JP7257376B2 - ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン化合物の塩およびその結晶 - Google Patents

ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン化合物の塩およびその結晶 Download PDF

Info

Publication number
JP7257376B2
JP7257376B2 JP2020501065A JP2020501065A JP7257376B2 JP 7257376 B2 JP7257376 B2 JP 7257376B2 JP 2020501065 A JP2020501065 A JP 2020501065A JP 2020501065 A JP2020501065 A JP 2020501065A JP 7257376 B2 JP7257376 B2 JP 7257376B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
ppm
pyrazolo
crystals
amino
methyl
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
JP2020501065A
Other languages
English (en)
Other versions
JPWO2019163956A1 (ja
Inventor
太郎 山下
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Eisai R&D Management Co Ltd
Original Assignee
Eisai R&D Management Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Eisai R&D Management Co Ltd filed Critical Eisai R&D Management Co Ltd
Publication of JPWO2019163956A1 publication Critical patent/JPWO2019163956A1/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP7257376B2 publication Critical patent/JP7257376B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Description

本発明は、ＰＡＲ２阻害作用を有する、ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン化合物の塩およびその結晶に関する。
プロテアーゼ受容体（Ｐｒｏｔｅａｓｅ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ＰＡＲ）は三量体Ｇ蛋白と共役した７回膜貫通型受容体の１種であり、セリンプロテアーゼの細胞作用を媒介する受容体ファミリーで、現在までにＰＡＲ１、ＰＡＲ２、ＰＡＲ３、およびＰＡＲ４の４分子がクローニングされている。
セリンプロテアーゼはＰＡＲ分子の細胞外アミノ末端側ペプチド鎖を特定部位で切断することにより、５ないし６個のアミノ酸残基からなる受容体活性化配列を有する新しいアミノ末端ペプチド鎖を露出させる。セリンプロテアーゼによって切断され、新たに露出したアミノ末端ペプチド鎖は、鎖状リガンドとしてＰＡＲ２自身の活性部位である細胞外第２ループに結合することで、ＰＡＲ２を活性化する。ＰＡＲ２は、トリプシン、トリプターゼ、カリクレイン（主にカリクレイン２、４、５、６、および１４）、血液凝固第ＶＩＩａ因子、血液凝固第Ｘａ因子などによって活性化されるほか、受容体活性化配列に基づいて合成した５ないし６個のアミノ酸からなる合成ペプチドを外来的に与えることによっても活性化されることが知られている（非特許文献１～３参照）。
ここで、ＰＡＲ２は、血管、前立腺、小腸、結腸、肝臓、腎臓、膵臓、胃、肺、脳、皮膚など、生体内に広く分布し、神経性炎症、疼痛、痒み、炎症、アレルギーなどの種々の疾患において増悪因子であることが知られている（特許文献１および２、ならびに非特許文献４～６参照）。そのため、ＰＡＲ２阻害剤はこれら疾患の治療薬になり得ることが期待されており、例えば、炎症性腸疾患治療薬、皮膚炎治療薬、アレルギー性疾患治療薬、皮膚色素沈着防止薬として有用であることが示唆されている（特許文献３～５、ならびに非特許文献３および６～１１参照）。
特開２００３－２８６１７１号公報 特開２００４－１７０３２３号公報 国際公開第２０１２／１０１４５３号 国際公開第２０１５／０４８２４５号 国際公開第２００５／０３０７７３号
Ｄｅｒｙ，Ｏ．ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ（Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．）．２７４，Ｃ１４２９－１４５２，１９９８ Ｍａｃｆａｒｌａｎｅ，Ｓ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．５３，２４５－２８２，２００１ Ｙａｕ，Ｍ．Ｋ．ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５６，７４７７－７４９７，２０１３ Ｂｏｈｍ，Ｓ．Ｋ．ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１５；３１４，１００９－１０１６，１９９６ Ｄ’Ａｎｄｒｅａ，Ｍ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．４６（２）：１５７－１６４，１９９８ Ｒｏｔｈｍｅｉｅｒ，Ａ．Ｓ．，Ｒｕｆ，Ｗ．Ｓｅｍｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．３４（１）：１３３－１４９，２０１２ Ｙａｍａｇｕｃｈｉ，Ｙ．，Ｈｅａｒｉｎｇ，Ｖ．Ｊ．Ｂｉｏｆａｃｔｏｒｓ．３５（２）：１９３－１９９，２００９ Ａｆｋｈａｍｉ－Ｇｏｌｉ，Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１７９：５４９３－５５０３，２００７ Ｄａｌｅ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ Ｓｉｇｎａｌ Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ．２８：２９－３７，２００８ Ｈａｃｈｅｍ，Ｊ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ．１２６：２０７４－２０８６，２００６ Ｓｅｙｆａｒｔｈ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎｉｃｓ ｉｎ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ．２９：３１－３６，２０１１
下記式（Ｉ）で表される化合物（２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸、以下「化合物（Ｉ）」ともいう。）は、ＰＡＲ２阻害作用を有し、例えば、炎症性皮膚疾患治療剤、炎症性腸疾患治療剤としての利用可能性を有している。
Figure 0007257376000001
一般的に、医薬品として有用な化合物、その塩またはその塩の結晶の物性は、薬物のバイオアベイラビリティー、原薬の純度、製剤の処方などに大きな影響を与える。
本発明者らは、化合物（Ｉ）について、上記事情に鑑み鋭意研究を重ねた結果、化合物（Ｉ）の塩またはその結晶を見出し、本発明を完成した。
すなわち、本発明は以下の［１］から［１４］に関する。
［１］式（Ｉ）で表される２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の塩酸塩。
Figure 0007257376000002
 ［２］式（Ｉ）で表される２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の塩酸塩の結晶。
Figure 0007257376000003
 ［３］［２］記載の結晶であって、粉末Ｘ線回折において、回折角度（２θ±０．２°）８．３°に回折ピークを有する、２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の塩酸塩の結晶。
［４］［２］記載の結晶であって、粉末Ｘ線回折において、回折角度（２θ±０．２°）８．３°および１３．１°に回折ピークを有する、２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の塩酸塩の結晶。
［５］［２］記載の結晶であって、粉末Ｘ線回折において、回折角度（２θ±０．２°）８．３°、１３．１°および１５．７°に回折ピークを有する、２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の塩酸塩の結晶。
［６］［２］記載の結晶であって、粉末Ｘ線回折において、回折角度（２θ±０．２°）８．３°、１１．４°、１３．１°、１５．７°および１７．３°に回折ピークを有する、２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の塩酸塩の結晶。
［７］［２］記載の結晶であって、粉末Ｘ線回折において、回折角度（２θ±０．２°）８．３°、１１．４°、１３．１°、１５．２°、１５．７°、１７．３°、１８．８°、１９．７°、２２．３°および２５．０°に回折ピークを有する、２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の塩酸塩の結晶。
［８］［２］記載の結晶であって、図１で示される粉末Ｘ線回折パターンと実質的に同一の粉末Ｘ線回折パターンを有する、２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の塩酸塩の結晶。
［９］［２］記載の結晶であって、１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおいて、化学シフト（δ±０．５ｐｐｍ）５８．４ｐｐｍ、７７．４ｐｐｍおよび１７３．５ｐｐｍにピークを有する、２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の塩酸塩の結晶。
［１０］［２］記載の結晶であって、１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおいて、化学シフト（δ±０．５ｐｐｍ）１８．５ｐｐｍ、５８．４ｐｐｍ、７７．４ｐｐｍ、９４．４ｐｐｍおよび１７３．５ｐｐｍにピークを有する、２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の塩酸塩の結晶。
［１１］［２］記載の結晶であって、１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおいて、化学シフト（δ±０．５ｐｐｍ）１８．５ｐｐｍ、１９．９ｐｐｍ、５６．６ｐｐｍ、５８．４ｐｐｍ、７６．２ｐｐｍ、７７．４ｐｐｍ、９４．４ｐｐｍ、９５．９ｐｐｍ、１２９．３ｐｐｍおよび１７３．５ｐｐｍにピークを有する、２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の塩酸塩の結晶。
［１２］［２］記載の結晶であって、図２で示される１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルと実質的に同一の１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルを有する、２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の塩酸塩の結晶。
［１３］［１］記載の塩を有効成分として含有する医薬組成物。
［１４］［２］～［１２］のいずれかに記載の結晶を有効成分として含有する医薬組成物。
本発明により提供される、化合物（Ｉ）の塩およびその結晶は、医薬品の原薬としての利用可能性を有する。
図１は、実施例１で得られた化合物（Ｉ）の塩酸塩の結晶の粉末Ｘ線回折パターンである。横軸は回折角（２θ）、縦軸はピーク強度を示す。 図２は、実施例１で得られた化合物（Ｉ）の塩酸塩の結晶の１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルである。横軸は化学シフト（δ）、縦軸はピーク強度を示す。 図３は、参考例４で得られた化合物（Ｉ）の結晶の粉末Ｘ線回折パターンである。横軸は回折角（２θ）、縦軸はピーク強度を示す。 図４は、参考例４で得られた化合物（Ｉ）の結晶の１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルである。横軸は化学シフト（δ）、縦軸はピーク強度を示す。
以下、本発明の化合物（Ｉ）の塩およびその結晶、ならびにそれらの製造方法について詳細に説明する。
本明細書において、「塩」とは、化合物（Ｉ）と、化合物（Ｉ）に対して特定の当量数の酸または塩基とからなる化学物質を意味する。
塩は、薬剤学的に許容されるものであれば特に限定されないが、具体的には、例えば無機酸塩（例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩など）、有機酸塩（例えば酢酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、ステアリン酸塩、安息香酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩など）、酸性アミノ酸塩（例えばアスパラギン酸塩、グルタミン酸塩など）、無機塩基塩（例えばナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、アンモニウム塩など）、有機塩基塩（例えばジエチルアミン塩、ジエタノールアミン塩、メグルミン塩、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン塩など）、塩基性アミノ酸塩（例えば、アルギニン塩、リジン塩、オルニチン塩など）が挙げられる。
本発明の塩は、溶媒和物でもよい。本明細書において、化合物（Ｉ）の塩の溶媒和物とは、化合物（Ｉ）の塩およびその結晶と溶媒分子とが一緒になって形成する固体をいう。溶媒和物の溶媒としては、たとえば、アセトン、２－ブタノン、シクロヘキサノン等のケトン系溶媒；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル系溶媒；１，２－ジメトキシエタン、ｔ－ブチルメチルエーテル等のエーテル系溶媒；メタノール、エタノール、１－プロパノール、イソプロパノール等のアルコール系溶媒、Ｎ－メチル－２－ピロリドン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド等の極性溶媒；水が挙げられる。
本明細書において、「結晶」とは、化合物（Ｉ）またはその塩の結晶を指す。したがって、例えば化合物（Ｉ）の塩酸塩の結晶とは、化合物（Ｉ）と塩酸とで形成される塩の結晶であって、化合物（Ｉ）１分子に対して塩酸を１分子含有する塩の結晶を意味する。
本明細書において、好ましい化合物（Ｉ）の塩の結晶としては、
粉末Ｘ線回折において、回折角度（２θ±０．２°）８．３°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）の塩酸塩の結晶；
粉末Ｘ線回折において、回折角度（２θ±０．２°）８．３°および１３．１°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）の塩酸塩の結晶；
粉末Ｘ線回折において、回折角度（２θ±０．２°）８．３°、１３．１°および１５．７°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）の塩酸塩の結晶；
粉末Ｘ線回折において、回折角度（２θ±０．２°）８．３°、１１．４°、１３．１°、１５．７°および１７．３°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）の塩酸塩の結晶；
粉末Ｘ線回折において、回折角度（２θ±０．２°）８．３°、１１．４°、１３．１°、１５．２°、１５．７°、１７．３°、１８．８°、１９．７°、２２．３°および２５．０°に回折ピークを有する、化合物（Ｉ）の塩酸塩の結晶；
１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおいて、化学シフト（δ±０．５ｐｐｍ）５８．４ｐｐｍ、７７．４ｐｐｍおよび１７３．５ｐｐｍにピークを有する、化合物（Ｉ）の塩酸塩の結晶；
１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおいて、化学シフト（δ±０．５ｐｐｍ）１８．５ｐｐｍ、５８．４ｐｐｍ、７７．４ｐｐｍ、９４．４ｐｐｍおよび１７３．５ｐｐｍにピークを有する、化合物（Ｉ）の塩酸塩の結晶；
１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおいて、化学シフト（δ±０．５ｐｐｍ）１８．５ｐｐｍ、１９．９ｐｐｍ、５６．６ｐｐｍ、５８．４ｐｐｍ、７６．２ｐｐｍ、７７．４ｐｐｍ、９４．４ｐｐｍ、９５．９ｐｐｍ、１２９．３ｐｐｍおよび１７３．５ｐｐｍにピークを有する、化合物（Ｉ）の塩酸塩の結晶などを挙げることができる。
上記記載の粉末Ｘ線回折における回折ピークおよび１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおける化学シフトは、化合物（Ｉ）の塩酸塩の結晶にそれぞれ特有なものであり、当該結晶に特徴的なピークである。
一般に、粉末Ｘ線回折における回折角度（２θ）は±０．２°の範囲内で誤差が生じ得るため、上記の回折角度の値は±０．２°程度の範囲内の数値も含むものとして理解される必要がある。したがって、特定の化合物において、粉末Ｘ線回折におけるピークの回折角度が完全に一致する結晶だけでなく、ピークの回折角度が±０．２°程度の誤差で一致する結晶も同一であり、本発明に含まれる。
本明細書において、例えば、「回折角度（２θ±０．２°）８．３°に回折ピークを有する」とは、「回折角度（２θ）８．１°～８．５°に回折ピークを有する」ということを意味し、その他の回折角度の場合も同様である。
また、一般に、粉末Ｘ線回折における回折角度（２θ）のピーク強度または半値幅は、結晶形が同一であっても、測定条件の違いや測定試料として用いる粉末結晶の各粒子の大きさや形状のばらつきにより、測定ごとに異なり、必ずしも一定のピーク強度または半値幅が常に示されるとは限らない。そのため、粉末Ｘ線回折パターンの比較において、同じ回折角度（２θ）で、そのピーク強度または半値幅に違いがあっても、その違いは、測定された結晶形が互いに異なることを意味するものではない。したがって、本発明の特定の結晶に特徴的な回折ピークに対して、そのような違いを有する粉末Ｘ線回折パターンを示す当該化合物の結晶は、本発明の化合物の結晶と同一の結晶形であることを意味する。また、本明細書において「図１の粉末Ｘ線回折パターンと実質的に同一の粉末Ｘ線回折パターンを有する」とは、ある特徴的な回折ピークを有する粉末Ｘ線回折パターンが、図１で表される粉末Ｘ線回折パターンに完全に一致する場合だけでなく、ピーク強度または半値幅が異なるか、特徴的な回折ピークの回折角度が±０．２°の誤差範囲で一致する場合も、図１で示される粉末Ｘ線回折パターンと同一の粉末Ｘ線回折パターンであることを意味する。したがって、このような粉末Ｘ線回折パターンを有する結晶は全て、本発明の結晶と同一の結晶であることを意味する。
本明細書において、「化学シフト（δ±０．５ｐｐｍ）１８．５ｐｐｍ、１９．９ｐｐｍ、５６．６ｐｐｍ、５８．４ｐｐｍ、７６．２ｐｐｍ、７７．４ｐｐｍ、９４．４ｐｐｍ、９５．９ｐｐｍ、１２９．３ｐｐｍおよび１７３．５ｐｐｍ」とは、「通常の測定条件または本明細書に記載の条件にて１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトル測定を行い、それぞれ、化学シフト（δ±０．５ｐｐｍ）１８．５ｐｐｍ、１９．９ｐｐｍ、５６．６ｐｐｍ、５８．４ｐｐｍ、７６．２ｐｐｍ、７７．４ｐｐｍ、９４．４ｐｐｍ、９５．９ｐｐｍ、１２９．３ｐｐｍおよび１７３．５ｐｐｍと実質的に同等なピークを有すること」を意味する。
「実質的に同等なピークを有する」か否かの判断に際して、一般に、１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおける化学シフトδは、±０．５ｐｐｍの範囲内で誤差が生じ得るため、上記の化学シフトの値は、±０．５ｐｐｍ程度の範囲内の数値も含むものとして理解される必要がある。したがって、１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおける化学シフトが完全に一致する結晶だけでなく、化学シフトが±０．５ｐｐｍ程度の誤差で一致する結晶も本発明に含まれる。それ故に、本明細書において、例えば「化学シフト（δ±０．５ｐｐｍ）１７３．５ｐｐｍにピークを有する」とは、化学シフト（δ）１７３．０ｐｐｍ～１７４．０ｐｐｍの範囲にピークを有することを意味し、その他の１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおける化学シフトの場合も同様である。また、「図２で示される１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルと実質的に同一の１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルを有する結晶」とは、ある化学シフトのピークを有する１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルが、図２で示される１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルと完全に一致する場合だけでなく、ピーク強度が異なるか、特徴的なピークが化学シフト±０．５ｐｐｍ程度の範囲内で一致する場合も、図２で示される１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルと同一の１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルを有する結晶であることを意味する。したがって、このような１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルを有する結晶は全て、本発明の結晶と同一の結晶であることを意味する。
以下に、本発明の一実施形態である化合物（Ｉ）の塩またはその結晶等の製造方法について説明する。
化合物（Ｉ）の製造方法
化合物（Ｉ）は、当業者に周知な方法により製造されたものであってもよい。例えば、化合物（Ｉ）は、後述する参考例２に記載の方法で合成することができる。
化合物（Ｉ）の塩の製造方法
化合物（Ｉ）の塩は、通常の塩を製造する方法により得ることができる。具体的には、例えば、化合物（Ｉ）を溶媒に、必要に応じて加温して、懸濁または溶解させ、次いで、得られる懸濁液または溶液に、無機酸塩、有機酸塩、酸性アミノ酸塩、無機塩基塩、有機塩基塩および塩基性アミノ酸塩からなる群から選択される一つの酸または塩基を加え、室温下あるいは氷浴で冷却しながら数分から数日間撹拌することにより、または室温下あるいは氷浴で冷却しながら数分から数日間放置することにより、製造することができる。これらの製造方法により、化合物（Ｉ）の塩を、結晶または非晶質として得ることができる。ここで使用する溶媒としては、例えばエタノール、１－プロパノール、イソプロパノール等のアルコール系溶媒；アセトニトリル；アセトン、２－ブタノン等のケトン系溶媒；酢酸エチル等のエステル系溶媒；ヘキサン、ヘプタン等の飽和炭化水素系溶媒；ｔ－ブチルメチルエーテル等のエーテル系溶媒または水を挙げることができる。これらの溶媒は単独で使用してもよく、２種以上を混合して使用してもよい。
化合物（Ｉ）の塩は、前記した化合物（Ｉ）の製造方法において、化合物（Ｉ）を合成後に、引き続き、上記した方法を採用することにより製造することもできる。
化合物（Ｉ）またはその塩の結晶の製造方法
以下に化合物（Ｉ）またはその塩の結晶の製造方法について説明する。化合物（Ｉ）またはその塩の結晶は、化合物（Ｉ）またはその塩を、溶媒中で加熱溶解し、攪拌下冷却して晶析することにより製造することもできる。
晶析に使用する化合物（Ｉ）またはその塩は、どのような形態であってもよく、溶媒和物、水和物または無水物でもよく、非晶質でも結晶質（複数の結晶多形からなるものを含む）でもよく、これらの混合物でもよい。
晶析に使用する溶媒は、例えば、メタノール、エタノール、２－プロパノール、１－プロパノール、１－ブタノール等のアルコール系溶媒；アセトニトリル；Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド等のアミド系溶媒；酢酸エチル等のエステル系溶媒；ヘキサン、ヘプタン等の飽和炭化水素系溶媒；アセトン、２－ブタノン等のケトン系溶媒；ｔ－ブチルメチルエーテル等のエーテル系溶媒または水を挙げることができる。また、これらの溶媒は単独で使用してもよく、２種以上を混合して使用してもよい。
溶媒の使用量は、化合物（Ｉ）またはその塩が加熱により溶解する量または懸濁液が攪拌可能となる量を下限とし、結晶の収量が著しく低下しない量を上限として適宜選択することができる。
晶析において、所望の化合物（Ｉ）またはその塩の結晶を種結晶として加えてもよい。種結晶を加える際の溶液の温度は、特に限定されないが、好ましくは０～８０℃である。
化合物（Ｉ）またはその塩を加熱して溶解する場合の温度は、溶媒に応じて化合物（Ｉ）またはその塩が溶解する温度を適宜選択すればよく、好ましくは５０℃から溶媒が還流を開始する温度の範囲であり、より好ましくは５５～８０℃である。
晶析時の冷却は、急冷すると態様の異なる結晶（多形）を含むものを与えうるので、結晶の品質や粒度等への影響を考慮して適宜冷却速度を調整して実施することが好ましい。好ましい冷却速度は、例えば５～４０℃／時間である。
また、最終的な晶析温度は、結晶の収量と品質等から適宜選択することができるが、好ましくは－２５～３０℃である。
晶析した結晶を通常のろ過操作で分離し、目的の結晶を得ることができる。必要に応じてろ別した結晶を溶媒で洗浄し、さらにこれを乾燥してもよい。結晶の洗浄に使用する溶媒には、晶析溶媒と同様のものを使用できる。好ましくは、例えば、エタノール、アセトン、２－ブタノン、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ｔ－ブチルメチルエーテル、ヘキサン等を挙げることができる。また、これらの溶媒は単独で使用してもよく、２種以上を混合して使用してもよい。
ろ過操作で分離した結晶は、適宜、大気下または窒素気流下に放置することにより、または加熱によって乾燥することができる。
乾燥時間は、残留溶媒が所定の量を下回るまでの時間を製造量、乾燥装置、乾燥温度等に応じて適宜選択すればよい。また、乾燥は通風下でも減圧下でも行うことができる。減圧度は、製造量、乾燥装置、乾燥温度等に応じて適宜選択すればよい。得られた結晶は、乾燥後、必要に応じて大気中に放置することもできる。
以上に説明した製造方法によって得られる化合物（Ｉ）の塩またはその結晶は、後述の薬理試験例における活性データに示されているように、ＰＡＲ２阻害作用を有することにより、例えば、炎症性皮膚疾患治療剤、炎症性腸疾患治療剤の医薬品の原薬としての利用可能性を有している。
［医薬組成物］
本発明の他の実施形態は、化合物（Ｉ）の塩またはその結晶、および薬剤学的に許容される添加物を含有する医薬組成物である。医薬組成物は、薬剤学的に許容される添加物を化合物（Ｉ）の塩またはその結晶と混和することにより製造することができる。本発明に係る医薬組成物は例えば第十六改正日本薬局方の製剤総則に記載の方法など既知の方法に従って製造することができる。
本実施形態に係る医薬組成物は、その剤形に応じて適切に患者に投与することができる。
本発明に係る化合物（Ｉ）の塩またはその結晶の投与量は、症状の程度、年齢、性別、体重、投与形態・塩の種類、疾患の具体的な種類等に応じて異なるが、通常、成人の場合は１日あたり経口投与で約３０μｇ～１０ｇ、好ましくは１００μｇ～５ｇ、さらに好ましくは１００μｇ～１ｇを、注射投与で約３０μｇ～１ｇ、好ましくは１００μｇ～５００ｍｇ、さらに好ましくは１００μｇ～３００ｍｇをそれぞれ１回または数回に分けて投与する。
以下、参考例および実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの参考例および実施例に限定されるものではない。
以下の参考例および実施例において製造された結晶の粉末Ｘ線結晶回折は、得られた結晶を、粉末Ｘ線回折装置の試料台に載せ、下記の条件で分析した。
（測定条件）
サンプルホルダー：アルミニウム製ホルダー
ターゲット：銅
検出器：シンチレーションカウンター
管電圧：５０ｋＶ
管電流：３００ｍＡ
スリット：発散スリット０．５ｍｍ、散乱スリット開放、受光スリット開放
走査速度：５°／分または１０°／分
サンプリング間隔：０．０２°
走査範囲：５～３５°
結晶の１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルは、以下の条件で測定した。
（測定条件）
使用装置：Ａｖａｎｃｅ４００ＭＨｚ（ＢＲＵＫＥＲ社製）７ｍｍ－ＣＰＭＡＳプローブ（ＢＲＵＫＥＲ社製）
測定核：１３Ｃ（１００．６１３０６３６ＭＨｚ）
測定温度：室温（２５℃）
パルスモード：ＣＰＴＯＳＳ測定（スピニングサイドバンド消去法）
回転数：５０００Ｈｚ
パルス繰り返し時間：３ｓｅｃ
コンタクトタイム：１ｍｓｅｃ
積算回数：３０７２回
基準物質：グリシン（外部基準：１７６．０３ｐｐｍ）
文献名等が記載されている化合物は、その文献等に従って製造したことを示す。
また、本明細書に使用される略号は当業者に周知の慣用的な略号である。本明細書においては下記の略号を使用する。
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＤＭＳＯ－ｄ６：重ジメチルスルホキシド
ＨＡＴＵ：Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＯＢＴ：１－ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＮＭＰ：１－メチル－２－ピロリドン
Ｐｄ２ＤＢＡ３：トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム
ｔ－：ターシャリー
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＷＳＣ：１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）－カルボジイミド塩酸塩
１Ｈ－ＮＭＲ：プロトン核磁気共鳴スペクトルメトリー
プロトン核磁気共鳴スペクトルの化学シフトは、テトラメチルシランに対するδ単位（ｐｐｍ）で記録され、カップリング定数はヘルツ（Ｈｚ）で記録されている。分裂パターンは、以下のとおりである。
ｓ；シングレット、ｄ；ダブレット、ｔ；トリプレット、ｑ；カルテット、ｂｒ；ブロード、ｍ；マルチプレット、ｄｄ；ダブルダブレット、ｔｄ；トリプルダブレット。
１Ｈ－ＮＭＲは、Ｖａｒｉａｎ製ＭＥＲＣＵＲＹ ｐｌｕｓ型核磁気共鳴装置（４００ＭＨｚ）、Ｖａｒｉａｎ製ＩＮＯＶＡ ＵＮＩＴＹ型核磁気共鳴装置（４００ＭＨｚ）、Ｖａｒｉａｎ製ＩＮＯＶＡ ＵＮＩＴＹ型核磁気共鳴装置（５００ＭＨｚ）、またはＢｒｕｋｅｒ製Ａｖａｎｃｅ型核磁気共鳴装置（６００ＭＨｚ）を用いて測定した。
旋光度は、ＪＡＳＣＯ製ＤＩＰ－１０００型旋光計を用いて測定した。
クロマトグラフィーに関して、シリカゲルは、Ｍｅｒｃｋ社製Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ６０（７０－２３０ｍｅｓｈ ＡＳＴＭ）、富士シリシア化学社製ＰＳＱ６０Ｂ、関東化学社製シリカゲル６０（球状、４０－５０μＭ）、またはＹＭＣ社製ＹＭＣ＊ＧＥＬ ＯＤＳ－Ａ（１２ｎＭ Ｓ－５０μＭ）を用いるか、プレパックカラム｛カラム：ＹＡＭＡＺＥＮ社製 Ｈｉ－ＦｌａｓｈＴＭ Ｃｏｌｕｍｎ（Ｓｉｌｉｃａｇｅｌ）、サイズ；Ｓ（１６×６０ｍｍ）、Ｍ（２０×７５ｍｍ）、Ｌ（２６×１００ｍｍ）、２Ｌ（２６×１５０ｍｍ）、３Ｌ（４６×１３０ｍｍ）のいずれか｝を用いた。
ＮＨシリカゲルは、富士シリシア化学（株）製ＣＨＲＯＭＡＴＯＲＥＸ ＮＨ－ＤＭ２０３５を用いるか、プレパックカラム｛カラム：ＹＡＭＡＺＥＮ社製 Ｈｉ－ＦｌａｓｈＴＭ Ｃｏｌｕｍｎ（Ａｍｉｎｏ）、サイズ；Ｓ（１６×６０ｍｍ）、Ｍ（２０×７５ｍｍ）、Ｌ（２６×１００ｍｍ）、２Ｌ（２６×１５０ｍｍ）、３Ｌ（４６×１３０ｍｍ）のいずれか、もしくは和光純薬工業社製 プレセップＴＭ（ルアーロック）ＮＨ２（ＨＣ）、サイズ：タイプＭ（１４ｇ／２５ｍＬ）、タイプＬ（３４ｇ／７０ｍＬ）、タイプ２Ｌ（５０ｇ／１００ｍＬ）、タイプ３Ｌ（１１０ｇ／２００ｍＬ）のいずれか｝を用いた。
以下の実施例および参考例中の「室温」は通常約１０℃から約３５℃を示す。％は特記しない限り重量パーセントを示す。
以下の実施例および参考例中の化合物の化学名は、「Ｅ－ノートブック」バージョン１２（パーキンエルマー社）を用いて、化学構造から発生させた。ただし、立体配置中の「＊」は、相対配置を表し、特に記載がない場合にはいずれか１つのエナンチオマーを示す。さらに「（３Ｒ＊，４Ｓ＊）」のように標記されている場合には、相対配置については、各不斉中心の関係を示すものとする。すなわち「（３Ｒ＊，４Ｓ＊）」は、（３Ｒ，４Ｓ）または（３Ｓ，４Ｒ）のいずれか１つの特定のエナンチオマーを示す。
本明細書において回転異性体の混合物とは、Ｃ－Ｃ、Ｃ－Ｎ、Ｃ－Ｏなど単結合のまわりの分子内回転により生じる、立体配座を異にする異性体の混合物をいう。
参考例１
２－（（３Ｒ＊，４Ｓ＊）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸エチルエステル塩酸塩の合成
Figure 0007257376000004
（１ａ）４－（２－エトキシ－２－オキソエチリデン）－３－メトキシピペリジン－１－カルボン酸ｔ－ブチルエステルの合成
室温で窒素雰囲気下、ジエチルホスホノ酢酸エチル（１６．５６ｇ）のＴＨＦ（３４０ｍＬ）溶液に水素化ナトリウム（約６０％、２．９５ｇ）を加え、１５分間攪拌した後、３－メトキシ－４－オキソピペリジン－１－カルボン酸ｔ－ブチルエステル（１４．１１ｇ）（国際公開第２０１２／０８０７３５号）のテトロヒドロフラン（５０ｍＬ）溶液を滴下して加え、室温で１６時間攪拌した。反応液に酢酸エチル（１０００ｍＬ）と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（４００ｍＬ）を加えた。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘプタン－酢酸エチル系）で精製し、標記化合物（１４．６５ｇ）を得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＥＺ混合物）δ：１．２９（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ），１．４７（ｓ，４．５Ｈ），１．４８（ｓ，４．５Ｈ），１．９８（ｍ，０．５Ｈ），２．５２－２．８３（ｍ，２Ｈ），３．２－３．９７（ｍ，３Ｈ），３．３０（ｓ，１．５Ｈ），３．３７（ｓ，１．５Ｈ），３．８０－４．５８（ｍ，１Ｈ），４．１８（ｍ，２Ｈ），５．２１（ｂｒ．ｓ，０．５Ｈ），５．８３（ｓ，０．５Ｈ），５．９４（ｓ，０．５Ｈ）.
（１ｂ）２－（３－メトキシピペリジン－４－イリデン）酢酸エチルエステル塩酸塩の合成
４－（２－エトキシ－２－オキソエチリデン）－３－メトキシピペリジン－１－カルボン酸ｔ－ブチルエステル（１．２０ｇ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）溶液にトリフルオロ酢酸（４ｍＬ）を加え、混合物を室温で５時間攪拌した。減圧濃縮し、トルエン（１００ｍＬ）を加え、減圧濃縮した。再度トルエン（１０ｍＬ）を加え、減圧濃縮した後、残渣に酢酸エチル（１０ｍＬ）、トルエン（１０ｍＬ）および４Ｎ塩化水素酢酸エチル溶液（５ｍＬ）を加え、減圧濃縮し、標記化合物（０．９５ｇ）を得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１．２９（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，１．５Ｈ），１．２９（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，１．５Ｈ）,２．９２－３．２０（ｍ，３Ｈ），３．３３（ｓ，１．５Ｈ），３．３４（ｓ，１．５Ｈ），３．２５－３．９１（ｍ，４Ｈ），４．１６－４．２４（ｍ，２Ｈ），５．９８（ｓ，０．５Ｈ），６．００（ｓ，０．５Ｈ），７．９５（ｂｒ．ｓ，０．５Ｈ），８．４３（ｂｒ．ｓ，０．５Ｈ），１０．１１（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）．
（１ｃ）２－（３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸エチルエステル塩酸塩の合成
２－（３－メトキシピペリジン－４－イリデン）酢酸エチルエステル塩酸塩（０．９５ｇ）、エタノール（１０ｍＬ）および酢酸エチル（１０ｍＬ）の混合物にパラジウム－活性炭素（Ｐｄ１０％）（０．２１ｇ）を加え、水素雰囲気下、室温で１７時間攪拌した。雰囲気を窒素に戻し、混合物をセライト濾過し、セライトをエタノールで洗浄した。濾液と洗浄液を合わせ、減圧濃縮して、標記化合物（１．０２ｇ、主にシス異性体）を得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，シス異性体）δ：１．２７（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），１．７１（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，１Ｈ），１．９４（ｂｒ．ｑ，Ｊ＝１４Ｈｚ，１Ｈ），２．１５（ｍ，１Ｈ），２．３２（ｄｄ，Ｊ＝１６，６Ｈｚ，１Ｈ），２．５４（ｄｄ，Ｊ＝１６，８Ｈｚ，１Ｈ），２．９４（ｍ，２Ｈ），３．４１（ｓ，３Ｈ），３．４４－３．６５（ｍ，３Ｈ），４．１５（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），７．８４（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），９．９２（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）.
（１ｄ）（±）－２－（シス－１－ベンズヒドリル－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸エチルエステルの合成
窒素雰囲気下、－２０℃にて、２－（３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸エチルエステル塩酸塩（２．０９８ｇ）、ＤＭＦ（８０ｍＬ）、トリエチルアミン（１．３５ｍＬ）および炭酸カリウム（２．４４ｇ）の混合物にブロモジフェニルメタン（２．６２ｇ）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液を加え、室温で終夜攪拌した。ｔ－ブチルメチルエ－テル（４００ｍＬ）および水（２００ｍＬ）を加えた。有機層を水（２００ｍＬｘ２）および飽和塩化ナトリウム水溶液（２００ｍＬ）で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾去して、濾液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘプタン－酢酸エチル系）で精製し、標記化合物（１．１２７ｇ）を無色液体として得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１．２４（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），１．５１（ｍ，１Ｈ），１．６９（ｍ，１Ｈ），１．９４－２．１２（ｍ，３Ｈ），２．２７（ｄｄ，Ｊ＝１６，７Ｈｚ，１Ｈ），２．５２（ｄｄ，Ｊ＝１６，７Ｈｚ，１Ｈ），２．７２（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），２．９８（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），３．２８（ｓ，３Ｈ），３．２９（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），４．１１（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），４．２６（ｓ，１Ｈ），７．１９（ｍ，２Ｈ），７．２７（ｍ，４Ｈ），７．４４（ｍ，４Ｈ）.
（１ｅ）２－（（３Ｒ＊，４Ｓ＊）－１－ベンズヒドリル－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸エチルエステルの合成
ＣＨＩＲＡＬ ＰＡＫ ＯＪ－Ｈカラムを用い、下記条件にて（±）－２－（シス－１－ベンズヒドリル－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸エチルエステル（１．１２７ｇ）のエナンチオマーを分離（光学分割）し、前半画分として、標記化合物（０．４１１ｇ）を得た。
ＨＰＬＣ条件
カラム：ＣＨＩＲＡＬ ＰＡＫ ＯＪ－Ｈ（Ｌｏｔ；ＯＪＨ－０ＣＪ－ＦＡ００１），２０ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ；
移動相；ヘキサン：エタノール＝９８：２；
溶出速度：２０ｍＬ／ｍｉｎ；
濃度：６７ｍｇ／ｍＬ；
注入量：０．３ｍＬ；
ＨＰＬＣ保持時間：１０．５ｍｉｎ（最初に溶出されたフラクション）．
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１．２４（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），１．４９（ｍ，１Ｈ），１．６９（ｍ，１Ｈ），１．９４－２．１２（ｍ，３Ｈ），２．２７（ｄｄ，Ｊ＝１６，７Ｈｚ，１Ｈ），２．５２（ｄｄ，Ｊ＝１６，７Ｈｚ，１Ｈ），２．７２（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），２．９８（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），３．２７（ｓ，３Ｈ），３．２９（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），４．１１（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），４．２６（ｓ，１Ｈ），７．１９（ｍ，２Ｈ），７．２７（ｍ，４Ｈ），７．４４（ｍ，４Ｈ）．
（１ｆ）２－（（３Ｒ＊，４Ｓ＊）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸エチルエステル塩酸塩の合成
２－（（３Ｒ＊，４Ｓ＊）－１－ベンズヒドリル－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸エチルエステル（４１１ｍｇ）、１Ｎ塩酸（１．１１８ｍＬ）、パラジウム－活性炭素（Ｐｄ５％）（０．２３８ｇ）、シクロヘキセン（２０ｍＬ）およびエタノール（８０ｍＬ）の混合物を、９０℃で１８時間攪拌した。反応液をセライト濾過し、セライトをエタノール（５０ｍＬｘ２）にて洗浄した。濾液と洗浄液を合わせ、減圧濃縮した。残渣にヘプタンとトルエンの混合溶媒（１０ｍＬ、１：１）および２Ｎ塩酸（２０ｍＬ）を加え、分液した。有機層を２Ｎ塩酸（２０ｍＬ）で抽出した。合わせた水層に５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を加え、アルカリ性にし、ジクロロメタン（５０ｍＬｘ２）で抽出した。合わせた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾去して、濾液に４Ｎ塩化水素酢酸エチル溶液（２ｍＬ）を加え、減圧濃縮して、標記化合物（１１９ｍｇ）を得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：１．２５（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），１．７２（ｍ，１Ｈ），１．７６（ｍ，１Ｈ），２．２０（ｍ，１Ｈ），２．３４（ｄｄ，Ｊ＝１７，７Ｈｚ，１Ｈ），２．５２（ｄｄ，Ｊ＝１７，８Ｈｚ，１Ｈ），３．０２（ｍ，２Ｈ），３．２７（ｍ，１Ｈ），３．４１（ｓ，３Ｈ），３．６０（ｍ，２Ｈ），４．１４（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ）．
参考例２
２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の合成
Figure 0007257376000005
（２ａ）５－クロロ－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボン酸エチルエステルの合成
５，７－ジクロロピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボン酸エチルエステル（ＣＡＳ Ｎｏ．１２３２２２４－６２－２）（５ｇ）および２－フルオロ－６－メチルアニリン（ＣＡＳ Ｎｏ．４４３－８９－０）（２．４１ｇ）のＮＭＰ（３ｍＬ）溶液を１２０℃で４時間撹拌した。別途に５，７－ジクロロピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボン酸エチルエステル（０．５０ｇ）および２－フルオロ－６－メチルアニリン（０．２７ｇ）とＮＭＰ（０．２０ｍＬ）を１２０℃で４時間撹拌した反応液と合わせて酢酸エチルで希釈し、水および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去後、濾液を減圧濃縮して残渣にジクロロメタンを加えて不溶の固体を濾取し、標記化合物（２．８８ｇ）を淡黄色固体として得た。濾液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン－酢酸エチル系）で精製し、標記化合物（２．２８ｇ）を得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１．４６（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ），４．５０（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），５．７５（ｓ，１Ｈ），７．０２（ｓ，１Ｈ），７．１２（ｔ，Ｊ＝８Ｈz，１Ｈz，１Ｈ），７．１８（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｔｄ，Ｊ＝８，６Ｈｚ，１Ｈ），７．８２（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）．
（２ｂ）５－クロロ－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボン酸エチルエステルの合成
５－クロロ－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボン酸エチルエステル（５．１６ｇ）のＤＭＦ（８０ｍＬ）溶液に炭酸セシウム（７．２３ｇ）とヨウ化メチル（４．６１ｍＬ）を加え、５０℃で３時間撹拌した。反応液を酢酸エチルで希釈して水および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去して、濾液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘプタン－酢酸エチル系）で精製し、標記化合物（４．６４ｇ）を淡黄色固体として得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１．３７（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），２．２６（ｓ，３Ｈ），３．８３（ｂｒ．ｓ，３Ｈ），４．３６（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），５．７９（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），６．８８（ｓ，１Ｈ），７．０４（ｔ，Ｊ＝９Ｈz，１Ｈ），７．１３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｔｄ，Ｊ＝９，６Ｈｚ，１Ｈ）．
（２ｃ）５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボン酸エチルエステルの合成
窒素雰囲気下、５－クロロ－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボン酸エチルエステル（０．７３ｇ）および１，４－ジオキサン（１６ｍＬ）の混合物に水（２ｍＬ）、炭酸ナトリウム（０．５３ｇ）、４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニルボロン酸（０．４４ｇ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．１２ｇ）を加え、１００℃で３時間撹拌した。室温に戻した後、反応液に酢酸エチル（２００ｍＬ）および水（５０ｍＬ）を加え、有機層を分離し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾去して、濾液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘプタン－酢酸エチル系）で精製し、標記化合物（０．９６ｇ）を淡黄色固体として得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１．３９（ｔ，Ｊ=７Ｈｚ，３Ｈ），２．２８（ｓ，３Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），４．３８（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），６．１４（ｓ，１Ｈ），７．０３（ｓ，１Ｈ），７．０４（ｄｄ，Ｊ＝９，８Ｈz，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｔｄ，Ｊ＝８，６Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ）．
（２ｄ）５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボン酸の合成
５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボン酸エチルエステル（２．３５ｇ）および１，４－ジオキサン（１００ｍＬ）の混合物に水（１０ｍＬ）および４Ｎ水酸化リチウム水溶液（２．４７ｍＬ）を加え、室温で１７時間撹拌した。５Ｎ塩酸（２ｍＬ）を加え、減圧下、容積が約１５ｍＬになるまで濃縮した。超音波処理し、混合物を室温で３０分間撹拌した後、固体を濾取し、水（５ｍＬ）で洗浄し、減圧下で乾燥して、標記化合物（２．２４ｇ）を淡黄色固体として得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：２．３０（ｓ，３Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），６．４７（ｓ，１Ｈ），７．０３（ｔ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｓ，１Ｈ），７．１３－７．１８（ｍ，１Ｈ），７．３４（ｔｄ，Ｊ＝８，５Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ）．
（２ｅ）２－（（３Ｒ＊，４Ｓ＊）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸エチルエステルの合成
５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボン酸（１１２ｍｇ）のＤＭＦ（６ｍＬ）溶液にＨＯＢＴ（５７ｍｇ）、ＷＳＣ（７２ｍｇ）、２－（（３Ｒ＊，４Ｓ＊）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸エチルエステル塩酸塩（７７ｍｇ）（参考例１）、およびトリエチルアミン（１０１ｍｇ）を順次加え、室温で１５時間撹拌した。反応液に酢酸エチル（５０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）を加え、有機層を水（２０ｍＬｘ２）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘプタン－酢酸エチル系）で精製し、標記化合物（１３７ｍｇ）を得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，回転異性体の混合物）δ：１．２６（ｍ，３Ｈ），１．４０－１．７４（ｍ，２Ｈ），２．１２－２．５５（ｍ，５Ｈ），２．６０－３．１１（ｍ，４Ｈ），３．３８－３．７５（ｍ，６Ｈ），４．１４（ｍ，２Ｈ），４．１０－４．４６（ｍ，１Ｈ），４．５４－４．９５（ｍ，１Ｈ），６．２９－６．５３（ｍ，１Ｈ），６．９０－７．２８（ｍ，４Ｈ），７．６１－７．７０（ｍ，２Ｈ）．
（２ｆ）２－（（３Ｒ＊，４Ｓ＊）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の合成
２－（（３Ｒ＊，４Ｓ＊）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸エチルエステル（１３７ｍｇ）の１，４－ジオキサン（６ｍＬ）溶液に、水酸化リチウム（１０．４ｍｇ）の水溶液（１．５ｍＬ）を加え、室温で２０時間撹拌した。反応液にＤＭＳＯ（２ｍＬ）および酢酸（０．１ｍＬ）を加え、減圧濃縮した。残渣を逆相シリカゲルクロマトグラフィー（アセトニトリル－水、０．１％酢酸系）で精製し、標記化合物（９２ｍｇ）を白色固体として得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，３０℃，回転異性体の混合物）δ：１．２５－１．７６（ｍ，２Ｈ），２．０１－２．４１（ｍ，４Ｈ），２．４７－３．１４（ｍ，４Ｈ），３．３８－３．７５（ｍ，７Ｈ），４．１３－４．４６（ｍ，１Ｈ），４．５４－４．９８（ｍ，１Ｈ），６．２９－６．５７（ｍ，１Ｈ），６．８４－７．３０（ｍ，４Ｈ），７．５６－７．７９（ｍ，２Ｈ）．
Ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｕｍ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６０２（Ｍ＋Ｈ）＋．
Figure 0007257376000006
（２ｇ）（２Ｓ，３Ｓ）－３－（シアノメチル）－１－（（Ｓ）－１－フェニルエチル）ピロリジン－２－カルボン酸エチルエステルの合成
窒素雰囲気下（Ｓ）－２－（ブテン－３－エン－１－イル（１－フェニルエチル）アミノ）酢酸エチルエステル（ＣＡＳ Ｎｏ．１８６５８６－６５－２）（６０．２９ｇ）のＴＨＦ（７５０ｍＬ）溶液を－７５℃に冷却し、カニューレを用いてこの溶液にエタノール・ドライアイスで冷却したリチウムジイソプロピルアミドのｎ－ヘキサン・ＴＨＦ溶液（１．１３Ｍ，２４５ｍＬ）を加えた。－２０℃まで昇温して１５分間攪拌した後、再びエタノール・ドライアイスを冷媒とした冷却槽を用いて反応液を冷却し、－７２℃以下で臭化亜鉛（１５６ｇ）のジエチルエーテル（８００ｍＬ）溶液を加えた。冷却槽を外して反応液を室温に戻し、１時間攪拌した。食塩を含む氷水を冷媒とした冷却槽を用いて反応液を０℃以下に冷却し、シアン化銅（Ｉ）（４１．３ｇ）、塩化リチウム（３９．１ｇ）およびＴＨＦ（７５０ｍＬ）の混合物を加えた。続いて、（４－メチルフェニル）スルホニルシアニド（ＣＡＳ Ｎｏ．１９１５８－５１－１）（５０．２ｇ）のＴＨＦ（２００ｍＬ）溶液を加え、室温で１４時間攪拌した。攪拌しながら、水（１０００ｍＬ）、アンモニア水（２８％、３００ｍＬ）および酢酸エチル（１５００ｍＬ）を加えた。懸濁液をセライト濾過し、沈殿物を除去した。濾液を分液ロートに移し、有機層と水層を分離し、有機層をアンモニア水（１０％、７５０ｍＬ）、水（７５０ｍＬ）および飽和塩化ナトリウム水溶液（７５０ｍＬ）で順次洗浄した。セライトと沈殿物を酢酸エチル（５００ｍＬ）で４回洗浄し、これらの洗浄液を合わせた。合わせた洗浄液を用いて、上記４つの水層（最初に分離した水層、洗浄に使用したアンモニア水、洗浄に使用した水、洗浄に使用した飽和塩化ナトリウム水溶液）を順次抽出した。有機層を全部合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘプタン－酢酸エチル系）で精製し、標記化合物（４２．９８ｇ）を得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，主な異性体）δ：１．２４（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），１．３６（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），１．７７（ｍ,１Ｈ），２．１８（ｍ，１Ｈ），２．２７（ｄｄ，Ｊ＝１７，９Ｈｚ，１Ｈ），２．３５（ｄｄ，Ｊ＝１７，７Ｈｚ，１Ｈ），２．６６（ｍ，１Ｈ），２．９５（ｑ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），３．１０（ｔｄ，Ｊ＝９，３Ｈｚ，１Ｈ），３．４２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），３．７５（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ），４．０９－４．１８（ｍ，２Ｈ），７．２２－７．３８（ｍ，５Ｈ）．
（２ｈ）２－（（２Ｓ，３Ｓ）－２－ヒドロキシメチル－１－（（Ｓ）－１－フェニルエチル）ピロリジン－３－イル）アセトニトリルの合成
氷冷下で窒素の雰囲気下、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（シアノメチル）－１－（（Ｓ）－１－フェニルエチル）ピロリジン－２－カルボン酸エチルエステル（４４．７４ｇ）のＴＨＦ（７００ｍＬ）溶液にテトラヒドロほう酸リチウム（２０ｇ）を加え、５時間加熱還流した。反応液を室温に冷却し、１Ｎ塩酸（１０００ｍＬ）および酢酸エチルの混合物に注いだ。３０分間攪拌した後、炭酸水素ナトリウム（約１００ｇ）を加え、酢酸エチルで３回、ジクロロメタンで２回抽出した。有機層を合わせ、乾燥し、乾燥剤を濾去した後、濾液を減圧濃縮した。残渣をＮＨシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘプタン－酢酸エチル系）で精製し、標記化合物（２８．９８ｇ）を得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，主な異性体）δ：１．４７（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），１．５９（ｑｄ，Ｊ＝１２，７Ｈｚ，１Ｈ），１．９３（ｄｔ，Ｊ＝１２，６Ｈｚ，１Ｈ），２．３２－２．４０（ｍ，１Ｈ），２．４６－２．６３（ｍ，３Ｈ），３．０１（ｄｄ，Ｊ＝９，８Ｈｚ，１Ｈ），３．０８－３．１０（ｍ，１Ｈ），３．２７（ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，１Ｈ），３．５５（ｄｄ，Ｊ＝１２，２Ｈｚ，１Ｈ），３．６５（ｄｄ，Ｊ＝１２，４Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ），７．２６－７．３６（ｍ，５Ｈ）．
（２ｉ）２－（（３Ｒ，４Ｓ）－３－ヒドロキシ－１－（（Ｓ）－１－フェニルエチル）ピペリジン－４－イル）アセトニトリルの合成
窒素雰囲気下２－（（２Ｓ，３Ｓ）－２－ヒドロキシメチル－１－（（Ｓ）－１－フェニルエチル）ピロリジン－３－イル）アセトニトリル（５２．４４ｇ）のＴＨＦ（２０００ｍＬ）溶液を－７４℃以下に冷却し、攪拌しながらトリフルオロ酢酸無水物（３６．４ｍＬ）を内温が－７３℃を超えないように滴下して加えた。更に３時間攪拌した後、トリエチルアミン（１２０ｍＬ）を滴下して加えた。１５分間攪拌した後、内温を室温に戻し、１５時間加熱還流した。溶液を減圧除去し、残渣に酢酸エチル（５０００ｍＬ）と２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）を加え、分液した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残渣をＮＨシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘプタン－酢酸エチル系）で精製し、標記化合物（５１．２５ｇ）を得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，主な異性体）δ：１．３７（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），１．４７－１．７６（ｍ，３Ｈ），１．９５（ｔｄ，Ｊ＝１２，３Ｈｚ，１Ｈ），２．１５（ｄｄ，Ｊ＝１２，１Ｈｚ，１Ｈ），２．３３（ｄｄ，Ｊ＝１７，８Ｈｚ，１Ｈ），２．４６（ｄｄ，Ｊ＝１７，７Ｈｚ，１Ｈ），２．８２－２．８６（ｍ，２Ｈ），３．０９－３．１４（ｍ，１Ｈ），３．５６（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ），３．７４（ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ，１Ｈ），７．２４－７．３５（ｍ，５Ｈ）．
（２ｊ）２－（（３Ｒ，４Ｓ）－３－メトキシ－１－（（Ｓ）－１－フェニルエチル）ピペリジン－４－イル）アセトニトリルの合成
水冷下で窒素雰囲気下、２－（（３Ｒ，４Ｓ）－３－ヒドロキシ－１－（（Ｓ）－１－フェニルエチル）ピペリジン－４－イル）アセトニトリル（５１．０１ｇ）とＴＨＦ（７５０ｍＬ）の混合物に、攪拌しながら水素化ナトリウム（６０％、９．１９ｇ）を１５分かけて少しずつ加えた。更に１０分間攪拌した後、硫酸ジメチル（２２．９４ｍＬ）を滴下して加えた。５時間攪拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液（５０ｍＬ）、アンモニア水（２８％、５０ｍＬ）および酢酸エチル（１０００ｍＬ）を順次加え、３０分間攪拌した。１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）を加え、分液した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液（２５０ｍＬ）で洗浄し、合わせた水層を酢酸エチル（５００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残渣をＮＨシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘプタン－酢酸エチル系）で精製し、標記化合物（４７．９ｇ）を得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，主な異性体）δ：１．３８（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），１．５３－１．５９（ｍ，１Ｈ），１．６３－１．７２（ｍ，１Ｈ），１．８５－１．９４（ｍ，１Ｈ），２．０２－２．１５（ｍ，２Ｈ），２．３０（ｄｄ，Ｊ＝１７，７Ｈｚ，１Ｈ），２．４９（ｄｄ，Ｊ＝１７，８Ｈｚ，１Ｈ），２．７４（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，１Ｈ），３．０４（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，１Ｈ），３．３０（ｓ，３Ｈ），３．３８（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），３．５５（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ），７．２３－７．３３（ｍ，５Ｈ）．
（２ｋ）２－（（３Ｒ，４Ｓ）－３－メトキシ－１－（（Ｓ）－１－フェニルエチル）ピペリジン－４－イル）酢酸メチルエステルの合成
窒素雰囲気下、メタノール（１５００ｍＬ）に塩化チオニル（３５２ｍＬ）を氷冷下滴下して加えた後、２－（（３Ｒ，４Ｓ）－３－メトキシ－１－（（Ｓ）－１－フェニルエチル）ピペリジン－４－イル）アセトニトリル（４９．８ｇ）のメタノール（５０ｍＬ）溶液を加えた。混合物を２０時間加熱還流した後、氷冷し、更に塩化チオニル（３５２ｍＬ）を滴下して加え、２２時間加熱還流した。反応液を再度氷冷し、更に塩化チオニル（５０ｍＬ）を滴下して加え、６２時間加熱還流した。反応液を室温に戻した後、減圧濃縮した。残渣を水（２５０ｍＬ）および酢酸エチル（２５０ｍＬ）に溶解し、アンモニア水（２８％、５０ｍＬ）を加えた後、ｐＨ１１になるまで２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を加えた。分液し、水層を酢酸エチル（５００ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮し、残渣Ａを得た。
次に水層を減圧濃縮し、残渣にメタノール（１０００ｍＬ）および濃硫酸（５０ｍＬ）を加え、２２時間加熱還流した。反応液を室温に戻し、炭酸水素ナトリウムでｐＨを８に調整した。溶媒を減圧除去し、残渣を酢酸エチル（１０００ｍＬ）および水（２５０ｍＬ）に溶解し、２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨを１１に調整し、分液した。水層を酢酸エチル（５００ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮し、残渣Ｂを得た。
窒素雰囲気下、メタノール（１５００ｍＬ）に塩化チオニル（３５２ｍＬ）を氷冷下滴下して加えた後、残渣Ａのメタノール（１００ｍＬ）溶液を加えた。混合物を２２時間加熱還流した。反応液を室温に戻し、溶媒を減圧除去し、残渣を酢酸エチル（１０００ｍＬ）および水（２５０ｍＬ）に溶解し、アンモニア水（２８％、５０ｍＬ）を加え、２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨを１１に調整し、分液した。水層を酢酸エチル（５００ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮し、残渣Ｃを得た。
２回目の反応後処理で得た水層を減圧濃縮し、残渣にメタノール（１０００ｍＬ）および濃硫酸（５０ｍＬ）を加え、２２時間加熱還流した。反応液を室温に戻し、炭酸水素ナトリウムでｐＨを８に調整した。溶媒を減圧除去し、残渣を酢酸エチル（１０００ｍＬ）および水（２５０ｍＬ）に溶解し、２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨを１１に調整し、分液した。水層を酢酸エチル（５００ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮し、残渣Ｄを得た。
残渣Ｂ、残渣Ｃおよび残渣Ｄを合わせ、ＮＨシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘプタン－酢酸エチル系）で精製し、粗２－（（３Ｒ，４Ｓ）－３－メトキシ－１－（（Ｓ）－１－フェニルエチル）ピペリジン－４－イル）酢酸メチルエステル（５２．３５ｇ）を得た。
粗２－（（３Ｒ，４Ｓ）－３－メトキシ－１－（（Ｓ）－１－フェニルエチル）ピペリジン－４－イル）酢酸メチルエステル（５２．３５ｇ）と別途同様の方法で得た粗２－（（３Ｒ，４Ｓ）－３－メトキシ－１－（（Ｓ）－１－フェニルエチル）ピペリジン－４－イル）酢酸メチルエステル（１．４５ｇ）を合わせた酢酸エチル（４００ｍＬ）溶液に、攪拌しながら４Ｎ塩化水素酢酸エチル溶液（１００ｍＬ）を加えた。室温で一晩攪拌した後、沈殿物を濾取し、酢酸エチル（１００ｍＬ）で洗浄し、減圧乾燥した。得られた固体に、攪拌しながら水（２５０ｍＬ）、酢酸エチル（２５０ｍＬ）、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（２５０ｍＬ）を順次加えた。さらに酢酸エチル（７５０ｍＬ）を加えた後、炭酸カリウムを用いてｐＨを１２に調整し、分液した。水層を酢酸エチル（２５０ｍＬ）で洗浄し、この洗浄液と分液した有機層を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。得られた残渣（４６．３ｇ）を酢酸エチル（４００ｍＬ）に溶解し、攪拌しながら４Ｎ塩化水素酢酸エチル溶液（８０ｍＬ）を加えた。室温で一晩攪拌した後、沈殿物を濾取し、酢酸エチル（４０ｍＬ）で洗浄し、減圧乾燥して得られた固体に、水（２５０ｍＬ）および酢酸エチル（２５０ｍＬ）を順次加え、攪拌しながら炭酸水素ナトリウムを加えた。水（７５０ｍＬ）および酢酸エチル（７５０ｍＬ）を加え、分液した。水層に５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１０００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮し、４５．２ｇの残渣を得た。これを、別途同様の操作で得た１６．２ｇの残渣と合わせ、酢酸エチル（５００ｍＬ）に溶解し、攪拌しながら４Ｎ塩化水素酢酸エチル溶液（１００ｍＬ）を加えた。室温で一晩攪拌した後、沈殿物を濾取し、酢酸エチル（６０ｍＬ）で２回洗浄し、減圧乾燥した。得られた固体に水（８００ｍＬ）および酢酸エチル（８００ｍＬ）を順次加え、攪拌しながら炭酸水素ナトリウムを加え、分液した。水層に５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（８００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮し、標記化合物（６０．７ｇ）を得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１．３８（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），１．４５－１．５４（ｍ，１Ｈ），１．５７－１．６７（ｍ，１Ｈ），２．０３－２．２１（ｍ，３Ｈ），２．２４（ｄｄ，Ｊ＝１６，７Ｈｚ，１Ｈ），２．５０（ｄｄ，Ｊ＝１６，７Ｈｚ，１Ｈ），２．６４（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），２．８５（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），３．２７（ｓ，３Ｈ），３．２９－３．３２（ｍ，１Ｈ），３．５２（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ），３．６５（ｓ、３Ｈ），７．２３－７．３３（ｍ，５Ｈ）．
（２ｌ）２－（（３Ｒ，４Ｓ）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸メチルエステル塩酸塩の合成
２－（（３Ｒ，４Ｓ）－３－メトキシ－１－（（Ｓ）－１－フェニルエチル）ピペリジン－４－イル）酢酸メチルエステル（４．３７ｇ）のメタノール（５０ｍＬ）溶液および塩化水素のメタノール溶液（５－１０％、３０ｍＬ）の混合物にパラジウム－活性炭素（Ｐｄ１０％）（０．６３９ｇ）を加え、水素雰囲気下、室温で１６時間攪拌した。さらに、パラジウム－活性炭素（Ｐｄ１０％）（０．６３９ｇ）を加え、水素雰囲気下、室温で２４時間攪拌した。パラジウム－活性炭素（Ｐｄ１０％）（０．６３９ｇ）を加え、水素雰囲気下、室温で更に２４時間攪拌した。混合物をセライト濾過し、セライトをメタノールで洗浄した。濾液と洗浄液を合わせ、減圧濃縮して、標記化合物（３．８１ｇ）を得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：１．７１－１．８５（ｍ，２Ｈ），２．１６－２．２５（ｍ，１Ｈ），２．２５（ｄｄ，Ｊ＝１６，７Ｈｚ，１Ｈ），２．５３（ｄｄ，Ｊ＝１６，７Ｈｚ，１Ｈ），３．００－３．０６（ｍ，２Ｈ），３．２７（ｍ，１Ｈ），３．４０（ｓ，３Ｈ），３．５９－３．６３（ｍ，２Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ）．
（２ｍ）２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸メチルエステルの合成
５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボン酸（６．０３ｇ）（参考例２－（２ｄ））のＤＭＦ（１００ｍＬ）溶液にＨＯＢＴ（２．２８０ｇ）およびＷＳＣ（３．２３ｇ）を加え、１５分間攪拌した後、２－（（３Ｒ，４Ｓ）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸メチルエステル塩酸塩（３．３６ｇ）のＤＭＦ（５０ｍＬ）溶液、およびトリエチルアミン（５．６４ｍＬ）を順次加え、室温で３時間撹拌した。反応液に酢酸エチル（７００ｍＬ）と水（５００ｍＬ）を加え、有機層を少量の塩化ナトリウムを含む水（７５０ｍＬ）で２回洗浄した。水層と洗浄液を酢酸エチル（７５０ｍＬ）で順次抽出し、有機層を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、濾液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘプタン－酢酸エチル系）で精製し、標記化合物（５．８３ｇ）を得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，回転異性体の混合物）δ：１．２５－１．７５（ｍ，２Ｈ），２．０５－２．９５（ｍ，９Ｈ），３．３８－３．７５（ｍ，９Ｈ），４．１０－４．４６（ｍ，１Ｈ），４．５４－４．９５（ｍ，１Ｈ），６．３７－６．５０（ｍ，１Ｈ），６．９０－７．２８（ｍ，４Ｈ），７．６４－７．７６（ｍ，２Ｈ）．
（２ｎ）２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の合成
２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸メチルエステル（５．７３ｇ）の１，４－ジオキサン（１５０ｍＬ）溶液に、水（３０ｍＬ）および４Ｎ水酸化リチウム水溶液（３．４９ｍＬ）を加え、室温で１４時間撹拌した。反応液にＤＭＳＯ（１０ｍＬ）およびギ酸（３ｍＬ）を加え、減圧濃縮した。残渣を逆相シリカゲルクロマトグラフィー（アセトニトリル－水、０．１％酢酸系）で精製し、標記化合物（５．１２４ｇ）を固体として得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ，回転異性体の混合物）δ：１．２４－１．６０（ｍ，２Ｈ），２．００－２．４７（ｍ，４Ｈ），２．４８－３．１２（ｍ，４Ｈ），３．３１－３．６４（ｍ，７Ｈ），４．００－４．３４（ｍ，１Ｈ），４．３４－４．６５（ｍ，１Ｈ），６．８４－６．８７（ｍ，１Ｈ），６．９０－７．３５（ｍ，４Ｈ），７．９８－８．０１（ｍ，２Ｈ）．
［α］Ｄ ２０：－１０９．９°（１００ｍｇ，ＤＭＳＯ，５ｍＬ，１００ｍｍ）．
参考例３
２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸のＸ線回折実験
参考例２－（２ｎ）で得られた２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の固体をメタノールに溶解し、アセトニトリルをリザーバーとする蒸気拡散法により再結晶化した。得られた単結晶を用いてＸ線回折実験を行った。結晶学的データおよび構造解析結果を表１に、原子座標データを表２に示す。かかる結果より、標記化合物の絶対構造を特定した。
Figure 0007257376000007
Figure 0007257376000008
参考例４
２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の再結晶
参考例２に記載の方法と同様の方法で得られた２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸（６３．５ｇ）、テトラヒドロフラン（１５６ｍＬ）、アセトニトリル（４９６ｍＬ）および水（６５ｍＬ）の混合物を内温９５℃で撹拌しながら、水（５５０ｍＬ）を加えた。３０分間撹拌した後、アセトニトリル（２５ｍＬ）および水（１０ｍＬ）を加え、沈殿物を溶解させた。水（３ｍＬ）を滴下し、３０分間撹拌した後、再び透明な溶液になるまでアセトニトリル（３ｍＬ）を滴下した。３０分間撹拌した後、内温を５０℃まで下げ、更に２時間撹拌した。参考例２に記載の方法と同様の方法で得られた標記化合物の固体（０．０５ｇ）を加え、加熱を止め、内温が室温に戻った後３日間室温で撹拌した。混合物を内温－５℃まで冷却し、固体を濾取し、氷水を用いて冷却したアセトニトリル：テトラヒドロフラン：水 ４：１：５混液（３ｘ２００ｍＬ）で洗浄し、窒素気流下で減圧乾燥し、標記化合物の結晶（４６．０ｇ）を得た。
粉末Ｘ線回折 回折角度（２θ±０．２°）：６．１、９．９、１１．６、１２．７、１３．９、１７．５、２０．６、２１．１、２３．２、２９．４
１３Ｃ－ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｓｏｌｉｄ ｓｔａｔｅ）δ（ｐｐｍ）：１５．５、４０．５、４７．１、５４．８、７５．０、９９．７、１３２．６、１３７．５、１６４．５、１７４．７
参考例４で得られた結晶の粉末Ｘ線回折パターンを図３に、１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルを図４にそれぞれ示す。
実施例１
２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸 塩酸塩の合成
参考例２に記載の方法と同様の方法で得られた２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸（１０ｍｇ）に酢酸エチル１ｍＬを加えた。７０℃の水浴にて、固体を完全に溶解させた。濃塩酸３μＬを加え、終夜室温で撹拌した。固体を濾取し、減圧乾燥し、標記化合物の結晶（９ｍｇ）を得た。
参考例２に記載の方法と同様の方法で得られた２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸（１．２０４ｇ）および酢酸エチル（１２０ｍＬ）を固体が完全に溶解するまで窒素雰囲気下７０℃で攪拌した。溶液を室温に戻した後、４Ｎ塩化水素酢酸エチル溶液（４ｍＬ）および上記で得られた標記化合物の結晶数ｍｇを加えた。終夜室温で撹拌した後、固体を濾取し、酢酸エチル（５ｍＬ）で洗浄し、減圧乾燥し、標記化合物の結晶（１．２０２ｇ）を得た。
粉末Ｘ線回折 回折角度（２θ±０．２°）：８．３、１１．４、１３．１、１５．２、１５．７、１７．３、１８．８、１９．７、２２．３、２５．０
１３Ｃ－ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｓｏｌｉｄ ｓｔａｔｅ）δ（ｐｐｍ）：１８．５、１９．９、５６．６、５８．４、７６．２、７７．４、９４．４、９５．９、１２９．３、１７３．５
実施例１で得られた結晶の粉末Ｘ線回折パターンを図１に、１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルを図２にそれぞれ示す。
試験例１ 細胞内カルシウム濃度測定
ウシ胎児血清３％（３％ＦＢＳ）添加ＤＭＥＭ培養液（インビトロジェン社）を用いて培養したヒト胎児腎臓由来細胞株ＨＥＫ２９３細胞を２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調製し、１型コラーゲンでコートした３８４穴黒色プレート（透明底）（グライナー社）に２５μＬ／ｗｅｌｌとなるように播いて、炭酸ガス培養装置で一晩培養した。Ｈａｎｋｓ－２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ７．４）で調製したＦＬＩＰＲ Ｃａｌｃｉｕｍ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を細胞に２５μＬ／ｗｅｌｌとなるように添加して、１時間炭酸ガス培養装置にて培養した。Ｈａｎｋｓ－２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ７．４）で、終濃度が５Ｕ／ｍＬ（ＢＡＥＥ ｕｎｉｔ）になるように調製したトリプシン（ＳＩＧＭＡ－ＡＬＤＲＩＣＨ社、カタログ番号：Ｔ８８１６、Ｅｎｚｙｍｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ Ｎｕｍｂｅｒ ３．４．２１．４）を、３８４穴ｄｅｅｐ ｗｅｌｌポリプロピレンプレート（グライナー社）に添加してアゴニスト試薬プレートとした。ＦＤＳＳ６０００（浜松ホトニクス社）で測定する３０分前に、Ｈａｎｋｓ－２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ７．４）で調製した被検化合物を、細胞に８μＬ／ｗｅｌｌ添加した。被検化合物を添加した細胞プレートと試薬プレートをＦＤＳＳ６０００にセットし、試薬プレートからアゴニスト溶液を２２μｌ／ｗｅｌｌ添加し、その際の細胞内カルシウム濃度の変化をＣＣＤカメラにて検出した。測定は３７℃で１２０秒間行い、試薬プレートから細胞プレートへの試薬の添加は、ＦＤＳＳ６０００本体内蔵の３８４ｗｅｌｌ自動分注機で行った。
被検化合物の細胞内カルシウム上昇抑制活性（ＩＣ５０（ｎＭ））を、表３に示した。
Figure 0007257376000009
試験例２ 溶解度試験
被検化合物約１ｍｇを試験管に秤量し、試験液１ｍＬを添加した。試験液は、０．１Ｍ塩酸水溶液（ｐＨ１）、およびブリトン－ロビンソン緩衝液（ｐＨ３、ｐＨ５およびｐＨ７；イオン強度０．３）を用いた。室温で試験液を２４時間振とう後、フィルターろ過した。ろ液中の被検化合物の濃度を高速液体クロマトグラフィーにより測定し、溶解度を評価した。結果を表５に示す。また、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）条件を以下に示す。
〔ＨＰＬＣ条件〕
カラム；ＹＭＣ－Ｐａｃｋ Ｐｒｏ Ｃ１８，４．６ｍｍ×３５ｍｍ，３μｍ
移動相Ａ；水：アセトニトリル：７０％過塩素酸＝９００：１００：１
移動相Ｂ；水：アセトニトリル：７０％過塩素酸＝１００：９００：１
流速；２ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度；４０℃
検出波長；２７５ｎｍ
注入量；１０μＬ
グラジエント条件
Figure 0007257376000010
Figure 0007257376000011
試験例３ 溶出試験
溶出試験は、ＦａＳＳＩＦ（３ｍＭタウロコール酸ナトリウム、０．７５ｍＭレシチン、２９ｍＭリン酸二水素ナトリウムおよび１０３ｍＭ塩化カリウムを含有する水溶液で、水酸化ナトリウム水溶液の滴下によりｐＨ６．５に調整した水溶液）を試験液とし、パドル法にて行った。試験液１００ｍＬ中に、被検化合物約１０ｍｇを添加した。３７℃、５０ｒｐｍの条件で、パドルを用いて試験液を撹拌した。撹拌開始後、表６に示す各時点で、試験液１ｍＬを採取し、フィルターろ過した。ろ液中の被検化合物の濃度を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ条件は、試験例２に記載した条件と同じ条件）により測定した。結果を表６に示す。
Figure 0007257376000012

Claims (11)

  1. 式（Ｉ）で表される２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の塩酸塩。
    Figure 0007257376000013
  2. 式（Ｉ）で表される２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の塩酸塩の結晶。
    Figure 0007257376000014
  3. 請求項２記載の結晶であって、
    粉末Ｘ線回折において、回折角度（２θ±０．２°）８．３°に回折ピークを有する、２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の塩酸塩の結晶。
  4. 請求項２記載の結晶であって、
    粉末Ｘ線回折において、回折角度（２θ±０．２°）８．３°および１３．１°に回折ピークを有する、２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の塩酸塩の結晶。
  5. 請求項２記載の結晶であって、
    粉末Ｘ線回折において、回折角度（２θ±０．２°）８．３°、１３．１°および１５．７°に回折ピークを有する、２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の塩酸塩の結晶。
  6. 請求項２記載の結晶であって、
    粉末Ｘ線回折において、回折角度（２θ±０．２°）８．３°、１１．４°、１３．１°、１５．７°および１７．３°に回折ピークを有する、２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の塩酸塩の結晶。
  7. 請求項２記載の結晶であって、
    粉末Ｘ線回折において、回折角度（２θ±０．２°）８．３°、１１．４°、１３．１°、１５．２°、１５．７°、１７．３°、１８．８°、１９．７°、２２．３°および２５．０°に回折ピークを有する、２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の塩酸塩の結晶。
  8. 請求項２記載の結晶であって、
    １３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおいて、化学シフト（δ±０．５ｐｐｍ）５８．４ｐｐｍ、７７．４ｐｐｍおよび１７３．５ｐｐｍにピークを有する、２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の塩酸塩の結晶。
  9. 請求項２記載の結晶であって、
    １３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおいて、化学シフト（δ±０．５ｐｐｍ）１８．５ｐｐｍ、５８．４ｐｐｍ、７７．４ｐｐｍ、９４．４ｐｐｍおよび１７３．５ｐｐｍにピークを有する、２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の塩酸塩の結晶。
  10. 請求項２記載の結晶であって、
    １３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルにおいて、化学シフト（δ±０．５ｐｐｍ）１８．５ｐｐｍ、１９．９ｐｐｍ、５６．６ｐｐｍ、５８．４ｐｐｍ、７６．２ｐｐｍ、７７．４ｐｐｍ、９４．４ｐｐｍ、９５．９ｐｐｍ、１２９．３ｐｐｍおよび１７３．５ｐｐｍにピークを有する、２－（（３Ｒ，４Ｓ）－１－（５－（４－クロロ－３，５－ジフルオロフェニル）－７－（（２－フルオロ－６－メチルフェニル）（メチル）アミノ）ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－２－カルボニル）－３－メトキシピペリジン－４－イル）酢酸の塩酸塩の結晶。
  11. 請求項１～１０のいずれか一項に記載の塩または結晶を有効成分として含有する医薬組成物。
JP2020501065A 2018-02-26 2019-02-22 ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン化合物の塩およびその結晶 Active JP7257376B2 (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2018031646 2018-02-26
JP2018031646 2018-02-26
PCT/JP2019/006850 WO2019163956A1 (ja) 2018-02-26 2019-02-22 ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン化合物の塩およびその結晶

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPWO2019163956A1 JPWO2019163956A1 (ja) 2021-02-04
JP7257376B2 true JP7257376B2 (ja) 2023-04-13

Family

ID=67687243

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2020501065A Active JP7257376B2 (ja) 2018-02-26 2019-02-22 ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン化合物の塩およびその結晶

Country Status (14)

Country Link
US (1) US11312720B2 (ja)
EP (1) EP3760631B1 (ja)
JP (1) JP7257376B2 (ja)
KR (1) KR20200124655A (ja)
CN (1) CN111655694B (ja)
AU (1) AU2019224410A1 (ja)
BR (1) BR112020015729A2 (ja)
CA (1) CA3088718A1 (ja)
IL (1) IL276160A (ja)
MX (1) MX2020008110A (ja)
RU (1) RU2020125450A (ja)
SG (1) SG11202005926XA (ja)
TW (1) TW201936607A (ja)
WO (1) WO2019163956A1 (ja)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11141418B1 (en) * 2018-06-22 2021-10-12 The Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for KRAS inhibitors
WO2021106864A1 (en) * 2019-11-25 2021-06-03 Eisai R&D Management Co., Ltd. Process for the preparation of producing pyrazolo[1,5-a] pyrimidine derivatives
CA3220630A1 (en) 2021-06-02 2022-12-08 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Pyrazolo[1,5-a]pyrimidine compound for the treatment of dermal disorders
WO2023233033A1 (en) 2022-06-03 2023-12-07 Domain Therapeutics Novel par-2 inhibitors

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018043461A1 (ja) 2016-08-31 2018-03-08 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン化合物

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6833371B2 (en) * 2001-11-01 2004-12-21 Icagen, Inc. Pyrazolopyrimidines
JP2003286171A (ja) 2002-03-28 2003-10-07 Sumitomo Pharmaceut Co Ltd Ｐａｒ阻害剤
JP2004170323A (ja) 2002-11-22 2004-06-17 Sumitomo Pharmaceut Co Ltd 皮膚疾患治療剤のスクリーニング方法
WO2005030773A1 (ja) 2003-09-26 2005-04-07 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. 新規ピラゾロピリミジン誘導体
AU2011221075B2 (en) 2010-02-26 2013-12-19 Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation Pyrazolopyrimidine compounds and their use as PDE10 inhibitors
US9045485B2 (en) 2010-12-16 2015-06-02 Convergence Pharmaceuticals Limited ASK 1 inhibiting pyrrolopyrimidine derivatives
GB201101517D0 (en) 2011-01-28 2011-03-16 Proximagen Ltd Receptor antagonists
JP5531066B2 (ja) 2011-08-24 2014-06-25 田辺三菱製薬株式会社 ピラゾロピリミジン化合物及びｐｄｅ１０阻害剤としてのその使用
EP3049418A1 (en) * 2013-09-25 2016-08-03 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Imidazopyridazines useful as inhibitors of the par-2 signaling pathway

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018043461A1 (ja) 2016-08-31 2018-03-08 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン化合物

Also Published As

Publication number Publication date
CN111655694B (zh) 2023-03-28
WO2019163956A1 (ja) 2019-08-29
EP3760631A1 (en) 2021-01-06
RU2020125450A (ru) 2022-03-28
IL276160A (en) 2020-09-30
US20210107907A1 (en) 2021-04-15
CN111655694A (zh) 2020-09-11
EP3760631A4 (en) 2021-10-20
EP3760631B1 (en) 2023-11-08
US11312720B2 (en) 2022-04-26
BR112020015729A2 (pt) 2020-12-08
TW201936607A (zh) 2019-09-16
JPWO2019163956A1 (ja) 2021-02-04
RU2020125450A3 (ja) 2022-03-28
KR20200124655A (ko) 2020-11-03
MX2020008110A (es) 2020-11-06
AU2019224410A1 (en) 2020-07-09
CA3088718A1 (en) 2019-08-29
SG11202005926XA (en) 2020-07-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7257376B2 (ja) ピラゾロ［１，５－ａ］ピリミジン化合物の塩およびその結晶
EP2391627B1 (en) Bicyclic pyrazolo-heterocycles
JP2019116512A (ja) 選択的ｃｄｋ４／６阻害剤の固体形態
JP6126319B1 (ja) （６Ｓ，９ａＳ）−Ｎ−ベンジル−６−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−４，７−ジオキソ−８−（｛６−［３−（ピペラジン−１−イル）アゼチジン−１−イル］ピリジン−２−イル｝メチル）−２−（プロプ−２−エン−１−イル）−オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド化合物の結晶
WO2013134298A1 (en) Raf inhibitor compounds
US10227349B2 (en) Pyrazolo[1,5-a]pyrimidine compound
ES2784398T3 (es) Compuestos heterocíclicos de 3,3-difluoropiperidina carbamato como antagonistas del receptor de NMDA NR2B
KR20200096261A (ko) 설폰아마이드 화합물 및 이의 용도
ES2529295T3 (es) Forma cristalina anhidra de maleato de orvepitant
CA3064484A1 (fr) Composes inhibiteurs des canaux ioniques pour le traitement du cancer
US20220056026A1 (en) Crystalline forms of a selective c-kit kinase inhibitor
JP2020515631A (ja) 縮合二環式化合物、その組成物及び応用
US8211926B2 (en) Bicyclic pyrazolo-heterocycles
TWI785151B (zh) 6,7-二氫吡唑并［1,5-a］吡酮衍生物及其醫藥用途
US9120815B2 (en) Solid state forms of macrocyclic kinase inhibitors
US20160002250A1 (en) Polymorphs and salts of a compound
JP5570434B2 (ja) Ｐａｒ１阻害剤としてのイミダゾピリダジン類、その製造、及び薬剤としての使用
TW201504227A (zh) 環狀胺基甲基嘧啶衍生物
CN110862398A (zh) 脲取代的芳环连二噁烷并喹唑啉或喹啉类化合物、组合物及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821

Effective date: 20200622

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20211209

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20221122

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20221207

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20230314

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20230403

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 7257376

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150