RU98116622A - Способ получения rdspaa1 - Google Patents
Способ получения rdspaa1Info
- Publication number
- RU98116622A RU98116622A RU98116622/13A RU98116622A RU98116622A RU 98116622 A RU98116622 A RU 98116622A RU 98116622/13 A RU98116622/13 A RU 98116622/13A RU 98116622 A RU98116622 A RU 98116622A RU 98116622 A RU98116622 A RU 98116622A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- rdspa
- resin
- protein
- applying
- cation exchange
- Prior art date
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims 54
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 54
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims 34
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims 34
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 claims 30
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims 29
- 239000012539 chromatography resin Substances 0.000 claims 27
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 claims 27
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims 27
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 24
- 230000002209 hydrophobic Effects 0.000 claims 24
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims 21
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N HCl Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 18
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims 17
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 14
- 239000002609 media Substances 0.000 claims 13
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 12
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims 11
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N glycol Chemical group OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 10
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 claims 10
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims 9
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims 9
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims 9
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 9
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims 7
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims 7
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims 7
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims 7
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims 6
- ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N N,N'-Methylenebisacrylamide Chemical compound C=CC(=O)NCNC(=O)C=C ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 6
- STVZJERGLQHEKB-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol dimethacrylate Chemical group CC(=C)C(=O)OCCOC(=O)C(C)=C STVZJERGLQHEKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 5
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims 5
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims 5
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 claims 5
- 102000034327 globular proteins Human genes 0.000 claims 5
- 108091005889 globular proteins Proteins 0.000 claims 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims 5
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims 4
- FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N D-Mannitol Natural products OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N 0.000 claims 4
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N Mannitol Chemical group OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims 4
- 241001460678 Napo <wasp> Species 0.000 claims 4
- 239000004698 Polyethylene (PE) Substances 0.000 claims 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims 4
- 125000004181 carboxyalkyl group Chemical group 0.000 claims 4
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims 4
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims 4
- -1 polyethylene Polymers 0.000 claims 4
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 claims 4
- 229920000193 polymethacrylate Polymers 0.000 claims 4
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 4
- 239000000546 pharmaceutic aid Substances 0.000 claims 3
- 238000000034 method Methods 0.000 claims 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- ALPWRKFXEOAUDR-GKEJWYBXSA-M sodium;[(2R)-2,3-di(octadecanoyloxy)propyl] hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)([O-])=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC ALPWRKFXEOAUDR-GKEJWYBXSA-M 0.000 claims 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims 2
- 206010003178 Arterial thrombosis Diseases 0.000 claims 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 claims 1
- 102000001938 Plasminogen Activators Human genes 0.000 claims 1
- 108010001014 Plasminogen Activators Proteins 0.000 claims 1
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 claims 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000003636 conditioned culture media Substances 0.000 claims 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N ethene Chemical group C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 claims 1
Claims (1)
1. Способ очистки рекомбинантного активатора плазминогена слюны Desmondus rotundus (rDSPA α1) из биологической среды, включающий: (а) нанесение среды на катионообменную смолу при рН между 4 и 7; (b) промывание катионообменной смолы для удаления не принадлежащих к rDSPA α1 белков и небелковых загрязняющих примесей; (с) селективную элюцию связанного rDSPA α1 с катионообменной смолы; (d) нанесение элюента со стадии (с), содержащего rDSPA α1 на гидрофобно-взаимодействующую смолу при рН между 3 и 5; (е) промывание гидрофобно-взаимодействующей смолы для удаления не принадлежащего к rDSPA α1 белка и небелковых загрязняющих примесей; (f) селективную элюцию связанного rDSPA α1 с гидрофобно-взаимодействующей смолы; (g) нанесение элюента со стадии (f), содержащего rDSPA α1 на смолу для аффинной хроматографии при низком рН и низкой ионной силе; (h) промывание смолы для аффинной хроматографии для удаления не принадлежащего к rDSPA α1 белка и небелковых загрязняющих примесей; (i) селективную элюцию связанного rDSPA α1 со смолы для аффинной хроматографии с получением чистого rDSPA α1 в водном растворе.
2. Способ по п. 1, где биологическая среда представляет собой кондиционную среду.
3. Способ по п. 1, где катионообменная смола на стадии (а) включает частицы силикагеля, поперечно-сшитую агарозу или поперечно-сшитые полимеры полиметакрилата, дериватизированные карбоксильными и карбоксиалкильными группами.
4. Способ по п. 3, где катионообменная смола включает матрицу из частиц силикагеля, ковалентно связанных с полизтилениминсиланом, в котором аминогруппы полиэтилениминсилана дериватизированы карбоксильными группами.
5. Способ по п. 3, где условия загрузки на стадии (а) включают нанесение среды при рН между 4 и 7.
6. Способ по п. 4, где элюцию rDSPA α1 на стадии (с) выполняют с использованием буфера, содержащего 50 мМ натрий-фосфата и между 100 мМ и 500 мМ NaCl, или буфера эквивалентной ионной силы.
7. Способ по п. 1, где смола для гидрофобного взаимодействия на стадии (d) представляет собой незаряженную смолу, дериватизированную алкильными цепями из 1-10 углеродов в длину или арил-алкильными группами.
8. Способ по п. 7, где незаряженная смола включает частицы силикагеля, поперечно-сшитую агарозу или поперечно-сшитый полимер полиметакрилата.
9. Способ по п. 7, где незаряженная смола включает полужесткие сферические гранулы, синтезированные сополимеризацией этиленгликоля и полимеров метакрилатного типа, дериватизированных бутильными группами.
10. Способ по п. 9, где условия загрузки на стадии (d) включают нанесение элюента со стадии (с) при рН между 3 и 5.
11. Способ по п. 9, где условия загрузки на стадии (d) включают нанесение элюента со стадии (с) в 50 мМ натрийфосфата, 500 мМ NaCl с рН, доведенным до 4 фосфорной кислотой, или в буфере эквивалентной ионной силы.
12. Способ по п. 9, где элюцию на стадии (f) выполняют с использованием буфера, содержащего 20 мМ НС1 и содержащего концентрацию этанола более, чем 25%.
13. Способ по п. 12, где концентрация этанола находится между 28,5 и 30%.
14. Способ по п. 12, где концентрация этанола равна 29%.
15. Способ по п. 1, где смола для аффинной хроматографии со стадии (g) включает поперечно-сшитый сополимер аллилдекстрана и N,N'-метиленбисакриламида в форме гранул с диаметром между 25 и 75 мкм.
16. Способ по п. 15, где гранулы обладают способностью фракционировать глобулярные белки между 20000 и 8000000 кД.
17. Способ по п. 15, где условия загрузки на стадии (g) включают нанесение элюента со стадии (f) при рН между 1 и 4.
18. Способ по п. 15, где элюцию на стадии (i) осуществляют с использованием буфера, содержащего 200 мМ глицина с рН между 3 и 6, или буфера эквивалентной ионной силы.
19. Способ по п. 1, дополнительно включающий концентрирование водного раствора rDSPA α1.
20. Способ по п. 19, дополнительно включающий лиофилизацию концентрированного раствора rDSPA α1.
21. Способ по п. 1, дополнительно включающий концентрирование водного раствора rDSPA α1 и лиофилизацию концентрированного раствора rDSPA α1.
22. Способ по п. 1, где способ включает следующие стадии: (а) нанесение среды при рН между 4 и 7 на катионообменную смолу, включающую частицы силикагеля поперечно-сшитую агарозу или поперечно-сшитые полимеры полиметакрилата, дериватизированные карбоксильными или карбоксиалкильными группами; (b) промывание катионообменной смолы для удаления не принадлежащих к rDSPA α1 белков и небелковых загрязняющих примесей; (с) селективную элюцию связанного rDSPA α1 с катионообменной смолы с использованием буфера, содержащего 50 мМ натрийфосфата и между 100 мМ и 500 мМ NaCl или буфера эквивалентной ионной силы; (d) нанесение элюента со стадии (с), содержащего rDSPA α1 при рН между 3 и 5 на гидрофобно-взаимодействующую смолу, включающую частицы силикагеля, поперечно-сшитую агарозу или поперечно-сшитые полимеры полиметакрилата; (е) промывание гидрофобно-взаимодействующей смолы для удаления не принадлежащего к rDSPA α1 белка и небелковых загрязняющих примесей; (f) селективную элюцию связанного rDSPA α1 с гидрофобно-взаимодействующей смолы с использованием буфера, содержащего 20 мМ НСl и имеющего концентрацию этанола более, чем 25%; (g) нанесение элюента со стадии (f), содержащего rDSPA α1, при рН между 1 и 4 на смолу для аффинной хроматографии, включающую поперечно-сшитый полимер аллилдекстрана и N, N'-метиленбисакриламида в форме гранул с диметром между 25 и 75 мкм; (h) промывание смолы для аффинной хроматографии для удаления не принадлежащего к rDSPA α1 белка и небелковых загрязняющих примесей; (i) селективную элюцию связанного rDSPA α1 co смолы для аффинной хроматографии буфером, содержащим 200 мМ глицина, с рН между 3 и 6 или буфером эквивалентной ионной силы с получением чистого rDSPA α1 в водном растворе.
20. Способ по п. 19, дополнительно включающий лиофилизацию концентрированного раствора rDSPA α1.
21. Способ по п. 1, дополнительно включающий концентрирование водного раствора rDSPA α1 и лиофилизацию концентрированного раствора rDSPA α1.
22. Способ по п. 1, где способ включает следующие стадии: (а) нанесение среды при рН между 4 и 7 на катионообменную смолу, включающую частицы силикагеля поперечно-сшитую агарозу или поперечно-сшитые полимеры полиметакрилата, дериватизированные карбоксильными или карбоксиалкильными группами; (b) промывание катионообменной смолы для удаления не принадлежащих к rDSPA α1 белков и небелковых загрязняющих примесей; (с) селективную элюцию связанного rDSPA α1 с катионообменной смолы с использованием буфера, содержащего 50 мМ натрийфосфата и между 100 мМ и 500 мМ NaCl или буфера эквивалентной ионной силы; (d) нанесение элюента со стадии (с), содержащего rDSPA α1 при рН между 3 и 5 на гидрофобно-взаимодействующую смолу, включающую частицы силикагеля, поперечно-сшитую агарозу или поперечно-сшитые полимеры полиметакрилата; (е) промывание гидрофобно-взаимодействующей смолы для удаления не принадлежащего к rDSPA α1 белка и небелковых загрязняющих примесей; (f) селективную элюцию связанного rDSPA α1 с гидрофобно-взаимодействующей смолы с использованием буфера, содержащего 20 мМ НСl и имеющего концентрацию этанола более, чем 25%; (g) нанесение элюента со стадии (f), содержащего rDSPA α1, при рН между 1 и 4 на смолу для аффинной хроматографии, включающую поперечно-сшитый полимер аллилдекстрана и N, N'-метиленбисакриламида в форме гранул с диметром между 25 и 75 мкм; (h) промывание смолы для аффинной хроматографии для удаления не принадлежащего к rDSPA α1 белка и небелковых загрязняющих примесей; (i) селективную элюцию связанного rDSPA α1 co смолы для аффинной хроматографии буфером, содержащим 200 мМ глицина, с рН между 3 и 6 или буфером эквивалентной ионной силы с получением чистого rDSPA α1 в водном растворе.
23. Способ выделения и очистки rDSPA α1 из биологической среды, включающий: (а) нанесение среды при рН 5 на катионообменную смолу, включающую матрицу из частиц силикагеля, ковалентно связанных с полиэтилениминсиланом, в котором аминогруппы были дериватизированы карбоксильными группами; (b) промывание катионообменной смолы с рН 5 100 мМ NaOAc и 50 мМ NaPO4 с рН 7,5 для удаления не принадлежащего к rDSPA α1 белка и небелковых загрязняющих примесей; (с) элюцию связанного rDSPA α1 с катионообменной смолы буфером, содержащим 50 мМ натрийфосфата и 500 мМ натрийхлорида с рН 7,5; (d) нанесение элюента со стадии (с), содержащего rDSPA α1, при рН 4 на гидрофобно-взаимодействуюшую смолу, включающую полужесткие сферические гранулы, синтезированные путем сополимеризации этиленгликоля и полимеров метакрилатного типа, дериватизированных бутильными группами; (е) промывание гидрофобно-взаимодействующей смолы 20 мМ НСl, а затем 20 мМ НСl, содержащей 19% EtOH, для удаления белка, не принадлежащего к rDSPA α1, и небелковых загрязняющих примесей; (f) элюцию связанного rDSPA α1 с гидрофобно-взаимодействующей смолы буфером, содержащим 29% этанола и 20 мМ хлористоводородной кислоты, с рН 2,5; (g) нанесение элюента со стадии (f), содержащего rDSPA α1, при рН 2,5 на смолу для аффинной хроматографии, включающую поперечно-сшитый полимер аллилдекстрана и N,N'-метилен-бисакриламида, который фракционирует глобулярные белки между 20000 и 8000000 кД; (h) промывание смолы для аффинной хроматографии 20 мМ НСl для удаления белка, не принадлежащего к rDSPA α1, и небелковых загрязняющих примесей; (i) элюцию связанного rDSPA α1 со смолы для аффинной хроматографии буфером, содержащим 200 мМ глицина, с рН между 4 и 5, с получением чистого rDSPA α1 в водном растворе.
24. Рекомбинантный DSPA α1, очищенный способом, включающим следующие стадии: (а) нанесение среды на катионообменную смолу при рН между 4 и 7; (b) промывание катионообменной смолы для удаления не принадлежащих к rDSPA α1 белков и небелковых загрязняющих примесей; (с) селективную элюцию связанного rDSPA α1 с катионообменной смолы; (d) нанесение элюента со стадии (с), содержащего rDSPA α1, на гидрофобно-взаимодействующую смолу при рН между 3 и 5; (е) промывание гидрофобно-взаимодействующей смолы для удаления не принадлежащего к rDSPA α1 белка и небелковых загрязняющих примесей; (f) селективную элюцию связанного rDSPA α1 с гидрофобно-взаимодействующей смолы; (g) нанесение элюента со стадии (f), содержащего rDSPA α1, на смолу для аффинной хроматографии при низком рН и низкой ионной силе; (h) промывание смолы для аффинной хроматографии для удаления не принадлежащего к rDSPA α1 белка и небелковых загрязняющих примесей; (i) селективную элюцию связанного rDSPA α1 со смолы для аффинной хроматографии с получением чистого rDSPA α1 в водном растворе.
25. Рекомбинантный DSPA α1 по п. 24, очищенный способом, включающим следующие стадии: (а) нанесение среды с рН 5 на катионообменную смолу, включающую матрицу из частиц силикагеля, ковалентно связанных с полиэтилениминсиланом, в котором аминогруппы были дериватизированы карбоксильными группами; (b) промывание катионообменной смолы с рН 5 100 мМ NaOAc и 50 мМ NaPO4 с рН 7,5 для удаления не принадлежащего к rDSPA α1 белка и небелковых загрязняющих примесей; (с) элюцию связанного rDSPA α1 с катионообменной смолы буфером, содержащим 50 мМ натрийфосфата и 500 мМ натрийхлорида с рН 7,5; (d) нанесение элюента со стадии (с), содержащего rDSPA α1, при рН 4 на гидрофобно-взаимодействующую смолу, включающую полужесткие сферические гранулы, синтезированные путем сополимеризации этиленгликоля и полимеров метакрилатного типа, дериватизированных бутильными группами; (е) промывание гидрофобно-взаимодействующей смолы 20 мМ НСl, а затем 20 мМ НСl, содержащей 19% EtOH, для удаления белка, не принадлежащего к rDSPA α1, и небелковых загрязняющих примесей; (f) элюцию связанного rDSPA α1 с гидрофобно-взаимодействующей смолы буфером, содержащим 29% этанола и 20 мМ хлористоводородной кислоты с рН 2,5; (g) нанесение элюента со стадии (f), содержащего rDSPA α1, при рН 2,5, на смолу для аффинной хроматографии, включающую поперечно-сшитый полимер аллилдекстрана и N,N'-метилен-бисакриламида, который фракционирует глобулярные белки между 20000 и 8000000 кД; (h) промывание смолы для аффинной хроматографии 20 мМ НСl для удаления белка, не принадлежащего к rDSPA α1, и небелковых загрязняющих примесей; (i) элюцию связанного rDSPA α1 со смолы для аффинной хроматографии буфером, содержащим 200 мМ глицина, с рН между 4 и 5 с получением чистого rDSPA α1 в водном растворе.
26. Фармацевтическая композиция, содержащая rDSPA α1, очищенный способом, включающим следующие стадии: (а) нанесение среды на катионообменную смолу при рН между 4 и 7; (b) промывание катионообменной смолы для удаления не принадлежащих к rDSPA α1 белков и небелковых загрязняющих примесей; (с) селективную элюцию связанного rDSPA α1 с катионообменной смолы; (d) нанесение элюента со стадии (с), содержащего rDSPA α1, на гидрофобно-взаимодействующую смолу при рН между 3 и 5; (е) промывание гидрофобно-взаимодействующей смолы для удаления не принадлежащего к rDSPA α1 белка и небелковых загрязняющих примесей; (f) селективную элюцию связанного rDSPA α1 с гидрофобно-взаимодействующей смолы; (g) нанесение элюента со стадии (f), содержащего rDSPA α1, на смолу для аффинной хроматографии при низком рН и низкой ионной силе; (h) промывание смолы для аффинной хроматографии для удаления не принадлежащего к rDSPA α1 белка и небелковых загрязняющих примесей; (i) селективную элюцию rDSPA α1 со смолы для аффинной хроматографии с получением чистого rDSPA α1 в водном растворе.
27. Фармацевтическая композиция по п. 26, в которую добавляют фармацевтически приемлемый носитель.
28. Фармацевтическая композиция по п. 27, в которой наполнитель представляет собой маннитол.
29. Фармацевтическая композиция по п. 26, в которой rDSPA α1 очищен способом, включающим следующие стадии: (а) нанесение среды при рН 5 на катионообменную смолу, включающую матрицу из частиц силикагеля, ковалентно связанных с полиэтилениминсиланом, в котором аминогруппы силана дериватизированы карбоксильными группами; (b) промывание катионообменной смолы с рН 5 100 мМ NaOAc и 50 мМ NaPO4 с рН 7,5 для удаления не принадлежащего к rDSPA α1 белка и небелковых загрязняющих примесей; (с) элюцию связанного rDSPA α1 с катионообменной смолы буфером, содержащим 50 мМ натрийфосфата и 500 мМ натрийхлорида с рН 7,5; (d) нанесение элюента со стадии (с), содержащего rDSPA α1, при рН 4 на гидрофобно-взаимодействующую смолу, включающую полужесткие сферические гранулы, синтезированные путем сополимеризации этиленгликоля и полимеров метакрилатного типа, дериватизированных бутильными группами; (е) промывание гидрофобно-взаимодействующей смолы 20 мМ НСl, а затем 20 мМ НСl, содержащей 19% EtOH для удаления белка, не принадлежащего к rDSPA α1, и небелковых загрязняющих
примесей; (f) элюцию связанного rDSPA α1 с гидрофобно-взаимодействующей смолы буфером, содержащим 29% этанола и 20 мМ хлористоводородной кислоты с рН 2,5; (g) нанесение элюента со стадии (f), содержащего rDSPA α1, при рН 2,5 на смолу для аффинной хроматографии, включающую поперечно-сшитый полимер аллилдекстрана и N,N'-метилен-бисакриламида, который фракционирует глобулярные белки между 20000 и 8000000 кД; (h) промывание смолы для аффинной хроматографии 20 мМ НСl для удаления белка, не принадлежащего к rDSPA α1, и небелковых загрязняющих примесей; (i) элюцию связанного rDSPA α1 со смолы для аффинной хроматографии буфером, содержащим 200 мМ глицина с рН между 4 и 5, с получением чистого rDSPA α1 в водном растворе.
примесей; (f) элюцию связанного rDSPA α1 с гидрофобно-взаимодействующей смолы буфером, содержащим 29% этанола и 20 мМ хлористоводородной кислоты с рН 2,5; (g) нанесение элюента со стадии (f), содержащего rDSPA α1, при рН 2,5 на смолу для аффинной хроматографии, включающую поперечно-сшитый полимер аллилдекстрана и N,N'-метилен-бисакриламида, который фракционирует глобулярные белки между 20000 и 8000000 кД; (h) промывание смолы для аффинной хроматографии 20 мМ НСl для удаления белка, не принадлежащего к rDSPA α1, и небелковых загрязняющих примесей; (i) элюцию связанного rDSPA α1 со смолы для аффинной хроматографии буфером, содержащим 200 мМ глицина с рН между 4 и 5, с получением чистого rDSPA α1 в водном растворе.
30. Фармацевтическая композиция по п. 29, в которую добавляют фармацевтически приемлемый наполнитель.
31. Фармацевтическая композиция по п. 30, в которой наполнитель представляет собой маннитол.
32. Применение rDSPA α1, очищенного способом, включающим следующие стадии: (а) нанесение среды на катионообменную смолу при рН между 4 и 7; (b) промывание катионообменной смолы для удаления не принадлежащих к rDSPA α1 белков и небелковых загрязняющих примесей; (с) селективную элюцию связанного rDSPA α1 с катионообменной смолы; (d) нанесение элюента со стадии (с), содержащего rDSPA α1, на гидрофобно-взаимодействующую смолу при рН между 3 и 5;. (е) промывание гидрофобно-взаимодействующей смолы для удаления не принадлежащего к rDSPA α1 белка и небелковых загрязняющих примесей; (f) селективную элюцию связанного rDSPA α1 с гидрофобно-взаимодействующей смолы; (g) нанесение элюента со стадии (f), содержащего rDSPA α1, на смолу для аффинной хроматографии при низком рН и низкой ионной силе; (h) промывание смолы для аффинной хроматографии для удаления не принадлежащего к rDSPA α1 белка и небелковых загрязняющих примесей; (i) селективную элюцию связанного rDSPA α1 со смолы для аффинной хроматографии с получением чистого rDSPA α1 в водном растворе для изготовления лекарства для лечения людей с артериальными и венозными тромбозами.
33. Применение по п. 32, при котором добавляют фармацевтически приемлемый наполнитель.
34. Применение по п. 33, при котором наполнитель представляет собой маннитол.
35. Применение по п. 32, при котором очищают способом, включающим следующие стадии: (а) нанесение среды при рН 5 на катионообменную смолу, включающую матрицу из частиц силикагеля, ковалентно связанных с полиэтилениминсиланом, в котором аминогруппы дериватизированы карбоксильными группами, что приводит к селективному связыванию rDSPA α1 катионообменной смолой; (b) промывание катионообменной смолы с рН 5 100 мМ NaOAc и 50 мМ NaPO4 с рН 7,5 для удаления белка, не принадлежащего к rDSPA α1, и небелковых загрязняющих примесей; (с) элюцию связанного rDSPA α1 с катионообменной смолы буфером, содержащим 50 мМ натрийфосфата и 500 мМ натрийхлорида, с рН 7,5; (d) нанесение элюента со стадии (с), содержащего rDSPA α1, при рН 4 на гидрофобно-взаимодействующую смолу, включающую полужесткие сферические гранулы, синтезированные сополимеризацией этиленгликоля и полимеров метакрилатного типа, дериватизированных бутильными группами, что приводит к селективному связыванию rDSPA α1 с гидрофобно-взаимодействующей смолой; (е) промывание гидрофобно-взаимодействующей смолы 20 мМ НСl, а затем 20 мМ НСl, содержащей 19% EtOH для удаления белка, не принадлежащего к rDSPA α1, и небелковых загрязняющих примесей; (f) элюцию связанного rDSPA α1 с гидрофобно-взаимодействующей смолы буфером, содержащим 29% этанола и 20 мМ хлористоводородной кислоты с рН 2,5; (g) нанесение элюента со стадии (f), содержащего rDSPA α1, при рН 2,5 на смолу для аффинной хроматографии, включающую поперечно-сшитый полимер аллилдекстрана и N,N'-метилен-бисакриламида, который фракционирует глобулярные белки между 20000 и 8000000 кД, что приводит к селективному связыванию rDSPA α1 со смолой для аффинной хроматографии; (h) промывание смолы для аффинной хроматографии 20 мМ НСl для удаления белка, не принадлежащего к rDSPA α1, и небелковых загрязняющих примесей; (i) элюцию связанного rDSPA α1 со смолы для аффинной хроматографии буфером, содержащим 200 мМ глицина с рН между 4 и 5, для получения практически чистого rDSPA α1 в водном растворе.
36. Применение по п. 35, при котором добавляют фармацевтически приемлемый наполнитель.
37. Применение по п. 36, при котором наполнитель представляет собой маннитол.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/597,059 | 1996-02-05 | ||
| US08/597,059 US5731186A (en) | 1996-02-05 | 1996-02-05 | Method for the production of rDSPA α1 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU98116622A true RU98116622A (ru) | 2000-06-27 |
| RU2223315C2 RU2223315C2 (ru) | 2004-02-10 |
Family
ID=24389906
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU98116622/12A RU2223315C2 (ru) | 1996-02-05 | 1997-01-31 | РЕКОМБИНАНТНЫЙ АКТИВАТОР α1 ПЛАЗМИНОГЕНА СЛЮНЫ desmondus rotundus (rDSPAα1), СПОСОБ ЕГО ОЧИСТКИ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ЕГО ОСНОВЕ |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5731186A (ru) |
| EP (1) | EP1015568B1 (ru) |
| JP (1) | JP3805378B2 (ru) |
| KR (1) | KR100508043B1 (ru) |
| CN (1) | CN1242059C (ru) |
| AT (1) | ATE233316T1 (ru) |
| AU (1) | AU706286B2 (ru) |
| CZ (1) | CZ294827B6 (ru) |
| DE (1) | DE69719382T2 (ru) |
| DK (1) | DK1015568T3 (ru) |
| ES (1) | ES2193349T3 (ru) |
| HK (1) | HK1018795A1 (ru) |
| HU (1) | HU223902B1 (ru) |
| IL (1) | IL124952A (ru) |
| NO (1) | NO322527B1 (ru) |
| PL (1) | PL186410B1 (ru) |
| PT (1) | PT1015568E (ru) |
| RU (1) | RU2223315C2 (ru) |
| SK (1) | SK284179B6 (ru) |
| TW (1) | TW385313B (ru) |
| UA (1) | UA62925C2 (ru) |
| WO (1) | WO1997029188A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA97948B (ru) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100436655B1 (ko) * | 2001-07-25 | 2004-06-22 | (주)엘피스바이오텍 | 광범위한 단백질에 적용할 수 있는 단백질의 농축 및정제 방법 |
| DE10153601A1 (de) * | 2001-11-02 | 2003-05-22 | Paion Gmbh | DSPA zur Behandlung von Schlaganfall |
| WO2007134617A1 (en) * | 2006-05-19 | 2007-11-29 | Paion Deutschland Gmbh | Use of desmodus salivary plasminogen activator (dspa) for treating venous thromboembolism |
| TWI482628B (zh) * | 2007-10-18 | 2015-05-01 | Lundbeck & Co As H | 新穎之血栓溶解病患次群 |
| WO2011107299A2 (en) * | 2010-04-16 | 2011-09-09 | Paion Deutschland Gmbh | Method for the manufacture of recombinant dspa alpha1 |
| US20120258519A1 (en) * | 2011-04-10 | 2012-10-11 | Therapeutic Proteins Inc. | Protein Harvesting |
| KR102566292B1 (ko) | 2015-06-05 | 2023-08-10 | 더블유.알. 그레이스 앤드 캄파니-콘. | 흡착성 바이오프로세싱 정화제와 이의 제조 및 사용 방법 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3512910A1 (de) * | 1985-04-11 | 1986-10-16 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur reinigung von plasminogenaktivatoren |
| US4721572A (en) * | 1985-07-12 | 1988-01-26 | Miles Laboratories, Inc. | Purfication of blood clotting factors and other blood proteins on non-carbohydrate sulfated matrices |
| US4898825A (en) * | 1986-05-07 | 1990-02-06 | Mitsui Toatsu Chemicals, Incorporated | Methods for purification of single-chain and double-chain tissue plasminogen activator |
| JPS6463378A (en) * | 1986-08-11 | 1989-03-09 | Mitsui Toatsu Chemicals | Separation of single stranded tpa and double standard tpa |
| US4929560A (en) * | 1988-02-03 | 1990-05-29 | Damon Biotech, Inc. | Recovery of tissue plasminogen activator |
| DK176140B1 (da) * | 1988-07-20 | 2006-09-25 | Schering Ag Patentabteilung | Flagermusspyt-plasminogenaktivatorer |
| WO1990009438A1 (en) * | 1989-02-13 | 1990-08-23 | Schering Aktiengesellschaft Berlin Und Bergkamen | Novel thrombolytic |
| DE3943241A1 (de) * | 1989-12-22 | 1991-06-27 | Schering Ag | Thrombolytisch wirkendes kombinationspraeparat |
| US5141862A (en) * | 1990-04-17 | 1992-08-25 | Smithkline Beecham Corporation | Method of purifying tpa or plasminogen activator using a tripeptide of the formula: -X-Y-argininal wherein X and Y are selected from the group consisting of pro,phe,trp and tyr |
-
1996
- 1996-02-05 US US08/597,059 patent/US5731186A/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-01-31 HU HU9901029A patent/HU223902B1/hu active IP Right Grant
- 1997-01-31 CN CNB971920818A patent/CN1242059C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1997-01-31 SK SK1032-98A patent/SK284179B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1997-01-31 RU RU98116622/12A patent/RU2223315C2/ru active
- 1997-01-31 DK DK97901624T patent/DK1015568T3/da active
- 1997-01-31 CZ CZ19982455A patent/CZ294827B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-01-31 EP EP97901624A patent/EP1015568B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-01-31 ES ES97901624T patent/ES2193349T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-01-31 WO PCT/EP1997/000441 patent/WO1997029188A1/en active IP Right Grant
- 1997-01-31 AU AU15462/97A patent/AU706286B2/en not_active Expired
- 1997-01-31 JP JP52796297A patent/JP3805378B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1997-01-31 IL IL12495297A patent/IL124952A/en not_active IP Right Cessation
- 1997-01-31 DE DE69719382T patent/DE69719382T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-01-31 PT PT97901624T patent/PT1015568E/pt unknown
- 1997-01-31 PL PL97328146A patent/PL186410B1/pl unknown
- 1997-01-31 KR KR10-1998-0706036A patent/KR100508043B1/ko active IP Right Grant
- 1997-01-31 AT AT97901624T patent/ATE233316T1/de active
- 1997-01-31 UA UA98094695A patent/UA62925C2/uk unknown
- 1997-02-05 ZA ZA9700948A patent/ZA97948B/xx unknown
- 1997-08-12 TW TW086111545A patent/TW385313B/zh not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-08-04 NO NO19983579A patent/NO322527B1/no not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-09-02 HK HK99103794A patent/HK1018795A1/xx not_active IP Right Cessation
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4675384A (en) | Fractionation/purification of plasma by ion exchange chromatography | |
| ES2070919T5 (es) | Separacion cromatografica de las proteinas del plasma, principalmente del factor viii, del factor de willebrand de la fibronectina y del fibrinogeno. | |
| Olsson et al. | Isolation and characterization of a tumor necrosis factor binding protein from urine | |
| JP3435668B2 (ja) | 高純度で治療用に適した標準化ヒト フオン・ビルブラント因子濃厚液の工業規模製造の方法 | |
| US4359389A (en) | Method for the purification of interferon | |
| JPH04504720A (ja) | タンパク質精製のための方法 | |
| JPS6187631A (ja) | 静脈内に注射可能な免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）及びその製法 | |
| EP0211895A1 (en) | Method for purifying antihemophilic factor | |
| JPH11506603A (ja) | 新規因子ｉｘ精製法 | |
| PL164754B1 (pl) | Sposób wytwarzania koncentratu kompleksu czynnika krzepniecia krwi VIII z czynnikiemWlllebranda PL PL PL PL PL | |
| US8530698B2 (en) | Packing material for liquid chromatography and process for separation and purification of biopolymer by means of the packing material | |
| JP4250769B2 (ja) | 高度に精製されたｖＷＦまたは因子ＶＩＩＩ／ｖＷＦ複合体を得る方法 | |
| RU98116622A (ru) | Способ получения rdspaa1 | |
| US5853714A (en) | Method for purification of IL-12 | |
| JPS58201794A (ja) | ヒトインターフェロンβの濃縮精製法 | |
| JP2931630B2 (ja) | 熱処理された因子▲ｖｉｉｉ▼のゲル▲ろ▼過 | |
| Harris et al. | Purification of human serum angiotensin I-converting enzyme by affinity chromatography | |
| US4990597A (en) | Process for the purification of placental tissue protein PP4 | |
| US5760183A (en) | Process for the manufacture of very high-purity antithaemophilic factor (FVIIIC), and von Willebrand factor, and pharmaceutical compositions containing same | |
| JP2010145240A (ja) | 疎水性アミノ酸又はアミノメチル安息香酸を固定化した液体クロマトグラフィー用充填剤、及びそれを用いた生体高分子の分離精製乃至捕集回収方法 | |
| US6414125B1 (en) | Method of chromatographically purifying or fractionating, respectively, von Willebrand factor from a VWF-containing starting material | |
| US20010019839A1 (en) | Method for production of a C1 esterase inhibitor (C1-INH)-containing composition | |
| JP3615595B2 (ja) | Ｃ１−エステラーゼ阻害剤濃厚物（ｃ１−ｉｎｈ）の調製法、および治療的使用のための得られた濃厚物 | |
| US4510248A (en) | Process for concentrating and purifying human urinary kallikrein | |
| WO1995004077A1 (fr) | Procede de purification du plasminogene |