CN115433257A - 咪唑并哒嗪类双功能protac分子化合物及其制备和应用 - Google Patents

咪唑并哒嗪类双功能protac分子化合物及其制备和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN115433257A
CN115433257A CN202110620012.4A CN202110620012A CN115433257A CN 115433257 A CN115433257 A CN 115433257A CN 202110620012 A CN202110620012 A CN 202110620012A CN 115433257 A CN115433257 A CN 115433257A
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
reacting
imidazopyridazine
cancer
protac
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202110620012.4A
Other languages
English (en)
Inventor
王坚毅
张惠斌
王勉
卜红
义清源
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangxi University
Original Assignee
Guangxi University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangxi University filed Critical Guangxi University
Priority to CN202110620012.4A priority Critical patent/CN115433257A/zh
Publication of CN115433257A publication Critical patent/CN115433257A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种结构为式I的咪唑并哒嗪类双功能PROTAC分子化合物，它是基于Cereblon配体和VHL配体诱导MNK激酶降解的咪唑并哒嗪类双功能分子化合物，具体为基于E3泛素连接酶复合体中Cereblon配体和Von Hippel‑Lindau(VHL)蛋白配体的咪唑并哒嗪类双功能PROTAC分子化合物。据此，发明人还建立了相应制备方法。这些化合物及其衍生物有诱导MNK激酶降解的功能，可作为唯一活性成分单独使用，或者与已上市的其他药物联合使用，在治疗或预防肿瘤、降脂、炎症、代谢性疾病中有巨大的应用价值。

Description

咪唑并哒嗪类双功能PROTAC分子化合物及其制备和应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，尤其涉及咪唑并哒嗪类双功能PROTAC分子化合物及其制备和应用。
背景技术
丝裂原活化蛋白激酶作用激酶(Mitogen-activated protein kinaseinteracting protein kinases MNK)是丝氨酸/苏氨酸激酶，能够特异性地将真核翻译起始因子eIF4E(Eukaryotic translation initiaiton factor 4E)的Ser209磷酸化，从而间接调控mRNA翻译。eIF4E作为一种重要的转录因子，能够加强编码调控细胞周期蛋白与致癌蛋白mRNA的转录从而引起肿瘤相关蛋白表达的上调。eIF4E通过调控多种基因的表达翻译，进而影响细胞的增殖、分化和凋亡。在多种肿瘤细胞株中均检测到了eIF4E表达水平的上调，包括结肠癌、膀胱癌、肺癌、前列腺癌、胃癌、霍奇金淋巴瘤和神经细胞瘤。而在临床上，MNK激酶与eIF4E表达上调或过度磷酸化往往与耐药性以及不良预后密切相关。更为重要的是虽然MNK激酶是eIF4E调控肿瘤形成的必不可少的条件，但抑制MNK激酶的活性并不影响细胞和动物的正常存活和生长。由于MNK激酶在调节致癌基因表达中的关键作用，使其成为潜在的抗肿瘤靶点。此外，MNK蛋白激酶的失活可促进饮食诱发肥胖动物的氧化代谢，是一个非常有潜力的降脂药物作用靶点。近年来MNK抑制剂发展迅速，有三个抑制剂处于早期临床研究，分别为BAY1143269、eFT508和ETC-206。
研究发现MNK激酶的敲除或抑制在转录、翻译以及蛋白合成等方面都没有表现出任何缺陷，MNK激酶对于机体的正常生长发育不是必需的。因此，除了MNK激酶抑制剂外，降解MNK激酶来阻断eIF4E介导的下游事件为靶向MNK激酶的药物研发提供了新的思路，并且治疗效果可能优于选择性的小分子MNK抑制剂，更有效的新型MNK激酶降解药物有待进一步开发。
蛋白水解靶向嵌合体PROTAC(Proteolytic Targeting Chimera)技术，是将靶向蛋白的小分子药物和E3泛素连接酶配体通过连接臂片段连接起来，同时结合于靶蛋白与E3泛素连接酶，使靶蛋白泛素化进而使得蛋白酶体降解靶蛋白。相比传统小分子，PROTAC技术具有可用于难成药蛋白降解、克服给药后蛋白富集现象和耐药性、降解效力强以及在低浓度时即可保持催化降解作用等优势。PROTAC技术已用于多种靶点药物的改造，Arvinas公司开发的雄激素受体蛋白降解剂PROTAC(治疗前列腺癌)已进入临床I期研究。运用PROTAC技术进行新药分子研发有很高的优势和可行性，PROTAC分子可能成为下一代极具前途的新型药物。运用PROTAC技术进行新药分子研发有很高的优势和可行性，PROTAC分子可能成为下一代极具前途的新型药物。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供咪唑并哒嗪类双功能PROTAC分子化合物及其制备和应用。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
咪唑并哒嗪类双功能PROTAC分子化合物，其结构为以下式I：
Figure BDA0003099447960000021
式I中，L是连接臂，L选自脂肪链；B是E3泛素连接酶复合体中cereblon蛋白和VHL蛋白的小分子配体。
L的结构为以下式II之一：
Figure BDA0003099447960000022
通式II中，n为1-6之间的任一整数。
B的结构为以下式III之一：
Figure BDA0003099447960000023
上述咪唑并哒嗪类双功能PROTAC分子化合物，为以下化合物1-18之一：
Figure BDA0003099447960000031
Figure BDA0003099447960000041
Figure BDA0003099447960000051
上述咪唑并哒嗪类双功能PROTAC分子化合物的异构体、药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物。其中，
异构体可以是立体异构体或互变异构体。立体异构形式包括但不限于非对映异构体、对映异构体和阻转异构体以及他们的混合物，如外消旋物。“互变异构体”或“互变异构形式”是指经由低能垒相互转化的不同能量的结构异构体。
药学上可接受的盐包括化合物与下列酸形成的加成盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、三氟乙酸、马来酸、柠檬酸、富马酸、草酸、酒石酸、苯甲酸等。盐酸、氢溴酸、硫酸、柠檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、三氟乙酸、马来酸、苯磺酸、琥珀酸以及类似的已知可以接受的酸成盐。
前药是通式的衍生物，它们自身具有较弱的活性或没有活性，但是在给药后，在生理条件下(例如通过代谢、溶剂分解或另外的方式)被转化成相应的生物活性形式。
药物组合物，含有治疗有效量的上述化合物或其异构体、药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物。
上述咪唑并哒嗪类双功能PROTAC分子化合物的制备方法，按以下反应路线制备：
Figure BDA0003099447960000061
Figure BDA0003099447960000071
反应路线中：
步骤a为化合物(1)与溴乙酸乙酯反应得到化合物(2)；
步骤b为化合物(2)与氢氧化锂反应得到化合物(3)；
步骤c为化合物(4)与来那度胺反应得到化合物(5)；
步骤d为化合物(5)与三氟乙酸反应得到化合物(6)；
步骤e为化合物(4)与VHL配体反应得到化合物(7)；
步骤f为化合物(7)与三氟乙酸反应得到化合物(8)；
步骤g为化合物(9)与溴乙酸反应得到化合物(10)；
步骤h为化合物(10)与来那度胺反应得到化合物(11)；
步骤i为化合物(11)与三氟乙酸反应得到化合物(12)；
步骤j为化合物(10)与VHL配体反应得到化合物(13)；
步骤k为化合物(13)与三氟乙酸反应得到化合物(14)；
步骤l为化合物(15)与来那度胺反应得到化合物(16)；
步骤m为化合物(16)与三氟乙酸反应得到化合物(17)；
步骤n为化合物(15)与VHL配体反应得到化合物(18)；
步骤o为化合物(18)与三氟乙酸反应得到化合物(19)；
步骤p为化合物(3)与化合物(6)反应得到化合物1～5；
步骤q为化合物(3)与化合物(8)反应得到化合物6～10；
步骤r为化合物(3)与化合物(12)反应得到化合物11～12；
步骤s为化合物(3)与化合物(17)反应得到化合物13～14；
步骤t为化合物(3)与化合物(14)反应得到化合物15～16；
步骤u为化合物(3)与化合物(19)反应得到化合物17～18。
上述步骤的操作具体如下：
步骤a：将化合物(1)，溴乙酸乙酯和碳酸钾溶于适量N,N-二甲基甲酰胺中，40℃反应一段时间后，加入适量水，经二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗，收集有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱色谱层析纯化，洗脱得到化合物(2)。
步骤b：将化合物(2)和氢氧化锂溶于适量甲醇和水的混合溶剂中，室温反应一段时间后，减压浓缩，加入适量水，滴加1M盐酸溶液，调节pH至2～3，抽滤，收集滤饼并烘干，得到化合物(3)。
步骤c：将来那度胺，化合物(4)和吡啶溶于适量乙腈中，缓慢滴加三氯氧磷的乙腈溶液，滴加完后室温反应一段时间后，减压浓缩，加入适量水，经乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，收集有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱色谱层析纯化，洗脱得到化合物(5)。
步骤d：将化合物(5)溶于适量三氟乙酸的二氯甲烷溶液中，室温反应一段时间后，减压浓缩，得到化合物(6)。
步骤e：将VHL配体，化合物(4)，2-(7-偶氮苯并三氟唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和N,N-二异丙基乙胺溶于适量N,N-二甲基甲酰胺中，室温反应一段时间后，加入适量水，经乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，收集有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱色谱层析纯化，洗脱得到化合物(7)。
步骤f：将化合物(7)溶于适量三氟乙酸的二氯甲烷溶液中，室温反应一段时间后，减压浓缩，得到化合物(8)。
步骤g：将溴乙酸，化合物(9)溶于适量无水四氢呋喃中，在冰浴条件下，搅拌10分钟后，缓慢分批加入氢化钠，待反应稳定后撤去冰浴，室温反应一段时间后，缓慢加入适量甲醇和水淬灭氢化钠，经乙醚萃取，饱和碳酸氢钠水溶液洗，收集有机相层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到化合物(10)
步骤h：将来那度胺，化合物(10)和吡啶溶于适量乙腈中，缓慢滴加三氯氧磷的乙腈溶液，滴加完后室温反应一段时间后，减压浓缩，加入适量水，经乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，收集有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱色谱层析纯化，洗脱得到化合物(11)。
步骤i：将化合物(11)溶于适量三氟乙酸的二氯甲烷溶液中，室温反应一段时间后，减压浓缩，得到化合物(12)。
步骤j：将VHL配体，化合物(10)，2-(7-偶氮苯并三氟唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和N,N-二异丙基乙胺溶于适量N,N-二甲基甲酰胺中，室温反应一段时间后，加入适量水，经乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，收集有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱色谱层析纯化，洗脱得到化合物(13)。
步骤k：将化合物(13)溶于适量三氟乙酸的二氯甲烷溶液中，室温反应一段时间后，减压浓缩，得到化合物(14)。
步骤l：将来那度胺，化合物(15)和吡啶溶于适量乙腈中，缓慢滴加三氯氧磷的乙腈溶液，滴加完后室温反应一段时间后，减压浓缩，加入适量水，经乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，收集有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱色谱层析纯化，洗脱得到化合物(16)。
步骤m：将化合物(16)溶于适量三氟乙酸的二氯甲烷溶液中，室温反应一段时间后，减压浓缩，得到化合物(17)。
步骤n：将VHL配体，化合物(15)，2-(7-偶氮苯并三氟唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和N,N-二异丙基乙胺溶于适量N,N-二甲基甲酰胺中，室温反应一段时间后，加入适量水，经乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，收集有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱色谱层析纯化，洗脱得到化合物(18)。
步骤o：将化合物(18)溶于适量三氟乙酸的二氯甲烷溶液中，室温反应一段时间后，减压浓缩，得到化合物(19)。
步骤p：将化合物(3)，化合物(6)，2-(7-偶氮苯并三氟唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和N,N-二异丙基乙胺溶于适量N,N-二甲基甲酰胺中，室温反应一段时间后，加入适量水，经乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，收集有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱色谱层析纯化，洗脱得到化合物1～5。
步骤q：将化合物(3)，化合物(8)，2-(7-偶氮苯并三氟唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和N,N-二异丙基乙胺溶于适量N,N-二甲基甲酰胺中，室温反应一段时间后，加入适量水，经乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，收集有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱色谱层析纯化，洗脱得到化合物6～10。
步骤r：将化合物(3)，化合物(12)，2-(7-偶氮苯并三氟唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和N,N-二异丙基乙胺溶于适量N,N-二甲基甲酰胺中，室温反应一段时间后，加入适量水，经乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，收集有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱色谱层析纯化，洗脱得到化合物11～12。
步骤s：将化合物(3)，化合物(17)，2-(7-偶氮苯并三氟唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和N,N-二异丙基乙胺溶于适量N,N-二甲基甲酰胺中，室温反应一段时间后，加入适量水，经乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，收集有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱色谱层析纯化，洗脱得到化合物13～14。
步骤t：将化合物(3)，化合物(14)，2-(7-偶氮苯并三氟唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和N,N-二异丙基乙胺溶于适量N,N-二甲基甲酰胺中，室温反应一段时间后，加入适量水，经乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，收集有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱色谱层析纯化，洗脱得到化合物15～16。
步骤u：将化合物(3)，化合物(19)，2-(7-偶氮苯并三氟唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和N,N-二异丙基乙胺溶于适量N,N-二甲基甲酰胺中，室温反应一段时间后，加入适量水，经乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，收集有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物通过硅胶柱色谱层析纯化，洗脱得到化合物17～18。
上述咪唑并哒嗪类双功能PROTAC分子化合物或其异构体、药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物在制备治疗或预防肿瘤、降脂、炎症、代谢性疾病药物中的应用；肿瘤为多发性骨髓瘤、胃癌、肺癌、乳腺癌、食管癌、结肠癌、髓母细胞瘤、急性髓细胞性白血病、慢性白血病、黑色素瘤、前列腺癌、肝细胞瘤、肾细胞瘤、宫颈癌、皮肤癌、卵巢癌、结肠癌、神经胶质瘤、甲状腺癌或胰腺癌；降脂针对饮食诱发肥胖、高脂饮食引起的体重增加和胰岛素抵抗、糖脂代谢和胰腺组织炎症、降胆固醇和甘油三酯。
上述咪唑并哒嗪类双功能PROTAC分子化合物或其异构体、药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物在制备MNK激酶降解药物中的应用。
根据蛋白水解靶向嵌合体PROTAC技术，发明人研制了一种结构为式I的咪唑并哒嗪类双功能PROTAC分子化合物，它是基于Cereblon配体和VHL配体诱导MNK激酶降解的咪唑并哒嗪类双功能分子化合物，具体为基于E3泛素连接酶复合体中Cereblon配体和VonHippel-Lindau(VHL)蛋白配体的咪唑并哒嗪类双功能PROTAC分子化合物。据此，发明人还建立了相应制备方法。这些化合物及其衍生物有诱导MNK激酶降解的功能，可作为唯一活性成分单独使用，或者与已上市的其他药物联合使用，在治疗或预防肿瘤、降脂、炎症、代谢性疾病中有巨大的应用价值。
附图说明
图1是化合物10对MNK1的降解效果图，图中：(A)1nM、10nM、100nM、1000nM化合物10与A549细胞孵育24小时后，提取细胞内蛋白进行蛋白质免疫印迹分析(western blot)，并设DMSO溶剂对照组。(B)对蛋白质免疫印迹试验中MNK1蛋白表达量进行定量分析。
具体实施方式
为更好阐释本发明如何实施，下面参照上述反应路线及其具体操作结合实施例进行说明。其中，所用原料为公开购得或者按已知方法或本发明所述方法制备。实施例所得化合物的结构通过核磁共振(1H-NMR)和/或质谱(MS)来确定。NMR测定是用ACF-300BRUK型或AVANCE NEO 400MHZ核磁共振仪，测定溶剂为氘代氯仿(CDCl3)或氘代二甲亚砜(DMSO-D6)，TMS为内标。MS的测定用HP1100型质谱仪。柱层析采用200-300目硅胶(青岛海洋化工厂生产)。
实施例1
制备4-(2-(((S)-1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基)乙酰胺基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚-4-基)丁酰胺(化合物1)，其结构式如下：
Figure BDA0003099447960000111
步骤1：制备(S)-(1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)甘氨酸乙酯(2)
Figure BDA0003099447960000112
将(S)-(3-氨基哌啶-1-基)(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)甲酮盐酸盐(500mg，1.14mmol，1.0eq)和溴乙酸乙酯(229.03mg，1.37mmol，1.2eq)溶于10mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入碳酸钾(315.89mg，2.29mmol，2.0eq)，40℃反应2h。TLC监测反应完全后，反应液加入100mL二氯甲烷稀释，饱和氯化铵水溶液(100mL×3)和饱和食盐水(100mL×3)洗，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩，剩余残留物经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝150/1～100/1)分离纯化，得到黄色固体455mg，收率76.04％。
步骤2：制备(S)-(1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)甘氨酸盐酸盐(3)
Figure BDA0003099447960000121
将(S)-(1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)甘氨酸乙酯(125mg，238.74μmol，1.0eq)溶于4mL甲醇和1mL水的混合溶剂中，加入氢氧化锂(30.05mg，716.21μmol，3.0eq)，室温反应4h。TLC监测反应完全后，反应液减压浓缩，剩余残留物加入2mL水稀释，缓慢滴加1mol/L盐酸溶液，调节pH至2～3，析出大量黄色固体，抽滤，用少量水淋洗滤饼，收集滤饼并烘干，得到黄色固体108mg，收率91.29％。无需进一步纯化直接用于下一步反应。
步骤3：制备叔丁基(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚-4-基)氨基)-4-氧丁基)氨基甲酸酯(5a)
Figure BDA0003099447960000122
将来那度胺(200mg，771.41μmol，1.0eq)和4–((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸(188.41mg，925.69μmol，1.2eq)溶于6mL乙腈中，在冰浴条件下，缓慢分批滴加三氯氧磷(141.93mg，925.69μmol，1.2eq)的乙腈溶液，滴加结束后撤去冰浴，室温反应3h。TLC监测反应完全后，加入少量水淬灭三氯氧磷，反应液减压浓缩除去乙腈，剩余残留物加入50mL水，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相并用饱和食盐水(50mL×3)洗，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩，剩余残留物经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100/1～60/1)分离纯化，得到白色固体220mg，收率65.59％。
步骤4：制备4-氨基-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚-4-基)丁酰胺三氟乙酸盐(6a)
Figure BDA0003099447960000123
将叔丁基(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚-4-基)氨基)-4-氧丁基)氨基甲酸酯(220mg，479.81μmol，1.0eq)溶于10mL二氯甲烷中，加入1mL三氟乙酸，室温反应2h。TLC监测反应完全后，反应液减压浓缩，剩余残留物加入少量甲醇复溶，加入大量乙醚，反复几次析出固体，抽滤，得到黄色固体210mg，收率83.82％。
步骤5：制备4-(2-(((S)-1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基)乙酰胺基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚-4-基)丁酰胺
将(S)-(1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)甘氨酸盐酸盐(75mg，140.98μmol，1.0eq)和4-氨基-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚-4-基)丁酰胺三氟乙酸盐(64.62mg，140.98μmol，1.0eq)溶于5mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入N,N-二异丙基乙胺DIPEA(54.66mg，422.93μmol，3.0eq)和2-(7-偶氮苯并三氟唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯HATU(80.41mg，211.47μmol，1.5eq)，室温反应5h。TLC监测反应完全后，反应液加入50mL水，二氯甲烷萃取(50mL×3)，收集有机相并用饱和氯化铵水溶液(50mL×3)和饱和食盐水(50mL×3)洗，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩，剩余残留物经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝50/1～20/1)分离纯化，得到黄色固体29mg，收率25.03％。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.02(s,1H),9.87(d,J＝9.5Hz,1H),8.43–8.38(m,2H),8.33–8.26(m,2H),8.01(d,J＝9.5Hz,1H),7.81(d,J＝11.8Hz,3H),7.65(dd,J＝16.1,7.9Hz,4H),7.48(d,J＝5.8Hz,2H),7.39–7.30(m,2H),5.13(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.39–4.30(m,2H),3.30–2.74(m,8H),2.59(d,J＝16.7Hz,2H),2.42–2.25(m,3H),1.97–1.89(m,3H),1.83–1.73(m,2H),1.21(s,4H).
MS(ESI,m/z):820.4[M-H]-.
实施例2
制备5-(2-(((S)-1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基)乙酰氨基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚-4-基)戊酰胺(化合物2)，其结构式如下：
Figure BDA0003099447960000131
将实施例1步骤3中的4–((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸换为5–((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸，合成方法同实施例1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.03(s,1H),10.09(d,J＝30.6Hz,1H),8.45–8.38(m,2H),8.31(t,J＝8.8Hz,2H),8.04(d,J＝9.2Hz,1H),7.90–7.79(m,3H),7.65(dd,J＝20.6,8.1Hz,4H),7.46(s,2H),7.39–7.29(m,2H),5.12(d,J＝10.8Hz,1H),4.35(d,J＝19.0Hz,2H),3.29–2.83(m,9H),2.59(d,J＝16.5Hz,1H),2.38(d,J＝35.3Hz,3H),2.04–1.90(m,3H),1.46(d,J＝36.3Hz,5H),1.21(s,3H).
MS(ESI,m/z):834.4[M-H]-.
实施例3
制备6-(2-(((S)-1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基)乙酰胺)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1-氧异吲哚-4-基)己酰胺(化合物3)，其结构式如下：
Figure BDA0003099447960000141
将实施例1步骤3中的4–((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸换为6-((叔丁氧基羰基)氨基)己酸，合成方法同实施例1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.02(s,1H),9.72(d,J＝27.6Hz,1H),8.44–8.39(m,2H),8.30(d,J＝7.9Hz,2H),8.02(d,J＝9.6Hz,1H),7.85–7.79(m,3H),7.65(dd,J＝21.2,8.1Hz,4H),7.50–7.45(m,2H),7.34(dd,J＝15.4,7.5Hz,2H),5.13(dd,J＝13.2,5.1Hz,1H),4.34(s,2H),3.53(d,J＝37.8Hz,1H),3.18–2.86(m,8H),2.59(d,J＝18.9Hz,1H),2.34(d,J＝13.9Hz,3H),2.04–1.88(m,3H),1.63(s,1H),1.48(s,3H),1.35(s,3H),1.22(s,3H).
MS(ESI,m/z):848.4[M-H]-.
实施例4
制备7-(2-(((S)-1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基)乙酰胺)-N-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1-氧异吲哚-4-基)庚酰胺(化合物4)，其结构式如下：
Figure BDA0003099447960000142
将实施例1步骤3中的4–((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸换为7-((叔丁氧基羰基)氨基)庚酸，合成方法同实施例1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.02(s,1H),9.74(d,J＝21.4Hz,1H),8.45–8.38(m,2H),8.29(d,J＝7.8Hz,2H),8.02(d,J＝9.5Hz,1H),7.84–7.78(m,3H),7.65(dd,J＝20.9,8.1Hz,4H),7.46(d,J＝8.4Hz,2H),7.38–7.30(m,2H),5.13(dd,J＝13.4,5.1Hz,1H),4.34(s,2H),3.47(s,1H),3.21–2.89(m,8H),2.62(s,1H),2.37–2.25(m,3H),2.05–1.89(m,3H),1.61(s,1H),1.46(s,3H),1.31(d,J＝13.3Hz,4H),1.25(s,1H),1.22(s,3H).
MS(ESI,m/z):864.4[M+H]-.
实施例5
制备8-(2-(((S)-1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基)乙酰胺基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚基-4-基)辛酰胺(化合物5)，其结构式如下：
Figure BDA0003099447960000151
将实施例1步骤3中的4–((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸换为8-((叔丁氧基羰基)氨基)辛酸，合成方法同实施例1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.03(s,1H),9.83(d,J＝14.7Hz,1H),8.47–8.38(m,2H),8.30(d,J＝7.9Hz,2H),8.03(d,J＝9.6Hz,1H),7.82(d,J＝10.5Hz,3H),7.65(dd,J＝20.4,8.1Hz,4H),7.46(d,J＝8.6Hz,2H),7.39–7.30(m,2H),5.13(dd,J＝13.5,5.0Hz,1H),4.35(d,J＝12.4Hz,2H),3.54(d,J＝42.4Hz,1H),3.24–2.85(m,8H),2.62(s,1H),2.31(d,J＝28.2Hz,3H),1.93(d,J＝13.9Hz,3H),1.60(s,1H),1.44(s,4H),1.29(s,4H),1.25(s,1H),1.22(s,2H),1.13(s,2H).
MS(ESI,m/z):876.6[M-H]-.
实施例6
制备(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(2-((S)-1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基)乙酰胺基)丁酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物6)，其结构式如下：
Figure BDA0003099447960000161
步骤1：叔丁基(4-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-4-氧代丁基)氨基甲酸酯(7a)
Figure BDA0003099447960000162
将(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-2-吡咯烷甲酰胺(125mg，267.65μmol，1.0eq)和4–((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸(19a，54.40mg，267.65μmol，1.0eq)溶于5mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入N,N-二异丙基乙胺DIPEA(103.78mg，802.95μmol，3.0eq)和2-(7-偶氮苯并三氟唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯HATU(152.66mg，401.48mmol，1.5eq)，室温反应5h。TLC监测反应完全后，反应液加入50mL水，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，收集有机相并用饱和氯化铵水溶液(50mL×3)和饱和食盐水(50mL×3)洗，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩，剩余残留物经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝60/1～30/1)分离纯化，得到黄色固体140mg，收率84.94％。
步骤2：(2S,4R)-1-((S)-2-(4-氨基丁酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺三氟乙酸盐(8a)
Figure BDA0003099447960000163
将叔丁基(4-(((S)-1-((2S,4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨甲酰基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-4-氧代丁基)氨基甲酸酯(140mg，227.35μmol，1.0eq)溶于5mL二氯甲烷中，加入1mL三氟乙酸，室温反应2h。TLC监测反应完全后，反应液减压浓缩，剩余残留物加入少量甲醇复溶，加入大量乙醚，反复几次析出固体，抽滤，得到黄色固体130mg，收率90.81％。
步骤3：制备(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(2-((S)-1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基)乙酰胺基)丁酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺
将(S)-(1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)甘氨酸盐酸盐(70mg，131.58μmol，1.0eq)和(2S,4R)-1-((S)-2-(4-氨基丁酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺三氟乙酸盐(82.86mg，131.58μmol，1.0eq)溶于5mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入N,N-二异丙基乙胺(51.02mg，394.74μmol，3.0eq)和HATU(75.05mg，197.37μmol，1.5eq)，室温反应5h。TLC监测反应完全后，反应液加入50mL水，二氯甲烷萃取(50mL×3)，收集有机相并用饱和氯化铵水溶液(50mL×3)和饱和食盐水(50mL×3)洗，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩，剩余残留物经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝50/1～15/1)分离纯化，得到黄色固体55mg，收率42.09％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.97(s,1H),8.57(s,1H),8.45–8.39(m,2H),8.30(d,J＝8.0Hz,2H),8.08–7.95(m,2H),7.84–7.79(m,2H),7.66(dd,J＝17.4,8.0Hz,3H),7.37–7.29(m,7H),5.14(s,1H),4.55–4.17(m,7H),3.64(s,3H),3.48(d,J＝15.7Hz,1H),3.23(s,1H),3.14–2.98(m,4H),2.42(s,3H),2.35–2.08(m,3H),2.05–1.87(m,4H),1.61(d,J＝40.2Hz,4H),0.94(s,9H).
MS(ESI,m/z):993.6[M+H]-.
实施例7
制备(2S,4R)-1-((R)-2-(5-(2-((S)-1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基)乙酰胺基)五酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物7)，其结构式如下：
Figure BDA0003099447960000171
将实施例6步骤1中的4–((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸换为5–((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸，合成方法同实施例6。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.97(s,1H),8.57(s,1H),8.46–8.39(m,2H),8.30(dd,J＝9.0,3.4Hz,2H),8.03(d,J＝9.6Hz,1H),7.87 7.79(m,3H),7.66(dd,J＝19.2,8.0Hz,3H),7.44–7.29(m,7H),5.14(s,1H),4.56–4.16(m,7H),3.64(s,3H),3.48(d,J＝16.5Hz,1H),3.21(s,1H),3.08(dd,J＝27.1,15.4Hz,4H),2.43(s,3H),2.30–2.13(m,2H),2.10–1.83(m,5H),1.41(s,6H),0.93(s,9H).
MS(ESI,m/z):993.6[M+H]-.
实施例8
制备(2S,4R)-1-((S)-2-(6-(2-((S)-1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基)乙酰胺基)己胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物8)，其结构式如下：
Figure BDA0003099447960000181
将实施例6步骤1中的4–((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸换为6-((叔丁氧基羰基)氨基)己酸，合成方法同实施例6。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.97(s,1H),8.57(s,1H),8.47–8.38(m,2H),8.30(d,J＝8.2Hz,2H),8.03(d,J＝9.4Hz,1H),7.82(d,J＝12.3Hz,3H),7.66(dd,J＝14.6,7.9Hz,4H),7.37–7.29(m,6H),5.14(s,1H),4.58–4.16(m,7H),3.64(s,3H),3.22(s,1H),3.16–2.87(m,5H),2.43(s,3H),2.16(d,J＝8.2Hz,2H),2.08–1.81(m,5H),1.39(d,J＝24.4Hz,8H),0.92(s,9H).
MS(ESI,m/z):1021.6[M+H]-.
实施例9
制备(2S,4R)-1-((R)-2-(7-(2-((S)-1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基)乙酰胺基)庚酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物9)，其结构式如下：
Figure BDA0003099447960000182
将实施例6步骤1中的4–((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸换为7-((叔丁氧基羰基)氨基)庚酸，合成方法同实施例6。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.97(s,1H),8.57(s,1H),8.46–8.38(m,2H),8.30(d,J＝8.1Hz,2H),8.03(d,J＝9.6Hz,1H),7.82(dd,J＝11.4,6.1Hz,3H),7.66(dd,J＝19.4,8.1Hz,3H),7.36–7.28(m,7H),5.13(s,1H),4.63–4.13(m,7H),3.64(s,3H),3.49(d,J＝9.0Hz,1H),3.21(s,1H),3.13–2.95(m,4H),2.43(s,3H),2.27–2.10(m,2H),2.08–1.82(m,5H),1.50–1.33(m,6H),1.27(d,J＝16.4Hz,4H),0.93(s,9H).
MS(ESI,m/z):1035.6[M+H]-.
实施例10
制备(2S,4R)-1-((S)-2-(8-(2-((S)-1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基)乙酰胺基)辛胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物10)，其结构式如下：
Figure BDA0003099447960000191
将实施例6步骤1中的4–((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸换为8-((叔丁氧基羰基)氨基)辛酸，合成方法同实施例6。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.97(s,1H),8.57(s,1H),8.46–8.38(m,2H),8.30(d,J＝8.0Hz,2H),8.04–7.97(m,1H),7.87–7.78(m,3H),7.63(td,J＝16.8,15.6,8.0Hz,4H),7.43–7.28(m,6H),5.15(s,1H),4.56–4.16(m,6H),3.64(s,3H),3.23(s,1H),3.04(d,J＝35.2Hz,6H),2.43(s,3H),2.30–2.11(m,2H),2.10–1.81(m,5H),1.56–1.31(m,6H),1.27(d,J＝12.2Hz,6H),0.91(s,9H).
MS(ESI,m/z):1049.6[M+H]-.
实施例11
制备2-((S)-1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基)-N-(2-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1-氧异吲哚-4-基)氨基)-2-氧乙氧基)乙基)乙酰胺(化合物11)，其结构式如下：
Figure BDA0003099447960000192
步骤1：制备2-(2-((叔丁氧羰基)氨基)乙氧基)乙酸(10a)
Figure BDA0003099447960000193
将溴乙酸(200mg，1.44mmol，1.0eq)和N-(叔丁氧羰基)乙醇胺(348.05mg，2.16mmol，1.5eq)溶于6mL无水四氢呋喃中，在冰浴条件下，搅拌10分钟后，缓慢分批加入氢化钠(69.08mg，2.88mmol，2.0eq)，待反应稳定后撤去冰浴，室温反应3h。TLC监测反应完全后，向反应液中缓慢加入甲醇和大量水淬灭氢化钠直至反应液中无气泡产生，用乙醚萃取一次，水相滴加1M盐酸溶液调节pH至2～3，乙醚萃取(100mL×3)，收集有机相并用饱和碳酸氢钠水溶液(100mL×3)洗，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩，得到无色又装液体135mg，收率42.78％。
步骤2：制备叔丁基(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)基-1-氧代异吲哚-4-基)氨基)-2-氧乙氧基)乙基)氨基甲酸酯(11a)
Figure BDA0003099447960000201
将来那度胺(160mg，617.13μmol，1.0eq)和2-(2-((叔丁氧羰基)氨基)乙氧基)乙酸(202.95mg，925.69μmol，1.5eq)溶于6mL乙腈中，在冰浴条件下，缓慢分批滴加三氯氧磷(141.93mg，925.69μmol，1.5eq)的乙腈溶液，滴加结束后撤去冰浴，室温反应5h。TLC监测反应完全后，加入少量水淬灭三氯氧磷，反应液减压浓缩除去乙腈，剩余残留物加入50mL水，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相并用饱和食盐水(50mL×3)洗，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩，剩余残留物经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100/1～60/1)分离纯化，得到白色固体227mg，收率79.88％。
步骤3：制备2-(2-氨基乙氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚-4-基)乙酰胺三氟乙酸盐(12a)
Figure BDA0003099447960000202
将叔丁基(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)基-1-氧代异吲哚-4-基)氨基)-2-氧乙氧基)乙基)氨基甲酸酯(227mg，492.96μmol，1.0eq)溶于10mL二氯甲烷中，加入1mL三氟乙酸，室温反应3h。TLC监测反应完全后，反应液减压浓缩，剩余残留物加入少量甲醇复溶，加入大量乙醚，反复几次析出固体，抽滤，得到黄色固体177mg，收率75.69％。
步骤4：制备2-((S)-1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基)-N-(2-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1-氧异吲哚-4-基)氨基)-2-氧乙氧基)乙基)乙酰胺
将(S)-(1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)甘氨酸盐酸盐(70mg，131.58μmol，1.0eq)和2-(2-氨基乙氧基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚-4-基)乙酰胺三氟乙酸盐(62.42mg，131.58μmol，1.0eq)溶于5mLN,N-二甲基甲酰胺中，加入N,N-二异丙基乙胺(51.02mg，394.74μmol，3.0eq)和HATU(75.05mg，197.37μmol，1.5eq)，室温反应5h。TLC监测反应完全后，反应液加入50mL水，二氯甲烷萃取(50mL×3)，收集有机相并用饱和氯化铵水溶液(50mL×3)和饱和食盐水(50mL×3)洗，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩，剩余残留物经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝50/1～15/1)分离纯化，得到黄色固体26mg，收率23.58％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.01(s,1H),9.76(d,J＝9.7Hz,1H),8.44–8.38(m,2H),8.30(dd,J＝15.0,7.8Hz,2H),8.02(d,J＝9.3Hz,1H),7.87–7.75(m,3H),7.65(dd,J＝23.3,8.3Hz,4H),7.52(dt,J＝14.7,7.0Hz,2H),7.35(dt,J＝16.0,7.3Hz,2H),5.13(d,J＝12.9Hz,1H),4.35(d,J＝21.4Hz,2H),4.17–4.01(m,2H),3.55(d,J＝40.6Hz,3H),3.14–2.80(m,4H),2.58(d,J＝14.6Hz,1H),2.35(s,2H),1.97–1.93(m,3H),1.47–1.33(m,2H),1.21(s,5H).
MS(ESI,m/z):836.4[M-H]-.
实施例12
制备2-(((S)-1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基)-N-(3-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚-4-基)氨基)-2-氧乙氧基)丙基)乙酰胺(化合物12)，其结构式如下：
Figure BDA0003099447960000211
将实施例11步骤1中的N-(叔丁氧羰基)乙醇胺换为N-(3-羟丙基)氨基甲酸叔丁酯，合成方法同实施例11。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.01(s,1H),9.71(d,J＝40.4Hz,1H),8.44–8.37(m,2H),8.28(d,J＝7.7Hz,2H),8.00(d,J＝9.2Hz,1H),7.85–7.75(m,3H),7.65(dd,J＝20.4,8.4Hz,4H),7.53(dd,J＝7.8,7.2Hz,2H),7.34(dd,J＝16.1,7.1Hz,2H),5.19–5.07(m,1H),4.36(d,J＝16.7Hz,2H),4.12–4.00(m,2H),3.55(d,J＝18.6Hz,2H),3.12–2.79(m,5H),2.59(d,J＝16.3Hz,1H),2.44–2.23(m,2H),1.97–1.89(m,3H),1.74(d,J＝6.1Hz,2H),1.46–1.33(m,2H),1.20(s,5H).
MS(ESI,m/z):852.4[M+H]-.
实施例13
制备2-(((S)-1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基)-N-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚-4-基)氨基)-2-氧乙氧基)乙氧基)乙基)乙酰胺(化合物13)，其结构式如下：
Figure BDA0003099447960000221
将实施例1步骤3中的4–((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸换为2-(2-(叔丁氧羰基氨基)乙氧基)乙氧基乙酸，合成方法同实施例1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.02(s,1H),9.69(d,J＝26.1Hz,1H),8.45–8.37(m,2H),8.29(d,J＝7.8Hz,2H),8.01(d,J＝9.3Hz,1H),7.94–7.77(m,3H),7.65(dd,J＝22.4,8.1Hz,4H),7.59–7.45(m,2H),7.34(dt,J＝22.9,7.4Hz,2H),5.13(dd,J＝13.4,5.0Hz,1H),4.36(s,2H),4.17–4.04(m,2H),3.73–3.45(m,5H),3.23–3.04(m,4H),2.96–2.85(m,2H),2.59(d,J＝17.6Hz,1H),2.42–2.18(m,2H),2.07–1.80(m,3H),1.69(d,J＝44.2Hz,2H),1.47–1.31(m,2H),1.21(s,3H).
MS(ESI,m/z):880.4[M-H]-.
实施例14
制备2-(((S)-1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基)-N-(2-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)乙酰胺(化合物14)，其结构式如下：
Figure BDA0003099447960000222
将实施例1步骤3中的4–((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸换为5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷二酸-1-叔丁酯，合成方法同实施例1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.03(s,1H),9.69(d,J＝11.2Hz,1H),8.46–8.39(m,2H),8.30(d,J＝7.9Hz,2H),8.03(d,J＝9.7Hz,1H),7.87–7.74(m,3H),7.66(dd,J＝21.5,8.0Hz,4H),7.56–7.48(m,2H),7.40–7.31(m,2H),5.14(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.36(d,J＝9.8Hz,2H),4.12(d,J＝18.4Hz,2H),3.62–3.41(m,9H),3.25–3.05(m,4H),2.91–2.85(m,2H),2.64–2.52(m,2H),2.35(dd,J＝13.2,4.5Hz,1H),2.08–1.83(m,3H),1.44–1.32(m,2H),1.23(d,J＝14.2Hz,5H).
MS(ESI,m/z):926.4[M+H]-.
实施例15
制备(2S,4R)-1-((R)-2-(2-(2-(2-((S)-1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑[1,2-b]吡啶-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基)乙酰胺基)乙氧基)乙酰胺)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-羧酰胺(化合物15)，其结构式如下：
Figure BDA0003099447960000231
将实施例6步骤1中的4–((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸换为2-(2-((叔丁氧羰基)氨基)乙氧基)乙酸，合成方法同实施例6。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.96(s,1H),8.59(s,1H),8.47–8.37(m,2H),8.30(d,J＝8.2Hz,2H),8.02(d,J＝9.5Hz,1H),7.97–7.74(m,3H),7.66(dd,J＝21.4,8.2Hz,3H),7.52–7.27(m,7H),5.17(s,1H),4.61–4.19(m,6H),3.94(d,J＝36.9Hz,3H),3.58(d,J＝31.9Hz,4H),3.44(s,1H),3.26(s,1H),3.13–2.80(m,4H),2.42(s,3H),1.98–1.92(m,4H),1.71(d,J＝39.4Hz,1H),1.52–1.30(m,3H),0.94(s,9H).
MS(ESI,m/z):1009.6[M+H]-.
实施例16
制备(2S,4R)-1-((S)-2-(2-(3-(2-((S)-1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基)乙酰胺基)丙氧基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物16)，其结构式如下：
Figure BDA0003099447960000232
将实施例6步骤1中的4–((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸换为2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙氧基)乙酸，合成方法同实施例6。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.97(s,1H),8.62(s,1H),8.46–8.37(m,2H),8.30(d,J＝8.0Hz,2H),8.07–7.93(m,2H),7.84–7.78(m,2H),7.66(dd,J＝19.2,8.1Hz,3H),7.44–7.29(m,7H),5.18(s,1H),4.60–4.23(m,6H),4.07–3.75(m,3H),3.56(dd,J＝58.1,11.6Hz,5H),3.17(d,J＝59.2Hz,5H),2.42(s,3H),2.10–1.84(m,4H),1.66(d,J＝45.7Hz,4H),1.42(d,J＝10.4Hz,2H),0.94(s,9H).
MS(ESI,m/z):1023.6[M+H]-.
实施例17
制备(2S,4R)-1-((S)-14-((S)-1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基)-2-(叔丁基)-4,13-二氧代-6,9-二氧代-3,12-重氮十四烷酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物17)，其结构式如下：
Figure BDA0003099447960000241
将实施例6步骤1中的4–((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸换为2-(2-(叔丁氧羰基氨基)乙氧基)乙氧基乙酸，合成方法同实施例6。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.96(s,1H),8.59(s,1H),8.47–8.38(m,2H),8.30(d,J＝8.2Hz,2H),8.07–7.92(m,2H),7.85–7.79(m,2H),7.66(dd,J＝22.0,8.0Hz,3H),7.35(d,J＝23.2Hz,7H),5.18(s,1H),4.63–4.17(m,7H),3.94(d,J＝31.1Hz,2H),3.71–3.43(m,10H),3.23(s,2H),3.03(d,J＝36.9Hz,2H),2.42(s,3H),2.11–1.83(m,4H),1.43–1.29(m,4H),0.94(s,9H).
MS(ESI,m/z):1053.6[M+H]-.
实施例18
制备(2S,4R)-1-((R)-17-((S)-1-(4-(3-(苯并呋喃-2-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰基)哌啶-3-基)氨基)-2-(叔丁基)-4,16-二氧基-6,9,12-三氧基-3,15-重氮庚烷酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物18)，其结构式如下：
Figure BDA0003099447960000242
将实施例6步骤1中的4–((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸换为5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷二酸-1-叔丁酯，合成方法同实施例6。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.97(s,1H),8.61(s,1H),8.45–8.40(m,2H),8.30(d,J＝8.0Hz,2H),8.01(dd,J＝17.4,7.8Hz,2H),7.84–7.80(m,2H),7.69–7.63(m,3H),7.37(d,J＝7.6Hz,7H),5.17(s,1H),4.58–4.32(m,7H),3.97(s,2H),3.60(dd,J＝12.0,8.1Hz,10H),3.45(d,J＝12.3Hz,4H),3.05(dd,J＝66.4,42.3Hz,4H),2.42(s,3H),2.05–1.88(m,4H),1.42–1.28(m,4H),0.94(s,9H).
MS(ESI,m/z):1119.6[M+H]-.
生物活性试验
1、化合物对MNK1和MNK2酶的抑制作用
利用ADP-Glo激酶测试试剂盒(Promega,catalog No.V6930)，筛选本发明化合物对MNK1和MNK2酶活的抑制活性。所有激酶反应均在HEPES反应缓冲液(15mM HEPES pH7.4，20mM NaCl2，1mM EGTA，10mM MgCl2，0.1mg/mL BGG和0.02％Tween-20)中进行。最终MNK1反应液包含10nM MNK1(Carna，catalog No.02-145)、100μM多肽底物(TATKSGSTTKNR，Genscript)、300μM ATP和不同浓度化合物；最终MNK2反应液包含3nM MNK1(Carna，catalogNo.02-146)、50μM多肽底物(TATKSGSTTKNR，Genscript)、10μMATP和不同浓度化合物。各反应中最终DMSO浓度为1％。使用多功能酶标仪冷发光模块读取RLU(Relative luminescenceunit)值。化合物在500nM浓度下的抑制率(％)见表1。
表1化合物对MNK1和MNK2酶的抑制率(％)
Figure BDA0003099447960000251
2、化合物对MNK1蛋白的降解试验
在A549细胞中分别加入0nM、1nM、10nM、100nM、1000nM化合物孵育24小时后，用含苯甲基磺酰氟(PMSF)的RIPA裂解液裂解细胞，提取细胞内总蛋白。对蛋白进行定量后，加入SDS上样缓冲液，于沸水中加热5分钟使蛋白变性，上样于聚丙烯酰胺凝胶进行电泳，浓缩胶电压设为80V，分离胶电压设为120V。电泳结束后，用湿转法将蛋白从凝胶转移至聚偏二氟乙烯膜，转移电流为150mA，转移时间约为100min。根据蛋白Marker的位置，剪下目的条带，用含5％脱脂奶粉的PBST溶液于37℃下封闭1.5小时。之后，与MNK1一抗(#2195，cellsignaling technology)或GAPDH一抗(艾比玛特，上海)在4℃下孵育过夜。用PBST溶液在室温下洗脱3次(使用脱色摇床)，每次10min。加入用辣根过氧化物酶标记的二抗溶液，在室温下与膜上的一抗杂交1.5小时。用PBST溶液在室温下洗脱3次，每次10min。最后，MNK1使用极超敏ECL化学发光试剂盒(碧云天，江苏)、内参使用超敏ECL化学发光试剂盒(碧云天，江苏)进行显色，用一体化成像仪(ImageQuant LAS 500,GE)观察。图1是化合物10对MNK1的降解效果。
3、MTT法检测化合物对HepG2细胞增殖抑制作用
(1)铺板
观察HepG2细胞生长状态，选取处于对数生长期的细胞进行实验。细胞经胰酶消化，500r/min下离心5min，计数。将细胞接种到96孔板中，每孔10000个细胞(150μL细胞悬液)，边缘孔用150μL PBS进行填充，防止因为水分蒸发引起的实验误差，将96孔板放入37℃，5％CO2培养箱中培养24h。
(2)药物孵育
化合物母液溶剂为DMSO，母液浓度为100mM，将母液稀释到以下浓度梯度(0μM，12.5μM，25μM，50μM，100μM)，每个梯度设置3个平行，另外设置空白组和对照组(空白组的孔中仅加入DMEM完全培养基；而对照组孔中仅加入HepG2细胞和DMEM完全培养基)。将96孔板放入37℃，5％CO2培养箱中孵育48h。
(3)OD值检测
将培养48h的96孔板从培养箱中取出，在生物安全柜中每孔加入15μL的MTT(5mg/mL)，将96孔板放入培养箱中孵育4h后，取出96孔板，吸弃孔内含有MTT的培养基，然后每孔加150μL DMSO，避光摇床10min，将孔内的紫色结晶物充分溶解，随后使用酶标仪测量在490nm波长下的吸光度。
存活率计算公式：存活率(％)＝[(实验组OD值-空白组OD值)/(对照组OD值-空白组OD值)]×100％
结果见表2。
表2化合物对HepG2细胞增殖抑制作用化合物 IC50(μM)
Figure BDA0003099447960000271

Claims (10)

1.咪唑并哒嗪类双功能PROTAC分子化合物，其特征在于其结构为以下式I：
Figure FDA0003099447950000011
式I中，L是连接臂，L选自脂肪链；B是E3泛素连接酶复合体中cereblon蛋白和VHL蛋白的小分子配体。
2.根据权利要求1所述的咪唑并哒嗪类双功能PROTAC分子化合物，其特征在于所述L的结构为以下式II之一：
Figure FDA0003099447950000012
通式II中，n为1-6之间的任一整数。
3.根据权利要求2所述的咪唑并哒嗪类双功能PROTAC分子化合物，其特征在于所述B的结构为以下式III之一：
Figure FDA0003099447950000013
4.根据权利要求3所述的咪唑并哒嗪类双功能PROTAC分子化合物，其特征在于为以下化合物1-18之一：
Figure FDA0003099447950000021
Figure FDA0003099447950000031
Figure FDA0003099447950000041
5.权利要求1至4任一所述咪唑并哒嗪类双功能PROTAC分子化合物的异构体、药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物。
6.一种药物组合物，其特征在于含有治疗有效量的权利要求1至4任一所述化合物或其异构体、药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物。
7.权利要求1所述的咪唑并哒嗪类双功能PROTAC分子化合物的制备方法，其特征在于按以下反应路线制备：
Figure FDA0003099447950000051
Figure FDA0003099447950000061
8.根据权利要求6所述的咪唑并哒嗪类双功能PROTAC分子化合物的制备方法，其特征在于所述反应路线中：
步骤a为化合物(1)与溴乙酸乙酯反应得到化合物(2)；
步骤b为化合物(2)与氢氧化锂反应得到化合物(3)；
步骤c为化合物(4)与来那度胺反应得到化合物(5)；
步骤d为化合物(5)与三氟乙酸反应得到化合物(6)；
步骤e为化合物(4)与VHL配体反应得到化合物(7)；
步骤f为化合物(7)与三氟乙酸反应得到化合物(8)；
步骤g为化合物(9)与溴乙酸反应得到化合物(10)；
步骤h为化合物(10)与来那度胺反应得到化合物(11)；
步骤i为化合物(11)与三氟乙酸反应得到化合物(12)；
步骤j为化合物(10)与VHL配体反应得到化合物(13)；
步骤k为化合物(13)与三氟乙酸反应得到化合物(14)；
步骤l为化合物(15)与来那度胺反应得到化合物(16)；
步骤m为化合物(16)与三氟乙酸反应得到化合物(17)；
步骤n为化合物(15)与VHL配体反应得到化合物(18)；
步骤o为化合物(18)与三氟乙酸反应得到化合物(19)；
步骤p为化合物(3)与化合物(6)反应得到化合物1～5；
步骤q为化合物(3)与化合物(8)反应得到化合物6～10；
步骤r为化合物(3)与化合物(12)反应得到化合物11～12；
步骤s为化合物(3)与化合物(17)反应得到化合物13～14；
步骤t为化合物(3)与化合物(14)反应得到化合物15～16；
步骤u为化合物(3)与化合物(19)反应得到化合物17～18。
9.权利要求1至4任一所述的咪唑并哒嗪类双功能PROTAC分子化合物或其异构体、药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物在制备治疗或预防肿瘤、降脂、炎症、代谢性疾病药物中的应用；所述肿瘤为多发性骨髓瘤、胃癌、肺癌、乳腺癌、食管癌、结肠癌、髓母细胞瘤、急性髓细胞性白血病、慢性白血病、黑色素瘤、前列腺癌、肝细胞瘤、肾细胞瘤、宫颈癌、皮肤癌、卵巢癌、结肠癌、神经胶质瘤、甲状腺癌或胰腺癌；所述降脂针对饮食诱发肥胖、高脂饮食引起的体重增加和胰岛素抵抗、糖脂代谢和胰腺组织炎症、降胆固醇和甘油三酯。
10.权利要求1至4任一所述的咪唑并哒嗪类双功能PROTAC分子化合物或其异构体、药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物在制备MNK激酶降解药物中的应用。
CN202110620012.4A 2021-06-03 2021-06-03 咪唑并哒嗪类双功能protac分子化合物及其制备和应用 Pending CN115433257A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110620012.4A CN115433257A (zh) 2021-06-03 2021-06-03 咪唑并哒嗪类双功能protac分子化合物及其制备和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110620012.4A CN115433257A (zh) 2021-06-03 2021-06-03 咪唑并哒嗪类双功能protac分子化合物及其制备和应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115433257A true CN115433257A (zh) 2022-12-06

Family

ID=84272174

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110620012.4A Pending CN115433257A (zh) 2021-06-03 2021-06-03 咪唑并哒嗪类双功能protac分子化合物及其制备和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115433257A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111153901B (zh) 一类含氮稠杂环类shp2抑制剂化合物、制备方法和用途
CN110204543B (zh) 一种基于Cereblon配体诱导BET降解的吡咯并吡啶酮类双功能分子化合物
JP6494624B2 (ja) カゼインキナーゼ１ｄ／ｅ阻害剤としての置換された４，５，６，７−テトラヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン誘導体
CN110143961B (zh) 一种基于vhl配体诱导bet降解的吡咯并吡啶酮类双功能分子化合物
EP3315499B1 (en) Crystal of (6S,9aS)-N-benzyl-8-({6-[3-(4-ethylpiperazin-1-yl)azetidin-1-yl]pyridin-2-yl}methyl)-6-(2-fluoro-4-hydroxybenzyl)-4,7-dioxo-2-(prop-2-en-1-yl)hexahydro-2H-pyrazino[2,1-c][1,2,4]triazine-1(6H)-carboxamide
EP2949647B1 (en) Deuterated phenyl amino pyrimidine compound and pharmaceutical composition containing same
EA026300B1 (ru) Активаторы ampk и их применение в терапевтических целях
CN110627812B (zh) 作为trk抑制剂的杂环化合物
BR112016002069B1 (pt) Composto de pirimidina fusionada ou sal deste, sonda, inibidor de btk, agente antitumor e composição farmacêutica compreendendo dito composto e usos terapêuticos do mesmo
KR102480074B1 (ko) 설폰아마이드 화합물 및 이의 용도
CN112300153B (zh) 一种杂环化合物、药物组合物和用途
EP3473626A1 (en) Pyrrolopyrimidine crystal for preparing jak inhibitor
JP7248256B2 (ja) Ｊａｋキナーゼ阻害剤及びその調製方法、並びにその医薬分野での使用
UA122241C2 (uk) Піранодипіридинова сполука
BR112021005989A2 (pt) derivados de quinolino-pirrolidin-2-ona e aplicação dos mesmos
JP2023538090A (ja) Ｂｔｋ阻害剤としての架橋二環式化合物
JP2023522863A (ja) Ｅｇｆｒ阻害剤としての三環式化合物
EP3929185A1 (en) Nitrogen-containing fused cyclic compound, preparation method therefor and use thereof
EP2896623A1 (en) CRYSTAL OF N-[2-({2-[(2S)-2-CYANOPYRROLIDIN-1-YL]-2- OXOETHYL}AMINO)-2-METHYLPROPYL]-2-METHYLPYRAZOLO[1,5-a]PYRIMIDINE-6-CARBOXAMIDE
JP2023502675A (ja) 核タンパク質阻害剤の結晶形及びその使用
WO2023235719A2 (en) Stereoselective allosteric inhibitors of sarm1
CN114437113B (zh) 一种噻唑并吡啶环联三氮唑类化合物及其制备方法和应用
CN115433257A (zh) 咪唑并哒嗪类双功能protac分子化合物及其制备和应用
EP3250575B1 (en) Tosylate salt of n-[3-[(4ar,7as)-2-amino-6-(5-fluoropyrimidin-2-yl)-4,4a,5,7-tetrahydropyrrolo[3,4-d][1,3]thiazin-7a-yl]-4-fluoro-phenyl]-5-methoxy-pyrazine-2-carboxamide.
CN111527069B (zh) 一类喹啉衍生物

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination