ES2784398T3 - Compuestos heterocíclicos de 3,3-difluoropiperidina carbamato como antagonistas del receptor de NMDA NR2B - Google Patents
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Abstract
Una entidad química, que es un compuesto de fórmula (II): **(Ver fórmula)** en donde **(Ver fórmula)** Z es ; R5 es -H, -F, -Cl, -CH3, -CFH2, -CF2H, -CF3, -CH2CH3, -CF2CH3, -CH2CF3, ciclopropilo, -OCF3, -OCF2H, -SCH3, -S(O)2CH3 o -C≡CH; R6 es -H o -F; y R7 es -H, -F, -Cl o -CH3.
Description
DESCRIPCIÓN
Compuestos heterocíclicos de 3,3-difluoropiperidina carbamato como antagonistas del receptor de NMDA NR2B
Antecedentes
Los antagonistas no selectivos del receptor de NMDA, originalmente desarrollados en ictus y traumatismo craneal, han mostrado más recientemente eficacia clínica en tratar la depresión. El antagonista no selectivo del receptor de NMDA, ketamina, ha mostrado tener inicio rápido y eficacia en depresión resistente a terapia de inhibidor de recaptación de monoamina estándar (Mathews y Zarate, 2013, J. Clin. Psychiatry 74:516-158). Sin embargo, los antagonistas no selectivos del receptor de NMDA tal como ketamina tienen una gama de actividades farmacológicas indeseables que limitan la aplicación en seres humanos. En particular los efectos secundarios disociativos o psicógenos son particularmente prominentes para antagonistas no selectivos del receptor de NMDA. Más recientemente, los antagonistas del receptor de NMDA selectivos de subtipo NR2B han demostrado potencial en una amplia gama de indicaciones clínicas. En particular, los antagonistas NR2B también han demostrado actividad antidepresiva en ensayos clínicos de estadio temprano (Ibrahim et al., 2012, J. Clin. Psychopharmacol. 32, 551-557; Preskorn et al., 2008, J. Clin. Psychopharmacol. 28, 631-637). Además, los antagonistas de NR2B selectivos tienen ventajas sobre los antagonistas del receptor de NMDA no selectivos tal como ketamina debido a los efectos secundarios disociativos muy disminuidos. Sin embargo, los antagonistas de NR2B descritos hasta la fecha en general han mostrado desventajas con respecto a otras propiedades farmacéuticas que han limitado el potencial uso en terapia farmacéutica humana.
Patani y LaVoie discuten en Chem. Rev., 1996, 96, 3147-3176 el bioisosterismo como un enfoque racional a la modificación de compuestos de partida en descubrimiento de fármacos.
Compendio
Para un amplio ámbito de aplicación y uso humano seguro en una gama de indicaciones clínicas incluyendo depresión, se necesitan antagonistas selectivos del subtipo NR2B mejorados. La presente invención, entre otras cosas, aborda la necesidad para agonistas de receptor NR2B que estén mejorados en uno o más aspectos ejemplificados por rendimiento farmacocinético, actividad oral, seguridad cardiovascular, y medidas de índices de seguridad terapéutica in vitro e in vivo.
La presente invención se refiere a compuestos de fórmula (II) como se define en la reivindicación 1, con formas de realización preferidas que se exponen en las reivindicaciones dependientes. En algunas formas de realización, la presente divulgación abarca la percepción de que entidades químicas de fórmula (I):
en donde R1 y Z se definen en el presente documento, son antagonistas de receptor selectivos del subtipo NR2B. Las entidades químicas de fórmula (I), y composiciones farmacéuticamente aceptables de las mismas, son útiles para tratar una variedad de enfermedades y trastornos asociados con antagonismos de receptor NR2B. Tales enfermedades y trastornos incluyen los descritos en el presente documento.
Breve descripción de los dibujos
La figura 1A muestra los resultados de la prueba de natación forzada en ratones como se describe en el ejemplo 2.4.1 con el compuesto E1-1.2. La figura 1B muestra los resultados de la prueba de natación forzada en ratones como se describe en el ejemplo 2.4.2 con el compuesto E1-8.2 por administración i.p. La figura 1C muestra los resultados de la prueba de natación forzada en ratones como se describe en el ejemplo 2.4.3 con el compuesto E1-21.26 por administración i.p. La figura 1D muestra los resultados de la prueba de natación forzada en ratones como se describe en el ejemplo 2.4.4 con el compuesto E1-1.2 por administración oral (p.o.). La figura 1E muestra los resultados de la prueba de natación forzada en ratas como se describe en el ejemplo 2.4.5 con el compuesto E1-1.2 por administración i.p. La figura 1F muestra los resultados de la prueba de natación forzada en ratas como se describe en el ejemplo 2.4.6 con el compuesto E1-21.26 por administración p.o. La figura 1G muestra los resultados de la prueba de natación forzada como se describe en el ejemplo 2.4.7 con el compuesto E1-1.2.
La figura 2 muestra los resultados de la prueba del umbral electroconvulsivo (ECT) como se describe en el ejemplo 2.5.1 con el compuesto E1-1.2.
La figura 3 muestra los resultados de la prueba del umbral electroconvulsivo (ECT) como se describe en el ejemplo 2.5.2 con el compuesto E1-8.2.
La figura 4 muestra los resultados de la prueba del umbral electroconvulsivo (ECT) como se describe en el ejemplo 2.5.3 con el compuesto E1-21.26.
La figura 5A muestra el número de animales que muestran convulsiones clónicas en la prueba de convulsiones con pentilenotetrazol (PTZ) como se describe en el ejemplo 2.6.1 con el compuesto E1-1.2. La figura 5B muestra el número de animales que muestran convulsiones tónicas en la prueba de convulsiones con PTZ con el compuesto E1-1.2. La figura 5C muestra el número de animales muertos en la prueba de convulsiones con PTZ con el compuesto E1-1.2. La figura 5D muestra la latencia hasta convulsiones clónicas en la prueba de convulsiones con PTZ con el compuesto E1-1.2. La figura 5E muestra la latencia hasta convulsiones tónicas en la prueba de convulsiones con PTZ con el compuesto E1-1.2. La figura 5G muestra la latencia hasta la muerte en la prueba de convulsiones con PTZ con el compuesto E1-1.2.
La figura 6A muestra el número de animales que muestran convulsiones clónicas en la prueba de convulsiones con pentilenotetrazol (PTZ) como se describe en el ejemplo 2.6.2 con el compuesto E1-21.26. La figura 6B muestra el número de animales que muestran convulsiones tónicas en la prueba de convulsiones con PTZ con el compuesto E1-21.26. La figura 6C muestra el número de animales muertos en la prueba de convulsiones con PTZ con el compuesto E1-21.26. La figura 6D muestra la latencia hasta convulsiones clónicas en la prueba de convulsiones con PTZ con el compuesto E1-21.26. La figura 6E muestra la latencia hasta convulsiones tónicas en la prueba de convulsiones con PTZ con el compuesto E1-21.26. La figura 6G muestra la latencia hasta la muerte en la prueba de convulsiones con PTZ con el compuesto E1-21.26.
La figura 7A muestra la puntuación de clono de las extremidades anteriores en la prueba de convulsiones de 6 Hz como se describe en el ejemplo 2.7.1 para el compuesto E1-1.2. La figura 7B muestra el número de ratones con cola de Straub en la prueba de convulsiones de 6 Hz como se describe en el ejemplo 2.7.1 para el compuesto E1-1.2.
La figura 8A muestra los resultados del modelo de catalepsia inducida por haloperidol como se describe en el ejemplo 2.8.1 para el compuesto E1-1.2. La figura 8B muestra los resultados del modelo de catalepsia inducida por haloperidol para anfetamina. La figura 8C muestra los resultados del modelo de catalepsia inducida por haloperidol como se describe en el ejemplo 2.8.2 para el compuesto E1-21.26.
La figura 9A muestra el comportamiento nociceptivo en fase I del modelo de formalina en rata como se describe en el ejemplo 2.9 para el compuesto E1-1.2. La figura 9B muestra el comportamiento nociceptivo en fase II del modelo de formalina en rata como se describe en el ejemplo 2.9 para el compuesto E1-1.2.
La figura 10 muestra el número de potenciales de CC para el compuesto E1-1.2 en el modelo de depresión cortical propagada (migraña) como se describe en el ejemplo 2.10.
La figura 11 muestra un diagrama de barras y esferas del intermedio (R)-XVIa que muestra el esquema de numeración empleado en las tablas A-D.
Descripción detallada de ciertas formas de realización
Descripción general de entidades químicas
En algunas formas de realización, la presente divulgación proporciona entidades químicas de fórmula I:
en donde
R1 es alquilo, cicloalquilo, (cicloalquil)alquilo, heterociclilo, (heterociclil)alquilo, arilo, (aril)alquilo, heteroarilo o (heteroaril)alquilo,
en donde cada uno de cicloalquilo, (cicloalquil)alquilo, heterociclilo, (heterociclil)alquilo, arilo, (aril)alquilo, heteroarilo y (heteroaril)alquilo está independientemente opcionalmente sustituido con de 1 a 3 grupos independientemente seleccionados de -F, -Cl, alquilo de C1-C4, ciclopropilo, -CeCH, -CFH2, -CF2H, -CF3, -CF2CH3 , -CH2CF3, alcoxi de C1-C4 , -OCFH2 , -OCF2H, -OCF3 , -CN, -N(R2)(R3), -NO2 , alquiltio de C1-C4 , alquilsulfonilo de C1-C4 y -S(O)2CF3 ;
en donde en cada caso de R2 y R3 es independientemente -H o alquilo de C1-C4 , o
Z es un heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros o bicíclico de 9 o 10 miembros que tiene átomos de carbono de anillo, 1 átomo de nitrógeno de anillo y 0-3 heteroátomos de anillo adicionales seleccionados independientemente de N, O y S, que está opcionalmente sustituido con 1 o 2 grupos Rx y opcionalmente sustituido con 1 grupo Ra, en donde cada Rx está unido a un átomo de carbono del anillo y Ra está unido a un átomo de nitrógeno del anillo;
en donde:
cada caso de Rx independientemente es -F, -Cl, -CH3 , -CFH2, -CF2H, -CF3 , -OH, -OCH3, -OCF3 o -CN; y
Ra es alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-4 o -S(O)2-alquilo de C1-4.
A menos que se especifique otra cosa o esté claro del contexto, el término “entidad química” se refiere a un compuesto que tiene la estructura indicada, sea en su forma “ libre” (por ejemplo, “compuesto libre” o forma de “base libre” o “ácido libre”, según sea aplicable), o en una forma de sal, en particular una forma de sal farmacéuticamente aceptable, y además ya sea en la forma de estado sólido o de otra manera. En algunas formas de realización, una forma en estado sólido es una forma amorfa (es decir, no cristalina); en algunas formas de realización, una forma en estado sólido es una forma cristalina. En algunas formas de realización, una forma cristalina (por ejemplo, un polimorfo, pseudohidrato o hidrato). De forma similar, el término abarca el compuesto ya sea proporcionado en forma sólida o de otra manera. A menos que se especifique de otra manera, todas las afirmaciones hechas en el presente documento respecto a “compuestos” aplican a las entidades químicas asociadas, como se define.
Entidades químicas y definiciones
A menos que se especifique de otra manera, la palabra “incluye” (o cualquier variación en la misma, por ejemplo, “incluir”, “que incluye”, etc.) se pretende que sea abierta. Por ejemplo, “A incluye 1, 2 y 3” significa que A incluye, pero no está limitado a 1, 2 y 3.
A menos que se especifique de otra manera, la frase “tal como” se pretende que sea abierta. Por ejemplo, “A puede ser un halógeno, tal como cloro o bromo” significa que A puede ser, pero no está limitado a, cloro o bromo.
Las entidades químicas de esta invención incluyen las descritas en general anteriormente, y se ilustran adicionalmente por las clases, subclases y especies divulgadas en el presente documento. Como se usan en el presente documento, las siguientes definiciones se aplicarán a menos que se indique otra cosa. Para los fines de esta invención, los elementos químicos se identifican según la tabla periódica de los elementos, versión CAS, Handbook of Chemistry and Physics, 75a Ed., cubierta interior, y los grupos funcionales específicos en general se definen como se describe en la misma. Además, los principios generales de química orgánica, así como fracciones funcionales específicas y reactividad, se describen en Thomas Sorrell, Organic Chemistry, University Science Books, Sausalito, 1999; Smith y March, March's Advanced Organic Chemistry, 5 a Edición, John Wiley & Sons, Inc., Nueva York, 2001; Larock, Comprehensive Organic Transformations, v Ch Publishers, Inc., Nueva York, 1989; y Carruthers, Some Modern Methods of Organic Synthesis, 3 a Edición, Cambridge University Press, Cambridge, 1987.
El término “alquilo”, usado solo o como parte de una fracción mayor, significa una cadena hidrocarbonada univalente, sustituida o sin sustituir, lineal o ramificada que está completamente saturada o que contiene una o más unidades de insaturación. A menos que se especifique de otra manera, los grupos alquilo contienen de 1 a 7 átomos de carbono (“alquilo de C1-C7”). En algunas formas de realización, los grupos alquilo contienen de 1 a 6 átomos de carbono (“alquilo de C1-C6”). En algunas formas de realización, los grupos alquilo contienen de 1 a 5 átomos de carbono (“alquilo de C1-C5”). En algunas formas de realización, los grupos alquilo contienen de 1 a 4 átomos de carbono (“alquilo de C1-C4”). En algunas formas de realización, los grupos alquilo contienen de 3 a 7 átomos de carbono (“alquilo de C3-C7”). Los ejemplos de grupos alquilo saturados incluyen metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, t-butilo, i-butilo, s-butilo, homólogos e isómeros de, por ejemplo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo, y similares. Un grupo alquilo insaturado es uno que tiene uno o más dobles enlaces carbono-carbono o triples enlaces carbono-carbono. Los ejemplos de grupos alquilo insaturados incluyen alilo, vinilo, 2-propenilo, crotilo, 2-isopentenilo, 2-(butadienilo), 2,4-pentadienilo, 3-(1,4-pentadienilo), etinilo, 1- y 3-propinilo, 3-butinilo, y similares. El término “alquilo inferior” se refiere a grupos alquilo que tienen de 1 a 4 (si son saturados) o de 2 a 4 (si son insaturados) átomos de carbono. Los grupos alquilo inferiores ejemplares incluyen metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, s-butilo, i-butilo, t-butilo y similares. El término “alquenilo” se refiere a grupos alquilo que tienen al menos dos átomos de carbono y al menos un doble enlace carbono-carbono. El término “alquinilo” se refiere a grupos alquilo que tienen al menos dos átomos de carbono y al menos un triple enlace carbono-carbono.
El término “cidoalquilo”, usado solo o como parte de una fracción mayor, por ejemplo, “(ddoalquil)alquNo”, se refiere a un hidrocarburo monocíclico univalente que está completamente saturado o que contiene una o más unidades de insaturación, pero que no es aromático; o biciclo[2.2.1]heptanilo (también llamado norbornilo) o biciclo[2.2.2]octanilo. En algunas formas de realización, los grupos cicloalquilo contienen de 3 a 8 átomos de carbono de anillo (“cicloalquilo de C3-C8”). Los ejemplos de cicloalquilo incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, 1-ciclohexenilo, 3-ciclohexenilo, cicloheptilo, y similares, así como biciclo[2.2.1]heptanilo y biciclo[2.2.2]octanilo.
El término “alcoxi”, usado solo o como parte de una fracción mayor, se refiere al grupo -O-alquilo.
El término “halógeno” o “halo”, usado solo o como parte de una fracción mayor, se refiere a fluoro, cloro, bromo o yodo.
El término “arilo”, usado solo o como parte de una fracción mayor, por ejemplo, “(aril)alquilo”, se refiere a un sistema de anillos aromático carbocíclico monocíclico o bicíclico. A menos que se especifique de otra manera, los grupos arilo contienen 6 o 10 miembros de anillo. Los ejemplos de arilo incluyen fenilo, naftilo, y similares.
El término “heteroarilo”, usado solo o como parte de una fracción mayor, Por ejemplo, “(heteroaril)alquilo”, se refiere a un grupo monocíclico o bicíclico univalente que tiene de 5 a 10 átomos de anillo, preferiblemente 5, 6, 9 o 10 átomos de anillo, que tiene 6, 10 o 14 electrones n compartidos en una formación cíclica, y que tiene, además de átomos de carbono de anillo, de uno a cuatro heteroátomos. Los ejemplos de grupos heteroarilo incluyen tienilo, furanilo, pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, triazolilo, tetrazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, oxadiazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, tiadiazolilo, piridilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, indolizinilo, purinilo, naftiridinilo, pteridinilo, y similares.
El término “heterociclilo”, usado solo o como parte de una fracción mayor, por ejemplo, “(heterociclil)alquilo”, se refiere a una fracción heterocíclica monocíclica de 5 a 7 miembros o bicíclica de 7 a 10 miembros estable univalente que o bien está saturada o parcialmente insaturada, y que tiene, además de los átomos de carbono de anillo, uno o más heteroátomos. Los ejemplos de grupos heterociclilo incluyen tetrahidrofuranilo, pirrolidinilo, tetrahidropiranilo, piperidinilo, morfolinilo, y similares.
Como se usa en el presente documento, el término “sal farmacéuticamente aceptable” se refiere a esas sales que son, en el ámbito del juicio médico racional, adecuadas para uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales inferiores sin toxicidad, irritación, respuesta alérgica indebida y similares, y son proporcionales con una relación beneficio/riesgo razonable. Las sales farmacéuticamente aceptables se conocen bien en la técnica. Por ejemplo, S. M. Berge et al., describen sales farmacéuticamente aceptables en detalle en J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66:1-19. Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de esta invención incluyen las derivadas de ácidos y bases inorgánicos y orgánicos adecuados. Los ejemplos de sales de adición ácidas no tóxicas, farmacéuticamente aceptables son sales de un grupo amino formadas con ácidos inorgánicos tal como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico y ácido perclórico o con ácidos orgánicos tal como ácido acético, ácido oxálico, ácido maleico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico o ácido malónico o usando otros métodos usadas en la técnica tal como intercambio iónico. Otras sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales adipato, alginato, ascorbato, aspartato, bencenesulfonato, benzoato, bisulfato, borato, butirato, canforato, canforsulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, formiato, fumarato, glucoheptonato, glicerofosfato, gluconato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, yodhidrato, 2-hidroxi-etanosulfonato, lactobionato, lactato, laurato, lauril sulfato, malato, maleato, malonato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, p-toluenosulfonato, undecanoato, valerato y similares.
Las sales derivadas de bases apropiadas incluyen sales de metales alcalinos, metales alcalinotérreos, amonio y N+(alquilo de C-m )4. Las sales de metales alcalinos o alcalinotérreos representativas incluyen sodio, litio, potasio, calcio, magnesio y similares. Sales farmacéuticamente aceptables adicionales incluyen, cuando sea apropiado, amonio no tóxico, amonio cuaternario y cationes amina formados usando contraiones tal como haluro, hidróxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, sulfonato de alquilo inferior, y arilsulfonato.
Como se usa en el presente documento, el término “sujeto” incluye un mamífero (por ejemplo, un ser humano, en algunas formas de realización incluyendo formas humanas prenatales). En algunas formas de realización, un sujeto padece una enfermedad, trastorno o afección relevante. En algunas formas de realización, un sujeto es susceptible a una enfermedad, trastorno o afección. En algunas formas de realización, un sujeto muestra uno o más síntomas o características de una enfermedad, trastorno o afección. En algunas formas de realización, un sujeto no muestra ningún síntoma o característica de una enfermedad, trastorno o afección. En algunas formas de realización un sujeto es alguien con uno o más rasgos característicos de susceptibilidad a o riesgo de una enfermedad, trastorno o afección. En algunas formas de realización, un sujeto es un paciente. En algunas formas de realización, un sujeto es un individuo al que se administra o ha administrado diagnóstico y/o terapia. En algunas formas de realización, un sujeto es un feto, un lactante, un niño, un adolescente, un adulto, o una persona mayor (es decir, el sujeto es de edad avanzada, tal
como mayor de 50 años). En algunas formas de realización, un niño se refiere a un ser humano entre 2 y 18 años de edad. En algunas formas de realización, un adulto se refiere a un ser humano de dieciocho años de edad o mayor.
A menos que se indique de otra manera, también se pretende que las estructuras representadas en el presente documento incluyan todas las formas isoméricas (por ejemplo, enantioméricas, diastereoméricas, y geométricas (o conformacionales)) de la estructura; por ejemplo, las configuraciones R y S para cada centro asimétrico, los isómeros de doble enlace Z y E, y los isómeros conformacionales Z y E. Por tanto, los isómeros estereoquímicos individuales, así como las mezclas enantioméricas, diastereoméricas y geométricas (o conformacionales) de los presentes compuestos están dentro del ámbito de la invención. A menos que se indique de otra manera, todas las formas tautoméricas de los compuestos de la invención están dentro del ámbito de la invención. Además, a menos que se indique de otra manera, también se pretende que las estructuras representadas en el presente documento incluyan compuestos que se diferencian solo en la presencia de uno o más átomos isotópicamente enriquecidos. Por ejemplo, los compuestos que tienen las presentes estructuras incluyendo la sustitución de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, cloro o flúor con 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 17O, 18O, 36Cl o 18F, respectivamente, están dentro del ámbito de esta invención. Tales compuestos son útiles, por ejemplo, como herramientas analíticas, como sondas en ensayos biológicos, o como agentes terapéuticos según la presente invención. Además, la incorporación de isótopos más pesados tal como deuterio (2H) puede dar ciertas ventajas terapéuticas resultantes de mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, aumentar la semivida in vivo, o requisitos de dosis reducidos.
El exceso diastereomérico se expresa como % de, es decir, para los diastereómeros X e Y, el exceso diastereomérico de X = ((x-y)/(x+y))*100, donde x e y son las fracciones de X e Y, respectivamente.
El exceso enantiomérico se expresa como % de, es decir, para los enantiómeros X e Y, el exceso enantiomérico de X = ((x-y)/(x+y))*100, donde x e y son las fracciones de X e Y, respectivamente.
Formas de realización ejemplares de entidades químicas
En algunas formas de realización, la presente divulgación proporciona entidades químicas de fórmula (I):
en donde R1 y Z son como se ha descrito anteriormente.
En algunas formas de realización, R1 es alquilo opcionalmente sustituido.
En algunas formas de realización, R1 es cicloalquilo opcionalmente sustituido o (cicloalquil)alquilo opcionalmente sustituido. En algunas formas de realización, R1 es cicloalquilo opcionalmente sustituido. En algunas formas de realización, R1 es ciclohexilo opcionalmente sustituido. En algunas formas de realización, R1 es ciclohexilo. En algunas formas de realización, R1 es 4,4-difluorociclohexilo. En algunas formas de realización, R1 es 4,4-dimetilciclohexilo. En algunas formas de realización, R1 es 4-metilciclohexilo. En algunas formas de realización, R1 es 4-etilciclohexilo. En algunas formas de realización, R1 es 4-ciclopropilciclohexilo. En algunas formas de realización, R1 es norbornanilo opcionalmente sustituido. En algunas formas de realización, R1 es (cicloalquil)alquilo opcionalmente sustituido. En algunas formas de realización, R1 es biciclo[2.2.1]heptan-2-metilo. En algunas formas de realización, R1 es ciclohexilmetilo opcionalmente sustituido. En algunas formas de realización, R1 es ciclohexilmetilo. En algunas formas de realización, R1 es (4,4-dimetilciclohexil)metilo. En algunas formas de realización, R1 es (4,4-difluorociclohexil)metilo.
En algunas formas de realización, R1 es heterociclilo opcionalmente sustituido o (heterociclil)alquilo opcionalmente sustituido. En algunas formas de realización, R1 es heterociclilo opcionalmente sustituido. En algunas formas de realización, R1 es tetrahidropiranilo opcionalmente sustituido. En algunas formas de realización, R1 es tetrahidropiran-4-ilo. En algunas formas de realización, R1 es (heterociclil)alquilo opcionalmente sustituido. En algunas formas de realización, R1 es tetrahidropiranilmetilo opcionalmente sustituido. En algunas formas de realización, R1 es tetrahidropiran-4-ilmetilo.
En algunas formas de realización, R1 es arilo opcionalmente sustituido o (aril)alquilo opcionalmente sustituido. En algunas formas de realización, R1 es (aril)alquilo opcionalmente sustituido. En algunas formas de realización, R1 es bencilo opcionalmente sustituido. En algunas formas de realización, R1 es 4-metilbencilo. En algunas formas de realización, R1 es 4-etilbencilo. En algunas formas de realización, R1 es 4-isopropilbencilo. En algunas formas de realización, R1 es 4-(2,2,2-trifluoroetil)bencilo. En algunas formas de realización, R1 es 4-(1,1-difluoroetil)bencilo. En algunas formas de realización, R1 es 4-t-butilbencilo. En algunas formas de realización, R1 es 4-clorobencilo. En algunas formas de realización, R1 es 4-fluorobencilo. En algunas formas de realización, R1 es 4-difluorometilbencilo.
En algunas formas de realización, R1 es 4-difluorometoxibencilo. En algunas formas de realización, R1 es 4-trifluorometoxibencilo. En algunas formas de realización, R1 es 4-metiltiobencilo. En algunas formas de realización, R1 es 4-etiltiobencilo. En algunas formas de realización, R1 es 4-metilsulfonilbencilo. En algunas formas de realización, R1 es 4-etilsulfonilbencilo. En algunas formas de realización, R1 es 4-trifluorometilsulfonilbencilo.
En algunas formas de realización, R1 es heteroarilo opcionalmente sustituido o (heteroaril)alquilo opcionalmente sustituido. En algunas formas de realización, R1 es (heteroaril)alquilo opcionalmente sustituido. En algunas formas de realización, R1 es (piridin-2-il)metilo opcionalmente sustituido. En algunas formas de realización, R1 es (5-cloro-piridin-2-il)metilo opcionalmente sustituido. En algunas formas de realización, R1 es opcionalmente (5-metil-piridin-2-il)metilo. En algunas formas de realización, R1 es (piridin-3-il)metilo opcionalmente sustituido. En algunas formas de realización, R1 es (5-metil-piridin-3-il)metilo.
En algunas formas de realización, Z es un heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros o bicíclico de 9 o 10 miembros que tiene átomos de carbono de anillo, 1 átomo de nitrógeno de anillo y 0-3 heteroátomos de anillo adicionales seleccionados independientemente de N, O y S, que estás opcionalmente sustituido con 1 o 2 grupos Rx y opcionalmente sustituido con 1 grupo Ra, en donde cada Rx está unido a un átomo de carbono del anillo y Ra está unido a un átomo de nitrógeno del anillo.
En algunas formas de realización, Z es un sistema de anillos heteroaromático bicíclico de 9 miembros opcionalmente sustituido que tiene átomos de carbono de anillo, 1 átomo de nitrógeno de anillo y 0-3 heteroátomos de anillo adicionales seleccionados independientemente de N, O y S.
En algunas formas de realización, Z es un sistema de anillos heteroaromático bicíclico de 9 miembros opcionalmente sustituid que tiene átomos de carbono de anillo, 1 átomo de nitrógeno de anillo y 1 heteroátomo de anillo de oxígeno.
En algunas formas de realización, Z es un sistema de anillos heteroaromático bicíclico de 9 miembros opcionalmente sustituid que tiene átomos de carbono de anillo y 2 heteroátomos de nitrógeno de anillo.
En algunas formas de realización, Z es un sistema de anillos heteroaromático bicíclico de 9 miembros opcionalmente sustituid que tiene átomos de carbono de anillo y 3 heteroátomos de nitrógeno de anillo.
En algunas formas de realización, Z es un sistema de anillos heteroaromático bicíclico de 9 miembros opcionalmente sustituid que tiene átomos de carbono de anillo y 4 heteroátomos de nitrógeno de anillo.
En algunas formas de realización, Z es un sistema de anillos heteroaromático monocíclico de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituido que tiene átomos de carbono de anillo, 1 átomo de nitrógeno de anillo y 0-2 heteroátomos de anillo adicionales seleccionados independientemente de N, O y S.
En algunas formas de realización, Z es un sistema de anillos heteroaromático monocíclico de 6 miembros opcionalmente sustituido que tiene átomos de carbono de anillo, 1 átomo de nitrógeno de anillo y 0 o 1 heteroátomo de anillo adicional. En algunas formas de realización, Z es piridilo. En algunas formas de realización, Z es piriminidilo. En algunas formas de realización, Z es piridazinilo.
En algunas formas de realización, Z es un sistema de anillos heteroaromático monocíclico de 6 miembros opcionalmente sustituido que tiene átomos de carbono de anillo y 2 átomos de nitrógeno de anillo. En algunas formas de realización, Z es un sistema de anillos heteroaromático monocíclico de 6 miembros opcionalmente sustituido que tiene átomos de carbono de anillo y 2 átomos de nitrógeno de anillo, en donde Z está sustituido con 1 o 2 grupos Rx. En algunas formas de realización, Z es un sistema de anillos heteroaromático monocíclico de 6 miembros opcionalmente sustituido que tiene átomos de carbono de anillo y 2 átomos de nitrógeno de anillo, en donde Z está sustituido con 1 grupo Rx. Por tanto, en algunas formas de realización, Z es un sistema de anillos heteroaromático monocíclico de 6 miembros que tiene átomos de carbono de anillo y 2 átomos de nitrógeno de anillo, en donde Z está monosustituido con Rx. En algunas formas de realización, Z es piridilo monosustituido con Rx. En algunas formas de realización, Z es piriminidilo monosustituido con Rx. En algunas formas de realización, Z es piridazinilo monosustituido con Rx. En algunas formas de realización, Z es un sistema de anillos heteroaromático monocíclico de 5 miembros opcionalmente sustituido que tiene átomos de carbono de anillo, 1 átomo de nitrógeno de anillo y 0-2 heteroátomos de anillo adicionales seleccionados independientemente de N, O y S.
En algunas formas de realización, Z es un sistema de anillos heteroaromático monocíclico de 5 miembros opcionalmente sustituido que tiene átomos de carbono de anillo, 1 átomo de nitrógeno de anillo y 0 o 1 heteroátomo de anillo adicional seleccionado independientemente de N, O y S. En algunas formas de realización, Z es imidazolilo o tiazolilo. En algunas formas de realización, Z es imidazolilo. En algunas formas de realización, Z es tiazolilo.
En algunas formas de realización, Z es un sistema de anillos heteroaromático monocíclico de 5 miembros opcionalmente sustituido que tiene átomos de carbono de anillo, 1 átomo de nitrógeno de anillo y 0-2 heteroátomos de anillo adicionales seleccionados independientemente de N, O y S. En algunas formas de realización, Z es triazolilo,
oxadiazolilo o tiadiazolilo. En algunas formas de realización, Z es triazolilo. En algunas formas de realización, Z es oxadiazolilo. En algunas formas de realización, Z es tiadiazolilo.
En algunas formas de realización, Z está opcionalmente sustituido con 1 o 2 grupos Rx y opcionalmente sustituido con 1 grupo Ra, en donde cada Rx está unido a un átomo de carbono del anillo y Ra está unido a un átomo de nitrógeno del anillo. En algunas formas de realización, cada Rx se selecciona independientemente de -F, -Cl, -CH3, -CFH2, -CF2H, -CF3 , -OH, -OCH3 , -OCF3 o -CN. En algunas formas de realización, Rx es -F o -Cl. En algunas formas de realización, Rx es -F, -Cl o -CN. En algunas formas de realización, Rx es -CH3 , -CFH2 , -CF2H o -CF3. En algunas tales formas de realización, Rx es -CFH2 , -CF2H o -CF3. En algunas formas de realización, Rx es -CH3 o -CF3. En algunas formas de realización, Rx es- OH, -OCH3 , o -OCF3.
En algunas formas de realización, cada Ra se selecciona independientemente de alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-4 o -S(O)2-alquilo de C1-4. En algunas formas de realización, Ra es alquilo de C1-4, o cicloalquilo de C3-4. En algunas formas de realización, Ra es -S(O)2-alquilo de C1-4.
En algunas formas de realización Z es una de las fórmulas Z1-Z36, en donde Z está opcionalmente sustituido con 1 o 2 grupos Rx, en donde cada Rx está unido a un átomo de carbono del anillo:
en donde:
cada caso de Rx independientemente es -F, -Cl, -CH3 , -CFH2, -CF2H, -CF3 , -OH, -OCH3, -OCF3 o -CN; y
Ra es alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-4 o -S(O)2-alquilo de C1.4.
En algunas formas de realización, Z es Z1, Z2, Z3, Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, Z9, Z10, Z11, Z12, Z13, Z14, Z15, Z16, Z17, Z18, Z19, Z20, Z21, Z22, Z23, Z24, Z25, Z26, Z27, Z28, Z29, Z30, Z31, Z32, Z33, Z34, Z35 o Z36.
En algunas formas de realización, Z es Z1, Z2, Z3, Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, Z9, Z10, Z11, Z12, Z13, Z14, Z15, Z16, Z17, Z18, Z19, o Z20.
En algunas formas de realización, Z es Z1, Z2, Z5, Z6, Z8, Z17 o Z19. En algunas formas de realización, Z es Z1 o Z2. En algunas formas de realización, Z es Z1. En algunas formas de realización, Z es Z2. En algunas formas de realización, Z es Z6 o Z8. En algunas formas de realización, Z es Z6. En algunas formas de realización, Z es Z8. En algunas formas de realización, Z es Z3, Z4, Z7, Z9, Z10, Z11, Z12, Z13, Z14 o Z18. En algunas formas de realización, Z es Z7 o Z9. En algunas formas de realización, Z es Z7. En algunas formas de realización, Z es Z9. En algunas formas de realización, Z es Z15, Z16 o Z20. En algunas formas de realización, Z es Z15 o Z16. En algunas formas de realización, Z es Z15. En algunas formas de realización, Z es Z16. En algunas formas de realización, Z es Z20.
En algunas formas de realización, Z es Z21, Z22, Z23, Z24, Z25, Z26, Z27, Z28, Z29, Z30, Z31, Z32, Z33, Z34, Z35 o Z36. En algunas formas de realización, Z es Z21, Z22, Z23 o Z24. En algunas formas de realización, Z es Z25, Z26, Z27, Z28, Z29, Z30, Z31, Z32, Z33, Z34, Z35 o Z36.
En algunas formas de realización, Z es Z23.
En algunas formas de realización, Z es Z21, Z22, Z24, Z29, Z30, Z35 o Z36. En algunas formas de realización, Z es Z21, Z22, Z24, Z35 o Z36. En algunas formas de realización, Z es Z21 o Z22. En algunas formas de realización, Z es Z21. En algunas formas de realización, Z es Z22. En algunas formas de realización, Z es Z29 o Z30.
En algunas formas de realización, Z es Z25, Z26, Z27, Z28, Z31, Z32, Z33 o Z34. En algunas formas de realización, Z es Z25 o Z26. En algunas formas de realización, Z es Z25. En algunas formas de realización, Z es Z26. En algunas formas de realización, Z es Z27, Z31o Z32. En algunas formas de realización, Z es Z28, Z33 o Z34.
En algunas formas de realización, Z es Z27, Z29, Z30, Z31 o Z32. En algunas formas de realización, Z es Z29 o Z30. En algunas formas de realización, Z es Z27, Z31o Z32.
En algunas formas de realización, Z es Z28, Z33 o Z34. En algunas formas de realización, Z es Z28.
En algunas formas de realización, cada caso de Rx es independientemente -F, -Cl, -CH3, -CF3 , o -CN. En algunas formas de realización, cada caso de Rx es independientemente -CH3 o -CF3.
En algunas formas de realización, Ra es -CH3.
En algunas formas de realización, una entidad química de fórmula (I) es una entidad química de fórmula (II):
en donde Z es como se ha descrito en formas de realización de fórmula (I), anteriormente, o como se describe en formas de realización en el presente documento, tanto individualmente como en combinación; y en donde R5, R6 y R7 son independientemente -H, -F, -Cl, alquilo de C1-C4 , ciclopropilo, -CeCH, -CFH2 , -CF2H, -CF3, -CF2CH3 , -CH2CF3 , alcoxi de C1-C4 , -OCFH2 , -OCF2H, -OCF3 , -CN, -N(R2)(R3), -NO2 , alquiltio de C1-C4, alquilsulfonilo de C1-C4 o -S(O)2CF3;
en donde cada caso de R2 y R3 es independientemente -H o alquilo de C1-C4, o
En algunas formas de realización, Z se selecciona de las fórmulas Z1-Z36, en donde: Rx y Ra son como se ha descrito en formas de realización de las fórmulas Z1-Z36 anteriormente o se describe en formas de realización en el presente documento, tanto individualmente como en combinación.
En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada es una entidad química de fórmula (II), en donde cada uno de R5, R6 y R7 es independientemente -H, -F, -Cl, -CH3 , -CFH2 , -CF2H, -CF3 , -CH2CH3, -CF2CH3, -CH2CF3, isopropilo, ferf-butilo, ciclopropilo, -OCF3, -OCF2H, -SCH3 , -SCH2CH3 , -S(O)2CH3 , -S(O)2CH2CH3, -S(O)2CF3 o -CeCH. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada es una entidad química de fórmula (II), en donde cada uno de R5, R6 y R7 es independientemente -H, -F, -Cl, -CH3 , -CFH2 , -CF2H, -CF3 , -CH2CH3, -CF2CH3, -CH2CF3, ciclopropilo, -OCF3, -OCF2H, -SCH3, -S(O)2CH3 o -CeCH.
En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada es una entidad química de fórmula (II), en donde:
R5 es -H, -F, -Cl, -CH3, -CFH2 , -CF2H, -CF3, -CH2CH3, -CF2CH3 , -CH2CF3, ciclopropilo, -OCF3 , -OCF2H, -SCH3 , -S(O)2CH3 o -CeCH;
R6 es -H o -F; y
R7 es -H, -F, -Cl o -CH3.
En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada es una entidad química de fórmula (II), en donde cada uno de R5, R6 y R7 es independientemente -H, -F, -Cl, -CH3 , -CFH2 , -CF2H, -CF3 , -CH2CH3, -CF2CH3, -CH2CF3, isopropilo, fert-butilo, ciclopropilo, -OCF3, -OCF2H, -SCH3 , -SCH2CH3 , -S(O)2CH3 , -S(O)2CH2CH3, -S(O)2CF3 o -CeCH;
y Z es Z1, Z2, Z6 , Z7, Z8 , Z9, Z21 o Z22. En algunas formas de realización, Z es Z1 o Z2. En algunas formas de realización, Z es Z1. En algunas formas de realización, Z es Z2.
En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada es una entidad química de fórmula (II), en donde cada uno de R5, R6 y R7 es independientemente -H, -F, -Cl, -CH3 , -CFH2 , -CF2H, -CF3 , -CH2CH3, -CF2CH3, -CH2CF3, ciclopropilo, -OCF3, -OCF2H, -SCH3, -S(O)2CH3 o -CeCH; y Z es Z1, Z2, Z6 , Z7, Z8 , Z9, Z21 o Z22. En algunas formas de realización, Z es Z1 o Z2. En algunas formas de realización, Z es Z1. En algunas formas de realización, Z es Z2.
En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada es una entidad química de fórmula (II), en donde:
R6 es -H o -F;
R7 es -H, -F, -Cl o -CH3 ; y
Z es Z1, Z2, Z6 , Z7, Z8 , Z9, Z21 o Z22. En algunas formas de realización, Z es Z1 o Z2. En algunas formas de realización, Z es Z1. En algunas formas de realización, Z es Z2.
La designación del estereocentro como R indica que el isómero R está presente en mayor cantidad que el isómero S correspondiente. Por ejemplo, el isómero R puede estar presente en un exceso enantiomérico del 50%, 60%, 70%, 80%, 8 5 %, 90%, 92%, 94%, 96% o 98% relativo al isómero S. De forma similar, en los intermedios sintéticos en los que puede estar indicado más de un estereocentro, el isómero R puede estar presente en un exceso diastereomérico del 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 92%, 94%, 96% o 98% relativo al isómero S.
La designación del estereocentro como S indica que el isómero S está presente en mayor cantidad que el isómero R correspondiente. Por ejemplo, el isómero S puede estar presente en un exceso enantiomérico del 50%, 60%, 70%, 80%, 8 5 %, 90%, 92%, 94%, 96% o 98% relativo al isómero R. De forma similar, en los intermedios sintéticos en los que puede estar indicado más de un estereocentro, el isómero S puede estar presente en un exceso diastereomérico del 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 92%, 94%, 96% o 98% relativo al isómero R.
La designación de la rotación óptica de una entidad química indica que el enantiómero indicado está presente en mayor cantidad que el enantiómero opuesto. Por ejemplo, el isómero (-) puede estar presente en un exceso enantiomérico del 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 92%, 94%, 96% o 98% relativo al isómero (+). De forma similar, el isómero (+) puede estar presente en un exceso enantiomérico del 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 92%, 94%,
96% o 98% relativo al isómero (-).
Las entidades químicas ejemplares de fórmula (I) se muestran en las tablas 1.C, 1.E1 y 1.E2, a continuación. Los compuestos que no son de fórmula (II) como se define en la reivindicación 1 se proporcionan como ejemplos de referencia.
Tabla 1.C
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Farmacología
El glutamato (GLU) es un neurotransmisor excitador fundamental en el cerebro y sistema nervioso central (SNC) de mamíferos. Los efectos de este neurotransmisor endógeno están mediados a través de la unión a y activación de GLU a receptores de glutamato (GLUR), que se clasifican en sentido amplio en acoplados a proteína G metabotrópicos (mGluR) y canales iónicos operados por ligando o GluR ionotrópicos. Los GLUR ionotrópicos se clasifican farmacológicamente en tres tipos principales basado en las acciones de agonistas de receptor selectivos: receptores NMDA (selectivos de N-metil D-aspartato), KA (selectivos de ácido kaínico) y AMPA (ácido a-amino-3-hidroxi-5-metil-4-isoxazolpropiónico) cuya estructura y función farmacológica se ha revisado recientemente en detalle (S. F. Traynelis et al. Pharmacology Reviews, 2010, 62, 405-496). Estudios de electrofisiología han demostrado que los NMDAR son canales iónicos de cationes que están sometidos a bloqueo de canal dependiente de voltaje por Mg2+ endógeno. La activación de los NMDAR por glutamato en presencia de glicina como un coagonista produce la apertura del canal iónico del receptor. Esto a su vez permite el flujo de Na+ y Ca2+ en la célula lo que genera potenciales postsinápticos excitadores (EPSP) y rutas de señalización de segundo mensajero activadas por Ca2+ en las neuronas. En virtud de su permeabilidad a Ca2+, la activación de los receptores de NMDA regula cambios a largo plazo en la comunicación neuronal tal como aprendizaje y memoria y plasticidad sináptica.
Desde la caracterización farmacológica original con ligandos selectivos, estudios de biología molecular y clonación han permitido han permitido la caracterización detallada de los NMDAR a nivel molecular (Paoletti et al., 2013, Nat. Rev. Neurosa. 14:383-400). Por tanto, los NMDAR son heterotetrámeros compuestos de dos subunidades NR1 y dos subunidades NR2. Las subunidades NR1 contienen el sitio de unión para el coagonista glicina mientras que las subunidades NR2 contienen el sitio de unión para glutamato. La existencia de múltiples variantes de ayuste para NR1 y cuatro isoformas de NR2 (NR2A, NR2B, NR2C y NR2D) de genes diferentes produce un conjunto molecular diverso y de NMDAR. Las propiedades farmacológicas y electrofisiológicas de los NMDAR varían dependiendo de la isoforma NR1 particular y la composición de subtipo de NR2. Además, las isoformas del subtipo NR2 se expresan diferencialmente a través de tipos celulares y regiones cerebrales. Por tanto, los compuestos que interaccionan selectivamente con subunidades de NR2 pueden ejercer efectos farmacológicos específicos en regiones cerebrales particulares y tienen potencial para tratar enfermedades del SNC con un alto grado de especificidad y selectividad (por ejemplo, efectos secundarios). Por ejemplo, la baja expresión del subtipo NR2B en el cerebelo relativo a otras estructuras cerebrales (Cull-Candy et al., 1998, Neuropharmacol. 37:1369-1380) indicaba menores efectos secundarios motores para este subtipo.
El antagonismo de receptor de NMDA se ha investigado extensamente por su potencial para tratar una variedad de enfermedades del SNC incluyendo ictus, epilepsia, dolor, depresión, enfermedad de Parkinson y enfermedad de Alzheimer (Paoletti et al., Nat. Rev. Neurosci 14:383-400; Sancora, 2008, Nature Rev. Drug Disc., 7, 426-437). El receptor de NMDA ofrece un número de puntos de entrada farmacológicos para desarrollar inhibidores del receptor. Los bloqueantes directos del poro del canal iónico del NMDAR representan una familia de compuestos antagonistas para los que se pudo demostrar eficacia en diversos modelos de enfermedades del SNC in vitro e in vivo incluyendo epilepsia, dolor y neurodegeneración/ictus. Sin embargo, los compuestos de esta clase, como se ejemplifica por fenciclidina (PCP), MK-801 y ketamina, en general se categorizan como no selectivos a través de la diversidad de subtipos de receptores de NMDA.
En seres humanos, los antagonistas de NMDAR no selectivos, de alta afinidad en general se han asociado con efectos secundarios clínicos serios incluyendo alucinaciones, disforia y falta de coordinación. No obstante, la ketamina, un fármaco intravenoso originalmente aprobado para uso en anestesia (Haas et. al, 1992, Anesthesia Prog., 39, 61-68) ha demostrado más recientemente eficacia clínica como una terapia antidepresiva (Katalinic et al. 2013, Aust. N. Z. J. Psychiatry, 47, 710-727). La acción antidepresiva de terapia aguda de ketamina tiene un inicio esencialmente inmediato comparado con aproximadamente seis semanas requeridas para terapia de fármaco inhibidor de la recaptación de serotonina estándar (SSRI). Por tanto, la administración intravenosa del fármaco ha mostrado inicio rápido y eficacia prolongada que se puede mantener con administraciones intermitentes continuadas (Zarate et al., 2006, Arch. Gen. Psychiatry63, 856-864). Por último, se ha mostrado que la ketamina es eficaz en casos de depresión resistente a terapias de fármacos estándar (Murrough et al., 2013, American J. Psychiatry, 170, 1134-1142) incluyendo depresión bipolar (Zarate et al. 2012, Biol. Psychiatry, 71, 939-946). Sin embargo, como un fármaco intravenoso con efectos secundarios serios (Gianni et. al 1985, Psychiatric Medicine, 3, 197-217; Curran et al 2000, Addiction, 95, 575 590) y potencial toxicidad crónica (Hardy et al., 2012, J. Clin. Oncol. 30:3611-3617; Noppers et al., 2011, Pain 152:2173-2178) la terapia de ketamina es de utilidad limitada y restringida a administración aguda o intermitente. Para tener un ámbito más amplio de aplicación y utilidad como terapia para depresión y otras enfermedades del SNC, son necesarios antagonistas de NMDA selectivos activos por vía oral con efectos secundarios reducidos que se puedan administrar crónicamente.
Se determinó que ifenprodil, un fármaco antagonista a-i-adrenérgico vasodilatador, tenía un mecanismo de acción modulador alostérico novedoso en el subtipo de receptor de NMDA NR2B (Reynolds et al. 1989, Mol. Pharmacol., 36, 758-765). Este nuevo mecanismo tenía promesa para una nueva clase de fármacos antagonistas de NMDA que tienen eficacia terapéutica sin los efectos secundarios limitantes de los bloqueantes de canales iónicos no selectivos de subtipo. Después de su descubrimiento, los análogos de ifenprodil antagonistas selectivos de NR2B (Borza et al., 2006, Current Topics in Medicinal Chemistry, 6, 687-695; Layton et al. Current Topics in Medicinal Chemistry, 6, 697-709) optimizados frente a la actividad a-i-adrenérgica indeseable incluían Ro-25,6981 (Fischer et al.
1997, J. Pharmacol. Exp. Ther., 283, 1285-1292) y CP-101,606 conocido de otra manera como traxoprodil (Chenard et al. 1995, Journal of Medicinal Chemistry, 38, 3138-3145; Menniti et al. 1998, CNS Drug Reviews., 4, 307-322). En un estudio clínico, CP-101.606 evidenció actividad antidepresiva en seres humanos después de administración intravenosa con un perfil de efecto secundario disociativo favorable relatico a los antagonistas de NMDA no selectivos (Preskorn et al. 2008, Journal of Clinical Psychopharmacology, 28, 631-637). Sin embargo, CP-101,606 tiene propiedades farmacocinéticas subóptimas y requiere administración intravenosa limitante. Para CP-101,606 se requirió un protocolo de infusión intravenosa lenta para resultados óptimos en el estudio clínico antidepresivo anteriormente mencionado (Preskorn et al. 2008, Journal of Clinical Psychopharmacology, 28, 631-637).
ifenprodil Ro-25,6981 CP-101,606
Otros antagonistas de NR2B que se han descrito como se revisa por B. Kuppa y col. (K.B. Ruppa et al., Annual Reports in Medicinal Chemistry 2012, 47:89-103) incluyen MK0657 (J.A. McCauley et al., 3er Anglo-Swedish Medicinal Chemistry Symposium, Áre, Suecia, Mar. 11-14, 2007; L. Mony et al., British J. of Pharmacology 2009, 157:1301-1317; véase también la publicación de la solicitud internacional No. WO 2004/108705; la patente en EE UU No. 7.592.360) y compuestos de fórmula LX (publicación de la solicitud internacional No. WO 2006/113471), a continuación, incluyendo el análogo específico LX-1 representado a continuación.
Las dificultades presentadas por los antagonistas de NR2B que tienen fracciones amino básicas con respecto a superar las obligaciones de seguridad de hERG y CYP2D6 al tiempo que mantienen potencia de NR2B in vitro e in vivo están bien establecidas como indican Kawai et al. (M. Kawai et al., Bioorganic and Medicinal Chem. Lett. 2007, v17:5533-5536) y Brown et al. (Brown et al., Bioorganic and Medicinal Chem. Lett. 2011, v21:3399-3403). La inhibición por compuestos de los canales de hERG y prolongación QT asociada en la electrocardiografía (ECG) representa un riesgo de seguridad cardiovascular humana bien reconocido (Hancox et al., Molecular Pharmacology 2008, 73:1592-1595). La prolongación QT puede producir arritmia cardiaca de torsades de pointes (TdP) que puede degenerar en taquicardia ventriculary muerte repentina.
La inhibición por compuestos de las enzimas citocromo P-450 metabólicas humanas incluyendo CYP2D6 representa un riesgo con respecto a la seguridad de fármacos humana debido a interacciones fármaco-fármaco (Drug Metabolism Handbook: Concepts and Applications, ed. Ala F. Nassar copyright 2009 Wiley & Sons, Hoboken, NJ). Por tanto, la depuración de fármacos que son sustratos de CYP2D6 se puede reducir por compuestos que inhiben CYP2D6. El resultado puede ser sobrecarga tóxica o de efecto secundario debido a la acumulación de sustratos fármacos de CYP2D6 determinados. Por tanto, la inhibición de CYP2D6 es muy indeseable para un fármaco antagonista de NR2B especialmente dada la aplicación común de comedicaciones o polifarmacia en indicaciones del SNC incluyendo depresión. Los ejemplos de sustratos de CYP2D6 incluyen antidepresivos de la clase SSRI tal como fluoxetina, paroxetina, y fluvoxamina, duloxetina, un antidepresivo de la clase SSNI, numerosos antipsicóticos incluyendo haloperidol, risperidona y aripiperazol, numerosos antihipertensivos beta-bloqueantes incluyendo metaprolol, propranolol, timolol y alprenolol y el fármaco inhibidor anticolinesterasa de la enfermedad de Alzheimer donepezil (Flockhart DA (2007). “Drug Interactions: Cytochrome P450 Drug Interaction Table”, Indiana University School of Medicine, acceso en << http://medicine.iupui.edu/clinpharm/ddis/>> el 28 de mayo, 2014).
MK0657 y análogos muy relacionados (Liverton et al., J. Med. Chem. 2007, v50:807-819) representan una generación mejorada de antagonistas de NR2B con respecto a biodisponibilidad oral humana. Sin embargo, los efectos secundarios cardiovasculares de elevación de la presión sanguínea sistólica, así como diastólica, relacionados con fármaco para MK0657 después de dosificación oral se han descrito en un estudio de ensayo de eficacia clínica en pacientes con enfermedad de Parkinson (Addy et al., J. Clin. Pharm. 2009, v49:856-864). Se describió que también se habían observado efectos sobre la presión sanguínea similares después de dosis únicas de MK0657 en estudios de seguridad con sujetos sanos. (Peterson et al., “A randomized, double-blind, placebo-controlled, parallel-group, three-part safety, pharmacokinetic, and pharmacodynamic study of CERC-301 in healthy subjects”, National Network of Depression Centers Annual Conference, Ann Arbor, 5-6 Nov, 2015). De forma interesante, MK0657 y su enantiómero (el compuesto 3R,4S) muestran potencia similar contra NR2B (MK0657 = 13,8 nM; enantiómero 3R,4S = 25,5 nM). Incluso más notable es que la potencia de los diastereómeros cis y trans muestran potencia similar contra NR2B (véase, Koudih et al., European J. Med. Chem. 53 (2012), 408-415).
El compuesto LX-1 demuestra biodisponibilidad oral en animales y carece de un grupo fenólico que puede comprometer la biodisponibilidad oral en seres humanos. Sin embargo, no inconsistente con otros antagonistas de NR2B que tienen fracciones amino básicas, el compuesto LX-1, que tiene un átomo de nitrógeno de piperidina básico, a pesar de la fracción difluoro vecinal atenuante de basicidad beta respecto a este nitrógeno muestra inhibición de canal hERG humano con una CI50 < 10 j M (~4,5 j M), y muestra actividad de inhibición de la enzima metabólica CYP2D6 humana (CI50 ~1,0 j M).
Para ámbito amplio de aplicación y uso humano seguro, se necesitan antagonistas selectivos de NR2B mejorados, como también se indica en K.B. Ruppa et al., Annual Reports in Medicinal Chemistry 2012, 47:89-103. Hay una
necesidad para compuestos antagonistas de NR2B que estén mejorados en uno o más aspectos ejemplificados por farmacocinética, adsorción, metabolismo, excreción (ADME, por ejemplo, actividad oral), eficacia mejorada, actividad inespecífica, índice de seguridad mejorado relativo y compatibilidad con terapia oral crónica. Por ejemplo, se han descrito efectos secundarios cardiovasculares de elevación de la presión sanguínea sistólica, así como diastólica, relacionados con fármaco para MK0657 después de dosificación oral en un estudio de ensayo de eficacia clínica en pacientes con enfermedad de Parkinson (Addy et al., J. Clin. Pharm. 2009, v49:856-864). Se describió que también se habían observado efectos sobre la presión sanguínea similares después de dosis únicas de MK0657 en estudios de seguridad con sujetos sanos de edad avanzada.
Las entidades químicas proporcionadas son antagonistas del receptor NR2B y tienen ventajas técnicas con respecto a una o más propiedades de fármaco farmacéuticas, tal como biodisponibilidad oral, parámetros farmacocinéticos, propiedades ADME (por ejemplo, inhibición de CYP, formación de metabolitos), seguridad farmacológica in vivo y/o in vitro.
En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene selectividad de receptor de NMDA funcional NR2B frente a NR2A (“selectividad NR2B”, determinada como la proporción CI50 de NR2 A/CI50 de NR2B, en la que los valores CI50 se miden según el procedimiento del ejemplo 2.1) > 400. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene selectividad NR2B > 300. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene selectividad NR2B > 200. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene selectividad NR2B > 100. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene selectividad NR2B > 50. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene selectividad NR2B > 20.
En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene actividad hERG (determinada como CI50 de hERG medida según el procedimiento del ejemplo 2.2) > 5 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de hERG > 10 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de hERG > 15 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de hERG > 20 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de hERG > 25 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de hERG > 30 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de hERG > 40 pM.
En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene actividad antagonista funcional de NR2B (determinada como CI50 de NR2B medida según el procedimiento del ejemplo 2.1) < 200 nM y actividad hERG determinada como CI50 de hERG medida según el procedimiento del ejemplo 2.2) > 5 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de NR2B < 200 nM y CI50 de hERG > 10 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de NR2B < 200 nM y CI50 de hERG > 15 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de NR2B < 200 nM y CI50 de hERG > 20 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de NR2B < 200 nM y CI50 de hERG > 25 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de NR2B < 200 nM y CI 50 de hERG > 30 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de NR2B < 200 nM y CI50 de hERG > 40 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de NR2B < 100 nM y CI50 de hERG > 5 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI 50 de NR2B < 100 nM y CI50 de hERG > 10 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de NR2B < 50 nM y CI50 de hERG > 5 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de Nr 2b < 50 nM y CI50 de hERG > 10 pM.
En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene actividad antagonista funcional de NR2B (determinada como CI50 de NR2B medida según el procedimiento del ejemplo 2.1) < 200 nM e inhibición de CYP2D6 (medida como CI50 de CYP2D6 determinada según el procedimiento del ejemplo 2.3) > 2 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de NR2B < 200 nM y CI50 de CYP2D6 > 3 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de NR2B < 200 nM y CI50 de CYP2D6 > 4 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de NR2B < 200 nM y CI50 de CYP2D6 > 5 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de NR2B < 200 nM y CI50 de CYP2D6 de aproximadamente 5-10 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI 50 de NR2B < 200 nM y CI50 de CYP2D6 > 10 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de NR2B < 100 nM y CI50 de CYP2D6 > 2 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de NR2B < 100 nM y CI50 de CYP2D6 > 3 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de NR2B < 100 nM y CI50 de CYP2D6 > 4 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de NR2B < 100 nM y CI50 de CYP2D6 > 5 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de NR2B < 100 nM y CI50 de CYP2D6 de aproximadamente 5-10 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de NR2B < 100 nM y CI50 de CYP2D6 > 10 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de NR2B < 50 nM y CI50 de CYP2D6 > 2 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de NR2B < 50 nM y CI50 de CYP2D6 > 3 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de NR2B < 50 nM y CI50 de CYP2D6 > 4 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de NR2B < 50 nM y CI50 de CYP2D6 > 5 pM. En algunas formas de realización, una
entidad química proporcionada tiene CI50 de NR2B < 50 nM y CI50 de CYP2D6 de aproximadamente 5-10 pM. En algunas formas de realización, una entidad química proporcionada tiene CI50 de NR2B < 50 nM y CI50 de CYP2D6 > 10 pM.
Usos, formulación y administración, y composiciones farmacéuticamente aceptables
En algunas formas de realización, la invención proporciona una composición que comprende una entidad química de la invención (o por referencia un derivado farmacéuticamente aceptable de la mismas) y un soporte, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable. La cantidad de entidad química en composiciones de esta invención es tal que es eficaz para inhibir sensiblemente NR2B, en una muestra biológica o en un paciente. En algunas formas de realización, la cantidad de entidad química en la composición de esta invención es tal que es eficaz para inhibir sensiblemente NR2B, en una muestra biológica o en un paciente. En algunas formas de realización, una composición de esta invención se formula para administración a un paciente en necesidad de tal composición. En algunas formas de realización, una composición de esta invención se formula para la administración oral a un paciente.
El término “paciente” como se usa en el presente documento, significa un animal, preferiblemente un mamífero, y lo más preferiblemente un ser humano.
El término “soporte, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable” se refiere a un soporte, adyuvante o vehículo no tóxico que no destruye la actividad farmacológica de la entidad química con la que está formulada. Los soportes, adyuvantes o vehículos farmacéuticamente aceptables que se pueden usar en las composiciones de esta invención incluyen intercambiadores de iones, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, proteínas de suero, tal como seroalbúmina humana, sustancias tampón tal como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potasio, mezclas de glicéridos parciales de ácidos grasos saturados vegetales, agua, sales o electrolitos, tal como sulfato de protamina, hidrogenofosfato disódico, hidrogenofosfato de potasio, cloruro de sodio, sales de cinc, sílice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, sustancias basadas en celulosa, polietilenglicol, carboximetilcelulosa de sodio, poliacrilatos, ceras, copolímeros en bloque de polietileno-polioxipropileno, polietilenglicol y lanolina.
Un “derivado farmacéuticamente aceptable” significa cualquier éster, sal de un éster u otro derivado no tóxico de una entidad química de esta invención (por ejemplo, un profármaco) que, tras la administración a un receptor, es capaz de proporcionar, sea directa o indirectamente, una entidad química de esta invención o un metabolito o residuo activo inhibidor del mismo.
Como se usa en el presente documento, el término “metabolito o residuo activo inhibidor del mismo” significa que un metabolito o residuo del mismo también es un inhibidor de NR2B.
Las composiciones de la presente invención se pueden administrar por vía oral, parenteral, por espray de inhalación, por vía tópica, rectal, nasal, yugal, vaginal o a través de un deposito implantado. El término “parenteral” como se usa en el presente documento incluye técnicas de inyección o infusión subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraarticular, intrasinovial, intraesternal, intratecal, intrahepática, intralesional e intracraneal. Preferiblemente, las composiciones se administran por vía oral, intraperitoneal o intravenosa. Las formas inyectables estériles de las composiciones de esta invención pueden ser una suspensión acuosa u oleaginosa. Estas suspensiones se pueden formular según métodos conocidos en la técnica usando agentes dispersantes o humectantes adecuados y agentes de suspensión. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o solvente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, una solución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y solventes aceptables que se pueden emplear están agua, solución de Ringer y solución isotónica de cloruro de sodio. Además, aceites no volátiles estériles se emplean convencionalmente como un solvente o medio de suspensión.
Para este fin, cualquier aceite no volátil suave se puede emplear incluyendo mono o diglicéridos sintéticos. Los ácidos grasos, tal como ácido oleico y sus derivados glicéridos son útiles en la preparación de inyectables, como lo son los aceites naturales farmacéuticamente aceptables, tal como aceite de oliva o aceite de ricino, especialmente en sus versiones polioxietiladas. Estas soluciones o suspensiones de aceite también pueden contener un diluyente o dispersante de alcohol de cadena larga, tal como carboximetilcelulosa o agentes dispersantes similares que se usan comúnmente en la formulación de formas posológicas farmacéuticamente aceptables incluyendo emulsiones y suspensiones. Otros tensioactivos comúnmente usados, tal como Tweens, Spans y otros agentes emulsionantes o potenciadores de biodisponibilidad que se usan comúnmente en la fabricación de formas farmacéuticas sólidas, líquidas u otras farmacéuticamente aceptables también se pueden usar para los fines de formulación.
Las composiciones farmacéuticamente aceptables de esta invención se pueden administrar por vía oral en cualquier forma farmacéutica oralmente aceptable incluyendo, cápsulas, comprimidos, suspensiones o soluciones acuosas. En el caso de comprimidos para uso oral, los soportes comúnmente empleados incluyen lactosa y almidón de maíz. También se añaden típicamente agentes lubricantes, tal como estearato de magnesio. Para la administración oral en una forma de cápsula, los diluyentes típicos incluyen lactosa y almidón de maíz seco. Cuando se requieren
suspensiones acuosas para uso oral, el principio activo se combina con agentes emulsionantes y de suspensión. Si se desea, también se pueden añadir ciertos edulcorantes, saborizantes o agentes colorantes.
Alternativamente, las composiciones farmacéuticamente aceptables de esta invención se pueden administrar en forma de supositorios para administración rectal. Estos se pueden preparar mezclando el agente con un excipiente no irritante adecuado que es sólido a temperatura ambiente, pero líquido a la temperatura rectal y por tanto se fundirá en el recto para liberar el fármaco. Tales materiales incluyen manteca de cacao, cera de abeja y polietilenglicoles.
Las composiciones farmacéuticamente aceptables de esta invención también se pueden administrar por vía tópica, especialmente cuando la diana de tratamiento incluye áreas u órganos fácilmente accesibles por aplicación tópica, incluyendo enfermedades del ojo, la piel o el tracto intestinal inferior. Las formulaciones tópicas adecuadas se preparan fácilmente para cada una de estas áreas u órganos.
La aplicación tópica para el tracto intestinal inferior se puede efectuar en una formulación de supositorio rectal (véase anteriormente) o en una formulación de enema adecuada. También se pueden usar parches transdérmicos de vía tópica.
Para aplicaciones tópicas, las composiciones farmacéuticas aceptables proporcionadas se pueden formular en una pomada adecuada que contiene el componente activo suspendido o disuelto en uno o más soportes. Los soportes para la administración tópica de compuestos de esta invención incluyen aceite de vaselina, vaselina líquida, vaselina filante, propilenglicol, polioxietileno, compuesto de polioxipropileno, cera emulsionante y agua. Alternativamente, las composiciones farmacéuticas aceptables proporcionadas se pueden formular en una loción o crema adecuada que contiene los componentes activos suspendidos o disueltos en uno o más soportes farmacéuticamente aceptables. Los soportes aceptables incluyen aceite de vaselina, monoestearato sorbitano, polisorbato 60, cera de ésteres de cetilo, alcohol cetearílico, 2-octildodecanol, alcohol bencílico y agua.
Para uso oftálmico, las composiciones farmacéuticas aceptables proporcionadas se pueden formular como una suspensión micronizada en solución salina estéril, de pH ajustado, isotónica, o, preferiblemente, como soluciones en solución salina estéril, de pH ajustado, isotónica con o sin un conservante tal como cloruro de benzalconio. Alternativamente, para usos oftálmicos, las composiciones farmacéuticas aceptables proporcionadas se pueden formular en una pomada tal como vaselina.
Las composiciones farmacéuticamente aceptables de esta invención también se pueden administrar por aerosol o inhalación nasal. Tales composiciones se preparan según métodos bien conocidos en la técnica de la formulación farmacéutica y se pueden preparar como soluciones en solución salina, empleando alcohol bencílico u otros conservantes adecuados, potenciadores de absorción para aumentar la biodisponibilidad, fluorocarbonos, y/u otros agentes solubilizantes o dispersantes convencionales.
Lo más preferiblemente, las composiciones farmacéuticamente aceptables de esta invención se formulan para administración oral. Tales formulaciones se pueden administrar con o sin alimento. En algunas formas de realización, las composiciones farmacéuticamente aceptables de esta invención se administran sin alimento. En algunas formas de realización, las composiciones farmacéuticamente aceptables de esta invención se administran con alimento.
La cantidad de compuestos de la presente invención que se puede combinar con los materiales soporte para producir una composición en una forma farmacéutica unitaria variará dependiendo de una variedad de factores, incluyendo el huésped tratado y el modo de administración particular. Preferiblemente, las composiciones proporcionadas se deben formular de modo que una dosis de entre 0,01-100 mg/kg de peso corporal/día del inhibidor se pueda administrar a un paciente que recibe estas composiciones.
También se debe entender que una dosis específica y pauta de tratamiento para cualquier paciente particular dependerá de una variedad de factores, incluyendo la actividad del compuesto específico empleado, la edad, peso corporal, salud general, sexo, dieta, tiempo de administración, velocidad de excreción, combinación de fármacos, y el juicio del médico y la gravedad de la enfermedad particular que se trata. La cantidad de un compuesto de la presente invención en la composición también dependerá del compuesto particular en la composición.
Usos de entidades químicas y composiciones farmacéuticamente aceptables
Las aplicaciones terapéuticas humanas de los antagonistas del receptor NR2B se han resumido en revisiones por Traynelis et al. (S.F. Traynelis et al., Pharmacology Reviews, 2010, 62:405-496), Beinat et al. (C. Beinat et al., Current Medicinal Chemistry, 2010, 17:4166-4190) y Mony et al. (L. Mony et al., British J. of Pharmacology, 2009, 157:1301-1317). El antagonismo de NR2B puede ser útil en el tratamiento de enfermedades y trastornos incluyendo depresión, dolor, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, enfermedad de Alzheimer, isquemia cerebral, lesión cerebral traumática, trastornos convulsivos (por ejemplo, epilepsia) y migraña. (S. B. Bausch et al., Epilepsia, 2010, 51:102-105; P. Mares, Naunyn-Schmiedeberg's Arch Pharmacol, 2014, 387:753-761; E. Szczurowska et al., Brain Research Bulletin, 2015, 111:1-8).
La actividad de una entidad química utilizada en esta invención como un antagonista de NR2B o un tratamiento para una enfermedad o trastorno del sistema nervioso central (SNC) se puede ensayar in vitro o in vivo. Una evaluación in vivo de la eficacia de los compuestos de la invención se puede hacer usando un modelo animal de una enfermedad o trastorno del SNC, por ejemplo, un modelo de roedor o primate. Se pueden realizar ensayos celulares usando, por ejemplo, una línea celular aislada de un tejido que expresa NR2B, o una línea celular que expresa NR2B de forma recombinante. Además, se pueden realizar ensayos bioquímicos o basados en mecanismo, por ejemplo, medir los niveles de AMPc o GMPc, transferencia Northern, RT-PCR, etc. Los ensayos in vitro incluyen ensayos que determinan la morfología celular, expresión de proteínas, y/o la citotoxicidad, actividad inhibidora de enzimas y/o las consecuencias funcionales posteriores del tratamiento de células con las entidades químicas de la invención. Ensayos in vitro alternativos cuantifican la capacidad del inhibidor para unirse a moléculas de proteína o ácido nucleico en la célula. La unión del inhibidor se puede medir por radiomarcaje del inhibidor antes de la unión, aislar el complejo inhibidor/molécula diana y determinar la cantidad de radiomarcador unido. Alternativamente, la unión del inhibidor se puede determinar al correr un experimento de competición donde nuevos inhibidores se incuban con proteínas o ácidos nucleicos purificados unidos a radioligandos conocidos. Las condiciones detalladas para ensayar un compuesto utilizado en esta invención como un antagonista de NR2B se muestran en los ejemplos posteriormente. Los ensayos anteriormente mencionados son ejemplares y no se pretende que limiten el ámbito de la invención. Un experto en la materia puede apreciar que se pueden hacer modificaciones a ensayos convencionales para desarrollar ensayos equivalentes para obtener el mismo resultado.
Los expertos en la materia aprecian que la identificación y/o caracterización de compuestos deseables o efectivos comúnmente implica la evaluación de una o más actividades en un modelo animal. Los expertos en la materia aprecian además que tales modelos animales no siempre recapitulan de forma precisa la experiencia humana. (Bezard et al. Neuroscience 211:1, 2012). Entre otras cosas, los modelos animales con frecuencia se desarrollan para mimetizar uno o más síntomas de una afección humana particular, pero no es siempre posible asegurar que, o posiblemente incluso determinar si, los síntomas observados en el animal resultan de o son atribuibles al mismo mecanismo que el que produce el/los síntoma(s) en seres humanos. Además, no es extraño que múltiples modelos animales se desarrollen para la misma enfermedad, trastorno o afección, cada uno de los cuales puede reflejar o mimetizar una o más características de la enfermedad, trastorno o afección; los expertos en la materia aprecian que los resultados no son siempre precisamente consistentes a través de tales modelos, y que se puede requerir que el juicio y/o la interpretación extraigan conclusiones razonablemente predictivas de respuestas humanas. Aún más, particularmente para modelos animales de afecciones neurológicas como se describen en el presente documento, diferentes medidas o respuestas observadas en el modelo pueden ser más fiables que otras en modelar o predecir la respuesta humana.
Para dar unos pocos ejemplos, se sabe en la técnica que los modelos animales disponibles para depresión tienen grados variables de imagen, construcción y validez predictiva para depresión y contribuyen diferentemente a nuestro entendimiento de los procesos antidepresivos. (Duman C. H. Vitamins & Hormones 82:1-21,2010).
Los modelos comúnmente empleados relevantes para trabajar descritos en el presente documento incluyen, por ejemplo, la prueba de la natación forzada de roedores, que con frecuencia se usa para la evaluación de eficacia de antidepresivos. (Can et al. J. Vis. Exp. 2012, 59:3638; Bogdanova et al. Physiol. Behav. 118:227, 2013). Hay disponibles diferentes protocolos para la realización de pruebas de natación forzada. (Slattery & Cryan Nature Protocols 7:1009, 2012; Lucki et el., 2001, Psychopharmacology 155:315-322).
El modelo de catalepsia inducido por haloperidol (HIC) se ha usado para caracterizar agentes terapéuticos para tratar ciertas afecciones y/o síntomas neurológicos. Por ejemplo, el modelo HIC se ha recomendado particularmente para uso en caracterizar agentes terapéuticos para su potencial utilidad en protección contra catalepsia asociada con EP (Steece-Collier et al. Exp. Neurol. 163: 239, 2000). Además, el modelo HIC se ha usado para caracterizar antidepresivos, y se ha descrito que es capaz de revelar actividades diferentes entre antidepresivos que pueden haber respondido comparablemente en uno o más otros ensayos tal como, por ejemplo, en pruebas de natación forzada. (Khisti et al. Indian J. Exp. Biol. 35:1297, 1997).
Se ha descrito que varios modelos diferentes proporcionan información relevante respecto al tratamiento de epilepsia, aunque la diversidad de los síndromes de epilepsia y sus causas puede excluir el uso de cualquier modelo individual o prueba como definitivo de eficacia. La mayoría de los modelos animales usados en investigación de epilepsia son modelos de ataques epilépticos más que modelos de epilepsia. La epilepsia se caracteriza por ataques recurrentes espontáneos, por tanto, una prueba tal como la prueba de convulsiones de 6 Hz descrita en el presente documento, en la que una convulsión aguda se induce eléctricamente en un animal normal no epiléptico, puede no representar por completo un modelo de epilepsia. (Loscher Seizure 2011, 20:359-368). Por el contrario, la prueba de convulsión de 6 Hz se considera que es un cribado potencial para epilepsia resistente a terapia. El ensayo de la prueba de convulsión de 6 Hz descrito en el presente documento usa una corriente de 44 mA que típicamente produce que la mayoría de los fármacos antiepilépticos pierdan su efecto. Según esto, se ha sugerido que la prueba de la convulsión de 6 Hz es un modelo útil de convulsiones límbicas resistentes a terapia. (Barton et al. Epilepsy Res. 47(3):217-27, 2001).
La prueba de PTZ, descrita en el presente documento, se piensa que es predictiva de actividad de fármaco anticonvulsivo contra crisis epilépticas no convulsivas (ausencia o mioclónica). Como se describe en una revisión por Loscher, varios fármacos antiepilépticos que protegen contra crisis no convulsivas en pacientes de epilepsia fallaron en la prueba de PTZ. (Loscher W. Seizure 20:359-368, 2011). Por tanto, los datos no concluyentes o negativos resultantes de la prueba de PTZ no significan necesariamente que la terapia ensayada (por ejemplo, compuesto) será ineficaz en pacientes de epilepsia. Además, tales compuestos podrían ser eficaces en un modelo animal diferente de epilepsia. Por ejemplo, un fármaco antiepiléptico puede fallar en la prueba de las convulsiones de 6 Hz (convulsiones eléctricamente inducidas), pero demostrarse eficaz en la prueba de PTZ (convulsiones químicamente inducidas).
Los expertos en la materia apreciarán que cualquier efecto observado en una prueba de modelo animal específico puede ser significativo. Además, los expertos en la materia apreciarán que el uso de múltiples y varios modelos animales de enfermedades puede ser beneficioso para caracterizar la eficacia de un agente o tratamiento particular. Además, los expertos en la materia apreciarán que no se requiere que cada evaluación de un agente particular en un modelo animal proporcione evidencia fuerte de actividad; en algunas circunstancias, la evidencia positiva de actividad en un contexto puede ser más significativa que la ausencia de evidencia de actividad en otro, en particular ya que se entiende que la optimización de las condiciones de reacción puede revelar actividad no observada en estudios iniciales.
Como se usan en el presente documento, los términos “tratamiento”, “trata” y “tratar” se refieren a revertir, aliviar, retrasar el inicio de, o inhibir la evolución de un enfermedad o trastorno, o uno o más síntomas del mismo, como se describe en el presente documento. En algunas formas de realización, el tratamiento se puede administrar después de que uno o más síntomas se hayan desarrollado. En otras formas de realización, el tratamiento se puede administrar en ausencia de síntomas. Por ejemplo, el tratamiento se puede administrar a un individuo susceptible antes del inicio de los síntomas (por ejemplo, a la luz de antecedentes de síntomas y/o a la luz de factores de susceptibilidad genéticos u otros). El tratamiento también puede seguir después de que los síntomas se hayan resuelto, por ejemplo, para prevenir o retrasar su recaída.
Las entidades químicas y composiciones, según los usos de la presente invención, se pueden administrar usando cualquier cantidad y cualquier ruta de administración eficaz para tratar o reducir la gravedad de una enfermedad o trastorno del SNC.
En algunas formas de realización, las entidades químicas y composiciones, según los usos de la presente invención, se pueden administrar usando cualquier cantidad y cualquier ruta de administración eficaz para tratar o reducir la gravedad de una enfermedad o trastorno asociado con NR2B.
En algunas formas de realización, las entidades químicas y composiciones, según los usos de la presente invención, se pueden administrar usando cualquier cantidad y cualquier ruta de administración eficaz para tratar o reducir la gravedad de una enfermedad o trastorno de SNC.
En algunas formas de realización, la enfermedad o trastorno es depresión con o sin trastorno de ansiedad concomitante, por ejemplo, trastorno depresivo de episodio único y recurrente, trastorno distímico, trastorno depresivo mayor, depresión psicótica, trastorno disfórico premenstrual, depresión postparto, trastorno depresivo estacional (SAD), trastorno del estado de ánimo, depresión resistente a tratamiento (TRD, es decir, trastorno depresivo mayor que no ha respondido a otras terapias de fármacos), depresión causada por una afección médica crónica tal como cáncer o dolor crónico, quimioterapia, estrés crónico, y trastornos de estrés postraumático.
En algunas formas de realización, la enfermedad o trastorno es un trastorno afectivo agudo, por ejemplo, seleccionado de trastornos bipolares incluyendo trastornos maniáticos bipolar I y bipolar II.
En algunas formas de realización, la presente invención proporciona un compuesto o composición para uso en tratar trastornos de drogodependencia, en donde el tratamiento produce tolerancia y/o dependencia disminuida a tratamiento opioide del dolor, y/o al tratar síndrome de abstinencia de, por ejemplo, alcohol, opioides, heroína, y cocaína. Como se usa en el presente documento, el término “trastornos de drogodependencia” incluye dependencia o abuso con o sin dependencia psicológica. Las sustancias asociadas con estos trastornos incluyen: alcohol, anfetaminas (o sustancias de tipo anfetaminas), cafeína, cannabis, cocaína, alucinógenos, inhalantes, marijuana, nicotina, opioides, fenciclidina (o compuestos similares a fenciclidina), hipnóticos sedativos o benzodiacepinas, y otras (o desconocidas) sustancias y combinaciones de todas las anteriores.
En algunas formas de realización, un trastorno de drogodependencia incluye trastornos de abstinencia de drogas tal como abstinencia de alcohol con o sin alteraciones perceptuales; delirio de abstinencia de alcohol; abstinencia de anfetaminas; abstinencia de cocaína; abstinencia de nicotina; abstinencia de opioides; abstinencia sedativa, hipnótica o ansiolítica con o sin alteraciones perceptuales; delirio de abstinencia sedativa, hipnótica o ansiolítica; y síntomas de abstinencia debidos o otras sustancias. Se apreciará que la referencia a tratamiento de abstinencia de nicotina incluye el tratamiento de síntomas asociados con dejar de fumar. Otros trastornos de drogodependencia incluyen trastorno de
ansiedad inducido por sustancia con inicio durante la abstinencia; trastorno del estado de ánimo inducido por sustancia con inicio durante la abstinencia; y trastorno del sueño inducido por sustancia con inicio durante la abstinencia.
En algunas formas de realización, la enfermedad o trastorno es dolor, por ejemplo, seleccionado de estados de dolor que surge de una variedad de fuentes incluyendo dolor neuropático (tal como neuralgia postherpética, lesión/daño de nervios, las “dinias”, por ejemplo, vulvodinia, dolor de miembro fantasma, avulsiones radiculares, neuropatía diabética dolorosa, mononeuropatía compresiva, neuropatía isquémica, mononeuropatía traumática dolorosa, o polineuropatía dolorosa), síndromes de dolor central (potencialmente causados por virtualmente cualquier lesión a cualquier nivel del sistema nervioso), y síndromes de dolor postquirúrgico (por ejemplo, síndrome de postmastectomía, síndrome de postoracotomía, dolor del muñón), dolor de huesos y articulaciones (artrosis, artritis reumatoide, espondilitis anquilosante), dolor de movimiento repetitivo, síndrome del túnel carpiano, dolor dental, dolor de cáncer, dolor miofascial (lesión muscular, fibromialgia), dolor perioperatorio (cirugía general, ginecológico), dolor crónico, dismenorrea, así como dolor asociado con angina, y dolor inflamatorio de orígenes variados (por ejemplo, artrosis, artritis reumatoide, enfermedad reumática, tenosinovitis y gota), dolor de cabeza, migraña y cefalea en brotes. En algunas formas de realización, la enfermedad o trastorno está asociada con dolor intratable, tal como migraña, fibromialgia y neuralgia del trigémino.
En algunas formas de realización, la enfermedad o trastorno es un trastorno de migraña. La migraña está entre los trastornos neurológicos más comunes con una prevalencia del 10-15% mundial. Un tercio de los pacientes con migraña también padecen síntomas neurológicos focales transitorios, llamado aura. El aura típicamente empieza de minutos a horas antes de la cefalea, pero se puede producir durante la fase de cefalea o incluso en ausencia de cefalea. Los aspectos más interesantes del aura son el carácter de 'propagación', lo que sugiere un mecanismo subyacente que se propaga lentamente a lo largo de tejido cerebral adyacente.
Se ha acumulado un gran cuerpo de datos que sugieren que de depresión propagada (SD), que también se puede denominar depresión cortical propagada (CSD), es el sustrato electrofisiológico del aura de migraña y un potencial desencadenante para la cefalea. Ocasionalmente, se puede producir un aura con poca o sin cefalea que la siga. La SD tiene lugar en un número de trastornos neurológicos principales además de la migraña con aura, por ejemplo, ictus y traumatismo cerebral. Además, la SD es capaz de activar rutas nociceptivas trigeminovasculares centrales y periféricas con una latencia concordante con la que se produce entre aura y cefalea en pacientes de migraña. Por último, pero no menos importante, se ha mostrado que los fármacos profilácticos de migraña suprimen la SD, lo que sugiere que la SD es una diana farmacológica relevante en migraña. (Shatillo et al. Neuropharm. 2015, 93:164-170).
La SD es una despolarización intensa de membranas neuronales y gliales que se propaga en el tejido cerebral a una velocidad de aproximadamente 3 mm/min. La onda de despolarización será reconocida por registro de CC (corriente continua) en corteza en ratas anestesiadas. Simultáneamente, se puede medir en la duramadre un aumento del CBF (flujo sanguíneo cerebral) que indica la vasodilatación de las venas de la duramadre. Provocada cuando las concentraciones extracelulares de K+ superan un umbral crítico, la SD se asocia con alteración de gradientes iónicos de membrana, se cree que la salida masiva de K+ y glutamato despolarizan primero y después hiperpolarizan las neuronas adyacentes para facilitar la propagación. La SD se puede provocar farmacológicamente por aplicación de glutamato, K+ e inhibidores de la bomba Na+/K+, por estimulación eléctrica y por lesión tisular, tal como traumatismo, hemorragia o isquemia. Se ha obtenido evidencia directa para la aparición de SD en cerebro humano in situ usando registros electrofisiológicos subdurales y electrodos multiparamétricos intracorticales. (Ayata et al. Ann. Neurol. 2006, 59:652-61).
En algunas formas de realización, la enfermedad o trastorno es una migraña sin aura. En algunas formas de realización, la enfermedad o trastorno es una migraña con aura. En algunas formas de realización, la enfermedad o trastorno es una migraña con aura típica. En algunas formas de realización, la enfermedad o trastorno incluye migraña con aura de tronco encefálico, migraña hemipléjica, migraña retinal y/o migraña crónica.
En algunas formas de realización, una migraña puede ser una migraña de estrés, una migraña silenciosa o acefálgica, migraña sinusal, migraña ocular, migraña estacional, síndrome de migraña cíclica, migraña con estasis gástrica, y/o migraña de tensión.
En algunas formas de realización la enfermedad o trastorno es un trastorno de cefalea primaria caracterizado por cefaleas recurrentes que son de moderadas a graves. Una cefalea puede afectar a la mitad de la cabeza y durar de una hora a varios días. En algunas formas de realización, la enfermedad o trastorno es una cefalea de tensión y/o cefaleas autonómicas del trigémino.
En algunas formas de realización la enfermedad o trastorno es cefalea en brotes. La cefalea en brotes es un tipo de cefalea que se repite durante un periodo de tiempo. En general, los pacientes que padecen cefaleas en brotes experimentan un episodio de una a tres veces al día durante un periodo de tiempo (el periodo del brote), que puede durar de dos semanas a tres meses. Una cefalea en brotes típicamente despierta a la persona del sueño una o dos horas después de acostarse. Las cefaleas en brotes pueden desaparecer o entrar en remisión durante meses o años, solo para repetirse sin aviso. En algunas formas de realización, la cefalea en brotes es crónica (por ejemplo, el periodo
de brotes se mide por meses o años, más que semanas). En ciertas formas de realización, la cefalea en brotes es episódica.
En algunas formas de realización, una cefalea puede producir síntomas que comprenden nauseas, vómitos, y sensibilidad a la luz, sonido u olor. En algunas formas de realización, una migraña puede producir síntomas que comprenden nauseas, vómitos, y sensibilidad a la luz, sonido u olor. En algunas formas de realización, las complicaciones de la migraña incluyen estado migrañoso, aura persistente sin infarto, infarto migrañoso y/o convulsiones desencadenadas por aura de migraña.
En algunas formas de realización la enfermedad o trastorno se selecciona de trastornos del sueño y sus secuelas incluyendo insomnio, narcolepsia e hipersomnia idiopática.
En algunas formas de realización la enfermedad o trastorno se selecciona de trastornos del SNC caracterizados por hiperexcitabilidad neuronal, tal como epilepsia, convulsiones, crisis, trastornos convulsivos parciales, trastornos convulsivos generalizados, tal como crisis de ausencia, convulsiones atónicas, mioclónicas, tónicas, tónicas-clónicas o epilepsia mayor, estado epiléptico, depresión propagada cortical, cefaleas migrañas, parálisis cerebral, síndrome de Ohtahara, síndrome del cromosoma X frágil, convulsiones pediátricas o genéticas tal como síndrome de West, síndrome de Lennox-Gastaut y síndrome de Angleman, esclerosis tuberosa, hipertensión intracraneal, edema del sistema nervioso central, toxicidad neuronal, tal como toxicidad inducida por exposición a alcohol, efectos patofisiológicos de traumatismo de cabeza, ictus, isquemia, hipoxia y otras afecciones resultantes de o que producen desequilibrios iónicos en el sistema nervioso central, o descargas sincronizadas de poblaciones neuronales.
En algunas formas de realización la enfermedad o trastorno se caracteriza por la aparición de un ataque. Los ataques son un resultado de descargas incontroladas de actividad eléctrica en el cerebro. Un ataque típicamente se manifiesta como fenómenos repentinos, involuntarios, perturbadores, y con frecuencia destructivos sensoriales, motores y cognitivos. Los ataques con frecuencia se asocian con daño físico al cuerpo (por ejemplo, morderse la lengua, rotura de extremidades, y quemaduras), una pérdida completa de consciencia, e incontinencia. Un ataque típico, por ejemplo, podría empezar como una agitación espontánea de un brazo o pierna y evolucionar durante segundos o minutos a movimiento rítmico del cuerpo entero, pérdida de consciencia y evacuación de orina o heces. Hay ataques tanto convulsivos como no convulsivos. Los ataques convulsivos pueden ser ataques generalizados o ataques parciales. Hay seis tipos principales de ataques generalizados; ataques tónico-clónicos, tónicos, clónicos, mioclónicos, de ausencia y atónicos. Un ataque no convulsivo, por ejemplo, un ataque de ausencia, presenta un nivel disminuido de consciencia y habitualmente dura aproximadamente 10 segundos.
En algunas formas de realización la enfermedad o trastorno es epilepsia. La epilepsia es un trastorno del cerebro caracterizado por una predisposición duradera a generar ataques epilépticos y por las consecuencias neurobiológicas, cognitivas, psicológicas y sociales de esta afección. (R. S. Fisher et al., Epilepsia, 2005, 46(4):470-472). La epilepsia puede ser la aparición de al menos un ataque epiléptico. Un ataque epiléptico es una aparición transitoria de signos y/o síntomas debidos a actividad neuronal anómala excesiva o sincrónica del cerebro. La epilepsia afecta a personas de todas las edades; sin embargo, la epilepsia con mayor frecuencia se produce en la infancia y la edad adulta más vieja (Institute of Medicine, 2012). La causa exacta de la epilepsia es incierta. Algunas causas conocidas de epilepsia incluyen traumatismo craneal, ictus, tumores, infección, o anomalías del cerebro.
La epilepsia se categoriza como idiopática (causa genética) o sintomática (causa desconocida), y se agrupa además en generalizada, que afecta a ambos hemisferios del cerebro, o epilepsia parcial, que afecta a un hemisferio del cerebro. Los ejemplos de epilepsia generalizada idiopática incluyen epilepsia de ausencia infantil, epilepsia mioclónica juvenil y epilepsia con convulsiones tonicoclónicas generalizadas. Los ejemplos de epilepsia parcial idiopática incluyen epilepsia focal benigna de la infancia. La epilepsia generalizada sintomática incluye síndrome de West, síndrome de Lennox-Gastaut y otros. La epilepsia parcial sintomática incluye epilepsia de lóbulo temporal, epilepsia de lóbulo frontal y otras.
En algunas formas de realización, el trastorno convulsivo es un trastorno convulsivo pediátrico. La capacidad para categorizar un caso de un trastorno convulsivo, por ejemplo, epilepsia, en un síndrome específico se produce con más frecuencia con niños ya que el inicio de las convulsiones es comúnmente pronto. Ejemplos menos graves son epilepsia rolándica benigna, epilepsia de ausencia infantil y epilepsia mioclónica juvenil (A. Neligan et al., Handbook of clinical neurology 2012, 107:113-33). Otros ejemplos de convulsiones pediátricas incluyen convulsiones febriles, espasmos infantiles y convulsiones neonatales.
En algunas formas de realización, el trastorno convulsivo es epilepsia del lóbulo frontal, epilepsia mioclónica juvenil, epilepsia mioclónica, epilepsia de ausencia, síndrome de Lennox-Gastaut, síndrome de Landau-Kleffner, síndrome de Dravet, epilepsias minoclónicas progresivas, epilepsia de reflejo, síndrome de Rasmussen, epilepsia del lóbulo temporal, epilepsia límbica, estado epiléptico, epilepsia abdominal, mioclono bilateral masivo, epilepsia catamenial, trastorno convulsivo jacksoniano, enfermedad de Lafora o epilepsia fotosensible, o una combinación de una o más de estas.
Para la mayoría de los casos de epilepsia, la enfermedad es crónica y requiere medicaciones crónicas para el tratamiento. Los fármacos antiepilépticos (AED) en general suprimen la actividad neural por una variedad de mecanismos, incluyendo alterar la actividad de los canales iónicos de la membrana celular y la propensión de potenciales de acción o ráfagas de potenciales de acción que se van a generar. Estos efectos terapéuticos deseados con frecuencia van acompañados por el efecto secundario indeseado de sedación. Otras medicaciones tienen efectos secundarios no neurológicos significativos, tal como hiperplasia gingival, un crecimiento excesivo cosméticamente indeseable de las encías, y/o un engrosamiento del cráneo, como se produce con fenitoína. Mientras que el uso crónico de los AED ha demostrado ser eficaz para una mayoría de los pacientes que padecen epilepsia, los efectos secundarios persistentes pueden producir una alteración significativa de la calidad de vida del paciente. Además, a pesar del arsenal actualmente disponible de AED viejos y nuevos, casi un tercio de los pacientes epilépticos no responden (por ejemplo, resistentes) a todas las pautas farmacológicas. (M.M. Castel-Branco et al., Methods Find Exp Clin Pharmacol, 2009, 31(2):101-106). Subsecuentemente, hay una necesidad sustancial para desarrollar AED nuevos y más eficaces.
En algunas formas de realización, el trastorno convulsivo es resistente a tratamiento. Los síndromes graves con disfunción cerebral difusa, también denominados encefalopatías epilépticas, son resistentes al tratamiento actual. Las encefalopatías epilépticas constituyen un grupo de trastornos en los que la actividad epiléptica misma se considera que contribuye a deterioro cognitivo grave o declive por encima y más allá de lo que se podría esperar de la patología subyacente sola. En formas de realización adicionales, el trastorno convulsivo resistente es un trastorno asociado con migración neuronal, tal como microcircunvoluciones humanas. (S. Bandyopadhyay et al., Epilepsy Research, 2006, 72:127-139). Otra alteración importante en un subgrupo de pacientes quirúrgicamente tratados para convulsiones intratables es displasia focal de la corteza cerebral. La terapia de fármacos anticonvulsivos es con frecuencia ineficaz en pacientes con tales malformaciones corticales. En algunas formas de realización, el trastorno convulsivo implica hiperexcitabilidad cortical en displasia cortical focal (malformaciones). (S. Bandyopadhyay et al., Epilepsy Research, 2006, 72:127-139).
En algunas formas de realización, el trastorno convulsivo o epiléptico está causado por una anomalía genética. Se cree que la genética desempeña un papel importante en epilepsias por un número de mecanismos. Se han identificado modos de herencia sencillos y complejos para algunos de ellos. Estudios de secuenciación del exoma y el genoma recientes han empezado a revelar un número de mutaciones génicas de novo que son responsables para algunas encefalopatías epilépticas, incluyendo CHD2 y SYNGAP1 y DMN1, GABBR2, FASN y RYR3. Pacientes con la encefalopatía epiléptica síndrome de West, presentan distintas características electrofisiológicas clínicas que habitualmente se manifiestan entre 3 y 12 meses como brotes de espasmos infantiles (IS) y un patrón de electroencefalograma (EEG) característico llamado hipsarritmia. El síndrome de West se ha asociado con mutaciones en ARX, CDKL5, STXBP1, y ST3GAL3, así como diversas variaciones del número de copia (CNV). (J. R. Lemke et al., Ann Neurol, 2014, 75(1), 147-154). Mutaciones en GRIN2A y GRIN2B que codifican los receptores de NMDA NR2A y NR2B se asocian con varios trastornos de neurodesarrollo. Recientemente se han detectado mutaciones en GRIN2A en epilepsia focal idiopática con picos rolándicos y encefalopatías epilépticas relacionadas, es decir, en síndrome de Landau-Kleffner, epilepsia con picos y ondas continuos durante el síndrome de sueño lento, y epilepsia no sindrómica asociada con discapacidad intelectual. En contraste, no se ha descrito GRIN2B como gen de epilepsia hasta la fecha, pero se ha considerado repetidamente como un putativo gen candidato para convulsiones, y se detectaron mutaciones en pacientes con ID y esquizofrenia. (J. R. Lemke et al., Ann Neurol, 2014, 75(1), 147-154).
En algunas formas de realización, la enfermedad o trastorno es un trastorno de movimiento. Los trastornos de movimiento incluyen enfermedad de Parkinson, discinesias (incluyendo los efectos secundarios que acompañan dosis normales de L-Dopa), discinesia tardía, parkinsonismo inducido por fármacos, parkinsonismo postencefálico, parálisis supranuclear progresiva, atrofia sistémica múltiple, degeneración corticobasal, complejo parkinsonismo-demencia ELA, calcificación de ganglios basales, acinesia, síndrome acinético rígido, bradicinesia, distonía, parkinsonismo inducido por medicación, síndrome de Gilles de la Tourette, enfermedad de Huntington, temblor, corea, mioclono, trastorno de tic y distonía.
En algunas formas de realización, el trastorno de movimiento es uno o más de acinesias y síndromes acinéticos rígidos, discinesias y parkinsonismo inducido por medicación (tal como parkinsonismo inducido por neurolépticos, síndrome neuroléptico maligno, distonía aguda inducida por neurolépticos, acatisia aguda inducida por neurolépticos, discinesia tardía inducida por neurolépticos y temblor postural inducido por medicación). Los ejemplos de “síndromes acinéticos rígidos” incluyen enfermedad de Parkinson, parkinsonismo inducido por drogas, parkinsonismo postencefálico, parálisis supranuclear progresiva, atrofia sistémica múltiple, degeneración corticobasal, complejo parkinsonismo-demencia ELA, y calcificación de ganglios basales. Los ejemplos de discinesias incluyen temblor (incluyendo temblor en reposo, temblor postural y temblor de intención), corea (tal como corea de Sydenham, enfermedad de Huntington, corea hereditaria benigna, neuroacantocitosis, corea sintomática, corea inducida por drogas y hemibalismo), mioclono (incluyendo mioclono generalizado y mioclono focal), tics (incluyendo tics sencillos, tics complejos y tics sintomáticos), y distonía (incluyendo distonía generalizada tal como distonía idiopática, distonía inducida por drogas, distonía sintomática y distonía paroximal, y distonía focal tal como blefaroespasmo, distonía oromandibular, disfonía espasmódica, tortícolis espasmódica, distonía axial, calambre del escritor distónico y distonía hemipléjica).
En algunas formas de realización, la enfermedad o trastorno es enfermedad de Parkinson.
En algunas formas de realización, la enfermedad o trastorno es enfermedad de Huntington.
En algunas formas de realización, la enfermedad o trastorno es disfunción cognitiva asociada con trastornos incluyendo esquizofrenia, enfermedad de Alzheimer, demencia frontotemporal, enfermedad de Pick, enfermedad de cuerpos de Lewy y otras demencias seniles (por ejemplo, demencia vascular).
En algunas formas de realización, la presente invención proporciona un compuesto o composición para uso en tratar un trastorno descrito en el presente documento, el uso comprende administrar una entidad química de la invención junto con uno o más agentes farmacéuticos. Los agentes farmacéuticos adecuados que se pueden usar en combinación con las entidades químicas de la presente invención incluyen inhibidores de la recaptación de serotonina selectivos (SSRI), por ejemplo, en el tratamiento de depresión; pautas de terapia de sustitución de dopamina y agonistas de dopamina, por ejemplo, en el tratamiento de la enfermedad de Parkinson; antipsicóticos típicos; antipsicóticos atípicos; anticonvulsivos; estimulantes; terapias para enfermedad de Alzheimer; agentes antimigraña; y agentes ansiolíticos.
Los SSRI incluyen citalopram, dapoxetina, escitalopram, fluoxetina, fluvoxamina, indalpina, paroxetina, sertralina, vilazodona y zimelidina.
Las pautas de terapia sustitución de dopamina adecuadas incluyen sustitución de L-DOPA con un inhibidor de DOPA descarboxilasa tal como carbidopa.
Los agonistas del receptor de dopamina adecuados incluyen aplindora, apomorfina, bromocriptina, cabergolina, ciladopa, dihidroergocriptina, lisurida, pardoprunox, pergolida, piribedil, pramipexol, ropinirol y rotigotina.
Los antipsicóticos típicos adecuados incluyen clorpromazina, tioridazina, mesoridazina, levomepromazina, loxapina, molindona, perfenazina, tiotixeno, trifluoperazina, haloperidol, flufenazina, droperidol, zuclopentixol, flupentixol y proclorperazina.
Los antipsicóticos atípicos adecuados incluyen amisulprida, aripiprazol, asenapina, blonanserin, clotiapina, clozapina, iloperidona, llurasidona, mosapramina, olanzapina, paliperidona, perospirona, quetiapina, remoxiprida, risperidona, sertindol, sulpirida, ziprasidona, zotepina, bifeprunox, pimavanserin y vabicaserin.
Los anticonvulsivos adecuados incluyen fenitoína, carbamazepina, barbituratos, fenobarbital, fenobarbital, mefobarbital, trimetadiona, mefenitoína, parametadiona, fentenilato, fenacemida, metarbital, benzclorpropamida, fensuximida, priraidona, metsuximida, etotoina, aminoglutetinida, diazepam, clonazepam, clorazepato, fosfenitoína, etosuximida, valproato, felbamato, gabapentin, lamotrigina, topiramato, vigrabatrin, tiagabina, ziamida, clobazam, tiopental, midazolam, propofol, levetiracetam, oxcarbazepina, CCPeno, y GYKI 52466.
Los estimulantes adecuados incluyen Adderall (anfetamina, dextroamfetamina sales mezcladas), metilfenidato, dextroamfetamina, dexmetilfenidato y lisdexanfetamina.
Las terapias para enfermedad de Alzheimer adecuadas incluyen inhibidores de acetilcolinesterasa tal como rivastigmina, donepezil, galantamina y huperazina; agonistas alfa-7 nicotínico tal como enceniclina; y fármacos que reducen Ap42 tal como inhibidores de BACE, moduladores de gamma secretasa y anticuerpos de péptido beta amiloide.
Los fármacos antimigraña adecuados incluyen alcaloides Ergot (por ejemplo, ergotamina y mesilato de dihidroergotamina). Otros fármacos antimigraña adecuados incluyen triptanos agonistas de 5-HT1D tal como sumitriptano, almotriptano, eletriptano, frovotriptano, naratriptano, rizatriptano y zolmitriptano.
Otros agentes adecuados para uso en tratar o prevenir cefalea(s) o migraña incluyen medicación para el dolor (por ejemplo, aspirina, naproxeno, ibuprofeno, y paracetamol), medicación para náusea, cafeína, antihistamínicos, mucato de isometepteno, divalproex sódico/valproate sódico, topiramato, metoprolol, propranolol, timolol, lisinopril, candesartan, atenolol, nadolol, diltiazem, nimodipina, verapamil, amitriptilina, nortriptilina, imipramina, doxepin, protriptilina, paroxetina, fluoxetina, sertralina, topiramato, gabapentin, y divalproex sódico.
En algunas formas de realización, uno o más otros agentes adecuados se pueden combinar con una entidad química de la invención para prevenir y/o tratar una cefalea. En algunas formas de realización, uno o más otros agentes adecuados se pueden combinar con una entidad química de la invención para prevenir y/o tratar una migraña. En algunas formas de realización, uno o más otros agentes adecuados se pueden combinar con una entidad química de la invención para prevenir y/o tratar una migraña con aura.
En algunas formas de realización, uno o más otros agentes adecuados se pueden combinar con una entidad química de la invención para prevenir y/o tratar cefalea en brotes. Se ha mostrado que medicaciones que bajan la presión sanguínea tratan cefalea en brotes. Según esto, en algunas de tales formas de realización, una entidad química de la invención se puede combinar con, por ejemplo, verapamil, litio, divalproex sódico, prednisona, tartrato de ergotamina, melatonina, un triptano (por ejemplo, sumatriptano), oxígeno, lidocaína intranasal, o cualquier otro agente adecuado para prevenir y/o tratar una cefalea en brotes.
Los fármacos ansiolíticos adecuados incluyen moduladores del receptor de benzodiacepina tal como diazepam, alprazolam, lorazepam y clonazepam.
Otros agentes adecuados para uso junto con una entidad química de la invención incluyen memantina y modafinil.
La cantidad exacta requerida variará de sujeto a sujeto, dependiendo de la especie, edad, y estado general del sujeto, la gravedad de la infección, el agente particular, su modo de administración, y similares. Las entidades químicas de la invención preferiblemente se formulan en forma farmacéutica unitaria para facilidad de administración y uniformidad de dosis. La expresión “forma farmacéutica unitaria” como se usa en el presente documento se refiere a una unidad físicamente discreta de agente apropiada para el paciente que se va a tratar. Se entenderá, sin embargo, que el uso diario total de las entidades químicas y composiciones de la presente invención lo decidirá el médico en el ámbito del juicio médico racional. El nivel de dosis eficaz específico para cualquier paciente u organismos particular dependerá de una variedad de factores incluyendo el trastorno que se trata y la gravedad del trastorno; la actividad de la entidad química específica empleada; la composición específica empleada; la edad, peso corporal, salud general, sexo y dieta del paciente; el tiempo de administración, la ruta de administración, y la velocidad de excreción de la entidad química específica empleada; la duración del tratamiento; fármacos usados en combinación o coincidentes con la entidad química específica empleada, y factores similares bien conocidos en las artes médicas. El término “paciente”, como se usa en el presente documento, significa un animal, preferiblemente un mamífero, y lo más preferiblemente un ser humano.
En algunas formas de realización, la administración puede implicar dosificación que es intermitente (por ejemplo, una pluralidad (es decir, al menos dos) de dosis separadas en tiempo) y/o dosificación periódica (por ejemplo, dosis individuales separadas por un periodo de tiempo común). En algunas formas de realización, una pauta de dosis para un agente activo particular puede implicar administración intermitente o continua, por ejemplo, para lograr un perfil farmacocinético deseado particular u otro patrón de exposición en uno o más tejidos o fluidos de interés en el sujeto que recibe la terapia. En algunas formas de realización, la dosificación intermitente puede incluir dosificación que se produce una vez al día, una vez en días alternos, una vez a la semana, una vez cada dos semanas, o una vez al mes.
En algunas formas de realización, administración puede implicar dosificación que se titula a lo largo del tiempo con el fin de alcanzar una dosis diana. En algunas formas de realización, se pueden producir aumentos en la cantidad y/o plan de dosis a intervalos semanales basado en la respuesta clínica y tolerabilidad del sujeto.
En algunas formas de realización, una o más características de una pauta de dosis se pueden modificar a lo largo del tiempo (por ejemplo, aumentar o disminuir la cantidad de activo en cualquier dosis individual, aumentar o disminuir los intervalos de tiempo entre dosis, etc.), por ejemplo, con el fin de optimizar un efecto terapéutico o respuesta deseados.
En algunas formas de realización, las composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención se pueden administrar una vez a la semana. En algunas formas de realización, las composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención se pueden administrar una vez al día. En algunas formas de realización, las composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención se pueden administrar dos veces al día. En algunas formas de realización, las composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención se pueden administrar tres veces al día. En algunas formas de realización, las composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención se pueden administrar con o sin alimento.
En algunas formas de realización, las composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención se pueden administrar para tratar afecciones agudas. Las afecciones agudas pueden ser de inicio repentino. Los síntomas de las afecciones agudas pueden aparecer y cambiar o empeorar rápidamente. En algunas formas de realización, las composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención se pueden administrar para tratar afecciones crónicas. Las afecciones crónicas pueden ser afecciones de desarrollo largo. Una afección crónica se puede desarrollar y empeorar durante un periodo de tiempo extendido.
En algunas formas de realización, las composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención se pueden administrar antes de un ataque. En algunas formas de realización, las composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención se pueden administrar después de un ataque. En algunas formas de realización, las composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención se pueden administrar a un paciente en riesgo de ataque.
Las composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención se pueden administrar a seres humanos y otros animales por vía oral, rectal, parenteral, intracisternal, intravaginal, intraperitoneal, tópica (como por polvos, pomadas, o gotas), yugal, como un espray oral o nasal, o similares, dependiendo de la gravedad de la infección que se trata. En ciertas formas de realización, las entidades químicas de la invención se pueden administrar por vía oral o parenteral a unos niveles de dosis de aproximadamente 0,01 mg/kg hasta aproximadamente 50 mg/kg y preferiblemente de aproximadamente 1 mg/kg hasta aproximadamente 25 mg/kg, de peso corporal del sujeto al día, una o más veces al día, para obtener el efecto terapéutico deseado.
Las formas farmacéuticas líquidas para administración oral incluyen emulsiones, microemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables. Además de los compuestos activos, las formas farmacéuticas líquidas pueden contener diluyentes inertes comúnmente usados en la técnica tal como agua u otros solventes, agentes solubilizantes y emulsionantes tal como alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, dimetilformamida, aceites (en particular, aceites de semilla de algodón, cacahuete, maíz, germen, oliva, ricino, y sésamo), glicerol, alcohol tetrahidrofurfurílico, polietilenglicoles y ésteres de ácidos grasos de sorbitano, y mezclas de los mismos. Además de diluyentes inertes, las composiciones orales también pueden incluir adyuvantes tal como agentes humectantes, agentes emulsionantes y de suspensión, agentes edulcorantes, saborizantes y perfumantes.
Las preparaciones inyectables, por ejemplo, suspensiones acuosas u oleaginosas estériles inyectables se pueden formular según la técnica conocida usando agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución, suspensión o emulsión inyectable estéril en un diluyente o solvente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, como una solución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y solventes aceptables que se pueden emplear están agua, solución de Ringer y solución de cloruro de sodio isotónica y U.S.P. Además, aceites no volátiles estériles se emplean convencionalmente como un solvente o medio de suspensión. Para este fin, cualquier aceite no volátil suave se puede emplear incluyendo mono o diglicéridos sintéticos. Además, ácidos grasos tal como ácido oleico se usan en la preparación de inyectables.
Las formulaciones inyectables se pueden esterilizar, por ejemplo, por filtración a través de un filtro que retiene bacterias, o incorporando agentes esterilizantes en forma de composiciones estériles sólidas que se pueden disolver o dispersar en agua estéril u otro medio inyectable estéril antes del uso.
Con el fin de prolongar el efecto de una entidad química de la presente invención, con frecuencia es deseable ralentizar la absorción de la entidad química de la inyección subcutánea o intramuscular. Esto se puede lograr mediante el uso de una suspensión líquida de material cristalino o amorfo con poca solubilidad en agua. La velocidad de absorción de la entidad química depende entonces de su velocidad de disolución que, a su vez, puede depender del tamaño del cristal y forma cristalina. Alternativamente, la absorción retrasada de una forma de entidad química administrada por vía parenteral se logra disolviendo o suspendiendo la entidad química en polímeros biodegradables tal como polilactida-poliglicolida. Dependiendo de la proporción de entidad química respecto al polímero y la naturaleza del polímero particular empleado, la velocidad de liberación de la entidad química se puede controlar. Los ejemplos de otros polímeros biodegradables incluyen poli(ortoésteres) y poli(anhídridos). También se preparan formulaciones inyectables en depósito atrapando la entidad química en liposomas o microemulsiones que son compatibles con tejidos corporales.
Las composiciones para la administración rectal o vaginal son preferiblemente supositorios que se pueden preparar mezclando las entidades químicas de esta invención con excipientes o soportes no irritantes adecuados tal como manteca de cacao, polietilenglicol o una cera de supositorio que son sólidas a temperatura ambiente, pero líquidas a temperatura corporal y por tanto se funden en el recto o cavidad vaginal y liberan la entidad química activa.
Las formas farmacéuticas sólidas para la administración oral incluyen cápsulas, comprimidos, píldoras, polvos y gránulos. En tales formas farmacéuticas sólidas, la entidad química activa se mezcla con al menos un soporte farmacéuticamente aceptable inerte tal como citrato de sodio o fosfato dicálcico y/o a) rellenos o extensores tal como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol, y ácido silícico, b) aglutinantes tal como carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa, y goma arábiga, c) humectantes tal como glicerol, d) agentes disgregantes tal como agar-agar, carbonato de calcio, fécula de patata o tapioca, ácido algínico, ciertos silicatos, y carbonato de sodio, e) agentes de retraso de solución tal como parafina, f) aceleradores de absorción tal como compuestos de amonio cuaternario, g) agentes humectantes tal como alcohol cetílico y monoestearato de glicerol, h) absorbentes tal como caolín y arcilla de bentonita, e i) lubricantes tal como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, lauril sulfato de sodio, y mezclas de los mismos. En el caso de cápsulas, comprimidos y píldoras, la forma farmacéutica también puede comprender agentes tamponantes.
También se pueden emplear composiciones sólidas de un tipo similar como rellenos en cápsulas de gelatina blandas y duras rellenas usando tales excipientes como lactosa o azúcar de leche, así como polietilenglicoles de alto peso molecular y similares. Las formas farmacéuticas sólidas de comprimidos, grajeas, cápsulas, píldoras y gránulos se pueden preparar con recubrimientos y caparazones tal como recubrimientos entéricos y otros recubrimientos bien conocidos en la técnica de la formulación farmacéutica. Pueden contener opcionalmente agentes opacificantes y
también pueden ser de una composición que liberen el/los principio(s) activo(s) solo, o preferentemente, en una cierta parte del tracto intestinal, opcionalmente, de una manera retrasada. Los ejemplos de composiciones de inclusión que se pueden usar incluyen sustancias poliméricas y ceras. También se pueden emplear composiciones sólidas de un tipo similares como rellenos en cápsulas de gelatina blandas y duras rellenas usando tales excipientes como lactosa o azúcar de leche, así como polietilenglicoles de alto peso molecular y similares.
Las entidades químicas activas también pueden estar en forma microencapsulada con uno o más excipientes como se ha indicado anteriormente. Las formas farmacéuticas sólidas de comprimidos, grajeas, cápsulas, píldoras y gránulos se pueden preparar con recubrimientos y caparazones tal como recubrimientos entéricos y otros recubrimientos bien conocidos en la técnica de la formulación farmacéutica. En tales formas farmacéuticas sólidas la entidad química activa se puede mezclar con al menos un diluyente inerte tal como sacarosa, lactosa o almidón. Tales formas farmacéuticas también pueden comprender, como es práctica normal, sustancias adicionales diferentes de los diluyentes inertes, por ejemplo, lubricantes de comprimidos y otros auxiliares de formación de comprimidos tal como estearato de magnesio y celulosa microcristalina. En el caso de cápsulas, comprimidos y píldoras, las formas farmacéuticas también pueden comprender agentes tamponantes. Pueden contener opcionalmente agentes opacificantes y también pueden ser de una composición que liberen el/los principio(s) activo(s) solo, o preferentemente, en una cierta parte del tracto intestinal, opcionalmente, de una manera retrasada. Los ejemplos de composiciones de inclusión que se pueden usar incluyen sustancias poliméricas y ceras.
Las formas farmacéuticas para la administración tópica o transdérmica de una entidad química de la invención incluyen pomadas, pastas, cremas, lociones, geles, polvos, soluciones, espráis, inhalantes o parches. La entidad química activa se mezcla en condiciones estériles con un soporte farmacéuticamente aceptable y cualquier conservante o tampón necesario según se requiera. También se contemplan formulación oftálmica, gotas para el oído, y gotas oculares como que están en el ámbito de la invención. Además, la presente invención contempla el uso de parches transdérmicos, que tienen la ventaja añadida de proporcionar administración controlada de una entidad química al cuerpo. Tales formas farmacéuticas se pueden hacer disolviendo o dispensando la entidad química en el medio apropiado. También se pueden usar potenciadores de absorción para aumentar el flujo de la entidad química a través de la piel. La velocidad se puede controlar o bien proporcionando una membrana que controla la velocidad o dispersando la entidad química en una matriz de polímero o gel.
Como se usa en el presente documento, el término “combinación”, “combinado”, y términos relacionados se refiere a la administración simultánea o secuencial de agentes terapéuticos según esta invención. Por ejemplo, una entidad química de la presente invención se puede administrar con otro agente terapéutico simultánea o secuencialmente en formas farmacéuticas unitarias separadas o juntas en una única forma farmacéutica unitaria. Según esto, la presente invención proporciona una única forma farmacéutica unitaria que comprende una entidad química de fórmula (I), un agente terapéutico adicional, y un soporte, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable.
En algunas formas de realización, diferentes agentes administrados en combinación se pueden administrar a través de diferentes rutas de administración y/o según diferentes programas. De forma alternativa o adicional, en algunas formas de realización, una o más dosis de un primer agente activo se administra sustancialmente de forma simultánea con, y en algunas formas de realización a través de una ruta común y/o como parte de una única composición con, uno o más otros agentes activos.
La cantidad de ambos, un entidad química proporcionada y agente terapéutico adicional (en esas composiciones que comprenden agente terapéutico adicional como se ha descrito anteriormente), que se puede combinar con los materiales soporte para producir una única forma farmacéutica variará dependiendo del huésped tratado y el modo de administración particular. Preferiblemente, las composiciones de esta invención se deben formular de modo que se pueda administrar una dosis entre 0,01-100 mg/kg de peso corporal/día de una entidad química proporcionada.
En esas composiciones que comprenden un agente terapéutico adicional, ese agente terapéutico adicional y la entidad química de esta invención pueden actuar sinérgicamente. Por tanto, la cantidad de agente terapéutico adicional en tales composiciones será menor que la requerida en una monoterapia que utiliza solo ese agente terapéutico. En tales composiciones se puede administrar una dosis entre 0,01-100 pg/kg de peso corporal/día del agente terapéutico adicional.
La cantidad de agente terapéutico adicional presente en las composiciones de esta invención será no más que la cantidad que se administraría normalmente en una composición que comprende ese agente terapéutico como el único agente activo. Preferiblemente, la cantidad de agente terapéutico adicional en las composiciones presentemente divulgadas variará desde aproximadamente el 50% hasta el 100% de la cantidad normalmente presente en una composición que comprende ese agente como el único agente terapéuticamente activo.
En algunas formas de realización, la presente divulgación proporciona un medicamento que comprende al menos una entidad química de fórmula (I) y un soporte, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable.
En algunas formas de realización, la presente divulgación proporciona el uso de una entidad química de fórmula (I) en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o trastorno del SNC.
Métodos sintéticos generales
Las entidades químicas de fórmula (I) se pueden sintetizar según el esquema 1 y/o usando métodos conocidos en la técnica.
Esquema 1
a. base (por ejemplo, diisopropiletilamina), solvente orgánico (por ejemplo, n-butanol), calor o condiciones de acoplamiento de Buchwald (por ejemplo, catalizador de Pd, base, solvente orgánico, calor) b. condiciones de desprotección (por ejemplo, CF3CO2H o HCl, temperatura ambiente cuando R1’ = t-butilo) c. condiciones de formación de carbamato (por ejemplo, carbonildiimidazol, R1-OH, DMSO, temperatura ambiente).
En el método representado en el esquema 1, en una primera etapa, se pueden preparar compuestos de fórmula XII por acoplamiento de intermedios de fórmula X, en donde R1’ = R1 o un grupo protector (por ejemplo, donde R1’ es tbutilo, la fracción Rr -OC(O)- es un grupo Boc), con intermedios Z-LG de fórmula XI. Para compuestos de fórmula XI Z es un grupo heterocíclico como se ha definido anteriormente y LG es un grupo adecuado para la reacción de acoplamiento tal como cloro o bromo. En ciertos casos, la reacción de acoplamiento se puede realizar como una reacción de sustitución aromática nucleofílica mediada por base. En ciertos casos la reacción de acoplamiento se puede realizar como una reacción de Buchwald mediada por catálisis de paladio. Las reacciones de acoplamiento de sustitución aromática se pueden realizar en solventes próticos (por ejemplo, isopropanol, n-butanol) o apróticos (por ejemplo, CH2O 2, DMF, DMSO, CH3CN) adecuados a temperaturas desde ambiente a 160°C, por ejemplo, entre 50°C y 120°C con intermedios de fórmula Z-Cl en presencia de una base adecuada (por ejemplo, trietilamina, diisopropiletilamina). Las reacciones de acoplamiento de Buchwald (Buchwald, S.; Muci, A. Top. Curr. Chem. 2002;
219, 133-209) se pueden llevar a cabo en solventes orgánicos adecuados (por ejemplo, t-butanol, tolueno, DMF, DMSO, CH3CN) en presencia de un catalizador de paladio adecuado y sistema de ligando de fosfina (por ejemplo, Brettphos/precatalizador Brettphos, BINAP/Pd2(dba)3) a temperaturas desde 70°C a 150°C, por ejemplo, entre 80°C y 130°C con intermedios de fórmula Z-Br, en presencia de una base adecuada (por ejemplo, Cs2CO3) en atmósfera inerte (por ejemplo, nitrógeno). En el caso donde R1’ = R1, los compuestos de fórmula XII son equivalentes a compuestos de fórmula I. En el caso donde R1’ es un grupo protector entonces los compuestos intermedios de fórmula XII se pueden convertir a los compuestos intermedios de fórmula XIII usando condiciones de desprotección conocidas en la técnica. Por ejemplo, cuando R1’ es un grupo t-butilo (es decir, la fracción R1’-OC(O)- es un grupo Boc), los compuestos intermedios de fórmula XII se pueden convertir a los compuestos intermedios de fórmula XIII usando un número de métodos conocidos. Típicamente, la desprotección de Boc se realiza en condiciones ácidas usando HCl (por ejemplo, HCl 1-4 N en éter o dioxano en un solvente adecuado, por ejemplo, diclorometano, metanol o THF) a temperaturas entre 0°C y 50°C, o usando ácido trifluoroacético en un solvente aprótico (por ejemplo, diclorometano) a temperaturas entre 0°C y temperatura ambiente. Lo último es particularmente útil para compuestos que son sensibles a reacciones secundarias mediadas por cloruro. Los compuestos intermedios de fórmula XIII se pueden convertir a los compuestos de fórmula I por reacción de carbamoilación con un reactivo de carbamoilación de fórmula R1OC(O)X en donde X es un grupo saliente adecuado (por ejemplo, Cl, imidazolilo, hidroxisuccinilo). Los reactivos de fórmula R1OC(O)X se pueden implementar en forma aislada o generar in situ. Por ejemplo, un alcohol de fórmula R1OH se puede tratar con carbonildiimidazol en un solvente orgánico aprótico a entre 0°C y temperatura ambiente para formar primero el reactivo de carbomoilación R1OC(O)imidazolilo. La reacción in situ del reactivo de carbomoilación
R1OC(O)imidazolilo con compuestos intermedios de fórmula XIII (en forma de base libre o forma de sal de adición ácida, a temperaturas entre 0°C y 70°C) en solvente aprótico (por ejemplo, DMSO) da compuestos de fórmula I.
Los reactivos de acoplamiento cloruro o bromuro de heteroarilo Z-LG o bien están comercialmente disponibles, se pueden preparar según procedimientos de la bibliografía conocidos para el compuesto exacto o se pueden preparar usando métodos conocidos en la técnica para sintetizar cloruro y bromuros de heteroarilo. Por ejemplo, el compuesto heteroarilo Z-H se puede bromar o clorar usando métodos conocidos en la técnica (por ejemplo, por tratamiento con bromo o N-bromosuccinimida u otro reactivo bromador o tratamiento con un reactivo de cloración tal como sulfurilcloruro) el reactivo acoplante heteroarilo Z-Br o Z-Cl deseado se puede aislar después por el procedimiento apropiado (por ejemplo, por cromatografía según se necesite para separar regioisómeros). Los reactivos de acoplamiento heteroarilos Z-Cl en donde el grupo cloro es parte de una subestructura iminocloruro se pueden preparar en condiciones estándar (por ejemplo, usando oxicloruro de fósforo a temperatura elevada como solvente mismo o en un solvente orgánico aprótico adecuado) a partir del correspondiente material de partida Z-OH que tiene la subestructura tautomérica amido correspondiente. Se pueden preparar otros reactivos de acoplamiento heteroarilo a partir del material de partida Z-NH2 correspondiente en condiciones de tipo de reacción de Sandmeyer que están bien establecidas en la técnica (es decir, reacción de diazotización seguida por cloración o bromación con CuCl o CuBr). En algunos casos los materiales de partida requeridos Z-OH o Z-NH2 se pueden preparar usando métodos conocidos en la técnica para sintetizar compuestos heteroarilo.
Las entidades químicas de fórmula (I) se pueden obtener como enantiómeros individuales de mezclas racémicas usando métodos conocidos en la técnica tal como cromatografía quiral o recristalización de sales de adición ácidas diastereoméricas. Alternativamente, las entidades químicas de fórmula (I) se pueden obtener como enantiómeros individuales por síntesis asimétrica o a partir de los intermedios enantiómeros individuales correspondientes. Por ejemplo, los enantiómeros individuales de entidades químicas de fórmula (I) se pueden preparar de enantiómeros de los intermedios de fórmula X que tienen la configuración estereoquímica absoluta correspondiente en el C-4 del sistema de anillos de piperidina. Los intermedios de fórmula X se pueden preparar a su vez por un proceso de síntesis asimétrica como se representa en el esquema 2. En este proceso el material de partida conocido XIV (Madaiah M. et. Al. Tetrahedron Lett. 2013, 54, 1424-27) se convierte en tres etapas a un intermedio acilo a,p-insaturado XV sustituido con un sistema auxiliar quiral de oxazolidinona ópticamente puro R = (XVa) o S = (XVb). En el caso de XVa, con el auxiliar quiral de estequiometría R absoluta, la hidrogenación catalítica estándar usando Pd-C al 10% en acetato de etilo da una mezcla aprox. 5:1 de productos diastereoméricos (R)-XVIa (principal) y (S)-XVIa (minoritario). Esta mezcla se puede separar por cromatografía estándar sobre gel de sílice para dar (R)-XVIa en forma pura. Como se representa en el esquema 2, la hidrólisis del auxiliar quiral del intermedio puro (R)-XVIa da el intermedio ácido enantiómero puro (R)-XVII. A partir de (R)-XVII, un proceso de reacción de Curtis de dos etapas da el enantiómero (-)(R)-X. El enantiómero (+)(S)-X se puede preparar de forma análoga empezando del intermedio XVb. Los enantiómeros puros de fórmula X también se pueden preparar de mezclas enantioméricamente enriquecidas o racémicas por formación de sales de adición ácidas quirales y métodos de recristalización (por ejemplo, usando un ácido tartárico quiralmente puro) estándar en la técnica.
Esquema 2
a. (trifenilfosfaranilideno)acetato de metilo, tolueno, rt b. NaOH, THF, agua 50°C c. trietilamina, cloruro de pivaloilo, THF, -78°C, R-4-bencil-3-litio-2-oxazolidinona d. Pd/C al 10%, H2, acetato de etilo, rt, separación diastereómeros producto por cromatografía en columna sobre gel de sílice e. LiOH, H2SO2 al 30%, THF, 50°C f. difenilfosforilazida, PhCH2OH, trimetilamina, tolueno, reflujo g. Pd/C al 10%, H2, acetato de etilo, rt h. hidrogenación asimétrica.
Los intermedios enantiómeros de formula XVI también se pueden preparar por hidrogenación catalítica asimétrica de los intermedios de fórmula XV en donde Y forma un grupo éster quiral simple (por ejemplo, Y = OMe, OEt). Para este fin se pueden emplear catalizadores quirales que comprenden un ligando fosfina quiral (por ejemplo, ligandos de Waldphos) y un metal de transición (por ejemplo, Ir, Rh o Ru) en condiciones de hidrogenación catalítica asimétrica a temperatura y presión elevadas para dar intermedios éster sencillo XVI de alta pureza enantiomérica. El último se puede convertir a enantiómeros puros X usando métodos estándar en la técnica tal como los descritos anteriormente. La hidrogenación de ácido a,p-insaturado y sistemas éster, se han revisado por Tang et al. (Tang W. et al., Chem Rev.
2003, 103, 3029), y se han descrito métodos de hidrogenación catalítica asimétrica adicionales por Krska et al. (Krska S. W. et al., Tetrahedron 2009, 65, 8987-8994) and Tudge et al. (Tudge M. et al., Organic Process Research and Development 2010, 14, 787-798).
Los intermedios enantiómeros puros para sintetizar enantiómeros de compuestos de fórmula I también se pueden preparar por variantes de los métodos anteriores usando intermedios con grupos protectores alternativos o isómeros de doble enlace como se ejemplifica en el esquema 3.
Esquema 3
a. R = CH2Ph, R' = hidrógeno o alquilo (por ejemplo, Me o Et), hidrogenación catalítica asimétrica b. H2, Pd/C al 10% para eliminar el grupo protector bencilo para dar R = H c. carbamoilación, por ejemplo, carbonildiimidazol, R1-OH, DMSO para dar R = R1-OC(O)- d. saponificación de éster, por ejemplo, NaOH, THF e. degradación de Hofmann o protocolo de reorganización de Curtis.
Por ejemplo, un intermedio de fórmula XXI en donde R = bencilo se puede someter a los procesos de reducción descritos anteriormente (por ejemplo, hidrogenación asimétrica catalítica) para generar intermedios de fórmula (R)-XXII que son quiralmente puros en el estereocentro de piperidina C-4. En etapas posteriores el grupo bencilo se puede eliminar e intercambiar por otro grupo protector (por ejemplo, Boc) o el grupo CO2R1 presente en el compuesto de fórmula I. Alternativamente, el mismo esquema de reacción se puede implementar a través de la hidrogenación asimétrica del material de partida de isómero de doble enlace XXX.
Ejemplo 1. Entidades químicas.
Como se representa en los ejemplos siguientes, en ciertas formas de realización ejemplares, las entidades químicas se preparan según los siguientes procedimientos. Se apreciará que, aunque los métodos generales representan la síntesis de ciertas entidades químicas de la presente invención, los siguientes métodos, y otros métodos que conocen los expertos en la materia, se pueden aplicar a todas las entidades químicas y subclases y especies de cada una de estas entidades químicas, como se describe en el presente documento.
Las temperaturas se dan en grados centígrados. Si no se menciona otra cosa, todas las evaporaciones se realizan a presión reducida, preferiblemente entre 15 mm Hg y 100 mm Hg. Las estructuras de los intermedios y productos finales se confirman por métodos analíticos estándar, por ejemplo, espectrometría de masas y espectroscopia de RMN. Las rotaciones óticas se miden en la línea D de sodio y se dan en grados. El exceso enantiomérico se puede determinar a través de métodos de HPLC quiral (por ejemplo, usando columnas CHIRALPAK AD-H4.6*150 mm 5 pm y selección de fase móvil, por ejemplo, hexano/isopropanol (80:20), y velocidades de flujo, por ejemplo, 1,5 ml/min adecuadas).
Abreviaturas:
ac acuoso
BINAP 2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1 -binaftaleno
Boc t-butoxicarbonilo
Brettphos 2-(diciclohexilfosfino)-3,6-dimetoxi-2',4',6'-triisopropil-1,1'-bifenilo precatalizador Brettphos cloro[2-(diciclohexilfosfino)-3,6-dimetoxi-2',4',6'-triisopropil-1,1'-bifenil][2-(2-aminoetil)fenil]paladio(II)
nBuOH n-butanol
Cbz benciloxicarbonilo
CDI carbonildiimidazol
DAST trifluoruro de dietilamino azufre
dba dibenilidenoacetona
DCM diclorometano
DCE 1,2-dicloroetano
DIPEA N,N-diisopropiletilamina
DMF N,N-dimetilformamida
DMSO dimetilsulfóxido
Et etilo
Et2O éter dietílico ("éter")
EtOAc acetato de etilo
EtOH etanol
eq equivalentes
h horas
HPLC cromatografía líquida de alto rendimiento
LC cromatografía líquida
Me metilo
Ms metanosulfonilo
MsCl cloruro de metanosulfonilo
MS espectrometría de masas
MS (ESI) espectrometría de masas ionización de electroespray
NMP N-metil-2-pirrolidona
RMN resonancia magnética nuclear
Pd/C paladio apoyado en carbono
rt temperatura ambiente
TEA trietilamina
TFA ácido trifluoroacético
THF tetrahidrofurano
TLC cromatografía de capa fina
Ts p-toluenosulfonilo
EJEMPLO 1.A. 4-(aminometil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de (-)-R-tert-butilo
Etapa 1: 3,3-difluoro-4,4-dihidroxipiperidina-1-carboxilato de tert-butilo
Fy F OH
r f 0H
Boc' N ^
A una solución de 1-bencil-3,3-difluoropiperidina-4,4-diol (100,0 g, 412 mmol) en etanol (1850 ml) se añadió Pd/C al 10% (10,0 g) y HCl (6,0 M, 69 ml, 414 mmol), La mezcla se purgó con H2 tres veces y se hidrogenó a temperatura ambiente a presión atmosférica. Después de que se consumiera el material de partida, la mezcla se filtró a través de celite y la almohadilla de filtro se extrajo con EtOH. Los filtrados combinados se concentraron a presión reducida y el producto clorhidrato de 3,3-difluoropiperidina-4,4-diol se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación. Una solución agitada del producto crudo clorhidrato de 3,3-difluoropiperidina-4,4-diol (78 g) en agua (1000 ml) y acetona (500 ml) se basificó por Na2CO3 a pH 9. Se añadió después dicarbonato de di-tert-butilo (98,9 g, 453 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla se concentró a presión reducida para eliminar el cosolvente acetona. La mezcla resultante se extrajo con EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para dar el producto crudo como un aceite marrón. El aceite se trató con hexano y el material sólido precipitado se trituró y filtró para dar el compuesto del título como un polvo blanco (94,3 g, 90% global).
1H RMN (400 MHz, CD3OD) 83.72 (t, J = 11.6 Hz, 2H), 3.56-3.46 (m, 2H), 1.83-1.77 (m, 2H), 1.42 (s, 9H).
Etapa 2: 3,3-difluoro-4-(2-metoxi-2-oxoetilideno)piperidina-1-carboxilato de tert-butilo
A una solución agitada de 3,3-difluoro-4,4-dihidroxipiperidina-1-carboxilato detert-butilo (80,0 g, 314 mmol) en tolueno (1000 ml) se añadió (trifenilfosforanilideno)acetato de metilo (126 g, 377 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc/hexano = 1/5) para dar el compuesto del título como un aceite incoloro (79,6 g, 87%). 1H RMN (400 MHz, CDCls) 86.23 (s, 1H), 3.83-3.71 (m, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.58-3.47 (m, 2H), 3.13-3.05 (m, 2H), 1.48 (s, 9H).
Step 3: ácido 2-(1-(tert-butoxicarbonil)-3,3-difluoropiperidin-4-ilideno)acético
A una solución agitada de 3,3-difluoro-4-(2-metoxi-2-oxoetilideno)piperidina-1-carboxilato de tert-butilo (590 g, 2,03 mol) en THF (1,5 l) se añadió una solución de NaOH (40,1 g, 1,0 mol) en agua (1,5 l) a temperatura ambiente. La mezcla resultante se calentó a 50°C y se agitó durante 1 h. Después de consumirse el material de partida, el THF se concentró a presión reducida. El concentrado acuoso se extrajo con acetato de etilo y se acidificó a pH 5 con HCl acuoso 4,0 M con enfriamiento en baño de hielo-agua. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo tres veces. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua, salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. El residuo se trituró con hexano y la suspensión se filtró para dar el producto del título como un polvo blanquecino (492 g, 87%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 812.99 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 3.81 (t, J = 11.6 Hz, 2H), 3.50 3.42 (m, 2H), 2.94-2.88 (m, 2H), 1.42 (s, 9H).
Etapa 4: (R)-4-(2-(4-bencil-2-oxooxazolidin-3-il)-2-oxoetilideno)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de tert-butilo
A una solución agitada de ácido 2-(1-(tert-butoxicarbonil)-3,3-difluoropiperidin-4-ilideno)acético (23,5 g, 84,8 mmol) en THF anhidro (250 ml) se añadió Et3N (11,7 ml, 85,7 mmol) a 0°C. Se añadió gota a gota cloruro de pivaloilo (10,5 g, 89,0 mmol) y la mezcla se agitó a 0°C durante 2 h. A la mezcla a -78°C se añadió una solución de THF de un equivalente de (R)-4-bencil-3-litio-2-oxazolidinona (preparada a partir de (R)-4-bencil-2-oxazolidinona (15,0 g, 84,7 mmol) y n-BuLi (2,5 M en hexano, 34 ml, 85 mmol) en THF (150 ml) a -78°C). La mezcla resultante se dejó calentar a 0°C, se agitó durante 30 minutos a 0°C y se extinguió con NH4Cl sat. La mezcla se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua, salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron al vacío. El residuo se recristalizó de acetato de etilo/hexano (60 ml/400 ml) para dar el compuesto del título como un polvo blanco (24,5 g, 66%). MS (ESI) calculada para C22H26F2N2Oa:436,2; determinada [459,3] [M+ Na]; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 7.39-7.32 (m, 3H), 7.31-7.29 (m, 1H ), 7.22 (d, J=8.0 Hz, 2H), 4.76-4.70 (m, 1H), 4.27-4.19 (m, 2H), 3.84-3.79 (m, 2H), 3.63-3.52 (m, 2H), 3.35 (dd, J= 3.2 y 13.2 Hz, 1H), 3.08-2.97 (m, 2H), 2.80 (dd, J=10.0 y 13.2 Hz, 1H), 1.49 (s, 9H).
Etapa 5: 4-(2-((R)-4-bencil-2-oxooxazolidin-3-il)-2-oxoetil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo
A una suspensión de 4-(2-(4-bencil-2-oxooxazolidin-3-il)-2-oxoetilideno)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de (R)-tert-butilo (10,0 g, 22,8 mmol) en acetato de etilo (150 ml) se añadió paladio sobre carbono al 10% (1,0 g). La mezcla
se hidrogenó a temperatura ambiente durante 13 h a presión atmosférica. La mezcla se filtró a través de celite y la almohadilla de filtro se extrajo con acetato de etilo. Los filtrados combinados se concentraron al vacío para dar 12,0 g de una mezcla de aprox. 1:5 del compuesto del título R junto con un correspondiente diastereoisómero S secundario. Los diastereómeros se separaron por cromatografía en columna sobre gel de sílice (acetato de etilo/hexano = 1/3). El diastereoisómero principal eluyó primero y se obtuvo como un polvo blanco (5,20 g, 52%, >99% ed) (Columna: CHIRALPAKAD-H 4.6*150mm, 5um; Fase movil: A: Hexanos B: Etanol=70:30; t = 9,07). MS (ESI) calculada para C22H28F2N2O5: 438,2; determinada: 461,2 [M+Na] 1H RMN (400 MHz, CDCls) 8 7.37-7.32 (m, 2H), 7.31-7.28 (m, 1H), 7.20 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.72-4.66 (m, 1H), 4.48-4.00 (m, 4H), 3.38-3.27 (m, 2H), 3.11-2.72 (m, 4H), 2.66-2.53 (m, 1H), 1.93-1.89 (m, 1H), 1.63-1.51 (m, 1H), 1.47 (s, 9H).
Etapa 6: ácido R-2-(1-(tert-butoxicarbonil)-3,3-difluoropiperidin-4-il)acético
A una mezcla agitada de 4-(2-((R)-4-bencil-2-oxooxazolidin-3-il)-2-oxoetil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo (5,20 g, 11,8 mmol) en THF/H2O (45 ml/45 ml) se añadieron H2O2 ac. al 30% (4,9 ml, 48 mmol) e hidróxido de litio monohidrato (800 mg, 19,0 mmol) a 0°C. Después de agitar durante 90 min a 0°C, la mezcla de reacción se trató con solución de Na2SO31 M (40 ml) y después se extrajo con acetato de etilo (2*100 ml) para eliminar el auxiliar quiral. La fase acuosa se acidificó a pH = 2~3 con HCl ac. 1 M y después se extrajo con acetato de etilo (2*100 ml). Las fases de acetato de etilo combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron al vacío. El residuo se recristalizó de acetato de etilo/hexano (5 ml/50 ml) para dar el compuesto del título como un polvo blanco (3,70 g, 79%). MS (ESI) calculada para C12H19F2NO4 : 279,1; determinada 224 [M H -56 (grupo t-butilo)]; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 84.51-4.01 (m, 2H), 3.10-2.70 (m, 3H), 2.45-2.28 (m, 2H), 1.93-1.89 (m, 1H), 1.58-1.50 (m, 1H), 1.46 (s, 9H).
Etapa 7: 4-((benciloxicarbonilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo
A una solución agitada de ácido R-2-(1-(tert-butoxicarbonil)-3,3-difluoropiperidin-4-il)acético (6,05 g, 21,7 mmol) en tolueno anhidro (50 ml) se añadieron trietilamina (4,6 ml, 34 mmol) y difenilfosofrilazida (5,2 ml, 24 mmol) en nitrógeno. Después de agitar durante 20 min a 80°C, se añadió alcohol bencílico (1,4 ml, 25 mmol) y la reacción se agitó a 100°C durante la noche. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente, se concentró y diluyó con DCM (200 ml). La fase orgánica se lavó con HCl ac. 0,5 M (2*50 ml), agua (2*50 ml) y salmuera (50 ml), se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se recristalizó de etanol/H2O (30 ml/90 ml) para dar el compuesto del título como un polvo blanco (6,91 g, 84%). MS (ESI) calculada para C 19 H26F2N2O4: 384,2; determinada: 407,2 [M+Na]. 1H RMN (400 MHz, CDCls) 8 7.39-7.30 (m, 5H), 5.10 (s, 2H), 5.02 (brs, 1H), 4.51-3.99 (m, 2H), 3.55-3.44 (m, 1H), 3.39-3.26 (m, 1H), 3.04-2.65 (m, 2H), 2.18-2.02 (m, 1H), 1.78-1.75 (m, 1H), 1.58-1.48 (m, 1H), 1.46 (s, 9H).
Etapa 8: 4-(aminometil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de (-)-R-tert-butilo
A una suspensión de 4-((benciloxicarbonilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo (7,01 g, 24,7 mmol) en acetato de etilo (45 ml) se añadió paladio sobre carbono al 10% (700 mg). la mezcla se hidrogenó a temperatura ambiente a presión de hidrógeno atmosférica durante 13 h. La mezcla se filtró a través de celite y la almohadilla de filtro se extrajo con acetato de etilo. Los filtrados combinados se concentraron al vacío para dar el compuesto del título como un aceite marrón (4,60 g, 93%). [a]o = -18,3° (c = 10 mg/ml, metanol, 20oC), MS (ESI) calculada para C11 H20F2N2O2 : 250,2; determinada: 195,2 [M+H - 56 (grupo t-butilo)]; 1H RMN (400 MHz, CDCls) 84.45 4.01 (m, 2H), 3.15 (dd, J= 5.2 , 12.8 Hz, 1H), 3.05-2.75 (m, 2H), 2.68 (dd, J = 6.4, 12.8 Hz, 1H) 1.96-1.74 (m, 2H), 1.58-1.48 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.40 (brs, 2H).
EJEMPLO 1.B. carbonato de 2,5-dioxopirrolidin-1-il 4-metilbencilo
un solvente mezcla compuesto de acetonitrilo (30 ml) y CH2CI2 (30 ml) se trató con 4-dimetilaminopiridina (1,20 g, 9,8 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 2 h a temperatura ambiente. Después de consumirse el alcohol, la mezcla se echó en agua (100 ml), y la fase orgánica se separó, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró al vacío. El sólido así obtenido se trituró con éter y se secó para dar el compuesto del título como un sólido blanco (3,40 g, 66%). 1H RMN (400 MHz, CDCls) 7.29 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.20 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.28 (s, 2H), 2.82 (s, 4H), 2.36 (s, 3H).
EJEMPLO 1.C. carbonato de 2,5-dioxopirrolidin-1-il 4-etilbencilo
Una mezcla de alcohol 4-etilbencílico (1,0 g, 7,3 mmol) y carbonato de bis(2,5-dioxopirrolidin-1-ilo) (1,88 g, 7,3 mmol) en un solvente mezcla compuesto de acetonitrilo (15,0 ml) y CH2Cl2 (15,0 ml) se trató con 4-dimetilaminopiridina (446 mg, 3,65 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 2 h a temperatura ambiente. Después la mezcla se diluyó con acetato de etilo, se lavó con agua, salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título como un polvo blanquecino (2,0 g, 99%) que se usó sin purificación adicional.
EJEMPLO 1.D. 4-(aminometil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de (+)-S-tert-butilo
El compuesto del título se puede preparar de una manera análoga a 4-(aminometil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de (-)-R-tert-butilo como se describe en el ejemplo 1.A, pero usando (S)-4-bencil-3-litio-2-oxazolidinona (preparada a partir de (S)-4-bencil-2-oxazolidinona y n-BuLi) en lugar del reactivo correspondiente que tiene la configuración (R).
EJEMPLO 1.1. 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxIlato de (+)-R-4-metilbencilo (E1-1.2)
Etapa 1: 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo
Una mezcla agitada de 4-(aminometil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de (-)-R-tert-butilo (230 mg, 0,92 mmol), 8-cloro-[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazina (127 mg, 0,83 mmol) y DIPEA (0,30 ml, 1,8 mmol) en n-BuOH (5 ml) se calentó a 95°C en nitrógeno durante 13 h. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (acetato de etilo/hexano = 1/1) para dar el compuesto del título como un polvo blanco (210 mg, 62%). MS (ESI) calculada para C16H22F2N6O2: 368,2; determinada: 369,1 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CDCla) 88.72 (s, 1H), 7.41 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.50-6.45
(m, 1H), 4.47-4.09 (m, 2H), 4.02-3.96 (m, 1H), 3.79-3.72 (m, 1H), 3.09-2.69 (m, 2H), 2.45-2.29 (m, 1H), 1.92-1.87 (m, 1H), 1.68-1.58 (m, 1H), 1.47 (s, 9H).
Etapa 2: trifluoroacetato de R-N-((3,3-difluoropiperidin-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-amina
cf3co2h
A una suspensión de 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-tertbutilo (1,01 mg, 2,72 mmol) en diclorometano (15 ml) se añadió TFA (3 ml). La solución se agitó después a temperatura ambiente durante 30 min. La mezcla de reacción resultante se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título como un residuo amarillo que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. MS (ESI) calculada para C11 H14F2N6 : 268,1; determinada: 269,1 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 89.26 (s, 1H), 7.87 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.16-4.05 (m, 1H), 3.82-3.75 (m, 2H), 3.52-3.46 (m, 2H), 3.20-3.13 (m, 1H), 2.92-2.76 (m, 1H), 2.36-2.26 (m, 1H), 1.95-1.87 (m, 1H).
Etapa 3: 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de (+)-R-4-metilbencilo
A una solución agitada de trifluoroacetato de R-N-((3,3-difluoropiperidin-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-amina de la etapa previa (aprox. 2,72 mmol) y trietilamina (2,1 ml, 15 mmol) en acetonitrilo (20 ml) se añadió carbonato de 2,5-dioxopirrolidin-1 -il-4-metilbencilo (750 mg, 2,85 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. Después la mezcla se diluyó con acetato de etilo (100 ml), se lavó con agua, salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (DCM/MeOH = 35/1) para dar el compuesto del título como un polvo blanquecino (840 mg, 75%). [a]o= 13,5° (c=10 mg/ml, MeOH, 20oC). HPLC pureza quiral >99 % ee (CHIRALpAkAD-H 4.6*150mm, 5um; Fase móvil: Hexano: Isopropanol = 80:20; tr = 6,88 min). MS (ESI) calculada para C20H22F2N6O6: 416,2; determinada: 417,5 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 89.11 (s, 1H), 7.71 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.19 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.11 (s, 2H), 4.38-4.26 (m, 1H), 4.18-4.14 (m, 1H), 4.01 (dd, J = 5.2, 13.6 Hz, 1H), 3.62 (dd, J = 8.8, 13.6 Hz, 1H), 3.29-3.11 (m, 1H), 3.03-2.89 (m, 1H), 2.65-2.50 (m, 1H), 2.35 (s, 3H), 2.00-1.94 (m, 1H), 1.62-1.52 (m, 1H).
EJEMPLO 1.1a. 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-4-metilbencilo metanosulfonato (E1-1.2a)
A una solución agitada de 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de (+)-R-4-metilbencilo (1,8 g, 4,32 mmol) en 30 ml de DCM/MeOH (1/1) se añadió ácido metanosulfónico (420 mg, 4,32
mmol). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. El solvente se evaporó, y el sólido así obtenido se trituró con éter (25 ml) para dar el compuesto del título como un sólido blanco (1,90 g, 85%). MS (ESI) calculada para C20H22F2N6O6: 416,2; determinada: 417,5 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 6 9.33 (s, 1H), 7.96 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.19 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.12 (s, 2H), 4.47-4.33 (m, 1H), 4.27-4.21 (m, 1H), 4.07-3.99 (m, 1H), 3.75-3.65 (m, 1H), 3.30-3.14 (m, 1H), 3.08-2.92 (m, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.70 2.60 (m, 1H), 2.35 (s, 3H), 2.08-2.00 (m, 1H), 1.67-1.56 (m, 1H).
EJEMPLO 1.2. 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de (±)-4-metilbencilo (C-1.2)
Etapa 1: 2-(1-bencil-3,3-difluoropiperidin-4-ilideno)acetato de metilo
A una solución agitada de 1-bencil-3,3-difluoropiperidina-4,4-diol (10,9 g, 44,8 mmol) en tolueno (350 ml) se añadió (trifenilfosforanilideno)acetato de metilo (18,0 g, 52 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró al vacío y se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc/hexano = 1/6) para dar el compuesto del título como un polvo blanco (10,9 g, 8 6 %). MS (ESI) calculada para C15H17 F2NO2: 281,1; determinada: 282,3 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CDCla) 6 7.36-7.27 (m, 5H), 6.19 (br s, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.64 (s, 2H), 3.14-3.11 (m, 2H), 2.79 (t, J = 11.2 Hz, 2H), 2.60 (t, J = 5.6 Hz, 2H).
Etapa 2: 2-(3,3-difluoropiperidin-4-il)acetato de metilo
A una solución agitada de 2-(1-bencil-3,3-difluoropiperidin-4-ilideno)acetato de metilo (10,9 g, 39 mmol) en MeOH (200 ml) se añadió Pd/C al 10% (1,0 g, 10%). La mezcla de reacción se purgó con H2 tres veces, y se hidrogenó a temperatura ambiente a presión atmosférica. Después de consumirse el material de partida, la mezcla se filtró a través de celite y la almohadilla de filtro se extrajo con MeOH. Los filtrados combinados se concentraron y el residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc/hexano = 1/6) para dar el compuesto del título como un aceite transparente (5,30 g, 70%). MS (ESI) calculada para C8H13F2NO2: 193,1; determinada: 194,4 [M+H]. 1HRMN (400 MHz, CDCla) 6 3.67 (s, 3H), 3.20-3.11 (m, 1H), 3.03-2.99 (m, 1H), 2.83-2.70 (m, 2H), 2.66-2.56 (m, 1H), 2.46 2.29 (m, 1H), 2.25-2.19 (m, 1H), 1.90-1.82 (m, 1H), 1.64 (br s, 1H), 1.45-1.34 (m, 1H).
Etapa 3: 3,3-difluoro-4-(2-metoxi-2-oxoetil)piperidina-1-carboxilato de 4-metilbencilo
A una solución agitada de p-tolilmetanol (1,5 g, 12 mmol) en DMSO (20 ml) se añadió CDI (1,9 g, 11 mmol) a temperatura ambiente en una atmósfera de N2. La mezcla se agitó durante 1 h y se añadió 2-(3,3-difluoropiperidin-4il)acetato de metilo (2,0 g, 10 mmol) en DMSO (10 ml) a temperatura ambiente. La mezcla se calentó a 50°C durante la noche, se dejó enfriar a temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc. La fase orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El concentrado se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc/hexano = 1/6) para dar el compuesto del título como un aceite transparente (1,5 g, 43%). 1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 7.26 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.17 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.09 (br s, 2H), 4.64 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.54-4.06 (m, 2H), 3.69 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 3.12-2.73 (m, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.29-2.22 (m, 1H), 1.92-1.65 (m, 1H), 1.59 (s, 3H).
Etapa 4: ácido 2-(3,3-difluoro-1-((4-metilbenciloxi)carbonil)piperidin-4-il)acético
A una solución agitada de 3,3-difluoro-4-(2-metoxi-2-oxoetil)piperidina-1-carboxilato de 4-metilbencilo (1,5 g, 4,4 mmol) en THF (20 ml) se añadió NaOH acuoso (1 M, 20 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 h y se extinguió con HCl 1 N con enfriamiento en un baño de agua-hielo. La mezcla se concentró y se extrajo con acetato de etilo. La fase de acetato de etilo se lavó con agua, salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar el compuesto del título como un sólido blanco (650 mg, 46%). 1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 7.25 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.16 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.08 (s, 2H), 4.16 (br s, 2H), 2.91-2.71 (m, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.31-2.26 (m, 1H), 2.01-1.88 (m, 1H), 1.80-1.69 (m, 1H), 1.25-1.14 (m, 2H).
Etapa 5: 4-(aminometil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de 4-metilbencilo
A una solución agitada de ácido 2-(3,3-difluoro-1-((4-metilbenciloxi)carbonil)piperidin-4-il)acético (650 mg, 1,98 mmol) en tolueno (3 ml) se añadió trietilamina (93 mg, 1,0 mmol) y DPPA (187 mg, 2,98 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 70°C durante 1 h. Se añadió una mezcla de dioxano (3 ml) y NaOH acuoso 1 M (3 ml) y la mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente. La mezcla se concentró a presión reducida y se diluyó con EtOAc. La fase orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró. El residuo se absorbió en diclorometano y se filtró. El filtrado se concentró para dar producto crido como un aceite amarillo (600 mg). MS (ESI) calculada para C15H20F2N2O2: 298,2; determinada: 299,2 [M+H].
Etapa 6: 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de (±)-4-metilbencilo
Una mezcla de 4-(aminometil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de 4-metilbencilo crudo (600 mg, 2,0 mmol), 8-cloro-[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazina (360 mg, 2,0 mmol) y DIPEA (0,76 ml, 4,0 mmol) en alcohol butílico (10 ml) se calentó a 130°C durante la noche. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El concentrado se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (acetato de etilo al 100%) para dar el compuesto del título como un polvo gris claro (150 mg, 18%). MS (ESI) calculada para C20H22F2N6O2: 416,2; determinada: 417,3 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 89.16 (s, 1H), 7.77 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.17 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.09 (s, 2H), 4.33 (br s, 1H), 4.19-4.15 (m, 1H), 4.05-3.95 (m, 1H), 3.72-3.58 (m, 1H), 3.25-2.90 (m, 2H), 2.67-2.51 (m,1H), 2.33 (s, 3H), 1.99-1.93 (m, 1H), 1.62-1.52 (m, 1H).
EJEMPLO 1.3. 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de (-)-S-4-metilbencilo (E2-1.2)
Se separó 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de (±)-4-metilbencilo por HPLC quiral [Ch IrAl PAKAD-H4.6*150it it , 5um. Fase móvil: A: Hexanos B: (Etanol/Metanol=2:1)=70:30] para dar los respectivos enantiómeros puros, eluyendo 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de (+)-R-4-metilbencilo primero (tr = 7,065 min) seguido por 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de (-)-S-4-metilbencilo (tr= 9,160 min).
4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de (+)-R-4-metilbencilo. CHIRALPAKAD tr = 7,065 min a20D = 13,5° (c=10 mg/ml, MeOH).
4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de (-)-S-4-metilbencilo CHIRALPAKAD tr= 9,160 min a20D = -12,0° (c=10 mg/ml, MeOH).
EJEMPLO. 1.4. 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-5-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato (E1-2.2)
Etapa 1: 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-5-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo
Una mezcla de 4-(aminometil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo (300 mg, 1,20 mmol), 5-bromo-[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazina (356 mg, 1,80 mmol) y DIPEA (0,42 ml, 2,40 mmol) en NMP (9 ml) se calentó a 130°C con agitación durante la noche. La solución naranja se dejó enfriar a temperatura ambiente y se diluyó con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío. El concentrado se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (hexano/acetato de etilo = 1/3) para dar el compuesto del título como un polvo amarillo (210 mg, 48%). 1H RMN (400 MHz, CDCla) 89.25 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 6.17 6.01 (m, 1H), 4.51-4.17 (m, 2H), 3.93-3.84 (m, 1H), 3.52-3.44 (m, 1H), 3.11-2.71 (m, 2H), 2.52-2.37 (m, 1H), 2.03-1.92 (m, 1H), 1.73-1.63 (m, 1H), 1.48 (s, 9H).
Etapa 2: trifluoroacetato de R-N-((3,3-difluoropiperidin-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-5-amina
c f 3c o 2 h
A una solución de 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-5-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo (256 mg, 0,69 mmol) en diclorometano (5 ml) se añadió TFA (2 ml) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 30 min, la mezcla se concentró para dar el compuesto del título como un aceite amarillo que se usó directamente como sal cruda en la siguiente etapa. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 89.38 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 3.99-3.92 (m, 1H), 3.84-3.75 (m, 1H), 3.57-3.46 (m, 3H), 3.18-3.11 (m, 1H), 2.83-2.69 (m, 1H), 2.40-2.33 (m, 1H), 1.92-1.81 (m, 1H).
Etapa 3: 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-5-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-4-metilbencilo
A una solución de carbonato de 2,5-dioxociclopentil 4-metilbencilo (201 mg, 0,76 mmol) en MeCN (5 ml) se añadió trifluoroacetato de R-N-((3,3-difluoropiperidin-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-5-amina (470 mg, 0,69 mmol) y trietilamina (0,32 ml, 2,30 mmol) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 1 h, la mezcla se diluyó con EtOAc. La fase orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío. El concentrado se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (DCM/MeOH = 40/1) para dar el compuesto del título como un polvo amarillo (126 mg, rendimiento de dos etapas 43,6%). MS (ESI) calculada para C20H22F2N6O2: 416,2; determinada: 417,5 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 89.33 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 7.24 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.23 (s, 1H), 7.16 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.40-4.29 (m, 1H), 4.23-4.14 (m, 1H), 3.86 (dd, J = 4.8 and 14.4 Hz, 1H), 3.41 (dd, J = 4.8 and 14.4 Hz, 1H), 3.30-2.15 (m, 1H), 3.05-2.88 (m, 1H), 2.61-2.47 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.10-2.00 (m, 1H), 1.65-1.53 (m, 1H).
EJEMPLO 1.4a. 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-5-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-4-metilbencilo metanosulfonato (E1-2.2a)
A una solución 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-5-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-4-metilbencilo (127 mg, 0,31 mmol) en MeOH (3 ml) se añadió ácido metanosulfónico (29 mg, 0,30 mmol). Después de agitar durante 1 h a temperatura ambiente, la mezcla se concentró para dar el compuesto del título como un polvo blanco (131 mg, 84%). MS (ESI) calculada para C20H22F2N6O2: 416,2; determinada: 417,5 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 89.58 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 7.70 (s, 1H),7.24 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.17 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.45-4.30 (m, 1H), 4.24-4.18 (m, 1H), 3.95 (dd, J = 5.2 y 14.0 Hz, 1H), 3.57 (dd, J = 8.0 y 14.0 Hz, 1H), 3.26-2.90 (m, 2H), 2.70 (s, 3H), 2.64-2.51 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.11-2.02 (m, 1H), 1.67-1.54 (m, 1H).
EJEMPLO 1.5. 4-(([1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de (+)-R-4-metilbencilol (E1-9.2)
Etapa 1: 4-(([1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo
A una suspensión agitada de 2-bromo-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridina (500 mg, 2,53 mmol) en alcohol t-butílico (15 ml) se añadieron 4-(aminometil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo (758 mg, 3,03 mmol), precatalizador Brettphos (75 mg), Brettphos (75 mg) y Cs2CO3 (2,25 g, 5,06 mmol) a temperatura ambiente en nitrógeno. La mezcla de reacción se calentó a 100°C durante la noche. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente, se diluyó con DCM y se filtró a través de celite. El filtrado se lavó con agua, salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (hexanos al 50% en EtOAc) para dar el compuesto del título como un polvo blanquecino (298 mg, 32%). MS (ESI) calculada para C17 H23F2N5O2: 367,2; determinada: 368,5 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 88.45 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.53-7.48 (m, 1H), 7.37 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.96-6.92 (m, 1H), 4.28-4.14 (m, 1H), 4.12-4.04 (m, 1H), 3.77 (dd, J= 14, 4.8Hz, 1H), 3.36-3.33 (m, 1H), 3.18 3.07 (m, 1H), 2.92-2.84 (m, 1H), 2.48-2.35 (m, 1H), 1.98-1.91 (m, 1H), 1.56-1.48 (m, 1H ), 1.47 (s, 9H).
Etapa 2: 4-(([1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de (+)-R-4-metilbencilo
A una solución de 4-(([1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo (230 mg, 0,63 mmol) en DCM (6 ml) se añadió TFA (2 ml). La solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. El solvente se evaporó para dar el intermedio de sal del ácido trifluoroacético de R-N-((3,3-difluoropiperidin-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amina como un aceite amarillo (260 mg) que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. A una solución agitada de la sal trifluoroacetato de R-N-((3,3-difluoropiperidin-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridin-2-amina (260 mg) en acetonitrilo (5 ml) se añadieron trietilamina (0,26 ml) y carbonato de 2,5-dioxopirrolidin-1-il 4-metilbencilo (181 mg, 0, 69 mmol). Después de agitar durante 1 h a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo se absorbió en EtOAc. La solución se lavó con agua, salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (hexanos al 50% en EtOAc) para dar el compuesto del título como un polvo blanco (234 mg, 90%). [a]o= 26,2° (c=7,5 mg/ml, MeOH, 28oC). MS (ESI) calculada para C21H23F2N5O2 : 415,2; determinada: 416,6 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 88.44 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.52-7.48 (m, 1H), 7.36 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.17 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.95-6.92 (m, 1H), 5.12-5.06 (m, 2H), 4.34-4.22 (m, 1H), 4.16-4.11 (m, 1H), 3.77 (dd, J = 14, 4.8 Hz, 1H), 3.36-3.31 (m, 1H), 3.25-3.09 (m, 1H), 3.00-2.89 (m, 1H), 2.51-2.38 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.00 1.92 (m, 1H), 1.57-1.46 ( m, 1H ).
EJEMPLO 1.6. (+)-R-4-metilbencil-4-((1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato (E1-8.2)
Etapa 1: 4-((1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo
Boc 
Una mezcla de 4-(aminometil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo (440 mg, 1,60 mmol), 6-cloro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (272 mg, 1,76 mmol) y DIPEA (0,84 ml, 4,80 mmol) en i-PrOH (10 ml) se calentó durante la
noche a 85°C. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El concentrado se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (hexano/acetato de etilo = 1/3) para dar el compuesto del título como un polvo amarillo (510 mg, 86%). MS (ESI) calculada para C16H22F2N6O2: 368,2; determinada: 369,4 [M+H].
1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 10.88 (brs, 1H), 8.78 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 5.77-5.67 (m, 1H), 4.50-4.00 (m, 2H), 3.90 3.84 (m, 1H), 3.67-3.58 (m, 1H), 3.07-2.68 (m, 2H), 2.38-2.23 (m, 1H), 1.91-1.85 (m, 1H), 1.62-1.56 (m, 1H), 1.46 (s, 9H).
Etapa 2: clorhidrato de R-N-((3,3-difluoropiperidin-4-il)metil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-amina
A una solución de 4-((1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo (510 mg, 1,39 mmol) en DCM (4 ml) se añadió HCl en MeOH (10 ml, 2,0 M) a temperatura ambiente. Después de agitar durante la noche, la mezcla se concentró para dar el compuesto del título como un polvo amarillo pálido (504 mg, 100%) que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. MS (ESI) calculada para C11 H14F2N6 : 268,1; determinada: 269,2 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 89.09 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 4.04 (dd, J = 5.2, 14.0 Hz, 1H), 3.81-3.73 (m, 1H), 3.63-3.46 (m, 3H), 3.21-3.13 (m, 1H), 2.83-2.69 (m, 1H), 2.33-2.24 (m, 1H), 1.90-1.79 (m, 1H).
Etapa 3: (+)-R-4-metilbencil-4-((1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato
A una solución de p-tolilmetanol (263 mg, 2,15 mmol) en DMSO (4 ml) se añadió CDI (349 mg, 2,15 mmol) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 1 h, se añadió clorhidrato de R-N-((3,3-difluoropiperidin-4-il)metil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-amina (504 mg, 1,66 mmol). La mezcla se calentó a 80°C en una atmósfera de N2. Después de agitar durante la noche la mezcla se diluyó con EtOAc. La fase orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío. El concentrado se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (DCM/MeOH = 40/1) para dar el compuesto del título como un polvo blanco (306 mg, 49%). [a]o= 22° (c=8,5 mg/ml, DCM al 50% en MeOH, 26oC). MS (ESI) calculada para C20H22F2N6O2: 416,2; determinada: 417,4 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 88.77 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.24 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.17 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.09 (s, 2H), 4.33-4.23 (m, 1H), 4.16-4.10 (m, 1H), 3.87 (dd, J = 5.2 and 14.0 Hz, 1H), 3.47-3.39 (m, 1H), 3.25-3.10 (m, 1H), 3.02 2.87 (m, 1H), 2.54-2.40 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 1.95-1.88 (m, 1H), 1.58-1.47 (m, 1H).
EJEMPLO 1.6a. 4-((1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de (+)-R-4-metibencilo metanosulfonato (E1-8.2a)
A una solución de 4-((1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-4-metilbencilo (184 mg, 0,44 mmol) en DCM/MeOH (12 ml/4 ml) se añadió ácido metanosulfónico (43 mg, 0,44 mmol). Después de agitar 1 h a temperatura ambiente, la mezcla se concentró para dar el compuesto del título como un polvo blanco (191 mg, 84%). [a]p= 11,2° (c=10 mg/ml, DCM al 50% en MeOH, 26oC). MS (ESI) calculada para C20H22F2N6O2: 416,2; determinada: 417.5 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 89.03 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.24 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.17 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.09 (s, 2H), 4.37-4.27 (m, 1H), 4.20-4.13 (m, 1H), 3.94 (dd, J = 5.2 y 14.0 Hz,
1H), 3.58-3.53 (m, 1H), 3.24-3.10 (m, 1H), 3.03-2.92 (m, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.56-2.44 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 1.99-1.90 (m, 1H), 1.61-1.50 (m, 1H).
EJEMPLO 1.7. 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-4-clorobencilo (E1-1.3)
A una solución agitada de alcohol 4-clorobencílico (115 mg, 0,81 mmol) y bis-(2,5-dioxopirrolidin-1-il)carbonato (207 mg, 0,81 mmol) en acetonitrilo (3,0 ml) y CH2O 2 (3,0 ml) se añadió 4-dimetilaminopiridina (49 mg, 0,40 mmol) y la mezcla se agitó durante 2 h a temperatura ambiente. Se añadieron sal trifluoroacetato de N-((3,3-difluoropiperidin-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-amina (280 mg, 0,73 mmol) en MeCN (2 ml) y TEA (0,3 ml, 2,2 mmol) y la mezcla resultante se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó después con acetato de etilo (5 ml) y la fase orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (DCM/MeOH = 50/1) para dar el compuesto del título como un polvo amarillo pálido (190 mg, 59%). MS (ESI) calculada para C1gH-igClF2N6O2 : 436,1, 438,1; determinada: 437,4, 439,4 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 8 9.08 (s, 1H), 7.69 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.39-7.33 (m, 4H), 7.32 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 5.16-5.09 (m, 2H), 4.37-4.26 (m, 1H), 4.19-4.11 (m, 1H), 4.01-3.95 (m, 1H), 3.65-3.57 (m, 1H), 3.27-3.07 (m, 1H), 3.07-2.88 (m, 1H), 2.65-2.47 (m, 1H), 1.99-1.91 (m, 1H), 1.63-1.49 (m, 1H).
EJEMPLO 1.7a. 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-4-clorobencilo metanosulfonata (E1-1.3a)
CH3SO3H
A una solución agitada de 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-4-clorobencilo (99 mg, 0,23 mmol) en MeOH (2,0 ml) se añadió CH3SO3H (22 mg, 0,23 mmol) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 30 min, la mezcla se concentró para dar el compuesto del título como un polvo blanquecino (116 mg, 96%). MS (ESI) calculada para C19H19C F 2N6O2: 436,1, 438,4; determinada: 437,4, 439,4[M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 8 9.31 (s, 1H), 7.94 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.36 (s, 4H), 7.25 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 5.19-5.09 (m, 2H), 4.4 4 -4 . 3 3 (m, 1H), 4.26-4.18 (m, 1H), 4.06-3.96 (m, 1H), 3.73-3.62 (m, 1H), 3.29-3.14 (m, 1H), 3.11-2.91 (m, 1H), 2.70 (s, 3H), 2.68-2.58 (m, 1H), 2.07-1.99 (m, 1H), 1.66-1.53 (m, 1H).
EJEMPLO 1.8. 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-4-fluorobencilo (E1-1.4)
A una solución agitada de alcohol 4-fluorobencílico (300 mg, 2,38 mmol) en DCM-MeCN (1:1 v/v, 10 ml) se añadieron carbonato de N,N'-disuccinimidilo (610 mg, 2,38 mmol) y DMAP (145 mg, 1,19 mmol) a temperatura ambiente. Se
obtuvo gradualmente una solución transparente, y la mezcla se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. Se añadió después trietilamina (1,0 ml, 7,1 mmol) seguido por la sal TFA de R-N-((3,3-difluoropiperidin-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-amina (780 mg, 2,14 mmol) en acetonitrilo (3.0 ml). La mezcla resultante se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente y la mezcla se concentró al vacío. El residuo se disolvió en acetato de etilo y la fase orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío. El concentrado se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (acetato de etilo) para dar el compuesto del título como un polvo blanquecino (446 mg, 50%). MS (ESI) calculada para C19H19F3N6O2: 420,2; determinada: 421,5 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 8 8.71 (s, 1H), 7.40 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.36-7.31 (m, 3H), 7.04 (t, J=8.4Hz, 2H), 6.51-6.51 (m, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.54-4.10 (m, 2H), 4.04-3.96 (m, 1H), 3.82-3.72 (m, 1H), 3.14-2.96 (m, 1H), 2.94-2.78 (m, 1H), 2.49-2.33 (m, 1H), 1.95-1.87 (m, 1H), 1.71-1.61 (m, 1H).
EJEMPLO 1.8a. 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-4-fluorobencilo metanosulfonato (E1-1.4a)
A una solución agitada de 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-4-fluorobencilo (446 mg, 1,06 mmol) en DCM/MeoH ( 6 ml, 1 :1 ) se añadió ácido metilsulfónico ( 1 0 2 mg, 1,06 mmol) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 30 min, la mezcla se concentró. El sólido obtenido se lavó con éter para dar el compuesto del título como un sólido marrón pálido (510 mg, 93%). MS (ESI) calculada para C19H19F3N6O2 : 420,2; determinada: 421,5 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 8 9.31 (s, 1H), 7.94 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.43-7.37 (m, 2H), 7.25 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.09 (t, J=8.8 Hz, 2H), 5.13 (s, 2H), 4.43-4.32 (m, 1H), 4.24-4.17 (m, 1H), 4.06-3.95 (m, 1H), 3.73-3.63 (m, 1H), 3.32-3.10 (m, 1H), 3.09-2.92 (m, 1H), 2.70 (s, 3H), 2.68-2.58 (m, 1H), 2.06-1.98 (m, 1H), 1.65 1.53 (m, 1H).
EJEMPLO 1.9. 3,3-difluoro-4-((pirimidin-2-ilamino)metil)-piperidina-1-carboxilato de (+)-R-4-metilbencilo (E1-22.2)
Etapa 1: 3,3-difluoro-4-((pirimidin-2-ilamino)metil)piperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo
Una solución de 2-cloropirimidina (206 mg, 1,8 mmol), 4-(aminometil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-tertbutilo (500 mg, 1,8 mmol) y DIPEA (0,63 ml, 3,6 mmol) en n-BuOH (5 ml) se calentó a 95°C en un tubo sellado durante la noche con agitación. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en acetato de etilo y la fase orgánica se lavó con agua y salmuera. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio, y se concentró al vacío. El concentrado se trató con hexano y acetato de etilo (1,5 ml 5 ml). La suspensión resultante se filtró para dar el compuesto como un polvo blanquecino (420 mg, 71%). MS (ESI) calculada para C15H22F2N4O2: 328,2; determinada: 329,3[M+H]. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 8 8.27 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 6.55 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 5.35-5.29 (m, 1H), 4.45-4.03 (m, 2H), 3.82-3.75 (m, 1H), 3.57-3.47 (m, 1H), 3.06-2.67 (m, 2H), 2.31-2.16 (m, 1H), 1.88-1.79 (m, 1H), 1.62-1.52 (m, 1H), 1.46 (s, 9H).
Etapa 2: clorhidrato de R-N-((3,3-difluoropiperidin-4-il)metil)pirimidin-2-amina
A una solución de 3,3-difluoro-4-((pirimidin-2-ilamino)metil)piperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo (410 mg, 1,24 mmol) en diclorometano (2 ml) se añadió HCl metanólico 2 N (7 ml) a temperatura ambiente. Después de agitar durante la noche a temperatura ambiente, la mezcla se concentró al vacío para dar el compuesto del título (285 mg, 76%) que se usó directamente en la siguiente etapa. MS (ESI) calculada para C10H14F2N4 : 228,1; determinada: 229,3[M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 8 8.95-8.43 (m, 2H), 7.10 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.03 (dd, J = 14.0, 5.6 Hz, 1H), 3.82-3.74 (m, 1H), 3.68 (dd, J = 14.0, 5.6 Hz, 1H), 3.59-3.48 (m, 2H), 3.23-3.15 (m, 1H), 2.82-2.67 (m, 1H), 2.34-2.24 (m, 1H), 1.91 1.78 (m, 1H).
Etapa 3: 3,3-difluoro-4-((pirimidin-2-ilamino)metil)-piperidina-1-carboxilato de (+)-R-4-metilbencilo
A una solución agitada de alcohol 4-metilbencílico (199 mg, 1,62 mmol) en DMSO (5 ml) se añadió CDI (263 mg, 1,62 mmol). Después de agitar durante 1 h a temperatura ambiente, se añadió diclorhidrato de (3,3-difluoropiperidin-4-ilmetil)pirimidin-2-amina (285 mg, 0,95 mmol), y la mezcla de reacción se agitó durante la noche a 80°C. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo, y la fase orgánica se lavó con agua y salmuera. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio, y se concentró al vacío. El concentrado se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (hexano/EtOAc = 1:1) para dar el compuesto como un polvo blanco (135 mg, 38%). [a]o= 10,5° (c=3,7 mg/ml, MeOH, 26oC).MS (ESI) calculada para C19H22F2N4O2 : 376,2; determinada: 377,4 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 8.27 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 7.25 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.17 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.55 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 5.37-5.26 (m, 1H), 5.16-5.05 (m, 2H), 4.57-4.10 (m, 2H), 3.84-3.74 (m, 1H), 3.59-3.47 (m, 1H), 3.12-2.76 (m, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.32-2.17 (m, 1H), 1.92-1.78 (m, 1H), 1.62-1.52 (m, 1H).
EJEMPLO 1.9a. 3,3-difluoro-4-((pirimidin-2-ilamino)metil)piperidina-1-carboxilato de R-4-metilbencilo metanosulfonato (E1-22.2a)
A una solución agitada de 3,3-difluoro-4-((pirimidin-2-ilamino)metil)-piperidina-1-carboxilato de (+)-R-4-metilbencilo (123 mg, 0,33 mmol) en MeOH (2,0 ml) se añadió CH3SO3H (32 mg, 0,33 mmol) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 30 min, la mezcla se concentró para dar el compuesto del título como un polvo blanquecino (150 mg, 97%). MS (ESI) calculada para C19H22F2N4O2: 376,2; determinada: 377,4[M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 8 8.90 8.40 (m, 2H), 7.24 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.17 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.00 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 5.09 (s, 2H), 4.39-4.25 (m, 1H), 4.21-4.12 (m, 1H), 3.91 (dd, J=5.6 y 14.0 Hz, 1H), 3.57 (dd, J=7.6 y 14.0 Hz, 1H), 3.27-3.08 (m, 1H), 3.06-2.87 (m, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.54-2.39 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 1.97-1.89 (m, 1H), 1.60-1.48 (m, 1H).
EJEMPLO 1.10. 3,3-difluoro-4-((pirazin-2-ilamino)metil)piperidina-1-carboxilato de R-4-metilbencilo (E1-21.2)
Etapa 1: 3,3-difluoro-4-((pirazin-2-ilamino)metil)piperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo
Una mezcla de 4-(aminometil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo (200 mg, 0,80 mmol), 2-bromopirazina (140 mg, 0,88 mmol) y DIPEA (0, 42 ml, 2,40 mmol) en NMP ( 6 ml) se calentó con agitación durante la noche a 130°C. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente, y se diluyó con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío. El concentrado se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (hexano/acetato de etilo = 1 / 1 ) para dar el compuesto del título como un aceite amarillo (196 mg, 50%). MS (ESI) calculada para C15H22F2N4O2: 328,2; determinada: 329,2[M+H]. 1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 7.98 (dd, J = 2.8 y 1.2 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.80-4.70 (m, 1H), 4.45-4.10 (m, 2H), 3.76-3.69 (m, 1H), 3.57-3.49 (m, 1H), 3.04-2.70 (m, 2H), 2.31-2.16 (m, 1H), 1.87-1.79 (m, 1H), 1.63 1.53 (m, 1H), 1.47 (s, 9H).
Etapa 2: 3,3-difluoro-4-((pirazin-2-ilamino)metil)piperidina-1-carboxilato de R-4-metilbencilo
A una solución de 3,3-difluoro-4-((pirazin-2-ilamino)metil)piperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo (196 mg, 0,59 mmol) en DCM (3 ml) se añadió TFA (2 ml) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 30 min, la mezcla se concentró para dar el producto crudo trifluoroacetato de R-N-((3,3-difluoropiperidin-4-il)metil)pirazin-2-amina como un aceite amarillo que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. A una solución del trifluoroacetato de R-N-((3,3-difluoropiperidin-4-il)metil)pirazin-2-amina crudo en MeCN ( 6 ml) se añadieron trietilamina (0,8 ml, 5,8 mmol) y carbonato de 2,5-dioxociclopentil 4-metilbencilo (386 mg, 1,44 mmol) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 1 h, la mezcla se diluyó con EtOAc. La fase orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío. El concentrado se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 100%) para dar el compuesto del título como un aceite amarillo (167 mg, 52%). MS (ESI) calculada para C19H22F2N4O2: 376,2; determinada: 377,5 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 8 7.97 (dd, J = 2.8 y 1.2 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.17 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.09 (s, 2H), 4.31-4.21 (m, 1H), 4.17-4.07 (m, 1H), 3.76 (dd, J = 14.0 y 5.2 Hz, 1H), 3.35 (dd, J = 14.0 y 5.2 Hz, 1H), 3.27-2.85 (m, 2H), 2.44-2.34 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 1.96-1.85 (m, 1H), 1.54-1.43 (m, 1H).
EJEMPLO 1.10a. 3,3-difluoro-4-((pirazin-2-ilamino)metil)piperidina-1-carboxilato de R-4-metilbencilo metanosulfonato (E1-21.2a)
A una solución de 3,3-difluoro-4-((pirazin-2-ilamino)metil)piperidina-1-carboxilato de R-4-metilbencilo (118 mg, 0,31 mmol) en MeOH (2 ml) se añadió ácido metanosulfónico (27 mg, 0,28 mmol). Después de agitar durante 1 h a
temperatura ambiente, la mezcla se concentró para dar el compuesto del título como un polvo amarillo (127 mg, 87%). MS (ESI) calculada para C19H22F2N4O2 : 376,2; determinada: 377,4 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 8 8 .6 (dd, J = 2.8 y 1.2 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.85(d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.17 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.09 (s, 2H), 4.40-4.27 (m, 1H), 4.22-4.14 (m, 1H), 3.85 (dd, J = 14.0 y 5.2 Hz, 1H), 3.49 (dd, J = 14.0 y 5.2 Hz, 1H), 3.30-2.90 (m, 2H), 2.72 (s, 3H), 2.55-2.36 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 1.99-1.89 (m, 1H), 1.60-1.47 (m, 1H).
EJEMPLO 1.11. 3,3-difluoro-4-((5-metilpirazin-2-ilamino)-metil)piperidina-1-carboxilato de R-4-metilbencilo (E1-21.26)
Etapa 1: 3,3-difluoro-4-((5-metilpirazin-2-ilamino)metil)-piperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo
A una solución de 4-(aminometil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo (188 mg, 0,75 mmol) en dioxano (3 ml) se añadieron 2-cloro-5-metilpirazina (100 mg, 0,78 mmol), Pd2(dba)3-CHCh (21 mg, 0,02 mmol), Xantphos (23 mg, 0,04 mmol) y Cs2CO3 (329 mg, 1,0 mmol). La mezcla se calentó a 90°C en N2. Después de agitar durante la noche, la solución de reacción se trató con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (acetato de etilo/hexano = 1/1) para dar el compuesto del título como un polvo amarillo pálido (115 mg, 45%). MS (ESI) calculada para C16H24F2N4O2: 342,2; determinada: 343,4[M+H]. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 8 7.86 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 4.63-4.53 (m, 1H), 4.48-4.04 (m, 2H), 3.73-3.67 (m, 1H), 3.52-3.45 (m, 1H), 3.00-2.89 (m, 1H), 2.79-2.70 (m, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.28-2.15 (m, 1H), 1.85-1.80 (m, 1H), 1.47 (s, 9H).
Etapa 2: 3,3-difluoro-4-((5-metilpirazin-2-ilamino)-metil)piperidina-1-carboxilato de R-4-metilbencilo
A una solución de 3,3-difluoro-4-((5-metilpirazin-2-ilamino)metil)-piperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo (115 mg, 0,34 mmol) en DCM (3 ml) se añadió TFA (1 ml) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 30 min, la mezcla se concentró para dar trifluoroacetato de R-N-((3,3-difluoropiperidin-4-il)metil)-5-metilpirazin-2-amina como un aceite amarillo que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. A una solución del trifluoroacetato de R-N-((3,3-difluoropiperidin-4-il)metil)-5-metilpirazin-2-amina crudo en MeCN (4 ml) se añadieron trietilamina (1 ml) y carbonato de 2,5-dioxociclopentil 4-metilbencilo (98 mg, 0,37 mmol) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 1 h, la mezcla se diluyó con EtOAc. La fase orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío. El concentrado se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (acetato de etilo/hexano = 2/1) para dar el compuesto del título como un polvo amarillo pálido (61 mg, 46%). MS (ESI) calculada para C20H24F2N4O2: 390,2; determinada: 391,2 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 8 7.86 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.24 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.17 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.66-4.60 (m, 1H), 4.49-4.16 (m, 2H), 3.73-3.67 (m, 1H), 3.51 3.44 (m, 1H), 3.07-2.95 (m, 1H), 2.87-2.79 (m, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 2.30-2.18 (m, 1H), 1.85-1.81 (m, 1H), 1.63-1.53 (m, 1H).
EJEMPLO 1.11a. 3,3-difluoro-4-((5-metilpirazin-2-ilamino)metil)-piperidina-1-carboxilato de R-4-metilbencilo metanosulfonato (E1-21.26a)
A una solución de 3,3-difluoro-4-((5-metilpirazin-2-ilamino)-metil)piperidina-1-carboxilato de R-4-metilbencilo (54 mg, 0,138 mmol) en DCM (2 ml) se añadió ácido metilsulfónico en MeOH (0,14 ml, 1,0 M, 0,14 mmol). Después de agitar durante 15 min a temperatura ambiente, la mezcla se concentró para dar el compuesto del título como un polvo amarillo pálido (127 mg, 87%). MS (ESI) calculada para C20H24F2N4O2 : 390,2; determinada: 391,2 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 88.22 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.24 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.17 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.09 (s, 2H), 4.37-4.26 (m, 1H), 4.19-4.15 (m, 1H), 3.82 (dd, J = 14.0 y 5.6 Hz, 1H), 3.46 (dd, J = 14.0 y 5.6 Hz, 1H), 3.30-3.12 (m, 1H), 3.02-2.91 (m, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.48 (s, 3H), 2.46-2.36 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 1.95-1.91 (m, 1H), 1.58-1.48 (m, 1H).
EJEMPLO 1.12. 4-((1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-4-fluorobencilo (E1-8.4)
Etapa 1: trifluoroacetato de R-N-((3,3-difluoropiperidin-4-il)metil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-amina
CF3CO2H
A una solución de 4-((1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo (340 mg, 0,92 mmol) en d Cm (5 ml) se añadió TFA (3 ml) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 30 min, la mezcla se concentró para dar el compuesto del título como un aceite amarillo pálido que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Etapa 2: 4-((1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-4-fluorobencilo
A una solución de la sal trifluoroacetato de R-N-((3,3-difluoropiperidin-4-il)metil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-amina de la etapa previa (aprox. 0,92 mmol) en MeCN (5 ml) se añadió trietilamina (0,6 ml, 4,6 mmol), seguido por la adición de carbonato de 2,5-dioxopirrolidin-1-il 4-fluorobencilo (296 mg, 1,10 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. Después la mezcla se diluyó con acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (acetato de etilo/hexano = 1/1) para dar el compuesto del título como un polvo blanquecino (160 mg, 41% para dos etapas). MS (ESI) calculada para C19H19F3N6O2 : 420,2; determinada: 421,4 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 8 8.77 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.42-7.36 (m, 2H), 7.12-7.05 (m, 2H), 5.12 (s, 2H), 4.33-4.21(m, 1H), 4.16-4.10 (m, 1H), 3.86 (dd, J = 13.6 y 4.4 Hz, 1H), 3.50-3.43 (m, 1H), 3.25-2.85 (m, 2H), 2.54-2.40 (m, 1H), 1.95-1.88 (m, 1H), 1.58-1.47 (m, 1H).
EJEMPLO 1.13. 4-((1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-4-metilbencilo (E1-6.2)
Etapa 1: 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo
A una solución agitada de 4-(aminometil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo (600 mg, 2,4 mmol) en n-BuOH (5 ml) se añadieron 4-cloro-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (571 mg, 2,4 mmol) y DIPEA (0,84 ml, 4,8 mmol). La mezcla se calentó a 100°C en nitrógeno durante 13 horas. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El residuo se disolvió en acetato de etilo y la fase orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró a presión reducida. El concentrado se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (acetato de etilo/hexano = 1 / 1 ) para dar el compuesto del título como un polvo amarillo (800 mg, 80%). MS (ESI) calculada para C21H30F2N6O3: 452,2; determinada: 453,6 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 8 8.42 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 5.98-5.95 (m, 1H), 5.81-5.60 (brs, 1H), 4.49-4.09 (m, 3H), 3.99-3.87 (m, 1H), 3.83-3.76 (m, 2H), 3.06-2.67 (m, 2H), 2.63-2.53 (m, 1H), 2.40-2.23 (m, 1H), 2.16-2.08 (m, 1H), 1.96-1.92 (m, 1H), 1.93 1.54 (m, 6 H), 1.47 (s, 9H).
Etapa 2: sal diclorhidrato de R-N-((3,3-difluoropiperidin-4-il)metil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina
Se disolvió 3,3-difluoro-4-((1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ilamino)piperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo (0,80 g, 1,76 mmol) en solución de HCl metanólico (2 N, 15 ml) a temperatura ambiente. Después de agitar durante la noche, la mezcla de reacción resultante se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título como un sólido amarillo (600 mg, 99%) que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. MS (ESI) calculada para C11 H14F2N6: 268,1; determinada: 269,2 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 8 8.72 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 4.19 (dd, J = 14.0 y 5.6 Hz, 1H), 3.90 (dd, J = 14.0 y 5.6 Hz, 1H), 3.83-3.75 (m, 1H), 3.61-3.48 (m, 2H), 3.24-3.18 (m, 1H), 2.93-2.78 (m, 1H), 2.35-2.29 (m, 1H), 1.94-1.84 (m, 1H).
Etapa 3: 4-((1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-4-metilbencilo
A una solución agitada de diclorhidrato de R-N-((3,3-difluoropiperidin-4-il)metil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (400 mg, 1,17 mmol) y TEA (0,37 ml, 2,6 mmol) en una mezcla de solventes de MeCN (15 ml) y DMF (4 ml) se añadió carbonato de 2,5-dioxopirrolidin-1-il 4-metilbencilo (307 mg, 1,17 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente y después se diluyó con acetato de etilo (50 ml). La fase orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (DCM/MeOH = 35/1) para dar el compuesto del título como un polvo amarillo (250 mg, 51%). MS (ESI) calculada para C20H22F2N6O6: 416,2; determinada: 417,5 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 8 8.27 (s, 1H), 8.09
(s, 1H), 7.26 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.18 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.11 (s, 2H), 4.38-4.26 (brs, 1H), 4.18-4.12 (m, 1H), 3.99 3.95 (m, 1H), 3.67-3.61 (m, 1H), 3.28-3.10 (m, 1H), 3.03-2.89 (m, 1H), 2.60-2.44 (m, 1H), 2.35 (s, 3H), 1.96-1.93 (m, 1H), 1.60-1.49 (m, 1H).
EJEMPLO 1.13a. 4-((1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de (+)-R-4-metilbencilo metanosulfonato (E1-6.2a)
A una solución agitada de 4-((1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-4-metilbencilo (230 mg, 0,55 mmol) en DCM (3 ml) se añadió una solución de ácido metanosulfónico (53 mg, 0,55 mmol) en metanol (3 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. El solvente se evaporó, y el sólido así obtenido se trituró con éter (10 ml) y se filtró para dar el compuesto del título como un polvo amarillo (270 mg, 95%).
[a]D= 13,5 (c=10 mg/ml, MeOH, 20oC). MS (ESI) calculada para C20H22F2N6O6: 416,2; determinada: 417,5 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 8 8.55 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.26 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.19 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.11 (s, 2H), 4.41-4.29 (m, 1H), 4.23-4.15 (m, 1H), 4.11-4.06 (m, 1H), 3.84-3.78 (m, 1H), 3.26-3.14 (m, 1H), 3.07-2.91 (m, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.63-2.50 (m, 1H), 2.35 (s, 3H), 2.00-1.92 (m, 1H), 1.64-1.53 (m, 1H).
EJEMPLO 1.14. 4-((7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de (+)-R-4-metilbencilo (E1-7.2)
Etapa 1: 3,3-difluoro-4-((7-tosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)metil)piperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo
Una mezcla de 4-cloro-7-tosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (615 mg, 1,99 mmol), 4-(aminometil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-tert-butilo (600 mg, 2,39 mmol) y DIPeA (0,66 ml, 3,99 mmol) en n-BuOH ( 8 ml) se calentó a 130°C en una atmósfera de nitrógeno durante la noche. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El concentrado se repartió en acetato de etilo y agua. La fase orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (hexano/EtOAc = 3/2) para dar el compuesto del título como un polvo blanquecino (850 mg, 82%). MS (ESI) calculada para C24H29F2N5O4S: 521,2; determinada: 522,5 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 8.44 (s, 1H), 8.07 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.47 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.41 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 5.23-5.16 (m, 1H), 4.45-4.25 (m, 2H), 3.88-3.70 (m, 2H), 3.02-2.67 (m, 2H), 2.39 (s, 3H), 2.35-2.19 (m, 1H), 1.85-1.77 (m, 1H), 1.62-1.50 (m, 1H), 1.46 (s, 9H).
Etapa 2: trifluoroacetato de R-N-((3,3-difluoropiperidin-4-il)metil)-7-tosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina
A una solución de 3,3-difluoro-4-((7-tosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)metil)piperidina-1-carboxilato de R-tertbutilo (850 mg, 1,63 mmol) en DCM ( 8 ml) se añadió TFA (4 ml). La solución resultante se agitó durante 30 min a temperatura ambiente y después se concentró al vacío para dar el compuesto del título (2,19 g) que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. MS (ESI) calculada para C19H21F2N5O2S: 421,1; determinada: 422,7 [M+H].
Etapa 3: 3,3-difluoro-4-((7-tosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)metil)piperidina-1-carboxilato de R-4-metilbencilo
La sal trifluoroacetato de R-N-((3,3-difluoropiperidin-4-il)metil)-7-tosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina cruda (2,19 g, aprox. 1,6 mmol) se disolvió en acetonitrilo (9 ml), seguido por adición de trietilamina (1,2 ml, 8,16 mmol). Después se añadió carbonato de 2,5-dioxociclopentil 4-metilbencilo (515 mg, 1,95 mmol) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se concentró, y el concentrado se disolvió en acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (hexano/EtOAc = 3/2) para dar el compuesto del título como un polvo blanco (847 mg, 80%). MS (ESI) calculada para C28H29F2N5O4S: 569,2; determinada: 570.5 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 8.43 (s, 1H), 8.06 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.47 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.24 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.16 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.40 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 5.23-5.15 (m, 1H), 5.13-5.05 (m, 2H), 4.55-4.10 (m, 2H), 3.87 3.71 (m, 1H), 3.07-2.90 (m, 1H), 2.87-2.74 (m, 1H), 2.39 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 2.37-2.22 (m, 2H), 1.87-1.77 (m, 1H), 1.64-1.51 (m, 1H).
Etapa 4: 4-((7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de (+)-R-4-metilbencilo
A una solución de 3,3-difluoro-4-((7-tosil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)metil)piperidina-1-carboxilato de R-4-metilbencilo (77 mg, 1,36 mmol) en THF ( 8 ml) se añadió NaOH acuoso al 50% (2 ml). la mezcla resultante se agitó durante la noche a temperatura ambiente y se concentró al vacío para eliminar el solvente THF. La solución residual se ajustó a pH = 9 con HCl ( 6 N) con enfriamiento en baño de agua-hielo. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (hexano/acetona = 1/1) para dar el compuesto del título como un polvo marrón pálido (390 mg, 70%). [a]o= 22,5° (c=10 mg/ml, MeOH, 26oC). MS (ESI) calculada para C21H23F2N5O2: 415,2; determinada: 416,5 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CDCla) 8 10.08-9.98 (brs, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.25 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.17 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.07 (d, J=2.7 Hz, 1H), 6.37 (d, J=2.7 Hz, 1H), 5.31-5.25 (m, 1H), 5.14-5.07 (s, 2H), 4.56-4.10 (m, 2H), 3.98-3.89 (m, 1H), 3.88-3.77 (m, 1H), 3.12-2.93 (m, 1H), 2.91-2.77 (m, 1H), 2.45 2.28 (m, 1H), 2.35 (s, 3H), 1.95-1.85 (m, 1H), 1.70-1.56 (m, 1H).
EJEMPLO 1.15. 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-4-etilbencilo (E1-1.5)
A una solución del trifluoroacetato de N-((3,3-difluoropiperidin-4-il)metil)-[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-amina crudo previamente descrito (373 mg, aprox. 1,0 mmol) en MeCN (5 ml) se añadió TEA (0,7 ml, 5,05 mmol), seguido por carbonato de 2,5-dioxopirrolidin-1-il 4-etilbencilo (335,8 mg, 1,21 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con acetato de etilo y la fase orgánica se lavó con agua, salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (acetato de etilo/hexano = 1/1) para dar el compuesto del título como un polvo blanquecino (302 mg). MS (ESI) calculada para C21H24F2N6O2: 430,2; determinada: 431,4 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 8 9.08 (s, 1H), 7.69 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.19 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.37-4.26 (m, 1H), 4.19-4.11 (m, 1H), 3.98 (dd, J = 14.0 y 5.2 Hz, 1H), 3.62 (dd, J = 14.0 y 8.4 Hz, 1H), 3.27-3.07 (m, 1H), 3.07-2.88 (m, 1H), 2.64 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 2.59-2.48 (m, 1H), 1.98-1.93(m, 1H) , 1.61-1.51 (m, 1H), 1.22(t, J = 7.6 Hz, 3H).
EJEMPLO 1.15a. 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de (+)-R-4-etilbencilo metanosulfonato (E1-1.5a)
A una solución agitada de 4-(([1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-8-ilamino)metil)-3,3-difluoropiperidina-1-carboxilato de R-4-etilbencilo (302 mg, 0,70 mmol) en MeOH/DCM (4,0 ml, v/v = 1:1) se añadió una solución de CH3SO3H ( 6 8 mg, 0,70 mmol) en metanol (1 ml) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 30 min, la mezcla se concentró para dar el producto como polvo blanquecino (335 mg, 90,6%). [a]o= 2,4° (c=10 mg/ml, MeOH, 23oC). MS (ESI) calculada para C21H24F2N6O2: 430,2; determinada: 431,5 [M+H]. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 8 9.32 (s, 1H), 7.95 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.24 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.45-4.36 (m, 1H), 4.24 4.20 (m, 1H), 4.04-3.99 (m, 1H), 3.71-3.66 (m, 1H), 3.25-2.93 (m, 2H), 2.70 (s, 3H), 2.68-2.60 (m, 3H), 2.08-1.98 (m, 1H), 1.65-1.55 (m, 1H), 1.22 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
EJEMPLO 1.16 Difracción de rayos X de cristal único (SCXRD) de (R)-XVIa
Se recogieron datos en un difractómetro Oxford Diffraction Supernova Dual Source, Cu at Zero, Atlas CCD equipado cpm un dispositivo de refrigeración Oxford Cryosystems Cobra. Los datos se recogieron usando radiación de CuKa. Las estructuras típicamente se resolvieron usando los programas SHELXS o SHELXD y se refinaron con el programa SHELXL como parte del paquete Bricker AXS SHELXTL (V6.10). A menos que se indique de otra manera, los átomos de hidrógeno unidos a carbono se colocaron geométricamente y se dejaron refinar con un parámetro de desplazamiento isotrópico de movimiento. Los átomos de hidrógeno unidos a un heteroátomo se localizaron en una síntesis de Fourier diferente y se dejaron refinar libremente con un parámetro de desplazamiento isotrópico.
Una muestra de (R)-XVIa se recristalizó (aprox. 10 mg) de 2-metil-1-propanol (400 pl, 40 vol.) por evaporación lenta a temperatura ambiente. Se aisló un cristal de tamaño y calidad suficientes para análisis por difracción de rayos X de cristal único con dimensiones aproximadas 0 , 2 0 x 0,15 x 0 , 10 mm.
La estructura se determinó a 100 K en el sistema ortorrómbico, grupo espacial P2 -|2 -|21 con el R1 final [I>a2(I)] = 4,52%. Se puede encontrar un resumen de todos los datos estructurales en las tablas A a D. El compuesto se identificó como una forma no solvatada de (R)-XVIa.
Tabla A. Datos de muestra y cristal para (R)-XVIa.
Solventes de cristalización 2-metil-1-propanol
Método de cristalización Evaporación lenta
Fórmula empírica C22H28F2N2O5
Peso de fórmula 438,46
Temperatura 100(2) K
Longitud de onda 1,54178 A
Tamaño del cristal 0,200 x 0,150 x 0,100 mm
Hábito del cristal Prisma incoloro
Sistema del cristal Ortorrómbico
Grupo espacial P2221
Dimensiones de célula unidad a = 5,47256(9) A a = 90°
b = 11,73866(17) A p = 90°
c = 34,1360(5) A y = 90°
Volumen 2192,91(6) A3
Z 4
Densidad (calculada) 1,328 Mg/m3
Coeficiente de absorción 0,886 mm-1
F(000) 928
Tabla B. Recogida de datos y refinamiento de estructura para (R)-XVIa.
Difractómetro SuperNova, Dual, Cu at cero, Atlas
Fuente de radiación SuperNova (Cu) fuente de rayos X, CuKa
Método de recogida de datos Barridos omega
Intervalo theta para recogida de datos 8,941 a 74,419°
Intervalos de índice -6 < h < 6, -14 <k <14, -42 < l <42
Reflexiones recogidas 43577
Reflexiones independientes 4457 [R(int) = 0,0698]
Cobertura de reflexiones independientes 99,4 %
Variación en reflexiones de comprobación n/a
Corrección de absorción Semiempírica de equivalentes
Transmisión max. y min. 1,00000 y 0,56116
Técnica de solución de estructuras Métodos directos
Programa de solución de estructuras SHELXTL (Sheldrick, 2013)
Técnica de refinamiento Matriz completa mínimos cuadrados en F2
Programa de refinamiento SHELXTL (Sheldrick, 2013)
Función minimizada I w(Fo2 - Fc2)2
Datos / restricciones / parámetros 4457 / 0 / 283
Bondad de ajuste en F2 1,082
A/amax 0,01
Índices R finales
4253 datos; I>2D(I) R1 = 0,0452, wR2 = 0,1191
todos los datos R1 = 0,0469, wR2 = 0,1207
Esquema de ponderación w =1 / [a2 (Fo2)+(0,0637P)2+0,8591P]
donde P=(FQ2+2Fc2)/3
Parámetro de estructura absoluta -0,04(6)
Coeficiente de extinción n/a
Diferencia mayor de pico y agujero 0,259 y -0,189 eA-3
Table C. Coordenadas atómicas y parámetros de desplazamiento atómico isotrópico equivalentes, (A2), para (R)-XVIa.
U(eq) se define como un tercio de la traza del tensor Uy ortogonalizado.
x/a y/b z/c U(eq)
F1 0.7976(4) 0.47723(15) 0.84220(6) 0.0440(4)
F2 1.1649(4) 0.49906(16) 0.86598(5) 0.0464(5)
O1 0.7099(5) 0.31705(19) 0.73129(6) 0.0410(5)
O2 0.8636(4) 0.49684(18) 0.73493(6) 0.0395(5)
O3 1.0565(4) 0.12527(18) 0.91034(6) 0.0345(5)
O4 0.4735(4) 0.32754(17) 0.95057(7) 0.0388(5)
O5 0.4084(4) 0.17168(17) 0.98667(6) 0.0344(4)
N1 0.9942(6) 0.3583(2) 0.77608(7) 0.0429(7)
N2 0.7173(4) 0.16508(18) 0.94441(6) 0.0262(4) C1 0.5884(6) 0.3317(3) 0.69316(8) 0.0376(7)
C2 0.4246(6) 0.4362(3) 0.69245(12) 0.0496(8)
C3 0.7802(6) 0.3375(5) 0.66140(10) 0.0594(11
C4 0.4369(8) 0.2240(3) 0.68976(11) 0.0523(9)
C5 0.8538(6) 0.3995(2) 0.74621(8) 0.0339(6)
C6 1.1272(7) 0.4357(3) 0.80100(9) 0.0390(7)
C7 1.0279(6) 0.4298(2) 0.84224(8) 0.0341(6)
C8 1.0144(5) 0.3107(2) 0.85927(8) 0.0299(5)
C9 0.8847(7) 0.2319(2) 0.83005(9) 0.0381(7)
C10 0.9968(8) 0.2401(3) 0.78948(9) 0.0468(9)
C11 0.8919(6) 0.3113(2) 0.89942(8) 0.0346(6)
C12 0.9000(5) 0.1951(2) 0.91797(7) 0.0287(5)
C13 0.5282(5) 0.2322(2) 0.95928(8) 0.0299(6)
C14 0.5338(5) 0.0654(2) 0.99436(8) 0.0311(6)
C15 0.6961(5) 0.0475(2) 0.95830(7) 0.0258(5)
C16 0.5776(5) -0.0257(2) 0.92593(7) 0.0278(5)
C17 0.5697(5) -0.1508(2) 0.93511(7) 0.0251(5)
C18 0.7557(5) -0.2228(2) 0.92237(7) 0.0289(5)
C19 0.7448(5) -0.3390(2) 0.92911(9) 0.0350(6)
C20 0.5484(6) -0.3857(2) 0.94909(9) 0.0366(7)
C21 0.3642(5) -0.3151(3) 0.96252(9) 0.0351(6)
C22 0.3740(5) -0.1989(2) 0.95534(8) 0.0299(5)
Tabla D. Parámetros de desplazamiento atómico anisotrópico, (A2), para (R)-XVIa.
El exponente del factor de desplazamiento atómico anisotrópico toma la forma:
-2n2 [h2a*2 U11 + ... 2hka* b* U12]
u n u 22 u33 u 23 u 13 u 12
F1 0.0490(11) 0.0289(9) 0.0540(10) 0.0059(7) 0.0020(9) 0.0083(8)
F2 0.0640(13) 0.0364(9) 0.0388(9) -0.0027(7) -0.0061(9) -0.0202(9)
OI 0.0562(13) 0.0333(11) 0.0336(10) 0.0030(8) -0.0078(10) -0.0040(10)
02 0.0410(12) 0.0331(11) 0.0443(11) 0.0104(9) -0.0017(9) 0.0000(9)
03 0.0300(10) 0.0330(10) 0.0404(10) 0.0050(8) 0.0049(8) 0.0074(8)
04 0.0386(11) 0.0234(9) 0.0545(12) -0.0019(9) 0.0059(10) 0.0071(9)
05 0.0357(10) 0.0268(10) 0.0407(10) -0.0032(8) 0.0088(8) 0.0023(9)
NI 0.069(2) 0.0284(12) 0.0314(12) 0.0003(9) -0.0113(12) -0.0010(13)
N2 0.0277(10) 0.0208(10) 0.0302(10) -0.0009(8) 0.0004(8) 0.0033(9)
C1 0.0307(14) 0.0498(18) 0.0324(13) 0.0041(12) -0.0014(11) 0.0035(14)
C2 0.0293(16) 0.054(2) 0.066(2) 0.0023(17) -0.0032(15) 0.0043(15)
C3 0.0282(15) 0.115(4) 0.0351(16) -0.0011(19) -0.0024(12) 0.008(2)
C4 0.058(2) 0.049(2) 0.0497(18) -0.0038(15) -0.0136(17) -0.0017(18)
C5 0.0416(16) 0.0313(14) 0.0289(13) 0.0023(10) 0.0036(11) 0.0043(12)
C6 0.0492(18) 0.0319(15) 0.0357(14) 0.0021(11) -0.0038(13) -0.0055(14)
C7 0.0411(16) 0.0257(13) 0.0356(14) -0.0023(11) -0.0062(12) -0.0054(12)
C8 0.0338(13) 0.0253(12) 0.0306(12) 0.0002(10) -0.0041(10) 0.0006(11)
C9 0.0512(18) 0.0211(13) 0.0421(15) 0.0027(11) -0.0147(13) -0.0042(13)
CIO 0.078(2) 0.0274(14) 0.0349(14) -0.0014(11) -0.0172(16) 0.0040(16)
CU 0.0420(15) 0.0245(13) 0.0371(14) 0.0017(10) 0.0039(12) 0.0027(12)
C12 0.0282(12) 0.0276(13) 0.0303(12) -0.0008(10) -0.0018(10) 0.0021(11)
C13 0.0298(13) 0.0234(13) 0.0366(13) -0.0062(10) 0.0025(10) -0.0001(11)
C14 0.0363(14) 0.0260(12) 0.0311(12) -0.0032(10) 0.0016(11) -0.0003(11)
C15 0.0285(12) 0.0214(12) 0.0277(11) -0.0018(9) -0.0026(10) 0.0031(10)
C16 0.0313(13) 0.0246(12) 0.0277(11) -0.0017(10) -0.0038(10) 0.0026(11)
C17 0.0260(12) 0.0251(12) 0.0242(11) -0.0035(9) -0.0039(9) 0.0006(10)
C18 0.0263(13) 0.0302(13) 0.0303(12) -0.0040(10) 0.0006(10) 0.0001(11)
C19 0.0334(15) 0.0282(14) 0.0433(15) -0.0058(12) -0.0059(12) 0.0078(11)
C20 0.0428(16) 0.0230(13) 0.0441(16) 0.0014(11) -0.0124(13) -0.0023(12)
C21 0.0308(13) 0.0342(14) 0.0404(14) 0.0004(11) -0.0018(11) -0.0086(12)
C22 0.0238(12) 0.0316(14) 0.0342(13) -0.0045(10) -0.0010(10) -0.0006(11)
La unidad asimétrica contiene una única molécula completamente ordenada de (R)-XVIa. Los elipsoides de desplazamiento atómico anisotrópico para los átomos no de hidrógeno se muestran al nivel de probabilidad del 50%. Los átomos de hidrógeno se muestran con un radio arbitrariamente pequeño (Fig. 11). Para la estructura como se presente con C8 y C15 en la configuración R, el parámetro de Flack = 0,04(6) (Parsons y Flack, Acta Cryst. 2004, A60, s61). Para la estructura invertida con C8 y C15 en la configuración S, el parámetro de Flack = 1,04(6). La determinación de la estructura absoluta usando estadística bayesiana en diferencias de Bijvoet (Hooft et al., J. Appl. Cryst., 2008, 41, 96-103), revela que la probabilidad de la estructura absoluta presentada como que es correcta es 1,000, mientras que las probabilidades de que la estructura absoluta sea un gemelo racémico o falso son ambas 0,000. El equivalente de Flack y su incertidumbre se calculan a través de este programa que son -0,01(5). El calculó se basó en 1853 pares de Bijvoet con una cobertura del 100%. Basado en el parámetro de Flack, el análisis estadístico bayesiano y el conocimiento a priori de que la quiralidad en C15 es R la estereoquímica absoluta.
EJEMPLO 2. Ensayos
EJEMPLO 2.1. Actividad antagonista de NR2B
Se establecieron líneas de células HEK293 que expresan establemente NR1/NR2B y NR1/NR2A humanos clonados, respectivamente, según métodos estándar previamente descritos (Hansen et al., Comb. Chem High Throughput Screen. 11:304, 2008). La activación del subtipo NR2A o NR2B de receptor de NMDA con glutamato como agonista y coagonista glicina en estas células produce entrada de calcio, que se puede seguir con indicador fluorescente Fluo-4. Se ha implementado un ensayo celular para evaluar el efecto de un compuesto en receptores NR2A y NR2B midiendo los cambios fluorescentes (Hansen et al., Comb. Chem High Throughput Screen. 11:304, 2008).
Se cultivaron células HEK293 que expresan establemente los receptores NR2A o NR2B a 37°C en un incubador de CO2 humidificado en DMEM suplementado con suero bovino fetal (SBF) al 10% (Hyclone), MK801 10 pM (Sigma-Aldrich) y AP-550 pM (Tocris). Para los experimentos, las células se sembraron en placas negras con fondo claro de
96 pocilios recubiertos con poli-D-lisina (Corning) a una densidad de ~50.000 células/pocillo. Después de cultivo durante la noche, el medio de crecimiento se retiró de los pocillos y las células se incubaron a 37°C durante 60 min en tampón de Hanks que contenía fluo-4-AM 4 pM (Invitrogen) y seroalbúmina bovina (BSA) al 0,1%. Después de la carga del colorante, las células se lavaron tres veces con tampón de Hanks y se incubaron durante 10 min a temperatura ambiente con varias concentraciones de compuestos de prueba preparados en tampón de Hanks con BSA al 0,1%. Las placas de células se colocaron en el lector de fluorescencia FDSS pCell (Hamamatsu). Después de lectura de 20 seg de fluorescencia de fondo, se añadieron el agonista glutamato a 100 pM final y el coagonista glicina a 50 pM final a las células para activar el receptor, y los cambios de fluorescencia resultantes se registraron y cuantificaron. Basado en los cambios en intensidad de fluorescencia, el efecto farmacológico de los compuestos de prueba se analizó y los valores CI50 se derivaron de un ajuste de mínimos cuadrados no lineal de la respuesta dependiente de concentración respecto a una ecuación logística estándar usando Prism (Graphpad, Inc):
Amplitud = Amplitud Max /(1+(Cl50/[antagonista])n).
Los resultados se muestran en la Tabla 2.1. Se proporcionan datos de compuestos que no son de fórmula (II) como se define en la reivindicación 1 como ejemplos de referencia.
Tabla 2.1
EJEMPLO 2.1.1. Ensayo de unión de radioligandos
Este ejemplo describe ensayos de unión al receptor de NMDA usando dos radioligandos diferentes, [3H] MK-801 y [3H] (E)-N1-(2-metoxibencil)-cinnamidina (véase posteriormente). Un ensayo de unión establecido usando el ligando del receptor de NMDA no selectivo [3H] MK-801 sirve como una medida de actividad de unión al receptor de NMDA total a través de todos los subtipos de receptores de NMD en receptores de cerebro de rata nativos. El método del ensayo de unión usando el ligando selectivo de NR2B [3H] (E)-N1-(2-metoxibencil)-cinnamidina se adaptó de un ensayo de receptor clonado NR2B humano celular previamente descrito (Kiss et al., Neurochemistry International. 46, p 453-464, 2005) a tejido cerebral de rata. Este ensayo sirve como una medida selectiva de la actividad de unión al receptor NR2B en receptores de cerebro de rata nativo. Brevemente, los cerebros de ratas Wistar macho se homogenizaron (Polytron) antes de centrifugación a 40.000 x g durante 15 minutos a 4°C. Después de dos lavados, el precipitado final se homogenizó y almacenó a -80°C. La concentración de proteína se determinó mediante el ensayo de Bradford.
[3H] (E)-N1-(2-metoxibencil)-cinnamidina
Se usó [3H] MK-801 a una concentración, 2 nM, con 400 pg de proteínas de membrana. La unión no específica (NS) se evaluó en presencia de exceso (10 pM) de MK-801 sin marcar. Se observó un único sitio de unión con un valor Ki de 5,75 nM.
Se usó [3H] (E)-N1-(2-metoxibencil)-cinnamidina a 2 concentraciones diferentes, 0,5 y 30 nM, con 30 pg de proteínas de membrana. La unión no específica (NS) se evaluó en presencia de exceso (10 pM) de (E)-N1-(2-metoxibencil)-cinnamidina. Se identificó un sitio de alta afinidad, para el que se determinó un valor Ki de 0,18 nM para (E)-N1-(2-metoxibencil)-cinnamidina. Por tanto, usando [3H] (E)-N1-(2-metoxibencil)-cinnamidina como el radioligando del
receptor NR2B (Kiss et al., Neurochemistry International. 46, p 453-464, 2005), se determinó un valor Ki de 1,0 nM en receptores NR2B clonados. (Clairborne, C. F. Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, 13, 697-700, 2003) mientras que usando [3H] ifenprodil como el radioligando del receptor NR2B un valor Ki de 0,7 nM en receptores NR2B clonados (Curtis N. R. et al., Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, 13, 693-696, 2003).
Los compuestos de prueba se solubilizaron a 10 mM en DMSO. Después se hicieron diluciones con una concentración de solvente constante (DMSO al 1%) en el ensayo.
Después de incubación durante 4,5 h a temperatura ambiente, los ensayos se filtraron en filtros GF/B pretratados con PEI al 0,3% (v/v) con un sistema Brandel para [3H] MK-801, y con un sistema Packard para [3H] (E)-N1-(2-metoxibencil)-cinnamidina. El experimento se realizó en duplicado (n = 2).
El compuesto E1-1.2 mostró solo un efecto parcial (40%) en la unión de [3H] MK-801 consistente con la unión selectiva a subtipo de receptor NR2B. El compuesto E1-1.2 mostró un desplazamiento completo de [3H] (E)-N1-(2-metoxibencil)-cinnamidina en el sitio de alta afinidad del receptor NR2B (96%; Ki = 5,23 nM).
El compuesto E2-1.2 mostró solo un efecto parcial (36%) en la unión de [3H] MK-801 consistente con la unión selectiva a subtipo de receptor NR2B. El compuesto E2-1.2 mostró un desplazamiento completo de [3H] (E)-N1-(2-metoxibencil)-cinnamidina en el sitio de alta afinidad del receptor NR2B (98%; Ki = 74,3 nM).
El compuesto E1-1.3 mostró solo un efecto parcial (41%) en la unión de [3H] MK-801 consistente con la unión selectiva a subtipo de receptor NR2B. El compuesto E1-1.3 mostró un desplazamiento completo de [3H] (E)-N1-(2-metoxibencil)-cinnamidina en el sitio de alta afinidad del receptor NR2B (97%; Ki = 2,34 nM).
El compuesto E1-1.4 mostró solo un efecto parcial (32%) en la unión de [3H] MK-801 consistente con la unión selectiva a subtipo de receptor NR2B. El compuesto E1-1.4 mostró un desplazamiento completo de [3H] (E)-N1-(2-metoxibencil)-cinnamidina en el sitio de alta afinidad del receptor NR2B (98%; Ki = 18,2 nM).
El compuesto E1-1.5 mostró solo un efecto parcial (48%) en la unión de [3H] MK-801 consistente con la unión selectiva a subtipo de receptor NR2B. El compuesto E1-1.5 mostró un desplazamiento completo de [3H] (E)-N1-(2-metoxibencil)-cinnamidina en el sitio de alta afinidad del receptor NR2B (97%; Ki = 0,854 nM).
El compuesto E1-8.2 mostró solo un efecto parcial (33%) en la unión de [3H] MK-801 consistente con la unión selectiva a subtipo de receptor NR2B. El compuesto E1-8.2 mostró un desplazamiento completo de [3H] (E)-N1-(2-metoxibencil)-cinnamidina en el sitio de alta afinidad del receptor NR2B (95%; Ki = 1,71 nM).
El compuesto E1-9.2 mostró solo un efecto parcial (34%) en la unión de [3H] MK-801 consistente con la unión selectiva a subtipo de receptor NR2B. El compuesto E1-9.2 mostró un desplazamiento completo de [3H] (E)-N1-(2-metoxibencil)-cinnamidina en el sitio de alta afinidad del receptor NR2B (97%; Ki = 11,3 nM).
El compuesto E1-21.2 mostró solo un efecto parcial (49%) en la unión de [3H] MK-801 consistente con la unión selectiva a subtipo de receptor NR2B. El compuesto E1-21.2 mostró un desplazamiento completo de [3H] (E)-N1-(2-metoxibencil)-cinnamidina en el sitio de alta afinidad del receptor NR2B (98%; Ki = 0,716 nM).
El compuesto E1-21.26 mostró solo un efecto parcial (41%) en la unión de [3H] MK-801 consistente con la unión selectiva a subtipo de receptor NR2B. El compuesto E1-21.26 mostró un desplazamiento completo de [3H] (E)-N1-(2-metoxibencil)-cinnamidina en el sitio de alta afinidad del receptor NR2B (99%; Ki = 1,02 nM).
EJEMPLO 2.2. Inhibición de canales hERG
El ensayo se realizó en el canal hEREG establemente expresado en células HEK293. Las células se cultivaron a 37°C en un incubador de CO2 humidificado en medio de crecimiento que consistía en DMEM, suero bovino fetal al 10% y antibióticos. Antes del ensayo, las células se sembraron en un cubreobjetos de vidrio recubierto con PDL de 12 mm y se cultivaron en una placa Petri de 35 mm. Después de 16 a 40 horas de cultivo, el cubreobjetos se transfirió a la cámara de un sistema de perfusión OctaFlow (ALA Instruments) y con un flujo constante de solución extracelular (NaCl 140 mM, KCl 4 mM, MgCh 1 mM, CaCl22 mM, HEPES 10 mM, D-glucosa 10 mM, pH 7,35, osmolaridad 290). Se realizó pinzamiento zonal de membrana en célula entera con una micropipeta de vidrio llena con solución intracelular (KCl 120 mM, MgCl2 1,75 mM, CaCh 5,4 mM, HEPES 10 mM, EGTA 10 mM y ATP-K24 mM, pH 7,2, osmolaridad 310). Se mantuvo el gigasello durante la prueba. El control de voltaje y la medida de la corriente se llevaron a cabo usando un amplificador Axon 700B, Digidata 1440A y software CLAMPEX10 (Molecular Devices). Las corrientes de hERG de célula entera se registraron según el protocolo de Petroski: la célula se mantuvo a -80 mV, y el paso de voltaje saltó de -80 a 30 mV y permanece durante 2 segundos con un prepulso de 20 ms a -40 mV. Después de la despolarización, el voltaje se disminuyó a -40 mV y permanece durante 2 segundos, y vuelve a -80 mV. El compuesto de prueba se aplicó por punta de tubos capilares de cuarzo (diámetro interno de 200 pm), y la velocidad de flujo se controló a 2-3 ml/min con sistema de perfusión OctaFlow. Se aplicaron diferentes concentraciones del compuesto a
las células durante 5 min y la corriente de hERG se midió tres veces antes, durante y después del tratamiento con el compuesto. Los datos se analizaron usando el software Clamfit 10 (Molecular Devices) para generar valores CI50. Los resultados se muestran en la tabla 2.2. Los datos de compuestos que no son de fórmula (II) como se define en la reivindicación 1 se proporcionan como ejemplo de referencia.
Tabla 2.2
EJEMPLO 2.3 Inhibición de la enzima CYP P450
Se evaluaron las actividades inhibidoras de los compuestos de prueba en 5 isoformas principales de CYP P450 usando microsoma de hígado humano agrupado (HLM, comprado de BD Gentest) y sustratos selectivos para esas isoformas. Esas isoformas de CYP y sus correspondientes sustrato sonda son como sigue: CYP1A2 (fenacetina, 30 j M), CYP2C9 (totulamida, 100 j M), CYP2C19 (S-mefenitoína, 40 j M), CYP2D6 (dextrometorfano, 5 j M) y CYP3A4 (midazolam, 1 j M). Todos los sustratos sonda se usaron a concentraciones cerca o por debajo de su Km. Para el experimento, una mezcla de reacción de compuesto de prueba a 10 j M o en dilución en serie, sustrato sonda de CYP descrito anteriormente y HLM agrupado 0,2 mg/ml en tampón fosfato, pH 7,4 en un volumen final de 200 j l se preincubó a 37°C durante 10 minutos por triplicado. La reacción se inició por la adición de NADPH a una concentración final de 1 mM. La reacción se terminó después de 10 minutos (CYP1A2, CYP2D6 y CYP3A4) o 30 minutos (CYP2C9 y CYP2C19) por adición de 100 j l de acetonitrilo helado con un estándar interno (IS). Las muestras se centrifugaron después a 13.000 rpm y los sobrenadantes se inyectaron a LC-MS/MS (Agilent Tecnologies) para cuantificar la concentración de los metabolitos específicos de los sustratos sonda formados por las isoformas CYP450 individuales. La proporción de inhibición se calcula como:
(Mt-Mü)/Magua x 100%
en la que Mt y M0 representan las concentraciones del metabolito del sustrato sonda específico, que se formó por la isoforma CYP450 individual, al principio y al final de la reacción en presencia del compuesto de prueba; mientras que Magua representa la concentración del metabolito específico al final de la reacción en ausencia de compuesto de prueba. Los experimentos de datos de respuesta dependiente de la concentración de compuestos de prueba se realizaron en triplicado. Los valores CI50 de CYP2D6 medios se derivaron de ajuste por mínimos cuadrados no lineal de datos de respuesta dependiente de dosis respecto a ecuación logística estándar (Prism, GraphPad Software, Inc.) para generar los resultados de CI50 de CYP2D6 mostrados en la tabla 2.3. Los datos de compuestos que no son de fórmula (II) como se define en la reivindicación 1 se proporcionan como ejemplos de referencia.
Tabla 2.3
EJEMPLO 2.4. Prueba de natación forzada (FST)
La prueba de natación forzada (FST) también conocida como la prueba de la desesperación conductual se usó para evaluar la actividad antidepresiva (Porsolt et al., 1977 Arch. Int. Pharmacodyn. 229: 327-336, Porsolt et al., 1977, Eur. J. Pharmacol. 47:379-391). Ratones o ratas que son forzados a nadar en una situación de la que no pueden escapar, rápidamente se vuelven inmóviles. Los fármacos con actividad antidepresiva, tal como Imipramina, reducen la cantidad de tiempo pasado en el estado inmóvil. Por tanto, la cantidad de tiempo de inmovilidad durante una prueba realizada después de la administración de fármaco representa un indicador útil de actividad antidepresiva (Lucki et al 2001 Psychopharmacology 155:315-322; Porsolt et al., 1977, Nature 266:730-732).
Los compuestos de prueba E1-1.2 y E1-21.26 se administraron como sales mesilato (mpk basado en el peso molecular de la base libre). El compuesto de prueba E1-8.2 se administró como la base libre. Los datos de compuestos que no son de fórmula (II) como se define en la reivindicación 1 se proporcionan como ejemplos de referencia.
El ensayo para actividad antidepresiva se realizó en ratas o ratones según los procedimientos generales siguientes.
Los ratones se evaluaron en una única sesión de prueba de natación de 6 minutos. Los ratones se colocaron en un cilindro de plástico transparente de 24 cm de altura con un diámetro de 13 cm que contenía 10 cm de agua con control de temperatura ambiente en general de 22 ± 2°C. Los ratones se colocaron en el agua durante 6 minutos y se midió la duración de la inmovilidad durante los últimos 4 minutos.
Se usaron ratas Wistar macho que pesaban 197-251 g para la prueba de ratas. Las ratas se evaluaron según un procedimiento de dos sesiones con una sesión de natación de 15 minutos el primer día del experimento (sesión 1) seguida 24 horas después por una prueba de natación de 5 minutos (sesión 2). Se forzó a las ratas individualmente a nadar dentro de cilindros de plexiglás transparentes verticales de 40 cm x 18 cm que contenían 15 cm de agua mantenida a 25°C (sesión 1). Después de 15 minutos en el agua, las ratas se retiraron y se dejaron secar durante 15 min en un recinto calentado (32°C) antes de devolverlas a sus jaulas. Las ratas se colocaron en el agua 24 h después durante 5 minutos (sesión 2) y se midió la duración de la inmovilidad.
Los animales fueron observados por un observador a ciegas. El observador juzgó que el animal estaba inmóvil cuando cesó toda actividad (luchar, nadar, saltar, etc.) y flotó pasivamente encima del agua. La cantidad de tiempo que cada animal pasó en el estado inmóvil (y la latencia hasta el primer episodio de inmovilidad) se registró y usó para análisis estadísticos de efecto del compuesto. Las diferencias de grupos se evaluaron por la prueba de la t de Student (sustancia de referencia) o ANOVA unidireccional seguido por prueba de Dunnett post-hoc (sustancias de prueba).
En un experimento determinado (tanto para experimentos con ratón como rata) se administraron un compuesto de prueba, una solución control de vehículo y una compuesto de referencia control positivo imipramina. Los compuestos de prueba se administraron en una o más dosis por rutas de dosificación por alimentación forzosa oral (p.o.) o por inyección intraperitoneal (i.p.) después de disolver en dimetilsulfóxido al 0,5%, agua con hidroxipropil-b-ciclodextrina al 4% como vehículo. Las dosis de los compuestos de prueba variaron de 1 a 30 miligramos por kilogramo (expresado en las figuras acompañantes como mpk o mg/kg).
El compuesto control imipramina se disolvió en solución salina fisiológica. La imipramina se dosificó como en indica en los ejemplos particulares.
Las soluciones de dosis de los compuestos de prueba y soluciones control de vehículo se administraron 20 minutos antes de colocar a los animales en el cilindro de agua para experimentos tanto orales como intraperitoneales. La imipramina se dosificó como se indica en los ejemplos particulares posteriormente.
Se usaron ratones macho (cepa NLMN) que pesaban 25-35 g para los ensayos. Todos los animales se enjaularon en un entorno con temperatura (22-24°C) y humedad (50-60%) controladas con acceso libre a comida y agua en un ciclo de luz-oscuridad de 12 horas. Los compuestos de prueba se disolvieron en dimetilsulfóxido al 0,5%, agua con hidroxipropil-b-ciclodextrina al 40% para generar la solución de dosis apropiada. Los fármacos se administraron por inyección intraperitoneal a en un volumen de dosis de 10 ml/kg. El ensayo se inició 20-60 minutos después de la dosis. El ensayo para actividad antidepresiva se realizó como se describe por Darci et al. (Darci et al., 2004, Eur. J. Pharmacol. 499:135-146). Los ratones se colocaron en un cilindro de plástico blanco de 20 cm de altura con un diámetro de 21 cm que contenía 10 cm de agua a 25 ± 2°C. Los ratones se grabaron en video durante 6 minutos, y los últimos 4 minutos de video se analizaron por un observador a ciegas fuera de línea. El observador juzgó que el animal estaba inmóvil cuando cesó toda actividad (luchar, nadar, saltar, etc.) y flotó pasivamente encima del agua. La cantidad de tiempo que cada animal pasó en el estado inmóvil (y la latencia hasta el primer episodio de inmovilidad) se registró y usó para análisis estadísticos de efecto del compuesto. Las diferencias de grupos se evaluaron por la prueba de la t de Student o ANOVA unidireccional seguido por prueba de Dunnett post-hoc.
EJEMPLO 2.4.1. Compuesto E1-1.2 en ratones
Los resultados se muestran en la figura 1A. Las barras representan el tiempo de inmovilidad medio ± EEM para cada grupo de dosis (n = 10, ***: diferente del grupo vehículo, p< 0,001, ANOVA unidireccional, prueba posterior de Dunnett). Las dosis se dan en miligramos por kilogramo (mpk). La dosis de imipramina fue 32 mpk.
EJEMPLO 2.4.2. Compuesto E1-8.2 administrado por inyección intraperitoneal en ratones
Los resultados se muestran en la figura 1B. Las barras representan el tiempo de inmovilidad medio ± EEM para cada grupo de dosis (***: diferente del grupo vehículo, p< 0,001, ANOVA unidireccional, prueba posterior de Dunnett). En el presente ejemplo, el compuesto control positivo, imipramina (32 mpk i.p.) administrado una vez 30 min antes de la prueba, mostró la actividad antidepresiva esperada.
EJEMPLO 2.4.3. Compuesto E1-21.26 administrado por inyección intraperitoneal en ratones
Los resultados se muestran en la figura 1C. Las barras representan el tiempo de inmovilidad medio ± EEM para cada grupo de dosis (***: diferente del grupo vehículo, p< 0,001, ANOVA unidireccional, prueba posterior de Dunnett). En el presente ejemplo, el compuesto control positivo, imipramina (32 mpk i.p.) administrado una vez 30 min antes de la prueba, mostró la actividad antidepresiva esperada.
EJEMPLO 2.4.4. Compuesto E1-1.2 administrado por vía oral en ratones
Los resultados se muestran en la figura 1D. Las barras representan el tiempo de inmovilidad medio ± EEM para cada grupo de dosis (***: diferente del grupo vehículo, p< 0,001, ANOVA unidireccional, prueba posterior de Dunnett). En el presente ejemplo, el compuesto control positivo, imipramina (64 mpk p.o.) administrado una vez 60 min antes de la prueba, mostró la actividad antidepresiva esperada.
EJEMPLO 2.4.5. Compuesto E1-1.2 administrado por inyección intraperitoneal en ratas
Los resultados se muestran en la figura 1E. Las barras representan el tiempo de inmovilidad medio ± EEM para cada grupo de dosis (***: diferente del grupo vehículo, p< 0,001, ANOVA unidireccional, prueba posterior de Dunnett). En el presente ejemplo, el compuesto control positivo, imipramina (32 mpk i.p.) administrado 3 veces: a las 24 h, 4 h y 30 min antes de la prueba (sesión 2), mostró la actividad antidepresiva esperada.
EJEMPLO 2.4.6. Compuesto E1-21.26 administrado por vía oral en ratas
Los resultados se muestran en la figura 1F. Las barras representan el tiempo de inmovilidad medio ± EEM para cada grupo de dosis (***: diferente del grupo vehículo, p< 0,001, ANOVA unidireccional, prueba posterior de Dunnett). En el presente ejemplo, el compuesto control positivo, imipramina (64 mpk p.o.) administrado 3 veces: a las 24 h, 4 h y 60 min antes de la prueba (sesión 2), mostró la actividad antidepresiva esperada.
EJEMPLO 2.4.7. Dosificación crónica de ratones en la prueba de natación forzada
Los ratones se colocaron individualmente en un cilindro (altura = 24 cm, diámetro = 13 cm) que contenía 10 cm de agua (22°C) del que no pueden escapar. Los ratones se colocaron en el agua durante 6 minutos y se midió la duración de la inmovilidad durante los últimos 4 minutos. La latencia hasta el primer episodio de inmovilidad también se registró empezando desde el principio de la prueba.
El compuesto se evaluó a 2 dosis (3 y 10 mg/kg), administrado de forma aguda p.o. 20 minutos antes de la prueba el día 7 o a diario durante 7 días con la última administración 20 minutos antes de la prueba el día 7, y se comparó con
un grupo control de vehículo. El vehículo se administró a diario cuando el fármaco no tocaba. La imipramina (128 mg/kg, p.o.), administrada una vez 60 minutos antes de la prueba el día 7, se usó como sustancia de referencia.
Los resultados se muestran en la figura 1G. Las barras representan el tiempo de inmovilidad medio ± EEM para cada grupo de dosis (**/***: diferente del grupo vehículo, p < 0,01/p < 0,001, ANOVA unidireccional, prueba posterior de Dunnett). En el presente ejemplo, el compuesto control positivo, imipramina (128 mpk p.o.) administrado una vez 60 minutos antes de la prueba el día 7, mostró la actividad antidepresiva esperada.
Estos resultados indican que los compuestos proporcionados muestran actividad antidepresiva cuando se ensayan en modelos estándar para depresión humana. Estos datos demuestran que los compuestos de prueba muestran actividad antidepresiva cuando se dosifican crónicamente. Además, estos resultados indican que los compuestos proporcionados muestran actividad antidepresiva cuando se dosifican de forma aguda y crónica.
EJEMPLO 2.5. Prueba del umbral electroconvulsivo (ECT).
La prueba del umbral electroconvulsivo, que detecta actividad proconvulsiva o anticonvulsiva, en general se realizó como se describe por Swinyard et al., (J. Pharmacol. Exp. Ther., 106, 319-330, 1952). Los compuestos de prueba E1-1.2 y E1-21.26 se administraron como sales mesilato (mpk basado en el peso molecular de la base libre). El compuesto de prueba E1-8.2 se administró como la base libre. Los datos de compuestos que no son de fórmula (II) como se define en la reivindicación 1 se proporcionan como ejemplos de referencia.
Se administró ECS (corriente rectangular: amplitud de pulso 0,6 ms, duración 1,5 s, 200 Hz) a ratas a través de electrodos auriculares conectados a un generador de choque de corriente constante (Ugo Basile: tipo 7801). Los compuestos de prueba se administraron por alimentación forzada oral (p.o.) 1 hora antes de la prueba en un volumen de dosis de 5 ml/kg.
Se expusieron grupos de tratamiento de 20 ratas a ECS como sigue: El primer animal se expuso a 30 mA de ECS. Si este animal no se convulsionó (convulsiones tónicas) a los 5 segundos máximo, el animal n° 2 se expuso a 35 mA, etc... (aumentos de 5 mA) hasta que se observó la primera convulsión tónica. Una vez se observó la primera convulsión tónica, la intensidad del ECS se disminuyó en 2 mA para el siguiente animal y después disminuyó o aumentó en 2 mA de animal a animal dependiendo de si el animal previo se convulsionó o no. Si el primer animal se convulsionó (convulsiones tónicas) a los 5 segundos, el animal n° 2 se expuso a 25 mA, etc... (disminuciones de 5 mA) hasta que se observó la ausencia de convulsiones tónicas. En este punto, la intensidad del ECS se aumentó en 2 mA para el siguiente animal y después disminuyó o aumentó en 2 mA de animal a animal dependiendo de si el animal previo se convulsionó o no. La intensidad de corriente aplicada mínima es 5 mA y la máxima 95 mA. Los primeros 5 animales sirvieron para acercarse a la corriente umbral y no se incluyeron en el análisis. Los resultados se presentan como la intensidad de corriente media administrada a los 15 animales finales de un grupo. La prueba se realizó con enmascaramiento. Un cambio de porcentaje positivo indica un efecto anticonvulsivo. Un cambio de porcentaje negativo indica un efecto preconvulsivo. La sustancia de prueba se evaluó a 4 dosis, típicamente usando dimetilsulfóxido al 0,5%, agua con hidroxipropil-b-ciclodextrina al 4% como vehículo, y administrada p.o. 60 minutos antes de ECS, y comparada con un grupo control de vehículo. Se usó diazepam (16 mg/kg p.o.), administrado en las mismas condiciones experimentales, como sustancia de referencia. El experimento incluía 6 grupos. Los datos con la sustancia de prueba se analizaron comprando los grupos tratados con control vehículo usando ANOVA unidireccional seguido por pruebas t de Dunnett.
En el ejemplo 2.5.1 el compuesto control positivo anticonvulsivo diazepam (16 mpk p.o.) mostró la actividad anticonvulsiva esperada. El compuesto control positivo proconvulsivo teofilina (128 mpk p.o.) mostró la actividad proconvulsiva esperada. En el ejemplo 2.5.2 solo se incluyó el control positivo anticonvulsivo en el estudio.
EJEMPLO 2.5.1. Compuesto E1-1.2.
Los resultados se muestran en la figura 2. Las barras presentan el umbral electroconvulsivo medio ± EEM para cada grupo de dosis (n = 15, ***: diferente del grupo vehículo control, p < 0,001, ANOVA unidireccional, prueba posterior de Dunnett). Las dosis se dan como miligramo por kilogramo (mpk). La dosis de diazepam fue 16 mpk. La dosis de teofilina fue 128 mpk.
El compuesto E1-1.2 mostró actividad anticonvulsiva robusta a las dosis ensayadas, 3, 10 y 30 mpk.
EJEMPLO 2.5.2. Compuesto E1-8.2.
Los resultados se muestran en la figura 3. Las barras presentan el umbral electroconvulsivo medio ± EEM para cada grupo de dosis (n = 15, ***/*: diferente del grupo vehículo control, p < 0,001/0,05 respectivamente, ANOVA unidireccional, prueba posterior de Dunnett). Las dosis se dan como miligramo por kilogramo (mpk). La dosis de diazepam fue 16 mpk.
El compuesto E1-8.2 mostró actividad proconvulsiva modesta después de la administración de 0,5 y 2 mpk, y actividad anticonvulsiva a dosis de 10 y 20 mpk.
EJEMPLO 2.5.3. Compuesto E1-21.26.
Los resultados se muestran en la figura 4. Las barras presentan el umbral electroconvulsivo medio ± EEM para cada grupo de dosis (n = 15, ***/*: diferente del grupo vehículo control, p < 0,001/0,05 respectivamente, ANOVA unidireccional, prueba posterior de Dunnett).
El compuesto E1-21.26 mostró actividad anticonvulsiva a dosis de 3 y 10 mpk.
EJEMPLO 2.6. Prueba de convulsiones de pentilenotetrazol (PTZ)
El método, que detecta actividad proconvulsiva o anticonvulsiva relacionada con un mecanismo GABAérgico, sigue lo descrito por Krall (Epilepsia, 19, 409-428, 1978). Ratas, colocadas en jaulas de macrolon individuales (25 x 19 x 13 cm), se inyectaron con pentilenotetrazol (PTZ) (100 mg/kg, s.c.). La aparición y latencia de convulsiones clónicas y tónicas y muerte se anotaron durante un periodo de 30 minutos. Se estudiaron 15 ratas por grupo. La prueba se realizó con enmascaramiento.
Los compuestos de prueba E1-1.2 y E1-21.26 se administraron como sales mesilato (mpk basado en el peso molecular de la base libre). El compuesto de prueba E1-8.2 se administró como la base libre. Los datos de compuestos que no son de fórmula (II) como se define en la reivindicación 1 se proporcionan como ejemplos de referencia.
Los compuestos se evaluaron típicamente usando dimetilsulfóxido al 0,5%, agua con hidroxipropil-b-ciclodextrina al 4% como vehículo en 1 o más dosis (por ejemplo, 1, 3 10 mg/kg), administradas p.o. 30 minutos antes que PTZ y comparados con un grupo control de vehículo. Diazepam (16 mg/kg p.o.), administrado 60 minutos antes de PTZ, se usó como sustancia de referencia. El experimento se realizó en 2 subexperimentos separados con N = 7 a 8 animales por grupo y por subexperimento. Los datos cuantitativos (latencias) con la sustancia de prueba se analizaron comparando los grupos tratados con el control vehículo usando la prueba de Kruskal-Wallis seguida por la prueba de la U de Mann-Whitney. Los datos cuantitativos con sustancia de referencia se analizaron usando la prueba de la U de Mann-Whitney. Los datos de cuantos (frecuencias) se analizaron comparando grupos tratados con el control vehículo usando pruebas de probabilidad exacta de Fisher (* = p < 0,05; ** = p < 0,01; *** = p < 0,001).
EJEMPLO 2.6.1. Compuesto E1-1.2.
Los resultados se muestran en la figura 5A, figura 5B, figura 5C, figura 5D, figura 5E y figura 5F.
El compuesto E1-1.2 a una dosis de 10 mg/kg p.o. disminuyó el número de ratas que muestran convulsiones tónicas (-82%, p< 0,01) y el número de muertes (-91%, p < 0,001) comparado con los controles de vehículo. El compuesto E1-1.2 también aumentó las latencias para inducir convulsiones clónicas y tónicas y la latencia a la muerte (+72%, p < 0,05; 39%, p < 0,01 y 35%, p < 0,001, respectivamente). Estos resultados confirman la actividad anticonvulsiva para el compuesto E1-1.2 a 10 mg/kg p.o. en la prueba de convulsiones de pentilenotetrazol en ratas.
EJEMPLO 2.6.2. Compuesto E1-21.26.
Los resultados se muestran en la figura 6A, figura 6B, figura 6C, figura 6D, figura 6E y figura 6F.
El compuesto E1-21.26 a una dosis de 10 mg/kg p.o. disminuyó el número de ratas que muestran convulsiones tónicas (-82%, p< 0,01) y el número de muertes (-82%, p < 0,01) comparado con los controles de vehículo. El compuesto E1-21.26 también aumentó las latencias para inducir convulsiones clónicas y tónicas y la latencia a la muerte (+45%, p < 0,05; 40%, p < 0,01 y 31%, p < 0,01, respectivamente). Estos resultados confirman la actividad anticonvulsiva para el compuesto E1-21.26 a 10 mg/kg p.o. en la prueba de convulsiones de pentilenotetrazol en ratas.
EJEMPLO 2.7. Prueba de convulsiones de 6 Hz
La prueba de convulsiones a 6 Hz, que detecta actividad anticonvulsiva de compuestos de prueba, se realizó según métodos descritos por Brown et al. (J. Pharmacol. Exp. Ther. 107, 273-283, 1953,) y Barton et al. (Epilepsy Res. 47, 217-227, 2001). Se administró a ratones una corriente rectangular (44 mA, pulso rectangular: amplitud de pulso 0,2 ms, duración 3 s, 6 Hz) a través de electrodos corneales conectados a un generador de choque de corriente constante (Ugo Basile: tipo 7801). Los resultados para el número de convulsiones reflejado por clono de las extremidades anteriores se registraron durante el primer minuto después de la administración de la corriente. El clono de las extremidades anteriores se puntuó como ausente (0), leve (1) y fuerte (2). Se estudiaron 15 ratones por grupo. La prueba se realizó parcialmente enmascarada (sustancia de prueba frente a vehículo). Las sustancias de prueba se administraron típicamente usando dimetilsulfóxido al 0,5%, agua con hidroxipropil-b-ciclodextrina al 4% como vehículo p.o. 30 minutos antes de la prueba y se compararon con un grupo control de vehículo. Los compuestos de prueba E1
1.2 y E1-21.26 se administraron como sales mesilato (mpk basado en el peso molecular de la base libre). El compuesto de prueba E1-8.2 se administró como la base libre. Los datos de compuestos que no son de fórmula (II) como se define en la reivindicación 1 se proporcionan como ejemplos de referencia.
Se usó diazepam, administrado 60 minutos antes de la prueba, como una sustancia de referencia de control positivo. Los datos cuantitativos (puntuaciones) con la sustancia de prueba se analizaron comparando los grupos tratados con el control vehículo usando la prueba de Kruskal-Wallis seguida por la prueba de la U de Mann-Whitney.
EJEMPLO 2.7.1. Compuesto E1-1.2.
Los resultados se muestran en la figura 7A. Las barras representan la puntuación de clono de las extremidades anteriores medio ± EEM (unidades arbitrarias) para cada grupo de dosis (*/**/***: diferente del grupo vehículo, p < 0,05/0,01/0,001, ANOVA unidireccional, prueba posterior de Dunnett). Las dosis se dan como miligramo por kilogramo (mpk). La dosis de diazepam fue 8 mpk (p.o.). El compuesto E1-1.2 mostró una reducción de respuesta a la dosis en el clono de las extremidades anteriores (10 y 30 mg/kg), administrado p.o. 30 minutos antes de la prueba, significativamente y disminución dependiente de la dosis de la puntuación de convulsiones de las extremidades anteriores, comparado con el control vehículo (-50%, p < 0,05 y -70%, p < 0,01, respectivamente). También disminuyó de forma dependiente de la dosis el número de ratones con cola de Straub con un efecto significativo observado a 30 mg/kg (10 mg/kg: -13%, NS y 30 mg/kg: -40%, p < 0,05) (Fig. 7B).
EJEMPLO 2.8. Modelo de catalepsia inducida por haloperidol (HIC)
El modelo de catalepsia inducida por haloperidol (HIC) detecta actividad antipsicótica y la acción de antagonistas selectivos de NR2B (Steece-Collier et al. Exp. Neurol. 163: 239, 2000) y se basó en métodos descritos por Chermat y Simon (J. Pharmacol., 6, 493-496, 1975). La capacidad para inducir catalepsia sirve como un índice de la predisposición de una sustancia de prueba a inducir efectos secundarios extrapiramidales, en particular parkinsonismo. El antagonismo de catalepsia inducida por antipsicóticos puede así servir para detectar potencial antiparkinsoniano.
Se inyectaron ratas con haloperidol (1 mg/kg i.p.) y se examinaron para catalepsia a intervalos de 30 minutos hasta 360 minutos. Se evaluó la presencia (+) o ausencia (-) de catalepsia mediante tres procedimientos: 1) cruce impuesto de las extremidades anteriores y posteriores ipsilaterales; 2) colocar el animal en la posición de buda; 3) el tablero basculante, un dispositivo automático que, 5 segundos después de colocar la rata, desplaza la rata de una posición horizontal a vertical y vuelta mientras se aferra a una rejilla de alambre con sus garras frontales. Se evaluaron acinesia y catalepsia dependiendo de si el animal se mueve o no antes (acinesia) o durante la operación del tablero (catalepsia).
Las 4 puntuaciones se acumularon a lo largo del tiempo para dar una puntuación de catalepsia global por animal. Se estudiaron seis ratas por grupo. La prueba se realizó con enmascaramiento (sustancia de prueba frente a vehículo). Las sustancias de prueba se evaluaron a 1 o más dosis, administradas típicamente usando dimetilsulfóxido al 0,5%, agua con hidroxipropil-b-ciclodextrina al 4% como vehículo p.o. 15 minutos antes de haloperidol (es decir, 45 minutos antes de la primera medida), y se comparó con un grupo control de vehículo. Los compuestos de prueba E1-1.2 y E1-21.26 se administraron como sales mesilato (mpk basado en el peso molecular de la base libre). El compuesto de prueba E1-8.2 se administró como la base libre. Los datos de compuestos que no son de fórmula (II) como se define en la reivindicación 1 se proporcionan como ejemplos de referencia.
Se usó anfetamina (8 mg/kg p.o.), administrada 60 minutos antes de la prueba (es decir, 90 minutos antes de la primera medida) como sustancia de referencia. Los datos con las sustancias de prueba se analizaron al comparar los grupos tratados con control vehículo usando la prueba de Kluskal-Wallis seguido por pruebas U de Mann-Whitney en cada tiempo y por puntuación acumulada. Los datos con la sustancia de referencia se analizaron usando pruebas U de Mann-Whitney.
EJEMPLO 2.8.1. Compuesto E1-1.2.
Los resultados se muestran en la figura 8A. Las dosis se dieron como miligramo por kilogramo (mpk). La dosis de anfetamina fue 8 mpk (Fig. 8B).
El compuesto control positivo anfetamina (8 mg/kg p.o.) mostró la actividad anticataléptica robusta esperada (Fig. 8B). El compuesto E1-1.2 disminuyó significativamente la puntuación acumulada de catalepsia a lo largo de 360 min, comparado con los controles de vehículo (2,0, p < 0,01). A 1 y 3 mg/kg, el compuesto E1-1.2 tendía a disminuir la puntuación acumulada de catalepsia a lo largo de 360 min (17,0, p = 0,0898 y 15,8, p = 0,0526, respectivamente) con efectos significativos a las 2,5 horas a 1 mg/kg (p < 0,05) y a 2,5 y 3,5 horas a 3 mg/kg (p < 0,05 y p < 0,01, respectivamente). Se observó catalepsia entre 4 y 6 horas a 10 mg/kg. Estos resultados sugieren la presencia de una actividad anticataléptica significativa para el compuesto E1-1.2 en la prueba de catalepsia inducida por haloperidol en rata.
EJEMPLO 2.8.2. Compuesto E1-21.26.
Los resultados se muestran en la figura 8C. Las dosis se dieron como miligramo por kilogramo (mpk). El compuesto control positivo anfetamina (8 mg/kg p.o.) mostró la actividad anticataléptica robusta esperada (Fig. 8B). El compuesto E1-21.26 a 3 mg/kg y 10 mg/kg disminuyó significativamente y de forma dependiente de la dosis la puntuación acumulada de catalepsia a lo largo de 360 min, comparado con los controles de vehículo (11,7 y 1,0, respectivamente, p < 0,01). Se observó catalepsia entre 1,5 y 6 horas a 3 mg/kg. También se observó catalepsia entre 5 y 6 horas a 10 mg/kg. Estos resultados sugieren la presencia de una actividad anticataléptica significativa para el compuesto E1-21.26 en la prueba de catalepsia inducida por haloperidol en rata.
EJEMPLO 2.9. Modelo de formalina de rata
El modelo de formalina de rata es un modelo tónico de dolor continuo resultante de comportamientos nociceptivos espontáneos inducidos por formalina. La inyección en las patas de formalina es un modelo comúnmente usado para medir comportamientos nociceptivos espontáneos en roedores (Dubuisson, D. y Dennis, S.G. Pain 4:161, 1977). La inyección plantar subcutánea de formalina causa una respuesta conductual nocifensiva bifásica en roedores. La fase temprana (fase I) dura aproximadamente 5-10 min después de lo cual se produce una interfase sin ninguna reacción nociceptiva discernible después de lo cual sigue la reacción nociceptiva de fase tardía (fase II) que continúa desde aproximadamente 20-60 min después de la inyección de formalina. El modelo de formalina es un modelo de dolor tónico, persistente, y se usa mucho para el cribado rápido de compuestos analgésicos novedosos. El modelo abarca mecanismos inflamatorios, neurogénicos y centrales de nocicepción, y la fase tardía en particular se considera como un sustituto farmacodinámico de sensibilización central. En el presente ejemplo, se evaluaron los efectos de los productos de prueba en 0-5 minutos de la fase temprana (fase I) y 20-25 minutos de la fase tardía (fase II) del comportamiento nociceptivo inducido por formalina. 20 min antes de la inyección de formalina, a los animales se les administró vehículo, compuesto de prueba (10, 30, 60 mpk i.p.) típicamente usando dimetilsulfóxido al 0,5%, agua con hidroxipropil-b-ciclodextrina al 4% como vehículo y control positivo duloxetina (30 mpk).
Para todos los grupos, los animales se aclimataron a la cámara de observación durante 15 minutos inmediatamente antes de la inyección de formalina. Todos los animales recibieron una inyección subcutánea intraplantar de 50 pl de formalina al 5% en la pata delantera izquierda y después se colocaron inmediatamente en una cámara de observación y los comportamientos nociceptivos espontáneos provocados por formalina en las ratas se registraron continuamente durante 0-60 min usando una videocámara comercial.
La puntuación de los ficheros de video grabados se realizó fuera de línea usando un PC por un observador que estaba validado para puntuar tal comportamiento nociceptivo en roedores. Se registró el tiempo total pasado en un archivo de 5 min usando un cronómetro para el siguiente comportamiento nociceptivo: retirar, agitar, morder y lamer la pata inyectada.
El compuesto E1-1.2 se administró como una sal mesilato (mpk basado en el peso molecular de la base libre). Los datos de compuestos que no son de fórmula (II) como se define en la reivindicación 1 se proporcionan como ejemplos de referencia.
Los efectos del compuesto de prueba se evaluaron en los siguientes archivos: 0-5 minutos de la fase temprana (fase I) y 20-25 minutos de la fase tardía (fase II).
Los resultados se muestran en la figura 9A y 9B. Las barras representan la media ± EEM para cada grupo de dosis (n = 8, ****: diferente del grupo vehículo, p < 0,0001, ANOVA unidireccional, prueba posterior de Dunnett). Las dosis se dan en miligramos por kilogramo (mpk).
A cada una de las dosis (10, 30 y 60 mpk i.p.), el compuesto E1-1.2 disminuyó el tiempo acumulado pasado en comportamiento nociceptivo en fase I (0-5 min) (Fig. 9A) y fase II (20-35 min) (Fig. 9B).
EJEMPLO 2.10. Depresión cortical propagada (CSD), fase aura del modelo de migraña.
El modelo de depresión cortical propagada se utiliza para investigar si el tratamiento con compuestos de la presente invención afecta sucesos electrofisiológicos y hemodinámicos en un modelo de rata de migraña.
Las ratas se anestesiaron con isoflurano al 5% (en N2O al 70% y O2 al 30%; flujo 300 ml/min) y se colocaron en un marco estereotáctico. Durante la operación y CSD la concentración de anestésico se redujo al 1-1,5%. La temperatura rectal se mantuvo a 37,0 ± 1,0°C con un sistema de manta homeotérmica. La piel se abrió mediante una incisión medial y se retiró lateralmente. Se perforaron tres agujeros de trepanación con refrigeración con solución salina sobre el hemisferio derecho en las siguientes coordenadas (mm desde el bregma): (1) posterior 4,5, lateral 2,0 (corteza occipital): sitio de aplicación de KCl; (2) posterior 0,5, lateral 2,0 (corteza parietal): sitio de registro de LDF; (3) anterior 2, lateral 2 (corteza frontal); sitio de registro de potencial de CC. Se colocaron una sonda de flujo laser Doppler (Oxyflow, Oxford Optronics, RU) para seguir el c Bf y un electrodo de Ag/AgCl invasivo para medir los cambios de
potencial de la corriente continua (CC) en los agujeros de trepanación de la corteza parietal y frontal en la duramadre intacta y en la corteza respectivamente. La sonda de flujo laser Doppler se colocó en un área libre de vasos grandes de la piamadre y duramadre para minimizar la contribución de un gran vaso en la señal. Para la medida del potencial de c C, un electrodo de referencia se fijó en el cuello. La duramadre sobre la corteza occipital se retiró suavemente y se tuvo cuidado para evitar hemorragias. Después de la preparación quirúrgica, la corteza se dejó recuperar durante 15 minutos con irrigación de solución salina. Una bola de algodón (2 mm de diámetro) empapada con KCl 1 M se colocó en la superficie de la piamadre y se mantuvo húmeda colocando 5 pl de solución de KCl cada 15 minutos. Se administró compuesto de prueba o vehículo diez (10) minutos antes del inicio de CSD. El control positivo MK-801 se administró 30 min antes del inicio de CSD. Se contó el número de CSD inducidas por KCl durante 2 horas. Se siguieron el CBF y el potencial de CC continuamente empezando desde 5 minutos antes de la exposición a KCl.
El compuesto E1-1.2 se administró como una sal mesilato (mpk basado en el peso molecular de la base libre). Los datos de compuestos que no son de fórmula (II) como se define en la reivindicación 1 se proporcionan como ejemplos de referencia.
Los datos se recogieron en software de adquisición Windaq (Dataq Instruments, EE UU) a 20 kHz. Los datos en bruto se analizaron en el programa Clampfit (Axon Instruments, EE UU). Las señales se filtraron a pase bajo (intervalo de corte 5-10000 Hz) que episodios de CSD en CC y CBF se pudieron confirmar. Se analizaron los siguientes parámetros: i) el número, duración y amplitud de potenciales de CC, y ii) el número y amplitud de sucesos de CBF.
Los resultados para el número de potenciales de CC se muestran en la figura 10. Las dosis se dieron en miligramos por kilogramo (mpk). La dosis de MK-801, el control positivo, fue 1,25 mg/kg. Las barras representan media ± error estándar de la media (EEM), y se consideraron que las diferencias eran estadísticamente significativas al nivel P<0,05 (n = 8, * diferente del grupo vehículo). El análisis estadístico se realizó usando software estadístico StatsDirect. Las diferencias entre grupos se analizaron usando ANOVA unidireccional y prueba de Dunnett post-hoc.
La amplitud de los potenciales de CC para el compuesto E1-1.2 a varias dosis y MK-801 no era estadísticamente diferente comparado con el vehículo (no mostrado). La duración de los potenciales de CC para el compuesto E1-1.2 a varias dosis no era estadísticamente diferente comparado con vehículo (no mostrado). La duración de los potenciales de CC para MK-801 aumentó comparada con el vehículo (p<0,05, no mostrado).
La magnitud de CBF no cambió para el compuesto E1-1.2 comparado con el vehículo. El número de sucesos de CBF disminuyó para el compuesto E1-1.2 a 10 mg/kg y para MK-801 a 1,25 mg/kg con una diferencia estadísticamente significativa del vehículo (* p <0,05 frente al grupo vehículo) (no mostrado).
El compuesto E1-1.2 (3 mpk, 10 mpk y 30 mpk) disminuyó significativamente el número de potenciales de CC cuando se compara con el grupo vehículo (* p < 0,05 para todas las dosis frente al grupo vehículo, datos presentados como media ± EEM). Los presentes datos demuestran que el compuesto E1-1.2 era eficaz en un modelo de migraña.
Claims (6)
1. Una entidad química, que es un compuesto de fórmula (II):
R5 es -H, -F, -Cl, -CH3 , -CFH2, -CF2H, -CF3, -CH2CH3 , -CF2CH3 , -CH2CF3 , ciclopropilo, -OCF3, -OCF2H, -SCH3, -S(O)2CH3 o -CeCH;
R6 es -H o -F; y
R7 es-H, -F, -Cl o -CH3.
2. La entidad química de fórmula (II) según la reivindicación 1 seleccionada de la tabla 1.E1:
Tabla 1.E1
Ċ
Tabla 1.E1
Tabla 1.E1
3. Una composición farmacéutica que comprende la entidad química de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2 y
un soporte farmacéuticamente aceptable.
4. La composición farmacéutica de la reivindicación 3, que es adecuada para la administración oral.
5. Una cantidad eficaz de la entidad química de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2 para uso en el tratamiento
de una enfermedad o trastorno que responde a antagonismo de NR2B, en donde la enfermedad o trastorno es
depresión, dolor, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, enfermedad de Alzheimer, isquemia
cerebral, lesión cerebral traumática, epilepsia o migraña.
6. La entidad química para uso de la reivindicación 5, en donde la enfermedad o trastorno es depresión.
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