JPH11506603A - 新規因子ix精製法 - Google Patents
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Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1.溶液中の因子IXの精製方法であって、下記工程: 該溶液をアニオン交換樹脂に適用すること、 該アニオン交換樹脂を第1の溶離液で溶離して第1の溶離物を得ること、 該溶離物をヘパリン様樹脂に適用すること、 該ヘパリン様樹脂を第2の溶離液で溶離して第2の溶離物を得ること、 該第2の溶離物をヒドロキシアパタイト樹脂に適用すること、次いで、 該ヒドロキシアパタイト樹脂を第3の溶離液で溶離して第3の溶離物を得るこ と を特徴とする方法。 2.下記工程: 該第1の溶離液で溶離する前に該アニオン交換樹脂を第1の洗浄液で洗浄する こと をさらに特徴とする請求項1の方法。 3.該第1の洗浄液が、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウム、リ ン酸ナトリウムまたはリン酸カリウムからなる群より選択される溶液を含むもの である請求項2の方法。 4.該第1の洗浄液が200mM塩化ナトリウムである請求項3の方法。 5.下記工程: 該第3の溶離物を固定化金属アフィニティー樹脂に適用し、次いで、 該固定化金属アフィニティー樹脂を第4の溶離液で溶離して第4の溶離物を得 ること をさらに特徴とする請求項1の方法。 6.該第1の溶離液が、カルシウム、マグネシウム、マンガン、ストロンチウ ム、亜鉛、コバルトおよびニッケルからなる群より選択される2価カチオンを含 むものである請求項1の方法。 7.該第1の溶離液が10mMカルシウムである請求項6の方法。 8.該アニオン交換樹脂が、ジエチルアミノエタン(DEAE)、ポリエチレ ンイミン(PEI)および4級アミノエタン(QAE)からなる群より選択され るメンバーである正に帯電した基を有するものである請求項1の方法。 9.該アニオン交換樹脂がQ-Sepharose Fast Flowである請求項8の方法。 10.該ヘパリン様樹脂が、ヘパリン、セルロースの硫酸エステル、スルフィ ルプロピル(SP)、カルボキシルおよびカルボキシメチルからなる群より選択 されるメンバーである負に帯電した基を有するものである請求項1の方法。 11.該ヘパリン様樹脂がMatrex Cellufine Sulfateである請求項10の方法 。 12.該第2の溶離液が、塩化ナトリウムおよび塩化カリウムからなる群より 選択されるメンバーである請求項1の方法。 13.該第2の溶離液が50mM Tris,0.50M NaCl,pH8.0で ある請求項12の方法。 14.該第3の溶離液が、リン酸塩および硫酸塩からなる群から選択されるメ ンバーである請求項1の方法。 15.該第3の溶離液が0.5Mリン酸カリウム,0.2M NaCl,pH7.2 である請求項14記載の方法。 16.該ヒドロキシアパタイト樹脂が、セラミック−ヒドロキシアパタイトお よびBioGel-HTからなる群より選択されるメンバーである請求項1の方法。 17.該ヒドロキシアパタイト樹脂がセラミック−ヒドロキシアパタイトであ る請求項16の方法。 18.該固定化金属アフィニティー樹脂が、Fractogel-EMD-Chelate、Chelati ng-Sepharose、Matrex Cellufine ChelateおよびPOROS 20MCからなる群より選択 されるメンバーである請求項5の方法。 19.該固定化金属アフィニティー樹脂がFractogel-EMD-Chelateである請求 項5の方法。 20.該第4の溶離液が置換物質である請求項5の方法。 21.該置換物質が、イミダゾール、EDTA、グリシン、ヒスチジンおよび Trisからなる群より選択されるメンバーである請求項20の方法。 22.溶液中の因子IXの精製方法であって、下記工程: 該溶液をアニオン交換樹脂に適用すること、 該アニオン交換樹脂を第1の溶離液で溶離して第1の溶離物を得ること、 該第1の溶離物をヒドロキシアパタイト樹脂に適用すること、次いで、 該ヒドロキシアパタイト樹脂を第3の溶離液で溶離して第3の溶離物を得るこ と を特徴とする方法。 23.下記工程: 該第1の溶離液で溶離する前に該アニオン交換樹脂を第1の洗浄液で洗浄する こと をさらに特徴とする請求項22の方法。 24.下記工程: 該第3の溶離物を固定化金属アフィニティー樹脂に結合させること、次いで、 該固定化金属アフィニティー樹脂を第4の溶離液で溶離して第4の溶離物を得 ること をさらに特徴とする請求項22の方法。 25.溶液中の因子IXの精製方法であって、下記工程: 該溶液をアニオン交換樹脂に適用すること、 該アニオン交換樹脂を第1の洗浄液で洗浄すること、次いで、 該アニオン交換樹脂を第1の溶離液で溶離して第1の溶離物を得ること を特徴とし、該第1の溶離液が該第1の洗浄液の導電率および該溶液の導電率の うち高い方よりも低い導電率を有するのもである方法。 26.該第1の洗浄液が、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウム、 リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウムからなる群より選択される溶液を含むも のである請求項25の方法。 27.該第1の洗浄液が200mM塩化ナトリウムである請求項26の方法。 28.溶液中の因子IXの精製方法であって、下記工程: 該溶液をヒドロキシアパタイト樹脂に適用すること、 該ヒドロキシアパタイト樹脂を第1のリン酸塩バッファーで洗浄して不活性形 態の因子IXを除去すること、 該ヒドロキシアパタイト樹脂を第2のリン酸塩バッファーで溶離すること を特徴とし、該第2のリン酸塩バッファーが該第1のリン酸塩バッファーよりも 高い濃度のリン酸塩濃度を有するものである方法。 29.該第1のリン酸塩バッファーが硫酸塩バッファーである請求項28の方 法。 30.該第1のリン酸塩バッファーが50mMリン酸カリウム,0.185M NaCl,pH7.2であり、該第2のリン酸塩バッファーが0.5Mリン酸カリ ウム,0.2M NaCl,pH7.2である請求項28の方法。 31.請求項1の方法により製造される因子IX。 32.請求項5の方法により製造される因子IX。 33.請求項22の方法により製造される因子IX。 34.請求項24の方法により製造される因子IX。 35.請求項25の方法により製造される因子IX。 36.請求項28の方法により製造される因子IX。 37.240〜400U/mgの比活性を有する因子IX。 38.該比活性が約240U/mgである請求項37の因子IX。
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