CN103599111B - 用于治疗胰腺癌的组合药物 - Google Patents
用于治疗胰腺癌的组合药物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103599111B CN103599111B CN201310548889.2A CN201310548889A CN103599111B CN 103599111 B CN103599111 B CN 103599111B CN 201310548889 A CN201310548889 A CN 201310548889A CN 103599111 B CN103599111 B CN 103599111B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- withaferin
- oxaliplatin
- pancreatic cancer
- purchased
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 85
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 85
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 title abstract description 54
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 title abstract description 38
- 229940000425 combination drug Drugs 0.000 title 1
- DBRXOUCRJQVYJQ-CKNDUULBSA-N withaferin A Chemical compound C([C@@H]1[C@H]([C@@H]2[C@]3(CC[C@@H]4[C@@]5(C)C(=O)C=C[C@H](O)[C@@]65O[C@@H]6C[C@H]4[C@@H]3CC2)C)C)C(C)=C(CO)C(=O)O1 DBRXOUCRJQVYJQ-CKNDUULBSA-N 0.000 claims abstract description 84
- YCGBUPXEBUFYFV-UHFFFAOYSA-N withaferin A Natural products CC(C1CC(=C(CO)C(=O)O1)C)C2CCC3C4CC5OC56C(O)C=CC(O)C6(C)C4CCC23C YCGBUPXEBUFYFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 84
- DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L oxaliplatin Chemical compound O1C(=O)C(=O)O[Pt]11N[C@@H]2CCCC[C@H]2N1 DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L 0.000 claims abstract description 64
- 229960001756 oxaliplatin Drugs 0.000 claims abstract description 63
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 10
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims description 10
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 claims description 9
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 claims description 9
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 claims description 9
- 229960002737 fructose Drugs 0.000 claims description 9
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 7
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 7
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 7
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 7
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 7
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 claims description 7
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 6
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 claims description 5
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 claims description 5
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 claims description 5
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 4
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 3
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 2
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 2
- MBBZMMPHUWSWHV-BDVNFPICSA-N N-methylglucamine Chemical compound CNC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBBZMMPHUWSWHV-BDVNFPICSA-N 0.000 claims description 2
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 claims description 2
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 2
- 229960001855 mannitol Drugs 0.000 claims description 2
- 229960003194 meglumine Drugs 0.000 claims description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 2
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 claims description 2
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 claims description 2
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 claims description 2
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 claims description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 131
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 37
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 31
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 abstract description 13
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 abstract description 13
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 abstract description 6
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 abstract description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 abstract description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 abstract 1
- 230000002946 anti-pancreatic effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 abstract 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 abstract 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 abstract 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 25
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 21
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 17
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 16
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 16
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 16
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 16
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 14
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 14
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 12
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 11
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 10
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 8
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 7
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 7
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 6
- 102100023085 Serine/threonine-protein kinase mTOR Human genes 0.000 description 6
- 108010065917 TOR Serine-Threonine Kinases Proteins 0.000 description 6
- 238000010609 cell counting kit-8 assay Methods 0.000 description 6
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 6
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 6
- 102000010400 1-phosphatidylinositol-3-kinase activity proteins Human genes 0.000 description 5
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 5
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 5
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 description 5
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108010014186 ras Proteins Proteins 0.000 description 5
- 108010087230 Sincalide Proteins 0.000 description 4
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 4
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 206010025482 malaise Diseases 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010064218 Poly (ADP-Ribose) Polymerase-1 Proteins 0.000 description 3
- 102100023712 Poly [ADP-ribose] polymerase 1 Human genes 0.000 description 3
- 238000001378 electrochemiluminescence detection Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000003952 Caspase 3 Human genes 0.000 description 2
- 108090000397 Caspase 3 Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710088172 HTH-type transcriptional regulator RipA Proteins 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 2
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 2
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 2
- 230000002079 cooperative effect Effects 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 239000000890 drug combination Substances 0.000 description 2
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 2
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 2
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 2
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 2
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010055113 Breast cancer metastatic Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108010040476 FITC-annexin A5 Proteins 0.000 description 1
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000600756 Homo sapiens 3-phosphoinositide-dependent protein kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001117146 Homo sapiens [Pyruvate dehydrogenase (acetyl-transferring)] kinase isozyme 1, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 102000019149 MAP kinase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040008097 MAP kinase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 229920009405 Polyvinylidenefluoride (PVDF) Film Polymers 0.000 description 1
- 108091008611 Protein Kinase B Proteins 0.000 description 1
- 108010029869 Proto-Oncogene Proteins c-raf Proteins 0.000 description 1
- 102100033810 RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Human genes 0.000 description 1
- 102100033479 RAF proto-oncogene serine/threonine-protein kinase Human genes 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000208292 Solanaceae Species 0.000 description 1
- 244000061458 Solanum melongena Species 0.000 description 1
- 235000002597 Solanum melongena Nutrition 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 102100024148 [Pyruvate dehydrogenase (acetyl-transferring)] kinase isozyme 1, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000012930 cell culture fluid Substances 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229940120655 eloxatin Drugs 0.000 description 1
- 208000021045 exocrine pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 230000004987 nonapoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- QOFFJEBXNKRSPX-ZDUSSCGKSA-N pemetrexed Chemical compound C1=N[C]2NC(N)=NC(=O)C2=C1CCC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 QOFFJEBXNKRSPX-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 229960005079 pemetrexed Drugs 0.000 description 1
- 210000000578 peripheral nerve Anatomy 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000001855 preneoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000011470 radical surgery Methods 0.000 description 1
- 108700042226 ras Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 201000010174 renal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000009182 swimming Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011285 therapeutic regimen Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 229940096998 ursolic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
本发明公开了一种用于治疗胰腺癌的组合药物制剂,该组合药物制剂是将醉茄素A和奥沙利铂使用,治疗胰腺癌。本发明中醉茄素A与奥沙利铂均可通过ROS介导的氧化应激损伤来杀伤肿瘤细胞,组合用药后可将两种不同来源的ROS联合并发挥协同效应,其杀伤胰腺癌细胞的效果显著强于单一用药。组合药物在不对正常细胞产生明显毒性效应的浓度下,对胰腺癌细胞的生长抑制作用较胰腺癌临床一线用药吉西他滨更为显著,表明该组合药物能够更好地应用在胰腺癌的治疗以及制备抗胰腺癌的药物中。
Description
技术领域
本发明涉及治疗胰腺癌领域,具体地指一种用于治疗胰腺癌的组合药物。
背景技术
胰腺癌是一种恶性程度高,预后极差的消化道肿瘤。近年来,其发病率在全球范围内逐年升高,在美国,胰腺癌发病率位居恶性肿瘤第十位,死亡率为第四位;在中国,随着国民经济和国人生活水平的不断提高,胰腺癌在恶性肿瘤中的发病率已由第20位上升到第8位,死亡率居恶性肿瘤第6位。因此,胰腺癌已经成为严重威胁人类健康的疾病之一。
由于胰腺的特殊解剖部位,使胰腺癌的早期症状隐匿,多数患者只表现出一些如恶心呕吐、食欲下降等消化道症状,极易被误诊;而只有在晚期肿瘤压迫胰腺周围神经,引起剧烈腹疼时才发现病情,此时已失去最佳治疗时机;又由于胰腺癌本身的生物学特点,其恶性程度高,进展快,转移早,且目前尚缺乏有效的系统治疗手段,使得胰腺癌预后较差。胰腺癌在初次确诊后,1年内死亡率达80%,3年内为95%,转移患者的中位生存期为3~6个月,局部晚期为6~10个月,故其也被成为“癌症之王”。
目前,胰腺癌的治疗以手术为主,根治性手术切除是现阶段唯一可以治愈胰腺癌的方法。然而由于大多数患者就诊时已属中晚期,失去了手术切除的机会,故非手术治疗(如化疗)在胰腺癌的综合治疗中有着十分重要的地位。但现有的临床化疗方案对胰腺癌的治疗效果并未达到令人满意的程度,以吉西他滨(Gemcitabine)为代表的一线化疗药物的治疗应答率不足30%,仅能延长患者4~6个月的中位生存期。
因此,面对目前胰腺癌的治疗现状,以及人群中日益增加的发病率,迫切需要开发出一种更有效的新型抗肿瘤剂来治疗胰腺癌。但是用醉茄素A(Withaferin A)与奥沙利铂组合使用是否显示抗肿瘤效果尚无任何报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题就是提供了一种用于治疗胰腺癌的组合药物制剂,将醉茄素A(Withaferin A)与奥沙利铂组合使用时,可通过阻滞Ras/Raf/MAPK、PI3K/AKT/mTOR信号通路来实现对胰腺癌细胞的生长抑制作用,同时该组合药物还可引起细胞内活性氧(ROS)水平显著上升,并通过氧化应激损伤诱导胰腺癌细胞的凋亡。上述效应均较单一使用醉茄素A或奥沙利铂时显著增强
为解决上述技术问题,本发明提供了一种用于治疗胰腺癌的组合药物制剂,由有效量的奥沙利铂、醉茄素A和药学上可接受的辅料组成。
进一步地,药物制剂由1份醉茄素A、1~50份奥沙利铂和6~8份辅料组成。
再进一步地,药物制剂由1份醉茄素A、1~30份奥沙利铂和6~8份辅料组成。
再进一步地,所述辅料为维生素C、山梨醇、甘露醇、木糖醇、果糖、氨基酸、葡甲胺、糊精、硬脂酸镁和蔗糖中任意一种或两种。
再进一步地,所述药物制剂为注射制剂或口服制剂。
再进一步地,所述口服制剂为片剂、胶囊剂或颗粒剂。
再进一步地,所述注射制剂由1份醉茄素A、10份奥沙利铂、6份果糖和2份维生素C组成。
再进一步地,所述片剂由1份醉茄素A、8份奥沙利铂和6份维生素C组成。
再进一步地,所述片剂由1份醉茄素A、30份奥沙利铂、1份糊精和6份果糖组成。
再进一步地,所述注射制剂为冻干粉针剂。
本发明的理论基础:
醉茄素A是茄科植物醉茄的主要活性成分。化学名称为(4β,5β,6β,22R)-5,6-环氧-4,22,27-三羟基-1-氧代-麦角甾-2,24-二烯-26-乌苏酸δ-内酯,英文名为Withaferin A,分子式C28H38O6,分子量470.58,白色棱柱结晶(丙酮-石油醚),熔点252~253°,沸点680.69℃,易溶于甲醇、二甲基亚砜(DMSO),见光缓慢分解,密度1.28g/cm3,其结构式如下:
现代药理和临床研究证明,醉茄素A具有调节免疫、缓解焦虑及保护心血管等作用。同时还发现其对多种人类肿瘤细胞具有生长抑制作用,但对正常组织和细胞却没有明显的损伤作用,副作用小,具有良好的应用前景。关于产生这种差异的机制尚未完全明确,部分原因可能与醉茄素A通过氧化应激损伤机制来杀伤细胞,而正常细胞较肿瘤细胞更能耐受氧化应激损伤。
奥沙利铂(Oxaliplatin)属于新的铂类抗癌药,其在结、直肠癌、卵巢癌、肾癌、胰腺癌、非小细胞肺癌、乳腺癌中的适用已被许可或开发。另外,通过将奥沙利铂与各种药剂组合来对抗各种癌症的组合疗法已被许可或开发。其中包括:通过与5-氟尿嘧啶组合使用来治疗转移性结、直肠癌或转移性乳腺癌、通过与吉西他滨组合使用来治疗局部晚期胰腺癌、通过与培美曲塞组合使用来治疗进展期非小细胞肺癌、通过与多西紫杉醇组合使用来治疗复发性卵巢癌等
本发明的有益效果在于:
醉茄素A与奥沙利铂均可通过ROS介导的氧化应激损伤来杀伤肿瘤细胞,但二者产生ROS的来源和机制不同,组合用药后可将两种不同来源的ROS联合并发挥协同效应,其杀伤胰腺癌细胞的效果显著强于单一用药。而正常细胞一般较肿瘤细胞更能耐受ROS介导的应激损伤,因此,在相同剂量的药物浓度下,组合用药对人体正常细胞的毒性作用较肿瘤细胞小;此外,原癌基因K-ras和Akt分别调控的Ras/Raf/MAPK和PI3K/Akt/mTOR信号通路,被认为是维持胰腺癌恶性生物学行为的重要分子通路。本发明通过免疫印迹检测发现,单用醉茄素A或奥沙利铂均只能部分抑制Ras/Raf/MAPK和PI3K/Akt/mTOR信号通路活性,而组合用药可显著抑制上述通路活性,进而抑制胰腺癌细胞的生长。同时,上述组合药物在不对正常细胞产生明显毒性效应的浓度下,对胰腺癌细胞的生长抑制作用较胰腺癌临床一线用药吉西他滨更为显著,表明该组合药物能够更好地应用在胰腺癌的治疗以及制备抗胰腺癌的药物中。
附图说明
图1为不同药物处理方式对人胰腺癌细胞和人正常细胞存活率影响的图;其中,纵坐标表示细胞存活率,单位为%;横坐标表示药物浓度,单位为μg/mL。
图2、图3、图4及图5为通过Compusyn软件计算醉茄素A和奥沙利铂联合用药对人胰腺癌细胞和人正常细胞的药物联合指数CI的图。
图6为不同药物浓度的吉西他滨对人胰腺癌细胞以及人正常细胞存活率影响的图;其中,纵坐标表示细胞存活率,单位为%;横坐标表示药物浓度,单位为μg/mL。
图7为不同药物处理方式对人胰腺癌细胞集落形成率影响的图。
图8为不同药物处理方式对人胰腺癌细胞形态学影响的图。
图9为不同药物处理方式对人胰腺癌细胞凋亡率影响的图。
图10为不同药物处理方式对人胰腺癌细胞内活性氧水平影响的图。
图11为不同药物处理方式对人胰腺癌细胞蛋白表达影响的图。
图12为不同药物处理方式对人胰腺癌细胞裸鼠皮下移植瘤成瘤能力影响的图。
具体实施方式
为了更好地解释本发明,以下结合具体实施例进一步阐明本发明的主要内容,但本发明的内容不仅仅局限于以下实施例。
实施例1醉茄素A联合奥沙利铂的体外细胞毒性检测实验
1、材料
实验药物配置:
本实施例中醉茄素A购自美国Santa Cruz公司,用DMSO配制成浓度为2mg/mL的浓缩液,置于-20℃冰箱中保存,实验时根据需要用培养液将其稀释成不同浓度的工作液;
奥沙利铂可通过公知的方法制备,例如,可以按照美国专利第5338874号(US5338874)及美国专利第5420319号(US5420319)中记载的方法制备。另外,奥沙利铂还可以通过从Sanofi Aventis公司购买Eloxatin(注册商标)来获得。
本实施例中奥沙利铂购自Sanofi Aventis公司。
其他试剂:高糖DMEM、RPMI-1640、胎牛血清(Fatal BovineSerum,FBS)均购于美国Gibco公司;细胞培养瓶、培养板均购自于美国Corning公司;CCK-8(cell counting kit-8)检测试剂盒购自日本Dojindo公司;
2、细胞及细胞培养
人胰腺癌细胞株Panc-1、MiaPaCa-2和Capan-2购自美国模式培养集存库(ATCC);正常人肝细胞L02和正常人肺成纤维细胞HLF1购自中科院上海细胞库。HLF1细胞培养条件:RPMI-1640,10%胎牛血清,37℃,5%CO2;Panc-1、MiaPaCa-2、Capan-2和L02细胞培养条件:高糖DMEM,10%胎牛血清,37℃,5.0%CO2。
3、实验步骤
取对数生长期的人胰腺癌细胞、正常人肝细胞L02和正常人肺成纤维细胞HLF1,调整细胞密度为2.0×104个/mL接种于96孔培养板中,每孔100μL,置于培养箱中培养,待细胞完全贴壁后吸去培养液,分别加入200μL含有不同浓度梯度醉茄素A、奥沙利铂以及醉茄素A+奥沙利铂联合使用的培养液,同时设立空白对照组及含有同等稀释度的DMSO作为阴性对照组,每组设5个复孔。药物作用24小时后,每孔加入10μL CCK-8,继续培养4h,于酶标仪波长450nm处读取吸光度(D)值。按公式计算细胞存活率和抑制率。细胞存活率%(Cell viability%)=(药物处理组平均D值/细胞对照孔平均D值)×100%。细胞抑制率%(inhibitory rate%)=(1-药物处理组平均D值/细胞对照孔平均D值)×100%。细胞的半数抑制浓度(half inhibitionconcentration,IC50)按中效方程计算,药物联合指数(CombinationIndex,CI)采用Compusyn软件计算。
4、实验结果
图1中A-J显示不同药物处理方式对细胞存活率的影响。由图1中A-F可知,醉茄素A和奥沙利铂对胰腺癌细胞Panc-1、MiaPaCa-2和Capan-2均具有一定的生长抑制作用,且有浓度依赖性。作用24小时后,奥沙利铂对Panc-1、MiaPaCa-2和Capan-2细胞的IC50分别为33.93、22.70和16.10μg/mL,而当奥沙利铂联合0.5μg/mL的醉茄素A后,其对三种胰腺癌细胞的IC50显著减少,分别为5.62、2.34和3.04μg/mL;同样,醉茄素A作用24小时后对Panc-1、MiaPaCa-2和Capan-2细胞的IC50分别为8.13、1.53和1.69μg/mL,而当醉茄素A联合5μg/mL的奥沙利铂后,其对三种胰腺癌细胞的IC50分别为0.40、0.22和0.25μg/mL,均显著低于单用醉茄素A。
由图1中G-J可知,奥沙利铂作用24小时后对L02和HLF1细胞的IC50分别为57.04和117.10μg/mL,当奥沙利铂联合0.5μg/mL的醉茄素A后,其对L02和HLF1细胞的IC50分别为16.40和26.77μg/mL;醉茄素A作用24小时后对L02和HK2细胞的IC50分别为17.91和19.16μg/mL,而当醉茄素A联合5μg/mL的奥沙利铂后,其对L02和HLF1细胞的IC50分别为2.16和3.79μg/mL。
图1中K-M显示,当醉茄素A与奥沙利铂药物浓度比固定为1:10联合作用24小时后,奥沙利铂对Panc-1、MiaPaCa-2和Capan-2细胞的IC50分别为4.70、5.05和4.75μg/mL,醉茄素A对Panc-1、MiaPaCa-2和Capan-2细胞的IC50分别为0.47、0.51和0.47μg/mL,均显著低于单独用药组。
图2A-E、图3、图4A-C及图5为通过Compusyn软件分别计算Panc-1、MiaPaCa-2和Capan-2的药物联合指数CI,CI<1提示奥沙利铂与醉茄素A联合应用可产生协同效应。
实施例2吉西他滨的体外细胞毒性检测实验
1、材料
实验药物:吉西他滨购自美国Sigma公司,用DMSO配制成浓度为50mg/mL的浓缩液,置于-20℃冰箱中保存,实验时根据需要用培养液将其稀释成不同浓度的工作液;
其他试剂:高糖DMEM、RPMI-1640、胎牛血清(Fatal BovineSerum,FBS)均购于美国Gibco公司;细胞培养瓶、培养板均购自于美国Corning公司;CCK-8(cell counting kit-8)检测试剂盒购自日本Dojindo公司;
2、细胞及细胞培养
人胰腺癌细胞株Panc-1、MiaPaCa-2和Capan-2购自美国模式培养集存库(ATCC);正常人肝细胞L02和正常人肺成纤维细胞HLF1购自中科院上海细胞库。HLF1细胞培养条件:RPMI-1640,10%胎牛血清,37℃,5%CO2;Panc-1、MiaPaCa-2、Capan-2和L02细胞培养条件:高糖DMEM,10%胎牛血清,37℃,5.0%CO2。
3、实验步骤
取对数生长期的人胰腺癌细胞、正常人肝细胞L02和正常人肺成纤维细胞HLF1,调整细胞密度为2.0×104个/mL接种于96孔培养板中,每孔100μL,置于培养箱中培养,待细胞完全贴壁后吸去培养液,分别加入200μL含有不同浓度梯度(0.5、1、5、10、50μg/mL)吉西他滨的培养液,同时设立空白对照组及含有同等稀释度的DMSO作为阴性对照组,每组设5个复孔。药物作用24小时后,每孔加入10μL CCK-8,继续培养4h,于酶标仪波长450nm处读取吸光度(D)值。按公式计算细胞存活率和抑制率。细胞存活率%(Cell viability%)=(药物处理组平均D值/细胞对照孔平均D值)×100%。
4、实验结果
图6显示不同浓度吉西他滨对细胞存活率的影响。由图6可知,在50.0μg/mL的高浓度吉西他滨作用时,其对胰腺癌细胞株的抑制率仅在15~45%之间,同时对正常人肝细胞L02和正常人肺成纤维细胞HLF1的抑制率分别达到25.8±3.0%和41.8±5.9%。结合图1结果,当使用0.5μg/mL醉茄素A联合1.0μg/mL奥沙利铂对胰腺癌细胞株的抑制率就可达到20%以上,随着奥沙利铂浓度从5.0μg/mL增加到50.0μg/mL,组合药物对胰腺癌细胞的抑制率介于45~95%之间,效果明显高于吉西他滨;同时,当使用0.5μg/mL醉茄素A联合1.0μ-5.0μg/mL奥沙利铂时,对正常人肝细胞L02和正常人肺成纤维细胞HLF1仅有轻微抑制作用,而只有当奥沙利铂在50.0μg/mL高浓度时,才对两种细胞有较明显的抑制作用。因此从上述实验可以看出,在较低浓度范围内,醉茄素A与奥沙利铂联合用药对胰腺癌细胞的生长抑制作用较吉西他滨效果更为显著,且对正常细胞的毒性作用更小。
实施例3集落形成实验检测药物对细胞生长的抑制率
1、材料
实验药物:醉茄素A购自美国Santa Cruz公司,用DMSO配制成浓度为2mg/mL的浓缩液,置于-20℃冰箱中保存;奥沙利铂购自Sanofi Aventis公司。
其他试剂:高糖DMEM、胎牛血清(Fatal Bovine Serum,FBS)均购于美国Gibco公司;细胞培养瓶、培养皿均购自于美国Corning公司;4%多聚甲醛和结晶紫均购自北京鼎国昌盛生物技术公司。
2、细胞及细胞培养
人胰腺癌细胞株Panc-1、MiaPaCa-2和Capan-2购自美国模式培养集存库(ATCC)。细胞培养条件:高糖DMEM,10%胎牛血清,37℃,5.0%CO2。
3、实验步骤
取对数生长期的人胰腺癌Panc-1、MiaPaCa-2和Capan-2细胞接种于6cm培养皿中,每个小皿接种约1000个细胞,置于培养箱中培养,待细胞完全贴壁后吸去培养液,分别加入3mL含有1μg/mL醉茄素A、10μg/mL奥沙利铂以及1μg/mL醉茄素A+10μg/mL奥沙利铂的培养液,同时设立含有同等稀释度的DMSO作为阴性对照组。作用24小时后更换新鲜的培养液,继续培养10天,随后用4%多聚甲醛溶液固定,结晶紫染色并计数集落个数(以大于50个细胞为一个集落单位)。集落抑制率=(1-药物处理组集落形成率/阴性对照组集落形成率)×100%
4、实验结果
图7结果显示,相比于阴性对照组,10μg/mL奥沙利铂对三种胰腺癌细胞Panc-1、MiaPaCa-2和Capan-2的集落抑制率分别为26.47±4.24%、32.12±3.54%和31.95±1.41%,1μg/mL醉茄素A对三种细胞集落抑制率分别为28.86±1.62%、41.26±2.12%和34.94±3.54%,而10μg/mL奥沙利铂与1μg/mL醉茄素A联合使用对三种细胞集落抑制率分别为72.76±4.95%、77.85±2.83%和83.63±1.41%(图7A-C)。提示醉茄素A与奥沙利铂联合用药对胰腺癌细胞的增殖抑制作用显著强于单一用药。
实施例4醉茄素A联合奥沙利铂对胰腺癌细胞形态学影响
1、材料
实验药物:醉茄素A购自美国Santa Cruz公司,用DMSO配制成浓度为2mg/mL的浓缩液,置于-20℃冰箱中保存;奥沙利铂购自Sanofi Aventis公司。
其他试剂:高糖DMEM、胎牛血清(Fatal Bovine Serum,FBS)均购于美国Gibco公司;细胞培养瓶、培养板均购自于美国Corning公司。
2、细胞及细胞培养
人胰腺癌细胞株Panc-1、MiaPaCa-2和Capan-2购自美国模式培养集存库(ATCC)。细胞培养条件:高糖DMEM,10%胎牛血清,37℃,5.0%CO2。
3、实验步骤
取对数生长期的人胰腺癌Panc-1、MiaPaCa-2和Capan-2细胞,调整细胞密度为2.0×105个/mL接种于12孔培养板中,每孔2ml,置于培养箱中培养,待细胞完全贴壁后吸去培养液,分别加入2ml含有1μg/mL醉茄素A、10μg/mL奥沙利铂以及1μg/mL醉茄素A+10μg/mL奥沙利铂的培养液,同时设立含有同等稀释度的DMSO作为阴性对照组。作用24小时后将各组细胞置于倒置普通显微镜下观察并拍照。
4、实验结果
图8结果显示,醉茄素A与奥沙利铂的组合用药可引胰腺癌Panc-1、MiaPaCa-2和Capan-2细胞大部分出现体积变小、皱缩变圆、细胞间的连接消失等凋亡形态学改变,这种效应较醉茄素A或奥沙利铂单独用药组显著增强(图8A-C)。
实施例5醉茄素A联合奥沙利铂对胰腺癌细胞凋亡率的影响
1、材料
实验药物:醉茄素A购自美国Santa Cruz公司,用DMSO配制成浓度为2mg/mL的浓缩液,置于-20℃冰箱中保存;奥沙利铂购自Sanofi Aventis公司。
其他试剂:高糖DMEM、胎牛血清(Fatal Bovine Serum,FBS)均购于美国Gibco公司;细胞培养瓶、培养皿均购自于美国Corning公司;AnnexinV/FITC凋亡检测试剂盒购自南京凯基生物科技发展有限公司。
2、细胞及细胞培养
人胰腺癌细胞株Panc-1、MiaPaCa-2和Capan-2购自美国模式培养集存库(ATCC)。细胞培养条件:高糖DMEM,10%胎牛血清,37℃,5.0%CO2。
3、实验步骤
取对数生长期的人胰腺癌Panc-1、MiaPaCa-2和Capan-2细胞,接种于12孔板,每孔2×105个细胞,置于细胞培养箱中培养过夜。待细胞完全贴壁后吸去培养液,分别加入2mL含有1μg/mL醉茄素A、10μg/mL奥沙利铂以及1μg/mL醉茄素A+10μg/mL奥沙利铂的培养液,同时设立含有同等稀释度的DMSO作为阴性对照组,继续培养24小时,消化收集细胞,PBS洗涤细胞2次(2000rpm,室温离心5min,r=8cm),每管收集约1×105个细胞;加入500μL的Binding Buffer重悬细胞后,再分别加入5μL Annexin V-FITC和5μL Propidiumiodide染料混匀,室温避光反应15min,于1h内上流式仪检测细胞凋亡情况。采用CellQuest软件分析实验结果。正常的活细胞不被AnnexinV–FITC和PI染色;早期凋亡的细胞仅被AnnexinV–FITC染色;坏死细胞和晚期凋亡的细胞可以被AnnexinV–FITC和PI同时染色。我们视AnnexinV–FITC阳性细胞为凋亡细胞。
4、实验结果
图9中A-C结果显示,胰腺癌Panc-1、MiaPaCa-2和Capan-2细胞未加药的空白对照组凋亡率分别为4.82±1.35%、12.21±2.56%和9.73±1.54%;10μg/mL奥沙利铂作用24小时后三种细胞凋亡率分别为22.37±3.67%、26.98±2.54%和20.53±2.27%;1μg/mL醉茄素A作用24小时后三种细胞凋亡率分别为24.89±2.44%、42.03±6.07%和38.74±4.29%;而10μg/mL奥沙利铂与1μg/mL醉茄素A联合作用24小时后三种细胞凋亡率分别为76.10±5.38%、83.32±6.37%和84.03±8.06%。可见与之前凋亡形态学结果相一致,醉茄素A与奥沙利铂联合用药对胰腺癌细胞的促凋亡作用显著强于单一用药。
实施例6醉茄素A联合奥沙利铂对胰腺癌细胞活性氧(ROS)水平的影响
1、材料
实验药物:醉茄素A购自美国Santa Cruz公司,用DMSO配制成浓度为2mg/mL的浓缩液,置于-20℃冰箱中保存;奥沙利铂购自Sanofi Aventis公司。
其他试剂:高糖DMEM、胎牛血清(Fatal Bovine Serum,FBS)均购于美国Gibco公司;细胞培养瓶、培养板均购自于美国Corning公司;活性氧(ROS)检测试剂盒购于上海碧云天生物技术研究所。
2、细胞及细胞培养
人胰腺癌细胞株Panc-1、MiaPaCa-2和Capan-2购自美国模式培养集存库(ATCC)。细胞培养条件:高糖DMEM,10%胎牛血清,37℃,5.0%CO2。
3、实验步骤
取对数生长期的人胰腺癌Panc-1、MiaPaCa-2和Capan-2细胞,接种于12孔板,每孔2×105个细胞,置于细胞培养箱中培养过夜。待细胞完全贴壁后吸去培养液,分别加入2ml含有1μg/mL醉茄素A、10μg/mL奥沙利铂以及1μg/mL醉茄素A+10μg/mL奥沙利铂的培养液,同时设立含有同等稀释度的DMSO作为阴性对照组,继续培养12小时。去除细胞培养液,加入浓度为10μmol/L的荧光探针DCFH-DA,37℃细胞培养箱内孵育20分钟。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA,消化收集细胞后上流式仪检测。
4、实验结果
图10中A-C结果显示,胰腺癌Panc-1、MiaPaCa-2和Capan-2细胞未加药的空白对照组ROS平均荧光强度(MFI)值分别为11.92±1.99、58.11±0.50和4.06±0.07;10μg/mL奥沙利铂作用12小时后三种细胞ROS平均荧光强度(MFI)值分别为19.58±4.85、67.37±2.43和16.46±1.31;1μg/mL醉茄素A作用12小时后三种细胞ROS平均荧光强度(MFI)值分别为28.31±5.18、86.46±2.29和25.24±0.95;而10μg/mL奥沙利铂与1μg/mL醉茄素A联合作用12小时后三种细胞ROS平均荧光强度(MFI)值分别为47.20±6.41、138.30±6.27和65.56±4.09。提示相较于醉茄素A或奥沙利铂单药作用而言,联合用药可显著提高胰腺癌细胞内ROS水平。
实施例7醉茄素A联合奥沙利铂对胰腺癌细胞相关蛋白的影响
1、材料
实验药物:醉茄素A购自美国Santa Cruz公司,用DMSO配制成浓度为2mg/mL的浓缩液,置于-20℃冰箱中保存;奥沙利铂购自Sanofi Aventis公司。
Western blot主要试剂:蛋白分子量Marker购于Fermentas公司;聚偏二氟乙烯(PVDF)膜购于美国Millipore公司;牛血清蛋白(BSA)购于北京鼎国昌盛生物科技有限公司;RIPA裂解液、BCA蛋白定量试剂盒购于上海碧云天生物技术研究所;蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂购于德国Roche公司;化学发光剂(ECL)购自美国Pierce公司;辣根过氧化物酶(HRP)标记二抗体购自武汉博士德生物工程有限公司司,所有一抗均购自于美国Cell Signaling公司。
其他试剂:高糖DMEM、胎牛血清(Fatal Bovine Serum,FBS)均购于美国Gibco公司;细胞培养瓶、培养皿均购自于美国Corning公司。
2、细胞及细胞培养
人胰腺癌细胞株Panc-1和MiaPaCa-2购自美国模式培养集存库(ATCC)。细胞培养条件:高糖DMEM,10%胎牛血清,37℃,5.0%CO2。
3、实验步骤
取对数生长期的人胰腺癌Panc-1和MiaPaCa-2细胞接种于6cm培养皿中,每个小皿接种约1×106个细胞,置于培养箱中培养,待细胞完全贴壁后吸去培养液,分别加入3ml含有1μg/mL醉茄素A、10μg/mL奥沙利铂以及1μg/mL醉茄素A+10μg/mL奥沙利铂的培养液,同时设立含有同等稀释度的DMSO作为阴性对照组。继续培养24和48小时后,胰酶消化、收集细胞,加入RIPA裂解液及蛋白酶抑制剂,冰上孵育30min,4℃12000×g,离心20min。取上清用BCA法测定蛋白浓度;以50ug蛋白/泳道上样,10%-12%的SDS-PAGE电泳分离,电泳结束后将PAGE胶上蛋白电转移至PVDF膜上;于5%的脱脂奶粉中室温振荡封闭2h;分别加入一抗(稀释比例均为1︰500)于杂交袋中4℃孵育过夜;次日用TBST洗膜15min/次×3次,室温孵育二抗(1∶3000)1h;TBST洗膜10min/次×3次;之后采用增强化学发光(ECL)法进行显色、曝光。采集图像后用图像分析软件Quantity One进行灰度分析。
4、实验结果
图11A结果显示,单用10μg/mL奥沙利铂或1μg/mL醉茄素A分别作用胰腺癌Panc-1和MiaPaCa-2细胞24小时和48小时,可引起细胞凋亡蛋白Caspase-3、PARP1的前体减少而活性剪切体(cleavedcaspase-3、cleaved PARP1)增多,提示细胞出现部分凋亡;而当两种药物联合作用后,可显著增加凋亡蛋白Caspase-3、PARP1的活性剪切体,同时前体进一步减少,提示细胞凋亡较单一用药组显著增加,这也与AnnexinV凋亡检测结果相一致。
图11B结果显示,醉茄素A与奥沙利铂组合用药相比于单一用药,可显著抑制胰腺癌Panc-1和MiaPaCa-2细胞Ras/Raf/MAPK和PI3K/Akt/mTOR信号通路关键蛋白c-Raf、ERK1/2、PDK1、AKT和mTOR的磷酸化活性形式。而Ras/Raf/MAPK和PI3K/Akt/mTOR信号通路被认为是维持胰腺癌恶性增殖和分化的关键通路之一,因此,联合用药可通过靶向干预关键蛋白位点来达到抑制胰腺癌细胞生长和增殖的目的。
实施例8醉茄素A联合奥沙利铂对胰腺癌细胞皮下移植瘤成瘤能力的影响
1、材料
实验药物:醉茄素A购自美国Santa Cruz公司,用DMSO配制成浓度为2mg/mL的浓缩液,置于-20℃冰箱中保存;奥沙利铂购自Sanofi Aventis公司。
动物及其他试剂:雌性BALB/C裸鼠(6-8W)购自北京华阜康公司。高糖DMEM、胎牛血清(Fatal Bovine Serum,FBS)均购于美国Gibco公司。
2、细胞及细胞培养
人胰腺癌细胞株Panc-1和MiaPaCa-2购自美国模式培养集存库(ATCC)。细胞培养条件:高糖DMEM,10%胎牛血清,37℃,5.0%CO2。
3、实验步骤
取对数生长期的细胞,经胰酶消化后,调整细胞浓度至2×107个/mL,取0.2mL接种于裸鼠右前肢背部皮下。当瘤子体积达到100mm3后,将裸鼠随机分成4组,每组5只。空白对照组给予含等量DMSO的生理盐水腹腔注射,醉茄素A组给予2mg/kg,1次/2天,腹腔注射;奥沙利铂组给予20mg/kg,2次/周,腹腔注射;联合组给予醉茄素A+奥沙利铂治疗方案。于最后一次给药结束后第二天处死裸鼠并取出瘤子称重。给药期间每3天测量肿瘤长、短径,根据公式:体积(V)=长径×短径×短径×0.5计算肿瘤大小。比肿瘤体积=给药后肿瘤体积/给药前肿瘤体积。
4、实验结果
图12中A-D结果显示,醉茄素A与奥沙利铂组合用药可显著抑制胰腺癌Panc-1和MiaPaCa-2细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,效果较单一给药显著增强。
实施例9注射制剂制备
取1份醉茄素A、10份奥沙利铂、6份果糖和2份维生素C,按常规方法制备成注射制剂。
实施例10片剂制备
取1份醉茄素A、8份奥沙利铂和6份维生素C,按常规方法制备成片剂。
实施例11片剂制备
取1份醉茄素A、30份奥沙利铂、1份糊精和6份果糖,按常规方法制备成片剂。
实施例12胶囊剂制备
取1份醉茄素A、1份奥沙利铂、2份维生素C和6份果糖,按常规方法制备成胶囊剂。
实施例13颗粒剂制备
取1份醉茄素A、50份奥沙利铂、1份氨基酸和4份蔗糖,按常规方法制备成胶囊剂。
Claims (9)
1.一种用于治疗胰腺癌的组合药物制剂,其特征在于:所述药物制剂由1份醉茄素A、1~50份奥沙利铂和6~8份辅料组成。
2.根据权利要求1所述的组合药物制剂,其特征在于:药物制剂由1份醉茄素A、1~30份奥沙利铂和6~8份辅料组成。
3.根据权利要求1或2所述的组合药物制剂,其特征在于:所述辅料为维生素C、山梨醇、甘露醇、木糖醇、果糖、氨基酸、葡甲胺、糊精、硬脂酸镁和蔗糖中任意一种或两种。
4.根据权利要求1或2所述的组合药物制剂,其特征在于:所述药物制剂为注射制剂或口服制剂。
5.根据权利要求4所述的组合药物制剂,其特征在于:所述口服制剂为片剂、胶囊剂或颗粒剂。
6.根据权利要求4所述的组合药物制剂,其特征在于:所述注射制剂由1份醉茄素A、10份奥沙利铂、6份果糖和2份维生素C组成。
7.根据权利要求5所述的组合药物制剂,其特征在于:所述片剂由1份醉茄素A、8份奥沙利铂和6份维生素C组成。
8.根据权利要求5所述的组合药物制剂,其特征在于:所述片剂由1份醉茄素A、30份奥沙利铂、1份糊精和6份果糖组成。
9.根据权利按要求4所述的组合药物制剂,其特征在于:所述注射制剂为冻干粉针剂。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201310548889.2A CN103599111B (zh) | 2013-11-07 | 2013-11-07 | 用于治疗胰腺癌的组合药物 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201310548889.2A CN103599111B (zh) | 2013-11-07 | 2013-11-07 | 用于治疗胰腺癌的组合药物 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN103599111A CN103599111A (zh) | 2014-02-26 |
CN103599111B true CN103599111B (zh) | 2015-04-22 |
Family
ID=50117420
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201310548889.2A Active CN103599111B (zh) | 2013-11-07 | 2013-11-07 | 用于治疗胰腺癌的组合药物 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN103599111B (zh) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104523674B (zh) * | 2014-12-11 | 2017-10-24 | 广州市上为医药科技有限公司 | 一种以奥沙利铂为主药成分的注射用组合物 |
CN113304164B (zh) * | 2021-06-11 | 2022-04-08 | 朱峰 | 山萘苷在制备抗非小细胞肺癌药物中的用途 |
-
2013
- 2013-11-07 CN CN201310548889.2A patent/CN103599111B/zh active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN103599111A (zh) | 2014-02-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN103371991A (zh) | 二甲双胍在制备预防或治疗肝细胞癌药物中的应用 | |
CN106963769A (zh) | 含pi3k抑制剂和perk抑制剂的药物组合物及其应用 | |
CN104398526B (zh) | 雷公藤甲素和雷公藤红素在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
CN103599111B (zh) | 用于治疗胰腺癌的组合药物 | |
CN102688493B (zh) | 含有白藜芦醇及白藜芦醇类衍生物和Bc1-2抑制剂的药物组合物及其应用 | |
CN106822904B (zh) | 含akt抑制剂和ire1抑制剂的药物组合物及其应用 | |
CN103393638A (zh) | 芒柄花黄素在制备抗乳腺癌药物中的应用 | |
CN102688489B (zh) | 含有雷公藤甲素及雷公藤甲素类衍生物和Bcl-2抑制剂的药物组合物及其应用 | |
CN106974908A (zh) | 含有hdac抑制剂和ire1抑制剂的药物组合物及用途 | |
CN111658655A (zh) | 葫芦素b在制备铁死亡诱导剂及抗鼻咽癌药物中的应用 | |
CN111166754A (zh) | 隐丹参酮在制备防治恶病质骨骼肌萎缩药物中的应用 | |
CN107007594A (zh) | 维生素c和奥沙利铂联用在抗肿瘤中的作用 | |
CN106955292B (zh) | 一种治疗食管癌的药物组合物及用途 | |
CN109793727A (zh) | 一种有效抗恶性肿瘤的药物组合物及其应用 | |
CN102688228B (zh) | 含有芹菜素及芹菜素类衍生物和冬凌草甲素及冬凌草甲素类衍生物的药物组合物及其应用 | |
CN115212216A (zh) | 抗食管鳞癌的药物组合物 | |
CN107028935A (zh) | 汉黄芩素在制备治疗肾细胞癌药物中的应用 | |
CN106727603A (zh) | 去甲泽拉木醛在制备治疗胰腺癌的药物中的应用 | |
CN109172557B (zh) | Ppm-18通过激活细胞内活性氧诱导膀胱癌细胞凋亡的应用 | |
CN103169693A (zh) | 汉黄芩素衍生物在制备治疗肝癌的药物中的应用 | |
CN111920813A (zh) | 6-乙氧基血根碱在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
CN111632132A (zh) | 一种协同抑制肝癌索拉非尼耐药的药物组合物及其应用 | |
CN104491496B (zh) | 天麻素/天麻粉在制备抗肝纤维化药物中的应用 | |
CN105999245A (zh) | 含乌司他丁的药物组合物在制备治疗胆囊癌药物中的用途 | |
CN102210725B (zh) | 田基黄总黄酮用于制备治疗肝纤维化的药物的用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant |