CN103371991A - 二甲双胍在制备预防或治疗肝细胞癌药物中的应用 - Google Patents

二甲双胍在制备预防或治疗肝细胞癌药物中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN103371991A
CN103371991A CN2012101146374A CN201210114637A CN103371991A CN 103371991 A CN103371991 A CN 103371991A CN 2012101146374 A CN2012101146374 A CN 2012101146374A CN 201210114637 A CN201210114637 A CN 201210114637A CN 103371991 A CN103371991 A CN 103371991A
Authority
CN
China
Prior art keywords
metformin
hepatocellular carcinoma
dimethyldiguanide
application
cell
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2012101146374A
Other languages
English (en)
Inventor
王红阳
郑龙轶
杨文�
邹大进
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Second Military Medical University SMMU
Original Assignee
Second Military Medical University SMMU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Second Military Medical University SMMU filed Critical Second Military Medical University SMMU
Priority to CN2012101146374A priority Critical patent/CN103371991A/zh
Publication of CN103371991A publication Critical patent/CN103371991A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Landscapes

  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

本发明涉及医药技术领域。二甲双胍属于双胍类口服降糖药，广泛应用于2型糖尿病的药物治疗。本发明的目的在于提供二甲双胍的新用途，特别是在制备预防或治疗肝细胞癌药物中的应用。本发明从体外细胞培养和体内动物实验两个方面研究发现二甲双胍对肝细胞癌的抑制作用。通过实验发现，二甲双胍能抑制肝癌细胞系的增殖和克隆形成能力，导致其细胞周期阻滞和凋亡增多，并与化疗药物(顺铂、多柔比星等)联用，能增强化疗药物的抗肝细胞癌效果。本发明为二甲双胍提供了一种新用途。本发明也为肝细胞癌的预防和治疗提供了新的思路。

Description

二甲双胍在制备预防或治疗肝细胞癌药物中的应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及二甲双胍在制备预防或治疗肝细胞癌药物中的应用。
背景技术
原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是世界上第五大常见肿瘤，在癌症相关死亡原因中排名第三。肝细胞癌常见于发展中国家，尤其多发于东亚、东南亚、太平洋盆地和非洲撒哈拉沙漠南部地区。在已报告的626,000例肝细胞癌患者中，大约410,000例分布于东亚地区(其中中国346,000例，日本40,000例)。但是，由于治疗前侵袭和转移的发生率较高，肝细胞癌的预后较差，5年复发率为40％-70％。
二甲双胍属于双胍类口服降糖药，广泛应用于2型糖尿病的药物治疗。二甲双胍在机体内主要通过激活AMPK通路抑制肝脏的糖异生，同时通过促进肌肉和脂肪组织对葡萄糖的摄取及无氧酵解，改善机体胰岛素的敏感性，从而降低血糖(参见文献：Zhou G，Myers R，Li Y，Chen Y，Shen X，Fenyk-Melody J，et al.Role of AMP-activated protein kinase in mechanism ofmetformin action.J Clin Invest.2001；108(8)：1167-74.)。随着研究的不断深入，发现二甲双胍可能同时具有抑制肿瘤生长的作用，其抗肿瘤作用越来越受到重视(参见文献：Ben Sahra I，Le Marchand-Brustel Y，Tanti JF，Bost F.Metformin in cancer therapy：a new perspective for an old antidiabetic drug？Mol Cancer Ther.2010；9(5)：1092-9.)。多项回顾性临床研究也表明，2型糖尿病患者服用二甲双胍能够降低包括乳腺癌、胰腺癌等多种肿瘤的发生率(参见文献：Bowker SL，Majumdar SR，Veugelers P，Johnson JA.Increasedcancer-related mortality for patients with type 2 diabetes who use sulfonylureasor insulin：Response to Farooki and Schneider.Diabetes Care.2006；29(8)：1990-1.；Evans JM，Donnelly LA，Emslie-Smith AM，Alessi DR，Morris AD.Metformin and reduced risk of cancer in diabetic patients.BMJ.2005；330(7503)：1304-5.)。
目前尚未有文献报道二甲双胍在肝细胞癌中的治疗作用，以及通过体内和体外实验研究结果表明二甲双胍能够抑制肝细胞癌细胞系的生长，并能增强化疗药物的抗肿瘤效应。
发明内容
本发明的目的在于提供二甲双胍的新用途，特别是在制备预防或治疗肝细胞癌药物中的应用。
本发明从体外细胞培养和体内动物实验两个方面研究了二甲双胍对肝细胞癌的抑制作用。通过实验发现，二甲双胍能抑制肝癌细胞系的增殖和克隆形成能力，导致其细胞周期阻滞和凋亡增多，并能增强化疗药对人肝癌细胞株的杀伤作用。在体内二甲双胍同样能明显抑制人肝癌细胞株SMMC7721、HCC-LM3在裸鼠皮下的生长速度。二甲双胍对原代人肝细胞癌标本分离获得的肝癌细胞同样具有抑制增殖的作用。本发明涉及治疗或/和预防人肝细胞癌及其某些并发症的方法，该方法包含给予需要治疗的患者有效、无毒且药学上可接受量的二甲双胍。二甲双胍对肝细胞癌具有良好的抑制作用，对肝细胞癌细胞的抑制作用具有较好的选择性，对肝细胞癌的增殖和细胞周期有明显影响，对肝细胞癌的转化能力有明显影响。
本发明还发现二甲双胍与化疗药物(顺铂等)联用，能增强化疗药物的抗肝细胞癌效果。
本发明提供了二甲双胍在制备预防或治疗肝细胞癌药物中的应用。
本发明所述的二甲双胍是指各种形式的二甲双胍及其衍生物，包括缓释片、普通片等。
本发明所述的二甲双胍的给药方式包括：口服、局部给药等。
本发明所述的肝细胞癌具体指SMMC7721、Huh7、HCC-LM3、HepG2或原代人肝细胞癌细胞。
本发明还提供了二甲双胍在增强化疗药物的抗肿瘤效应方面的应用。
本发明所述的化疗药物是顺铂、多柔比星等。
本发明二甲双胍在制备预防或治疗肝细胞癌药物中的应用，还可联合其它肝癌治疗方法，如化学药物治疗，抗体治疗，放射治疗等。
本发明为二甲双胍提供了一种新用途。本发明也为肝细胞癌的预防和治疗提供了新的思路。
附图说明
图1：二甲双胍对人肝细胞癌细胞株SMMC7721、Huh7、HepG2、HCC-LM3等在体外的生长具有明显的抑制作用；
图2：二甲双胍能明显使人肝癌细胞株SMMC7721的细胞周期发生阻滞；
图3：二甲双胍能明显促进人肝癌细胞株SMMC7721、HCC-LM3发生凋亡；其中，A为用AnnexinV/PI试剂盒(购自Invitrogen公司)通过流式细胞仪检测，得到二甲双胍处理后SMMC7721细胞凋亡发生的比例明显增高(右下象限)；B为通过免疫印迹法检测凋亡相关蛋白表达水平，发现二甲双胍处理后HCC-LM3细胞增殖相关的CyclinD1表达水平降低，而凋亡相关的PARP剪切体(cleavage PARP)表达量升高。
图4：二甲双胍能明显抑制人肝癌细胞株(SMMC7721、HepG2、HCC-LM3)的克隆形成能力；
图5：二甲双胍能明显增强化疗药顺铂对人肝癌细胞株(SMMC7721、HepG2、HCC-LM3)的杀伤作用；
图6：二甲双胍能明显促进化疗药顺铂对肝癌细胞株诱导的凋亡；其中，A为SMMC7721细胞经二甲双胍或/和二甲双胍处理后，用AnnexinV/PI试剂盒通过流式细胞仪检测，得到二甲双胍联合顺铂处理后细胞凋亡发生的比例明显高于单用顺铂组或二甲双胍组(右下象限)；B为通过免疫印迹法检测凋亡相关蛋白表达水平，发现二甲双胍处理后细胞(HCC-LM3、HepG2、SMMC7721)凋亡相关的PARP剪切体(cleavage PARP)表达量升高。
图7：二甲双胍能明显抑制人肝癌细胞株HCC-LM3、SMMC7721在裸鼠皮下的生长速度；
图8：二甲双胍能明显抑制原代人肝癌细胞的增殖。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作详细描述，但本发明的实施不仅限于此。
实施例1.二甲双胍对人肝细胞癌细胞株体外生长的抑制作用。
将处于对数生长期的肝细胞癌细胞系SMMC7721、Huh7、HCC-LM3、HepG2(购自中科院上海细胞库)以2000-3000细胞/孔的密度接种于96孔板中，24小时后更换为含有不同浓度(以未加二甲双胍组为对照，二甲双胍分别设1mM、2mM、5mM、10mM四个浓度)二甲双胍的完全培养基，分别于不同时间点(48小时和96小时)用Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒，购自日本同仁化学研究所(Dojindo)，检测细胞增殖情况，检测方法参见《医学免疫学实验技术》(苏州大学出版社，出版日期：2011年2月)。
结果如图1所示，二甲双胍对不同细胞系的增殖均具有明显抑制作用，随着二甲双胍浓度的提高和作用时间的延长，二甲双胍对肝癌细胞系增殖的抑制作用逐渐增强，提示二甲双胍对肝癌细胞系的体外增殖具有明显抑制作用。
实施例2.二甲双胍对肝癌细胞系克隆形成能力的抑制作用。
将处于对数生长期的肝细胞癌细胞系SMMC7721、HCC-LM3、HepG2以1000细胞/孔的密度接种于6孔板中，24小时后更换为含有二甲双胍(设2mM和5mM两个浓度)的完全培养基，以未加任何刺激的空细胞组为对照。细胞培养箱中培养10天后，用结晶紫对所形成的细胞克隆染色，并计数，计算二甲双胍处理组细胞形成的细胞克隆数目占对照组的比例。结果如图4所示，二甲双胍处理后三种细胞所形成的细胞克隆数目均明显减少，提示二甲双胍能抑制肝癌细胞的恶性转化能力。
实施例3.二甲双胍联合化疗药对人肝细胞癌细胞株体外生长的抑制作用。
将处于对数生长期的肝细胞癌细胞系SMMC7721、HCC-LM3、HepG2以2000-3000细胞/孔的密度接种于96孔板中，24小时后更换为含有二甲双胍和顺铂(购自Sigma公司)的完全培养基，分别设空白对照(未加任何刺激的空细胞)、单加二甲双胍(2mM-5mM)对照、单加顺铂(0.5-2ug/ml)对照。作用24小时后，用CCK-8法检测结果如图5，二甲双胍与顺铂联用的情况下，肝癌细胞系的存活率均较单用顺铂时显著下降，提示二甲双胍与顺铂联用可以增强对肝癌细胞系生长的抑制作用。
实施例4.二甲双胍对人肝细胞癌细胞株体内生长的抑制作用。
将1×106SMMC7721或HCC-LM3细胞接种于雄性裸鼠(周龄为6周，购自上海斯莱克公司)皮下，待肿瘤长至5mm3大小时，将裸鼠平均分为对照组和二甲双胍处理组(5g/L浓度溶于小鼠饮用水中，每天更换)，每组各10只，每周一次测量肿瘤体积大小(肿瘤体积大小的计算公式为：体积＝1/2×肿瘤长径×短径2)。
结果如图7所示，二甲双胍处理后SMMC7721和HCC-LM3细胞在小鼠皮下的生长速度均明显减慢，进一步证明了二甲双胍对这两种细胞系在小鼠体内的成瘤能力具有抑制作用。
实施例5.二甲双胍对原代人肝癌细胞增殖的抑制作用。
分离人原代肝细胞癌标本(行肝癌根治性切除术的患者签署知情同意后，于手术过程中获取)获得原代人肝癌细胞。具体分离方法为：在严格无菌状况下，将获取的肝癌手术标本，用无血清DMEM液(购自Gibco公司)漂洗两次；用眼科剪剪成约1mm3小块，然后加入浓度为0.1％的IV型胶原酶(购自Sigma公司)，于37摄氏度细胞培养箱中作用20-30分钟后取出，轻柔吹打成单细胞悬液，细胞悬液经200目尼龙网过滤后获得单细胞悬液，1000转/分钟离心3分钟后，弃上清，用含有10％胎牛血清(购自Gibco公司)的培养基重悬后获得单细胞悬液。将肝癌细胞以2000-3000细胞/孔的密度接种于96孔板中，24小时后更换为含有不同浓度(以未加二甲双胍组为对照，二甲双胍分别设1mM、2mM、5mM、10mM四个浓度)二甲双胍的完全培养基，分别于24小时和48小时后，用CCK-8法检测细胞增殖情况。
CCK-8法检测细胞增殖情况如图8所示，二甲双胍对原代肝癌细胞的增殖均具有明显抑制作用，随着二甲双胍浓度的升高和作用时间的延长，抑制增殖的效果逐渐加强，提示二甲双胍对肝癌细胞系的体外增殖具有明显抑制作用。

Claims (6)

1.二甲双胍在制备预防或治疗肝细胞癌药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的二甲双胍在制备预防或治疗肝细胞癌药物中的应用，其特征在于，其中的二甲双胍是指各种形式的二甲双胍及其衍生物。
3.根据权利要求1或2所述的二甲双胍在制备预防或治疗肝细胞癌药物中的应用，其特征在于，其中的二甲双胍是缓释片或普通片。
4.根据权利要求1或2所述的二甲双胍在制备预防或治疗肝细胞癌药物中的应用，其特征在于，其中的肝细胞癌是指SMMC7721、Huh7、HCC-LM3、HepG2或人原代肝细胞癌细胞。
5.根据权利要求1所述的二甲双胍在制备预防或治疗肝细胞癌药物中的应用，其特征在于，二甲双胍用于直接抗肿瘤或增强化疗药物的抗肿瘤效应。
6.根据权利要求5所述的二甲双胍在制备预防或治疗肝细胞癌药物中的应用，其特征在于，化疗药物是顺铂或多柔比星。
CN2012101146374A 2012-04-18 2012-04-18 二甲双胍在制备预防或治疗肝细胞癌药物中的应用 Pending CN103371991A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2012101146374A CN103371991A (zh) 2012-04-18 2012-04-18 二甲双胍在制备预防或治疗肝细胞癌药物中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2012101146374A CN103371991A (zh) 2012-04-18 2012-04-18 二甲双胍在制备预防或治疗肝细胞癌药物中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN103371991A true CN103371991A (zh) 2013-10-30

Family

ID=49458241

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2012101146374A Pending CN103371991A (zh) 2012-04-18 2012-04-18 二甲双胍在制备预防或治疗肝细胞癌药物中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103371991A (zh)

Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104230760A (zh) * 2014-09-02 2014-12-24 浙江工业大学 N-芳基取代的双胍氢溴酸盐类化合物及制备方法和应用
CN105534999A (zh) * 2015-12-25 2016-05-04 南京医科大学第一附属医院 一种用于治疗肿瘤的药物组合物及其应用
CN106188209A (zh) * 2016-07-05 2016-12-07 福州大学 一种兼具抗肿瘤和抗肿瘤转移活性的二甲双胍偶联物及其应用
CN107148274A (zh) * 2014-08-19 2017-09-08 国立大学法人冈山大学 增强免疫细胞功能的方法和评估免疫细胞多功能性的方法
WO2018091961A1 (en) * 2016-11-15 2018-05-24 Uniwersytet Lodzki New medical use of metformin and epothilone a in treatment of neoplastic diseases
CN109223742A (zh) * 2018-10-09 2019-01-18 西安交通大学医学院第附属医院 联合辛伐他汀与二甲双胍的用途
CN109939241A (zh) * 2019-03-27 2019-06-28 宁夏医科大学 一种双前药共组装纳米靶向给药系统及其制备方法
CN110151743A (zh) * 2019-07-04 2019-08-23 江苏安唐医药科技有限公司 一种药物组合物及其在制备抑癌药物中的应用
CN110891574A (zh) * 2017-07-05 2020-03-17 埃里克·雅宁 用于预防和/或治疗肝细胞癌的美格列明
CN112574071A (zh) * 2019-09-30 2021-03-30 复旦大学 一种双胍基连接脂肪碳链的两亲性二甲双胍衍生物及其制药用途
CN112791182A (zh) * 2020-12-31 2021-05-14 中山大学 二甲双胍和抗pd-1抗体药物组合物在制备肝癌药物中的应用
CN113143898A (zh) * 2021-04-14 2021-07-23 浙江工业大学 二甲双胍在制备预防砷致肺癌发生药物中的应用
CN113908280A (zh) * 2021-09-14 2022-01-11 深圳先进技术研究院 Trim11抑制剂和二甲双胍的组合物在治疗肝细胞癌中的应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DIMITRIOS ILIOPOULOS等: "Metformin Decreases the Dose of Chemotherapy for Prolonging Tumor Remission in Mouse Xenografts Involving Multiple Cancer Cell Types", 《CANCER RESEARCH》 *
张舫 等: "糖尿病治疗药物与癌症的关系及其临床应用", 《实用糖尿病杂志》 *
王钦加: "二甲双胍及AICAR激活AMPK诱导肝癌细胞株PLC/PRF/5增殖抑制", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 *

Cited By (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107148274A (zh) * 2014-08-19 2017-09-08 国立大学法人冈山大学 增强免疫细胞功能的方法和评估免疫细胞多功能性的方法
CN104230760A (zh) * 2014-09-02 2014-12-24 浙江工业大学 N-芳基取代的双胍氢溴酸盐类化合物及制备方法和应用
CN105534999A (zh) * 2015-12-25 2016-05-04 南京医科大学第一附属医院 一种用于治疗肿瘤的药物组合物及其应用
CN106188209A (zh) * 2016-07-05 2016-12-07 福州大学 一种兼具抗肿瘤和抗肿瘤转移活性的二甲双胍偶联物及其应用
WO2018091961A1 (en) * 2016-11-15 2018-05-24 Uniwersytet Lodzki New medical use of metformin and epothilone a in treatment of neoplastic diseases
CN110891574A (zh) * 2017-07-05 2020-03-17 埃里克·雅宁 用于预防和/或治疗肝细胞癌的美格列明
CN110891574B (zh) * 2017-07-05 2023-03-21 埃里克尔公司 用于预防和/或治疗肝细胞癌的美格列明
CN109223742A (zh) * 2018-10-09 2019-01-18 西安交通大学医学院第附属医院 联合辛伐他汀与二甲双胍的用途
CN109939241A (zh) * 2019-03-27 2019-06-28 宁夏医科大学 一种双前药共组装纳米靶向给药系统及其制备方法
CN109939241B (zh) * 2019-03-27 2022-02-15 宁夏医科大学 一种双前药共组装纳米靶向给药系统及其制备方法
CN110151743A (zh) * 2019-07-04 2019-08-23 江苏安唐医药科技有限公司 一种药物组合物及其在制备抑癌药物中的应用
CN112574071A (zh) * 2019-09-30 2021-03-30 复旦大学 一种双胍基连接脂肪碳链的两亲性二甲双胍衍生物及其制药用途
CN112791182A (zh) * 2020-12-31 2021-05-14 中山大学 二甲双胍和抗pd-1抗体药物组合物在制备肝癌药物中的应用
CN113143898A (zh) * 2021-04-14 2021-07-23 浙江工业大学 二甲双胍在制备预防砷致肺癌发生药物中的应用
CN113908280A (zh) * 2021-09-14 2022-01-11 深圳先进技术研究院 Trim11抑制剂和二甲双胍的组合物在治疗肝细胞癌中的应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103371991A (zh) 二甲双胍在制备预防或治疗肝细胞癌药物中的应用
CN106822905B (zh) 含Survivin抑制剂和IRE1抑制剂的药物及用途
CN105111271A (zh) 一种熊果酸-阿司匹林偶联物及其在制备预防肿瘤转移中药物的应用
CN108434455A (zh) Mthfd2特异性抑制剂在防治结直肠癌方面的应用
CN102719432A (zh) 特异性抑制肿瘤凋亡抑制基因Bcl2的双链不对称小核酸干扰分子asiRNA及其应用
CN104398526B (zh) 雷公藤甲素和雷公藤红素在制备抗肿瘤药物中的应用
CN102552908A (zh) 含青蒿素及青蒿素类衍生物和Bcl-2抑制剂的药物组合物及其应用
CN102688493B (zh) 含有白藜芦醇及白藜芦醇类衍生物和Bc1-2抑制剂的药物组合物及其应用
CN101062041B (zh) 葫芦素新的医药用途
CN102688489B (zh) 含有雷公藤甲素及雷公藤甲素类衍生物和Bcl-2抑制剂的药物组合物及其应用
CN107569485A (zh) 一种治疗braf抑制剂耐药型黑色素瘤的复方制剂
CN102688228B (zh) 含有芹菜素及芹菜素类衍生物和冬凌草甲素及冬凌草甲素类衍生物的药物组合物及其应用
CN106955292B (zh) 一种治疗食管癌的药物组合物及用途
CN109045028A (zh) P53转录抑制剂PFTαHBr在制备抗端粒酶阴性p53阳性肿瘤药物中的应用
CN106727603A (zh) 去甲泽拉木醛在制备治疗胰腺癌的药物中的应用
CN103599111B (zh) 用于治疗胰腺癌的组合药物
CN102824339A (zh) 丁酸钠在制备缺氧性肺动脉高压防治药物中的应用
CN103494822B (zh) 一种联合他汀类降胆固醇药与噻嗪类抗高血压药物的复方抗癌药物
CN106075454A (zh) 一种抗肿瘤药物制剂组合
CN102688490B (zh) 含有吴茱萸碱及吴茱萸碱类衍生物和Bc1-2抑制剂的药物组合物及其应用
CN109432084A (zh) 一种抗癌组合物及其在药物制备中的应用
CN110354121A (zh) 环吡酮胺在制备治疗肿瘤药物中的应用和包含环吡酮胺的组合药物及用途
CN110420219A (zh) 一种用于抗肿瘤的联合用药物及其应用
CN104173354B (zh) 可治疗癌症的药学组合物
CN101797242A (zh) 半胱胺在制备治疗癌症的药物中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C12 Rejection of a patent application after its publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20131030