RU2739983C2

RU2739983C2 - ПИРАЗОЛО[1,5-a]ПИРИМИДИНОВОЕ СОЕДИНЕНИЕ

Info

Publication number: RU2739983C2
Application number: RU2019102674A
Authority: RU
Inventors: Ричард КЛАРК; Тецуя КАВАХАРА; Даисуке ИИДА; Синсуке ХИРОТА; Ясуаки КАМАДА; Тосиюки ОХФУСА; Наоки ЙОНЕДА; Фумиёси МАЦУУРА; Со ЯСУИ
Original assignee: Эйсай Ар Энд Ди Менеджмент Ко., Лтд.
Priority date: 2016-08-31
Filing date: 2017-08-29
Publication date: 2020-12-30
Also published as: KR20190039884A; BR112019001968A2; EP3508487B1; RU2019102674A; EP3508487A4; AU2017319080B2; US10227349B2; JPWO2018043461A1; MX2018013133A; RU2019102674A3; AU2017319080A1; CA3021675C; CA3021675A1; WO2018043461A1; ES2886840T3; CN109071554A; EP3508487A1; TW201811796A; JP6916799B2; CN109071554B

Abstract

Изобретение относится к соединениям, представленным формулами (I)-(XVIII), или их фармацевтически приемлемым солям и фармацевтическим композициям на их основе.Технический результат: получены новые соединения, обладающие ингибиторной активностью PAR2, пригодные для лечения воспалительного заболевания кожи или воспалительного заболевания кишечника. 6 н. и 9 з.п. ф-лы, 8 табл., 24 пр.

Description

Область техники

Настоящее изобретение относится к пиразоло[1,5-a]пиримидиновому соединению, характеризующемуся ингибирующим действием по отношению к PAR2, и к его фармацевтически приемлемой соли, и к фармацевтической композиции, содержащей таковое.

Уровень техники

Рецептор, активируемый протеазой (PAR), представляет собой тип тримерных сопряженных с G-белком семиспиральных трансмембранных рецепторов и относится к семейству рецепторов, опосредующих клеточное действие сериновых протеаз, и при этом четыре молекулы были клонированы до настоящего времени: PAR1, PAR2, PAR3 и PAR4.

Сериновые протеазы отщепляют внеклеточную аминоконцевую пептидную цепь молекулы PAR в конкретных участках и, таким образом, обнажают новую аминоконцевую пептидную цепь, имеющую последовательность, вызывающую активацию рецептора, состоящую из 5 или 6 аминокислотных остатков. Только что обнаженная аминоконцевая пептидная цепь, отщепленная сериновой протеазой, связывается в виде подобного цепи лиганда с внеклеточной петлей 2, которая является активным участком самого PAR2, и, таким образом, активирует PAR2. Известно, что PAR2 активируется трипсином, триптазой, калликреином (главным образом калликреинами 2, 4, 5, 6 и 14), фактором свертывания крови VIIa, фактором свертывания крови Xa и т. п., и также активируется, когда синтетический пептид, состоящий из 5 или 6 аминокислот, синтезированных на основе последовательности, вызывающей активацию рецептора, поступает экзогенно (см. непатентные литературные источники 1-3).

Упоминаемый в данном документе, PAR2 является широко распространенным in vivo, как, например в кровеносных сосудах, предстательной железе, тонкой кишке, толстой кишке, печени, почке, поджелудочной железе, желудке, легком, головном мозге и коже и, как известно, является ухудшающим фактором при различных заболеваниях, таких как нейрогенное воспаление, боль, зуд, воспаление и аллергия (см. патентные литературные источники 1 и 2 и непатентные литературные источники 4-6). По этой причине ожидается, что ингибитор PAR2 будет являться возможным лекарственным средством для лечения таких заболеваний и предполагается, что он будет являться, например, лекарственным средством для лечения воспалительных заболеваний кишечника, лекарственным средством для лечения дерматита, лекарственным средством для лечения аллергических заболеваний или лекарственным средством для предупреждения пигментации кожи (см. патентные литературные источники 3-5 и непатентные литературные источники 3 и 6-11).

Список использованной литературы

Патентная литература

[Патентный литературный источник 1] JP-A-2003-286171

[Патентный литературный источник 2] JP-A-2004-170323

[Патентный литературный источник 3] WO 2012/101453

[Патентный литературный источник 4] WO 2015/048245

[Патентный литературный источник 5] WO 2005/030773

Непатентная литература

[Непатентный литературный источник 1] Dery, O. et al. Am. J. Physiol (Cell Physiol.). 274, C1429-1452, 1998

[Непатентный литературный источник 2] Macfarlane, S.R. et al. Pharmacol. Rev. 53, 245-282, 2001

[Непатентный литературный источник 3] Yau, M.K. et al. Journal of Medicinal Chemistry, 56, 7477-7497, 2013

[Непатентный литературный источник 4] Bohm, S. K. et al. Biochem. J. 15; 314, 1009-1016, 1996

[Непатентный литературный источник 5] D'Andrea, M.R. et al. J. Histochem. Cytochem. 46(2): 157-164, 1998.

[Непатентный литературный источник 6] Rothmeier, A.S., Ruf, W. Semin. Immunopathol. 34(1): 133-149, 2012

[Непатентный литературный источник 7] Yamaguchi, Y., Hearing, V.J. Biofactors. 35(2): 193-199, 2009

[Непатентный литературный источник 8] Afkhami-Goli, A. et al. The Journal of Immunology. 179: 5493-5503, 2007

[Непатентный литературный источник 9] Dale, C. et al. Journal of Receptors and Signal Transduction. 28:29-37, 2008

[Непатентный литературный источник 10] Hachem, J.P. et al. Journal of Investigative Dermatology. 126: 2074-2086, 2006

[Непатентный литературный источник 11] Seyfarth, F. et al. Clinics in Dermatology. 29: 31-36, 2011

Краткое описание изобретения

Техническая задача

Целью настоящего изобретения является получение пиразоло[1,5-a]пиримидинового соединения, характеризующегося ингибирующим действием по отношению к PAR2, и его фармацевтически приемлемой соли, и фармацевтической композиции, содержащей таковое.

Решение задачи

Авторы настоящего изобретения тщательно проводили исследования для достижения вышеуказанной цели и в результате обнаружили новые пиразоло[1,5-a]пиримидиновые соединения, характеризующиеся ингибирующим действием по отношению к PAR2.

Более конкретно настоящее изобретение относится к следующим пунктам [1]-[57].

[1] Соединение, выбранное из группы, состоящей из:

2-((3R*,4S*)-1-(7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты, представленной химической формулой (I):

2-((3R*,4S*)-1-(7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты, представленной химической формулой (II):

2-((3R*,4S*)-1-(5-(4,4-диметилциклогексил)-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты, представленной химической формулой (III):

2-((3R*,4S*)-1-(5-(3-хлор-4-фторфенил)-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты, представленной химической формулой (IV):

2-((3R*,4S*)-3-фтор-1-(7-((2-метокси-6-метилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)пиперидин-4-ил)уксусной кислоты, представленной химической формулой (V):

2-((3R*,4S*)-3-метокси-1-(7-((2-метокси-6-метилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)пиперидин-4-ил)уксусной кислоты, представленной химической формулой (VI):

(R)-3-(7-((2-фтор-6-метоксифенил)(метил)амино)-N-метил-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоксамид)бутановой кислоты, представленной химической формулой (VII):

2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-(изобутил((R)-3-метилбутан-2-ил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты, представленной химической формулой (VIII):

(R)-3-(7-(изобутил((R)-3-метилбутан-2-ил)амино)-N-метил-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоксамид)бутановой кислоты, представленной химической формулой (IX):

2-((3R,4S)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-фтор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты, представленной химической формулой (X):

2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3-фторфенил)-7-((2-хлор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты, представленной химической формулой (XI):

2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-хлор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты, представленной химической формулой (XII):

2-((3R*,4S*)-1-(7-((2-хлор-6-фторфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты, представленной химической формулой (XIII):

2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-хлорфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты, представленной химической формулой (XIV):

2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-(изопропил(пропил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты, представленной химической формулой (XV):

2-((1α,5α,6α)-3-(7-(изобутил((S)-1-фенилэтил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты, представленной химической формулой (XVI):

2-(1-(7-((2-хлор-6-фторфенил)метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)пиперидин-4-ил)уксусной кислоты, представленной химической формулой (XVII):

и

2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-(изопропил(пропил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метилпиперидин-4-ил)уксусной кислоты, представленной химической формулой (XVIII):

или его фармацевтически приемлемая соль.

[2] 2-((3R,4S)-1-(5-(4-Хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-фтор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусная кислота, представленная химической формулой (X):

или ее фармацевтически приемлемая соль.

[3] 2-((3R*,4S*)-3-Метокси-1-(7-((2-метокси-6-метилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)пиперидин-4-ил)уксусная кислота, представленная химической формулой (VI):

или ее фармацевтически приемлемая соль.

[4] (R)-3-(7-((2-Фтор-6-метоксифенил)(метил)амино)-N-метил-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоксамид)бутановая кислота, представленная химической формулой (VII):

или ее фармацевтически приемлемая соль.

[5] 2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-Хлор-3,5-дифторфенил)-7-(изопропил(пропил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусная кислота, представленная химической формулой (XV):

или ее фармацевтически приемлемая соль.

[6] Фармацевтическая композиция, содержащая соединение согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемую соль.

[7] Фармацевтическая композиция согласно пункту [6] для лечения воспалительного заболевания кожи или воспалительного заболевания кишечника.

[8] Фармацевтическая композиция согласно пункту [6] для лечения воспалительного заболевания кожи.

[9] Фармацевтическая композиция согласно пункту [6] для лечения атопического дерматита.

[10] Фармацевтическая композиция согласно пункту [6] для лечения контактного дерматита.

[11] Фармацевтическая композиция согласно пункту [6] для лечения экземы кожи.

[12] Фармацевтическая композиция согласно пункту [6] для лечения псориаза.

[13] Фармацевтическая композиция согласно пункту [6] для лечения дерматита, характеризующегося сухостью кожи.

[14] Фармацевтическая композиция согласно пункту [6] для лечения воспалительного заболевания кишечника.

[15] Фармацевтическая композиция согласно пункту [6] для лечения язвенного колита.

[16] Фармацевтическая композиция согласно пункту [6] для лечения болезни Крона.

[17] Фармацевтическая композиция согласно пункту [6] для лечения инфекционного энтерита.

[18] Средство для лечения воспалительного заболевания кожи, содержащее соединение согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемую соль.

[19] Средство для лечения атопического дерматита, содержащее соединение согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемую соль.

[20] Средство для лечения контактного дерматита, содержащее соединение согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемую соль.

[21] Средство для лечения экземы кожи, содержащее соединение согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемую соль.

[22] Средство для лечения псориаза, содержащее соединение согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемую соль.

[23] Средство для лечения дерматита, характеризующегося сухостью кожи, содержащее соединение согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемую соль.

[24] Средство для лечения воспалительного заболевания кишечника, содержащее соединение согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемую соль.

[25] Средство для лечения язвенного колита, содержащее соединение согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемую соль.

[26] Средство для лечения болезни Крона, содержащее соединение согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемую соль.

[27] Средство для лечения инфекционного энтерита, содержащее соединение согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемую соль.

[28] Способ лечения воспалительного заболевания кожи, включающий введение соединения согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемой соли пациенту.

[29] Способ лечения атопического дерматита, включающий введение соединения согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемой соли пациенту.

[30] Способ лечения контактного дерматита, включающий введение соединения согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемой соли пациенту.

[31] Способ лечения экземы кожи, включающий введение соединения согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемой соли пациенту.

[32] Способ лечения псориаза, включающий введение соединения согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемой соли пациенту.

[33] Способ лечения дерматита, характеризующегося сухостью кожи, включающий введение соединения согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемой соли пациенту.

[34] Способ лечения воспалительного заболевания кишечника, включающий введение соединения согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемой соли пациенту.

[35] Способ лечения язвенного колита, включающий введение соединения согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемой соли пациенту.

[36] Способ лечения болезни Крона, включающий введение соединения согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемой соли пациенту.

[37] Способ лечения инфекционного энтерита, включающий введение соединения согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемой соли пациенту.

[38] Соединение согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемая соль, применяемые для лечения воспалительного заболевания кожи.

[39] Соединение согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемая соль, применяемые для лечения атопического дерматита.

[40] Соединение согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемая соль, применяемые для лечения контактного дерматита.

[41] Соединение согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемая соль, применяемые для лечения экземы кожи.

[42] Соединение согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемая соль, применяемые для лечения псориаза.

[43] Соединение согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемая соль, применяемые для лечения дерматита, характеризующегося сухостью кожи.

[44] Соединение согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемая соль, применяемые для лечения воспалительного заболевания кишечника.

[45] Соединение согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемая соль, применяемые для лечения язвенного колита.

[46] Соединение согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемая соль, применяемые для лечения болезни Крона.

[47] Соединение согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемая соль, применяемые для лечения инфекционного энтерита.

[48] Применение соединения согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемой соли для получения средства для лечения воспалительного заболевания кожи.

[49] Применение соединения согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемой соли для получения средства для лечения атопического дерматита.

[50] Применение соединения согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемой соли для получения средства для лечения контактного дерматита.

[51] Применение соединения согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемой соли для получения средства для лечения экземы кожи.

[52] Применение соединения согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемой соли для получения средства для лечения псориаза.

[53] Применение соединения согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемой соли для получения средства для лечения дерматита, характеризующегося сухостью кожи.

[54] Применение соединения согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемой соли для получения средства для лечения воспалительного заболевания кишечника.

[55] Применение соединения согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемой соли для получения средства для лечения язвенного колита.

[56] Применение соединения согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемой соли для получения средства для лечения болезни Крона.

[57] Применение соединения согласно любому из пунктов [1]-[5] или его фармацевтически приемлемой соли для получения средства для лечения инфекционного энтерита.

Полезные эффекты изобретения

Соединения, представленные формулами (I)-(XVIII), согласно настоящему изобретению (далее в данном документе также называемые как соединения (I)-(XVIII)) или их фармацевтически приемлемые соли характеризуются ингибирующим действием по отношению к PAR2. Таким образом, является перспективным применение соединений (I)-(XVIII) согласно настоящему изобретению или их фармацевтически приемлемых солей в качестве средства для лечения заболеваний, для которых ингибирующее действие по отношению к PAR2 является эффективным, таких как воспалительное заболевание кожи.

Описание вариантов осуществления

Далее в данном документе будут объясняться значения символов, терминов и т. п., используемых в настоящем описании, и будет подробно описано настоящее изобретение.

Ингибитор PAR2 в настоящем описании конкретно не ограничен, при условии, что соединение действует в направлении ингибирования активности PAR2 и относится к группе, включающей соединения, снижающие уровень экспрессии PAR2, антагонисты PAR2 и соединения, подавляющие сигналы PAR2. "Соединение, снижающее уровень экспрессии PAR2" в данном документе относится к соединениям, снижающим уровень экспрессии mRNA, кодирующей PAR2, или соединениям, снижающим уровень белка PAR2.

Соединения (I)-(XVIII) по настоящему изобретению и их фармацевтически приемлемые соли могут включать кристаллические полиморфы без ограничения любыми конкретными кристаллическими полиморфами и могут представлять собой любую одну кристаллическую форму или их смесь, при этом как одна кристаллическая форма, так и их смесь включены в объем формулы настоящего изобретения. Дополнительно, соединения (I)-(XVIII) по настоящему изобретению и их фармацевтически приемлемые соли могут представлять собой ангидрид, гидрат или сольват, все из которых включены в объем формулы настоящего изобретения.

Настоящее изобретение также включает изотопно-меченые соединения (I)-(XVIII). Соединения (I)-(XVIII), меченые изотопом, являются идентичными соединениям (I)-(XVIII), за исключением того, что один или несколько атомов замещены атомами с атомной массой или массовым числом, отличных от атомной массы или массового числа, которые обычно встречаются в природе. Изотопами, которые подлежат включению в соединения по настоящему изобретению, например, являются изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фтора, хлора, фосфора, серы и йода, включая ²H, ³H, ¹¹C, ¹⁴C, ¹³N, ¹⁵O, ¹⁸F, ³²P, ³⁵S, ¹²³I и ¹²⁵I. Соединения по настоящему изобретению, содержащие такие изотопы и/или другие изотопы, и их фармацевтически приемлемые производные (например, соли) также включены в объем формулы настоящего изобретения.

Изотопно-меченые соединения по настоящему изобретению, например, соединения с радиоактивными изотопами, такими как ³H и/или ¹⁴C, включенными в них, могут быть пригодными для фармацевтических лекарственных средств и/или анализа распределения в ткани матрицы. Полагают, что ³H и ¹⁴C пригодны для их получения и легкого обнаружения. Полагают, что изотопы ¹¹C и ¹⁸F пригодны для PET (положительной эмиссионной томографии), полагают, что изотоп ¹²⁵I пригоден для SPECT (однофотонной эмиссионной компьютерной томографии), и при этом все данные изотопы пригодны для визуализации головного мозга. Замещение более тяжелым изотопом, таким как ²H, обеспечивает определенные терапевтические преимущества, такие как увеличение периода полувыведения in vivo или уменьшение необходимой дозы вследствие более высокой метаболической устойчивости, и поэтому его считают пригодным в определенных ситуациях. Все соединения, меченные изотопом, из соединений (I)-(XVIII) по настоящему изобретению можно получать аналогичным образом с помощью следующей процедуры, раскрытой в примерах ниже, с применением легкодоступного изотопно-меченного реагента вместо не меченого изотопом реагента.

Соединения (I)-(XVIII) по настоящему изобретению могут находиться в форме соли. Соль конкретно не ограничена, при условии, что она является фармацевтически приемлемой, но конкретные примеры включают соли неорганических кислот (например, гидрохлорид, гидробромид, сульфат, нитрат и фосфат), соли органических кислот (например, ацетат, сукцинат, фумарат, малеат, тартрат, цитрат, лактат, стеарат, бензоат, манделат, метансульфонат, этансульфонат, п-толуолсульфонат и бензолсульфонат), соли кислой аминокислоты (например, аспартат и глутамат), неорганические основные соли (например, соли щелочных металлов, такие как натриевая соль и калиевая соль, соли щелочноземельных металлов, такие как кальциевая соль и магниевая соль, алюминиевая соль и аммониевая соль), органические основные соли (например, диэтиламинную соль, диэтаноламинную соль, меглюминовую соль и N,N'-дибензилэтилендиаминную соль) и соли основных аминокислот (например, соль аргинина, соль лизина и соль орнитина).

В вариантах осуществления по настоящему изобретению предусмотрены соединения, выбранные из группы, состоящей из следующих соединений или их фармацевтически приемлемых солей:

2-((3R*,4S*)-1-(7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусная кислота,

2-((3R*,4S*)-1-(7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусная кислота,

2-((3R*,4S*)-1-(5-(4,4-диметилциклогексил)-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусная кислота,

2-((3R*,4S*)-1-(5-(3-хлор-4-фторфенил)-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусная кислота,

2-((3R*,4S*)-3-фтор-1-(7-((2-метокси-6-метилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)пиперидин-4-ил)уксусная кислота,

2-((3R*,4S*)-3-метокси-1-(7-((2-метокси-6-метилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)пиперидин-4-ил)уксусная кислота,

(R)-3-(7-((2-фтор-6-метоксифенил)(метил)амино)-N-метил-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоксамид)бутановая кислота,

2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-(изобутил((R)-3-метилбутан-2-ил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусная кислота,

(R)-3-(7-(изобутил((R)-3-метилбутан-2-ил)амино)-N-метил-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоксамид)бутановая кислота,

2-((3R,4S)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-фтор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусная кислота,

2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3-фторфенил)-7-((2-хлор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусная кислота,

2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-хлор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусная кислота,

2-((3R*,4S*)-1-(7-((2-хлор-6-фторфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусная кислота,

2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-хлорфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусная кислота,

2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-(изопропил(пропил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусная кислота,

2-((1α,5α,6α)-3-(7-(изобутил((S)-1-фенилэтил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусная кислота,

2-(1-(7-((2-хлор-6-фторфенил)метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)пиперидин-4-ил)уксусная кислота и

2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-(изопропил(пропил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метилпиперидин-4-ил)уксусная кислота.

Примеры предпочтительного варианта осуществления настоящего изобретения включают 2-((3R,4S)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-фтор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусную кислоту, представленную химической формулой (X):

или ее фармацевтически приемлемую соль;

2-((3R*,4S*)-3-метокси-1-(7-((2-метокси-6-метилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)пиперидин-4-ил)уксусную кислоту, представленную химической формулой (VI):

или ее фармацевтически приемлемую соль;

(R)-3-(7-((2-фтор-6-метоксифенил)(метил)амино)-N-метил-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоксамид)бутановую кислоту, представленную химической формулой (VII):

или ее фармацевтически приемлемую соль;

2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-(изопропил(пропил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусную кислоту, представленную химической формулой (XV):

или ее фармацевтически приемлемую соль.

Соединения (I)-(XVIII) по настоящему изобретению можно получать в виде фармацевтически приемлемых солей, при необходимости, традиционным способом. Фармацевтически приемлемые соли соединений (I)-(XVIII) можно получать путем объединения соответствующим образом способов, обычно применяемых в области синтетической органической химии. Подобным образом, соединения (I)-(XVIII), полученные в виде солей соединений (I)-(XVIII), можно преобразовать в свободное основание соединений (I)-(XVIII) в соответствии с традиционным способом. Дополнительно, соединения (I)-(XVIII) по настоящему изобретению можно преобразовать, при необходимости, в сольват путем осуществления известной реакции образования сольвата.

Различные изомеры (например, геометрический изомер, оптический изомер, содержащий асимметричный углерод, ротамер и стереоизомер), полученные из соединений (I)-(XVIII), можно очищать и выделять с применением обычных способов разделения, таких как перекристаллизация, способ получения диастереомерной соли, способ ферментативного разделения, различные типы хроматографии (например, тонкослойная хроматография, колоночная хроматография и газовая хроматография).

Фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению можно получать путем смешивания фармацевтически приемлемых добавок с соединениями (I)-(XVIII) или их фармацевтически приемлемыми солями. Фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению можно получать в соответствии с известным способом, описанным, например, в "Общие правила получения" в Японской фармакопее, шестнадцатое издание.

Фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению можно соответствующим образом вводить пациенту в соответствии с ее лекарственной формой.

В настоящем описании примеры способа измерения ингибиторной активности в отношении PAR2 включают способ измерения повышения концентрации внутриклеточного кальция; способ измерения увеличения продуцирования внутриклеточного инозитолтрифосфата; способ измерения увеличения фосфорилирования внутриклеточного белка протеинкиназой C и MAP-киназой и способ измерения количества продуцируемых или количества высвобождаемых связанных с воспалением физиологически активных веществ, таких как цитокин, хемокин, простагландин и монооксид азота. Примеры способа измерения повышения концентрации внутриклеточного кальция включают способ, где заранее обеспечивают включение кальций-связывающего флуоресцентного зонда в культивируемую клеточную линию или выделенную клетку животного происхождения, содержащую PAR2, или клетку, в которой искусственно экспрессируется PAR2, при этом протеазу, имеющую функцию активации PAR2, такую как трипсин, или агонист PAR2 (синтетические пептиды, такие как SLIGKV-NH2 (SEQ ID NO: 1) и SLIGRL-NH2 (SEQ ID NO: 2) добавляют для активации PAR2, в результате чего колеблющиеся концентрации внутриклеточного кальция обнаруживают в виде изменений флуоресцентного сигнала. В качестве альтернативы, также является возможным измерение концентрации внутриклеточного кальция путем определения величины интенсивности флуоресценции, генерируемой пропорционально концентрации кальция, с применением клеточной линии, сверхэкспрессирующей кальций-связывающий люминесцентный белок, такой как Aequorin. Конкретно, примеры включают способы, описанные в тестовых примерах настоящего описания.

Соединения (I)-(XVIII) согласно настоящему изобретению или их фармацевтически приемлемыми солями представляют собой таковые, предпочтительно характеризующиеся значением IC50, составляющим 30 нМ или меньше, еще более предпочтительно значением IC50, составляющим 10 нМ или меньше, касательно подавляющей активности в отношении повышения уровня внутриклеточного кальция.

Соединения (I)-(XVIII) согласно настоящему изобретению или их фармацевтически приемлемые соли характеризуются ингибирующим действием по отношению к PAR2 и, таким образом, являются перспективными для применения в качестве средства для лечения заболеваний, при которых ингибирующее действие по отношению к PAR2 является эффективным. Примеры заболеваний, с которыми, как известно, ассоциируется ингибирующее действие по отношению к PAR2, включают воспалительное заболевание кожи (например, атопический дерматит, контактный дерматит, дерматит, характеризующийся сухостью кожи, псориаз, экзема кожи, склеродермия), воспалительные заболевания кишечника (например, язвенный колит, болезнь Крона, инфекционный энтерит, регионарный энтерит), болезнь Альцгеймера, аллергическую контактную гиперчувствительность, нейродегенеративные заболевания (острые и хронические), аутоиммунные заболевания, конъюнктивит, аномальное заживление ран, боль и нейрогенное воспаление, обусловленное нервной тканью, сопровождающееся болью.

Доза соединений (I)-(XVIII) согласно настоящему изобретению или их фармацевтически приемлемых солей изменяется в зависимости от уровня тяжести симптомов, возраста, пола, веса тела, пути введения/типа соли и конкретного типа заболевания, однако их обычно вводят взрослому человеку путем перорального введения в количестве, составляющем от приблизительно 30 мкг до 10 г, предпочтительно от 100 мкг до 5 г, еще более предпочтительно от 100 мкг до 1 г в сутки, или путем инъекционного введения в количестве, составляющем от приблизительно 30 мкг до 1 г, предпочтительно от 100 мкг до 500 мг, еще более предпочтительно от 100 мкг до 300 мг, соответственно, один раз или в нескольких разделенных дозах.

Примеры

Соединения (I)-(XVIII) по настоящему изобретению можно получать например, с помощью способов, описанных в следующих примерах и эффект данных соединений можно подтверждать с помощью способов, описанных в следующих тестовых примерах. Однако данные способы являются иллюстративными и настоящее изобретение в любом случае не ограничено следующими конкретными примерами и можно осуществлять изменения в пределах, в которых объем настоящего изобретения не затрагивается.

Соединения с названием, которое приведено в литературных источниках и т.п. указывают на то, что их получали в соответствии с литературными источниками или т.п.

Далее в данном документе настоящее изобретение подробно описано с помощью примеров, примеров получения и тестовых примеров. Однако настоящее изобретение не ограничивается ими. Дополнительно, сокращения, применяемые в примерах, являются обычными сокращениями, хорошо известными специалистам в данной области техники, при этом некоторые из них приведены ниже.

DMF: N,N-Диметилформамид

DMSO: Диметилсульфоксид

DMSO-d₆: Дейтерированный диметилсульфоксид

HATU: Гексафторфосфат O-(7-азабензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония

HOBT: 1-Гидроксибензотриазол

NMP: 1-Метил-2-пирролидон

Pd₂DBA₃: Трис(дибензилиденацетон)дипалладий

трет-: Третичный

THF: Тетрагидрофуран

WSC: Гидрохлорид 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида

¹H-ЯМР: спектрометрия на основе протонного ядерного магнитного резонанса.

Химический сдвиг в спектре протонного ядерного магнитного резонанса записывали в единицах δ (ppm) относительно тетраметилсилана, и константу взаимодействия записывали в герцах (Гц). Паттерны расщепления являются следующими:

s: синглет; d: дублет; t: триплет; q: квартет; br: широкий; m: мультиплет; dd: двойной дублет; td: тройной дублет.

¹H-ЯМР измеряли с применением аппарата для ядерного магнитного резонанса модели Varian MERCURY Plus (400 MГц), аппарата для ядерного магнитного резонанса модели Varian INOVA UNITY (400 MГц), аппарата для ядерного магнитного резонанса модели Varian INOVA UNITY (500 MГц) или аппарата для ядерного магнитного резонанса модели Bruker Avance (600 MГц).

В качестве аппарата для микроволнового облучения применяли модели Biotage Initiator или Initiator +.

Вращение плоскости поляризации измеряли с применением поляриметра модели JASCO DIP-1000.

Для хроматографии применяемый силикагель представлял собой либо силикагель Merck Silica Gel 60 (70-230 меш ASTM), Fuji Silysia Chemical Ltd. PSQ60B, Kanto Kagaku Silica Gel 60 (сферический, 40-50 мкМ), либо YMC YMC*GEL ODS-A (12 нМ S-50 мкМ), или применяли предварительно упакованную колонку {колонка: YAMAZEN Hi-Flash™ Column (Silicagel), размер: либо S (16 × 60 мм), M (20 × 75 мм), L (26 × 100 мм), 2L (26 × 150 мм), либо 3L (46 × 130 мм)}.

Применяемый NH-силикагель представлял собой либо Fuji Silysia Chemical Ltd. CHROMATOREX NH-DM2035, либо предварительно упакованную колонку {колонка: YAMAZEN Hi-Flash™ Column (Amino), размер: либо S (16 × 60 мм), M (20 × 75 мм), L (26 x × 100 мм), 2L (26 × 150 мм), либо 3L (46 × 130 мм), или Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Presep™ (Luer Lock) NH2 (HC), размер: тип M (14 г/25 мл), тип L (34 г/70 мл), тип 2L (50 г/100 мл), тип 3L (110 г/200 мл)}.

"Комнатная температура" в следующих примерах и примерах получения обычно означает от приблизительно 10°C до приблизительно 35°C. "%" означает весовой процент, если не указано иное.

Химические названия для соединений в следующих примерах и примерах получения были созданы на основе химических структур с применением "E-Notebook" версии 12 (PerkinElmer Co., Ltd.). Однако "*" в конфигурации отображает относительное положение и обозначает любой один из энантиомеров, если не указано иное. Кроме того, в случае, где записано "(3R*,4S*)", обозначается относительное положение каждого стереоцентра. Более конкретно, "(3R*,4S*)" обозначает любой один из конкретных энантиомеров (3R,4S) или (3S,4R).

Смесь ротамеров в настоящем описании означает смесь изомеров, имеющих различные конформации, вызванные внутримолекулярными вращениями вокруг одинарных связей, таких как C-C, C-N и C-O.

Пример получения 1

Синтез гидробромида сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты

(1a) Синтез (3R*,4S*)-4-метилбензил-4-(2-этокси-2-оксоэтил)-3-фторпиперидин-1-карбоновой кислоты

С применением колонки CHIRAL PAK IA энантиомеры (±)-цис-4-метилбензил-4-(2-этокси-2-оксоэтил)-3-фторпиперидин-1-карбоновой кислоты (1,0 г) (CAS № 808733-17-7) (WO 2004/108705) разделяли (оптическое разделение) при следующих условиях с получением указанного в заголовке соединения (0,336 г) в виде второй фракции элюирования.

Условия HPLC

Колонка: CHIRAL PAK IA (серия: IA-00CJ-NH005) 20 мм × 250 мм, 5 мкм;

подвижная фаза: гексан:этанол=89: 11;

скорость элюирования: 20 мл/мин;

концентрация: 62,5 мг/мл;

вводимое количество: 0,80 мл;

время удерживания HPLC: 14,5 мин (последняя фракция элюирования).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,26 (t, J=8 Гц, 3H), 1,50-1,72 (m, 2H), 2,05-2,18 (m, 1H), 2,30 (dd, J=17, 7 Гц, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,53 (dd, J=17, 7 Гц, 1H), 2,73-3,10 (m, 2H), 4,15 (q, J=8 Гц, 2H), 4,20-4,80 (m, 3H), 5,09 (m, 2H), 7,15 (d, J=8 Гц, 2H), 7,25 (d, J=8 Гц, 2H).

(1b) Синтез гидробромида сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты

30% раствор бромистого водорода/уксусной кислоты (3 мл) добавляли к смеси (3R*,4S*)-4-метилбензил-4-(2-этокси-2-оксоэтил)-3-фторпиперидин-1-карбоновой кислоты (0,336 г) и дихлорметана (3 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. Диэтиловый эфир (10 мл) добавляли к реакционной смеси, которую концентрировали при пониженном давлении. Трет-бутилметиловый эфир (10 мл) добавляли к остатку и подвергали воздействию ультразвука в течение 10 минут. Осажденное твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали с помощью трет-бутилметилового эфира с получением указанного в заголовке соединения (0,236 г) в виде светло-коричневого твердого вещества.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,25 (t, J=8 Гц, 3H), 1,72-1,94 (m, 2H), 2,24-2,32 (m, 2H), 2,55-2,61 (m, 1H), 3,08-3,15 (m, 1H), 3,24-3,30 (m, 1H), 3,34-3,40 (m, 1H), 3,57-3,68 (m, 1H), 4,15 (q, J=8 Гц, 2H), 4,99 (d, J=48 Гц, 1H).

Пример получения 2

Синтез гидрохлорида сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты

(2a) Синтез сложного трет-бутилового эфира 4-(2-этокси-2-оксоэтилиден)-3-метоксипиперидин-1-карбоновой кислоты

Гидрид натрия (приблизительно 60%, 2,95 г) добавляли в атмосфере азота при комнатной температуре к раствору этилдиэтилфосфоноацетата (16,56 г) в THF (340 мл), перемешивали в течение 15 минут, затем добавляли по каплям раствор сложного трет-бутилового эфира 3-метокси-4-оксопиперидин-1-карбоновой кислоты (14,11 г) (WO 2012/080735) в тетрагидрофуране (50 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. К реакционной смеси добавляли этилацетат (1000 мл) и насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия (400 мл). Органический слой высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (14,65 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, E/Z смесь) δ: 1,29 (t, J=7,3 Гц, 3H), 1,47 (s, 4,5H), 1,48 (s, 4,5H), 1,98 (m, 0,5H), 2,52-2,83 (m, 2H), 3,2-3,97 (m, 3H), 3,30 (s, 1,5H), 3,37 (s, 1,5H), 3,80-4,58 (m, 1H), 4,18 (m, 2H), 5,21 (br.s, 0,5H), 5,83 (s, 0,5H), 5,94 (s, 0,5H).

(2b) Синтез гидрохлорида сложного этилового эфира 2-(3-метоксипиперидин-4-илиден)уксусной кислоты

Трифторуксусную кислоту (4 мл) добавляли к раствору сложного трет-бутилового эфира 4-(2-этокси-2-оксоэтилиден)-3-метоксипиперидин-1-карбоновой кислоты (1,20 г) в дихлорметане (20 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, добавляли к ней толуол (100 мл) и концентрировали при пониженном давлении. Снова добавляли толуол (10 мл), реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, затем к остатку добавляли этилацетат (10 мл), толуол (10 мл) и 4 н. раствор хлороводород-этилацетата (5 мл) и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (0,95 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,29 (t, J=7 Гц, 1,5H), 1,29 (t, J=7 Гц, 1,5H), 2,92-3,20 (m, 3H), 3,33 (s, 1,5H), 3,34 (s, 1,5H), 3,25-3,91 (m, 4H), 4,16-4,24 (m, 2H), 5,98 (s, 0,5H), 6,00 (s, 0,5H), 7,95 (br.s, 0,5H), 8,43 (br.s, 0,5H), 10,11 (br.s, 1H).

(2c) Синтез гидрохлорида сложного этилового эфира 2-(3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты

Палладий на активированном угле (Pd10%) (0,21 г) добавляли к смеси гидрохлорида сложного этилового эфира 2-(3-метоксипиперидин-4-илиден)уксусной кислоты (0,95 г), этанола (10 мл) и этилацетата (10 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 17 часов в атмосфере водорода. Возвращали атмосферу азота, смесь фильтровали через целит и целит промывали с помощью этанола. Фильтрат и промывочный раствор объединяли и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (1,02 г, главным образом цис-изомер).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, цис изомер) δ: 1,27 (t, J=7 Гц, 3H), 1,71 (br.d, J=14 Гц, 1H), 1,94 (br.q, J=14 Гц, 1H), 2,15 (m, 1H), 2,32 (dd, J=16, 6 Гц, 1H), 2,54 (dd, J=16, 8 Гц, 1H), 2,94 (m, 2H), 3,41 (s, 3H), 3,44-3,65 (m, 3H), 4,15 (q, J=7 Гц, 2H), 7,84 (br.s, 1H), 9,92 (br.s, 1H).

(2d) Синтез сложного этилового эфира (±)-2-(цис-1-бензгидрил-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты

Раствор бромдифенилметана (2,62 г) в DMF (5 мл) добавляли в атмосфере азота при -20°C к смеси гидрохлорида сложного этилового эфира 2-(3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты (2,098 г), DMF (80 мл), триэтиламина (1,35 мл) и карбоната калия (2,44 г) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли к указанному трет-бутилметиловый эфир (400 мл) и воду (200 мл). Органический слой последовательно промывали с помощью воды (200 мл × 2) и насыщенного водного раствора хлорида натрия (200 мл) и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (1,127 г) в виде бесцветной жидкости.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,24 (t, J=7 Гц, 3H), 1,51 (m, 1H), 1,69 (m, 1H), 1,94-2,12 (m, 3H), 2,27 (dd, J=16, 7 Гц, 1H), 2,52 (dd, J=16, 7 Гц, 1H), 2,72 (br.s, 1H), 2,98 (br.s, 1H), 3,28 (s, 3H), 3,29 (br.s, 1H), 4,11 (q, J=7 Гц, 2H), 4,26 (s, 1H), 7,19 (m, 2H), 7,27 (m, 4H), 7,44 (m, 4H).

(2e) Синтез сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-1-бензгидрил-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты

С применением колонки CHIRALPAK OJ-H, энантиомеры сложного этилового эфира (±)-2-(цис-1-бензгидрил-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты (1,127 г) разделяли (оптическое разделение) при следующих условиях с получением указанного в заголовке соединения (0,411 г) в виде первой фракции элюирования.

Условия HPLC

Колонка: CHIRAL PAK OJ-H (серия: OJH-0CJ-FA001), 20 мм × 250 мм, 5 мкм;

подвижная фаза: гексан:этанол=98: 2;

скорость элюирования: 20 мл/мин;

концентрация: 67 мг/мл;

вводимое количество: 0,3 мл;

время удерживания HPLC: 10,5 мин (первая фракция элюирования).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,24 (t, J=7 Гц, 3H), 1,49 (m, 1H), 1,69 (m, 1H), 1,94-2,12 (m, 3H), 2,27 (dd, J=16, 7 Гц, 1H), 2,52 (dd, J=16, 7 Гц, 1H), 2,72 (br.s, 1H), 2,98 (br.s, 1H), 3,27 (s, 3H), 3,29 (br.s, 1H), 4,11 (q, J=7 Гц, 2H), 4,26 (s, 1H), 7,19 (m, 2H), 7,27 (m, 4H), 7,44 (m, 4H).

(2f) Синтез гидрохлорида сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты

Смесь сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-1-бензгидрил-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты (411 мг), 1 н. хлористоводородной кислоты (1,118 мл), палладия на активированном угле (Pd 5%) (0,238 г), циклогексена (20 мл) и этанола (80 мл) перемешивали при 90°C в течение 18 часов. Реакционную смесь фильтровали через целит и целит промывали с помощью этанола (50 мл × 2). Фильтрат и промывочный раствор объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Смешанный растворитель из гептана и толуола (10 мл, 1: 1) и 2 н. хлористоводородной кислоты (20 мл) добавляли к остатку и слои разделяли. Органический слой экстрагировали с помощью 2 н. хлористоводородной кислоты (20 мл). К объединенным водным слоям добавляли 5 н. водный раствор гидроксида натрия для подщелачивания и слои экстрагировали с помощью дихлорметана (50 мл × 2). Объединенные органические слои высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали, к фильтрату добавляли 4 н. раствор хлороводород-этилацетата (2 мл) и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (119 мг).

¹H-ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ: 1,25 (t, J=7 Гц, 3H), 1,72 (m, 1H), 1,76 (m, 1H), 2,20 (m, 1H), 2,34 (dd, J=17, 7 Гц, 1H), 2,52 (dd, J=17, 8 Гц, 1H), 3,02 (m, 2H), 3,27 (m, 1H), 3,41 (s, 3H), 3,60 (m, 2H), 4,14 (q, J=7 Гц, 2H).

Пример получения 3

Синтез гидрохлорида сложного метилового эфира (R)-3-(метиламино)бутановой кислоты

(3a) Синтез сложного метилового эфира (R)-3-(((бензилокси)карбонил)(метил)амино)бутановой кислоты

(R)-3-(((Бензилокси)карбонил)амино)бутановую кислоту (CAS № 67843-72-5)(1,5 г) растворяли в THF (40 мл) и к ней добавляли гидрид натрия (456 мг). Добавляли THF (30 мл) и метилйодид (6 г) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали, добавляли воду и экстрагировали с помощью трет-бутилметилового эфира. К водному слою добавляли 1 н. хлористоводородную кислоту с подкислением водного слоя, который затем экстрагировали с помощью трет-бутилметилового эфира и органический слой высушивали над сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в смешанном растворителе из дихлорметана и метанола (20 мл, 4: 1) и добавляли триметилсилилдиазометан (2 M раствор, 7 мл) при охлаждении льдом, пока реакционная смесь не становилась желтой. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре и концентрировали. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (1,5 г).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ: 1,21 (br.s, 3H), 2,30-2,69 (m, 2H), 2,83 (s, 3H), 3,62 (m, 3H), 4,64 (d, J=6 Гц, 1H), 5,14 (br.s, 2H), 7,30-7,43 (m, 5H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 266 (M+H)⁺

(3b) Синтез гидрохлорида сложного метилового эфира (R)-3-(метиламино)бутановой кислоты

Сложный метиловый эфир (R)-3-(((бензилокси)карбонил)(метил)амино)бутановой кислоты (108 мг) растворяли в метаноле (5 мл), добавляли палладий на угле (50 мг) и перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут в атмосфере водорода. Реакционную смесь фильтровали, к фильтрату добавляли 0,5 н. раствор хлороводород-метанола (2 мл) и концентрировали с получением указанного в заголовке соединения (70 мг).

¹H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ: 1,19 (d, J=7 Гц, 3H), 2,57 (dd, J=17, 9 Гц, 1H), 2,85 (dd, J=17, 5 Гц, 1H), 3,42 (m, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,72 (br.s, 3H), 8,88 (br.s, 2H).

Пример получения 4

Синтез гидрохлорида сложного метилового эфира 2-((1α,5α,6α)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты

(4a) Синтез сложного бензилового эфира (1α,5α,6α)6-(2-метокси-2-оксоэтил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-3-карбоновой кислоты

Раствор триметилсилилдиазометана в 2 М гексане (0,15 мл) добавляли при 0°C к смеси 2-((1α,5α,6α)-3-((бензилокси)карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты (CAS № 1251668-95-7) (62 мг), метанола (1 мл) и этилацетата (4 мл) и затем перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Добавляли уксусную кислоту до исчезновения цвета раствора и концентрировали реакционную смесь при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (32 мг).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 0,91 (m, 1H), 1,41 (br.s, 2H), 2,23 (dd, J=16, 7 Гц, 1H), 2,32 (dd, J=16, 7 Гц, 1H), 3,42 (t, J=9 Гц, 2H), 3,65-3,72 (m, 5H), 5,10 (m, 2H), 7,28-7,37 (m, 5H).

(4b) Синтез гидрохлорида сложного метилового эфира 2-((1α,5α,6α)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты

Сложный бензиловый эфир (1α,5α,6α)6-(2-метокси-2-оксоэтил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-3-карбоновой кислоты (32 мг) растворяли в метаноле (2 мл), добавляли палладий на угле (10 мг) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 часа в атмосфере водорода. Реакционную смесь фильтровали, к фильтрату добавляли 4 н. раствор хлороводород-этилацетата (0,05 мл) и концентрировали с получением указанного в заголовке соединения (26 мг).

¹H-ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ: 0,95 (m, 1H), 1,74 (m, 2H), 2,37 (m, 2H), 3,38-3,45 (m, 4H), 3,68 (s, 3H).

Пример получения 5

Синтез гидрохлорида сложного изопропилового эфира 2-((3R*,4S*)-3-метилпиперидин-4-ил)уксусной кислоты

(5a) Синтез сложного трет-бутилового эфира (4S)-3-(гидроксиметил)-4-(2-изопропокси-2-оксоэтил)пиперидин-1-карбоновой кислоты

Смесь сложного трет-бутилового эфира (3R,4S)-4-(2-изопропокси-2-оксоэтил)-3-винилпиперидин-1-карбоновой кислоты (CAS № 345223-81-6) (16,69 г), дихлорметана (200 мл) и метанола (400 мл) охлаждали в атмосфере азота с применением смеси сухой лед-этанол в качестве охладителя и пропускали озон в течение 1 часа при перемешивании (Nihon Ozone Generator Co., Ltd. HYD-G5000, скорость потока O2: 1,5 л/мин.). После продувания азота в течение 15 минут с удалением избытка озона добавляли тетрагидроборат натрия (6,08 г) к разделенным реакционным растворам (540 мл), подлежащим применению для следующей реакции, и затем обеспечивали достижение реакционной смесью комнатной температуры. Реакционную смесь охлаждали до 0°C, добавляли дополнительное количество тетрагидробората натрия (2,03 г) и перемешивали в течение 1 часа. Избыток восстановителя гасили с помощью ацетона, добавляли этилацетат (600 мл) и воду (100 мл) и значение pH регулировали до 5-6 с применением лимонной кислоты. Органический слой высушивали над безводным сульфатом магния, осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (9,09 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,23-1,25 (m, 6H), 1,30-1,42 (m, 1H), 1,45-1,47 (m, 10H), 1,91-2,47 (m, 4H), 2,75-2,97 (m, 2H), 3,28-3,58 (m, 2H), 3,90-4,25 (m, 2H), 4,96-5,06 (m, 1H).

(5b) Синтез сложного трет-бутилового эфира (4S) 4-(2-изопропокси-2-оксоэтил)-3-(((метилсульфонил)окси)метил)пиперидин-1-карбоновой кислоты

Смесь сложного трет-бутилового эфира (4S)-3-(гидроксиметил)-4-(2-изопропокси-2-оксоэтил)пиперидин-1-карбоновой кислоты (9,09 г) и дихлорметана (300 мл) охлаждали в атмосфере азота с применением смеси сухой лед-ацетон в качестве охладителя и добавляли метансульфонилхлорид (3,59 мл) и триэтиламин (6,02 мл) при перемешивании. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи до остывания до комнатной температуры и добавляли дихлорметан (500 мл) и 5% водный раствор серной кислоты (100 мл). Органический слой последовательно промывали с помощью насыщенного водного раствора гидрокарбоната натрия (100 мл), воды (100 мл) и насыщенного водного раствора хлорида натрия (100 мл). Безводный сульфат магния добавляли к органическому слою для высушивания, затем осушающее средство отфильтровывали и концентрировали с получением неочищенного продукта на основе указанного в заголовке соединения (11,34 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,23-1,25 (m, 6H), 1,30-1,42 (m, 1H), 1,45-1,80 (m, 10H), 2,11-2,52 (m, 4H), 2,74-2,97 (m, 2H), 3,04 (m, 3H), 3,75-4,28 (m, 4H), 4,97-5,05 (m, 1H).

(5c) Синтез сложного трет-бутилового эфира (4S)-3-(йодметил)-4-(2-изопропокси-2-оксоэтил)пиперидин-1-карбоновой кислоты

Смесь сложного трет-бутилового эфира (4S) 4-(2-изопропокси-2-оксоэтил)-3-(((метилсульфонил)окси)метил)пиперидин-1-карбоновой кислоты (13,37 г), ацетона (200 мл) и йодида натрия (30,6 г) перемешивали с нагреванием при 55°C в течение 6 часов. После охлаждения реакционной смеси до комнатной температуры добавляли этилацетат (600 мл) и насыщенный водный раствор тиосульфата натрия. Органический слой последовательно промывали с помощью воды (200 мл) и насыщенного водного раствора хлорида натрия (200 мл) и затем высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали, фильтрат концентрировали при пониженном давлении и затем остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (9,80 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,24-1,28 (m, 6H), 1,30-1,42 (m, 1H), 1,45-1,80 (m, 10H), 2,00-2,48 (m, 4H), 2,73-3,35 (m, 4H), 3,94-4,28 (m, 2H), 4,99-5,07 (m, 1H).

(5d) Синтез сложного трет-бутилового эфира (4S)-4-(2-изопропокси-2-оксоэтил)-3-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты

Цинк (37,7 г) добавляли в атмосфере азота к смеси сложного трет-бутилового эфира (4S)-3-(йодметил)-4-(2-изопропокси-2-оксоэтил)пиперидин-1-карбоновой кислоты (9,80 г) и уксусной кислоты (151 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов и фильтровали. Удаленное твердое вещество промывали с помощью этилацетата. Промывочный раствор и фильтрат объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в этилацетате (800 мл) и 10% водном растворе лимонной кислоты (200 мл), органический слой высушивали над безводным сульфатом магния, затем фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток объединяли с остатком, полученным с применением такой же процедуры в отдельном эксперименте из сложного трет-бутилового эфира (4S)-3-(йодметил)-4-(2-изопропокси-2-оксоэтил)пиперидин-1-карбоновой кислоты (2,59 г), уксусной кислоты (40 мл) и цинка (9,95 г) и очищенным посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат), с получением указанного в заголовке соединения (7,85 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 0,86 (d, J=7 Гц, 2,4H), 0,88 (d, J=7 Гц, 0,6H), 1,23 (m, 6H), 1,45 (m, 11H), 1,83 (br.s, 1H), 2,09-2,25 (m, 3H), 2,74 (br.s, 1H), 2,99 (dd, J=13, 4 Гц, 1H), 3,72-3,78 (m, 1H), 4,04 (br.s, 1H), 4,97-5,06 (m, 1H).

(5e) Синтез 2,2,2-трифторацетата сложного изопропилового эфира 2-((4S)-3-метилпиперидин-4-ил)уксусной кислоты

Трифторуксусную кислоту (30 мл) добавляли к смеси сложного трет-бутилового эфира (4S)-4-(2-изопропокси-2-оксоэтил)-3-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты (7,22 г) и дихлорметана (120 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Добавляли толуол (100 мл) и реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Снова добавляли толуол (100 мл) и реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (10,80 г) в виде неочищенного продукта.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,00 (d, J=7 Гц, 0,6H), 1,04 (d, J=7 Гц, 2,4H), 1,24 (d, J=6 Гц, 6H), 1,54-1,89 (m, 2H), 1,95-2,36 (m, 4H), 2,87-3,51 (m, 4H), 5,03 (m, 1H), 8,07 (br.s, 1H), 8,55 (br.s, 1H).

(5f) Синтез сложного изопропилового эфира 2-((3R*,4S*)-1-бензгидрил-3-метилпиперидин-4-ил)уксусной кислоты

Смесь 2,2,2-трифторацетата сложного изопропилового эфира 2-((4S)-3-метилпиперидин-4-ил)уксусной кислоты (7,55 г) и DMF (200 мл) охлаждали в атмосфере азота до -40°C и добавляли раствор триэтиламина (3,36 мл), карбоната калия (13,33 г) и бромдифенилметана (6,85 г) в DMF (10 мл). Смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и добавляли этилацетат (600 мл) и воду (300 мл). Органический слой последовательно промывали с помощью воды (2 × 200 мл) и насыщенного водного раствора хлорида натрия (200 мл) и затем высушивали над безводным сульфатом магния и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и затем остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (5,40 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,03 (d, J=7 Гц, 3H), 1,20 (d, J=6 Гц, 6H), 1,40-1,48 (m, 1H), 1,51-1,61 (m, 1H), 1,75-1,86 (m, 1H), 1,88-2,10 (m, 3H), 2,16 (dd, J=15, 8 Гц, 1H), 2,22 (dd, J=15, 7 Гц, 1H), 2,58 (br.s, 1H), 2,71 (br.s, 1H), 4,17 (s, 1H), 4,98 (m, 1H), 7,16 (m, 2H), 7,26 (m, 4H), 7,40 (m, 4H).

(5g) Синтез гидрохлорида сложного изопропилового эфира 2-((3R*,4S*)-3-метилпиперидин-4-ил)уксусной кислоты

Палладий на активированном угле (Pd 5%) (3,14 г), 5 н. хлористоводородную кислоту (2,95 мл) и циклогексен (150 мл) добавляли в атмосфере азота к смеси сложного изопропилового эфира 2-((3R*,4S*)-1-бензгидрил-3-метилпиперидин-4-ил)уксусной кислоты (5,40 г) и этанола (500 мл) и нагревали с обратным холодильником в течение 20 часов. Реакционную смесь охлаждали и затем фильтровали через целит и целит промывали с помощью этанола (4 × 100 мл). Фильтрат и промывочный раствор объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в толуоле (20 мл), гептане (20 мл) и 5 н. хлористоводородной кислоте (50 мл) и органический слой экстрагировали с помощью 5 н. хлористоводородной кислоты (50 мл). Водные слои объединяли, регулировали до значения pH 14 с помощью 5 н. водного раствора гидроксида натрия и экстрагировали с помощью дихлорметана (200 мл, 2 × 100 мл). Органические слои объединяли, высушивали над безводным сульфатом магния и фильтровали. Добавляли 4 н. раствор хлороводород-этилацетата (4 мл) и концентрировали до объема 10 мл и добавляли трет-бутилметиловый эфир (10 мл). Растворитель концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (2,65 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ: 1,01 (d, J=7 Гц, 3H), 1,23 (d, J=6 Гц, 6H), 1,67-1,84 (m, 2H), 2,10-2,21 (m, 1H), 2,26-2,40 (m, 3H), 3,03-3,16 (m, 3H), 3,20-3,25 (ddd, J=13, 6, 4 Гц, 1H), 4,99 (m, 1H).

Пример 1

Синтез 2-((3R*,4S*)-1-(7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты

(1a) Синтез сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2,6-диметилфенил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Раствор сложного этилового эфира 5,7-дихлорпиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (CAS № 1232224-62-2) (WO 2011/105628) (1,36 г), 2,6-диметиланилина (CAS № 87-62-7) (0,76 г), Pd₂DBA₃ (0,239 г), 2-(дихлоргексилфосфино)бифенила (0,092 г) и фосфата калия (1,67 г) в 1,2-диметоксиэтане (15 мл) перемешивали при 120°C в течение 12 часов в аппарате для микроволнового облучения. Реакционную смесь разбавляли с помощью этилацетата, затем промывали с помощью насыщенного солевого раствора и органический слой высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали, фильтрат концентрировали и затем остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (1,7 г) в виде красного маслянистого продукта.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,46 (t, J=7 Гц, 3H), 2,25 (s, 6H), 4,51 (q, J=7 Гц, 2H), 5,60 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 7,27 (m, 3H), 7,86 (s, 1H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 345 (M+H)⁺

(1b) Синтез сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Карбонат калия (0,75 г) и метилйодид (0,5 мл) добавляли к раствору сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2,6-диметилфенил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (0,93 г) в DMF (20 мл) и перемешивали при 50°C в течение 2 часов. Реакционную смесь разбавляли с помощью этилацетата, затем дважды промывали с помощью насыщенного солевого раствора и органический слой высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали, фильтрат концентрировали при пониженном давлении и затем остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (0,4 г) в виде светло-желтого маслянистого продукта.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,45 (t, J=7 Гц, 3H), 2,23 (s, 6H), 4,16 (s, 3H), 4,47 (q, J=7 Гц, 2H), 5,25 (s, 1H), 6,68 (s, 1H), 7,24 (m, 3H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 359 (M+H)⁺

(1c) Синтез сложного этилового эфира 7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Смесь сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (1,8 г), 3,4,5-трифторфенилбороновой кислоты (CAS № 143418-49-9) (971 мг), тетракис(трифенилфосфин)палладия (0) (290 мг), карбоната калия (1,59 г), воды (0,09 мл) и 1,4-диоксана (10 мл) перемешивали при 120°C в течение 1,5 часа в аппарате для микроволнового облучения. Реакционную смесь разбавляли с помощью этилацетата, затем промывали с помощью насыщенного солевого раствора и органический слой высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (1,9 г) в виде светло-желтого маслянистого продукта.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 1,46 (br.s, 3H), 2,25 (s, 6H), 4,21 (s, 3H), 4,49 (br.s, 2H), 5,55 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 7,37 (br.s, 5H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 455 (M+H)⁺

(1d) Синтез 7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

5 н. водный раствор гидроксида натрия (1,25 мл) добавляли к раствору сложного этилового эфира 7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (0,95 г) в 1,4-диоксане (20 мл) и перемешивали при 90°C в течение 2 часов. После обеспечения остывания реакционной смеси обратно до комнатной температуры добавляли 5 н. хлористоводородную кислоту для подкисления, полученное твердое вещество собирали посредством фильтрации и промывали с помощью этанола с получением 0,88 г указанного в заголовке соединения в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H-ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆, смесь поворотных изомеров) δ: 2,04 (s, 4H), 2,20 (s, 2H), 3,48 (s, 2H), 4,07 (s, 1H), 5,62 (s, 0,4H), 6,82-7,32 (m, 4,6H), 7,57 (br.s, 0,7H), 8,26 (s, 1,3H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 427 (M+H)⁺

(1e) Синтез сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-1-(7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты

Гидробромид сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты (16,5 мг) (пример получения 1) добавляли к раствору 7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (20 мг), WSC (18,0 мг), HOBT (12,7 мг) и триэтиламина (0,013 мл) в DMF (1 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. К реакционной смеси добавляли этилацетат и воду с разделением раствора. Водный слой дважды экстрагировали с помощью этилацетата. Объединенные органические слои промывали с помощью насыщенного солевого раствора и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (21 мг).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 1,26-1,30 (m, 3H), 1,54-1,72 (m, 2H), 2,06-2,18 (m, 7H), 2,25-2,63 (m, 4H), 3,44 (s, 3H), 4,13-4,21 (m, 2H), 4,41-5,14 (m, 2H), 5,52 (s, 1H), 6,46 (br.s, 1H), 6,82-7,39 (m, 4H), 7,73-7,80 (m, 2H).

(1f) Синтез 2-((3R*,4S*)-1-(7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты

5 н. водный раствор гидроксида натрия (0,2 мл) добавляли к раствору сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-1-(7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты (20 мг) в 1,4-диоксане (1 мл) и перемешивали при 55°C в течение 3 часов. Реакционную смесь очищали посредством обращенно-фазовой колоночной хроматографии на силикагеле (система ацетонитрил-вода, 0,1% уксусной кислоты) с получением указанного в заголовке соединения (9,64 мг).

¹H-ЯМР (600 МГц, DMSO-d₆, 42°C, смесь поворотных изомеров) δ: 1,05-1,56 (m, 2H), 2,00-2,08 (m, 7H), 2,17-2,21 (m, 1H), 2,33-2,37 (m, 1H), 2,53-2,92 (m, 2H), 3,48 (s, 3H), 3,97-4,78 (m, 3H), 6,74-6,77 (m, 1H), 7,08-7,12 (m, 4H), 8,25 (m, 2H), 12,11 (br.s, 1H).

Пример 2

Синтез 2-(3R*,4S*)-1-(7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты

(2a) Синтез сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-1-(7-(2,6-диметилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты

HOBT (46 мг), WSC (58 мг), гидрохлорид сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты (62 мг) (пример получения 2) и триэтиламин (81 мг) последовательно добавляли к раствору 7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (85 мг) (пример 1 - (1d)) в DMF (5 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 6 часов. К реакционной смеси добавляли этилацетат (50 мл) и воду (20 мл) и органический слой промывали с помощью воды (20 мл × 2) и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (108 мг) в виде белого твердого вещества.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 1,26-1,35 (m, 3H), 1,52-1,91 (m, 2H), 2,22-2,52 (m, 8H), 2,57-2,66 (m, 1H), 3,49-3,56 (m, 7H), 4,10-4,26 (m, 3H), 4,53-4,65 (m, 1H), 4,78-4,87 (m, 1H), 4,98-5,08 (m, 1H), 5,49-6,49 (m, 1H), 6,94-7,02 (m, 1H), 7,20-7,33 (m, 3H), 7,74-7,81 (m, 2H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 610 (M+H)⁺

(2b) Синтез 2-((3R*,4S*)-1-(7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты

4 н. водный раствор гидроксида лития (0,089 мл) добавляли к смеси сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-1-(7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты (108 мг), 1,4-диоксана (5 мл) и воды (1 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 19 часов. Добавляли диметилсульфоксид (1 мл) и уксусную кислоту (0,2 мл), реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой колоночной хроматографии на силикагеле(система ацетонитрил-вода, 0,1% уксусной кислоты), за счет чего обеспечивали сбор фракции, содержащей указанное в заголовке соединение. Фракцию концентрировали при пониженном давлении до объема приблизительно 3 мл, осадок собирали посредством фильтрации, промывали с помощью воды (2 мл) и высушивали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (69 мг).

¹H-ЯМР (600 МГц, CDCl₃, 30°C, смесь поворотных изомеров) δ: 1,52-1,91 (m, 2H), 2,22-2,52 (m, 8H), 2,57-2,66 (m, 1H), 3,49-3,56 (m, 7H), 4,15-4,26 (m, 1H), 4,53-4,65 (m, 1H), 4,78-4,87 (m, 1H), 4,98-5,08 (m, 1H), 5,48-6,49 (m, 1H), 6,94-7,02 (m, 1H), 7,20-7,33 (m, 3H), 7,70-7,81 (m, 2H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 582 (M+H)⁺

Пример 3

Синтез 2-((3R*,4S*)-1-(5-(4,4-диметилциклогексил)-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты

(3a) Синтез сложного этилового эфира 5-(4,4-диметилциклогекс-1-ен-1-ил)-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Воду (3 мл), карбонат натрия (0,27 г), сложный пинаколовый эфир 4,4-(диметилциклогексен-1-ил)бороновой кислоты (CAS № 859217-67-7) (0,35 г) и тетракис(трифенилфосфин)палладий (0) (0,058 г) добавляли к смеси сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (0,36 г) (пример 1- (1b)) и 1,4-диоксана (15 мл) и смесь перемешивали с нагреванием при 95°C в течение 2 часов в атмосфере азота. Реакционную смесь разбавляли с помощью этилацетата (150 мл) и воды (50 мл) и органический слой высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (0,31 г) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 0,91 (br.s, 6H), 1,24-1,45 (m, 5H), 1,96 (br.s, 2H), 2,21 (br.s, 6H), 2,32 (br.s, 2H), 4,13 (br.s, 3H), 4,43 (br.s, 2H), 5,44 (br.s, 1H), 6,35 (br.s, 1H), 6,91 (s, 1H), 7,22 (br.s, 3H).

(3b) Синтез сложного этилового эфира 5-(4,4-диметилциклогексил)-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

10% палладий на угле (10 мг) добавляли к смеси сложного этилового эфира 5-(4,4-диметилциклогекс-1-ен-1-ил)-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (43 мг) и метанола (4 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов в атмосфере водорода. Реакционную смесь фильтровали через целит и катализатор отфильтровывали. Целит и катализатор промывали с помощью этилацетата, фильтрат и промывочный раствор объединяли и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (46 мг).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 0,90 (br.s, 6H), 1,26 (br.s, 3H), 1,35-1,65 (m, 8H), 2,19 (br.s, 6H), 2,30 (br.s, 1H), 4,13 (br.s, 3H), 4,43 (br.s, 2H), 5,17 (br.s, 1H), 6,88 (s, 1H), 7,22 (br.s, 3H).

(3c) Синтез 5-(4,4-диметилциклогексил)-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Воду (4 мл) и гидроксид лития (30 мг) добавляли к смеси сложного этилового эфира 5-(4,4-диметилциклогексил)-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (271 мг) и 1,4-диоксана (20 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 17 часов. Уксусную кислоту (0,2 мл) и DMSO (4 мл) добавляли к реакционной смеси, которую концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой колоночной хроматографии на силикагеле (система ацетонитрил-вода, 0,1% уксусной кислоты) с получением указанного в заголовке соединения (200 мг).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 0,80-1,08 (m, 6H), 1,15-1,88 (m, 8H), 2,00-2,63 (m, 7H), 3,43 (s, 2,3H), 4,08 (br.s, 0,7H), 5,24 (br.s, 0,3H), 6,13 (br.s, 0,7H), 6,83-7,26 (m, 4H).

(3d) Синтез сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-1-(5-(4,4-диметилциклогексил)-7-((2,6-диметилфенил)(метил)(амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты

HOBT (63 мг) и WSC (79 мг) добавляли к смеси 5-(4,4-диметилциклогексил)-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (112 мг) и DMF (5 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. Гидробромид сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты (82 мг) (пример получения 1) и триэтиламин (111 мг) последовательно добавляли к указанному и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. К реакционной смеси добавляли этилацетат (60 мл) и воду (30 мл) и органический слой промывали с помощью воды (30 мл × 2) и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (139 мг).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 0,81-1,05 (m, 6H), 1,15-1,84 (m, 12H), 1,25 (m, 3H), 2,01-2,36 (m, 8H), 2,47 (m, 1H), 2,60 (br.s, 1H), 3,34 (br.s, 2H), 4,02 (br.s, 1H), 4,17 (m, 2H), 4,26-5,21 (m, 3H), 6,15-6,85 (m, 2H), 6,98-7,34 (m, 3H).

(3e) Синтез 2-((3R*,4S*)-1-(5-(4,4-диметилциклогексил)-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты

Водный раствор (2 мл) гидроксида лития (11,5 мг) добавляли к раствору сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-1-(5-(4,4-диметилциклогексил)-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты (139 мг) в 1,4-диоксане (6 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. DMSO (2 мл) и уксусную кислоту (0,1 мл) добавляли к реакционной смеси, которую концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой колоночной хроматографии на силикагеле (система ацетонитрил-вода, 0,1% уксусной кислоты), фракции, содержащие указанное в заголовке соединение, объединяли и концентрировали при пониженном давлении до объема 5 мл. Осадок собирали посредством фильтрации, промывали с помощью воды (5 мл) и высушивали при пониженном давлении. Указанное в заголовке соединение (97 мг) получали в виде светло-коричневого твердого вещества.

¹H-ЯМР (500 МГц, CD₃OD, смесь поворотных изомеров) δ: 0,90-1,08 (m, 6H), 1,15-1,34 (m, 1H), 1,41-1,48 (m, 3H), 1,55-1,65 (m, 2H), 1,72-1,95 (m, 3H), 2,04-2,16 (m, 6H), 2,20-2,40 (m, 3H), 2,41-2,95 (m, 4H), 3,42 (s, 0,7H), 4,08 (s, 2,3H), 4,14-5,25 (m, 3H), 6,40-6,73 (m, 2H), 7,06-7,35 (m, 3H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 550 (M+H)⁺

Пример 4

Синтез 2-((3R*,4S*)-1-(5-(3-хлор-4-фторфенил)-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты

(4a) Синтез сложного этилового эфира 5-(3-хлор-4-фторфенил)-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Воду (1 мл), карбонат натрия (0,18 г), 3-хлор-4-фторфенилбороновую кислоту (CAS № 144432-85-9) (0,14 г) и тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (0,065 г) добавляли к смеси сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (269 мг) (пример 1 - (1b)) и 1,4-диоксана (10 мл) и смесь перемешивали с нагреванием при 90°C в течение 24 часов в атмосфере азота. Реакционную смесь разбавляли с помощью этилацетата (100 мл) и воды (50 мл) и органический слой высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (0,35 г) в виде белого твердого вещества.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 1,46 (br.s, 3H), 2,25 (s, 6H), 4,20 (s, 3H), 4,49 (br.s, 2H), 5,60 (br.s, 1H), 6,98 (br.s, 1H), 7,12 (br.s, 1H), 7,25 (br.s, 3H), 7,52 (br.s, 1H), 7,86 (br.s, 1H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 453 (M+H)⁺

(4b) Синтез 5-(3-хлор-4-фторфенил)-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Воду (1 мл) и 4 н. водный раствор гидроксида лития (0,39 мл) добавляли к смеси сложного этилового эфира 5-(3-хлор-4-фторфенил)-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (353 мг) и 1,4-диоксана (9 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, к остатку добавляли воду (3 мл) и уксусную кислоту (0,2 мл) и подвергали воздействию ультразвука. Осадок собирали посредством фильтрации, промывали с помощью воды (1 мл) и высушивали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (233 мг) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H-ЯМР (500 МГц, CD₃OD, смесь поворотных изомеров) δ: 2,12 (s, 1,5H), 2,28 (br.s, 4,5H), 3,54 (s, 0,8H), 4,19 (s, 2,2H), 5,60 (s, 0,7H), 6,80-7,45 (m, 5,3H), 7,54 (br.s, 0,7H), 7,87 (br.s, 0,7H), 8,16 (br.s, 0,3H), 8,33 (br.s, 0,3H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 425 (M+H)⁺

(4c) Синтез сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-1-(5-(3-хлор-4-фторфенил)-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты

HOBT (54 мг) и WSC (68 мг) добавляли к смеси 5-(3-хлор-4-фторфенил)-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (100 мг) и DMF (3 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. Гидрохлорид сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты (60 мг) (пример получения 2) и триэтиламин (95 мг) последовательно добавляли к указанному и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. К реакционной смеси добавляли этилацетат и воду и органический слой промывали с помощью воды и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (110 мг).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 1,21-1,83 (m, 2H), 1,27 (m, 3H), 1,95-2,26 (m, 7H), 2,35-2,73 (m, 4H), 2,77-3,13 (m, 1H), 3,22-4,10 (m, 6H), 4,02-5,08 (m, 4H), 5,58 (m, 0,45H), 6,51 (m, 0,55H), 6,78-7,30 (m, 5H), 7,52 (br.s, 0,45H), 7,85 (br.s, 0,45H), 8,00 (br.s, 0,55H), 8,17 (d, J=6 Гц, 0,55H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 608 (M+H)⁺

(4d) Синтез 2-((3R*,4S*)-1-(5-(3-хлор-4-фторфенил)-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты

Воду (1,5 мл) и 4 н. водный раствор гидроксида лития (0,086 мл) добавляли к смеси сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-1-(5-(3-хлор-4-фторфенил)-7-((2,6-диметилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты (105 мг) и 1,4-диоксана (6 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов. 1 н. хлористоводородную кислоту (0,34 мл) добавляли к реакционной смеси, которую концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой колоночной хроматографии на силикагеле (система ацетонитрил-вода, 0,1% уксусной кислоты) с получением указанного в заголовке соединения (81 мг).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 1,21-1,79 (m, 2H), 1,95-2,26 (m, 7H), 2,35-2,74 (m, 4H), 2,75-3,11 (m, 1H), 3,22-3,55 (m, 4,8H), 4,03 (m, 0,2H), 4,09 (s, 1,2H), 4,23 (m, 0,2H), 4,62 (m, 0,8H), 4,84-5,07 (m, 0,4H), 5,57 (m, 0,4H), 6,52 (m, 0,6H), 6,80 (m, 0,4H), 6,98-7,16 (m, 3H), 7,22-7,33 (m, 2H), 7,52 (br.s, 0,4H), 7,85 (br.s, 0,6H), 8,00 (br.s, 0,4H), 8,17 (d, J=7 Гц, 0,6H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 580 (M+H)⁺

Пример 5

Синтез 2-((3R*,4S*)-3-фтор-1-(7-((2-метокси-6-метилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)пиперидин-4-ил)уксусной кислоты

(5a) Синтез сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2-метокси-6-метилфенил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Раствор сложного этилового эфира 5,7-дихлорпиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (CAS № 1232224-62-2) (8 г) и 2-метокси-6-метиланилина (CAS № 50868-73-0) (4,64 г) в NMP (6 мл) перемешивали при 150°C в течение 4 часов. К реакционной смеси добавляли этилацетат, DMSO и насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия и органический слой промывали с помощью насыщенного солевого раствора и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта на основе указанного в заголовке соединения (10,98 г).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 1,46 (t, J=7 Гц, 3H), 2,27 (s, 3H), 3,78 (s, 3H), 4,50 (q, J=7 Гц, 2H), 5,66 (s, 1H), 6,88 (d, J=8 Гц, 1H), 6,95 (d, J=8 Гц, 1H), 6,99 (s, 1H), 7,31 (t, J=8 Гц, 1H), 7,80 (s, 1H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 361 (M+H)⁺

(5b) Синтез сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2-метокси-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Карбонат калия (12,62 г) и метилйодид (5,71 мл) добавляли к раствору неочищенного продукта (10,98 г) на основе сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2-метокси-6-метилфенил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты в DMF (100 мл) и перемешивали при 50°C в течение 4 часов. К реакционной смеси добавляли этилацетат и воду с разделением раствора. Водный слой экстрагировали с помощью этилацетата. Объединенные органические слои последовательно промывали с помощью воды и насыщенного солевого раствора и высушивали над безводным сульфатам магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (7,14 г).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃, 45°C, смесь поворотных изомеров) δ: 1,39 (t, J=7 Гц, 3H), 2,21 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,88 (br.s, 3H), 4,39 (q, J=7 Гц, 2H), 5,56 (br.s, 1H), 6,83 (s, 1H), 6,84 (d, J=7 Гц, 1H), 6,92 (d, J=7 Гц, 1H), 7,27 (t, J=7 Гц, 1H).

(5c) Синтез сложного этилового эфира 7-((2-метокси-6-метилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Смесь сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2-метокси-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (500 мг), 3,4,5-трифторфенилбороновой кислоты (282 мг), тетракис(трифенилфосфин)палладия (0) (77 мг), карбоната натрия (353 мг), воды (1,6 мл) и 1,4-диоксана (16 мл) перемешивали при 100°C в течение 3 часов в атмосфере азота. К реакционной смеси добавляли этилацетат и насыщенный солевой раствор и органический слой высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (668 мг).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃, 45°C, смесь поворотных изомеров) δ: 1,40 (t, J=7 Гц, 3H), 2,23 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,94 (s, 3H), 4,41 (q, J=7 Гц, 2H), 5,88 (br.s, 1H), 6,88 (d, J=8 Гц, 1H), 6,95 (d, J=7 Гц, 1H), 6,97 (s, 1H), 7,30 (t, J=8 Гц, 1H), 7,49 (m, 2H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 471 (M+H)⁺

(5d) Синтез 7-((2-метокси-6-метилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

4 н. водный раствор гидроксида лития (1 мл) добавляли к раствору сложного этилового эфира 7-((2-метокси-6-метилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (668 мг) в 1,4-диоксане (5 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. К реакционной смеси добавляли 2 н. хлористоводородную кислоту (2 мл) и осажденное твердое вещество собирали посредством фильтрации с получением указанного в заголовке соединения (574 мг).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃, 45°C, смесь поворотных изомеров) δ: 2,24 (s, 3H), 3,68 (s, 6H), 6,31 (br.s, 1H), 6,80 (d, J=8 Гц, 1H), 6,94 (d, J=8 Гц, 1H), 6,99 (s, 1H), 7,31 (t, J=7 Гц, 1H), 7,67 (m, 2H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 443 (M+H)⁺

(5e) Синтез 2-((3R*,4S*)-3-фтор-1-(7-((2-метокси-6-метилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)пиперидин-4-ил)уксусной кислоты

N,N-Диизопропилэтиламин (0,05 мл) добавляли к раствору 7-((2-метокси-6-метилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (30 мг), гидробромида сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты (27 мг) (пример получения 1) и HATU (60 мг) в дихлорметане (1 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. К реакционной смеси добавляли этилацетат и воду и органический слой последовательно промывали с помощью воды и насыщенного солевого раствора и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта на основе сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-3-фтор-1-(7-((2-метокси-6-метилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)пиперидин-4-ил)уксусной кислоты. К указанному добавляли 1,4-диоксан (1 мл) и 4 н. водный раствор гидроксида лития (0,2 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь, к которой добавляли 2 н. хлористоводородную кислоту (0,4 мл), очищали посредством обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (система ацетонитрил-вода, 0,1% уксусной кислоты) с получением указанного в заголовке соединения (2,81 мг).

¹H-ЯМР (600 МГц, пиридин-d₅, 15°C, смесь поворотных изомеров) δ: 1,50-1,81 (m, 2H), 2,23-2,37 (m, 3H), 2,39-2,59 (m, 2H), 2,63-2,69 (m, 1H), 2,74-3,03 (m, 2H), 3,37 (br.s, 3H), 3,48 (br.s, 3H), 4,54-4,70 (m, 1H), 4,90-5,12 (m, 1H), 5,17-5,38 (m, 1H), 6,72-6,99 (m, 4H), 7,43-7,57 (m, 1H), 8,12 (br.s, 2H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 586 (M+H)⁺

Пример 6

Синтез 2-((3R*,4S*)-3-метокси-1-(7-((2-метокси-6-метилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)пиперидин-4-ил)уксусной кислоты

(6a) Синтез сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-3-метокси-1-(7-((2-метокси-6-метилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)пиперидин-4-ил)уксусной кислоты

HOBT (46 мг), WSC (58 мг), гидрохлорид сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты (62 мг) (пример получения 2) и триэтиламин (81 мг) последовательно добавляли к раствору 7-((2-метокси-6-метилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (88 мг) (пример 5 - (5d)) в DMF (5 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. К реакционной смеси добавляли этилацетат (50 мл) и воду (20 мл) и органический слой промывали с помощью воды (20 мл × 2) и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (111 мг) в виде белого твердого вещества.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 1,27 (m, 3H), 1,28-1,75 (m, 2H), 2,15-2,30 (m, 1H), 2,15-2,34 (m, 3H), 2,40-2,55 (m, 1H), 2,60-3,15 (m, 4H), 3,35-3,44 (m, 3H), 3,52-3,80 (m, 6H), 4,11-4,20 (m, 2H), 4,20-4,96 (m, 2H), 6,22 (br.s, 1H), 6,68-6,97 (m, 3H), 7,16-7,34 (m, 1H), 7,55-7,77 (m, 2H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 626 (M+H)⁺

(6b) Синтез 2-((3R*,4S*)-3-метокси-1-(7-((2-метокси-6-метилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)пиперидин-4-ил)уксусной кислоты

4 н. водный раствор гидроксида лития (0,089 мл) добавляли к смеси сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-3-метокси-1-(7-((2-метокси-6-метилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)пиперидин-4-ил)уксусной кислоты (111 мг), 1,4-диоксана (5 мл) и воды (1 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 22 часов. Добавляли DMSO (1 мл) и уксусную кислоту (0,2 мл) и реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой колоночной хроматографии на силикагеле (система ацетонитрил-вода, 0,1% уксусной кислоты) и фракции, содержащие указанное в заголовке соединение, объединяли. Фракцию концентрировали при пониженном давлении до объема приблизительно 3 мл, осадок собирали посредством фильтрации, промывали с помощью воды (2 мл) и высушивали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (76 мг) в виде белого твердого вещества.

¹H-ЯМР (600 МГц, CDCl₃, 42°C, смесь поворотных изомеров) δ: 1,33-1,77 (m, 2H), 2,10-2,16 (m, 1H), 2,23-2,25 (m, 3H), 2,32-2,39 (m, 1H), 2,49-3,15 (m, 4H), 3,41-3,45 (m, 3H), 3,53-3,78 (m, 6H), 4,22-4,93 (m, 2H), 6,02-6,38 (m, 1H), 6,73-6,96 (m, 3H), 7,21-7,24 (m, 1H), 7,56-7,73 (m, 2H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 598 (M+H)⁺.

[α]_D ²⁰: -109,0° (100 мг, DMSO, 5 мл, 100 мм).

Пример 7

Синтез (R)-3-(7-((2-фтор-6-метоксифенил)(метил)амино)-N-метил-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоксамид)бутановой кислоты

(7a) Синтез сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2-фтор-6-метоксилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Раствор сложного этилового эфира 5,7-дихлорпиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (CAS № 1232224-62-2) (3,63 г) и 2-фтор-6-метоксиланилина (CAS № 446-61-7) (1,97 г) в NMP (2,69 мл) перемешивали в атмосфере азота при 140°C в течение 4 часов. После обеспечения остывания реакционной смеси обратно до комнатной температуры добавляли DMF (15 мл), карбонат калия (7,72 г) и метилйодид (2,62 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней. К реакционной смеси добавляли этилацетат (200 мл) и воду (100 мл) и органический слой промывали с помощью воды (50 мл × 2) и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (3,33 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,33 (t, J=7 Гц, 3H), 3,70 (br.s, 3H), 3,75 (s, 3H), 4,32 (q, J=7 Гц, 2H), 5,98 (br.s, 1H), 6,75-6,86 (m, 3H), 7,29-7,35 (m, 1H).

(7b) Синтез сложного этилового эфира 7-((2-фтор-6-метоксилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Смесь сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2-фтор-6-метоксилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (3,33 г), 3,4,5-трифторфенилбороновой кислоты (1,857 г), тетракис(трифенилфосфин)палладия (0) (0,508 г), карбоната калия (2,431 г), воды (5 мл) и 1,4-диоксана (50 мл) перемешивали при 90°C в течение 14 часов в атмосфере азота. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, к остатку добавляли этилацетат (400 мл) и воду (200 мл). Водный слой экстрагировали с помощью этилацетата (200 мл), органические слои объединяли и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (3,836 г).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ: 1,35 (t, J=7 Гц, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 4,33 (q, J=7 Гц, 2H), 6,31 (br.s, 1H), 6,77-6,83 (m, 2H), 6,98 (s, 1H), 7,30-7,33 (m, 1H), 7,66 (m, 2H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 475 (M+H)⁺

(7c) Синтез 7-((2-фтор-6-метоксилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

4 н. водный раствор гидроксида лития (1 мл) добавляли к раствору сложного этилового эфира 7-((2-фтор-6-метоксилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (399 мг) в 1,4-диоксане (5 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. 2 н. хлористоводородную кислоту (2 мл) добавляли к реакционной смеси, которую концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли воду и осажденное твердое вещество собирали посредством фильтрации с получением указанного в заголовке соединения (338 мг).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ: 3,64 (s, 3H), 3,72 (s, 3H), 6,56 (s, 1H), 6,77 (d, J=8 Гц, 1H), 6,83 (t, J=8 Гц, 1H), 7,04 (s, 1H), 7,34-7,39 (m, 1H), 7,74 (m, 2H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 447 (M+H)⁺

(7d) Синтез сложного метилового эфира (R)-3-(7-((2-фтор-6-метоксифенил)(метил)амино)-N-метил-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоксамид)бутановой кислоты

Триэтиламин (0,66 мл) добавляли к раствору 7-((2-фтор-6-метоксифенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (700 мг), гидрохлорида сложного метилового эфира (R)-3-(метиламино)бутановой кислоты (263 мг) (пример получения 3), WSC (451 мг) и HOBT (360 мг) в DMF (10 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. К реакционной смеси добавляли этилацетат и воду и органический слой последовательно промывали с помощью воды и насыщенного солевого раствора и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (554 мг). Полученное соединение дополнительно очищали с применением колонки CHIRALPAK OD-H при следующих условиях с получением указанного в заголовке соединения (0,465 г).

Условия HPLC

Колонка: CHIRALPAK OD-H (серия: ODH-0CJ-EL007), 25 мм × 300 мм;

подвижная фаза; гексан: этанол=65: 35;

скорость элюирования: 20 мл/мин;

концентрация: 100 мг/мл;

вводимое количество: 0,30 мл;

время удерживания HPLC: 11,5 мин.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 1,10 (d, J=7 Гц, 1,5H), 1,22 (d, J=7 Гц, 1,5H), 2,30 (dd, J=15, 7 Гц, 0,5H), 2,48 (dd, J=15, 7 Гц, 0,5H), 2,50 (dd, J=15, 7 Гц, 0,5H), 2,60 (dd, J=15, 7 Гц, 0,5H), 2,68 (s, 1,5H), 2,89 (s, 1,5H), 3,56-3,70 (m, 9H), 4,83 (m, 0,5H), 5,04 (m, 0,5H), 6,37 (s, 0,5H), 6,48 (s, 0,5H), 6,70 (dd, J=9, 4 Гц, 1H), 6,77 (q, J=9 Гц, 1H), 6,86 (s, 0,5H), 6,95 (s, 0,5H), 7,22-7,28 (m, 1H), 7,67-7,75 (m, 2H).

(7e) Синтез (R)-3-(7-((2-фтор-6-метоксифенил)(метил)амино)-N-метил-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоксамид)бутановой кислоты

Сложный метиловый эфир (R)-3-(7-((2-фтор-6-метоксилфенил)(метил)амино)-N-метил-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоксамид)бутановой кислоты (465 мг) растворяли в 1,4-диоксане (7 мл), добавляли 4 н. водный раствор гидроксида лития (0,3 мл) и воду (0,75 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Далее добавляли 1 н. водный раствор гидроксида лития (0,05 мл), перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, затем добавляли 1 н. хлористоводородную кислоту (2 мл) к реакционной смеси, которую экстрагировали с помощью этилацетата. Органический слой высушивали, концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали посредством обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (система ацетонитрил-вода, 0,1% уксусной кислоты) с получением указанного в заголовке соединения (402 мг).

¹H-ЯМР (500 МГц, CD₃OD) δ: 1,06 (d, J=7 Гц, 1,5H), 1,20 (d, J=7 Гц, 1,5H), 2,29 (dd, J=16, 6 Гц, 0,5H), 2,47 (dd, J=16, 6 Гц, 0,5H), 2,50 (dd, J=16, 6 Гц, 0,5H), 2,57 (dd, J=16, 6 Гц, 0,5H), 2,64 (s, 1,5H), 2,87 (s, 1,5H), 3,58 (s, 1,5H), 3,60 (s, 1,5H), 3,62 (s, 1,5H), 3,68 (s, 1,5H), 4,62 (m, 0,5H), 4,98 (m, 0,5H), 6,75-6,94 (m, 4H), 7,31 (m, 1H), 8,00 (m, 2H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 546 (M+H)⁺

Пример 8

Синтез 2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-(изобутил((R)-3-метилбутан-2-ил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты

(8a) Синтез (R)-N-бензил-3-метилбутан-2-амина

Смесь (R)-(-)-3-метил-2-бутиламина (CAS № 34701-33-2) (4,79 г), THF (150 мл), бензальдегида (5 мл) и уксусной кислоты (5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. К указанному добавляли триацетоксиборогидрид натрия (15 г) и перемешивали при комнатной температуре в течение 14 часов и 40 минут. К реакционной смеси добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. Органический слой последовательно промывали с помощью насыщенного водного раствора гидрокарбоната натрия, воды и насыщенного солевого раствора и высушивали над безводным сульфатом натрия. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на NH-силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (8,76 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ: 0,82 (d, J=7 Гц, 3H), 0,83 (d, J=7 Гц, 3H), 0,89 (d, J=6 Гц, 3H), 1,60-1,75 (m, 2H), 2,30-2,42 (m, 1H), 3,64 (br.d, J=14 Гц, 1H), 3,73 (br.d, J=14 Гц, 1H), 7,15-7,36 (m, 5H).

(8b) Синтез (R)-N-бензил-N-(3-метилбутан-2-ил)изобутиламида

Изобутирилхлорид (6 мл) добавляли при 0°C к смеси (R)-N-бензил-3-метилбутан-2-амина (8,64 г), дихлорметана (200 мл) и триэтиламина (13 мл) и перемешивали в течение 35 минут. К реакционной смеси добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия и органический слой промывали с помощью воды, насыщенного солевого раствора и высушивали над безводным сульфатом натрия. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (11,202 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆, смесь поворотных изомеров) δ: 0,70-1,10 (m, 15H), 1,73-1,85 (m, 1H), 2,96-3,08 (m, 0,5H), 3,60-3,72 (m, 0,5H), 4,10-4,22 (m, 1H), 4,45 (d, J=16 Гц, 1H), 4,58 (d, J=16 Гц, 1H), 7,11-7,39 (m, 5H).

(8c) Синтез (R)-N-бензил-N-изобутил-3-метилбутан-2-амина

(R)-N-Бензил-N-(3-метилбутан-2-ил)изобутиламид (11,2 г) добавляли при 0°C к смеси THF (200 мл) и алюмогидрида лития (3,5 г) и перемешивали при 90°C в течение 1 часа и 15 минут. После обеспечения остывания реакционной смеси обратно до комнатной температуры к реакционной смеси последовательно добавляли воду (3,5 мл), 2 н. водный раствор гидроксида натрия (3,5 мл), воду (10,5 мл) и безводный сульфат натрия и перемешивали в течение 1 часа и 55 минут. Нерастворимое вещество отфильтровывали, промывали с помощью этилацетата и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (10,872 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ: 0,72-0,98 (m, 15H), 1,53-1,72 (m, 2H), 1,95-2,02 (m, 1H), 2,11-2,23 (m, 2H), 3,21 (d, J=14 Гц, 1H), 3,70 (d, J=14 Гц, 1H), 7,15-7,38 (m, 5H).

(8d) Синтез гидрохлорида (R)-N-изобутил-3-метилбутан-2-амина

10% порошок палладия на угле (содержание воды - 51%) (50 мг) добавляли к смеси (R)-N-бензил-N-изобутил-3-метилбутан-2-амина (2 г) и метанола (35 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов и 30 минут в атмосфере водорода. Нерастворимое вещество отфильтровывали и промывали с помощью метанола и этилацетата. К фильтрату добавляли 4 н. раствор хлороводород-этилацетата (10 мл) и смесь концентрировали при пониженном давлении. К остатку добавляли 50% смесь диэтиловый эфир-гептан (100 мл), подвергали воздействию ультразвука и затем концентрировали при пониженном давлении. Процедуру повторяли 4 раза. Полученное твердое вещество высушивали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (1,323 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ: 0,90 (d, J=7 Гц, 3H), 0,92 (d, J=7 Гц, 3H), 0,96 (d, J=7 Гц, 3H), 0,97 (d, J=7 Гц, 3H), 1,14 (d, J=7 Гц, 3H), 1,95-2,20 (m, 2H), 2,65-2,80 (m, 2H), 3,00-3,09 (m, 1H), 8,28 (br.s, 1H), 8,65 (br.s, 1H).

(8e) Синтез сложного этилового эфира (R)-5-хлор-7-(изобутил(3-метилбутан-2-ил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Триэтиламин (10 мл) добавляли к смеси сложного этилового эфира 5,7-дихлорпиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (CAS № 1232224-62-2) (4,5 г), гидрохлорида (R)-N-изобутил-3-метилбутан-2-амина (3,588 г) и THF (70 мл) и перемешивали в течение 31 часа и 40 минут с обратным холодильником. К реакционной смеси добавляли этилацетат и воду и органический слой промывали с помощью насыщенного солевого раствора и высушивали над безводным сульфатом натрия. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на NH-силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (5,05 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ: 0,77 (d, J=6 Гц, 3H), 0,78 (d, J=7 Гц, 3H), 0,87 (d, J=6 Гц, 3H), 0,89 (d, J=6 Гц, 3H), 1,34 (td, J=7, 1 Гц, 3H), 1,39 (d, J=7 Гц, 3H), 1,74-2,00 (m, 2H), 2,95-3,08 (m, 1H), 3,67-3,77 (m, 1H), 4,30-4,40 (m, 1H), 4,36 (q, J=7 Гц, 2H), 6,66 (s, 1H), 6,89 (s, 1H).

(8f) Синтез (R)-5-хлор-7-(изобутил(3-метилбутан-2-ил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

5 н. водный раствор гидроксида натрия (5 мл) добавляли к смеси сложного этилового эфира (R)-5-хлор-7-(изобутил(3-метилбутан-2-ил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (1,9 г) и этанола (25 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. К реакционной смеси добавляли 5 н. хлористоводородную кислоту (5 мл) и воду и подвергали воздействию ультразвука. Полученное твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали с помощью воды и высушивали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (1,624 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ: 0,75 (d, J=7 Гц, 3H), 0,77 (d, J=7 Гц, 3H), 0,86 (d, J=7 Гц, 3H), 0,88 (d, J=7 Гц, 3H), 1,39 (d, J=6 Гц, 3H), 1,75-1,99 (m, 2H), 2,95-3,05 (dd, J=15, 10 Гц, 1H), 3,67-3,78 (m, 1H), 4,30-4,43 (m, 1H), 6,62 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 13,32 (br.s, 1H).

(8g) Синтез сложного метилового эфира 2-((1α,5α,6α)-3-(5-хлор-7-(изобутил((R)-3-метилбутан-2-ил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты

Триэтиламин (3 мл) добавляли к смеси (R)-5-хлор-7-(изобутил(3-метилбутан-2-ил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (1,620 г), гидрохлорида сложного метилового эфира 2-((1α,5α,6α)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты (1 г) (пример получения 4), WSC (1,4 г), HOBT (1 г) и DMF (25 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов. К реакционной смеси добавляли этилацетат и воду и органический слой промывали с помощью насыщенного солевого раствора и высушивали над безводным сульфатом натрия. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (1,844 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆, смесь поворотных изомеров) δ: 0,65-0,94 (m, 13H), 1,41 (d, J=7 Гц, 3H), 1,48-1,62 (m, 2H), 1,80-2,00 (m, 2H), 2,22-2,45 (m, 2H), 2,93-3,05 (m, 1H), 3,46-3,56 (m, 1H), 3,58 (s, 3H), 3,65-3,78 (m, 1H), 3,82-3,93 (m, 2H), 4,17-4,25 (m, 1H), 4,40-4,55 (m, 1H), 6,58 (s, 0,5H), 6,59 (s, 0,5H), 6,73 (s, 0,5H), 6,74 (s, 0,5H).

(8h) Синтез 2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-(изобутил((R)-3-метилбутан-2-ил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты

1,4-Диоксан (2 мл) и чистую воду (200 мкл) добавляли к смеси сложного метилового эфира 2-((1α,5α,6α)-3-(5-хлор-7-(изобутил((R)-3-метилбутан-2-ил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты (40 мг), 4-хлор-3,5-дифторфенилбороновой кислоты (CAS № 864759-63-7) (25 мг), тетракис(трифенилфосфин)палладия (0) (10 мг) и карбоната калия (25 мг) и перемешивали при 80°C в течение 2 часов. Реакционную смесь непосредственно концентрировали при пониженном давлении и полученный остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением сложного метилового эфира 2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-(изобутил((R)-3-метилбутан-2-ил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты. Соединение растворяли в этаноле (1,5 мл), затем добавляли 5 н. водный раствор гидроксида натрия (100 мкл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем реакционную смесь нейтрализовали с помощью 5 н. хлористоводородной кислоты (100 мкл) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой колоночной хроматографии на силикагеле (система ацетонитрил-вода, 0,1% уксусной кислоты) с получением указанного в заголовке соединения (32 мг).

¹H-ЯМР (400 МГц, CD₃OD, смесь поворотных изомеров) δ: 0,80 (d, J=7 Гц, 3H), 0,83-0,91 (m, 4H), 0,94 (d, J=7 Гц, 1,5H), 0,95 (d, J=7 Гц, 1,5H), 0,98 (d, J=7 Гц, 1,5H), 1,00 (d, J=7 Гц, 1,5H), 1,53 (d, J=7 Гц, 3H), 1,56-1,61 (m, 1H), 1,62-1,67 (m, 1H), 1,95-2,07 (m, 2H), 2,22-2,41 (m, 2H), 3,05 (dd, J=14, 10 Гц, 1H), 3,65 (dt, J=12, 5 Гц, 1H), 3,90 (dd, J=14, 4 Гц, 1H), 4,01 (ddd, J=11, 4, 1 Гц, 1H), 4,08 (dd, J=12, 5 Гц, 1H), 4,43 (dd, J=12, 7 Гц, 1H), 4,58 (dt, J=10, 7 Гц, 1H), 6,87 (s, 1H), 6,91 (s, 1H), 7,89 (d, J=8 Гц, 2H).

Пример 9

Синтез (R)-3-(7-(изобутил((R)-3-метилбутан-2-ил)амино)-N-метил-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоксамид)бутановой кислоты

(9a) Синтез сложного этилового эфира (R)-7-(изобутил(3-метилбутан-2-ил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Смесь сложного этилового эфира (R)-5-хлор-7-(изобутил(3-метилбутан-2-ил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (890 мг) (пример 8 - (8e)), 3,4,5-трифторфенилбороновой кислоты (520 мг), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (250 мг), 2 M водного раствора карбоната натрия (2,5 мл), этанола (1 мл) и толуола (9 мл) перемешивали при 100°C в течение 19 часов 35 минут в атмосфере азота. Реакционную смесь непосредственно очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (955 мг).

¹H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ: 0,78 (d, J=7 Гц, 3H), 0,81 (d, J=7 Гц, 3H), 0,89 (d, J=6 Гц, 3H), 0,90 (d, J=7 Гц, 3H), 1,35 (t, J=7 Гц, 3H), 1,43 (d, J=6 Гц, 3H), 1,75-1,86 (m, 1H), 1,92-2,05 (m, 1H), 3,05 (dd, J=15, 10 Гц, 1H), 3,96 (dd, J=15, 5 Гц, 1H), 4,33 (dd, J=10, 6 Гц, 1H), 4,37 (q, J=7 Гц, 2H), 6,98 (s, 1H), 7,14 (s, 1H), 8,19 (dd, J=10, 7 Гц, 2H).

(9b) Синтез (R)-7-(изобутил(3-метилбутан-2-ил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

1 н. водный раствор гидроксида лития (6 мл) добавляли к раствору сложного этилового эфира (R)-7-(изобутил(3-метилбутан-2-ил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (950 мг) в 1,4-диоксане (18 мл) и перемешивали при 50°C в течение 1 часа. 1 н. хлористоводородную кислоту (6 мл) добавляли к реакционной смеси, которую разбавляли с помощью этилацетата и промывали с помощью воды и насыщенного солевого раствора. Органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия, осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт (863 мг) на основе указанного в заголовке соединения получали в виде желтого твердого вещества.

¹H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ: 0,78 (d, J=6 Гц, 3H), 0,79 (d, J=6 Гц, 3H), 0,88 (d, J=6 Гц, 3H), 0,90 (d, J=6 Гц, 3H), 1,43 (d, J=6 Гц, 3H), 1,74-1,87 (m, 1H), 1,92-2,05 (m, 1H), 3,04 (dd, J=14, 10 Гц, 1H), 3,98 (dd, J=14, 4 Гц, 1H), 4,36 (dd, J=10, 6 Гц, 1H), 6,93 (s, 1H), 7,12 (s, 1H), 8,19 (dd, J=10, 7 Гц, 2H), 13,27 (br.s, 1H).

(9c) Синтез сложного метилового эфира (R)-3-(7-(изобутил((R)-3-метилбутан-2-ил)амино)-N-метил-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоксамид)бутановой кислоты

Триэтиламин (0,07 мл) добавляли к раствору (R)-7-(изобутил(3-метилбутан-2-ил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (19,6 мг), гидрохлорида сложного метилового эфира (R)-3-(метиламино)бутановой кислоты (10 мг) (пример получения 3), WSC (10 мг) и HOBT (10 мг) в DMF (0,5 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. К реакционной смеси добавляли этилацетат и воду и органический слой последовательно промывали с помощью воды и насыщенного солевого раствора и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением неочищенного продукта указанного в заголовке соединения (21,1 мг).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 0,75 (m, 3H), 0,88 (m, 6H), 0,98 (m, 3H), 1,36 (m, 3H), 1,44 (d, J=7 Гц, 3H), 1,92 (m, 1H), 1,98 (m, 1H), 2,41-2,77 (m, 2H), 2,92-3,69 (m, 8H), 4,50 (m, 1H), 5,01-5,21 (m, 1H), 6,35 (m, 1H), 6,87-6,92 (m, 1H), 7,66 (m, 2H).

(9d) Синтез (R)-3-(7-(изобутил((R)-3-метилбутан-2-ил)амино)-N-метил-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоксамид)бутановой кислоты

Сложный метиловый эфир (R)-3-(7-(изобутил((R)-3-метилбутан-2-ил)амино)-N-метил-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоксамид)бутановой кислоты (21 мг) растворяли в этаноле (2 мл), добавляли 1 н. водный раствор гидроксида натрия (0,5 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь, к которой добавляли 2 н. хлористоводородную кислоту, очищали посредством обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (система ацетонитрил-вода, 0,1% уксусной кислоты) с получением указанного в заголовке соединения (11 мг).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 0,73 (m, 3H), 0,82-0,89 (m, 6H), 0,96 (d, J=6 Гц, 3H), 1,34-1,46 (m, 3H), 1,44 (d, J=7 Гц, 3H), 1,92 (m, 1H), 1,98 (m, 1H), 2,41-2,77 (m, 2H), 2,93 (m, 1H), 3,03 (s, 1,7H), 3,28 (s, 1,3H), 3,61 (m, 1H), 4,40-5,25 (m, 2H), 6,30-6,36 (m, 1H), 6,77-6,93 (m, 1H), 7,61 (m, 2H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 534 (M+H)⁺

Пример 10

Синтез 2-((3R,4S)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-фтор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты

(10a) Синтез сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2-фтор-6-метилфенил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Раствор сложного этилового эфира 5,7-дихлорпиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (CAS № 1232224-62-2) (5 г) и 2-фтор-6-метиланилина (CAS № 443-89-0) (2,41 г) в NMP (3 мл) перемешивали при 120°C в течение 4 часов. Реакционную смесь объединяли с реакционным раствором, полученным отдельно посредством перемешивания сложного этилового эфира 5,7-дихлорпиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (0,50 г) и 2-фтор-6-метиланилина (0,27 г) в NMP (0,20 мл) при 120°C в течение 4 часов, разбавляли с помощью этилацетата, промывали с помощью воды и насыщенного солевого раствора и высушивали над безводным сульфатом натрия. После отфильтровывания осушающего средства фильтрат концентрировали при пониженном давлении, к остатку добавляли дихлорметан и нерастворимое твердое вещество собирали посредством фильтрации с получением указанного в заголовке соединения (2,88 г) в виде светло-желтого твердого вещества. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гексан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (2,28 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,46 (t, J=7 Гц, 3H), 2,34 (s, 3H), 4,50 (q, J=7 Гц, 2H), 5,75 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 7,12 (t, J=8 Гц, 1H), 7,18 (br.d, J=8 Гц, 1H), 7,35 (td, J=8, 6 Гц, 1H), 7,82 (br.s, 1H).

(10b) Синтез сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2-фтор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Карбонат цезия (7,23 г) и метилйодид (4,61 мл) добавляли к раствору сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2-фтор-6-метилфенил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (5,16 г) в DMF (80 мл) и перемешивали при 50°C в течение 3 часов. Реакционную смесь разбавляли с помощью этилацетата, последовательно промывали с помощью воды и насыщенного солевого раствора и высушивали над безводным сульфатом натрия. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (4,64 г) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,37 (t, J=7 Гц, 3H), 2,26 (s, 3H), 3,83 (br.s, 3H), 4,36 (q, J=7 Гц, 2H), 5,79 (br.s, 1H), 6,88 (s, 1H), 7,04 (t, J=9Hz, 1H), 7,13 (d, J=8 Гц, 1H), 7,30 (td, J=9, 6 Гц, 1H).

(10c) Синтез сложного этилового эфира 5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-фтор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Воду (2 мл), карбонат натрия (0,53 г), 4-хлор-3,5-дифторфенилбороновую кислоту (0,44 г) и тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (0,12 г) в атмосфере азота добавляли к смеси сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2-фтор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (0,73 г) и 1,4-диоксана (16 мл) и перемешивали при 100°C в течение 3 часов. После обеспечения остывания реакционной смеси обратно до комнатной температуры к реакционной смеси добавляли этилацетат (200 мл) и воду (50 мл) и органический слой отделяли и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (0,96 г) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,39 (t, J=7 Гц, 3H), 2,28 (s, 3H), 3,88 (s, 3H), 4,38 (q, J=7 Гц, 2H), 6,14 (s, 1H), 7,03 (s, 1H), 7,04 (dd, J=9, 8Hz, 1H), 7,15 (d, J=8 Гц, 1H), 7,32 (td, J=8, 6 Гц, 1H), 7,57 (d, J=8 Гц, 2H).

(10d) Синтез 5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-фтор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Воду (10 мл) и 4 н. водный раствор гидроксида лития (2,47 мл) добавляли к смеси сложного этилового эфира 5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-фтор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (2,35 г) и 1,4-диоксана (100 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 17 часов. Добавляли 5 н. хлористоводородную кислоту (2 мл) и реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении до объема приблизительно 15 мл. Смесь подвергали воздействию ультразвука и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут, затем собирали твердое вещество посредством фильтрации, промывали с помощью воды (5 мл) и высушивали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (2,24 г) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 2,30 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 6,47 (s, 1H), 7,03 (t, J=9 Гц, 1H), 7,08 (s, 1H), 7,13-7,18 (m, 1H), 7,34 (td, J=8, 5 Гц, 1H), 7,69 (d, J=7 Гц, 2H).

(10e) Синтез сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-фтор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты

HOBT (57 мг), WSC (72 мг), гидрохлорид сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты (77 мг) (пример получения 2) и триэтиламин (101 мг) последовательно добавляли к раствору 5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-фтор-6-метилфенил(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (112 мг) в DMF (6 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. К реакционной смеси добавляли этилацетат (50 мл) и воду (20 мл) и органический слой промывали с помощью воды (20 мл × 2) и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (137 мг).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 1,26 (m, 3H), 1,40-1,74 (m, 2H), 2,12-2,55 (m, 5H), 2,60-3,11 (m, 4H), 3,38-3,75 (m, 6H), 4,14 (m, 2H), 4,10-4,46 (m, 1H), 4,54-4,95 (m, 1H), 6,29-6,53 (m, 1H), 6,90-7,28 (m, 4H), 7,61-7,70 (m, 2H).

(10f) Синтез 2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-фтор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты

Водный раствор (1,5 мл) гидроксида лития (10,4 мг) добавляли к раствору сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-фтор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты (137 мг) в 1,4-диоксане (6 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов. DMSO (2 мл) и уксусную кислоту (0,1 мл) добавляли к реакционной смеси, которую концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой колоночной хроматографии на силикагеле (система ацетонитрил-вода, 0,1% уксусной кислоты) с получением указанного в заголовке соединения (92 мг) в виде белого твердого вещества.

¹H-ЯМР (600 МГц, CDCl₃, 30°C, смесь поворотных изомеров) δ: 1,25-1,76 (m, 2H), 2,01-2,41 (m, 4H), 2,47-3,14 (m, 4H), 3,38-3,75 (m, 7H), 4,13-4,46 (m, 1H), 4,54-4,98 (m, 1H), 6,29-6,57 (m, 1H), 6,84-7,30 (m, 4H), 7,56-7,79 (m, 2H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 602 (M+H)⁺.

(10g) Синтез сложного этилового эфира (2S,3S)-3-(цианометил)-1-((S)-1-фенилэтил)пирролидин-2-карбоновой кислоты

Раствор сложного этилового эфира (S)-2-(бутен-3-ен-1-ил(1-фенилэтил)амино)уксусной кислоты (CAS №186586-65-2) (60,29 г) в THF (750 мл) охлаждали в атмосфере азота до -75°C и раствор диизопропиламида лития в смеси н-гексан-THF (1,13 M, 245 мл), охлажденный с помощью смеси этанол-сухой лед, добавляли к раствору с применением канюли. После повышения температуры до -20°C и перемешивания в течение 15 минут реакционную смесь затем снова охлаждали с применением охладительного бака со смесью этанол-сухой лед в качестве охладителя и добавляли раствор бромида цинка (156 г) в диэтиловом эфире (800 мл) при -72°C или меньше. Охладительный бак удаляли с обеспечением остывания реакционной смеси обратно до комнатной температуры и раствор перемешивали в течение 1 часа. С применением охладительного бака с ледяной водой, содержащей соль в качестве охладителя, реакционную смесь охлаждали до 0°C или меньше и добавляли смесь цианида меди(I) (41,3 г), хлорида лития (39,1 г) и THF (750 мл). Затем добавляли раствор (4-метилфенил)сульфонилцианида (CAS № 19158-51-1) (50,2 г) в THF (200 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 14 часов. При перемешивании добавляли воду (1000 мл), аммиачную воду (28%, 300 мл) и этилацетат (1500 мл). Суспензию фильтровали через целит с удалением осадка. Фильтрат помещали в делительную воронку с отделением органического слоя от водного слоя и затем органический слой последовательно промывали с помощью аммиачной воды (10%, 750 мл), воды (750 мл) и насыщенного водного раствора хлорида натрия (750 мл). Целит и осадок промывали 4 раза с помощью этилацетата (500 мл) и данные промывочные растворы объединяли. С применением объединенного промывочного раствора вышеуказанные 4 водные слоя последовательно экстрагировали (первый отделенный водный слой, аммиачную воду, применяемую для промывания, воду, применяемую для промывания, и насыщенный водный раствор хлорида натрия, применяемый для промывания). Все органические слои объединяли и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (42,98 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, основной изомер) δ: 1,24 (t, J=7 Гц, 3H), 1,36 (d, J=7 Гц, 3H), 1,77 (m,1H), 2,18 (m, 1H), 2,27 (dd, J=17, 9 Гц, 1H), 2,35 (dd, J=17, 7 Гц, 1H), 2,66 (m, 1H), 2,95 (q, J=8 Гц, 1H), 3,10 (td, J=9, 3 Гц, 1H), 3,42 (d, J=8 Гц, 1H), 3,75 (q, J=7 Гц, 1H), 4,09-4,18 (m, 2H), 7,22-7,38 (m, 5H).

(10h) Синтез 2-((2S,3S)-2-гидроксиметил-1-((S)-1-фенилэтил)пирролидин-3-ил)ацетонитрила

Тетрагидроборат лития (20 г) при охлаждении льдом и в атмосфере азота добавляли к раствору сложного этилового эфира (2S,3S)-3-(цианометил)-1-((S)-1-фенилэтил)пирролидин-2-карбоновой кислоты (44,74 г) в THF (700 мл) и нагревали с обратным холодильником в течение 5 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и выливали в смесь 1 н. хлористоводородной кислоты (1000 мл) и этилацетата. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут, затем добавляли гидрокарбонат натрия (приблизительно 100 г) и 3 раза экстрагировали с помощью этилацетата и дважды с помощью дихлорметана. Органические слои объединяли и высушивали, осушающее средство отфильтровывали и затем фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на NH-силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (28,98 г).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃, основной изомер) δ: 1,47 (d, J=7 Гц, 3H), 1,59 (qd, J=12, 7 Гц, 1H), 1,93 (dt, J=12, 6 Гц, 1H), 2,32-2,40 (m, 1H), 2,46-2,63 (m, 3H), 3,01 (dd, J=9, 8 Гц, 1H), 3,08-3,10 (m, 1H), 3,27 (d, J=11 Гц, 1H), 3,55 (dd, J=12, 2 Гц, 1H), 3,65 (dd, J=12, 4 Гц, 1H), 3,87 (q, J=7 Гц, 1H), 7,26-7,36 (m, 5H).

(10i) Синтез 2-((3R,4S)-3-гидрокси-1-((S)-1-фенилэтил)пиперидин-4-ил)ацетонитрила

Раствор 2-((2S,3S)-2-гидроксиметил-1-((S)-1-фенилэтил)пирролидин-3-ил)ацетонитрила (52,44 г) в THF (2000 мл) охлаждали в атмосфере азота до -74°C или меньше и по каплям добавляли трифторуксусный ангидрид (36,4 мл) при перемешивании таким образом, что внутренняя температура не превышала -73°C. После дополнительного перемешивания в течение 3 часов по каплям добавляли триэтиламин (120 мл). После перемешивания в течение 15 минут обеспечивали возвращение внутренней температуры обратно до комнатной температуры и реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 15 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении, к остатку добавляли этилацетат (5000 мл) и 2 н. водный раствор гидроксида натрия (500 мл) с разделением раствора. Органический слой высушивали над безводным сульфатом магния, осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на NH-силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (51,25 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, основной изомер) δ: 1,37 (d, J=7 Гц, 3H), 1,47-1,76 (m, 3H), 1,95 (td, J=12, 3 Гц, 1H), 2,15 (dd, J=12, 1 Гц, 1H), 2,33 (dd, J=17, 8 Гц, 1H), 2,46 (dd, J=17, 7 Гц, 1H), 2,82-2,86 (m, 2H), 3,09-3,14 (m, 1H), 3,56 (q, J=7 Гц, 1H), 3,74 (d, J=10 Гц, 1H), 7,24-7,35 (m, 5H).

(10j) Синтез 2-((3R,4S)-3-метокси-1-((S)-1-фенилэтил)пиперидин-4-ил)ацетонитрила

Гидрид натрия (60%, 9,19 г) при охлаждении льдом и в атмосфере азота постепенно добавляли при перемешивании в течение периода времени 15 минут к смеси 2-((3R,4S)-3-гидрокси-1-((S)-1-фенилэтил)пиперидин-4-ил)ацетонитрила (51,01 г) и THF (750 мл). После дополнительного перемешивания в течение 10 минут по каплям добавляли диметилсульфат (22,94 мл). После перемешивания в течение 5 часов последовательно добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония (50 мл), аммиачной воды (28%, 50 мл) и этилацетата (1000 мл) и перемешивали в течение 30 минут. Добавляли 1 н. водный раствор гидроксида натрия (500 мл) с разделением раствора. Органический слой промывали с помощью насыщенного водного раствора хлорида натрия (250 мл) и объединенные водные слои экстрагировали с помощью этилацетата (500 мл). Органические слои объединяли, высушивали над безводным сульфатом магния, осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на NH-силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (47,9 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, основной изомер) δ: 1,38 (d, J=7 Гц, 3H), 1,53-1,59 (m, 1H), 1,63-1,72 (m, 1H), 1,85-1,94 (m, 1H), 2,02-2,15 (m, 2H), 2,30 (dd, J=17, 7 Гц, 1H), 2,49 (dd, J=17, 8 Гц, 1H), 2,74 (br.d, J=11 Гц, 1H), 3,04 (br.d, J=11 Гц, 1H), 3,30 (s, 3H), 3,38 (br.s, 1H), 3,55 (q, J=7 Гц, 1H), 7,23-7,33 (m, 5H).

(10k) Синтез сложного метилового эфира 2-((3R,4S)-3-метокси-1-((S)-1-фенилэтил)пиперидин-4-ил)уксусной кислоты

Тионилхлорид (352 мл) в атмосфере азота по каплям добавляли к метанолу (1500 мл) при охлаждении льдом, затем добавляли раствор 2-((3R,4S)-3-метокси-1-((S)-1-фенилэтил)пиперидин-4-ил)ацетонитрила (49,8 г) в метаноле (50 мл). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 20 часов, затем охлаждали льдом и по каплям добавляли дополнительное количество тионилхлорида (352 мл) и нагревали с обратным холодильником в течение 22 часов. Реакционную смесь снова охлаждали льдом и по каплям добавляли дополнительное количество тионилхлорида (50 мл) и нагревали с обратным холодильником в течение 62 часов. После обеспечения остывания до комнатной реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в воде (250 мл) и добавляли этилацетат (250 мл), аммиачную воду (28%, 50 мл), и затем добавляли 2 н. водный раствор гидроксида натрия до достижения значения pH 11. Раствор разделяли, водный слой экстрагировали с помощью этилацетата (500 мл), органические слои объединяли и высушивали над безводным сульфатом магния, осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением остатка A.

Затем водный слой концентрировали при пониженном давлении и к остатку добавляли метанол (1000 мл) и концентрированную серную кислоту (50 мл) и нагревали с обратным холодильником в течение 22 часов. Обеспечивали остывание реакционной смеси обратно до комнатной и ее регулировали до значения pH 8 с помощью гидрокарбоната натрия. Растворитель удаляли при пониженном давлении, остаток растворяли в этилацетате (1000 мл) и воде (250 мл), значение pH регулировали до 11 с применением 2 н. водного раствора гидроксида натрия и раствор разделяли. Водный слой экстрагировали с помощью этилацетата (500 мл), органические слои объединяли и высушивали над безводным сульфатом магния, осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением остатка B.

Тионилхлорид (352 мл) в атмосфере азота по каплям добавляли к метанолу (1500 мл) при охлаждении льдом и затем добавляли раствор остатка A в метаноле (100 мл). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 22 часов. Обеспечивали остывание реакционной смеси обратно до комнатной температуры, растворитель удаляли при пониженном давлении, остаток растворяли в этилацетате (1000 мл) и воде (250 мл), добавляли аммиачную воду (28%, 50 мл), значение pH регулировали до 11 с применением 2 н. водного раствора гидроксида натрия и раствор разделяли. Водный слой экстрагировали с помощью этилацетата (500 мл), органические слои объединяли и высушивали над безводным сульфатом магния, осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением остатка C.

Водный слой, полученный при последующей обработке второй реакции, концентрировали при пониженном давлении, к остатку добавляли метанол (1000 мл) и концентрированную серную кислоту (50 мл) и нагревали с обратным холодильником в течение 22 часов. Обеспечивали остывание реакционной смеси обратно до комнатной и ее регулировали до значения pH 8 с помощью гидрокарбоната натрия. Растворитель удаляли при пониженном давлении, остаток растворяли в этилацетате (1000 мл) и воде (250 мл), значение pH регулировали до 11 с применением 2 н. водного раствора гидроксида натрия и раствор разделяли. Водный слой экстрагировали с помощью этилацетата (500 мл), органические слои объединяли и высушивали над безводным сульфатом магния, осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением остатка D.

Остаток B, остаток C и остаток D объединяли, очищали посредством колоночной хроматографии на NH-силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением неочищенного сложного метилового эфира 2-((3R,4S)-3-метокси-1-((S)-1-фенилэтил)пиперидин-4-ил)уксусной кислоты (52,35 г).

Добавляли 4 н. раствор хлороводород-этилацетата (100 мл) с перемешиванием к раствору этилацетата (400 мл), при этом неочищенный сложный метиловый эфир 2-((3R,4S)-3-метокси-1-((S)-1-фенилэтил)пиперидин-4-ил)уксусной кислоты (1,45 г), полученный отдельно с помощью того же способа, объединяли с неочищенным сложным метиловым эфиром 2-((3R,4S)-3-метокси-1-((S)-1-фенилэтил)пиперидин-4-ил)уксусной кислоты (52,35 г). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, затем осадок собирали посредством фильтрации, промывали с помощью этилацетата (100 мл) и высушивали при пониженном давлении. К полученному твердому веществу при перемешивании последовательно добавляли воду (250 мл), этилацетат (250 мл) и водный раствор гидрокарбоната натрия (250 мл). После добавления дополнительного количества этилацетата (750 мл) значение pH регулировали до 12 с применением карбоната калия и слои разделяли. Водный слой промывали с помощью этилацетата (250 мл), промывочный раствор и отделенный органический слой объединяли и высушивали над безводным сульфатом магния, осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток (46,3 г) растворяли в этилацетате (400 мл) и 4 н. раствор хлороводород-этилацетата (80 мл) добавляли при перемешивании. Воду (250 мл), и этилацетат (250 мл), и гидрокарбонат натрия последовательно добавляли при перемешивании к твердому веществу, полученному посредством перемешивания реакционной смеси при комнатной температуре в течение ночи, затем собирания осадка посредством фильтрации, промывания с помощью этилацетата (40 мл) и высушивания при пониженном давлении. Добавляли воду (750 мл) и этилацетат (750 мл) с разделением слоев. 5 н. водный раствор гидроксида натрия (50 мл) добавляли к водному слою, который экстрагировали с помощью этилацетата (1000 мл). Органические слои объединяли, высушивали над безводным сульфатом магния, осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением 45,2 г остатка. Остаток объединяли с 16,2 г остатка, полученного отдельно посредством таких же операций, растворяли в этилацетате (500 мл) и добавляли 4 н. раствор хлороводород-этилацетата (100 мл) при перемешивании. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, затем осадок собирали посредством фильтрации, дважды промывали с помощью этилацетата (60 мл) и высушивали при пониженном давлении. Воду (800 мл) и этилацетат (800 мл) последовательно добавляли при перемешивании к полученному твердому веществу, добавляли гидрокарбонат натрия при перемешивании и раствор разделяли. 5 н. водный раствор гидроксида натрия (50 мл) добавляли к водному слою, который экстрагировали с помощью этилацетата (800 мл). Органические слои объединяли, высушивали над безводным сульфатом магния, осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (60,7 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,38 (d, J=7 Гц, 3H), 1,45-1,54 (m, 1H), 1,57-1,67 (m, 1H), 2,03-2,21 (m, 3H), 2,24 (dd, J=16, 7 Гц, 1H), 2,50 (dd, J=16, 7 Гц, 1H), 2,64 (br.s, 1H), 2,85 (br.s, 1H), 3,27 (s, 3H), 3,29-3,32 (m, 1H), 3,52 (q, J=7 Гц, 1H), 3,65 (s, 3H), 7,23-7,33 (m, 5H).

(10l) Синтез гидрохлорида сложного метилового эфира 2-((3R,4S)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты

Палладий на активированном угле (Pd10%) (0,639 г) добавляли к смеси на основе раствора сложного метилового эфира 2-((3R,4S)-3-метокси-1-((S)-1-фенилэтил)пиперидин-4-ил)уксусной кислоты (4,37 г) в метаноле (50 мл) и раствора хлороводорода в метаноле (5-10%, 30 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов в атмосфере водорода. Далее добавляли палладий на активированном угле (Pd10%) (0,639 г) и перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов в атмосфере водорода. Добавляли палладий на активированном угле (Pd10%) (0,639 г) и дополнительно перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов в атмосфере водорода. Смесь фильтровали через целит и целит промывали с помощью метанола. Фильтрат и промывочный раствор объединяли и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (3,81 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ: 1,71-1,85 (m, 2H), 2,16-2,25 (m, 1H), 2,25 (dd, J=16, 7 Гц, 1H), 2,53 (dd, J=16, 7 Гц, 1H), 3,00-3,06 (m, 2H), 3,27 (m, 1H), 3,40 (s, 3H), 3,59-3,63 (m, 2H), 3,67 (s, 3H).

(10m) Синтез сложного метилового эфира 2-((3R,4S)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-фтор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты

HOBT (2,280 г) и WSC (3,23 г) добавляли к раствору 5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-фтор-6-метилфенил(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (6,03 г) (пример 10 - (10d)) в DMF (100 мл), перемешивали в течение 15 минут, затем последовательно добавляли раствор гидрохлорида сложного метилового эфира 2-((3R,4S)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты (3,36 г) в DMF (50 мл) и триэтиламин (5,64 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. К реакционной смеси добавляли этилацетат (700 мл) и воду (500 мл) и органический слой дважды промывали с помощью воды (750 мл), содержащей небольшое количество хлорида натрия. Водный слой и промывочные растворы последовательно экстрагировали с помощью этилацетата (750 мл), органические слои объединяли и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (5,83 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 1,25-1,75 (m, 2H), 2,05-2,95 (m, 9H), 3,38-3,75 (m, 9H), 4,10-4,46 (m, 1H), 4,54-4,95 (m, 1H), 6,37-6,50 (m, 1H), 6,90-7,28 (m, 4H), 7,64-7,76 (m, 2H).

(10n) Синтез 2-((3R,4S)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-фтор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты

Воду (30 мл) и 4 н. водный раствор гидроксида лития (3,49 мл) добавляли к раствору сложного метилового эфира 2-((3R,4S)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-фтор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты (5,73 г) в 1,4-диоксане (150 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 14 часов. DMSO (10 мл) и муравьиную кислоту (3 мл) добавляли к реакционной смеси, которую концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой колоночной хроматографии на силикагеле (система ацетонитрил-вода, 0,1% уксусной кислоты) с получением указанного в заголовке соединения (5,124 г) в виде твердого вещества.

¹H-ЯМР (500 МГц, CD₃OD, смесь поворотных изомеров) δ: 1,24-1,60 (m, 2H), 2,00-2,47 (m, 4H), 2,48-3,12 (m, 4H), 3,31-3,64 (m, 7H), 4,00-4,34 (m, 1H), 4,34-4,65 (m, 1H), 6,84-6,87 (m, 1H), 6,90-7,35 (m, 4H), 7,98-8,01 (m, 2H).

[α]_D ²⁰: -109,9° (100 мг, DMSO, 5 мл, 100 мм).

Пример 11

Синтез 2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3-фторфенил)-7-((2-хлор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты

(11a) Синтез сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2-хлор-6-метилфенил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Раствор сложного этилового эфира 5,7-дихлорпиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (CAS № 1232224-62-2) (2,9 г) и 2-хлор-6-метиланилина (CAS № 87-63-8) (1,6 г) в NMP (1,1 мл) перемешивали при 140°C в течение 4 часов. Реакционную смесь охлаждали, затем разбавляли с помощью этилацетата, осадок собирали посредством фильтрации и промывали с помощью диэтилового эфира. К фильтрату добавляли насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия и водный слой экстрагировали с помощью этилацетата. Органические слои объединяли и высушивали над безводным сульфатом натрия. После отфильтровывания осушающего средства фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гексан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (3,44 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,47 (t, J=7 Гц, 3H), 2,33 (s, 3H), 4,51(q, J=7 Гц, 2H), 5,65(s, 1H), 7,02 (s, 1H), 7,30 (dd, J=8, 2 Гц, 1H), 7,34 (t, J=8 Гц, 1H), 7,44 (dd, J=8, 2 Гц, 1H), 7,98 (br.s, 1H).

(11b) Синтез сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2-хлор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Карбонат калия (1,14 г) и метилйодид (0,86 мл) добавляли к раствору сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2-хлор-6-метилфенил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (2,00 г) в DMF (50 мл) и перемешивали в течение 3 дней. К реакционной смеси добавляли этилацетат (300 мл) и воду (100 мл) и органический слой промывали с помощью воды (2 × 100 мл) и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (1,89 г) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃, 55°C, смесь поворотных изомеров) δ: 1,35 (br.s, 3H), 2,27 (s, 3H), 3,83 (br.s, 3H), 4,34 (br.s, 2H), 5,68 (br.s, 1H), 6,85 (s, 1H), 7,20-7,41 (m, 3H).

(11c) Синтез сложного этилового эфира 5-(4-хлор-3-фторфенил)-7-((2-хлор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Воду (5 мл), карбонат натрия (0,63 г), 4-хлор-3-фторфенилбороновую кислоту (CAS № 137504-86-0) (0,52 г) и тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (0,14 г) в атмосфере азота добавляли к смеси сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2-хлор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (0,94 г) и 1,4-диоксана (40 мл) и перемешивали при 90°C в течение 18 часов. После обеспечения остывания реакционной смеси обратно до комнатной температуры к ней добавляли этилацетат (200 мл) и воду (100 мл) и органический слой разделяли и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (0,99 г) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃, 55°C, смесь поворотных изомеров) δ: 1,37 (t, J=7 Гц, 3H), 2,29 (s, 3H), 3,88 (s, 3H), 4,36 (q, J=7 Гц, 2H), 6,07 (br.s, 1H), 6,98 (s, 1H), 7,20-7,27 (m, 2H), 7,34 (m, 1H), 7,43 (t, J=8 Гц, 1H), 7,62 (br.d, J=6 Гц, 1H), 7,73 (br.d, J=10 Гц, 1H).

(11d) Синтез 5-(4-хлор-3-фторфенил)-7-((2-хлор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Воду (5 мл) и 4 н. водный раствор гидроксида лития (1,01 мл) добавляли к сложному этиловому эфиру 5-(4-хлор-3-фторфенил)-7-((2-хлор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (0,96 г) и 1,4-диоксану (40 мл), и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. Добавляли уксусную кислоту (0,2 мл) и 5 н. хлористоводородную кислоту (0,5 мл) и реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении до объема приблизительно 5 мл. Твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали с помощью воды (5 мл) и высушивали при пониженном давлении. Указанное в заголовке соединение (0,83 г) получали в виде белого твердого вещества.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃, 55°C, смесь поворотных изомеров) δ: 2,28 (s, 3H), 3,68 (br.s, 3H), 6,45 (br.s, 1H), 7,02 (s, 1H), 7,23-7,34 (m, 3H), 7,50 (t, J=8 Гц, 1H), 7,76 (br.s, 1H), 7,85 (br.s, 1H).

(11e) Синтез сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3-фторфенил)-7-((2-хлор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты

HOBT (57 мг), WSC (72 мг), гидрохлорид сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты (77 мг) (пример получения 2) и триэтиламин (101 мг) последовательно добавляли к раствору 5-(4-хлор-3-фторфенил)-7-((2-хлор-6-метилфенил(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (111 мг) в DMF (5 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. К реакционной смеси добавляли этилацетат (50 мл) и воду и органический слой промывали с помощью воды (25 мл × 2) и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (120 мг).

¹H-ЯМР (400 МГц, CD₃OD, смесь поворотных изомеров) δ: 1,24 (m, 3H), 1,24-1,58 (m, 2H), 2,03-2,48 (m, 6H), 2,60-3,08 (m, 3H), 3,30-3,34 (m, 3H), 3,52-3,55 (m, 3H), 3,99-4,52 (m, 2H), 4,12 (q, J=7 Гц, 2H), 6,79-6,82 (m, 1H), 6,96-6,98 (m, 1H), 7,23-7,39 (m, 3H), 7,64 (t, J=8 Гц, 1H), 8,01 (d, J=8 Гц, 1H), 8,09 (d, J=8 Гц, 1H).

(11f) Синтез 2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3-фторфенил)-7-((2-хлор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты

4 н. водный раствор гидроксида лития (0,057 мл) добавляли к смеси сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3-фторфенил)-7-((2-хлор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты (36 мг), воды (2 мл), THF (2 мл) и метанола (2 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. Уксусную кислоту (0,057 мл) добавляли к реакционной смеси, которую концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (система ацетонитрил-вода, 0,1% уксусной кислоты) с получением указанного в заголовке соединения (30 мг) в виде белого твердого вещества.

¹H-ЯМР (400 МГц, CD₃OD, смесь поворотных изомеров) δ: 1,20-1,58 (m, 2H), 2,00-2,48 (m, 6H), 2,55-3,10 (m, 3H), 3,29-3,58 (m, 6H), 3,99-4,54 (m, 2H), 6,79-6,81 (m, 1H), 6,95-6,97 (m, 1H), 7,22-7,38 (m, 3H), 7,63 (t, J=8 Гц, 1H), 8,01 (d, J=9 Гц, 1H), 8,09 (d, J=11 Гц, 1H).

Пример 12

Синтез 2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-хлор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты

(12a) Синтез сложного этилового эфира 5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-хлор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Воду (5 мл), карбонат натрия (0,63 г), 4-хлор-3,5-дифторфенилбороновую кислоту (0,57 г) и тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (0,14 г) в атмосфере азота добавляли к смеси сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2-хлор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (0,94 г) (пример 11 - (11b)) и 1,4-диоксана (40 мл) и перемешивали при 90°C в течение 18 часов. После обеспечения остывания реакционной смеси обратно до комнатной температуры к ней добавляли этилацетат (200 мл) и воду (100 мл) и органический слой разделяли и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (0,99 г) в виде твердого вещества.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃, 55°C, смесь поворотных изомеров) δ: 1,37 (t, J=7 Гц, 3H), 2,29 (s, 3H), 3,89 (s, 3H), 4,37 (q, J=7 Гц, 2H), 6,02 (br.s, 1H), 6,99 (s, 1H), 7,25-7,29 (m, 2H), 7,34 (m, 1H), 7,55 (br.d, J=7 Гц, 2H).

(12b) Синтез 5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-хлор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Воду (5 мл) и 4 н. водный раствор гидроксида лития (0,98 мл) добавляли к смеси сложного этилового эфира 5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-хлор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (0,96 г) и 1,4-диоксана (40 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. Добавляли уксусную кислоту (0,2 мл) и 5 н. хлористоводородную кислоту (0,5 мл) и реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении до объема приблизительно 5 мл. Твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали с помощью воды (5 мл) и высушивали при пониженном давлении. Указанное в заголовке соединение (0,88 г) получали в виде белого твердого вещества.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃, 55°C, смесь поворотных изомеров) δ: 2,28 (s, 3H), 3,68 (br.s, 3H), 6,40 (br.s, 1H), 7,03 (s, 1H), 7,25-7,35 (m, 3H), 7,68 (br.s, 2H).

(12c) Синтез сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-хлор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты

HOBT (57 мг), WSC (72 мг), гидрохлорид сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты (77 мг) (пример получения 2) и триэтиламин (101 мг) последовательно добавляли к раствору 5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-хлор-6-метилфенил(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (116 мг) в DMF (5 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. К реакционной смеси добавляли этилацетат (50 мл) и воду (25 мл) и органический слой промывали с помощью воды (25 мл × 2) и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (125 мг).

¹H-ЯМР (400 МГц, CD₃OD, смесь поворотных изомеров) δ: 1,24 (m, 3H), 1,24-1,58 (m, 2H), 2,00-2,48 (m, 6H), 2,55-3,07 (m, 3H), 3,30-3,40 (m, 3H), 3,52-3,56 (m, 3H), 3,98-4,52 (m, 2H), 4,12 (q, J=7 Гц, 2H), 6,80-83 (m, 1H), 6,98 (m, 1H), 7,21-7,39 (m, 3H), 7,32 (br.d, J=9 Гц, 2H).

(12d) Синтез 2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-хлор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты

4 н. водный раствор гидроксида лития (0,053 мл) добавляли к смеси сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-хлор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты (34 мг), воды (2 мл), THF (2 мл) и метанола (2 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. Уксусную кислоту (0,053 мл) добавляли к реакционной смеси, которую концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (система ацетонитрил-вода, 0,1% уксусной кислоты) с получением указанного в заголовке соединения (36 мг).

¹H-ЯМР (400 МГц, CD₃OD, смесь поворотных изомеров) δ: 1,20-1,58 (m, 2H), 2,00-2,48 (m, 6H), 2,55-3,08 (m, 3H), 3,29-3,58 (m, 6H), 3,99-4,54 (m, 2H), 6,81-6,84 (m, 1H), 6,99-7,01 (m, 1H), 7,25-7,39 (m, 3H), 8,03 (d, J=9 Гц, 2H).

Пример 13

Синтез 2-((3R*,4S*)-1-(7-((2-хлор-6-фторфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты

(13a) Синтез сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2-хлор-6-фторфенил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Трет-бутоксид калия (0,070 г) добавляли к смеси 2-хлор-6-фторанилина (CAS № 363-51-9) (0,090 г) и THF (5 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. Добавляли сложный этиловый эфир 5,7-дихлорпиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (CAS № 1232224-62-2) (0,100 г) и перемешивали с нагреванием при 50°C в течение 1 часа. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония с отделением органического слоя от водного слоя. Водный слой экстрагировали с помощью этилацетата, органические слои объединяли и высушивали над безводным сульфатом натрия. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (0,063 г) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,46 (t, J=7 Гц, 3H), 4,30 (q, J=7 Гц, 2H), 5,87 (s, 1H), 7,04 (s, 1H), 7,23-7,27 (m, 1H), 7,40-7,43 (m, 2H), 7,98 (br.s, 1H).

(13b) Синтез сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2-хлор-6-фторфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Карбонат калия (0,050 г) и метилйодид (0,050 мл) добавляли к раствору сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2-хлор-6-фторфенил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (0,063 г) в DMF (2 мл) и перемешивали при 50°C в течение 3 часов. К реакционной смеси добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и этилацетат с отделением органического слоя от водного слоя. Водный слой экстрагировали с помощью этилацетата, органические слои объединяли и высушивали над безводным сульфатом натрия. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (0,047 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,31 (t, J=7 Гц, 3H), 3,64 (br.s, 3H), 4,28 (q, J=7 Гц, 2H), 6,11 (br.s, 1H), 6,87 (s, 1H), 7,12 (td, J=9, 2 Гц, 1H), 7,28 (br.d, J=9 Гц, 1H), 7,34 (td, J=9, 6 Гц, 1H).

(13c) Синтез сложного этилового эфира 7-((2-хлор-6-фторфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Воду (0,2 мл), карбонат калия (0,030 г), 3,4,5-трифторфенилбороновую кислоту (0,025 г) и тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (0,010 г) в атмосфере азота добавляли к смеси сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2-хлор-6-фторфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (0,047 g) и 1,4-диоксана (2 мл) и перемешивали при 80°C в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (0,052 г) в виде белого твердого вещества.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,32 (t, J=7 Гц, 3H), 3,72 (br.s, 3H), 4,30 (q, J=7 Гц, 2H), 6,42 (br.s, 1H), 7,00 (s, 1H), 7,13 (td, J=9, 2 Гц, 1H), 7,28 (br.d, J=9 Гц, 1H), 7,34 (td, J=9, 6 Гц, 1H), 7,70 (m, 2H).

(13d) Синтез 7-((2-хлор-6-фторфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

5 н. водный раствор гидроксида натрия (0,10 мл) добавляли к смеси сложного этилового эфира 7-((2-хлор-6-фторфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (0,052 г), THF (1 мл) и этанола (1 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. К реакционной смеси добавляли 5 н. хлористоводородную кислоту, этилацетат и воду с отделением органического слоя от водного слоя. Водный слой экстрагировали с помощью этилацетата, органические слои объединяли и высушивали над безводным сульфатом натрия. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (0,047 г) в виде белого твердого вещества.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 3,66 (s, 3H), 6,62 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 7,14 (td, J=8, 1 Гц, 1H), 7,32 (br.d, J=8 Гц, 1H), 7,39 (td, J=8, 6 Гц, 1H), 7,76 (dd, J=9, 7 Гц, 2H).

(13e) Синтез сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-1-(7-((2-хлор-6-фторфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты

HOBT (0,063 г), WSC (0,079 г), гидробромид сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты (0,082 г) (пример получения 1) и триэтиламин (0,111 г) последовательно добавляли к раствору 7-((2-хлор-6-фторфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (0,124 г) в DMF (5 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. К реакционной смеси добавляли этилацетат (60 мл) и воду (30 мл) и органический слой промывали с помощью воды (30 мл × 2) и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (0,125 г) в виде белого твердого вещества.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 1,26-1,32 (m, 3H), 1,40-1,52 (m, 1H), 1,60-1,71 (m, 1H), 2,08-2,23 (m, 1H), 2,30 (td, J=14, 6 Гц, 1H), 2,53 (m, 1H), 2,65-2,90 (m, 2H), 3,60 (m, 3H), 4,10-4,21 (m, 2H), 4,36-5,04 (m, 3H), 6,54-7,09 (m, 3H), 7,24-7,31 (m, 2H), 7,71-7,79 (m, 2H).

(13f) Синтез 2-((3R*,4S*)-1-(7-((2-хлор-6-фторфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты

Водный раствор (2 мл) гидроксида лития (0,0096 г) добавляли к раствору сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-1-(7-((2-хлор-6-фторфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты (0,125 г) в 1,4-диоксане (6 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. DMSO (2 мл) и уксусную кислоту (0,1 мл) добавляли к реакционной смеси, которую концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой колоночной хроматографии на силикагеле (система ацетонитрил-вода, 0,1% уксусной кислоты), фракции, содержащие указанное в заголовке соединение, объединяли и концентрировали при пониженном давлении до объема 5 мл. Осадок собирали посредством фильтрации, промывали с помощью воды (5 мл) и высушивали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (0,104 г) в виде белого твердого вещества.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 1,43-1,51 (m, 1H), 1,62-1,73 (m, 1H), 2,09-2,22 (m, 1H), 2,34-2,42 (m, 1H), 2,58-2,91 (m, 3H), 3,60 (s, 1,5H), 3,61 (s, 1,5H), 4,38-5,05 (m, 3H), 6,54 (s, 0,5H), 6,56 (s, 0,5H), 6,99 (s, 0,5H), 7,02 (s, 0,5H), 7,02-7,09 (m, 1H), 7,25-7,30 (m, 2H), 7,72-7,78 (m, 2H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 594/596 (M+H)⁺

Пример 14

Синтез 2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-хлорфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты

(14a) Синтез сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2-хлорфенил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Раствор сложного этилового эфира 5,7-дихлорпиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (CAS № 1232224-62-2) (1,7 г) и 2-хлоранилина (CAS № 95-51-2) (0,92 г) в NMP (1,3 мл) перемешивали с нагреванием при 120°C в течение 1 часа и 130°C в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждали, затем разбавляли с помощью этилацетата и подвергали воздействию ультразвука. Твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали с помощью этилацетата и высушивали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (1,3 г) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,46 (t, J=7 Гц, 3H), 4,50 (q, J=7 Гц, 2H), 6,20 (s, 1H), 7,03 (s, 1H), 7,36 (td, J=8, 2 Гц, 1H), 7,44 (td, J=8, 2 Гц, 1H), 7,53 (dd, J=8, 2 Гц, 1H), 7,59 (dd, J=8, 2 Гц, 1H), 8,29 (br.s, 1H).

(14b) Синтез сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2-хлорфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Карбонат калия (0,61 г) и метилйодид (0,46 мл) добавляли к раствору сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2-хлорфенил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (1,30 г) в DMF (10 мл) и перемешивали с нагреванием при 50°C в течение 3 часов. Этилацетат добавляли к реакционной смеси, которую дважды промывали с помощью насыщенного водного раствора хлорида натрия. Органический слой высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (1,21 г) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,35 (t, J=7 Гц, 3H), 3,83 (s, 3H), 4,35 (q, J=7 Гц, 2H), 5,85 (s, 1H), 6,89 (s, 1H), 7,34-7,41 (m, 3H), 7,49-7,52 (m, 1H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 365/367 (M+H)⁺

(14c) Синтез 5-хлор-7-((2-хлорфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

5 н. водный раствор гидроксида натрия (2,0 мл) добавляли к раствору сложного этилового эфира 5-хлор-7-((2-хлорфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (1,2 г) в 1,4-диоксане и перемешивали с нагреванием при 105°C в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждали, слабо подкисляли с помощью 5 н. хлористоводородной кислоты и экстрагировали с помощью этилацетата. Органический слой высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта на основе указанного в заголовке соединения (1,2 г) в виде светло-желтого твердого вещества.

¹H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ: 3,64 (s, 3H), 6,34 (s, 1H), 6,83 (s, 1H), 7,38-7,45 (m, 2H), 7,51-7,57 (m, 2H), 13,10 (br.s, 1H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 337/339 (M+H)⁺

(14d) Синтез 5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-хлорфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Воду (2 мл), карбонат натрия (0,20 г), 4-хлор-3,5-дифторфенилбороновую кислоту (0,14 г) и тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (0,048 г) добавляли к смеси 5-хлор-7-((2-хлорфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (0,19 г) и 1,4-диоксана (10 мл) и перемешивали при 95°C в течение 2 часов. К реакционной смеси добавляли этилацетат (100 мл), воду (50 мл) и 5 н. хлористоводородную кислоту (50 мл) и органический слой отделяли и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали, реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали посредством обращенно-фазовой колоночной хроматографии на силикагеле (система ацетонитрил-вода, 0,1% уксусной кислоты) с получением указанного в заголовке соединения (0,188 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 3,74 (s, 3H), 6,53 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 7,34-7,43 (m, 3H), 7,51-7,54 (m, 1H), 7,71 (d, J=8 Гц, 2H).

(14e) Синтез сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-хлорфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты

HOBT (0,063 г), WSC (0,079 г), гидробромид сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты (0,082 г) (пример получения 1) и триэтиламин (0,111 г) последовательно добавляли к раствору 5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-хлорфенил(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (0,124 г) в DMF (5 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. К реакционной смеси добавляли этилацетат (60 мл) и воду (30 мл) и органический слой промывали с помощью воды (30 мл × 2) и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (163 мг) в виде белого твердого вещества.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 1,26-1,32 (m, 3H), 1,40-1,52 (m, 1H), 1,60-1,71 (m, 1H), 2,08-2,23 (m, 1H), 2,26-2,35 (m, 1H), 2,53 (m, 1H), 2,66-2,91 (m, 2H), 3,65 (s, 1,2H), 3,66 (s, 1,8H), 4,10-4,21 (m, 2H), 4,39-5,06 (m, 3H), 6,48 (s, 0,6H), 6,50 (s, 0,4H), 7,01 (s, 0,4H), 7,03 (s, 0,6H), 7,15-7,23 (m, 1H), 7,26-7,32 (m, 2H), 7,47-7,52 (m, 1H), 7,68-7,72 (m, 2H).

(14f) Синтез 2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-хлорфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты

Водный раствор (2 мл) гидроксида лития (0,0126 г) добавляли к раствору сложного этилового эфира 2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-хлорфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-фторпиперидин-4-ил)уксусной кислоты (0,163 г) в 1,4-диоксане (6 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. DMSO (2 мл) и уксусную кислоту (0,1 мл) добавляли к реакционной смеси, которую концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой колоночной хроматографии на силикагеле (система ацетонитрил-вода, 0,1% уксусной кислоты), фракции, содержащие указанное в заголовке соединение, объединяли и концентрировали при пониженном давлении до объема 5 мл. Осадок собирали посредством фильтрации, промывали с помощью воды (5 мл) и высушивали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (0,132 г) в виде белого твердого вещества.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 1,44-1,54 (m, 1H), 1,63-1,73 (m, 1H), 2,09-2,23 (m, 1H), 2,38 (ddd, J=17, 11, 7 Гц, 1H), 2,60 (ddd, J=17, 10, 7 Гц, 1H), 2,67-2,92 (m, 2H), 3,65 (s, 1,2H), 3,67 (s, 1,8H), 4,42-5,07 (m, 3H), 6,48 (s, 0,6H), 6,51 (s, 0,4H), 7,02 (s, 0,4H), 7,04 (s, 0,6H), 7,15-7,23 (m, 1H), 7,26-7,32 (m, 2H), 7,47-7,52 (m, 1H), 7,68-7,72 (m, 2H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 592/594 (M+H)⁺

Пример 15

Синтез 2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-(изопропил(пропил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты

(15a) Синтез сложного этилового эфира 5-хлор-7-(изопропил(пропил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

N-Изопропилпропиламин (CAS №21968-17-2) (0,32 г) добавляли к смеси сложного этилового эфира 5,7-дихлорпиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (CAS №1232224-62-2) (0,78 г), триэтиламина (1,47 мл) и THF (15 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. К реакционной смеси добавляли этилацетат (100 мл) и насыщенный водный раствор хлорида аммония (50 мл) и органический слой отделяли и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (0,71 г) в виде светло-желтой жидкости.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ: 0,94 (t, J=7 Гц, 3H), 1,35 (d, J=7 Гц, 6H), 1,42 (t, J=7 Гц, 3H), 1,60 (m, 2H), 3,55 (m, 2H), 4,43 (q, J=7 Гц, 2H), 4,95 (m, 1H), 6,06 (s, 1H), 6,89 (s, 1H).

(15b) Синтез сложного этилового эфира 5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-(изопропил(пропил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Смесь сложного этилового эфира 5-хлор-7-(изопропил(пропил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (0,64 г), 1,4-диоксана (9 мл), воды (1 мл), карбоната натрия (0,31 г), 4-хлор-3,5-дифторфенилбороновой кислоты (0,42 г) и тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,23 г) перемешивали при 80°C в течение 3 часов. Реакционную смесь фильтровали через NH-силикагель и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (0,68 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 0,96 (t, J=7 Гц, 3H), 1,39 (d, J=7 Гц, 6H), 1,44 (t, J=7 Гц, 3H), 1,62 (m, 2H), 3,61 (m, 2H), 4,45 (q, J=7 Гц, 2H), 5,01 (m, 1H), 6,41 (s, 1H), 7,05 (s, 1H), 7,67 (d, J=7 Гц, 2H).

(15c) Синтез 5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-(изопропил(пропил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Смесь сложного этилового эфира 5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-(изопропил(пропил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (0,68 г), 1,4-диоксана (20 мл), воды (4 мл) и 4 н. водного раствора гидроксида лития (1,5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли 2 н. хлористоводородную кислоту (3 мл), реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и осадок собирали посредством фильтрации. Остаток промывали с помощью воды и высушивали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (0,60 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ: 0,86 (t, J=7 Гц, 3H), 1,30 (d, J=7 Гц, 6H), 1,48 (m, 2H), 3,69 (t, J=7 Гц, 2H), 5,02 (m, 1H), 6,91 (s, 1H), 6,99 (s, 1H), 8,17 (d, J=9 Гц, 2H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 409 (M+H)⁺

(15d) Синтез сложного этилового эфира 2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-(изопропил(пропил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты

HOBT (0,079 г), WSC (0,099 г), гидрохлорид сложного этилового эфира 2-((1α,5α,6α)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты (0,085 г), (сложный этиловый эфир (2-(1α,5α,6α)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты (CAS №1251668-97-9) (WO 2010/116328) превращали в его гидрохлорид посредством традиционного способа) и триэтиламин (0,105 г) последовательно добавляли к раствору 5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-(изопропил(пропил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (141 мг) в DMF (5 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. К реакционной смеси добавляли этилацетат (100 мл) и воду (50 мл) и органический слой промывали с помощью воды (50 мл × 2) и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (0,127 г) в виде бесцветной жидкости.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ: 0,95 (t, J=7 Гц, 3H), 0,95-1,00 (m, 1H), 1,26 (t, J=7 Гц, 3H), 1,35 (d, J=7 Гц, 3H), 1,36 (d, J=7 Гц, 3H), 1,50-1,53 (m, 1H), 1,55-1,57 (m, 1H), 1,61 (m, 2H), 2,24 (dd, J=16, 8 Гц, 1H), 2,36 (dd, J=16, 7 Гц, 1H), 3,47-3,57 (m, 2H), 3,65 (dd, J=13, 4 Гц, 1H), 3,97 (dd, J=12, 4 Гц, 1H), 4,14 (q, J=7 Гц, 2H), 4,19 (d, J=13 Гц, 1H), 4,36 (d, J=12 Гц, 1H), 5,11 (m, 1H), 6,40 (s, 1H), 7,03 (s, 1H), 7,67 (d, J=8 Гц, 2H).

(15e) Синтез 2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-(изопропил(пропил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты

Водный раствор (2 мл) гидроксида лития (0,0109 г) добавляли к раствору сложного этилового эфира 2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-(изопропил(пропил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты (0,127 г) в 1,4-диоксане (6 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. DMSO (1 мл) и уксусную кислоту (0,06 мл) добавляли к реакционной смеси, которую концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой колоночной хроматографии на силикагеле (система ацетонитрил-вода, 0,1% уксусной кислоты) с получением указанного в заголовке соединения (0,111 г) в виде желтого твердого вещества.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 0,95 (t, J=7 Гц, 3H), 0,94-1,00 (m, 1H), 1,34-1,37 (m, 6H), 1,53-1,65 (m, 4H), 2,30 (dd, J=16, 8 Гц, 1H), 2,42 (dd, J=16, 7 Гц, 1H), 3,50-3,53 (m, 2H), 3,65 (dd, J=13, 4 Гц, 1H), 3,97 (dd, J=12, 4 Гц, 1H), 4,21 (d, J=13 Гц, 1H), 4,38 (d, J=12 Гц, 1H), 5,11 (m, 1H), 6,39 (s, 1H), 7,03 (s, 1H), 7,67 (d, J=8 Гц, 2H).

Пример 16

Синтез 2-((1α,5α,6α)-3-(7-(изобутил((S)-1-фенилэтил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты

(16a) Синтез сложного этилового эфира (S)-5-хлор-7-((1-фенилэтил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Триэтиламин (10 мл) добавляли к смеси сложного этилового эфира 5,7-дихлорпиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (CAS № 1232224-62-2) (5 г), THF (75 мл) и (S) -(-)-α-метилбензиламина (CAS № 2627-86-3) (2,50 г) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. К реакционной смеси добавляли этилацетат и воду и органический слой промывали с помощью насыщенного водного раствора хлорида натрия и высушивали над безводным сульфатом натрия. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на NH-силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (6,47 г) в виде бесцветной жидкости.

¹H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ: 1,35 (t, J=7 Гц, 3H), 1,66 (d, J=7 Гц, 3H), 4,39 (q, J=7 Гц, 2H), 5,03 (q, J=7 Гц, 1H), 6,25 (s, 1H), 6,86 (s, 1H), 7,27 (t, J=7 Гц, 1H), 7,36 (t, J=7 Гц, 2H), 7,54 (d, J=7 Гц, 2H).

(16b) Синтез (S)-5-хлор-7-((1-фенилэтил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

5 н. водный раствор гидроксида натрия (15 мл) добавляли к смеси сложного этилового эфира (S)-5-хлор-7-((1-фенилэтил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (6,45 г) и этанола (100 мл) и перемешивали с нагреванием при 50°C в течение 30 минут. После охлаждения добавляли 5 н. хлористоводородную кислоту (14 мл) и воду и перемешивали при комнатной температуре. Осадок собирали посредством фильтрации, промывали с помощью воды и высушивали при пониженном давлении. Указанное в заголовке соединение (5,81 г) получали в виде белого твердого вещества.

¹H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ: 1,66 (d, J=7 Гц, 3H), 5,03 (квинтет, J=7 Гц, 1H), 6,23 (s, 1H), 6,81 (s, 1H), 7,27 (t, J=8 Гц, 1H), 7,36 (t, J=8 Гц, 2H), 7,53 (d, J=8 Гц, 2H), 8,79 (d, J=7 Гц, 1H), 13,40 (br.s, 1H).

(16c) Синтез сложного этилового эфира 2-((1α,5α,6α)-3-(5-хлор-7-(((S)-1-фенилэтил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты

Триэтиламин (2,5 мл) добавляли к смеси (S)-5-хлор-7-((1-фенилэтил)(амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (1 г), DMF (20 мл), HOBT (0,7 г), WSC (1 г) и гидрохлорида сложного этилового эфира 2-((1α,5α,6α)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты (0,7 г) и перемешивали при комнатной температуре в течение 23 часов. К реакционной смеси добавляли этилацетат и воду. Органический слой промывали с помощью насыщенного водного раствора хлорида натрия и высушивали над безводным сульфатом натрия. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (1,02 г) в виде бесцветной жидкости.

¹H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ: 0,72-0,79 (m, 1H), 1,18 (t, J=7 Гц, 3H), 1,50-1,60 (m, 2H), 1,66 (d, J=7 Гц, 3H), 2,27-2,39 (m, 2H), 3,47-3,52 (m, 1H), 3,84-4,09 (m, 5H), 5,01-5,08 (m, 1H), 6,19 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 7,27 (t, J=8 Гц, 1H), 7,36 (td, J=8, 2 Гц, 2H), 7,51 (d, J=8 Гц, 2H), 8,58 (br.s, 1H).

(16d) Синтез сложного этилового эфира 2-((1α,5α,6α)-3-(5-хлор-7-(изобутил((S)-1-фенилэтил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты

1-Йод-2-метилпропан (1,5 мл) добавляли к смеси сложного этилового эфира 2-((1α,5α,6α)-3-(5-хлор-7-(((S)-1-фенилэтил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты (1,02 г), DMF (10 мл) и карбоната цезия (2 г) и перемешивали с нагреванием при 70°C в течение 14 часов. Реакционную смесь охлаждали и добавляли этилацетат и воду. Органический слой промывали с помощью насыщенного водного раствора хлорида натрия и высушивали над безводным сульфатом натрия. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (0,46 г) в виде желтого твердого вещества.

¹H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆, смесь поворотных изомеров) δ: 0,71 (m, 3H), 0,73 (m, 1H), 0,80 (m, 3H), 1,15 (m, 3H), 1,48-1,56 (m, 2H), 1,73 (m, 3H), 1,81 (m, 1H), 2,24-2,35 (m, 2H), 2,79-2,87 (m, 1H), 2,95 (dd, J=15, 5 Гц, 1H), 3,50 (dt, 12, 5 Гц, 1H), 3,84-3,94 (m, 2H), 4,00-4,07 (m, 2H), 4,21 (dd, J=11, 4 Гц, 1H), 6,20 (m, 1H), 6,57 (s, 0,5H), 6,58 (s, 0,5H), 6,84 (m, 1H), 7,28-7,41 (m, 5H).

(16e) Синтез сложного этилового эфира 2-((1α,5α,6α)-3-(7-(изобутил((S)-1-фенилэтил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты

Смесь сложного этилового эфира 2-((1α,5α,6α)-3-(5-хлор-7-(изобутил((S)-1-фенилэтил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты (0,050 г), толуола (0,9 мл), 2 н. водного раствора карбоната натрия (0,12 мл), 3,4,5-трифторфенилбороновой кислоты (0,020 г) и тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,015 г) перемешивали при 100°C в течение 17 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением неочищенного продукта на основе указанного в заголовке соединения.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 0,78 (m, 3H), 0,89 (m, 3H), 0,92-0,96 (m, 1H), 1,24 (m, 3H), 1,47-1,56 (m, 2H), 1,77 (m, 3H), 1,96 (m, 1H), 2,21-2,34 (m, 2H), 2,81-2,93 (m, 2H), 3,64 (dt, J=12, 4 Гц, 1H), 3,96 (dt, J=12, 4 Гц, 1H), 4,12 (m, 2H), 4,19 (d, J=12 Гц, 1H), 4,35 (dd, J=12, 7 Гц, 1H), 6,25-6,36 (m, 2H), 7,13 (s, 0,5H), 7,14 (s, 0,5H), 7,28-7,54 (m, 5H), 7,66 (m, 2H).

(16f) Синтез 2-((1α,5α,6α)-3-(7-(изобутил((S)-1-фенилэтил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты

5 н. водный раствор гидроксида натрия (0,15 мл) добавляли к смеси неочищенного продукта на основе сложного этилового эфира 2-((1α,5α,6α)-3-(7-(изобутил((S)-1-фенилэтил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусной кислоты, полученной в (16e), и этанола (1 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Добавляли 5 н. хлористоводородную кислоту (0,15 мл) и воду, осадок собирали посредством фильтрации, промывали с помощью воды и высушивали при пониженном давлении. Указанное в заголовке соединение (0,042 г) получали в виде белого твердого вещества.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 0,78 (m, 3H), 0,90 (m, 3H), 0,93-0,98 (m, 1H), 1,48-1,54 (m, 2H), 1,76 (m, 3H), 1,91-1,98 (m, 1H), 2,27-2,38 (m, 2H), 2,82-2,93 (m, 2H), 3,64 (dt, J=13, 4 Гц, 1H), 3,96 (br.d, J=12 Гц, 1H), 4,20 (d, J=13 Гц, 1H), 4,37 (t, J=12 Гц, 1H), 6,32 (m, 1H), 6,35 (s, 0,5H), 6,36 (s, 0,5H), 7,12 (s, 0,5H), 7,13 (s, 0,5H), 7,27-7,34 (m, 5H), 7,66 (m, 2H).

Пример 17

Синтез 2-(1-(7-((2-хлор-6-фторфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)пиперидин-4-ил)уксусной кислоты

Смесь 7-((2-хлор-6-фторфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (пример 13- (13d)) (0,023 г), сложного этилового эфира 4-пиперидинуксусной кислоты (CAS № 59184-90-6) (0,012 г), HOBT (0,012 г), WSC (0,015 г), триэтиламина (0,030 мл) и DMF (2 мл) перемешивали при 40°C в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением неочищенного продукта на основе сложного этилового эфира 2-(1-(7-((2-хлор-6-фторфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)пиперидин-4-ил)уксусной кислоты. К указанному добавляли этанол (1,5 мл) и 5 н. водный раствор гидроксида натрия (0,100 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа, затем добавляли 5 н. хлористоводородную кислоту. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали посредством обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (система ацетонитрил-вода) с получением указанного в заголовке соединения (22 мг).

¹H-ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ: 0,83-0,97 (m, 1H), 1,13 (qd, J=12, 4 Гц, 1H), 1,63 (d, J=13 Гц, 1H), 1,81 (d, J=13 Гц, 1H), 1,91-2,05 (m, 1H), 2,15-2,32 (m, 2H), 2,67-2,70 (m, 2H), 3,60 (s, 3H), 4,11 (d, J=13 Гц, 1H), 4,54 (d, J=13 Гц, 1H), 6,81 (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 7,18 (br.t, J=8 Гц, 1H), 7,33-7,42 (m, 2H), 8,00-8,09 (m, 2H).

Пример 18

Синтез 2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-(изопропил(пропил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метилпиперидин-4-ил)уксусной кислоты

Триэтиламин (0,060 мл) добавляли к смеси 5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-(изопропил(пропил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (0,030 г) (пример 15 - (15c)), гидрохлорида сложного изопропилового эфира 2-((3R*,4S*)-3-метилпиперидин-4-ил)уксусной кислоты (0,020 г) (пример получения 5), HOBT (0,028 г), WSC (0,040 г) и DMF (0,6 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 17 часов. К реакционной смеси добавляли воду и этилацетат с отделением органического слоя, который концентрировали в потоке газообразного азота. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением неочищенного продукта на основе сложного изопропилового эфира 2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-(изопропил(пропил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метилпиперидин-4-ил)уксусной кислоты. К указанному добавляли этанол (0,700 мл) и 5 н. водный раствор гидроксида натрия (0,100 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3,5 часа, затем добавляли 5 н. хлористоводородную кислоту (0,100 мл). Осадок собирали посредством фильтрации, промывали с помощью воды и высушивали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (36 мг).

¹H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆, смесь поворотных изомеров) δ: 0,73-0,87 (m, 6H), 1,23-1,29 (m, 6H), 1,40-1,58 (m, 4H), 1,83-2,22 (m, 4H), 2,99-3,44 (m, 2H), 3,60-3,71 (m, 2H), 3,99-4,31 (m, 2H), 4,95-5,06 (m, 1H), 6,72 (s, 0,45H), 6,74 (s, 0,55H), 6,99 (s, 1H), 8,17 (d, J=9 Гц, 2H).

Масс-спектр (ESI) масса/заряд: 548 (M+H)⁺

Эталонный пример 1

Синтез (S)-2-(1-(7-(метил(1-фенилэтил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)пиперидин-4-ил)уксусной кислоты

(19a) Синтез сложного этилового эфира (S)-5-хлор-7-(метил(1-фенилэтил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

(S)-N-Метил-1-фенилэтанамин (CAS № 19131-99-8) (1,716 г) и триэтиламин (3,22 мл) добавляли к раствору сложного этилового эфира 5,7-дихлорпиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (3 г) в THF (95 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли этилацетат и воду с разделением раствора. Органический слой промывали с помощью солевого раствора и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (4,08 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,41 (t, J=7 Гц, 3H), 1,75 (d, J=7 Гц, 3H), 2,83 (s, 3H), 4,43 (qd, J=7, 1 Гц, 2H), 6,03 (s, 1H), 6,60 (q, J=7 Гц, 1H), 6,97 (s, 1H), 7,28-7,45 (m, 5H).

(19b) Синтез сложного этилового эфира (S)-7-(метил(1-фенилэтил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

2 н. водный раствор карбоната натрия (40 мл) добавляли к смеси сложного этилового эфира (S)-5-хлор-7-(метил(1-фенилметил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (13,95 г), толуола (150 мл), этанола (15 мл), 3,4,5-трифторфенилбороновой кислоты (7,5 г) и тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (2,5 г) и перемешивали при 100°C в течение 75 минут. Этилацетат и воду добавляли к реакционной смеси, которую фильтровали с удалением осадка. Фильтрат разделяли, органический слой промывали с помощью солевого раствора и затем высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (16,23 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 1,43 (t, J=7 Гц, 3H), 1,78 (d, J=7 Гц, 3H), 2,91 (s, 3H), 4,45 (qd, J=7, 3 Гц, 2H), 6,33 (s, 1H), 6,68 (q, J=7 Гц, 1H), 7,12 (s, 1H), 7,29-7,39 (m, 3H), 7,42-7,45 (m, 2H), 7,69 (dd, J=9, 7 Гц, 2H).

(19c) Синтез (S)-7-(метил(1-фенилэтил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты

Воду (5 мл) и 4 н. водный раствор гидроксида лития (0,653 мл) добавляли к раствору сложного этилового эфира (S)-7-(метил(1-фенилэтил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (0,791 г) в 1,4-диоксане (40 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течении 3 дней. Растворитель удаляли при пониженном давлении, добавляли воду (20 мл) к остатку, к которому добавляли 5 н. хлористоводородную кислоту (0,5 мл) при перемешивании. Осадок собирали посредством фильтрации, высушивали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (678 мг).

¹H-ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ: 1,69 (d, J=7 Гц, 3H), 2,91 (s, 3H), 6,77 (q, J=7 Гц, 1H), 6,89 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 7,31 (m, 1H), 7,39 (t, J=7 Гц, 2H), 7,46 (d, J=7 Гц, 2H), 8,18-8,22 (m, 2H), 13,30 (br.s, 1H).

(19d) Синтез сложного этилового эфира (S)-2-(1-(7-(метил(1-фенилэтил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)пиперидин-4-ил)уксусной кислоты

HOBT (2,68 г), WSC (3,35 г), сложный этиловый эфир 4-пиперидинуксусной кислоты (CAS № 59184-90-6) (2,226 г) и триэтиламин (4,18 мл) последовательно добавляли к раствору (S)-7-(метил(1-фенилэтил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоновой кислоты (4,26 г) в DMF (50 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. К реакционной смеси добавляли этилацетат (500 мл) и органический слой промывали 3 раза с помощью воды (300 мл) и высушивали над безводным сульфатом магния. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (система гептан-этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения (5,175 г).

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 1,07-1,12 (m, 1H), 1,22-1,34 (m, 4H), 1,50-1,63 (m, 1H), 1,70-1,72 (m, 3H), 1,80-1,86 (m, 1H), 2,02-2,09 (m, 1H), 2,13-2,25 (m, 2H), 2,76-2,83 (m, 1H), 2,87 (s, 3H), 2,99-3,07 (m, 1H), 4,13 (q, J=7 Гц, 2H), 4,54-4,61 (m, 1H), 4,72-4,88 (m, 1H), 6,31 (s, 1H), 6,73-6,84 (m, 1H), 6,93-6,95 (m, 1H), 7,28-7,40 (m, 5H), 7,66-7,73 (m, 2H).

(19e) Синтез (S)-2-(1-(7-(метил(1-фенилэтил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)пиперидин-4-ил)уксусной кислоты

Смесь сложного этилового эфира (S)-2-(1-(7-(метил(1-фенилэтил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)пиперидин-4-ил)уксусной кислоты (1,42 г), этанола (10 мл) и 4 н. водного раствора гидроксида лития (1,225 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, остаток разбавляли с помощью 1,4-диоксана, к указанному добавляли 4 н. водный раствор гидроксида лития (1,2 мл) и смесь перемешивали с нагреванием при 50°C в течение 90 минут. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток разбавляли с помощью этилацетата с разделением растворителей. Органический слой экстрагировали с помощью 1 н. водного раствора гидроксида натрия, водные слои объединяли и промывали с помощью этилацетата. Водный слой нейтрализовали с помощью 2 н. хлористоводородной кислоты и экстрагировали с помощью этилацетата. Органический слой промывали с помощью солевого раствора и высушивали над безводным сульфатом натрия. Осушающее средство отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток разбавляли с помощью раствора диэтиловый эфир:метанол (3:1) и подвергали воздействию ультразвука. Осадок собирали посредством фильтрации и высушивали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (1,134 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃, смесь поворотных изомеров) δ: 1,05-1,38 (m, 2H), 1,50-1,66 (m, 1H), 1,69-1,73 (m, 3H), 1,83-1,90 (m, 1H), 1,97-2,11 (m, 1H), 2,17-2,31 (m, 2H), 2,75-2,84 (m, 1H), 2,87 (s, 3H), 2,98-3,07 (m, 1H), 4,54-4,65 (m, 1H), 4,73-4,81 (m, 1H), 6,32 (s, 1H), 6,71-6,86 (m, 1H), 6,92-6,95 (m, 1H), 7,27-7,40 (m, 5H), 7,66-7,74 (m, 2H).

(Эталонный пример 2)

Эксперимент посредством рентгеновской дифракции в отношении 2-((3R,4S)-1-(5-(4-хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-фтор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусной кислоты

2-((3R,4S)-1-(5-(4-Хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-фтор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусную кислоту в твердом виде, полученную в примере 10 - (10n), растворяли в метаноле и перекристаллизовывали посредством способа диффузии в парах с ацетонитрилом в качестве резервуарного раствора. Эксперимент посредством рентгеновской дифракции проводили с применением полученного монокристалла. Кристаллографические данные и результаты структурного анализа показаны в таблице 1 и данные атомных координат показаны в таблице 2. Данные результаты идентифицировали абсолютную структуру указанного в заголовке соединения.

[Таблица 1]

Температура при измерениях	100 K
Длина волны	1,54187 Å
Кристаллическая система, пространственная группа	Тетрагональная система, P4₁2₁2
Постоянная решетки	a=10,07760 (8) Å c=56,3508 (7) Å
Объем	5722,88 (10) Å³
Значение Z, рассчитанная плотность	8, 1,397 г/см³
Размер кристалла	0,2×0,2×0,1 мм
Число всех отражений/число уникальных отражений	36332/5658
Завершенность	98,4%
Определение фаз	Прямой способ (SHELXT версия 2014/5)
Способ уточнения	Способ наименьших квадратов по F²
Число данных/число параметров	5658/383
Критерий соответствия	1,054
Значение R (по всем данным)	0,0558
Значение R (I>2σ (I))	0,0549
Параметр Флэка	0,021 (5)
Максимальный и минимальный пики на разностной карте	1,09 и -0,50 e/Å³

[Таблица 2]

Атом	x	y	z	Bэкв.
Cl8	0,22435 (12)	1,18031 (10)	0,76648 (2)	3,54 (2)
F7	0,4747 (3)	1,0360 (3)	0,77268 (5)	3,89 (5)
F9	0,0801 (3)	1,0411 (3)	0,72860 (4)	3,56 (5)
F26	0,4086 (5)	0,2758 (5)	0,71424 (8)	7,69 (11)
O30	0,8904 (3)	0,5016 (3)	0,64474 (5)	2,82 (5)
O37	0,8890 (3)	0,1675 (3)	0,68629 (6)	3,74 (6)
O41	1,0257 (3)	-0,2595 (3)	0,68278 (6)	3,65 (6)
O42	0,9183 (3)	-0,2401 (3)	0,64825 (6)	3,17 (5)
N13	0,5061 (3)	0,5220 (3)	0,68112 (6)	2,31 (5)
N14	0,5701 (3)	0,4396 (3)	0,66596 (6)	2,35 (5)
N18	0,5449 (3)	0,7086 (3)	0,70694 (6)	2,49 (5)
N19	0,2959 (3)	0,4237 (4)	0,67562 (8)	3,41 (7)
N31	0,7970 (3)	0,2975 (3)	0,64425 (6)	2,41 (5)
C1	0,3639 (4)	0,8225 (4)	0,72514 (7)	2,43 (6)
C2	0,4429 (4)	0,8765 (4)	0,74272 (7)	2,71 (6)
C3	0,3979 (4)	0,9838 (4)	0,75560 (7)	2,75 (6)
C4	0,2756 (4)	1,0421 (4)	0,75118 (7)	2,63 (6)
C5	0,1986 (4)	0,9859 (4)	0,73357 (7)	2,73 (6)
C6	0,2383 (4)	0,8765 (4)	0,72066 (7)	2,52 (6)
C10	0,4149 (4)	0,7127 (4)	0,71002 (7)	2,50 (6)
C11	0,3251 (4)	0,6201 (4)	0,69996 (8)	2,92 (7)
C12	0,3707 (4)	0,5195 (4)	0,68562 (8)	2,83 (7)
C15	0,6980 (4)	0,4784 (4)	0,66795 (7)	2,31 (6)
C16	0,7161 (4)	0,5825 (4)	0,68390 (7)	2,44 (6)
C17	0,5904 (4)	0,6122 (4)	0,69233 (7)	2,35 (6)
C20	0,3443 (4)	0,2896 (4)	0,67243 (9)	3,28 (8)
C21	0,3962 (5)	0,2189 (5)	0,69117 (10)	3,92 (9)
C22	0,4368 (5)	0,0866 (5)	0,68811 (12)	4,72 (11)
C23	0,4222 (6)	0,0297 (5)	0,66631 (13)	5,28 (14)
C24	0,3727 (5)	0,0979 (5)	0,64723 (12)	4,75 (13)
C25	0,3334 (4)	0,2318 (5)	0,65018 (10)	3,75 (9)
C27	0,2849 (4)	0,3080 (4)	0,63103 (7)	2,51 (6)
C28	0,1509 (5)	0,4311 (6)	0,67950 (15)	6,24 (18)
C29	0,8015 (4)	0,4240 (3)	0,65189 (7)	2,30 (6)
C32	0,7215 (4)	0,1909 (4)	0,65550 (8)	2,62 (6)
C33	0,8179 (4)	0,0975 (4)	0,66828 (8)	3,03 (7)
C34	0,9203 (4)	0,0409 (4)	0,65113 (9)	3,17 (7)
C35	0,9901 (4)	0,1539 (4)	0,63775 (8)	3,13 (7)
C36	0,8918 (4)	0,2507 (4)	0,62672 (8)	2,84 (7)
C38	0,8171 (6)	0,1866 (6)	0,70746 (10)	4,94 (11)
C39	1,0218 (5)	-0,0476 (4)	0,66358 (12)	4,46 (11)
C40	0,9887 (4)	-0,1923 (4)	0,66628 (8)	3,07 (7)

Тестовый пример 1. Измерение концентрации внутриклеточного кальция

Получали клетки HEK293 клеточной линии почки эмбриона человека, которые культивировали с применением среды для культивирования DMEM (Invitrogen) с добавленной 3% фетальной бычьей сывороткой (3% FBS), с концентрацией 2 × 10⁵ клеток/мл и высевали в покрытом коллагеном типа I 384-луночном черном планшете (с прозрачным дном) (Greiner) так, чтобы концентрация составляла 25 мкл/лунка и культивировали в CO2-инкубаторе в течение ночи. Набор для анализа кальция FLIPR (Molecular Devices), полученный с раствором Хенкса с 20 мМ буфером Hepes (pH 7,4), добавляли в клетки так, чтобы концентрация составляла 25 мкл/лунка и культивировали в CO2-инкубаторе в течение 1 часа. Трипсин (SIGMA-ALDRICH, номер по каталогу: T8816, Enzyme Commission Number 3.4.21.4), полученный так, чтобы конечная концентрация составляла 5 Ед./мл (единица BAEE) с раствором Хенкса с 20 мМ буфером Hepes (pH 7,4), добавляли в 384-луночный полипропиленовый планшет с глубокими лунками (Greiner) как планшет с реагентом, представляющим собой агонист. За тридцать минут до измерения с применением FDSS6000 (Hamamatsu Photonics K.K.) тестируемое соединение, полученное с раствором Хенкса с 20 мМ буфером Hepes (pH 7,4), добавляли в клетки так, чтобы концентрация составляла 8 мкл/лунка. Планшет с клетками, в который добавляли тестируемое соединение, и планшет с реагентом помещали в FDSS6000, из планшета с реагентом добавляли раствор агониста в концентрации 22 мкл/лунка и изменение концентрации внутриклеточного кальция измеряли с помощью CCD-камеры. Измерение проводили при 37°C в течение 120 секунд и добавление реагента с планшета с реагентом в планшет с клетками проводили с применением встроенного 384-луночного автоматического распределителя для FDSS6000.

В таблице 3 показана ингибиторная активность в отношении повышения уровня внутриклеточного кальция (IC50 (нM)) тестируемых соединений. Следует отметить, что эталонный пример 1 в таблице 3 представляет собой соединение, представленное формулой (XIX), синтезированное в вышеуказанном эталонном примере 1 (далее в данном документе, также называемое соединение (XIX)). Дополнительно, "сравнительное соединение" в таблице 3 представляет собой соединение, описанное в патентном литературном источнике 4, представленное следующей формулой (XX) (I-343; далее в данном документе, также называемое соединение (XX)).

[Таблица 3]

Примеры	Ингибиторная активность в отношении повышения уровня внутриклеточного кальция (IC50 (нM))
1	2,57
2	7,54
3	8,73
4	7,32
5	2,45
6	2,79
7	1,74
8	25,11
9	4,90
10	3,46
11	6,88
12	4,77
13	4,00
14	5,08
15	12,82
16	26,32
17	3,27
18	7,38
Эталонный пример 1	8,27
Сравнительное соединение	24,21

Тестовый пример 2. Измерение индуцированного агонистом PAR2 слюновыделения у мыши

Тестируемое соединение добавляли к 0,5% раствору карбоксиметилцеллюлозы, к которому добавляли 2% DMSO, так, чтобы конечная концентрация составляла 0,3 мг/мл, за счет чего обеспечивали получение раствора для введения, содержащего тестируемое соединение. Раствор для введения, содержащий тестируемое соединение (10 мл/кг), вводили перорально самцам мышей C57BL/6J (Charles River), возрастом 6-10 недель с применением зонда для перорального введения и шприца. Через сорок пять минут после введения тестируемого соединения вводили внутрибрюшинно 10 мл/кг 20% (вес/об.) раствора уретана мышам, которых затем подвергали анестезии. Через шестьдесят минут после введения тестируемого соединения 10 мл/кг 0,1 мг/мл раствора SLIGRL-NH2 (SEQ ID NO: 2) внутрибрюшинно вводили в качестве агониста PAR2 и немедленно помещали ватный шарик в полость рта мыши для сбора слюны. Через десять минут после введения агониста PAR2 ватный шарик удаляли и взвешивали с измерением количества выделенной слюны.

В таблице 4 показана ингибиторная активность тестируемых соединений в отношении PAR2-зависимого выделения слюны (%). Следует отметить, что эталонный пример 1 в таблице 4 представляет собой соединение (XIX). Дополнительно, сравнительное соединение в таблице 4 представляет собой соединение (XX).

[Таблица 4]

Примеры	Ингибиторная активность в отношении PAR2-зависимого выделения слюны (%)
1	91,5
2	91,3
3	86,7
4	87,1
5	94,5
6	97,0
7	96,0
8	98,1
9	96,0
10	92,2
11	97,8
12	98,8
13	95,0
14	92,5
15	91,1
16	98,2
17	94,9
18	95,1
Эталонный пример 1	95,9
Сравнительное соединение	98,0

Тестовый пример 3. Оценивание в мышиной модели дерматита

Тестируемое соединение добавляли к 0,5% раствору карбоксиметилцеллюлозы так, чтобы конечная концентрация составляла 0,3 мг/мл, за счет чего обеспечивали получение раствора для введения, содержащего тестируемое соединение. Применяемый гаптен представлял собой 2,4-динитрофторбензол (DNFB, Wako Pure Chemical Industries).

Двадцать пять (25) мкл раствора DNFB, разбавленного до 0,4% с помощью смешанного растворителя из ацетона и оливкового масла в объемном соотношении 2: 1, дважды наносили на бритую область живота самцов мышей BALB/c (Charles River) возрастом 6-10 недель в течение периода 2 дней для обеспечения сенсибилизации. Через четыре дня после сенсибилизации в первый день 20 мкл раствора DNFB, разбавленного до 0,2% с помощью смешанного растворителя из ацетона и оливкового масла в объемном соотношении 2: 1, применяли в отношении правого уха мыши для индуцирования дерматита. Через восемь часов после индуцирования дерматита раствор для введения, содержащий тестируемое соединение (10 мл/кг), перорально вводили мыши. На следующий день после индуцирования дерматита толщину правого уха мыши измеряли с применением толщиномера для оценки действия тестируемого соединения.

В таблице 5 показана ингибиторная активность (%) тестируемого соединения в отношении отека уха. Следует отметить, что эталонный пример 1 в таблице 5 представляет собой соединение (XIX).

[Таблица 5]

Примеры	Ингибиторная активность в отношении отека уха (%)
7	61,6
10	52,9
15	17,4
Эталонный пример 1	22,3

Тестовый пример 4. Оценивание в мышиной модели энтерита

Обычно длина кишечника, как известно, является более короткой во время энтерита (Maxwell, J.R. et al. Curr. Protoc. Pharmacol. Chapter 5: Unit 5.58, 2009). Длину кишечника в модели энтерита измеряли для оценивания эффекта тестируемого соединения.

Тестируемое соединение добавляли к 0,5% раствору карбоксиметилцеллюлозы так, чтобы конечная концентрация составляла 0,1 мг/мл, за счет чего обеспечивали получение раствора для введения, содержащего тестируемое соединение. Применяемый гаптен представлял собой 4-этоксиметилен-2-фенилоксазол-5-он (OXA, SIGMA-ALDRICH).

Сто (100) мкл раствора OXA, разбавленного до 0,3% с помощью этанола, наносили на бритую область живота самцов мышей BALB/c (Charles River), возрастом 6-10 недель для обеспечения сенсибилизации. Через пять дней после сенсибилизации ректально вводили OXA для индуцирования реакции в виде энтерита. Более конкретно шприц, оснащенный зондом для перорального введения, вводили в анус мыши, подвергнутой анестезии посредством ингаляции изофлураном при концентрации 4-5%, и в прямую кишку вводили 50 мкл раствора OXA, доведенного до 1% с помощью растворителя из 50% этанола/50% дистиллированной воды.

За час до индуцирования энтерита и на следующий день после этого раствор для введения, содержащий тестируемое соединение (10 мл/кг), в целом дважды перорально вводили мышам. Через два дня после индуцирования энтерита мышей подвергали эвтаназии посредством цервикальной дислокации и затем собирали кишку на промежутке от слепой кишки до ануса для измерения общей длины толстой кишки и прямой кишки с применением измерительной линейки, за счет чего обеспечивали оценивание действия тестируемого соединения.

В таблице 6 показана ингибиторная активность (%) тестируемого соединения в отношении укорочения кишечника. Следует отметить, что эталонный пример 1 в таблице 6 представляет собой соединение (XIX).

[Таблица 6]

Примеры	Ингибиторная активность в отношении укорочения кишечника (%)
1	60,4
2	69,7
5	105,5
6	79,6
8	55,0
13	62,2
16	74,5
Эталонный пример 1	37,3

Тестовый пример 5. Модель для индуцированного антигеном клеща атопического дерматита

Известно, что модель дерматита, индуцированного применением антигена клеща к мыши Nc, демонстрирует клинические симптомы и гистологические заключения, аналогичные атопическому дерматиту человека (Allergology International, 56, стр. 139-148 (2007)). Состояние дерматита в рамках модели наблюдали для оценивания эффекта тестируемого соединения на дерматит.

<Способ>

4 вес/об.% раствор SDS (0,15 мл/мышь) сначала наносили на дорсальную область и область ушей 8-недельных самцов мышей NC/NgaTndCrlj (Charles River Laboratories Japan, Inc.) при анестезии посредством ингаляции изофлураном. Приблизительно через 3 часа после применения 4 вес/об.% раствора SDS (0,15 мл/мышь) 1 мл-полипропиленовый одноразовый шприц (Terumo Corporation) наполняли Biostir AD (Biostir Inc.) в виде мази, содержащей антиген клеща, которую наносили на дорсальную область и область ушей (0,1 мл/мышь). Каждые 2 или 3 дня 4 вес/об.% раствор SDS (0,15 мл/мышь) и Biostir AD в целом применяли 8 раз, включая первоначальное применение, посредством такого же способа для индуцирования дерматита. После индуцирования дерматита наблюдали состояния кожи на участках применения (другие оценки, отличные от поведения, характеризующегося зудом) и результаты в отношении дерматита от 1) до 5), описанные ниже, оценивали в баллах на основе критерия оценки для клинических симптомов атопического дерматита человека. Следует отметить, что оценки в баллах результатов в отношении дерматита от 1) до 5) имеют значение 0 для отсутствия симптома, 1 для слабо выраженного, 2 для умеренного и 3 для тяжелого симптома. Балл оценки дерматита каждого индивидуума представляет собой общую сумму результатов в отношении дерматита от 1) до 5). Группирование (15 мышей в каждой группе) проводили произвольным образом так, что каждая группа имела практически такой же (без статистически значимой разницы) средний балл оценки дерматита (общий) и средний вес тела.

В течение 14 дней, начиная с дня, в который проводили группирование, раствор для введения, содержащий тестируемое соединение (10 мл/кг), перорально вводили мышам раз в день (14 раз в целом). Раствор для введения представлял собой 0,5% раствор карбоксиметилцеллюлозы, содержащий гидроксид натрия в концентрации 10 ммоль/л, и состоял из трех типов растворов, содержащих тестируемое соединение в концентрации 0,3, 1 или 3 мг/мл. Утром в день группирования (день 0), через 4 дня, 7 дней, 11 дней и 14 дней после начала введения для всех случаев наблюдали состояние кожи в местах введения антигена клеща снова для присвоения баллов оценки для результатов в отношении дерматита.

В таблице 7 показаны баллы оценки для 0 дня, 4 дней, 7 дней, 11 дней и 14 дней после начала введения.

<Результаты в отношении дерматита>

1) Поведение, характеризующееся зудом: за поведением наблюдали в течение 2 минут, во время которых наблюдали поведение, характеризующееся зудом на индуцированных участках.

0: Отсутствие симптомов: состояния без поведения, характеризующегося зудом на индуцированных участках.

1: Слабо выраженные симптомы: поведение, характеризующееся непрерывным зудом, наблюдали два или более раза во время периода наблюдения, но суммарно по времени оно не превышало приблизительно 1 минуту.

2: Умеренно выраженные симптомы: поведение по времени превышало приблизительно 1 минуту, но суммарно не превышало приблизительно 1 минуту с половиной.

3: Сильно выраженные симптомы: поведение, характеризующееся непрерывным зудом, по времени превышало приблизительно 1 минуту с половиной или суммарно длилось в течение 2 минут.

2) Покраснение и кровотечение: наблюдали симптомы в виде покраснения и кровотечения на индуцированных участках.

0: Отсутствие симптомов: состояние без симптома в виде покраснения или кровотечения на индуцированных участках.

1: Слабо выраженные симптомы: локализированные состояния с симптомами в виде покраснения и кровотечения, идентифицированными на индуцированных участках, или без кровотечения, обусловленного непрерывным расчесыванием.

2: Умеренно выраженные симптомы: состояния с идентифицированными симптомами в виде покраснения и кровотечения, рассредоточенными около индуцированных участков, или симптомы в виде покраснения и кровотечения, обусловленные непрерывным расчесыванием, идентифицированные локально.

3: Сильно выраженные симптомы: состояния с симптомами в виде покраснения и кровотечения, идентифицированными на всех индуцированных участках, или симптомы в виде покраснения и кровотечения с непрерывным расчесыванием, распространяющимися на широкой области.

3) Отек: проводили количественное наблюдение за индуцированным участком уха.

0: Отсутствие симптомов: состояние без утолщения левого или правого уха.

1: Слабо выраженные симптомы: состояние с незначительным утолщением либо правого, либо левого уха.

2: Умеренно выраженные симптомы: состояние с явно выраженным утолщением и отечностью обоих ушей.

3: Сильно выраженные симптомы: состояние с явно выраженным утолщением, отечностью и деформацией, идентифицированными для обоих ушей, и затвердение, ощущаемое при касании пальцами.

4) Расчесывание и некроз тканей: наблюдали симптомы в виде расчесывания и некроза тканей на индуцированных участках.

0: Отсутствие симптомов: Состояние без идентифицированных расчесывания или некроза тканей на индуцированных участках.

1: Слабо выраженные симптомы: состояние с локализированными расчесыванием и некрозом тканей, идентифицированными на индуцированных участках, идентифицированным прерывистым расчесыванием, но без некроза тканей.

2: Умеренно выраженные симптомы: состояние с идентифицированными расчесыванием и некрозом тканей, рассредоточенными около индуцированных участков или идентифицированные небольшое непрерывное расчесыванием, но без некроза тканей.

3: Сильно выраженные симптомы: состояние с идентифицированными расчесыванием и некрозом тканей на всех индуцированных участках или непрерывное расчесывание, распространяющееся в широкой области, и некроз тканей.

5) Образование струпа и сухость: наблюдали симптомы в виде образования струпа и сухости на индуцированных участках.

0: Отсутствие симптомов: состояние без симптомов в виде образования струпа или сухости на индуцированных участках.

1: Слабо выраженные симптомы: состояние с локализированными симптомами в виде образования струпа и сухости, идентифицированными на индуцированных участках, и незначительные побеление кожи и отслоение ороговевшего слоя, идентифицированные на индуцированных участках.

2: Умеренно выраженные симптомы: состояние с симптомами в виде образования струпа и сухости, рассредоточенными около индуцированных участков, или отслоение ороговевшего слоя, четко идентифицируемое на индуцированных участках.

3: Сильно выраженные симптомы: состояние с идентифицированными симптомами в виде образования струпа и сухости или отслоение ороговевшего слоя, четко идентифицируемое на всех индуцированных участках.

[Таблица 7]

Дата оценивания (после начала введения)		0	4	7	11	14
Среда		9,8 ± 0,5	9,5 ± 0,5	9,4 ± 0,6	8,1 ± 0,8	8,2 ± 0,8
Пример 10	3 мг/кг	9,7 ± 0,5	9,1 ± 0,5	8,6 ± 0,7	6,7 ± 0,7	5,4 ± 0,7
	10 мг/кг	9,3 ± 0,6	8,6 ± 0,9	7,7 ± 0,8	7,1 ± 1,0	5,9 ± 0,9
	30 мг/кг	9,3 ± 0,6	8,7 ± 0,7	7,8 ± 0,8	6,5 ± 0,8	5,0 ± 0,8

Тестовый пример 6. Мышиная модель разрушения кожного барьера, индуцированного соскобом липкой лентой

Эффект тестируемого соединения на функции кожного барьера оценивали с применением модели с разрушением кожного барьера, индуцированным соскобом липкой лентой. Трансэпидермальная потеря воды (TEWL) представляет собой индикатор оценки функций кожного барьера (Journal of Investigative Dermatology, 126, p 2074-2086 (2006)).

<Способ>

Самцы мышей Hos: HR-1 (Hoshino Laboratory Animals, Inc.) в возрасте семи недель подвергали тесту (n=10 для каждой обработки). Для перорального введения растворы тестируемого соединения с разной концентрацией получали следующим образом.

(1) С применением 0,5% раствора метилцеллюлозы, содержащего гидроксид натрия в концентрации 1,7 ммоль/л, раствор тестируемого соединения получали таким образом, что концентрация тестируемого соединения составляла 1 мг/мл.

(2) Раствор тестируемого соединения, полученный в (1), разбавляли с помощью 0,5% раствора метилцеллюлозы с получением раствора тестируемого соединения таким образом, что концентрация тестируемого соединения составляла 0,3 мг/мл.

TEWL измеряли перед тем как вводили тестируемое соединение (именуемая TEWL [перед]). После измерения TEWL [перед] раствор тестируемого соединения, доведенный как указано в (1) или (2), вводили перорально (доза: 10 мл/кг). Через один час после введения тестируемого соединения кожный барьер на бритой области живота мышей разрушали посредством обработки с помощью соскобом липкой лентой. TEWL измеряли немедленно после соскоба липкой лентой и через 1 час после этого (именуемые TEWL [0 часов], TEWL [1 час] соответственно). % Восстановления барьера рассчитывали в соответствии со следующей формулой.

% Восстановление барьера

= {(TEWL [0 часов] - TEWL [1 час])/(TEWL [0 часов] - TEWL [перед])} * 100

Результат выражали как среднее±стандартное отклонение % восстановления барьера. Для статистического анализа применяли критерий множественного сравнения Дуннетта и p<0,05 определяли как статистически значимую разницу.

<Результат>

В таблице 8 показаны результаты. Введение соединения по настоящему изобретению увеличивает % восстановления барьера. Результатов демонстрируют эффективность соединений по настоящему изобретению в моделях разрушения кожного барьера.

[Таблица 8]

Обработка		% Восстановление барьера
Среда		13,1 ± 3,0
Пример 10	3 мг/кг	24,2 ± 8,1
	10 мг/кг	53,5 ± 4,9*

*p<0,05 по сравнению со средой (тест Дуннетта).

Промышленная применимость

Как описано выше, пиразоло[1,5-a]пиримидиновые соединения согласно настоящему изобретению или их фармацевтически приемлемые соли имеют ингибирующее действие по отношению к PAR2. Дополнительно, соединения согласно настоящему изобретению продемонстрировали подавляющее действие на PAR2-зависимое выделение слюны и подавляющую активность в отношении отека уха, ассоциированные с дерматитом у мышей. Таким образом, соединения согласно настоящему изобретению являются перспективными для применения в качестве средства лечения для воспалительных заболеваний кожи, при которых вовлечен PAR2, таких как атопический дерматит, контактный дерматит, экзема кожи, псориаз и дерматит, характеризующийся сухостью кожи. Кроме того, соединения согласно настоящему изобретению продемонстрировали подавляющее действие в отношении укорочения кишечника в мышиной модели энтерита. Таким образом, соединения согласно настоящему изобретению также являются перспективными для применения в качестве средства для лечения воспалительных заболеваний кишечника, при которых вовлечен PAR2, таких как язвенный колит, болезнь Крона и инфекционный энтерит.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Eisai R&D Management Co. Ltd.

<120> Пиразоло[1,5-a]пиримидиновое соединение

<130> FP17-0171-00

<150> JP2016-169507

<151> 2016-08-31

<160> 2

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Агонист PAR2

<400> 1

Val Lys Gly Ile Leu Ser

1. 5

<210> 2

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Агонист PAR2

<400> 2

Leu Arg Gly Ile Leu Ser

1. 5

<---

Claims

1. Соединение, выбранное из следующей группы, состоящей из:

2-(1-(7-((2-хлор-6-фторфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)пиперидин-4-ил)уксусной кислоты, представленной химической формулой (XVII):

и

или его фармацевтически приемлемая соль.

2. 2-((3R,4S)-1-(5-(4-Хлор-3,5-дифторфенил)-7-((2-фтор-6-метилфенил)(метил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-метоксипиперидин-4-ил)уксусная кислота, представленная химической формулой (X):

или ее фармацевтически приемлемая соль.

3. 2-((3R*,4S*)-3-Метокси-1-(7-((2-метокси-6-метилфенил)(метил)амино)-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)пиперидин-4-ил)уксусная кислота, представленная химической формулой (VI):

или ее фармацевтически приемлемая соль.

4. (R)-3-(7-((2-Фтор-6-метоксифенил)(метил)амино)-N-метил-5-(3,4,5-трифторфенил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбоксамид)бутановая кислота, представленная химической формулой (VII):

или ее фармацевтически приемлемая соль.

5. 2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-Хлор-3,5-дифторфенил)-7-(изопропил(пропил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-2-карбонил)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-6-ил)уксусная кислота, представленная химической формулой (XV):

или ее фармацевтически приемлемая соль.

6. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибиторной активностью PAR2, содержащая эффективное количество соединения по любому из пп. 1-5 или его фармацевтически приемлемой соли, и фармацевтически приемлемые добавки.

7. Фармацевтическая композиция по п. 6 для лечения воспалительного заболевания кожи или воспалительного заболевания кишечника.

8. Фармацевтическая композиция по п. 7, где воспалительное заболевание кожи представляет собой атопический дерматит.

9. Фармацевтическая композиция по п. 7, где воспалительное заболевание кожи представляет собой контактный дерматит.

10. Фармацевтическая композиция по п. 7, где воспалительное заболевание кожи представляет собой экзему кожи.

11. Фармацевтическая композиция по п. 7, где воспалительное заболевание кожи представляет собой псориаз.

12. Фармацевтическая композиция по п. 7, где воспалительное заболевание кожи представляет собой дерматит, характеризующийся сухостью кожи.

13. Фармацевтическая композиция по п. 7, где воспалительное заболевание кишечника представляет собой язвенный колит.

14. Фармацевтическая композиция по п. 7, где воспалительное заболевание кишечника представляет собой болезнь Крона.

15. Фармацевтическая композиция по п. 7, где воспалительное заболевание кишечника представляет собой инфекционный энтерит.