعانون من التصلب المتعدد برشاحة التهابية ‎inflammatory infiltrate‏ مكونة بشكل رئيسي من الخلايا البلعمية ‎macrophages‏ والخلايا اللمفاوية ‎.١1 lymphocytes‏ وعلى مستوى ميكانيكي؛ يعتبر التصلب المتعدد من أمراض المناعة الذاتية. ويعتبر التصلب المتعدد عادة مرضًا تتوسطه ‎CD4 + T WIA‏ بشكل أساسي ‎٠‏ ولقد أسهمت مجموعات فرعية محددة من 604 ‎Th :+ 0‏ ومؤخراً 1717 في الفيزيولوجيا المرضية للمرض. وفي الوقت ‎Ye all‏ يزال من الصعب تعيين أدوار محددة لكل مجموعة فرعية من 111 و 1717. علاوة على ذلك؛ تم حالياً اعتماد تثبيط انتقال خلايا الدم البيضاء بواسطة تأثير التضاد ل ‎(ad)-integrin‏ 800084 كنهج علاجي لمعالجة الأمراض الالتهابية مثل التصلب المتعدد ومرض التهاب الأمعاء ‎(IBD) inflammatory bowel disease‏ وأيضاً معالجة التصلب العصيدي ‎atherosclerosis 15‏ (انظر المرجع 2014 ‎(Zhi et al.,‏ ويتم التعبير عن 04]7 على مجموعة أكثر تقييداً من خلايا الدم البيضاء بما في ذلك الخلايا البلعمية المنشطة؛ مجموعات فرعية من الخلايا اللمغاوية»؛ خلايا ‎(NK‏ الخلايا البدينة والخلايا الحمضية ‎.atherosclerosis‏ ‏يحث ‎IL-7‏ البشري التعبير القوي عن إنتغرينات ‎ad‏ و ‎BT‏ في أنبوب الاختبار على الخلايا اللمفاوية آ البشرية ويزيد بشكل كبير تواتر الخلايا اللمفاوية آ البشرية التي تعبر عن 0 إنتغرينات ‎BT ad‏ و 04/87؛ المطلوية لتوجيه الخلايا اللمفاوية 1 والاحتجاز في الأنسجة غير اللمفاوية مثل الأمعاء؛ الدماغ والجلد (انظر المرجع ‎Denucci et al., 2009: Gorfu et al.,‏ 2009(. وتعتبر خلايا 1 الساذجة مسؤولة ‎Wits‏ عن الرفض الحاد للأعضاء والأنسجة المزروعة. ويمكن التحكم بهذه الخلايا عن طريق العقاقير الحالية المثبطة للمناعة (مثبطات كالسينيورين ‎(calcineurin inhibitors 5‏ وبواسطة الأجسام المضادة أحادية النسيلة التي تمنع التحفيز المشترك

‎ails) block costimulation‏ التصاق 801-80065100؛ مثبطات 01080/86). وتعتبر خلايا ‎T‏ الذاكرة مسؤولة أيضاً عن رفض الطعوم. وتتراكم خلايا ‎T‏ الذاكرة في الإنسان بسبب تاريخ المناعة المكتسبة وبخاصة التفاعلات السابقة ضد الفيروسات. ولقد تبين أنه يمكن ‎sale)‏ تنشيط خلايا 1 الذاكرة بواسطة مولدات المضادات الخيفية كنتيجة ل "المناعة ‎(dag pall‏ وهي عبارة عن تفاعل متصالب للدفاعات المضادة للفيروسات مع مولدات المضادات الخيفية (انظر المرجع ‎(Adams et al., 2003‏ وتمثل المناعة الغيروية عائقاً قوياً لحث التحمل نظراً لأن خلايا 1 الذاكرة؛ بعكس ‎TDA‏ الساذجة؛ تبرمج لتنشط بسرعة مع خفض الحاجة لإشارات التحفيز المشترك. ويمكن أن تسهم خلايا آ الذاكرة أيضاً في الرفض المزمن. وإلى جانب دورها في زراعة الأعضاء والأنسجة؛ تعتبر ‎T WIA‏ الذاكرة والساذجة مسئولة بشكل مشترك أيضاً عن العديد من 0 أمراض المناعة الذاتية. وهذا هو الحال مع التهاب القولون التقرحي ) ‎Shinohara et al.,‏ 1) التهاب المفاصل الروماتويدي ‎arthritis‏ 600081010 الصدفية ‎psoriasis‏ أو مرض الطعم حيال المضيف ‎.graft-versus—host disease‏ تعتبر أمراض التهاب الأمعاء ‎Inflammatory bowel diseases‏ (نا8ا)؛ مثل التهاب القولون التقرحي ‎(UC) ulcerative colitis‏ ومرض كرون ‎(CD) Crohn’s disease‏ 5 اضطرابات معدية معوية ناكسة مزمنة ‎chronic relapsing gastrointestinal disorders‏ تتميز بالتهاب معوي مزمن؛ استجابات مناعية غير منظمة للميكرويات المعوية واختلال وظيفي في الحاجز الظهاري (انظر المرجع 2009 ‎.(Khor et at., 2011; Abraham and Cho,‏ وتتزايد معدلات الإصابة وانتشار مرض التهاب الأمعاء في جميع أنحاء العالم وترتبط هذه الأمراض باعتلال ملحوظ ولها تأثير كبير على نوعية الحياة والقدرة على العمل (انظر المرجع ‎.(Danese and Fiocchi, 2011; Baumgart and Sandbom, 2012 20‏ وتهدف العلاجات التقليدية الحالية إلى تخفيف الالتهاب عن طريق الاستخدام التدريجي للعوامل المضادة للالتهابات والعقاقير المثبطة للمناعة والعوامل البيولوجية التي تستهدف السيتوكينات الالتهابية مثل عامل نخر الورم ألفا ‎(TNF) tumor necrosis factor alpha‏ ومن السمات الرئيسية ل ‎IBD‏ أيضًا الإجلاب السريع والبقاء المطول لخلايا الدم البيضاء ‎rapid recruitment and prolonged‏ ‎persistence of leukocytes 5‏ عند موقع الالتهاب وهو أمر يسمح به تفاعل الإنتغرينات مع

المستقبلات ذات الصلة المعبر عنها بواسطة الخلايا البطانية التي تسمح بالتصاق الخلايا والاهتجار (انظر المراجع 2006 ‎and Eksteen, 2006: Agace,‏ 808015). وتستهدف العلاجات الناشئة باب الدخول إلى الأمعاء بجزيئات مضادة للالتصاق؛ وخاصة استهداف مسار إنتغرينات 04]87 المتخصصة بالأمعاء (انظر المراجع ‎Feagan et al., 2013; Sandbom‏ ‎al., 2013 5‏ 7:8)61. ومع ذلك؛ لا تحافظ هذه العلاجات على فترة تخفيف للأعراض في أكثر من نصف المرضى؛ وتحدث تفاقمات ناكسة في نسبة عالية من المستجيبين الأساسيين. وتتطور العدوات الانتهازية أيضًا نتيجة للكبت المناعي العام. وبالتالي؛ يتمثل أحد الأهداف الرئيسية في توفير علاجات جديدة لل ‎IBD‏ وتحديد علامات تحدد الطابع للمزمن ل ‎BD‏ واستجابته وانتكاسه. علاوة على ذلك؛ فقد تبين أن العديد من الخلايا الخبيثة ‎several malignant cells‏ 0 تعرض ‎JIL-TR‏ وينطبق ذلك على لمفومة سيزاري الجلدية ‎Sezary cutaneous lymphoma‏ )760 منها) أو لوكيميا الأرومة اللمفاوية الحادة ‎childhood acute lymphoblastic‏ ‎vie leukemia‏ الأطفال حيث يظهر حوالي 715 من الحالات طفرة كسب الوظيفة في 7 مما يجعل هذه الأورام تعتمد جزئياً على 7-اا )2011 ‎.(Shochat et al.,‏ لقد كان استنفاد ‎LAY depletion‏ اللمفاوية ‎T‏ نهجًا مثبطَا للمناعة ‎immunosuppressive 5‏ بشكل واضح للتصدي لرفض الطعم الخيفي أو لمحارية المناعة الذاتية ‎fight autoimmunity‏ ومع ذلك؛ فإن استنفاد خلايا ‎T‏ الكلية قد لا يكون مواتياً لحث التحمل المناعي. ويمكن أن يشكل استهداف مجموعات ‎subpopulations de j‏ من خلايا ‎T‏ أو خلايا ‎T‏ المنشّطة بشكل انتقائي؛ دون تعديل خلايا ‎(Treg‏ طريقة مؤيدة للتحمل (انظر المرجع ‎.(Haudebourg et al., 2009‏ وبالتالي يمكن اعتبار 000127 هدف علاجي مثير للاهتمام 0 محتمل للأجسام المضادة أحادية النسيلة ‎(Mabs)‏ يهدف إلى تعديل الاستجابات المناعية نظراً ‎SY‏ ‏هذه الأجسام المضادة أحادية النسيلة قد يكون لديها القدرة على استنفاد الخلايا اللمفاوية المستفعلة وليس المنظمة. وعليه لقد افترض أنها يمكن أن تظهر فعالية في الزرع ‎transplantation‏ ‏المناعة الذاتية ‎autoimmunity‏ (انظر المرجع 2008 ‎(Michel et al.,‏ والأورام الخبيثة عن طريق اعتراض وصول ‎IL-7 antagonizing access‏ إلى ‎IL-7-R‏ وبالتالي الحد من وظيفة ونمو خلايا 1 و 8.

إن العلاج بجسم مضاد أحادي النسيلة يعمل ضد خلايا ‎CD127+‏ والذي يعترض مسار 7-اا يمكن أن يحقق هذا الهدف من خلال القضاء على/تحييد ‎TDA‏ الساذجة والذاكرة و/أو تقليل عددها مع الحفاظ على خلايا ‎Treg‏ أو عن طريق القضاء على أو تقليل عدد الخلايا الخبيثة الإيجابية بالنسبة لذ 00127. ومع ذلك قد يكون العلاج بجسم مضاد أحادي النسيلة يعمل ضد خلايا +60127 بمثابة سيف ذو حدين إذا كان يؤدي إلى تنشيط الخلايا التغصنية. وفي الواقع؛ يتم التعبير عن 00127 أيضًا بواسطة الخلايا التغصنية بالاشتراك مع ‎Ally CCRLF2‏ تشكل مستقبلة 0ا15. وفي وجود ‎(TSLP‏ يتم تنشيط الخلايا التغصنية وتعزيز الاستجابات المناعية بوساطة الخلايا 1. وبعض الأجسام المضادة أحادية النسيلة التي تعمل ضد 00127؛ ريما من خلال تعديل الطريقة التي يتفاعل بها ‎TSLP‏ مع مستقبلة ‎(TSLP‏ تمتلك خاصية زيادة نضج 0 الخلايا التغصنية التي يسببها ‎TSLP‏ ونتيجة لذلك؛ فإن العلاج بجسم مضاد أحادي النسيلة يعمل ‎aa‏ 60127 والذي لن يزبد من نضج الخلايا التغصنية الناجم عن ‎TSLP‏ يقدم ميزة علاجية. وسوف يقدم فائدة محاصرة ‎ILTR‏ بدون عيب تنشيط ‎WAY‏ التغصنية في بيئة مصابة بالتهاب تحتوي على ‎TSLP‏ ‏وفي نشرة معينة )2009 ‎((Racapé et al.,‏ حلل المؤلفون أهمية مستقبلة ‎Wf IL-7‏ (جاا 5 740) كهدف علاجي محتمل في عملية الزرع. وبعد استعراض التعبير عن 11-7546 على خلايا ‎T‏ المختلفة والخلايا المستجيبة ل 7 -ااء حدد المؤلفون ما إذا كان استهداف خلايا 7 الذاكرة التي تعبر عن .7540-] يمكن أن يُطيل بقاء الطعم الخيفي في ‎hal‏ وتم الاستنتاج أن استهداف 7-اا أو ‎IL-TRa‏ سيوفر خلايا ‎Treg‏ بشكل مفيد. ومن بين وجهات النظرء أشار المؤلفون إلى أن استهداف إما 7-اا أو 7540-اا في العلاج قد يكون له عواقب مختلفة على بقاء الخلايا التي 0 تعبر عن 60127 وقد يثير أنواعًا مختلفة من قلة اللمفاويات. وتم أيضاً طرح مسألة تأثيرات الأجسام المضادة التي سيتم توجيهها ضد ‎IL-TRa‏ اعتمادًا على ما إذا كانت أجسام مضادة معيقة؛ محيدة أو سامة للخلايا من الوجهة النظرية. ومع ذلك؛ لم يلظهر المؤلفون أنهم حصلوا على ‎Jie‏ هذه الأجسام المضادة وقاموا بمعايرتها وأعربوا عن الحاجة إلى دراسة أخرى لتقييم ملاءمة الفرضية.

وفي ضوء عيوب الطرق العلاجية المتاحة بخصوص الأمراض المرتبطة بالمناعة وغيرها من الأمراض التي تنطوي على ‎IL=T/IL-TRO0‏ مثل أنواع مختلفة من السرطانات؛ بما في ذلك بعض أنواع سرطان الثدي ‎breast cancers‏ لا تزال هناك حاجة لعقاقير مرشحة ‎drug‏ ‎(gal candidates‏ وخاصة عقاقير مرشحة فعالة بالنسبة لأهداف أكثر انتقائية لغرض التحكم ب على سبيل المثال؛ تعديل التنشيط المناعي في المرضى البشربين. وعلى الرغم من الاهتمام الأخير بتطوير الأجسام المضادة التي تعمل ضد 00127؛ فقد ركزت الجهود على تثبيط تأشير ‎IL-TR‏ المستحث ب 7اا. ومع ذلك؛ فقد أسهم ‎TSLP‏ و ‎TSLPR‏ في حدوث عدد من الأمراض. وثبت أن ‎TSLP‏ يلعب دورًا في أمراض الجلد والرئة (انظر المرجع 2010 ‎(He and Geha,‏ ويرتبط ‎Calida‏ الأمراض بما في ذلك مرض التهاب 0 الشعب الهوائية والتهاب الجلد التأتبي في الإنسان والفئران (انظر المرجع 2008 ‎(Ying et al.,‏ (انظر المرجع 2011 ‎et al.,‏ 8010/818ل). بالإضافة إلى ‎cally‏ فقد تبين أن ‎TSLP‏ يرتبط بتنظيم المناعة والالتهابات المعوية (انظر المرجع 2009 ‎(Taylor et al.,‏ وتشمل الأمراض الأخرى التي تنطوي على ‎TSLP‏ و ‎TSLPR‏ لوكيميا ‎WIA‏ 8 عند الأطفال (انظر المرجع ‎van‏ ‎(Bodegom et al., 2012‏ واضطرابات الحساسية الخاصة بالرئة والجلد -5/60 ‎lung— and‏ ‎specific allergic disorders 5‏ الأمراض المرتبطة بالمناعة الذاتية (انظر المرجع ‎Roan et‏ ‎(al., 2012‏ والسرطان؛ بما في ذلك سرطان الثدي (انظر المرجع 2011 ‎.(Olkhanud et al.,‏ وتم الكشف عن أجسام مضادة لا تظهر تأثير زيادة نضج الخلايا التغصنية و/أو لا تحث استبطان 00127 و/أو تثبط الاستبطان المستحث ب 7اا في طلب براءة الاختراع الدولي رقم 2.. وتتمتع الأجسام المضادة المذكورة؛ التي يطلق عليها ‎NI3B2‏ (جسم مضاد 0 خيمري)» 001382-01 ‎N13B2-h2‏ و 111382-03 ‎N13B2)‏ مؤنسن) في الطلب المذكور وفيما يلي بفعالية عالية؛ خاصة في الجسم ‎all‏ وتبين تحديداً أن لها تأثير سريع على خلايا 1 الذاكرة والمستفعلة؛ كما هو محدد أدناه. ومع ذلك؛ يتم أنسنة الأجسام المضادة المذكورة بدرجة محدودة وتكون كفاءة إنتاجها محدودة أيضًا. علاوة على ذلك؛ لم يتم ذكر أي تأثير طويل الأمد للأجسام المضادة المذكورة على خلايا ‎T‏ الذاكرة والمستفعلة.

ويتعلق الاختراع بأدوات لتصميم أجسام مضادة جديدة مناسبة كمرشحات علاجية لإعطائها للمرضى الذين يعانون من أو معرضون لخطر الإصابة بمرض ينطوي على مسارات إشارات ‎IL‏ ‏7. ووفقًا للعديد من الطرق المزودة هناء فإن هذه الأدوات تعمل على تحسين تحضير الأجسام المضادة المعدة لإعطائها إلى مضيفات بشرية. وتشتمل هذه الأدوات على أجسام مضادة أحادية النسيلة تحديداً ومؤنسنة بشكل خاص تشتمل على جميع سياقات ‎CDRs‏ الخاصة ب ‎N13B2-‏ ‎.h3‏ ‏ويتم تزويد متعددات الببتيد هذه (أو متعددات النيوكليوتيد التي تحمل شيفرة متعددات الببتيد هذه) بشكل خاص لإنتاج الأجسام المضادة (أو شدفات ارتباط بمولد مضاد منها) و/أو كأجسام مضادة (أو شدفات ارتباط بمولد مضاد منها) وتحديداً التي ترتبط نوعياً ب 00127؛ وتشتمل هذه 0 الأجسام المضادة وبخاصة الأجسام المضادة أحادية النسيلة على نطاق متغير لسلسلة ثقيلة يشتمل على سياقات مناطق ‎VHCDR] CDR‏ كما حددت في سياق برقم تعريف: 1 ‎VHCDR2‏ كما حددت في سياق برقم تعريف: 2 و1000143// كما حددت في سياق برقم تعريف: 3. وبشكل خاص؛ يتكون النطاق المتغير للسلسلة الثقيلة المذكور من السياق المحدد في السياق برقم التعريف: 7 أو يمتلك السياق المذكور مع طفرات إضافية وبخاصة استبدال» حذف أو غرز أربعة 5 شقات ويفضل 3 شقات أو شقين والأفضل شق واحد وبفضل حيث لا تكون الطفرات المذكورة موجودة في سياقات ‎CDR‏ ولا في المواقع القانونية أو مواقع فيرنييه للسياقات الهيكلية. وبفضل أن تكون الأجسام المضادة المزودة هنا أجسام مضادة أحادية النسيلة؛ مما يعني أن تركيب هذه الأجسام المضادة يكون ‎dilate‏ ويشكل خاص ‎Ollie‏ من حيث تخصصية الارتباط بمولد المضاد وبالتالي من حيث تركيب المنطقة المتغيرة. ويوفر الاختراع أجسام مضادة تشترك في ‎CDRs‏ الخاصة بالجسم المضاد ‎N13B2-h3‏ ‏ولكن لديها منطقة هيكلية مميزة لنطاق متغير لسلسلة خفيفة. ولقد أظهر المخترعون بشكل مدهش أن الأجسام المضادة التي تشتمل على نفس ‎CDRS‏ للنطاق المتغير للسلسلة الخفيفة ل ‎N13B2-‏ ‎<h3‏ أي ‎CDRs‏ ذات السياقات بأرقام التعريف: 4 و 5 و 6 ولكن تشتمل على سياق مختلف للنطاق المتغير للسلسلة الخفيفة؛ أي سياق برقم تعريف: 9؛ سياق برقم تعريف: 10؛ سياق برقم

— 1 3 — تعريف: 11( أو سياق برقم تعريف: 12( بينما تكون مؤنسنة على نطاق واسع؛ يتم إنتاجها بشكل كبير مقارنة مع ‎N13B2-h3‏ (بما يزيد عن 4 مرات) مع الحفاظ على جميع الميزات الوظيفية. ويوفر الاختراع وسيلة مناسبة في هذا السياق؛ تشتمل تحديداً على أجسام مضادة نوعية أحادية النسيلة تعمل ضد 740--ا. وفي تجسيدات معينة؛ تتداخل الأجسام المضادة المذكورة سلبًا فقط مع مسار ©151. ووفقًا ‎(UM‏ في تجسيدات مفضلة؛ لا تزيد الأجسام المضادة المذكورة من نضج الخلايا التغصنية المستحث ب ©191. بالإضافة إلى ذلك أو ‎edie Yau‏ في تجسيدات معينة؛ لا تحث الأجسام المضادة المذكورة استبطان 0127© و/أو تثبط استبطان 7 المستحث ب 7اا. وفي تجسيدات معينة؛ تجمع الأجسام المضادة المذكورة هذه الخصائص المرتبطة بنضج الخلايا التغصنية و/أو الاستبطان مع النشاط المضاد نحو إشارات ‎IL-7/IL-7-R 0‏ وفي تجسيدات معينة؛ تثبط الأجسام المضادة المذكورة التعبير المستحث ب ‎IL7‏ ‏للانتغرينات ‎BT cad‏ و 04/07 في ‎TWA‏ وخاصة في الجسم ‎all‏ وفي تجسيدات معينة؛ تبذل الأجسام المضادة المذكورة تأثير سامًا للخلايا ضد ‎CD127+ WA‏ المستهدفة التى تقلل فعلياً من عددها (تقلص المجموعة الفرعية). وبالإضافة إلى ذلك أو بدلاً من ذلك؛ في تجسيدات معينة؛ تشتمل الأجسام المضادة المذكورة على 780 على الأقل؛ وبفضل 784 على الأقل؛ أو 5 أكثر من 784 والأفضل 785 على الأقل من الشقات البشرية كما هو محدد ‎Led‏ يلي. وبالإضافة إلى ذلك أو ‎cate Yay‏ في تجسيدات معينة؛ يتم إنتاج الأجسام المضادة المذكورة على الأقل بنفس فعالية إنتاج 011382-13 ويفضل بضعف الفعالية على الأقل؛ كما هو محدد فيما يلي. وبالإضافة إلى ذلك أو ‎Yay‏ منه؛ في تجسيدات معينة؛ يكون للأجسام المضادة المذكورة تأثير سربع و/أو طويل الأمد على خلايا 1 الذاكرة المستفعلة. ‎(Sd, 20‏ محدد؛ تشتمل الأجسام المضادة المزودة هنا على سلسلة ثقيلة متغيرة ‎(VH)‏ تشتمل على سياقات الأحماض الأمينية التالية: سياق ‎VHCDRI‏ برقم تعريف: 1؛ سياق ‎VHCDR2‏ برقم تعريف: 2؛ سياق ‎VHCDR3‏ برقم تعريف: 3.

— 2 3 — ويفضل أن تشتمل الأجسام المضادة المزودة هنا على سلسلة ‎VH‏ تتكون من السياق كما حدد في سياق برقم تعريف: 7: ‎QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAVSGFTLSDYYMAWIRQAPGKGLEWVS‏ ‎TISASGLRTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPL‏ ‎.SAHYGFNYFDYWGQGTLVTVSS 5‏ وترتبط السلسلة الثقيلة المتغيرة المذكورة تحديداً بالسلسلة الثقيلة الثابتة التى تتكون من السياق برقم تعريف: 26 لتشكيل سلسلة ثقيلة كاملة للجسم المضاد. وبشكل محدد؛ تشتمل الأجسام المضادة المزودة هنا على سلسلة ‎VE‏ تتكون من سياق يختار من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف: 9؛ سياق برقم تعريف: 10؛ سياق برقم 0 تعريف: 11؛ وسياق برقم تعريف: 12( وبالأخص السياق برقم تعريف: 12: ‎DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSEDIYQGLAWYQQKPGKAPKLLLYSA‏ ‎NTLHIGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQYYDYPLAFGGG‏ ‎(TKVEIK‏ وترتبط السلسلة الخفيفة المتغيرة المذكورة تحديداً بالسلسلة الخفيفة الثابتة التى تتكون من سياق يختار من سياق برقم تعريف: 27 وسياق برقم تعريف: 28؛ وبالأخص سياق برقم تعريف: 27 لتشكيل سلسلة خفيفة كاملة للجسم المضاد. وبشكل ‎case‏ يرتبط الجسم المضاد أو شدفة الارتباط بمولد المضاد ‎die‏ وفقاً للاختراع نوعياً ب ‎«CD 1 27‏ وخاصة 27 1 ‎CD‏ بشري ويشتمل على: سلسلة خفيفة للجسم المضاد تشتمل على أو نطاق متغير للسلسلة الخفيفة للجسم المضاد يتكون من سياق يختار من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف: 9؛ سياق برقم تعريف: 10؛ سياق برقم 0 تعريف: 11؛ سياق برقم تعريف: 12؛ وبالأخص سياق برقم تعريف: 12؛ و نطاق متغير للسلسلة الثقيلة للجسم المضاد يشتمل على مناطق ‎EME CDR‏ التى تتكون من السياقات كما حددت في سياق برقم تعريف: 1»؛ سياق برقم تعريف: 2 وسياق برقم تعريف: 3؛ وبالأخص نطاق متغير للسلسلة الثقيلة للجسم المضاد يتكون من السياق المحدد في السياق برقم تعريف: 7.

وفي تجسيد أكثر تحديداً للاختراع؛ يرتبط الجسم المضاد أو شدفة الارتباط بمولد المضاد ‎die‏ نوعياً ب ‎«CD127‏ وخاصة 010127 بشري ويشتمل على: نطاق متغير للسلسلة الخفيفة للجسم المضاد أو سلسلة خفيفة للجسم المضاد وفقاً للاختراع» وخاصة يتكون من سياق يختار من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف: 9؛ سياق برقم تعريف: 10؛ سياق برقم تعريف: 11 وسياق برقم تعريف: 12 وبالأخص سياق برقم تعريف: 12؛ و نطاق متغير للسلسلة الثقيلة للجسم المضاد يشتمل على مناطق ‎CDR‏ الثلاث التي تتكون من السياقات كما حددت في سياق برقم تعريف: 1؛ سياق برقم تعريف: 2؛ وسياق برقم تعريف: 3؛ وبالأخص نطاق متغير للسلسلة الثقيلة للجسم المضاد يتكون من السياق المحدد في السياق برقم تعريف: 7. 0 ارتباط 60127

وفقاً للاختراع» يشير "الارتباط" ببروتين 11-780 إلى تفاعل من نوع الجسم المضاد-مولد المضاد وبشتمل على خصائص "الارتباط النوعي” للأجسام المضادة أو شدفات الارتباط بمولد المضاد منه ويقصد بالارتباط النوعي أن الأجسام المضادة أو شدفات الارتباط بمولد المضاد منها ترتبط ببروتين 7540| وفي نفس الوقت لا ترتبط أو ترتبط بألفة أضعف إلى حد كبير مع

5 البروتينات الأخرى (مثل سلسلة 7 لمستقبلة السيتوكين الشائعة). وئفضل أن يتم تعيين و/أو تحديد الارتباط النوعي في الظروف الفسيولوجية؛ وخاصة من حيث درجة الحموضة ومحتوى الملح في محلول الاختبار. ويمكن معايرة الارتباط وتخصصية الارتباط وفقاً للاختبارات التي تم الكشف ‎lie‏ ‏في الأمثلة وبصفة خاصة يمكن معايرتها بواسطة التحليل بمستشعر حيوي؛ تحليل ‎Blitz‏ ‎ELISA (Biacore‏ (معايرة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم) أو تحليل لطخة ويستيرن.

وفي تجسيدات معينة؛ تستهدف الأجسام المضادة المزودة هنا وترتبط بسلسلة ‎IL-7-R‏ ‏8 عندما تشكل معقد مع مستقبلة ‎TSLP‏ (مع 005472؛ برقم حيازة ‎AF338733‏ في بنك الجينات؛ انظر المرجع 2001 ,.81 ‎et‏ 86006). وفي تجسيدات معينة؛ ترتبط الأجسام المضادة المزودة هنا ب 60127 كبروتين معزول بألفة ثابتة ‎(KD)‏ لا تزيد عن 5 ‎x‏ 9-10 مولارء كما قد يتم تحديده بواسطة التحليل بمستشعر ‎(gon‏ خاصة بواسطة طريقة ‎Ag Blitz‏ تجسيدات معينة؛

يتم تحديد أو تعيين خصائص ارتباط الأجسام المضادة باستخدام مولد مضاد من 60127 بشري يشتمل على سياقات ‎pl‏ (سياق برقم تعريف: 19) و/أو 602 (سياق برقم تعريف: 20). وفي تجسيدات معينة؛ يشتمل مولد المضاد على شدفة من ‎CD127‏ بشري يشتمل على كل من 801 و 2 (أي؛ يشتمل مولد المضاد على سياقات 801 و 602 والسياقات المقحمة من 60127

البشري). وفي تجسيدات معينة؛ يكون للأجسام المضادة المزودة هنا على الأقل نفس الألفة نحو مولد المضاد المذكور التي يمتلكها الجسم المضاد 1382-13 الذي تم الكشف ‎aie‏ في طلب براءة الاختراع الدولي رقم 2015/189302؛ و/أو الجسم المضاد ‎N13B2-hVLG‏ الذي تم الكشف ‎aie‏ هنا (حيث تشتمل سلسلة ‎VH‏ على ‎lad)‏ برقم التعريف: 7 وتشتمل سلسلة ‎VL‏ على السياق برقم التعريف: 12) و/أو الجسم المضاد حيث تشتمل سلسلة ‎VH‏ على السياق برقم

0 التعريف: 7 وتشتمل سلسلة ‎VL‏ على السياق برقم التعريف: 10 أو السياق برقم التعريف: 11. وتعتبر طرق اختبار ارتباط الأجسام المضادة بمادتها المستهدفة؛ ‎Lf‏ 060127 كامل الطول؛ أو معزول أو ك ‎TSLPR‏ أو ‎LTR‏ أو مولد مضاد منها كما ورد أعلاه؛ والتي تتضمن بشكل خاص طريقة ‎Blitz‏ معروفة للشخص المتمرس ‎aig‏ توضيحها على ‎dag‏ الخصوص في الشكل 3( المثال 3 والمثتال 4 هنا وفي ‎dada‏ 14( الأشكال 3« 4 و 6 والتعليقات التفسيرية ذات 5 الصلة»؛ والأمثلة 1« 2؛ 6؛ 7 من طلب براءة الاختراع الدولي رقم 2015/189302. غياب زبادة نضج الخلايا التغصنية المستحث ب ‎TSLP‏ ‏قد ترتبط الأجسام المضادة المزودة هنا ب 00127 في مستقبلة ‎TSLP‏ (أي؛ قد ترتبط ب 7 عندما تشكل معقد مع ‎«CRLF2‏ مما يشكل مستقبلة ©191). ‎(ly‏ قد تتداخل الأجسام المضادة المزودة هنا مع التأشير المستحث بواسطة ‎TSLP‏ و/أو الذي تتوسطه مستقبلة 0 ©151. ويفضل أن لا تتآزر الأجسام المضادة المزودة هنا مع ‎TSLP‏ من أجل نضج الخلايا ‎(de Lidl‏ خاصة الخلايا التغصنية. وبمعنى آخرء لا تزيد الأجسام المضادة وفقاً للاختراع من نضج الخلايا المناعية المستحث بواسطة ‎TSLP‏ ‏وهذا التأثير مرغوب بشكل خاص على نضج الخلايا التغصنية. وتُعرف وسائل قياس هذا التأثير للشخص المتمرس ويتم الكشف عنها بشكل خاص في طلب براءة الاختراع الدولي رقم

— 5 3 — 89302 5/1 201 في الصفحات 17-16 وفي المثال 9 منه. وعلى ‎dag‏ الخصوص» لا تزيد الأجسام المضادة المزودة هنا من تعبير 6040 بأكثر من 750 عند مقارنتها بالتحفيز باستخدام ‎TSLP‏ وحده (بدون جسم مضاد) ‎٠‏ وبفضل أن لا يتم زيادة التعبير عن 0040 بأكثر من 725؛ وبفضل ألا يزيد بأكثر من 710 بل والأفضل ألا يزيد بأكثر من 75. ‎By‏ تجسيدات مفضلة بشكل خاص» لا يتم زيادة التعبير عن 6040 أو إنقاصه في ‎WAN‏ المحفزة باستخدام ‎TSLP‏ والأجسام المضادة المذكورة عند مقارنتها ‎WAIL‏ المحفزة باستخدام ‎TSLP‏ فقط. تثبيط التعبير المستحث بواسطة 7اا عن إنتغرينات ‎BT cad‏ و 4/87 في تجسيدات محددة؛ تثبط الأجسام المضادة المزودة هنا التعبير المستحث بواسطة ‎IL7‏ ‏لإنتغرينات ‎BT cad‏ و 04/]7 في أنابيب الاختبار. وبشير التعبير المستحث بواسطة ‎IL7‏ ‏0 الإنتغرينات ‎cod‏ 87 و 04/87؛ كما هو مستخدم ‎lia‏ إما إلى زيادة مستوى التعبير عن إنتغرينات 04 و 87 أو زبادة عدد أو نسبة الخلايا اللمفاوية آ التى تعبر عن إنتغرينات ‎cad‏ 87 و/أو ‎a4/B7‏ أو كلاهما. وقد يكون ‎a Jail)‏ أي أن مستوى التعبير عن إنتغرينات ‎B7 «od‏ و 04/87 في وجود ‎ILT‏ يزداد قياساً إلى مستوى الخط القاعدي (أي المستوى بدون الجسم المضاد أو 7اا) في وجود الأجسام المضادة ولكن أقل منه في عدم وجود الأجسام المضادة أو قد 5 1 يكون التثبيط مكتملاً أي لا يكون مستوى التعبير عن إنتغرينات ‎B7 «od‏ و/أو ‎a4/B7‏ في وجود 7ا والجسم المضاد أعلى من مستوى الخط القاعدي. وفي تجسيدات محددة؛ تثبط الأجسام المضادة المزودة هنا التعبير المستحث عن إنتغرينات ‎BT cad‏ و 04/87 في أنابيب ‎LAY)‏ أي يكون مستوى التعبير عن إنتغرينات ‎BT cad‏ و/أو 7 أقل في ‎WAY‏ المعالجة بالأجسام المضادة ‎pes)‏ و/أو بدون ‎(ILT‏ من ‎WAY‏ غير 0 المعالجة (أي بدون الجسم المضاد أو 7ا). وقد يكون مدى التثبيط معتمداً على الجرعة. ويمكن بشكل أكثر دقة تحديد؛ اختبار و/أو قياس تثبيط التعبير بالكيفية المحددة في طلب براءة الاختراع الدولي رقم 2015/189302 في صفحة 18 وتحديداً الفقرة [58] وفي المثال 16. مثبطات استبطان ‎CD127‏

— 3 6 —

فى تجسيد محدد؛ تثبط أ لأجسام المضادة المزودة هنا استبطان ‎CD127‏ المستحث ب 7ا. ويالتالي؛ عند الحضن مع الأجسام المضادة المذكورة؛ لا يؤدي وجود 7اا إلى حث الانخفاض في التعبير عن 60127 على سطح الخلية أو يحث انخفاضاً أقل قوة في التعبير عن 7 على سطح الخلية من الخلايا التي حضنت بدون الأجسام المضادة. ‎Ay‏ تجسيدات

محددة؛ عند الحضن مع | لأجسام المضادة المذكورة لا يقل مستوى التعبير عن ‎CD127‏ على

سطح الخلية عندما ‎pan‏ الخلايا عند 37 ‎a‏ لمدة 5 1 دقيقة مع 5 ناتوغرام/مل من ‎L7‏ | عن 0 ويفضل أن لا يقل عن 790 من مستوى التعبير على سطح الخلية في الخلايا التي حضنت بدون ‎LT‏ وفي أنابيب الاختبار» يفضل قياس التعبير على سطح الخلية بعد وقت محدد كما هو مذكور أعلاه. إلى جانب ذلك؛ نظراً ‎oY‏ معظم عمليات الاستبطان الخلوي يتم تثبيطها عند درجة

0 حرارة منخفضة؛ فإنه عادة ما يُلاحظ التأثير على ‎gail)‏ الأفضل عند درجة الحرارة الفسيولوجية؛ وبخاصة 37 م ‎٠‏ ومع ذلك»؛ قد يكون مشمولاً أيضاً حضن الخلايا عند درجة حرارة منخفضة وتحديداً 4م

‎ig‏ تجسيد مفضل؛ لا تحث الأجسام المضادة المزودة هنا استبطان 00127. وبالتالي؛ لا يقل التعبير عن 00127 على سطح الخلية في الخلايا التي تُحضن بوجود الأجسام المضادة

‏5 المذكورة أو لا يقل بشكل ‎aS‏ قياساً إلى التعبير على سطح الخلية في الخلايا التي تُحضن في ظروف مماثلة أخرى ولكن في غياب الجسم المضاد. وفي تجسيدات محددة؛ عند الحضن عند 7م لمدة 30 إلى 45 دقيقة بوجود 50 نانوغرام/مل من الجسم المضاد؛ لا يقل مستوى التعبير عن 60127 على سطح الخلية عن 780 ويفضل أن لا يقل عن 790 من مستواه في الخلايا التى حضنت في عدم وجود الجسم المضاد. وبمكن ملاحظة هذا التأثير في عدم وجود ‎ILT‏ (في

‏0 كل من ‎LAN‏ المعالجة وغير المعالجة بالجسم المضاد) أو في وجود ‎ILT‏ و/أو كلاهما.

‏ويمكن أيضاً تحديد و/أو اختبار السمتين المرتبطتين باستبطان 60127 الموصوفتين أعلاه (أي تثبيط الاستبطان المستحث ب ‎IL7‏ أو عدم حث الاستبطان) بالكيفية المحددة فى طلب براءة الاختراع الدولي رقم 2015/189302 وتحديداً في الفقرات [59]-[63] في الصفحات 19- 0 وفي الشكل 16 والمثال 5.

‏5 تعطيل تفاعل 00127 وسلسلة ‎YC‏

وفقاً لتجسيد محدد؛ قد تقوم الأجسام المضادة المزودة هنا بتعطيل ارتباط 060127 مع سلسلة ‎yc‏ ل 7-14 1ا. وهذا يعني ‎cas]‏ تحت الظروف (وبخاصة الظروف الكيميائية والفيزيائية) حيث يرتبط 00127 وسلسلة 70 معاً في عدم وجود الجسم ‎colina)‏ وبخاصة في وجود ‎ALT‏ ‏فإن وجود الأجسام المضادة المذكورة يقلل بشكل كبير من الارتباط المذكور. وفي تجسيدات محددة؛ لا يرتبط 000127 مع سلسلة 76 في وجود الجسم المضاد و7اا. ‎Kang‏ محدد؛ يكون مقدار سلسلة ‎YC‏ الذي وجد أنه مقترن مع ‎of)‏ مرتبط مع) 00127 في وجود الجسم المضاد و7اا أقل من 780 ‎Jiang‏ أقل من 750 والأفضل أقل من 725 أو 710 من المقدار المرتبط في عدم وجود الجسم المضاد (أو في وجود جسم مضاد آخر يعمل ضد 000-127 ‎die‏ ‎(MDT07-13‏ في ظروف مماثلة أخرى وبخاصة في وجود 7اا. ويمكن تقييم هذه السمة للجسم 0 المضاد تحديداً بواسطة طرق الترسيب المناعي المشترك المعروفة للشخص المتمرس لاختبار تفاعل البروتينات والموضحة؛ ‎Sie‏ في طلب براءة الاختراع الدولي رقم 2015/189302 في المثال 21. وبشكل محدد؛ يمكن حضن الخلايا في وجود أو عدم وجود الجسم المضاد المختبرء ثم يتم تذويبها في ظروف تسمح بحفظ معقدات البروتين ويمكن تعريض الحلالة الناتجة للترسيب المناعي باستخدام مضاد 60127 وبتم تقييم وجود سلسلة ‎YC‏ في المعقد المرسب ‎Lelie‏ الذي 5 يحتوي على 60127 بواسطة تلطيخ وبستيرن باستخدام أجسام مضادة ل ‎YC‏ (وبالعكس؛ يمكن إجراء الترسيب المناعي باستخدام أجسام مضادة ل ‎YC‏ وتقييم وجود 000127 باستخدام أجسام مضادة ل ‎.CD127‏ ‏التأثير المضاد نحو تفاعل ‎IL7-IL7-R‏ ‎(Gare dual Gly‏ يكون لجزيء كبير؛ خاصة جسم مضاد أو شدفة ارتباط بمولد مضاد ‎cate 0‏ وفقاً للاختراع ‎Load‏ خصائص مضادة تجاه إنترلوكين 7 ‎(ILT)‏ وبالتالي اعتراض وصول» أي ربط ‎ILT7‏ ب 60127 على خلايا إيجابية بالنسبة ل ‎.CD127‏ ‏وبقصد ب "الخواص المضادة نحو تفاعل 4|-7-17اا" أن الأجسام المضادة أو شدفات الارتباط بمولد المضاد منها وفقاً للإختراع التي تستهدف ‎IL7-Ralpha‏ تمتلك تأثير منع وصول مستقبلة 7اا المعبر عنها على ‎WIA‏ 00127 وخاصة ‎T WIA‏ مستفعلة بشرية؛ وبشكل محدد 5 خلايا 1 ذاكرة بشرية للارتباط بشريك ارتباطها 7اا وخاصة ‎ILT‏ بشري. ونتيجة لاعتراض ارتباط

7 تؤدي الأجسام المضادة وفقاً للاختراع أو شدفاتها الوظيفية إلى قلة اللمفاويات عن طريق منع إنتاج خلايا آ التيموسية المعتمدة على ‎ALT‏ ‏وقد تتمثل الخصائص المضادة تحديداً بالتأثير المضاد نحو إشارات ‎IL7-R‏ المستحث بواسطة ‎WILT‏ ويمكن تحديد التأثير المضاد لإشارات ‎IL7-R‏ المستحث بواسطة 7اا عن طريق قياس تثبيط فسفرة ‎STATS‏ كما هو موضح في الأمثلة. وتكون الفسفرة المستحثة ب ‎TILT‏ ‏5 عبارة عن علامة على تنشيط ‎ILT-R‏ ومن المتوقع أن يؤدي التأثير المضاد للجسم المضاد نحو تفاعل ‎IL7-IL7-R‏ إلى تقليل الفسفرة المستحثة ب ‎STATS JLT‏ ‎Jy‏ تجسيدات محددة؛ يكون الجزيء الكبير وفقاً للاختراع عبارة عن مضاد لإشارات ‎IL7-R‏ المستحث بواسطة 7اا. وفي تجسيد ‎carne‏ يثبط الجزيء الكبير وفقاً للاختراع الفسفرة 0 المستحثة ب 7 ل ‎(STATS‏ وفي تجسيدات مفضلة؛ تكون نسبة تثبيط فسفرة ‎STATS‏ أكبر من 0 عند تراكيز جسم مضاد منخفضة مثل 55 نانوغرام/مل و/أو تكون نسبة تثبيط فسفرة 5 أكبر من 780 عند تراكيز جسم مضاد منخفضة ‎Jie‏ 100 نانوغرام/مل. ‎(Sarg‏ تقييم تثبيط فسفرة ‎STATS‏ بطرق معروفة للشخص المتمرس وبخاصة بواسطة الطريقة المذكورة في جزءٍ الأمثلة وتحديداً في المثال 5 و/أو صفحة 21 الفقرات [69] و ]70[ والمثال 3 من طلب براءة 5 الاختراع الدولي رقم 2015/189302. ومن المرغوب أيضاً أن ‎Lif‏ الجزيء الكبير وفقاً للاختراع (على وجه الخصوص الجسم المضاد أو شدفة ارتباط بمولد مضاد منه أو جزيء محاك للجسم المضاد) تنشيط و/أو لا ينشط أو يزيد تنشيط مسارات إشارة ‎PI3-K‏ و/أو ‎ERK‏ (كيناز منظم الإشارة خارج الخلية) وعلى ‎dag‏ ‏الخصوص يثبط الفسفرة و/أو لا يحث أو يزيد فسفرة -013 و/أو 1 ‎ERK‏ و/أو 2 ‎[ERK‏ وعلى 0 وجه الخصوص؛ لا يحث الجسم المضاد؛ شدفة الارتباط بمولد المضاد منه أو الجزيء المحاكي للجسم المضاد المزودة ‎dng leg cla‏ الخصوص ذلك الجسم المضاد؛ شدفة الارتباط بمولد المضاد منه أو الجزيء المحاكي للجسم المضاد الذي له تأثير مضاد نحو تفاعل ‎IL-‏ - 7-اا 7 تنشيط مسارات ‎PI3—k‏ و/أو ‎ERK‏ (ويفضل مسار ا-013 و ‎(Ss (ERK‏ خاص لا يحث فسفرة مسار ا-013 و/أو 1 ‎ERK‏ و/أو 2 ‎ERK‏ والأكثر تحديداً لا يحث فسفرة -13© و 5 1 كلع و 2 ‎[ERK‏ وبشكل ‎(pala‏ يثبط الجسم المضاد؛ شدفة الارتباط بمولد المضاد منه أو

الجزيء المحاكي للجسم المضاد المزودة هنا وتحديداً ذلك الجسم المضاد؛ شدفة الارتباط بمولد المضاد منه أو الجزيء المحاكي للجسم المضاد الذي له تأثير مضاد نحو تفاعل ‎IL-‏ - 7-اا ‎TR‏ تنشيط مسارات ا-013 و/أو ‎(ERK‏ وخاصة تثبط فسفرة »ا-013 و/أو 1 ‎ERK‏ و/أو ‎ERK 2‏ والأكثر تحديداً تثبط فسفرة ‎PI3-k‏ و 1 ‎ERK‏ و ‎ERK2‏ ويمكن اختبار تنشيط المسارات و/أو فسفرة البروتينات المذكورة بواسطة طرق معروفة للشخص المتمرس وبشكل خاص

بواسطة تلطيخ وبستيرن كما هو موضح في الشكل 7 والمثال 8. التأثير المضاد لارتباط ‎TSLP‏

نظراً لأن الأجسام المضادة المزودة هنا ترتبط ب ‎CD127‏ في ‎7-٠‏ فإنها ترتبط أيضاً ب 60127 في ‎TSLPR‏ 5« بسبب الإعاقة الفراغية و/أو بالتنافس على مواقع الارتباط المشتركة

0 بشكل ‎cals‏ تقوم بتثبيط ارتباط 71510 ب |15101. وبعبارة أخرى؛ قد تظهر الأجسام المضادة المزودة هنا نشاطاً مضاداً لارتباط ‎TSLP‏ ‏مثبط لإنتاج ‎TARC‏ المستحث ب ‎TSLP‏

في تجسيد محدد؛ تثبيّط الأجسام المضادة المزودة هنا إنتاج ‎TARC‏ المستحث ب ‎TSLP‏ ‏في الخلايا الإيجابية بالنسبة ل 000127. ‎Ly‏ ذكر أعلاه؛ تنتج الخلايا التغصنية المحفزة ب

‎TSLP 5‏ مستويات مرتفعة من 18146. وقد ينتج هذا عن ارتباطها ب 151014 وتأثيرها المحتمل كمضادات لارتباط ‎TSLP‏ وفي تجسيد محدد؛ لا تزيد الأجسام المضادة المزودة هنا من نضج الخلايا التغصنية (حيث يتم تحديد النضج على سبيل المثال عن طريق التعبير المتزايد لواسم سطح الخلية ‎CD40‏ و/أو 0080).

‏وقد يكون مستوى إنتاج ‎TARC‏ المستحث ب ‎TSLP‏ أقل في الخلايا المعالجة ب ‎TSLP‏

‏20 مع الأجسام المضادة ل 60127 المزودة هنا مقارنة بالخلايا المعالجة ب ‎TSLP‏ لوحده. وبعبارة أخرى؛ قد تكون الأجسام المضادة المزودة هنا مثبطات لإنتاج ‎TARC‏ المستحث ب 1510. وفي تجسيد للاختراع؛ تقلل الأجسام المضادة المزودة هنا مستويات إنتاج ‎TARC‏ وفي تجسيد محدد؛ يقل مستوى إنتاج 18140 في الخلايا المعالجة ب ‎TSLP‏ وجسم مضاد مزود هنا بأكثر من 710 وبفضل بأكثر من 720 بالمقارنة مع المستوى في الخلايا المعالجة ب ‎TSLP‏ لوحده عند تراكيز

جسم مضاد منخفضة مثل 1 ميكروغرام/مل. ويمكن قياس إنتاج ‎TARC‏ على الخلايا المناعية الإيجابية بالنسبة ل 00127؛ في الخلايا التغصنية تحديداً» من عينة دم باستخدام أي طريقة قياسية معروفة للشخص المتمرس وموضحة. ‎Sle‏ في طلب براءة الاختراع الدولي رقم 2 في المثال 9. النشاط السام للخلايا في تجسيد محدد؛ تكون الأجسام المضادة المزودة هنا سامة للخلايا ضد خلايا بشرية؛

وخاصة خلايا ‎T‏ بشرية تعبر عن 00127. وتكون الخلايا البشرية التي تعبر عن 60127 كسلسلة من مستقبلة 7-ااء والتي تمثل أهداف الأجسام المضادة المذكورة؛ عبارة عن ‎WIA‏ لمفاوية آ بشكل رئيسي وتكون بشكل أكثر تحديداً عبارة عن ‎WIS‏ لمفاوية ‎T‏ مستفعلة بما في ذلك خلايا

‎١1 0‏ الساذجة والذاكرة ولكنها ليست خلايا ‎T‏ منظمة ‎(Treg)‏ وبشكل خاص ليست خلايا ‎Treg‏ ‏طبيعية مستريحة. ‎aig‏ إنتاج خلايا ‎T‏ الذاكرة نتيجة التلامس الأولي ‎algal‏ المضاد ويحدد بشكل رئيسي وفقاً لخصائصها الوظيفية؛ ‎Lay‏ في ذلك القدرة على الخضوع لتكاثر استذكاري عند ‎sale)‏ ‏التنشيط والتمايز إلى خلايا ذاكرة ومستفعلة ثانوية. وبالمثل؛ تنظم مستقبلة ‎TSLP‏ المستهدفة (كمعقد يشتمل على سلسلة ‎(IL-7-R alpha‏ تمايز ‎LAY‏ اللمفاوية آ المساعدة؛ خلايا 8

‏5 والخلايا التغصنية.

‏وبشكل محدد؛ فإن الأجسام المضادة المزودة هناء والتي لها 'نشاط سام للخلايا ضد

‏الخلايا ‎'T‏ أو خصائص سامة للخلايا (أجسام مضادة سامة للخلايا) تؤدي إلى نفاد مجموعة خلايا آ المستفعلة عن طريق قتل هذه الخلايا وبالتالي تقليل عدد هذه الخلايا عند إعطائها. وعلى العكس من ذلك»؛ فإن الأجسام المضادة المذكورة لا تعدل المجموعة الفرعية لخلايا ‎T‏ المنظمة أو

‏0 لا تعدلها إلى حد كبير؛ مما يسمح لخلايا ‎Treg‏ بأداء وظاتفها. وفي هذا السياق؛ في تجسيد معين» ترتفع نسبة خلايا ‎T‏ المنظمة ‎(Treg)‏ مقابل خلايا ‎T‏ المستفعلة ‎(Teff)‏ بعد إعطاء الأجسام المضادة المذكورة. وعلى ‎dag‏ الخصوص» تمكن الأجسام المضادة المزودة هنا من رفع النسبة المذكورة بمقدار لا يقل عن 710. وعلى ‎dng‏ الخصوص» فإن الزيادة في نسبة ‎Treg‏ مقابل ‎Teff‏ ‏تبلغ حوالي 720.

وبشكل محدد؛ تظهر الأجسام المضادة السامة للخلايا سمية خلوية معتمدة على الجسم المضاد ‎.(ADCC)‏ وبدلاً من ذلك؛ قد لا تمتلك الأجسام المضادة المزودة هنا خواص ‎ADCC‏ ‏ويمكن اعتبار إمكانية ‎ADCC‏ للجسم المضاد إيجابية عندما تكون السمية الخلوية المتخصصة على سبيل المثال أعلى من 710. ويمكن تقييم خواص ‎ADCC‏ في معايرة ‎Jie ADCC‏ الاختبار الموصوف في المثال 10 المذكور في طلب براءة الاختراع الدولي رقم 2015/189302. وعندما يكون الجسم المضاد جسم مضاد مأخوذ من جرذ فإنه يفضل أن تكون الخلايا المستفعلة المستخدمة في معايرة ‎ADCC‏ عبارة عن خلايا ‎LAK‏ مأخوذة من جرذ (خلايا قاتلة منشطة باللمفوكين) وعندما تكون الأجسام المضادة مؤنسنة فإنه يتم ‎shal‏ معايرة ‎ADCC‏ في خلايا ‎NK‏ ‏البشرية بشكل خاص.

وتتيح الأجسام المضادة وفقاً للاختراع التي تمتلك خصائص مضادة وسامة للخلايا الإيجابية لل 60127 الآثار التراكمية لهذه الخصائص فيما يتعلق بنفاد خلايا ‎T‏ المستفعلة» خاصة خلايا 1 الذاكرة» مما يتيح نفاد أقوى (استنفاد ‎de sane‏ الخلايا + ‎(CD127‏ وما يقابلها من انخفاض في عدد ‎TWA‏ المستهدفة.

وتصف الفقرات أعلاه وكذلك الأمثلة كيفية اختبار الخصائص الوظيفية المطلوية ذات

5 الصلة للأجسام المضادة المزودة هنا. وسوف تصف الأقسام التالية بالتفصيل مختلف الخصائص البنيوية والتعديلات المحتملة للأجسام المضادة. وفي ضوءٍ هذه الإرشادات؛ سيكون الشخص المتمرس قادرًا على الحصول على أجسام مضادة لها الخصائص البنيوية أدناه بالإضافة إلى الخصائص الوظيفية المطلوية؛ خاصة بدءًا من الجسم المضاد 811382-117/16 الذي يتميز بالخصائص الوظيفية المطلوية.

وعندما يُراد إعطاؤها إلى أفراد بشريين» فمن المرغوب أن تُظهر الأجسام المضادة أكبر قدر ممكن من التماثل مع الأجسام المضادة البشرية كما يدرك الشخص المتمرس. وبتم قياس درجة التطابق مع الجسم المضاد البشري كنسبة مئوية من الشقات البشرية في سياق الجسم المضاد؛ وخاصة في المنطقة الهيكلية للنطاق المتغير للسلسلة الخفيفة أو الثقيلة للجسم المضاد؛ أي النسبة المئوية من الشقات في سياق الجسم المضاد؛ وخاصة في المنطقة الهيكلية للنطاق المتغير للسلسلة

5 الخفيفة أو الثقيلة للجسم المضاد؛ والتي تتطابق عند الموقع الوظيفي نفسه مع الشق في الجسم

المضاد البشري المعروف الأكثر ‎Sila‏ وخاصة في المنطقة الهيكلية للنطاق المتغير للسلسلة الخفيفة أو الثقيلة للجسم المضاد البشري المعروف الأكثر تماثلاً. ويتم التعبير عن هذه السمة هنا بشكل عام؛ كما في النشرات؛ ك "جسم مضاد ‎A‏ (أو السياق الهيكلي لنطاقه المتغير) يمتلك النسبة ‎XX‏ 7 من الشقات البشرية"؛ مما يعني أن الجسم المضاد ‎A‏ (أو السياق الهيكلي لنطاقه المتغير) يمتلك النسبة ‎XX‏ 7 من الشقات المتماثلة عند نفس الموقع الوظيفي للشقات للجسم المضاد البشري المعروف الأكثر تماثلاً (أو السياق الهيكلي لنطاقه المتغير). ‎(Sang‏ قياس درجة التطابق هذه بوسائل معروفة للشخص المتمرس وخاصة باستخدام أداة ‎DomainGapAlign‏ لنظام المعلومات الدولي للوراثيات المناعية ‎(IMGT)‏ كما وضح خلال الجلسة المفتوحة ل ‎WHO INN Expert‏ ‎Group‏ (إبريل 2015). وبفضل أن تكون الأجسام المضادة المزودة هنا متطابقة مع الجسم 0 المضاد البشري بنسبة أكثر من 780 والأفضل بنسبة لا تقل عن 784 أو أكثر من 784 والأكثر تفضيلاً بنسبة لا تقل عن 785؛ كما حددت بشكل خاص باستخدام أداة ‎.DomainGapAlign‏ ‎(Sag‏ تحديد درجة التطابق المذكورة للنطاق المتغير للسلسلة الخفيفة فقط أو للسلسلة الخفيفة فقط (بالمقارنة مع النطاق المتغير للسلسلة الخفيفة للجسم المضاد البشري أو السلسلة الخفيفة) أو للسلسلة الخفيفة والسلسلة الثقيلة ‎cla‏ بمقارنة كل سلسلة مع سلسلة الجسم المضاد البشري المناظرة 5 الأكثر تماثلاً, وتدوين النسبة المئوية التراكمية للتطابق. وبشكل محدد؛ يشتمل النطاق المتغير للسلسلة الخفيفة للجسم المضاد أو السلسلة الخفيفة للجسم المضاد ‎Tidy‏ للاختراع على 780 على الأقل؛ والأكثر تحديداً 784 على الأقل والأكثر تحديداً 785 على الأقل من الشقات البشرية. وتشتمل النطاقات المتغيرة للسلسلة الخفيفة للجسم المضاد المحددة المزودة هنا على التوالي على 2 (ياق برقم تعريف: 9)؛ 785.3 (سياق برقم تعريف: 10 وسياق برقم تعريف: 11) و 0 786.3 (سياق برقم تعريف: 12) من الشقات البشرية. ويشتمل النطاق المتغير للسلسلة الثقيلة للجسم المضاد المفضل المزود هنا (سياق برقم تعريف: 7) على 790.8 من الشقات البشرية. وقد يشتمل نطاق متغير لسلسلة خفيفة للجسم المضاد مزود هنا على ما لا يزيد عن 135 حمض أميني؛ وبفضل ما لا يزيد عن 120 حمض أميني والأفضل ما لا يزيد عن 110 أو 107 أحماض أمينية. وقد يشتمل نطاق متغير لسلسلة خفيفة للجسم المضاد مزود هنا على ما لا يقل 5 عن 80؛ ‎Jiang‏ ما لا يقل عن 90 والأفضل ما لا يقل عن 100 أو 106 أحماض أمينية. وقد

يشتمل نطاق متغير لسلسلة خفيفة للجسم المضاد مزود هنا من 80 إلى 135؛ ويفضل من 90 إلى 120؛ والأفضل من 105 إلى 110 أحماض أمينية. وقد تشتمل سلسلة خفيفة للجسم المضاد مزودة هنا على ما لا يزيد عن 250 حمض أميني؛ وبفضل ما لا يزيد عن 230 حمض أميني والأفضل ما لا يزيد عن 214 أو 211 حمض أميني. وقد تشتمل سلسلة خفيفة للجسم المضاد مزودة هنا على ما لا يقل عن 150( ويفضل ما لا يقل عن 190 والأفضل ما لا يقل عن 200 أو 210 أحماض أمينية. وقد تشتمل سلسلة خفيفة للجسم المضاد مزودة هنا من 150 إلى 250« وبفضل من 190 إلى 230؛ والأفضل من 210 إلى 220 حمض أميني. وتم هنا أيضا تزوبد متعددات ببتيد تكون (أ) عبارة عن شدفات ارتباط بمولد مضاد 0 للأجسام المضادة المزودة هناء وبخاصة شدفات ارتباط بمولد مضاد تتكون من أو تشتمل على شدفة من سلاسل خفيفة للجسم المضاد أو مناطق متغيرة للسلسلة الخفيفة للجسم المضاد مزودة هناء نطاق متغير لسلسة ثقيلة للجسم المضاد مزود هنا و/أو ‎(iT)‏ جزيئات محاكية للجسم المضاد خاصة بالأجسام المضادة المزودة هنا. وتكون شدفة ارتباط بمولد مضاد عبارة عن متعدد ببتيد يرتبط ‎begs‏ ببروتين 601727 كما 5 هو محدد أعلاه في ‎gall‏ ذي الصلة (الفقرات [44] إلى [47]) وتشتمل على ثلاث مناطق ‎CDR‏ ‏على الأقل ل 811382-03 (تتكون من السياقات بأرقام التعريف: 4 إلى 6) ويفضل شدفة من النطاقات المتغيرة للسلسلة الخفيفة المزودة هنا (بسياقات بأرقام تعريف: 9 إلى 12) تشتمل على سياقات ‎CDR‏ المذكورة. وقد تشتمل شدفة ارتباط بمولد مضاد على ما لا يقل عن 40؛ ويفضل ما لا يقل عن 50 والأفضل ما لا يقل عن 70 أو 74 حمض أميني. وقد تشتمل شدفة ارتباط بمولد 0 مضاد على ما لا يزيد عن 100 ويفضل ما لا يزيد عن 90 والأفضل ما لا يزيد عن 80 أو 74 حمض أميني. وقد تشتمل شدفة ارتباط بمولد مضاد من 40 إلى 100؛ من 50 إلى 90 ويفضل من 60 إلى 100 والأفضل من 50 إلى 70 أو 60 إلى 80 حمض أميني. وقد تمتلك شدفة ارتباط بمولد مضاد كما هو مزود هنا بشكل خاص أي من السمات الوظيفية الملائمة التي تم الكشف عنها ‎Lad‏ يخص الأجسام المضادة المزودة هناء ولا سيما السمات التي تم الكشف عنها في 5 النفقرات [47] إلى [62].

ووفقاً لذلك؛ قد يتكون متعدد ببتيد معزول مزود هنا من سياق يشتمل على ما لا يزيد عن 0 حمض أميني؛ وبخاصة ما لا يزيد عن 217 حمض أميني؛ أو ما لا يزيد عن 214 حمض أميني أو ما لا يزيد عن 211 حمض أميني وبشكل أكثر تحديداً ما لا يزيد عن 200 حمض أميني أو ما لا يزيد عن 175 حمض أميني أو ما لا يزيد عن 150 حمض أميني أو ما لا يزيد عن 135 حمض أميني أو ما لا يزيد عن 120 حمض أميني أو ما لا يزيد عن 107 أحماض أمينية والأكثر تحديداً ما لا يزيد عن 100 حمض أميني أو ما لا يزيد عن 90 حمض أميني أو ما لا يزيد عن 80 حمض أميني أو ما لا يزيد عن 74 حمض أميني أو ما لا يزيد عن 70 أحماض أمينية أو ما لا يزيد عن 60 حمض أميني. ويكون جزيء محاك للجسم المضاد عبارة عن متعدد ببتيد له خواص مماثلة للجسم 0 المضاد وبخاصة له خواص ربط مماثلة مع 00127. وقد تكون الجزيئات المحاكية للجسم المضاد؛ على سبيل ‎(Jill‏ جزيئات جسم ‎Call‏ الارتباط ‎caffibody‏ مركبات أفيلين 8101:05؛ أفيمرات ‎caffimers‏ مركبات أنتيكالين ‎canticalins‏ أجسام أحادية ‎<monobodies‏ إلخ. وقد يمتلك جزيء محاك للجسم المضاد كما هو مزود هنا بشكل خاص أي من السمات الوظيفية الملائمة التي تم الكشف عنها فيما يخص الأجسام المضادة المزودة هناء ولا سيما السمات التي تم 5 الكشف عنها في الفقرات [47] إلى [62]. وبشكل محدد؛ يكون الجسم المضاد وفقاً للاختراع ‎Ble‏ عن جسم مضاد مؤنسن؛ يشتمل على نطاقات ثابتة مشتقة من نطاقات ثابتة بشرية. ويشكل محدد؛ يتم اشتقاق النطاق الثابت للسلسلة الخفيفة للجسم المضاد من نطاق ثابت للسلسلة الخفيفة ‎LIS‏ البشربة و/أو يتم اشتقاق النطاق الثابت للسلسلة الثقيلة للجسم المضاد من منطقة ثابتة للسلسلة الثقيلة من 61واء 62واء 0 10963 أو 10964 بشري وخاصة من منطقة ثابتة للسلسلة الثقيلة من 064 بشري. ويقصد بعبارة 5054( من" بعض الطفرات النقطية بواسطة استبدالات الأحماض الأمينية مثل ‎I9G4 (S228P)‏ أو (/961)5333ا. وتقوم هذه الطفرات المعروفة تماماً للشخص المتمرس في التقنية عموماً بتعديل بعض خواص السلسلة الأصلية. على سبيل المثال» تؤدي إلى استمناع أقل بالمقارنة مع الجسم المضاد الأصلي أو تلغي ارتباط ‎FeyReceptor‏ أو تتفادى ديمرة الجسم المضاد المونمري 5 أو تثبت الديمرة مما يجعل الأجسام المضادة أفضل للاستخدامات العلاجية للإنسان. ويشتمل

الجسم المضاد ‎Tay‏ للإختراع المشتق من النطاق الثابت للسلسلة الخفيفة والثقيلة الأصلية أو يتكون من السياق المحدد في سياق برقم تعريف: 26؛ سياق برقم تعريف: 27 أو سياق برقم تعريف: 28 أو شدفة منه؛ على التوالي. وبشكل أكثر تحديداً؛ يتكون النطاق الثابت للسلسلة الخفيفة للجسم المضاد من السياق المحدد في سياق برقم تعريف: 27. ويشكل ‎case‏ يشتمل النطاق الثابت اللسلسلة الثقيلة للجسم المضاد أو يتكون من السياق المحدد في سياق برقم تعريف: 26 أو شدفة منه. وبشكل أكثر ‎danas‏ يتكون النطاق الثابت للسلسلة الثقيلة للجسم المضاد من السياق المحدد في سياق برقم تعريف: 26. وتم هنا أيضا تزويد جزيئات حمض نووي معزولة تحمل شيفرة متعدد ببتيد وفقاً للاختراع؛ أو جسم مضاد أو شدفة ارتباط بمولد مضاد ‎die‏ مزودة هنا. وبشكل محدد؛ تحمل جزيئات الحمض 0 النووي المذكورة شيفرة النطاق المتغير للسلسلة الخفيفة أو السلسلة الخفيفة لجسم مضاد مزود هناء في توليفة مع جزيئات حمض نووي معزولة تحمل شيفرة السلسلة الثقيلة لجسم مضاد مزود هناء وفقاً لأي من التعريفات المزودة هما. ‎(Sg‏ محدد؛ يزود هنا جزيء حمض نووي معزول ‎Jens‏ ‏شيفرة متعدد ببتيد يشتمل على أو يتكون من سياق يختار من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف: 9؛ سياق برقم تعريف: 10؛ سياق برقم تعريف: 11؛ سياق برقم تعريف: 12. ‎Jug‏ ‏5 محدد؛ يشتمل جزيء الحمض النووي المعزول وفقاً للاختراع أو يتكون من سياق يختار من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف: 15؛ سياق برقم تعريف: 16؛ سياق برقم تعريف: 17؛ أو سياق برقم تعريف: 18. ويشكل محددء يُزود جزيء الحمض النووي المعزول المذكور في توليفة مع جزيء حمض نووي معزول يحمل شيفرة سلسلة ثقيلة تشتمل على مناطق ‎COUN CDR‏ التي تتكون من السياقات المذكورة في سياق برقم تعريف: 1؛ سياق برقم تعريف: 2 وسياق برقم 0 تعريف: 3؛ وبشكل خاص يحمل شيفرة نطاق متغير لسلسلة ‎ALE‏ يتكون من السياق المذكور في سياق برقم تعريف: 7 والأكثر تحديداً جزيء الحمض النووي المعزول الذي يتكون من السياق المحدد بسياق برقم التعريف 13. وفي تجسيد مفضل؛ يتم تزويد توليفة من جزيئات حمض نووي معزولة تحمل شيفرة جسم مضاد أو شدفة ارتباط بمولد مضاد منه؛ وتشتمل التوليفة المذكورة أو تتكون من جزيء حمض نووي معزول أول يشتمل على أو يتكون من سياق يتم اختياره من 5 المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف: 15؛ سياق برقم تعريف: 16؛ سياق برقم تعريف: 17

وسياق برقم تعريف: 18؛ وجزيء حمض نووي معزول ثانٍ يشتمل على أو يتكون من السياق برقم تعريف: 13. وفي تجسيد مفضل آخرء يتم تزويد توليفة من جزيئات حمض نووي معزولة تحمل شيفرة جسم مضاد أو شدفة ارتباط بمولد مضاد منه؛ وتشتمل التوليفة المذكورة أو تتكون من جزيء حمض نووي معزول أول يشتمل على أو يتكون من السياق برقم تعريف: 18؛ وجزيء حمض نووي معزول ثانٍ يشتمل على أو يتكون من السياق برقم تعريف: 13. وتم هنا أيضا تزويد متعددات نيوكليوتيد تحمل شيفرة سياق متعدد الببتيد لسلسلة خفيفة كاملة؛ تشتمل على كل من النطاق الثابت والمتغيرء أي بشكل محدد متعددات نيوكليوتيد تحمل شيفرة أحد السياقات بأرقام التعريف: 9 إلى 12 والسياق برقم التعريف: 27 أو 28؛ وبشكل محدد متعددات نيوكليوتيد تشتمل على أو تتكون من أحد السياقات بأرقام التعريف: 15 إلى 18 متسلسلة 0 مع سياق برقم تعريف: 30 أو سياق برقم تعريف: 31. ويتم تزويد متعددات النيوكليوتيد هذه بشكل محدد في توليفة مع متعدد نيوكليوتيد يحمل شيفرة سياق متعدد الببتيد لسلسلة ثقيلة كاملة تشتمل على كل من النطاق الثابت ‎ually‏ أي بشكل محدد متعددات نيوكليوتيد تحمل شيفرة سياق برقم تعريف: 7 والسياق برقم التعريف: 26؛ وبشكل محدد متعددات نيوكليوتيد تشتمل على أو تتكون من سياق برقم تعريف: 13 متسلسل مع سياق برقم تعريف: 29. وبشكل محدد؛ قد تشتمل جزيئات الحمض النووي المعزولة المزودة هنا بشكل مفيد؛ إلى جانب سياق يحمل شيفرة سلسلة خفيفة وبشكل اختياري سلسلة ثقيلة من جسم مضاد مزود ‎lia‏ قبل السياق الذي يحمل شيفرة سلاسل الجسم المضاد المذكورة؛ على سياق يحمل شيفرة ببتيد إشارة يسمح بإفراز السلاسل المذكورة عندما يتم التعبير عنه في خلية منتجة. وقد تشتمل أيضاً على سياق واحد أو أكثر يحمل شيفرة ببتيد واسم واحد أو أكثر للكشف عن و/أو تسهيل تنقية السلاسل 0 المذكورة. ويزود هنا أيضاً ناقل للتنسيل و/أو للتعبير عن جزيء حمض نووي مزود هنا. ويشكل محدد؛ يكون الناقل المزود المذكور عبارة عن بلازميد ملائم للتنسيل و/أو التعبير في خلايا ثديية؛ يشتمل على سياقات تنظيم للانتساخ والتعبير. ووفقاً لذلك؛ يزود هنا ناقل يشتمل على متعدد نيوكليوتيد كما تم الكشف عنه أعلاه وخاصة متعدد نيوكليوتيد كما تم الكشف عنه في الفقرات

[78] -]76[ 5

علاوة على ذلك؛ يزود هنا خلايا أو خطوط خلايا يعاد اندماجها مع جزيء حمض نووي كما هو مذكور أعلاه؛ وبشكل محدد ناقل ويشكل خاص خلية أو خط ‎WA‏ من ثديي أو طير؛ وخاصة كما هو مفصل في الشكل 2. على سبيل المثال؛ ‎WA‏ مبيض الهمستر الصيني المعدلة وراثياً لتقليل إضافة الفوكوز العامة. وفي الواقع؛ تظهر الأجسام المضادة التي تفتقر إلى إضافة الفوكوز الأساسية سمية خلوية بالتوسط الخلوي تعتمد على الجسم المضاد ‎(ADCC)‏ معززة بشكل كبير (انظر المرجع 2010 ‎(von Horsten et al,‏ ويكمن مثال ‎AT‏ في خط خلايا 866] له بشكل طبيعي خواص إضافة فوكوز منخفضة (انظر المرجع 2010 ‎(Olivier et al.,‏ ويمكن أيضاً إنتاج الأجسام المضادة في خلايا مخمجة تحوبلياً بشكل عابر باستخدام جزيء حمض نووي كما ذكر أعلاه وبخاصة ناقل وبشكل محدد خلايا ‎COS‏ وتحديداً كما هو مفصل في المثال 2. وتم هنا أيضا تزويد طرق لإنتاج متعدد الببتيد المزود هناء وخاصة سلسلة خفيفة للجسم المضاد و/أو جسم مضاد أحادي النسيلة؛ وتشتمل الطرق المذكورة على خطوة التعبير عن متعدد الببتيد المذكور أو السلسلة الخفيفة للجسم المضاد أو الجسم المضاد أحادي النسيلة (أو السلسلة الخفيفة واختيارياً السلسلة الثقيلة للجسم المضاد أحادي النسيلة) في ‎WIA‏ تشتمل على جزيء حمض نووي يحمل شيفرة متعدد الببتيد المذكور في ظروف تتيح استعادة متعدد الببتيد المذكور 5 وخطوة استعادة متعدد الببتيد المذكور. وبشكل ‎(pals‏ يتم تحضير الأجسام المضادة أو شدفاتها في خلايا تظهر خواص إضافة فوكوز منخفضة مثل خلايا 5866 المأخوذة من الطيور ‎avian‏ ‏259 هنا أيضاً تركيب صيدلي ‎pharmaceutical composition‏ يشتمل على متعدد ببتيد (وبالأخص نطاق متغير للسلسلة الخفيفة للجسم المضاد أو سلسلة خفيفة للجسم المضاد) و/أو جسم مضاد أو شدفة ارتباط بمولد مضاد أو جزيء محاكٍ للجسم المضاد منه و/أو جزيء 0 حمض نووي معزول كما هو محدد أعلاه؛ ومادة ناقلة صيدلية. وبشتمل التركيب الصيدلي المذكور بشكل اختياري كذلك على مقوم فعال مختلف. ‎ang‏ تزويد التركيب المذكور بشكل خاص في تركيبة ‎Ladle‏ للإعطاء جهازياً أو للإعطاء موضعياً. وبصفة محددة؛ تزود هنا تراكيب ملائمة للإعطاء موضعياً؛ ويشكل خاص للحقن داخل العضل أو تحت الجلد؛ أو للحقن باستخدام أداة ‎Jie‏ محقنة ذاتية (أو قلم حاقن ‎pen‏ 10(60102)؛ أو للإعطاء عبر الأدمة ‎dransdermal‏ وبالأخص 5 باستخدام لصقات توضع على الجلد؛ أو للإعطاء عبر الغشاء المخاطي؛ وبالأخص للإعطاء

داخل الأنف أو عبر المستقيم. وبصفة محددة؛ تزود هنا تراكيب ملائمة للإعطاء موضعياً إلى الجهاز الهضمي ‎(aug (Gl)‏ خاص من خلال الإعطاء الفموي؛ وتحديداً لمعالجة مرض معوي ‎intestinal disease‏ مثل مرض كرون أو التهاب القولون التقرحي ‎(UC)‏ وبالأخص؛ تراكيب ملائمة للتوصيل إلى القولون. وبصفة محددة»؛ تتزود هنا تراكيب ملائمة للإعطاء جهازياً؛ وبخاصة للإعطاء المعوي أو اللامعوي وتحديداً الحقن داخل الوريد أو الإعطاء الفموي. وكما يُدرك الشخص

المتمرس؛ قد يكون الإعطاء المعوي إما إعطاء موضعي إلى الجهاز الهضمي أو إعطاء جهازي. وحيثما تزود هذه التراكيب الصيدلية أو استخداماتها هناء يجب أن يكون مفهوماً أن ناقل الإعطاء واستخداماته قد تزود أيضاً؛ ‎lie‏ عندما يتم تزويد تركيب صيدلي قابل للحقن بشكل صريح؛ يجب أن يكون مفهوماً أن التركيب يزود بحد ذاته وأيضاً في أداة أو بالاشتراك مع أداة تسمح بإعطاء

0 و/أو حقن التركيب المذكور (أداة توصيل"). وتشمل أمثلة أدوات التوصيل على سبيل المثال لا الحصر المحاقن ‎Ald‏ وبشكل خاص المحاقن متعددة الحجرات واللصقات التي ‎pag‏ على الجلد. ووفقاً لذلك؛ تزود هنا أداة توصيل؛ وبشكل خاص محقنة ذاتية؛ مضخة أو لصقة توضع على الجلد تشتمل على التركيب المذكور واستخداماتها كما هو ‎aly‏ أدناه ‎Las‏ يتعلق بالتراكيب الصيدلية. ويزود هنا أيضاً طقم يشتمل على تركيب صيدلي وأداة توصيل موضعية؛ ويشكل خاص

5 أداة توصيل تحت الجلد؛ معوية أو فموية؛ ويشكل خاص محقنة معبأة مسبقاً أو أداة بدون إبرة؛ تحتوي على التركيب المذكور أو ملائمة لإعطاء التركيب المذكور؛ واستخداماته كما هو وارد أدناه ‎Las‏ يتعلق بالتراكيب الصيدلية. ويزود التركيب الصيدلي بأي شكل ملائم للإعطاء؛ بما في ذلك على شكل محلول؛ وبشكل خاص محلول مائي معقم؛ أو معلق أو ‎sale‏ صلبة وبشكل خاص مادة صلبة مجفدة؛ وتحديداً لتُمتز على ‎dial‏ و/أو ‎sale‏ تعليقها وإعطائها كمحلول أو حبوب أو

0 أقراص أو شكل صلب آخر ملائم للإعطاء الفموي؛ وبشكل خاص بإطلاق متأخر أو طويل الأمد؛ أو في صورة جسيمات نانوية؛ مثلاً تركيب يشتمل على جسيمات نانوية حيث يمتز متعدد الببتيد على السطح أو ضمن الجسيمات النانوية المذكورة؛ إلخ. وقد يكون شكل التركيب الصيدلي واختيارياً طبيعة أداة التوصيل ملائمين لتوصيل المقوم الفعال كما هو مزود هنا بشكل جهازي أو موضعي؛ أي قد يكونا ملائمين للمقوم الفعال للوصول إلى الخلايا المستهدفة؛ الأنسجة المستهدفة؛

5 أو الأعضاء المستهدفة في حالة فعالة. ‎day log‏ الخصوص»؛ قد يكون شكل التركيب الصيدلي واختياريا طبيعة أداة التوصيل ملائمين للتوصيل إلى الجهاز الهضمي؛ وخاصة إلى القولون.

ويشتمل التركيب الصيدلي على مادة حاملة مقبولة صيدلياً؛ ومع ذلك تزود تراكيب صيدلية أيضاً بدون ‎sale‏ حاملة لاستخدامات وأغراض مشابهة؛ عندما لا تكون هذه المادة الحاملة مطلوية للاستخدام الصيدلي, مثلاً؛ إذا أعطي المنتج في صورة مادة صلبة مجفدة نقية. وبصفة محددة؛ يتم الإعطاء وفقاً لأي وسيلة ملائمة كما هو موصوف هنا للإطلاق المعوي وخاصة للإطلاق المعوي بشكل متأخر. ويزود أيضاً هنا تركيب يشتمل كمقوم فعال؛ على متعدد ببتيد (وبالأخص نطاق متغير

للسلسلة الخفيفة للجسم المضاد أو سلسلة خفيفة للجسم المضاد) و/أو جسم مضاد (وبالأخص جسم مضاد أحادي النسيلة)؛ شدفة ارتباط بمولد مضاد أو جزيء محاكٍِ للجسم المضاد منه كما هو محدد أعلاه؛ أو تركيب صيدلي كما هو محدد أعلاه في تركيبة ملائمة للتحكم ببقاء أو توسع

0 الخلايا الإيجابية لا 00127 البشري؛ وبخاصة الخلايا المستفعلة الإيجابية لذ 601727 البشري وخصوصاً بقاء أو توسع ‎T WDA‏ ذاكرة إيجابية لا 0601727 خاصة خلايا ‎T‏ ذاكرة إيجابية لل 7 و 608 أو خلايا إيجابية لال 60127 و 004؛ ‎Lexie‏ تعطى لمريض بشري. ويشكل محدد؛ يكون التركيب المذكور المشتمل على الجسم المضاد ‎gf)‏ عامل آخر كما هو محدد أعلاه) كمقوم فعال عبارة عن تركيبة ملائمة للتحكم بتمايز و/أو نضج الخلايا التغصنية عندما تعطى

5 المريض. ولقد أظهر المخترعون على نحو مدهش أن حقنة مفردة من الجسم المضاد المزود هنا تسمح بتأثير مستدام؛ ولا تزال الاستجابة الالتهابية منخفضة بشكل كبير في الحيوانات التي عولجت عن طريق حقنة مفردة من الأجسام المضادة المزودة لمدة تصل إلى 14 شهرًاء وحتى 18 شهراً بعد الحقنة المفردة المذكورة. ويكون للإعطاء ويفضل الإعطاء المفرد لمتعدد الببتيد؛ وبشكل خاص سلسلة

0 خفيفة للجسم المضاد وبالأخص الجسم المضاد؛ شدفة ارتباط بمولد مضاد أو جزيء ‎las die‏ للجسم المضاد المزودة هنا تأثير سريع و/أو طويل الأمد بشكل مفضل على خلايا 7 الذاكرة المستفعلة. ويفضل أن يلاحظ التأثير السريع خلال أسبوع والأفضل خلال 48 ساعة؛ والأفضل من ذلك خلال يوم من إعطاء متعدد الببتيد المذكور؛ سلسلة الجسم المضاد المذكورة أو الجسم المضاد المذكور. ويفضل أن يلاحظ التأثير طويل الأمد لمدة 12 شهراً على الأقل والأفضل لمدة 14 شهراً

5 على الأقل بعد آخر إعطاء (وبفضل الإعطاء المفرد) لمتعدد الببتيد المذكور؛ سلسلة الجسم

المضاد المذكورة أو الجسم المضاد المذكور. ويكون مثل هذا التأثير عكوساً بشكل خاص (وتحديداً يمكن استعادة استجابة خلايا ‎T‏ بواسطة تلقيح جديد). ويفضل أن يكون مثل هذا التأثير متخصص بمولد المضاد و/أو الاستجابة ويفضل أن لا يكون مرتبطاً باستنفاد ملموس لليمفاوبات (أي لا يتم تقليل العدد ‎Maal)‏ لليمفاويات في الكائن الخاضع للمعالجة كما تم قياسه بواسطة الطرق الشائعة). ويمكن تحديد هذا التأثير بطريقة أخرى كحذف نسيلي لخلايا ‎T‏ الذاكرة أو كحذف عكوس

متخصص بمولد المضاد لخلايا ‎T‏ الذاكرة المناعية. ‎(Sarg‏ تقييم تأثير هذا الإعطاء على خلايا 1 الذاكرة المستفعلة عن طريق مقارنة مستويات الخلايا التي تفرز ‎IFN=y‏ (تقاس مثلاً بواسطة طريقة ‎(ELISPOT‏ استجابة لمولد مضاد؛ مثلاً توبركولين» في أفراد ملقحين (وتحديداً في البابون) تم معالجتهم لاحقاً باستخدام متعدد الببتيد؛ سلسلة الجسم المضاد أو الجسم المضاد أحادي النسيلة

0 المزود هنا وفي أفراد ملقحين لم يتم معالجتهم: يلاحظ وجود تأثير إذا كان المستوى المقاس لخلايا ‎T‏ المتخصصة بمولد المضاد أقل بشكل ملحوظ (وبفضل أقل بمقدار 710 على الأقل والأفضل أقل بمقدار 740 على الأقل) في الأفراد المعالجين؛ عند النقطة الزمنية المعنية بعد المعالجة. ويمكن أيضاً قياس ‎Jie‏ هذا التأثير بواسطة تقييم الاستجابة الالتهابية لمولد مضاد معين بطريقة ‎(ga‏ مثلاً؛ رد فعل التهابي موضعيء وتحديداً بالجلد؛ استجابة لمولد مضاد معطى موضعاً.

‎Yay 5‏ من ذلك؛ يمكن استخدام معايرة تترامر ‎MHC‏ وتعرف طرق اختبار ‎Jie‏ هذا التأثير للشخص المتمرس وهي موضحة هنا تحديداً في المثال 6. بالإضافة إلى ‎cally‏ أظهر المخترعون على نحو مدهش أن الجسم المضاد المزود هنا قد يكون له تأثير سريع؛ وخاصة على تنشيط خلايا ‎T‏ وبشكل محدد على إطلاق السيتوكينات بواسطة خلايا ‎oT‏ وخصوصاً في نسيج التهابي. ويلاحظ هذا التأثير بشكل خاص خلال أسبوع ويفضل خلال 48

‎dels 0‏ والأفضل خلال 24 ساعة من إعطاء الجسم المضاد ويلاحظ بشكل خاص كانخفاض في إنتاج (أو إطلاق) /-لاا. وبلاحظ هذا التأثير موضعياً بشكل ‎«als‏ أي عند موقع إعطاء الجسم المضاد أو عند موقع التوصيل. وبشكل محدد؛ يكون للجسم المضاد المزود هنا تأثير سربع ‎Jig‏ خاص تأثير موضعي سريع؛ وتحديداً على إطلاق السيتوكينات بواسطة ‎TA‏ وخاصة له تأثير ملحوظ خلال 24 ساعة من الإعطاء. وعندما يتم إعطاء الجسم المضاد للتوصيل الموضعي

‏5 ولكن ليس بشكل مباشر على موقع التوصيل المنشود؛ فقد يكون للجسم المضاد تأثير سريع كما

— 5 1 —

هو مذكور أعلاه عند موقع التوصيل» خلال نفس الفترات الزمنية من التوصيل وليس من الإعطاء والذي يمكن أو لا يمكن أن يكون متأخراً منذ الإعطاء كما سيدرك الشخص المتمرس. وقد يشتمل تركيب مزود هنا أيضاً على مركب إضافي له تأثير علاجي معيّل للمناعة وخاصة على الخلايا التي تسهم في الحساسية أو المناعة الذاتية. ولأغراض التوضيح؛ تتمثل معدلات

مناعية تمثيلية مثيرة للاهتمام في أجسام مضادة أحادية النسيلة ‎(gal‏ تستهدف خلايا 1 ‎Jie‏ ‏الأجسام المضادة التي تعمل ضد 0003 ضد ‎ICOS‏ أو ضد ‎CD28‏ أو بروتينات مأشوية أو أجسام مضادة تستهدف خلايا إضافية ‎(ie‏ 9ا01184 أو أجسام مضادة تعمل ضد 6040.

ويمكن تزويد متعدد الببتيد؛ الجسم المضاد؛ شدفة الارتباط بمولد المضاد أو الجزيء

المحاكي للجسم المضاد منه؛ جزيء الحمض النووي المعزول؛ الخلية و/أو التركيب المزود هنا في

0 منتج متوالف»؛ يشتمل على منتجات إضافية؛ وبخاصة عامل له تأثير ‎ade‏ معزّل للمناعة كما ورد أعلاه؛ يُعتزم استخدامه تحديداً للإعطاء بشكل متزامن أو بشكل منفصل أو متعاقب. ويزود هنا منتج متوالف يشتمل على متعدد ببتيد (وخاصة نطاق متغير لسلسلة خفيفة للجسم المضاد أو سلسلة خفيفة للجسم المضاد) و/أو جسم مضاد أو شدفة ارتباط بمولد مضاد أو جزيء محاك للجسم المضاد منه و/أو جزيء حمض نووي معزول؛ ‎(Jil‏ خلية أو خط ‎WA‏ و/أو تركيب

5 صيدلى كما هو محدد أعلاه واختيارياً يشتمل أيضاً على: عامل ذو تأثير علاجي معدل للمناعة» مخصص تحديداً للإعطاء في توليفة مع؛ على سبيل المثال» الجسم المضاد المزود هناء خاصة حيثما يكون الإعطاء المذكور إما متزامن أو متنفصل زمنياً» و/أو حيثما يكون الإعطاء المذكور من خلال نفس الطريقة أو طريقة مختلفة؛ و/أو أداة لإعطاء المنتج.

ويزود متعدد ببتيد وبالأخص سلسلة خفيفة للجسم المضاد و/أو جسم مضاد وبخاصة جسم مضاد أحادي النسيلة و/أو شدفة ارتباط بمولد مضاد أو جزيء محاكِ للجسم المضاد و/أو حمض نووي؛ ناقل 3 خلية أو خط خلايا و/أو تركيب صيدلى أو تركيب كما هو محدد أعلاه على ‎dag‏ الخصوص لاستخدامها في مريض بشري لمعالجة أمراض أو حالات مرضية تتأثر بالاستجابات المناعية؛ وخاصة باستجابات خلايا 1 الذاكرة. وتشمل هذه الحالات أو الأمراض تلك المستحثة برفض

الأعضاء المزروعة ‎transplant rejection‏ أمراض المناعة الذاتية ‎autoimmune‏ ‎diseases‏ أمراض الحساسية ‎callergic diseases‏ أمراض الجهاز التنفسي ‎respiratory‏ ‎diseases‏ العدوات الفيروسية المزمنة ‎chronic viral infections‏ الأمراض الالتهابية المزمنة ‎«chronic inflammatory disease‏ وخاصة الأمراض الالتهابية المعوية المزمنة ‎chronic‏ ‎cintestinal inflammatory disease 5‏ اللمفومة ‎lymphoma‏ اللوكيميا ‎leukemia‏ أو غيرها

من الأمراض ‎cancer diseases Lila pod)‏ بما في ذلك تلك الناتجة من الأورام الصلبة ‎solid‏ ‏65 عندما ترتبط هذه الأمراض بالخلايا الإيجابية لل 60127 وكذلك بمسار التأشير بواسطة 7ااء؛ وبالأخص عندما ينبغي تجنب زيادة نضج الخلايا التغصنية. ووفقاً لذلك؛ يبين المخترعون أنه يمكن استخدام العوامل المذكورة لمعالجة اضطرابات ‎Lala‏ تحسسية محددة ‎particular‏

‎callergic skin disorders 0‏ مرض التهاب الأمعاء ‎inflammatory bowel disease‏ ‎(IBD)‏ وخاصة مرض كرون ‎(CD) Crohn’s disease‏ أو التهاب القولون التقرحي ‎(UC) Crohn’s disease‏ أو متلازمة شوخرن الأولية ‎Primary Sjogren Syndrome‏ أو 4830 الحمامية الجهازية ‎Systemic Lupus Erythematosus‏ أو التصلب الجهازي ‎Systemic Sclerosis‏ أو التصلب المتعدد ‎multiple sclerosis‏ أو داء السكري من النوع

‏5 الأول ‎type | diabetes‏ أو لوكيميا الأرومة اللمفاوية الحادة ‎acute lymphoblastic‏ ‎(T-ALL Sis) leukemia‏ أو لمفومة هودجكين ‎<Hodgkin lymphoma‏ أو سرطان الثدي ‎breast cancer‏ المرتبط بالخلايا الإيجابية لل 010127 سرطان الكلى ‎«renal cancer‏ سرطان المثانة ‎cancer‏ +018008؛ سرطان الرئة ‎dung cancer‏ سرطان البنكرياس ‎pancreatic cancer‏ أو لمعالجة لمفومة خلايا ‎T‏ الجلدية ‎cell cutaneous‏ 1

‎ie lymphoma 20‏ لمفومة سيزاري ‎Sezary lymphoma‏ أو لمعالجة لوكيميا الأرومة اللمفاوية الحادة ‎acute lymphoblastoid leukemia‏ مع طفرة كسب الوظيفة لمسار -9810-01 ‎IL-7-R/TSLP function mutation‏ أو لمعالجة رفض الأعضاء المزروعة و/أو المرضى الذين بحاجة إلى عملية زرع و/أو على وشك الخضوع لعملية زرع و/أو خضعوا لعملية زرع. وتعد ‎dallas‏ مرض التهاب الأمعاء ‎IBD)‏ وخاصة مرض كرون ‎(CD)‏ أو التهاب القولون التقرحي

‎(UC) 5‏ أو متلازمة شوغرن الأولية ‎Primary Sjogren Syndrome‏ أو الذئبة الحمامية الجهازية ‎Systemic Lupus Erythematosus‏ أو التصلب الجهازي ‎Systemic Sclerosis‏

أو التصلب المتعدد ‎multiple sclerosis‏ أو داء السكري من النوع الأول ‎type | diabetes‏ مشمولة ضمن التجسيدات المفضلة. وبشكل محدد؛ يتعلق الاختراع بمتعدد الببتيد؛ أو الجسم المضاد أو شدفة الارتباط بمولد المضاد أو الجزيء المحاكي للجسم المضاد منه و/أو جزيء الحمض النووي المعزول؛ أو التركيب الصيدلي وفقاً للاختراع لاستخدامها كدواء؛ ويشكل أكثر تحديداً لاستخدامها في الوقاية من أو معالجة رفض الأعضاء أو الأنسجة المزروعة أو مرض يختار من المجموعة المكونة من أمراض المناعة الذاتية ولا سيما التهاب المفاصل الروماتويدي؛ التصلب الجهازي؛ التصلب المتعدد؛ داء السكري من النوع الأول؛ التهاب الدرقية الناجم عن المناعة الذاتية؛ الذئبة الحمامية الجهازية»؛ متلازمة شوغرن الأولية والأمراض الالتهابية وبشكل محدد مرض التهاب الأمعاء ‎(IBD)‏ والأكثر تحديداً مرض كرون والتهاب القولون التقرحي 0 والتهاب الدماغ والنخاع وأمراض الحساسية وأمراض السرطان والأمراض المرتبطة بالزرع وأمراض الجهاز التنفسي؛ ويفضل بالإعطاء الموضعي. ويزود الاختراع هنا استخدامات متعدد ‎canal)‏ السلسلة الخفيفة للجسم المضاد أو الجسم المضاد؛ شدفة الارتباط بمولد المضاد أو الجزيء المحاكي للجسم المضاد منه في معالجة الحالات المرضية التي تنطوي على تغيير الاستجابة المناعية لدى مريض بشري يؤدي إلى حالة سائدة مولدة للتحمل أو على العكس من ذلك؛ عدم وجود تحمل حيث ستكون هناك حاجة للسيطرة على مستوى الاستجابة المناعية وكذلك تدمير الخلايا الإيجابية لل 60127 الخبيثة. ويُقصد ب "المعالجة" أن الخطوات المنفذة للإعطاء تؤدي إلى تحسين الحالة السريرية لحيوان أو إنسان مريض يحتاج ‎clad)‏ والذي يعاتي من اضطراب (اضطرابات) مرتبط بمسار ‎IL=‏ ‏7 أي ينطوي على تنشيط أو تكاثر ‎WAY‏ الإيجابية لل 00127. وتهدف هذه المعالجة إلى 0 تحسين الحالة السريرية للحيوان أو الإنسان المريض عن طريق القضاء على أو تخفيف الأعراض المرتبطة بالاضطراب (الاضطرابات) المتعلق بمسار 7-ااء أي التي تنطوي على تنشيط أو تكاثر الخلايا الإيجابية لل 000127. ويفضل أن تتيح المعالجة المزودة هنا استعادة الصحة. وبفضل أن لا يكون للمعالجة المذكورة آثار سلبية غير مرغوبة بسبب زيادة نضج ‎LAN‏ المناعية؛ وخاصة الخلايا التغصنية.

وفي جوانب محدّدة لمعالجة المرضى؛ يتم تزويد متعدد الببتيد؛ الجسم المضاد؛ شدفة الارتباط بمولد المضاد أو الجزيء المحاكي للجسم المضاد؛ متعدد النيوكليوتيد؛ الخلية أو خط الخلايا أو التركيب أو يكون من المنشود و/أو الملائم استخدامها لاستنفاد الخلايا الإيجابية لل 7 مع الحفاظ على ‎WAY‏ السلبية لل ‎.CD127‏

وفي جوانب محدّدة لمعالجة المرضى؛ يزود استخدام متعدد ‎catia)‏ الجسم المضاد؛ شدفة الارتباط بمولد المضاد أو الجزيء المحاكي للجسم المضاد؛ متعدد النيوكليوتيد؛ الخلية أو خط ‎Wal‏ أو التركيب أو يكون من المنشود و/أو الملائم استخدامها لمنع تمايز و/أو توسع و/أو نضج الخلايا الإيجابية لا 00127؛ وبالأخص التمايز؛ التوسع أو النضج المستحث بواسطة 7-اا و/أو ‎TSLP‏ مع وجود تأثير مباشر ضئيل أو معدوم على الخلايا السلبية لا 00127.

0 وفي جوانب محدّدة لمعالجة المرضى؛ يزود استخدام متعدد ‎catia)‏ الجسم المضاد؛ شدفة الارتباط بمولد المضاد؛ الجزيء المحاكي للجسم المضاد؛ متعدد النيوكليوتيد؛ الخلية أو خط الخلايا أو التركيب أو تكون منشودة و/أو ملائمة للاستخدام للقضاء على/ تحييد خلايا ‎T‏ الذاكرة والساذجة عن طريق التداخل مع التأشير المستحث بواسطة 7-اا مع الحفاظ على خلايا ‎Treg‏ ‏وفي جوانب محدّدة لمعالجة المرضى؛ يزود استخدام متعدد الببتيد؛ الجسم المضاد؛ شدفة الارتباط

بمولد المضاد؛ الجزيء المحاكي للجسم المضاد؛ متعدد النيوكليوتيد؛ الخلية أو خط الخلايا أو التركيب أو تكون منشودة و/أو ملائمة للاستخدام في استنفاذ مجموعات فرعية من الخلايا الليمفاوية أو مجموعات خلايا أخرى تعبر عن 00127 (بما في ذلك الخلايا الليمفاوية ‎T‏ و 8 السوية أو المرضية؛ خلايا ‎(NK‏ خلايا تغصنية وأنواع أخرى من الخلايا بما فيها الخلايا الظهارية) كنتيجة للتأثير السام للخلايا للأجسام المضادة ريما ولكن ليس حصراً من خلال ‎ADCC‏ (السمية

0 الخلوية المعتمدة على الجسم المضاد) واختيارياً من خلال ‎CDC‏ (السمية الخلوية المعتمدة على المتممات). ويزود هنا كذلك متعدد ببتيد؛ وبالأخص سلسلة خفيفة للجسم المضاد و/أو جسم مضاد؛ شدفة ارتباط بمولد ‎alias‏ جزيء محاكٍِ للجسم المضاد؛ متعدد ‎(anion‏ خلية أو خط ‎WA‏ أو تركيب كما هو محدد أعلاه؛ لاستخدامها كمقوم فعال في نظام علاجي مركب أو إضافي لدى مربض

بحاجة إليه. ويُزود كذلك استخدام متعدد ببتيد؛ وبالأخص سلسلة خفيفة للجسم المضاد و/أو جسم مضاد؛ شدفة ارتباط بمولد ‎(lias‏ جزيء ‎das‏ للجسم المضاد ‎(die‏ متعدد نيوكليوتيد؛ خلية أو خط خلايا أو تركيب كما هو محدد أعلاه كمقوم فعال علاجياً في نظام علاجي مركب أو إضافي لدى مريض بحاجة إليه. وفي الجوانب أعلاه؛ تنطبق الاستخدامات المشار إليها أيضاً على الأحماض النووية؛ النواقل؛

‎(LAY‏ خطوط الخلاياء التراكيب والتراكيب الصيدلية المزودة أعلاه. وتزود هنا الوسائل والمنتجات أعلاه التي من المنشود و/أو الملائم استخدامها في معالجة أمراض مثل تلك الناجمة عن رفض الأعضاء المزروعة؛ أمراض المناعة الذاتية؛ أمراض الحساسية؛ أمراض الجهاز التنفسيء العدوات الفيروسية المزمنة؛ الأمراض الالتهابية المزمنة؛ وخاصة

‏0 الأمراض الالتهابية المعوية المزمنة؛ اللمفومة؛ اللوكيميا أو غيرها من أمراض السرطان بما في ذلك الأمراض الناتجة عن الأورام الصلبة ‎Lovie‏ ترتبط هذه الأمراض بالخلايا الإيجابية لا 60127 وكذلك بمسار تأشير7-اا؛ وبالأخص عندما ينبغي تجنب زيادة نضج الخلايا التغصنية. ووفقاً لذلك؛ تكون الوسائل والمنتجات المذكورة مخصصة و/أو ملائمة بشكل خاص لمعالجة اضطرابات جلدية تحسسية محددة؛ مرض التهاب الأمعاء (180)؛ وخاصة مرض كرون ‎(CD)‏ أو التهاب

‏5 القولون التقرحي ‎(UC)‏ أو لوكيميا الأرومة اللمفاوية الحادة ‎(T-ALL lie)‏ أو لمفومة هودجكين» أو سرطان الثدي المرتبط بالخلايا الإيجابية لال ‎«CD127‏ سرطان ‎«ASH‏ سرطان ‎ctl)‏ سرطان الرئة؛ سرطان البنكرياس؛ أو لمعالجة لمفومة خلايا ‎T‏ الجلدية؛ مثل لمفومة سيزاري أو لمعالجة لوكيميا الأرومة اللمفاوية الحادة مع طفرة كسب الوظيفة لمسار ‎IL=7—‏ ‎R/TSLP‏ أو لمعالجة رفض الأعضاء المزروعة و/أو المرضى الذين بحاجة إلى عملية زرع و/أو

‏0 على وشك الخضوع لعملية زرع و/أو خضعوا لعملية زرع. وبشكل محدد؛ يزود هنا استخدام متعدد ببتيد؛ وبالأخص سلسلة خفيفة للجسم المضاد و/أو جسم ‎alias‏ شدفة ارتباط بمولد مضاد؛ جزيء محاكٍِ للجسم المضادء؛ حمض نووي» خلية؛ خط ‎WIA‏ ‏أو تركيب في ‎Lane‏ بشري لمعالجة حالات و/أو أمراض ناجمة عن رفض الأعضاء المزروعة؛ أمراض المناعة الذاتية؛ أمراض الحساسية؛ أمراض الجهاز التنفسي؛ العدوات الفيروسية المزمنة؛

‏5 الأمراض الالتهابية المزمنة؛ وخاصة الأمراض الالتهابية المعوية المزمنة؛ اللمفومة؛ اللوكيميا أو

— 6 5 — غيرها من أمراض السرطان بما في ذلك الأمراض الناتجة عن الأورام الصلبة عندما ترتبط هذه الأمراض بالخلايا الإيجابية لل 60127 وكذلك بمسار تأشير 7-ا؛ وبالأخص عندما يتبغى تجنب زيادة نضج الخلايا التغصنية. ووفقاً ‎lI)‏ تستخدم المنتجات المذكورة بشكل خاص لمعالجة اضطرابات جلدية تحسسية محددة؛ مرض التهاب الأمعاء (180)؛ وخاصة مرض كرون ‎(CD)‏ أو التهاب القولون التقرحي (6لا)؛ أو لوكيميا الأرومة اللمفاوية الحادة ‎(T-ALL Sie)‏ أو لمفومة هودجكين» أو سرطان الثدي المرتبط بالخلايا الإيجابية لل ‎«CD127‏ سرطان ‎ASH‏ سرطان ‎ctl)‏ سرطان الرئة؛ سرطان البنكرياس؛ أو لمعالجة لمفومة خلايا ‎T‏ الجلدية؛ مثل لمفومة سيزاري أو لمعالجة لوكيميا الأرومة اللمفاوية الحادة مع طفرة كسب الوظيفة لمسار ‎IL=7—‏ ‎R/TSLP‏ أو لمعالجة رفض الأعضاء المزروعة و/أو المرضى الذين بحاجة إلى عملية زرع و/أو

0 على وشك الخضوع لعملية زرع و/أو خضعوا لعملية زرع؛ أمراض المناعة الذاتية أو أمراض الحساسية أو لمعالجة اللوكيميا مثل لوكيميا الأرومة اللمفاوية الحادة أو لمعالجة اللمفومة أو لمعالجة مرض السرطان أو لمعالجة العدوات الفيروسية المزمنة أو لمعالجة الأمراض الالتهابية وبالأخص ‎«IBD‏ ولا سيما ‎CD‏ أو ‎UC‏ أو لمعالجة أمراض الجهاز التنفسي أو للوقاية من و/أو معالجة الأعراض المرتبطة بالزرع.

‎JS 1 5‏ محددء تزود هنا طريقة للمعالجة تشمل إعطاء متعدد ببتيد (ويا لأخص نطاق متغير للسلسلة الخفيفة للجسم المضاد أو سلسلة خفيفة للجسم المضاد) و/أو جسم مضاد؛ شدفة ارتباط بمولد مضاد؛ جزيء محاكٍ للجسم المضاد؛ أو جزيء حمض نووي معزول؛ خلية؛ و/أو خط خلايا أو تركيب و/أو تركيب صيدلي كما هو محدد أعلاه في مريض بشري لمعالجة حالات و/أو أمراض ناجمة عن رفض الأعضاء المزروعة؛ أمراض المناعة الذاتية؛ أمراض الحساسية؛ أمراض الجهاز

‏0 اتتنفسىء العدوات الفيروسية المزمنة؛ الأمراض الالتهابية المزمنة؛ وخاصة الأمراض الالتهابية المعوية المزمنة؛ اللمفومة؛ اللوكيميا أو غيرها من أمراض السرطان بما في ذلك الأمراض الناتجة عن الأورام الصلبة عندما ترتبط هذه الأمراض بالخلايا الإيجابية لل 60127 وكذلك بمسار تأشير 7-ااء وبالأخص عندما ينبغي تجنب زبادة نضج الخلايا التغصنية. ووفقاً لذلك» تستخدم الطرق المذكورة بشكل خاص لمعالجة اضطرابات جلدية تحسسية محددة؛ مرض التهاب الأمعاء (180)؛

‏5 وخاصة مرض كرون ‎(CD)‏ أو التهاب القولون التقرحي ‎(UC)‏ أو لوكيميا الأرومة اللمفاوية

الحادة ‎(T-ALL Sie)‏ أو لمفومة هودجكين؛ أو سرطان الثدي المرتبط بالخلايا الإيجابية لل ‎«CD127‏ سرطان الكلى؛ سرطان المثانة؛ سرطان الرئة؛ سرطان البنكرياس؛ أو لمعالجة لمفومة خلايا 1 الجلدية؛ مثل لمفومة سيزاري أو لمعالجة لوكيميا الأرومة اللمفاوية الحادة مع طفرة كسب الوظيفة لمسار ‎IL=7-R/TSLP‏ أو لمعالجة رفض الأعضاء المزروعة و/أو المرضى الذين بحاجة إلى عملية زرع و/أو على وشك الخضوع لعملية زرع و/أو خضعوا لعملية زرع؛ أمراض

المناعة الذاتية أو أمراض الحساسية أو لمعالجة اللوكيميا مثل لوكيميا الأرومة اللمفاوية الحادة أو لمعالجة اللمفومة أو لمعالجة مرض السرطان أو لمعالجة العدوات الفيروسية المزمنة أو لمعالجة الأمراض الالتهابية وبالأخص مرض التهاب الأمعاء ‎¢(IBD)‏ ولا سيما مرض كرون ‎(CD)‏ أو التهاب القولون التقرحي ‎(UC)‏ أو لمعالجة أمراض الجهاز التنفسي أو ‎LEN‏ من و/أو معالجة

0 الأعراض المرتبطة بالزرع. وقد أظهر المخترعون أيضًا أنه في المرضى الذين يعانون من التهاب القولون التقرحي؛ تسمح مستويات ‎mRNA‏ ل 7ااء 0127© و/أو ‎gall TSLPR‏ بالاستجابة للعلاجات المثبطة للمناعة التقليدية: أظهر المستجيبون (أي المرضى الذين يظهرون انخفاضاً ملحوظاً في الأعراض ‎arial‏ ‏للعلاج) مستويات أقل من 7-اا و 60127 ومستويات أعلى من ‎TLSPR‏ مقارنة بغير

5 المستجيبين. ووفقاً لذلك؛ تزود هنا طرق تتم في الجسم ‎al)‏ لتقييم احتمالية الاستجابة للعلاجات المثبطة للمناعة لدى المرضى؛ ولا سيما مرضى من البشر يعانون من التهاب القولون التقرحي ‎(UC)‏ تشمل قياس في ‎die‏ يتم الحصول عليها من المريض المذكور مستوى ‎MRNA‏ أو البروتين ل ‎«LT‏ 60127 و/أو 115054 واستنتاج أن احتمال الاستجابة يزداد مقارنة مع مجموعة مرجعية عندما يكون المستوى المقاس ل 7اا و/أو 60127 أقل من المستوى المتوسط

0 في المجموعة المذكورة و/أو عندما يكون المستوى المقاس ل 151014 أعلى من المستوى المتوسط في المجموعة المذكورة. وطرق إجراء القياسات المطلوية معروفة للشخص المتمرس وقد تتضمن استخدام جسم مضاد موجه ضد ‎CD127‏ خاصة لقياس مستويات التعبير عن البروتين ل 7. وبتم تزوبد متعدد ‎cand)‏ خاصة السلسلة الخفيفة للجسم المضاد و/أو الجسم المضاد أحادي النسيلة المزود أعلاه على ‎dag‏ الخصوص للاستخدام في مثل هذه الطرق؛ ويتم تزويد مثل

هذه الطرق على ‎dag‏ الخصوص باستخدام متعدد الببتيد هذاء السلسلة الخفيفة للجسم المضاد هذه و/أو الجسم المضاد أحادي النسيلة هذا. ويصفة محددة»؛ تزود هنا طريقة لاختيار مركب من المجموعة المكونة من جسم مضاد؛ شدفة ارتباط بمولد مضاد منه وجزيء محاك للجسم المضاد؛ وتشمل الطريقة إحدى الخطوات التالية على الأقل:

اختبار ارتباط المركب مع 00127؛ وبشكل خاص مع 60127 بشري؛ وتحديداً بسياق حاتمة من النطاق 01 و/أو الموقع 2ب من النطاق 02 ل 00127. وقد يكون سياق الحاتمة من النطاق 01 و/أو من الموقع 2ب من النطاق 02 أي سياق من سياقات الحاتمة المبينة ‎(gd‏ ‏وخاصة على النحو الذي كشف عنه في ‎[O16] sal‏ وتحديداً سياق حاتمة يتم اختياره من

0 المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف 32؛ سياق برقم تعريف 33« سياق برقم تعريف 34؛ سياق برقم تعريف 35« سياق برقم تعريف 36 أو سياق برقم تعريف 96 ويشكل أكثر تحديداً سياق برقم تعريف 34؛ سياق برقم تعريف 35 وسياق برقم تعريف 96. وفي تجسيد محدد ‎cpl adil‏ قد يشمل اختبار الارتباط اختبار ارتباط المركب مع سياق حاتمة يتم اختياره من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف: 34 سياق برقم تعريف 35 وسياق برقم تعريف 96

5 واختبار ارتباط المركب مع سياق حاتمة يتم اختياره من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف 2 وسياق برقم تعريف 43. ويمكن اختبار قدرة ارتباط المركب بواسطة أي من الطرق المعروفة في ‎cdl)‏ وبخاصة طريقة ‎Bitz‏ المعروفة للشخص المتمرس والموضحة تحديداً في الشكل 3؛ المتال 3 والمثال 4 هنا وفي صفحة رقم 14( الأشكال 3؛ 4 و 6 والتعليقات التفسيرية ذات الصلة بها والأمثلة 1 2« 6< 7 الواردة في طلب براءة الاختراع الدولي رقم 2015/189302 و/أو

0 بواسطة طريقة المثال 10 الموضحة هنا؛ و/أو اختبار تثبيط إشارات ‎IL7-R‏ المستحث بواسطة 7-ااء ويشكل خاص فسفرة ‎STATS‏ بوجود المركب. ويمكن اختبار التثبيط المستحث بواسطة ‎ILT‏ في وجود المركب بالطريقة التي تم الكشف عنها في المثال 8 و/أو المثال 11 هنا؛ و/أو

اختبار تنشيط ‎phosphatidylinositol 3-kinase‏ في وجود المركب. ويمكن اختبار تنشيط

‎phosphatidylinositol 3-kinase‏ في وجود المركب وفقاً للطريقة التي تم الكشف عنها في

‏المثال 8 و/أو المثال 11 هنا؛ و/أو

‏اختبار تنشيط مسار تأشير ‎ERK‏ في وجود المركب. ويمكن اختبار تنشيط مسار تأشير ‎ERK‏ في

‏5 وجود المركب وفقاً للطريقة التي تم الكشف عنها في المثال 8 و/أو المثال 11 هنا؛

‏اختبار قدرة ارتباط المركب مع صفيحة بيتا واحدة على الأقل من الموقع 2ب للنطاق 02 ل

‏7 وبشكل خاص مع صفيحة بيتا الثالثة على الأقل للموقع 2ب؛ المحددة على أنها

‏أحماض نووية بالسياق ذي رقم التعريف 34 و/أو مع سياق حمض أميني واحد على الأقل يتم

‏اختياره من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف 35 وسياق برقم تعريف 96. ويمكن اختبار 0 قدرة ارتباط المركب بواسطة أي من الطرق المعروفة في التقنية؛ وبخاصة طريقة ‎Bitz‏ المعروفة

‏للشخص المتمرس والموضحة تحديداً في الشكل 3 المثال 3 والمثال 4 هنا وفي صفحة رقم 14؛

‏الأشكال 3؛ 4 و 6 والتعليقات التفسيرية ذات الصلة والأمثلة 1 2 6؛ 7 من ‎calla‏ براءة الاختراع

‎sl‏ رقم 2015/189302 و/أو بواسطة طريقة المثال 10 الموضحة هنا.

‏وقد تشمل الطريقة أيضاً أي واحدة من الخطوات الاختيارية التالية أو خطوة واحدة على

‏5 الأقل من الخطوات الاختيارية التالية:

‏اختبار ارتباط 060127 وبخاصة 60127 بشري مع السلسلة المشتركة ‎YC‏ لمستقبلات السيتوكين

‏في وجود المركب. ويمكن تقييم ارتباط 00127 مع السلسلة المشتركة ‎YC‏ لمستقبلات السيتوكين

‏في وجود المركب بشكل محدد بواسطة طرق الترسيب المناعي المشترك المعروفة للشخص

‏المتمرس لاختبار تفاعل البروتينات والموضحة؛ على سبيل المثال في طلب براءة الاختراع الدولي 0 رقم 2015/189302 في المثال 21. وعلى وجه التحديد. يمكن حضن الخلايا في وجود أو غياب

‏المركب الذي يتم اختباره؛ ثم تذويبها في ظروف تسمح بحفظ معقدات البروتين ويمكن تعريض

‏الحلالة الناتجة إلى ترسيب ‎elie‏ باستخدام مضاد 00127 وتقييم وجود 70 في المعقد المرسب

‏مناعياً الذي يحتوي على 00127 بواسطة تلطيخ ويستيرن باستخدام أجسام مضادة موجهة ضد

‎leg) ©‏ العكس من ذلك»؛ يمكن ‎shal‏ الترسيب المناعي باستخدام أجسام مضادة موجهة ضد ‎YC‏ وتقييم وجود 00127 باستخدام الأجسام المضادة الموجهة ‎aca‏ 60127)؛ و/أو اختبار استبطان 00127؛ وبخاصة 00127 بشري و/أو استبطان 60127 المستحث بواسطة ‎ILT‏ في وجود المركب. وقد يتم تعريف و/أو اختبار استبطان 00127؛ المعرف هنا في الفقرات من [51] إلى ]53[ كما هو موضح في طلب براءة الاختراع الدولي رقم 2015/189302 وتحديداً في الفقرات [59] - [63] في الصفحات 20-19 وفي الشكل 16 والمثال 5؛ و/أو اختبار نضج الخلايا التغصنية المستحث بواسطة 151 في وجود المركب. ويتم تعريف نضج الخلايا التغصنية المستحث بواسطة ‎TSLP‏ في الفقرتين [47] و [48] ‎La‏ وتُعرف وسائل قياس هذا التأثير للشخص المتمرس وبتم الكشف عنها بشكل خاص في طلب براءة الاختراع الدولي رقم 0 2015/189302 في الصفحات 17-16 وفي المثال 9 منه. ‎dag og‏ الخصوص؛ تشتمل وسائل قياس هذا التأثير على مقياس للتعبير عن 6040 بين ‎WAY‏ المحفزة بالمركب والخلايا المحفزة باستخدام ‎TSLP‏ وحده (بدون المركب). وفي تجسيد محدد للطريقة؛ يتم اختيار المركب الذي يرتبط نوعياً ب 001727؛ ‎CD127 dala‏ بشري؛ مضاد لتأشير ‎IL7-R‏ المستحث بواسطة 7 والذي لا يحفز تنشيط ‎if phosphatidylinositol 3-kinase 5‏ مسار تأشير ‎(ERK‏ وفي تجسيد أكثر تحديداً لهذه الطريقة؛ يتم اختيار المركب الذي يرتبط نوعياً ب 001727؛ ‎ala‏ 60127 بشري؛ مضاد لإشارات ‎IL7-R‏ المستحث بواسطة اا والذي لا يحفز تنشيط -3 ‎phosphatidylinositol‏ ‎kinase‏ ولا يحفز تنشيط مسار تأشير ‎ERK‏ ‏وبصفة محددة» تزود هنا طريقة لإنتاج جسم ‎alias‏ أو شدفة ارتباط بمولد مضاد ‎die‏ وفقاً للاختراع؛ 0 موك ضد 60127 وريما موك عن طريق تمنيع حيوان غير بشري مثل جرذان من السلالة 8 ©/لا0ا متوفرة في جامعة ‎(lig)‏ بلجيكا. ‎(Say‏ إجراء التمنيع باستخدام شدفة من سياق الحمض الأميني ذي رقم التعريف 22؛ وبالأخص شدفة من سياق الحمض الأميني ذي رقم التعريف 22 الذي يشتمل على سياق حاتمة كما حدد هنا وبالأخص سياق برقم تعريف 35 و/أو سياق برقم تعريف 96؛ كمستمنع. ويمكن الحصول على ورم هجين بواسطة دمج خلايا طحال

— 1 6 — أحادية النواة مع ورم خلوي مناعي 49831 من جرذ ‎LOU‏ ويمكن غريلة الورم الهجين وفقاً لقدرة الأجسام المضادة أحادية النسيلة المفرزة على الارتباط مع سياق حمض أميني يتم اختياره من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف: 22 سياق برقم تعريف: 35 وسياق برقم تعريف: 96؛ وبالأخص سياق برقم تعريف: 35 و/أو سياق برقم تعريف: 96. ولذلك؛ يشمل الاختراع أيضاً مركب مستمنع؛ ويكون المركب المستمنع المذكور عبارة عن شدفة من سياق الحمض الأميني لسياق برقم تعريف 22( وبالأخص شدفة تشتمل على سياق حمض أميني واحد على الأقل يتم اختياره من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف 32؛ سياق برقم تعريف 33؛ سياق برقم تعريف 34؛ سياق برقم تعريف 35 وسياق برقم تعريف 96 وتحديداً؛ سياق برقم تعريف 34؛ سياق برقم تعريف 35 وسياق برقم تعريف 96 والأكثر تحديداً سياق برقم تعريف 96. وفي تجسيد 0 محدد للاختراع؛ يكون المركب المستمنع عبارة عن ببتيد خطي وبشكل محدد ببتيد خطي يشتمل على سياق الحمض الأميني لسياق برقم تعريف 96 والأكثر تحديداً ببتيد خطي يشتمل على أو يتكون من ويفضل يتكون من سياق الحمض الأميني لسياق برقم تعريف 35. الأمثلة 5 المثال 1. أنسنة السلاسل الخفيفة تم استخدام السلسلة الثقيلة التالية في كل التجارب الواردة هناء ما لم ينص على خلاف ذلك سياق نيوكليوتيد ‎VH‏ مؤنسن 801382 (سياق برقم تعريف: 13): ‎CAGGTGCAGCTGGTCGAATCAGGGGGGGGACTGGTCAAACCCGGGG‏ ‎GCTCACTGCGTCTGTCATGTGCCGTCTCAGGCTTCACACTGAGCGACT 0‏ ‎ACTATATGGCATGGATCCGACAGGCACCAGGCAAGGGACTGGAGTGG‏ ‎GTGTCTACTATTTCTGCCAGTGGCCTGAGGACCTACTATCCTGACAGT‏ ‎GTCAAGGGAAGGTTCACAATCTCACGGGATAACGCTAAAAATTCCCTG‏ ‎TACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAAGACACCGCTGTGTACTAT‏

— 2 6 — ‎TGCGCTCGCCCACTGTCCGCACACTATGGCTTCAATTACTTTGATTATT‏ ‎GGGGGCAGGGTACCCTGGTGACAGTCTCCAGC‏ ‏سياق حمض أميني ‎VH‏ مؤنسن 01382 (سياق برقم تعريف: 7): انظر الشكل 1أ تم استخدام سياقات النيوكليوتيد المستمثلة التالية لإنتاج السلاسل الخفيفة من الجسم المضاد ‎Gus)‏ تزود سياقات الأحماض الأمينية الخاصة بها في الشكل ‎Hel‏ ‎N13B2-h3‏ (سياق برقم تعريف: 14): ‎GAGATCGTCATGACGCAGTCCCCCGCAACGCTCTCCGTCTCCCCGGG‏ ‎GGAACGCGCGACCCTGTCGTGCAGGACCTCCGAGGACATCTACCAAG‏ ‎GCCTCGCGTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCGCGGCTGTT‏ ‎GATCTACTCCGCGAACACCTTGCACATCGGCATCCCGGCGCGCTTCTC 0‏ ‎GGGGTCAGGGAGCGGCACCGAGTTCACCCTGACCATCTCGTCGCTCC‏ ‎AGAGCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTACTACGACTACC‏ ‎CCCTGGCGTTCGGGGGCGGGACCAAGGTGGAGATCAAG‏ ‎3k) N13B2hVL3‏ برقم تعريف: 15): ‎GACATTCAGATGACCCAGTCCCCCTCGAGCCTGAGTGCGAGTGTGGG 15‏ ‎CGACCGCGTGACGATCACCTGCCGGACGTCCGAGGATATCTACCAGG‏ ‎GCCTCGCCTGGTACCAGCAGAAGCCGGGCAAGGCCCCCAAACTGCTG‏ ‎GTCTACAGCGCGAACACCCTCCACATCGGCGTCCCCAGCCGGTTCAG‏ ‎CGGCTCCGGCTCGGGAACGGACTACACCCTCACGATCTCGTCCCTGC‏ ‎AGCCGGAAGACTTCGCCACCTACTTCTGCCAGCAGTATTACGACTACC 20‏ ‎CGCTGGCGTTCGGTGGCGGCACCAAGGTCGAGATCAAG‏ ‎N13B2hVLA‏ (سياق برقم تعريف: 16):

GACATTCAGATGACCCAGTCCCCCTCGAGCCTGAGTGCGAGTGTGGG

CGACCGCGTGACGATCACCTGCCGGACGTCCGAGGATATCTACCAGG

GCCTCGCCTGGTACCAGCAGAAGCCGGGCAAGGCCCCCAAACTGCTG

CTCTACAGCGCGAACACCCTCCACATCGGCGTCCCCAGCCGGTTCAG

CGGCTCCGGCTCGGGAACGGACTACACCCTCACGATCTCGTCCCTGC 5

AGCCGGAAGACTTCGCCACCTACTTCTGCCAGCAGTATTACGACTACC

CGCTGGCGTTCGGTGGCGGCACCAAGGTCGAGATCAAG

:)17 ‏(سياق برقم تعريف:‎ 813825

GACATTCAGATGACCCAGTCCCCCTCGAGCCTGAGTGCGAGTGTGGG

CGACCGCGTGACGATCACCTGCCGGACGTCCGAGGATATCTACCAGG 0

GCCTCGCCTGGTACCAGCAGAAGCCGGGCAAGGCCCCCAAACTGCTG

GTCTACAGCGCGAACACCCTCCACATCGGCGTCCCCAGCCGGTTCAG

CGGCTCCGGCTCGGGAACGGACTACACCCTCACGATCTCGTCCCTGC

AGCCGGAAGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTATTACGACTACC

CGCTGGCGTTCGGTGGCGGCACCAAGGTCGAGATCAAG 5 :)18 ‏(سياق برقم تعريف:‎ 6

GACATTCAGATGACCCAGTCCCCCTCGAGCCTGAGTGCGAGTGTGGG

CGACCGCGTGACGATCACCTGCCGGACGTCCGAGGATATCTACCAGG

GCCTCGCCTGGTACCAGCAGAAGCCGGGCAAGGCCCCCAAACTGCTG

CTCTACAGCGCGAACACCCTCCACATCGGCGTCCCCAGCCGGTTCAG 0

CGGCTCCGGCTCGGGAACGGACTACACCCTCACGATCTCGTCCCTGC

AGCCGGAAGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTATTACGACTACC

CGCTGGCGTTCGGTGGCGGCACCAAGGTCGAGATCAAG

تم الحصول على كل سياق ‎VL‏ عن طريق التصنيع الجيني؛ وأدخل في ناقل تنسيل ‎(PUCST)‏ بواسطة الأطراف 5" و 173 ‎BsiWI‏ وإضافة سياق ‎(GCCACC) Kozak‏ قبل ‎ATG‏ وكناقل تعبيري؛ استخدم بلازميد تعبيري من ‎PFUSECLIg—hK‏ (مزود من شركة انفيفوجين 007 »)) يحتوي على النطاق الثابت ‎Clkappa‏ ل 961 البشري.

وتم ‎aad‏ كل بلازميد تنسيل ‎(VL-pUCS57-Genscript)‏ بواسطة الانزيم الحصري 851/7 لاستخلاص وليجة ‎VL‏ (طولها 400 زوج قاعدة). وتم ربط الوليجة المنقاة في البلازميد التعبيري ‎pFUseCLIg-hk‏ وشكلت في صورة خطية بواسطة الهضم ب ‎BSIWI‏ ونزعت ‎ie‏ ‏مجموعة الفوسفات. وتم تضخيم النسائل الإيجابية؛ التي أدخلت فيها شدفات ‎VL‏ في الاتجاه الصحيح قبل النطاقات الثابتة البشرية وضخمت ونقيت بواسطة بلازميد خال من الذيفان الداخلي

0 من نوع ‎Midiprep‏ (مزود من شركة ماكيري ناجيل ‎(Macherey-Nagel‏ لإجراء خطوة الخمج التحويلي. وتم تنسيل السلسلة الثقيلة بكيفية مشابهة بحيث يتكون النطاق الثابت من سياق برقم التعريف: 26. المثال 2. إنتاج سلاسل خفيفة مؤنسنة

بالنسبة للأجسام المضادة ل 60127 المؤنسنة التي تم اختبارهاء تم إجراء خمج تحوبلي

5 وانتقاء للنسائل الثابتة وفقًا للطرق التقليدية. وتم تحضير واختبار ثلاث مواد طافية لكل جسم مضاد يقابل نسبة مختلفة من الخمج التحوبلي للسلسلة الثقيلة ‎(HO)‏ والسلاسل الخفيفة ‎:(LC)‏ 1:2« 1 و 2:1 10: ©-ا. وتم تدوين العيارات التي حصل عليها في الشكل 2؛ ‎Cua‏ حصل عليها بعد الإنتاج في خلايا 0110 التي زرعت بمعدل 300000 خلية/مل؛ بدون استخدام مضادات حيوية؛ وفقاً للطرق التقليدية: تم فحص العيار بواسطة ‎ELISA‏ على 106 مثبت يعمل

0 ضد مولدات مضادة بشرية ‎(FC)‏ من الجسم المضاد المناظر وتم إجراء كشف باستخدام ‎MAD‏ ‏فأري من نوع ‎kappa‏ يعمل ضد مولدات مضادة بشرية وكذلك أجسام مضادة مأخوذة من حمار تعمل ضد مولدات مضادة فأرية موسومة ب ‎peroxidase‏ وكشف عنها عن طريق قياس اللون عند 450 نانومتر باستخدام ركيزة ‎TMB‏

وتم اختبار إنتاج 111382-13 و ‎Lad N13B2-hVLG‏ في تجارب خمج تحويلي عابر. وقبل الخمج التحوبلي بيوم واحد؛ زرعت ‎Jae: COS WIA‏ 100000 خلية/عين في صفيحة ‎P12‏ مزودة بوسط مكتمل ‎DMEM SVF)‏ 710 (مزود من هايكلون ‎PS + (Hyclone‏ ‎Glu + 1‏ £1( وحضنت عند 37"م؛ ويوجود 002 بنسبة 75. ‎Ag‏ يوم الخمج التحويلي؛ تم استخدام خلايا ‎COS‏ بنسبة التقاء من 50 إلى 790. وغسلت باستخدام ‎PBS‏ وحفظت في 500 ميكرولتر من الوسط المكتمل. وتم خلط 0.6 ميكروغرام من الشكل المغاير ‎VH‏ مع 0.4 ميكروغرام من الشكل المغاير ‎VL‏ في 200 ميكرولتر من وسط 0011/51/4 وأضيف 1 ميكرولتر من ‎Plus Reagent‏ (مزود من شركة انفتروجين ‎(Invitrogen‏ (تم الحضن لمدة 15 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة). وتمت إضافة 3.5 ميكرولتر من ‎lipofectamine LTX‏ (مزود من شركة

0 انفتروجين) + 100 ميكرولتر في الخليط وحُضن لمدة 25 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة. وتم ترسيب الخليط بالكامل على شكل قطرات على ‎COS WA‏ وحضنت لمدة 48 ساعة عند 2°37( ويوجود 002 بنسبة 75. ويعد 48 ساعة؛ جمعت المواد الطافية وفرزت بالطرد المركزي (بسرعة 0 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق عند 4"م). وتم قياس كمية المواد الطافية باستخدام ‎.ELISA n°TH-MO-43‏ وتم إجراء معايرة النشاط باستخدام ‎[ELISA TH-MO-44‏

5 المثال 3. الارتباط مع 00127- اختبار ‎ELISA‏

بالنسبة لمعايرة ‎ELISA‏ الشطيرية؛ تم طلي جسم مضاد من 196 مأخوذ من حمار يعمل ضد مولدات مضادة بشرية (متخصص ب ‎(FC‏ بمقدار بلغ 1.2 ميكروغرام/مل على صفيحة 96 وأضيفت الأجسام المضادة المنقاة لقياس التركيز في إطار المدى القياسي. وبعد الحضن والغسل؛ تم إضافة جسم مضاد من سلسلة خفيفة فأرية تعمل ضد مولدات مضادة بشرية؛ متخصصة ب

‎kappa 0‏ (مزود من شركة إيفيميون ‎(Effimune‏ النسيلة ‎(NaMT76-5F3‏ وجسم مضاد مأخوذ من ‎les‏ يعمل ضد مولدات مضادة فأرية موسوم ب ‎Peroxidase‏ (مزود من شركة جاكسون ايميونو ربسيرش» المرجع 715-036-151) وكشف عنها بواسطة الطرق التقليدية. ولمعايرة النشاط باستخدام ‎(ELISA‏ تم تثبيت 100127 مأشوب (مزود من شركة سينو بيولوجيكالز ‎«Sino Biologicals‏ بكين؛ الصين؛ المرجع ‎(10975-HO8H‏ على البلاستيك

‏5 بققدار بلغ 1 ميكروغرام/مل وأضيفت محاليل مخففة من الجسم المضاد الذي يعمل ضد 00127

— 6 6 — لقياس الارتباط. وبعد الحضن والغسل؛ تم إضافة جسم مضاد من سلسلة خفيفة فأرية تعمل ضد مولدات مضادة بشرية (متخصص 2 ‎(kappa‏ وجسم مضاد مأخوذ من حمار يعمل ‎Ain‏ مولدات مضادة فأرية موسوم ب ‎peroxidase‏ وكشف عنها بواسطة قياس اللون عند 450 نانومتر باستخدام ركيزة ‎TMB‏ بواسطة الطرق التقليدية. الإشارة القصوى): ‎ED50‏ ‏(نانوغرام/مل) ‏الجدول 1. . يبين قيم 5050 (بوحدة نانوغرام/مل) لارتباط الأجسام المضادة مع 00127 وتمت دراسة ثبات الأجسام المضادة عن طريق حضن الأجسام المضادة لمدة 7 14 أو 0 يوماً عند 4*م» 25 "م و 42"م. وظل ارتباط الأجسام المضادة مع 60127 ممتازاً حتى بعد 0 30 يوماً من الحضن. وتم تدوين قيم 5050 المحددة بواسطة ‎ELISA‏ بعد 30 يوماً من الحضن في الجدول 2.

‎N13B2-hVL6 7‏ عند 4ثم |55.31 ‎N13B2-hVL6 7‏ عند 25 |47.83 ‎N13B2-hVL6 7‏ عند 2°42 ]56.16 ‎N13B2-hVLG 4‏ عند ثم ]62.75 الجدول 2. يبين ‎af‏ 5050 (بوحدة ‎N13B2-hVL6 d14‏ عند 1 52.58 نانوغرام/مل) لارتباط الأجسام المضادة °25 . ’ مع 010127 بعد 30 يوما من الحضن ‎N13B2-hVL6 d14‏ عند عند درجة الحرارة المبينة. 40.62 ‎S42‏ ‏10 المثال 4. الارتباط مع 00127 - ‎N13B2-hVL6 d30‏ عند 4م |46.98 طريقة ‎Blitz‏ ‎N13B2-hVL6 d30‏ عند تم إجراء هذه الطريقة باستخدام ‎Blitz‏ ‏40.19 ‏5م (فورتي يبو ‎C22-2 «Forté Bio‏ ‎.(No 61010-1‏ ‎N13B2-hVL6 d30‏ عند 58.69 2م 15 تم تثبيت 00127" مأشوب (مزود من شركة سينو بيولوجيكالز؛ بكين؛ الصين؛ المرجع 10975-110811)/بروتين مأشوب (مزود من شركة سينو بيولوجيكالز برقم كتالوج: ‎(11612-HOSH‏ بتركيز بلغ 1 ميكروغرام/مل بواسطة شدفة © في مستشعر حيوي من ‎9G‏ ‏© يعمل ضد مولدات مضادة بشرية (8110)(فورتي بيو 18-5063) لمدة 30 ثانية. وبعد ذلك 0 أضيفت أجسام مضادة تعمل ضد 60127 بتركيز بلغ 20 ميكروغرام/مل (تركيز الإشباع) لفترة ارتباط بلغت 120 ثانية؛ ثم فترة تفكك للجسم المضاد الذي يعمل ضد ‎CD127‏ في محلول منظم لمعايرة الحركيات لمدة 120 ثانية. وتم تحليل البيانات باستخدام برنامج 1.2 ‎Blitz pro‏ الذي قام

— 6 8 — بحساب ثابت الارتباط ‎(ka)‏ وثابت التفكك ‎(kd)‏ وحدد ثابت الألفة ‎(kd /ka) KD‏ والنتائج مدونة في الجدول 3. a] mess] apps wef emf GE weer 9-10 x 3.51 3-10 x 4.47 6101.27 0-0 ‏ا‎ ‎ae ‎9-10 x 2.71 3-10 x 2.81 610x1.04} hg

Nex 9-10 x 2.63 | 3-10 x 2.66 6101.01] ‏لوم‎ ‏ا‎ ‎wer ‎9-10 x 2.53 3-10 x 2.66 610x1.05f ws ‏على بروتين‎ CD127 ‏لأجسام مضادة تعمل ضد‎ Blitz ‏الجدول 3. | تحليل الألفة بواسطة‎ ‏مأشوب 7 بشري‎ المثال 5. تتبيط فسفرة ‎STATS‏ ‏لاختبار تثبيط ‎ILTR‏ في معايرة وظيفية؛ حضن جسم مضاد مع ‎PBMC‏ بشرية لمدة 30 دقيقة عند 37"م؛ قبل التحفيز ب ‎ILT‏ (مزود من شركة ايه بي دي سيروتيك ‎«AbD Serotec‏ المرجع 0110046) بتركيز بلغ 0.1 نانوغرام/مل ‎sad‏ 15 دقيقة عند 37"م. وأوقف التفاعل عند 4م ‎Judy‏ مزيج التفاعل باستخدام محلول منظم ‎Perm Wash‏ قبل التثبيت باستخدام طقم ‎Cytofix/Cytoperm 0‏ (مزود من شركة بي دي بيوسينس ‎(BD Bioscience‏ المرجع

— 9 6 — ‎sad (554722‏ 15 دقيقة عند 4"م. وغسلت ‎WAN‏ وصبغت باستخدام جسم مضاد ل ‎CD3‏ ‏موسوم 2 ‎FITC‏ (مزود من شركة بي دي بيوسينس؛ المرجع 557694( لمدة 30 ‎dada‏ عند 4م . ثم جعلت الخلايا قابلة للنفاذ في محلول منظم للحضن ‎Perm‏ من نوع !اا (مزود من شركة بي دي بيوسينس؛ المرجع 558050) لمدة 30 دقيقة عند 4”م. وبعد الغسل ب ‎PBS‏ يحتوي على ‎BSA‏ ‏5 بنسبة 71 و ‎Azide‏ بنسبة 70.1 صبغت ‎WAY‏ باستخدام جسم مضاد ل 051815 موسوم ب 8168-7 (مزود من شركة بي دي بيوسينس؛ المرجع 612599( لمدة 30 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة. وحللت العينات على مقياس الفلورة الخلوية ‎.BD Cantoll‏ وقد عمل ‎hPBMC~‏ ‎CD3+‏ مع 7ا على حث فسفرة 051815 بينماء بدون ‎ALT‏ لم يتم الحصول على فسفرة. وتم تدوين النتائج في الشكل 4 والجدول أدناه؛. حيث يعرض ‎(EDS0‏ أي تركيز الجسم المضاد المبين 0 للوصول إلى 50 من الإشارة في هذه المعايرة. ‎os‏ ‎va‏ ‎(eles)‏ ‎N13B2-‏ ‏21.5 ‎h3‏ ‎N13B2-‏ ‏27.2 ‎hVL3‏ ‎N13B2-‏ ‏16.1 ‎hVL4‏ ‎N13B2-‏ ‏27.3 ‎hVL5‏

— 0 7 — ‎N13B2-‏ ‏16.8 ‎hVL6‏ ‏الجدول 4. تثبيط فسفرة ‎STATS‏ بواسطة أجسام مضادة تعمل ضد ‎CD127‏ ‏أكدت هذه التجرية أن تعديل الخط ‎SEY)‏ وتعديل الشقات البنيوية بواسطة الحمض الأمينى المؤنسن لم يغير النشاط البيولوجي للجسم المضاد ل 00127. وجميع الأشكال المغايرة التي تم اختبارها ‎N13B2- «(N13B2-hVL5 (N13B2-hVL4 (N13B2-hVL3 (N13B2-h3)‏ ‎(VLE 5‏ يمكن أن تثبط فسفرة ‎Stat5‏ بعد التحفيز ب ‎IL7‏ على ‎(hPBMC‏ مثل الدُفعات المرجعية المنتجة مسبقًا من 801382. ومع التركيز على ‎N13B2-hVL6‏ (الأكثر أنسنة والأكثر استمثالاً)»؛ لوحظ أنه كان قادرًا على الحفاظ على نشاطه البيولوجي في تثبيط فسفرة ‎Stats‏ بالقدر نفسه مقارنة بالمرجع ‎N13B2-3‏ علاوة على ذلك؛ كان هذا الشكل المغاير ثابتاً للغاية بعد 14 ‎lag‏ من الحضن عند 2°42 أو 2°25 أو 4"م؛ ‎aly‏ يحفز تشكل التكدسات؛ وحافظ على نشاطه 0 الارتباطي. ‎Jul‏ 6. التأثير على خلايا 1 الذاكرة نموذج فرط الحساسية من النوع المتأخر المستحث ب توبركولين تم تمنيع البابون داخل الأدمة مرتين باستخدام لقاح عصية كالميت غيران ‎bacillus Calmette—‏ ‎Guerin‏ )0.1 مل؛ 8-2 ‎x‏ 510 وحدة تشكيل مستعمرة ‎(CFU)‏ مزود من شركة سانوفي باستور ام اس دي ‎«Sanofi Pasteur MSD‏ ليون؛ فرنسا) في المنطقة العلوية من الساق؛ قبل 4 أسابيع وأسبوعين من اختبار الجلد لتحديد وجود فرط الحساسية من النوع المتأخر (0111). وأجريت التفاعلات داخل الأدمة ‎DR)‏ { بحشن 2000 أو 000 1 وحدة دولية من مشتق البروتين المنقى تويركولين داخل الأدمة ‎(PPD)‏ مزود من شركة سيمبيوتيكس كوربوريشن ‎Symbiotics‏ ‎«Corporation‏ سان دييغوء كاليفورنيا). وتم استخدام محلول ملحي (0.1 مل) كضابط سلبي. وتم قياس الاستجابات الجلدية في مواقع الحقن باستخدام مريع فرجار بواسطة مراقبين اثنين على الأقل واعتبرت إيجابية عندما كان القطر> 4 ملم. وتم إجراء ‎IDR‏ ثان بعد فترة الغسل لمدة ثلاثة أسابيع وتلقت الحيوانات حقنة واحدة في الوريد عيارها 10 ملغم/كغم من ‎=n) NI3B2‏ 7) أو

10 ملغم/كغم (/9156/ 889288 32257 33874( ‎=n)‏ 4) من ‎N13B2‏ مؤنسن أو سواغ بحجم مماثل ‎=n)‏ 4). وأجري ‎IDR‏ إضافي كل شهر بعد الحقن. ويعد فترة الغسل؛ تم تمنيع بعض قرود البابون ‎(All)‏ سبق علاجها ب ‎(NI3B2‏ مرة أخرى داخل الأدمة مرتين باستخدام يتبعه ‎IDR‏ جديد. وتم تسجيل متوسط القراءة ومثل لكل نقطة زمنية. ولمقارنة العديد من الظروف التجريبية؛ تم قياس الاستجابات المتمثلة بالاحمرار الجلدي كمساحة تحت المنحنى ‎(AUC)‏ باستخدام برنامج ‎Graph Pad Prism‏ للحساب (انظر الشكلان 5أ و ب). ‎Elispot‏ ‏تم تتبع تواتر خلايا ‎T‏ المتخصصة بمولد المضاد باستخدام معايرة ‎IFN-g ELISPOT‏ (طقم ‎IFN—-g ELISPOT‏ من حيوان رئيس غير بشري؛ مزود من شركة آر آند دي سيستمز ‎(R&D Systems 0‏ مينابولس؛ مينيسوتا) على ‎PBMC‏ معزولة حديثاً معاد تحفيزها بتويركولين ‎Ga‏ لتعليمات الشركة الصانعة. باختصار؛ تمت إضافة جسم مضاد التقاطي (مزود من شركة آر آند دي سيستمز؛ رقم الكتالوج 581961) في كل عين لصفائح ترشيح من نوع ‎Elispot MultiScreen® HTS‏ (مزودة من شركة ميرك ميليبور ‎(Merck Millipore‏ وحضن لليلة واحدة عند 4"م. ويعد ثلاث 5 عمليات ‎(Jue‏ تمت إضافة محلول منظم ساد وحضنت الصفيحة لمدة ساعتين في درجة الحرارة المحيطة. وتم استخراج ‎PBMC‏ الخاص بالبابون حديثاً من دم البابون بواسطة الفرز بالطرد المركزي المتدرج ‎Ficoll‏ (شركة جي إي هيلثكير لايف سينس ‎GE Healthcare Life‏ 6 باريسء فرنسا). وتم بعد ذلك انحلال خلايا الدم الحمراء وغسلت ‎LOAN‏ قبل إعادة التكوين بتركيز مناسب في وسط الزراعة (وسط ‎TexMacs‏ مزود ب ‎penicillin—streptomycin‏ ‏0 (من شركة جيبكو 60500)) مع أو بدون مشتق البروتين المنقى توبركولين. وحضنت الصفيحة عند 2°37 ويوجود 002 نسبته 75 خلال 24-18 ساعة. ‎dag‏ ثلاث عمليات غسل باستخدام محلول غسل منظم؛ تمت ‎Alia)‏ جسم مضاد كشفي (مزود من شركة آر آند دي سيستمز؛ رقم الكتالوج 51961) وحضن عند 4"م خلال 24 ساعة. وتمت إضافة ‎Streptavidin—AP‏ ‏(مزود من شركة آر آند دي سيستمز؛ رقم الكتالوج ‎(SELOO2‏ بعد ثلاث عمليات غسل وحضن 5 لمدة ساعتين عند درجة الحرارة المحيطة. وأجربت 3 عمليات غسل. وتمت إضافة ‎BCIP/NBT‏

— 2 7 — (مزود من شركة آر آند دي سيستمزء رقم الكتالوج ‎(SELOO2‏ ووضع في الظلام خلال 30 دقيقة. واستلزم إجراء عدة عمليات غسل باستخدام محلول غسل منظم ومرة واحدة باستخدام ماء منزوع الأيونات (انظر الشكل 5ج). الحيوانات تم الحصول على قرود البابون (من نوع الرياح الزيتوني ‎anubis‏ 10م8©؛ تتراوح أوزانها بين 14-7 كغم) من المركز الوطني للبحث العلمي مركز البحث 'مركز الرئيسيات" (روسيت؛ فرنسا). وتم إيواء الحيوانات في منشأة الحيوانات الكبيرة في وحدة ‎INSERM‏ (المعهد الوطني الفرنسي للأبحاث الطبية والصحية) رقم 1064. وتمت الموافقة على الدراسات الحيوانية من قبل لجنة الأخلاقيات الوطنية الفرنسية. ‎zal 0‏ في تجرية أولى»؛ تم إجراء تفاعل داخل الأدمة ‎(IDR)‏ أول باستخدام تويركولين في قرود بابون ملقحة ب ‎BCG‏ لم تتلق العلاج في ذلك الوقت (اليوم -30). وبعد فترة غسل بلغت شهر واحد» تم إجراء ‎IDR‏ ثان بعد 4 ساعات وكل شهر بعد حقن 10 ملغم/كغم من 11382 داخل الوريد (أعمدة بيضاء). وتم إجراء تفاعل ‎IDR‏ أخير بعد تلقيح جديد باستخدام ‎BCG‏ (بعد حقن 5 الجسم المضاد ب 14 شهراً). وتلقت الحيوانات الضابطة (أعمدة سوداء) حجم مماثل من السواغ داخل الوربد واختبرت بنفس البروتوكول. وأظهرت النتائج أن الجسم المضاد الخيمري ضد ‎IL7TRa‏ ‏حث حماية طويلة الأمد بشكل كبير (تصل إلى 14 شهرًا) بعد إعطائه مرة واحدة. واستعيدت الاستجابة فقط بعد تلقيح جديد. وفي تجرية ‎cal‏ تم إجراء تفاعل داخل الأدمة ‎(IDR)‏ أول باستخدام تويركولين في قرود 0 بابون ملقحة ب ‎BCG‏ (أعمدة مخططة - مثلاً 10851 ل 9156/8/). وبعد فترة غسل بلغت شهر واحد ‘ تم إجراء ‎IDR‏ ثان بعد 4 ساعات وكل شهر بعد حفن 10 ملغم/كغم من ‎N13B2‏ مؤنسن داخل الوريد (أعمدة مظللة بالكامل - ‎Mic‏ 1082-6 ل /9156//). وتم إجراء تفاعل ‎IDR‏ أخير بعد تلقيح جديد باستخدام ‎BCG‏ وتويركولين (أعمدة منقطة - مثلاً 1057 ل 1/9156/8). وتلقت الحيوانات الضابطة (أعمدة سوداء) ‎ana‏ مماثل من السواغ داخل الوربد واختبرت بنفس

البروتوكول. وأظهرت النتائج أن ‎N13B2‏ المؤنسن حث أيضاً حماية طويلة الأمد بعد إعطائه مرة واحدة في 3 قرود بابون من أصل أربعة قرود تم تقييمها. وكان الحيوان "33874" مستجيباً في البداية بعد حقن الجسم المضاد مباشرة ولكن الاستجابة استعيدت تلقائياً بعد شهر واحد. وأعيد تحفيز ‎PBMC‏ المستخلصة من الدم خارج الجسم ‎all‏ باستخدام تويركولين. وأجري اختبار ‎IFNy elispot‏ أول باستخدام أو بدون استخدام تويركولين على قرود بابون ملقحة ب 6 (عمدة مخططة). وأجري اختبار ‎IFNy Elispot‏ ثانٍ بعد 4 أيام من الحقن باستخدام 10 ملغم/كغم من 11382 مؤنسن (أعمدة ممتلئة). وبعد ذلك تم إجراء ‎ELISPOT‏ جديد كل شهر عند كل ‎IDR‏ جديد باستخدام توبركولين في الجسم الحي. وتم إجراء ‎IFNy elispot‏ أخير بعد تلقيح جديد ب ‎BCG‏ (أعمدة منقطة). وأظهرت النتائج أن إعطاء 811382 المؤنسن حث ‎Cada‏ ‏0 خلايا 1 الذاكرة المتخصصة بمولد المضاد في الحيوانات المستجيبة لفتزة طويلة. ‎aly‏ يظهر البابون "7 انخفاضاً ملحوظاً في خلايا ‎T‏ الذاكرة المتخصصة بتوبركولين إلى جانب عدم إظهار حماية طويلة الأمد في نموذج ‎DTH‏ وبعد التلقيح الجديد ب ‎(BCG‏ أظهرت الحيوانات المستجيبة على المدى الطويل زيادة في تواتر خلايا ‎T‏ الذاكرة المتخصصة بمولد المضاد؛ تعود إلى المستوى القاعدي (قبل حقن الجسم المضاد أحادي النسيلة) وهذا مرتبط باستعادة استجابة ‎DTH‏ في الجسم 5 الحي. ‎Yaad‏ أظهرت هذه النتائج أن الحماية طويلة الأمد المحفزة بواسطة 811382 المؤنسن مرتبطة بحذف خلايا 1 الذاكرة المتخصصة بمولد المضاد والتي تفسر التأثير طويل المدى للعقار. المثال 7. التعبير عن 7-ااء 60127 و 1510 في مرضى مصابين بمرض التهاب الأمعاء ‎(IBD)‏ ‏تم تحليل بيانات التعبير عن ال ‎MRNA‏ الأولية التي تم الحصول عليها كما هو مفصل 0 في المرجع 2013 ‎Planell et al.

Gut‏ بالطريقة الموضحة بالتفصيل في شرح الشكل 6. المتال 8. مسار تأشير ‎PBMC‏ بشرية محفزة بأجسام مضادة ‎aca‏ 60127 و ‎IL7‏ ‏تمت دراسة مسارات تأشير 7اا من حلالات ‎PBMC‏ البشرية التي حضنت لمدة 30 دقيقة عند 37"م مع 10 ميكروغرام/مل من أجسام مضادة ل 00127 بشري قابل للذويان وحفزت ب 17 (مزود من ايه بي دي سيروتيك»؛ المرجع 0110046) بتركيز بلغ 5 نانوغرام/مل لمدة 10

دقائق عند 37"م. وأجري تحليل لطخة ويستيرن في ظروف مختزلة باستخدام 20 ميكروغرام من بروتين من حلالات خلوية في هلامات ‎polyacrylamide‏ تركيزها 77.5 ولطخت على أغشية ‎Nitrocellulose‏ )53534 من جي إي هيلثكير ‎(GeHealthcare‏ وتم إشباع اللطخات بمزيج من ‎BSA‏ تركيزه 75 و محلول ملحي منظم ب ‎(TBS) Tris‏ وكشف عنها إما باستخدام جسم مضاد ‎Phospho-Akt (Phospho-Pl3-Kinase p85 (Phospho-Stat5 5‏ و ‎Phospho-‏ ‎ERK1/2‏ )8293 من سل سيجنالينغ تكنولوجي ‎(Cell Signalling Technology‏ بنسبة 1 في ‎BSA‏ تركيزه 185-71 (طوال الليل عند 4"م) ثم باستخدام جسم مضاد متعدد النسائل موسوم ب ‎horseradish peroxidase‏ مأخوذ من ماعز يعمل ضد مولدات مضادة من أرب (مزود من سل سيجنالينغ تكنولوجي) بنسبة 2000/1 لمدة ساعة عند درجة حرارة الغرفة؛ أو 0 باستخدام جسم مضاد ل ‎GAPDH‏ (مزود من شركة سانتاكروز ‎(Santa Cruz‏ بنسبة 1000/1 في /85 تركيزه 185-71 (طوال الليل عند 4"م) ثم باستخدام جسم مضاد متعدد النسائل موسوم ب ‎horseradish peroxidase‏ مأخوذ من ماعز يعمل ضد مولدات مضادة من فأر (مزود من شركة جاكسون ايميونو ريسيرش) بنسبة 2000/1 لمدة ساعة عند درجة حرارة الغرفة. وتم الكشف عن الأغشية بواسطة التألق الكيميائي باستخدام نظام تصوير من نوع ‎LAS-3000‏ ‏5 (مزود من شركة فوجي فيلم 0[18100). وبالتالي تمت معايرة الأجسام المضادة التي تعمل ضد 7 البشري التالية: ‎N13B2-h3‏ و ‎N13B2-hVL6‏ (كلاهما عبارة عن أجسام مضادة تعمل ضد الموقع 2/1ب؛ التي تم الكشف عنها هنا)؛ 110707-13-64 ‎pun’)‏ مضاد يعمل ضد الموقع 1» الذي تم الكشف ‎die‏ في طلب براءة الاختراع الدولي رقم 2013/0569854) و 1 ر(الذي تم الكشف ‎die‏ في براءة ‎(GSK‏ طلب براءة الاختراع الدولي رقم 0 2011/094259). المثال 9. التأثير على إطلاق سيتوكينات خلايا ‎T‏ في نسيج مصاب بمرض التهاب الأمعاء ‎(IBD)‏ ‏يمكن استخدام الخزعات المأخوذة من مرضى ‎IBD‏ كنموذج التهابي للمرض خارج الجسم الحي؛ ولقد بين هنا أنها تطلق مستويات عالية من السيتوكينات المحرضة على الالتهاب تلقائياً بعد 24 ساعة من الزراعة (ثانا: ‎IFNy‏ £130 19 بيكوغرام/مل؛ ‎(IL-6‏ 4042 + 529

بيكوغرام/مل؛ ‎IL-8‏ 25626 + 1640 بيكوغرام/مل - ‎«IFNy :CD‏ 180 + 38 بيكوغرام/مل؛ ‎(IL-6‏ 3653 + 734 بيكوغرام/مل؛ 8حااء 15540 + 2452 بيكوغرام/مل [القيم المتوسطة + الخطأً المعياري للمتوسط ‎(sem)‏ ل ‎UC‏ و ‎CD‏ على التوالي]). وتم استخدام ‎MAD‏ يعمل ضد 00127 بتركيز بلغ 10 ميكروغرام/مل في معايرة زرع العضو هذه باستخدام عينات جراحية أخذت من أغشية مخاطية قولونية ملتهبة ل 20 مريضًا مصابين بمرض التهاب الأمعاء (10 مصابين بمرض كرون و 10 مصابين بالتهاب قولون تقرحي وأجريت الزراعة عند 37"م لمدة 24 ساعة في وسط مزود ب 10 ميكروغرام/مل من ‎MAD‏ ضابط من ‎IgG‏ أو ‎MAb‏ ساد مضاد ل 1-7540 بشري (انظر تفاصيل أخذ العينات وظروف الزراعة أدناه). وتم أخذ عينات ضابطة مزدوجة من كل مريض وزرعت في نفس الظروف؛ حيث استخدم 0 ضابط من 196 بدلاً من الجسم المضاد ل ‎.CD127‏ وتم قياس تركيز السيتوكينات بواسطة ‎ELISA‏ (كما هو مفصل أدناه) في المادة الطافية للعينات المزروعة خارج الجسم الحي. وتم تثبيط إنتاج ‎IFNy‏ بواسطة عينات الخزعة المأخوذة من المصابين ب ‎UC‏ والتي زرعت خارج الجسم ‎all‏ بشكل كبير بواسطة ‎MAD‏ الذي يعمل ضد ‎LTR‏ ولوحظت نتائج مشابهة لبعض عينات الخزعة المأخوذة من المصابين ب ‎CD‏ التي تفرز مقداراً عالياً من ‎AFNY‏ ‏5 أخذ عينات من العضو وزراعته خارج الجسم الحي إذا تم استخدام نسيج مستأصل جراحياً من الغشاء المخاطي؛ تم قطع أجزاء صغيرة بحجم الخزعة باستخدام المقص. وبعد ذلك؛ تم وضع الخزعات أو الأجزاء التي بحجم الخزعة في 300 ميكرولتر من وسط ‎HLT‏ خالٍ من المصل (مزود من شركة لونزا 1-0028 كامبريدج بيو ساينس ‎«Cambridge BioScience‏ المملكة المتحدة) مزود ب ‎L-Glutamine‏ 100 وحدة/مل من ‎«penicillin 20‏ 100 ميك روغرام/مل من ‎streptomycin‏ و 50 ميك روغرام/مل من ‎.gentamycin‏ ‏وحضنت أنسجة الأغشية المخاطية المزروعة خارجاً لمدة 24 ساعة عند 37"م ويوجود ‎CO2‏ ‏تركيزه 75. وتمت إضافة الجسم المضاد المعني الذي تم اختباره ‎(N13B2)‏ أو المادة الضابطة 6 المستخدمة بتركيز بلغ 10 ميكروغرام/مل إلى الوسط في بداية وقت الحضن. وأخيراً؛ تم تجميد المادة الطافية ومادة الخزعة بشكل سريع وتخزينها عند -70"م لتحليلها في المستقبل.

— 6 7 — معايرة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم ‎(ELISA)‏ ‏تم قياس إنتاج السيتوكين في المادة الطافية للخزعة بواسطة معايرة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم ‎(ELISA)‏ وتم استخدام ‎IFN-Y‏ بشري مأشوب مزود من شركة إيميونو تولز ‎ImmunoTools‏ (برقم 31673539( فريزوبته؛ ألمانيا) ‎Gg‏ لتعليمات الشركة الصانعة. المثال 10. مقارنة أجسام مضادة تعمل ضد 117-40 بشري مرتبطة بتمييز حاتمتها تحليل مطيافية الكتلة: تشخيص الأجسام المضادة باستخدام صفيف مايكروي من الببتيد تشتمل الصفائف المايكروية للببتيد 260518111 المزودة من شركة ببتايد تكنولوجيز ‎peptide Technologies‏ على ببتيدات اصطناعية منقاة مشتقة من مولدات مضادات أو مصادر أخرى يتم تثبيتها تساهمياً ويشكل انتقائي من الناحية الكيميائية على سطح زجاجي. وبتم 0 إدخال شق رابط أليف للماء مستمثل بين السطح الزجاجي وسياق الببتيد المشتق من مولد المضاد لتفادي النتائج السلبية الخاطئة الناجمة عن الإعاقة الفراغية. ولأسباب تقنية تحتوي جميع الببتيدات على ‎glycine‏ عند الطرف ©. وتم إجراء تجارب تشخيص العينات على مكتبة ببتيدات تتألف من 2 ببتيد. وتظهر القائمة الكاملة للببتيدات أدناه: ‎Sle‏ سياق سياق برقم |السياق برقم ١السياق‏ برقم االسياق تعريف تعريف تعريف ‎HDVAYRQEKDE| 80|FIETKKFLLIGKSN| 62|ESGYAQNGDLE| 44 ٍ‏ ‎NKWT | DAEL| |‏ ‎AQNGDLEDAEL| 45]‏ اده ‎YRQEKDENKWT| 81| KKFLLIGKSNICV|‏ ‎HVNL KV pDYS| |‏ ‎KDENKWTHVNL| 82| LIGKSNICVKVGE| 64| DLEDAELDDYS| 46]‏ ‎SSTK KS FSCY‏

KWTHVNLSSTKL| 83 |SNICVKVGEKSLT| 65| AELDDYSFSCY| 47]

TLL CK SQLE !

VNLSSTKLTLLQ| 84|VKVGEKSLTCKKI| 66| DYSFSCYSQLE 48

RKL DL VNGS ٍ

STKLTLLQRKLQ| 85|EKSLTCKKIDLTTI| 67١ SCYSQLEVNGS 49

PAA Vv QHSL ٍ

TLLQRKLQPAAM| 86|TCKKIDLTTIVKPE| 68١ QLEVNGSQHSL| 50]

YEI A TCAF

RKLQPAAMYEIK| 87|IDLTTIVKPEAPFD| ‏لوم‎ NGSQHSLTCAF| 51 ٍ

VRS L EDPD ٍ

PAAMYEIKVRSIP| 88|TIVKPEAPFDLSVI| 70| HSLTCAFEDPD 52

DH 7 VNTT ٍ

YEIKVRSIPDHYF| 89|PEAPFDLSVIYRE| 71١ CAFEDPDVNTT 53

KG GA NLEF

VRSIPDHYFKGFE| 90|FDLSVIYREGAND| 72|DPDVNTTNLEFE| 54 ٍ

WSE FV ICG ٍ

PDHYFKGFWSE| 91|VIYREGANDFWT| 73|NTTNLEFEICGA| 53

WSPS FN LVE ٍ

FKGFWSEWSPS| ‏ادو‎ EGANDFVVTFNT| 74١ LEFEICGALVEV 56

YYFR SHL KCL ٍ

— 7 8 —

WSEWSPSYYFR| ‏دو‎ DFVWTFNTSHLQ| 75|ICGALVEVKCLN| 57]

TPEI KKY FRK

SPSYYFRTPEIN| ‏ابو‎ TFNTSHLQKKYV| 76|LVEVKCLNFRKL| 58

NSS KVL QE! ٍ

YFRTPEINNSSG| 95| SHLQKKYVKVLM| 77|KCLNFRKLQEIY| ‏و‎ ‎EMD HDV FE]

KKYVKVLMHDVA| 78|FRKLQEIYFIETK| ‏مه‎ ‎YRQ KF

KVLMHDVAYRQE| 79|QEIYFIETKKFLLI| ‏بده‎ ‎KDE الجدول ‎ .5‏ قائمة الببتيدات المستخدمة فى معايرات الصفائف المايكروبة للببتيد تم حضن ما مجموعه 4 عينات على شرائح صفيف مايكروي باستخدام النسق متعدد العيون ‎Multiwell‏ وبالنسبة للجسم المضاد ‎N13B2-h3VL6‏ والعينة الأخرى ‎MD707-13)‏ 1 ‏و 1811؛ تم استخدام 6 تراكيز مختلفة )10 ميك روغرام/مل؛ 2 ميك روغرام/مل؛‎ HAL ميكروغرام/مل؛ 0.1 ميكروغرام/مل؛ 0.01 ميكروغرام/مل؛ 0.001 ميكروغرام/مل). وحضنت المحاليل المخففة تسلسلياً للعينات لمدة ساعة واحدة عند 2°30 على شريحة صفيف مايكروي متعددة العيون تحتوي على 21 صفيف صغير مفرد (صفيف صغير واحد لكل محلول مخفف من العينة). وبعد حضن العينة؛ تم إضافة جسم مضاد ثانوي من ‎19G‏ يعمل ضد مولدات مضادة بشرية بتركيز يبلغ 1 ميكروغرام/مل وترك ليتفاعل لمدة ساعة واحدة. وتم إجراء حضن ضابط 0 إضافى باستخدام الجسم المضاد الثانوي فقط بشكل متواز على شريحة الصفيف المايكروي نفسها لتقييم ‎J‏ لارتباط | لإيجابي الخاطئ مع الببتيدات ‎zag.‏ الغسل والتجفيف ؛ ثم مسح الشريحة باستخدام ماسح ضوئي ليزري عالي ا لاستبانة عند 5 63 نانومتر للحصول على جانبيات شدة التفلور . وتم قياس الصور الناتجة للحصول على قيمة بكسل متوسطة لكل ببتيد. وتم قياس الصور للحصول

على ‎dad‏ بكسل متوسطة لكل ببتيد. وتم وسم جسم مضاد ثانوي من 106 يعمل ضد مولدات مضادات بشرية باستخدام ‎CYS‏ عند تركيز يبلغ 1 ميك روغرام/مل. المحاليل المنظمة والمحاليل. كان المحلول المنظم المستخدم عبارة عن محلول منظم من يحتوي على ‎Tween20‏ بنسبة 70.05 (مزود من شركة جيه بيه تي ‎(JPT‏ ومحلول 5 معايرة منظم 120 (مزود من شركة بيرس ‎SuperBlock TBS 120 (Pierce‏ رقم 37536). وتم إجراء استحواذ وتحليل باستخدام صفائف مايكروية من الببتيد (مزودة من شركة جيه بيه تي ببتايد تكنولوجيز جي إم بي اتش ‎(JPT Peptide Technologies GmbH‏ برلين؛ ألمانيا؛ الدفعة رقم 2608( حجرة حضن متعددة العيون» ماسح ضوئي من نوع ‎Axon Genepix‏ ‎(Scanner 4200/1‏ حيث مسحت الصفائف المايكروية باستخدام ماسح تفلور عالي الاستبانة. 0 وكانت إعدادات الليزر والاستبانة المطبقة مماثلة في كل القياسات التي أجريت. وحللت الصور الناتجة وقيست باستخدام برنامج تعرف على البقعة ‎GenePix‏ (مزود من شركة موليكيولار ديفايسيز ‎(Molecular Devices‏ ولكل بقعة؛ تم استخلاص متوسط شدة الإشارة (بين 0 و 5 وحدة اختيارية). ولإجراء مزيد من ‎and‏ البيانات؛ تم تحديد ما يسمى بقيم 0/062/ا. وساوي ‎MMC2‏ ‏5 القيمة المتوسطة لجميع الحالات الثلاث على الصفيف المايكروي باستثناء عندما يكون معامل التباين ‎(CV)‏ - الانحراف المعياري مقسوماً على القيمة المتوسطة - أكبر من 0.5. وفي هذه الحالة؛ يتم تحديد متوسط أقرب قيمتين ‎(MC2)‏ ب ‎MMC2‏ ‏تحليل ‎Deuterium‏ ‏باستخدام نظام ‎HDX=2‏ (مزود من شركة ووترز اس ء.ايه./إن. في. ‎Waters‏ ‎SAN. 0‏ زبليك؛ بلجيكا)؛ تم خلط 60127 بشري مأشوب و 0 أو 1 مكافئ مولي من ‎MAb‏ وتم تخفيفهما في ‎D20‏ تركيزه 799.9« ‎sodium phosphate‏ تركيزه 10 ملي مولار» ‎NaCl‏ تركيزه 100 ملي مولار؛ درجة الحموضة = 6.8 حتى بلغ محتوى 020 النهائي 790 وتركيز 60127 أو معقد من ‎MAD/CD127‏ 27.5 ميكرومولار. وتم إجراء تبادل بين ال ‎Hydrogen‏ و ال ‎deuterium‏ عند 20.0 "م لمدة 30 دقيقة. وتم إخماد التبادل بواسطة محلول

مخفف بنسبة 1:1 (حجم/حجم) من العينات مع ‎sodium phosphate‏ تركيزه 100 ملي مولارء ‎guanidine HCI‏ تركيزه 4 مولار» ‎TCEP‏ تركيزه 0.4 مولارء درجة الحموضة- 2.3؛ عند 0م مما أدى إلى درجة حموضة نهائية مقدارها 2.5. وبعد دقيقتين؛ تم تحميل العينات المخمدة على موجّه ‎HDX‏ لإجراء هضم فوري بالببسين عند 20.0 "م (عمود من نوع ‎Enzymate BEH‏ ‎(Pepsin 5‏ أبعاده 2.1 ‎fale 30 X‏ 5 ميكرومتر)؛ ثم نزع الملح منها (عمود من نوع ‎Acquity‏ ‎<BEH C18 Vanguard‏ أبعاده 2.1 ملم ‎tale 5 x‏ 1.7 ميكرومتر) وأجري فصل معكوس الطور (عمود من نوع ‎<Acquity BEH C18‏ أبعاده 1.0 ملم ‎X‏ 100 ملم؛ 1.7 ميكرومتر) باستخدام مادة يتدرج تركيزها من 740-75 من ‎formic acid‏ تركيزه 70.2 في ‎acetonitrile‏ ‏(درجة الحموضة = 2.5( لمدة 10 دقائق بمعدل تدفق بلغ 40 ميكرولتر/دقيقة عند درجة الصفر 0 المثوي. وأجري تحليل مطيافية الكتلة على مطياف كتلة من نوع ‎Waters Xevo G2-XS‏ ‎ESI-Q-TOF‏ في نمط الأيون الموجب مع تصحيح ‎lockspray‏ واستخدمت ظروف مصدر معتدلة (درجة الحرارة: 2°90( فلطية شعرية: 2.5 كيلوفولت؛ مخروط أخذ العينات: 30 فولت؛ معدل تدفق الغاز لإزالة المذيب: 800 لتر/ساعة»؛ درجة حرارة إزالة المذيب: 250"م) لتقليل التبادل العكسي للحد الأدنى مع ضمان إزالة المذيب بشكل ملائم (73). وتم تحديد الببتيد بمساعدة اتتفكك المستحث بالتصادم الذي تم تحصيله في وضع ‎(MSE‏ باستخدام 3.0.2 01-65 و 8 ا١-الاالا.‏ وتم تحديد دمج ال ‎Deuterium‏ في 3.0 ‎.DynamX‏ وتم إعداد الأشكال البنيوية باستخدام 1.8.2.3 ‎PYMOL‏ (مزود من شركة شرودينغر ال ال سي ‎«Schrodinger LLC‏ كامبريدج؛ ماساتشوستس» الولايات المتحدة الأمريكية) من ‎.PDB ID 3DI3(19)‏ وتم شراء ‎guanidine (sodium chloride 0010008516 and dibasic sodium phosphate‏ ‎«Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride (TCEP) hydrochloride 0‏ ‎sodium hydroxide‏ تركيزه 750« ‎formic acid‏ من شركة سيغما ألدريتش ‎Sigma‏ ‎Aldrich‏ (شنايلدورف»؛ ألمانيا) بأعلى نقاوة متاحة. وتم الحصول على مذيبات من الصنف المستخدم ل ‎LC-MS‏ من شركة بيوسولف كيمي ‎Chimie‏ 81050176 (ديوز» فرنسا)؛ و ‎(D 799.9) deuterium oxide‏ و ‎deuterium chloride‏ تركيزه 720 في ‎deuterium‏ ‎(D 799.96) oxide 5‏ من كامبريدج أيزوتوب لابوراتوريز ‎Cambridge Isotope‏ 5ه (أندوفر»؛ ماساتشوستس» الولايات المتحدة الأمريكية)» و 8616 ‎hydrochloric‏

تركيزه 737 من في دبليو آر انترناشونال ‎VWR International‏ (فونتوني سو بواء فرنسا) و ‎bovine cytochrome C digest‏ من تيرمو فيشر ساينتيفيك ‎Thermo Fisher Scientific‏ (جيرمرنغ؛ ألمانيا). وتم الحصول على مرشحات فائقة الطرد المركزي من نوع ‎Amicon‏ )0.5 مل؛ القيمة الحدية 10 كيلودالتون) من شركة ميرك ميليبور ‎Merck Millipore‏ (مولشيم؛ فرنسا). النتائج أدى تمييز الحاتمة بواسطة صفيف ببتيدات ‎ad‏ من ‎MADS‏ مختلفة تعمل ضد :7540 إلى تحديد نوعين من ‎MADS‏ المضادة: )1( 0105 ترتبط بمنطقة (الموقع -1) التفاعل مع -ا! 7 كما وصف مسبقاً بواسطة مجموعتين أخربين (النسيلة 1811 الموصوفة في طلب براءة الاختراع الدولي رقم 2011/094259 والنسيلة ‎HAL‏ الموصوفة في طلب براءة الاختراع الدولي

0 رقم 2011/104687( وتشمل 100707-13 )2( ‎«MAb‏ أي ‎ay N13B2-h3VL6‏ للاختراع الحالي»؛ يرتبط ‎JS‏ من الموقع-1 وحاتمة متداخلة مع النطاق المتوقع (الموقع-2ب) من الديمرة غير المتجانسة بين 7406| والوحدات الفرعية من سلسلة ‎y‏ (انظر المرجع ‎Walsh‏ ‏2).

وتم التعبير عن ‎N13B2-h3VL6‏ و 100707-13 اللذين يمتلكان ألفات عالية

5 ومشابهة (المرتبط بالموقع-2/1ب له قيمة ‎KD‏ تبلغ 2 ‎x‏ 10-10 مولار والمرتبط بالموقع-1 له ‎KD dai‏ مشابهة تبلغ 5 ‎x‏ 10-10 مولار) بشكل مأشوب باستخدام نمط إسوي ‎Fe‏ 10964 بشري (يحتوي على الطفرة المفصلية ‎S228P‏ لمنع تبادل ‎(Fab—arm‏ ومقارنتهما مع ‎ATMAD‏ مرتبط بالموقع-1 موصوف مسبقاً له ألفة مشابهة؛ النسيلة 1/11؛ الموصوف في طلب براءة الاختراع الدولي رقم 2011/094259 ‎KD)‏ يبلغ 6 ‎x‏ 10-10 مولار) والمعبر عنه بشكل مأشوب

0 باستخدام نمط إسوي ‎FC‏ 1964 بشري بصفته قيد التطوير سريرياً ‎.(NCT02293161)‏ وأكد تحليل الحاتمة الهيئية باستخدام تبادل ال ‎Hydrogen‏ وال ‎Deuterium‏ مع مطيافية الكتلة ‎(HDX-MS)‏ الملاحظات السابقة ووضح أن الجسم المضاد وفقاً للاختراع» أي ‎N13B2-‏ ‎MAD) 6‏ مرتبط بالموقع- 2/1ب) محمي من دمج ال ‎deuterium‏ في عدة ببتيدات للموقع-1 ‎Lady‏ ببتيد متداخل مع الموقع 2« بينما ال 00/05 الآخرين ‎MD707-13)‏ و

-2ع8- 1 ) يمنعان بشكل كبير دمج ال ‎deuterium‏ فقط في ببتيدات من الموقع-1 (لا تظهر البيانات). وكان الجسم المضاد وفقاً للاختراع هو الوحيد الذي يتعرف على حاتمة هيئية متمركزة في الموقع 1 من النطاق 1 و حاتمة هيئية متمركزة في الموقع 2ب ل 00127 البشري. المثال 11 مقارنة أجسام مضادة تعمل ضد 1|740 بشري من حيث قدرتها على أن تكون شادة و/أو مضادة لمسار ‎IL-7‏ ‏اختبار تلطيخ ويستيرن ‎PBMCs cual‏ بشرية معزولة حديثاً لمدة 30 دقيقة عند 2°37 مع 10 ميك روغرام/مل من ‎MADS‏ تعمل ضد ‎IL-TRQ‏ بشري» ثم زرعت بمفردها أو مع 5 نانوغرام/مل من 7-اا 0 بشري مأشوب (مزود من ايه بي دي سيروتيك) لمدة 10 دقائق عند 37"م. وبعد إيقاف التفاعلات على الثلج؛ تم تحضير الحلالات الخلوية باستخدام محلول منظم من ‎RIPA‏ (مع خليط مثبطات 6 . وفصلت البروتينات )15 ميكروغرام) في ظروف مختزلة على هلامات ‎polyacrylamide‏ تركيزها 77.5 وثبتت على أغشية ‎Nitrocellulose‏ )8394 من جي إي هيلثكير) باستخدام طرق قياسية. وغسلت اللطخات باستخدام محلول ملحي منظم ب ‎Tris‏ و ‎BSA‏ ‏5 تركيزه 75 وحضنت مع أجسام مضادة متخصصة ب ‎Phospho-PI3K (Phospho-STATS‏ ‎Phospho-ERK 4 «p55‏ في ‎BSA-TBS‏ تركيزه 71 (طوال الليل عند 4"م) ثم جسم مضاد متعدد النسائل موسوم ب ‎horseradish peroxidase‏ مأخوذ من ماعز يعمل ضد مولدات مضادة مأخوذة من أرنب (مزود من سل سيجنالينغ تكنولوجي) لمدة ساعة عند درجة حرارة الغرفة. وبدلاً من ذلك؛ ضبغت اللطخات باستخدام جسم ‎alias‏ ل ‎GAPDH‏ (مزود من شركة سانتاكروز) 0 في 858-185 تركيزه 71 (طوال الليل عند 4"م) ثم باستخدام جسم مضاد متعدد النسائل موسوم ب ‎horseradish peroxidase‏ مأخوذ من ماعز يعمل ضد مولدات مضادة فأربة (مزود من شركة جاكسون ايميونو ‎(Gh)‏ لمدة ساعة عند درجة حرارة الغرفة. وتم الكشف عن الأغشية بواسطة التألق الكيميائي باستخدام نظام تصوير من نوع 5-3000ها (مزود من شركة فوجي فيلم).

تحديد سياق ال ‎RNA‏ ‏حخضنت ‎PBMCs‏ بشرية معزولة حديثاً مع 10 ميك روغرام/مل من 11805 تعمل ضد ‎IL-TRat‏ بشري (لمدة 30 دقيقة عند 37"م)» ثم زرعت بمفردها أو مع 5 نانوغرام/مل من 7-اا بشري مأشوب (مزود من ايه بي دي سيروتيك) لمدة 3 ساعات عند 37"م. وتم إيقاف التفاعلات على الثلج وأعيد تعليق كريات الخلايا في محلول منظم من ‎RLT‏ (مزود من شركة كياجين ‎(Qiagen‏ يحتوي على ‎B mercaptoethanol‏ تركيزه 71 في ماء خال من ال ‎RNase/DNase‏ وخزنت عند -80"م. وتم استخلاص ال ‎RNA‏ باستخدام طقم استخلاص ‎RNA‏ صغير وفقاً لتعليمات الجهة الصانعة (مزود من شركة كياجين). وتم تقدير نوعية وكمية ال ‎RNA‏ باستخدام القياس الطيفي بالأشعة تحت الحمراء (باستخدام جهاز من نوع ‎(Nanodrop‏ ‏0 ومحلل بيولوجي من نوع ‎Agilent‏ (طقم ‎(Agilent RNA 6000 Pico‏ وحضرت مكتبات ‎Smart-Seq2‏ بواسطة برود تكنولوجي لابس ‎Broad Technology Labs‏ وحدد السياق بواسطة برود جينوميكس بلاتفورم ‎Broad Genomics Platform‏ وفقاً لبروتوكول 2 مع بعض التعديلات. وباختصار؛ نقي ال ‎JASHRNA‏ باستخدام خرزات ‎RNA-‏ ‎«SPR‏ ونسخ ‎polyA+ mRNA‏ عكسياً لإنتاج ال ‎«cDNA‏ وغُرض ‎CDNA‏ المضخم للتشدف 5 المعتمد على الينقول (الترانسبوزون) الذي استخدم الفهرسة المزدوجة لتحديد شفرة تعرف لكل شدفة من كل نسخة محولة باستخدام توليفة شفرات تعرف خاصة بكل عينة. وأجري تحديد السياق في صورة مزدوجة الطرف 2 ‎x‏ 25 زوج قاعدة باستخدام 8 دورات إضافية لكل فهرس. وفصلت البيانات بواسطة شفرة التعرف وتمت مواءمتها باستخدام برنامج ‎Tophat‏ نسخة رقم 2.0.10 بإعدادات افتراضية. وحددت كمية النسخ بواسطة أنابيب التجزئة الحسابية ل برود تكنولوجي لابس 0 باستخدام برنامج ‎Cuffquant‏ نسخة رقم 2.2.1. وياختصار؛ تمت معالجة البيانات عن طريق برنامج 6010800000 إذا تمت مواءمة 750 من القراءات» و إذا تمت مواءمة 100000 زوج على الأقل لكل عينة. واستخدمت المعايرة الإعدادات الافتراضية؛ التي تشمل معايرة 'هندسية" ومعلومات عن مستوى التعبير في صورة قيم ‎FPKM‏ محولة إلى لوغاريتم بالأساس 2 (عدد الشدفات لكل كيلوقاعدة من النسخة لكل مليون شدفة مخططة) للتحليلات اللاحقة. وللتعرف على الجينات 5 التفاضلية؛ أجريت نمذجة خطية مع تقدير العلاقة بين القيمة المتوسطة والتباين (توجّه ‎(imma‏

بواسطة إجراء بيز الإحصائي التجريبي باستخدام حزمة 101708 في جينات مقاومة تظهر ‎dad‏ م معدلة وفقاً ل بنجاميني وهوشبيرغ > 75 وتغير مضاعف ‎(FC)‏ > 1.5 اعتبرت معبر ‎lie‏ ‏تفاضلياً. ولتمثيل التعبير الجيني؛ أجري تحليل العنصر الرئيسي ‎(PCA)‏ والتجميع في 73.3.2 ‎R‏ ‏باستخدام حزمتي ‎«pheatmap 4 ade4/adegraphics‏ على التوالي. وتم تقييم الدلالة البيولوجية للجينات المختارة باستخدام حزمة ‎.clusterProfiler‏ وتم اختيار فئات الأونتولوجيا

الجينية ‎(GO)‏ الغنية بمعدل اكتشاف خاطئ ‎(FDR)‏ > 75 والمشتملة على 5 جينات ممثلة على الأقل. ويمكن الوصول إلى بيانات سياق ‎RNA‏ برقم حيازة ‎GSE‏ وققاً ل ‎.GEO‏ ‏النتائج ‏مسارات تأشير ‎PIK3 (STATS‏ و ‎ERK‏

تم لاحقاً مقارنة ‎MADS‏ التي تعمل ضد 11-780 بشري ‎(N13B2-h3VL6)‏ ‎(MD707-13‏ 1811 و ‎(HAL‏ من حيث قدرتها على تنشيط أو تثبيط مسارات تأشير ‎PI3K (STATS‏ و ‎ERK‏ المرتبطة مسبقاً بتأشير 74-اا (انظر الشكلين 9 و 10). وكما وضح سابقاً (انظر على سبيل المثال الشكل 7)؛ يقوم 7-اا بحث فسفرة ‎STATS‏ الفعالة على 5 بشرية وتكون كل ال 07805 التي تم اختبارها مثبطات فعالة لفسفرة ‎STATS‏ هذه

5 (انظر الشكل 7). ‎og‏ النقيض من ذلك؛ وكما هو موضّح في الشكلين 9 و 10؛ وجد المخترعون أنه بينما يقوم ‎IL-7‏ بحث فسفرة >ا013 متغيرة ولا يحث فسفرة ‎(ERK‏ فإن الأجسام المضادة وفقاً للتقنية السابقة (أي 100707-13 1811 و ‎(HAL‏ تحث بشكل كبير سفرة ‎ERK‏ ‏وبدرجة أقل إشارة ‎PI3K‏ حتى في غياب ‎IL-7‏ خارجي بعكس الجسم المضاد وفقاً للاختراع. وتبين هذه النتائج أن الأجسام المضادة ل ‎IL-TRat‏ البشري وفقاً للتقنية السابقة لها خواص شادة جزئية

0 وبالتالي تعتبر 10005 ذات خواص شادة/مضادة مزدوجة ل ‎IL=TR‏ البشري. وعلى النقيض من ذلك؛ يعتبر الجسم المضاد وفقاً للاختراع» وبخاصة 11382-131/16؛ ذو خاصية مضادة فقط ل ‎IL-TR‏ البشري. وقذّر المخترعون ما إذا كانت الأجسام المضادة التي لها خواص شادة/مضادة قادرة على توصيل إشارة شادة فعالة يمكنها تعديل خلايا 1 البشرية. وقد تم تحليل ترنسكريبتومات 5 البشرية التي حضتت لمدة 3 ساعات ونصف بدون 7-اا بشري خارجي؛ مع 7-اا

5 بشريء؛ ومع 7-اا وجسم مضاد ‎(MDT07-13)‏ 1811 الموقع-1 (064ا رقم 1 و 061 رقم

— 5 8 — 2 على التوالي) أو ‎N13B2-hVLE‏ الموقع-2/1ب )1964( بواسطة الجيل الثاني لتحديد السياق المعتمد على ال ‎.(RNA-SEQ) RNA‏ وتم التعبير عن ما مجموعه 481 جين تفاضلياً في ‎PBMCs‏ بشرية حضنت مع ‎MADS‏ تعمل ضد 1-7140 بشري بالمقارنة مع الظروف الضابطة بينما تم التعبير عن ما مجموعه 334 جين تفاضلياً مع التحفيز ب ‎IL=T‏ بشري لوحده بالمقارنة مع الظروف الضابطة. 4 0707-13 ‎1gG1 2 N13B2-h3VL6‏ 1811 #1 ‎logFC‏ قيمة ‎logFC| P 4.3 logFC| P‏ قيمة ‎P‏ ‏الجين ‎/Unstim‏ المعدلة ‎[Unstim|‏ المعدلة ‎/Unstim‏ المعدلة ‎ACADVL‏ 0853 0040 115 000 087 0011 ‎AHR‏ 086 0029 5لا 000 ]121 0000 ‎oss 002s 075 AKRWI‏ 0002 075 0006 ‎ALDHIGAI‏ )123 فا 0001 )132 م ‎ALDHSA‏ 072 ا عند 0001 ‎ apPoP‏ 081 000 00 0000 اهم 000 ‎oor 08s] ARHoEF)‏ 105 0000 085 0000 مده ]103 005 123 0005 115 0005 و ]107 003 صما 0001 تعد 0004 ‎000s 0s] oz oss| nou 071) coven‏ د - © 0000 078 نا oot 0s ‏ديه افد ووم‎ 08 corr ‏ا نا دا تت‎ on 0026 063] 0033 062 0043 09 Exocs 0024 0m 000 126 000 08a) coed soos ow) oon 109 oes 09 remie oot owl oon os7loon ‏ار‎ oor: s02 0) oom 081 ‏كته‎ 065 Gren ooo 0so| 000 Los oon oss| Ha

002 ksi] ‏صم‎ is ‏عم ل مه‎ 0.009 am 00 0 am 00 le om LYSMD? oor 886 000 O86 oot Ge ue 0,002 on 0,002 on 0,029 0,63 NSUN2 sors ‏له‎ 002 103 oo om| pmo sooo 10s| 0000 130] 0001 ‏معام .صا‎ 004 092 oois 078 ois oss] prem 0,002 0,60] 0,000 oe 0,004 om ‏5م‎ ‏0ه نمه‎ ooo oss oon om] ‏مهم‎ ooo oso] 003 oe 00> ‏بصعم اص‎ ooo ‏سد د شا سد‎ 000 098] 0000 Li 00 0s) sees ooo 0m) ooor Lis ‏دده‎ Lod Ta 0,002 0,59! 0,000 073 0,001 0,71 TRAM] ooo 106) 0000 ‏تقل‎ 0005 038] Troe 0002 126) 0001 Ida oo Lea unos 000 083 000 052000 00) Use soi oma oo 101 oot onl zwvsoo 0,000 0,000 0,005 0,55 ACTN4 oss | 0st ooo! GEE 0020 EE casos oo 0s 0000 OW| 0004 0m) cons

0030 ‏ده‎ 0000 GEE] 0000 ‏مع الف‎ 000: oss oom oso oon om) ‏مد‎ ‎0007 0s6-| 0000 096 oor Ga] Kn 0.002 - ‏وو‎ 0.002 rs 0.037 0.58 PARP 0,033 0,53| 0,008 0,66| 0,037 0,61 RADS54L2 ‏حت لد ا 000 073 ا‎ 0040 0,57| 0,028 on 0,028 0,73 TOR3A 05671 002-| 0000 HIE] 000s | G8 som 0047 — 008 07 0 39 ‏0م و‎ oot Um 00 Lal ‏ويه دده‎ avr 0.026 es 0.01 - ‏و‎ 0919 0.4 1 ois om ‏ممم 031 مه افد مه‎ 0,049 0,59 0,012 0.75] 0,178 0,51 CCNL2 ae

NE ‏و ا‎

NE ‏ل ا ل‎ 0.008 am 0.006 ‏وجو‎ 0116 0.50 CREB on 0m oon os oms om] once

J... ‏صمي أنه بده‎ 0.013 om 0.022 oa 0.264 037 EAM115C oom 066 oon 0 oz ‏غيم‎ ruow

0,005 0,701 0,002 0,78] 0,076 0,55 GMIP soto 095 oot 093 0005 ‏شه‎ ower oo ‏نا ا عا‎ Hoo 0.017 am 0.019 ou 0.980 0.43 HEATRS oun ‏ابه‎ oo os ooss 07 wen 0.010 an 0.013 ‏دعب 0.42 0.287 جو‎ 0,022 0,59 0,019 0,61] 0,088 0,54 HMG20B soos 00] 002 07 016s 03s NPA sos oa oms 086 ‏فيد‎ 03s) Heo sor ooo oo os ome 0s Km» 0,040 0,621 0,019 an 0,149 0,54 KLHDC?2 ‏نا ا سا ا‎ ure soot Lisl ooo | ‏صصده لهم‎ os ‏جم‎ ‎0.044 em 0.030 en 0.963 0.49 MAP3KI 1 oe |e oois ‏تلقل‎ ooo 105] wes ‏نا نا ا سا ا‎ oor ol om ‏صده افتة‎ ox] ‏صم‎ ‏:مه‎ wm om wml om] ras 0 | 0 | ; asl 0 | 0 | 8 om 0 | ) | ) 0 | 1 | SMD ) oo UE ‏مه‎ GE oo oso ei 0.00 00 0.046 om 0.633 0.29 ELE os om om om oars us| rows 0,014 0,66] 0,016 em 0,095 0,56 RNF10 0,012 0,69] 0,016 0.69] 0,077 0,60 RNF149 oons 05 ‏مده‎ SHE ons 102 meu "J. NI -

Somme = 7 : 7-13 ‏4و‎ ‎oon I aon 7 oan 0] sow 0,007 a 0,012 0.69 0,204 0,44 SENP6 0,013 0,74] 0,021 0,71 0,992 0,01- SIPA1L3 oon ow an 015 02 0s soe 0,030 oe 0,014 0,76] 0,595 0,24] SLC38A10 on 0%) ‏يه‎ 0s ‏اميه‎ ooo] ‏تيه‎

سف نا دا ا ل بن نا سا د ‎oor‏ ‏ممع اكه 071 )097 003 كا 0005 ‎om 0,006 am 0,052 0,66 TNKS‏ 0,016 ‎TSC22D2‏ 0,47 0,137 ]0.65 1 ]0.61 0,014 ‎oi ues‏ 0006 122 ممه 1 ‎00s‏ ‎an 0,054 0,56 ZFANDS5‏ 0,003 0.64 0,007 ‎oss 06s ooo oss 02e 041 aw‏ ‎oo oss) ooos ose 020 031 2WFass‏

0,004 0,55| 0,001 0.64] 0,028 0,50 CHMP7 oot ‏لوده‎ oom 6x 0s ‏متعم عم‎ ‏بن ا نا سانا ل‎ 0,013 0,49] 0,000 en 0,040 0,49 UBE2D2 00st 0a] oon G86 000 ‏يم‎ AGTRAR 0114 033 0012 050] 0.005 on ‏دونه‎ ‎007 ora] 0000 ESE 00m ‏تين‎ eam

وو

110707-13 4 0002 060- 0065 03-| 0000 053. CveA 0006 080 025 033-| 0043 ‏7ه‎ RNFLSS 0311 036-| 0294 08-0036 079 ALDHIBI 0310 036 0477 027/0007 898 Torn ‏وده بيده‎ 0002] 060-| 0068 o43-| ‏يتدعم‎ ois ‏لوده‎ 000 7068 oom oso] ‏ميم‎ ‎soot oss| ‏يمه‎ ose ow os ome 0000 072 ‏لبهم امه‎ 0a 025] ‏معام‎ ‎0.008 0.49 0.001 Th 0.053 0.5 FRMDS 0,014 0,50 1 0,71] 0,086 0,43 GSR 0,008 0,57| 0,007 0,59] 0,092 0,45 KIF1B 0,035 0,57| 0,028 0,60] 0,103 0,53 MEF2D 0,002 0,75 0,020 0,58| 0,220 0,38 MPZL1 ‏ل‎ - oo ‏سنا نت سانا‎

0,005 0,62] 0,009 0,57] 0,228 0,34 NUP153 ‏لس‎ 082 001s ‏بد ا اتا‎ 0,012 0,49] 0,001 0.66| 0,166 0,34 STATSA 0007 06H 00s ‏مم‎ 030 02 Tow)

Sa 0707-13 1900 0002 0a] 0008 06 00# 0s] 8 0.027 0.55 0.013 Te 0.545 ‏دده‎ TMEM1848 000 OEE 0012 ‏امم‎ 0212 03s ‏مم‎ ‎0,006 0,61] 0,029 0,49] 0,105 0,44 USP38 0,006 0,57| 0,005 0,60! 0,329 0,27 XYLT2 0,093 0,53] 0,018 0,74| 0,137 0,56 ACTRS

معدم يمه سه تقو سه ‎06s]‏ تنه ‎am 0,548 0,29 BAG?‏ 0,042 0,42 0,254 ‎oa 0x] oon UE 01 out] se‏ ‎os os) oe 0m 06 0s] comic‏ ‎Las 0 | 5 0 | 032 om 0 | 2 0 | 1 0‏ | 0 ‎CAMK1D‏ 0,47 0,228 0,64 0,040 0,48 0,136 ‎os] cos‏ صقم ‎iss os ool OEE‏ ‎yy 0,833 0,12 CD6‏ 0,042 0,51 0,134 ‎ows ose] oom oe oss 03s] oo‏

02 osi-| oo OEE ‏كيم نه‎ tec 0,249 0,45| 0,031 or 0,167 0,62 ECI1 0,091 0,51 0,013 0.74] 0,120 0,56 ELAVL1 ox on] ooo GH ome os | enon oss om om sz oss om] ras 0,572 0,24| 0,035 rr 0,180 0,57 FHL3 0,250 0,28 0,002 0,68 0,166 0,39 FKBPS oss os] a0 18 ‏ام نه‎ ru

4 707-13 نا ‎os:‏ | ده م ‎wow] oon‏ ‎GIMAP1‏ 0,39 0,256 0,012 0,47 0,097 ‎GIMAP1-‏ اد ‎woos oa mas iw) owes‏ ‎GZMM‏ 0,55 0,215 7 - 0,029 0,31 0,448 عم ‎sr‏ سيم ‎osm oun] oon 0a‏ ‎em 0,107 0,61 HECTD3‏ 0,038 0,38 0,267 ‎oa wos‏ ميقم ‎om om‏ ]0% 0105 ‎esl 0.145 0.50 FO!‏ 0.032 0.93 0.487 ‎os oa] oon UE oss oes | ios‏

‏ا‎ EERE oss oe wi an 0372 033 0.030 en 0621 04 18 oss on] ons ‏صم عع‎ om ‏عات‎

22 ow oon aod ows om] occ 0.970 0.38 0.043 os 0 885 0.08 ‏يرم‎ ‏ليده ده‎ ovis ‏الف‎ oom oo| ‏مم‎ ‏لله‎ oo age on] ro 0063 076) 0005 ‏3لا‎ 0.065 090 RACI 0,107 0,44 0,023 am 0,234 0,39 RALY 0,293 0,31 0,026 0,59| 0,738 0,14 RANBP10 0,102 0,34 0,001 0,66| 0,120 0,38 RASA3

0,053 0,50 0,017 0,62] 0,182 0,43 RAVER] 0,234 0,41 0,017 0,76] 1 0,48 RCN2 0,065 0,59| 0,047 0,65] 0,231 0,48 RETSAT own oa] ooosT GE om vas] ree os om] aml ‏دده اهل‎ ou sve oss 00%] 08H os 0a 0,469 0,23 0,020 0,62] 0,254 0,38١ 1801022 0,120 0,44 0,010 0,71] 0,298 0,37 TBC1D25 0,542 0,23 0,026 0,68| 0,450 0,31 TBL2 0,159 0,41 0,027 0,61] 0,552 0,23 TFE3 oss oa] ooz ‏ا‎ os] es

0,096 0,54] 0,042 0,65 0,924 0,06 UBE3A 0,363 0,27] 0,004 0,75] 0,272 0,37 USP21 0168 0do-| 0024 08 0375 ‏اده‎ VAMP 0,108 0,57 0,026 0,061 0,78 XPOT 0,328 0,30] 0,008 0,73] 0,095 0,56 ZDHHC3 0,333 0,366 9 0,759 1 0,58 ZER1 0,474 0,25] 0,012 0,73] 0,504 0,27 ZNF589 0,487 0,23] 0,020 0,65] 0,101 0,55 ZNF171 006 of 0008 095 0108# | 070 ZN ‏ل 057 000 100 062 نا‎ ABHDI4A 0,003 0,71] 0,259 0,31] 0,547 0,21 AGO2 0,034 0,68 0,801 0,12 0,673 0,20١ APOBEC3D 0,026 0,60 0,364 0,28] 0,582 0,22| ARHGAP31 0017 099 oases and 0777 0387 ATES ‏ده‎ an] ‏ته‎ ome on] on 0.001 on 0.296 025! 0352 0.26 BACH?

4 707-13 نا حب ‎om oo om or]‏ اال ‎aa 0.153 040 0319 0.34 Coord‏ 0012 ‎oa] ool‏ ته لوده يده ‎0oul‏ 0002 وجدمه 8 | 0 494 | 36-0 | 0 285 | 0 ‎TR‏ 008 | 0 ‎cone‏ م ‎oo om |om‏ افق نمه ‎c - 2‏ 0 : | 0 49 | 0 وه | 0 | : 1 | 0 ‎os‏ 8 0 | 0 ‎om‏ ا ا ا ا امم ‎sa‏ oo SHE ‏اد دم‎ on| oom 0,004 en 0,989 0,01 0,930 0,04 CSF2RB ouns ‏للق ا‎ ows ous ar] oxom oo 053 oo ‏أل ان‎ ousel 0,040 am 0,058 0,58] 0,143 054 DVL2 oms ox] 020 ‏لماعم‎ ae] som 0,021 on 0,728 0,16 0,874 0,09 EPSTI1 0,034 0,59 0,083 0,50] 0,338 0,35 FAMO1Al 0,007 0,76| 0,881 0,066 3 0,05 FASLG 0,024 0.70] 0,077 0,63] 0,586 0,27 FBXO30 oon 0370 om onl as aie ‏صم‎ ‎ows ‏امد‎ ows ‏مره ايده‎ ax] om 0.004 ea 0.956 0.02! 0924 0.04 BP? 0,002 0,14 0,823 0,08 0,997 0,00 GBP4

‏ا ا‎ on] cee 0,035 am 0,092 0,49| 0,298 0,37 GIMAPS ous 06] oan oo oa] ca 0.002 on 0.879 008-66 0.05 CAME oons 80 oss oso ‏ديهم‎ oz caw ous 07] os oro 0a] wera 0,005 ues 0,783 0,09| 0,213 0,36 HIVEP1

MD707-13 4 wom orm owl am os] vere 0 | 5 1 ‏وو‎ 0 | 0 5 ‘ 0 | ; | 0 | 1 | 1 0 | 40 PH or ml oes om foms om ‏مم‎ ‎0,049 0.61] 0212 0,42| 0,664 0,20 IKZF?2 0,007 0.61] 0172 0,34] 0,635 0,16١ IL21R-AS1 0,018 0,59] 0,088 0,45] 0,070 0,56 INADL os ow] oso onv|ams ao] wes oon 088 oan ‏لهم مه ايده‎ we 0,010 ee 0,079 0,49 0,092 0,55 INTS3 0,013 0.68 0,727 0,13| 0,996 0,01 IRF1 oom a0 ous ‏فده يمه‎ ox we 0.000 an 0.982 oot 0.790 0.09 RES oom ai] ‏مده‎ ois 0s ‏عدم‎ wo om ol oor oso os wae 0 | 002 in 0 | 400 0 | 0: 0 | . 80 0 | oc JUN on om| ous os oss 0] Kos 0,006 oes 0,527 0,19 1 0,05- KDM6B ov ‏نا نان ا‎ ew 0 | 0 | 8 ‏وو‎ 0 | 1 | 8 0 | : 0 0 | 7 : 0 | | : MING ous ‏ده لفل‎ 0s 0 oan Loon 003 0%) 007 07 oar0 om] Leow

0:10 ‏مه يضمن‎ ous] sn oo SIE] 072 ‏سم اهم‎ on ‏عضا‎ ‎oo om) ores ossjomn oi wor wml gl om wom onl en 0,002 ‏وجو‎ 0,3 0,25-| 0,841 0,09- NR4A2 ovis ‏لهم‎ oss oa nin oss] oss 0,040 0.59] 0,181 0,42| 0,930 0,05 PIM3 oo oml asm ‏معام ليم صم اتيم‎ 0 | 036 om 0 067 0 | 7 0 | | - 0 | 5 | 01 0,003 0,60] 0,143 0,32 0,302 0,27| PPP1R15B ous [HOD oa oor] oss ‏معفم لدم‎

4 707-13 نا مق ‎TTT ETE‏ ‎el 0,324 0,34-| 0,509 0,28- RAB20‏ 0,045 ‎own ois] Rosia‏ امم يده هلد ‎oa‏ ‎ae 0,282 0,26| 0,457 0,22 RNF19A‏ 0,002 ‎oom 08] os ooo ose] noun‏ ‎SERPINE2‏ |-0,19 0,655 |0,02 0,957 ]0,63 0,026 ‎oom ol or ooo oii sos‏ ‎ay 0,530 0,21| 0,355 0,33 SLC7TAS‏ 0,024 ‎SLMO2-‏ ‎ovis aus 0,594 0,82-| 0,893 0,30- ATP5E‏ ‎0,45١ 0,410 0,30 SMG6‏ 0,121 0.621 0,021 o0ss ‏ل نا نا ا‎ 0.042 es 034 | 032 0 540 0 ’s SRC os 0% 0a oss 050 oa swe 0,008 om 0,428 0,23] 0,582 0,20 STATI oon dei om ox ‏ممه‎ oar] su ol ‏ألا‎ oe ooo on] ow 0,038 a 0,645 0,18 0,921 0,06- TESK1 0,038 0,65 0,083 0,57| 0,303 0,42| TMEM165 0,007 0.61] 0,206 0,32-] 0,261 0,33- TNF oow owl ozs ues oa os meson rol ta or sonar a] ‏صمت‎ ‎wk ‏ماه نه أله‎ we] oe 0,000 ow 0,979 0,021 0,941 0,07- XCL1

‎XCL2‏ -0,25 0,805 )0,77 0,257 0,000 ‎0d Ze‏ بيده تكن ‎nose‏ -060 ]004 الجدول 6. قائمة الجينات المعبر عنها بشكل واضح ‎FDR)‏ 75( وبشكل تفاضلي (التغير المضاعف > 1.5) بعد حضن ‎PBMCs‏ بشرية ‎=n)‏ 7( ومع ‎MADS‏ تعمل ضد ‎IL7Ra‏ ‏بالمقارنة مع خلايا غير محفزة. ميز تحليل مخطط فن ‎Venn diagram‏ (الشكل 11ج) 61 جين ‎fare‏ عنها تفاضلياً مشتركة ‎common differentially expressed genes‏ مع ‎MAbs‏ الثلاثة بدون أي إغناء محدد لفئات الأونتولوجيا الجينية ‎.GoMiner‏ وبالرغم من ال 61 جين المشترك؛ حث الجسم المضاد وفقاً للاختراع 31 تعديل جيني واضح فقط بدون إغناء فئات الأونتولوجيا الجينية. وفي المقابل» قام الجسمان المضادان وفقاً للتقنية السابقة بحث تعديل انتساخي مهم لترنسكرببتومات ‎PBMCs‏ البشرية ‎Cus‏ تم تحفيز 245 جين معبر عنه تفاضلياً بواسطة ‎MAD‏ المتمثل في ‎19G4‏ ‏0 رقم 1 في الموقع 1 وتم تحفيز 237 جين معبر ‎die‏ تفاضلياً بواسطة ‎MAb‏ المتمثل في ‎IgG1‏ ‏رقم 2 في الموقع 1. وكانت 78 جين معبر عنها تفاضلياً مشتركة بين هذين ال 01805 في الموقع 1 ولكن هذه الجينات لا يتم التعبير عنها تفاضلياً عندما يتم تحفيز ‎PBMCS‏ بواسطة ‎N13B2-‏ ‎.hVL6‏ ‏وبين تحليل العنصر الرئيسي ‎(PCA) Principal Component Analysis‏ لبصمة ‎IL-7 signature 5‏ أن الجينات المعبر عنها تفاضلياً التي تم تحفيزها بواسطة الأجسام المضادة ‎Ga,‏ للتقنية السابقة تختلف بشكل كبير عن الجينات المعبر عنها تفاضلياً التي تم تحفيزها بواسطة 7-اا. وبشير إغناء الأونتولوجيا الجينية ‎GoMiner‏ أن كلا الجسيمين المضادين وفقاً للتقنية السابقة يعدلان الوظائف البيولوجية ل ‎PBMCs‏ مثل تنشيط ‎LIA‏ الدم البيضاء ‎leukocyte‏ ‎activation‏ التكائر ‎proliferation‏ الهجرة ‎cmigration‏ الانجذاب الكيميائي ‎«chemotaxis‏ ‏0 إفراز السيتوكينات ‎cytokine secretion‏ والاستجابات الالتهابية المقترنة بمسار ‎MAPK/ERK'‏

ومن بين الجينات ال 334 المعبر عنها تفاضلياً مع 7اا بالمقارنة مع الظروف الضابطة؛ تم التعبير تفاضلياً عن 93 جين بتغير مضاعف عالي (> 2) وتم فصلها إلى 3 مجموعات مختلفة بواسطة تحليل المخطط الحراري (انظر الشكل 11أ). وقد أسهمت المجموعة الأولى من الجينات ذات التنظيم التقليلي التي تم تقييمها بواسطة إغناء الأونتولوجيا الجينية بشكل رئيسي في

تمايز والموت المبرمج لخلايا الدم البيضاء وارتبطت المجموعة الثانية من الجينات ذات التنظيم التزايدي بدرجة عالية بالتصاق خلايا الدم البيضاء وتمايزها وتنشيطها وكان للمجموعة الثالثة من الجينات ذات التنظيم التزايدي أونتولوجيا جينية مختلطة. ومن الملفت أن كل ‎MAbs‏ التي تم اختبارها (في الموقع-1 أو الموقع 2/1ب) أظهرت تأثيرات مشابهة بمنع تعديل المجموعة-1 و المجموعة-2 ولكن بدون التأثير على المجموعة-3 (انظر الشكل 11ب).

0 وإجمالًا؛ أكدت تحليلات النسخ على أنه على الرغم من أن ‎MADS‏ التي تعمل ضد ‎IL=TR0t‏ ‏البشري في الموقع-1 والموقع 2/1ب اشتركت في خواص مضادة مشابهة؛ إلا أن ‎MADS‏ الاثنين في الموقع-1 الموصوفين وفقاً لحالة التقنية السابقة قاما بحث تعديلات انتساخية كبيرة ل ‎PBMCs‏ ‏البشرية متوافقة مع تنشيط خلايا ‎T‏ والاستجابات الالتهابية المستحثة بمسار ‎MAPK/ERK‏ ‏وحث ‎MAD‏ الذي يعمل ضد 1-7540 البشري في الموقع 2/1ب ‎lady‏ للاختراع» أي ‎N13B2-‏

‎hVLG 5‏ تعديل انتساخي أقل ل ‎PBMCs‏ البشرية بالمقارنة مع ‎MADS‏ الاثنين في الموقع-1 الموصوفين وفقاً لحالة التقنية السابقة. إن عدم وجود ‎MADS‏ مضادة ل ‎IL-TRa‏ نوعية و'ذات خاصية مضادة ‎had‏ بالنسبة للأنواع الأكبر حال دون التحقق من هذا التأثير في الرئيسيات أو البشر. ووجد المخترعون أن الخواص الشادة/المضادة ل ‎MADS‏ المضادة ل ‎IL=TRa‏ تعتمد على الحاتمة المحددة المستهدفة؛ نطراً لأن

‏20 الأجسام المضادة وفقاً لحالة التقنية السابقة التي ترتبط بنطاق التفاعل 7-اا في الموقع-1 يبدو أنها تمتلك الخواص الشادة/المضادة معاً بينما يظهر الجسم المضاد وفقاً للاختراع الذي يرتبط بنطاق الديمرة ل ‎IL=TRafyC‏ (الموقع 2ب) نشاطاً مضاداً صارماً. وبشير المخترعون أن الجسم المضاد وفقاً للاختراع يمكن أن يخل بديمرة ‎IL-TRa/YC‏ المطلوية لاستبطان وتأشير المستقبلات. ومنعت الأجسام المضادة 'ذات الخاصية المضادة فقط" ل ‎IL-TR‏ التهاب الجلد الذي تسببه خلايا

آ الذاكرة على المدى الطويل في الرئيسيات حتى بعد التحفيز المزمن بمولد المضاد بدون حث قلة اللمفاويات أو القصور الوظيفي أو الأيضي لخلايا 1 متعددة النسائل. ولقد تبين أن 7-اا يحث إشارات متعلقة بالتكاثر ومضادة للموت الخلوي المبرمج عن طريق تأشير ‎IL-TR‏ وبشكل رئيسي عن طريق تنشيط مسار ‎JAK/STAT‏ ويعتقد ‎Load‏ أن تأشير -اا 74 يسهم في مسار ‎PIBK/AKT‏ ولكن هذا لوحظ في خطوط الخلايا المخلدة المحولة أو الخلايا الثيموسية الأولية ولم تكن هذه الإشارات قابلة للكشف في الخلايا اللمفاوية ‎T‏ البشرية الذاكرة أو الساذجة المحيطية (انظر المرجع 1998 ‎(Watanabe, J.

Exp.

Med,‏ ولقد أشارت عدة تقارير ‎Lad‏ إلى أن تأشير ‎IL-TR‏ يمكن أن يضخم فسفرة ‎ERK‏ إما في ‎WAY‏ اللمفاوية آ أو مجموعات فرعية من ‎WIS‏ 8 سلفية (انظر المراجع ;2013 ‎Deshpande P.

I.

Immunol,‏ ‎HE and Paige CJ, Immunity, 2001 0‏ 160109). ويكون دور هذه المسارات في تأشير ‎IL-TR‏ في خلايا 1 الناضجة والبشرية أقل وضوحاً. وباستخدام ‎PBMCs‏ بشرية معزولة حديثاً أولية (يتكون معظمها من الخلايا اللمفاوية ‎T‏ و 8؛ الخلايا الأحادية وخلايا ‎(NK‏ من متطوعين أصحاء تم تحفيزها بتركيز مرتفع من 7-اا بشري مأشوب (5000 بيكوغرام/مل. بينما التركيز في المصل حوالي 5 بيكوغرام/مل في ظروف غير ناقصة اللمفاويات»؛ انظر المرجع ‎Wong H-L,‏ ‎«(Cancer Epidemiol Biomarkers Prev, 2008 5‏ أكد المخترعون أن 7-اا حث فسفرة 5 قابلة للتكرار. وكان تنشيط إشارة ‎PI3K‏ أكثر تبايناً ولم يلاحظوا أي فسفرة ل ‎ERK‏ ‏وبينما كانت كل ‎MADS‏ التي تعمل ضد 17140 المستخدمة في هذه الدراسة مثبطات فعالة ل 5 المستحث ب 7-اا وأظهرت خواص مضادة انتساخية مماثلة؛ فقد وجد المخترعون أن 5ه الاثنين في الموقع-1 وفقاً لحالة التقنية السابقة قاما بحث إشارات شادة ل ‎PI3K/ERK‏ ‏0 وتعديلات انتساخية مهمة مرتبطة بتنشيط خلايا آ والاستجابات الالتهابية المستحثة بمسار ‎.MAPK/ERK‏ وهذه الخصائص المضادة/الشادة المزدوجة المتعارضة لبعض ‎MADS‏ ليست نادرة نظراً لأن أهداف ‎L-4 (ix gal‏ 68-اء ‎CD40 «CD38 «CD28 «IL-15‏ أو ‎HER2‏ أظهرت نشاطات مشابهة بعد استبطان/التقام المستقبلة. ولقد تم مؤخراً أيضاً تأكيد الديمرة غير المتجانسة لهذا الموقع 2ب مع ‎TSLPR‏ وتبين أنها متأهبة 5 تتأشير المستقبلة كما توقع مسبقاً ل ‎IL-TRat‏ وسلسلة ‎y‏ (انظر المرجع ‎Verstraete K.,‏

‎(Nature Communications, 2017‏ ومن الملفت أن موقع الديمرة غير المتجانسة المتوقع بين ‎IL=7Ra/y—chain‏ و ‎IL-7Ra/TSLPR‏ متداخل مما يشير إلى آلية تأشير مشتركة تتوسطها الديمرة غير المتجانسة بين كلتا المستقبلتين. ووجد أن معايرة تثبيط 0517875 في أنابيب الاختبار لم تتنباً بفعالية الجسم المضاد ضد ‎IL-TR‏ ‏5 في الجسم الحي. وفي تقرير سابق؛ ثبط ‎ATMAD‏ مضاد ل ‎١7146‏ 051/8715 المستحث ب 7-اا في أنابيب الاختبار وخارج الجسم الحي في الرئيسيات ولكنه لم يحمي من التهاب الدماغ في نموذج قرد صغير مصاب بالتهاب دماغ ناجم عن المناعة الذاتية تجريبي (]/5)(انظر المرجع ‎.(Dunham J., J.

Neuroimmune.Pharmacol, 2016‏ ولقد وصف ‎IL-7‏ وصفاً جيداً من حيث المحافظة على تجمع من الخلايا اللمفاوية ‎T‏ الساذجة 0 والذاكرة المحيطية فى الفئران. إلا أنه فى الرئيسيات قد تكون أهمية 7-اا فى الحفاظ على توازن الخلايا ‎T‏ المحيطية أقل وضوحاً و/أو قد تفسر آليات وافرة الاختلاف بين الأنواع. وأظهرت هذه البيانات أن الخواص المضادة ل ‎MADS‏ التى تعمل ضد ‎IL-TRA‏ البشري والفعالية في الجسم الحي لا ترتبط فقط بمنع ارتباط 7-اا وتثبيط ‎PSTATS‏ وأظهرت هذه البيانات أن الجسم المضاد وفقاً للإختراع الذي يستهدف ‎Wiad‏ موقع الديمرة غير المتجانسة للمستقبلة (الموقع 2ب)؛ هو 'مضاد فقط' وبنتج فعالية أعلى لاستجابات خلايا 1 المثبطة في الجسم الحي. ولاستهداف ‎ILTR‏ بالأجسام المضادة 'ذات الخاصية المضادة ‎add‏ القدرة على تنظيم بقاء خلايا 1 الذاكرة الخاصة بمولد المضاد وتراكمها؛ وبالتالى قد يعزز الحماية من الانتكاس على ‎Gall‏ ‏الطويل في أمراض المناعة الذاتية والأمراض الالتهابية. المراجع : ‎Abraham, C. & Cho, J.

H.

Inflammatory Bowel Disease.

New England 0‏ ‎Journal of Medicine 361, 2066-2078 (2009).‏

Adams, D. H. & Eksteen, B. Aberrant homing of mucosal T cells and extra—intestinal manifestations of inflammatory bowel disease. Nat. Rev.

Immunol. 6, 244-251 (2006).

Agace, W. W. Tissue-tropic effector T cells: generation and targeting opportunities. Nat. Rev. Immunol. 6, 682-692 (2006). 5

Albuquerque AS, 00116580 CS, Foxall RB, Soares RS, Victorino RM,

Sousa AE. Rate of increase in circulating IL-7 and loss of IL-7Ralpha expression differ in HIV-1 and HIV-2 infections: two lymphopenic diseases with similar hyperimmune activation but distinct outcomes. J

Immunol. 2007 Mar 1;178(5):3252-9. PubMed PMID: 17312174. 0

Baumgart, ‏.ل‎ C. & Sandborn, W. J. Crohn’s disease. Lancet 380, 1590- 1605 (2012).

Broux, B., Hellings, N., Venken, K., Rummens, J.-L., Hensen, K., Van

Wijmeersch, B., and Stinissen, P. (2010). Haplotype 4 of the multiple sclerosis—associated interleukin—7 receptor alpha gene influences the 5 frequency of recent thymic emigrants. Genes Immun. 11, 326-333.

Chothia, C., and Lesk, A.M. (1987). Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins. J. Mol. Biol. 196, 901-917.

Chothia C, Lesk AM, Gherardi E, Tomlinson IM, Walter G, Marks JD,

Llewelyn MB, Winter G. Structural repertoire of the human VH segments. 20

J Mol Biol. 1992 Oct 5;227(3):799-817.

Clark LA, Demarest SJ, Eldredge J, Jarpe MB, Li Y, Simon ‏كا‎ van Vlijmen

HW. Influence of canonical structure determining residues on antibody affinity and stability. J Struct Biol. 2014 Feb;185(2):223-7. doi: 10.1016/).jsb.2013.08.009. PubMed PMID: 23994046

Danese, 5. 8 Fiocchi, C. Ulcerative colitis. N. Engl. J. Med. 365, 1713- 1725 (2011).

Denucci, C.C., Mitchell, J.S., and Shimizu, Y. (2009). Integrin function in 5

T-cell homing to lymphoid and nonlymphoid sites: getting there and staying there. Crit. Rev. Immunol. 29, 87-109.

Feagan, B. G. et al. Vedolizumab as Induction and Maintenance Therapy for Ulcerative Colitis. New England Journal of Medicine 369, 699-710 (2013). 0

Deshpande, P., Cavanagh, M.M., Le Saux, S., Singh, K., Weyand, C.M., and Goronzy, J.J. (2013). IL-7- and IL-15-mediated TCR sensitization enables T cell responses to self-antigens. J. Immunol. Baltim. Md 1950 190, 1416-1423.

Dunham, J., Lee, L.—F., Driel, N. van, Laman, J.D., Ni, ٠., Zhai, W., Tu, 15

G.-H., Lin, J.C., Bauer, J., Hart, B.A. ‘t, et al. (2016). Blockade of

CD127 Exerts a Dichotomous Clinical Effect in Marmoset Experimental

Autoimmune Encephalomyelitis. J. Neuroimmune Pharmacol. 11, 73-83.

Fleming, H.E., and Paige, C.J. (2001). 06-8 Cell Receptor Signaling

Mediates Selective Response to IL-7 at the 00-8 to Pre-B Cell 0

Transition via an ERK/MAP Kinase-Dependent Pathway. Immunity 15, 521-531.

Gorfu, G., Rivera—Nieves, J., and Ley, ‏كا‎ (2009). Role of beta7 integrins in intestinal lymphocyte homing and retention. Curr. Mol. Med. 9, 836— 850.

Haas, J., Korporal, M., Schwarz, A., Balint, B., and Wildemann, B. (2011). The interleukin—7 receptor « chain contributes to altered 5 homeostasis of regulatory T cells in multiple sclerosis. Eur. J. Immunol. 41, 845-853.

Haudebourg, T., Poirier, N., and Vanhove, B. (2009). Depleting T-cell subpopulations in organ transplantation. Transpl. Int. Off. J. Eur. Soc.

Organ Transplant. 22, 509-518. 10

He, R., and Geha, R.S. (2010). Thymic stromal lymphopoietin. Ann. N.

Y. Acad. Sci. 1183, 13-24.

Henriques, C.M., Rino, J., Nibbs, R.J., Graham, G.J., and Barata, J.T. (2010). IL=7 induces rapid clathrin-mediated internalization and JAK3- dependent degradation of IL-7Ralpha in T cells. Blood 115, 3269-3277. 15

Kabat, E.A., Wu, T.T., Reid-Miller, M., Perry, H.M. and Gottesman, K.S. (1992) Sequences of Proteins of Immunological Interest (DIANE publishing, 1992).

Kern, B., Kraynov, E., Lee, L.-F., Ray, R. (2013). Receptor occupancy and internalization of an anti—IL-7 receptor antibody. Cytokine 63, 276- 20 2717.

Kern 8, Li W, Bono C, Lee LF, Kraynov E. Receptor occupancy and blocking of STATS signaling by an anti—IL-7 receptor o antibody in cynomolgus monkeys. Cytometry 8 Clin Cytom. 2016 Mar;90(2):191-8.

Khor, B., Gardet, A. & Xavier, R. J. Genetics and pathogenesis of inflammatory bowel disease. Nature 474, 307-317 (2011). 5

Lei, L., Zhang, Y., Yao, W., Kaplan, M.H., and Zhou, B. (201 1). Thymic

Stromal Lymphopoietin Interferes with Airway Tolerance by Suppressing the Generation of Antigen—Specific Regulatory T Cells. J. Immunol. 186, 2254-2261.

Mazzucchelli, R., Hixon, J.A., Spolski, R., Chen, X., Li, W.Q., Hall, V.L., 10

Willette—Brown, J., Hurwitz, A.A., Leonard, W.J., and Durum, S.K. (2008). Development of regulatory T cells requires IL-7Ralpha stimulation by IL-7 or TSLP. Blood 112, 3283-3292.

McElroy CA, Dohm JA, Walsh ST. Structural and biophysical studies of the human IL-7/IL-7Ralpha complex. Structure. 2009 Jan 14;17(1):54- 5 65. doi: 10.1016/j.str.2008.10.019.

McElroy CA, Holland PJ, Zhao P, Lim JM, Wells L, Eisenstein E, Walsh

ST. Structural reorganization of the interleukin—7 signaling complex. Proc

Natl Acad Sci ‏ل‎ 5 A. 2012 Feb 14;109(7):2503-8. doi: 10.1073 /pnas.1116582109 0

Michel, L., Berthelot, L., Pettré, S., Wiertlewski, S., Lefrére, F., Braudeau,

C., Brouard, S., Saulillou, J.-P., and Laplaud, D.-A. (2008). Patients with relapsing-remitting multiple sclerosis have normal Treg function when cells expressing IL-7 receptor alpha—chain are excluded from the analysis. J. Clin. Invest. 118, 3411-3419.

Planell N, Lozano JJ, Mora-—Buch ‏ا‎ Masamunt MC, Jimeno M, Ordas ٠

Esteller M, Ricart E, Piqué JM, Panés J, Salas A. Transcriptional analysis of the intestinal mucosa of patients with ulcerative colitis in remission 5 reveals lasting epithelial cell alterations. Gut. 2013 Jul;62(7):967-76. doi: 10.1136/gutjnl-2012-303333

Racapé, M., Vanhove, B., Soulillou, J.-P., and Brouard, S. (2009).

Interleukin 7 receptor alpha as a potential therapeutic target in transplantation. Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz.) 57, 253-261. 0

Reche PA, Soumelis V, Gorman DM, Clifford T, Liu Mr, Travis M,

Zurawski SM, Johnston J, Liu YJ, Spits H, de Waal Malefyt R, Kastelein

RA, Bazan JF. Human thymic stromal lymphopoietin preferentially stimulates myeloid cells. J Immunol. 2001 Jul 1;167(1):336-43

Roan, F., Bell, B.D., Stoklasek, T.A., Kitajima, M., Han, H., and Ziegler, 15

S.F. (2012). The multiple facets of thymic stromal lymphopoietin (TSLP) during allergic inflammation and beyond. J. Leukoc. Biol. 91, 877-886.

Rochman, Y., Kashyap, M., Robinson, G.W., Sakamoto, K., Gomez-

Rodriguez, J., Wagner, K.-U., and Leonard, W.J. (2010). Thymic stromal lymphopoietin—-mediated STATS phosphorylation via kinases JAK] and 0

JAK? reveals a key difference from IL-7-induced signaling. Proc. Natl.

Acad. Sci. ‏.لا‎ 5. A. 107, 19455-19460.

5800017, W. J. et al. Vedolizumab as Induction and Maintenance

Therapy for Crohn’s Disease. New England Journal of Medicine 369, 711-721 (2013).

Shochat C, Tal N, Bandapalli OR, Palmi C, Ganmore |, te Kronnie G,

Cario G, Cazzaniga G, Kulozik AE, Stanulla M, Schrappe M, Biondi A, 5

Basso G, Bercovich ‏,نا‎ Muckenthaler MU, lzraeli 5. Gain—of-function mutations in interleukin—7 receptor-a (IL7R) in childhood acute lymphoblastic leukemias. J Exp Med. 2011 May 9;208(5):901-8. doi: 10.1084/jem.20110580. Erratum in: J Exp Med. 2011 May 9;208(5):preceding 901. J Exp Med. 2011 Jun 6;208(6):1333 0

Taylor, B.C., Zaph, C., Troy, A.E., Du, Y., Guild, K.J., Comeau, M.R., and Artis, D. (2009). TSLP regulates intestinal immunity and inflammation in mouse models of helminth infection and colitis. J. Exp. Med. 206, 655— 667.

Van Bodegom, D., Zhong, J., Kopp, N., Dutta, C., Kim, M.-S., Bird, L., 5

Weigert, O., Tyner, J., Pandey, A., Yoda, A., et al. (2012). Differences in signaling through the B-cell leukemia oncoprotein CRLF2 in response to

TSLP and through mutant JAK2. Blood 120, 2853-2863.

Verstraete, K., Peelman, F., Braun, H., Lopez, J., Van Rompaey, D.,

Dansercoer, A., Vandenberghe, ٠٠١, Pauwels, ‏.كا‎ Tavernier, J., Lambrecht, 20

B.N., et al. (2017). Structure and antagonism of the receptor complex mediated by human TSLP in allergy and asthma. Nat. Commun. 8.

Walsh ST. Structural insights into the common y-chain family of cytokines and receptors from the interleukin—7 pathway. Immunol Rev. 2012

Nov;250(1):303-16

Watanabe, M., Ueno, Y., Yajima, T., Okamoto, S., Hayashi, T.,

Yamazaki, M., Iwao, Y., Ishii, H., Habu, S., Uehira, M., et al. (1998). 5

Interleukin 7 transgenic mice develop chronic colitis with decreased interleukin 7 protein accumulation in the colonic mucosa. J. Exp. Med. 187, 389-402.

Watanabe, N., Wang, Y.-H., Lee, H.K., Ito, T., Wang, Y.-H., Cao, W., and Liu, Y.-J. (20053). Hassall’s corpuscles instruct dendritic cells to 10 induce CD4+CD25+ regulatory 1 cells in human thymus. Nature 436, 1181-1185.

Wong, H.-L., Pfeiffer, R.M., Fears, T.R., Vermeulen, R., Ji, S., and

Rabkin, C.S. (2008). Reproducibility

Ying, S., O’Connor, B., Ratoff, J., Meng, Q., Fang, C., Cousins, D., 15

Zhang, G., Gu, S., Gao, Z., Shamiji, B., et al. (2008). Expression and cellular provenance of thymic stromal lymphopoietin and chemokines in patients with severe asthma and chronic obstructive pulmonary disease.

J. Immunol. Baltim. Md 1950 181, 2790-2798.

Zhi, K., Li, M., Zhang, X., Gao, Z., Bai, J., Wu, Y., Zhou, S., Li, M., and 20

Qu, L. (2014). a4p7 Integrin (LPAM-1) is upregulated at atherosclerotic lesions and is involved in atherosclerosis progression. Cell. Physiol.

Biochem. Int. J. Exp. Cell. Physiol. Biochem. Pharmacol. 33, 1876-1887

Zhong, J., Sharma, J., Raju, R., Palapetta, S.M., Prasad, T.S.K., Huang,

T.-C., Yoda, A., Tyner, J.W., van Bodegom, D., Weinstock, D.M., et al. (2014). TSLP signaling pathway map: a platform for analysis of TSLP- mediated signaling. Database J. Biol. Databases Curation 2014, bauQ07. ‏قائمة السياقات‎ ‏أوز إيمونوثيرابيوتيكس‎ >110< 127CD ‏أجسام مضادة ومتعددات ببتيد موجهة ضد‎ >120< ‏122018م‎ >130< 16306655.8 EP >150< 09-12-2016 <151> 96 <160>

Patentln version 3.5 <170> 1 <210> 20

>211< 9 ‎PRT <212>‏ >213< سياق صناعي >220< <> _سياق تخليقي >400< 1

Phe Thr Leu Ser Asp Tyr Tyr Met Ala 10 5 1 2 <210> >211< 17 ‎PRT <212>‏ >213< سياق صناعي >220>

‏_سياق تخليقي‎ <223> 2 <400>

Thr lle Ser Ala Ser Gly Leu Arg Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys 5 15 10 5 1

Gly 3 <210> 13 <211> ‎PRT <212> 15‏ >213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي

3 <400>

Pro Leu Ser Ala His Tyr Gly Phe Asn Tyr Phe Asp Tyr 5 1 5 4 <210> 11 <211>

PRT <212> 10 ‏_سياق صناعي‎ <213> >220> ‏_سياق تخليقي‎ <223> 4 <400>

Arg Thr Ser Glu Asp lle Tyr Gin Gly Leu Ala 10 5 1

<210> 7 <211>

PRT <212> 5 ‎Bbw <213>‏ صناعي >220> ‎Bla <223>‏ تخليقي ‎10 ‎5 <400>

Ser Ala Asn Thr Leu His lle 5 1 ‎15 ‎6 <210> 9 <211>

PRT <212>

>213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي 6 <400>

Gln GIn Tyr Tyr Asp Tyr Pro Leu Ala 5 1 7 <210> 122 <211>

PRT <212> >213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي

7 <400>

Gln Val GIn Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 15 10 5 1

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Leu Ser Asp Tyr 30 25 20

Tyr Met Ala Trp lle Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 40 35

Ser Thr lle Ser Ala Ser Gly Leu Arg Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 15 60 55 50

Lys Gly Arg Phe Thr lle Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

80 75 70 65

Leu GIn Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 95 90 85 5

Ala Arg Pro Leu Ser Ala His Tyr Gly Phe Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp 110 105 100

Gly GIn Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 120 115 8 <210> 107 <211>

PRT <212> >213< _سياق صناعي

>220> >223< _سياق تخليقي >400< 8

Glu lle Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 5 1

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Thr Ser Glu Asp lle Tyr Gin Gly 25 20

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lle 15 40 35

Tyr Ser Ala Asn Thr Leu His lle Gly lle Pro Ala Arg Phe Ser Gly

60 55 50

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lle Ser Ser Leu Gin Ser 80 75 70 65 5

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 60 GIn Tyr Tyr Asp Tyr Pro Leu 95 90 85

Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lle Lys 105 100 9 <210> 107 <211>

PRT <212> >213< _سياق صناعي

>220> >223< _سياق تخليقي >400< 9

Asp lle GIn Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 5 1

Asp Arg Val Thr lle Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asp lle Tyr Gin Gly 25 20

Leu Ala Trp Tyr Gln Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val 15 40 35

Tyr Ser Ala Asn Thr Leu His lle Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

60 55 50

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr lle Ser Ser Leu Gin Pro 80 75 70 65 5

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gin GIn Tyr Tyr Asp Tyr Pro Leu 95 90 85

Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lle Lys 105 100 10 <210> 107 <211>

PRT <212> >213< _سياق صناعي

>220> >223< _سياق تخليقي <400> 10

Asp lle GIn Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 5 1

Asp Arg Val Thr lle Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asp lle Tyr Gin Gly 25 20

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Leu 15 40 35

Tyr Ser Ala Asn Thr Leu His lle Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

60 55 50

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr lle Ser Ser Leu Gin Pro 80 75 70 65 5

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gin GIn Tyr Tyr Asp Tyr Pro Leu 95 90 85

Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lle Lys 105 100 11 <210> 107 <211>

PRT <212> >213< _سياق صناعي

>220> >223< _سياق تخليقي <400> 11

Asp lle GIn Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 5 1

Asp Arg Val Thr lle Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asp lle Tyr Gin Gly 25 20

Leu Ala Trp Tyr Gln Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val 15 40 35

Tyr Ser Ala Asn Thr Leu His lle Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

60 55 50

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr lle Ser Ser Leu Gin Pro 80 75 70 65 5

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys GIn GIn Tyr Tyr Asp Tyr Pro Leu 95 90 85

Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lle Lys 105 100 12 <210> 107 <211>

PRT <212> >213< _سياق صناعي

>220> >223< _سياق تخليقي >400< 12

Asp lle GIn Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 5 1

Asp Arg Val Thr lle Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asp lle Tyr Gin Gly 25 20

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Leu 15 40 35

Tyr Ser Ala Asn Thr Leu His lle Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

60 55 50

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr lle Ser Ser Leu Gin Pro 80 75 70 65 5

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys GIn GIn Tyr Tyr Asp Tyr Pro Leu 95 90 85

Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lle Lys 105 100 13 <210> 366 <211>

DNA <212> >213< _سياق صناعي

>220> ‏_سياق تخليقي‎ <223> 13 >400< 5 caggtgcagc tggtcgaatc agggggggga ctggtcaaac ccgggggctc 60actgcgtctg tcatgtgccg tctcaggcett cacactgagec gactactata tggcatggat ccgacaggca 120 10 ccaggcaagg gactggagtg ggtgtctact atttctgcca gtggcctgag gacctactat 180 cctgacagtg tcaagggaag gttcacaatc tcacgggata acgctaaaaa ttccctgtac 5 240 ctgcagatga acagcctgag agccgaagac accgctgtgt actattgcgc tcgcccactg 300

360tccgcacact atggcttcaa ttactttgat tattgggggc agggtaccct ggtgacagtc 366tccage 14 <210> 321 <211>

DNA <212> ‏سياق صناعي‎ <213> >220> ‏_سياق تخليقي‎ <223> 14 >400< 60 gagatcgtca tgacgcagtc ccccgcaacg ctecteegtct ccccggggga acgegegace ‏ل‎ 5 ctgtcgtgca ggacctccga ggacatctac caaggcctcg cgtggtatca gcagaagcecc 120 ggccaggccc 00992101 gatctactcc gcgaacacct tgcacatcgg 812660929 180 cgcttctcgg ggtcagggag cggcaccgag ttcaccctga ccatctcgtc gectccagage 240 5 gaggacttcg ccgtgtacta ctgccagcag tactacgact accccctgge 300 gttcgggggc 321 gggaccaagg tggagatcaag 0 <210> 321 <211>

DNA <212> 5 ‏سياق صناعي‎ <213> >220> ‏_سياق تخليقي‎ <223>

15 >400< gacattcaga tgacccagtc cccctcgagce ctgagtgcga gtgtgggcga 60ccgcgtgacg atcacctgcc ggacgtccga ggatatctac cagggcectcg cctggtacca gcagaageecg 5 120 ggcaaggccc ccaaactgct ggtctacagc gcgaacaccc tccacatcgg 180 cgtccccage cggttcagcg gctcecggcetc gggaacggac tacaccctca cgatctcgte cectgcagecg 240 gaagacttcg ccacctactt ctgccagcag tattacgact acccgctgge gttcggtggce 300 15 321 ggcaccaagg tcgagatcaa g 16 <210> 20

321 <211>

DNA <212> ‏سياق صناعي‎ <213> >220> 5 ‏_سياق تخليقي‎ <223> 16 <400> gacattcaga tgacccagtc cccctcgagce ctgagtgcga gtgtgggcga 60ccgcgtgacg 10 atcacctgcc ggacgtccga ggatatctac cagggcectcg cctggtacca gcagaagcecg 120 ggcaaggccc ccaaactgct getctacage gecgaacaccce tccacatcgg cgtccccage 15 180 cggttcagcg gctcecggcetc gggaacggac tacaccctca cgatctcgte 240 cctgcagceceg gaagacttcg ccacctactt ctgccagcag tattacgact acccgctgge gttcggtggce 300 321 ggcaccaagg tcgagatcaa g 17 <210> 321 <211>

DNA <212> ‏سياق صناعي‎ <213> 10 >220> ‏_سياق تخليقي‎ <223> 17 >400< 5 gacattcaga tgacccagtc cccctcgagce ctgagtgcga gtgtgggcga ccgegtgacg 60 atcacctgcc ggacgtccga ggatatctac cagggcctcg cctggtacca gcagaagcecg 120 0 ggcaaggccc ccaaactgct ggtctacagc gcgaacaccc tccacatcgg cgtcceccage 180 cggttcagcg gctcecggcetc gggaacggac tacaccctca cgatctcgtc cctgcagecg 5

240 gaagacttcg ccacctacta ctgccagcag tattacgact acccgctggce gttcggtgge 300

321 ggcaccaagg tcgagatcaa g 18 <210>

>211< 321 ‎DNA <212>‏ >213< سياق صناعي >220>

0 >223< _سياق تخليقي

18 <400> 60 gacattcaga tgacccagtc 060100302 ctgagtgcga gtgtgggcga 00010829 atcacctgcc ggacgtccga ggatatctac cagggcctcg cctggtacca gcagaagcecg 5 120 ggcaaggccc ccaaactgct gctctacage gcgaacaccc tccacatcgg cgtcccecagce 180 cggttcagceg gctceggcetc gggaacggac tacaccctca cgatctegtc cctgcagecg 240 gaagacttcg ccacctacta ctgccagcag tattacgact acccgctggce gttcggtgge 300 15 321 ggcaccaagg tcgagatcaa g 19 <210> 20

<211> 31 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي >400< 19

Lys Cys Leu Asn Phe Arg Lys Leu GIn Glu lle Tyr Phe lle Glu Thr 10 10 5 1

Lys Lys Phe Leu Leu lle Gly Lys Ser Asn lle Cys Val Lys Val 30 25 20 15 <210> 31 <211>

PRT <212>

‎Bbw <213>‏ صناعي

‎>220>

‏5 >223< سياق تذخ ‎alas‏

‎20 <400>

‎Tyr Glu lle Lys Val Arg Ser lle Pro Asp His Tyr Phe Lys Gly Phe 10 5 1 10

‎Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Tyr Tyr Phe Arg Thr Pro Glu lle

‎30 25 20

‎15

‎21 <210>

‎459 <211>

‎PRT <212>

Homo sapiens >213< 21 <400>

Met Thr lle Leu Gly Thr Thr Phe Gly Met Val Phe Ser Leu Leu Gin 5 10 5 1

Val Val Ser Gly Glu Ser Gly Tyr Ala Gln Asn Gly Asp Leu Glu Asp 25 20 10

Ala Glu Leu Asp Asp Tyr Ser Phe Ser Cys Tyr Ser GIn Leu Glu Val 40 35 15

Asn Gly Ser Gin His Ser Leu Thr Cys Ala Phe Glu Asp Pro Asp Val 60 55 50

Asn Thr Thr Asn Leu Glu Phe Glu lle Cys Gly Ala Leu Val Glu Val 80 75 70 65

Lys Cys Leu Asn Phe Arg Lys Leu 60 Glu lle Tyr Phe lle Glu Thr 95 90 85

Lys Lys Phe Leu Leu lle Gly Lys Ser Asn lle Cys Val Lys Val Gly 10 110 105 100

Glu Lys Ser Leu Thr Cys Lys Lys lle Asp Leu Thr Thr lle Val Lys 125 120 115 15

Pro Glu Ala Pro Phe Asp Leu Ser Val lle Tyr Arg Glu Gly Ala Asn 140 135 130

Asp Phe Val Val Thr Phe Asn Thr Ser His Leu GIn Lys Lys Tyr Val 160 155 150 145

Lys Val Leu Met His Asp Val Ala Tyr Arg Gin Glu Lys Asp Glu Asn 175 170 165

Lys Trp Thr His Val Asn Leu Ser Ser Thr Lys Leu Thr Leu Leu 07 190 185 180

Arg Lys Leu GIn Pro Ala Ala Met Tyr Glu lle Lys Val Arg Ser lle 15 205 200 195

Pro Asp His Tyr Phe Lys Gly Phe Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Tyr

220 215 210

Tyr Phe Arg Thr Pro Glu lle Asn Asn Ser Ser Gly Glu Met Asp Pro 240 235 230 225 5 lle Leu Leu Thr lle Ser lle Leu Ser Phe Phe Ser Val Ala Leu Leu 255 250 245

Val lle Leu Ala Cys Val Leu Trp Lys Lys Arg lle Lys Pro lle Val 270 265 260

Trp Pro Ser Leu Pro Asp His Lys Lys Thr Leu Glu His Leu Cys Lys 285 280 275

Lys Pro Arg Lys Asn Leu Asn Val Ser Phe Asn Pro Glu Ser Phe Leu 300 295 290

Asp Cys Gin lle His Arg Val Asp Asp lle Gin Ala Arg Asp Glu Val 5 320 315 310 305

Glu Gly Phe Leu GIn Asp Thr Phe Pro Gin Gin Leu Glu Glu Ser Glu 335 330 325 10

Lys Gin Arg Leu Gly Gly Asp Val GIn Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu 350 345 340

Asp Val Val lle Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr 365 360 355

Cys Leu Ala Gly Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro lle Leu Ser Ser 380 375 370

Ser Arg Ser Leu Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val 400 395 390 385

Tyr Gin Asp Leu Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro 10 415 410 405

Pro Pro Phe Ser Leu GIn Ser Gly lle Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala 430 425 420 15

Gln Gly 60 Pro lle Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gin Glu Glu Ala 445 440 435

Tyr Val Thr Met Ser Ser Phe Tyr Gin Asn Gin 455 450 22 <210> 219 <211>

PRT <212> ‏سياق صناعي‎ <213> 10 >220> ‏_سياق تخليقي‎ <223> 22 <400> 5

Glu Ser Gly Tyr Ala Gin Asn Gly Asp Leu Glu Asp Ala Glu Leu Asp 10 5 1

Asp Tyr Ser Phe Ser Cys Tyr Ser 60 Leu Glu Val Asn Gly Ser 0 30 25 20

His Ser Leu Thr Cys Ala Phe Glu Asp Pro Asp Val Asn Thr Thr Asn 40 35

Leu Glu Phe Glu lle Cys Gly Ala Leu Val Glu Val Lys Cys Leu Asn 10 60 55 50

Phe Arg Lys Leu GIn Glu lle Tyr Phe lle Glu Thr Lys Lys Phe Leu 80 75 70 65 15

Leu lle Gly Lys Ser Asn lle Cys Val Lys Val Gly Glu Lys Ser Leu 95 90 85

Thr Cys Lys Lys lle Asp Leu Thr Thr lle Val Lys Pro Glu Ala Pro 110 105 100

Phe Asp Leu Ser Val lle Tyr Arg Glu Gly Ala Asn Asp Phe Val Val 125 120 115

Thr Phe Asn Thr Ser His Leu GIn Lys Lys Tyr Val Lys Val Leu Met 140 135 130

His Asp Val Ala Tyr Arg Gin Glu Lys Asp Glu Asn Lys Trp Thr His 15 160 155 150 145

Val Asn Leu Ser Ser Thr Lys Leu Thr Leu Leu GIn Arg Lys Leu Gin

175 170 165

Pro Ala Ala Met Tyr Glu lle Lys Val Arg Ser lle Pro Asp His Tyr 190 185 180 5

Phe Lys Gly Phe Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Tyr Tyr Phe Arg Thr 205 200 195

Pro Glu lle Asn Asn Ser Ser Gly Glu Met Asp 215 210 23 <210> 7 <211>

PRT <212> >213< _سياق صناعي

>220> >223< _سياق تخليقي <400> 23

Phe lle Glu Thr Lys Lys Phe 5 1 >210< 24 >211< 6 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي >400< 24

Asp Leu Ser Val lle Tyr 1 5 >210< 25 >211< 4 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي <400> 25

Phe Lys Gly Phe 1

>210< 26 >211< 327 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي >400< 26

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 10 5 1

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 15 25 20

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

45 40 35

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu GIn Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 60 55 50 5

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 80 75 70 65

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 95 90 85

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 110 105 100

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 125 120 115

Asp Thr Leu Met lle Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 5 140 135 130

Asp Val Ser GIn Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp 160 155 150 145 10

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe 175 170 165

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 190 185 180

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 205 200 195

Pro Ser Ser lle Glu Lys Thr lle Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg 220 215 210

Glu Pro GIn Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 0 Glu Glu Met Thr Lys 10 240 235 230 225

Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 255 250 245 15 lle Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 270 265 260

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 285 280 275

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser 300 295 290

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser 320 315 310 305

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 5 325 27 <210>

107 <211>

PRT <212> ‏_سياق صناعي‎ <213> >220> 5 ‏_سياق تخليقي‎ <223> 27 <400>

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lle Phe Pro Pro Ser Asp Glu 10 10 5 1

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 25 20 15

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val GIn Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin 40 35

Ser Gly Asn Ser 60 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 60 55 50

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 80 75 70 65

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 95 90 85

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 15 105 100 28 <210>

106 <211>

PRT <212> ‏_سياق صناعي‎ <213> >220> 5 ‏_سياق تخليقي‎ <223> 28 <400>

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lle Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin 10 10 5 1

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 25 20 15

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu GIn Ser 40 35

Gly Asn Ser GIn Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 60 55 50

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 80 75 70 65

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 95 90 85

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 15 105 100 29 <210>

984 >211<

DNA <212> ‏سياق صناعي‎ <213> >220> 5 ‏_سياق تخليقي‎ <223> 29 <400> gctagcacca agggcccatc 0910116666 ctggegecct gectccaggag cacctccgag 60 10 120 agcacagccg ccctgggcetg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 180 tggaactcag gcgccctgac cagcggegtg cacaccttce cggctgtect acagtcctca 240 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcettggg cacgaagacc tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag 300 agttgagtcc aaatatggtc ccccatgccc accatgccca gcacctgagt tcctgggggg accatcagte 360 ttcctgttcc ccccaaaacc caaggacact ctcatgatct cccggaccee tgaggtcacg 5

420 tgcgtggtgg tggacgtgag ccaggaagac cccgaggtcec agttcaactg gtacgtggat 480 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagttcaa cagcacgtac 540 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtectgcac caggactgge tgaacggcaa

600 ggagtacaag 15 tgcaaggtct ccaacaaagg cctccegtee tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 660 gggcagcccc gagagccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccaggagga gatgaccaag 20 720 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat 009 780 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctccegt getggactce 5 840 gacggctcct tcttectcta cagcaggcta accgtggaca agagcaggtg 900 669 aatgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac acagaagagc 960 984 ctcteectgt cteccgggtaa atga 30 <210> 325 <211>

DNA <212> >213< سياق صناعي

>220> ‏_سياق تخليقي‎ <223> 30 <400> 5 cgcacggtgg ccgcgcecgte ggtgttcata ttcccgecga gcgacgagcea 60 gttgaagtcc ggcaccgcct ccgtegtgtg cctgctcaac aacttctacc cccgcgagge gaaggtgcag 120 10 tggaaggtgg acaacgccct ccagtcgggce aacagtcagg agagcgtcac 180 ggagcaggac tccaaggact cgacatactc cctgtcctcg acgctgacct tgagcaaagc cgattacgag 15 240 aagcacaagg tgtacgcgtg cgaggtgacc catcagggcc tgtcctccece 300 ggtgaccaag

325 tccttcaacc ggggcgaatg ctgat 31 <210> 322 <211> 5

‎DNA <212>‏ >213< سياق صناعي >220>

‏0 >223< سياق تخليقي <400> 31 ‎acggtggccg 090091-09 gttcatattc 602609039020 08061‏ ‎gaagtccggce‏ 60

‎15 ‎accgcctccg tegtgtgect getcaacaac ttctacccee gecgaggegaa ggtgcagtgg 120 aaggtggaca acgccctcca gtcgggcaac agtcaggaga gcgtcacgga

‎180 gcaggactcc 20 aaggactcga catactccct gtcctcgacg ctgaccttga gcaaagccga ttacgagaag 240 cacaaggtgt acgcgtgcga ggtgacccat cagggcctgt cctccecggt gaccaagtcece 5 300 322 ttcaaccggg gcgaatgctg at

>210< 32 >211< 9 ‎PRT <212>‏ >213< سياق صناعي

>220> >223< _سياق تخليقي >400< 32

Phe Asp Leu Ser Val lle Tyr Arg Glu 1 5 >210< 33 >211< 10 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي >400< 33

Asn Asp Phe Val Val Thr Phe Asn Thr Ser 10 5 1

>210< 34 <211> 8 ‎PRT <212>‏ >213< سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي >400< 34

Thr Lys Leu Thr Leu Leu Gin Arg 5 1 >210< 35 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< سياق صناعي

>220> >223< _سياق تخليقي <400> 35

Thr Leu Leu 60 Arg Lys Leu GIn Pro Ala Ala Met Tyr Glu lle 15 10 5 1 >210< 36 >211< 10 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي 5 <220< >223< _سياق تخليقي >400< 36

Leu Val Glu Val Lys Cys Leu Asn Phe Arg 5 1 37 <210> 5

>211< 14 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي

0 >220> >223< _سياق تخليقي >400< 37 lle Cys Gly Ala Leu Val Glu Val Lys Cys Leu Asn Phe Arg 15 10 5 1 38 <210>

<211> 11 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي >400< 38

Leu Val Glu Val Lys Cys Leu Asn Phe Arg Lys 10 5 1 39 <210> >211< 7 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي >220>

‏_سياق تخليقي‎ <223> 39 <400>

Lys Lys Phe Leu Leu lle Gly 5 1 40 <210> >211< 11 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي >220> ‎3b <223> 5‏ تخليقي >400< 40 ‎Lys Lys Phe Leu Leu lle Gly Lys Ser Asn lle‏

10 5 1 41 <210> 11 <211> 5

PRT <212> ‏_سياق صناعي‎ <213> >220> ‏تخليقي‎ glu <223> 0 41 <400>

Phe lle Glu Thr Lys Lys Phe Leu Leu lle Gly 10 5 1 15 42 <210> <211>

PRT <212> ‏_سياق صناعي‎ <213> >220> das Bla <223> 5 42 <400>

Cys Leu Asn Phe Arg 1 10 43 <210> 7 <211> ‎PRT <212> 15‏ >213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي

43 <400>

Phe lle Glu Thr Lys Lys Phe 1 5 44 <210> <211> ‎PRT <212> 10‏ >213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي ‎15 ‎44 <400>

Glu Ser Gly Tyr Ala Gln Asn Gly Asp Leu Glu Asp Ala Glu Leu 15 10 5 1

45 <210> 15 <211>

PRT <212> 5 ‏_سياق صناعي‎ <213> >220> ‏_سياق تخليقي‎ <223> 45 <400>

Ala GIn Asn Gly Asp Leu Glu Asp Ala Glu Leu Asp Asp Tyr Ser 10 5 1 15 46 <210> 15 <211>

PRT <212>

>213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي 46 <400>

Asp Leu Glu Asp Ala Glu Leu Asp Asp Tyr Ser Phe Ser Cys Tyr 15 10 5 1 47 <210> <211>

PRT <212> 15 >213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي

47 <400>

Ala Glu Leu Asp Asp Tyr Ser Phe Ser Cys Tyr Ser GIn Leu Glu 15 10 5 1 48 <210> 15 <211>

PRT <212> >213< سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي 48 <400> 5

Asp Tyr Ser Phe Ser Cys Tyr Ser 60 Leu Glu Val Asn Gly Ser 10 5 1

>210< 49 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي 49 <400> 0

Ser Cys Tyr Ser GIn Leu Glu Val Asn Gly Ser 0 His Ser Leu 10 5 1 15 >210< 50 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي

>220> >223< _سياق تخليقي <400> 50

Gln Leu Glu Val Asn Gly Ser GIn His Ser Leu Thr Cys Ala Phe 15 10 5 1 >210< 51 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي <400> 51

Asn Gly Ser GIn His Ser Leu Thr Cys Ala Phe Glu Asp Pro Asp 15 10 5 1 >210< 52 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي <400> 52

His Ser Leu Thr Cys Ala Phe Glu Asp Pro Asp Val Asn Thr Thr 15 10 5 1

>210< 53 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي >400< 53

Cys Ala Phe Glu Asp Pro Asp Val Asn Thr Thr Asn Leu Glu Phe 10 5 1 15 >210< 54 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< سياق صناعي

>220> >223< _سياق تخليقي <400> 54

Asp Pro Asp Val Asn Thr Thr Asn Leu Glu Phe Glu lle Cys Gly 15 10 5 1 >210< 55 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي 5 <220< >223< _سياق تخليقي <400> 55

Asn Thr Thr Asn Leu Glu Phe Glu lle Cys Gly Ala Leu Val Glu 10 5 1 56 <210> 5 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي 0 >220> >223< _سياق تخليقي <400> 56

Leu Glu Phe Glu lle Cys Gly Ala Leu Val Glu Val Lys Cys Leu 15 15 10 5 1 57 <210>

>211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي >220>

>223< _سياق تخليقي <400> 57 lle Cys Gly Ala Leu Val Glu Val Lys Cys Leu Asn Phe Arg Lys 10 10 5 1 58 <210>

15 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي >220>

‏_سياق تخليقي‎ <223> 58 >400<

Leu Val Glu Val Lys Cys Leu Asn Phe Arg Lys Leu Gin Glu lle 5 15 10 5 1 59 <210> >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي >220> ‎3b <223> 5‏ تخليقي >400< 59 ‎Lys Cys Leu Asn Phe Arg Lys Leu 60 Glu lle Tyr Phe lle Glu‏

10 5 1 60 <210> 15 <211> 5

PRT <212> ‏صناعي‎ Bbw <213> >220> ‏تخليقي‎ Bbw <223> 0 60 <400>

Phe Arg Lys Leu GIn Glu lle Tyr Phe lle Glu Thr Lys Lys Phe 15 10 5 1 15 61 <210> 15 <211>

PRT <212> ‏_سياق صناعي‎ <213> >220> ‏_سياق تخليقي‎ <223> 5 61 <400>

Gln Glu lle Tyr Phe lle Glu Thr Lys Lys Phe Leu Leu lle Gly 10 5 1 10 62 <210> 15 <211>

PRT <212> 15 ‏_سياق صناعي‎ <213> >220> ‏_سياق تخليقي‎ <223>

62 <400>

Phe lle Glu Thr Lys Lys Phe Leu Leu lle Gly Lys Ser Asn lle 10 5 1 5 63 <210> 15 <211>

PRT <212> 10 ‏_سياق صناعي‎ <213> >220> ‏_سياق تخليقي‎ <223> 15 63 <400>

Lys Lys Phe Leu Leu lle Gly Lys Ser Asn lle Cys Val Lys Val 15 10 5 1

64 <210> 15 <211>

PRT <212> 5 ‏_سياق صناعي‎ <213> >220> ‏_سياق تخليقي‎ <223> 64 <400>

Leu lle Gly Lys Ser Asn lle Cys Val Lys Val Gly Glu Lys Ser 10 5 1 15 65 <210> 15 <211>

PRT <212>

>213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي 65 <400>

Ser Asn lle Cys Val Lys Val Gly Glu Lys Ser Leu Thr Cys Lys 15 10 5 1 66 <210> <211>

PRT <212> 15 >213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي

66 <400>

Val Lys Val Gly Glu Lys Ser Leu Thr Cys Lys Lys lle Asp Leu 15 10 5 1 67 <210> 15 <211>

PRT <212> >213< سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي 67 >400< 5

Glu Lys Ser Leu Thr Cys Lys Lys lle Asp Leu Thr Thr lle Val 10 5 1

>210< 68 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي 68 <400> 0

Thr Cys Lys Lys lle Asp Leu Thr Thr lle Val Lys Pro Glu Ala 10 5 1 15 >210< 69 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي

>220> >223< _سياق تخليقي <400> 69 lle Asp Leu Thr Thr lle Val Lys Pro Glu Ala Pro Phe Asp Leu 15 10 5 1

>210< 70 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي

>220> >223< _سياق تخليقي >400< 70

Thr lle Val Lys Pro Glu Ala Pro Phe Asp Leu Ser Val lle Tyr 15 10 5 1 >210< 71 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي >400< 71

Pro Glu Ala Pro Phe Asp Leu Ser Val lle Tyr Arg Glu Gly Ala 15 10 5 1

>210< 72 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي >400< 72

Phe Asp Leu Ser Val lle Tyr Arg Glu Gly Ala Asn Asp Phe Val 10 5 1 15 >210< 73 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< سياق صناعي

>220> >223< _سياق تخليقي >400< 73

Val lle Tyr Arg Glu Gly Ala Asn Asp Phe Val Val Thr Phe Asn 15 10 5 1 >210< 74 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي 5 <220< >223< _سياق تخليقي >400< 74

Glu Gly Ala Asn Asp Phe Val Val Thr Phe Asn Thr Ser His Leu 10 5 1 75 <210> 5 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي 0 >220> >223< _سياق تخليقي >400< 75

Asp Phe Val Val Thr Phe Asn Thr Ser His Leu Gin Lys Lys Tyr 15 15 10 5 1 76 <210>

>211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي >400< 76

Thr Phe Asn Thr Ser His Leu GIn Lys Lys Tyr Val Lys Val Leu 10 10 5 1 77 <210> 15 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي >220>

‏_سياق تخليقي‎ <223> 77 <400>

Ser His Leu GIn Lys Lys Tyr Val Lys Val Leu Met His Asp Val 5 15 10 5 1 78 <210> >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي >220> ‎3b <223> 5‏ تخليقي >400< 78 ‎Lys Lys Tyr Val Lys Val Leu Met His Asp Val Ala Tyr Arg 0‏

10 5 1 79 <210> 15 <211> 5

PRT <212> ‏صناعي‎ Bbw <213> >220> ‏تخليقي‎ Bbw <223> 0 79 <400>

Lys Val Leu Met His Asp Val Ala Tyr Arg Gin Glu Lys Asp Glu 15 10 5 1 15 80 <210> 15 <211>

PRT <212> ‏_سياق صناعي‎ <213> >220> ‏_سياق تخليقي‎ <223> 5 80 >400<

His Asp Val Ala Tyr Arg 60 Glu Lys Asp Glu Asn Lys Trp Thr 10 5 1 10 81 <210> 15 <211>

PRT <212> 15 ‏_سياق صناعي‎ <213> >220> ‏_سياق تخليقي‎ <223>

81 <400>

Tyr Arg GIn Glu Lys Asp Glu Asn Lys Trp Thr His Val Asn Leu 10 5 1 5 82 <210> 15 <211>

PRT <212> 10 ‏_سياق صناعي‎ <213> >220> ‏_سياق تخليقي‎ <223> 15 82 <400>

Lys Asp Glu Asn Lys Trp Thr His Val Asn Leu Ser Ser Thr Lys 15 10 5 1

83 <210> 15 <211>

PRT <212> 5 >213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي 83 <400>

Lys Trp Thr His Val Asn Leu Ser Ser Thr Lys Leu Thr Leu Leu 10 5 1 15 84 <210> 15 <211>

PRT <212>

>213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي 84 <400>

Val Asn Leu Ser Ser Thr Lys Leu Thr Leu Leu Gin Arg Lys Leu 15 10 5 1 85 <210> <211>

PRT <212> 15 >213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي

85 >400<

Ser Thr Lys Leu Thr Leu Leu GIn Arg Lys Leu GIn Pro Ala Ala 15 10 5 1 86 <210> 15 <211>

PRT <212> >213< سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي 86 <400> 5

Thr Leu Leu GIn Arg Lys Leu GIn Pro Ala Ala Met Tyr Glu lle 10 5 1

>210< 87 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي 87 <400> 0

Arg Lys Leu GIn Pro Ala Ala Met Tyr Glu lle Lys Val Arg Ser 10 5 1 15 >210< 88 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي

>220> >223< _سياق تخليقي >400< 88

Pro Ala Ala Met Tyr Glu lle Lys Val Arg Ser lle Pro Asp His 15 10 5 1 >210< 89 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي >400< 89

Tyr Glu lle Lys Val Arg Ser lle Pro Asp His Tyr Phe Lys Gly 15 10 5 1 >210< 90 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي >400< 90

Val Arg Ser lle Pro Asp His Tyr Phe Lys Gly Phe Trp Ser Glu 15 10 5 1

>210< 91 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي >400< 91

Pro Asp His Tyr Phe Lys Gly Phe Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser 10 5 1 15 >210< 92 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< سياق صناعي

>220> >223< _سياق تخليقي >400< 92

Phe Lys Gly Phe Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Tyr Tyr Phe Arg 15 10 5 1 >210< 93 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي 5 <220< >223< _سياق تخليقي >400< 93

Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Tyr Tyr Phe Arg Thr Pro Glu lle 10 5 1 94 <210> 5 >211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي 0 >220> >223< _سياق تخليقي >400< 94

Ser Pro Ser Tyr Tyr Phe Arg Thr Pro Glu lle Asn Asn Ser Ser 15 15 10 5 1 95 <210>

>211< 15 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي >220> >223< _سياق تخليقي >400< 95

Tyr Phe Arg Thr Pro Glu lle Asn Asn Ser Ser Gly Glu Met Asp 10 10 5 1 96 <210> 15 >211< 8 ‎PRT <212>‏ >213< _سياق صناعي >220>

‏سياق تخليقي‎ <223> 96 <400>

Arg Lys Leu GIn Pro Ala Ala Met 5 1

Claims (1)

1. عناصر الحماية 1- جسم مضاد ‎antibody‏ أو شدفة ارتباط بمولد مضاد ‎antigen-binding fragment‏ منه يرتبط نوعياً ب 00127 وخاصة 60127 بشري ‎human‏ ؛ يشتمل على: - نطاق متغير للسلسلة الخفيفة للجسم المضاد ‎antibody light chain variable domain‏ يتكون من سياق يختار من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف ‎ID NO‏ 550: 9؛ سياق برقم تعريف ‎:.SEQ ID NO‏ 10؛ سياق برقم تعريف ‎:SEQ ID No.‏ 11؛ سياق برقم تعريف ‎:SEQ ID No.‏ 12؛و - نطاق متغير للسلسلة الثقيلة للجسم المضاد ‎antibody heavy chain variable domain‏ يتكون من السياق المحدد في سياق برقم تعريف ‎:SEQ ID No.‏ 7. 0 2- الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شدفة الارتباط بمولد ‎fragmentaliaall‏ 801960-170109 منه وفقاً لعنصر الحماية 1؛ حيث يكون الجسم المضاد ‎antibody‏ المذكور عبارة عن جسم مضاد أحادي النسيلة مؤنسن ‎.humanized monoclonal antibody‏ 3- الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شدفة الارتباط ‎alge‏ المضاد ‎antigen-binding fragment‏ منه وفقاً لعنصر الحماية 2 حيث يشتق النطاق الثابت للسلسلة الخفيفة ‎light chain constant‏ 07 للجسم المضاد ‎antibody‏ من نطاق ثابت لسلسلة خفيفة ‎light chain constant‏ ‎kappa domain‏ بشري. 4- الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شدفة الارتباط بمولد المضاد ‎antigen-binding fragment‏ منه وفقاً لعنصر الحماية 3 حيث يتكون النطاق الثابت للسلسلة الخفيفة ‎light chain‏ ‎constant domain‏ من السياق لسياق برقم تعريف ‎:.SEQ ID No‏ 27 أو 28. 5- الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شدفة الارتباط ‎alge‏ المضاد ‎antigen-binding fragment‏ منه وفقاً لعنصر الحماية 1؛ حيث يشتق النطاق الثابت للسلسلة الثقيلة ‎heavy chain‏

   ‎constant domain‏ للجسم المضاد ‎antibody‏ من النطاق الثابت للسلسلة الثقيلة ‎heavy‏ ‎chain constant domain‏ ل 61واء 62واء 963وا أو 4 البشري. 6- الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شدفة الارتباط ‎alge‏ المضاد ‎antigen-binding fragment‏ منه وفقاً لعنصر الحماية 5 حيث يتكون النطاق الثابت للسلسلة الثقيلة ‎heavy chain‏

   SEQ ‏للجسم المضاد /ا801000 من السياق مع السياق برقم التعريف ناا‎ constant domain .26 :.No antigen-binding fragment ‏المضاد‎ alge ‏أو شدفة الارتباط‎ antibody ‏الجسم المضاد‎ -7

   منه وفقاً لعنصر الحماية 1؛ ‎us‏ تشتمل السلسلة الخفيفة ‎light chain‏ للجسم المضاد ‎antibody‏ أو يتكون النطاق المتغير للسلسلة الخفيفة ‎light chain variable domain‏ للجسم المضاد ‎@ntibody‏ من سياق برقم التعريف ‎SEQ ID No.‏ : 12 وحيث يتكون النطاق المتغير للسلسلة الثقيلة ‎heavy chain variable domain‏ للجسم المضاد ‎antibody‏ من سياق برقم التعريف ‎:.SEQ ID No‏ 7.

   8— الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شدفة الارتباط بمولد المضاد ‎antigen-binding fragment‏ منه وفقاً لعنصر الحماية 1؛ حيث يكون عبارة عن مضاد ‎antagonist‏ لتأشير ‎IL-7R‏ المستحث ‎signalling induced‏ بواسطة ‎IL-7‏ والذي لا يحث تنشيط -3 ‎phosphatidylinositol‏ ‎kinase‏ و/أو مسار تأشير ‎.ERK signalling pathway‏

   9- الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شدفة الارتباط بمولد المضاد ‎antigen-binding fragment‏ منه وفقاً لعنصر الحماية 1؛ حيث يتعرف على حاتمة ‎epitope‏ تشتمل على سياق ‎sequence‏ ‏مأخوذ من الموقع 2ب ل 0127© و/أو يعطل ارتباط 60127 بسلسلة ‎YC‏ المشتركة لمستقبلات السيتوكين ‎.common chain of cytokine receptors‏

   0. الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شدفة الارتباط بمولد المضاد ‎antigen-binding fragment‏ منه وفقاً لعنصر الحماية 9 حيث يتعرف على صفيحة بيتا الثالثة ‎third beta sheet‏ على الأقل للموقع 2ب ل ‎.CD127‏ ‏5 11- الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شدفة الارتباط بمولد المضاد ‎antigen-binding‏

   00127 internalization ‏منه وفقاً لعنصر الحماية 1؛ حيث لا يحث استبطان‎ fragment ‏ب 7اا.‎ 1000060 internalization ‏و/أو يثبط استبطان 60127 المستحث‎ antigen-binding ‏أو شدفة الارتباط بمولد المضاد‎ antibody ‏الجسم المضاد‎ -2

   ‎fragment 0‏ منه وفقاً لعنصر الحماية 1؛ حيث لا يزيد من نضج ‎LIAN‏ التغصنية ‎maturation‏ ‎of dendritic cells‏ المستحث بواسطة ‎TSLP‏ ‏3- الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شدفة الارتباط بمولد المضاد ‎antigen-binding‏ ‏714 منه وفقاً لعنصر الحماية 1؛ حيث يكون له تأثير طويل الأمد ‎long-lasting effect‏

   ‏5 و/أو تأثير سربع ‎fast effect‏ 4- الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شدفة الارتباط بمولد المضاد ‎antigen-binding‏ ‏1 منه وفقاً لعنصر الحماية 13؛ حيث يكون له بشكل خاص تأثير موضعي سريع ‎fast local effect‏

   ‏20 ‏5- الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شدفة الارتباط بمولد المضاد ‎antigen-binding‏ ‏714 منه وفقاً لعنصر الحماية 1 حيث يرتبط نوعياً ب 60127 بشري بثابت ألفة ‎KD affinity constant‏ يقل عن 5 ‎xX‏ 9-10 مولار؛ كما قد يتم تحديده بواسطة التحليل بمستشعر حيوي ‎.biosensor analysis‏

   ‎25

   6- توليفة ‎cOmbination‏ من ‎lia‏ حمض نووي معزولة ‎isolated nucleic acid‏ ‎Molecules‏ تحمل شيفرة جسم مضاد ‎antibody‏ أو شدفة ارتباط بمولد مضاد ‎antigen—‏ ‎binding fragment‏ منه وفقاً لعنصر الحماية 1؛ وبشكل خاص جزيء حمض نووي معزول أول ‎first isolated nucleic acid molecule‏ يشتمل على أو يتكون من سياق ‎sequence‏ يتم اختياره من المجموعة المكونة من سياق برقم تعريف ‎1.SEQ ID NO‏ 15 سياق برقم تعريف

   ‎:.SEQ ID No‏ 16؛ سياق برقم تعريف ‎:.SEQ ID NO‏ 17 وسياق برقم تعريف ‎SEQ ID‏

   0.: 18؛ وجزيء حمض نووي معزول ثانٍ ‎second isolated nucleic acid molecule‏ يشتمل على أو يتكون من السياق برقم تعريف ‎:.SEQ ID No‏ 13. 0 17- تركيب صيدلي ‎pharmaceutical composition‏ يشتمل على الجسم المضاد ‎antibody‏ ‏أو شدفة الارتباط بمولد المضاد ‎antigen-binding fragment‏ منه وفقاً لعنصر الحماية 1؛ و/أو توليفة ‎combination‏ جزيئات الحمض النووي المعزولة ‎isolated nucleic acid‏ ‎molecules‏ وفقاً لعنصر الحماية 16 ومادة ناقلة صيدلية ‎isolated nucleic acid‏

   ‎.molecules‏ 8- التركيب الصيدلي ‎pharmaceutical composition‏ وفقاً لعنصر الحماية 17؛ حيث يكون ملائماً للإعطاء الموضعي ‎local administration‏ وبشكل خاص للإعطاء الموضعي تحت الجلد ‎docal subcutaneous‏ معوباً ‎enteric‏ أو فموياً ‎oral‏ وبشكل أخص للإعطاء إلى القولون ‎.colon‏ 9- طقم ‎Kit‏ يشتمل على تركيب صيدلي ‎pharmaceutical composition‏ وفقاً لعنصر الحماية 17 وأداة توصيل ‎delivery device‏

   0. طقم ‎kit‏ وفقا لعنصر الحماية 19( حيث تشتمل أداة التوصيل ‎delivery device‏ المذكورة 5 على محقنة معبأة مسبقاً ‎syringe‏ 026-1110 أو أداة بدون إبرة ‎.needle—free device‏

   1- الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شدفة الارتباط بمولد المضاد ‎antigen-binding‏ ‎fragment‏ منه وفقاً لعنصر الحماية 1؛ أو توليفة ‎combination‏ جزيئات الحمض النووي المعزولة ‎isolated nucleic acid‏ وفقاً لعنصر الحماية 16 أو التركيب الصيدلي ‎pharmaceutical composition‏ وفقاً لعنصر الحماية 17 للاستخدام في تصنيع دواء

   ‎.manufacture of a medicament 5‏ 2- الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شدفة الارتباط بمولد المضاد ‎antigen-binding‏ ‎fragment‏ منه وفقاً لعنصر الحماية 1؛ أو توليفة ‎combination‏ جزيئات الحمض النووي المعزولة ‎isolated nucleic acid molecules‏ وفقاً لعنصر الحماية 16 أو التركيب الصيدلي ‎pharmaceutical composition 0‏ وفقاً لعنصر الحماية 17 للاستخدام في تصنيع دواء ‎manufacture of a medicament‏ وفقاً لعنصر الحماية 21 للمعالجة ‎treatment‏ أو الوقاية 07 من رفض الأعضاء أو الأنسجة المزروعة ‎organ or tissue transplant‏ ‎rejection‏ أو مرض ‎disease‏ يختار من المجموعة المكونة من أمراض المناعة الذاتية ‎autoimmune diseases‏ ولا سيما التهاب المفاصل الروماتويدي ‎«rheumatoid arthritis‏ التصلب الجهازي ‎(systemic sclerosis‏ التصلب المتعدد ‎amultiple sclerosis‏ داء السكري من النوع الأول ‎type | diabetes‏ التهاب الدرقية الناجم عن المناعة الذاتية ‎autoimmune‏ ‎cthyroiditis‏ )453 الحمامية الجهازية ‎systemic lupus erythematosus‏ متلازمة شوغرن الأولية ‎primary sjégren syndrome‏ والأمراض الالتهابية ‎inflammatory diseases‏ وبشكل محدد مرض التهاب الأمعاء ‎(IBD) inflammatory bowel disease‏ والأكثر تحديداً 0 مرض كرون ‎Crohn’s disease‏ والتهاب القولون التقرحي ‎ulcerative colitis‏ والتهاب الدماغ والنخاع ‎encephalomyelitis‏ وأمراض الحساسية ‎allergic diseases‏ وأمراض السرطان ‎cancer diseases‏ والأمراض المرتبطة بالزرع وأمراض الجهاز التنفسي ‎transplantation‏

   ‎.and respiratory diseases‏

   :! )7 ‏(سياق برقم تعريف:‎ N13B2-VH QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAVSGFTLSDYYMAWIRQAPGKGL EWVSTISASGLRTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLOMNSLRAEDTA VYYCARPLSAHYGENYFDYWGQGTLVTVSS (4 ‏(سياق برقم تعريف:‎ N13B2-hVL3 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSEDIYQGLAWYQQKPGKAPKL LVYSANTLHIGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLOPEDFATYECQQYYDY PLAFGGGTKVEIK )٠١ ‏(سياق برقم تعريف:‎ N13B2-hVL4-V4SL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSEDIYQGLAWYQQKPGKAPKL LLYSANTLHIGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLOPEDFATYECQQYYDYP LAFGGGTKVEIK (VY ‏(سباق برقم تعريف:‎ N13B2-hVL5-F87Y DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSEDIYOGLAWYQQKPGKAPKL LVYSANTLHIGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLOPEDFATYYCQQYYDY PLAFGGGTKVEIK (VY ‏(سياق برقم تعريف:‎ N13B2-hVL6-V4BL-F87Y DIQMTQSPSSLSASVGDRYTITCRTSEDIYQGLAWYQQKPGKAPKL LLYSANTLHIGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLOPEDFATYYCQQYYDYP LAFGGGTKVEIK ١ ‏الشكل‎

   ‏مما‎

   ‎. 13823 1 ٠٠٠١ - »- 1382-38 77

   ,... —+N13B2-hVL4 F 3 ——N13B2-hVL5 / 2 Ave -=N13B2-hVL6 2 1 | 5 ‏ا‎ Maes : 4 7 2060 3 ٍ' 3 HE 7 ‏ض بحر‎ Yoo . Zea Cov oY rf oe tv A 4 a. ‏زمن المعالجة [يوم]‎ ‏الشكل ؟‎

   0 تك ‎—-N13B2-h3 =—N13B2-hVL3 —+N138B2-hVL4‏ .

   ‎v . —N13B2-hVL5 —=-N13B2-hVL6‏ ‎Poa * “i‏ ‎A,‏ ٍ .7 / ‎A 1 2 ~ ;‏ ‎oO ْ 7‏ 7 1 . = ‎i, ZY‏ و رف 3 و | 0 # ! بدا 'ْ = ب 4 ال 1 ‎x‏ ‏ع 3 ‎aes‏ ب ' الل ااا الما ااا ااا ال لل لا أ مسقت قر ‎ta‏ وما ‎Ye Yoo, ١ roa‏ 3« ا 1 اها اج ‎¥o#‏ ‏التركيز (نانوغرام/مل) الشكل + i a ‏هب‎ N13B2-h3 ‏سبي‎ N13B2-hVL3 ‏ا‎ ERA ~~ 011332-14 1 7 AN —— N13B2-hVLS5

   3 . 3 88 ‏-ت-‎ N13B2-hVL6 ‏ل ل‎ “1 "4 A, = 0 “> ‏ب‎ ‏ب لدم‎ . 2 : ‏اب لات ب‎ ٠ ‏طلا 9 اح‎ mmm ‏بر ب‎ DQ ‏ملل‎ ‎ys Yar Yaa ‏الجسم المضاد (نانوغرام/مل)‎ een ‏-ه‎ N13B2-h3 ‏يهب‎ N13B2-hVL3 ‏سه ال‎ N13B2-hVL4 ‏ب ال اا‎ . NN ‏ب‎ N13B2-hVL5 ™ ta. . of TR = Ny ‏و‎ N13B2-hVL6 LN uy Xx 58 ‏مج‎ ‎13 ‏ا‎ ‎0 ‏جو‎ + ٠ \ ry Fe son son see see oo oo om rom 300 200 ove oe son soo son so soe owe hd 2 Lhd ‏دي يدج‎ ” . . 4 3» Yaa A ‏ده‎ ‏الجسم العضاد (تانوغرام/مل)‎ ‏الشكل ؟‎

   ‏ا‎ ‏»مالا‎ 0 . ‏يع‎ (f=n)gisd = L(Y =n)N13B2 igG4 1

   =

   1. > A ‏ج*‎ ٠ 1 ْ ١ = | = I. > | > CURL ‏للك‎ Be BL BS Be Sa ‏تك‎ mils A s ©. % 2. LY, YR dA. Ley BOG ‏بعد‎ ‏الأيام بعد الحقن‎ ‏نا‎ ‎La IDR1 + IDR2-6 DRY : A « ! 8 8 = 3 “ 3 ay 8 © 8 0 2 i 0 | 2 IN 3 2) 8 0 SN & FB y u Nou 0 ‏اد‎ YF

   4.08 8 0 RE 1 8 oO 3 NN ‏ا[‎ ‎3 ¥ ou 0 SENN : SE 8 SY XN # fed Ol 3 BON 38 NN 7 8 ‏تي[ بي‎ HH ‏تخ‎ ‎3 NE 0 EON) BE ‏بي د‎ ‏الاي‎ 0 #* 0 EN NN NEN Eon) BE NN A N NOE EE OR NN § 8 AABS2BB 32257 | ‏محلول منظم | 33874 | م1586ول7ا‎ a. 18 50

   ‏ا‎ ‎z ‏ملقم كم‎ ٠١ 8 ‏ملعم/كثم‎ ٠١ 32257 effi? ‏قبن‎ ‎1 oes gs ‏ث5‎ IDRbog a ‏بعد 10 تب‎ - 3 8 a ‏ا‎ ‎3 0 1 3 1. . 0 53 8 i 3, 88 a 4 SR 9 a 8 8 a = = ‏ا ا‎ 8 RS 8 : = Si ‏ب 88 = ا اخ‎ : = 8 : 0 8 : 0 a 1 0 3 2 ‏ا‎ 1 0 8 ‏لله ا 8 2ل‎ os, 8 8 8 ‏ا‎ OE ‏الي بج‎ ‏ا اج‎ ‏اي‎ NN SX 0 3 SR 2 pay al Bn A nd 8 SE a WR Es 1 wh . BEE dee mi Biwi Ag ‏توبركولين بدون‎ Ag ‏تويركولين يدون‎ ‏ملثم/تثم‎ ٠١ : 9158 ‏لماك‎ ٠١١: 4 ‏الت‎ XN ‏قبل ثم‎ ‏فين ضع وو حا‎ To AN 10-5 ‏ممم ا‎ SRE IDRbeg ay WN ‏بع كه‎ + v , ‏نه‎ 2 3 2 ih \ 3 Ven 0 4, ‏ب‎ 3 8 ‏و‎ ‏و‎ 8 1 \ ‏ا‎ 8 - N : ‏0ل‎ . be A 8 Sy . Nz : N 8 Ki 8 - SN 8 ‏الا‎ 8 \ ‏عن احا بح الله :0 0 ده ل‎

   NN . 8 888 8 ‏نشي ب‎ SANE ‏اا‎ 8 RN Ag ‏توبركولين يدون‎ Ag ‏تويركرني بدون‎ * ‏تابع الشكل‎ iL-7 IL-7Ra ‏م15‎ ‎** FARR SHER 0 ‏تت ا ال ا‎ + EIEN 3 A TH ‏و سي‎ ; - i — a ‏سيج‎ 0 ‏ا » 0 ب م ا و‎ > 3 5 ‏ا 0 #8 يج لخ 1 = بو‎ JRE a Bod x re 8 oR 4A 3 9 4a Bog = 8 ‏ا‎ oO 8 B® § >, 8 ‏ب 5 لبر‎ ‏رج اك > ا‎ Qo N 3 Sy : Ww 8 I = ٠ 8 > ‏ل‎ : 0 ! : op 4 o£ i 8 . Os a & 3 = - a} = Ag 7 Fh 3 ‏ف‎ JA ‏اخ ا‎ ‏ال‎ wo? ‏على‎ 7 FO 57 Z A ‏و‎ ‎; , Ech wi id = FH ‏ادج‎ & Pi “ 7 7 Zz Ay FE A ‏كن‎ ‎aad “¥ 7 = EZ ey HE wr 7 A 7 : i ad EF Pace Zr iy =: Ho 4 5 = ‏تم‎ ‎= = a ot ‏ب ال“ ب‎ 5 ‏ب‎ 0 \ SN No 5, ‏ب‎ NG NN HEY يجرفتلا ‏مراضى التهاب القولون‎ Co Sh an ‏بر‎ ‎He us ; ” 0 “© — EC) ‏مرضي الذهاب الفولون التفرحي‎ (U0) > A ‏مرضى النهاب الفولون‎ HB) ‏غير المستجيبين تق غير المتنجييين‎ {18 Cpe 1 ‏غير‎ ‎“+ ‏الشكل‎

   ‎٠‏ دقائق علد لم 1]7 + ' ' ب ْ 0 ا ُ ‎at 4‏ : ‎E 2 TF‏ بم <= © 2 = ‎o 3 0 a -‏ ‎ed < <<‏ ب . : 2 ‎Yes = : LI = = —‏ كيلودالتون توب 7177777 الا )£2 كيلودالتون) ب ال#يْسه ‎pPI3K-p5S {Tyr199)‏ ..: ا ‎nn P=‏ (©*-3 كبلودالتون) ‎#٠ Er‏ كبلودالقون مسي اللي * ا كلودالتون ‎ie‏ ا ب ا ا ‎ob] PARTE‏ ‎ ———‏ ‎dugss lm EE‏ ‎wn‏ = ‎gen)‏ 44 كيلودالتونم ححص ‎ee‏ ‎ceeded 8‏ ‎ey a.‏ © كيلودالترون) ‎GAPDH‏ ا ا ا ا © كيلودالتون ‎TT aaa | +>-‏ ‎i‏ ‏ا ا الشكل ‎٠‏

   ١ Loe * 3 = = Teo = ‏سلا‎ _

   > «. ‏سال‎ 5 2 p ‏“اح‎ ‎Ysa ) 1 ‏يح‎ i) SF 0 Ee - ‏ب‎ ‏اوري‎ ‎A $ us Lie ii oo pe ‏عا‎ CN ‏ل‎ ٍ A 3 “XO bos Ss ‏مح‎ ‏الشكل م‎ i NOT = ‏تك‎ 9 2 ‏ا‎ 5 © 4 8 © 4 4 | ‏ا له‎ = = wt PPISKPSS | 0 ‏اد‎ ‎GAPDH | rn] ‏طم ب‎ PERK vw ¥ 4 A v : َ 3 ¥ & 4 ¥ . A * EA 3 ‏ض‎ ‎3 & + a ‏ل‎ ٍ 2 pe 3 0 A qd + 4 : eo 3 8 : a ‏ااا ات ا‎ SS ‏ا‎ ETL @ | : A Co ‏يو و‎ wg A " ie ® vy 3 ‏د اسار‎ ‏حي لحن حم ج وجي وما‎ ‏ب مل‎ | Rd ‏ان ب‎ A NR a4 oo a; . ‏الشكل 4 ل‎ 5 pSTATS ‏ل‎ + wo = y ‏م‎ ‎ad ‎Ww 3 2 I * a o ¢ « © ¥ ‏؟‎ ‎ًْ un 8 A w ten Jig AF SF © or - 7 WV OF ny VA ‏كي ا‎ ‏ب‎ ‎° > ٠١ ‏الشكل‎

   0 3 ¥ ¥ 3 ا ‎SEN 0‏ اا لا الا اا ا الا ا ل © 0 ‎NNR Bir NN‏ ا ‎AR Er‏ الال ‎Ne 2‏ ل ا ا ‎Foe’ EB La‏ ل ‎EE OR‏ ل : ‎ol‏ ا ا ‎Lae‏ اد المجموعة ؟ ‎feed EEN WN EN EN a‏ ‎RR Naa a 8# Ta 1 RR SLE‏ ‎FONE We Ss‏ اللا ا ‎Late‏ ; اا ل ا اد : الاي ا # ل ل ا ‎fa‏ ل ‎NE‏ ا 8 ‎a‏ : ‎FR GARY On RE EN NE‏ ‎BNE TE GA ae oe‏ ‎aaa ae ee‏ ا ل ل ‎a aE‏ ‎A LENE EE eee pos Ue‏ وا ار ‎RR RRR Nagas a ae‏ م ا ا ‎ANTE‏ ‎EE we‏ الك ل ا ‎Lez L1H smi eR Se‏ ‎BE‏ ال ا اا ال ‎Reseed 1١‏ ‎REE MR REE eT I‏ ل إ ا ا ال« الال ال ا اب اال ‎AN . e‏ ‎BN‏ ان ال ال ‎NO ee‏ ‎x No A Sere es A NER RR i ie eae fe‏ ‎Las‏ ‎A OMEN Ea) Ne‏ ‎Ee‏ = ا ‎iq LE‏ ا ال ال ل ل ‎AR SERRE‏ ‎FAN a me we aw EG Sen‏ ‎eee Sama EE ENE SR Ea‏ 0 ا = _١ًزمسا‏ ‎Na ONE ey RE‏ 0 ا ا ا ‎pane Dal La 5 Sa Re Baa‏ ‎EE RS PRS he‏ و 1 ‎RR‏ ‏اجعدا الحا جم مومه ‎SR a.

   SS‏ ا ال ‎RN as 0 NE‏ 0 ‎eg Eo‏ ا ا ا 0 ااا اا : ‎AR Nan ae eas BE a SI‏ ا ‎nn Nu ENT a He‏ ‎TANNER SEI Ga essa Ne pan‏ ~ ‎A NE Na He‏ ‎ME‏ ‎Cs Na Naa NEE EE aE EE NL WE‏ ا ا ا ا ا اا ل الا ‎BE‏ المجوعة + ‎Satie‏ اال ال ا ال اا ‎١‏ ‎NL‏ اا ‎EN NN DMR‏ ‎NNN Nh‏ ‎Le a ae‏ ‎WR NNN‏ ب * ¥ * ‎i * 5 :‏ ‎Ir ee : *¥‏ ’ ‎RRR FEY —‏ ‎i oa‏ ‎a 3 : ¢‏ ‎rT 0‏ لعا > ل هلم ‎SE‏ وأ ‎T‏ انها ‎wv peeps‏ 4 اليه |" 1 ‎FE‏ ¥ ‎١‏ ْ آٍ 3 3 ‎fel 1 VERY‏ 4 ‎wy :‏ ل ل ا ‎~q : 0 i Lad‏ ‎i i : ٍْ 2‏ بهم لحجم ‎ow Pog, 1 EE‏ 3 ‎i Peel bw PRY ; : : 0"‏ 03 إٍْ ‎i HE‏ :. 1 وان ل ا ‎Sd‏ ٌْْ ‎sls : :‏ ¥ ليج :8 ‎i i‏ د > ّ ‎Sond { Pel ٍْ‏ ‎Sage i > : i a 1‏ ‎A‏ لما : 8 مم ‎x 8 > . = ‘ . :‏ 7 1 = ¢ ¥ ¥ 3 ‎yr fr‏ اي ‎Hs‏ : المجمواعة + المجموعة * المجموعة ‎١‏ ‏الشكل ‎VA‏

   A 3 ‏ا‎

   الحاضهة الهيلة السعودية الملضية الفكرية ‎Swed Authority for intallentual Property pW‏ ‎RE‏ .¥ + \ ا 0 § ام 5 + < ‎Ne‏ ‎ge‏ ”بن اج > عي كي الج دا لي ايام ‎TEE‏ ‏ببح ةا ‎Nase eg‏ + ‎Ed - 2 -‏ 3 .++ .* وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها ‎of‏ سقوطها لمخالفتها ع لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف ع النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية. »> صادرة عن + ب ب ‎٠.‏ ب الهيئة السعودية للملكية الفكرية > > > ”+ ص ب ‎101١‏ .| لريا ‎1*١ uo‏ ؛ المملكة | لعربية | لسعودية ‎SAIP@SAIP.GOV.SA‏