TW201936607A - 吡唑并[1,5-a]嘧啶化合物的鹽及其晶體 - Google Patents

吡唑并[1,5-a]嘧啶化合物的鹽及其晶體 Download PDF

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Abstract

由式(I)表示的化合物的鹽及其晶體具有可用作藥物產品的藥物物質的潛力。

Description

吡唑并[1,5-a]嘧啶化合物的鹽及其晶體
本發明涉及具有PAR2抑制作用的吡唑并[1,5-a]嘧啶化合物的鹽及其晶體。
蛋白酶激活受體(PAR)係三聚體G蛋白偶聯的七跨膜受體的類型，並且屬於介導絲胺酸蛋白酶細胞作用的受體家族，並且迄今為止已經選殖了四種分子：PAR1、PAR2、PAR3和PAR4。
絲胺酸蛋白酶在特定位點切割PAR分子的細胞外胺基末端肽鏈，並因此暴露由5個或6個胺基酸殘基組成的具有受體激活序列的新的胺基末端肽鏈。由絲胺酸蛋白酶切割的新暴露的胺基末端肽鏈作為鏈狀配位基鍵合到細胞外環2，所述胞外環2係PAR2本身的活性位點，並因此激活PAR2。已知PAR2被胰蛋白酶、類胰蛋白酶、激肽釋放酶(主要是激肽釋放酶2、4、5、6和14)、凝血因子VIIa、凝血因子Xa等激活，並且當基於受體激活序列合成的由5個或6個胺基酸組成的合成肽外源進入時也被激活(參見非專利文獻1至3)。
本文中的PAR2廣泛地分佈在體內(例如血管、前列腺、小腸、大腸、肝、腎、胰、胃、肺、腦和皮膚)中，並且已知在各種疾病(例如神 經性炎症、疼痛、發癢、炎症和過敏)中是惡化因子(參見專利文獻1和2、以及非專利文獻4至6)。由於這個原因，PAR2抑制劑被期望為用於該等疾病的可能的治療藥物並且被建議為，例如，用於炎性腸病的治療藥物、用於皮炎的治療藥物、用於變應性疾病的治療藥物、用於皮膚色素形成的預防藥物(參見專利文獻3至5以及非專利文獻3和6至11)。
引用列表 專利文獻
[專利文獻1] 日本未經審查的專利公開案號2003-286171
[專利文獻2] 日本未經審查的專利公開案號2004-170323
[專利文獻3] WO 2012/101453
[專利文獻4] WO 2015/048245
[專利文獻5] WO 2005/030773
非專利文獻
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[非專利文獻2] Macfarlane, S.R.等人Pharmacol. Rev. [藥學評論] 53, 245-282, 2001
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[非專利文獻11] Seyfarth, F.等人Clinics in Dermatology. [皮膚病學臨床]29: 31-36, 2011
由式(I)表示的化合物(2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸(在下文中，也被稱為化合物(I))具有PAR2抑制作用，並且例如，具有可用作炎性皮膚病的治療劑和炎性腸病的治療劑的潛力。
通常，可用作藥物產品的化合物、其鹽或該鹽的晶體的特性對藥物的生體可用率、藥物物質的純度和製劑的配製物產生顯著影響。
鑒於以上情況，本發明的諸位發明人對化合物(I)進行了大量研究，並且因此發現了化合物(I)之鹽或其晶體，從而完成了本發明。
更具體地，本發明涉及以下[1]至[14]。
[1]一種由式(I)表示的2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽。
[2]一種由式(I)表示的2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽的晶體。
[3]根據[2]所述的晶體，2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽的晶體在粉末X射線繞射中在衍射角(2θ±0.2°)為8.3°處具有衍射峰。
[4]根據[2]所述的晶體，2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽的晶體在粉末X射線繞射中在衍射角(2θ±0.2°)為8.3°和13.1°處具有衍射峰。
[5]根據[2]所述的晶體，2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽的晶體在粉末X射線繞射中在衍射角(2θ±0.2°)為8.3°、13.1°和15.7°處具有衍射峰。
[6]根據[2]所述的晶體，2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽的晶體在粉末X射線繞射中在衍射角(2θ±0.2°)為8.3°、11.4°、13.1°、15.7°和17.3°處具有衍射峰。
[7]根據[2]所述的晶體，2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽的晶體在粉末X射線繞射中在衍射角(2θ±0.2°)為8.3°、11.4°、13.1°、15.2°、15.7°、17.3°、18.8°、19.7°、22.3°和25.0°處具有衍射峰。
[8]根據[2]所述的晶體，2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽的晶體具有與圖1示出之粉末X射線繞射圖基本同一之粉末X射線繞射圖。
[9]根據[2]所述的晶體，2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽的晶體在13C固態NMR譜中在化學位移(δ±0.5ppm)為58.4ppm、77.4ppm和173.5ppm處具有峰。
[10]根據[2]所述的晶體，2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽的晶體在13C固態NMR譜中在化學位移(δ±0.5ppm)為18.5ppm、58.4ppm、77.4ppm、94.4ppm和173.5ppm處具有峰。
[11]根據[2]所述的晶體，2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽的晶體在13C固態NMR譜中在化學位移(δ±0.5ppm)為18.5ppm、19.9ppm、56.6ppm、58.4ppm、76.2ppm、77.4ppm、94.4ppm、95.9ppm、129.3ppm和173.5ppm處具有峰。
[12]根據[2]所述的晶體，2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽的晶體具有與圖2示出的13C固態NMR譜基本同一的13C固態NMR譜。
[13]一種藥物組成物，其含有根據[1]所述的鹽作為有效組分。
[14]一種藥物組成物，其含有根據[2]至[12]中任一項所述的晶體作為有效組分。
本發明提供的化合物(I)之鹽及其晶體具有用作藥物產品的藥物物質的潛力。
[圖1]圖1係在實例1中獲得的化合物(I)之鹽酸鹽的晶體之粉末X射線繞射圖。橫坐標示出了衍射角(2θ)，並且縱坐標示出了峰強度。
[圖2]圖2係在實例1中獲得的化合物(I)之鹽酸鹽的晶體的固態13C NMR譜。橫坐標示出了化學位移(δ)，並且縱坐標示出了峰強度。
[圖3]圖3係在參考實例4中獲得的化合物(I)之晶體之粉末X射線繞射圖。 橫坐標示出了衍射角(2θ)，並且縱坐標示出了峰強度。
[圖4]圖4係在參考實例4中獲得的化合物(I)之晶體的固態13C NMR譜。橫坐標示出了化學位移(δ)，並且縱坐標示出了峰強度。
在下文中，詳細描述了本發明的化合物(I)之鹽及其晶體以及所述鹽和晶體的生產方法。
本說明書中的“鹽”意指由化合物(I)和與化合物(I)相當的特定數目的酸或鹼組成的化學物質。
所述鹽只要是藥學上可接受的就無特別限制，但是具體的實例包括無機酸鹽(例如，鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽和磷酸鹽)、有機酸鹽(例如，乙酸鹽、琥珀酸鹽、延胡索酸鹽、馬來酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、硬脂酸鹽、苯甲酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽和苯磺酸鹽)、酸性胺基酸鹽(例如，天冬胺酸鹽和榖 胺酸鹽)、無機鹼性鹽(例如，鹼金屬鹽例如鈉鹽和鉀鹽、鹼土金屬鹽例如鈣鹽和鎂鹽、鋁鹽和銨鹽)、有機鹼性鹽(例如二乙胺鹽、二乙醇胺鹽、葡甲胺鹽和N,N'-二苄基乙二胺鹽)、以及鹼性胺基酸鹽(例如，精胺酸鹽、賴胺酸鹽和鳥胺酸鹽)。
本發明的鹽可以是溶劑化物。在本說明書中，化合物(I)之鹽的溶劑化物意指藉由化合物(I)之鹽及其晶體和溶劑分子一起形成的固體。溶劑化物的溶劑的實例包括酮溶劑，例如丙酮、2-丁酮以及環己酮；酯溶劑，例如乙酸甲酯以及乙酸乙酯；醚溶劑，例如1,2-二甲氧基乙烷以及三級丁基甲醚；醇溶劑，例如甲醇、乙醇、1-丙醇、和異丙醇；極性溶劑，例如N-甲基-2-吡咯啶酮、N,N-二甲基甲醯胺以及二甲亞碸；以及水。
在本說明書中，“晶體”係指化合物(I)或其鹽的晶體。因此，例如，化合物(I)之鹽酸鹽的晶體係由化合物(I)和鹽酸形成的鹽的晶體，並且意指含有1分子的鹽酸比1分子的化合物(I)之鹽的晶體。
在本說明書中，化合物(I)之鹽的較佳的晶體的實例包括，在粉末X射線繞射中在衍射角(2θ±0.2°)為8.3°處具有衍射峰的化合物(I)之鹽酸鹽的晶體；在粉末X射線繞射中在衍射角(2θ±0.2°)為8.3°和13.1°處具有衍射峰的化合物(I)之鹽酸鹽的晶體；在粉末X射線繞射中在衍射角(2θ±0.2°)為8.3°、13.1°和15.7°處具有衍射峰的化合物(I)之鹽酸鹽的晶體；在粉末X射線繞射中在衍射角(2θ±0.2°)為8.3°、11.4°、13.1°、15.7°和17.3°處具有衍射峰的化合物(I)之鹽酸鹽的晶體； 在粉末X射線繞射中在衍射角(2θ±0.2°)為8.3°、11.4°、13.1°、15.2°、15.7°、17.3°、18.8°、19.7°、22.3°和25.0°處具有衍射峰的化合物(I)之鹽酸鹽的晶體；在固態13C NMR譜中在化學位移(δ±0.5ppm)為58.4ppm、77.4ppm和173.5ppm處具有峰的化合物(I)之鹽酸鹽的晶體；在固態13C NMR譜中在化學位移(δ±0.5ppm)為18.5ppm、58.4ppm、77.4ppm、94.4ppm和173.5ppm處具有峰的化合物(I)之鹽酸鹽的晶體；和在固態13C NMR譜中在化學位移(δ±0.5ppm)為18.5ppm、19.9ppm、56.6ppm、58.4ppm、76.2ppm、77.4ppm、94.4ppm、95.9ppm、129.3ppm和173.5ppm處具有峰的化合物(I)之鹽酸鹽的晶體。
粉末X射線繞射中的衍射峰和上述固態13C NMR譜中的化學位移分別對化合物(I)之鹽酸鹽的晶體和不同於該晶體的峰來說是典型的。
通常，在粉末X射線繞射中的衍射角(2θ)導致±0.2°的範圍內的誤差，並且因此上述衍射角的值應理解為包括在約±0.2°的範圍內的數值。由於這個原因，不僅在特定化合物的粉末X射線繞射中具有精確匹配的峰的衍射角的晶體，而且具有在約±0.2°的誤差中匹配的峰的衍射角的晶體被認為係同一的並且涵蓋在本發明中。
在本說明書中，例如“在衍射角(2θ±0.2°)為8.3°處具有衍射峰”意指“在衍射角(2θ)為8.1°至8.5°處具有衍射峰”，並且同樣適用於其他衍射角的情況。
此外，通常，即使晶體形式同一，取決於測量條件的差異以及用作測量樣品的粉末晶體的每個顆粒的尺寸和形狀的不一致性，粉末X射線繞射中的衍射角(2θ)的峰強度或半寬度在每次測量時都不同，且因此不 一定總是出現恒定的峰強度或半寬度。由於這個原因，在粉末X射線繞射圖的比較中，即使在相同衍射角(2θ)處峰強度或半寬度存在差異時，該等差異也不意指所測量的晶體形式彼此不同。因此，顯示與本發明的特定晶體的特徵衍射峰具有此類差異的粉末X射線繞射的化合物的晶體意指該等晶體具有與本發明化合物的晶體同一的晶體形式。另外，在本說明書中“具有與圖1中示出之粉末X射線繞射圖基本同一之粉末X射線繞射圖”意指不僅具有某種特徵衍射峰的粉末X射線繞射與圖1中示出之粉末X射線繞射圖精確匹配的情況，而且峰強度或半寬度不同或者特徵衍射峰的衍射角在±0.2°的誤差範圍內匹配的情況都被認為係與圖1中示出之粉末X射線繞射圖同一之粉末X射線繞射圖。因此，具有這種粉末X射線繞射圖的所有晶體都意指與本發明的晶體同一的晶體。
在本說明書中，當在典型測量條件下或在本說明書中描述的條件下測量固態13C NMR譜時，“化學位移(δ±0.5ppm)為18.5ppm、19.9ppm、56.6ppm、58.4ppm、76.2ppm、77.4ppm、94.4ppm、95.9ppm、129.3ppm和173.5ppm”意指“分別與化學位移(δ±0.5ppm)為18.5ppm、19.9ppm、56.6ppm、58.4ppm、76.2ppm、77.4ppm、94.4ppm、95.9ppm、129.3ppm和173.5ppm具有基本相等的峰”。
當確定是否“具有基本相等的峰”時，通常，固態13C NMR譜中的化學位移δ引起在±0.5ppm範圍內的誤差，並且因此以上化學位移的值應理解為包括在約±0.5ppm範圍內的數值。由於這個原因，不僅在特定化合物的固態13C NMR譜中具有精確匹配化學位移的晶體，而且具有在約±0.5ppm誤差中匹配的化學位移的晶體都涵蓋在本發明中。由於這個原因，在本說明書中，例如“在化學位移(δ±0.5ppm)為173.5ppm處具有峰”意指 在範圍為從173.0ppm至174.0ppm的化學位移(δ)處具有峰，並且同樣適用於固態13C NMR譜中其他化學位移的情況。另外，“具有與圖2中示出的固態13C NMR譜基本同一的固態13C NMR譜的晶體”意指不僅在某個化學位移處具有峰的固態13C NMR譜與圖2中示出的13C NMR譜精確匹配的情況，而且峰強度不同或特徵峰匹配在約±0.5ppm範圍內的化學位移的情況都被認為係具有與圖2中示出的固態13C NMR譜同一的固態13C NMR譜的晶體。因此，具有這種固態13C NMR譜的所有晶體都意指與本發明的晶體同一的晶體。
在下文中，描述了作為本發明的實施方式的化合物(I)之鹽或其晶體的生產方法。
化合物(I)之生產方法
化合物(I)可以是由熟悉該項技術者藉由熟知的方法生產的那些化合物。例如，化合物(I)可以藉由稍後將描述的參考實例2中描述的方法合成。
化合物(I)之鹽的生產方法
化合物(I)之鹽可以藉由用於生產鹽的典型方法獲得。具體地，例如，化合物(I)可以藉由以下步驟生產：懸浮於或溶於溶劑中(根據需要加熱)，然後向待獲得的懸浮液或溶液中添加選自下組的酸或鹼，該組由以下組成：無機酸鹽、有機酸鹽、酸性胺基酸鹽、無機鹼性鹽、有機鹼性鹽、和鹼性胺基酸鹽，並且在室溫或在冰浴中冷卻的同時攪拌若干分鐘至若干天，或在室溫或在冰浴中冷卻的同時靜置若干分鐘至若干天。化合物(I)之鹽可以藉由該等生產方法以晶體或無定形形式獲得。本文使用的溶劑的實例包括：醇溶劑，例如乙醇、1-丙醇以及異丙醇；乙腈；酮溶劑，例如丙酮以及2-丁酮；酯溶劑，例如乙酸乙酯；飽和烴溶劑，例如己烷以及庚烷；醚 溶劑，例如甲基三級丁基醚；和水。該等溶劑可以單獨使用或者作為兩種或更多種的混合物使用。
在化合物(I)以上述化合物(I)之製備方法合成後，藉由隨後採用更早描述的方法，也可以生產化合物(I)之鹽。
化合物(I)或其鹽的晶體的生產方法
在下文中，描述了化合物(I)或其鹽的晶體的生產方法。化合物(I)或其鹽的晶體也可以藉由將化合物(I)或其鹽溶解在溶劑中並伴隨在攪拌下加熱和冷卻以進行結晶來生產。
用於結晶的化合物(I)或其鹽可以呈任何形式，並且可以是溶劑化物、水合物或酸酐，或者可以是無定形的或結晶的(包括由多個晶體多晶型物組成的那些)，或者可以是其混合物。
用於結晶的溶劑的實例包括：醇溶劑，例如甲醇、乙醇、2-丙醇以及1-丁醇；乙腈；醯胺溶劑，例如N,N-二甲基甲醯胺；酯溶劑，例如乙酸乙酯；飽和烴溶劑，例如己烷以及庚烷；酮溶劑，例如丙酮以及2-丁酮；醚溶劑，例如甲基三級丁基醚；和水。此外，該等溶劑可以單獨使用或者作為兩種或更多種的混合物使用。
使用的溶劑的量可以適當地選自作為下限的化合物(I)或其鹽伴隨加熱溶解的量或懸浮液可以攪拌的量，至作為上限的晶體的產率沒有顯著降低的量。
在結晶中，可以添加化合物(I)或其鹽的所希望的晶體作為晶種。添加晶種的溶液的溫度不受具體限制，且較佳的是0℃至80℃。
化合物(I)或其鹽伴隨加熱溶解的溫度可根據溶劑從化合物(I)或其鹽溶解的溫度中適當選擇，並且較佳的是範圍為從50℃至該溶劑開始回流的溫度，並且更較佳的是55℃至80℃。
考慮到對晶體的品質和晶粒尺寸的影響，較佳的是藉由適當調節冷卻速率來進行結晶期間的冷卻，因為快速冷卻可能產生含有不同結構晶體(多態性)的晶體。較佳的冷卻速率係，例如5℃至40℃/小時。
此外，最終結晶溫度可以基於晶體的產率和品質進行適當選擇，但較佳的是-25℃至30℃。
藉由典型的過濾操作分離結晶的晶體，由此可以獲得目的晶體。藉由過濾分離的晶體可以根據需要用溶劑洗滌並進一步乾燥。對於用於洗滌晶體的溶劑，可以使用與用於結晶的溶劑相同的溶劑。實例較佳的是包括乙醇、丙酮、2-丁酮、乙酸乙酯、二乙醚、甲基三級丁基醚和己烷。此外，該等溶劑可以單獨使用或者作為兩種或更多種的混合物使用。
藉由過濾操作分離的晶體可以藉由允許在大氣中或在氮氣流下靜置或藉由加熱而適當地乾燥。
根據生產量、乾燥裝置和乾燥溫度，可以從殘留溶劑減少到小於預定量的時間中適當地選擇乾燥時間。此外，還可以在通風下或在減壓下進行乾燥。減壓程度可根據生產量、乾燥裝置和乾燥溫度適當選擇。乾燥後獲得的晶體也可以根據需要允許在大氣中靜置。
如稍後將描述的藥理學測試實例中的活性數據示出的，藉由上述生產方法獲得的化合物(I)之鹽或其晶體具有PAR2抑制作用，由此具有用作藥物產品的藥物物質的潛力，例如，炎性皮膚病治療劑和炎性腸病治療劑的藥物物質。
[藥物組成物]
本發明的另一個實施方式係含有化合物(I)之鹽或其晶體和藥學上可接受的添加劑的藥物組成物。藥物組成物可以藉由將藥學上可接受的添加劑與化合物(I)之鹽或其晶體混合來生產。根據本發明的藥物組成物可以根據例如The Japanese Pharmacopoeia Sixteenth Edition[日本藥典第十六版]中的General Rules for Preparations[製劑通則]中描述的已知方法來生產。
根據本實施方式的藥物組成物可以根據其劑型適當地給予至患者。
根據本發明的化合物(I)之鹽或其晶體的劑量取決於症狀級別、年齡、性別、體重、給予形式/鹽的種類、以及疾病的特定類型而變化，但是典型地以一天約30μg至10g、較佳的是100μg至5g、進一步較佳的是100μg至1g藉由口服給予至成年人，或者以約30μg至1g、較佳的是100μg至500mg、進一步較佳的是100μg至300mg(分別地以一次或以若干次分開的劑量)藉由注射給予至成年人。
實例
在下文中，本發明參考參考實例和實例進行了詳細描述，但不限於該等參考實例和實例。
對於在以下參考實例和實例中生產的晶體的粉末X射線晶體衍射，將獲得的晶體置於粉末X射線繞射儀的樣品架上並在以下條件下分析。
(測量條件)
樣品架：鋁架
靶標：銅
檢測器：閃爍計數器
管電壓：50kV
管電流：300mA
狹縫：發散狹縫0.5mm，散射狹縫開放，光接收狹縫開放
掃描速度：5°/min或10°/min
加樣間隔：0.02°
掃描場：5°至35°
在以下條件下測量晶體的固態13C NMR譜。
(測量條件)
使用的裝置：Avance 400MHz(布魯克公司(BRUKER))7mm-CPMAS探頭(布魯克公司)
測量核：13C(100.6130636MHz)
測量溫度：室溫(25℃)
脈衝模式：CPTOSS測量(無旋轉邊帶法)
頻率：5000Hz
脈衝重複時間：3sec
接觸時間：1msec
掃描次數：3072次
參比物質：甘胺酸(外部參比：176.03ppm)
具有文獻名稱等的化合物表明它們係根據文獻等生產的。
另外，本說明書中使用的縮寫係熟悉該項技術者熟知的常用縮寫。在本說明書中使用以下縮寫。
DMF：N,N-二甲基甲醯胺
DMSO：二甲基亞碸
DMSO-d6：氘化的二甲基亞碸
HATU：O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽
HOBT：1-羥基苯并三唑
NMP：1-甲基-2-吡咯啶酮
Pd2DBA3：三(二苯亞甲基丙酮)二鈀
t-：三級
THF：四氫呋喃
WSC：1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸酯
1H-NMR：質子核磁共振光譜法
質子核磁共振譜中的化學位移以相對於四甲基矽烷的δ單位(ppm)記錄，並且偶聯常數以赫茲(Hz)記錄。分裂模式如下。
s：單峰，d；二重峰，t；三重峰，q；四重峰，br；寬峰，m；多重峰，dd；雙二重峰，td；三二重峰。
使用Varian MERCURY plus模型核磁共振裝置(400MHz)、Varian INOVA UNITY模型核磁共振裝置(400MHz)、Varian INOVA UNITY模型核磁共振裝置(500MHz)或Bruker Avance模型核磁共振裝置(600MHz)測量1H-NMR。
使用JASCO DIP-1000模型旋光計測量旋光度。
對於層析法，所使用的矽膠係默克公司(Merck)的矽膠60(70-230目ASTM)、富士矽化學有限公司(Fuji Silysia Chemical Ltd.)的PSQ60B、關東化學公司(Kanto Kagaku)的矽膠60(球形的，40-50μM)或YMC YMC*GEL ODS-A(12nM S-50μM)，或者 使用預填充柱{柱：YAMAZEN Hi-FlashTM柱(矽膠)，大小；S(16×60mm)、M(20×75mm)、L(26×100mm)、2L(26×150mm)或3L(46×130mm)}。
所使用的NH矽膠係富士矽化學有限公司(Fuji Silysia Chemical Ltd.)的CHROMATOREX NH-DM2035或預填充柱{柱：YAMAZEN Hi-FlashTM柱(Amino)，大小；S(16×60mm)、M(20×75mm)、L(26x×100mm)、2L(26×150mm)或3L(46×130mm)或和光純化學工業有限公司(Wako Pure Chemical Industries,Ltd.)PresepTM(Luer Lock)NH2(HC)，大小；M型(14g/25mL)、L型(34g/70mL)、2L型(50g/100mL)、3L型(110g/200mL)}。
以下實例和參考實例中的“室溫”典型地表示約10℃至約35℃。除非另外說明，“%”表示重量百分比。
以下實例和參考實例中的化合物的化學名稱係使用“E-手冊”(E-Notebook)第12版(鉑金埃爾默有限公司(PerkinElmer Co.,Ltd.))，基於化學結構創建的。然而，構型中的“*”表示相對位置，並且除非另外說明，表示鏡像異構物之一。此外，在寫有“(3R*,4S*)”的情況下，在每個立構中心的關係中表示相對位置。更具體地，“(3R*,4S*)”表示特定的鏡像異構物(3R,4S)或(3S,4R)之一。
在本說明書中的旋轉異構物的混合物意指具有由圍繞單鍵(例如，C-C、C-N和C-O)的分子內旋轉所引起的不同構象的異構物的混合物。
參考實例1
2-((3R*,4S*)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯鹽酸鹽的合成
(1a)4-(2-乙氧基-2-側氧基亞乙基)-3-甲氧基哌啶-1-甲酸三級丁酯的合成
在室溫，在氮氣氣氛下，將氫化鈉(約60%,2.95g)添加至二乙基膦醯基乙酸乙酯(16.56g)在THF(340mL)中的溶液中，攪拌15分鐘，隨後逐滴添加3-甲氧基-4-側氧基哌啶-1-甲酸三級丁酯(14.11g)(WO 2012/080735)在四氫呋喃(50mL)中的溶液並且將其在室溫攪拌16小時。將乙酸乙酯(1000mL)和飽和碳酸氫鈉水性溶液(400mL)添加至反應混合物中。將有機層經無水硫酸鎂乾燥。將乾燥劑過濾掉，並且將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠柱層析法(庚烷-乙酸乙酯系統)純化以獲得標題化合物(14.65g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3,EZ混合物)δ：1.29(t,J=7.3Hz,3H),1.47(s,4.5H),1.48(s,4.5H),1.98(m,0.5H),2.52-2.83(m,2H),3.2-3.97(m,3H),3.30(s,1.5H),3.37(s,1.5H),3.80-4.58(m,1H),4.18(m,2H),5.21(br.s,0.5H),5.83(s,0.5H),5.94(s,0.5H)。
(1b)2-(3-甲氧基哌啶-4-亞基)乙酸乙酯鹽酸鹽的合成
將三氟乙酸(4mL)添加至4-(2-乙氧基-2-側氧基亞乙基)-3-甲氧基哌啶-1-甲酸三級丁酯(1.20g)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中，並且將所述混合物在室溫攪拌5小時。將所述反應混合物在減壓下濃縮，向其中添加甲 苯(100mL)，並且將其在減壓下濃縮。再次添加甲苯(10mL)，將反應混合物在減壓下濃縮，隨後將乙酸乙酯(10mL)、甲苯(10mL)和4N氯化氫乙酸乙酯溶液(5mL)添加至殘餘物，並且將其在減壓下濃縮以獲得標題化合物(0.95g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.29(t,J=7Hz,1.5H),1.29(t,J=7Hz,1.5H),2.92-3.20(m,3H),3.33(s,1.5H),3.34(s,1.5H),3.25-3.91(m,4H),4.16-4.24(m,2H),5.98(s,0.5H),6.00(s,0.5H),7.95(br.s,0.5H),8.43(br.s,0.5H),10.11(br.s,1H)。
(1c)2-(3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯鹽酸鹽的合成
將鈀活性碳(Pd10%)(0.21g)添加至2-(3-甲氧基哌啶-4-亞基)乙酸乙酯鹽酸鹽(0.95g)、乙醇(10mL)和乙酸乙酯(10mL)的混合物中，並且在氫氣氣氛下在室溫攪拌17小時。將所述氣氛返回氮氣，將所述混合物通過矽藻土過濾並且將所述矽藻土用乙醇洗滌。將所述濾液和洗滌溶液合併並在減壓下濃縮以獲得標題化合物(1.02g，主要為順式異構物)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3,順式異構物)δ：1.27(t,J=7Hz,3H),1.71(br.d,J=14Hz,1H),1.94(br.q,J=14Hz,1H),2.15(m,1H),2.32(dd,J=16,6Hz,1H),2.54(dd,J=16,8Hz,1H),2.94(m,2H),3.41(s,3H),3.44-3.65(m,3H),4.15(q,J=7Hz,2H),7.84(br.s,1H),9.92(br.s,1H)。
(1d)(±)-2-(順式-1-二苯甲基-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯的合成在氮氣氣氛下，在-20℃，將溴二苯基甲烷(2.62g)在DMF(5mL)中的溶液添加至2-(3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯鹽酸鹽(2.098g)、DMF(80mL)、三乙胺(1.35mL)和碳酸鉀(2.44g)的混合物中，並且在室溫攪拌過夜。向其中添加三級丁基甲基醚(400mL)和水(200mL)。隨後用 水(200mL×2)和飽和氯化鈉水性溶液(200mL)洗滌所述有機層，並且經無水硫酸鎂乾燥。將乾燥劑過濾掉，並且將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠柱層析法(庚烷-乙酸乙酯系統)純化以獲得呈無色液體的標題化合物(1.127g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.24(t,J=7Hz,3H),1.51(m,1H),1.69(m,1H),1.94-2.12(m,3H),2.27(dd,J=16,7Hz,1H),2.52(dd,J=16,7Hz,1H),2.72(br.s,1H),2.98(br.s,1H),3.28(s,3H),3.29(br.s,1H),4.11(q,J=7Hz,2H),4.26(s,1H),7.19(m,2H),7.27(m,4H),7.44(m,4H)。
(1e)2-((3R*,4S*)-1-二苯甲基-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯的合成
使用CHIRALPAK OJ-H柱，在以下條件下分離(旋光拆分)(±)-2-(順式-1-二苯甲基-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯的鏡像異構物(1.127g)以獲得標題化合物(0.411g)作為第一洗脫級分。
HPLC條件
柱：CHIRAL PAK OJ-H(批號；OJH-0CJ-FA001),20mm×250mm,5μm；流動相：己烷：乙醇=98：2；溶解速率：20mL/min；濃度：67mg/mL；注射量：0.3mL；HPLC保留時間：10.5min(第一洗脫級分)
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.24(t,J=7Hz,3H),1.49(m,1H),1.69(m,1H),1.94-2.12(m,3H),2.27(dd,J=16,7Hz,1H),2.52(dd,J=16,7Hz,1H),2.72 (br.s,1H),2.98(br.s,1H),3.27(s,3H),3.29(br.s,1H),4.11(q,J=7Hz,2H),4.26(s,1H),7.19(m,2H),7.27(m,4H),7.44(m,4H)。
(1f)2-((3R*,4S*)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯鹽酸鹽的合成
在90℃攪拌2-((3R*,4S*)-1-二苯甲基-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯(411mg)、1N鹽酸(1.118mL)、鈀活性碳(Pd 5%)(0.238g)、環己烯(20mL)和乙醇(80mL)的混合物18小時。將所述反應混合物通過矽藻土過濾並且將所述矽藻土用乙醇(50mL x 2)洗滌。將所述濾液和洗滌溶液合併並在減壓下濃縮。將庚烷和甲苯(10mL,1：1)以及2N鹽酸(20mL)的混合溶劑添加至殘餘物並且將各層分離。用2N鹽酸(20mL)萃取有機層。將5N氫氧化鈉水性溶液添加至合併的水層以鹼化，並且用二氯甲烷(50mL×2)萃取各層。將合併的有機層經無水硫酸鎂乾燥。將乾燥劑過濾掉，將4N氯化氫乙酸乙酯溶液(2mL)添加至濾液中，並且在減壓下濃縮以獲得標題化合物(119mg)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ：1.25(t,J=7Hz,3H),1.72(m,1H),1.76(m,1H),2.20(m,1H),2.34(dd,J=17,7Hz,1H),2.52(dd,J=17,8Hz,1H),3.02(m,2H),3.27(m,1H),3.41(s,3H),3.60(m,2H),4.14(q,J=7Hz,2H)。
參考實例2
2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的合成
(2a)5-氯-7-((2-氟-6-甲基苯基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯的合成
將5,7-二氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(CAS號1232224-62-2)(5g)和2-氟-6-甲基苯胺(CAS號443-89-0)(2.41g)在NMP(3mL)中的溶液在120℃攪拌4小時。將反應混合物與藉由在120℃攪拌在NMP(0.20mL)中的5,7-二氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(0.50g)和2-氟-6-甲基苯胺(0.27g)4小時單獨獲得的反應溶液合併，用乙酸乙酯稀釋，用水和飽和鹽水洗滌並經無水硫酸鈉乾燥。在將乾燥劑過濾掉後，將濾液在減壓下濃縮，將二氯甲烷添加至殘餘物並且藉由過濾收集不溶解的固體以獲得呈淡黃色固體的標題化合物(2.88g)。將濾液在減壓下進行濃縮並將殘餘物藉由矽膠柱層析法(己烷-乙酸乙酯系統)純化以獲得標題化合物(2.28g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.46(t,J=7Hz,3H),2.34(s,3H),4.50(q,J=7Hz,2H),5.75(s,1H),7.02(s,1H),7.12(t,J=8Hz,1Hz,1H),7.18(br.d,J=8Hz,1H),7.35(td,J=8,6Hz,1H),7.82(br.s,1H)。
(2b)5-氯-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯的合成
將碳酸銫(7.23g)和碘甲烷(4.61mL)添加至5-氯-7-((2-氟-6-甲基苯基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(5.16g)在DMF(80mL)中的溶液，並且在50℃攪拌3小時。將反應混合物用乙酸乙酯稀釋，依次用水和飽和鹽水洗滌，並且經無水硫酸鈉乾燥。將乾燥劑過濾掉，並且將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠柱層析法(庚烷-乙酸乙酯系統)純化以獲得呈淡黃色固體的標題化合物(4.64g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.37(t,J=7Hz,3H),2.26(s,3H),3.83(br.s,3H),4.36(q,J=7Hz,2H),5.79(br.s,1H),6.88(s,1H),7.04(t,J=9Hz,1H),7.13(d,J=8Hz,1H),7.30(td,J=9,6Hz,1H)。
(2c)5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯的合成
在氮氣氣氛下，將水(2mL)、碳酸鈉(0.53g)、4-氯-3,5-二氟苯基硼酸(0.44g)和四(三苯基膦)鈀(0)(0.12g)添加至5-氯-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(0.73g)和1,4-二(16mL)的混合物中，並且在100℃攪拌3小時。在回到室溫後，將乙酸乙酯(200mL)和水(50mL)添加至反應混合物中，並且將有機層分離並經無水硫酸鎂乾燥。將乾燥劑過濾掉，並且將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠柱層 析法(庚烷-乙酸乙酯系統)純化以獲得呈淡黃色固體的標題化合物(0.96g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.39(t,J=7Hz,3H),2.28(s,3H),3.88(s,3H),4.38(q,J=7Hz,2H),6.14(s,1H),7.03(s,1H),7.04(dd,J=9,8Hz,1H),7.15(d,J=8Hz,1H),7.32(td,J=8,6Hz,1H),7.57(d,J=8Hz,2H)。
(2d)5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸的合成
將水(10mL)和4N氫氧化鋰水性溶液(2.47mL)添加至5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯(2.35g)和1,4-二(100mL)的混合物中，並且在室溫攪拌17小時。添加5N鹽酸(2mL)並且將反應混合物在減壓下濃縮至約15mL體積。將所述混合物進行超音波處理並且在室溫攪拌30分鐘，隨後將固體藉由過濾收集，用水(5mL)洗滌並在減壓下乾燥以獲得呈淡黃色固體的標題化合物(2.24g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：2.30(s,3H),3.71(s,3H),6.47(s,1H),7.03(t,J=9Hz,1H),7.08(s,1H),7.13-7.18(m,1H),7.34(td,J=8,5Hz,1H),7.69(d,J=7Hz,2H)。
(2e)2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯的合成
依次將HOBT(57mg)、WSC(72mg)、2-((3R*,4S*)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯鹽酸鹽(77mg)(生產實例2)和三乙胺(101mg)添加至5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(112mg)在DMF(6mL)中的溶液，並且在室溫攪拌15小時。將乙酸乙 酯(50mL)和水(20mL)添加至反應混合物中，並且將有機層用水(20mL×2)洗滌並經無水硫酸鎂乾燥。將乾燥劑過濾掉，並且將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠柱層析法(庚烷-乙酸乙酯系統)純化以獲得標題化合物(137mg)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3，旋轉異構物的混合物)δ：1.26(m,3H),1.40-1.74(m,2H),2.12-2.55(m,5H),2.60-3.11(m,4H),3.38-3.75(m,6H),4.14(m,2H),4.10-4.46(m,1H),4.54-4.95(m,1H),6.29-6.53(m,1H),6.90-7.28(m,4H),7.61-7.70(m,2H)。
(2f)2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的合成
將氫氧化鋰(10.4mg)的水性溶液(1.5mL)添加至2-((3R*,4S*)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸乙酯(137mg)在1.4-二(6mL)中的溶液中，並且在室溫攪拌20小時。將DMSO(2mL)和乙酸(0.1mL)添加至反應混合物中，將其在減壓下濃縮。將殘餘物藉由反相矽膠柱層析法(乙腈-水、0.1%乙酸系統)純化以獲得呈白色固體的化合物(92mg)。
1H-NMR(600MHz,CDCl3,30℃，旋轉異構物的混合物)δ：1.25-1.76(m,2H),2.01-2.41(m,4H),2.47-3.14(m,4H),3.38-3.75(m,7H),4.13-4.46(m,1H),4.54-4.98(m,1H),6.29-6.57(m,1H),6.84-7.30(m,4H),7.56-7.79(m,2H)。
質譜(ESI)m/z：602(M+H)+。
(2g)(2S,3S)-3-(氰基甲基)-1-((S)-1-苯基乙基)吡咯啶-2-甲酸乙酯的合成
在氮氣氣氛下，將(S)-2-(丁烯-3-烯-1-基(1-苯基乙基)胺基)乙酸乙酯(CAS號186586-65-2)(60.29g)在THF(750mL)中的溶液冷卻至-75℃，並且使用插管將用乙醇-乾冰冷卻的二異丙基醯胺鋰在正己烷-THF(1.13M,245mL)中的溶液添加至所述溶液中。在溫度升高至-20℃並攪拌15分鐘後，隨後使用具有乙醇-乾冰作為製冷劑的冷卻槽將所述反應混合物再次冷卻，並且在-72℃或更低下添加溴化鋅(156g)在二乙醚(800mL)中的溶液。移除冷卻槽以使反應混合物回到室溫，並且將所述溶液攪拌1小時。使用具有含鹽的冰水作為製冷劑的冷卻槽，將反應混合物冷卻至0℃或更低，並且添加氰化銅(I)(41.3g)、氯化鋰(39.1g)和THF(750mL)的混合物。隨後，添加(4-甲基苯基)磺醯氰(CAS號19158-51-1)(50.2g)在 THF(200mL)中的溶液，並且在室溫攪拌14小時。在攪拌的時候，添加水(1000mL)、氨水(28%,300mL)和乙酸乙酯(1500mL)。將懸浮液通過矽藻土過濾以除去沈澱物。將濾液移至分液漏斗以將有機層從水層分離，並且將所述有機層依次用氨水(10%,750mL)、水(750mL)和飽和氯化鈉水性溶液(750mL)洗滌。將矽藻土和沈澱物用乙酸乙酯(500mL)洗滌4次並且合併該等洗滌溶液。使用合併的洗滌溶液，依次萃取以上4種水層(首先分離的水層、用於洗滌的氨水、用於洗滌的水和用於洗滌的飽和氯化鈉水性溶液)。將有機層全部合併並且經無水硫酸鎂乾燥。將乾燥劑過濾掉，並且將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠柱層析法(庚烷-乙酸乙酯系統)純化以獲得標題化合物(42.98g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3，主要的異構物)δ：1.24(t,J=7Hz,3H),1.36(d,J=7Hz,3H),1.77(m,1H),2.18(m,1H),2.27(dd,J=17,9Hz,1H),2.35(dd,J=17,7Hz,1H),2.66(m,1H),2.95(q,J=8Hz,1H),3.10(td,J=9,3Hz,1H),3.42(d,J=8Hz,1H),3.75(q,J=7Hz,1H),4.09-4.18(m,2H),7.22-7.38(m,5H)。
(2h)2-((2S,3S)-2-羥基甲基-1-((S)-1-苯基乙基)吡咯啶-3-基)乙腈的合成
在冰冷卻和氮氣氣氛下，將四氫硼酸鋰(20g)添加至(2S,3S)-3-(氰基甲基)-1-((S)-1-苯基乙基)吡咯啶-2-甲酸乙酯(44.74g)在THF(700mL)中的溶液中，並且加熱至回流5小時。將反應混合物冷卻至室溫並且將其倒入1N鹽酸(1000mL)和乙酸乙酯的混合物中。將反應混合物攪拌30分鐘，隨後添加碳酸氫鈉(約100g)，並且用乙酸乙酯萃取3次和用二氯甲烷萃取2次。將有機層合併並乾燥，將乾燥劑過濾掉，並且隨後將濾液在減壓下 濃縮。將殘餘物藉由NH矽膠柱層析法(庚烷-乙酸乙酯系統)純化以獲得標題化合物(28.98g)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3，主要的異構物)δ：1.47(d,J=7Hz,3H),1.59(qd,J=12,7Hz,1H),1.93(dt,J=12,6Hz,1H),2.32-2.40(m,1H),2.46-2.63(m,3H),3.01(dd,J=9,8Hz,1H),3.08-3.10(m,1H),3.27(d,J=11Hz,1H),3.55(dd,J=12,2Hz,1H),3.65(dd,J=12,4Hz,1H),3.87(q,J=7Hz,1H),7.26-7.36(m,5H)。
(2i)2-((3S,4S)-3-羥基-1-((S)-1-苯基乙基)吡咯啶-4-基)乙腈的合成
在氮氣氣氛下，將2-((2S,3S)-2-羥基甲基-1-((S)-1-苯基乙基)吡咯啶-3-基)乙腈(52.44g)在THF(2000mL)中的溶液冷卻至-74℃或更低，並且以使內部溫度不超過-73℃的方式在攪拌的時候逐滴添加三氟乙酸酐(36.4mL)。在進一步攪拌3小時後，逐滴添加三乙胺(120mL)。在攪拌15分鐘後，使內部溫度回到室溫並且將反應混合物加熱至回流15小時。在減壓下去除溶劑，將乙酸乙酯(5000mL)和2N氫氧化鈉水性溶液(500mL)添加至殘餘物以分離溶液。將有機層經無水硫酸鎂乾燥，將乾燥劑過濾掉，並且將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由NH矽膠柱層析法(庚烷-乙酸乙酯系統)純化以獲得標題化合物(51.25g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3，主要的異構物)δ：1.37(d,J=7Hz,3H),1.47-1.76(m,3H),1.95(td,J=12,3Hz,1H),2.15(dd,J=12,1Hz,1H),2.33(dd,J=17,8Hz,1H),2.46(dd,J=17,7Hz,1H),2.82-2.86(m,2H),3.09-3.14(m,1H),3.56(q,J=7Hz,1H),3.74(d,J=10Hz,1H),7.24-7.35(m,5H)。
(2j)2-((3R,4S)-3-甲氧基-1-((S)-1-苯基乙基)哌啶-4-基)乙腈的合成
在冰冷卻和氮氣氣氛下，在攪拌的時候經15分鐘的時間將氫化鈉(60%,9.19g)逐漸添加至2-((3R,4S)-3-羥基-1-((S)-1-苯基乙基)哌啶-4-基)乙腈(51.01g)和THF(750mL)的混合物中。在進一步攪拌10分鐘後，逐滴添加硫酸二甲酯(22.94mL)。在攪拌5小時後，依次添加飽和的氯化銨水性溶液(50mL)、氨水(28%,50mL)和乙酸乙酯(1000mL)並且攪拌30分鐘。添加1N氫氧化鈉水性溶液(500mL)以分離溶液。將有機層用飽和氯化鈉水性溶液(250mL)洗滌並且將合併的水層用乙酸乙酯(500mL)萃取。將有機層合併，經無水硫酸鎂乾燥，將乾燥劑過濾掉並且將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由NH矽膠柱層析法(庚烷-乙酸乙酯系統)純化以獲得標題化合物(47.9g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3，主要的異構物)δ：1.38(d,J=7Hz,3H),1.53-1.59(m,1H),1.63-1.72(m,1H),1.85-1.94(m,1H),2.02-2.15(m,2H),2.30(dd,J=17,7Hz,1H),2.49(dd,J=17,8Hz,1H),2.74(br.d,J=11Hz,1H),3.04(br.d,J=11Hz,1H),3.30(s,3H),3.38(br.s,1H),3.55(q,J=7Hz,1H),7.23-7.33(m,5H)。
(2k)2-((3R,4S)-3-甲氧基-1-((S)-1-苯基乙基)哌啶-4-基)乙酸甲酯的合成
在氮氣氣氛下，在冰冷卻下將亞硫醯氯(352mL)逐滴添加至甲醇(1500mL)，隨後添加2-((3R,4S)-3-甲氧基-1-((S)-1-苯基乙基)哌啶-4-基)乙腈(49.8g)在甲醇(50mL)中的溶液。將混合物加熱至回流20小時，隨後冰冷卻，並且進一步逐滴添加亞硫醯氯(352mL)，並且加熱至回流22小時。將反應混合物再次冰冷卻，並且進一步逐滴添加亞硫醯氯(50mL)，並且加熱至回流62小時。在使其回到室溫後，將反應混合物在減壓下濃縮。將殘餘 物溶解在水(250mL)和乙酸乙酯(250mL)中，添加氨水(28%,50mL)並且隨後添加2N氫氧化鈉水性溶液直到pH達到11。分離溶液，將水層用乙酸乙酯萃取(500mL)，將有機層合併並經無水硫酸鎂乾燥，將乾燥劑過濾掉並且將濾液在減壓下濃縮以獲得殘餘物A。
其次，將水層在減壓下濃縮並且將甲醇(1000mL)和濃縮硫酸(50mL)添加至殘餘物，並且加熱至回流22小時。使反應混合物回到室溫並且用碳酸氫鈉調節至pH 8。在減壓下去除溶劑，將殘餘物溶解在乙酸乙酯(1000mL)和水(250mL)中，使用2N氫氧化鈉水性溶液將pH調節至11並且分離溶液。將水層用乙酸乙酯萃取(500mL)，將有機層合併並經無水硫酸鎂乾燥，將乾燥劑過濾掉並且將濾液在減壓下濃縮以獲得殘餘物B。
在氮氣氣氛下，在冰冷卻下將亞硫醯氯(352mL)逐滴添加至甲醇(1500mL)並且隨後添加殘餘物A在甲醇(100mL)中的溶液。將所述混合物加熱至回流22小時。使反應混合物回到室溫，在減壓下去除溶劑，將殘餘物溶解在乙酸乙酯(1000mL)和水(250mL)中，添加氨水(28%,50mL)，使用2N氫氧化鈉水性溶液將pH調節至11並且分離溶液。將水層用乙酸乙酯萃取(500mL)，將有機層合併並經無水硫酸鎂乾燥，將乾燥劑過濾掉並且將濾液在減壓下濃縮以獲得殘餘物C。
將在處理後第二個反應中獲得的水層在減壓下濃縮，添加甲醇(1000mL)和濃縮硫酸(50mL)至殘餘物，並且加熱至回流22小時。使反應混合物回到室溫並且用碳酸氫鈉調節至pH 8。在減壓下去除溶劑，將殘餘物溶解在乙酸乙酯(1000mL)和水(250mL)中，使用2N氫氧化鈉水性溶液將pH調節至11並且分離溶液。將水層用乙酸乙酯萃取(500mL)，將有 機層合併並經無水硫酸鎂乾燥，將乾燥劑過濾掉並且將濾液在減壓下濃縮以獲得殘餘物D。
將殘餘物B、殘餘物C和殘餘物D合併，藉由NH矽膠柱層析法(庚烷-乙酸乙酯系統)純化以獲得粗的2-((3R,4S)-3-甲氧基-1-((S)-1-苯基乙基)哌啶-4-基)乙酸甲酯(52.35g)。
伴隨攪拌將4N氯化氫乙酸乙酯溶液(100mL)添加至乙酸乙酯(400mL)溶液中，其中將藉由相同的方法單獨獲得的粗的2-((3R,4S)-3-甲氧基-1-((S)-1-苯基乙基)哌啶-4-基)乙酸甲酯(1.45g)與粗的2-((3R,4S)-3-甲氧基-1-((S)-1-苯基乙基)哌啶-4-基)乙酸甲酯(52.35g)合併。將反應混合物在室溫攪拌過夜，隨後將沈澱物藉由過濾收集，用乙酸乙酯(100mL)洗滌並在減壓下乾燥。在攪拌的時候依次添加水(250mL)、乙酸乙酯(250mL)和碳酸氫鈉水性溶液(250mL)以獲得固體。在進一步添加乙酸乙酯(750mL)後，使用碳酸鉀將pH調節至12並分離各層。將水層用乙酸乙酯(250mL)洗滌，將洗滌溶液和分離的有機層合併並且經無水硫酸鎂乾燥，將乾燥劑過濾掉，並且將濾液在減壓下濃縮。將所獲得的殘餘物(46.3g)溶解在乙酸乙酯(400mL)中，並且在攪拌的時候添加4N氯化氫乙酸乙酯溶液(80mL)。在攪拌的時候將水(250mL)和乙酸乙酯(250mL)以及碳酸氫鈉依次添加至藉由在室溫下攪拌反應混合物過夜所獲得的固體，隨後藉由過濾收集沈澱物，將其用乙酸乙酯(40mL)洗滌並在減壓下乾燥。添加水(750mL)和乙酸乙酯(750mL)以分離各層。將5N氫氧化鈉水性溶液(50mL)添加至水層，將其用乙酸乙酯(1000mL)萃取。將有機層合併，經無水硫酸鎂乾燥，將乾燥劑過濾掉並且將濾液在減壓下濃縮以獲得45.2g殘餘物。將所述殘餘物與藉由相同的操作單獨獲得的16.2g殘餘物合 併，溶解在乙酸乙酯(500mL)中，並且在攪拌的時候添加4N氯化氫乙酸乙酯溶液(100mL)。將反應混合物在室溫攪拌過夜，隨後將沈澱物藉由過濾收集，用乙酸乙酯(60mL)洗滌2次並且在減壓下乾燥。在攪拌的時候將水(800mL)和乙酸乙酯(800mL)依次添加至所獲得的固體，在攪拌的時候添加碳酸氫鈉並分離溶液。將5N氫氧化鈉水性溶液(50mL)添加至水層，將其用乙酸乙酯(800mL)萃取。將有機層合併，經無水硫酸鎂乾燥，將乾燥劑過濾掉並將濾液在減壓下濃縮以獲得標題化合物(60.7g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.38(d,J=7Hz,3H),1.45-1.54(m,1H),1.57-1.67(m,1H),2.03-2.21(m,3H),2.24(dd,J=16,7Hz,1H),2.50(dd,J=16,7Hz,1H),2.64(br.s,1H),2.85(br.s,1H),3.27(s,3H),3.29-3.32(m,1H),3.52(q,J=7Hz,1H),3.65(s,3H),7.23-7.33(m,5H)。
(2l)2-((3R,4S)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸甲酯鹽酸鹽的合成
將鈀活性碳(Pd10%)(0.639g)添加至2-((3R,4S)-3-甲氧基-1-((S)-1-苯基乙基)哌啶-4-基)乙酸甲酯(4.37g)在甲醇(50mL)中的溶液和氯化氫在甲醇(5-10%,30mL)中的溶液的混合物中，並且在氫氣氣氛下在室溫攪拌16小時。而且，添加鈀活性碳(Pd10%)(0.639g)並且在氫氣氣氛下在室溫攪拌24小時。添加鈀活性碳(Pd10%)(0.639g)並且在氫氣氣氛下在室溫進一步攪拌24小時。將混合物通過矽藻土過濾並且用甲醇洗滌所述矽藻土。將濾液和洗滌溶液合併並且在減壓下濃縮以獲得標題化合物(3.81g)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ：1.71-1.85(m,2H),2.16-2.25(m,1H),2.25(dd,J=16,7Hz,1H),2.53(dd,J=16,7Hz,1H),3.00-3.06(m,2H),3.27(m,1H),3.40(s,3H),3.59-3.63(m,2H),3.67(s,3H)。
(2m)2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸甲酯的合成
將HOBT(2.280g)和WSC(3.23g)添加至5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(6.03g)(實例10-(10d))在DMF(100mL)中的溶液，攪拌15分鐘，隨後依次添加2-((3R,4S)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸甲酯鹽酸鹽(3.36g)在DMF(50mL)和三乙胺(5.64mL)中的溶液，並且在室溫攪拌3小時。將乙酸乙酯(700mL)和水(500mL)添加至反應混合物中，並且將有機層用含有少量氯化鈉的水(750mL)洗滌2次。將水層和洗滌溶液依次用乙酸乙酯(750mL)萃取，將有機層合併並且經無水硫酸鎂乾燥。將乾燥劑過濾掉，並且將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠柱層析法(庚烷-乙酸乙酯系統)純化以獲得標題化合物(5.83g)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3，旋轉異構物的混合物)δ：1.25-1.75(m,2H),2.05-2.95(m,9H),3.38-3.75(m,9H),4.10-4.46(m,1H),4.54-4.95(m,1H),6.37-6.50(m,1H),6.90-7.28(m,4H),7.64-7.76(m,2H)。
(2n)2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的合成
將水(30mL)和4N氫氧化鋰水性溶液(3.49mL)添加至2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸甲酯(5.73g)在1.4-二(150mL)中的溶 液中，並且在室溫攪拌14小時。將DMSO(10mL)和甲酸(3mL)添加至反應混合物中，將其在減壓下濃縮。將殘餘物藉由反相矽膠柱層析法(乙腈-水、0.1%乙酸系統)純化以獲得呈固體的標題化合物(5.124g)。
1H-NMR(500MHz,CD3OD，旋轉異構物的混合物)δ：1.24-1.60(m,2H),2.00-2.47(m,4H),2.48-3.12(m,4H),3.31-3.64(m,7H),4.00-4.34(m,1H),4.34-4.65(m,1H),6.84-6.87(m,1H),6.90-7.35(m,4H),7.98-8.01(m,2H)。
[α]D 20：-109.9°(100mg，DMSO，5mL，100mm)。
(參考實例3)
2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的X射線繞射實驗將在參考實例2-(2n)中獲得的固體2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸溶解在甲醇中並且用乙腈作為儲蓄池藉由蒸汽擴散法重結晶。使用獲得的單晶進行X射線繞射實驗。將晶體學數據和結構分析結果示出於表1中，並且將原子座標數據示出於表2中。該等結果鑒定了標題化合物的絕對結構。
參考實例4
2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的重結晶
將水(550mL)添加至藉由與參考實例2中描述的方法相同的方法獲得的2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸(63.5g)、四氫呋喃(156mL)、乙腈(496mL)和水(65mL)的混合物中，同時在95℃的內部溫度下攪拌。將反應混合物攪拌30分鐘後，添加乙腈(25mL)和水(10mL)以溶解沈澱物。滴加水(3mL)並攪拌30分鐘，並且隨後滴加乙腈(3mL)直至混合物再次變澄清。將反應混合物攪拌30分鐘後，將內部溫度降至50℃並進一步繼續攪拌2小時。添加藉由與參考實例2中描述的方法相同的方法獲得的標題化合物(0.05g)的固體，並在停止加熱並使內部溫度回到室溫後，在室溫攪拌3天。將混合物冷卻至-5°的內部溫度，過濾收集固體，並且用比例為4：1：5的乙腈：四氫呋喃：水的混合液體(3×200mL)洗滌， 使用冰水冷卻，並且在氮氣流下減壓乾燥，以獲得標題化合物的晶體(46.0g)。
粉末X射線繞射 衍射角(2θ±0.2°)：6.1,9.9,11.6,12.7,13.9,17.5,20.6,21.1,23.2,29.4
13C-NMR(100MHz，固態)δ(ppm)：15.5,40.5,47.1,54.8,75.0,99.7,132.6,137.5,164.5,174.7
分別地，參考實例4中獲得的晶體之粉末X射線繞射圖示出於圖3中，並且其固態13C NMR譜示出於圖4中。
實例1
2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽的合成
將1mL的乙酸乙酯添加至藉由與參考實例2中描述的方法相同的方法獲得的2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸(10mg)中。在70℃的水浴中，固體完全溶解。添加3μL的濃鹽酸並在室溫攪拌過夜。將固體藉由過濾收集並且在減壓下乾燥以獲得標題化合物的晶體(9mg)。
將藉由與參考實例2中描述的方法相同的方法獲得的2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸(1.204g)和乙酸乙酯(120mL)在氮氣氛下在70℃攪拌直至固體完全溶解。使溶液回到室溫後，添加4N氯化氫乙酸乙酯溶液(4mL)和若干毫克以上獲得的標題化合物的晶體。在室溫攪拌反應溶液過夜後，藉由過濾收集固體，用乙酸乙酯(5mL)洗滌並在減壓下乾燥，以獲得標題化合物的晶體(1.202g)。
粉末X射線繞射 衍射角(2θ±0.2°)：8.3,11.4,13.1,15.2,15.7,17.3,18.8,19.7,22.3,25.0
13C-NMR(100MHz，固態)δ(ppm)：18.5,19.9,56.6,58.4,76.2,77.4,94.4,95.9,129.3,173.5
分別地，實例1中獲得的晶體之粉末X射線繞射圖示出於圖1中，並且其固態13C NMR譜示出於圖2中。
測試實例1 細胞內鈣濃度測量
將添加有3%胎牛血清(3% FBS)的使用DMEM培養基(英傑公司(Invitrogen))培養的人胚腎細胞系HEK293細胞製備為具有2×105個細胞/mL的濃度，並且塗板在I型膠原包被的384-孔黑色板(透明底)(格瑞納公司(Greiner))中以便成為25μL/孔並且在CO2培養箱中培養過夜。將用Hanks-20mM Hepes緩衝液(pH 7.4)製備的FLIPR鈣分析試劑盒(分子裝置公司(Molecular Devices))添加至細胞中以便成為25μL/孔並且在CO2培養箱中培養1小時。將用Hanks-20mM Hepes緩衝液(pH 7.4)製備為5U/mL作為終濃度(BAEE單位)的胰蛋白酶(西格瑪奧德里奇公司(SIGMA-ALDRICH)，目錄號：T8816，酶學委員會編號3.4.21.4)添加至384-孔深孔聚丙烯板(格瑞納公司(Greiner))以成為激動劑試劑板。在使用FDSS6000(濱松光子學有限公司(Hamamatsu Photonics K.K.))測量前30分鐘，將用Hanks-20mM Hepes緩衝液(pH 7.4)製備的測試化合物添加至細胞以便成為8μL/孔。將添加了測試化合物的細胞板和試劑板放置在FDSS6000上，從試劑板添加22μL/孔激動劑溶液，並且用CCD攝像機測量細胞內鈣濃度的變化。測量在37℃進行120秒，並且使用FDSS6000的內置384-孔自動分液器進行試劑從試劑板向細胞板的添加。
表3示出了測試化合物對細胞內鈣升高的抑制活性(IC50(nM))。
測試實例2 溶解度測試
稱取約1mg的測試化合物放入試管中，並向其中添加1mL的測試溶液。對於測試溶液，使用0.1M鹽酸水溶液(pH 1)和Britton-Robinson緩衝液(pH 3，pH 5和pH 7；離子強度0.3)。將測試溶液在室溫振盪24小時，並且隨後使用過濾器過濾。藉由高效液相層析法測量濾液中測試化合物的濃度以評估溶解度。將結果示出於表5中。另外，高效液相層析(HPLC)條件在以下列出。
[HPLC條件]
柱；YMC-Pack Pro C18,4.6mm×35mm,3μm
流動相A；水：乙腈：70%高氯酸=900：100：1
流動相B；水：乙腈：70%高氯酸=100：900：1
流速；2mL/min
柱溫；40℃
檢測波長；275nm
注射量；10μL
梯度條件
測試實例3 溶出測試
溶出測試藉由槳法(paddle method)使用FaSSIF(藉由滴加氫氧化鈉水溶液將含有3mM牛磺膽酸鈉、0.75mM卵磷脂、29mM磷酸二氫鈉和103mM氯化鉀的水溶液調節至pH 6.5)作為測試溶液進行。將約10mg的測試化合物添加至100mL的測試溶液中。在37℃和50rpm的條件下，使用槳攪拌測試溶液。開始攪拌後，在表6中示出的時間收集1mL測試溶液，並使用過濾器過濾。藉由高效液相層析法測量濾液中測試化合物的濃度(HPLC條件係與測試實例2中描述的條件的相同條件)。將結果示出於表6中。
[表6]

Claims (13)

  1. 一種由式(I)表示的2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽。
  2. 一種由式(I)表示的2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽的晶體。
  3. 如申請專利範圍第2項所述之晶體，所述2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽的晶體在粉末X射線繞射中在衍射角(2θ±0.2°)為8.3°處具有衍射峰。
  4. 如申請專利範圍第2項所述之晶體， 所述2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽的晶體在粉末X射線繞射中在衍射角(2θ±0.2°)為8.3°和13.1°處具有衍射峰。
  5. 如申請專利範圍第2項所述之晶體，所述2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽的晶體在粉末X射線繞射中在衍射角(2θ±0.2°)為8.3°、13.1°和15.7°處具有衍射峰。
  6. 如申請專利範圍第2項所述之晶體，所述2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽的晶體在粉末X射線繞射中在衍射角(2θ±0.2°)為8.3°、11.4°、13.1°、15.7°和17.3°處具有衍射峰。
  7. 如申請專利範圍第2項所述之晶體，所述2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽的晶體在粉末X射線繞射中在衍射角(2θ±0.2°)為8.3°、11.4°、13.1°、15.2°、15.7°、17.3°、18.8°、19.7°、22.3°和25.0°處具有衍射峰。
  8. 如申請專利範圍第2項所述之晶體，所述2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽的晶體具有與圖1示出之粉末X射線繞射圖基本同一之粉末X射線繞射圖。
  9. 如申請專利範圍第2項所述之晶體， 所述2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽的晶體在固態13C NMR譜中在化學位移(δ±0.5ppm)為58.4ppm、77.4ppm和173.5ppm處具有峰。
  10. 如申請專利範圍第2項所述之晶體，所述2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽的晶體在固態13C NMR譜中在化學位移(δ±0.5ppm)為18.5ppm、58.4ppm、77.4ppm、94.4ppm和173.5ppm處具有峰。
  11. 如申請專利範圍第2項所述之晶體，所述2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽的晶體在固態13C NMR譜中在化學位移(δ±0.5ppm)為18.5ppm、19.9ppm、56.6ppm、58.4ppm、76.2ppm、77.4ppm、94.4ppm、95.9ppm、129.3ppm和173.5ppm處具有峰。
  12. 如申請專利範圍第2項所述之晶體，所述2-((3R,4S)-1-(5-(4-氯-3,5-二氟苯基)-7-((2-氟-6-甲基苯基)(甲基)胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)-3-甲氧基哌啶-4-基)乙酸的鹽酸鹽的晶體具有與圖2示出的固態13C NMR譜基本同一的13C固態NMR譜。
  13. 一種藥物組成物，其包含如申請專利範圍第1至12項中任一項所述之鹽或晶體作為活性成分。
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