JP2014528966A - 陰イオン交換クロマトグラフィによるタンパク質の精製方法 - Google Patents
陰イオン交換クロマトグラフィによるタンパク質の精製方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2014528966A JP2014528966A JP2014535103A JP2014535103A JP2014528966A JP 2014528966 A JP2014528966 A JP 2014528966A JP 2014535103 A JP2014535103 A JP 2014535103A JP 2014535103 A JP2014535103 A JP 2014535103A JP 2014528966 A JP2014528966 A JP 2014528966A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- divalent cation
- anion exchange
- binding protein
- protein
- buffer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 99
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 title description 4
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 title 1
- 102000029950 cation binding proteins Human genes 0.000 claims abstract description 70
- 108091014789 cation binding proteins Proteins 0.000 claims abstract description 70
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 claims abstract description 51
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 63
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 38
- 102100023804 Coagulation factor VII Human genes 0.000 claims description 37
- 108010023321 Factor VII Proteins 0.000 claims description 37
- 229940012413 factor vii Drugs 0.000 claims description 37
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 23
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 claims description 23
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 claims description 20
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 claims description 20
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 20
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 claims description 20
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 claims description 20
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 15
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 14
- 108091005605 Vitamin K-dependent proteins Proteins 0.000 claims description 9
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 7
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 claims description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims description 6
- DAZXVJBJRMWXJP-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylethylamine Chemical compound CCN(C)C DAZXVJBJRMWXJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 claims description 5
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 claims description 5
- -1 aminohexyl Chemical group 0.000 claims description 5
- 102000000412 Annexin Human genes 0.000 claims description 4
- 108050008874 Annexin Proteins 0.000 claims description 4
- 102000005701 Calcium-Binding Proteins Human genes 0.000 claims description 4
- 108010045403 Calcium-Binding Proteins Proteins 0.000 claims description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 3
- 102000000584 Calmodulin Human genes 0.000 claims description 3
- 108010041952 Calmodulin Proteins 0.000 claims description 3
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical group CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 claims description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 3
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 claims description 3
- 102000017975 Protein C Human genes 0.000 claims description 3
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 claims description 3
- 102000029301 Protein S Human genes 0.000 claims description 3
- 108010066124 Protein S Proteins 0.000 claims description 3
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 claims description 3
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 claims description 3
- 125000004103 aminoalkyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- PXXJHWLDUBFPOL-UHFFFAOYSA-N benzamidine Chemical compound NC(=N)C1=CC=CC=C1 PXXJHWLDUBFPOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M cobalt(2+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+2].N#[C-].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M 0.000 claims description 3
- 229940012426 factor x Drugs 0.000 claims description 3
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 claims description 3
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 claims description 3
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 claims description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 45
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 48
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 43
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 43
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 42
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 42
- 239000000047 product Substances 0.000 description 41
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 24
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 23
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 21
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 21
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 19
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 19
- 239000012564 Q sepharose fast flow resin Substances 0.000 description 18
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 17
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 16
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 15
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 14
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 10
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 10
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 7
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 6
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 6
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 6
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 6
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 6
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 6
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 5
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 4
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 4
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 4
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 4
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 3
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 238000011118 depth filtration Methods 0.000 description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 2
- DBXNUXBLKRLWFA-UHFFFAOYSA-N N-(2-acetamido)-2-aminoethanesulfonic acid Chemical compound NC(=O)CNCCS(O)(=O)=O DBXNUXBLKRLWFA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 2
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 2
- 229930003448 Vitamin K Natural products 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940099816 human factor vii Drugs 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 description 2
- 239000011712 vitamin K Substances 0.000 description 2
- 150000003721 vitamin K derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 229940046010 vitamin k Drugs 0.000 description 2
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007991 ACES buffer Substances 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000019838 Blood disease Diseases 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108010048049 Factor IXa Proteins 0.000 description 1
- 108010054265 Factor VIIa Proteins 0.000 description 1
- 108010071241 Factor XIIa Proteins 0.000 description 1
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 description 1
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 229940006612 barium citrate Drugs 0.000 description 1
- 229910001422 barium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- PAVWOHWZXOQYDB-UHFFFAOYSA-H barium(2+);2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate Chemical compound [Ba+2].[Ba+2].[Ba+2].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O PAVWOHWZXOQYDB-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical compound OC(O)=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000012459 cleaning agent Substances 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940012414 factor viia Drugs 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Polymers 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000018706 hematopoietic system disease Diseases 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000001254 nonsecretory effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000193 polymethacrylate Polymers 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 229910001427 strontium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229920002994 synthetic fiber Polymers 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- PIEPQKCYPFFYMG-UHFFFAOYSA-N tris acetate Chemical compound CC(O)=O.OCC(N)(CO)CO PIEPQKCYPFFYMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/145—Extraction; Separation; Purification by extraction or solubilisation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/18—Ion-exchange chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4721—Lipocortins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/473—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used alpha-Glycoproteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6432—Coagulation factor Xa (3.4.21.6)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6437—Coagulation factor VIIa (3.4.21.21)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/644—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21021—Coagulation factor VIIa (3.4.21.21)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21022—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
Abstract
Description
本発明は、以下の工程を含む二価カチオン結合タンパク質の精製方法に関する:
(a)第1陰イオン交換樹脂物質に、二価カチオンの非存在下でローディング緩衝液中の二価カチオン結合タンパク質をロードし、所望により二価カチオンの非存在下、ロードした陰イオン交換樹脂物質を洗浄用緩衝液で洗浄し、
(b)二価カチオン結合タンパク質を対アニオンを含む溶離剤で溶出して二価カチオン結合タンパク質含有溶出液を得、
(c)工程(b)で得た溶出液に少なくとも1の二価カチオンを添加してpHを増加させ、
(d)第2陰イオン交換樹脂物質に工程(c)で得た添加溶出液をロードし、
(e)二価カチオン結合タンパク質を含むフロースルーを回収する。
2.工程(c)において該添加溶出液のpHを少なくとも0.5pH単位増加させる項目1記載の方法。
3.工程(b)の溶離剤の溶離剤が、工程(a)のローディング緩衝液、および洗浄工程を行う場合は工程(a)の洗浄用緩衝液の伝導度より高い伝導度を有し、工程(c)の該添加溶出液が工程(b)の溶離剤の伝導度より低い伝導度を有する項目1または2記載の方法。
4.工程(c)の少なくとも1の二価カチオンが、Ca2+、Be2+、Ba2+、Mg2+、Mn2+、Sr2+、Zn2+、Co2+、Ni2+、およびCu2+、またはその組み合わせからなる群から選ばれる項目1〜3のいずれかに記載の方法。
5.第1および第2陰イオン交換樹脂物質が、それぞれ独立してジエチルアミノエタン(DEAE)、ジメチルアミノエタン(DMAE)、トリメチルアミノエチル(TMAE)、ポリエチレンイミン(PEI)、第4級アミノアルキル、第4級アミノエタン(QAE)、および第4級アンモニウム(Q)からなる群から選ばれる正荷電基を有する項目1〜4のいずれかに記載の方法。
6.第1および第2陰イオン交換樹脂物質が、リガンドとして、それぞれ独立してアミノヘキシル、ベンズアミジン、リジン、およびアルギニンからなる群から選ばれる1級アミンを保持する項目1〜5のいずれかに記載の方法。
7.二価カチオン結合タンパク質が、カルシウム結合タンパク質である項目1〜6のいずれかに記載の方法。
8.二価カチオン結合タンパク質がビタミンK依存性タンパク質である項目1〜7のいずれかに記載の方法。
9.二価カチオン結合タンパク質が、第II因子、第VII因子、第IX因子、第X因子、プロテインC、プロテインS、アネキシン、およびカルモジュリンからなる群から選ばれ、特に好ましくは第IX因子、第VII因子、およびアネキシンVからなる群から選ばれる項目1〜8のいずれかに記載の方法。
該二価カチオン結合タンパク質は、天然供給源、例えば血漿由来であるか、組換えにより生成することができる。
10.ローディング工程(a)中のローディング緩衝液のpH、および/または所望の洗浄工程(a)に用いる洗浄用緩衝液のpHが<pH7.4、好ましくはpH5.5〜pH7.0、より好ましくはpH6.0〜pH7.0、さらにより好ましくはpH6.5〜pH7.0である項目1〜9のいずれかに記載の方法。
11.項目1〜10のいずれかに記載の方法により得ることができる精製された二価カチオン結合タンパク質。
12.項目1〜10のいずれかに記載の方法を実施する手段を含むキット。
(発明の詳細な説明)
(a)第1陰イオン交換樹脂物質に二価カチオンの非存在下またはその低濃度下で二価カチオン結合タンパク質をロードし、所望により二価カチオンの非存在下、ロードした陰イオン交換樹脂物質を洗浄用緩衝液で洗浄し、
(b)二価カチオン結合タンパク質を対アニオン含有溶離剤で溶出して二価カチオン結合タンパク質含有溶出液を得、
(c)工程(b)で得た溶出液に少なくとも1の二価カチオンを添加してpHを増加させ、
(d)第2陰イオン交換樹脂物質に工程(c)で得た添加溶出液をロードし、
(e)二価カチオン結合タンパク質を含むフロースルーを回収する。
a)第1陰イオン交換カラムに、出発物質(すなわち、好ましい態様では細胞培養物質)をロードする。これは夾雑物の多い出発物質である。第2陰イオン交換カラムに、すでにある程度精製された物質(溶出(および添加)工程後に得られた物質である)をロードする。
b)第1陰イオン交換工程は、二価カチオンの非存在下で実施するが、第2陰イオン交換工程を実施する場合は、ロード物質に二価カチオンを添加している。
c)第2陰イオン交換における該ロードの伝導度は、好ましい態様において、第1陰イオン交換カラムの溶出工程の伝導度より低くなるように選択する。
d)次に、第1陰イオン交換工程を生成物結合モードで実施し、第2陰イオン交換工程を生成物非結合モードで実施する。
トリス:(pH=8,06±1,0の緩衝剤)
MES:(pH=6,2±1,0の緩衝剤)
HEPES:(pH7,7±1,0の緩衝剤)
MOPS:(pH=7,3±1,0の緩衝剤)
トリシン:(pH=8,3±1,0の緩衝剤)
ヒスチジン:(pH=7,6±1,0の緩衝剤)
Gly-Gly:(pH=7,4±1,0の緩衝剤)
Bis-トリス:(pH=6,35±1,0の緩衝剤)
ACES:(pH=7,0±1,0の緩衝剤)(N-(2-アセトアミド)-2-アミノエタンスルホン酸)
ADA:(pH=7,0±1,0の緩衝剤)(N-(2-アセトアミド)-イミド2酢酸)
洗浄用緩衝液の伝導度を調節するのに適した塩、例えば濃度100〜200mMで存在しうるNaClなども含みうる。塩濃度の絶対値は、精製する二価カチオン結合タンパク質に依存し、最適な純度を得るために二価カチオン結合タンパク質がより低いまたは高い塩濃度を必要とするかを決定することは当業者の知識内である。本発明の方法に適用することができる溶離剤は、例えば20mM MESおよび350mM NaClを含み、pH6.0でありうる。
実施例1:組換え第IX因子(rFIX)の精製
該樹脂を最初に平衡化用緩衝液(20mM MES、2mM EDTA、pH=6.0)で平衡化し、次いで調整済みrFIX含有ロードを樹脂に適用した。洗浄用緩衝液(20mM MES、2mM EDTA、180mM NaCl、pH=6.0)で洗浄後、生成物を溶出用緩衝液(20mM MES、350mM NaCl、pH=6.0)で溶出した。生成物の収量と不純物の除去率のまとめをイオン交換捕捉工程の典型的成績について表1に示す。
Q-Sepharose Fast Flowを用いる第1精製工程から得られる溶出液プールに約8mM Ca2+を添加し、トリス緩衝液で希釈して伝導度約12 mS/cm(室温)とし、pHを7.6に調整した。樹脂を最初に平衡化用緩衝液(20mMトリス、10mM CaCl2、90mM NaCl、pH=7.8)で平衡化し、調整済み生成物含有溶液をカラムにポンプで流した。クロマトグラフィ条件は、大部分のCHO宿主細胞タンパク質不純物および不活性生成物種は陰イオン交換樹脂と結合するが、生成物は結合しないように設定した。高活性および高精製生成物は、Q-Sepharose Fast Flowを用いる第2陰イオン交換工程のカラムフロースルー分画中に含まれる。結合した不純物は、1M NaClで樹脂から除去される。生成物の収量と不純物の除去率のまとめを表2に示す。
実施例2:Poros Qを用いる2段階イオン交換法を用いるFVIIの精製
1) Poros Qを用いる第1精製(イオン交換法、pH=6,0)
2)Poros Qによる第2精製(カルシウムろ過法、pH=>7.6、室温(RT))。
要約
FVII:C: FVII色素生成アッセイ。
実施例3:Q-Sepharose Fast Flowを用いる2段階イオン交換法によるFVIIの精製
1) Q-Sepharose Fast Flowを用いる第1精製(イオン交換法、pH=6,0)
2)Poros Qによる第2精製(カルシウムろ過法、pH=>7.6、室温(RT))。
要約実施例3
FVII:C: FVII色素生成アッセイ。
Claims (12)
- 以下の工程を含む二価カチオン結合タンパク質の精製方法:
(a)第1陰イオン交換樹脂物質に、二価カチオンの非存在下またはその低濃度下でローディング緩衝液中の二価カチオン結合タンパク質をロードし、所望により二価カチオンの非存在下、ロードした陰イオン交換樹脂物質を洗浄用緩衝液で洗浄し、
(b)二価カチオン結合タンパク質を対アニオンを含む溶離剤で溶出して二価カチオン結合タンパク質含有溶出液を得、
(c)工程(b)で得た溶出液に少なくとも1の二価カチオンを添加してpHを増加させ、
(d)第2陰イオン交換樹脂物質に工程(c)で得た添加溶出液をロードし、
(e)二価カチオン結合タンパク質を含むフロースルーを回収する。 - 工程(c)において該添加溶出液のpHを少なくとも0.5pH単位増加させる請求項1記載の方法。
- 工程(b)の溶離剤の溶離剤が、工程(a)のローディング緩衝液、および洗浄工程を行う場合は工程(a)の洗浄用緩衝液の伝導度より高い伝導度を有し、工程(c)の該添加溶出液が工程(b)の溶離剤の伝導度より低い伝導度を有する請求項1または2記載の方法。
- 工程(c)の少なくとも1の二価カチオンが、Ca2+、Be2+、Ba2+、Mg2+、Mn2+、Sr2+、Zn2+、Co2+、Ni2+、およびCu2+、またはその組み合わせからなる群から選ばれる請求項1〜3のいずれかに記載の方法。
- 第1および第2陰イオン交換樹脂物質が、それぞれ独立してジエチルアミノエタン(DEAE)、ジメチルアミノエタン(DMAE)、トリメチルアミノエチル(TMAE)、ポリエチレンイミン(PEI)、第4級アミノアルキル、第4級アミノエタン(QAE)、および第4級アンモニウム(Q)からなる群から選ばれる正荷電基を有する請求項1〜4のいずれかに記載の方法。
- 第1および第2陰イオン交換樹脂物質が、リガンドとして、それぞれ独立してアミノヘキシル、ベンズアミジン、リジン、およびアルギニンからなる群から選ばれる1級アミンを保持する請求項1〜5のいずれかに記載の方法。
- 二価カチオン結合タンパク質が、カルシウム結合タンパク質である請求項1〜6のいずれかに記載の方法。
- 二価カチオン結合タンパク質がビタミンK依存性タンパク質である請求項1〜7のいずれかに記載の方法。
- 二価カチオン結合タンパク質が、第II因子、第VII因子、第IX因子、第X因子、プロテインC、プロテインS、アネキシン、およびカルモジュリンからなる群から選ばれ、特に好ましくは第IX因子、第VII因子、およびアネキシンVからなる群から選ばれる請求項1〜8のいずれかに記載の方法。
- ローディング工程(a)中のローディング緩衝液のpH、および/または所望の洗浄工程(a)に用いる洗浄用緩衝液のpHが<pH7.4、好ましくはpH5.5〜pH7.0、より好ましくはpH6.0〜pH7.0、さらにより好ましくはpH6.5〜pH7.0である請求項1〜9のいずれかに記載の方法。
- 請求項1〜10のいずれかに記載の方法により得ることができる精製された二価カチオン結合タンパク質。
- 請求項1〜10のいずれかに記載の方法を実施する手段を含むキット。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201161547513P | 2011-10-14 | 2011-10-14 | |
US61/547,513 | 2011-10-14 | ||
PCT/EP2012/070259 WO2013053888A1 (en) | 2011-10-14 | 2012-10-12 | Protein purification by anion exchange chromatography |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017055835A Division JP6788533B2 (ja) | 2011-10-14 | 2017-03-22 | 陰イオン交換クロマトグラフィによるタンパク質の精製方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2014528966A true JP2014528966A (ja) | 2014-10-30 |
JP6117219B2 JP6117219B2 (ja) | 2017-04-19 |
Family
ID=47010609
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014535103A Active JP6117219B2 (ja) | 2011-10-14 | 2012-10-12 | 陰イオン交換クロマトグラフィによるタンパク質の精製方法 |
JP2017055835A Active JP6788533B2 (ja) | 2011-10-14 | 2017-03-22 | 陰イオン交換クロマトグラフィによるタンパク質の精製方法 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017055835A Active JP6788533B2 (ja) | 2011-10-14 | 2017-03-22 | 陰イオン交換クロマトグラフィによるタンパク質の精製方法 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US9701710B2 (ja) |
EP (1) | EP2748180B1 (ja) |
JP (2) | JP6117219B2 (ja) |
AU (1) | AU2012322949B2 (ja) |
ES (1) | ES2700933T3 (ja) |
HK (1) | HK1198653A1 (ja) |
WO (1) | WO2013053888A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2014530230A (ja) * | 2011-10-14 | 2014-11-17 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドBaxter International Incorp0Rated | アニオン交換クロマトグラフィーによるタンパク質の精製 |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101780518B1 (ko) | 2010-04-29 | 2017-09-21 | 박스알타 인코퍼레이티드 | 음이온 교환 수지상에서의 2가 양이온 결합 단백질의 정제 방법 |
JP6117219B2 (ja) | 2011-10-14 | 2017-04-19 | バクスアルタ ゲーエムベーハー | 陰イオン交換クロマトグラフィによるタンパク質の精製方法 |
NZ629845A (en) | 2013-03-15 | 2016-10-28 | Baxalta Inc | Purification method for vitamin k dependent proteins by anion exchange chromatography |
AR102331A1 (es) * | 2014-08-12 | 2017-02-22 | Baxalta Inc | Activación del factor x |
GB2542391A (en) * | 2015-09-17 | 2017-03-22 | Annexin Pharmaceuticals Ab | Process of manufacture |
EP3560946B1 (en) | 2016-12-22 | 2022-02-02 | KM Biologics Co., Ltd. | Chromatographic method for collecting blood coagulation factor vii with high yield |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH02200180A (ja) * | 1988-10-04 | 1990-08-08 | Eli Lilly & Co | タンパク質の精製法 |
JPH11506603A (ja) * | 1995-06-07 | 1999-06-15 | ジェネテイックス・インスティテュート・インコーポレイテッド | 新規因子ix精製法 |
WO2007026020A1 (en) * | 2005-09-01 | 2007-03-08 | Novo Nordisk Health Care Ag | Purification of coagulation factor vii polypeptides |
JP2008514216A (ja) * | 2004-09-29 | 2008-05-08 | ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト | Desgla−vii因子ポリペプチド構造の除去による、vii因子ポリペプチドの原体の精製 |
JP2008525381A (ja) * | 2004-12-23 | 2008-07-17 | ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト | 関心のあるビタミンk依存性タンパク質を含んでなる組成物中におけるタンパク質混入物の量の減少 |
JP2013525411A (ja) * | 2010-04-29 | 2013-06-20 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド | 陰イオン交換樹脂を用いる二価カチオン結合タンパク質の精製方法 |
JP2014530230A (ja) * | 2011-10-14 | 2014-11-17 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドBaxter International Incorp0Rated | アニオン交換クロマトグラフィーによるタンパク質の精製 |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2143125C (en) | 1992-08-27 | 2008-09-23 | Koenraad Mertens | Antibodies specific for a haemostatic protein, their use for isolating intact protein, haemostatic compositions devoid of proteolytic cleavage products of the protein |
DE4406515C1 (de) | 1994-02-28 | 1995-10-19 | Immuno Ag | Verfahren zur Isolierung und Reinigung Vitamin K-abhängiger Proteine |
DE4435485C1 (de) * | 1994-10-04 | 1996-03-21 | Immuno Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem von Willebrand-Faktor |
EP0971724B1 (en) | 1997-02-14 | 2010-01-20 | American Red Cross | Expression of active human factor ix in mammary tissue of transgenic animals |
DE60138111D1 (de) * | 2000-07-21 | 2009-05-07 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | Verfahren zur reinigung eines kalziumionen-bindenden proteins |
GB0524432D0 (en) * | 2005-11-30 | 2006-01-11 | Nhs Blood & Transplant | Method |
WO2007112953A1 (en) * | 2006-03-30 | 2007-10-11 | Baxter Internaional Inc. | Process for the purification of recombinant alpha 1-antitrypsin involving a step of anion exchange chromatography |
FR2901707B1 (fr) | 2006-05-31 | 2017-09-29 | Lab Francais Du Fractionnement | Composition de facteur vii recombinant ou transgenique, chaque molecule de facteur vii possedant deux sites de n-glycosylation a motifs glycanniques definis |
FR2901796A1 (fr) | 2006-05-31 | 2007-12-07 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede d'extraction d'une ou de plusieurs proteines presentes dans du lait |
WO2008104372A1 (en) | 2007-02-28 | 2008-09-04 | Baxter International Inc. | Method for the purification of recombinant blood coagulation factor ix enriched in sulfated and/or phosphorylated molecules |
CN102666568B (zh) | 2009-12-18 | 2015-12-09 | 杰特有限公司 | 纯化多肽的方法 |
JP6117219B2 (ja) | 2011-10-14 | 2017-04-19 | バクスアルタ ゲーエムベーハー | 陰イオン交換クロマトグラフィによるタンパク質の精製方法 |
-
2012
- 2012-10-12 JP JP2014535103A patent/JP6117219B2/ja active Active
- 2012-10-12 US US14/351,544 patent/US9701710B2/en active Active
- 2012-10-12 AU AU2012322949A patent/AU2012322949B2/en active Active
- 2012-10-12 WO PCT/EP2012/070259 patent/WO2013053888A1/en active Application Filing
- 2012-10-12 EP EP12770497.1A patent/EP2748180B1/en active Active
- 2012-10-12 ES ES12770497T patent/ES2700933T3/es active Active
-
2014
- 2014-12-01 HK HK14112107.9A patent/HK1198653A1/xx unknown
-
2017
- 2017-03-22 JP JP2017055835A patent/JP6788533B2/ja active Active
- 2017-06-06 US US15/615,696 patent/US10723761B2/en active Active
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH02200180A (ja) * | 1988-10-04 | 1990-08-08 | Eli Lilly & Co | タンパク質の精製法 |
JPH11506603A (ja) * | 1995-06-07 | 1999-06-15 | ジェネテイックス・インスティテュート・インコーポレイテッド | 新規因子ix精製法 |
JP2008514216A (ja) * | 2004-09-29 | 2008-05-08 | ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト | Desgla−vii因子ポリペプチド構造の除去による、vii因子ポリペプチドの原体の精製 |
JP2008525381A (ja) * | 2004-12-23 | 2008-07-17 | ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト | 関心のあるビタミンk依存性タンパク質を含んでなる組成物中におけるタンパク質混入物の量の減少 |
WO2007026020A1 (en) * | 2005-09-01 | 2007-03-08 | Novo Nordisk Health Care Ag | Purification of coagulation factor vii polypeptides |
JP2013525411A (ja) * | 2010-04-29 | 2013-06-20 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド | 陰イオン交換樹脂を用いる二価カチオン結合タンパク質の精製方法 |
JP2014530230A (ja) * | 2011-10-14 | 2014-11-17 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドBaxter International Incorp0Rated | アニオン交換クロマトグラフィーによるタンパク質の精製 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
ACS SYMPOSIUM SERIES, vol. 698, JPN6015017212, 1998, pages 8 - 93, ISSN: 0003381532 * |
JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B, vol. 790, JPN6016026213, 2003, pages 183 - 197, ISSN: 0003381531 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2014530230A (ja) * | 2011-10-14 | 2014-11-17 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドBaxter International Incorp0Rated | アニオン交換クロマトグラフィーによるタンパク質の精製 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ES2700933T3 (es) | 2019-02-20 |
US20140302592A1 (en) | 2014-10-09 |
HK1198653A1 (en) | 2015-05-22 |
US10723761B2 (en) | 2020-07-28 |
EP2748180B1 (en) | 2018-08-15 |
JP6117219B2 (ja) | 2017-04-19 |
WO2013053888A1 (en) | 2013-04-18 |
EP2748180A1 (en) | 2014-07-02 |
AU2012322949B2 (en) | 2015-07-02 |
JP2017141258A (ja) | 2017-08-17 |
JP6788533B2 (ja) | 2020-11-25 |
AU2012322949A1 (en) | 2013-05-16 |
US9701710B2 (en) | 2017-07-11 |
US20180111961A1 (en) | 2018-04-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6788533B2 (ja) | 陰イオン交換クロマトグラフィによるタンパク質の精製方法 | |
CN106967150B (zh) | 二价阳离子结合蛋白在阴离子交换树脂上的纯化方法 | |
JP6820232B2 (ja) | アニオン交換クロマトグラフィーによるタンパク質の精製 | |
AU2011247567A1 (en) | Purification method for divalent cation binding proteins on anion exchange resin | |
DK2970376T3 (en) | PURIFICATION PROCEDURE FOR VITAMIN K-DEPENDENT PROTEINS BY ANION EXCHANGE CHROMATOGRAPHY |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20151009 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20160217 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20160511 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20160608 |
|
RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20160615 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160823 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20161116 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170221 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170322 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6117219 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |