CN109071554A - 吡唑并[1,5-a]嘧啶化合物 - Google Patents

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Abstract

由式(I)至(XVIII)表示的化合物或其药学上可接受的盐。

Description

吡唑并[1,5-a]嘧啶化合物
技术领域
本发明涉及具有PAR2抑制作用的吡唑并[1,5-a]嘧啶化合物及其药学上可接受的盐，以及包含其的药物组合物。
背景技术
蛋白酶激活受体(PAR)是三聚体G蛋白偶联的七跨膜受体的类型，并且属于介导丝氨酸蛋白酶细胞作用的受体家族，并且迄今为止已经克隆了四个分子：PAR1、PAR2、PAR3和PAR4。
丝氨酸蛋白酶在特定位点切割PAR分子的细胞外氨基末端肽链，并因此暴露由5个或6个氨基酸残基组成的具有受体激活序列的新的氨基末端肽链。由丝氨酸蛋白酶切割的新暴露的氨基末端肽链作为链状配体键合到细胞外环2，该胞外环2是PAR2本身的活性位点，并因此激活PAR2。已知PAR2被胰蛋白酶、类胰蛋白酶、激肽释放酶(主要是激肽释放酶2、4、5、6和14)、凝血因子VIIa、凝血因子Xa等激活，并且当基于受体激活序列合成的由5个或6个氨基酸组成的合成肽外源进入时也被激活。(参见非专利文献1至3)。
在本文中，PAR2被广泛地分布在体内(例如血管、前列腺、小肠、大肠、肝、肾、胰、胃、肺、脑以及皮肤)中，并且已知在各种疾病(例如神经性炎症、疼痛、发痒、炎症以及过敏)中是恶化因子(参见专利文献1和2、以及非专利文献4至6)。由于这个原因，PAR2抑制剂被期望为用于这些疾病的可能的治疗药物并且被建议为，例如，用于炎性肠病的治疗药物、用于皮炎的治疗药物、用于变应性疾病的治疗药物、或用于皮肤色素形成的预防药物(参见专利文献3至5以及非专利文献3和6至11)。
引用列表
专利文献
[专利文献1]JP-A-2003-286171
[专利文献2]JP-A-2004-170323
[专利文献3]WO 2012/101453
[专利文献4]WO 2015/048245
[专利文献5]WO 2005/030773
非专利文献
[非专利文献1]Dery,O.等人，Am.J.Physiol[美国生理学杂志](Cell Physiol.[细胞生理学])，274,C1429-1452,1998
[非专利文献2]Macfarlane,S.R.等人，Pharmacol.Rev.[药学评论]，53,245-282,2001
[非专利文献3]Yau,M.K.等人，Journal of Medicinal Chemistry[药物化学杂志]，56,7477-7497,2013
[非专利文献4]Bohm,S.K.等人，Biochem J[生物化学杂志]15；314,1009-1016，1996
[非专利文献5]D'Andrea,M.R.等人，J.Histochem.Cytochem.[组织化学细胞化学杂志]46(2):157-164,1998
[非专利文献6]Rothmeier,A.S.,Ruf,W.Semin.Immunopathol.[免疫病理学研讨会]34(1):133-149,2012
[非专利文献7]Yamaguchi,Y.,Hearing,V.J.Biofactors[生物因子]35(2):193-199,2009
[非专利文献8]Afkhami-Goli,A.等人，The Journal of Immunology[免疫学杂志]179:5493-5503,2007
[非专利文献9]Dale,C.等人，Journal of Receptors and Signal Transduction[受体和信号转导杂志]28:29-37,2008
[非专利文献10]Hachem,J.P.等人，Journal of Investigative Dermatology[研究型皮肤病学杂志]126:2074-2086,2006
[非专利文献11]Seyfarth,F.等人，Clinics in Dermatology[皮肤病学临床]29:31-36,2011
发明内容
技术问题
本发明的目标是提供具有PAR2抑制作用的吡唑并[1,5-a]嘧啶化合物及其药学上可接受的盐，以及包含其的药物组合物。
问题的解决方案
本发明的诸位发明人着力进行研究以实现上述目标，并且因此发现了新颖的具有PAR2抑制作用的吡唑并[1,5-a]嘧啶化合物。
更具体地，本发明涉及以下[1]至[57]。
[1]一种选自下组的化合物，该组由以下各项组成：
由化学式(I)表示的2-((3R*,4S*)-1-(7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸：
由化学式(II)表示的2-((3R*,4S*)-1-(7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸：
由化学式(III)表示的2-((3R*,4S*)-1-(5-(4,4-二甲基环己基)-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸：
由化学式(IV)表示的2-((3R*,4S*)-1-(5-(3-氯-4-氟苯基)-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸：
由化学式(V)表示的2-((3R*,4S*)-3-氟-1-(7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸：
由化学式(VI)表示的2-((3R*,4S*)-3-甲氧基-1-(7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸：
由化学式(VII)表示的(R)-3-(7-((2-氟-6-甲氧基苯基)(甲基)氨基)-N-甲基-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酰胺)丁酸：
由化学式(VIII)表示的2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丁基((R)-3-甲基丁烷-2-基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸：
由化学式(IX)表示的(R)-3-(7-(异丁基((R)-3-甲基丁烷-2-基)氨基)-N-甲基-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酰胺)丁酸：
由化学式(X)表示的2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸：
由化学式(XI)表示的2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3-氟苯基)-7-((2-氯-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸：
由化学式(XII)表示的2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氯-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸：
由化学式(XIII)表示的2-((3R*,4S*)-1-(7-((2-氯-6-氟苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸：
由化学式(XIV)表示的2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氯苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸：
由化学式(XV)表示的2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丙基(丙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸：
由化学式(XVI)表示的2-((1α,5α,6α)-3-(7-(异丁基((S)-1-苯基乙基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸：
由化学式(XVII)表示的2-(1-(7-((2-氯-6-氟苯基)甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸：
，以及
由化学式(XVIII)表示的2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丙基(丙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲基哌啶-4-基)乙酸：
或其药学上可接受的盐。
[2]由化学式(X)表示的2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸：
或其药学上可接受的盐。
[3]由化学式(VI)表示的2-((3R*,4S*)-3-甲氧基-1-(7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸：
或其药学上可接受的盐。
[4]由化学式(VII)表示的(R)-3-(7-((2-氟-6-甲氧基苯基)(甲基)氨基)-N-甲基-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酰胺)丁酸：
或其药学上可接受的盐。
[5]由化学式(XV)表示的2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丙基(丙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸：
或其药学上可接受的盐。
[6]一种药物组合物，其包含根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
[7]根据[6]所述的药物组合物，用于治疗炎性皮肤病或炎性肠病。
[8]根据[6]所述的药物组合物，用于治疗炎性皮肤病。
[9]根据[6]所述的药物组合物，用于治疗特应性皮炎。
[10]根据[6]所述的药物组合物，用于治疗接触性皮炎。
[11]根据[6]所述的药物组合物，用于治疗皮肤湿疹。
[12]根据[6]所述的药物组合物，用于治疗银屑病。
[13]根据[6]所述的药物组合物，用于治疗干性皮肤皮炎。
[14]根据[6]所述的药物组合物，用于治疗炎性肠病。
[15]根据[6]所述的药物组合物，用于治疗溃疡性结肠炎。
[16]根据[6]所述的药物组合物，用于治疗克罗恩病。
[17]根据[6]所述的药物组合物，用于治疗传染性肠炎。
[18]一种用于治疗炎性皮肤病的试剂，该试剂包括根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
[19]一种用于治疗特应性皮炎的试剂，该试剂包括根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
[20]一种用于治疗接触性皮炎的试剂，该试剂包括根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
[21]一种用于治疗皮肤湿疹的试剂，该试剂包括根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
[22]一种用于治疗银屑病的试剂，该试剂包括根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
[23]一种用于治疗干性皮肤皮炎的试剂，该试剂包括根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
[24]一种用于治疗炎性肠病的试剂，该试剂包括根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
[25]一种用于治疗溃疡性结肠炎的试剂，该试剂包括根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
[26]一种用于治疗克罗恩病的试剂，该试剂包括根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
[27]一种用于治疗传染性肠炎的试剂，该试剂包括根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
[28]一种用于治疗炎性皮肤病的方法，该方法包括向患者给予根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
[29]一种用于治疗特应性皮炎的方法，该方法包括向患者给予根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
[30]一种用于治疗接触性皮炎的方法，该方法包括向患者给予根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
[31]一种用于治疗皮肤湿疹的方法，该方法包括向患者给予根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
[32]一种用于治疗银屑病的方法，该方法包括向患者给予根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
[33]一种用于治疗干性皮肤皮炎的方法，该方法包括向患者给予根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
[34]一种用于治疗炎性肠病的方法，该方法包括向患者给予根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
[35]一种用于治疗溃疡性结肠炎的方法，该方法包括向患者给予根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
[36]一种用于治疗克罗恩病的方法，该方法包括向患者给予根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
[37]一种用于治疗传染性肠炎的方法，该方法包括向患者给予根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
[38]根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗炎性皮肤病。
[39]根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗特应性皮炎。
[40]根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗接触性皮炎。
[41]根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗皮肤湿疹。
[42]根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗银屑病。
[43]根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗干性皮肤皮炎。
[44]根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗炎性肠病。
[45]根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗溃疡性结肠炎。
[46]根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗克罗恩病。
[47]根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗传染性肠炎。
[48]根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐用于生产治疗炎性皮肤病的试剂的用途。
[49]根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐用于生产治疗特应性皮炎的试剂的用途。
[50]根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐用于生产治疗接触性皮炎的试剂的用途。
[51]根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐用于生产治疗皮肤湿疹的试剂的用途。
[52]根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐用于生产治疗银屑病的试剂的用途。
[53]根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐用于生产治疗干性皮肤皮炎的试剂的用途。
[54]根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐用于生产治疗炎性肠病的试剂的用途。
[55]根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐用于生产治疗溃疡性结肠炎的试剂的用途。
[56]根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐用于生产治疗克罗恩病的试剂的用途。
[57]根据[1]至[5]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐用于生产治疗传染性肠炎的试剂的用途。
发明的有益作用
根据本发明的由式(I)至(XVIII)表示的化合物(在下文中也称为化合物(I)至(XVIII))或其药学上可接受的盐具有PAR2抑制作用。因此，根据本发明的化合物(I)至(XVIII)或其药学上可接受的盐具有被用作用于PAR2抑制作用有效的疾病(例如炎性皮肤病)的治疗剂的潜力。
具体实施方式
在下文中，将解释本文中所用的符号、术语等的含义，并且将详细描述本发明。
在本说明书中的PAR2抑制剂只要化合物在抑制PAR2活性的方向上起作用就无特别限制，并且是指包括降低PAR2的表达水平的化合物、PAR2拮抗剂和抑制PAR2信号的化合物的概念。在本文中“降低PAR2的表达水平的化合物”是指降低编码PAR2的mRNA的表达水平的化合物或降低PAR2的蛋白水平的化合物。
本发明的化合物(I)至(XVIII)及其药学上可接受的盐可以包括晶体多晶型物但不限于任何特定的晶体多晶型物，并且可以是任何单晶形式或其混合物，二者都包括在本发明的权利要求书的范围内。此外，本发明的化合物(I)至(XVIII)及其药学上可接受的盐可以是酸酐、水合物或溶剂化物，所有这些都包括在本发明的权利要求书的范围内。
本发明还包括同位素标记的化合物(I)至(XVIII)。用同位素标记的化合物(I)至(XVIII)与化合物(I)至(XVIII)相同，除了一个或多个原子被具有原子质量或质量数不同于典型地发现于自然界中的原子质量或质量数的原子取代。被掺入本发明的化合物中的同位素是，例如，氢、碳、氮、氧、氟、氯、磷、硫和碘的同位素，包括2H、3H、11C、14C、13N、15O、18F、32P、35S、123I和125I。包含这些同位素和/或其他同位素的本发明的化合物及其药学上可接受的衍生物(例如，盐)也包括在本发明的权利要求书的范围内。
本发明的经同位素标记的化合物，例如，具有放射性同位素(例如3H和/或14C)掺入其中的化合物可以被用于药物药品和/或基质的组织分布测定。3H和/或14C被认为可用于其制备和简易检测。同位素11C和18F被认为可用于PET(正电子发射断层扫描)，同位素125I被认为可用于SPECT(单光子发射计算机化断层扫描)，并且这些同位素都可用于脑成像。由于更高的代谢稳定性，用更重的同位素(例如2H)取代提供某些治疗益处(例如，增加的体内半衰期或降低必需的剂量)，并且因此被认为可用于某些情况。用本发明的化合物(I)至(XVIII)的同位素标记的化合物全部都可以通过遵循以下实例中披露的程序、使用容易获得的同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂以相同的方式制备。
本发明的化合物(I)至(XVIII)可以是处于盐的形式。该盐只要是药学上可接受的就无特别限制，但是具体的实例包括无机酸盐(例如，盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐和磷酸盐)；有机酸盐(例如，乙酸盐、琥珀酸盐、延胡索酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、硬脂酸盐、苯甲酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、对甲苯磺酸盐和苯磺酸盐)；酸性氨基酸盐(例如，天冬氨酸盐和谷氨酸盐)；无机碱性盐(例如，碱金属盐例如钠盐和钾盐、碱土金属盐例如钙盐和镁盐、铝盐和铵盐)；有机碱性盐(例如二乙胺盐、二乙醇胺盐、葡甲胺盐和N,N'-二苄基乙二胺盐)；以及碱性氨基酸盐(例如，精氨酸盐、赖氨酸盐和鸟氨酸盐)。
本发明的实施例是选自下组的化合物，该组由以下化合物或其药学上可接受的盐组成。
2-((3R*,4S*)-1-(7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸、
2-((3R*,4S*)-1-(7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸、
2-((3R*,4S*)-1-(5-(4,4-二甲基环己基)-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸、
2-((3R*,4S*)-1-(5-(3-氯-4-氟苯基)-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸、
2-((3R*,4S*)-3-氟-1-(7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸、
2-((3R*,4S*)-3-甲氧基-1-(7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸、
(R)-3-(7-((2-氟-6-甲氧基苯基)(甲基)氨基)-N-甲基-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酰胺)丁酸、
2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丁基((R)-3-甲基丁烷-2-基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸、
(R)-3-(7-(异丁基((R)-3-甲基丁烷-2-基)氨基)-N-甲基-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酰胺)丁酸、
2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸、
2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3-氟苯基)-7-((2-氯-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸、
2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氯-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸、
2-((3R*,4S*)-1-(7-((2-氯-6-氟苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸、
2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氯苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸、
2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丙基(丙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸、
2-((1α,5α,6α)-3-(7-(异丁基((S)-1-苯基乙基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸、
2-(1-(7-((2-氯-6-氟苯基)甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸、以及
2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丙基(丙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲基哌啶-4-基)乙酸。
本发明的优选实施例的实例包括由化学式(X)表示的2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸
或其药学上可接受的盐；
由化学式(VI)表示的2-((3R*,4S*)-3-甲氧基-1-(7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸
或其药学上可接受的盐；
由化学式(VII)表示的(R)-3-(7-((2-氟-6-甲氧基苯基)(甲基)氨基)-N-甲基-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酰胺)丁酸
或其药学上可接受的盐；
由化学式(XV)表示的2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丙基(丙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸
或其药学上可接受的盐。
本发明的化合物(I)至(XVIII)可以根据需要通过常规方法制备为药学上可接受的盐。化合物(I)至(XVIII)的药学上可接受的盐可以通过在合成有机化学领域中典型地使用的合适地组合的方法来生产。类似地，按照常规方法，可以将以化合物(I)至(XVIII)的盐形式获得的化合物(I)至(XVIII)转化为化合物(I)至(XVIII)的游离碱。此外，可以将本发明的化合物(I)至(XVIII)根据需要通过已知的溶剂化物形成反应转化为溶剂化物。
从化合物(I)至(XVIII)获得的各种异构体(例如，几何异构体、具有不对称碳原子的旋光异构体、旋转异构体和立体异构体)可以使用典型的分离方法(例如，重结晶、非对映异构盐形成、酶拆分方法、各种色谱法(例如，薄层色谱法、柱色谱法以及气相色谱法))进行纯化和分离。
根据本发明的药物组合物可以通过将药学上可接受的添加剂与化合物(I)至(XVIII)或其药学上可接受的盐混合来生产。根据本发明的药物组合物可以根据例如TheJapanese Pharmacopoeia Sixteenth Edition[日本药典(第十六版)]中的General Rulesfor Preparations[制剂通则]中所述的已知方法来生产。
根据本发明的药物组合物可以根据其剂型适合地给予至患者。
在本说明书中，PAR2抑制活性的测量方法的实例包括细胞内钙浓度升高的测量方法；细胞内肌醇三磷酸的生产增加的测量方法；通过蛋白激酶C和MAP激酶增加细胞内蛋白质磷酸化的测量方法；以及炎症相关的生理活性物质例如细胞因子、趋化因子、前列腺素和一氧化氮的生产量或释放量的测量方法。细胞内钙浓度升高的测量方法的实例包括如下方法：在该方法中允许钙结合的荧光探针提前渗入培养的细胞系或具有PAR2的动物来源的分离细胞、或人工表达PAR2的细胞中，添加具有PAR2活性功能的蛋白酶例如胰蛋白酶或PAR2激动剂(合成肽，例如SLIGKV-NH2(SEQ ID NO:1)和SLIGRL-NH2(SEQ ID NO:2)以激活PAR2，借此随着荧光信号的变化检测波动的细胞内钙浓度。可替代地，还可以通过使用过量表达钙结合发光蛋白(例如水母蛋白)的细胞系确定与钙浓度成比例地产生的荧光强度的量来测量细胞内钙浓度。具体地，实例包括在本说明书的测试实例中所描述的方法。
根据本发明的化合物(I)至(XVIII)或其药学上可接受的盐是在细胞内钙升高抑制活性方面优选地显示30nM或更少的IC50值，进一步优选地显示10nM或更少的IC50值的那些。
根据本发明的化合物(I)至(XVIII)或其药学上可接受的盐具有PAR2抑制作用，并因此具有被用作PAR2抑制作用有效的疾病的治疗剂的潜力。已知的与PAR2抑制作用相关的疾病的实例包括：炎性皮肤病(例如，特应性皮炎、接触性皮炎、干性皮肤皮炎、银屑病、皮肤湿疹、硬皮病)；炎性肠病(例如，溃疡性结肠炎、克罗恩病、传染性肠炎、局限性肠炎)；阿尔茨海默病；变应性接触性超敏反应；神经退行性疾病(急性和慢性)；自身免疫性疾病；结膜炎；伤口愈合异常；疼痛；以及伴有疼痛的神经组织起源的神经源性炎症。
根据本发明的化合物(I)至(XVIII)或其药学上可接受的盐的剂量取决于症状级别、年龄、性别、体重、给药形式/盐的种类、以及疾病的特定类型而变化，但是典型地以一天约30μg至10g、优选地100μg至5g、进一步优选地100μg至1g通过口服给药向成年人给予，或者以约30μg至1g、优选地100μg至500mg、进一步优选地100μg至300mg(分别以一次或以若干次分开的剂量)通过注射给药向成年人给予。
实例
本发明的化合物(I)至(XVIII)可以通过例如以下实例中所述的方法来生产，并且此类化合物的效果可以通过以下测试实例中所述的方法来验证。但是，这些是说明性的，并且本发明在任何情况下不局限于以下具体实例，并且可以在本发明的范围不受影响的范围内进行改变。
具有文献名称等的化合物表明它们是根据文献等生产的。
在下文中，用实例、生产实例以及测试实例详细描述本发明。然而，本发明并不局限于此。此外，实例中使用的缩写是本领域普通技术人员熟知的常规缩写，其中的一些在下面示出。
DMF：N,N-二甲基甲酰胺
DMSO：二甲亚砜
DMSO-d6：氘化的二甲亚砜
HATU：O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸酯HOBT：1-羟基苯并三唑
NMP：1-甲基-2-吡咯烷酮
Pd2DBA3：三(二亚苄基丙酮)二钯
t-：叔
THF：四氢呋喃
WSC：1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸酯
1H-NMR：质子核磁共振光谱法
质子核磁共振谱中的化学位移以相对于四甲基硅烷的δ单位(ppm)记录，并且偶联常数以赫兹(Hz)记录。分裂模式如下。
s：单峰；d：二重峰；t：三重峰；q：四重峰；br：宽峰；m：多重峰；dd：双二重峰；td：三二重峰。
使用Varian MERCURY plus模型核磁共振装置(400MHz)、Varian INOVA UNITY模型核磁共振装置(400MHz)、Varian INOVA UNITY模型核磁共振装置(500MHz)或BrukerAvance模型核磁共振装置(600MHz)测量1H-NMR。
对于微波装置，使用拜泰齐(Biotage)引发剂或引发剂+模型。
使用JASCO DIP-1000模型旋光计测量旋光度。
对于色谱法，所使用的硅胶是默克公司(Merck)的硅胶60(70-230目ASTM)、富士硅化学有限公司(Fuji Silysia Chemical Ltd.)的PSQ60B、关东化学公司(Kanto Kagaku)的硅胶60(球形的，40-50μM)或YMC YMC*GEL ODS-A(12nM S-50μM)，或者
使用预填充柱{柱：YAMAZEN Hi-FlashTM柱(硅胶)；大小：S(16×60mm)、M(20×75mm)、L(26×100mm)、2L(26×150mm)或3L(46×130mm)}。
所使用的NH硅胶是富士硅化学有限公司(Fuji Silysia Chemical Ltd.)的CHROMATOREX NH-DM2035或预填充柱{柱：YAMAZEN Hi-FlashTM柱(Amino)；大小：S(16×60mm)、M(20×75mm)、L(26x×100mm)、2L(26×150mm)或3L(46×130mm)或和光纯化学工业有限公司(Wako Pure Chemical Industries,Ltd.)PresepTM(Luer Lock)NH2(HC)；大小：M型(14g/25mL)、L型(34g/70mL)、2L型(50g/100mL)、3L型(110g/200mL)}。
以下实例和生产实例中的“室温”典型地表示约10℃至约35℃。除非另外说明，“％”表示重量百分比。
以下实例和生产实例中的化合物的化学名称是使用“E-手册”(E-Notebook)第12版(铂金埃尔默有限公司(PerkinElmer Co.,Ltd.)，基于化学结构创建的。然而，构型中的“*”代表相对位置，并且除非另外说明，表示对映异构体之一。而且，在写有“(3R*,4S*)”的情况下，表示每个立构中心的相对关系。更具体地，“(3R*,4S*)”表示特定的对映异构体(3R,4S)或(3S,4R)之一。
在本说明书中的旋转异构体的混合物意指具有由围绕单键(例如，C-C、C-N和C-O)的分子内旋转所引起的不同构象的异构体的混合物。
生产实例1
2-((3R*,4S*)-3-氟哌啶-4-基)乙酸乙酯氢溴酸盐的合成
(1a)(3R*,4S*)-4-甲基苄基4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-3-氟哌啶-1-甲酸的合成
使用CHIRAL PAK IA柱，在以下条件下分离(旋光拆分)(±)-顺式-4-甲基苄基4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-3-氟哌啶-1-甲酸(1.0g)的对映异构体(CAS号808733-17-7)(WO2004/108705)以获得标题化合物(0.336g)作为第二洗脱级分。
HPLC条件
柱：CHIRAL PAK IA(批号：IA-00CJ-NH005)20mm×250mm，5μm；
流动相：己烷:乙醇＝89:11；
洗脱速率：20mL/min；
浓度：62.5mg/mL；
注射量：0.80mL；
HPLC保留时间：14.5min(后洗脱级分)
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.26(t,J＝8Hz,3H),1.50-1.72(m,2H),2.05-2.18(m,1H),2.30(dd,J＝17,7Hz,1H),2.35(s,3H),2.53(dd,J＝17,7Hz,1H),2.73-3.10(m,2H),4.15(q,J＝8Hz,2H),4.20-4.80(m,3H),5.09(m,2H),7.15(d,J＝8Hz,2H),7.25(d,J＝8Hz,2H)。
(1b)2-((3R*,4S*)-3-氟哌啶-4-基)乙酸乙酯氢溴酸盐的合成
将30％溴化氢/乙酸溶液(3mL)添加至(3R*,4S*)-4-甲基苄基4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-3-氟哌啶-1-甲酸(0.336g)和二氯甲烷(3mL)的混合物中并且在室温下搅拌30分钟。将二乙醚(10mL)添加至反应混合物中，在减压下将其浓缩。将叔丁基甲基醚(10mL)添加至残余物并且进行超声处理持续10分钟。将沉淀的固体通过过滤收集，用叔丁基甲基醚洗涤，以获得呈淡棕色固体的标题化合物(0.236g)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.25(t,J＝8Hz,3H),1.72-1.94(m,2H),2.24-2.32(m,2H),2.55-2.61(m,1H),3.08-3.15(m,1H),3.24-3.30(m,1H),3.34-3.40(m,1H),3.57-3.68(m,1H),4.15(q,J＝8Hz,2H),4.99(d,J＝48Hz,1H)。
生产实例2
2-((3R*,4S*)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯盐酸盐的合成
(2a)4-(2-乙氧基-2-氧代亚乙基)-3-甲氧基哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成
在室温下、在氮气气氛下，将氢化钠(约60％，2.95g)添加至二乙基膦酰基乙酸乙酯(16.56g)在THF(340mL)中的溶液，搅拌15分钟，随后逐滴添加3-甲氧基-4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(14.11g)(WO 2012/080735)在四氢呋喃(50mL)中的溶液并且将其在室温下搅拌16小时。将乙酸乙酯(1000mL)和饱和碳酸氢钠水性溶液(400mL)添加至反应混合物中。将有机层经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(14.65g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3,E/Z混合物)δ:1.29(t,J＝7.3Hz,3H),1.47(s,4.5H),1.48(s,4.5H),1.98(m,0.5H),2.52-2.83(m,2H),3.2-3.97(m,3H),3.30(s,1.5H),3.37(s,1.5H),3.80-4.58(m,1H),4.18(m,2H),5.21(br.s,0.5H),5.83(s,0.5H),5.94(s,0.5H)。
(2b)2-(3-甲氧基哌啶-4-亚基)乙酸乙酯盐酸盐的合成
将三氟乙酸(4mL)添加至4-(2-乙氧基-2-氧代亚乙基)-3-甲氧基哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.20g)在二氯甲烷(20mL)中的溶液，并且将该混合物在室温下搅拌5小时。将该反应混合物在减压下浓缩，向其中添加甲苯(100mL)，并且将其在减压下浓缩。再次添加甲苯(10mL)，将反应混合物在减压下浓缩，随后将乙酸乙酯(10mL)、甲苯(10mL)和4N氯化氢乙酸乙酯溶液(5mL)添加至残余物，并且将其在减压下浓缩以获得标题化合物(0.95g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.29(t,J＝7Hz,1.5H),1.29(t,J＝7Hz,1.5H),2.92-3.20(m,3H),3.33(s,1.5H),3.34(s,1.5H),3.25-3.91(m,4H),4.16-4.24(m,2H),5.98(s,0.5H),6.00(s,0.5H),7.95(br.s,0.5H),8.43(br.s,0.5H),10.11(br.s,1H)。
(2c)2-(3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯盐酸盐的合成
将钯活性碳(Pd 10％)(0.21g)添加至2-(3-甲氧基哌啶-4-亚基)乙酸乙酯盐酸盐(0.95g)、乙醇(10mL)和乙酸乙酯(10mL)的混合物中，并且在氢气气氛下在室温下搅拌17小时。将该气氛返回氮气，将该混合物通过硅藻土过滤并且将该硅藻土用乙醇洗涤。将该滤液和洗涤溶液合并并在减压下浓缩以获得标题化合物(1.02g，主要为顺式异构体)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3,顺式异构体)δ:1.27(t,J＝7Hz,3H),1.71(br.d,J＝14Hz,1H),1.94(br.q,J＝14Hz,1H),2.15(m,1H),2.32(dd,J＝16,6Hz,1H),2.54(dd,J＝16,8Hz,1H),2.94(m,2H),3.41(s,3H),3.44-3.65(m,3H),4.15(q,J＝7Hz,2H),7.84(br.s,1H),9.92(br.s,1H)。
(2d)(±)-2-(顺式-1-二苯甲基-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯的合成
在氮气气氛下，在-20℃，将溴二苯基甲烷(2.62g)在DMF(5mL)中的溶液添加至2-(3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯盐酸盐(2.098g)、DMF(80mL)、三乙胺(1.35mL)和碳酸钾(2.44g)的混合物中，并且在室温下搅拌过夜。向其中添加叔丁基甲基醚(400mL)和水(200mL)。随后用水(200mL×2)和饱和氯化钠水性溶液(200mL)洗涤该有机层，并且经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得呈无色液体的标题化合物(1.127g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.24(t,J＝7Hz,3H),1.51(m,1H),1.69(m,1H),1.94-2.12(m,3H),2.27(dd,J＝16,7Hz,1H),2.52(dd,J＝16,7Hz,1H),2.72(br.s,1H),2.98(br.s,1H),3.28(s,3H),3.29(br.s,1H),4.11(q,J＝7Hz,2H),4.26(s,1H),7.19(m,2H),7.27(m,4H),7.44(m,4H)。
(2e)2-((3R*,4S*)-1-二苯甲基-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯的合成
使用CHIRALPAK OJ-H柱，在以下条件下分离(旋光拆分)(±)-2-(顺式-1-二苯甲基-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯的对映异构体(1.127g)以获得标题化合物(0.411g)作为第一洗脱级分。
HPLC条件
柱：CHIRAL PAK OJ-H(批号：OJH-0CJ-FA001)，20mm×250mm，5μm；
流动相：己烷:乙醇＝98:2；
洗脱速率：20mL/min；
浓度：67mg/mL；
注射量：0.3mL；
HPLC保留时间：10.5min(第一次洗脱级分)
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.24(t,J＝7Hz,3H),1.49(m,1H),1.69(m,1H),1.94-2.12(m,3H),2.27(dd,J＝16,7Hz,1H),2.52(dd,J＝16,7Hz,1H),2.72(br.s,1H),2.98(br.s,1H),3.27(s,3H),3.29(br.s,1H),4.11(q,J＝7Hz,2H),4.26(s,1H),7.19(m,2H),7.27(m,4H),7.44(m,4H)。
(2f)2-((3R*,4S*)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯盐酸盐的合成
在90℃下搅拌2-((3R*,4S*)-1-二苯甲基-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯(411mg)、1N盐酸(1.118mL)、钯活性碳(Pd 5％)(0.238g)、环己烯(20mL)和乙醇(80mL)的混合物持续18小时。将该反应混合物通过硅藻土过滤并且将该硅藻土用乙醇(50mL x 2)洗涤。将该滤液和洗涤溶液合并并在减压下浓缩。将庚烷和甲苯(10mL，1:1)以及2N盐酸(20mL)的混合溶剂添加至残余物并且将各层分离。用2N盐酸(20mL)萃取有机层。将5N氢氧化钠水性溶液添加至合并的水层以碱化，并且用二氯甲烷(50mL×2)萃取各层。将合并的有机层经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，将4N氯化氢乙酸乙酯溶液(2mL)添加至滤液中，并且在减压下浓缩以获得标题化合物(119mg)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:1.25(t,J＝7Hz,3H),1.72(m,1H),1.76(m,1H),2.20(m,1H),2.34(dd,J＝17,7Hz,1H),2.52(dd,J＝17,8Hz,1H),3.02(m,2H),3.27(m,1H),3.41(s,3H),3.60(m,2H),4.14(q,J＝7Hz,2H)。
生产实例3
(R)-3-(甲基氨基)丁酸甲酯盐酸盐的合成
(3a)(R)-3-(((苄基氧基)羰基)(甲基)氨基)丁酸甲酯的合成
将(R)-3-(((苄基氧基)羰基)氨基)丁酸(CAS号67843-72-5)(1.5g)溶解在THF(40mL)中并且向其中添加氢化钠(456mg)。添加THF(30mL)和碘甲烷(6g)，并且在室温下搅拌过夜。将反应混合物进行浓缩，添加水并且用叔丁基甲基醚萃取。将1N盐酸添加至水层以酸化水层，然后将其用叔丁基甲基醚萃取，并且将有机层经硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物溶解在二氯甲烷和甲醇(20mL，4:1)的混合溶剂中，并且在冰冷却条件下添加三甲基甲硅烷基重氮基甲烷(2M溶液，7mL)直到反应混合物变黄。将反应混合物在室温下搅拌并且浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(1.5g)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ:1.21(br.s,3H),2.30-2.69(m,2H),2.83(s,3H),3.62(m,3H),4.64(d,J＝6Hz,1H),5.14(br.s,2H),7.30-7.43(m,5H)。
质谱(ESI)m/z:266(M+H)+
(3b)(R)-3-(甲基氨基)丁酸甲酯盐酸盐的合成
将(R)-3-(((苄基氧基)羰基)(甲基)氨基)丁酸甲酯(108mg)溶解在甲醇(5mL)中，添加钯碳(50mg)，并且在氢气气氛下在室温下搅拌20分钟。将反应混合物过滤，将0.5N氯化氢甲醇溶液(2mL)添加至滤液中并且浓缩以获得标题化合物(70mg)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:1.19(d,J＝7Hz,3H),2.57(dd,J＝17,9Hz,1H),2.85(dd,J＝17,5Hz,1H),3.42(m,1H),3.59(s,3H),3.72(br.s,3H),8.88(br.s,2H)。
生产实例4
2-((1α,5α,6α)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸甲酯盐酸盐的合成
(4a)(1α,5α,6α)6-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄 酯的合成
在0℃下，将三甲基甲硅烷基重氮基甲烷在2M己烷(0.15mL)中的溶液添加至2-((1α,5α,6α)-3-((苄基氧基)羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸(CAS号1251668-95-7)(62mg)、甲醇(1mL)和乙酸乙酯(4mL)的混合物中，并且随后在室温下搅拌1小时。添加乙酸直到溶液的颜色消失，并且将反应混合物在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(32mg)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:0.91(m,1H),1.41(br.s,2H),2.23(dd,J＝16,7Hz,1H),2.32(dd,J＝16,7Hz,1H),3.42(t,J＝9Hz,2H),3.65-3.72(m,5H),5.10(m,2H),7.28-7.37(m,5H)。
(4b)2-((1α,5α,6α)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸甲酯盐酸盐的合成
将(1α,5α,6α)6-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(32mg)溶解在甲醇(2mL)中，添加钯碳(10mg)，并且在氢气气氛下在室温下搅拌1.5小时。将反应混合物过滤，将4N氯化氢乙酸乙酯溶液(0.05mL)添加至滤液中，并且浓缩以获得标题化合物(26mg)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:0.95(m,1H),1.74(m,2H),2.37(m,2H),3.38-3.45(m,4H),3.68(s,3H)。
生产实例5
2-((3R*,4S*)-3-甲基哌啶-4-基)乙酸异丙酯盐酸盐的合成
(5a)(4S)-3-(羟基甲基)-4-(2-异丙氧基-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合 成
在氮气气氛下，使用干冰-乙醇作为制冷剂冷却(3R,4S)-4-(2-异丙氧基-2-氧代乙基)-3-乙烯基哌啶-1-甲酸叔丁酯(CAS号345223-81-6)(16.69g)、二氯甲烷(200mL)和甲醇(400mL)的混合物，并且在搅拌的时候将臭氧吹入1小时(日本臭氧发生器有限公司(Nihon Ozone Generator Co.,Ltd.)HYD-G5000，O2流速：1.5L/min)。在吹入氮气15分钟以去除过量的臭氧后，将四氢硼酸钠(6.08g)添加至细分的反应溶液(540mL)以用于下一步反应，并且随后允许反应混合物达到室温。将反应混合物冷却至0℃，进一步添加四氢硼酸钠(2.03g)并且搅拌1小时。用丙酮淬灭过量的还原剂，添加乙酸乙酯(600mL)和水(100mL)，并且使用柠檬酸调节至pH 5-6。将有机层经无水硫酸镁干燥，将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(9.09g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.23-1.25(m,6H),1.30-1.42(m,1H),1.45-1.47(m,10H),1.91-2.47(m,4H),2.75-2.97(m,2H),3.28-3.58(m,2H),3.90-4.25(m,2H),4.96-5.06(m,1H)。
(5b)(4S)4-(2-异丙氧基-2-氧代乙基)-3-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)哌啶-1-甲 酸叔丁酯的合成
在氮气气氛下，使用干冰-丙酮作为制冷剂冷却(4S)-3-(羟基甲基)-4-(2-异丙氧基-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(9.09g)和二氯甲烷(300mL)的混合物，并且在搅拌的时候添加甲磺酰氯(3.59mL)和三乙胺(6.02mL)。将反应混合物搅拌过夜直到回到室温，并且添加二氯甲烷(500mL)和5％硫酸水性溶液(100mL)。依次用饱和碳酸氢钠水性溶液(100mL)、水(100mL)和饱和氯化钠水性溶液(100mL)洗涤有机层。添加无水硫酸镁以干燥有机层，随后将干燥剂过滤掉并且浓缩以获得标题化合物的粗产物(11.34g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.23-1.25(m,6H),1.30-1.42(m,1H),1.45-1.80(m,10H),2.11-2.52(m,4H),2.74-2.97(m,2H),3.04(m,3H),3.75-4.28(m,4H),4.97-5.05(m,1H)。
(5c)(4S)-3-(碘甲基)-4-(2-异丙氧基-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成
将(4S)4-(2-异丙氧基-2-氧代乙基)-3-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(13.37g)、丙酮(200mL)和碘化钠(30.6g)的混合物在55℃下加热搅拌6小时。将反应混合物冷却至室温，添加乙酸乙酯(600mL)和饱和硫代硫酸钠水性溶液。依次用水(200mL)和饱和氯化钠水性溶液(200mL)洗涤有机层，并且随后经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，将滤液在减压下浓缩，并且随后将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(9.80g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.24-1.28(m,6H),1.30-1.42(m,1H),1.45-1.80(m,10H),2.00-2.48(m,4H),2.73-3.35(m,4H),3.94-4.28(m,2H),4.99-5.07(m,1H)。
(5d)(4S)-4-(2-异丙氧基-2-氧代乙基)-3-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成
在氮气气氛下，将锌(37.7g)添加至(4S)-3-(碘甲基)-4-(2-异丙氧基-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(9.80g)和乙酸(151mL)的混合物中。将反应混合物在室温下搅拌24小时并过滤。将去除的固体用乙酸乙酯洗涤。将洗涤溶液和滤液合并并且在减压下浓缩。将残余物溶解在乙酸乙酯(800mL)和10％柠檬酸水性溶液(200mL)中，将有机层经无水硫酸镁干燥，随后过滤并且在减压下浓缩。在单独的实验中，合并将所得的残余物与通过相同的程序从(4S)-3-(碘甲基)-4-(2-异丙氧基-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.59g)、乙酸(40mL)和锌(9.95g)获得的残余物合并，并且将其通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(7.85g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:0.86(d,J＝7Hz,2.4H),0.88(d,J＝7Hz,0.6H),1.23(m,6H),1.45(m,11H),1.83(br.s,1H),2.09-2.25(m,3H),2.74(br.s,1H),2.99(dd,J＝13,4Hz,1H),3.72-3.78(m,1H),4.04(br.s,1H),4.97-5.06(m,1H)。
(5e)2-((4S)-3-甲基哌啶-4-基)乙酸异丙酯2,2,2-三氟乙酸酯的合成
将三氟乙酸(30mL)添加至(4S)-4-(2-异丙氧基-2-氧代乙基)-3-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯(7.22g)和二氯甲烷(120mL)的混合物中，并且在室温下搅拌3小时。添加甲苯(100mL)并且将反应混合物在减压下浓缩。再次添加甲苯(100mL)并且将反应混合物在减压下浓缩以获得作为粗产物的标题化合物(10.80g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.00(d,J＝7Hz,0.6H),1.04(d,J＝7Hz,2.4H),1.24(d,J＝6Hz,6H),1.54-1.89(m,2H),1.95-2.36(m,4H),2.87-3.51(m,4H),5.03(m,1H),8.07(br.s,1H),8.55(br.s,1H)。
(5f)2-((3R*,4S*)-1-二苯甲基-3-甲基哌啶-4-基)乙酸异丙酯的合成
在氮气气氛下，将2-((4S)-3-甲基哌啶-4-基)乙酸异丙酯2,2,2-三氟乙酸酯(7.55g)和DMF(200mL)的混合物冷却至-40℃，并且添加三乙胺(3.36mL)、碳酸钾(13.33g)和溴二苯基甲烷(6.85g)在DMF(10mL)中的溶液。将混合物在室温下搅拌过夜并添加乙酸乙酯(600mL)和水(300mL)。将有机层依次用水(2×200mL)和饱和氯化钠水性溶液(200mL)洗涤，并且随后经无水硫酸镁干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩，并且随后将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(5.40g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.03(d,J＝7Hz,3H),1.20(d,J＝6Hz,6H),1.40-1.48(m,1H),1.51-1.61(m,1H),1.75-1.86(m,1H),1.88-2.10(m,3H),2.16(dd,J＝15,8Hz,1H),2.22(dd,J＝15,7Hz,1H),2.58(br.s,1H),2.71(br.s,1H),4.17(s,1H),4.98(m,1H),7.16(m,2H),7.26(m,4H),7.40(m,4H)。
(5g)2-((3R*,4S*)-3-甲基哌啶-4-基)乙酸异丙酯盐酸盐的合成
在氮气气氛下，将钯活性碳(Pd 5％)(3.14g)、5N盐酸(2.95mL)和环己烯(150mL)添加至2-((3R*,4S*)-1-二苯甲基-3-甲基哌啶-4-基)乙酸异丙酯(5.40g)和乙醇(500mL)的混合物中，并且加热至回流持续20小时。将反应混合物冷却并随后通过硅藻土过滤并用乙醇(4×100mL)洗涤该硅藻土。将该滤液和洗涤溶液合并并且在减压下浓缩。将残余物溶解在甲苯(20mL)、庚烷(20mL)和5N盐酸(50mL)中，并且将有机层用5N盐酸(50mL)萃取。将合并，用5N氢氧化钠水性溶液调节至pH 14，并且用二氯甲烷(200mL，2×100mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸镁干燥并过滤。添加4N氯化氢乙酸乙酯溶液(4mL)并浓缩至10mL体积，并且添加叔丁基甲基醚(10mL)。将溶剂在减压下浓缩以获得标题化合物(2.65g)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:1.01(d,J＝7Hz,3H),1.23(d,J＝6Hz,6H),1.67-1.84(m,2H),2.10-2.21(m,1H),2.26-2.40(m,3H),3.03-3.16(m,3H),3.20-3.25(ddd,J＝13,6,4Hz,1H),4.99(m,1H)。
实例1
2-((3R*,4S*)-1-(7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑 并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸的合成
(1a)5-氯-7-((2,6-二甲基苯基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯的合成
将5,7-二氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(CAS No.1232224-62-2)(WO 2011/105628)(1.36g)、2,6-二甲基苯胺(CAS号87-62-7)(0.76g)、Pd2DBA3(0.239g)、2-(二氯己基膦基)联苯(0.092g)和磷酸钾(1.67g)在1,2-二甲氧基乙烷(15mL)中的溶液在120℃下在微波装置中搅拌12小时。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，随后用饱和盐水洗涤，并且将有机层经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，将滤液浓缩，并且随后将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得呈红色油状产物的标题化合物(1.7g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.46(t,J＝7Hz,3H),2.25(s,6H),4.51(q,J＝7Hz,2H),5.60(s,1H),7.00(s,1H),7.27(m,3H),7.86(s,1H)。质谱(ESI)m/z:345(M+H)+
(1b)5-氯-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯的 合成
将碳酸钾(0.75g)和碘甲烷(0.5mL)添加至5-氯-7-((2,6-二甲基苯基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(0.93g)在DMF(20mL)中的溶液，并且在50℃下搅拌2小时。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，随后用饱和盐水洗涤2次，并且将有机层经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，将滤液在减压下浓缩，并且随后将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得呈淡黄色油状产物的标题化合物(0.4g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.45(t,J＝7Hz,3H),2.23(s,6H),4.16(s,3H),4.47(q,J＝7Hz,2H),5.25(s,1H),6.68(s,1H),7.24(m,3H)。质谱(ESI)m/z:359(M+H)+
(1c)7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧 啶-2-甲酸乙酯的合成
将5-氯-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(1.8g)、3,4,5-三氟苯基硼酸(CAS号143418-49-9)(971mg)、四(三苯基膦)钯(0)(290mg)、碳酸钾(1.59g)、水(0.09mL)和1,4-二噁烷(10mL)的混合物在120℃下在微波装置中搅拌1.5小时。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，随后用饱和盐水洗涤，并且将有机层经无水硫酸镁干燥。过滤掉干燥剂，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得呈淡黄色油状产物的标题化合物(1.9g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:1.46(br.s,3H),2.25(s,6H),4.21(s,3H),4.49(br.s,2H),5.55(s,1H),7.01(s,1H),7.37(br.s,5H)。
质谱(ESI)m/z:455(M+H)+
(1d)7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧 啶-2-甲酸的合成
将5N氢氧化钠水性溶液(1.25mL)添加至7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(0.95g)在1,4-二噁烷(20mL)中的溶液，并且在90℃下搅拌2小时。在使反应混合物回到室温后，添加5N盐酸以酸化，将产生的固体通过过滤收集并且用乙醇洗涤以获得0.88g的呈淡黄色固体的标题化合物。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6,旋转异构体的混合物)δ:2.04(s,4H),2.20(s,2H),3.48(s,2H),4.07(s,1H),5.62(s,0.4H),6.82-7.32(m,4.6H),7.57(br.s,0.7H),8.26(s,1.3H)。
质谱(ESI)m/z:427(M+H)+
(1e)2-((3R*,4S*)-1-(7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基) 吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸乙酯的合成
将2-((3R*,4S*)-3-氟哌啶-4-基)乙酸乙酯氢溴酸盐(16.5mg)(生产实例1)添加至7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(20mg)、WSC(18.0mg)、HOBT(12.7mg)和三乙胺(0.013mL)在DMF(1mL)中的溶液，并且在室温下搅拌1小时。将乙酸乙酯和水添加至反应混合物中以分离溶液。将水层用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用饱和盐水洗涤并且经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(21mg)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:1.26-1.30(m,3H),1.54-1.72(m,2H),2.06-2.18(m,7H),2.25-2.63(m,4H),3.44(s,3H),4.13-4.21(m,2H),4.41-5.14(m,2H),5.52(s,1H),6.46(br.s,1H),6.82-7.39(m,4H),7.73-7.80(m,2H)。
(1f)2-((3R*,4S*)-1-(7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基) 吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基-3-氟哌啶-4-基)乙酸的合成
将5N氢氧化钠水性溶液(0.2mL)添加至2-((3R*,4S*)-1-(7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸乙酯(20mg)在1,4-二噁烷(1mL)中的溶液，并且在55℃下搅拌3小时。将反应混合物通过反相硅胶柱色谱法(乙腈-水、0.1％乙酸体系)纯化以获得标题化合物(9.64mg)。1H-NMR(600MHz,DMSO-d6,42℃,旋转异构体的混合物)δ:1.05-1.56(m,2H),2.00-2.08(m,7H),2.17-2.21(m,1H),2.33-2.37(m,1H),2.53-2.92(m,2H),3.48(s,3H),3.97-4.78(m,3H),6.74-6.77(m,1H),7.08-7.12(m,4H),8.25(m,2H),12.11(br.s,1H)。
实例2
2-(3R*,4S*)-1-(7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑 并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的合成
(2a)2-((3R*,4S*)-1-(7-(2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基) 吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯的合成
依次将HOBT(46mg)、WSC(58mg)、2-((3R*,4S*)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯盐酸盐(62mg)(生产实例2)和三乙胺(81mg)添加至7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(85mg)(实例1-(1d))在DMF(5mL)中的溶液，并且在室温下搅拌6小时。将乙酸乙酯(50mL)和水(20mL)添加至反应混合物中，并且将有机层用水(20mL×2)洗涤并经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得呈白色固体的标题化合物(108mg)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:1.26-1.35(m,3H),1.52-1.91(m,2H),2.22-2.52(m,8H),2.57-2.66(m,1H),3.49-3.56(m,7H),4.10-4.26(m,3H),4.53-4.65(m,1H),4.78-4.87(m,1H),4.98-5.08(m,1H),5.49-6.49(m,1H),6.94-7.02(m,1H),7.20-7.33(m,3H),7.74-7.81(m,2H)。
质谱(ESI)m/z:610(M+H)+
(2b)2-((3R*,4S*)-1-(7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基) 吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的合成
将4N氢氧化锂水性溶液(0.089mL)添加至2-((3R*,4S*)-1-(7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯(108mg)、1,4-二噁烷(5mL)和水(1mL)的混合物中，并且在室温下搅拌19小时。添加二甲亚砜(1mL)和乙酸(0.2mL)，将反应混合物在减压下浓缩。将残余物通过反相硅胶柱色谱法(乙腈-水、0.1％乙酸体系)纯化，从而收集包含标题化合物的级分。将该级分在减压下浓缩至约3mL的体积，将沉淀物通过过滤收集，用水(2mL)洗涤并且在减压下干燥以获得标题化合物(69mg)。
1H-NMR(600MHz,CDCl3,30℃,旋转异构体的混合物)δ:1.52-1.91(m,2H),2.22-2.52(m,8H),2.57-2.66(m,1H),3.49-3.56(m,7H),4.15-4.26(m,1H),4.53-4.65(m,1H),4.78-4.87(m,1H),4.98-5.08(m,1H),5.48-6.49(m,1H),6.94-7.02(m,1H),7.20-7.33(m,3H),7.70-7.81(m,2H)。
质谱(ESI)m/z:582(M+H)+
实例3
2-((3R*,4S*)-1-(5-(4,4-二甲基环己基)-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)吡 唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸的合成
(3a)5-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并 [1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯的合成
将水(3mL)、碳酸钠(0.27g)、4,4-(二甲基环己烯-1-基)硼酸频哪醇酯(CAS号859217-67-7)(0.35g)和四(三苯基膦)钯(0)(0.058g)添加至5-氯-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(0.36g)(实例1-(1b))和1,4-二噁烷(15mL)的混合物中，并且将该混合物在氮气气氛下在95℃下加热搅拌2小时。将反应混合物用乙酸乙酯(150mL)和水(50mL)稀释，并且将有机层经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得呈淡黄色固体的标题化合物(0.31g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:0.91(br.s,6H),1.24-1.45(m,5H),1.96(br.s,2H),2.21(br.s,6H),2.32(br.s,2H),4.13(br.s,3H),4.43(br.s,2H),5.44(br.s,1H),6.35(br.s,1H),6.91(s,1H),7.22(br.s,3H)。
(3b)5-(4,4-二甲基环己基)-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a] 嘧啶-2-甲酸乙酯的合成
将10％钯碳(10mg)添加至5-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(43mg)和甲醇(4mL)的混合物中，并且在氢气气氛下在室温下搅拌2小时。将反应混合物通过硅藻土过滤，并且将催化剂过滤掉。用乙酸乙酯洗涤硅藻土和催化剂，将滤液和洗涤溶液合并并且在减压下浓缩以获得标题化合物(46mg)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:0.90(br.s,6H),1.26(br.s,3H),1.35-1.65(m,8H),2.19(br.s,6H),2.30(br.s,1H),4.13(br.s,3H),4.43(br.s,2H),5.17(br.s,1H),6.88(s,1H),7.22(br.s,3H)。
(3c)5-(4,4-二甲基环己基)-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a] 嘧啶-2-甲酸的合成
将水(4mL)和氢氧化锂(30mg)添加至5-(4,4-二甲基环己基)-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(271mg)和1,4-二噁烷(20mL)的混合物中，并且在室温下搅拌17小时。将乙酸(0.2mL)和DMSO(4mL)添加至反应混合物中，将其在减压下浓缩。将残余物通过反相硅胶柱色谱法(乙腈-水、0.1％乙酸体系)以获得标题化合物(200mg)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:0.80-1.08(m,6H),1.15-1.88(m,8H),2.00-2.63(m,7H),3.43(s,2.3H),4.08(br.s,0.7H),5.24(br.s,0.3H),6.13(br.s,0.7H),6.83-7.26(m,4H)。
(3d)2-((3R*,4S*)-1-(5-(4,4-二甲基环己基)-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)(氨 基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸乙酯的合成
将HOBT(63mg)和WSC(79mg)添加至5-(4,4-二甲基环己基)-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(112mg)和DMF(5mL)的混合物中，并且在室温下搅拌30分钟。向其中依次添加2-((3R*,4S*)-3-氟哌啶-4-基)乙酸乙酯氢溴酸盐(82mg)(生产实例1)和三乙胺(111mg)，并且在室温下搅拌15小时。将乙酸乙酯(60mL)和水(30mL)添加至反应混合物中，并且将有机层用水(30mL×2)洗涤并经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(139mg)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:0.81-1.05(m,6H),1.15-1.84(m,12H),1.25(m,3H),2.01-2.36(m,8H),2.47(m,1H),2.60(br.s,1H),3.34(br.s,2H),4.02(br.s,1H),4.17(m,2H),4.26-5.21(m,3H),6.15-6.85(m,2H),6.98-7.34(m,3H)。
(3e)2-((3R*,4S*)-1-(5-(4,4-二甲基环己基)-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨 基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸的合成
将氢氧化锂(11.5mg)的水性溶液(2mL)添加至2-((3R*,4S*)-1-(5-(4,4-二甲基环己基)-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸乙酯(139mg)在1,4-二噁烷(6mL)中的溶液，并且在室温下搅拌15小时。将DMSO(2mL)和乙酸(0.1mL)添加至反应混合物中，将其在减压下浓缩。将残余物通过反相硅胶柱色谱法(乙腈-水、0.1％乙酸体系)纯化，将包含标题化合物的级分合并并且在减压下浓缩至5mL体积。将沉淀物通过过滤收集，用水(5mL)洗涤并且在减压下干燥。获得呈淡棕色固体的标题化合物(97mg)。
1H-NMR(500MHz,CD3OD,旋转异构体的混合物)δ:0.90-1.08(m,6H),1.15-1.34(m,1H),1.41-1.48(m,3H),1.55-1.65(m,2H),1.72-1.95(m,3H),2.04-2.16(m,6H),2.20-2.40(m,3H),2.41-2.95(m,4H),3.42(s,0.7H),4.08(s,2.3H),4.14-5.25(m,3H),6.40-6.73(m,2H),7.06-7.35(m,3H)。
质谱(ESI)m/z:550(M+H)+
实例4
2-((3R*,4S*)-1-(5-(3-氯-4-氟苯基)-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑 并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的合成
(4a)5-(3-氯-4-氟苯基)-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧 啶-2-甲酸乙酯的合成
将水(1mL)、碳酸钠(0.18g)、3-氯-4-氟苯基硼酸(CAS号144432-85-9)(0.14g)和四(三苯基膦)钯(0)(0.065g)添加至5-氯-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(269mg)(实例1-(1b))和1,4-二噁烷(10mL)的混合物中，并且将该混合物在氮气气氛下在90℃下加热搅拌24小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)稀释，并且将有机层经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得呈白色固体的标题化合物(0.35g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:1.46(br.s,3H),2.25(s,6H),4.20(s,3H),4.49(br.s,2H),5.60(br.s,1H),6.98(br.s,1H),7.12(br.s,1H),7.25(br.s,3H),7.52(br.s,1H),7.86(br.s,1H)。
质谱(ESI)m/z:453(M+H)+
(4b)5-(3-氯-4-氟苯基)-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧 啶-2-甲酸的合成
将水(1mL)和4N氢氧化锂水性溶液(0.39mL)添加至5-(3-氯-4-氟苯基)-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(353mg)和1,4-二噁烷(9mL)的混合物中，并且在室温下搅拌20小时。将反应混合物在减压下浓缩，并且将水(3mL)和乙酸(0.2mL)添加至残余物并且进行超声处理。将沉淀物通过过滤收集，用水(1mL)洗涤并且在减压下干燥以获得呈淡黄色固体的标题化合物(233mg)。
1H-NMR(500MHz,CD3OD,旋转异构体的混合物)δ:2.12(s,1.5H),2.28(br.s,4.5H),3.54(s,0.8H),4.19(s,2.2H),5.60(s,0.7H),6.80-7.45(m,5.3H),7.54(br.s,0.7H),7.87(br.s,0.7H),8.16(br.s,0.3H),8.33(br.s,0.3H)。
质谱(ESI)m/z:425(M+H)+
(4c)2-((3R*,4S*)-1-(5-(3-氯-4-氟苯基)-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基) 吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯的合成
将HOBT(54mg)和WSC(68mg)添加至5-(3-氯-4-氟苯基)-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(100mg)和DMF(3mL)的混合物中，并且在室温下搅拌30分钟。向其中依次添加2-((3R*,4S*)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯盐酸盐(60mg)(生产实例2)和三乙胺(95mg)，并且在室温下搅拌15小时。将乙酸乙酯和水添加至反应混合物中，并且将有机层用水洗涤并经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(110mg)。1H-NMR(500MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:1.21-1.83(m,2H),1.27(m,3H),1.95-2.26(m,7H),2.35-2.73(m,4H),2.77-3.13(m,1H),3.22-4.10(m,6H),4.02-5.08(m,4H),5.58(m,0.45H),6.51(m,0.55H),6.78-7.30(m,5H),7.52(br.s,0.45H),7.85(br.s,0.45H),8.00(br.s,0.55H),8.17(d,J＝6Hz,0.55H)。
质谱(ESI)m/z:608(M+H)+
(4d)2-((3R*,4S*)-1-(5-(3-氯-4-氟苯基)-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基) 吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的合成
将水(1.5mL)和4N氢氧化锂水性溶液(0.086mL)添加至2-((3R*,4S*)-1-(5-(3-氯-4-氟苯基)-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯(105mg)和1,4-二噁烷(6mL)的混合物中，并且在室温下搅拌20小时。将1N盐酸(0.34mL)添加至反应混合物中，将其在减压下浓缩。将残余物通过反相硅胶柱色谱法(乙腈-水、0.1％乙酸体系)纯化以获得标题化合物(81mg)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:1.21-1.79(m,2H),1.95-2.26(m,7H),2.35-2.74(m,4H),2.75-3.11(m,1H),3.22-3.55(m,4.8H),4.03(m,0.2H),4.09(s,1.2H),4.23(m,0.2H),4.62(m,0.8H),4.84-5.07(m,0.4H),5.57(m,0.4H),6.52(m,0.6H),6.80(m,0.4H),6.98-7.16(m,3H),7.22-7.33(m,2H),7.52(br.s,0.4H),7.85(br.s,0.6H),8.00(br.s,0.4H),8.17(d,J＝7Hz,0.6H)。
质谱(ESI)m/z:508(M+H)+
实例5
2-((3R*,4S*)-3-氟-1-(7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三 氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸的合成
(5a)5-氯-7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯的 合成
在150℃下，将5,7-二氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(CAS号1232224-62-2)(8g)和2-甲氧基-6-甲基苯胺(CAS号50868-73-0)(4.64g)在NMP(6mL)中的溶液搅拌4小时。将乙酸乙酯、DMSO和饱和碳酸氢钠水性溶液添加至反应混合物中，并且将有机层用饱和盐水洗涤并经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩以获得标题化合物的粗产物(10.98g)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:1.46(t,J＝7Hz,3H),2.27(s,3H),3.78(s,3H),4.50(q,J＝7Hz,2H),5.66(s,1H),6.88(d,J＝8Hz,1H),6.95(d,J＝8Hz,1H),6.99(s,1H),7.31(t,J＝8Hz,1H),7.80(s,1H)。
质谱(ESI)m/z:361(M+H)+
(5b)5-氯-7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸 乙酯的合成
将碳酸钾(12.62g)和碘甲烷(5.71mL)添加至5-氯-7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯的粗产物(10.98g)在DMF(100mL)中的溶液，并且在50℃下搅拌4小时。将乙酸乙酯和水添加至反应混合物中以分离溶液。将水层用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层依次用水和饱和盐水洗涤并经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(7.14g)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3,45℃,旋转异构体的混合物)δ:1.39(t,J＝7Hz,3H),2.21(s,3H),3.75(s,3H),3.88(br.s,3H),4.39(q,J＝7Hz,2H),5.56(br.s,1H),6.83(s,1H),6.84(d,J＝7Hz,1H),6.92(d,J＝7Hz,1H),7.27(t,J＝7Hz,1H)。
(5c)7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5- a]嘧啶-2-甲酸乙酯的合成
将5-氯-7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(500mg)、3,4,5-三氟苯基硼酸(282mg)、四(三苯基膦)钯(0)(77mg)、碳酸钠(353mg)、水(1.6mL)和1,4-二噁烷(16mL)的混合物在氮气气氛下在100℃下搅拌3小时。将乙酸乙酯和饱和盐水添加至反应混合物中，并且将有机层经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(668mg)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3,45℃,旋转异构体的混合物)δ:1.40(t,J＝7Hz,3H),2.23(s,3H),3.75(s,3H),3.94(s,3H),4.41(q,J＝7Hz,2H),5.88(br.s,1H),6.88(d,J＝8Hz,1H),6.95(d,J＝7Hz,1H),6.97(s,1H),7.30(t,J＝8Hz,1H),7.49(m,2H)。
质谱(ESI)m/z:471(M+H)+
(5d)7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5- a]嘧啶-2-甲酸的合成
将4N氢氧化锂水性溶液(1mL)添加至7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(668mg)在1,4-二噁烷(5mL)中的溶液，并且在室温下搅拌过夜。将2N盐酸(2mL)添加至反应混合物中并且将沉积的固体通过过滤收集以获得标题化合物(574mg)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3,45℃,旋转异构体的混合物)δ:2.24(s,3H),3.68(s,6H),6.31(br.s,1H),6.80(d,J＝8Hz,1H),6.94(d,J＝8Hz,1H),6.99(s,1H),7.31(t,J＝7Hz,1H),7.67(m,2H)。
质谱(ESI)m/z:443(M+H)+
(5e)2-((3R*,4S*)-3-氟-1-(7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4, 5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸的合成
将N,N-二异丙基乙胺(0.05mL)添加至7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(30mg)、2-((3R*,4S*)-3-氟哌啶-4-基)乙酸乙酯氢溴酸盐(27mg)(生产实例1)和HATU(60mg)在二氯甲烷(1mL)中的溶液，并且在室温下搅拌过夜。将乙酸乙酯和水添加至反应混合物中，并且将有机层依次用水和饱和盐水洗涤并经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉并且将滤液在减压下浓缩以获得2-((3R*,4S*)-3-氟-1-(7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸乙酯的粗产物。向其中添加1,4-二噁烷(1mL)和4N氢氧化锂水性溶液(0.2mL)并且在室温下搅拌过夜。将添加2N盐酸(0.4mL)的反应混合物通过反相高效液相色谱法(乙腈-水、0.1％乙酸体系)纯化以获得标题化合物(2.81mg)。
1H-NMR(600MHz,吡啶-d5,15℃,旋转异构体的混合物)δ:1.50-1.81(m,2H),2.23-2.37(m,3H),2.39-2.59(m,2H),2.63-2.69(m,1H),2.74-3.03(m,2H),3.37(br.s,3H),3.48(br.s,3H),4.54-4.70(m,1H),4.90-5.12(m,1H),5.17-5.38(m,1H),6.72-6.99(m,4H),7.43-7.57(m,1H),8.12(br.s,2H)。
质谱(ESI)m/z:586(M+H)+
实例6
2-((3R*,4S*)-3-甲氧基-1-(7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4, 5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸的合成
(6a)2-((3R*,4S*)-3-甲氧基-1-(7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)(甲基)氨基)-5- (3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸乙酯的合成
将HOBT(46mg)、WSC(58mg)、2-((3R*,4S*)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯盐酸盐(62mg)(生产实例2)和三乙胺(81mg)依次添加至7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(88mg)(实例5-(5d))在DMF(5mL)中的溶液，并且在室温下搅拌3小时。将乙酸乙酯(50mL)和水(20mL)添加至反应混合物中，并且将有机层用水(20mL×2)洗涤并经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得呈白色固体的标题化合物(111mg)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:1.27(m,3H),1.28-1.75(m,2H),2.15-2.30(m,1H),2.15-2.34(m,3H),2.40-2.55(m,1H),2.60-3.15(m,4H),3.35-3.44(m,3H),3.52-3.80(m,6H),4.11-4.20(m,2H),4.20-4.96(m,2H),6.22(br.s,1H),6.68-6.97(m,3H),7.16-7.34(m,1H),7.55-7.77(m,2H)。
质谱(ESI)m/z:626(M+H)+
(6b)2-((3R*,4S*)-3-甲氧基-1-(7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)(甲基)氨基)-5- (3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸的合成
将4N氢氧化锂水性溶液(0.089mL)添加至2-((3R*,4S*)-3-甲氧基-1-(7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸乙酯(111mg)、1,4-二噁烷(5mL)和水(1mL)的混合物中，并且在室温下搅拌22小时。添加DMSO(1mL)和乙酸(0.2mL)并且将反应混合物在减压下浓缩。将残余物通过反相硅胶柱色谱法(乙腈-水、0.1％乙酸体系)纯化，并且将包含标题化合物的级分合并。将该级分在减压下浓缩至约3mL的体积，将沉淀物通过过滤收集，用水(2mL)洗涤并且在减压下干燥以获得呈白色固体的标题化合物(76mg)。
1H-NMR(600MHz,CDCl3,42℃,旋转异构体的混合物)δ:1.33-1.77(m,2H),2.10-2.16(m,1H),2.23-2.25(m,3H),2.32-2.39(m,1H),2.49-3.15(m,4H),3.41-3.45(m,3H),3.53-3.78(m,6H),4.22-4.93(m,2H),6.02-6.38(m,1H),6.73-6.96(m,3H),7.21-7.24(m,1H),7.56-7.73(m,2H)。
质谱(ESI)m/z:598(M+H)+
[α]D 20:-109.0°(100mg,DMSO,5mL,100mm)。
实例7
(R)-3-(7-((2-氟-6-甲氧基苯基)(甲基)氨基)-N-甲基-5-(3,4,5-三氟苯基)吡 唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酰胺)丁酸的合成
(7a)5-氯-7-((2-氟-6-甲氧基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙 酯的合成
在氮气气氛下，将5,7-二氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(CAS号1232224-62-2)(3.63g)和2-氟-6-甲氧基苯胺(CAS号446-61-7)(1.97g)在NMP(2.69mL)中的溶液在140℃下搅拌4小时。在使反应混合物回到室温后，添加DMF(15mL)、碳酸钾(7.72g)和碘甲烷(2.62mL)并且在室温下搅拌3天。将乙酸乙酯(200mL)和水(100mL)添加至反应混合物中，并且将有机层用水(50mL×2)洗涤并经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(3.33g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.33(t,J＝7Hz,3H),3.70(br.s,3H),3.75(s,3H),4.32(q,J＝7Hz,2H),5.98(br.s,1H),6.75-6.86(m,3H),7.29-7.35(m,1H)。
(7b)7-((2-氟-6-甲氧基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a] 嘧啶-2-甲酸乙酯的合成
将5-氯-7-((2-氟-6-甲氧基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(3.33g)、3,4,5-三氟苯基硼酸(1.857g)、四(三苯基膦)钯(0)(0.508g)、碳酸钾(2.431g)、水(5mL)和1,4-二噁烷(50mL)的混合物在氮气气氛下在90℃下搅拌14小时。将反应混合物在减压下浓缩，向残余物添加乙酸乙酯(400mL)和水(200mL)。将水层用乙酸乙酯(200ml)萃取，将有机层合并并且经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(3.836g)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ:1.35(t,J＝7Hz,3H),3.75(s,3H),3.76(s,3H),4.33(q,J＝7Hz,2H),6.31(br.s,1H),6.77-6.83(m,2H),6.98(s,1H),7.30-7.33(m,1H),7.66(m,2H)。
质谱(ESI)m/z:475(M+H)+
(7c)7-((2-氟-6-甲氧基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a] 嘧啶-2-甲酸的合成
将4N氢氧化锂水性溶液(1mL)添加至7-((2-氟-6-甲氧基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(399mg)在1,4-二噁烷(5mL)中的溶液并且在室温下搅拌过夜。将2N盐酸(2mL)添加至反应混合物中，将其在减压下浓缩。将水添加至残余物并且将沉积的固体通过过滤收集以获得标题化合物(338mg)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ:3.64(s,3H),3.72(s,3H),6.56(s,1H),6.77(d,J＝8Hz,1H),6.83(t,J＝8Hz,1H),7.04(s,1H),7.34-7.39(m,1H),7.74(m,2H)。
质谱(ESI)m/z:447(M+H)+
(7d)(R)-3-(7-((2-氟-6-甲氧基苯基)(甲基)氨基)-N-甲基-5-(3,4,5-三氟苯 基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酰胺)丁酸甲酯的合成
将三乙胺(0.66mL)添加至7-((2-氟-6-甲氧基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(700mg)、(R)-3-(甲基氨基)丁酸甲酯盐酸盐(263mg)(生产实例3)、WSC(451mg)和HOBT(360mg)在DMF(10mL)中的溶液，并且在室温下搅拌4小时。将乙酸乙酯和水添加至反应混合物中，并且将有机层依次用水和饱和盐水洗涤并经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(554mg)。在以下条件下，使用CHIRALPAK OD-H柱进一步纯化所得的化合物以获得标题化合物(0.465g)。
HPLC条件
柱：CHIRALPAK OD-H(批号：ODH-0CJ-EL007)，25mm×300mm；
流动相：己烷:乙醇＝65:35；
洗脱速率：20mL/min；
浓度：100mg/mL；
注射量：0.30mL；
HPLC保留时间：11.5min。
1H-NMR(500MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:1.10(d,J＝7Hz,1.5H),1.22(d,J＝7Hz,1.5H),2.30(dd,J＝15,7Hz,0.5H),2.48(dd,J＝15,7Hz,0.5H),2.50(dd,J＝15,7Hz,0.5H),2.60(dd,J＝15,7Hz,0.5H),2.68(s,1.5H),2.89(s,1.5H),3.56-3.70(m,9H),4.83(m,0.5H),5.04(m,0.5H),6.37(s,0.5H),6.48(s,0.5H),6.70(dd,J＝9,4Hz,1H),6.77(q,J＝9Hz,1H),6.86(s,0.5H),6.95(s,0.5H),7.22-7.28(m,1H),7.67-7.75(m,2H)。
(7e)(R)-3-(7-((2-氟-6-甲氧基苯基)(甲基)氨基)-N-甲基-5-(3,4,5-三氟苯 基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酰胺)丁酸的合成
将(R)-3-(7-((2-氟-6-甲氧基苯基)(甲基)氨基)-N-甲基-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酰胺)丁酸甲酯(465mg)溶解在1,4-二噁烷(7mL)中，添加4N氢氧化锂水性溶液(0.3mL)和水(0.75mL)并且在室温下搅拌过夜。而且，添加1N氢氧化锂水性溶液(0.05mL)，在室温下搅拌过夜，随后将1N盐酸(2mL)添加至反应混合物中，将其用乙酸乙酯萃取。将有机层干燥、在减压下浓缩，并且将残余物通过反相高效液相色谱法(乙腈-水、0.1％乙酸体系)纯化以获得标题化合物(402mg)。
1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ:1.06(d,J＝7Hz,1.5H),1.20(d,J＝7Hz,1.5H),2.29(dd,J＝16,6Hz,0.5H),2.47(dd,J＝16,6Hz,0.5H),2.50(dd,J＝16,6Hz,0.5H),2.57(dd,J＝16,6Hz,0.5H),2.64(s,1.5H),2.87(s,1.5H),3.58(s,1.5H),3.60(s,1.5H),3.62(s,1.5H),3.68(s,1.5H),4.62(m,0.5H),4.98(m,0.5H),6.75-6.94(m,4H),7.31(m,1H),8.00(m,2H)。
质谱(ESI)m/z:546(M+H)+
实例8
2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丁基((R)-3-甲基丁烷-2-基) 氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸的合成
(8a)(R)-N-苄基-3-甲基丁烷-2-胺
将(R)-(-)-3-甲基-2-丁胺(CAS号34701-33-2)(4.79g)、THF(150mL)、苯甲醛(5mL)和乙酸(5mL)的混合物在室温下搅拌30分钟。向其中添加三乙酰氧基硼氢化钠(15g)并且在室温下搅拌14小时40分钟。将乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水性溶液添加至反应混合物中并且在室温下搅拌30分钟。将有机层依次用饱和碳酸氢钠水性溶液、水和饱和盐水洗涤并且经无水硫酸钠干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过NH硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(8.76g)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:0.82(d,J＝7Hz,3H),0.83(d,J＝7Hz,3H),0.89(d,J＝6Hz,3H),1.60-1.75(m,2H),2.30-2.42(m,1H),3.64(br.d,J＝14Hz,1H),3.73(br.d,J＝14Hz,1H),7.15-7.36(m,5H)。
(8b)(R)-N-苄基-N-(3-甲基丁烷-2-基)异丁酰胺的合成
在0℃下将异丁酰氯(6mL)添加至(R)-N-苄基-3-甲基丁烷-2-胺(8.64g)、二氯甲烷(200mL)和三乙胺(13mL)的混合物，并且搅拌35分钟。将乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水性溶液添加至反应混合物中，并且将有机层用水、饱和盐水洗涤并经无水硫酸钠干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(11.202g)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6,旋转异构体的混合物)δ:0.70-1.10(m,15H),1.73-1.85(m,1H),2.96-3.08(m,0.5H),3.60-3.72(m,0.5H),4.10-4.22(m,1H),4.45(d,J＝16Hz,1H),4.58(d,J＝16Hz,1H),7.11-7.39(m,5H)。
(8c)(R)-N-苄基-N-异丁基-3-甲基丁烷-2-胺的合成
在0℃下将(R)-N-苄基-N-(3-甲基丁烷-2-基)异丁酰胺(11.2g)添加至THF(200mL)和氢化铝锂(3.5g)的混合物，并且在90℃下搅拌1小时15分钟。在使反应混合物回到室温后，依次将水(3.5mL)、2N氢氧化钠水性溶液(3.5mL)、水(10.5mL)和无水硫酸钠添加至反应混合物并且搅拌1小时55分钟。将不溶解的物质过滤掉，用乙酸乙酯洗涤并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(10.872g)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:0.72-0.98(m,15H),1.53-1.72(m,2H),1.95-2.02(m,1H),2.11-2.23(m,2H),3.21(d,J＝14Hz,1H),3.70(d,J＝14Hz,1H),7.15-7.38(m,5H)。
(8d)(R)-N-异丁基-3-甲基丁烷-2-胺盐酸盐的合成
将10％钯碳粉末(51％含水量)(50mg)添加至(R)-N-苄基-N-异丁基-3-甲基丁烷-2-胺(2g)和甲醇(35mL)的混合物中，并且在室温下在氢气气氛下搅拌2小时30分钟。将不溶解的物质过滤掉并且用甲醇和乙酸乙酯洗涤。将4N氯化氢乙酸乙酯溶液(10mL)添加至滤液中，并且将混合物在减压下浓缩。将50％二乙醚-庚烷(100mL)添加至残余物，进行超声处理并且随后在减压下浓缩。将该程序重复4次。将所得的固体在减压下干燥以获得标题化合物(1.323g)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:0.90(d,J＝7Hz,3H),0.92(d,J＝7Hz,3H),0.96(d,J＝7Hz,3H),0.97(d,J＝7Hz,3H),1.14(d,J＝7Hz,3H),1.95-2.20(m,2H),2.65-2.80(m,2H),3.00-3.09(m,1H),8.28(br.s,1H),8.65(br.s,1H)。
(8e)(R)-5-氯-7-(异丁基(3-甲基丁烷-2-基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸 乙酯的合成
将三乙胺(10mL)添加至5,7-二氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(CAS号1232224-62-2)(4.5g)、(R)-N-异丁基-3-甲基丁烷-2-胺盐酸盐(3.588g)和THF(70mL)的混合物中，并且在回流下搅拌31小时40分钟。将乙酸乙酯和水添加至反应混合物，并且将有机层用饱和盐水洗涤并经无水硫酸钠干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过NH硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(5.05g)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:0.77(d,J＝6Hz,3H),0.78(d,J＝7Hz,3H),0.87(d,J＝6Hz,3H),0.89(d,J＝6Hz,3H),1.34(td,J＝7,1Hz,3H),1.39(d,J＝7Hz,3H),1.74-2.00(m,2H),2.95-3.08(m,1H),3.67-3.77(m,1H),4.30-4.40(m,1H),4.36(q,J＝7Hz,2H),6.66(s,1H),6.89(s,1H)。
(8f)(R)-5-氯-7-(异丁基(3-甲基丁烷-2-基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸 的合成
将5N氢氧化钠水性溶液(5mL)添加至(R)-5-氯-7-(异丁基(3-甲基丁烷-2-基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(1.9g)和乙醇(25mL)的混合物中，并且在室温下搅拌20分钟。将5N盐酸(5mL)和水添加至反应混合物中并且进行超声处理。将产生的固体通过过滤收集，用水洗涤并在减压下干燥以获得标题化合物(1.624g)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:0.75(d,J＝7Hz,3H),0.77(d,J＝7Hz,3H),0.86(d,J＝7Hz,3H),0.88(d,J＝7Hz,3H),1.39(d,J＝6Hz,3H),1.75-1.99(m,2H),2.95-3.05(dd,J＝15,10Hz,1H),3.67-3.78(m,1H),4.30-4.43(m,1H),6.62(s,1H),6.84(s,1H),13.32(br.s,1H)。
(8g)2-((1α,5α,6α)-3-(5-氯-7-(异丁基((R)-3-甲基丁烷-2-基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸甲酯的合成
将三乙胺(3mL)添加至(R)-5-氯-7-(异丁基(3-甲基丁烷-2-基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(1.620g)、2-((1α,5α,6α)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸甲酯盐酸盐(1g)(生产实例4)、WSC(1.4g)、HOBT(1g)和DMF(25mL)的混合物中，并且在室温下搅拌24小时。将乙酸乙酯和水添加至反应混合物中，并且将有机层用饱和盐水洗涤并经无水硫酸钠干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(1.844g)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6,旋转异构体的混合物)δ:0.65-0.94(m,13H),1.41(d,J＝7Hz,3H),1.48-1.62(m,2H),1.80-2.00(m,2H),2.22-2.45(m,2H),2.93-3.05(m,1H),3.46-3.56(m,1H),3.58(s,3H),3.65-3.78(m,1H),3.82-3.93(m,2H),4.17-4.25(m,1H),4.40-4.55(m,1H),6.58(s,0.5H),6.59(s,0.5H),6.73(s,0.5H),6.74(s,0.5H)。
(8h)2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丁基((R)-3-甲基丁烷- 2-基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸的合成
将1,4-二噁烷(2mL)和纯水(200μL)添加至2-((1α,5α,6α)-3-(5-氯-7-(异丁基((R)-3-甲基丁烷-2-基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸甲酯(40mg)、4-氯-3,5-二氟苯基硼酸(CAS号864759-63-7)(25mg)、四(三苯基膦)钯(0)(10mg)和碳酸钾(25mg)的混合物中，并且在80℃下搅拌2小时。将反应混合物在减压下直接浓缩并且将所得的残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丁基((R)-3-甲基丁烷-2-基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸甲酯。将该化合物溶解在乙醇(1.5mL)中，随后添加5N氢氧化钠水性溶液(100μL)并且在室温下搅拌2小时。随后，将反应混合物用5N盐酸(100μL)中和并且在减压下浓缩。将残余物通过反相硅胶柱色谱法(乙腈-水、0.1％乙酸体系)纯化以获得标题化合物(32mg)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD,旋转异构体的混合物)δ:0.80(d,J＝7Hz,3H),0.83-0.91(m,4H),0.94(d,J＝7Hz,1.5H),0.95(d,J＝7Hz,1.5H),0.98(d,J＝7Hz,1.5H),1.00(d,J＝7Hz,1.5H),1.53(d,J＝7Hz,3H),1.56-1.61(m,1H),1.62-1.67(m,1H),1.95-2.07(m,2H),2.22-2.41(m,2H),3.05(dd,J＝14,10Hz,1H),3.65(dt,J＝12,5Hz,1H),3.90(dd,J＝14,4Hz,1H),4.01(ddd,J＝11,4,1Hz,1H),4.08(dd,J＝12,5Hz,1H),4.43(dd,J＝12,7Hz,1H),4.58(dt,J＝10,7Hz,1H),6.87(s,1H),6.91(s,1H),7.89(d,J＝8Hz,2H)。
实例9
(R)-3-(7-(异丁基((R)-3-甲基丁烷-2-基)氨基)-N-甲基-5-(3,4,5-三氟苯基) 吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酰胺)丁酸的合成
(9a)(R)-7-(异丁基(3-甲基丁烷-2-基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5- a]嘧啶-2-甲酸乙酯的合成
将(R)-5-氯-7-(异丁基(3-甲基丁烷-2-基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(890mg)(实例8-(8e))、3,4,5-三氟苯基硼酸(520mg)、四(三苯基膦)钯(0)(250mg)、2M碳酸钠水性溶液(2.5mL)、乙醇(1mL)和甲苯(9mL)的混合物在100℃下在氮气气氛下搅拌19小时35分钟。将反应混合物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)直接纯化以获得标题化合物(955mg)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:0.78(d,J＝7Hz,3H),0.81(d,J＝7Hz,3H),0.89(d,J＝6Hz,3H),0.90(d,J＝7Hz,3H),1.35(t,J＝7Hz,3H),1.43(d,J＝6Hz,3H),1.75-1.86(m,1H),1.92-2.05(m,1H),3.05(dd,J＝15,10Hz,1H),3.96(dd,J＝15,5Hz,1H),4.33(dd,J＝10,6Hz,1H),4.37(q,J＝7Hz,2H),6.98(s,1H),7.14(s,1H),8.19(dd,J＝10,7Hz,2H)。
(9b)(R)-7-(异丁基(3-甲基丁烷-2-基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5- a]嘧啶-2-甲酸的合成
将1N氢氧化锂水性溶液(6mL)添加至(R)-7-(异丁基(3-甲基丁烷-2-基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(950mg)在1,4-二噁烷(18mL)中的溶液，并且在50℃下搅拌1小时。将1N盐酸(6mL)添加至反应混合物中，将其用乙酸乙酯稀释并且用水和饱和盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。获得呈黄色固体的标题化合物的粗产物(863mg)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:0.78(d,J＝6Hz,3H),0.79(d,J＝6Hz,3H),0.88(d,J＝6Hz,3H),0.90(d,J＝6Hz,3H),1.43(d,J＝6Hz,3H),1.74-1.87(m,1H),1.92-2.05(m,1H),3.04(dd,J＝14,10Hz,1H),3.98(dd,J＝14,4Hz,1H),4.36(dd,J＝10,6Hz,1H),6.93(s,1H),7.12(s,1H),8.19(dd,J＝10,7Hz,2H),13.27(br.s,1H)。
(9c)(R)-3-(7-(异丁基((R)-3-甲基丁烷-2-基)氨基)-N-甲基-5-(3,4,5-三氟苯 基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酰胺)丁酸甲酯的合成
将三乙胺(0.07mL)添加至(R)-7-(异丁基(3-甲基丁烷-2-基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(19.6mg)、(R)-3-(甲基氨基)丁酸甲酯盐酸盐(10mg)(生产实例3)、WSC(10mg)和HOBT(10mg)在DMF(0.5mL)中的溶液，并且在室温下搅拌过夜。将乙酸乙酯和水添加至反应混合物中，并且将有机层依次用水和饱和盐水洗涤并经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物的粗产物(21.1mg)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:0.75(m,3H),0.88(m,6H),0.98(m,3H),1.36(m,3H),1.44(d,J＝7Hz,3H),1.92(m,1H),1.98(m,1H),2.41-2.77(m,2H),2.92-3.69(m,8H),4.50(m,1H),5.01-5.21(m,1H),6.35(m,1H),6.87-6.92(m,1H),7.66(m,2H)。
(9d)(R)-3-(7-(异丁基((R)-3-甲基丁烷-2-基)氨基)-N-甲基-5-(3,4,5-三氟苯 基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酰胺)丁酸的合成
将(R)-3-(7-(异丁基((R)-3-甲基丁烷-2-基)氨基)-N-甲基-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酰胺)丁酸甲酯(21mg)溶解在乙醇(2mL)中，向其中添加1N氢氧化钠水性溶液(0.5mL)，并且在室温下搅拌过夜。将添加了2N盐酸的反应混合物通过反相高效液相色谱法(乙腈-水、0.1％乙酸体系)纯化以获得标题化合物(11mg)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:0.73(m,3H),0.82-0.89(m,6H),0.96(d,J＝6Hz,3H),1.34-1.46(m,3H),1.44(d,J＝7Hz,3H),1.92(m,1H),1.98(m,1H),2.41-2.77(m,2H),2.93(m,1H),3.03(s,1.7H),3.28(s,1.3H),3.61(m,1H),4.40-5.25(m,2H),6.30-6.36(m,1H),6.77-6.93(m,1H),7.61(m,2H)。
质谱(ESI)m/z:534(M+H)+
实例10
2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡 唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的合成
(10a)5-氯-7-((2-氟-6-甲基苯基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯的合成
将5,7-二氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(CAS号1232224-62-2)(5g)和2-氟-6-甲基苯胺(CAS号443-89-0)(2.41g)在NMP(3mL)中的溶液在120℃下搅拌4小时。将反应混合物与通过在120℃下搅拌在NMP(0.20mL)中的5,7-二氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(0.50g)和2-氟-6-甲基苯胺(0.27g)持续4小时单独获得的反应溶液合并，用乙酸乙酯稀释，用水和饱和盐水洗涤并经无水硫酸钠干燥。在将干燥剂过滤掉后，将滤液在减压下浓缩，将二氯甲烷添加至残余物并且通过过滤收集不溶解的固体以获得呈淡黄色固体的标题化合物(2.88g)。将滤液在减压下进行浓缩并将残余物通过硅胶柱色谱法(己烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(2.28g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.46(t,J＝7Hz,3H),2.34(s,3H),4.50(q,J＝7Hz,2H),5.75(s,1H),7.02(s,1H),7.12(t,J＝8Hz,1H),7.18(br.d,J＝8Hz,1H),7.35(td,J＝8,6Hz,1H),7.82(br.s,1H)。
(10b)5-氯-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 的合成
将碳酸铯(7.23g)和碘甲烷(4.61mL)添加至5-氯-7-((2-氟-6-甲基苯基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(5.16g)在DMF(80mL)中的溶液，并且在50℃下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，依次用水和饱和盐水洗涤，并且经无水硫酸钠干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得呈淡黄色固体的标题化合物(4.64g)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.37(t,J＝7Hz,3H),2.26(s,3H),3.83(br.s,3H),4.36(q,J＝7Hz,2H),5.79(br.s,1H),6.88(s,1H),7.04(t,J＝9Hz,1H),7.13(d,J＝8Hz,1H),7.30(td,J＝9,6Hz,1H)。
(10c)5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5- a]嘧啶-2-甲酸乙酯的合成
在氮气气氛下，将水(2mL)、碳酸钠(0.53g)、4-氯-3,5-二氟苯基硼酸(0.44g)和四(三苯基膦)钯(0)(0.12g)添加至5-氯-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(0.73g)和1,4-二噁烷(16mL)的混合物中，并且在100℃下搅拌3小时。在回到室温后，将乙酸乙酯(200mL)和水(50mL)添加至反应混合物中，并且将有机层分离并经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得呈淡黄色固体的标题化合物(0.96g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.39(t,J＝7Hz,3H),2.28(s,3H),3.88(s,3H),4.38(q,J＝7Hz,2H),6.14(s,1H),7.03(s,1H),7.04(dd,J＝9,8Hz,1H),7.15(d,J＝8Hz,1H),7.32(td,J＝8,6Hz,1H),7.57(d,J＝8Hz,2H)。
(10d)5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5- a]嘧啶-2-甲酸的合成
将水(10mL)和4N氢氧化锂水性溶液(2.47mL)添加至5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(2.35g)和1,4-二噁烷(100mL)的混合物中，并且在室温下搅拌17小时。添加5N盐酸(2mL)并且将反应混合物在减压下浓缩至约15mL体积。将该混合物进行超声处理并且在室温下搅拌30分钟，随后将固体通过过滤收集，用水(5mL)洗涤并在减压下干燥以获得呈淡黄色固体的标题化合物(2.24g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:2.30(s,3H),3.71(s,3H),6.47(s,1H),7.03(t,J＝9Hz,1H),7.08(s,1H),7.13-7.18(m,1H),7.34(td,J＝8,5Hz,1H),7.69(d,J＝7Hz,2H)。
(10e)2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基) 氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯的合成
依次将HOBT(57mg)、WSC(72mg)、2-((3R*,4S*)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯盐酸盐(77mg)(生产实例2)和三乙胺(101mg)添加至5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(112mg)在DMF(6mL)中的溶液，并且在室温下搅拌15小时。将乙酸乙酯(50mL)和水(20mL)添加至反应混合物中，并且将有机层用水(20mL×2)洗涤并经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(137mg)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:1.26(m,3H),1.40-1.74(m,2H),2.12-2.55(m,5H),2.60-3.11(m,4H),3.38-3.75(m,6H),4.14(m,2H),4.10-4.46(m,1H),4.54-4.95(m,1H),6.29-6.53(m,1H),6.90-7.28(m,4H),7.61-7.70(m,2H)。
(10f)2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基) 氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的合成
将氢氧化锂(10.4mg)的水性溶液(1.5mL)添加至2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯(137mg)在1.4-二噁烷(6mL)中的溶液，并且在室温下搅拌20小时。将DMSO(2mL)和乙酸(0.1mL)添加至反应混合物中，将其在减压下浓缩。将残余物通过反相硅胶柱色谱法(乙腈-水、0.1％乙酸体系)纯化以获得呈白色固体的化合物(92mg)。
1H-NMR(600MHz,CDCl3,30℃,旋转异构体的混合物)δ:1.25-1.76(m,2H),2.01-2.41(m,4H),2.47-3.14(m,4H),3.38-3.75(m,7H),4.13-4.46(m,1H),4.54-4.98(m,1H),6.29-6.57(m,1H),6.84-7.30(m,4H),7.56-7.79(m,2H)。
质谱(ESI)m/z:602(M+H)+。
(10g)(2S,3S)-3-(氰基甲基)-1-((S)-1-苯基乙基)吡咯烷-2-甲酸乙酯的合成
在氮气气氛下，将(S)-2-(丁烯-3-烯-1-基(1-苯基乙基)氨基)乙酸乙酯(CAS号186586-65-2)(60.29g)在THF(750mL)中的溶液冷却至-75℃，并且使用插管将用乙醇-干冰冷却的二异丙基酰胺锂在正己烷-THF(1.13M，245mL)中的溶液添加至该溶液中。在温度升高至-20℃并搅拌15分钟后，随后使用具有乙醇-干冰作为制冷剂的冷却槽将该反应混合物再次冷却，并且在-72℃或更低下添加溴化锌(156g)在二乙醚(800mL)中的溶液。移除冷却槽以使反应混合物回到室温，并且将该溶液搅拌1小时。使用具有含盐的冰水作为制冷剂的冷却槽，将反应混合物冷却至0℃或更低，并且添加氰化铜(I)(41.3g)、氯化锂(39.1g)和THF(750mL)的混合物。随后，添加(4-甲基苯基)磺酰氰(CAS号19158-51-1)(50.2g)在THF(200mL)中的溶液，并且在室温下搅拌14小时。在搅拌的时候，添加水(1000mL)、氨水(28％，300mL)和乙酸乙酯(1500mL)。将悬浮液通过硅藻土过滤以除去沉淀物。将滤液移至分液漏斗以将有机层从水层分离，并且将该有机层依次用氨水(10％，750mL)、水(750mL)和饱和氯化钠水性溶液(750mL)洗涤。将硅藻土和沉淀物用乙酸乙酯(500mL)洗涤4次并且合并这些洗涤溶液。使用合并的洗涤溶液，依次萃取以上4种水层(首先分离的水层、用于洗涤的氨水、用于洗涤的水和用于洗涤的饱和氯化钠水性溶液)。将有机层全部合并并且经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(42.98g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3,主要的异构体)δ:1.24(t,J＝7Hz,3H),1.36(d,J＝7Hz,3H),1.77(m,1H),2.18(m,1H),2.27(dd,J＝17,9Hz,1H),2.35(dd,J＝17,7Hz,1H),2.66(m,1H),2.95(q,J＝8Hz,1H),3.10(td,J＝9,3Hz,1H),3.42(d,J＝8Hz,1H),3.75(q,J＝7Hz,1H),4.09-4.18(m,2H),7.22-7.38(m,5H)。
(10h)2-((2S,3S)-2-羟基甲基-1-((S)-1-苯基乙基)吡咯烷-3-基)乙腈的合成
在冰冷却和氮气气氛下，将四氢硼酸锂(20g)添加至(2S,3S)-3-(氰基甲基)-1-((S)-1-苯基乙基)吡咯烷-2-甲酸乙酯(44.74g)在THF(700mL)中的溶液，并且加热至回流持续5小时。将反应混合物冷却至室温并且将其倒入1N盐酸(1000mL)和乙酸乙酯的混合物中。将反应混合物搅拌30分钟，随后添加碳酸氢钠(约100g)，并且用乙酸乙酯萃取3次和用二氯甲烷萃取2次。将有机层合并并干燥，将干燥剂过滤掉，并且随后将滤液在减压下浓缩。将残余物通过NH硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(28.98g)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3,主要的异构体)δ:1.47(d,J＝7Hz,3H),1.59(qd,J＝12,7Hz,1H),1.93(dt,J＝12,6Hz,1H),2.32-2.40(m,1H),2.46-2.63(m,3H),3.01(dd,J＝9,8Hz,1H),3.08-3.10(m,1H),3.27(d,J＝11Hz,1H),3.55(dd,J＝12,2Hz,1H),3.65(dd,J＝12,4Hz,1H),3.87(q,J＝7Hz,1H),7.26-7.36(m,5H)。
(10i)2-((3R,4S)-3-羟基-1-((S)-1-苯基乙基)哌啶-4-基)乙腈的合成
在氮气气氛下，将2-((2S,3S)-2-羟基甲基-1-((S)-1-苯基乙基)吡咯烷-3-基)乙腈(52.44g)在THF(2000mL)中的溶液冷却至-74℃或更低，并且以使内部温度不超过-73℃的方式在搅拌的时候逐滴添加三氟乙酸酐(36.4mL)。在进一步搅拌3小时后，逐滴添加三乙胺(120mL)。在搅拌15分钟后，使内部温度回到室温并且将反应混合物加热至回流持续15小时。在减压下去除溶剂，将乙酸乙酯(5000mL)和2N氢氧化钠水性溶液(500mL)添加至残余物以分离溶液。将有机层经无水硫酸镁干燥，将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过NH硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(51.25g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3,主要的异构体)δ:1.37(d,J＝7Hz,3H),1.47-1.76(m,3H),1.95(td,J＝12,3Hz,1H),2.15(dd,J＝12,1Hz,1H),2.33(dd,J＝17,8Hz,1H),2.46(dd,J＝17,7Hz,1H),2.82-2.86(m,2H),3.09-3.14(m,1H),3.56(q,J＝7Hz,1H),3.74(d,J＝10Hz,1H),7.24-7.35(m,5H)。
(10j)2-((3R,4S)-3-甲氧基-1-((S)-1-苯基乙基)哌啶-4-基)乙腈的合成
在冰冷却和氮气气氛下，在搅拌的时候经15分钟的时间将氢化钠(60％，9.19g)逐渐添加至2-((3R,4S)-3-羟基-1-((S)-1-苯基乙基)哌啶-4-基)乙腈(51.01g)和THF(750mL)的混合物中。在进一步搅拌10分钟后，逐滴添加硫酸二甲酯(22.94mL)。在搅拌5小时后，依次添加饱和的氯化铵水性溶液(50mL)、氨水(28％，50mL)和乙酸乙酯(1000mL)并且搅拌30分钟。添加1N氢氧化钠水性溶液(500mL)以分离溶液。将有机层用饱和氯化钠水性溶液(250mL)洗涤并且将合并的水层用乙酸乙酯(500mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸镁干燥，将干燥剂过滤掉并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过NH硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(47.9g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3,主要的异构体)δ:1.38(d,J＝7Hz,3H),1.53-1.59(m,1H),1.63-1.72(m,1H),1.85-1.94(m,1H),2.02-2.15(m,2H),2.30(dd,J＝17,7Hz,1H),2.49(dd,J＝17,8Hz,1H),2.74(br.d,J＝11Hz,1H),3.04(br.d,J＝11Hz,1H),3.30(s,3H),3.38(br.s,1H),3.55(q,J＝7Hz,1H),7.23-7.33(m,5H)。
(10k)2-((3R,4S)-3-甲氧基-1-((S)-1-苯基乙基)哌啶-4-基)乙酸甲酯的合成
在氮气气氛下，在冰冷却下将亚硫酰氯(352mL)逐滴添加至甲醇(1500mL)，随后添加2-((3R,4S)-3-甲氧基-1-((S)-1-苯基乙基)哌啶-4-基)乙腈(49.8g)在甲醇(50mL)中的溶液。将混合物加热至回流持续20小时，随后冰冷却，并且进一步逐滴添加亚硫酰氯(352mL)，并且加热至回流持续22小时。将反应混合物再次冰冷却，并且进一步逐滴添加亚硫酰氯(50mL)，并且加热至回流持续62小时。在使其回到室温后，将反应混合物在减压下浓缩。将残余物溶解在水(250mL)和乙酸乙酯(250mL)中，添加氨水(28％，50mL)并且随后添加2N氢氧化钠水性溶液直到pH达到11。分离溶液，将水层用乙酸乙酯萃取(500mL)，将有机层合并并经无水硫酸镁干燥，将干燥剂过滤掉并且将滤液在减压下浓缩以获得残余物A。
其次，将水层在减压下浓缩并且将甲醇(1000mL)和浓缩硫酸(50mL)添加至残余物，并且加热至回流持续22小时。使反应混合物回到室温并且用碳酸氢钠调节至pH 8。在减压下去除溶剂，将残余物溶解在乙酸乙酯(1000mL)和水(250mL)中，使用2N氢氧化钠水性溶液将pH调节至11并且分离溶液。将水层用乙酸乙酯萃取(500mL)，将有机层合并并经无水硫酸镁干燥，将干燥剂过滤掉并且将滤液在减压下浓缩以获得残余物B。
在氮气气氛下，在冰冷却下将亚硫酰氯(352mL)逐滴添加至甲醇(1500mL)并且随后添加残余物A在甲醇(100mL)中的溶液。将该混合物加热至回流持续22小时。使反应混合物回到室温，在减压下去除溶剂，将残余物溶解在乙酸乙酯(1000mL)和水(250mL)中，添加氨水(28％，50mL)，使用2N氢氧化钠水性溶液将pH调节至11并且分离溶液。将水层用乙酸乙酯萃取(500mL)，将有机层合并并经无水硫酸镁干燥，将干燥剂过滤掉并且将滤液在减压下浓缩以获得残余物C。
将在处理后第二个反应中获得的水层在减压下浓缩，添加甲醇(1000mL)和浓缩硫酸(50mL)至残余物，并且加热至回流持续22小时。使反应混合物回到室温并且用碳酸氢钠调节至pH 8。在减压下去除溶剂，将残余物溶解在乙酸乙酯(1000mL)和水(250mL)中，使用2N氢氧化钠水性溶液将pH调节至11并且分离溶液。将水层用乙酸乙酯萃取(500mL)，将有机层合并并经无水硫酸镁干燥，将干燥剂过滤掉并且将滤液在减压下浓缩以获得残余物D。
将残余物B、残余物C和残余物D合并，通过NH硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得粗的2-((3R,4S)-3-甲氧基-1-((S)-1-苯基乙基)哌啶-4-基)乙酸甲酯(52.35g)。
伴随搅拌将4N氯化氢乙酸乙酯溶液(100mL)添加至乙酸乙酯(400mL)溶液中，其中将通过相同的方法单独获得的粗的2-((3R,4S)-3-甲氧基-1-((S)-1-苯基乙基)哌啶-4-基)乙酸甲酯(1.45g)与粗的2-((3R,4S)-3-甲氧基-1-((S)-1-苯基乙基)哌啶-4-基)乙酸甲酯(52.35g)合并。将反应混合物在室温下搅拌过夜，随后将沉淀物通过过滤收集，用乙酸乙酯(100mL)洗涤并在减压下干燥。在搅拌的时候依次添加水(250mL)、乙酸乙酯(250mL)和碳酸氢钠水性溶液(250mL)以获得固体。在进一步添加乙酸乙酯(750mL)后，使用碳酸钾将pH调节至12并分离各层。将水层用乙酸乙酯(250mL)洗涤，将洗涤溶液和分离的有机层合并并且经无水硫酸镁干燥，将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将所获得的残余物(46.3g)溶解在乙酸乙酯(400mL)中，并且在搅拌的时候添加4N氯化氢乙酸乙酯溶液(80mL)。在搅拌的时候将水(250mL)和乙酸乙酯(250mL)以及碳酸氢钠依次添加至通过在室温下搅拌反应混合物过夜所获得的固体，随后通过过滤收集沉淀物，将其用乙酸乙酯(40mL)洗涤并在减压下干燥。添加水(750mL)和乙酸乙酯(750mL)以分离各层。将5N氢氧化钠水性溶液(50mL)添加至水层，将其用乙酸乙酯(1000mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸镁干燥，将干燥剂过滤掉并且将滤液在减压下浓缩以获得45.2g残余物。将该残余物与通过相同的操作单独获得的16.2g残余物合并，溶解在乙酸乙酯(500mL)中，并且在搅拌的时候添加4N氯化氢乙酸乙酯溶液(100mL)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，随后将沉淀物通过过滤收集，用乙酸乙酯(60mL)洗涤2次并且在减压下干燥。在搅拌的时候将水(800mL)和乙酸乙酯(800mL)依次添加至所获得的固体，在搅拌的时候添加碳酸氢钠并分离溶液。将5N氢氧化钠水性溶液(50mL)添加至水层，将其用乙酸乙酯(800mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸镁干燥，将干燥剂过滤掉并将滤液在减压下浓缩以获得标题化合物(60.7g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.38(d,J＝7Hz,3H),1.45-1.54(m,1H),1.57-1.67(m,1H),2.03-2.21(m,3H),2.24(dd,J＝16,7Hz,1H),2.50(dd,J＝16,7Hz,1H),2.64(br.s,1H),2.85(br.s,1H),3.27(s,3H),3.29-3.32(m,1H),3.52(q,J＝7Hz,1H),3.65(s,3H),7.23-7.33(m,5H)。
(10l)2-((3R,4S)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸甲酯盐酸盐的合成
将钯活性碳(Pd 10％)(0.639g)添加至2-((3R,4S)-3-甲氧基-1-((S)-1-苯基乙基)哌啶-4-基)乙酸甲酯(4.37g)在甲醇(50mL)中的溶液和氯化氢在甲醇(5％-10％，30mL)中的溶液的混合物中，并且在氢气气氛下在室温下搅拌16小时。而且，添加钯活性碳(Pd10％)(0.639g)并且在氢气气氛下在室温下搅拌24小时。添加钯活性碳(Pd 10％)(0.639g)并且在氢气气氛下在室温下进一步搅拌24小时。将混合物通过硅藻土过滤并且用甲醇洗涤该硅藻土。将滤液和洗涤溶液合并并且在减压下浓缩以获得标题化合物(3.81g)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:1.71-1.85(m,2H),2.16-2.25(m,1H),2.25(dd,J＝16,7Hz,1H),2.53(dd,J＝16,7Hz,1H),3.00-3.06(m,2H),3.27(m,1H),3.40(s,3H),3.59-3.63(m,2H),3.67(s,3H)。
(10m)2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)氨 基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸甲酯的合成
将HOBT(2.280g)和WSC(3.23g)添加至5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(6.03g)(实例10-(10d))在DMF(100mL)中的溶液，搅拌15分钟，随后依次添加2-((3R,4S)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸甲酯盐酸盐(3.36g)在DMF(50mL)和三乙胺(5.64mL)中的溶液，并且在室温下搅拌3小时。将乙酸乙酯(700mL)和水(500mL)添加至反应混合物中，并且将有机层用含有少量氯化钠的水(750mL)洗涤2次。将水层和洗涤溶液依次用乙酸乙酯(750mL)萃取，将有机层合并并且经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(5.83g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:1.25-1.75(m,2H),2.05-2.95(m,9H),3.38-3.75(m,9H),4.10-4.46(m,1H),4.54-4.95(m,1H),6.37-6.50(m,1H),6.90-7.28(m,4H),7.64-7.76(m,2H)。
(10n)2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)氨 基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的合成
将水(30mL)和4N氢氧化锂水性溶液(3.49mL)添加至2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸甲酯(5.73g)在1.4-二噁烷(150mL)中的溶液，并且在室温下搅拌14小时。将DMSO(10mL)和甲酸(3mL)添加至反应混合物中，将其在减压下浓缩。将残余物通过反相硅胶柱色谱法(乙腈-水、0.1％乙酸体系)纯化以获得呈固体的标题化合物(5.124g)。
1H-NMR(500MHz,CD3OD,旋转异构体的混合物)δ:1.24-1.60(m,2H),2.00-2.47(m,4H),2.48-3.12(m,4H),3.31-3.64(m,7H),4.00-4.34(m,1H),4.34-4.65(m,1H),6.84-6.87(m,1H),6.90-7.35(m,4H),7.98-8.01(m,2H)。
[α]D 20:-109.9°(100mg,DMSO,5mL,100mm)。
实例11
2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3-氟苯基)-7-((2-氯-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑 并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的合成
(11a)5-氯-7-((2-氯-6-甲基苯基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯的合成
在140℃下搅拌5,7-二氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(CAS号1232224-62-2)(2.9g)和2-氯-6-甲基苯胺(CAS号87-63-8)(1.6g)在NMP(1.1mL)中的溶液持续4小时。将反应混合物冷却，随后用乙酸乙酯稀释，将沉淀物通过过滤收集并且用二乙醚洗涤。将饱和碳酸氢钠水性溶液添加至滤液中，并且将水层用乙酸乙酯萃取。将有机层合并并且经无水硫酸钠干燥。在将干燥剂过滤掉后，将滤液在减压下浓缩并且将残余物通过硅胶柱色谱法(己烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(3.44g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.47(t,J＝7Hz,3H),2.33(s,3H),4.51(q,J＝7Hz,2H),5.65(s,1H),7.02(s,1H),7.30(dd,J＝8,2Hz,1H),7.34(t,J＝8Hz,1H),7.44(dd,J＝8,2Hz,1H),7.98(br.s,1H)。
(11b)5-氯-7-((2-氯-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 的合成
将碳酸钾(1.14g)和碘甲烷(0.86mL)添加至5-氯-7-((2-氯-6-甲基苯基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(2.00g)在DMF(50mL)中的溶液并且搅拌3天。将乙酸乙酯(300mL)和水(100mL)添加至反应混合物中，并且将有机层用水(2×100mL)洗涤并经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得呈淡黄色固体的标题化合物(1.89g)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3,55℃,旋转异构体的混合物)δ:1.35(br.s,3H),2.27(s,3H),3.83(br.s,3H),4.34(br.s,2H),5.68(br.s,1H),6.85(s,1H),7.20-7.41(m,3H)。
(11c)5-(4-氯-3-氟苯基)-7-((2-氯-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧 啶-2-甲酸乙酯的合成
在氮气气氛下，将水(5mL)、碳酸钠(0.63g)、4-氯-3-氟苯基硼酸(CAS号137504-86-0)(0.52g)和四(三苯基膦)钯(0)(0.14g)添加至5-氯-7-((2-氯-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(0.94g)和1,4-二噁烷(40mL)的混合物中，并且在90℃下搅拌18小时。在使反应混合物回到室温后，向其中添加乙酸乙酯(200mL)和水(100mL)，并且将有机层分离并经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得呈淡黄色固体的标题化合物(0.99g)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3,55℃,旋转异构体的混合物)δ:1.37(t,J＝7Hz,3H),2.29(s,3H),3.88(s,3H),4.36(q,J＝7Hz,2H),6.07(br.s,1H),6.98(s,1H),7.20-7.27(m,2H),7.34(m,1H),7.43(t,J＝8Hz,1H),7.62(br.d,J＝6Hz,1H),7.73(br.d,J＝10Hz,1H)。
(11d)5-(4-氯-3-氟苯基)-7-((2-氯-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧 啶-2-甲酸的合成
将水(5mL)和4N氢氧化锂水性溶液(1.01mL)添加至5-(4-氯-3-氟苯基)-7-((2-氯-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(0.96g)和1,4-二噁烷(40mL)，并且在室温下搅拌15小时。添加乙酸(0.2mL)和5N盐酸(0.5mL)并且将反应混合物在减压下浓缩至约5mL体积。将固体通过过滤收集，用水(5mL)洗涤并且在减压下干燥。获得呈白色固体的标题化合物(0.83g)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3,55℃,旋转异构体的混合物)δ:2.28(s,3H),3.68(br.s,3H),6.45(br.s,1H),7.02(s,1H),7.23-7.34(m,3H),7.50(t,J＝8Hz,1H),7.76(br.s,1H),7.85(br.s,1H)。
(11e)2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3-氟苯基)-7-((2-氯-6-甲基苯基)(甲基)氨 基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯的合成
将HOBT(57mg)、WSC(72mg)、2-((3R*,4S*)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯盐酸盐(77mg)(生产实例2)和三乙胺(101mg)依次添加至5-(4-氯-3-氟苯基)-7-((2-氯-6-甲基苯基(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(111mg)在DMF(5mL)中的溶液，并且在室温下搅拌15小时。将乙酸乙酯(50mL)和水添加至反应混合物中，并且将有机层用水(25mL×2)洗涤并经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(120mg)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD,旋转异构体的混合物)δ:1.24(m,3H),1.24-1.58(m,2H),2.03-2.48(m,6H),2.60-3.08(m,3H),3.30-3.34(m,3H),3.52-3.55(m,3H),3.99-4.52(m,2H),4.12(q,J＝7Hz,2H),6.79-6.82(m,1H),6.96-6.98(m,1H),7.23-7.39(m,3H),7.64(t,J＝8Hz,1H),8.01(d,J＝8Hz,1H),8.09(d,J＝8Hz,1H)。
(11f)2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3-氟苯基)-7-((2-氯-6-甲基苯基)(甲基)氨 基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的合成
将4N氢氧化锂水性溶液(0.057mL)添加至2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3-氟苯基)-7-((2-氯-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯(36mg)、水(2mL)、THF(2mL)和甲醇(2mL)的混合物中，并且在室温下搅拌15小时。将乙酸(0.057mL)添加至反应混合物中，将其在减压下浓缩。将残余物通过反相高效液相色谱法(乙腈-水、0.1％乙酸体系)纯化以获得呈白色固体的标题化合物(30mg)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD,旋转异构体的混合物)δ:1.20-1.58(m,2H),2.00-2.48(m,6H),2.55-3.10(m,3H),3.29-3.58(m,6H),3.99-4.54(m,2H),6.79-6.81(m,1H),6.95-6.97(m,1H),7.22-7.38(m,3H),7.63(t,J＝8Hz,1H),8.01(d,J＝9Hz,1H),8.09(d,J＝11Hz,1H)。
实例12
2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氯-6-甲基苯基)(甲基)氨基) 吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的合成
(12a)5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氯-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5- a]嘧啶-2-甲酸乙酯的合成
在氮气气氛下，将水(5mL)、碳酸钠(0.63g)、4-氯-3,5-二氟苯基硼酸(0.57g)和四(三苯基膦)钯(0)(0.14g)添加至5-氯-7-((2-氯-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(0.94g)(实例11-(11b))和1,4-二噁烷(40mL)的混合物中，并且在90℃下搅拌18小时。在使反应混合物回到室温后，向其中添加乙酸乙酯(200mL)和水(100mL)，并且将有机层分离并经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得呈固体的标题化合物(0.99g)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3,55℃,旋转异构体的混合物)δ:1.37(t,J＝7Hz,3H),2.29(s,3H),3.89(s,3H),4.37(q,J＝7Hz,2H),6.02(br.s,1H),6.99(s,1H),7.25-7.29(m,2H),7.34(m,1H),7.55(br.d,J＝7Hz,2H)。
(12b)5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氯-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5- a]嘧啶-2-甲酸的合成
将水(5mL)和4N氢氧化锂水性溶液(0.98mL)添加至5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氯-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(0.96g)和1,4-二噁烷(40mL)的混合物中，并且在室温下搅拌15小时。添加乙酸(0.2mL)和5N盐酸(0.5mL)并且将反应混合物在减压下浓缩至约5mL体积。将固体通过过滤收集，用水(5mL)洗涤并且在减压下干燥。获得呈白色固体的标题化合物(0.88g)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3,55℃,旋转异构体的混合物)δ:2.28(s,3H),3.68(br.s,3H),6.40(br.s,1H),7.03(s,1H),7.25-7.35(m,3H),7.68(br.s,2H)。
(12c)2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氯-6-甲基苯基)(甲基) 氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯的合成
将HOBT(57mg)、WSC(72mg)、2-((3R*,4S*)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯盐酸盐(77mg)(生产实例2)和三乙胺(101mg)依次添加至5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氯-6-甲基苯基(甲基)氨基)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(116mg)在DMF(5mL)中的溶液，并且在室温下搅拌15小时。将乙酸乙酯(50mL)和水(25mL)添加至反应混合物中，并且将有机层用水(25mL×2)洗涤并经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(125mg)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD,旋转异构体的混合物)δ:1.24(m,3H),1.24-1.58(m,2H),2.00-2.48(m,6H),2.55-3.07(m,3H),3.30-3.40(m,3H),3.52-3.56(m,3H),3.98-4.52(m,2H),4.12(q,J＝7Hz,2H),6.80-83(m,1H),6.98(m,1H),7.21-7.39(m,3H),7.32(br.d,J＝9Hz,2H)。
(12d)2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氯-6-甲基苯基)(甲基) 氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的合成
将4N氢氧化锂水性溶液(0.053mL)添加至2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氯-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯(34mg)、水(2mL)、THF(2mL)和甲醇(2mL)的混合物中，并且在室温下搅拌15小时。将乙酸(0.053mL)添加至反应混合物中，将其在减压下浓缩。将残余物通过反相高效液相色谱法(乙腈-水、0.1％乙酸体系)纯化以获得标题化合物(36mg)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD,旋转异构体的混合物)δ:1.20-1.58(m,2H),2.00-2.48(m,6H),2.55-3.08(m,3H),3.29-3.58(m,6H),3.99-4.54(m,2H),6.81-6.84(m,1H),6.99-7.01(m,1H),7.25-7.39(m,3H),8.03(d,J＝9Hz,2H)。
实例13
2-((3R*,4S*)-1-(7-((2-氯-6-氟苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑 并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸的合成
(13a)5-氯-7-((2-氯-6-氟苯基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯的合成
将叔丁醇钾(0.070g)添加至2-氯-6-氟苯胺(CAS号363-51-9)(0.090g)和THF(5mL)的混合物中，并且在室温下搅拌15分钟。添加5,7-二氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(CAS号1232224-62-2)(0.100g)并且在50℃下加热搅拌1小时。添加饱和氯化铵水性溶液以将有机层与水层分离。将水层用乙酸乙酯萃取，将有机层合并并且经无水硫酸钠干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得呈淡黄色固体的标题化合物(0.063g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.46(t,J＝7Hz,3H),4.30(q,J＝7Hz,2H),5.87(s,1H),7.04(s,1H),7.23-7.27(m,1H),7.40-7.43(m,2H),7.98(br.s,1H)。
(13b)5-氯-7-((2-氯-6-氟苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯的 合成
将碳酸钾(0.050g)和碘甲烷(0.050mL)添加至5-氯-7-((2-氯-6-氟苯基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(0.063g)在DMF(2mL)中的溶液，并且在50℃下搅拌3小时。将饱和氯化铵水性溶溶液和乙酸乙酯添加至反应混合物中以将有机层与水层分离。将水层用乙酸乙酯萃取，将有机层合并并且经无水硫酸钠干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(0.047g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.31(t,J＝7Hz,3H),3.64(br.s,3H),4.28(q,J＝7Hz,2H),6.11(br.s,1H),6.87(s,1H),7.12(td,J＝9,2Hz,1H),7.28(br.d,J＝9Hz,1H),7.34(td,J＝9,6Hz,1H)。
(13c)7-((2-氯-6-氟苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧 啶-2-甲酸乙酯的合成
在氮气气氛下，将水(0.2mL)、碳酸钾(0.030g)、3,4,5-三氟苯基硼酸(0.025g)和四(三苯基膦)钯(0)(0.010g)添加至5-氯-7-((2-氯-6-氟苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(0.047g)和1,4-二噁烷(2mL)的混合物中，并且在80℃下搅拌3小时。将反应混合物在减压下浓缩并且将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得呈白色固体的标题化合物(0.052g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.32(t,J＝7Hz,3H),3.72(br.s,3H),4.30(q,J＝7Hz,2H),6.42(br.s,1H),7.00(s,1H),7.13(td,J＝9,2Hz,1H),7.28(br.d,J＝9Hz,1H),7.34(td,J＝9,6Hz,1H),7.70(m,2H)。
(13d)7-((2-氯-6-氟苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧 啶-2-甲酸的合成
将5N氢氧化钠水性溶液(0.10mL)添加至7-((2-氯-6-氟苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(0.052g)、THF(1mL)和乙醇(1mL)的混合物中，并且在室温下搅拌1小时。将5N盐酸、乙酸乙酯和水添加至反应混合物中以将有机层与水层分离。将水层用乙酸乙酯萃取，将有机层合并并且经无水硫酸钠干燥。将干燥剂过滤掉并且将滤液在减压下浓缩以获得呈白色固体的标题化合物(0.047g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:3.66(s,3H),6.62(s,1H),7.08(s,1H),7.14(td,J＝8,1Hz,1H),7.32(br.d,J＝8Hz,1H),7.39(td,J＝8,6Hz,1H),7.76(dd,J＝9,7Hz,2H)。
(13e)2-((3R*,4S*)-1-(7-((2-氯-6-氟苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基) 吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸乙酯的合成
将HOBT(0.063g)、WSC(0.079g)、2-((3R*,4S*)-3-氟哌啶-4-基)乙酸乙酯氢溴酸盐(0.082g)(生产实例1)和三乙胺(0.111g)依次添加至7-((2-氯-6-氟苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(0.124g)在DMF(5mL)中的溶液，并且在室温下搅拌15小时。将乙酸乙酯(60mL)和水(30mL)添加至反应混合物中，并且将有机层用水(30mL×2)洗涤并经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得呈白色固体的标题化合物(0.125g)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:1.26-1.32(m,3H),1.40-1.52(m,1H),1.60-1.71(m,1H),2.08-2.23(m,1H),2.30(td,J＝14,6Hz,1H),2.53(m,1H),2.65-2.90(m,2H),3.60(m,3H),4.10-4.21(m,2H),4.36-5.04(m,3H),6.54-7.09(m,3H),7.24-7.31(m,2H),7.71-7.79(m,2H)。
(13f)2-((3R*,4S*)-1-(7-((2-氯-6-氟苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基) 吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸的合成
将氢氧化锂(0.0096g)水性溶液(2mL)添加至2-((3R*,4S*)-1-(7-((2-氯-6-氟苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸乙酯(0.125g)在1,4-二噁烷(6mL)中的溶液，并且在室温下搅拌15小时。将DMSO(2mL)和乙酸(0.1mL)添加至反应混合物中，将其在减压下浓缩。将残余物通过反相硅胶柱色谱法(乙腈-水、0.1％乙酸体系)纯化，将包含标题化合物的级分合并并且在减压下浓缩至5mL体积。将沉淀物通过过滤收集，用水(5mL)洗涤并且在减压下干燥以获得呈白色固体的标题化合物(0.104g)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:1.43-1.51(m,1H),1.62-1.73(m,1H),2.09-2.22(m,1H),2.34-2.42(m,1H),2.58-2.91(m,3H),3.60(s,1.5H),3.61(s,1.5H),4.38-5.05(m,3H),6.54(s,0.5H),6.56(s,0.5H),6.99(s,0.5H),7.02(s,0.5H),7.02-7.09(m,1H),7.25-7.30(m,2H),7.72-7.78(m,2H)。
质谱(ESI)m/z:594/596(M+H)+
实例14
2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氯苯基)(甲基)氨基)吡唑并 [1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸的合成
(14a)5-氯-7-((2-氯苯基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯的合成
将5,7-二氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(CAS号1232224-62-2)(1.7g)和2-氯苯胺(CAS号95-51-2)(0.92g)在NMP(1.3mL)中的溶液在120℃下加热搅拌1小时并在130℃下加热搅拌2小时。使反应混合物冷却，随后用乙酸乙酯稀释并进行超声处理。将固体通过过滤收集，用乙酸乙酯洗涤并在减压下干燥以获得呈淡黄色固体的标题化合物(1.3g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.46(t,J＝7Hz,3H),4.50(q,J＝7Hz,2H),6.20(s,1H),7.03(s,1H),7.36(td,J＝8,2Hz,1H),7.44(td,J＝8,2Hz,1H),7.53(dd,J＝8,2Hz,1H),7.59(dd,J＝8,2Hz,1H),8.29(br.s,1H)。
(14b)5-氯-7-((2-氯苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯的合成
将碳酸钾(0.61g)和碘甲烷(0.46mL)添加至5-氯-7-((2-氯苯基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(1.30g)在DMF(10mL)中的溶液，并且在50℃下加热搅拌3小时。将乙酸乙酯添加至反应混合物中，将其用饱和氯化钠水性溶液洗涤2次。将有机层经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得呈淡黄色固体的标题化合物(1.21g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.35(t,J＝7Hz,3H),3.83(s,3H),4.35(q,J＝7Hz,2H),5.85(s,1H),6.89(s,1H),7.34-7.41(m,3H),7.49-7.52(m,1H)。
质谱(ESI)m/z:365/367(M+H)+
(14c)5-氯-7-((2-氯苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸的合成
将5N氢氧化钠水性溶液(2.0mL)添加至5-氯-7-((2-氯苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(1.2g)在1,4-二噁烷中的溶液，并且在105℃下加热搅拌2小时。使反应混合物冷却，用5N盐酸使其呈弱酸性并且用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉并且将滤液在减压下浓缩以获得呈淡黄色固体的标题化合物的粗产物(1.2g)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:3.64(s,3H),6.34(s,1H),6.83(s,1H),7.38-7.45(m,2H),7.51-7.57(m,2H),13.10(br.s,1H)。
质谱(ESI)m/z:337/339(M+H)+
(14d)5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氯苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶- 2-甲酸的合成
将水(2mL)、碳酸钠(0.20g)，4-氯-3,5-二氟苯基硼酸(0.14g)和四(三苯基膦)钯(0)(0.048g)添加至5-氯-7-((2-氯苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(0.19g)和1,4-二噁烷(10mL)的混合物中，并且在95℃下搅拌2小时。将乙酸乙酯(100mL)、水(50mL)和5N盐酸(50mL)添加至反应混合物中，并且将有机层分离并经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，将反应混合物在减压下浓缩并且将残余物通过反相硅胶柱色谱法(乙腈-水，0.1％乙酸体系)纯化以获得标题化合物(0.188g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:3.74(s,3H),6.53(s,1H),7.08(s,1H),7.34-7.43(m,3H),7.51-7.54(m,1H),7.71(d,J＝8Hz,2H)。
(14e)2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氯苯基)(甲基)氨基)吡 唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸乙酯的合成
将HOBT(0.063g)、WSC(0.079g)、2-((3R*,4S*)-3-氟哌啶-4-基)乙酸乙酯氢溴酸盐(0.082g)(生产实例1)和三乙胺(0.111g)依次添加至5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氯苯基(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(0.124g)在DMF(5mL)中的溶液，并且在室温下搅拌15小时。将乙酸乙酯(60mL)和水(30mL)添加至反应混合物中，并且将有机层用水(30mL x 2)洗涤并经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得呈白色固体的标题化合物(163mg)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:1.26-1.32(m,3H),1.40-1.52(m,1H),1.60-1.71(m,1H),2.08-2.23(m,1H),2.26-2.35(m,1H),2.53(m,1H),2.66-2.91(m,2H),3.65(s,1.2H),3.66(s,1.8H),4.10-4.21(m,2H),4.39-5.06(m,3H),6.48(s,0.6H),6.50(s,0.4H),7.01(s,0.4H),7.03(s,0.6H),7.15-7.23(m,1H),7.26-7.32(m,2H),7.47-7.52(m,1H),7.68-7.72(m,2H)。
(14f)2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氯苯基)(甲基)氨基)吡 唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸的合成
将氢氧化锂(0.0126g)水性溶液(2mL)添加至2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氯苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸乙酯(0.163g)在1.4-二噁烷(6mL)中的溶液，并且在室温下搅拌15小时。将DMSO(2mL)和乙酸(0.1mL)添加至反应混合物中，将其在减压下浓缩。将残余物通过反相硅胶柱色谱法(乙腈-水、0.1％乙酸体系)纯化，将包含标题化合物的级分合并并且在减压下浓缩至5mL体积。将沉淀物通过过滤收集，用水(5mL)洗涤并且在减压下干燥以获得呈白色固体的标题化合物(0.132g)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:1.44-1.54(m,1H),1.63-1.73(m,1H),2.09-2.23(m,1H),2.38(ddd,J＝17,11,7Hz,1H),2.60(ddd,J＝17,10,7Hz,1H),2.67-2.92(m,2H),3.65(s,1.2H),3.67(s,1.8H),4.42-5.07(m,3H),6.48(s,0.6H),6.51(s,0.4H),7.02(s,0.4H),7.04(s,0.6H),7.15-7.23(m,1H),7.26-7.32(m,2H),7.47-7.52(m,1H),7.68-7.72(m,2H)。
质谱(ESI)m/z:592/594(M+H)+
实例15
2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丙基(丙基)氨基)吡唑并[1, 5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸的合成
(15a)5-氯-7-(异丙基(丙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯的合成
将N-异丙基丙胺(CAS号21968-17-2)(0.32g)添加至5,7-二氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(CAS号1232224-62-2)(0.78g)、三乙胺(1.47mL)和THF(15mL)的混合物中，并且在室温下搅拌过夜。将乙酸乙酯(100mL)和饱和氯化铵水性溶液(50mL)添加至反应混合物中，并且将有机层分离并经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得呈淡黄色液体的标题化合物(0.71g)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ:0.94(t,J＝7Hz,3H),1.35(d,J＝7Hz,6H),1.42(t,J＝7Hz,3H),1.60(m,2H),3.55(m,2H),4.43(q,J＝7Hz,2H),4.95(m,1H),6.06(s,1H),6.89(s,1H)。
(15b)5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丙基(丙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲 酸乙酯的合成
将5-氯-7-(异丙基(丙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(0.64g)、1,4-二噁烷(9mL)、水(1mL)、碳酸钠(0.31g)、4-氯-3,5-二氟苯基硼酸(0.42g)和四(三苯基膦)钯(0)(0.23g)的混合物在80℃下搅拌3小时。将反应混合物通过NH硅胶过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(0.68g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:0.96(t,J＝7Hz,3H),1.39(d,J＝7Hz,6H),1.44(t,J＝7Hz,3H),1.62(m,2H),3.61(m,2H),4.45(q,J＝7Hz,2H),5.01(m,1H),6.41(s,1H),7.05(s,1H),7.67(d,J＝7Hz,2H)。
(15c)5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丙基(丙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲 酸的合成
将5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丙基(丙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(0.68g)、1,4-二噁烷(20mL)、水(4mL)和4N氢氧化锂水性溶液(1.5mL)在室温下搅拌过夜。添加2N盐酸(3mL)，将反应混合物在减压下浓缩并且将沉淀物通过过滤收集。将残余物用水洗涤并在减压下干燥以获得标题化合物(0.60g)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:0.86(t,J＝7Hz,3H),1.30(d,J＝7Hz,6H),1.48(m,2H),3.69(t,J＝7Hz,2H),5.02(m,1H),6.91(s,1H),6.99(s,1H),8.17(d,J＝9Hz,2H)。
质谱(ESI)m/z:409(M+H)+
(15d)2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丙基(丙基)氨基)吡唑 并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸乙酯的合成
将HOBT(0.079g)、WSC(0.099g)、2-((1α,5α,6α)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸乙酯盐酸盐(0.085g)(通过常规方法将2-(1α,5α,6α)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸乙酯(CAS号1251668-97-9)(WO 2010/116328)转化为其盐酸盐)和三乙胺(0.105g)添加至5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丙基(丙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(141mg)在DMF(5mL)中的溶液，并且在室温下搅拌15小时。将乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)添加至反应混合物中，并且将有机层用水(50mL×2)洗涤并经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得呈无色液体的标题化合物(0.127g)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ:0.95(t,J＝7Hz,3H),0.95-1.00(m,1H),1.26(t,J＝7Hz,3H),1.35(d,J＝7Hz,3H),1.36(d,J＝7Hz,3H),1.50-1.53(m,1H),1.55-1.57(m,1H),1.61(m,2H),2.24(dd,J＝16,8Hz,1H),2.36(dd,J＝16,7Hz,1H),3.47-3.57(m,2H),3.65(dd,J＝13,4Hz,1H),3.97(dd,J＝12,4Hz,1H),4.14(q,J＝7Hz,2H),4.19(d,J＝13Hz,1H),4.36(d,J＝12Hz,1H),5.11(m,1H),6.40(s,1H),7.03(s,1H),7.67(d,J＝8Hz,2H)。
(15e)2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丙基(丙基)氨基)吡唑 并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸的合成
将氢氧化锂(0.0109g)水性溶液(2mL)添加至2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丙基(丙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸乙酯(0.127g)在1.4-二噁烷(6mL)中的溶液，并且在室温下搅拌16小时。将DMSO(1mL)和乙酸(0.06mL)添加至反应混合物中，将其在减压下浓缩。将残余物通过反相硅胶柱色谱法(乙腈-水、0.1％乙酸体系)纯化以获得呈黄色固体的标题化合物(0.111g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:0.95(t,J＝7Hz,3H),0.94-1.00(m,1H),1.34-1.37(m,6H),1.53-1.65(m,4H),2.30(dd,J＝16,8Hz,1H),2.42(dd,J＝16,7Hz,1H),3.50-3.53(m,2H),3.65(dd,J＝13,4Hz,1H),3.97(dd,J＝12,4Hz,1H),4.21(d,J＝13Hz,1H),4.38(d,J＝12Hz,1H),5.11(m,1H),6.39(s,1H),7.03(s,1H),7.67(d,J＝8Hz,2H)。
实例16
2-((1α,5α,6α)-3-(7-(异丁基((S)-1-苯基乙基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡 唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸的合成
(16a)(S)-5-氯-7-((1-苯基乙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯的合成
将三乙胺(10mL)添加至5,7-二氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(CAS号1232224-62-2)(5g)、THF(75mL)和(S)-(-)-α-甲基苄胺(CAS号2627-86-3)(2.50g)的混合物中，并且在室温下搅拌过夜。将乙酸乙酯和水添加至反应混合物中，并且将有机层用饱和氯化钠水性溶液洗涤并经无水硫酸钠干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过NH硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得呈无色液体的标题化合物(6.47g)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:1.35(t,J＝7Hz,3H),1.66(d,J＝7Hz,3H),4.39(q,J＝7Hz,2H),5.03(q,J＝7Hz,1H),6.25(s,1H),6.86(s,1H),7.27(t,J＝7Hz,1H),7.36(t,J＝7Hz,2H),7.54(d,J＝7Hz,2H)。
(16b)(S)-5-氯-7-((1-苯基乙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸的合成
将5N氢氧化钠水性溶液(15mL)添加至(S)-5-氯-7-((1-苯基乙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(6.45g)和乙醇(100mL)的混合物中，并且在50℃下加热搅拌30分钟。在冷却后，添加5N盐酸(14mL)和水并且在室温下搅拌。将沉淀物通过过滤收集，用水洗涤并且在减压下干燥。获得呈白色固体的标题化合物(5.81g)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:1.66(d,J＝7Hz,3H),5.03(五重峰,J＝7Hz,1H),6.23(s,1H),6.81(s,1H),7.27(t,J＝8Hz,1H),7.36(t,J＝8Hz,2H),7.53(d,J＝8Hz,2H),8.79(d,J＝7Hz,1H),13.40(br.s,1H)。
(16c)2-((1α,5α,6α)-3-(5-氯-7-(((S)-1-苯基乙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶- 2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸乙酯的合成
将三乙胺(2.5mL)添加至(S)-5-氯-7-((1-苯基乙基)(氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(1g)、DMF(20mL)、HOBT(0.7g)、WSC(1g)和2-((1α,5α,6α)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸乙酯盐酸盐(0.7g)的混合物中，并且在室温下搅拌23小时。将乙酸乙酯和水添加至反应混合物中。将有机层用饱和氯化钠水性溶液洗涤并经无水硫酸钠干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得呈无色液体的标题化合物(1.02g)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:0.72-0.79(m,1H),1.18(t,J＝7Hz,3H),1.50-1.60(m,2H),1.66(d,J＝7Hz,3H),2.27-2.39(m,2H),3.47-3.52(m,1H),3.84-4.09(m,5H),5.01-5.08(m,1H),6.19(s,1H),6.85(s,1H),7.27(t,J＝8Hz,1H),7.36(td,J＝8,2Hz,2H),7.51(d,J＝8Hz,2H),8.58(br.s,1H)。
(16d)2-((1α,5α,6α)-3-(5-氯-7-(异丁基((S)-1-苯基乙基)氨基)吡唑并[1,5- a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸乙酯的合成
将1-碘-2-甲基丙烷(1.5mL)添加至2-((1α,5α,6α)-3-(5-氯-7-(((S)-1-苯基乙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸乙酯(1.02g)、DMF(10mL)和碳酸铯(2g)的混合物中，并且在70℃下搅拌14小时。将反应混合物冷却并且添加乙酸乙酯和水。将有机层用饱和氯化钠水性溶液洗涤并经无水硫酸钠干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得呈黄色固体的标题化合物(0.46g)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6,旋转异构体的混合物)δ:0.71(m,3H),0.73(m,1H),0.80(m,3H),1.15(m,3H),1.48-1.56(m,2H),1.73(m,3H),1.81(m,1H),2.24-2.35(m,2H),2.79-2.87(m,1H),2.95(dd,J＝15,5Hz,1H),3.50(dt,12,5Hz,1H),3.84-3.94(m,2H),4.00-4.07(m,2H),4.21(dd,J＝11,4Hz,1H),6.20(m,1H),6.57(s,0.5H),6.58(s,0.5H),6.84(m,1H),7.28-7.41(m,5H)。
(16e)2-((1α,5α,6α)-3-(7-(异丁基((S)-1-苯基乙基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯 基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸乙酯的合成
将2-((1α,5α,6α)-3-(5-氯-7-(异丁基((S)-1-苯基乙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸乙酯(0.050g)、甲苯(0.9mL)、2N碳酸钠水性溶液(0.12mL)、3,4,5-三氟苯基硼酸(0.020g)和四(三苯基膦)钯(0)(0.015g)在100℃下搅拌17小时。将反应混合物在减压下浓缩，将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物的粗产物。
1H-NMR(500MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:0.78(m,3H),0.89(m,3H),0.92-0.96(m,1H),1.24(m,3H),1.47-1.56(m,2H),1.77(m,3H),1.96(m,1H),2.21-2.34(m,2H),2.81-2.93(m,2H),3.64(dt,J＝12,4Hz,1H),3.96(dt,J＝12,4Hz,1H),4.12(m,2H),4.19(d,J＝12Hz,1H),4.35(dd,J＝12,7Hz,1H),6.25-6.36(m,2H),7.13(s,0.5H),7.14(s,0.5H),7.28-7.54(m,5H),7.66(m,2H)。
(16f)2-((1α,5α,6α)-3-(7-(异丁基((S)-1-苯基乙基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯 基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸的合成
将5N氢氧化钠水性溶液(0.15mL)添加至在(16e)中获得的2-((1α,5α,6α)-3-(7-(异丁基((S)-1-苯基乙基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸乙酯的粗产物和乙醇(1mL)的混合物中，并且在室温下搅拌1小时。添加5N盐酸(0.15mL)和水，将沉淀物通过过滤收集，用水洗涤并且在减压下干燥。获得呈白色固体的标题化合物(0.042g)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:0.78(m,3H),0.90(m,3H),0.93-0.98(m,1H),1.48-1.54(m,2H),1.76(m,3H),1.91-1.98(m,1H),2.27-2.38(m,2H),2.82-2.93(m,2H),3.64(dt,J＝13,4Hz,1H),3.96(br.d,J＝12Hz,1H),4.20(d,J＝13Hz,1H),4.37(t,J＝12Hz,1H),6.32(m,1H),6.35(s,0.5H),6.36(s,0.5H),7.12(s,0.5H),7.13(s,0.5H),7.27-7.34(m,5H),7.66(m,2H)。
实例17
2-(1-(7-((2-氯-6-氟苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧 啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸的合成
在40℃下将7-((2-氯-6-氟苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(实例13-(13d))(0.023g)、4-哌啶乙酸乙酯(CAS号59184-90-6)(0.012g)、HOBT(0.012g)、WSC(0.015g)、三乙胺(0.030mL)和DMF(2mL)搅拌3小时。将反应混合物在减压下浓缩，将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得2-(1-(7-((2-氯-6-氟苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸乙酯的粗产物。向其中添加乙醇(1.5mL)和5N氢氧化钠水性溶液(0.100mL)并且在室温下搅拌1小时，向其中添加5N盐酸。将反应混合物在减压下浓缩并且将残余物通过反相高效液相色谱法(乙腈-水体系)纯化以获得标题化合物(22mg)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ:0.83-0.97(m,1H),1.13(qd,J＝12,4Hz,1H),1.63(d,J＝13Hz,1H),1.81(d,J＝13Hz,1H),1.91-2.05(m,1H),2.15-2.32(m,2H),2.67-2.70(m,2H),3.60(s,3H),4.11(d,J＝13Hz,1H),4.54(d,J＝13Hz,1H),6.81(s,1H),7.06(s,1H),7.18(br.t,J＝8Hz,1H),7.33-7.42(m,2H),8.00-8.09(m,2H)。
实例18
2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丙基(丙基)氨基)吡唑并[1,5- a]嘧啶-2-羰基)-3-甲基哌啶-4-基)乙酸的合成
将三乙胺(0.060mL)添加至5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丙基(丙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(0.030g)(实例15-(15c))、2-((3R*,4S*)-3-甲基哌啶-4-基)乙酸异丙酯盐酸盐(0.020g)(生产实例5)、HOBT(0.028g)、WSC(0.040g)和DMF(0.6mL)的混合物中，并且在室温下搅拌17小时。将水和乙酸乙酯添加至反应混合物以分离有机层，将其在氮气流下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丙基(丙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲基哌啶-4-基)乙酸异丙酯的粗产物。向其中添加乙醇(0.700mL)和5N氢氧化钠水性溶液(0.100mL)并且在室温下搅拌3.5小时，向其中添加5N盐酸(0.100mL)。将沉淀物通过过滤收集，用水洗涤并且在减压下干燥以获得标题化合物(36mg)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6,旋转异构体的混合物)δ:0.73-0.87(m,6H),1.23-1.29(m,6H),1.40-1.58(m,4H),1.83-2.22(m,4H),2.99-3.44(m,2H),3.60-3.71(m,2H),3.99-4.31(m,2H),4.95-5.06(m,1H),6.72(s,0.45H),6.74(s,0.55H),6.99(s,1H),8.17(d,J＝9Hz,2H)。
质谱(ESI)m/z:548(M+H)+
参考实例1
(S)-2-(1-(7-(甲基(1-苯基乙基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧 啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸的合成
(19a)(S)-5-氯-7-(甲基(1-苯基乙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯的 合成
将(S)-N-甲基-1-苯乙胺(CAS号19131-99-8)(1.716g)和三乙胺(3.22mL)添加至5,7-二氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(3g)在THF(95mL)中的溶液，并且在室温下搅拌过夜。添加乙酸乙酯和水以分离溶液。将有机层用盐水洗涤并经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(4.08g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.41(t,J＝7Hz,3H),1.75(d,J＝7Hz,3H),2.83(s,3H),4.43(qd,J＝7,1Hz,2H),6.03(s,1H),6.60(q,J＝7Hz,1H),6.97(s,1H),7.28-7.45(m,5H)。
(19b)(S)-7-(甲基(1-苯基乙基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧 啶-2-甲酸乙酯的合成
将2N碳酸钠水性溶液(40mL)添加至(S)-5-氯-7-(甲基(1-苯基甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(13.95g)、甲苯(150mL)、乙醇(15mL)、3,4,5-三氟苯基硼酸(7.5g)和四(三苯基膦)钯(0)(2.5g)的混合物中，并且在100℃下搅拌75分钟。将乙酸乙酯和水添加至反应混合物中，将其过滤以去除沉淀物。将滤液分离，将有机层用盐水洗涤并且随后经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(16.23g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:1.43(t,J＝7Hz,3H),1.78(d,J＝7Hz,3H),2.91(s,3H),4.45(qd,J＝7,3Hz,2H),6.33(s,1H),6.68(q,J＝7Hz,1H),7.12(s,1H),7.29-7.39(m,3H),7.42-7.45(m,2H),7.69(dd,J＝9,7Hz,2H)。
(19c)(S)-7-(甲基(1-苯基乙基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧 啶-2-甲酸的合成
将水(5mL)和4N氢氧化锂水性溶液(0.653mL)添加至(S)-7-(甲基(1-苯基乙基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(0.791g)在1,4-二噁烷(40mL)中的溶液，并且在室温下搅拌3天。在减压下去除溶剂，将水(20mL)添加至残余物，在搅拌的时候向其中添加5N盐酸(0.5mL)。将沉淀物通过过滤收集，在减压下干燥以获得标题化合物(678mg)。
1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:1.69(d,J＝7Hz,3H),2.91(s,3H),6.77(q,J＝7Hz,1H),6.89(s,1H),7.01(s,1H),7.31(m,1H),7.39(t,J＝7Hz,2H),7.46(d,J＝7Hz,2H),8.18-8.22(m,2H),13.30(br.s,1H)。
(19d)(S)-2-(1-(7-(甲基(1-苯基乙基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5- a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸乙酯的合成
将HOBT(2.68g)、WSC(3.35g)、4-哌啶乙酸乙酯(CAS号59184-90-6)(2.226g)和三乙胺(4.18mL)依次添加至(S)-7-(甲基(1-苯基乙基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(4.26g)在DMF(50mL)中的溶液，并且在室温下搅拌15小时。将乙酸乙酯(500mL)添加至反应混合物中，并且将有机层用水(300mL)洗涤3次并经无水硫酸镁干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(庚烷-乙酸乙酯体系)纯化以获得标题化合物(5.175g)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:1.07-1.12(m,1H),1.22-1.34(m,4H),1.50-1.63(m,1H),1.70-1.72(m,3H),1.80-1.86(m,1H),2.02-2.09(m,1H),2.13-2.25(m,2H),2.76-2.83(m,1H),2.87(s,3H),2.99-3.07(m,1H),4.13(q,J＝7Hz,2H),4.54-4.61(m,1H),4.72-4.88(m,1H),6.31(s,1H),6.73-6.84(m,1H),6.93-6.95(m,1H),7.28-7.40(m,5H),7.66-7.73(m,2H)。
(19e)(S)-2-(1-(7-(甲基(1-苯基乙基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5- a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸的合成
将(S)-2-(1-(7-(甲基(1-苯基乙基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸乙酯(1.42g)、乙醇(10mL)和4N氢氧化锂水性溶液(1.225mL)的混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物在减压下浓缩，将残余物用1,4-二噁烷稀释，向其中添加4N氢氧化锂水性溶液(1.2mL)，并且将混合物在50℃下加热搅拌90分钟。将反应混合物在减压下浓缩，并且将残余物用乙酸乙酯稀释以分离各溶剂。将有机层用1N氢氧化钠水性溶液萃取，将水层合并并且用乙酸乙酯洗涤。将水层用2N盐酸中和并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤并经无水硫酸钠干燥。将干燥剂过滤掉，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物用二乙醚:甲醇(3:1)溶液稀释并且进行超声处理。将沉淀物通过过滤收集并且在减压下干燥以获得标题化合物(1.134g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3,旋转异构体的混合物)δ:1.05-1.38(m,2H),1.50-1.66(m,1H),1.69-1.73(m,3H),1.83-1.90(m,1H),1.97-2.11(m,1H),2.17-2.31(m,2H),2.75-2.84(m,1H),2.87(s,3H),2.98-3.07(m,1H),4.54-4.65(m,1H),4.73-4.81(m,1H),6.32(s,1H),6.71-6.86(m,1H),6.92-6.95(m,1H),7.27-7.40(m,5H),7.66-7.74(m,2H)。
(参考实例2)
2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡 唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的X射线衍射实验
将在实例10-(10n)中获得的固体2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸溶解在甲醇中并且用乙腈作为储蓄池通过蒸汽扩散法重结晶。使用所得的单晶进行X射线衍射实验。将晶体学数据和结构分析结果示于表1中，并且将原子坐标数据示于表2中。这些结果了标题化合物的绝对结构。
[表1]
[表2]
测试实例1细胞内钙浓度测量
将添加有3％胎牛血清(3％FBS)的使用DMEM培养基(英杰公司(Invitrogen))培养的人胚肾细胞系HEK293细胞制备为具有2×105个细胞/mL的浓度，并且涂板在I型胶原包被的384-孔黑色板(透明底)(格瑞纳公司(Greiner))中以便成为25μL/孔并且在CO2培养箱中培养过夜。将用Hanks-20mM Hepes缓冲液(pH 7.4)制备的FLIPR钙分析试剂盒(分子装置公司(Molecular Devices))添加至细胞中以便成为25μL/孔并且在CO2培养箱中培养1小时。将用Hanks-20mM Hepes缓冲液(pH 7.4)制备为5U/mL作为终浓度(BAEE单位)的胰蛋白酶(西格玛奥德里奇公司(SIGMA-ALDRICH)，目录号：T8816，酶学委员会编号3.4.21.4)添加至384-孔深孔聚丙烯板(格瑞纳公司(Greiner))以成为激动剂试剂板。在使用FDSS6000(滨松光子学有限公司(Hamamatsu Photonics K.K.))测量前30分钟，将用Hanks-20mM Hepes缓冲液(pH 7.4)制备的测试化合物添加至细胞以便成为8μL/孔。将添加了测试化合物的细胞板和试剂板放置在FDSS6000上，从试剂板添加22μL/孔激动剂溶液，并且用CCD摄像机测量细胞内钙浓度的变化。测量在37℃下进行120秒，并且使用FDSS6000的内置384-孔自动分液器进行试剂从试剂板向细胞板的添加。
表3显示了测试化合物对细胞内钙升高的抑制活性(IC50(nM))。注意，表3中的参考实例1是在以上参考实例1中合成的由式(XIX)表示的化合物(在下文中，也被称为化合物(XIX))。此外，表3中的“比较化合物”是在专利文献4中所描述的、由以下式(XX)表示的化合物(I-343；在下文中，也被称为化合物(XX))。
[表3]
测试实例2小鼠中PAR2激动剂诱发的唾液分泌的测量
将测试化合物添加至添加了2％DMSO的0.5％羧甲基纤维素溶液以便具有0.3mg/mL的终浓度，从而制备包含该测试化合物的给药溶液。使用口腔探测器和注射器，将包含该测试化合物的给药溶液(10mL/kg)口服地给予至6-10周龄的C57BL/6J雄性小鼠(查尔斯河(Charles River))。在给予该测试化合物后45分钟，将10mL/kg的20％(w/v)的尿烷溶液腹膜内给予至小鼠，然后将该小鼠麻醉。在给予该测试化合物60分钟后，将10mL/kg的0.1mg/mL SLIGRL-NH2(SEQ ID NO:2)溶液作为PAR2激动剂腹膜内给予并且将棉球立即放入小鼠的口腔内以收集唾液。在给予PAR2激动剂后10分钟，将棉球移除并称重以测量分泌的唾液的量。
表4显示了该测试化合物对PAR2依赖性唾液分泌的抑制活性(％)注意，表4中的参考实例1是化合物(XIX)。此外，表4中的比较化合物是化合物(XX)。
[表4]
测试实例3小鼠皮炎模型中的评估
将测试化合物添加至0.5％羧甲基纤维素溶液以便具有0.3mg/mL的终浓度,从而制备包含该测试化合物的给药溶液。所使用的半抗原是2,4-二硝基氟苯(DNFB，日本和光纯化学工业有限公司(Wako Pure Chemical Industries))。
经2天的时间向6-10周龄的BALB/c雄性小鼠(查尔斯河(Charles River))的剃光的腹部区域施用用丙酮和橄榄油以2:1的体积比的混合溶剂稀释至0.4％的二十五(25)μL的DNFB溶液以产生致敏作用。在致敏作用后4天，在第一天，向小鼠的右耳廓施用用丙酮和橄榄油以2:1的体积比的混合溶剂稀释至0.2％的20μL的DNFB溶液以诱发皮炎。在诱发皮炎后8小时，将包含该测试化合物的给药溶液(10mL/kg)口服地给予至小鼠。在诱发皮炎后的当天，使用测厚仪测量小鼠的右耳廓厚度以评估该测试化合物的作用。
表5显示了该测试化合物对耳肿胀的抑制活性(％)。注意，表5中的参考实例1是化合物(XIX)。
[表5]
测试实例4在模型小鼠中对肠炎的评估
一般而言，已知肠道长度在肠炎期间较短(Maxwell,J.R.等人，Curr.Protoc.Pharmacol.[现代药理学试验方案]第5章：单元5.58，2009)。测量肠炎模型中的肠道长度以评估该测试化合物的效果。
将测试化合物添加至0.5％羧甲基纤维素溶液以便具有0.1mg/mL的终浓度，从而制备包含该测试化合物的给药溶液。所使用的半抗原是4-乙氧基亚甲基-2-苯基噁唑-5-酮(OXA，西格玛奥德里奇公司(SIGMA-ALDRICH))。
向6-10周龄的BALB/c雄性小鼠(查尔斯河(Charles River))的剃光的腹部区域施用用乙醇稀释至0.3％的一百(100)μL的OXA溶液以产生致敏作用。在致敏作用后5天，将OXA直肠内给予以诱发肠炎反应。更具体地，将用于口服给药的装备有探测器的注射器插入通过吸入浓度为4％-5％的异氟醚麻醉的小鼠的肛门，并且将50μL的用50％乙醇/50％蒸馏水的溶剂调节至1％的OXA溶液给予到直肠中。
在诱发肠炎前1小时和诱发肠炎后的当天，将包含该测试化合物的给药溶液(10mL/kg)口服给予(总共2次)至小鼠。在诱发肠炎后2天，将小鼠通过颈脱位法安乐死，并随后收集盲肠至肛门以使用标尺测量结肠和直肠的组合长度，从而评估该测试化合物的作用。
表6显示了该测试化合物对肠缩短的抑制活性(％)注意。表6中的参考实例1是化合物(XIX)。
[表6]
测试实例5用于螨抗原诱发的特应性皮炎的模型
已知通过将螨抗原施用于Nc小鼠诱发的皮炎模型表现出高度类似于人类特应性皮炎的临床症状和组织学发现(国际变应性学，56，p 139-148(2007))。观察模型的皮炎状况以评估该测试化合物对皮炎的效果。
<方法>
在异氟醚吸入麻醉下，将4w/v％SDS溶液(0.15mL/小鼠)第一次施用于8周龄雄性NC/NgaTndCrlj小鼠(日本查尔斯河实验室公司(Charles River Laboratories Japan,Inc.))的背部区域和耳廓区域。在施用4w/v％SDS溶液(0.15mL/小鼠)后约3小时，将1mL聚丙烯一次性注射器(泰尔茂公司(Terumo Corporation))装满Biostir AD(Biostir公司)作为施用于背部区域和耳廓区域的螨抗原软膏剂(0.1mL/小鼠)。每2天或3天，通过相同的方法，将4w/v％SDS溶液(0.15mL/小鼠)和Biostir AD总共施用8次(包括初次施用)以诱发皮炎。诱发皮炎后，观察施用位点的皮肤状况(除瘙痒行为外的评价)，并且基于人类特应性皮炎的临床症状的评估标准对下述皮炎发现1)至5)进行评分。注意，皮炎发现1)至5)的分数有：0：无症状；1：轻度；2：中度；以及3：重度。每个个体的皮炎分数是皮炎发现1)至5)的总和。随机地进行分组(每组15只小鼠)以致于每组具有基本上相同(无统计学显著差异)的平均皮炎分数(总共)和平均体重。
从进行分组当天起14天，每天一次(总共14次)向小鼠口服给予包含测试化合物的给药溶液(10mL/kg)。给药溶液是包含10mmol/L氢氧化钠的0.5％羧甲基纤维素溶液，并并且制成具有0.3、1或3mg/mL的测试化合物浓度的3种溶液。在开始给药后的分组当天(第0天)、4天、7天、11天和14天的早上，对于他所有病例观察在螨抗原给予位点的皮肤状况以便对皮炎发现再次进行评分。
表7显示了在开始给药后0天、4天、7天、11天和14天的分数。
<皮炎发现>
1)瘙痒行为：观察行为2分钟，在此期间观察诱发位点处的瘙痒行为。
0：无症状：诱发位点处无瘙痒行为的状况
1：轻度：连续瘙痒行为在此期间看到2次或更多次，但累计不超过约1分钟。
2：中度：行为超过约1分钟但累计不超过约1.5分钟。
3：重度：连续瘙痒行为累计超过约1.5分钟或持续2分钟。
2)发红-出血：在诱发位点处观察到发红和出血症状。
0：无症状：在诱发位点处无发红或出血症状的状况。
1：轻度：在诱发位点处鉴定出发红和出血症状或没有鉴定出由连续抓挠引起的出血的局部状况。
2：中度：鉴定出分散在诱发位点周围的发红和出血症状或局部鉴定出由连续抓挠引起的发红和出血症状的状况。
3：重度：在整个诱发位点鉴定出发红和出血症状或连续抓挠遍布于广范围的发红和出血症状的状况。
3)肿胀：对耳廓诱发位点进行定量观察。
0：无症状：对右耳廓或左耳廓没有鉴定出增厚的状况。
1：轻度：右耳廓或左耳廓有轻微增厚的状况。
2：中度：双耳廓明显增厚和浮肿的状况。
3：重度：双耳廓鉴定出明显增厚、浮肿和变形并且当用手指触摸时感觉发硬的状况。
4)抓痕-组织缺损：在诱发位点处观察到抓痕和组织缺损症状。
0：无症状：在诱发位点处没有鉴定出抓痕或组织缺损的状况。
1：轻度：在诱发位点鉴定出局部抓痕和组织缺损、或者鉴定出非连续性抓痕但是没有鉴定出组织缺损的状况。
2：中度：鉴定出分散在诱发位点周围的抓痕和组织缺损、或者鉴定出小规模的连续抓痕但是没有鉴定出组织缺损的状况。
3：重度：在整个诱发位点鉴定出抓痕和组织缺损症状、或者连续抓痕遍布于广范围并鉴定出组织缺损的状况。
5)痂形成-干燥：在诱发位点处观察到痂形成和干燥症状。
0：无症状：在诱发位点处没有痂形成或干燥症状的状况。
1：轻度：在诱发位点处鉴定出局部痂形成和干燥症状并且在诱发位点处鉴定出轻微皮肤发白和角质剥落的状况。
2：中度：分散在周围的痂形成和干燥症状、或者在诱发位点处可清晰鉴定的角质剥落的状况。
3：重度：鉴定出痂形成和干燥症状、或者在整个诱发位点可清晰鉴定的角质剥落的状况。
[表7]
测试实例6由带状剥离诱发的皮肤屏障破坏的小鼠模型
使用由带状剥离诱发的皮肤屏障破坏的模型评估测试化合物对皮肤屏障功能的效果。经皮失水(TEWL)是皮肤屏障功能的评估指示物(Journal of InvestigativeDermatology[研究型皮肤病学杂志]，126，p 2074-2086(2006))。
<方法>
对7周龄雄性Hos:HR-1小鼠(星野试验动物公司(Hoshino Laboratory Animals,Inc.))进行测试(对于每个处理n＝10)。对于口服给药，如下制备具有不同浓度的测试化合物溶液。
(1)使用含有1.7mmol/L氢氧化钠的0.5％甲基纤维素溶液制备测试化合物溶液使得测试化合物浓度为1mg/mL。
(2)将在(1)中制备的测试化合物溶液用0.5％甲基纤维素溶液稀释以制备测试化合物溶液使得测试化合物的浓度为0.3mg/mL。
在给予测试化合物之前测量TEWL(称为TEWL[前])。在测量TEWL[前]之后，口服给予如在(1)或(2)中所调整的测试化合物溶液(剂量：10mL/kg)。在测试化合物给予后1小时，通过带状剥离处理破坏小鼠腹部区域的皮肤屏障。测量就在带状剥离后的TEWL和在带状剥离后1小时的TEWL(分别称为TEWL[0小时]、TEWL[1小时])。根据以下公式计算屏障恢复％。
屏障恢复％
＝{(TEWL[0小时]-TEWL[1小时])/(TEWL[0小时]-TEWL[前])}*100将结果表示为屏障恢复％的平均±标准偏差。对于统计学分析，使用邓尼特(Dunnett's)多重比较检验，并且将p<0.05确定为统计学显著差异。
<结果>
表8显示了结果。给予本发明的化合物增加了屏障恢复％。结果表明本发明的化合物在皮肤屏障破坏模型中的有效性。
[表8]
*p<0.05，相对于运载体(邓尼特检验)
工业实用性
如上所述，根据本发明的吡唑并[1,5-a]嘧啶化合物或其药学上可接受的盐具有PAR2抑制作用。此外，根据本发明的化合物证明了对PAR2依赖性唾液分泌的抑制作用以及对在小鼠上与皮炎相关的耳廓肿胀的抑制活性。因此，根据本发明的化合物具有被用作用于涉及PAR2的炎性皮肤疾病(例如特应性皮炎、接触性皮炎、皮肤湿疹、银屑病和干性皮肤皮炎)的治疗剂的潜力。而且，根据本发明的化合物证明了在小鼠肠炎模型中对肠缩短的抑制作用。因此，根据本发明的化合物还具有被用作用于涉及PAR2的炎性肠病(例如溃疡性结肠炎、克罗恩病和传染性肠炎)的治疗剂的潜力。

Claims (15)

1.一种选自下组的化合物，该组由以下各项组成：
由化学式(I)表示的2-((3R*,4S*)-1-(7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸
由化学式(II)表示的2-((3R*,4S*)-1-(7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸
由化学式(III)表示的2-((3R*,4S*)-1-(5-(4,4-二甲基环己基)-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸
由化学式(IV)表示的2-((3R*,4S*)-1-(5-(3-氯-4-氟苯基)-7-((2,6-二甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸
由化学式(V)表示的2-((3R*,4S*)-3-氟-1-(7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸
由化学式(VI)表示的2-((3R*,4S*)-3-甲氧基-1-(7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸
由化学式(VII)表示的(R)-3-(7-((2-氟-6-甲氧基苯基)(甲基)氨基)-N-甲基-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酰胺)丁酸
由化学式(VIII)表示的2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丁基((R)-3-甲基丁烷-2-基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸
由化学式(IX)表示的(R)-3-(7-(异丁基((R)-3-甲基丁烷-2-基)氨基)-N-甲基-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酰胺)丁酸
由化学式(X)表示的2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸
由化学式(XI)表示的2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3-氟苯基)-7-((2-氯-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸
由化学式(XII)表示的2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氯-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸
由化学式(XIII)表示的2-((3R*,4S*)-1-(7-((2-氯-6-氟苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸
由化学式(XIV)表示的2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氯苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氟哌啶-4-基)乙酸
由化学式(XV)表示的2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丙基(丙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸
由化学式(XVI)表示的2-((1α,5α,6α)-3-(7-(异丁基((S)-1-苯基乙基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸
由化学式(XVII)表示的2-(1-(7-((2-氯-6-氟苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸
以及
由化学式(XVIII)表示的2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丙基(丙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲基哌啶-4-基)乙酸
或其药学上可接受的盐。
2.由化学式(X)表示的2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸
或其药学上可接受的盐。
3.由化学式(VI)表示的2-((3R*,4S*)-3-甲氧基-1-(7-((2-甲氧基-6-甲基苯基)(甲基)氨基)-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-基)乙酸
或其药学上可接受的盐。
4.由化学式(VII)表示的(R)-3-(7-((2-氟-6-甲氧基苯基)(甲基)氨基)-N-甲基-5-(3,4,5-三氟苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酰胺)丁酸
或其药学上可接受的盐。
5.由化学式(XV)表示的2-((1α,5α,6α)-3-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-(异丙基(丙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-基)乙酸
或其药学上可接受的盐。
6.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至权利要求5中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
7.根据权利要求6所述的药物组合物，用于治疗炎性皮肤病或炎性肠病。
8.根据权利要求7所述的药物组合物，其中该炎性皮肤病是特应性皮炎。
9.根据权利要求7所述的药物组合物，其中该炎性皮肤病是接触性皮炎。
10.根据权利要求7所述的药物组合物，其中该炎性皮肤病是皮肤湿疹。
11.根据权利要求7所述的药物组合物，其中该炎性皮肤病是银屑病。
12.根据权利要求7所述的药物组合物，其中该炎性皮肤病是干性皮肤皮炎。
13.根据权利要求7所述的药物组合物，其中该炎性肠病是溃疡性结肠炎。
14.根据权利要求7所述的药物组合物，其中该炎性肠病是克罗恩病。
15.根据权利要求7所述的药物组合物，其中该炎性肠病是传染性肠炎。
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