RU2731098C2 - Способ улучшения функции иммунных клеток и оценки мультифункциональности иммунных клеток - Google Patents
Способ улучшения функции иммунных клеток и оценки мультифункциональности иммунных клеток Download PDFInfo
- Publication number
- RU2731098C2 RU2731098C2 RU2017108754A RU2017108754A RU2731098C2 RU 2731098 C2 RU2731098 C2 RU 2731098C2 RU 2017108754 A RU2017108754 A RU 2017108754A RU 2017108754 A RU2017108754 A RU 2017108754A RU 2731098 C2 RU2731098 C2 RU 2731098C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- cancer
- immune
- metformin
- treatment
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 118
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 title abstract description 107
- 230000003915 cell function Effects 0.000 title description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 152
- 229960003105 metformin Drugs 0.000 claims abstract description 131
- XZWYZXLIPXDOLR-UHFFFAOYSA-N metformin Chemical compound CN(C)C(=N)NC(N)=N XZWYZXLIPXDOLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 131
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 130
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 208000021712 Soft tissue sarcoma Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 90
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 7
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 claims description 5
- 229940127003 anti-diabetic drug Drugs 0.000 abstract description 51
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 abstract description 51
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 51
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 abstract description 48
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 19
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 189
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 121
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 112
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 67
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 63
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 63
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 62
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 55
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 52
- 229940123208 Biguanide Drugs 0.000 description 50
- XNCOSPRUTUOJCJ-UHFFFAOYSA-N Biguanide Chemical compound NC(N)=NC(N)=N XNCOSPRUTUOJCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 50
- 230000006870 function Effects 0.000 description 46
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 43
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 43
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 41
- 102100034458 Hepatitis A virus cellular receptor 2 Human genes 0.000 description 40
- 101001068133 Homo sapiens Hepatitis A virus cellular receptor 2 Proteins 0.000 description 40
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 39
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 39
- 229960004111 buformin Drugs 0.000 description 39
- XSEUMFJMFFMCIU-UHFFFAOYSA-N buformin Chemical compound CCCC\N=C(/N)N=C(N)N XSEUMFJMFFMCIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 229960003243 phenformin Drugs 0.000 description 39
- ICFJFFQQTFMIBG-UHFFFAOYSA-N phenformin Chemical compound NC(=N)NC(=N)NCCC1=CC=CC=C1 ICFJFFQQTFMIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 36
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 34
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 30
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 29
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 24
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 23
- 230000008859 change Effects 0.000 description 21
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 21
- PHEDXBVPIONUQT-UHFFFAOYSA-N Cocarcinogen A1 Natural products CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC1C(C)C2(O)C3C=C(C)C(=O)C3(O)CC(CO)=CC2C2C1(OC(C)=O)C2(C)C PHEDXBVPIONUQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 14
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 14
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 14
- PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N ionomycin Chemical compound O1[C@H](C[C@H](O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)/C=C/C[C@@H](C)C[C@@H](C)C(/O)=C/C(=O)[C@@H](C)C[C@@H](C)C[C@@H](CCC(O)=O)C)CC[C@@]1(C)[C@@H]1O[C@](C)([C@@H](C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N 0.000 description 14
- PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N ionomycin Natural products O1C(CC(O)C(C)C(O)C(C)C=CCC(C)CC(C)C(O)=CC(=O)C(C)CC(C)CC(CCC(O)=O)C)CCC1(C)C1OC(C)(C(C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 14
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 14
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 12
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 12
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 11
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 11
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 11
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 10
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- 108091008034 costimulatory receptors Proteins 0.000 description 10
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 description 10
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 description 10
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 10
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 9
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 9
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 9
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 8
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 8
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 8
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 8
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 8
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 8
- 241000894007 species Species 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 7
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 7
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 7
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 7
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 7
- 208000006593 Urologic Neoplasms Diseases 0.000 description 7
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 7
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 7
- 229940029030 dendritic cell vaccine Drugs 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 7
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 7
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 7
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 7
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 7
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 7
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 6
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 6
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 6
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 6
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 6
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 6
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 6
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 6
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 6
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 6
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 6
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 6
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 5
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 5
- 101100407308 Mus musculus Pdcd1lg2 gene Proteins 0.000 description 5
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 108700030875 Programmed Cell Death 1 Ligand 2 Proteins 0.000 description 5
- 102100024213 Programmed cell death 1 ligand 2 Human genes 0.000 description 5
- 102000003923 Protein Kinase C Human genes 0.000 description 5
- 108090000315 Protein Kinase C Proteins 0.000 description 5
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 5
- 206010047741 Vulval cancer Diseases 0.000 description 5
- 208000004354 Vulvar Neoplasms Diseases 0.000 description 5
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 5
- -1 antiseptics Substances 0.000 description 5
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 5
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 5
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 5
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 5
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 5
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 5
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 5
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 5
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 description 5
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 5
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 5
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 5
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 5
- 206010046885 vaginal cancer Diseases 0.000 description 5
- 208000013139 vaginal neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 5
- 201000005102 vulva cancer Diseases 0.000 description 5
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 208000022072 Gallbladder Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 4
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 4
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 4
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- 206010035603 Pleural mesothelioma Diseases 0.000 description 4
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 4
- 201000009036 biliary tract cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000020790 biliary tract neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 4
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 4
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 description 4
- 229950009791 durvalumab Drugs 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 201000003444 follicular lymphoma Diseases 0.000 description 4
- 201000010175 gallbladder cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 4
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 4
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 4
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 4
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 description 4
- JVJGCCBAOOWGEO-RUTPOYCXSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-4-amino-2-[[(2s,3s)-2-[[(2s,3s)-2-[[(2s)-2-azaniumyl-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-carboxylatobutanoyl]amino]-6-azaniumy Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JVJGCCBAOOWGEO-RUTPOYCXSA-N 0.000 description 3
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 3
- 208000029483 Acquired immunodeficiency Diseases 0.000 description 3
- 208000009746 Adult T-Cell Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 208000016683 Adult T-cell leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 3
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 208000031671 Large B-Cell Diffuse Lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 description 3
- 108010008707 Mucin-1 Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 3
- 102100022748 Wilms tumor protein Human genes 0.000 description 3
- 201000006966 adult T-cell leukemia Diseases 0.000 description 3
- 229960003852 atezolizumab Drugs 0.000 description 3
- 229950002916 avelumab Drugs 0.000 description 3
- 206010012818 diffuse large B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 229960005386 ipilimumab Drugs 0.000 description 3
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 3
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 3
- 230000009149 molecular binding Effects 0.000 description 3
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 3
- 229940023143 protein vaccine Drugs 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 2
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 description 2
- 206010010099 Combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- 101100451497 Dictyostelium discoideum hspB gene Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 2
- 208000021309 Germ cell tumor Diseases 0.000 description 2
- 101150022862 HSC70 gene Proteins 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 206010050017 Lung cancer metastatic Diseases 0.000 description 2
- 208000002030 Merkel cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 description 2
- 229930191564 Monensin Natural products 0.000 description 2
- GAOZTHIDHYLHMS-UHFFFAOYSA-N Monensin A Natural products O1C(CC)(C2C(CC(O2)C2C(CC(C)C(O)(CO)O2)C)C)CCC1C(O1)(C)CCC21CC(O)C(C)C(C(C)C(OC)C(C)C(O)=O)O2 GAOZTHIDHYLHMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- 201000003793 Myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 description 2
- 206010029266 Neuroendocrine carcinoma of the skin Diseases 0.000 description 2
- 108010092262 T-Cell Antigen Receptors Proteins 0.000 description 2
- 206010057644 Testis cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 239000007825 activation reagent Substances 0.000 description 2
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 2
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 2
- 208000017763 cutaneous neuroendocrine carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000002702 enteric coating Substances 0.000 description 2
- 238000009505 enteric coating Methods 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000029225 intracellular protein transport Effects 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229960005358 monensin Drugs 0.000 description 2
- GAOZTHIDHYLHMS-KEOBGNEYSA-N monensin A Chemical compound C([C@@](O1)(C)[C@H]2CC[C@@](O2)(CC)[C@H]2[C@H](C[C@@H](O2)[C@@H]2[C@H](C[C@@H](C)[C@](O)(CO)O2)C)C)C[C@@]21C[C@H](O)[C@@H](C)[C@@H]([C@@H](C)[C@@H](OC)[C@H](C)C(O)=O)O2 GAOZTHIDHYLHMS-KEOBGNEYSA-N 0.000 description 2
- 208000025189 neoplasm of testis Diseases 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 2
- 229950007217 tremelimumab Drugs 0.000 description 2
- URAYPUMNDPQOKB-UHFFFAOYSA-N triacetin Chemical compound CC(=O)OCC(OC(C)=O)COC(C)=O URAYPUMNDPQOKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PYSRRFNXTXNWCD-UHFFFAOYSA-N 3-(2-phenylethenyl)furan-2,5-dione Chemical compound O=C1OC(=O)C(C=CC=2C=CC=CC=2)=C1 PYSRRFNXTXNWCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035285 Allergic Seasonal Rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 1
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 1
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 229940125565 BMS-986016 Drugs 0.000 description 1
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 210000001239 CD8-positive, alpha-beta cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229920000623 Cellulose acetate phthalate Polymers 0.000 description 1
- 241000218631 Coniferophyta Species 0.000 description 1
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 208000027219 Deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 description 1
- 208000007514 Herpes zoster Diseases 0.000 description 1
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 description 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 1
- 102000037982 Immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008036 Immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 101150030213 Lag3 gene Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 208000034176 Neoplasms, Germ Cell and Embryonal Diseases 0.000 description 1
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 208000031845 Pernicious anaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 102000009097 Phosphorylases Human genes 0.000 description 1
- 108010073135 Phosphorylases Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 102100035703 Prostatic acid phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 206010062237 Renal impairment Diseases 0.000 description 1
- 241000702263 Reovirus sp. Species 0.000 description 1
- 206010062106 Respiratory tract infection viral Diseases 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 206010054979 Secondary immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010041925 Staphylococcal infections Diseases 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229920000147 Styrene maleic anhydride Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 208000024780 Urticaria Diseases 0.000 description 1
- 241000607272 Vibrio parahaemolyticus Species 0.000 description 1
- 208000006110 Wiskott-Aldrich syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 201000009628 adenosine deaminase deficiency Diseases 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 238000011224 anti-cancer immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007503 antigenic stimulation Effects 0.000 description 1
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 208000036556 autosomal recessive T cell-negative B cell-negative NK cell-negative due to adenosine deaminase deficiency severe combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- KQNZDYYTLMIZCT-KQPMLPITSA-N brefeldin A Chemical compound O[C@@H]1\C=C\C(=O)O[C@@H](C)CCC\C=C\[C@@H]2C[C@H](O)C[C@H]21 KQNZDYYTLMIZCT-KQPMLPITSA-N 0.000 description 1
- JUMGSHROWPPKFX-UHFFFAOYSA-N brefeldin-A Natural products CC1CCCC=CC2(C)CC(O)CC2(C)C(O)C=CC(=O)O1 JUMGSHROWPPKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L calcium stearate Chemical compound [Ca+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000013539 calcium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008116 calcium stearate Substances 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 229940081734 cellulose acetate phthalate Drugs 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000001087 glyceryl triacetate Substances 0.000 description 1
- 235000013773 glyceryl triacetate Nutrition 0.000 description 1
- 210000002288 golgi apparatus Anatomy 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- SPSXSWRZQFPVTJ-ZQQKUFEYSA-N hepatitis b vaccine Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1N=CN=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C1=CC=CC=C1 SPSXSWRZQFPVTJ-ZQQKUFEYSA-N 0.000 description 1
- 229940124736 hepatitis-B vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920003132 hydroxypropyl methylcellulose phthalate Polymers 0.000 description 1
- 229940031704 hydroxypropyl methylcellulose phthalate Drugs 0.000 description 1
- 229940121569 ieramilimab Drugs 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000005977 kidney dysfunction Effects 0.000 description 1
- 208000006443 lactic acidosis Diseases 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005976 liver dysfunction Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 201000005243 lung squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 208000015688 methicillin-resistant staphylococcus aureus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- OXOBLVKOVYDHQV-UHFFFAOYSA-N methyl 2-methylprop-2-enoate 3-(2-phenylethenyl)furan-2,5-dione Chemical compound COC(=O)C(C)=C.O=C1OC(=O)C(C=CC=2C=CC=CC=2)=C1 OXOBLVKOVYDHQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229940031734 peptide cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L phthalate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C([O-])=O XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 210000004224 pleura Anatomy 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 229940068984 polyvinyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 108010043671 prostatic acid phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 229940034080 provenge Drugs 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 239000002213 purine nucleotide Substances 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 208000015347 renal cell adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 208000002491 severe combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 229960002622 triacetin Drugs 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 229950005972 urelumab Drugs 0.000 description 1
- 229950001067 varlilumab Drugs 0.000 description 1
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/13—Amines
- A61K31/155—Amidines (), e.g. guanidine (H2N—C(=NH)—NH2), isourea (N=C(OH)—NH2), isothiourea (—N=C(SH)—NH2)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/15—Cells of the myeloid line, e.g. granulocytes, basophils, eosinophils, neutrophils, leucocytes, monocytes, macrophages or mast cells; Myeloid precursor cells; Antigen-presenting cells, e.g. dendritic cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
- G01N33/5047—Cells of the immune system
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/564—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for pre-existing immune complex or autoimmune disease, i.e. systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, rheumatoid factors or complement components C1-C9
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
- G01N33/6866—Interferon
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
- G01N33/6869—Interleukin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/52—Assays involving cytokines
- G01N2333/525—Tumor necrosis factor [TNF]
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/52—Assays involving cytokines
- G01N2333/54—Interleukins [IL]
- G01N2333/55—IL-2
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/52—Assays involving cytokines
- G01N2333/555—Interferons [IFN]
- G01N2333/57—IFN-gamma
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Rehabilitation Therapy (AREA)
- Rheumatology (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использована для лечения саркомы мягких тканей и рака кожи. Для этого используют комбинацию, содержащую метформин и анти-pd-1 антитело. Группа изобретений также относится к способу лечения и/или предупреждения ракового заболевания, включающему введение комбинации. Использование данной комбинации обеспечивает синергетический эффект, повышая чувствительность иммунных клеток к терапевтическому средству при обработке их антидиабетическим лекарственным средством метформином, увеличивая мультифункциональность иммунных клеток в результате увеличения числа cd8+-т-клеток, обладающих способностью продуцировать il-2, tnfα и ifnγ. 3 н. и 2 з.п. ф-лы, 8 пр., 5 табл., 13 ил.
Description
Область, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к способу улучшения функции иммунных клеток; к иммунным клеткам с улучшенной функцией; и к средству для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, где указанное средство содержит в качестве активного ингредиента иммунные клетки с улучшенной функцией. Настоящее изобретение также относится к способу оценки мультифункциональности иммунных клеток.
Предшествующий уровень техники
T-клетки служат в качестве иммунных клеток и составляют от 70 до 80% от всех лимфоцитов периферической крови. T-клетки присутствуют в селезенке или в лимфоузлах, распределенных по всему организму, и вносят свой вклад в биологическую защиту. T-клетки подразделяются на цитотоксические T-клетки (CD8+-T-клетки), которые непосредственно воздействуют на вирус-инфицированные клетки или раковые клетки, и на хелперные T-клетки (CD4+-Т-клетки), которые способствуют улучшению функции иммунокомпетентных клеток, таких как цитотоксические T-клетки. T-клетки имеют T-клеточные рецепторы (TCR), экспрессирующиеся на поверхности T-клеток и распознающие антигены. Одна T-клетка экспрессирует TCR, который специфически распознает антиген конкретного типа. Такое свойство называется специфичностью T-клеток к антигену. T-клетки играют важную роль в развитии различных иммуноассоциированных клинических состояний, включая инфекции; опухоли; заболевания, вызываемые трансплантацией органов; и аллергии.
В последние годы был выявлен механизм иммунного истощения и появились сообщения о том, что ингибирование связывания молекул, ответственных за иммунное истощение, с их лигандами, играет важную роль в лечении рака. У некоторых раковых пациентов наблюдается значительное снижение иммунного ответа (иммунное истощение). Иммунное истощение вызывается экспрессией маркеров истощения, таких как PD-1, Tim-3, Lag3 и т.п., под действием CD8+-T-клеток, и эти маркерные молекулы истощения (молекулы, ответственные за истощение), связывающиеся с их лигандами, вызывают потерю способности к одновременному продуцированию IL-2, TNFα и IFNγ (мультифункциональности), а также клеточноую гибель в результате апоптоза (Непатентные документы 1-6). Для предотвращения такого апоптоза и иммунного истощения CD8+-T-клеток необходимо подавлять экспрессию самих молекул, ответственных за иммунное истощение. Однако, в настоящее время такой технологии не существует, а поэтому единственным способом улучшения функций CD8+-T-клеток и предупреждения апоптоза является ингибирование связывания молекул, ответственных за иммунное истощение, с их лигандами. При этом известно, что определенные виды (определенное число) молекул истощения ответственны за увеличение продуцирования цитокинов, а поэтому в настоящее время проводятся исследования по поиску соответствующего числа молекул и лигандов, связывание которых необходимо ингибировать. Кроме того, поскольку очевидно, что такой способ может вызывать побочные эффекты, желательно разработать способ, дающий меньшее число побочных эффектов.
Для мониторинга иммунного статуса при патологическом состоянии или для оценки эффективности вакцины важную роль играют методы количественной и качественной оценки специфичности T-клеток к антигену, где указанные методы применяются для оценки мультифункциональности иммунных клеток. Для пациентов, подвергаемых иммунотерапии, такой как противораковая вакцинная терапия, необходимо осуществлять антигенную стимуляцию клеток in vitro в течение 1 или 2 недель для оценки терапевтического эффекта. Примерами методов оценки T-клеточной функции являются анализы на цитотоксичность; методы ELISA для детектирования продуцирования цитокинов; методы детектирования молекул, секретируемых клетками всех групп, с помощью иммуноанализа на флуоресцентных сферах; анализ на внутриклеточные цитокины (анализ на окрашивание внутриклеточных цитокинов: метод ICS) на проточном цитометре (FCM, FACS); и методы детектирования секреции молекул на отдельной клеточной основе методом ELISPOT (с помощью иммуноферментного спот-анализа).
Хотя уже известные методы оценки функции T-клеток позволяют провести точный анализ отдельных Т-клеточных функций, однако, результаты такого анализа необязательно будут коррелировать с прогнозом. Более конкретно, достаточно трудно точно определить иммунную кинетику у здоровых индивидуумов или у пациентов, например, с инфекциями, трудно поддающимися лечению, или раковыми заболеваниями, и сделать прогноз результатов лечения с помощью иммунного активатора. Известные методы улучшения функции T-клеток имеют тот недостаток, что они не позволяют значительно повысить необходимый иммунитет у пациентов, страдающих, например, инфекциями, трудно поддающимися лечению, или раковыми заболеваниями, или у здоровых пациентов, и тем самым, выявлять какие-либо симптомы. В первом случае, условия оценки иммунной кинетики для точного подтверждения или предсказания терапевтических эффектов являются недостаточно хорошими, и кроме того, пока не существуют способы объективной оценки и анализа эффективности методов и технологий улучшения различных функций T-клеток (способов оценки мультифункциональности иммунных клеток, используемых для прогноза результатов лечения).
Так, например, при введении вакцин почти всегда необходимо вводить адъювант вместе с антигеном, однако, адъювант может вызывать серьезные побочные эффекты. До сих пор еще не получен адъювант, который был бы безопасным, эффективным и применимым для всех вакцин. Кроме того, при многих инфекционных или раковых заболеваниях, достаточный протективный иммунитет не может быть достигнут путем введения вакцины, несмотря на увеличение числа CD8-позитивных T-клеток-киллеров в периферической крови в ответ на введение вакцины. Чаще всего, такое отсутствие эффекта при применении вакцины, вероятно, обусловлено иммунным истощением. Исходя из вышесказанного очевидно, что пока еще не существуют какие-либо методы объективной оценки иммунной кинетики и не выявлены агенты, улучшающие функцию T-клеток, а также не разработана комбинированная технология, которая включала бы в себя метод повышения мультифункциональности клеток посредством устранения иммунного истощения различных иммунных клеток и метод точного и простого предсказания и оценки конечных эффектов.
В Патентном документе 1 указывается, что метформин служит для усиления эффектов химиотерапевтических лекарственных средств, однако, в примерах Патентного документа 1 указывается, что сам метформин не дает желаемого эффекта при лечении опухоли. В Непатентном документе 7 описан механизм действия метформина как терапевтического средства для лечения диабета типа II.
Список цитируемых документов
Патентные документы
Патентный документ 1: JP2013-503171A
Непатентные документы
Непатентный документ 1: Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002; 99:12293-7
Непатентный документ 2: Cancer Res. 2004; 64: 1140-5
Непатентный документ 3: J. Exp. Med. 2010; 207: 2187-94
Непатентный документ 4: Trends Immunol. 2011; 32: 345-9
Непатентный документ 5: Cancer Res. 2011; 71: 3540-51
Непатентный документ 6: Nat. Rev Cancer. 2012; 12: 252-64
Непатентный документ 7: Nature 2006; 439: 682-687
Описание сущности изобретения
Технические проблемы
Целью настоящего изобретения является активация иммунных клеток ex vivo и разработка способа улучшения функции иммунных клеток, а также получения иммунных клеток с улучшенной функцией. Другой целью настоящего изобретения является разработка способа оценки мультифункциональности иммуноассоциированных клеток.
Способы решения указанных проблем
Для достижения вышеуказанных целей, авторы настоящего изобретения сосредоточили свое внимание на цитокинах, продуцируемых CD8+-T-клетками, и на функциях иммунных клеток, а также провели крупномасштабное исследование. В результате, авторами настоящего изобретения было обнаружено, что антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина, способствует увеличению числа CD8+-T-клеток, обладающих способностью продуцировать IL-2, TNFα и IFNγ на высоком уровне, и, тем самым, улучшению функций этих клеток; и на основании этих данных, авторами было разработано настоящее изобретение. Мультифункциональность иммунных клеток оценивают путем сравнения мультифункциональности иммунных клеток, обработанных антидиабетическим лекарственным средством бигуанидом, выбранным из метформина, фенформина и буформина, с мультифункциональностью контрольных иммунных клеток, которые не были обработаны антидиабетическим лекарственным средством бигуанидом. Если было подтверждено, что иммунные клетки, обработанные антидиабетическим лекарственным средством бигуанидом, выбранным из метформина, фенформина и буформина, имели значительно более высокую мультифункциональность по сравнению с контролем, то можно предположить, что чувствительность иммунных клеток повышается после добавления терапевтического средства. Иммунные клетки, которые, как было определено данным способом оценки, имеют повышенную чувствительность к терапевтическому средству, могут давать хороший терапевтический эффект после введения антидиабетического лекарственного средства бигуанида, выбранного из метформина, фенформина и буформина.
Настоящее изобретение включает следующие отличительные признаки:
1. Способ улучшения функции иммунных клеток, включающий in vitro обработку выделенных иммунных клеток терапевтическим средством, содержащим в качестве активного ингредиента антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина.
2. Способ улучшения функции иммунных клеток по п. 1, где иммунные клетки выбраны из CD8+-T-клеток, CD4+-Т-клеток, NK-клеток, γδT-клеток, NKT-клеток, B-клеток и клеток костного мозга.
3. Иммунные клетки, функция которых была улучшена способом по п.п. 1 или 2.
4. Средство для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, где указанное средство содержит в качестве активного ингредиента иммунные клетки с функцией, улучшенной способом по любому из п.п. 1-3.
5. Средство для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, по п. 4, где заболевания, ассоциированные с иммунными патологиями, выбраны из раковых, инфекционных и аутоиммуннных заболеваний.
6. Способ оценки мультифункциональности взятых иммунных клеток, где указанный способ включает in vitro обработку выделенных иммунных клеток терапевтическим средством, содержащим в качестве активного ингредиента антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина; определения способности обработанных иммунных клеток продуцировать цитокины трех видов, а именно IL-2, TNFα и IFNγ, и оценку индекса позитивности клеток, который представляет собой отношение клеток, являющихся позитивными по способности продуцировать цитокины трех видов.
7. Способ оценки мультифункциональности по п. 6, где указанный способ включает стадию оценки уровня экспрессии Tim-3 и/или PD-1 в выделенных иммунных клетках.
8. Способ оценки мультифункциональности по п.п. 6 или 7, где иммунные клетки выбраны из CD8+-T-клеток, CD4+-Т-клеток, NK-клеток, γδT-клеток, NKT-клеток, B-клеток и клеток костного мозга.
9. Способ диагностики заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, где указанный способ включает способ оценки мультифункциональности по любому из п.п. 6-8.
10. Способ диагностики по п. 9, где способ диагностики заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, представляет собой способ диагностики, который дополнительно применяется для предсказания эффективности лечения заболевания терапевтическим средством, оценки тяжести заболевания, прогноза течения заболевания или предсказания начала развития заболевания.
11. Способ диагностики по п. 10, где терапевтическим средством для лечения заболевания является терапевтическое средство, содержащее в качестве активного ингредиента антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина.
12. Средство для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, где указанное средство содержит в качестве активного ингредиента антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина, и где указанное средство вводят после проведения теста способом диагностики по любому из п.п. 9-11.
13. Средство для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, по п. 12, где заболевания, ассоциированные с иммунными патологиями, выбраны из раковых, инфекционных и аутоиммуннных заболеваний.
14. Средство для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, где указанное средство содержит в качестве активного ингредиента антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина, и где указанное средство вводят в комбинации по меньшей мере с одним терапевтическим средством, выбранным из агента, блокирующего иммуносупрессорный фактор, и агониста костимулирующего рецептора.
15. Средство для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, где указанное средство содержит в качестве активного ингредиента по меньшей мере одно терапевтическое средство, выбранное из агента, блокирующего иммуносупрессорный фактор, и агониста костимулирующего рецептора, и где указанное средство вводят в комбинации с антидиабетическим лекарственным средством бигуанидом, выбранным из метформина, фенформина и буформина.
16. Средство для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, по п.п. 14 или 15, где агентом, блокирующим иммуносупрессорный фактор, является одно из антител или слитых белков, выбранных из анти-CTLA-4 антитела, анти-PD-1 антитела, анти-PD-L1 антитела, анти-PD-L2 антитела, слитого белка PD-L1, слитого белка PD-L2, анти-Tim-3 антитела, анти-LAG-3 антитела, анти-BTLA антитела и анти-VISTA антитела.
17. Средство для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, по п. 16, где анти-CTLA-4 антителом является ипилимумаб или тремелимумаб; анти-PD-1 антителом является ниволубам, пембролизумаб, PDR-001, REGN-2810, BGB-A317 или AMP-514, анти-PD-L1 антителом является атезолизумаб, авелумаб, дурвалумаб или BMS-936559, а слитым белком PD-L2 является AMP-224.
18. Средство для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, по п.п. 14 или 15, где агонистом костимулирующего рецептора является антитело или любая комбинация антител, выбранных из анти-CD137 антитела, анти-OX40 антитела, анти-HVEM антитела, анти-CD27 антитела, анти-GITR антитела и анти-CD28 антитела.
19. Средство для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, где указанное средство содержит в качестве активного ингредиента антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина, и где указанное средство вводят в комбинации с противораковой вакциной.
20. Средство для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, по п. 19, где противораковой вакциной является противораковая пептидная вакцина (такая как MAGE-3, MUC-1, пептид WT1, P53 или NY-ESO1), противораковая белковая вакцина, вакцина на основе дендритных клеток или вакцина против рака, который, как было подтверждено, развивается в результате вирусной инфекции.
21. Средство для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, по любому из п.п. 13-20, где заболевания, ассоциированные с иммунными патологиями, выбраны из раковых, инфекционных и аутоиммуннных заболеваний.
22. Средство для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, по п. 21, где раковым заболеванием является по меньшей мере одно раковое заболевание, выбранное из рака головы и шеи, рака пищевода, рака желудка, рака прямой и ободочной кишки, рака толстой кишки, рака прямой кишки, рака печени, рака желчного пузыря, холангиокарциномы, рака желчных путей, рака поджелудочной железы, рака легких, рака молочной железы, рака яичника, рака шейки матки, рака эндометрия, рака влагалища, рака вульвы, рака почек, рака мочеполовых путей, рака предстательной железы, рака яичек, остеосаркомы, саркомы мягких тканей, лейкоза, миелодиспластического синдрома, злокачественной лимфомы, Т-клеточного лейкоза взрослых, множественной миеломы, рака кожи, опухоли головного мозга, мезотелиомы плевры и первичного рака неизвестной этиологии.
23. Средство для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, по п.п. 21 или 22, где лечение рака представляет собой подавление прогрессирования рака, а предупреждение рака представляет собой предупреждение рецидивов рака.
24. Средство для подавления прогрессирования рака, лечения рака, предупреждения рака и/или предупреждения рецидивов рака, где указанное средство включает в качестве активного ингредиента анти-PD-1 антитело, и где указанное средство вводят в комбинации с метформином, где раковым заболеванием является по меньшей мере одно раковое заболевание, выбранное из рака головы и шеи, рака пищевода, рака желудка, рака прямой и ободочной кишки, гепатоцеллюлярного рака, рака поджелудочной железы, немелкоклеточного рака легких, мелкоклеточного рака легких, рака молочной железы, рака яичника, рака шейки матки, рака эндометрия, рака влагалища, рака вульвы, почечноклеточного рака, рака мочеполовых путей, лимфомы Ходжкина, фолликулярной лимфомы, диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы, множественной миеломы, злокачественной меланомы, глиобластомы и мезотелиомы плевры.
25. Средство для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, по любому из п.п. 14-24, где указанное средство вводят после проведения теста способом диагностики по любому из п.п. 9-11.
A. Способ лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, где указанный способ включает использование терапевтического средства, содержащего в качестве активного ингредиента антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина, и где указанное средство вводят после проведения теста способом диагностики по любому из п.п. 9-11.
В. Способ лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, по пункту А, где заболевания, ассоциированные с иммунными патологиями, выбраны из раковых, инфекционных и аутоиммуннных заболеваний.
С. Способ лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, где указанный способ включает введение терапевтического средства, содержащего в качестве активного ингредиента антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина, и где указанное средство вводят в комбинации по меньшей мере с одним терапевтическим средством, выбранным из агента, блокирующего иммуносупрессорный фактор, и агониста костимулирующего рецептора.
D. Способ лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, где указанный способ включает введение терапевтического средства, содержащего в качестве активного ингредиента по меньшей мере одно терапевтическое средство, выбранное из агента, блокирующего иммуносупрессорный фактор, и агониста костимулирующего рецептора, и где указанное средство вводят в комбинации с антидиабетическим лекарственным средством бигуанидом, выбранным из метформина, фенформина и буформина.
E. Способ лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, по п.п. C или D, где агентом, блокирующим иммуносупрессорный фактор, является одно из антител или слитых белков, выбранных из анти-CTLA-4 антитела, анти-PD-1 антитела, анти-PD-L1 антитела, анти-PD-L2 антитела, слитого белка PD-L1, слитого белка PD-L2, анти-Tim-3 антитела, анти-LAG-3 антитела, анти-BTLA антитела и анти-VISTA антитела.
F. Способ лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, по п. E, где анти-CTLA-4 антителом является ипилимумаб или тремелимумаб; анти-PD-1 антителом является ниволубам, пембролизумаб, PDR-001, REGN-2810, BGB-A317 или AMP-514, анти-PD-L1 антителом является атезолизумаб, авелумаб, дурвалумаб или BMS-936559, а слитым белком PD-L2 является AMP-224.
G. Способ лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, по п.п. C или D, где агонистом костимулирующего рецептора является антитело или любая комбинация антител, выбранных из анти-CD137 антитела, анти-OX40 антитела, анти-HVEM антитела, анти-CD27 антитела, анти-GITR антитела, и анти-CD28 антитела.
H. Способ лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, где указанный способ включает введение терапевтического средства, содержащего в качестве активного ингредиента антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина, и где указанное средство вводят в комбинации с противораковой вакциной.
I. Способ лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, по п. H, где противораковой вакциной является противораковая пептидная вакцина (такая как MAGE-3, MUC-1, пептид WT1, P53 или NY-ESO1), противораковая белковая вакцина, вакцина на основе дендритных клеток или вакцина против рака, который, как было подтверждено, вызывается вирусной инфекцией.
J. Способ лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, где указанный способ включает введение иммунных клеток, функция которых была улучшена способом по любому из п.п. 1-3.
K. Способ лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, по любому из п.п. B-J, где заболевания, ассоциированные с иммунными патологиями, выбраны из раковых, инфекционных и аутоиммуннных заболеваний.
L. Способ лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, по п. K, где раковым заболеванием является по меньшей мере одно раковое заболевание, выбранное из рака головы и шеи, рака пищевода, рака желудка, рака прямой и ободочной кишки, рака толстой кишки, рака прямой кишки, рака печени (такого как гепатоцеллюлярный рак), рака желчного пузыря, холангиокарциномы, рака желчных путей, рака поджелудочной железы, рака легких (такого как немелкоклеточный рак легких (плоскоклеточный немелкоклеточный рак легких, неплоскоклеточный немелкоклеточный рак легких) или мелкоклеточный рак легких), рака молочной железы, рака яичника, рака шейки матки, рака эндометрия, рака влагалища, рака вульвы, рака почек (такого как почечноклеточный рак), рака мочеполовых путей (такого как рак мочевого пузыря или рак верхних мочевых путей), рака предстательной железы, опухоли яичек (такой как новообразование зародышевых клеток), остеосаркомы, саркомы мягких тканей, лейкоза, миелодиспластического синдрома, злокачественной лимфомы (такой как лимфома Ходжкина, фолликулярная лимфома или диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома), Т-клеточного лейкоза взрослых, множественной миеломы, рака кожи (такого как злокачественная меланома или карцинома клеток Меркеля), опухоли головного мозга (такой как глиобластома), мезотелиомы плевры и первичного рака неизвестной этиологии.
М. Способ лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, по п.п. K или L, где лечение рака представляет собой подавление прогрессирования рака, а предупреждение рака представляет собой предупреждение рецидивов рака.
N. Способ подавления прогрессирования рака, лечения рака, предупреждения рака и/или предупреждения рецидивов рака, где указанный способ включает введение терапевтического средства, содержащего в качестве активного ингредиента анти-PD-1 антитело (например, ниволубам, пембролизумаб), и где указанное средство вводят в комбинации с метформином, где раковым заболеванием является по меньшей мере одно раковое заболевание, выбранное из рака головы и шеи, рака пищевода, рака желудка, рака прямой и ободочной кишки, гепатоцеллюлярного рака, рака поджелудочной железы, немелкоклеточного рака легких, мелкоклеточного рака легких, рака молочной железы, рака яичника, рака шейки матки, рака эндометрия, рака влагалища, рака вульвы, почечноклеточного рака, рака мочеполовых путей, лимфомы Ходжкина, фолликулярной лимфомы, диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы, множественной миеломы, злокачественной меланомы, глиобластомы и мезотелиомы плевры.
O. Способ лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, по любому из п.п. C-N, где указанный способ осуществляют после проведения теста способом по любому из п.п. 9-11.
Преимущественные эффекты настоящего изобретения
Средство согласно изобретению, применяемое для лечения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, обладает способностью повышать иммунитет. Так, например, при лечении рака, средство согласно изобретению, если оно используется в комбинации с хирургической операцией, лучевой терапией или химиотерапией, является более эффективным, а поэтому, предположительно, улучшает прогноз. Кроме того, предполагается, что средство согласно изобретению является более эффективным, если оно используется в предоперационной химиотерапии. Кроме того, предполагается, что средство согласно изобретению будет способствовать подавлению рецидивов после лечения.
Кроме того, нижеследующие эффекты могут быть достигнуты посредством обработки клеток с применением способа улучшения функции иммунных клеток согласно изобретению. Путем обработки ex vivo самообновляющихся клеток антидиабетическим лекарственным средством бигуанидом, выбранным из метформина, фенформина и буформина, способом согласно изобретению с последующим возвращением этих клеток в организм пациента, у которого были взяты эти клетки, может быть достигнута высокая степень биологической защиты против рака или патогенных микробов. Обработка клеток способом улучшения функции иммунных клеток согласно изобретению с последующим возвращением этих клеток в организм пациента, у которого были взяты эти клетки, может обеспечивать эффективное предупреждение рака или инфекций.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 представлены результаты анализа на мультифункциональность CD8+-T-клеток, проводимого на проточном цитометре. При обработке мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК) PMA (форбол-12-миристат-13-ацетатом)/иономицином, CD8+-T-клетки подвергали гейтированию, и клетки в таблетированной форме выделяли с помощью FSC-A и FSC-H. Затем, лимфоцитарные области жизнеспособных клеток гейтировали с использованием параметров FSC-A и SSC-A, и анализировали экспрессию PD-1 и Tim-3. Кроме того, внутриклеточные цитокины IFNγ, TNFα и IL-2 были окрашенными, что позволяло детектировать мультифункциональность (Пример 1).
На фиг. 2 представлены результаты детектирования CD8+-T-клеток, способных одновременно продуцировать IFNγ, TNFα и IL-2, из всех клеток, полученных путем культивирования МКПК, взятых у здоровых индивидуумов, в течение одного часа в присутствии или в отсутствии метформина, с последующей обработкой этих клеток PMA/иономицином после удаления метформина (Пример 1).
На фиг. 3 представлены результаты анализа, проводимого с использованием мононуклеарных клеток периферической крови, взятых у раковых пациентов, методом, аналогичным методу, описанному на фиг. 2 (Пример 1).
На фиг. 4 представлены результаты подтверждения частоты встречаемости экспрессии истощающих молекул PD-1 и Tim-3 в CD8+-T-клетках, взятых у здоровых индивидуумов (N=5) и у раковых пациентов (N=5) (Пример 2).
На фиг. 5 проиллюстрированы процедуры подтверждения эффектов обработки клеток метформином ex vivo у мышей (C57BL/6) (Пример 5).
На фиг. 6 представлены результаты, полученные на проточном цитометре, где данные результаты указывали на способность Т-клеток, инфильтрированных в опухолевые клетки, продуцировать цитокины в анализе, в котором CD8+-T-клетки, происходящие от клеток селезенки донорных мышей OT-I (TCR-трансгенных мышей: TCR распознает H-2Kb+OVA257-264, Cell vol.76, 17-27, 1994), обработанных метформином ex vivo, были введены реципиенту C57BL/6 через семь дней после трансплантации опухолевых клеток (Пример 5).
На фиг. 7 приводятся результаты анализа, полученные на проточном цитометре, которые представляют собой индекс позитивности по аннексину V (степень апоптоза) для Т-клеток, инфильтрированных в опухолевые клетки, где CD8+-T-клетки донорных мышей OT-I, обработанных метформином ex vivo, были введены реципиенту C57BL/6 через семь дней после трансплантации опухолевых клеток (Пример 5).
На фиг. 8 представлены результаты измерения размера опухоли в анализе, где CD8+-T-клетки донорных мышей OT-I, обработанных метформином ex vivo, были введены реципиенту C57BL/6 через семь дней после трансплантации опухолевых клеток (Пример 5).
На фиг. 9 представлены результаты мониторинга кривой роста опухоли в анализе, где CD8+-T-клетки донорных мышей OT-I, обработанных метформином (0, 10, 100 M) ex vivo, были введены реципиенту C57BL/6 через семь дней после трансплантации опухолевых клеток (Пример 6).
На фиг. 10 представлены результаты мониторинга кривой роста опухоли после введения метформина мышам, имеющим свободный доступ к питьевой воде, и/или введения вакцины OVA (слитого белка, полученного путем присоединения OVA257-264 к C-концу мышиного hsc70: Int. Immunol. 13, 1233-1242, 2001) реципиенту C57BL/6 через семь дней после трансплантации опухолевых клеток (Пример 7).
На фиг. 11 представлены результаты мониторинга кривой роста опухоли после введения метформина мышам, имеющим свободный доступ к питьевой воде, и/или введения анти-PD-1 антитела (клона 4H2, мышиного химерного антитела, имеющего вариабельную область крысиного антитела против мышиного PD-1 и константную область мышиного IgGκ1, где указанное антитело было предоставлено компанией Ono Pharmaceutical Co., Ltd.) мышам-реципиентам C57BL/6 или BALB/c через пять дней после трансплантации опухолевых клеток (MO5→C57BL/6, Meth A→BALB/c) (Пример 8).
На фиг. 12 представлен график, на котором отложены диаметры опухолей отдельных мышей C57BL/6 (Пример 8).
На фиг. 13 представлен график, на котором отложены диаметры опухолей отдельных мышей BALB/c (Пример 8).
Описание вариантов осуществления изобретения
Один из вариантов осуществления изобретения относится к способу улучшения функции иммунных клеток, где указанный способ включает in vitro обработку выделенных иммунных клеток терапевтическим средством, содержащим в качестве активного ингредиента антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина; к иммунным клеткам с повышенным иммунитетом; и к средству для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, где указанное средство содержит в качестве активного ингредиента иммунные клетки с повышенным иммунитетом.
Другой вариант настоящего изобретения относится к мультифункциональности выделенных иммунных клеток и к способу оценки мультифункциональности иммунных клеток, которые являются позитивными по их способности продуцировать цитокины трех видов, а именно IL-2, TNFα и IFNγ, и которые были обработаны антидиабетическим лекарственным средством бигуанидом, выбранным из метформина, фенформина и буформина. Еще один вариант настоящего изобретения относится к способу оценки чувствительности иммунных клеток к терапевтическому средству, где указанный способ отличается тем, что он включает метод оценки мультифункциональности иммунных клеток. Если было определено, что мультифункциональность иммунных клеток, обработанных антидиабетическим лекарственным средством бигуанидом, выбранным из метформина, фенформина и буформина, значительно повышалась по сравнению с контролем, то это означает, что чувствительность иммунных клеток к терапевтическому средству является более высокой.
В настоящем описании, термин «иммунные клетки» означает эффекторные клетки, способные уничтожать клетки-мишени. Предпочтительными иммунными клетками являются, в частности, CD8+-T-клетки, и такие иммунные клетки могут быть также выбраны, например, из CD4+-Т-клеток, NK-клеток, γδT-клеток, NKT-клеток, B-клеток и клеток костного мозга. Этот термин охватывает генетически модифицированные клетки, такие как клетки iPS, полученные из CD8+-T-клеток, специфичных к вирусу или к раковым клеткам, или, полученные путем введения в «необученные» CD8+-T-клетки гена антигенного рецептора (T-клеточного рецептора антигена: TCR) или гена химерного антитела (рецептора химерного антигена: CAR), который распознает молекулы, экспрессирующиеся на поверхности раковых клеток.
1. Способ улучшения функции иммунных клеток
В настоящем описании, термин «иммунные клетки с улучшенной иммунной функцией» означает иммунные клетки, которые содержат большое количество клеток, являющихся позитивными по их способности продуцировать цитокины трех видов, а именно IL-2, TNFα и IFNγ.
Настоящее изобретение относится к способу улучшения функции иммунных клеток. Более конкретно, указанный способ осуществляют путем обработки иммунных клеток терапевтическим средством, содержащим в качестве активного ингредиента антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина. Кроме того, настоящее изобретение также включает клетки, обработанные способом, применяемым для улучшения функции иммунных клеток.
В настоящем описанн, иммунные клетки с повышенным иммунитетом, сообщаемым путем их обработки терапевтическим средством, содержащим в качестве активного ингредиента антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина, могут также называться «иммунными клетками, индуцированными метформином» (клетками MTi). Как объяснялось выше, обрабатываемыми иммунными клетками являются все эффекторные клетки, способные уничтожать клетки-мишени. Так, например, обрабатываемые иммунные клетки могут быть выбраны из CD8+-T-клеток, CD4+-Т-клеток, NK-клеток, γδT-клеток, NKT-клеток, B-клеток и клеток костного мозга. Примерами вышеупомянутых клеток также являются генетически модифицированные клетки, такие как клетки iPS, полученные из CD8+-T-клеток, специфичных к вирусу или к раковым клеткам, и клетки, полученные путем введения в «необученные» CD8+-T-клетки гена антигенного рецептора (T-клеточного рецептора антигена: TCR) или гена химерного антитела (рецептора химерного антигена: CAR), который распознает молекулы, экспрессирующиеся на поверхности раковых клеток. Особенно предпочтительными клетками являются CD8+-T-клетки. Обрабатываемые иммунные клетки могут быть собраны методами, известными per se, или любыми методами, которые будут разработаны в будущем. Кроме того, иммунные клетки, например, CD8+-T-клетки, необязательно должны быть подвергнуты непосредственной обработке. Если в группу иммунных клеток входят, например, CD8+-T-клетки, то мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК), выделенные из периферической крови, могут быть обработаны обычным методом.
МКПК могут быть получены методами, известными per se. Так, например, МКПК могут быть получены путем добавления пробы цельной крови, взятой у донора, к раствору Фиколла и центрифугирования этой смеси с последующим разделением под действием силы тяжести.
Функция иммунных клеток может быть улучшена путем культивирования среды, в которой антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина, было добавлено к МКПК для продуцирования клеток MTi.
Более конкретно, функция CD8+-T-клеток может быть улучшена путем культивирования клеток, включающих CD8+-T-клетки, такие как МКПК, при 37±0,5°C, 5% CO2, в течение 3-12 часов, предпочтительно, от 4 до 10 часов, а наиболее предпочтительно, 6 часов, в среде, содержащей антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина, в количестве приблизительно от 1 до 500 мкM, предпочтительно, от 1 до 100 мкM, более предпочтительно, приблизительно от 5 до 100 мкM, а особенно предпочтительно, от 10 до 100 мкM на 10×106/2 мл CD8+-T-клеток. Выбор среды не имеет конкретных ограничений; при этом, может быть использована любая среда, подходящая для культивирования CD8+-T-клеток. Особенно предпочтительной является среда AIM-V(R) (Invitrogen).
Настоящее изобретение также охватывает иммунные клетки, функция которых была улучшена путем проведения вышеописанной обработки. Термин «иммунные клетки с улучшенной иммунной функцией» означает группу иммунных клеток с повышенным содержанием клеток, которые являются позитивными по их способности продуцировать цитокины трех видов, а именно IL-2, TNFα и IFNγ. Полученные иммунные клетки с улучшенной иммунной функцией включают большое количество CD8+-T-клеток, а поэтому они являются позитивными по их способности продуцировать цитокины трех видов после введения клеток в организм. Иммунные клетки с улучшенной функцией могут быть использованы в качестве средства для лечения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями.
Кроме того, считается, что обработка клеток с применением способа улучшения функции иммунных клеток согласно изобретению будет давать эффекты, указанные ниже. Путем обработки ex vivo самообновляющихся клеток антидиабетическим лекарственным средством бигуанидом, выбранным из метформина, фенформина и буформина, способом согласно изобретению с последующим возвращением этих клеток в организм пациента, у которого были взяты эти клетки, может быть достигнута высокая степень биологической защиты против рака или патогенных микробов. Терапевтическое средство, содержащее в качестве активного ингредиента, антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина, противопоказано для пациентов с дисфункцией печени или почек, для пожилых людей, для пациентов, имеющих в анамнезе молочный ацидоз и т.п. Однако, путем ex vivo обработки самообновляющихся клеток способом, применяемым для улучшения функции иммунных клеток согласно изобретению, можно решить проблемы, связанные с побочными эффектами или с необходимостью обеспечения безопасности в случае введения антидиабетического лекарственного средства бигуанида. Кроме того, при проведении противораковой иммунотерапии, обработка иммунных клеток с повышенным иммунитетом способом согласно изобретению, проводимая путем повторного введения этих клеток пациенту, будет приводить к улучшению доставки клеток, вводимых в область опухоли-мишени, по сравнению с ситуацией, когда вводят терапевтическое средство, содержащее в качестве активного ингредиента антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, и, тем самым, повышать терапевтический эффект. Способ согласно изобретению может быть применен, например, для предупреждения начала развития рака у здоровых индивидуумов. Пролиферация лимфоцитов, выделенных из периферической крови здорового индивидуума методом, известным per se, с последующей криоконсервацией и частичным оттаиванием полученных клеток, а также их обработки способом, применяемым для улучшения функции иммунных клеток согласно изобретению, и возвращением этих клеток в организм индивидуума будут вносить определенный вклад в предупреждение заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, таких как рак или инфекции.
Такая группа клеток с повышенным иммунитетом может быть сохранена методом, аналогичным методу хранения всех известных клеток, используемых в иммунотерапии. Настоящее изобретение также охватывает средство для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, где указанное средство содержит в качестве активного ингредиента иммунные клетки с повышенным иммунитетом (клетки MTi), полученные вышеописанным методом. Дозу, частоту и интервал введения доз средства для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммунными патологиями, определяют, например, в зависимости от возраста, пола, массы тела и симптомов пациента.
При заболеваниях, ассоциированных с иммунными патологиями, функция Т-клеток, предположительно, истощается, а поэтому иммунитет, предположительно снижается или аномально увеличивается. Примерами таких заболеваний являются раковые заболевания, заболевания, связанные с иммунодефицитом, аутоиммунные заболевания, аллергические заболевания и различные инфекции, не поддающиеся лечению.
Если заболеванием является рак, то примерами такого ракового заболевания являются, но не ограничиваются ими, рак головы и шеи, рак пищевода, рак желудка, рак толстой кишки, рак прямой кишки, рак печени, рак желчного пузыря, холангиокарцинома, рак желчных путей, рак поджелудочной железы, рак легких, рак молочной железы, рак яичника, рак шейки матки, рак эндометрия, рак почек, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы, рак яичек, остеосаркома, саркома мягких тканей, лейкоз, злокачественная лимфома, множественная миелома, рак кожи, опухоль головного мозга и мезотелиома. Другими примерами заболеваний, связанных с иммунодефицитом, являются застойные заболевания, связанные с иммунодефицитом, и заболевания, связанные с приобретенным иммунодефицитом. Примерами застойных заболеваний, связанных с иммунодефицитом, являются, но не ограничиваются ими, тяжелый комбинированный иммунодефицит, синдром Вискотта-Алдрича, заболевание, связанное с дефицитом аденозин-дезаминазы, и заболевание, связанное с дефицитом пуриновых нуклеотидов/фосфорилазы. Другими заболеваниями, связанными с приобретенным иммунодефицитом, являются, но не ограничиваются ими, вторичный иммунодефицит, вызываемый приемом противораковых лекарственных средств, иммунодепрессантов, стероидов и т.п., и СПИД, вызываемый вирусом иммунодефицита человека. Примерами аутоиммунных заболеваний являются, но не ограничиваются ими, системная красная волчанка, ревматоидный артрит, синдром Сьегрена, тяжелая миастения, пернициозная анемия и тиреоидит Хашимото. Примерами аллергических заболеваний являются, но не ограничиваются ими, бронхиальная астма, хвойный поллиноз и крапивница. Примерами инфекций являются вирусные инфекции и бактериальные инфекции. Примерами вирусных инфекций являются, но не ограничиваются ими, инфекции пищеварительного тракта, вызываемые вирусом (таким как энтеровирус или цитомегаловирус); респираторные вирусные инфекции (инфекции, вызываемые респираторным вирусом, таким как вирус гриппа, риновирус, коронавирус, вирус парагриппа, вирус RS, аденовирус или реовирус); опоясывающий лишай, вызываемый герпесвирусом; диарея, вызываемая ротавирусом; вирусный гепатит и СПИД. Примерами бактериальных инфекций являются, но не ограничиваются ими, инфекции, вызываемые бактериями Bacillus cereus, Vibrio parahaemolyticus, энтерогеморрагической E. coli, Staphylococcus aureus, MRSA, Salmonella, Botulinus и Candida.
2. Способ оценки мультифункциональности иммунных клеток
В настоящем описании, способ оценки мультифункциональности выделенных иммунных клеток осуществляют путем определения функций клеток, а именно, их способности продуцировать цитокины IL-2, TNFα и IFNγ. Оценку мультифункциональности клеток осуществляют путем in vitro обработки иммунных клеток терапевтическим средством, содержащим в качестве активного ингредиента антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина. Оценка клеточной функции позволяет предсказать чувствительность клеток к антидиабетическому лекарственному средству бигуаниду, выбранному из метформина, фенформина и буформина, или терапевтический эффект. Если было определено, что мультифункциональность иммунных клеток, обработанных антидиабетическим лекарственным средством бигуанидом, выбранным из метформина, фенформина и буформина, была значительно повышена по сравнению с контролем, то это означает, что чувствительность иммунных клеток к терапевтическому средству является более высокой. Таким образом, может быть осуществлена оценка чувствительности выделенных иммунных клеток к антидиабетическому лекарственному средству бигуаниду, выбранному из метформина, фенформина и буформина. Функции истощенных CD8+-T-клеток или CD8+-T-клеток, имеющих тенденцию к истощению, могут быть восстановлены с использованием метформина. Нормальные CD8+-T-клетки (то есть, МКПК здоровых индивидуумов) являются менее чувствительными к метформину, что обусловлено их нормальными функциями, а поэтому в данном случае будет чаще наблюдаться снижение мультифункциональности при обработке метформином. В противоположность этому, поскольку у раковых пациентов со множеством истощенных CD8+-T-клеток наблюдается высокая чувствительность к метформину, то в данном случае, при обработке метформином, мультифункциональность будет, предположительно, повышаться, а чаще всего, вообще не будет изменяться.
Для осуществления способа оценки мультифункциональности иммунных клеток согласно изобретению, предпочтительно, стимулировать выделенные иммунные клетки, такие как МКПК, поскольку это необходимо для внутриклеточной активации и облегчения продуцирования цитокинов. Стимуляция клеток может быть осуществлена методами, известными per se, такими как стимуляция с использованием активатора протеинкиназы (в высокой степени активного активатора протеинкиназы С (PKC): PMA) и иономицина. Стимуляцию с использованием PMA и иономицина осуществляют с использованием, например, 20-100 нг/мл, предпочтительно, 30-80 нг/мл, более предпочтительно, 50 нг/мл PMA, и 1-10 мкМ, предпочтительно, 1-5 мкM, а более предпочтительно, 2 мкМ иономицина. Стимуляция с использованием PMA и иономицина может быть осуществлена путем культивирования МКПК при 37 ± 0,5°C в течение 3-12 часов, предпочтительно, 4-10 часов, а наиболее предпочтительно, 6 часов, в среде, содержащей PMA и иономицин к концентрации, выбранной из вышеуказанных значений. В этом случае, для блокирования высвобождения продуцированного цитокина во внешнюю область клеток предпочтительно, использовать терапевтическое средство, блокирующее транспорт белка из аппарата Гольджи в цитоплазму, такое как монензин, брефелдин А или т.п.
Оценка мультифункциональности иммунных клеток согласно изобретению включает подтверждение способности CD8+-T-клеток, входящих в группу иммунных клеток, продуцировать цитокины IL-2, TNFα и IFNγ, и измерение отношения (индекса позитивности клеток) клеток (B), которые являются позитивными по способности продуцировать цитокины трех видов, к популяции клеток (A), то есть, группы CD8+-T-клеток. В настоящем описании, индекс позитивности клеток может быть вычислен по нижеследующей формуле. Индекс позитивности клеток может быть также вычислен по результатам анализа, полученным на измерительном устройстве, таком как проточный цитометр.
Индекс позитивности клеток (%)=(число клеток в B)/(число клеток в A)×100.
В настоящем описании, выражение «клетки (B), которые являются позитивными по своей способности продуцировать цитокины трех видов» означает CD8+-T-клетки, которые, как было определено, являются позитивными по своей способности одновременно продуцировать все три цитокина IL-2, TNFα и IFNγ во время проведения анализа на способность продуцирования каждого из этих цитокинов. Более конкретно, выражение «клетки (B), которые являются позитивными по своей способности продуцировать цитокины трех видов» означает CD8+-T-клетки, которые, как было определено, являются позитивными при гейтировании по одному из трех цитокинов, и которые, как было определено, являются также позитивными по остальным двум цитокинам.
Более конкретно, оценку мультифункциональности иммунных клеток согласно изобретению проводят способом определения функции CD8+-T-клеток, включающим стадии 1) - 4), указанные ниже:
1) стадию обработки выделенных иммунных клеток in vitro терапевтическим средством, содержащим в качестве активного ингредиента антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина;
2) стадию стимуляции обработанных иммунных клеток с использованием PMA и иономицина после центрифугирования и промывки клеток;
3) стадию гейтирования CD8+-T-клеток, входящих в группу иммунных клеток, стимулированных в стадии 2, с помощью анализа, проводимого на проточном цитометре; и
4) стадию определения способности гейтированнях CD8+-T-клеток продуцировать цитокины трех видов IL-2, TNFα и IFNγ.
В способе оценки функции CD8+-T-клеток согласно изобретению может быть также определен уровень экспрессии Tim-3 и/или PD-1.
Кроме того, более конкретно, измерение может быть осуществлено следующим образом.
У обследуемого индивидуума берут периферическую кровь, а затем выделяют МКПК с использованием лимфоцит-разделяющего реагента, и эти МКПК хранят в тест-пробирке. Полученные МКПК могут быть подвергнуты криоконсервации непосредственно перед проведением теста. Тестируемые клетки (например, МКПК), оттаянные до проведения теста, могут быть культивированы при 37°C ± 0,5°C, 5% CO2, в течение 1-12 часов, предпочтительно, от 4 до 10 часов, а наиболее предпочтительно, 6 часов, в среде, содержащей антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина, в количестве приблизительно от 1 до 500 мкM, предпочтительно, от 1 до 100 мкM, более предпочтительно, приблизительно от 5 до 100 мкM, а особенно предпочтительно, от 10 до 100 мкM. Выбор среды не имеет конкретных ограничений, и при этом, может быть использована любая среда, подходящая для культивирования тестируемых клеток. Особенно предпочтительной является среда AIM-V(R) (Invitrogen). При этом, предпочтительно, чтобы клетки были промыты средой или т.п. и культивированы в присутствии реагента для активациии клеток (сильного наномолярного активатора протеинкиназы C (PMA, 50 нг/мл) и иономицина (1 мкM)) для обеспечения неспецифической стимуляции Т-клеток. Кроме того, предпочтительно, чтобы клетки были обработаны ингибитором внутриклеточного транспорта белка для сохранения продуцированных цитокинов внутри клеток. Таким образом, обработанные МКПК выделяют и промывают 1-4 раза буфером для окрашивания клеток, и после добавления окрашивающего буфера, клетки могут быть культивированы при 2-10°C, предпочтительно, при 3-5°C, а наиболее предпочтительно, при 4±1°C. Клетки промывают буфером для промывки клеток и осуществляют окрашивание на цитокины IL-2, TNFα и IFNγ. Затем клетки выделяют, промывают и анализируют с помощью FACS, и величины количеств продуцируемых цитокинов трех видов, а именно, IL-2, TNFα и IFNγ, сравнивают с контролем, который не был обработан антидиабетическим лекарственным средством бигуанидом, и с клетками, обработанными антидиабетическим лекарственным средством бигуанидом.
После гейтирования CD8+-T-клеток в анализе, проводимом на проточном цитометре согласно изобретению, таблетированные клетки удаляют с помощью FSC-A и FSC-H в FSC (посредством прямого рассеяния). Затем проводят гейтирование группы лимфоцитов с использованием параметров FSC-A и SSC-A для анализа экспрессии Tim-3 и/или PD-1. Кроме того, для детектирования мультифункциональности может быть осуществлено окрашивание на внутриклеточные цитокины IL-2, TNFα и IFNγ. В настоящем описании, способность иммунных клеток в одновременному продуцированию внутриклеточных цитокинов IL-2, TNFα и IFNγ иногда может называться «мультифункциональностью». С точки зрения мультифункциональности, самыми сильными эффекторными клетками являются клетки, способные одновременно продуцировать цитокины трех видов, а другими самыми сильными эффекторными клетками являются клетки, способные одновременно продуцировать цитокины двух видов. Клетки, продуцирующие цитокин только одного вида, не рассматриваются как мультифункциональные, поскольку эффекторная функция этих клеток является ограниченной.
Настоящее изобретение также охватывает способ диагностики заболеваний, ассоциированных с иммуными патологиями, с применением способа оценки мультифункциональности иммунных клеток согласно изобретению. В настоящем описании, способ диагностики заболевания, ассоциированного с иммуными патологиями, представляет собой способ, который дополнительно применяется для предсказания эффективности лечения заболевания терапевтическим средством, оценки тяжести заболевания, прогноза течения заболевания или предсказания начала развития заболевания. У раковых пациентов, которые не являются восприимчивыми к метформину, может наблюдаться тяжелое иммунное истощение. Оценка мультифункциональности иммунных клеток согласно изобретению может быть дополнительно применена для предсказания эффективности лечения заболевания терапевтическим средством, оценки тяжести заболевания, прогноза течения заболевания или предсказания начала развития заболевания, ассоциированного с иммуными патологиями.
В последние годы был выявлен механизм иммунного истощения, и появились сообщения о том, что ингибирование связывания молекул, ответственных за иммунное истощение, играет важную роль в лечении рака. Аналитический способ согласно изобретению позволяет осуществлять комбинированное детектирование группы клеток, одновременно продуцирующих цитокины трех видов, и детектирование молекул, ответственных за истощение, и тем самым детектирование иммунного статуса иммунных клеток, то есть, CD8+-T-клеток у пациентов. Если клетки экспрессируют молекулы, ответственные за истощение, а именно, PD-1 или Tim-3, то эти клетки определяют как истощенные клетки. Однако, если мультифункциональность группы клеток восстанавливается после их обработки метформином, то это может однозначно указывать на устранение истощения (на восстановление иммунитета).
В уже существующих способах лечения противораковыми вакцинами, пациенты, которые должны быть подвергнуты такому лечению, могут быть выявлены исходя из наличия или отсутствия экспрессии вакцинного антигена в раковых тканях. Однако, способ оценки согласно изобретению позволяет детектировать иммунный статус еще до проведения иммунотерапии и, тем самым, в комбинации с детектированием экспрессии антигена, значительно облегчает выбор курса лечения.
В настоящем описании, термин «терапевтическое средство» в выражении «предсказание эффективности терапевтического средства» означает терапевтическое средство, содержащее в качестве активного ингредиента антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина. Эффективность лечения заболеваний, ассоциированных с иммуными патологиями, является самой высокой у доноров иммунных клеток, которые были обработаны in vitro терапевтическим средством, содержащим в качестве активного ингредиента антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина, и такая эффективность подтверждается с точки зрения мультифункциональности по внутриклеточным цитокинам IL-2, TNFα и IFNγby в анализе, проводимом на проточном цитометре.
При введении здоровым индивидуумам средства для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммуными патологиями, где указанное средство содержит в качестве активного ингредиента антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина, CD8+-T-клеткам может быть сообщена мультифункциональность. В результате этого может наблюдаться эффект облегчения симптомов, ассоциированных с иммунным истощением (у пациентов с хронической инфекцией, не поддающейся лечению, у раковых пациентов, у пациентов с диабетом и т.п.) или, например, состояний, указанных ниже. Так, например, такими состояниями являются: потеря физической силы; снижение физической силы вследствие старения; иммунодефицит, такой как комбинированный иммунодефицит; расстройство, ассоциированное с продуцированием антител, или расстройство, ассоциированное с дефицитом комплемента; гипотериоидит; иммунное истощение, вызываемое облучением; застойное заболевание, ассоциированное с иммунодефицитом; и заболевания, ассоциированные с приобретенным иммунодефицитом (включая СПИД). Было высказано предположение, что при введении средства для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммуными патологиями, иммунитет может повышаться, что будет приводить к улучшению функции общей иммунной системы и, тем самым, к устранению состояний и облегчения их симптомов, или к ремиссии.
Настоящее изобретение также охватывает средство для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммуными патологиями, где указанное средство содержит в качестве активного ингредиента антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина. Активный ингредиент, содержащийся в средстве для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммуными патологиями согласно изобретению, обладает способностью восстанавливать функцию иммунных клеток и подавлять апоптоз и, тем самым, повышать иммунитет. В случае CD8+-T-клеток, восстановление функции иммунных клеток означает способность этих клеток одновременно продуцировать цитокины трех видов: IL-2, TNFα и IFNγ. Кроме того, в случае других иммунокомпетентных клеток, восстановление функции иммунных клеток означает восстановление функции, присущей этим клеткам, благодаря подавлению апоптоза. Так, например, восстановление функции иммунных клеток, предположительно, означает повышение способности к продуцированию IFNγ в случае CD4-T-клеток, NK-клеток, NKT-клеток и γδT-клеток; повышение уровня продуцирования антитела в случае B-клеток; и повышение способности индуцировать дифференцировку в случае клеток костного мозга.
Антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина, и служащее в качестве активного ингредиента средства для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммуными патологиями согласно изобретению, может быть введено взрослому индивидууму в количестве от 1 до 5000 мг, предпочтительно, от 10 до 4000 мг, более предпочтительно, приблизительно от 50 до 3000 мг, а особенно предпочтительно, приблизительно от 100 до 2500 мг в день. Активный ингредиент может быть введен один раз в день, либо он может быть введен в виде 2-4 доз один раз в день. Кроме того, если это необходимо, активный ингредиент может быть введен в течение нескольких дней. Интервал и частота введения могут быть определены специалистом.
3. Применение в комбинации с другими терапевтическими средствами
При лечении и/или предупреждении заболеваний, ассоциированных с иммуными патологиями согласно изобретению, если антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина, вводят пациенту, страдающему такими заболеваниями, то указанное средство может быть объединено с другими терапевтическими средствами. В случае раздельного введения антидиабетического лекарственного средства бигуанида согласно изобретению и других терапевтических средств, сначала вводят антидиабетическое лекарственное средство бигуанид согласно изобретению, а затем вводят другие терапевтические средства, либо сначала вводят другие терапевтические средства, а затем антидиабетическое лекарственное средство бигуанид согласно изобретению. Кроме того, во время введения, все терапевтические средства могут быть введены одновременно в течение ограниченного периода времени. Кроме того, терапевтические средства могут быть введены одним и тем же способом или различными способами. В зависимости от свойства терапевтического средства может быть приготовлен набор, включающий препарат, содержащий антидиабетическое лекарственное средство бигуанид согласно изобретению и другие терапевтические средства. Антидиабетическое лекарственное средство бигуанид согласно изобретению может быть соответствующим образом выбрано в зависимости от вышеупомянутых доз. Дозы других терапевтических средств могут быть также соответствующим образом выбраны в зависимости от клинически используемых доз. Другие терапевтические средства включают уже разработанные средства и средства, которые будут разработаны в будущем. Репрезентативными примерами других терапевтических средств являются средства, блокирующие иммуносупрессорный фактор. В раковых клетках или в раковом микроокружении присутствуют различные иммуносупрессорные факторы, блокирующие иммунный ответ на раковое заболевание. В процессе вырабатывания иммунного ответа имеются различные контрольные точки. В частности, функции негативных костимулирующих молекул, таких как CTLA-4 или PD-1 представляют собой контрольные точки, играющие важную роль в регуляции аутологической реактивности. Примерами таких молекул, ингибирующих иммунные контрольные точки, то есть, агентов, блокирующих иммуносупрессорный фактор, являются анти-CTLA-4 антитело (например, ипилимумаб, тремелимума), анти-PD-1 антитело (например, человеческое моноклональное (нейтрализующее) антитело против человеческого PD-1 (например, ниволумаб, REGN-2810), гуманизованное моноклональное (нейтрализующее) антитело против человеческого PD-1 (например, пембролизумаб, PDR-001, BGB-A317, AMP-514 (MEDI0680))), анти-PD-L1 антитело (например, атезолизумаб (RG7446, MPDL3280A), авелумаб (PF-06834635, MSB0010718C), дурвалумаб (MEDI4736), BMS-936559), анти-PD-L2 антитело, слитый белок PD-L1, слитый белок PD-L2 (например, AMP-224), анти-Tim-3 антитело (например, MBG453), анти-LAG-3 антитело (например, BMS-986016, LAG525), анти-KIR антитело (например, лирилумаб), анти-BTLA антитело и анти-VISTA антитело. Кроме того, примерами других терапевтических средств также являются агонисты костимулирующего рецептора, такие как анти-CD137 антитело (например, урелумаб), анти-OX40 антитело (например, MEDI6469), анти-HVEM антитело, анти-CD27 антитело (например, варлилумаб), анти-GITR антитело (например, MK-4166) и анти-CD28 антитело. Любые одно или более антител или слитых белков, связывающихся с этими агентами, блокирующими иммуносупрессорный фактор, и с агонистами костимулирующего рецептора, могут быть объединены с антидиабетическим лекарственным средством бигуанидом согласно изобретению. Примерами заболеваний, которые, как предполагается, могут быть подвергнуты успешному лечению или предупреждению путем введения комбинации антидиабетического лекарственного средства бигуанида, выбранного из метформина, фенформина и буформина согласно изобретению; агента, блокирующего иммуносупрессорный фактор; и агониста костимулирующего рецептора, являются раковые заболевания (такие как, но не ограничивающиеся ими, рак головы и шеи, рак пищевода, рак желудка, рак прямой и ободочной кишки, рак толстой кишки, рак прямой кишки, рак печени (такой как гепатоцеллюлярный рак), рак желчного пузыря, холангиокарцинома, рак желчных путей, рак поджелудочной железы, рак легких (такой как немелкоклеточный рак легких (плоскоклеточный немелкоклеточный рак легких, неплоскоклеточный немелкоклеточный рак легких) или мелкоклеточный рак легких), рак молочной железы, рак яичника, рак шейки матки, рак эндометрия, рак влагалища, рак вульвы, рак почек (такой как почечноклеточный рак), рак мочеполовых путей (такой как рак мочевого пузыря или рак верхних мочевых путей), рак предстательной железы, опухоль яичек (такая как новообразование зародышевых клеток), остеосаркома, саркома мягких тканей, лейкоз, миелодиспластический синдром, злокачественная лимфома (такая как лимфома Ходжкина, фолликулярная лимфома или диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома), Т-клеточный лейкоз взрослых, множественная миелома, рак кожи (такой как злокачественная меланома или карцинома клеток Меркеля), опухоль головного мозга (такая как глиобластома), мезотелиома плевры и первичный рак неизвестной этиологии. В случае этих раковых заболеваний, достижение максимального противоопухолевого эффекта возможно, в частности, у раковых пациентов, у которых нужные терапевтические эффекты не могли быть достигнуты с использованием только агента, блокирующего иммуносупрессорный фактор, или агониста костимулирующего рецептора.
Средство для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммуными патологиями согласно изобретению, предпочтительно, получают, например, в жидкой форме в случае его внутривенного введения. Жидкий препарат может быть получен, например, с использованием растворителей, таких как очищенная вода, физиологический раствор, спирты, включая этанол, пропиленгликоль, глицерин и полиэтиленгликоль, или триацетин. В препарат могут быть также добавлены адъюванты, такие как антисептики, смачивающие агенты, эмульгаторы, диспергирующие агенты, стабилизаторы и т.п. Кроме того, препарат может быть введен в виде суспензии.
Кроме того, твердые препараты, такие как таблетки, драже, порошкообразные лекарственные средства, гранулы или тонкодисперсные гранулы, могут быть приготовлены стандартными методами путем добавления носителей, таких как бикарбонат натрия, карбонат кальция, крахмал, сахароза, маннит или карбоксиметилцеллюлоза, и добавок, таких как стеарат кальция, стеарат магния или глицерин. Кроме того, лекарственное средство может быть приготовлено в виде препарата с энтеросолюбильным покрытием путем нанесения вещества для энтеросолюбильных покрытий, такого как органический растворитель или водный раствор ацетата-фталата целлюлозы, фталата гидроксипропилметилцеллюлозы, фталата поливинилового спирта, сополимера стирола-малеинового ангидрида, сополимера метакриловой кислоты-метилметакрилата или т.п. Примерами фармацевтически приемлемых носителей являются другие общие адъюванты, ароматизаторы и стабилизаторы или антисептики.
Кроме того, настоящее изобретение также охватывает средство и способ, применяемые для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммуными патологиями, путем введения терапевтического средства, содержащего в качестве активного ингредиента антидиабетическое лекарственное средство бигуанид, выбранное из метформина, фенформина и буформина, в комбинации с противораковой вакциной. Термин «противораковая вакцина» включает противораковые пептидные вакцины (MAGE-3, MUC-1, пептид WT1, P53, NY-ESO1 и т.п.), противораковые белковые вакцины, вакцины на основе дендритных клеток, вакцины для генотерапии и т.п. Примерами вакцин на основе дендритных клеток являются вакцины на основе дендритных клеток, в которых раковый пептид или раковый антигенный белок были иммобилизованными; вакцины на основе дендритных клеток, в которые была перенесена мРНК, происходящая от раковых клеток (эта вакцина также служит в качестве вакцины для генотерапии), и вакцины на основе дендритных клеток, культивированных с раковым антигенным белком, таким как простатическая кислая фосфатаза и слитый белок GM-CSF (такой как Provenge). Примерами противораковых вакцин являются вакцины против раковых заболеваний, которые, как было подтверждено развиваются посредством вирусных инфекций, и такими вакцинами являются вакцина на основе гепатита В, вызываемого вирусом гепатита В, или профилактическая вакцина против рака шейки матки, вызываемого вирусом человеческой папилломы. Объединение средства для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммуными патологиями согласно изобретению, с различными вакцинами может приводить к значительному повышению эффективности вакцины. В результате этого могут быть уменьшены дозы противораковых вакцин и т.п., что позволит снизить побочные эффекты, вызываемые вакцинами и адъювантами.
Настоящее изобретение также охватывает способ лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммуными патологиями, где указанный способ включает использование средства для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммуными патологиями.
Примеры
Для лучшего понимания настоящего изобретения ниже приводятся его более подробное описание со ссылкой на Примеры и Сравнительные примеры. Однако, настоящее изобретение не ограничивается этими примерами. Проведение исследований с использованием описанных ниже клинических образцов было одобрено Комитетом по этике Университета Окайамы. В нижеследующих примерах описаны анализы, проводимые в случае раковых заболеваний на различных стадиях, и в этих анализах использовали периферическую кровь, взятую у пациентов с первичным раком легких стадии I и у пациентов с метастазирующим раком легких (то есть, стадии IV). Стадии ракового заболевания описаны в 7-м издании Реестра классификации заболеваний (легких) по стадиям UICC TNM.
Пример 1: Способ оценки мультифункциональности иммунных клеток
В этом примере описан способ оценки иммунитета иммунных клеток. Сначала проводили анализ на мультифункциональность иммунных клеток на проточном цитометре. Затем подтверждали изменения мультифункциональности иммунных клеток после обработки клеток здоровых индивидуумов и раковых пациентов метформином. Обработку иммунных клеток осуществляли с использованием материалов (1) и с применением описанного ниже способа (2).
(1) Материалы
Лимфоцит-разделяющий реагент: Фиколл-Пак(R) (GE Healthcare)
Жидкость для криоконсервации клеток: Bambang Car (Nippon Genetics)
Среда для человеческих клеток: среда AIM V(R) (Gibco)
Реагент для активации клеток:
Сильный наномолярный активатор протеинкиназы С (Sigma-Aldrich)
Иономицин (Sigma-Aldrich)
Ингибитор внутриклеточного транспорта белка: BD Gorgi StopTM (содержащий монензин)(BD Biosciences)
Окрашивающий буфер: 0,58 г EDTA (Nacalai Tasque), растворенного в 1 л PBS (Gibco), содержащего 2% FCS (Thermo)
Раствор для фиксации клеток/буфер для пенетрации:
BD Cytofix/CytopermTM (BD Biosciences)
BD Perm/WashTM (разведенный 1:10 в дистиллированной H2O перед использованием)(BD Biosciences)
(2) Способ
1. У обследуемого индивидуума брали периферическую кровь, и выделяли МКПК путем центрифугирования в градиенте плотности с использованием лимфоцит-разделяющего реагента Фиколл-Пак(R) (GE Healthcare). 3 мл Фиколла-Пака(R) закапывали в 15-миллилитровую пробирку. 8 мл периферической крови осторожно наносили на реагент. При этом, следует принять меры предосторожности, то есть, реагент Фиколл-Пак(R) не следует смешивать с периферической кровью. Центрифугирование осуществляли при the 400× g в течение 30 минут, и выделяли МКПК.
2. Выделенные МКПК хранили в холодильнике при -150°C или в жидком азоте с использованием жидкости для консервации клеток Bambang Car путем доведения числа клеток до 2,0×106 клеток/пробирку.
3. В этом анализе, оттаянные МКПК культивировали в течение 1-10 часов в присутствии 10 мкM метформина или в отсутствии метформина. Культивирование осуществляли в 24-луночном планшете, и число клеток доводили приблизительно до 5,0×105 клеток/лунку.
4. Через 1-10 часов клетки собирали, промывали средой и культивировали в присутствии реагента для активации клеток (сильного наномолярного активатора протеинкиназы С (PMA, 50 нг/мл), иономицина (1 мкМ)) в течение 6 часов для неспецифической стимуляции Т-клеток. В это время добавляли реагент BD Gorgi StopTM для сохранения продуцированных цитокинов внутри клеток.
5. Клетки выделяли и два раза промывали буфером для окрашивания клеток. Сначала осуществляли окрашивание молекул, экспрессируемых на поверхности Т-клеток, на присутствие CD8, PD-1, Tim-3. На этой стадии окрашивания, окрашивающий буфер добавляли в количестве 50 мкл на образец. Культивирование осуществляли при 4°C в течение 30 минут.
6. Клетки собирали и два раза промывали буфером для окрашивания клеток. Затем добавляли 500 мкл BD Cytofix/CytopermTM и культивировали при 4°C в течение 30 минут.
7. Клетки собирали и два раза промывали буфером BD Perm/WashTM. Затем осуществляли окрашивание на цитокины IL-2, TNFα и IFNγ. На этой стадии окрашивания, буфер BD Perm/WashTM добавляли в количестве 50 мкл на образец. Культивирование осуществляли при 4°C в течение 30 минут.
8. Клетки собирали и два раза промывали буфером BD Perm/WashTM, а затем добавляли 200 мкл BD Perm/WashTM.
9. Анализ осуществляли на проточном цитометре FACSCantoTM II (Becton, Dickinson и Company).
(3) Анализ на мультифункциональность иммунных клеток, проводимый на проточном цитометре
МКПК, обработанные PMA/иономицином в описанном выше способе (2), сначала подвергали гейтированию на CD8+-T-клетки с использованием проточного цитометра FACSCantoTM II (Becton, Dickinson и Company), а затем таблетированные клетки выделяли с помощью FSC-A и FSC-H. С использованием параметров FSC-A и SSC-A осуществляли гейтирование группы лимфоцитов для анализа на экспрессию PD-1 и Tim-3. Затем внутриклеточные цитокины IFNγ, TNFα и IL-2 окрашивали и проводили анализ на мультифункциональность CD8+-T-клеток, входящих в популяцию МКПК (фиг. 1).
(4) Анализ на мультифункциональность CD8+-T-клеток у здоровых индивидуумов
МКПК, взятые у здоровых индивидуумов (N=10), культивировали в течение одного часа в присутствии или в отсутствии метформина с применением способа, описанного выше в (2). После удаления метформина, МКПК подвергали стимулирующему культивированию с PMA/иономицином в течение 6 часов с применением способа, описанного выше в (3). Из полученных клеток МКПК были детектированы CD8+-T-клетки, способные одновременно продуцировать цитокины трех видов, то есть, IFNγ, TNFα и IL-2. Было определено, что CD8+-T-клетки, не обработанные метформином, составляли 0,11%, а CD8+-T-клетки, обработанные метформином, составляли 0,09% (фиг. 2). В соответствии с этим, было определено, что у здоровых индивидуумов, мультифункциональность CD8+-T-клеток не увеличивалась после обработки метформином.
Для МКПК, взятых у здоровых индивидуумов и обработанных как описано выше, вычисляли отношения CD8+-T-клеток, продуцирующих цитокины трех видов (IFNγ/TNFα/IL-2), CD8+-T-клеток, продуцирующих цитокины двух видов (IFNγ/TNFα или IFNγ/IL-2), и CD8+-T-клеток, продуцирующих цитокин одного вида (IFNγ), ко всем CD8+-T-клеткам, и данные систематизировали в таблице 1. Результаты вычисления сравнивали для группы, не обработанной метформином (контроль), и для группы, обработанной метформином (метформин). Что касается отношений цитокин-продуцирующих CD8+-T-клеток, то увеличение на 10% или более после обработки метформином было обозначено стрелкой острием вверх (↑), снижение на 10% или более после обработки метформином было обозначено стрелкой острием вниз (↓), а другие случаи, то есть, отсутствие каких-либо значимых различий, отмечены стрелкой острием вправо (→).
Таблица 1
ID | IFNγ/TNFα/IL-2 | IFNγ/TNFα | IFNγ/IL-2 | IFNγ | ||||||||
контроль | метформин | контроль | метформин | контроль | метформин | контроль | метформин | |||||
1 | 0,15 | 0,03 | ↓ | 1,53 | 1,50 | → | 0,11 | 0,03 | ↓ | 1,75 | 1,68 | → |
2 | 0,92 | 0,48 | ↓ | 15,16 | 11,17 | ↓ | 0,66 | 0,21 | ↓ | 5,55 | 6,23 | ↑ |
3 | 0,01 | 0,00 | → | 0,17 | 0,12 | ↓ | 0,06 | 0,05 | ↓ | 0,75 | 0,95 | ↑ |
4 | 0,04 | 0,01 | ↓ | 0,98 | 1,08 | ↑ | 0,11 | 0,14 | ↑ | 2,37 | 1,87 | ↓ |
6 | 0,14 | 0,09 | ↓ | 4,20 | 3,98 | → | 0,29 | 0,24 | ↓ | 10,87 | 12,00 | ↑ |
8 | 3,91 | 3,79 | → | 35,44 | 31.38 | ↓ | 0,55 | 0,47 | ↓ | 13,80 | 13,18 | → |
10 | 0,12 | 0,09 | ↓ | 4,19 | 3,54 | ↓ | 0,26 | 0,48 | ↑ | 18,34 | 16,70 | → |
12 | 2,22 | 2,16 | → | 25,78 | 32,26 | ↑ | 0,64 | 0,71 | ↑ | 7,25 | 8,18 | ↑ |
16 | 0,80 | 0,37 | ↓ | 19,64 | 11,52 | ↓ | 1,04 | 0,28 | ↓ | 21,13 | 11,64 | ↓ |
18 | 0,61 | 0,48 | ↓ | 14,91 | 16,84 | ↑ | 0,15 | 0,15 | → | 4,73 | 4,62 | → |
(5) Анализ на мультифункциональность CD8+-T-клеток у раковых пациентов
Каждую МКПК, взятую у 31 пациента с первичным раком легких (стадии I), культивировали в течение одного часа способом, описанным в (4) в присутствии или в отсутствии метформина. После удаления метформина анализировали каждую полученную МКПК. В репрезентативном примере было определено, что CD8+-T-клетки, не обработанные метформином, составляли 0,92%, а CD8+-T-клетки, обработанные метформином, составляли 1,44% (фиг. 3). В соответствии с этим, было определено, что по сравнению со здоровыми индивидуумами, у многих раковых пациентов, мультифункциональность CD8+-T-клеток увеличивалась после обработки метформином.
Для раковых пациентов, подвергнутых лечению как описано выше, вычисляли отношения CD8+-T-клеток, продуцирующих цитокины трех видов (IFNγ/TNFα/IL-2), CD8+-T-клеток, продуцирующих цитокины двух видов (IFNγ/TNFα или IFNγ/IL-2), и CD8+-T-клеток, продуцирующих цитокин одного вида (IFNγ) ко всем CD8+-T-клеткам как описано в пункте (4), и данные систематизировали в таблице 2. Результаты вычисления сравнивали для группы, не обработанной метформином (контроль), и для группы, обработанной метформином (метформин). Что касается отношений цитокин-продуцирующих CD8+-T-клеток, то увеличение на 10% или более после обработки метформином было обозначено стрелкой острием вверх (↑), снижение на 10% или более после обработки метформином было обозначено стрелкой острием вниз (↓), а другие случаи, то есть, отсутствие каких-либо значимых различий, отмечены стрелкой острием вправо (→).
Таблица 2
ID | IFNγ/TNFα/IL-2 | IFNγ/TNFα | IFNγ/IL-2 | IFNγ | ||||||||
контроль | метформин | контроль | метформин | контроль | метформин | контроль | метформин | |||||
8 | 1,11 | 0,81 | ↓ | 1,48 | 1,70 | ↑ | 4,85 | 4,88 | → | 13,76 | 14,19 | → |
10 | 1,50 | 1,48 | → | 4,76 | 4,19 | ↓ | 4,51 | 3,46 | ↓ | 48,65 | 39,46 | ↓ |
11 | 0,17 | 0,52 | ↑ | 0,43 | 0,83 | ↑ | 1,20 | 0,31 | ↓ | 5,75 | 3,83 | ↓ |
13 | 0,33 | 0,43 | ↑ | 0,89 | 1,09 | ↑ | 1,85 | 1,40 | ↓ | 5,51 | 3,96 | ↓ |
17 | 0,40 | 0,59 | ↑ | 0,00 | 0,12 | ↑ | 1,09 | 0,48 | ↓ | 2,87 | 2,50 | ↓ |
26 | 1,05 | 3,62 | ↑ | 2,65 | 3,68 | ↑ | 6,93 | 5,65 | ↓ | 30,38 | 12,72 | ↓ |
32 | 0,41 | 1,05 | ↑ | 0,27 | 0,63 | ↑ | 5,71 | 3.52 | ↓ | 3,71 | 5,00 | ↑ |
38 | 13,30 | 12,47 | → | 17,00 | 20,08 | ↑ | 4,23 | 4,08 | ↓ | 14,17 | 23,07 | ↓ |
54 | 4,62 | 3,11 | ↓ | 19,94 | 14,85 | ↓ | 1,44 | 1,59 | ↑ | 14,23 | 15,55 | → |
55 | 5,37 | 5,14 | → | 16,34 | 17,42 | → | 2,35 | 2,63 | ↑ | 14,82 | 15,31 | → |
56 | 3,03 | 1,73 | ↓ | 6,10 | 6,01 | → | 1,97 | 2,50 | ↑ | 9,50 | 11,17 | ↑ |
59 | 3,60 | 5,78 | ↑ | 14,75 | 17,26 | ↑ | 2,02 | 2,26 | ↑ | 20,85 | 15,70 | ↓ |
61 | 3,38 | 2,93 | ↓ | 20,59 | 17,85 | ↓ | 4,33 | 3.16 | ↓ | 31,18 | 35,58 | ↑ |
65 | 1,76 | 2,16 | ↑ | 3,17 | 3,54 | ↑ | 0,79 | 1,34 | ↑ | 3,49 | 3,66 | → |
66 | 2,16 | 2,11 | → | 5,66 | 4,79 | ↓ | 2,35 | 2,23 | ↓ | 14,33 | 13,66 | → |
80 | 1,94 | 6,28 | ↑ | 16,68 | 21,02 | ↑ | 2,06 | 3,99 | ↑ | 38,59 | 30,91 | ↓ |
82 | 0,02 | 0,82 | ↑ | 0,93 | 2,80 | ↑ | 0,46 | 1,44 | ↑ | 9,79 | 7,04 | ↓ |
86 | 5,26 | 4,47 | ↓ | 8,91 | 5,72 | ↓ | 2,42 | 1,45 | ↓ | 9,32 | 4,57 | ↓ |
92 | 1,84 | 1,24 | ↓ | 6,75 | 5,85 | ↓ | 0,65 | 0,84 | ↑ | 5,47 | 5,37 | → |
101 | 0,38 | 0,63 | ↑ | 1,64 | 2,19 | ↑ | 1,35 | 1,41 | → | 32,83 | 29,66 | → |
104 | 0,93 | 0,25 | ↓ | 3,04 | 2,78 | → | 1,11 | 0,43 | ↓ | 14,41 | 14,72 | → |
105 | 0,92 | 0,34 | ↓ | 2,94 | 1,31 | ↓ | 2,54 | 1,46 | ↓ | 18,70 | 22,19 | ↑ |
106 | 0,16 | 0,14 | ↓ | 0,78 | 0,74 | → | 0,21 | 0,16 | ↓ | 2,44 | 2,51 | → |
108 | 1,05 | 1,39 | ↑ | 5,67 | 8,05 | ↑ | 2,09 | 2,18 | → | 37,29 | 33,58 | → |
120 | 0,92 | 0,51 | ↓ | 4,31 | 2,62 | ↓ | 0,58 | 0,97 | ↑ | 15,18 | 17,19 | ↑ |
123 | 2,62 | 1,74 | ↓ | 12,22 | 9,70 | ↓ | 0,58 | 0,00 | ↓ | 21,25 | 19,41 | → |
124 | 0,65 | 0,61 | → | 4,46 | 3,09 | ↓ | 0,40 | 0,61 | ↑ | 6,78 | 6,70 | → |
128 | 0,04 | 0,16 | ↑ | 0,72 | 1,47 | ↑ | 0,33 | 0,68 | ↑ | 10,42 | 7,54 | ↓ |
130 | 0,35 | 0,53 | ↑ | 6,67 | 4,27 | ↓ | 0,00 | 0,53 | ↑ | 8,08 | 8,36 | → |
131 | 0,66 | 0,77 | ↑ | 6,41 | 5,60 | ↓ | 0,26 | 0,38 | ↑ | 10,47 | 7,14 | ↓ |
133 | 1,65 | 1,11 | ↓ | 21,21 | 24,50 | ↑ | 0,71 | 0,19 | ↓ | 51,59 | 44,56 | ↓ |
Пример 2: Способ оценки мультифункциональности иммунных клеток
В этом примере описана оценка частоты экспрессии истощающих молекул PD-1 и Tim-3 в CD8+-T-клетках, взятых у пяти здоровых индивидуумов и у пяти пациентов с первичным раком легких (стадия I). Было обнаружено, что уровень экспрессии PD-1 у раковых пациентов был достаточно низким. Кроме того, хотя у раковых пациентов наблюдалась тенденция к увеличению уровня экспрессии Tim-3, однако, какого-либо значимого различия между образцами, взятыми у здоровых индивидуумов и раковых пациентов, не наблюдалось (фиг. 4). Однако, поскольку у здоровых индивидуумов и у раковых пациентов наблюдались явные различия в паттернах экспрессии в CD8+-T-клетках, то помимо анализа всех CD8+-T-клеток, можно было провести более детальный анализ на мультифункциональность путем комбинированного анализа паттернов экспрессии и анализа на мультифункциональность PD-1 и Tim-3.
Пример 3: Результаты анализа на восстановление мультифункциональности после обработки метформином
В этом примере описана оценка результатов анализа на восстановление мультифункциональности CD8+-T-клеток после их обработки метформином у 10 здоровых индивидуумов и у 31 ракового пациента (стадия I) исходя из данных, полученных способом, описанным в Примере 1. Результаты такого анализа представлены ниже в таблице 3. В таблице 3 представлены результаты оценки способности CD8+-T-клеток четырех видов продуцировать цитокины, то есть, PD-1-позитивных, Tim-3-негативных CD8+-T-клеток (PD-1+, Tim-3-), PD-1-позитивных, Tim-3-позитивных CD8+-T-клеток (PD-1+, Tim-3+), PD-1-негативных, Tim-3-позитивных CD8+-T-клеток (PD-1-, Tim-3+) и PD-1-негативных, Tim-3-негативных CD8+-T-клеток (PD-1-, Tim-3-), а также всех CD8+-T-клеток (всех CD8T). Способность продуцировать цитокины может быть выражена как отношение клеток, продуцирующих цитокины (A) трех видов, то есть, IFNγ/TNFα/IL-2, (B) двух видов IFNγ/TNFα, (C) двух видов, IFNγ/IL-2, и (D) одного вида, IFNγ.
Результаты, представленные в таблице 3, показали, что способности всех CD8+-T-клеток, PD-1-негативных, Tim-3-позитивных CD8+-T-клеток, PD-1-негативных и Tim-3-негативных CD8+-T-клеток продуцировать цитокины трех видов у здоровых индивидуумов и у раковых пациентов обнаруживали значимые различия. В частности, для всех CD8+-T-клеток у здоровых индивидуумов, такое увеличение составляло 0/10 (0%), а у раковых пациентов, оно составляло 14/31 (45,2%). Таким образом, очевидно, что повышение мультифункциональности CD8+-T-клеток у раковых пациентов легче достигается после обработки этих клеток метформином. Кроме того, коэффициент снижения мультифункциональности после обработки метформинов у здоровых индивидуумов составлял 7/10 (70%), а у раковых пациентов он составлял 12/31 (38,7%). Это явно указывает на снижение мультифункциональности у здоровых индивидуумов. Что касается способности всех CD8+-T-клеток или PD-1-негативных, Tim-3-позитивных CD8+-T-клеток продуцировать цитокины двух видов, то между этими клетками, взятыми у здоровых индивидуумов и у раковых пациентов, наблюдались явные различия. Что касается способности клеток продуцировать цитокин 1 вида (в этом случае IFNγ), то между здоровыми индивидуумами и раковыми пациентами, какого-либо явного различия не наблюдалось.
Таблица 3. Систематизированные данные анализа на мультифункциональность CD8+-T-клеток, выделенных у здоровых индивидуумов и у пациентов, страдающих раковым заболеванием (стадии I)
(А) Клетка, продуцирующая 3 цитокина | ||||||
Здоровые индивидуумы | Пациенты с раковым заболеванием (стадии I) | |||||
IFNγ/TNFα/IL-2 | Повышение | Без изменения | Снижение | Повышение | Без изменения | Снижение |
Все CD8T | 0/10 | 3/10 | 7/10 | 14/31 | 5/31 | 12/31 |
PD-1+, Tim-3- | 3/10 | 2/10 | 5/10 | 14/31 | 7/31 | 10/31 |
PD-1+, Tim-3+ | 5/10 | 4/10 | 1/10 | 11/31 | 13/31 | 7/31 |
PD-1-, Tim-3+ | 1/10 | 6/10 | 3/10 | 12/31 | 13/31 | 6/31 |
PD-1-, Tim-3- | 2/10 | 1/10 | 7/10 | 13/31 | 4/31 | 14/31 |
(B) Клетка, продуцирующая 2 цитокина | ||||||
Здоровые индивидуумы | Пациенты с раковым заболеванием (стадии I) | |||||
IFNγ/TNFα | Повышение | Без изменения | Снижение | Повышение | Без изменения | Снижение |
Все CD8T | 3/10 | 2/10 | 5/10 | 15/31 | 4/31 | 12/31 |
PD-1+, Tim-3- | 3/10 | 3/10 | 4/10 | 10/31 | 11/31 | 10/31 |
PD-1+, Tim-3+ | 3/10 | 1/10 | 6/10 | 11/31 | 11/31 | 9/31 |
PD-1-, Tim-3+ | 3/10 | 2/10 | 5/10 | 13/31 | 10/31 | 6/31 |
PD-1-, Tim-3- | 4/10 | 2/10 | 4/10 | 13/31 | 4/31 | 14/31 |
(C) Клетка, продуцирующая 2 цитокина | ||||||
Здоровые индивидуумы | Пациенты с раковым заболеванием (стадии I) | |||||
IFNγ/IL-2 | Повышение | Без изменения | Снижение | Повышение | Без изменения | Снижение |
Все CD8T | 3/10 | 1/10 | 6/10 | 13/31 | 3/31 | 15/31 |
PD-1+, Tim-3- | 3/10 | 1/10 | 6/10 | 12/31 | 7/31 | 12/31 |
PD-1+, Tim-3+ | 2/10 | 4/10 | 4/10 | 9/31 | 14/31 | 8/31 |
PD-1-, Tim-3+ | 1/10 | 5/10 | 4/10 | 13/31 | 9/31 | 9/31 |
PD-1-, Tim-3- | 4/10 | 1/10 | 5/10 | 12/31 | 2/31 | 17/31 |
(D) Клетка, продуцирующая 1 цитокин | ||||||
Здоровые индивидуумы | Пациенты с раковым заболеванием (стадии I) | |||||
IFNγ | Повышение | Без изменения | Снижение | Повышение | Без изменения | Снижение |
Все CD8T | 4/10 | 4/10 | 2/10 | 5/31 | 13/31 | 13/31 |
PD-1+, Tim-3- | 2/10 | 3/10 | 5/10 | 11/31 | 10/31 | 10/31 |
PD-1+, Tim-3+ | 6/10 | 0/10 | 4/10 | 19/31 | 2/31 | 10/31 |
PD-1-, Tim-3+ | 2/10 | 2/10 | 6/10 | 10/31 | 7/31 | 14/31 |
PD-1-, Tim-3- | 2/10 | 4/10 | 4/10 | 9/31 | 6/31 | 16/31 |
Пример 4: Способ оценки мультифункциональности иммунных клеток
В этом примере описана оценка результатов анализа на восстановление мультифункциональности CD8+-T-клеток после их обработки метформином у 10 здоровых индивидуумов и у пяти пациентов с метастазирующим раковм легких (стадия IV) исходя из данных, полученных способом, описанным в Примере 1. Результаты такого анализа представлены ниже в таблице 4. В таблице 4, как и в таблице 3, представлены результаты оценки способности CD8+-T-клеток (всех CD8T) четырех видов продуцировать цитокины, то есть, PD-1-позитивных, Tim-3-негативных CD8+-T-клеток, PD-1-позитивных, Tim-3-позитивных CD8+-T-клеток, PD-1-негативных, Tim-3-позитивных CD8+-T-клеток и PD-1-негативных, Tim-3-негативных CD8+-T-клеток (Таблица 4). Способность продуцировать цитокины может быть выражена как отношение клеток, продуцирующих цитокины (A) трех видов, то есть, IFNγ/TNFα/IL-2, (B) двух видов IFNγ/TNFα, (C) двух видов, IFNγ/IL-2, и (D) одного вида, IFNγ.
Результаты, представленные в таблице 4, показали, что способности всех CD8+-T-клеток, PD-1-негативных, Tim-3-позитивных CD8+-T-клеток, PD-1-негативных и Tim-3-негативных CD8+-T-клеток продуцировать цитокины трех видов у здоровых индивидуумов и у раковых пациентов обнаруживали значимые различия. Более конкретно, у раковых пациентов, обработка метформином приводила к очень незначительному (нулевому) снижению мультифункциональности. У здоровых индивидуумов и у раковых пациентов, способности клеток продуцировать цитокины двух видов почти не отличались. Кроме того, у здоровых индивидуумов и у раковых пациентов, способности клеток продуцировать цитокины одного вида почти не отличались.
Таблица 4. Систематизированные данные анализа на мультифункциональность CD8+-T-клеток, выделенных у здоровых индивидуумов и у пациентов, страдающих раковым заболеванием (стадии IV)
(А) Клетка, продуцирующая 3 цитокина | ||||||
Здоровые индивидуумы | Пациенты с раковым заболеванием (стадии I) | |||||
IFNγ/TNFα/IL-2 | Повышение | Без изменения | Снижение | Повышение | Без изменения | Снижение |
Все CD8T | 0/10 | 3/10 | 7/10 | 1/5 | 4/5 | 0/5 |
PD-1+, Tim-3- | 3/10 | 2/10 | 5/10 | 4/5 | 1/5 | 0/5 |
PD-1+, Tim-3+ | 5/10 | 4/10 | 1/10 | 0/5 | 5/5 | 0/5 |
PD-1-, Tim-3+ | 1/10 | 6/10 | 3/10 | 0/5 | 5/5 | 0/5 |
PD-1-, Tim-3- | 2/10 | 1/10 | 7/10 | 2/5 | 3/5 | 0/5 |
(B) Клетка, продуцирующая 2 цитокина | ||||||
Здоровые индивидуумы | Пациенты с раковым заболеванием (стадии I) | |||||
IFNγ/TNFα | Повышение | Без изменения | Снижение | Повышение | Без изменения | Снижение |
Все CD8T | 3/10 | 2/10 | 5/10 | 1/5 | 0/5 | 4/5 |
PD-1+, Tim-3- | 3/10 | 3/10 | 4/10 | 1/5 | 2/5 | 2/5 |
PD-1+, Tim-3+ | 3/10 | 1/10 | 6/10 | 1/5 | 3/5 | 1/5 |
PD-1-, Tim-3+ | 3/10 | 2/10 | 5/10 | 1/5 | 2/5 | 2/5 |
PD-1-, Tim-3- | 4/10 | 2/10 | 4/10 | 1/5 | 2/5 | 2/5 |
(C) Клетка, продуцирующая 2 цитокина | ||||||
Здоровые индивидуумы | Пациенты с раковым заболеванием (стадии I) | |||||
IFNγ/IL-2 | Повышение | Без изменения | Снижение | Повышение | Без изменения | Снижение |
Все CD8T | 3/10 | 1/10 | 6/10 | 1/5 | 4/5 | 0/5 |
PD-1+, Tim-3- | 3/10 | 1/10 | 6/10 | 4/5 | 0/5 | 1/5 |
PD-1+, Tim-3+ | 2/10 | 4/10 | 4/10 | 1/5 | 3/5 | 1/5 |
PD-1-, Tim-3+ | 1/10 | 5/10 | 4/10 | 0/5 | 2/5 | 3/5 |
PD-1-, Tim-3- | 4/10 | 1/10 | 5/10 | 1/5 | 2/5 | 2/5 |
(D) Клетка, продуцирующая 1 цитокин | ||||||
Здоровые индивидуумы | Пациенты с раковым заболеванием (стадии I) | |||||
IFNγ | Повышение | Без изменения | Снижение | Повышение | Без изменения | Снижение |
Все CD8T | 4/10 | 4/10 | 2/10 | 0/5 | 2/5 | 3/5 |
PD-1+, Tim-3- | 2/10 | 3/10 | 5/10 | 0/5 | 4/5 | 1/5 |
PD-1+, Tim-3+ | 6/10 | 0/10 | 4/10 | 1/5 | 3/5 | 1/5 |
PD-1-, Tim-3+ | 2/10 | 2/10 | 6/10 | 3/5 | 0/5 | 2/5 |
PD-1-, Tim-3- | 2/10 | 4/10 | 4/10 | 1/5 | 2/5 | 2/5 |
В соответствии с результатами примеров 3 и 4, указывающими на восстановление мультифункциональности под действием метформина у здоровых индивидуумов, у пациентов с раковым заболеванием стадии I и у пациентов с раковым заболеванием стадии IV был проведен анализ для групп, у которых наблюдалось увеличение продуцирования или отсутствие изменений в продуцировании цитокинов трех видов (IFNγ/TNFα/IL-2) всеми CD8+-T-клетками. Продуцирование цитокинов трех видов (IFNγ/TNFα/IL-2) повышалось или не изменялось у 30% здоровых индивидуумов, у 61,3% пациентов с раковым заболеванием стадии I и у 100% пациентов с раковым заболеванием стадии IV, и при этом, у здоровых индивидуумов и у пациентов с раковым заболеванием, наблюдались значимые различия (Таблица 5). Было высказано предположение, что у раковых пациентов наблюдалась тенденция к увеличению числа истощенных CD8+-T-клеток наряду с прогрессированием ракового заболевания на определенной стадии, и такая группа истощенных клеток была детектирована в соответствии со статусом «повышение» или «отсутствие изменения» мультифункциональности после обработки метформином.
Таблица 5
IFNγ/TNFα/IL-2 | Повышение+без изменения | ||
Здоровые индивидуумы | Пациенты (стадия I) | Пациенты (стадия IV) |
|
Все CD8T | 3/10 (30%) | 19/31(61,3%) | 5/5 (100%) |
Пример 5: Эффективность обработки клеток метформином
ex vivo
У мышей (C57BL/6), T-клетки экстракорпорально обрабатывали метформином, а затем клетки снова вводили в организм и подтверждали наличие или отсутствие противоопухолевого эффекта обработанных клеток. Сначала, в качестве реципиентов использовали 8-9-недельных мышей C57BL/6(CD45.2), и в дорсальные области реципиентов интрадермально трансплантировали 2×105 клеток клеточной линии меланомы (B16-OVA). В качестве доноров использовали 8-9-недельных мышей C57BL/6(CD45.1)×OT-1 (трансгенных мышей, имеющих OVA-антиген-распознающие CD8+-T-клетки, содержащие Т-клеточные рецепторы α,β-цепи). Группу клеток CD45.1 OT-1 CD8+T, выделенных из селезенки, очищали с использованием магнитных сфер. После обработки клеток метформином (±), клетки вводили реципиентам через 7 дней после трансплантации опухолевых клеток (см. фиг. 5). Более конкретно, CD8+-T-клетки культивировали в течение 6 часов в метформине в концентрации 3×106/2 мл 10 мкM, и при 37°C, 5% CO2. После выделения клеток (клеток MTi), клетки два раза промывали PBS, и 3×106 клеток инъецировали в хвостовую вену мышей. Была использована среда, полученная путем добавления пенициллина (50 ед./мл), стрептомицина (50 г/мл, Sigma P0781), пирувата натрия (1 мM, Sigma S8636), L-глутамина (2 мM, Sigma G7513), заменимых аминокислот MEM (100-кратно разведенный раствор, Life Technologies), 2-меркаптоэтанола (5×10-5 M, Sigma M6250) в среду RPMI-1640 (Sigma R0883). Фетальную бычью сыворотку не использовали.
Полученные CD45.1 OT-1 CD8+T-клетки, инфильтрированные в опухоль, подвергали гейтированию на проточном цитометре FACSCantoTM II (Becton, Dickinson и Company) и подтверждали способность этих клеток продуцировать IFNα и IL-2. Высокие индексы позитивности клеток по всем цитокинам подтверждали для группы CD45.1 OT-1 CD8+T-клеток (клеток MTi), стимулированных PMA и иономицином и обработанных метформином (см. фиг. 6). Было подтверждено, что степень апоптоза клеток, инфильтрированных в опухоли реципиентов после введения обработанных метформином CD45.1 OT-1 CD8+T-клеток (клеток MTi), была значительно ниже, чем степень апоптоза клеток, инфильтрированных в опухоли реципиентов после введения не обработанных метформином CD45.1 OT-1 CD8+T-клеток, не обработанных метформином, (клеток MTi) (см. фиг. 7). На второй день после введения клеток наблюдалось значимое различие в размерах опухолей у реципиентов, которым вводили обработанные метформином CD45.1 OT-1 CD8+T-клетки (клетки MTi), и у реципиентов, которым вводили CD45.1 OT-1 CD8+T-клетки, не обработанные метформином (см. фиг. 8). Было подтверждено, что эффективность переноса обработанных метформином CD45.1 OT-1 CD8+T-клеток в опухоли была высокой, и что эти CD8+-T-клетки также имели высокую степень мультифункциональности в опухолях. Полученные результаты подтвердили, что Т-клетки, которые были подвергнуты экстракорпоральной обработке метформином и снова возвращены в организм индивидуума, обладали противоопухолевым действием, что указывает на возможность использования этих клеток в клеточной иммунотерапии.
Пример 6: Эффективность обработки клеток метформином
ex vivo
Наличие или отсутствие противоопухолевого эффекта Т-клеток, которые были экстракорпорально обработаны метформином и снова возвращены в организм индивидуума, подтверждали у мышей C57BL/6. Сначала, в качестве реципиентов использовали 8-9-недельных мышей C57BL/6(CD45.2), и в дорсальные области реципиентов интрадермально трансплантировали 2×105 клеток клеточной линии меланомы (B16-OVA). CD8+-T-клетки донорных мышей OT-I (Cell, Vol. 76, pp.17-27, 1994), обработанные метформином (0 мкM, 10 мкM, 100 мкM), вводили реципиентам несколько раз на 5-й, 7-й, 9-й и 11-й дни после трансплантации опухолевых клеток, и проводили мониторинг кривой роста опухоли (см. фиг. 9).
Полученные результаты подтвердили, что очень хорошие эффекты ингибирования опухоли наблюдались у реципиентов, которым вводили CD8+-T-клетки донорных мышей OT-1 (клетки MTi), обработанные 100 мкM метформина (см. фиг. 9).
Пример 7: Эффекты перорального введения метформина в комбинации с противораковой вакциной
Противоопухолевые эффекты подтверждали после введения метформина мышам, имеющим свободный доступ к питьевой воде, и введения вакцины OVA (слитого белка, полученного путем присоединения OVA257-264 к C-концу мышиного hsc70: Int. Immunol. 13, 1233-1242, 2001). На 7-й, 12-й, 17-й и 22-й дни после трансплантации опухолевых клеток, в хвостовую вену реципиентов, имеющих свободный доступ к питьевой воде, вводили метформин и/или вакцину OVA (см. фиг. 10). Противораковая вакцина, используемая в этом примере, принадлежала к категории противораковых белковых вакцин.
Полученные результаты подтвердили, что превосходные эффекты ингибирования опухоли наблюдались у реципиентов, которым вводили метформин в комбинации с противораковой вакциной (см. фиг. 10).
Пример 8: Эффекты введения метформина в комбинации с анти-PD-1 антителом
Опухоли трансплантировали мышам-реципиентам и подтверждали эффекты введения метформина в комбинации с анти-PD-1 антителом. В этом случае были использованы 8-9-недельные мыши C57BL/6(N=10) или BALB/c(N=10). В дорсальные области мышей C57BL/6 интердермально трансплантировали опухолевые клетки MO5, а в дорсальные области мышей BALB/c вводили Meth А, где количество этих клеток и Meth А составляло 2×105. Затем проводили мониторинг кривой роста опухоли после введения метформина мышам, имеющим свободный доступ к питьевой воде, и/или после введения анти-PD-1 антитела αPD-1 (клона 4H2, мышиного химерного антитела, имеющего вариабельную область крысиного антитела против мышиного PD-1 и константную область мышиного IgGκ1 (указанное антитело было получено методом, описанным в Примере 12 заявки WO2006/121168), где указанное антитело было предоставлено компанией Ono Pharmaceutical Co., Ltd.) через пять дней после трансплантации опухолевых клеток. Анти-PD-1 антитело внутрибрюшинно вводили в количестве 200 мкг на 5-й, 11-й, 17-й и 23-й дни после трансплантации опухолевых клеток. В качестве контроля вводили PBS. На фиг. 11 указан средний диаметр опухоли для одной группы из 10 мышей. Полученные результаты со всей очевидностью подтвердили уменьшение размеров опухоли у группы мышей, которым вводили метформин в комбинации с анти-PD-1 антителом.
На фиг. 12 представлены результаты измерений диаметров опухоли у мышей C57BL/6 контрольной группы; группы, которой вводили только метформин; группы, которой вводили только αPD-1, и группы, которой вводили метформин в комбинации с αPD-1. Аналогичнным образом, на фиг. 13 представлены результаты измерений диаметров опухоли у мышей BALB/c. Полученные результаты со всей очевидностью подтвердили уменьшение размеров опухоли у группы мышей, которым вводили метформин в комбинации с анти-PD-1 антителом.
Промышленное применение
Как подробно описано выше, измерение индекса позитивности клеток по цитокинам трех видов позволяет легко определить иммунный статус пациента. Кроме того, способ оценки согласно изобретению позволяет одновременно детектировать молекулы, ответственные за истощение иммунных клеток, и вычислить индекс позитивности клеток по цитокинам трех видов, и тем самым легко и точно определить иммунный статус пациента.
В уже существующих способах лечения пациентов противораковыми вакцинами, пациентов, которые должны быть подвергнуты такому лечению, выявляют исходя из наличия или отсутствия экспрессии вакцинного антигена в раковых тканях, однако, поскольку способ оценки согласно изобретению, помимо данных по экспрессии антигена, позволяет получить информацию об иммунном статусе пациента еще до проведения иммунотерапии, то этот способ позволяет легко выявить пациентов, которым необходимо лечение вакциной. Этот способ вносит значительный вклад в выявление пациентов, нуждающихся в лечении.
Средство для лечения заболеваний, ассоциированных с иммуными патологиями согласно изобретению, способствует повышению иммунитета и, например, в случае раковых заболеваний, такое средство, предположительно, будет улучшать прогноз ракового заболевания при введении такого средства в комбинации с хирургической операцией, лучевой терапией или химиотерапией. Кроме того, проведение предоперационной химиотерапии рассматривается как эффективная мера. Кроме того, предполагается, что эта мера будет способствовать подавлению рецидивов после лечения.
Кроме того, настоящее изобретение также относится к способу улучшения функции иммунных клеток, а также к иммунным клеткам с улучшенной функцией (клеткам MTi) и к средству для лечения и/или предупреждения заболеваний, ассоциированных с иммуными патологиями, где указанное средство содержит клетки MTi в качестве активного ингредиента. Полученные клетки обладают превосходной иммунной функцией и могут быть использованы в качестве средства для лечения заболеваний, ассоциированных с иммуными патологиями. Так, например, эти клетки могут обладать превосходным действием, если они используются как противоопухолевое средство.
Claims (5)
1. Комбинация для лечения и/или предупреждения ракового заболевания, содержащая метформин и анти-PD-1 антитело, где раковым заболеванием является по меньшей мере одно раковое заболевание, выбранное из саркомы мягких тканей и рака кожи.
2. Комбинация по п.1, где анти-PD-1 антителом является ниволубам, пембролизумаб, PDR-001, REGN-2810, BGB-A317 или AMP-514.
3. Комбинация по п. 1 или 2, где лечение рака представляет собой подавление прогрессирования рака, а предупреждение рака представляет собой предупреждение рецидивов рака.
4. Комбинация для подавления прогрессирования рака, лечения рака, предупреждения рака и/или предупреждения рецидивов рака, содержащая анти-PD-1 антитело и метформин, где раковым заболеванием является по меньшей мере одно раковое заболевание, выбранное из саркомы мягких тканей и рака кожи.
5. Способ лечения и/или предупреждения ракового заболевания, включающий введение комбинации по любому из пп. 1-3, где раковым заболеванием является по меньшей мере одно раковое заболевание, выбранное из саркомы мягких тканей и рака кожи.
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2014-166593 | 2014-08-19 | ||
JP2014166593 | 2014-08-19 | ||
JP2015-085556 | 2015-04-20 | ||
JP2015085556 | 2015-04-20 | ||
PCT/JP2015/073011 WO2016027764A1 (ja) | 2014-08-19 | 2015-08-17 | 免疫細胞の機能増強方法及び免疫細胞の多機能性評価方法 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2020127099A Division RU2020127099A (ru) | 2014-08-19 | 2015-08-17 | Способ улучшения функции иммунных клеток и оценки мультифункциональности иммунных клеток |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2017108754A RU2017108754A (ru) | 2018-09-20 |
RU2017108754A3 RU2017108754A3 (ru) | 2019-03-29 |
RU2731098C2 true RU2731098C2 (ru) | 2020-08-28 |
Family
ID=55350709
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2020127099A RU2020127099A (ru) | 2014-08-19 | 2015-08-17 | Способ улучшения функции иммунных клеток и оценки мультифункциональности иммунных клеток |
RU2017108754A RU2731098C2 (ru) | 2014-08-19 | 2015-08-17 | Способ улучшения функции иммунных клеток и оценки мультифункциональности иммунных клеток |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2020127099A RU2020127099A (ru) | 2014-08-19 | 2015-08-17 | Способ улучшения функции иммунных клеток и оценки мультифункциональности иммунных клеток |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20170231929A1 (ru) |
EP (2) | EP3232199B1 (ru) |
JP (3) | JP6629211B2 (ru) |
KR (1) | KR20170042778A (ru) |
CN (1) | CN107148274A (ru) |
AU (1) | AU2015304448B2 (ru) |
BR (1) | BR112017002807A2 (ru) |
CA (1) | CA2958573A1 (ru) |
ES (1) | ES2915849T3 (ru) |
IL (1) | IL250639B (ru) |
MX (1) | MX2017002134A (ru) |
PH (1) | PH12017500224A1 (ru) |
RU (2) | RU2020127099A (ru) |
SG (2) | SG11201700978SA (ru) |
WO (1) | WO2016027764A1 (ru) |
Families Citing this family (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3530736A3 (en) * | 2005-05-09 | 2019-11-06 | ONO Pharmaceutical Co., Ltd. | Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics |
PL3081576T3 (pl) | 2013-12-12 | 2020-03-31 | Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co., Ltd. | Przeciwciało anty pd-1, jego fragment wiążący antygen i ich zastosowanie medyczne |
KR20230133934A (ko) | 2016-10-11 | 2023-09-19 | 아게누스 인코포레이티드 | 항-lag-3 항체 및 이의 사용 방법 |
CN107082812B (zh) * | 2017-03-29 | 2018-11-13 | 上海科医联创生物科技有限公司 | 一种恢复衰竭性免疫细胞功能的融合蛋白及其应用 |
FI3630112T3 (fi) * | 2017-06-02 | 2024-05-02 | Bayer Healthcare Llc | Regorafenibin ja nivolumabin yhdistelmä syövän hoidossa |
JPWO2019069449A1 (ja) * | 2017-10-06 | 2019-11-14 | 純児 赤木 | 測定方法 |
WO2019124423A1 (ja) * | 2017-12-19 | 2019-06-27 | 国立大学法人 岡山大学 | がんの進行抑制、治療、予防及び/又は再発予防剤 |
JP2019112353A (ja) * | 2017-12-25 | 2019-07-11 | 合同会社チューモス | 自家腫瘍ワクチン及び免疫誘導方法 |
JP7329840B2 (ja) * | 2017-12-26 | 2023-08-21 | 民男 山内 | 免疫動態に関する情報を提供する方法、システムおよびプログラム |
AU2019200033B2 (en) * | 2018-01-05 | 2020-09-10 | Gnt Biotech & Medicals Corporation | A pharmaceutical combination and method for regulation of tumor microenvironment and immunotherapy |
WO2019202473A1 (en) * | 2018-04-16 | 2019-10-24 | Université de Lausanne | Ucp2 inducing agents for the treatment of cancer resistant to immune checkpoint blockade |
US20220017969A1 (en) * | 2018-12-07 | 2022-01-20 | Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona | A method of determining risk for skin cancer development and skin cancer therapeutic prevention by measuring pd-1/pd-l1 signaling pathway members |
KR102510381B1 (ko) * | 2019-10-16 | 2023-03-15 | 한국과학기술원 | 메트포민을 유효성분으로 포함하는 뇌암의 예방 또는 치료용 면역치료제 조성물 |
WO2022072745A1 (en) * | 2020-10-01 | 2022-04-07 | The Regents Of The University Of California | Methods and compositions to treat and prevent viral infections and acute respiratory distress syndrome |
CN112791182A (zh) * | 2020-12-31 | 2021-05-14 | 中山大学 | 二甲双胍和抗pd-1抗体药物组合物在制备肝癌药物中的应用 |
CN113421627B (zh) * | 2021-05-11 | 2023-04-07 | 深圳市罗湖区人民医院 | 体外评估药物对nk细胞抗衰作用的系统 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002011716A2 (en) * | 2000-08-07 | 2002-02-14 | Ranbaxy Signature Llc | Liquid formulation of metformin |
EP1537878A1 (en) * | 2002-07-03 | 2005-06-08 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Immunopotentiating compositions |
WO2011031474A2 (en) * | 2009-08-25 | 2011-03-17 | President And Fellows Of Harvard College | Use of metformin in cancer treatment and prevention |
WO2012095379A1 (en) * | 2011-01-11 | 2012-07-19 | Universität Basel | Combination of syrosingopine and mitochondrial inhibitors for the treatment of cancer and immunosuppression |
Family Cites Families (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0624207B2 (ja) * | 1986-06-25 | 1994-03-30 | 新電元工業株式会社 | 高耐圧半導体装置の製造方法 |
US4938949A (en) * | 1988-09-12 | 1990-07-03 | University Of New York | Treatment of damaged bone marrow and dosage units therefor |
US5260275A (en) * | 1990-08-14 | 1993-11-09 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Hypoglycemics |
US5620889A (en) * | 1993-10-14 | 1997-04-15 | Immunex Corporation | Human anti-Fas IgG1 monoclonal antibodies |
EP3530736A3 (en) | 2005-05-09 | 2019-11-06 | ONO Pharmaceutical Co., Ltd. | Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics |
US8563500B2 (en) * | 2007-09-05 | 2013-10-22 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung Des Offentlichen Rechts | Methods and compounds for treating diseases caused by reactive oxygen species |
US20130059916A1 (en) * | 2010-05-26 | 2013-03-07 | Stephane Rocchi | Biguanide compounds and its use for treating cancer |
EP2729174A1 (en) * | 2011-07-08 | 2014-05-14 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Il-23 antagonists for treatment or prevention of skin rash associated with treatment with p13k/akt pathway inhibitors |
CN103371991A (zh) * | 2012-04-18 | 2013-10-30 | 中国人民解放军第二军医大学 | 二甲双胍在制备预防或治疗肝细胞癌药物中的应用 |
EP2872646B1 (en) * | 2012-07-12 | 2017-08-30 | Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale (INSERM) | Methods for predicting the survival time and treatment responsiveness of a patient suffering from a solid cancer with a signature of at least 7 genes |
PT2880180T (pt) * | 2012-08-06 | 2018-12-27 | Hopitaux Paris Assist Publique | Métodos e kits para o rastreio de doentes com um cancro |
US20150290316A1 (en) * | 2012-10-02 | 2015-10-15 | Bristol-Myers Squibb Company | Combination of anti-kir antibodies and anti-pd-1 antibodies to treat cancer |
WO2014083095A1 (en) * | 2012-11-29 | 2014-06-05 | Universitaet Basel | Combinations of metformin with other compounds for the treatment of cancer and for immunosuppression |
JP6125041B2 (ja) * | 2013-01-02 | 2017-05-10 | デコイ バイオシステムズ インコーポレイテッドDecoy Biosystems, Inc. | 細菌を用いた癌治療用組成物およびその製造のための菌の使用 |
JP6242071B2 (ja) * | 2013-04-23 | 2017-12-06 | 国立大学法人 岡山大学 | 免疫疲弊cd8+t細胞の機能改善薬、がん治療薬及びメタボリック症候群の予防または治療薬 |
-
2015
- 2015-08-17 ES ES17174222T patent/ES2915849T3/es active Active
- 2015-08-17 RU RU2020127099A patent/RU2020127099A/ru unknown
- 2015-08-17 JP JP2016544195A patent/JP6629211B2/ja active Active
- 2015-08-17 RU RU2017108754A patent/RU2731098C2/ru active
- 2015-08-17 SG SG11201700978SA patent/SG11201700978SA/en unknown
- 2015-08-17 WO PCT/JP2015/073011 patent/WO2016027764A1/ja active Application Filing
- 2015-08-17 MX MX2017002134A patent/MX2017002134A/es unknown
- 2015-08-17 KR KR1020177007514A patent/KR20170042778A/ko not_active Application Discontinuation
- 2015-08-17 BR BR112017002807A patent/BR112017002807A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2015-08-17 CN CN201580043408.XA patent/CN107148274A/zh active Pending
- 2015-08-17 SG SG10202005315SA patent/SG10202005315SA/en unknown
- 2015-08-17 US US15/503,247 patent/US20170231929A1/en not_active Abandoned
- 2015-08-17 EP EP17174222.4A patent/EP3232199B1/en active Active
- 2015-08-17 CA CA2958573A patent/CA2958573A1/en not_active Abandoned
- 2015-08-17 AU AU2015304448A patent/AU2015304448B2/en not_active Ceased
- 2015-08-17 EP EP15833898.8A patent/EP3192517A4/en not_active Withdrawn
-
2017
- 2017-02-07 PH PH12017500224A patent/PH12017500224A1/en unknown
- 2017-02-16 IL IL250639A patent/IL250639B/en active IP Right Grant
- 2017-04-20 JP JP2017083767A patent/JP6672217B2/ja active Active
- 2017-06-20 US US15/628,600 patent/US20170281569A1/en not_active Abandoned
-
2020
- 2020-03-03 JP JP2020035992A patent/JP2020109098A/ja active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002011716A2 (en) * | 2000-08-07 | 2002-02-14 | Ranbaxy Signature Llc | Liquid formulation of metformin |
EP1537878A1 (en) * | 2002-07-03 | 2005-06-08 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Immunopotentiating compositions |
WO2011031474A2 (en) * | 2009-08-25 | 2011-03-17 | President And Fellows Of Harvard College | Use of metformin in cancer treatment and prevention |
WO2012095379A1 (en) * | 2011-01-11 | 2012-07-19 | Universität Basel | Combination of syrosingopine and mitochondrial inhibitors for the treatment of cancer and immunosuppression |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
David A Christian et al. Particle-mediated delivery of cytokines for immunotherapy // Immunotherapy, vol.4, N4, pp.425-441. Pollak M. et al. Potential applications for biguanides in oncology // J Clin Invest. 2013 Sep; 123(9):3693-700. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ES2915849T3 (es) | 2022-06-27 |
IL250639B (en) | 2020-02-27 |
JP6629211B2 (ja) | 2020-01-15 |
EP3232199B1 (en) | 2022-05-04 |
JPWO2016027764A1 (ja) | 2017-06-01 |
JP2017165752A (ja) | 2017-09-21 |
RU2017108754A3 (ru) | 2019-03-29 |
CA2958573A1 (en) | 2016-02-25 |
MX2017002134A (es) | 2017-09-13 |
RU2017108754A (ru) | 2018-09-20 |
IL250639A0 (en) | 2017-04-30 |
US20170231929A1 (en) | 2017-08-17 |
US20170281569A1 (en) | 2017-10-05 |
EP3232199A3 (en) | 2018-02-14 |
PH12017500224B1 (en) | 2017-07-10 |
JP6672217B2 (ja) | 2020-03-25 |
SG11201700978SA (en) | 2017-03-30 |
AU2015304448A1 (en) | 2017-03-09 |
CN107148274A (zh) | 2017-09-08 |
EP3192517A1 (en) | 2017-07-19 |
SG10202005315SA (en) | 2020-07-29 |
RU2020127099A (ru) | 2020-09-02 |
BR112017002807A2 (pt) | 2017-12-19 |
AU2015304448B2 (en) | 2020-04-30 |
WO2016027764A1 (ja) | 2016-02-25 |
EP3232199A2 (en) | 2017-10-18 |
EP3232199A8 (en) | 2017-12-13 |
PH12017500224A1 (en) | 2017-07-10 |
KR20170042778A (ko) | 2017-04-19 |
JP2020109098A (ja) | 2020-07-16 |
EP3192517A4 (en) | 2018-04-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2731098C2 (ru) | Способ улучшения функции иммунных клеток и оценки мультифункциональности иммунных клеток | |
JP7034125B2 (ja) | Carの抗腫瘍活性のための毒性管理 | |
Sánchez–Fueyo et al. | Immunologic basis of graft rejection and tolerance following transplantation of liver or other solid organs | |
Sundström et al. | Tumor-infiltrating mucosal-associated invariant T (MAIT) cells retain expression of cytotoxic effector molecules | |
CN109844536B (zh) | 预测对pd-1轴抑制剂的响应 | |
JP6574179B2 (ja) | エフェクターtレグ細胞を同定するための方法及びキット | |
US20220096552A1 (en) | Method and composition for predicting long-term survival in cancer immunotherapy | |
Kellner et al. | Third party, umbilical cord blood derived regulatory T-cells for prevention of graft versus host disease in allogeneic hematopoietic stem cell transplantation: feasibility, safety and immune reconstitution | |
US20170000850A1 (en) | Differentiation therapy with cd137 ligand agonists | |
CN108883093A (zh) | 二盐酸组胺组合及其用途 | |
Erhart et al. | Spheroid glioblastoma culture conditions as antigen source for dendritic cell-based immunotherapy: spheroid proteins are survival-relevant targets but can impair immunogenic interferon γ production | |
Cheng et al. | CD 137 ligand signalling induces differentiation of primary acute myeloid leukaemia cells | |
KR20230062834A (ko) | 암 치료에 대한 반응을 예측하기 위한 바이오마커 | |
US10722523B2 (en) | Chemoimmunotherapy for epithelial cancer | |
US20240158869A1 (en) | Factors for optimizing immunotherapy | |
EP3750988A1 (en) | Improved alpha beta t processed cell production method | |
Mari et al. | Roxane Mari1*, Mathilde Guerin1, Cecile Vicier1, Jochen Walz2, Nathalie Bonnet3, Geraldine Pignot2 and Gwenaelle Gravis1 | |
Phillips | An Investigation Into the Role of T Follicular Helper Cells in Follicular Lymphoma | |
US20210145830A1 (en) | Materials and methods for treating cancer | |
Turnbull | Immunomodulation in Patients Receiving Systemic Anti-Cancer Therapy | |
TW202417643A (zh) | 用於將免疫療法最佳化之因素 | |
Salimu | Tumour antigen cross-presentation from irradiated tumour cells and the role of tlr4 polymorphism | |
角田健太郎 | Studies on biological properties and immunosuppressive function of myeloid-derived suppressor cells in tumor microenvironment | |
Norde et al. | Intra-and extramedullary immunosuppressive mechanisms in multiple myeloma | |
Brown | A phenotypic, morphological and functional comparison between normal and leukaemia-derived dendritic cells |