CN111658655A - 葫芦素b在制备铁死亡诱导剂及抗鼻咽癌药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了葫芦素B在制备铁死亡诱导剂及抗鼻咽癌药物中的应用。本发明首次研究显示葫芦素B可诱导铁死亡的发生，以一种新型的促进细胞死亡的方式调控鼻咽癌细胞的死亡，进一步探究发现，葫芦素B在鼻咽癌细胞CNE1内能促使铁离子的累积，减少细胞内谷胱甘肽的含量，下调GPX4的表达，导致脂质过氧化物的增加，诱发细胞发生铁死亡。在体内外研究中，葫芦素B诱导CNE1细胞周期阻滞在G2/M期，抑制细胞的迁移和侵袭，此外，葫芦素B能显著抑制小鼠鼻咽癌肿瘤的生长，无明显毒副作用。本发明为鼻咽癌的治疗药物提供了一种新选择，即铁死亡诱导剂；同时也为铁死亡诱导剂及鼻咽癌的治疗提供了天然新型的药物来源即葫芦素B，高效、安全、无毒副作用。

Description

葫芦素B在制备铁死亡诱导剂及抗鼻咽癌药物中的应用

技术领域

本发明属于医药技术领域。更具体地，涉及葫芦素B在制备铁死亡诱导剂及抗鼻咽癌药物中的应用。

背景技术

鼻咽癌是发生于鼻咽腔顶部和侧壁的恶性肿瘤，我国高发恶性肿瘤之一，发病率为耳鼻咽喉恶性肿瘤之首。鼻咽癌主要发生于我国南方五省，即广东、广西、湖南、福建和江西，占当地头颈部恶性肿瘤的首位，同时东南亚国家也是高发区。目前对鼻咽癌的治疗没有特别有效的药物，放射治疗是鼻咽癌的首选治疗方法，但是对较高分化癌，病程较晚以及放疗后复发的患者，还需手术切除和化疗。

2012年Dixon报道了铁死亡(ferroptosis)为一种铁离子依赖性的非凋亡性细胞坏死。铁死亡是依赖铁离子及活性氧诱导脂质过氧化导致的调节性细胞坏死，其在形态学、生物学及基因水平上均明显不同于凋亡、坏死、自噬等其他形式的调节性细胞坏死，近年来已成为研究的热点。铁死亡的本质是细胞内脂质氧化物的代谢障碍，进而在铁离子的催化下异常代谢，产生大量脂质，破坏细胞内氧化还原平衡，攻击生物大分子，触发细胞的死亡。铁死亡与神经系统疾病、肿瘤、缺血再灌注损伤、肾损伤、动脉粥样硬化、糖尿病、心脏病等疾病密切相关。大量的研究报道表明铁死亡在肿瘤的发生发展过程中发挥着关键的负性调控作用。越来越多的证据表明诱导铁死亡可作为抗肿瘤的重要机制，因此，诱导肿瘤细胞发生铁死亡是一种新型的抗肿瘤治疗策略。铁死亡可由两类小分子物质诱导：一类是系统Xc^-抑制剂，如Erastin；另一类是GPx4抑制剂，如RSL3。专利CN110279697A提供了一种铁死亡诱导剂Erastin、RSL3在治疗或缓解过敏性气道炎症药物中应用，但是这些药物往往有明显的副作用，目前发现的天然产物可诱导铁死亡的主要有青蒿素(易仁鑫,王歆悦,王汉东.青蒿素及其衍生物通过铁死亡途径发挥抗肿瘤作用的研究进展[J].科学技术创新,2020(08):31-32.)和党参酮类衍生物，天然产物由于其具有药源丰富、副作用小、多环节整体性治疗等优势，更具实用价值。

葫芦素类化合物是一种四环三萜类化合物，普遍存在于玄参科、十字花科、杜英科、四数木科、秋海棠科等高等植物及一些大型真菌中，葫芦素类化合物的许多药理活性已被实验证明，如抗肿瘤、抗炎等。葫芦素B(Cucurbitacin B,CuB)是葫芦素衍生物中含量最丰富的一种，有研究报道葫芦素B可用于多种肿瘤治疗，与常规的化疗药物相比，具对骨髓抑制作用较小、肝脏损害低、免疫系统破坏力小，作为发展抗肿瘤药物具有重要的潜力，但尚未有其治疗鼻咽癌的相关研究，关于其主要作用机制更不清楚。故急需以传统中医理论和现代药理药效学为指导，研究开发新型的治疗鼻咽癌的药物。

发明内容

本发明旨在提供天然产物葫芦素B在制备铁死亡诱导剂以及抗鼻咽癌药物中的应用。为鼻咽癌的治疗提供一种高效、安全无毒副作用、天然新型的药物来源。

本发明的首要目的在于提供葫芦素B在制备铁死亡诱导剂中的应用。

本发明的另一目的在于提供葫芦素B在制备抗鼻咽癌药物中的应用。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明请求保护葫芦素B在制备铁死亡诱导剂中的应用。

本发明通过MTT法检测葫芦素B对鼻咽癌细胞CNE1的生长抑制作用，发现了葫芦素B在体外可显著抑制鼻咽癌细胞株的增殖，利用电镜观察葫芦素B诱导鼻咽癌细胞CNE1形态的变化，发现鼻咽癌细胞形态在葫芦素B作用下呈现出铁死亡特征。

本发明为了进一步验证葫芦素B具有诱导铁死亡的作用，在葫芦素B加药处理后，进行了细胞内铁离子含量的检测，结果发现葫芦素B在鼻咽癌细胞CNE1内能促使铁离子的累积；由于细胞中的谷胱甘肽主要发挥抗氧化作用，是细胞内抵抗过氧化压力的重要分子，谷胱甘肽的耗竭会导致脂质过氧化积累，到达一定程度可诱发铁死亡，本发明进一步探究表明葫芦素B可以减少细胞内谷胱甘肽的含量，促使鼻咽癌细胞CNE1内的脂质活性氧累积；GPX4的表达对铁死亡具有重要调节作用，正常生理条件下GPX4能降解小分子过氧化物和某些脂质过氧化物，抑制脂质过氧化，因此抑制GPX4的活性或降低GPX4的表达有利于促进铁死亡的发生，本发明采用western blot方法对GPX4的表达进行检测，发现葫芦素B可下调GPX4的表达量，进一步加剧了葫芦素B诱导的铁死亡进程，双重的促进铁死亡发生。为了进一步评价葫芦素B的体内抗肿瘤效果，首先在细胞内检测葫芦素B对细胞周期的影响，采用流式方法对细胞周期进行检测，结果表明葫芦素B在CNE1细胞中能诱导细胞周期阻滞在G2/M期；在进一步评价葫芦素B的体内抗肿瘤效果研究中，检测了葫芦素B对细胞迁移和侵袭的影响，结果表明葫芦素B可有效地抑制细胞的迁移和侵袭；为了评价葫芦素B在体内的抗肿瘤效果，构建了小鼠移植瘤模型，结果显示葫芦素B能显著抑制鼻咽癌肿瘤的生长，且没有明显毒副作用。

本发明经过了创造性的探究，结果表明葫芦素B可诱导铁死亡的发生，以一种新型的促进细胞死亡的方式调控鼻咽癌细胞的死亡，是一种有效的铁死亡诱导剂，可用于制备开发抗鼻咽癌药物。

因此，本发明还请求保护葫芦素B在制备抗鼻咽癌药物中的应用。

优选地，所述抗鼻咽癌包括抑制鼻咽癌细胞增殖、抑制鼻咽癌细胞迁移和/或侵袭。

优选地，所述抗鼻咽癌包括诱导鼻咽癌细胞周期阻滞在G2/M期。

优选地，所述抗鼻咽癌包括抑制或下调鼻咽癌细胞GPX4表达。

优选地，所述抗鼻咽癌包括增加鼻咽癌细胞内铁离子浓度。

优选地，所述抗鼻咽癌包括降低鼻咽癌细胞内谷胱甘肽含量。

优选地，所述抗鼻咽癌包括增加鼻咽癌细胞内脂质活性氧。

作为一种优选的实施例，所述鼻咽癌细胞为CNE1鼻咽癌细胞。

此外，本发明创造性地研究表明铁死亡诱导剂具有较好的抗鼻咽癌肿瘤的效果，因此本发明还请求保护铁死亡诱导剂在制备抗鼻咽癌药物中的应用。

本发明上述葫芦素B的分子式为C₃₂H₄₆O₈，分子量为558.71，可以通过本领域已知的各种方法从植物中分离提取制备得到，也可以直接从商业购买获得。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明首次探究发现了天然产物葫芦素B在鼻咽癌细胞中具有诱导铁死亡的作用，可作为高效的铁死亡诱导剂，且体内外均展示较好的抗鼻咽癌肿瘤的效果，本发明为鼻咽癌的治疗药物提供了一种新选择，即铁死亡诱导剂；同时也为铁死亡诱导剂及鼻咽癌的治疗提供了天然新型的药物来源即葫芦素B，高效、安全、无毒副作用。

附图说明

图1为MTT法检测葫芦素B对鼻咽癌细胞CNE1的生长作用结果。

图2为葫芦素B对鼻咽癌细胞CNE1形态影响实验结果。

图3为葫芦素B对鼻咽癌细胞CNE1中铁离子的水平影响实验结果。

图4为葫芦素B对鼻咽癌细胞CNE1中总谷胱甘肽的含量影响实验结果。

图5为葫芦素B对鼻咽癌细胞CNE1中脂质活性氧含量影响实验结果。

图6为葫芦素B对鼻咽癌细胞CNE1中GPX4的表达量影响实验结果。

图7为葫芦素B对鼻咽癌细胞CNE1周期的阻滞实验结果。

图8为葫芦素B对鼻咽癌细胞CNE1的迁移作用抑制实验结果。

图9为葫芦素B对鼻咽癌细胞CNE1的侵袭作用抑制实验结果。

图10为葫芦素B在小鼠体内对鼻咽癌移植瘤的生长抑制实验结果。

图11为葫芦素B对小鼠重要脏器的毒性实验结果。

具体实施方式

以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

由于天然的化学分子结构的多样性和生物相容性，天然产物一直是药物研究的重要来源。自上世纪八十年代以来，基于天然产物的药物研发占据了全部新药来源的50％以上，基于天然产物的抗肿瘤药物占抗肿瘤药物来源的65％。萜类化合物是生物界三大次生代谢产物之一，其结构特点是异戊二烯单位构成，碳原子数目均为5的倍数。三萜类在自然界分布广泛，菌类、蕨类、单子叶、双子叶植物、动物及海洋生物中均有分布，尤以双子叶植物中分布最多。主要分布于石竹科、五加科、豆科、七叶树科、远志科、桔梗科及玄参科。少数三萜类成分也存在于动物体，如羊毛脂醇，鲨烯。三萜类化合物的结构类型很多，多数三萜为四环三萜和五环三萜，少数为链状、单环、双环和三环三萜。近几十年还发现了许多由于氧化、环裂解、甲基转位、重排及降解等而产生的结构复杂的高度氧化的新骨架类型的三萜类化合物。它们或以游离状态存在，或与配基结合成糖苷，具有显著的生物活性，在动植物生命活动中具有非常重要的作用。天然产物葫芦素B是四环三萜类化合物，具有多重药理活性。

所用统计学处理方法：用SPSS 24.0统计软件进行统计分析。两组间计量数据比较采用独立样本t检验，三组(或三组以上)比较采用单因素ANOVA方差分析方法。结果表示为

当P<0.05时，差异显著，P<0.01表明差异极显著，两种均具有一定的统计意义。

葫芦素B结构式如下所示：

实施例1葫芦素B对鼻咽癌细胞增殖抑制作用

1、实验材料和仪器

(1)1640培养基、0.25％胰酶，Gibco胎牛血清；96孔板(美国corning公司)；多功能酶标仪(Synergy H1,BioTek,USA)；生物安全柜(Thermo Fisher Scientific,USA)，CO2细胞培养箱(Thermo Fisher Scientific,USA)。

(2)细胞株：CNE1(鼻咽癌细胞)，细胞培养于正常含10％胎牛血清的1640完全培养基中。

(3)溶液配制：MTT试剂，称取150mg MTT溶于150mL PBS中配制成浓度为5mg/mL的溶液，然后用0.22μm的滤膜过滤后分装，-20℃避光保存。

2、增殖抑制作用测试方法

收集对数期细胞，以每孔5000个细胞接种于96孔细胞培养板中，板边缘孔用无菌PBS填充，5％CO₂，37℃孵育24小时。加入1-390nM的葫芦素B，继续孵育48小时。每个药物浓度做3个复孔。对照组加相应体积的DMSO。用无菌PBS配置5mg/mL MTT。按照每孔加20μLMTT，即MTT终浓度为0.5％。继续孵育4小时。小心吸去孔内培养液，每孔加入150μL DMSO，并置于摇床震荡5分钟，使结晶物充分溶解。在酶标仪λ490nm处测量各孔的吸光值。根据吸光度值用一下公式算出细胞生长抑制率：抑制率％＝(1-(A加药-A空白)/(Acontrol-A空白))*100％(注：A加药，A空白，Acontrol分别代表加药孔，空白孔，对照孔的吸光度值。

3、实验结果

实验结果如图1所示，从图1中可以看到葫芦素B对鼻咽癌细胞株CNE1的增殖抑制的半数抑制浓度(IC₅₀)为16nM，展示出优秀的抗肿瘤活性。

实施例2：葫芦素B诱导鼻咽癌细胞CNE1细胞形态呈现铁死亡特征

1、电镜观察细胞形态

收集对数期细胞，接种100万个细胞接种于60mm的孵育24小时。加入葫芦素B(50nM)，继续培养24小时。收集细胞，用2.5％戊二醛固定2小时，然后1％锇酸固定1.5小时，脱水、浸透、树脂包埋，切片电镜扫描细胞亚结构。同时使用已知的铁死亡诱导剂Erastin(10μM)作为对照，孵育时间也同为24小时。

2、实验结果

电镜观察结果如图2所示，电镜检测到在葫芦素B的作用下，CNE1细胞内的线粒体呈圆形，线粒体膜皱缩，同时线粒体嵴减少、消失，呈现铁死亡的形态特征，与凋亡的现象明显不同。正常的线粒体是呈哑铃状、线粒体嵴清晰明显。我们的研究结果表明葫芦素B可诱导细胞形态发生铁死亡状的改变。同时，与已知可诱导铁死亡化合物Erastin(10μM)相比，葫芦素B诱导的细胞形态改变与Erastin相似，但葫芦素B的浓度远低于Erastin，这表明葫芦素B能更有效的诱导细胞形态发生改变，该改变是细胞发生铁死亡的重要形态特征。

实施例3：葫芦素B对鼻咽癌细胞CNE1中铁离子含量的影响

发明人前期研究发现，使用铁死亡抑制剂去铁胺(Deferoxamine，DFO)可以有效的阻止葫芦素B引起的细胞死亡，因此，我们推测葫芦素B诱导的细胞死亡与铁死亡密切相关。为了进一步验证葫芦素B具有诱导铁死亡的作用，在葫芦素B加药处理后，进行了细胞内铁离子含量的检测。

1、细胞内铁离子含量检测

收集对数期细胞，以每孔30万个细胞接种于6孔细胞培养板中孵育24小时。加入1-50nM的葫芦素B与细胞孵育24小时，匀浆裂解细胞，根据铁离子检测试剂盒(sigma,USA)说明对细胞内铁离子含量进行检测。根据标准曲线计算出铁离子的浓度。

2、实验结果

本实施例结果如图3所示，从图中可以看到，在葫芦素B作用下，细胞内的铁离子含量随着葫芦素B浓度的增加而增加。铁死亡是一种铁依赖性的细胞死亡，铁离子主要通过催化脂质过氧化过程参与铁死亡的发生，该结果表明葫芦素B可有效的引起铁离子的蓄积，随着葫芦素B浓度的增加，铁离子的含量也在增加，大量的铁离子累积成为诱发铁死亡的重要因素。

实施例4：葫芦素B对鼻咽癌细胞CNE1中谷胱甘肽含量的影响

1、测试方法

总谷胱甘肽含量检测试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)，并按照附带的具体操作说明进行的。

收集对数期细胞，以每孔30万个细胞接种于6孔细胞培养板中孵育24小时。加入1-50nM的葫芦素B与细胞孵育24小时，PBS洗涤细胞一次，离心收集细胞。根据总谷胱甘肽含量检测试剂盒说明书加入细胞沉淀体积3倍量的蛋白去除试剂M溶液，充分Vortex。然后利用液氮和37℃水浴对样品进行两次快速的冻融。冰浴放置5分钟。4℃，10000g离心10分钟。取上清用于总谷胱甘肽的测定，根据标准曲线计算出谷胱甘肽的浓度。

2、实验结果

细胞中的谷胱甘肽主要发挥抗氧化作用，是细胞内抵抗过氧化压力的重要分子，谷胱甘肽的耗竭会导致脂质过氧化积累，到达一定程度可诱发铁死亡。本实施例结果如图4所示，从图中可以看到葫芦素B可以促使细胞内的谷胱甘肽含量降低，一方面使得细胞内的抗氧化能力降低，另一方面细胞内积聚各种自由基会导致脂质活性氧的增加，加剧细胞触发铁死亡。

实施例5：葫芦素B促使鼻咽癌细胞CNE1内的脂质活性氧累积

1、实验方法

采用流式检测方法对细胞内的脂质活性氧进行检测：取对数生长期CNE1细胞于30万个每孔铺于6孔板孵育24小时。加入1-50nM的葫芦素B，继续孵育24小时。吸走旧培养基，加入含2.5μM脂质活性氧探针C¹¹-BODIBY的无血清培养基，孵育30分钟。胰酶消化细胞，用流式细胞仪分析阳性细胞。

2、实验结果

铁死亡主要是细胞内脂质活性氧生成与降解的平衡失调所致，脂质活性氧堆积是诱发铁死亡的重要标志，本实施例结果如图5所示，证实了葫芦素B可促使鼻咽癌细胞CNE1内的脂质活性氧累积，证实了葫芦素B可诱导铁死亡的发生，是引起细胞死亡的重要因素。

实施例6：葫芦素B下调GPX4的表达检测

1、实验方法

采用western blot方法对GPX4的表达进行检测：取对数生长期CNE1细胞于，30万个每孔铺于6孔板孵育24小时。加入1-50nM的葫芦素B，DMSO作为对照，继续孵育48小时。吸走旧的培养基，PBS洗一遍，冰上裂解细胞30分钟，收集细胞裂解液于1.5mL离心管中，12000rpm，4℃离心15分钟，吸取上清测蛋白浓度并变性。取50μg蛋白电泳、转膜，4℃孵育GPX4一抗过夜。将膜用TBST洗三遍，然后孵育稀释的二抗1.5小时，再洗膜三遍，最后显影。

2、实验结果

GPX4的表达对铁死亡具有重要调节作用，正常生理条件下GPX4能降解小分子过氧化物和某些脂质过氧化物，抑制脂质过氧化，因此抑制GPX4的活性或降低GPX4的表达有利于促进铁死亡的发生。本实施例结果如图6所示，表明葫芦素B可下调GPX4的表达量，进一步加剧了葫芦素B诱导的铁死亡进程，结合已检测到脂质活性氧的增加，葫芦素B能够双重作用地诱导铁死亡发生，该结果也证实葫芦素B是高效的铁死亡诱导剂。

实施例7：葫芦素B对鼻咽癌CNE1细胞周期的影响

1、实验方法

采用流式方法对细胞周期进行检测：取对数生长期的CNE1细胞将细胞以每孔30万个接种于6孔板中，培养24小时。吸走培养基，用PBS洗一遍细胞，每孔加入10-100nM的葫芦素B，对照孔只加DMSO，继续培养24小时。胰酶消化细胞，1000g，4℃离心3分钟，去除上清，细胞沉淀用70％预冷乙醇固定4℃过夜。1000g，4℃离心3分钟，去除上清，PBS洗一遍细胞，按细胞周期检测试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)说明书加入检测缓冲溶液和PI，RNase A，37℃孵育30分钟，流式细胞仪检测。

2、实验结果

为了进一步评价葫芦素B的体内抗肿瘤效果，首先在细胞内检测葫芦素B对细胞周期的影响。本实施例的结果如图7所示，证明葫芦素B可诱导细胞周期阻滞，具体是使鼻咽癌CNE1细胞周期阻滞在G2/M期。同时通过western blot分析周期相关的蛋白表达，进一步证实了该结果。

实施例8：葫芦素B抑制鼻咽癌细胞CNE1迁移和侵袭

在进一步评价葫芦素B的体内抗肿瘤效果研究中，检测了葫芦素B对细胞迁移和侵袭的影响。

1、实验方法

(1)细胞迁移实验：取对数生长期的CNE1细胞消化后制成悬液，取细胞悬液100μL(含5万个细胞)加入Transwell chamber，同时加入10-100nM的葫芦素B。24孔板下室一般加入600μL含10％FBS的培养基，培养24小时。小心取出chamber，吸干上室液体，用棉签擦去未迁移细胞，将chamber移到预先加入约800μL多聚甲醛的孔中，室温固定30分钟；再用0.3％结晶紫染色30分钟，晾干，显微镜下取5个随机视野计数，统计结果。

(2)细胞侵袭实验：Matrigel(5mg/mL)在4℃过夜融化，用4℃预冷的无血清培养基稀释Matrigel至终浓度1mg/mL，在chamber上室底部中央垂直加入100μL稀释后的Matrigel，37℃温育2小时。后续步骤同细胞迁移实验，显微镜下取5个随机视野计数，统计结果。

2、实验结果

细胞迁移实验结果如图8所示，细胞侵袭实验结果如图9所示，从图中可以得到葫芦素B可有效地抑制细胞的迁移和侵袭。肿瘤细胞的侵袭和迁移同属于肿瘤细胞恶性行为，该结果表明葫芦素B良好的抗肿瘤转移的能力，为发展新型抗肿瘤药物提供了重要实验基础。

实施例9：葫芦素B在裸鼠移植瘤模型中抑制肿瘤的生长

为了评价葫芦素B在体内的抗肿瘤效果，我们构建了小鼠移植瘤模型，

1、实验方法

实验材料：BALB/c-nu裸鼠，SPF级，5周龄，15-18g/只，雌性，购至广东省动物中心。饲养条件：室温(20-26℃)，湿度(40-70)％，自由饮水、进食。

构建鼻咽癌移植瘤模型及给药：BALB/c-nu裸鼠中鼻咽癌移植瘤模型的建立，用0.25％胰酶消化对数生长期的鼻咽癌CNE1细胞，500g，离心5分钟收集细胞，PBS缓冲液洗涤2次，用无血清的培养基重悬，使细胞数大概是5×10⁷cells/mL，用1mL一次性注射器按1×10⁷cells/只接种到BALB/c-nu裸鼠的背部皮下。待BALB/c-nu裸鼠的背部出现的肿瘤突起即为鼻咽癌移植瘤模型构建成功。构建移植瘤成功的裸鼠随机地分为四组：阴性对照组(PBS)，葫芦素B高剂量组(1mg/kg)，葫芦素B低剂量组(0.5mg/kg)，吉西他滨阳性对照组(25mg/kg)，每组5只。每隔3天给药一次，并记录肿瘤体积和小鼠体重。给药36天后，终止实验，小鼠采用颈椎脱臼法处死，解剖肿瘤组织及重要脏器，并对脏器进行H&E染色。

2、实验结果

图10为葫芦素B在小鼠体内对肿瘤的生长抑制情况图，从图中可以看出葫芦素B在小鼠体内能够有效地抑制肿瘤的生长，抑制效果比阳性对照药吉西他滨显著；同时，图11为葫芦素B对小鼠重要脏器毒副测试结果，从图11可以看出，葫芦素B对小鼠体重没有明显影响，在小鼠的重要脏器也没有明显的转移和毒副作用。本实施例表明葫芦素B在体内具有良好的抗肿瘤效果，为鼻咽癌的治疗提供了重要的研究基础，为制备抗鼻咽癌药物提供了重要的理论依据。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.葫芦素B在制备铁死亡诱导剂中的应用。

2.葫芦素B在制备抗鼻咽癌药物中的应用。

3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述抗鼻咽癌包括增加鼻咽癌细胞内铁离子浓度。

4.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述抗鼻咽癌包括降低鼻咽癌细胞内谷胱甘肽含量。

5.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述抗鼻咽癌包括抑制或下调鼻咽癌细胞GPX4表达。

6.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述抗鼻咽癌包括诱导鼻咽癌细胞周期阻滞在G2/M期。

7.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述抗鼻咽癌包括抑制鼻咽癌细胞增殖、抑制鼻咽癌细胞迁移和/或侵袭。

8.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述抗鼻咽癌包括增加鼻咽癌细胞内脂质活性氧。

9.根据权利要求1-8任一所述应用，其特征在于，所述抗鼻咽癌细胞为CNE1鼻咽癌细胞。

10.铁死亡诱导剂在制备抗鼻咽癌药物中的应用。

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