RU2721574C2 - Вакцинная композиция против злокачественной опухоли - Google Patents
Вакцинная композиция против злокачественной опухоли Download PDFInfo
- Publication number
- RU2721574C2 RU2721574C2 RU2013141920A RU2013141920A RU2721574C2 RU 2721574 C2 RU2721574 C2 RU 2721574C2 RU 2013141920 A RU2013141920 A RU 2013141920A RU 2013141920 A RU2013141920 A RU 2013141920A RU 2721574 C2 RU2721574 C2 RU 2721574C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- peptide
- seq
- leu
- ser val
- asn ala
- Prior art date
Links
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 148
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 68
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 109
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 927
- 101150084041 WT1 gene Proteins 0.000 claims abstract description 384
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 claims abstract description 77
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 25
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 25
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 19
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 14
- 102100022748 Wilms tumor protein Human genes 0.000 claims description 1072
- 108700020467 WT1 Proteins 0.000 claims description 426
- 102100028972 HLA class I histocompatibility antigen, A alpha chain Human genes 0.000 claims description 297
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 claims description 297
- YSPJWDABFLRKDK-QAETUUGQSA-N Glu-Gln-Gln-Tyr Chemical compound N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(O)=O YSPJWDABFLRKDK-QAETUUGQSA-N 0.000 claims description 200
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 claims description 192
- 108010045023 alanyl-prolyl-tyrosine Proteins 0.000 claims description 156
- UVKNEILZSJMKSR-FXQIFTODSA-N Pro-Asn-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 UVKNEILZSJMKSR-FXQIFTODSA-N 0.000 claims description 142
- YHUBAXGAAYULJY-ULQDDVLXSA-N Pro-Tyr-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O YHUBAXGAAYULJY-ULQDDVLXSA-N 0.000 claims description 112
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 79
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 75
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 claims description 69
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 65
- DTBPLQNKYCYUOM-JYJNAYRXSA-N Arg-Met-Phe Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 DTBPLQNKYCYUOM-JYJNAYRXSA-N 0.000 claims description 30
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 claims description 26
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 20
- 101800001318 Capsid protein VP4 Proteins 0.000 claims description 18
- 101800001090 Protein 3A Proteins 0.000 claims description 18
- XNCUYZKGQOCOQH-YUMQZZPRSA-N Ser-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O XNCUYZKGQOCOQH-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims description 18
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 17
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 15
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 14
- NUHQMYUWLUSRJX-BIIVOSGPSA-N Asn-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N NUHQMYUWLUSRJX-BIIVOSGPSA-N 0.000 claims description 14
- 102220093889 rs876659091 Human genes 0.000 claims description 14
- 102220075766 rs757712173 Human genes 0.000 claims description 13
- 108010081208 RMFPNAPYL Proteins 0.000 claims description 12
- 102220235746 rs952058991 Human genes 0.000 claims description 11
- SMFGCTXUBWEPKM-KBPBESRZSA-N Phe-Leu-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 SMFGCTXUBWEPKM-KBPBESRZSA-N 0.000 claims description 10
- OHIYMVFLQXTZAW-UFYCRDLUSA-N Phe-Met-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O OHIYMVFLQXTZAW-UFYCRDLUSA-N 0.000 claims description 10
- FIDNSJUXESUDOV-JYJNAYRXSA-N Pro-Tyr-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O FIDNSJUXESUDOV-JYJNAYRXSA-N 0.000 claims description 10
- VXYQOFXBIXKPCX-BQBZGAKWSA-N Ser-Met-Gly Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N VXYQOFXBIXKPCX-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 10
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 10
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 9
- ZRNWJUAQKFUUKV-SRVKXCTJSA-N Arg-Met-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O ZRNWJUAQKFUUKV-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 6
- UHNQRAFSEBGZFZ-YESZJQIVSA-N Leu-Phe-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N UHNQRAFSEBGZFZ-YESZJQIVSA-N 0.000 claims description 6
- XXNYYSXNXCJYKX-DCAQKATOSA-N Ser-Leu-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O XXNYYSXNXCJYKX-DCAQKATOSA-N 0.000 claims description 6
- 108010056582 methionylglutamic acid Proteins 0.000 claims description 6
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 4
- 108010044087 AS-I toxin Proteins 0.000 claims 8
- MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N Ala-Leu-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims 8
- OFIYLHVAAJYRBC-HJWJTTGWSA-N Arg-Ile-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(O)=O OFIYLHVAAJYRBC-HJWJTTGWSA-N 0.000 claims 8
- RFNDQEWMNJMQHD-SZMVWBNQSA-N Arg-Met-Trp Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N RFNDQEWMNJMQHD-SZMVWBNQSA-N 0.000 claims 8
- WIDVAWAQBRAKTI-YUMQZZPRSA-N Asn-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O WIDVAWAQBRAKTI-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims 8
- CAXXTYYGFYTBPV-IUCAKERBSA-N Gln-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O CAXXTYYGFYTBPV-IUCAKERBSA-N 0.000 claims 8
- FZWVCYCYWCLQDH-NHCYSSNCSA-N Ile-Leu-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)O)N FZWVCYCYWCLQDH-NHCYSSNCSA-N 0.000 claims 8
- YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N Leu-Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N 0.000 claims 8
- HZVXPUHLTZRQEL-UWVGGRQHSA-N Met-Leu-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O HZVXPUHLTZRQEL-UWVGGRQHSA-N 0.000 claims 8
- BXHRXLMCYSZSIY-STECZYCISA-N Pro-Tyr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@H](Cc1ccc(O)cc1)NC(=O)[C@@H]1CCCN1)C(O)=O BXHRXLMCYSZSIY-STECZYCISA-N 0.000 claims 8
- OABLKWMLPUGEQK-JYJNAYRXSA-N Pro-Tyr-Met Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O OABLKWMLPUGEQK-JYJNAYRXSA-N 0.000 claims 8
- IFPBAGJBHSNYPR-ZKWXMUAHSA-N Ser-Ile-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O IFPBAGJBHSNYPR-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims 8
- FUMGHWDRRFCKEP-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FUMGHWDRRFCKEP-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 8
- VZQRNAYURWAEFE-KKUMJFAQSA-N Ser-Leu-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 VZQRNAYURWAEFE-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims 8
- KCGIREHVWRXNDH-GARJFASQSA-N Ser-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N KCGIREHVWRXNDH-GARJFASQSA-N 0.000 claims 8
- YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 8
- IXZHZUGGKLRHJD-DCAQKATOSA-N Ser-Leu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O IXZHZUGGKLRHJD-DCAQKATOSA-N 0.000 claims 8
- HEYZPTCCEIWHRO-IHRRRGAJSA-N Ser-Met-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HEYZPTCCEIWHRO-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims 8
- RFKVQLIXNVEOMB-WEDXCCLWSA-N Thr-Leu-Gly Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)O)N)O RFKVQLIXNVEOMB-WEDXCCLWSA-N 0.000 claims 8
- UMPVMAYCLYMYGA-ONGXEEELSA-N Val-Leu-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O UMPVMAYCLYMYGA-ONGXEEELSA-N 0.000 claims 8
- VCIYTVOBLZHFSC-XHSDSOJGSA-N Val-Phe-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N VCIYTVOBLZHFSC-XHSDSOJGSA-N 0.000 claims 8
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 claims 8
- 108010012581 phenylalanylglutamate Proteins 0.000 claims 8
- DGLQWAFPIXDKRL-UBHSHLNASA-N Ala-Met-Phe Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N DGLQWAFPIXDKRL-UBHSHLNASA-N 0.000 claims 4
- YBZMTKUDWXZLIX-UWVGGRQHSA-N Arg-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YBZMTKUDWXZLIX-UWVGGRQHSA-N 0.000 claims 4
- JOADBFCFJGNIKF-GUBZILKMSA-N Arg-Met-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JOADBFCFJGNIKF-GUBZILKMSA-N 0.000 claims 4
- VVJTWSRNMJNDPN-IUCAKERBSA-N Arg-Met-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(O)=O VVJTWSRNMJNDPN-IUCAKERBSA-N 0.000 claims 4
- JBIRFLWXWDSDTR-CYDGBPFRSA-N Arg-Met-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N JBIRFLWXWDSDTR-CYDGBPFRSA-N 0.000 claims 4
- OISWSORSLQOGFV-AVGNSLFASA-N Arg-Met-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N OISWSORSLQOGFV-AVGNSLFASA-N 0.000 claims 4
- LCBSSOCDWUTQQV-SDDRHHMPSA-N Arg-Met-Pro Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N LCBSSOCDWUTQQV-SDDRHHMPSA-N 0.000 claims 4
- ZEBDYGZVMMKZNB-SRVKXCTJSA-N Arg-Met-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N ZEBDYGZVMMKZNB-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 4
- RLHANKIRBONJBK-IHRRRGAJSA-N Asn-Met-Phe Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N RLHANKIRBONJBK-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims 4
- IBNSYSWDJJQKSY-PJYANRIDSA-N C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 IBNSYSWDJJQKSY-PJYANRIDSA-N 0.000 claims 4
- DFRYZTUPVZNRLG-KKUMJFAQSA-N Gln-Met-Phe Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N DFRYZTUPVZNRLG-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims 4
- CCBIBMKQNXHNIN-ZETCQYMHSA-N Gly-Leu-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O CCBIBMKQNXHNIN-ZETCQYMHSA-N 0.000 claims 4
- QGDOOCIPHSSADO-STQMWFEESA-N Gly-Met-Phe Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O QGDOOCIPHSSADO-STQMWFEESA-N 0.000 claims 4
- LQGCNWWLGGMTJO-ULQDDVLXSA-N His-Met-Phe Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N LQGCNWWLGGMTJO-ULQDDVLXSA-N 0.000 claims 4
- DNKDIDZHXZAGRY-HJWJTTGWSA-N Ile-Met-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N DNKDIDZHXZAGRY-HJWJTTGWSA-N 0.000 claims 4
- MJTOYIHCKVQICL-ULQDDVLXSA-N Leu-Met-Phe Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N MJTOYIHCKVQICL-ULQDDVLXSA-N 0.000 claims 4
- VMTYLUGCXIEDMV-QWRGUYRKSA-N Lys-Leu-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN VMTYLUGCXIEDMV-QWRGUYRKSA-N 0.000 claims 4
- SKUOQDYMJFUMOE-ULQDDVLXSA-N Lys-Met-Phe Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N SKUOQDYMJFUMOE-ULQDDVLXSA-N 0.000 claims 4
- CNTNPWWHFWAZGA-JYJNAYRXSA-N Met-Met-Phe Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 CNTNPWWHFWAZGA-JYJNAYRXSA-N 0.000 claims 4
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- DLZBBDSPTJBOOD-BPNCWPANSA-N Pro-Tyr-Ala Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DLZBBDSPTJBOOD-BPNCWPANSA-N 0.000 claims 4
- HEUVHBXOVZONPU-BJDJZHNGSA-N Ser-Leu-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O HEUVHBXOVZONPU-BJDJZHNGSA-N 0.000 claims 4
- VMLONWHIORGALA-SRVKXCTJSA-N Ser-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]([NH3+])CO VMLONWHIORGALA-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 4
- GVIGVIOEYBOTCB-XIRDDKMYSA-N Ser-Leu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 GVIGVIOEYBOTCB-XIRDDKMYSA-N 0.000 claims 4
- JWOBLHJRDADHLN-KKUMJFAQSA-N Ser-Leu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O JWOBLHJRDADHLN-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims 4
- CGCMNOIQVAXYMA-UNQGMJICSA-N Thr-Met-Phe Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O CGCMNOIQVAXYMA-UNQGMJICSA-N 0.000 claims 4
- UJRIVCPPPMYCNA-HOCLYGCPSA-N Trp-Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N UJRIVCPPPMYCNA-HOCLYGCPSA-N 0.000 claims 4
- DDJHCLVUUBEIIA-BVSLBCMMSA-N Trp-Met-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)CCSC)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 DDJHCLVUUBEIIA-BVSLBCMMSA-N 0.000 claims 4
- DWAMXBFJNZIHMC-KBPBESRZSA-N Tyr-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O DWAMXBFJNZIHMC-KBPBESRZSA-N 0.000 claims 4
- RSGHLMMKXJGCMK-JYJNAYRXSA-N Val-Met-Phe Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N RSGHLMMKXJGCMK-JYJNAYRXSA-N 0.000 claims 4
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 claims 4
- 108010043240 arginyl-leucyl-glycine Proteins 0.000 claims 4
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 claims 4
- 108010077112 prolyl-proline Proteins 0.000 claims 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 32
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 108010088729 HLA-A*02:01 antigen Proteins 0.000 abstract 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 abstract 1
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 abstract 1
- 101710127857 Wilms tumor protein Proteins 0.000 description 704
- 208000008383 Wilms tumor Diseases 0.000 description 608
- 208000026448 Wilms tumor 1 Diseases 0.000 description 606
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 168
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 66
- 102000040856 WT1 Human genes 0.000 description 59
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 54
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 46
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 40
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 40
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 30
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 29
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 29
- 239000000047 product Substances 0.000 description 29
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 28
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 28
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 28
- 102220019469 rs80358836 Human genes 0.000 description 27
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 24
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 24
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 24
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 20
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 20
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 19
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 19
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 19
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 18
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 16
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 16
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 16
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 15
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 15
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 15
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 11
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 11
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 10
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 10
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 10
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 10
- 230000004044 response Effects 0.000 description 10
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 9
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 8
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 8
- -1 and the like Proteins 0.000 description 8
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 8
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 8
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 8
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 8
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 7
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 6
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 6
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 6
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 6
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 6
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 6
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 5
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 5
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 5
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 5
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 4
- 101800001312 Capsid protein VP1 Proteins 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 4
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 4
- 108010092262 T-Cell Antigen Receptors Proteins 0.000 description 4
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 4
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 4
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 4
- NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N ethylparaben Chemical compound CCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 4
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 4
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 4
- 102220018893 rs80358527 Human genes 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 3
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 3
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 3
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 3
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 3
- 201000003793 Myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 3
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 3
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 3
- 229960001855 mannitol Drugs 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 3
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 3
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 3
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 3
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- QFOHBWFCKVYLES-UHFFFAOYSA-N Butylparaben Chemical compound CCCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QFOHBWFCKVYLES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100028976 HLA class I histocompatibility antigen, B alpha chain Human genes 0.000 description 2
- 102100028971 HLA class I histocompatibility antigen, C alpha chain Human genes 0.000 description 2
- 102100036242 HLA class II histocompatibility antigen, DQ alpha 2 chain Human genes 0.000 description 2
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010058607 HLA-B Antigens Proteins 0.000 description 2
- 108010052199 HLA-C Antigens Proteins 0.000 description 2
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000930801 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DQ alpha 2 chain Proteins 0.000 description 2
- 101000621309 Homo sapiens Wilms tumor protein Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 2
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- RAHZWNYVWXNFOC-UHFFFAOYSA-N Sulphur dioxide Chemical compound O=S=O RAHZWNYVWXNFOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 108091007916 Zinc finger transcription factors Proteins 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 2
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N benzyl benzoate Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OCC1=CC=CC=C1 SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 2
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000010338 boric acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N dinoprostone Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N 0.000 description 2
- 229960002986 dinoprostone Drugs 0.000 description 2
- 235000010228 ethyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 2
- 239000004403 ethyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 2
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 2
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 102000046004 human WT1 Human genes 0.000 description 2
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000845 maltitol Substances 0.000 description 2
- 235000010449 maltitol Nutrition 0.000 description 2
- VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N maltitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 2
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 2
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 2
- 201000008026 nephroblastoma Diseases 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 2
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 2
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N prostaglandin E2 Natural products CCCCCC(O)C=CC1C(O)CC(=O)C1CC=CCCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 2
- 229940037001 sodium edetate Drugs 0.000 description 2
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 2
- 239000004328 sodium tetraborate Substances 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N (3-hexadecanoyloxy-2-hydroxypropyl) 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- SPSPIUSUWPLVKD-UHFFFAOYSA-N 2,3-dibutyl-6-methylphenol Chemical compound CCCCC1=CC=C(C)C(O)=C1CCCC SPSPIUSUWPLVKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CVOFKRWYWCSDMA-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-n-(2,6-diethylphenyl)-n-(methoxymethyl)acetamide;2,6-dinitro-n,n-dipropyl-4-(trifluoromethyl)aniline Chemical compound CCC1=CC=CC(CC)=C1N(COC)C(=O)CCl.CCCN(CCC)C1=C([N+]([O-])=O)C=C(C(F)(F)F)C=C1[N+]([O-])=O CVOFKRWYWCSDMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical class NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010011485 Aspartame Proteins 0.000 description 1
- 208000032800 BCR-ABL1 positive blast phase chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000004860 Blast Crisis Diseases 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100035793 CD83 antigen Human genes 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 102000007644 Colony-Stimulating Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 206010071602 Genetic polymorphism Diseases 0.000 description 1
- 108010013476 HLA-A24 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010010378 HLA-DP Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000015789 HLA-DP Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010062347 HLA-DQ Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 1
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 1
- 101000946856 Homo sapiens CD83 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 239000004166 Lanolin Substances 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004288 Sodium dehydroacetate Substances 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 206010054094 Tumour necrosis Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 229940029042 WT1 peptide vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108700025700 Wilms Tumor Genes Proteins 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 102000038627 Zinc finger transcription factors Human genes 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037374 absorbed through the skin Effects 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- SNAAJJQQZSMGQD-UHFFFAOYSA-N aluminum magnesium Chemical compound [Mg].[Al] SNAAJJQQZSMGQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 239000000605 aspartame Substances 0.000 description 1
- IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N aspartame Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)OC)CC1=CC=CC=C1 IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 235000010357 aspartame Nutrition 0.000 description 1
- 229960003438 aspartame Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012911 assay medium Substances 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 229960004217 benzyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 229960002903 benzyl benzoate Drugs 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 229960002645 boric acid Drugs 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 235000010354 butylated hydroxytoluene Nutrition 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 208000013549 childhood kidney neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 229940099112 cornstarch Drugs 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000007908 dry granulation Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000007902 hard capsule Substances 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 102000046699 human CD14 Human genes 0.000 description 1
- 239000003906 humectant Substances 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 125000000741 isoleucyl group Chemical group [H]N([H])C(C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=O)O* 0.000 description 1
- 229960001375 lactose Drugs 0.000 description 1
- 235000019388 lanolin Nutrition 0.000 description 1
- 229940039717 lanolin Drugs 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002794 lymphocyte assay Methods 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 229940035436 maltitol Drugs 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003643 myeloid progenitor cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000006201 parenteral dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N phenylalanine group Chemical group N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L phthalate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C([O-])=O XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 235000019422 polyvinyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 230000017363 positive regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 235000019204 saccharin Nutrition 0.000 description 1
- 229940081974 saccharin Drugs 0.000 description 1
- 239000000901 saccharin and its Na,K and Ca salt Substances 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 229940001607 sodium bisulfite Drugs 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229960001790 sodium citrate Drugs 0.000 description 1
- 235000011083 sodium citrates Nutrition 0.000 description 1
- 235000019259 sodium dehydroacetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940079839 sodium dehydroacetate Drugs 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940001474 sodium thiosulfate Drugs 0.000 description 1
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 1
- DSOWAKKSGYUMTF-GZOLSCHFSA-M sodium;(1e)-1-(6-methyl-2,4-dioxopyran-3-ylidene)ethanolate Chemical compound [Na+].C\C([O-])=C1/C(=O)OC(C)=CC1=O DSOWAKKSGYUMTF-GZOLSCHFSA-M 0.000 description 1
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000025366 tissue development Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
- A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/15—Cells of the myeloid line, e.g. granulocytes, basophils, eosinophils, neutrophils, leucocytes, monocytes, macrophages or mast cells; Myeloid precursor cells; Antigen-presenting cells, e.g. dendritic cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4615—Dendritic cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/462—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells
- A61K39/4622—Antigen presenting cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464452—Transcription factors, e.g. SOX or c-MYC
- A61K39/464453—Wilms tumor 1 [WT1]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4748—Tumour specific antigens; Tumour rejection antigen precursors [TRAP], e.g. MAGE
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
- C12N5/0638—Cytotoxic T lymphocytes [CTL] or lymphokine activated killer cells [LAK]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0639—Dendritic cells, e.g. Langherhans cells in the epidermis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56966—Animal cells
- G01N33/56972—White blood cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
- G01N33/57496—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving intracellular compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5154—Antigen presenting cells [APCs], e.g. dendritic cells or macrophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2121/00—Preparations for use in therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/40—Regulators of development
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к противоопухолевым пептидным вакцинам, и может быть использовано в медицине для лечения или профилактики рака. В составе вакцины используют модифицированный пептид на основе пептида WT1187 или WT1126 с заменой одного аминокислотного остатка в аминокислотной последовательности указанного пептида, не затрагивая аминокислотные остатки в положениях 4-8 от его N-конца. Изобретение эффективно в отношении злокачественных опухолей, сопровождающихся увеличенной экспрессией гена WT1, у положительных по HLA-A*0201 индивидуумов. 6 н. и 17 з.п. ф-лы, 32 ил., 25 табл., 14 пр.
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к вакцинной композиции против злокачественной опухоли для положительных по лейкоцитарному антигену человека (HLA)-A*0206 индивидуумов, содержащей белковый продукт гена опухолевого супрессора опухоли Вильмса 1 (WT1) (далее в настоящем документе иногда сокращаемый как белок WT1) или его неполный пептид (далее в настоящем документе иногда сокращаемый как пептид WT1). Настоящее изобретение также относится к вакцинной композиции против злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0206 индивидуумов, содержащей ДНК или РНК, кодирующую указанный выше белок WT1 или пептид WT1, способу индукции специфичных к WT1 CTL, способу индукции дендритных клеток, которые презентируют злокачественный антиген, и способу диагностики злокачественной опухоли у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов и способу лечения или профилактики злокачественных опухолей у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов.
Настоящее изобретение дополнительно относится к вакцинной композиции против злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0201 индивидуумов, содержащей модифицированный пептид WT1.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Ген опухоли Вильмса WT1 выделен как ген, ассоциированный с образованием опухоли при опухоли Вильмса, которая представляет собой педиатрическую опухоль почек (смотри в непатентной литературе 1). Этот ген кодирует фактор транскрипции "цинковые пальцы", ассоциированный с механизмом регуляции роста и дифференцировки клеток и апоптоза и развития тканей.
Ген WT1 исходно классифицировали как ген опухолевого супрессора. Однако на основании недавних данных, представленных далее в (i)-(iii):
(i) высокая экспрессия гена WT1 дикого типа при различных злокачественных новообразованиях и солидных злокачественных опухолях человека, включая злокачественные опухоли системы кроветворения, такие как лейкоз и миелодиспластические синдромы (MDS),
(ii) ингибирование роста лейкозных клеток и клеток солидных злокачественных опухолей человека, обработанных антисмысловыми олигонуклеотидами WT1, и
(iii) стимуляция роста и ингибирование дифференцировки миелоидных клеток-предшественников мыши при конститутивной экспрессии гена WT1 дикого типа,
предположено, что ген WT1 дикого типа при различных злокачественных заболеваниях проявляет онкогенное действие, а не супрессирующее опухоль действие (смотри в патентной литературе 1).
Также известно о высокой экспрессии гена WT1 при солидных злокачественных опухолях, таких как рак желудка, рак толстого кишечника, рак легких, рак молочной железы, рак половых клеток, рак печени, рак кожи, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы, рак матки, рак шейки матки и рак яичников (смотри в патентной литературе 2).
В основном иммунная система для элиминации чужеродных объектов включает гуморальный иммунитет, в который вовлечены макрофаги, распознающие антиген и служащие в качестве антигенпредставляющих клеток, хелперные T-клетки, распознающие антиген, презентированный макрофагами, и продуцирующие различные лимфокины для активации других T-клеток, и B-лимфоциты, дифференцирующиеся в продуцирующие антитела клетки под действием лимфокинов; и клеточный иммунитет, в котором цитотоксические T-лимфоциты (CTL), продуцирующиеся вследствие дифференцировки в ответ на презентацию антигена, атакуют и разрушают клетки-мишени.
В настоящее время полагают, что направленный на злокачественные опухоли иммунитет главным образом основан на клеточном иммунитете, в который вовлечены CTL. В направленном на злокачественные опухоли иммунитете, основанном на CTL, T-клетки предшественники распознают антиген злокачественной опухоли, презентированный в форме комплекса главного комплекса гистосовместимости (MHC) класса I и антигена злокачественной опухоли, и, таким образом, дифференцируются и развиваются в CTL, атакующие и разрушающие злокачественные клетки. В этом случае злокачественная клетка на клеточной поверхности презентирует комплекс антигена MHC класса I и антигена злокачественной опухоли, который является мишенью для CTL (смотри в непатентной литературе от 2 до 5). MHC у людей называют лейкоцитарный антиген человека (HLA).
Полагают, что указанный выше антиген злокачественной опухоли, который презентирует антиген MHC класса I на поверхностях злокачественных клеток, т.е. клетках-мишенях, представляет собой пептид, длиной приблизительно от 8 до 12 аминокислот, продуцируемый вследствие опосредованного внутриклеточными протеазами процессинга антигенного белка, синтезируемого в злокачественных клетках (смотри в непатентной литературе от 2 до 5). В настоящее время осуществляется поиск антигенных белков различных видов злокачественных опухолей, но в качестве специфичных для злокачественных опухолей белков идентифицировано только небольшое количество белков.
Автор настоящего изобретения синтезировал полипептиды, каждый состоящий из смежных аминокислот в количестве от 7 до 30 на основе аминокислотной последовательности продукта экспрессии гена WT1 и каждый содержащий, по меньшей мере, одну аминокислоту, по-видимому, служащую в качестве якорной аминокислоты для связывания с HLA-A*2402 или HLA-A*0201, подтверждая, что эти пептиды связываются с HLA-A*2402 или HLA-A*0201 (эти пептиды рестриктированы по HLA-A*2402 или HLA-A*0201), и обнаружил, что связывание пептидов с HLA-A*2402 или HLA-A*0201 индуцирует CTL, приводящий к цитотоксическому ответу к клеткам-мишеням (далее в настоящем документе, сокращаемому как ответ CTL). На основании данного факта эти пептиды идентифицированы как эпитоп CTL, полученный из продукта экспрессии гена WT1 (белка WT).
На настоящий момент идентифицированы специфичные для WT1 эпитопы CTL только для HLA-A*2402 и HLA-A*0201 (смотри в патентной литературе 3), HLA-A*3303 (смотри в патентной литературе 4) или HLA-A*1101 (смотри в патентной литературе 5). Подтверждено, что ответ CTL, индуцированный полипептидами из указанной выше литературы, рестриктирован по HLA-A*2402, HLA-A*0201, HLA-A*3303 и HLA-A*1101.
Это указывает на возможность того, что белковый продукт гена опухолевого супрессора WT1 представляет собой перспективный антиген для отторжения опухоли, также называемый опухолеспецифическим антигеном (TAA). Фактически, высокие уровни специфичных к WT1 CTL или высокие титры антител к WT1 наблюдали не в периферической крови здоровых доноров крови, а в периферической крови пациентов со злокачественными опухолями.
Однако типы HLA в достаточной степени разнообразны, чтобы служить в качестве маркеров для идентификации индивидуумов. В HLA антигены MHC класса I классифицируют на HLA-A, HLA-B и HLA-C, а антигены MHC класса II классифицируют на HLA-DP, HLA-DQ и HLA-DR. Каждый класс содержит несколько типов антигенов. Антигенсвязывающий участок каждого HLA обладает генетическим полиморфизмом. Например, известно, что у HLA-A, HLA-B и HLA-C существует 27 или более, 59 или более и 10 или более разновидностей полиморфизма (аллелей), соответственно.
Таким образом, желательно идентифицировать антиген злокачественной опухоли, связывающийся с другими типами HLA, отличными от HLA-A*2402, HLA-A*0201, HLA-A*3303 и HLA-A*1101, и индуцирующий ответ CTL, и, таким образом, применять иммунотерапевтическое лечение для более широкого диапазона индивидуумов.
При этом в двух документах сообщается о трех указанных ниже модифицированных пептидах WT1:
пептид WT1187P1Y (YLGEQQYSV; SEQ ID NO: 12), пептид WT1126P1Y (YMFPNAPYL; SEQ ID NO: 35) (об указанных выше двух пептидах смотри в патентной литературе 6) и пептид WT1126P9M (RMFPNAPYM; SEQ ID NO: 52) (смотри в патентной литературе 7).
Кроме того, в письменных доводах при рассмотрении европейского патента № 1127068 приведены два указанных ниже пептида:
пептид WT1126P2L (RLFPNAPYL; SEQ ID NO: 39) и пептид WT1126P2L&P9V (RLFPNAPYV; SEQ ID NO: 75) (смотри в непатентной литературе 7).
Однако никогда не публиковалось, служат ли эти модифицированные пептиды WT1 в качестве антигена злокачественной опухоли, который связывается с типами HLA, отличными от HLA-A*2402, HLA-A*0201, HLA-A*3303 и HLA-A*1101, и индуцирует ответ CTL.
Патентная литература 1: JP-A 9-104629
Патентная литература 2: JP-A 11-035484
Патентная литература 3: публикация WO 00/06602
Патентная литература 4: патентная заявка Японии № 2006-045287
Патентная литература 5: патентная заявка Японии № 2006-355356
Патентная литература 6: публикация WO 2005/053618
Патентная литература 7: публикация WO 2007/016466
Непатентная литература 1: Gessler, M. et al., Nature, vol. 343, pp. 774-778, 1990
Непатентная литература 2: Cur. Opin. Immunol., vol. 5, p. 709, 1993
Непатентная литература 3: Cur. Opin. Immunol., vol. 5, p. 719, 1993
Непатентная литература 4: Cell, vol. 82, p. 13, 1995
Непатентная литература 5: Immunol. Rev., vol. 146, p. 167, 1995
Непатентная литература 6: Mol. Cell. Biol., vol. 11, p. 1707, 1991
Непатентная литература 7: письменные доводы для рассмотрения европейского патента № 1127068
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
ЗАДАЧА, ПОДЛЕЖАЩАЯ РЕШЕНИЮ ИЗОБРЕТЕНИЕМ
Целью настоящего изобретения является применение способа лечения и/или профилактики злокачественных опухолей для пациентов со злокачественными опухолями, включая лейкоз, кроме положительных по HLA-A*0206 индивидуумов, где способ основан на белковом продукте гена опухолевого супрессора WT1 (белок WT1) или его неполном пептиде (пептид WT1).
СРЕДСТВА РЕШЕНИЯ ЗАДАЧИ
Автор для достижения указанной выше цели настоящего изобретения провел интенсивные исследования. В результате он выявил, что пептид WT1187 (SLGEQQYSV) и пептид WT1126 (RMFPNAPYL), каждый полученный из белка WT1 человека, который известен как индуцирующий только рестриктированные по HLA-A*0201 CTL, неожиданно также индуцировал рестриктированные по HLA-A*0206 CTL. В условиях, где как пептид WT1, индуцирующий рестриктированные по HLA-A*0201 CTL, были известны только пептиды, описанные в публикации WO 00/06602, автор настоящего изобретения обнаружил, что модифицированный пептид на основе пептида WT1187 (также обозначаемый как модифицированный пептид WT1187) и модифицированный пептид на основе пептида WT1126 (также обозначаемый как модифицированный пептид WT1126) также связывается с молекулой HLA-A*0201. На основе этих изысканий автор настоящего изобретения провел дополнительные интенсивные исследования и осуществил настоящее изобретение.
Конкретно, настоящее изобретение относится к следующему (1)-(17).
(1) Вакцинная композиция против злокачественной опухоли для положительных по лейкоцитарному антигену человека (HLA)-A*0206 индивидуумов, содержащая белковый продукт гена опухолевого супрессора WT1 или его неполный пептид.
(2) Композиция по указанному выше (1), где белковый продукт гена опухолевого супрессора WT1 представляет собой белок по следующим (a) или (b):
(a) белок, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, или
(b) белок, состоящий из аминокислотной последовательности, с делецией, заменой или добавлением от одной до нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности (a), каждая из которых иммуногенна у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов.
(3) Композиция по указанному выше (1), где неполный пептид представляет собой
пептид WT1187: Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 2),
пептид WT1126: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 3),
пептид WT1187P1F: Phe Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 11),
пептид WT1187P2M: Ser Met Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 16),
пептид WT1187P3M: Ser Leu Met Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 20),
пептид WT1126P1F: Phe Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 34),
пептид WT1126P2L: Arg Leu Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 39),
пептид WT1126P3M: Arg Met Met Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 46) или
пептид WT1126P9V: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Val (SEQ ID NO: 49).
(4) Композиция по указанным выше (1)-(3), дополнительно содержащая адъювант.
(5) Вакцинная композиция против злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0206 индивидуумов, содержащая ДНК, кодирующую белковый продукт гена опухолевого супрессора WT1 или его неполный пептид.
(6) Вакцинная композиция против злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0206 индивидуумов, содержащая РНК, кодирующую белковый продукт гена опухолевого супрессора WT1 или его неполный пептид.
(7) Способ индукции специфичных к WT1 CTL, включающий культивирование мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC), полученных у положительного по HLA-A*0206 индивидуума, в присутствии белкового продукта гена опухолевого супрессора WT1 или его неполного пептида с получением индуцированных из них специфичных к WT1 CTL.
(8) Способ индукции дендритных клеток, презентирующих белковый продукт гена опухолевого супрессора WT1 или его неполный пептид, включающий культивирование незрелых дендритных клеток, полученных у положительного по HLA-A*0206 индивидуума, в присутствии белкового продукта или его неполного пептида с получением индуцированных из них дендритных клеток, которые презентируют белковый продукт или его неполный пептид.
(9) Способ диагностики злокачественной опухоли у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов, включающий
i) стадию детекции или количественного определения белкового продукта гена опухолевого супрессора WT1 или его неполного пептида, антитела к нему или специфичных к WT1 CTL в образце у положительного по HLA-A*0206 индивидуума, и стадию сравнения количества белка или его неполного пептида, антитела к нему или специфичным к WT1 CTL с количеством белка или его неполного пептида в случае, где злокачественная опухоль не развивается, или
ii) стадию введения положительному по HLA-A*0206 индивидууму специфичных к WT1 CTL, индуцированных способом, указанным в приведенном выше (7), или дендритных клеток, индуцированных способом, указанных в приведенном выше (8), и стадию определения положения или области CTL или дендритных клеток у положительного по HLA-A*0206 индивидуума.
(10) Вакцинная композиция против злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0201 индивидуумов, содержащая следующий пептид:
модифицированный пептид на основе пептида WT1187: Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 2), или пептида WT1126: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 3), каждый из которых представляет собой неполный пептид белкового продукта гена опухолевого супрессора WT1, где модифицированный пептид иммуногенен у положительных по HLA-A*0201 индивидуумов.
(11) Композиция по указанному выше (10), где модифицированный пептид представляет собой
пептид WT1187P1F: Phe Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 11),
пептид WT1187P2M: Ser Met Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 16),
пептид WT1187P3M: Ser Leu Met Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 20),
пептид WT1126P1F: Phe Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 34),
пептид WT1126P2L: Arg Leu Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 39),
пептид WT1126P3M: Arg Met Met Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 46) или
пептид WT1126P9V: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Val (SEQ ID NO: 49).
(12) Способ лечения или профилактики злокачественных опухолей, включающий введение положительному по HLA-A*0206 индивидууму композиции, содержащей белковый продукт гена опухолевого супрессора WT1 или его неполный пептид.
(13) Белковый продукт гена опухолевого супрессора WT1 или его неполный пептид для лечения или профилактики злокачественных опухолей у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов.
(14) Способ лечения или профилактики злокачественных опухолей, включающий введение положительному по HLA-A*0201 индивидууму композиции, содержащей следующий пептид:
модифицированный пептид на основе пептида WT1187: Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 2), или пептида WT1126: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 3), каждый из которых представляет собой неполный пептид белкового продукта гена опухолевого супрессора WT1, где модифицированный пептид иммуногенен у положительных по HLA-A*0201 индивидуумов,
(15) Пептид, представляющий собой:
модифицированный пептид на основе пептида WT1187: Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 2), или пептид WT1126: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 3), каждый из которых представляет собой неполный пептид белкового продукта гена опухолевого супрессора WT1, где модифицированный пептид иммуногенен у положительных по HLA-A*0201 индивидуумов,
для лечения или профилактики злокачественных опухолей у положительных по HLA-A*0201 индивидуумов.
(16) Способ лечения или профилактики злокачественных опухолей, включающий введение РНК, кодирующей белковый продукт гена опухолевого супрессора WT1 или его неполный пептид, в дендритные клетки положительного по HLA-A*0206 индивидуума.
(17) РНК, кодирующая белковый продукт гена опухолевого супрессора WT1 или его неполный пептид, для лечения или профилактики злокачественных опухолей у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов.
Настоящее изобретение также относится к применению белкового продукта гена опухолевого супрессора WT1 или его неполного пептида для получения вакцинной композиции против злокачественной опухоли, используемой для лечения или профилактики злокачественных опухолей у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов.
Настоящее изобретение также относится к применению следующего пептида:
модифицированный пептид на основе пептида WT1187: Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 2), или пептида WT1126: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 3), каждый из которых представляет собой неполный пептид белкового продукта гена опухолевого супрессора WT1, где модифицированный пептид иммуногенен у положительных по HLA-A*0201 индивидуумов,
для получения вакцинной композиции против злокачественной опухоли, используемой для лечения или профилактики злокачественных опухолей у положительных по HLA-A*0201 индивидуумов.
Как применяют в настоящем документе, "вакцинная композиция против злокачественной опухоли" (или "композиция против злокачественной опухоли") относится к лекарственному средству, применяемому для профилактики или лечения злокачественной опухоли посредством прививки или введения животному, включая человека. "Лечение", кроме полного излечения болезненного состояния, относится к остановке прогрессирования болезненного состояния посредством ингибирования прогрессирования и/или ухудшения симптомов до некоторой степени даже при неуспехе полного излечения; или к полному или частичному улучшению при болезненном состоянии в направлении излечения. "Профилактика" относится к профилактике, задержке или отсрочиванию развития заболевания.
Следующие термины: мононуклеарные клетки периферической крови, незрелые дендритные клетки, специфичные к WT1 CTL, образцы и т.д., полученные у положительных по HLA-A*0206 или положительных по HLA-A*0201 индивидуумов, относятся к мононуклеарным клеткам периферической крови, незрелым дендритным клеткам, специфичным к WT1 CTL, биологическим образцам и т.д., таким как кровь, которые выделены или собраны у положительных по HLA-A*0206 или положительных по HLA-A*0201 индивидуумов, соответственно. Специфичные к WT1 CTL, полученные у положительных по HLA-A*0206 или положительных по HLA-A*0201 индивидуумов, также включают CTL, индуцированные из мононуклеарных клеток периферической крови, незрелых дендритных клеток или биологических образцов, таких как кровь, которые выделены или собраны у положительных по HLA-A*0206 или положительных по HLA-A*0201 индивидуумов.
ЭФФЕКТ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение обеспечивает возможность индукции in vivo и in vitro специфичных к WT1 CTL у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов. Хотя субъекты иммунотерапии с применением содержащей белок WT1 или пептид WT1 вакцины, как правило, ограничены положительными по HLA-A*0201 пациентами и положительными по HLA-A*2402 пациентами, настоящее изобретение может расширить диапазон субъектов положительными по HLA-A*0206 пациентами. HLA-A2, который представляет собой серотип антигенов HLA класса I, наиболее часто встречается у европеоидов (приблизительно 50%), и у подавляющего большинства встречается HLA-A*0201, тогда приблизительно у 4% европеоидов встречается HLA-A*0206. С другой стороны, наиболее частым серотипом у японцев является HLA-A24 (приблизительно 58%), и у подавляющего большинства встречается HLA-A*2402. Приблизительно у 42% японцев встречается HLA-A2. Среди них, только приблизительно у 43% встречается HLA-A*0201, а у других встречается HLA-A*0206 или HLA-A*0207. Другими словами, приблизительно у 18% японцев встречается HLA-A*0201, и приблизительно у 17% японцев встречается HLA-A*0206. Таким образом, тот факт, что, по меньшей мере, рестриктированный по HLA-A*0206 эпитоп CTL идентифицирован у японцев, также как и рестриктированный по HLA-A*0201 эпитоп CTL, очень полезен для расширения диапазона субъектов иммунотерапии против злокачественных опухолей положительными по HLA-A*0206 индивидуумами. Так как этот аллель встречается у 14% китайцев и 9% южнокорейцев, можно применять вакцинную композицию против злокачественной опухоли по настоящему изобретению для дальнейшего расширения диапазона субъектов.
Вакцинная композиция против злокачественной опухоли по настоящему изобретению пригодна для лечения экспрессирующих WT1 злокачественных опухолей, таких как опухоли системы кроветворения и солидные злокачественные опухоли у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов. Вакцинная композиция против злокачественной опухоли по настоящему изобретению также пригодна для профилактики развития злокачественной опухоли у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР
На фиг. 1 показана цитотоксическая активность специфичных к пептиду WT1187 CTL, индуцированных из PBMC положительного по HLA-A*0206 здорового донора крови. На фиг. 1a показана цитотоксическая активность против меченных 51Cr B-LCL. На фиг. 1b показано, что цитотоксическая активность против меченных 51Cr аутологичных B-LCL увеличивается параллельно концентрации пептида WT1187, используемого для примирования им PBMC.
На фиг. 2 показана цитотоксическая активность специфичных к пептиду WT1187 CTL, индуцированных из PBMC положительного по HLA-A*0206 здорового донора крови. На фиг. 2a и 2b показана соответствующая цитотоксическая активность CTL, раздельно полученных у двух здоровых доноров крови, отличных от донора крови на фиг. 1a, против меченных 51Cr B-LCL.
На фиг. 3a показана цитотоксическая активность специфичных к пептиду WT1187 CTL против B-LCL, трансформированных геном WT1, или B-LCL, трансформированных пустым контрольным вектором. На фиг. 3b показана цитотоксическая активность специфичных к пептиду WT1187 CTL против клеток 0206K562, клеток K562, клеток KH88 или клеток JY.
На фиг. 4 показано ингибирование цитотоксической активности специфичных к пептиду WT1187 CTL антителами к HLA класса I и/или класса II.
На фиг. 5 показана цитотоксическая активность против меченных 51Cr B-LCL, специфичных к пептиду WT1126 CTL, индуцированных из PBMC положительного по HLA-A*0206 здорового донора крови.
На фиг. 6a и 6b показана соответствующая цитотоксическая активность специфичных к пептиду WT1126 CTL, раздельно индуцированных у двух различных доноров, против клеток 0206K562, клеток K562, клеток KH88 или клеток JY.
На фиг. 7 показаны результаты проточного цитометрического анализа CTL, окрашенных тетрамерами HLA, связанными с пептидом WT1126, и антителами к CD8. CTL индуцированы посредством стимуляции PBMC от положительного по HLA-A*0201 донора 1 модифицированными пептидами.
На фиг. 8 приведены результаты измерения цитотоксической активности CTL, индуцированных стимуляцией PBMC от положительного по HLA-A*0201 донора 1 пептидом WT1126P1F.
На фиг. 9 приведены результаты измерения цитотоксической активности CTL, индуцированных стимуляцией PBMC от положительного по HLA-A*0201 донора 1 пептидом WT1126P2L.
На фиг. 10 приведены результаты проточного цитометрического анализа CTL, окрашенных тетрамерами HLA, связанными с пептидом WT1126, и антителами к CD8. CTL индуцированы посредством стимуляции PBMC от положительного по HLA-A*0201 донора 2 пептидом WT1126P2L.
На фиг. 11 приведены результаты измерения цитотоксической активности CTL, индуцированных посредством стимуляции PBMC от донора 2 пептидом WT1126P2L.
На фиг. 12 приведены результаты измерения цитотоксической активности CTL, индуцированных посредством стимуляции PBMC от положительного по HLA-A*0206 донора 3 модифицированными пептидами WT1126.
На фиг. 13 приведены результаты измерения цитотоксической активности CTL, индуцированных посредством стимуляции PBMC от положительного по HLA-A*0206 донора 3 пептидом WT1126P9V.
На фиг. 14 приведены результаты измерения цитотоксической активности CTL, индуцированных стимуляцией PBMC от положительного по HLA-A*0206 донора 4 модифицированными пептидами WT1126.
На фиг. 15 приведены результаты измерения цитотоксической активности CTL, индуцированных стимуляцией PBMC от положительного по HLA-A*0206 донора 4 модифицированными пептидами WT1126.
На фиг. 16 приведены результаты измерения цитотоксической активности CTL, индуцированных стимуляцией PBMC от положительного по HLA-A*0201 донора модифицированными пептидами WT1187.
На фиг. 17 приведены результаты измерения цитотоксической активности CTL, индуцированных посредством стимуляции PBMC от положительного по HLA-A*0206 донора пептидом WT1187P1F.
На фиг. 18 приведены результаты измерения цитотоксической активности CTL, индуцированных посредством стимуляции PBMC от положительного по HLA-A*0206 донора пептидом WT1187P2M.
На фиг. 19 приведены результаты оценки действия модифицированных пептидов WT1187 на активность индукции специфического клеточного иммунитета.
На фиг. 20 приведены результаты оценки действия модифицированных пептидов WT1187 на активность индукции специфического клеточного иммунитета.
На фиг. 21 приведены результаты оценки действия модифицированных пептидов WT1187 на активность индукции специфического клеточного иммунитета.
На фиг. 22 приведены результаты оценки действия модифицированных пептидов WT1187 на активность индукции специфического клеточного иммунитета.
На фиг. 23 приведены результаты оценки действия модифицированных пептидов WT1126 на активность индукции специфического клеточного иммунитета.
На фиг. 24 приведены результаты оценки действия модифицированных пептидов WT1126 на активность индукции специфического клеточного иммунитета.
На фиг. 25 приведены результаты оценки действия модифицированных пептидов WT1126 на активность индукции специфического клеточного иммунитета.
На фиг. 26 приведены результаты оценки действия модифицированных пептидов WT1126 на активность индукции специфического клеточного иммунитета.
На фиг. 27 приведены результаты оценки действия модифицированных пептидов WT1126 на активность индукции специфического клеточного иммунитета.
На фиг. 28 приведены результаты оценки действия модифицированных пептидов WT1187 на активность индукции специфического клеточного иммунитета.
На фиг. 29 приведены результаты оценки действия модифицированных пептидов WT1187 на активность индукции специфического клеточного иммунитета.
На фиг. 30 приведены результаты оценки действия модифицированных пептидов WT1126 на активность индукции специфического клеточного иммунитета.
На фиг. 31 приведены результаты оценки действия модифицированных пептидов WT1126 на активность индукции специфического клеточного иммунитета.
На фиг. 32 приведены результаты оценки действия модифицированных пептидов WT1126 на активность индукции специфического клеточного иммунитета.
ЛУЧШИЙ СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Далее в настоящем документе будет проиллюстрировано настоящее изобретение.
Когда в настоящем описании и рисунках сокращенно представляют аминокислотные остатки, используют следующие коды:
Ala или A: остаток аланина
Arg или R: остаток аргинина
Asn или N: остаток аспарагина
Asp или D: остаток аспарагиновой кислоты
Cys или C: остаток цистеина
Gln или Q: остаток глутамина
Glu или E: остаток глутаминовой кислоты
Gly или G: остаток глицина
His или H: остаток гистидина
Ile или I: остаток изолейцина
Leu или L: остаток лейцина
Lys или K: остаток лизина
Met или M: остаток метионина
Phe или F: остаток фенилаланина
Pro или P: остаток пролина
Ser или S: остаток серина
Thr или T: остаток треонина
Trp или W: остаток триптофана
Tyr или Y: остаток тирозина
Val или V: остаток валина
Белок WT1 по настоящему изобретению может представлять собой продукт гена фактора транскрипции типа "цинковый палец", выделенного в качестве гена, являющегося причиной опухоли Вильмса, где продукт гена способен связываться с молекулой HLA-A*0206 и служить, таким образом, в качестве антигена-мишени злокачественных опухолей. Более конкретно, белок WT1 по настоящему изобретению предпочтительно представляет собой белок WT1 человека, состоящий из 449 аминокислот (список последовательностей: SEQ ID NO: 1), или белок, состоящий из аминокислотной последовательности, где в аминокислотной последовательности белка WT1 человека присутствует делеция, замена или добавление одной или нескольких аминокислот (предпочтительно приблизительно от 2 до 6 аминокислот), и которая является иммуногенной у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов. Аминокислоты, используемые для добавления или замены, кроме 20 кодируемых в генах аминокислот, могут являться неприродными аминокислотами.
Неполный пептид белка WT1 (пептид WT1) относится к пептиду, состоящему из части аминокислотной последовательности, составляющей белок WT1. Пептид WT1 может представлять собой пептид, состоящий из аминокислот в количестве от 8 до 12, предпочтительно из аминокислот в количестве от 8 до 9, происходящий из белка WT1 и связывающийся с молекулой HLA-A*0206 и, таким образом, индуцирующий цитотоксические T-клетки. Особенно предпочтительным является пептид WT1187 (Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val; SEQ ID NO: 2) или пептид WT1126 (Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu; SEQ ID NO: 3), оба описанные в публикации WO 00/06602.
В качестве пептида WT1 по настоящему изобретению также можно использовать модифицированный пептид с наличием делеции, замены или добавления одной или нескольких аминокислот пептида WT1 при условии, что он является иммуногенным у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов. Примеры такого модифицированного пептида включают модифицированный пептид WT1187 и модифицированный пептид WT1126.
Модифицированный пептид WT1187 предпочтительно представляет собой пептид, содержащий те же аминокислотные остатки (EQQYS) в положениях от 4 до 8 от N-конца, которые в тех же положениях содержит пептид WT1187, а более предпочтительно - пептид, содержащий те же аминокислотные остатки (EQQYSV) в положениях от 4 до 9 от N-конца, которые в соответствующих положениях содержит пептид WT1187. Такой модифицированный пептид WT1187 предпочтительно представляет собой пептид, состоящий из любой из приведенных далее аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 4-26 и 54-62.
Пептид WT1187P1G (GLGEQQYSV; SEQ ID NO: 4)
Пептид WT1187P1A (ALGEQQYSV; SEQ ID NO: 5)
Пептид WT1187P1V (VLGEQQYSV; SEQ ID NO: 6)
Пептид WT1187P1L (LLGEQQYSV; SEQ ID NO: 7)
Пептид WT1187P1I (ILGEQQYSV; SEQ ID NO: 8)
Пептид WT1187P1M (MLGEQQYSV; SEQ ID NO: 9)
Пептид WT1187P1W (WLGEQQYSV; SEQ ID NO: 10)
Пептид WT1187P1F (FLGEQQYSV; SEQ ID NO: 11)
Пептид WT1187P1Y (YLGEQQYSV; SEQ ID NO: 12)
Пептид WT1187P2V (SVGEQQYSV; SEQ ID NO: 13)
Пептид WT1187P2Q (SQGEQQYSV; SEQ ID NO: 14)
Пептид WT1187P2I (SIGEQQYSV; SEQ ID NO: 15)
Пептид WT1187P2M (SMGEQQYSV; SEQ ID NO: 16)
Пептид WT1187P3L (SLLEQQYSV; SEQ ID NO: 17)
Пептид WT1187P3A (SLAEQQYSV; SEQ ID NO: 18)
Пептид WT1187P3V (SLVEQQYSV; SEQ ID NO: 19)
Пептид WT1187P3M (SLMEQQYSV; SEQ ID NO: 20)
Пептид WT1187P3P (SLPEQQYSV; SEQ ID NO: 21)
Пептид WT1187P3W (SLWEQQYSV; SEQ ID NO: 22)
Пептид WT1187P3F (SLFEQQYSV; SEQ ID NO: 23)
Пептид WT1187P3Y (SLYEQQYSV; SEQ ID NO: 24)
Пептид WT1187P3S (SLSEQQYSV; SEQ ID NO: 25)
Пептид WT1187P3I (SLIEQQYSV; SEQ ID NO: 26)
Пептид WT1187P9L (SLGEQQYSL; SEQ ID NO: 53)
Пептид WT1187P1D (DLGEQQYSV; SEQ ID NO: 54)
Пептид WT1187P1E (ELGEQQYSV; SEQ ID NO: 55)
Пептид WT1187P1H (HLGEQQYSV; SEQ ID NO: 56)
Пептид WT1187P1K (KLGEQQYSV; SEQ ID NO: 57)
Пептид WT1187P1N (NLGEQQYSV; SEQ ID NO: 58)
Пептид WT1187P1P (PLGEQQYSV; SEQ ID NO: 59)
Пептид WT1187P1Q (QLGEQQYSV; SEQ ID NO: 60)
Пептид WT1187P1R (RLGEQQYSV; SEQ ID NO: 61)
Пептид WT1187P1T (TLGEQQYSV; SEQ ID NO: 62)
Модифицированный пептид WT1126 предпочтительно представляет собой пептид, содержащий те же аминокислотные остатки (PNAPY) в положениях от 4 до 8 от N-конца, которые в соответствующих положениях содержит пептид WT1126. Такой модифицированный пептид WT1126 предпочтительно представляет собой пептид, состоящий из любой из приведенных далее аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 27-52 и 63-75.
Пептид WT1126P1G (GMFPNAPYL; SEQ ID NO: 27)
Пептид WT1126P1A (AMFPNAPYL; SEQ ID NO: 28)
Пептид WT1126P1V (VMFPNAPYL; SEQ ID NO: 29)
Пептид WT1126P1L (LMFPNAPYL; SEQ ID NO: 30)
Пептид WT1126P1I (IMFPNAPYL; SEQ ID NO: 31)
Пептид WT1126P1M (MMFPNAPYL; SEQ ID NO: 32)
Пептид WT1126P1W (WMFPNAPYL; SEQ ID NO: 33)
Пептид WT1126P1F (FMFPNAPYL; SEQ ID NO: 34)
Пептид WT1126P1Y (YMFPNAPYL; SEQ ID NO: 35)
Пептид WT1126P2V (RVFPNAPYL; SEQ ID NO: 36)
Пептид WT1126P2Q (RQFPNAPYL; SEQ ID NO: 37)
Пептид WT1126P2A (RAFPNAPYL; SEQ ID NO: 38)
Пептид WT1126P2L (RLFPNAPYL; SEQ ID NO: 39)
Пептид WT1126P2I (RIFPNAPYL; SEQ ID NO: 40)
Пептид WT1126P3I (RMIPNAPYL; SEQ ID NO: 41)
Пептид WT1126P3L (RMLPNAPYL; SEQ ID NO: 42)
Пептид WT1126P3G (RMGPNAPYL; SEQ ID NO: 43)
Пептид WT1126P3A (RMAPNAPYL; SEQ ID NO: 44)
Пептид WT1126P3V (RMVPNAPYL; SEQ ID NO: 45)
Пептид WT1126P3M (RMMPNAPYL; SEQ ID NO: 46)
Пептид WT1126P3P (RMPPNAPYL; SEQ ID NO: 47)
Пептид WT1126P3W (RMWPNAPYL; SEQ ID NO: 48)
Пептид WT1126P9V (RMFPNAPYV; SEQ ID NO: 49)
Пептид WT1126P9A (RMFPNAPYA; SEQ ID NO: 50)
Пептид WT1126P9I (RMFPNAPYI; SEQ ID NO: 51)
Пептид WT1126P9M (RMFPNAPYM; SEQ ID NO: 52)
Пептид WT1126P1D (DMFPNAPYL; SEQ ID NO: 63)
Пептид WT1126P1E (EMFPNAPYL; SEQ ID NO: 64)
Пептид WT1126P1H (HMFPNAPYL; SEQ ID NO: 65)
Пептид WT1126P1K (KMFPNAPYL; SEQ ID NO: 66)
Пептид WT1126P1N (NMFPNAPYL; SEQ ID NO: 67)
Пептид WT1126P1P (PMFPNAPYL; SEQ ID NO: 68)
Пептид WT1126P1Q (QMFPNAPYL; SEQ ID NO: 69)
Пептид WT1126P1S (SMFPNAPYL; SEQ ID NO: 70)
Пептид WT1126P1T (TMFPNAPYL; SEQ ID NO: 71)
Пептид WT1126P2I&P9I (RIFPNAPYI; SEQ ID NO: 72)
Пептид WT1126P2I&P9V (RIFPNAPYV; SEQ ID NO: 73)
Пептид WT1126P2L&P9I (RLFPNAPYI; SEQ ID NO: 74)
Пептид WT1126P2L&P9V (RLFPNAPYV; SEQ ID NO: 75)
Кроме прочего, модифицированный пептид WT1187 предпочтительно представляет собой пептид WT1187P1F (SEQ ID NO: 11), пептид WT1187P2M (SEQ ID NO: 16) или пептид WT1187P3M (SEQ ID NO: 20), более предпочтительно - пептид WT1187P1F или пептид WT1187P2M, а еще более предпочтительно - пептид WT1187P2M. Модифицированный пептид WT1126 предпочтительно представляет собой пептид WT1126P1F (SEQ ID NO: 34), пептид WT1126P2L (SEQ ID NO: 39), пептид WT1126P3M (SEQ ID NO: 46) или пептид WT1126P9V (SEQ ID NO: 49), более предпочтительно - пептид WT1126P2L, пептид WT1126P3M или пептид WT1126P9V, а еще более предпочтительно - пептид WT1126P9V.
Пептид WT1 в вакцинной композиции против злокачественной опухоли по настоящему изобретению предпочтительно представляет собой пептид WT1187, пептид WT1126, пептид WT1187P1F, пептид WT1187P2M, пептид WT1187P3M, пептид WT1126P1F, пептид WT1126P2L, пептид WT1126P3M или пептид WT1126P9V. Более предпочтителен пептид WT1187, пептид WT1126, пептид WT1187P1F, пептид WT1187P2M, пептид WT1126P2L, пептид WT1126P3M или пептид WT1126P9V. Еще предпочтительнее пептид WT1187, пептид WT1126, пептид WT1187P2M или пептид WT1126P9V. Особенно предпочтителен пептид WT1187 или пептид WT1126.
Также в качестве пептида WT1 можно использовать производное пептида WT1. Например, производное пептида WT1187 или WT1126 может быть образовано из аминокислотной последовательности из указанных выше 9 смежных аминокислот и различных веществ, связанных с ее N- и/или C-концом. Различные вещества могут представлять собой, например, аминокислоты, пептиды, их аналоги и т.д. Такое вещество, связанное с пептидом WT1187, пептидом WT1126 или их модифицированным пептидом претерпевает, например, in vivo, ферментативное преобразование в результате внутриклеточного процессинга и т.д., и, наконец, образуется пептид, состоящий из указанных выше 9 аминокислот и представляется в виде комплекса с молекулой HLA-A*0206 на клеточной поверхности. Таким образом, у пациентов с HLA-A*0206 можно индуцировать специфичный ответ CTL на WT1.
Пептид WT1 можно получать способом, как правило используемым в данной области техники, таким как способ пептидного синтеза, описанный в Peptide Synthesis, Interscience, New York, 1966; The Proteins, Vol. 2, Academic Press Inc., New York, 1976; Peptide synthesis, Maruzen Co., Ltd., 1975; Basis and Experiments of Peptide Synthesis, Maruzen Co., Ltd. 1985; the Sequel to Development of Pharmaceuticals, Vol. 14 (peptide synthesis), Hirokawa Publishing Company, 1991 и т.д.
В качестве способа скрининга пептида WT1 и его модифицированного пептида, вследствие простоты, предпочтителен, например, способ, включающий проведение анализа IFNγ при одноразовой стимуляции пептидом PBMC (мононуклеарных клеток периферической крови) некоторых пациентов с HLA-A*0206, а затем отбор пептида, демонстрирующего хороший ответ.
В настоящем изобретении в качестве активного ингредиента вакцинной композиции против злокачественной опухоли также можно использовать полинуклеотиды, такие как ДНК, кодирующую указанный выше белок WT1 или пептид WT1, иммуногенный у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов. То есть, вставляя полинуклеотид, кодирующий белок WT1 или пептид WT1, в подходящий вектор, предпочтительно экспрессирующий вектор, и затем, вводя вектор животным, включая людей, в живом организме можно индуцировать направленный на злокачественные опухоли иммунитет. Примеры полинуклеотида включают ДНК, РНК и т.п., а предпочтительными являются ДНК или РНК. Последовательность оснований полинуклеотида можно определять на основе аминокислотной последовательности белка WT1 или пептида WT1, иммуногенного у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов. Полинуклеотид можно получать известным способом синтеза ДНК или РНК, способом ПЦР и т.д. Такая вакцинная композиция против злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0206 индивидуумов, содержащая ДНК, кодирующую белок WT1 или пептид WT1, также является одним из аспектов настоящего изобретения. Белок WT1 или пептид WT1 предпочтительно представляет собой пептид WT1, более предпочтительно - пептид WT1187, пептид WT1126 или его модифицированный пептид, а наиболее предпочтительно - пептид WT1187 или пептид WT1126. Экспрессирующий вектор, используемый для вставки в него указанной выше ДНК, конкретно не ограничен. РНК не нужно вставлять в вектор, а можно использовать в качестве активного ингредиента композиции как есть.
Вакцинная композиция против злокачественной опухоли по настоящему изобретению может содержать адъювант. Адъювант не ограничен, при условии, что, после введения вместе или раздельно с белком WT1 или пептидом WT1, используемым как антиген, он может неспецифически усиливать иммунный ответ на антиген. Примеры адъюванта включают адъюванты осаждающего типа и масляные адъюванты. Примеры адъювантов осаждающего типа включают гидроксид натрия, гидроксид алюминия, фосфат кальция, фосфат алюминия, квасцы, PEPES и карбоксивиниловые полимеры. Предпочтительным масляным адъювантом является адъювант, который может формировать мицеллы так, что масло заключает водный раствор антигена. Конкретные их примеры включают парафиновое масло, ланолин, Freund, Montanide ISA-763AVG, Montanide ISA-51, неполный адъювант Фрейнда и полный адъювант Фрейнда. Эти адъюванты также можно использовать в виде смеси двух или более их видов. Предпочтительным является масляный адъювант.
Количество адъюванта в вакцинной композиции против злокачественной опухоли по настоящему изобретению конкретно не ограничено при условии, что иммунологический ответ на антигены можно неспецифически усилить. Его количество можно соответственно выбрать в зависимости от вида адъюванта и т.д.
Вакцинную композицию против злокачественной опухоли по настоящему изобретению можно вводить перорально или парентерально (например, интраперитонеально, подкожно, внутрикожно, внутримышечно, внутривенно, интраназально и т.д.). В случае парентерального введения активный ингредиент, т.е. белок WT1 или пептид WT1, также может впитываться через кожу посредством нанесения вакцинной композиции на кожу, или посредством прикрепления к коже пластыря, содержащего вакцинную композицию. Вакцинную композицию по настоящему изобретению также можно водить посредством ингаляции и т.д. Вакцинную композицию предпочтительно вводят парентерально, а более предпочтительно - внутрикожно или подкожно. Например, часть тела для интрадермального или подкожного введения предпочтительно представляет собой плечо и т.д.
Вакцинная композиция против злокачественной опухоли по настоящему изобретению может находиться в различных лекарственных формах в зависимости от способа его введения, а его иллюстративные лекарственные формы включают твердый препарат и жидкий препарат. Вакцинная композиция против злокачественной опухоли может находиться, например, в форме твердого или жидкого препарата для внутреннего применения путем перорального введения, в форме инъекции для парентерального введения и т.п.
Примеры твердых препаратов для внутреннего применения посредством перорального введения включают таблетки, пилюли, капсулы, порошки и гранулы.
Для получения твердого препарата для внутреннего применения белок WT1 или пептид WT1 не обрабатывают, смешивают с добавкой или гранулируют (например, в соответствии со способом грануляции при перемешивании, грануляции в псевдоожиженном слое, сухой грануляции, грануляции в псевдоожиженном слое при вращении и перемешивании и т.д.), а затем обрабатывают обычным способом. Например, капсулы можно получать посредством инкапсуляции и т.д., а таблетки можно получать посредством таблетирования и т.д. В твердый препарат соответствующим образом можно добавлять один или два или более видов добавок. Примеры добавок включают эксципиенты, такие как лактоза, маннит, глюкоза, микрокристаллическая целлюлоза и кукурузный крахмал; связывающие средства, такие как гидроксипропилцеллюлоза, поливинилпирролидон и алюминометасиликат магния; диспергирующие средства, такие как кукурузный крахмал; дезинтегрирующие средства, такие как карбоксиметилцеллюлоза кальция; смазывающие средства, такие как стеарат магния; растворители, такие как глутаминовая кислота и аспарагиновая кислота; стабилизаторы; водорастворимые полимеры, включая целлюлозы, такие как гидроксипропилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза и метилцеллюлоза, и синтетические полимеры, такие как полиэтиленгликоль, поливинилпирролидон и поливиниловый спирт; и подсластители, такие как белый сахар, порошковый сахар, сахароза, фруктоза, глюкоза, лактоза, сироп из восстановленной мальтозы (мальтитный сироп), порошок сиропа из восстановленной мальтозы (порошок мальтитного сиропа), кукурузный сироп с высоким содержанием глюкозы, кукурузный сироп с высоким содержанием фруктозы, мед, сорбит, мальтит, маннит, ксилит, эритритол, аспартам, сахарин и сахаринат натрия.
Если необходимо, гранулы или таблетки можно покрывать покрывающим средством и т.д., и их можно покрывать двумя или более его слоями. Примеры покрывающего средства включают белый сахар, желатин, фталат гидроксипропилцеллюлозы и гидроксипропилметилцеллюлозы. Капсулы можно получать, смешивая активный ингредиент с гидратом пранлукаста и эксципиентом, соответствующим образом выбранным из указанных выше эксципиентов, необязательно гранулируя смесь и необязательно покрывая полученные гранулы покрывающим средством с последующим заполнением капсул. Альтернативно капсулы можно получать, добавляя в соответствующую основу для капсул (желатин и т.д.) глицерин, сорбит и т.д. для увеличения ее пластичности, и инкапсулируя активный ингредиент в полученную основу. Если необходимо, к основе для капсул можно добавлять окрашивающее вещество или консервант (диоксид серы и парабены, такие как метилпарагидроксибензоат, этилпарагидроксибензоат и пропилпарагидроксибензоат). Капсулы включают твердые капсулы и мягкие капсулы.
Примеры жидкого препарата для внутреннего применения путем перорального введения включают воду, суспензии/эмульсии, сиропы, препараты для растворения перед применением, такие как безводные сиропы и эликсиры. Для получения жидкого препарата для внутреннего применения белок WT1 или пептид WT1 растворяют, суспендируют или эмульгируют в разбавителе, как правило, применяемом для жидких препаратов для внутреннего применения. Примеры разбавителя включают очищенную воду, этанол и их смесь. Жидкий препарат может дополнительно содержать увлажнитель, суспендирующее средство, эмульгатор, подсластитель, средство для придания вкуса, ароматизатор, консервант или буферное средство. Например, безводные сиропы можно получать, смешивая активный ингредиент с гидратом пранлукаста и добавляя такой ингредиент, как белый сахар, порошковый сахар, сахароза, фруктоза, глюкоза и лактоза. Также безводные сиропы можно обычным способом помещать в гранулы.
Примеры лекарственной формы для парентерального введения включают инъекционные формы, мази, гели, кремы, пластыри, аэрозоли и спреи. Предпочтительными являются инъекционные формы. Например, инъекционная форма предпочтительно содержит традиционный носитель с белком WT1 или пептидом WT1.
Инъекционная форма для парентерального введения может представлять собой водную инъекционную форму или масляную инъекционную формы. Водную инъекционную форму можно получать известным способом, например, соответствующим образом добавляя фармацевтически приемлемую добавку к водному растворителю (вода для инъекций, очищенная вода и т.д.) с получением раствора, смешивая белок WT1 или пептид WT1 с раствором, стерилизуя посредством фильтрации полученную смесь с применением фильтра и т.д., а затем заполняя полученным фильтратом асептический контейнер. Примеры фармацевтически приемлемой добавки включают указанные выше адъюванты; средства придания изотоничности, такие как хлорид натрия, хлорид калия, глицерин, маннит, сорбит, борная кислота, бура, глюкоза и пропиленгликоль; буферные средства, такие как раствор фосфатного буфера, раствор ацетатного буфера, раствор боратного буфера, раствор карбонатного буфера, раствор цитратного буфера, раствор буфера Tris, раствор глутаматного буфера и раствор соли эпсилон-аминокапроновой кислоты; консерванты, такие как метилпарагидроксибензоат, этилпарагидроксибензоат, пропилпарагидроксибензоат, бутилпарагидроксибензоат, хлорбутанол, бензиловый спирт, хлорид бензалкония, дегидроацетат натрия, эдетат натрия, борная кислота и бура; загустители, такие как гидроксиэтилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, поливиниловый спирт и полиэтиленгликоль; стабилизаторы, такие как гидросульфит натрия, тиосульфат натрия, эдетат натрия, цитрат натрия, аскорбиновая кислота и дибутилгидрокситолуол; и регуляторы pH, такие как соляная кислота, гидроксид натрия, фосфорная кислота и уксусная кислота. Инъекционная форма может дополнительно содержать подходящий растворитель, и его примеры включают спирты, такие как этанол; полиспирты, такие как пропиленгликоль и полиэтиленгликоль; и неионные поверхностно-активные средства, такие как полисорбат 80, полиоксиэтилен-гидрогенизированное касторовое масло 50, лизолецитин и полиолы-плюроники. Также в инъекционной форме могут содержаться белки, такие как бычий сывороточный альбумин и гемоцианин морского блюдца; полисахариды, такие как аминодекстран, и т.д. Для препарата масляной инъекционной формы в качестве масляного растворителя используют, например, кунжутное масло или соевое масло, а в качестве солюбилизатора можно смешивать бензилбензоат или бензиловый спирт. Полученную инъекционную форму, как правило, хранят в подходящей ампуле, флаконе и т.д. Из жидких препаратов, таких как инъекционные формы, также можно удалять влагу и их можно сохранять посредством криоконсервации или лиофилизации. Лиофилизированные препараты готовят к применению посредством повторного их растворения в добавляемой дистиллированной воде для инъекций и т.д. непосредственно перед применением.
Другая лекарственная форма вакцинной композиции против злокачественной опухоли по настоящему изобретению может представлять собой липосому, содержащую белок WT1 или пептид WT1 и, если необходимо, полисахариды и/или другие ингредиенты, которые можно смешивать в вакцинную композицию против злокачественной опухоли.
Доза вакцинной композиции против злокачественной опухоли по настоящему изобретению варьирует в зависимости от разновидности используемых белка WT1, пептида WT1 или ДНК, возраста и массы тела пациента, подлежащего лечению заболевания и т.д. Например, в случае вакцинной композиции, содержащей пептид WT1, например, пептид WT1187 или пептид WT1126, суточная доза предпочтительно составляет приблизительно от 0,1 мкг/кг массы тела до 1 мг/кг массы тела в расчете на количество пептида WT1. Доза пептида WT1, как правило, составляет от 0,0001 мг до 1000 мг, предпочтительно - от 0,01 мг до 1000 мг, и более предпочтительно - от 0,1 мг до 10 мг. Это количество предпочтительно вводят один раз в течение срока от нескольких суток до нескольких месяцев.
Вакцинная композиция против злокачественной опухоли по настоящему изобретению представляет собой вакцинную композицию против злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0206 индивидуумов. Тип HLA, который является характеристикой для отбора положительных по HLA-A*0206 индивидуумов, можно определять, например, по периферической крови доноров. Примеры способа определения типа HLA включают известные способы, такие как способ типирования ДНК, например, способ SBT (типирования на основе секвенирования) или способ SSP, и способ типирования HLA. В способе SBT для точного определения генотипа HLA последовательность оснований амплифицированной посредством ПЦР ДНК сравнивают с данными о последовательности оснований известных аллелей. В способе SSP после амплификации посредством ПЦР с использованием множества праймеров, специфичных для соответствующих аллелей HLA, проводят последующий электрофорез для проверки наличия конкретной полосы. Таким образом, можно идентифицировать генотип HLA.
Когда вакцинную композицию против злокачественной опухоли по настоящему изобретению вводят положительному по HLA-A*0206 индивидууму, то рестриктированный по HLA-A*0206 белок WT1 или пептид WT1 в вакцинной композиции или белок WT1 или пептид WT1, экспрессированный с ДНК или РНК в вакцинной композиции, связывается с молекулой HLA-A*0206 на поверхности антигенпредставляющей клетки (дендритной клетки) положительного по HLA-A*0206 индивидуума. Это индуцирует специфический противоопухолевый иммунитет, т.е. специфичные к WT1 CTL, которые разрушают злокачественные клетки у индивидуума (положительного по HLA-A*0206 индивидуума).
Такой противоопухолевый иммунитет можно проверять, например, посредством специфичного ответа CTL на WT1, тестирования цитотоксичности против злокачественных клеток (например, тестирования цитотоксичности по высвобождению 51Cr) и т.д. Например, рестриктированные по HLA-A*0201 пептид WT1187 и пептид WT1126, каждый состоящий из 9 аминокислот, происходящих из белка WT1, который, как опубликовано, способен индуцировать специфичный ответ CTL на WT1, могут индуцировать рестриктированный по HLA-A*0206 ответ. Приблизительно 17% японцев являются положительными по HLA-A*0206, в то же время почти такая же часть положительна по HLA-A*0201. В следующих ниже примерах с 1 по 5, специфичные к пептиду WT1187 CTL получают из PBMC трех положительных по HLA-A*0206 доноров крови. Индуцированные CTL продемонстрировали цитотоксическое действие на экспрессирующие WT1 положительные по HLA-A*0206 лейкозные клетки. Так как специфичную к пептиду WT1187 и к пептиду WT1126 активность CTL можно ингибировать посредством антител к HLA класса I, выявлено, что эту активность демонстрируют рестриктированные по HLA класса I CTL. Белок WT1 или пептид WT1, включая пептид WT1187 и/или пептид WT1126, или их модифицированные пептиды могут представлять собой вакцину для положительных по HLA-A*0206 пациентов со злокачественными опухолями, а также положительных по HLA-A*0201 пациентов со злокачественными опухолями. Таким образом, иммунотерапию на основе белка WT1 или пептида WT1 для пациентов со злокачественными опухолями, такими как опухоли системы кроветворения и солидные злокачественные опухоли, можно дополнительно применять для положительных по HLA-A*0206 пациентов со злокачественными опухолями. Способ лечения и/или профилактики злокачественных опухолей у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов, включающий введение вакцинной композиции против злокачественной опухоли по настоящему изобретению положительному по HLA-A*0206 индивидууму, является одним из предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения.
У положительных по HLA-A*0206 индивидуумов вакцинную композицию против злокачественной опухоли по настоящему изобретению можно использовать для лечения и/или профилактики злокачественных опухолей, сопровождающихся увеличенной экспрессией гена WT1: например, опухолей системы кроветворения, таких как лейкоз, миелодиспластический синдром, множественная миелома и злокачественная лимфома; и солидных злокачественных опухолей, таких как рак желудка, рак толстого кишечника, рак легких, рак молочной железы, рак половых клеток, рак печени, рак кожи, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы, рак матки, рак шейки матки и рак яичников.
Иллюстративный способ введения вакцинной композиции против злокачественной опухоли по настоящему изобретению представляет собой способ, включающий сбор PBMC из периферической крови положительного по HLA-A*0206 пациента, извлечение дендритных клеток из PBMC, примирование дендритных клеток пептидом, например пептидом WT1187 или пептидом WT1126, или полинуклеотидом, например ДНК или РНК, содержащихся в качестве активного ингредиента в вакцинной композиции против злокачественной опухоли по настоящему изобретению, и возврат дендритных клеток пациенту посредством подкожного введения и т.д. Условия для примирования дендритных клеток пептидом WT1 и т.д. конкретно не ограничены, при условии, что достигается эффект по настоящему изобретению, и они могут представлять собой обычные условия.
В случае, когда для вакцинной композиции против злокачественной опухоли используют РНК, кодирующую белок WT1 или пептид WT1, предпочтительно, чтобы композицию вводили так, чтобы РНК входила в дендритные клетки положительного по HLA-A*0206 индивидуума. Иллюстративный способ введения РНК в дендритные клетки положительного по HLA-A*0206 индивидуума представляет собой способ, включающий сбор дендритных клеток у положительного по HLA-A*0206 индивидуума таким же способом, как указано выше, и введение РНК в дендритные клетки посредством электрического импульса. Белку WT1 или пептиду WT1, экспрессируемым с введенной в дендритные клетки РНК, позволяют презентироваться на их поверхности. Возвращая примированные РНК дендритные клетки положительному по HLA-A*0206 индивидууму, в живом организме можно быстро индуцировать направленный на злокачественные опухоли иммунитет. Такой способ лечения или профилактики злокачественных опухолей, включающий введение РНК, кодирующей белок WT1 или пептид WT1 в дендритные клетки положительного по HLA-A*0206 индивидуума, представляет собой один из предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу индукции специфичных к WT1 CTL, культивируя PBMC, полученные у положительного по HLA-A*0206 индивидуума в присутствии белка WT1 или пептида WT1, с получением индуцируемых из них специфичных к WT1 CTL. Индивидуум, у которого можно получать PBMC, конкретно не ограничен, при условии, что индивидуум положителен по HLA-A*0206. Примеры белка WT1 или пептида WT1 включают пептид WT1187, пептид WT1126 и их модифицированный пептид, а предпочтительно - пептид WT1187 и пептид WT1126. Например, специфичные к WT1 CTL можно индуцировать из клеток-предшественников CTL, находящихся среди PBMC, культивируя PBMC, полученные у положительного по HLA-A*0206 индивидуума, в присутствии пептида WT1187 (или пептида WT1126). Условия культивирования PBMC, полученных у положительного по HLA-A*0206 индивидуума, конкретно не ограничены и могут представлять собой обычные условия. Полученные, таким образом, CTL распознают комплекс пептида WT1187 (или пептида WT1126) и молекулы HLA-A*0206. Таким образом, используя специфичные к WT1 CTL, индуцированные по настоящему изобретению, у положительного по HLA-A*0206 индивидуума можно специфически разрушать высокоэкспрессирующие WT1 опухолевые клетки, и, таким образом, можно лечить и/или предотвращать опухоли системы кроветворения и солидные злокачественные опухоли у индивидуума, т.е. положительного по HLA-A*0206 индивидуума. Способ введения таких специфичных к WT1 CTL положительному по HLA-A*0206 индивидууму конкретно не ограничен и, например, может являться таким же, как способ введения указанной выше вакцинной композиции против злокачественной опухоли.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к набору для индукции специфичных к WT1 CTL, содержащему в качестве основного составляющего рестриктированный по HLA-A*0206 белок WT1 или пептид WT1. Предпочтительно набор используют для указанного выше способа индукции специфичных к WT1 CTL, полученных у положительного по HLA-A*0206 индивидуума. Такой набор в дополнение к рестриктированному по HLA-A*0206 белку WT1 или пептиду WT1 может содержать, например, средства для сбора PBMC, адъювант и реакционный контейнер. Используя набор можно эффективно индуцировать специфичные к WT1 CTL, распознающие комплекс антигена злокачественной опухоли, такого как пептид WT1187 и пептид WT1126, и молекулы HLA-A*0206.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу индукции дендритных клеток, которые презентируют белок WT1 или пептид WT1, культивируя незрелые дендритные клетки, полученные у положительного по HLA-A*0206 индивидуума, в присутствии белка WT1 или пептида WT1, с получением индуцированных из них дендритных клеток, которые презентируют белок WT1 или пептид WT1. Примеры белка WT1 или пептида WT1 включают пептид WT1187, пептид WT1126 и их модифицированный пептид, а предпочтительно - пептид WT1187 и пептид WT1126. Индивидуум, у которого получают незрелые дендритные клетки, конкретно не ограничен, при условии, что индивидуум является положительным по HLA-A*0206. Так как незрелые дендритные клетки находятся среди PBMC и т.д., PBMC также можно культивировать в присутствии, например, пептида WT1187 или пептида WT1126. При введении полученных таким образом дендритных клеток положительному по HLA-A*0206 индивидууму, эффективно индуцируются указанные выше специфичные к WT1 CTL, и, таким образом, можно лечить и/или предотвращать опухоли системы кроветворения и солидные злокачественные опухоли у индивидуума. Способ введения таких дендритных клеток положительному по HLA-A*0206 индивидууму конкретно не ограничен и, например, может являться таким же, как способ введения указанной выше вакцинной композиции против злокачественной опухоли.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к набору для индукции дендритных клеток, которые презентируют белок WT1 или пептид WT1, содержащему в качестве основного составляющего рестриктированный по HLA-A*0206 белок WT1 или пептид WT1. Предпочтительно набор используют для указанного выше способа индукции дендритных клеток. Такой набор в дополнение к рестриктированному по HLA-A*0206 белку WT1 или пептиду WT1 может содержать, например, средства для сбора незрелых дендритных клеток и PBMC, адъювант и реакционный контейнер. Используя набор можно эффективно индуцировать дендритные клетки, презентирующие белок WT1 или пептид WT1 посредством молекулы HLA-A*0206.
Злокачественные опухоли у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов можно диагностировать, используя
(1) белок WT1 или пептид WT1, специфичные к WT1 CTL, индуцированные указанным выше способом, или дендритные клетки, индуцированные указанным выше способом, или
(2) антитело к следующему: белок WT1 или пептид WT1, специфичные к WT1 CTL, индуцированные указанным выше способом, или дендритные клетки, индуцированные указанным выше способом.
Такой способ диагностики злокачественных опухолей также является одним из аспектов настоящего изобретения. В указанном выше пункте (1), диагностику злокачественной опухоли предпочтительно проводят с применением специфичных к WT1 CTL, индуцированных указанным выше способом. Примеры белка WT1 или пептида WT1 включают пептид WT1187, пептид WT1126 и их модифицированный пептид, а предпочтительно - пептид WT1187 и пептид WT1126.
Иллюстративный способ диагностики злокачественной опухоли у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов по настоящему изобретению включает стадию детекции или количественного определения белка WT1 или пептида WT1, антител к ним или специфичных к WT1 CTL в образце, взятом у положительного по HLA-A*0206 индивидуума, и стадию сравнения количества белка или его неполного пептида, антител к ним или специфичных к WT1 CTL, с количеством белка или его неполного пептида, антител к ним или специфичных к WT1 CTL, в том случае, когда злокачественная опухоль не развивается.
В образце, взятом у пациента со злокачественной опухолью (например, в крови), присутствует пептид WT1 и/или белок WT1, высвобождаемые из злокачественных клеток, и усилен иммунологический ответ на антиген злокачественной опухоли. То есть, образец, взятый у пациента со злокачественной опухолью, содержит увеличенное количество антител к пептиду WT1 или белку WT1, специфичным к WT1 CTL и т.д. Поэтому, когда количество пептида WT1 или белка WT1, антител к ним или специфичных к WT1 CTL в образце увеличено по сравнению с количеством пептида WT1 или белка WT1, антител к ним или специфичных к WT1 CTL, в случае, когда злокачественная опухоль не развивается, возможно развилась злокачественная опухоль. Количество антител можно измерять, например, способом ELISA. Специфичные к WT1 CTL можно детектировать способом с использованием мультимеров WT1, таких как тетрамеры MHC, описанные ниже.
Альтернативно диагностику злокачественной опухоли также можно проводить посредством инкубации указанных выше CTL, дендритных клеток или антител совместно с образцом, взятым у положительного по HLA-A*0206 индивидуума, или вводя указанные выше CTL, дендритные клетки или антитела положительному по HLA-A*0206 индивидууму; а затем проводя определение расположения, области, количества и т.д. CTL, дендритных клеток или антител. Так как CTL и дендритные клетки обладают свойством собираться вокруг злокачественных клеток, можно осуществлять диагностику злокачественной опухоли посредством введения CTL или дендритных клеток индивидууму, и проверяя их расположение или область. Способ диагностики злокачественной опухоли у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов, включающий стадию введения специфичных к WT1 CTL или дендритных клеток, индуцированных указанным выше способом, положительному по HLA-A*0206 индивидууму, и стадию определения расположения или области CTL или дендритных клеток у положительного по HLA-A*0206 индивидуума, также представляет собой один из аспектов настоящего изобретения.
Диагностику злокачественной опухоли также можно осуществлять, инкубируя CTL или дендритные клетки совместно с образцом, взятым у положительного по HLA-A*0206 индивидуума, позволяя им реагировать, добавляя антитела к CTL или дендритным клеткам, продолжая инкубацию, и детектируя или количественно определяя посредством связанной с антителом метки и т.д. связанные антителами комплексы злокачественных клеток и CTL, связанные антителами дендритные клетки и т.д. Когда количество связанных антителами комплексов злокачественных клеток и CTL или связанных антителами дендритных клеток по сравнению со связанными антителами комплексами злокачественных клеток и CTL или связанными антителами дендритными клетками, в том случае, когда злокачественная опухоль не развивается, возможно, произошло развитие злокачественной опухоли. Указанные выше CTL, дендритные клетки или антитела могут быть мечеными. Мечение позволяет эффективное проведение диагностики. Примеры образца, взятого у положительного по HLA-A*0206 индивидуума, включают биологические образцы, получаемые у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов, такие как моча, кровь, жидкость тканевого экстракта, слюна, слезы и другие биологические жидкости, а предпочтительной является кровь.
Примеры способа диагностики злокачественной опухоли у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов с применением указанного выше белка WT1 или пептида WT1 включают анализ с тетрамерами MHC, анализ с пентамерами MHC и анализ с декстрамерами MHC, в каждом из которых в качестве антигена используют пептид WT1. Например, в анализе с тетрамерами MHC или анализе с пентамерами MHC с применением пептида WT1187 или пептида WT1126 в качестве антигенного пептида, специфичные к WT1 CTL у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов можно детектировать, применяя в качестве зонда комплекс MHC/пептид WT1187 или комплекс MHC/пептид WT1126. Так как пациенты со злокачественными опухолями демонстрируют высокую экспрессию специфичных к WT1 CTL, злокачественную опухоль можно диагностировать, изменяя экспрессию специфичных к WT1 CTL у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов. Так как у пациентов со злокачественными опухолями развивается развернутый иммунный ответ на антигены злокачественных опухолей, злокачественную опухоль также можно диагностировать, тестируя иммунный ответ на белок WT1 или пептид WT1 у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов. Примеры способа тестирования иммунного ответа включают способ, включающий измерение концентрации антител к белку WT1 или пептиду WT1 посредством ELISA. Такой способ диагностики злокачественной опухоли у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов с использованием белкового продукта гена опухолевого супрессора WT1 или его неполного пептида также представляет собой один из аспектов настоящего изобретения. Анализ с тетрамерами MHC и анализ с пентамерами MHC можно осуществлять известным способом с применением коммерчески доступного набора, например, "WT1 tetramer" (Medical & Biological Laboratories, Co., Ltd.).
Диагностику злокачественных опухолей для положительных по HLA-A*0206 индивидуумов также можно осуществлять способом, включающим стадию взаимодействия образца, взятого у положительного по HLA-A*0206 индивидуума, с антителом к следующему: белок WT1 или пептид WT1, специфичные к WT1 CTL, индуцированные указанным выше способом, или дендритные клетки, индуцированные указанным выше способом, и стадию детекции или количественного определения комплекса антитела с белком WT1 или пептидом WT1, или комплекса антитела со специфичными к WT1 CTL или дендритными клетками. Когда количество комплекса антитела с белком WT1 или пептидом WT1, или комплекса антитела со специфичными к WT1 CTL или дендритными клетками по сравнению с количеством комплекса антитела с белком WT1 или пептидом WT1, или комплекса антитела со специфичными к WT1 CTL или дендритными клетками, в случае, когда злокачественная опухоль не развивается, увеличено, возможно, произошло развитие злокачественной опухоли.
Примеры антитела к дендритным клеткам включают антитело, распознающее комплекс пептид WT1/HLA-A*0206. Так как такое антитело может распознавать пептид WT1 и молекулу HLA-A*0206, антитело может распознавать дендритные клетки с пептидом WT1, презентированным HLA класса I.
В качестве антитела к дендритным клеткам также можно использовать антитело, распознающее комплекс пептида WT1/HLA-A*0206/TCR (рецептор T-клеточных антигенов) CTL. Такое антитело может распознавать комплекс дендритной клетки и CTL и комплекс злокачественной клетки и CTL.
Диагностику злокачественной опухоли можно осуществлять, инкубируя такие антитела совместно с образцом, взятым у положительного по HLA-A*0206 индивидуума, позволяя им формировать комплекс, и детектируя или количественно определяя связанный антителами комплекс злокачественной клетки и CTL, связанные антителами дендритные клетки, презентирующие пептид WT1, или т.п. посредством флуоресцентного излучения излучаемого антителами. Когда количество связанного антителами комплекса злокачественных клеток и CTL, связанных антителами дендритных клеток, презентирующих пептид WT или т.п. по сравнению с количеством связанного антителами комплекса злокачественных клеток и CTL, связанных антителами дендритных клеток, презентирующих пептид WT, или т.п., в том случае, когда злокачественная опухоль не развивается, увеличено, возможно, произошло развитие злокачественной опухоли.
Способ лечения или профилактики злокачественных опухолей, включающий введение композиции, содержащей белок WT1 или пептид WT1, положительному по HLA-A*0206 индивидууму, также представляет собой один из аспектов настоящего изобретения. Композиция, содержащая белок WT1 или пептид WT1 и их предпочтительные варианты осуществления, является такой же, как описано в отношении указанной выше вакцинной композиции против злокачественной опухоли.
Применение белка WT1 или пептида WT1 для лечения или профилактики злокачественных опухолей у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов и их применение для получения вакцинной композиции против злокачественной опухоли, используемой для лечения или профилактики злокачественных опухолей у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов, также представляет собой один из аспектов настоящего изобретения. Белок WT1 или пептид WT1 и их предпочтительные варианты осуществления являются такими же, как описано в отношении указанной выше вакцинной композиции против злокачественной опухоли.
Вакцинная композиция против злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0201 индивидуумов, содержащая модифицированный пептид на основе пептида WT1187 (SEQ ID NO: 2) или пептида WT1126 (SEQ ID NO: 3), каждый из которых представляет собой неполный пептид белкового продукта гена опухолевого супрессора WT1, где модифицированный пептид иммуногенен у положительных по HLA-A*0201 индивидуумов, также представляет собой один из аспектов настоящего изобретения.
Примеры модифицированного пептида WT1187 или модифицированного пептида WT1126 включают пептиды с делецией, заменой или добавлением одной или нескольких аминокислот в указанном выше пептиде WT1187 или пептиде WT1126. Модифицированный пептид WT1187 предпочтительно представляет собой пептид, содержащий те же аминокислотные остатки в положениях от 4 до 8 от N-конца, которые в соответствующих положениях содержит пептид WT1187. В качестве такого модифицированного пептида предпочтительными являются указанные выше пептиды SEQ ID NO: 4-12, 15 и 16, 18-20 и 22-25. Также является предпочтительным пептид WT1187P9L (SLGEQQYSL; SEQ ID NO: 53). Модифицированный пептид WT1126 предпочтительно представляет собой пептид, содержащий те же аминокислотные остатки в положениях от 4 до 8 от N-конца, которые в соответствующих положениях содержит пептид WT1126. Например, предпочтительными являются указанные выше пептиды SEQ ID NO: 27-37 и 39-52.
В еще одном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения, в качестве модифицированного пептида WT1187 можно использовать указанные выше пептиды SEQ ID NO: 4-26 и 53-62, а в качестве модифицированного пептида WT1126 можно использовать указанные выше пептиды SEQ ID NO: 27-52 и 63-75. Среди модифицированных пептидов SEQ ID NO: 4-75, предпочтительными являются пептиды за исключением пептида WT1187P1D, пептида WT1187P1E, пептида WT1187P1H, пептида WT1187P1P и пептида WT1187P2Q и пептида WT1126P1D, пептида WT1126P1E, пептида WT1126P1P, пептида WT1126P2A и пептида WT1126P2Q.
В частности, модифицированный пептид WT1187 предпочтительно представляет собой пептид WT1187P1F, пептид WT1187P2M или пептид WT1187P3M, а более предпочтительно - пептид WT1187P1F или пептид WT1187P2M. Модифицированный пептид WT1126 предпочтительно представляет собой пептид WT1126P1F, пептид WT1126P2L, пептид WT1126P3M или пептид WT1126P9V, а более предпочтительно - пептид WT1126P1F или пептид WT1126P2L.
Количество для применения модифицированного пептида WT1187 или пептида WT1126, которые иммуногенны у положительных по HLA-A*0201 индивидуумов, является таким же, как количество пептида WT1 в указанной выше вакцинной композиции против злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0206 индивидуумов. Другие ингредиенты вакцинной композиции против злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0201 индивидуумов и ее предпочтительные варианты осуществления являются такими же, как другие ингредиенты вакцинной композиции и ее предпочтительные варианты осуществления в указанной выше вакцинной композиции для положительных по HLA-A*0206 индивидуумов.
В качестве активного ингредиента вакцинной композиции против злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0201 индивидуумов также можно использовать ДНК и РНК, кодирующие указанный выше модифицированный пептид WT1187 или пептид WT1126, иммуногенные у положительных по HLA-A*0201 индивидуумов. Такая вакцинная композиция против злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0201 индивидуумов также представляет собой один из аспектов настоящего изобретения.
Отличные от указанных выше ДНК и РНК ингредиенты в вакцинной композиции против злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0201 индивидуумов и ее предпочтительные варианты осуществления являются такими как ингредиенты композиции и ее предпочтительные варианты изобретения у указанной выше вакцинной композиции против злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0206 индивидуумов.
Специфичные к WT1 CTL можно индуцировать из PBMC, полученных у положительного по HLA-A*0201 индивидуума, культивируя PBMC в присутствии модифицированного пептида WT1187 или пептида WT1126, иммуногенных у указанного выше положительного по HLA-A*0201 индивидуума. Такой способ индукции специфичных к WT1 CTL также представляет собой один из аспектов настоящего изобретения.
Предпочтительные примеры модифицированного пептида WT1187 или пептида WT1126, иммуногенных у положительных по HLA-A*0201 индивидуумов, являются такими же, как использовались для указанной выше вакцинной композиции против злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0201 индивидуумов.
Дендритные клетки, презентирующие модифицированный пептид WT1187 или пептид WT1126, можно индуцировать из незрелых дендритных клеток, полученных у положительного по HLA-A*0201 индивидуума, культивируя незрелые дендритные клетки в присутствии модифицированного пептида, иммуногенного у указанного выше положительного по HLA-A*0201 индивидуума. Такой способ индукции дендритных клеток, презентирующих модифицированный пептид WT1187 или пептид WT1126, также представляет собой один из аспектов настоящего изобретения. Предпочтительные примеры модифицированного пептида являются такими же, как использовались для указанной выше вакцинной композиции против злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0201 индивидуумов.
Злокачественные опухоли у положительных по HLA-A*0201 индивидуумов можно диагностировать, применяя указанный выше модифицированный пептид WT1187 или модифицированный пептид WT1126, иммуногенные у положительных по HLA-A*0201 индивидуумов, антитела к ним, специфичные к WT1 CTL, индуцированные модифицированным пептидом, или дендритные клетки, индуцированные модифицированным пептидом. Такой способ диагностики злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0201 индивидуумов также представляет собой один из аспектов настоящего изобретения. Способ диагностики злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0201 индивидуумов и его предпочтительные варианты осуществления являются такими же, как указанный выше способ диагностики злокачественной опухоли у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов и его предпочтительные варианты осуществления.
Примеры способа диагностики злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0201 индивидуумов включают анализ с тетрамерами MHC, анализ с пентамерами MHC и анализ с декстрамерами MHC, в каждом из которых в качестве антигена используют модифицированный пептид WT1187 или модифицированный пептид WT1126, иммуногенные у положительных по HLA-A*0201 индивидуумов. Предпочтительные примеры модифицированного пептида являются такими же, как использовались для указанной выше вакцинной композиции против злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0201 индивидуумов.
Злокачественные опухоли у положительных по HLA-A*0201 индивидуумов можно диагностировать, используя антитела к следующему: указанные выше модифицированный пептид WT1187 или модифицированный пептид WT1126, иммуногенные у положительных по HLA-A*0201 индивидуумов, специфичные к WT1 CTL, индуцированные модифицированным пептидом, или дендритные клетки, индуцированные модифицированным пептидом. Такой способ диагностики злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0201 индивидуумов также представляет собой один из аспектов настоящего изобретения. Предпочтительные примеры модифицированного пептида являются такими же, как использовались для указанной выше вакцинной композиции против злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0201 индивидуумов. Способ диагностики злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0201 индивидуумов и его предпочтительные варианты осуществления являются такими же, как указанные выше способ диагностики злокачественной опухоли у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов и его предпочтительные варианты осуществления.
Способ лечения или профилактики злокачественных опухолей, включающий введение положительному по HLA-A*0201 индивидууму вакцинной композиции против злокачественной опухоли, содержащей следующий пептид:
модифицированный пептид на основе пептида WT1187 (SEQ ID NO: 2) или пептид WT1126 (SEQ ID NO: 3), каждый из которых представляет собой неполный пептид белкового продукта гена опухолевого супрессора WT1, где модифицированный пептид иммуногенен у положительных по HLA-A*0201 индивидуумов,
также представляет собой один из аспектов настоящего изобретения.
Предпочтительные примеры модифицированного пептида являются такими же, как использовались для указанной выше вакцинной композиции против злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0201 индивидуумов. Вакцинная композиция против злокачественной опухоли и ее предпочтительные варианты осуществления являются такими же, как описано в отношении указанной выше вакцинной композиции для положительных по HLA-A*0201 индивидуумов.
Настоящее изобретение относится к применению следующего пептида:
модифицированный пептид на основе пептида WT1187 (SEQ ID NO: 2) или пептида WT1126 (SEQ ID NO: 3), каждый из которых представляет собой неполный пептид белкового продукта гена опухолевого супрессора WT1, где модифицированный пептид иммуногенен у положительного по HLA-A*0201 индивидуума,
для лечения или профилактики злокачественных опухолей у положительных по HLA-A*0201 индивидуумов, и применению их для получения вакцинной композиции против злокачественной опухоли, используемой для лечения или профилактики злокачественных опухолей у положительных по HLA-A*0201 индивидуумов.
Предпочтительные примеры модифицированного пептида являются такими же, как использовались для указанной выше вакцинной композиции против злокачественной опухоли для положительных по HLA-A*0201 индивидуумов. Вакцинная композиция против злокачественной опухоли и ее предпочтительные варианты осуществления являются такими же, как описаны в отношении указанной выше вакцинной композиции для положительных по HLA-A*0201 индивидуумов.
ПРИМЕРЫ
Далее в настоящем документе, настоящее изобретение будет проиллюстрировано более подробно в качестве примеров, но оно не ограничено ими. Сокращения в примерах имеют указанные ниже значения. Синтетические пептиды приобретали в SIGMA GENOSYS JAPAN.
DC: дендритные клетки
PBMC: мононуклеарные клетки периферической крови
CD: кластер дифференцировки (антиген дифференцировки лейкоцитов)
GM-CSF: гранулоцитарно-моноцититарный колониестимулирующий фактор
IL: интерлейкин
TNFα: фактор некроза опухоли α
PGE: простагландин
Gy: Грей
B-LCL: клеточная линия B-лимфобластов
EB вирус: вирус Эпштейна-Барр
tBu: трет-бутил
Trt: трифенилметил
Fmoc: 9-флуоренилметилоксикарбонил
Пример 1 (прогнозирование молекул HLA, способных к связыванию с пептидом WT1)
Молекулы HLA, способные к связыванию с пептидом WT1187 (SEQ ID NO: 2), прогнозировали с применением программы прогнозирования NetMHC2.0 Server.
Как результат, в программе прогнозирования NetMHC2.0 Server (http://www.cbs.dtu.dk/services/NetMHC-2.0/) на основании аффинности связывания с молекулой HLA-A*0206 был высоко ранжирован рестриктированный по HLA-A*0201 пептид WT1187, способный индуцировать специфичные к WT1 CTL.
Пример 2 (получение специфичных к пептиду WT1187 CTL из PBMC положительных по HLA-A*0206 здоровых доноров крови и тест цитотоксичности CTL)
(1) Выделение PBMC положительных по HLA-A*0206 здоровых доноров крови и получение DC
Сначала из периферической крови каждого из положительных по HLA-A*0206 здоровых доноров крови (три индивидуума) центрифугированием в градиенте плотности фиколла-гипака выделяли PBMC. Затем из PBMC выделяли CD14-позитивные клетки с применением магнитных частиц-DM с антителами к CD14 человека (произведенных Becton, Dickinson and company (BD)). В этом случае полагали, что в популяции моноцитов присутствует большое количество CD14-позитивных клеток. Для получения DC выделенные CD14-позитивные клетки культивировали в среде X-VIVO15 (произведенной BioWhittaker, Walkersville, MD), дополненной 1 об./об.% сывороточным AB человека, 800 МЕ/мл GM-CSF (произведенного Pepro Tech INC, Rocky Hill, NJ) и 1000 МЕ/мл IL-4 (произведенного Pepro Tech INC).
(2) Индукция аутологичных зрелых DC
DC, полученные в указанном выше пункте (1), культивировали при 37°C в течение 1 суток, а затем к лункам с культурой, содержащим DC, добавляли смесь цитокинов для созревания, содержащую 10 нг/мл TNF-α (фактор некроза опухоли-α; Pepro Tech INC, Rocky Hill, NJ), 10 нг/мл IL-β, 1000 МЕ/мл IL-6 и 1 мкг/мл PGE2. Через 24 часа культивирования при 37°C получали аутологичные зрелые DC.
(3) Индукция специфичных к пептиду WT1187 CTL
Аутологичные зрелые DC примировали пептидом WT1187, облученным 30 Гр радиоактивного излучения, и совместно культивировали с обогащенными CD8-позитивными T-клетками PBMC, полученными у положительного по HLA-A*0206 здорового донора крови. Примирование DC пептидом WT1187 проводили посредством культивирования DC в присутствии 10 мкг/мл пептида WT1187 при 37°C в течение 30 минут. CD8-позитивные T-клетки обогащали из PBMC положительного по HLA-A*0206 здорового донора крови с применением микробус с CD8 и колонки MS (произведенной Miltenyi Biotec GmbH).
После второй стимуляции аутологичные PBMC, примированные пептидом, а затем облученные радиоактивным облучением, использовали как селективные стимулирующие клетки. Через двое суток после второй стимуляции к среде для культивирования добавляли рекомбинантные IL-2 (предоставленный Shionogi & Co., Ltd.) и IL-7 (произведенный Pepro Tech INC) в концентрации 10 МЕ/мл и 10 нг/мл, соответственно. После 4-ой стимуляции клетки культивировали в течение 10 суток при 37°C, а затем полученные клетки (CTL) собирали посредством центрифугирования с применением центрифуги. Цитотоксическую активность этих клеток (CTL) против клеток-мишеней тестировали в тесте цитотоксичности по высвобождению 51Cr.
(4) Тест цитотоксичности
Тест цитотоксичности проводили посредством теста цитотоксичности по высвобождению 51Cr. Тест цитотоксичности по высвобождению 51Cr проводили, как указано далее. Сначала клетки-мишени (1×107 клеток/мл) инкубировали в присутствии 100 мкл 51Cr (удельная радиоактивность: 1 мКи/мл) в RPMI1640 (произведенной NIHON PHARMACEUTICAL CO., LTD.), дополненной 10% эмбриональной телячьей сывороткой, при 37°C в течение 1,5 часов для мечения клеток-мишеней 51Cr. Затем меченные 51Cr клетки-мишени добавляли в лунки 96-луночных круглодонных планшетов, содержащих различные количества CTL, полученных в указанном выше пункте (3) (суспендированных в 100 мкл среды для анализа), смешивали с CTL, а затем инкубировали при 37°C в течение 4 часов. Эти клетки смешивали так, чтобы отношение E/T (отношение количества клеток) составляло 1:1, 5:1, 20:1 или 25:1, при условии, что CTL и меченные 51Cr клетки-мишени обозначали как "E" и "T", соответственно. После завершения инкубации из каждой лунки отбирали 100 мкл супернатанта. Определяли количество высвободившегося из меченных клеток 51Cr, и на основе высвобождения 51Cr рассчитывали специфический лизис (%). Специфический лизис (%) рассчитывали указанным далее способом.
Специфический лизис (%) = (высвобождение из тестируемого образца - спонтанное высвобождение)/(максимальное высвобождение - спонтанное высвобождение) × 100.
В формуле величина спонтанного высвобождения относится к степени флуоресценции супернатанта культуры в лунках, содержащих только клетки-мишени, а максимальное высвобождение относится к степени флуоресценции среды для культивирования, в которой клетки-мишени полностью лизированы обработкой 1% масс. Triton X-100.
Используемые клетки-мишени представляли собой B-LCL, клетки K562, клетки JY и клетки KH88, которые будут подробно описаны ниже. Клетки KH88 являются такими же, как клетки KH88OF8, используемые в следующем ниже примере 9.
B-LCL, полученные путем опосредованной вирусом EB трансформации B-лимфоцитов периферической крови, полученных от положительного по HLA-A*0206 донора крови, не экспрессируют WT1.
Клетки K562, полученные от пациента с хроническим миелогенным лейкозом при бластном кризе, представляют собой экспрессирующую WT1 клеточную линию, не экспрессирующую HLA класса I. Автор настоящего изобретения не смог получить экспрессирующую WT1 положительную по HLA-A*0206 лейкозную клеточную линию дикого типа. Вследствие этого также использовали клетки 0206K562, которые получали посредством трансформации клеток K562 генами HLA-A*0206. Анализ FACS с использованием антитела к HLA-A2 (клон BB7.2; произведенный BD Biosciences Pharmingen) продемонстрировал, что клетки 0206K562, трансформированные генами HLA-A*0206, экспрессируют на клеточных поверхностях молекулы HLA-A*0206.
Анализ вестерн-блоттингом показал, что клетки B-LCL, трансформированные геном WT1, экспрессируют WT1. В качестве контроля использовали клетки B-LCL, трансформированные пустым контрольным вектором.
Клетки JY являются не экспрессирующей WT1 негативной по HLA-A*0206 линией B-клеток, полученной опосредованной вирусом EB трансформацией.
Клетки KH88 являются экспрессирующей WT1 негативной по HLA-A*0206 лейкозной клеточной линией.
Каждую клеточную линию культивировали в среде для культивирования RPMI1640, дополненной 10 об./об.% инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сывороткой, 50 МЕ/мл пенициллина и 50 мг/мл стрептомицина.
(5) Анализ антителами и проточной цитометрией
mAb к CD14, CD86, CD80, CD83 и HLA-DR человека приобретали в BD. Концентрацию и зрелость DC подтверждали посредством анализа клеточных поверхностных антигенов с применением моноклональных антител (mAb), перечисленных выше. Образцы анализировали в проточном цитометре (FACS Calibur; произведенный BD) с применением программного обеспечения CellQest.
(6) Результаты
Проведено тестирование, можно ли из PBMC положительных по HLA-A*0206 доноров крови получать специфичные к пептиду WT1187 CTL. Специфичную к пептиду WT1187 цитотоксическую активность тестировали с использованием CTL, полученных посредством повторной стимуляции обогащенных CD8-позитивными T-клетками PBMC от положительного по HLA-A*0206 здорового донора крови посредством аутологичных DC или PBMC, примированных пептидом WT1187. CTL продемонстрировали более сильную цитотоксическую активность в отношении аутологичных клеток B-LCL, примированных пептидом WT1187, чем в отношении клеток B-LCL, не примированных пептидом WT1187 (фиг. 1a). На фиг. 1a вертикальная ось соответствует цитотоксической активности, а горизонтальная ось соответствует отношению CTL, полученных посредством пептидной стимуляции (эффектор: E), к клеткам-мишеням (мишень: T) (отношение E/T). Закрашенный треугольник соответствует клеткам, примированным 10 мкг/мл пептида WT1187, а закрашенный квадрат соответствует клеткам, не примированным пептидом WT1187. Такая же цитотоксическая активность, как указанная выше, показана у CTL, сходным образом полученных из PBMC, выделенных у двух других положительных по HLA-A*0206 здоровых доноров крови (фиг. 2a и 2b). На фиг. 2 закрашенный треугольник соответствует клеткам, примированным 10 мкг/мл пептида WT1187, а закрашенный квадрат соответствует клеткам, не примированным пептидом WT1187. Эти результаты показывают, что в каждом случае цитотоксическая активность специфична в отношении пептида WT1187.
Цитотоксическая активность CTL увеличивалась параллельно концентрации пептида WT1187, используемого для примирования DC или PBMC, и достигала плато при концентрации пептида 0,1 мкг/мл (фиг. 1b). Половина от максимальной концентрации пептида WT1187 для специфического лизиса (полумаксимальное значение лизиса) составляла приблизительно 5×10-5 мкг/мл. Это показывает, что аффинность TCR (рецепторы T-клеточных антигенов) CTL в отношении комплекса пептид WT1187/HLA-A*0206 была относительно высокой. Этот результат убедительно свидетельствует, что CTL, индуцируемые пептидом WT1187, могут распознавать пептид WT1187.
Таким же образом, как и выше, тестировали цитотоксическую активность против различных клеток-мишеней, эндогенно экспрессирующих WT1, с использованием CTL, полученных стимуляцией обогащенных CD8-позитивными T-клетками PBMC от положительного по HLA-A*0206 донора крови посредством DC или PBMC, которых примировали пептидом WT1187. Результаты представлены на фиг. 3a и 3b. Соответствующую цитотоксическую активность в отношении клеток-мишеней, представленную на фиг. 3a и 3b, определяли в одно и то же время. На фиг. 3a представлена цитотоксическая активность специфичных к пептиду WT1187 CTL против B-LCL, трансформированных геном WT1 (экспрессирующие WT1, положительные по HLA-A*0206; закрашенный треугольник), или B-LCL, трансформированных пустым контрольным вектором (не экспрессирующие WT1, положительные по HLA-A*0206; закрашенный квадрат). На фиг. 3b показана цитотоксическая активность специфичных к пептиду WT1187 CTL против клеток 0206K562 (экспрессирующие WT1, положительные по HLA-A*0206; закрашенный квадрат), клеток K562 (экспрессирующие WT1, отрицательные по HLA-A*0206; незакрашенный квадрат), клеток KH88 (экспрессирующие WT1, отрицательные по HLA-A*0206; закрашенная окружность) или клеток JY (не экспрессирующие WT1, отрицательные по HLA-A*0206; закрашенный треугольник).
CTL продемонстрировали более сильную цитотоксическую активность против B-LCL, трансформированных WT1 (экспрессирующие WT1, положительные по HLA-A*0206), чем против B-LCL, трансформированных пустым контрольным вектором (не экспрессирующие WT1, положительные по HLA-A*0206) (фиг. 3a). Кроме того, как показано на фиг. 3b, CTL продемонстрировали более сильную цитотоксическую активность против клеток 0206K562, трансформированных HLA-A*0206 (экспрессирующие WT1, положительные по HLA-A*0206), чем против клеток K562 (экспрессирующие WT1, отрицательные по HLA-A*0206), клеток KH88 (экспрессирующие WT1, отрицательные по HLA-A*0206) или клеток JY (не экспрессирующие WT1, отрицательные по HLA-A*0206). Другими словами, CTL продемонстрировали значимую цитотоксическую активность против экспрессирующих WT1, положительных по HLA-A*0206 лейкозных клеток-мишеней, но не цитотоксическую активность против не экспрессирующих WT1 и/или отрицательных по HLA-A*0206 клеток. Данный результат демонстрирует, что специфичные к пептиду WT1187 CTL, полученные in vitro, демонстрируют цитотоксическую активность против опухолевых клеток, эндогенно экспрессирующих WT1 подобно лейкозным клеткам и являющихся положительными по HLA-A*0206. Результат на фиг. 3b убедительно свидетельствует, что цитотоксическая активность специфичных к пептиду WT1187 CTL рестриктирована по HLA-A класса I. Это основано на том факте, что в отношении клеток 0206K562 наблюдали более сильную цитотоксическую активность, чем против клеток K562.
Приведенные выше результаты демонстрируют, что указанные выше культивируемые CTL являются специфичными к пептиду WT1187 CTL.
Результаты на каждой фигуре являются типичными данными и в основном, с некоторыми отклонениями, воспроизводятся.
Пример 3 (подтверждение класса HLA, по которому рестриктированы специфичные к пептиду WT1187 CTL)
Проводили тестирование того, рестриктирована ли цитотоксическая активность специфичных к пептиду WT1187 CTL, полученных в примере 2 по HLA класса I. Тест цитотоксичности по высвобождению 51Cr проводили в присутствии или в отсутствие mAb к HLA класса I или HLA класса II. В качестве клеток-мишеней использовали аутологичные B-LCL. В данном эксперименте соотношение E/T составляло 5:1.
Результаты показаны на фиг. 4. На фиг. 4a приведены результаты теста, который проводили с использованием в качестве клеток-мишеней B-LCL (не экспрессирующие WT1187, положительные по HLA-A*0206) в отсутствие mAb против HLA класса I (mAb к HLA класса I) и mAb против HLA класса II (mAb к HLA класса II). На фиг. 4b приведены результаты теста, который проводили с использованием в качестве клеток-мишеней B-LCL, примированных пептидом WT1187 (экспрессирующие WT1187, положительные по HLA-A*0206), в отсутствие mAb к HLA класса I и в присутствии mAb к HLA класса II. На фиг. 4c приведены результаты теста, который проводили с использованием в качестве клеток-мишеней B-LCL, примированных пептидом WT1187 (экспрессирующие WT1187, положительные по HLA-A*0206), в присутствии mAb к HLA класса I и в отсутствие mAb к HLA класса II. На фиг. 4d приведены результаты теста, который проводили с использованием в качестве клеток-мишеней B-LCL, примированных пептидом WT1187 (экспрессирующие WT1187, положительные по HLA-A*0206), в отсутствие mAb к HLA класса I и mAb к HLA класса II.
Как показано на фиг. 4, цитотоксическую активность специфичных к пептиду WT1187 CTL полностью ингибировали добавлением антител к HLA класса I, а не антител к HLA класса II. Результат показывает, что цитотоксическая активность специфичных к пептиду WT1187 CTL рестриктирована по HLA класса I, как и ожидалось.
Пример 4 (тест цитотоксичности против опухолевых клеток)
Тест цитотоксичности против экспрессирующих WT1, положительных по HLA-A*0206 опухолевых клеток проводили in vitro с использованием специфичных к пептиду WT1187 CTL, полученных в примере 2. Тест цитотоксичности проводили в соответствии с тестом цитотоксичности по высвобождению 51Cr, описанном в примере 2. В результате специфичные к пептиду WT1187 CTL продемонстрировали цитотоксическую активность против экспрессирующих WT1 опухолевых клеток (данные не показаны).
Пример 5 (получение специфичных к пептиду WT1126 CTL, и тест цитотоксичности CTL)
Специфичные к пептиду WT1126 CTL получали таким же образом, как в примере 2 (3), за исключением, что вместо пептида WT1187 использовали пептид WT1126 (SEQ ID NO: 3). Тест цитотоксичности с использованием этих CTL для определения специфичной по отношению к пептиду WT1126 цитотоксической активности проводили таким же образом, как в примере 2. На фиг. 5 показана цитотоксическая активность специфичных к пептиду WT1126 CTL, индуцированных из PBMC того же положительного по HLA-A*0206 здорового донора крови, как на фиг. 2b. На фиг. 5 закрашенный треугольник соответствует клеткам, примированным 10 мкг/мл пептида WT1126, а закрашенный квадрат соответствует клеткам, не примированным пептидом WT1126. CTL продемонстрировали более сильную цитотоксическую активность против аутологичных клеток B-LCL, примированных пептидом WT1126, чем против клеток B-LCL, не примированных пептидом WT1126 (фиг. 5). Данный результат демонстрирует, что цитотоксическая активность CTL специфична по отношению к пептиду WT1126.
Таким же образом, как в примере 2, тестировали цитотоксическую активность против различных клеток-мишеней, эндогенно экспрессирующих WT1, с использованием CTL, полученных стимуляцией обогащенных CD8-позитивными T-клетками PBMC от положительных по HLA-A*0206 доноров крови посредством DC или PBMC, примированных пептидом WT1126. Цитотоксическая активность против каждой клетки-мишени представлена на фиг. 6a и 6b. Клетки-мишени на фиг. 6a и 6b представляют собой клетки 0206K562 (экспрессирующие WT1, положительные по HLA-A*0206; закрашенный квадрат), клетки K562 (экспрессирующие WT1, отрицательные по HLA-A*0206; незакрашенный квадрат), клетки KH88 (экспрессирующие WT1, отрицательные по HLA-A*0206; закрашенная окружность) и клетки JY (не экспрессирующие WT1, отрицательные по HLA-A*0206; закрашенный треугольник). На фиг. 6a показана цитотоксическая активность специфичных к пептиду WT1126 CTL, индуцированных из PBMC того же положительного по HLA-A*0206 здорового донора крови, как на фиг. 2a. На фиг. 6b показана цитотоксическая активность специфичных к пептиду WT1126 CTL, индуцированных из PBMC того же положительного по HLA-A*0206 здорового донора крови, как на фиг. 2b.
Подобно специфичным к пептиду WT1187 CTL, специфичные к пептиду WT1126 CTL продемонстрировали значимую цитотоксическую активность против экспрессирующих WT1, положительных по HLA-A*0206 лейкозных клеток-мишеней, но не продемонстрировали цитотоксической активности против не экспрессирующих WT1 и/или отрицательных по HLA-A*0206 клеток. Данный результат демонстрирует, что специфичные к пептиду WT1126 CTL, полученные in vitro, демонстрируют цитотоксическую активность против опухолевых клеток, эндогенно экспрессирующих WT1 подобно лейкозным клеткам и являющихся положительными по HLA-A*0206. Результаты на фиг. 6a и 6b убедительно свидетельствуют, что цитотоксическая активность специфичных к пептиду WT1126 CTL рестриктирована по HLA-A класс I. Это основано на том факте, что против клеток 0206K562 наблюдалась более сильная цитотоксическая активность, чем против клеток K562.
Приведенные выше результаты демонстрируют, что полученные CTL являются специфичными к пептиду WT1126 CTL.
Результаты на каждой фигуре являются типичными данными и в основном, с некоторыми отклонениями, воспроизводятся.
Пример 6 (получение вакцинных композиций)
Получали приведенные далее вакцинные композиции 1-8 против злокачественной опухоли. Они представляют собой только примеры вакцинных композиций против злокачественной опухоли по настоящему изобретению.
Вакцинная композиция 1 против злокачественной опухоли
Пептид WT1187 3 мг
Монтанид ISA-51 400 мг
5% глюкоза в воде 400 мг
Указанные выше ингредиенты смешивали, и смесь назвали вакцинная композиция 1 против злокачественной опухоли.
Вакцинная композиция 2 против злокачественной опухоли
Пептид WT1187 1 мг
Монтанид ISA-51 400 мг
5% глюкоза в воде 400 мг
Указанные выше ингредиенты смешивали, и смесь назвали вакцинная композиция 2 против злокачественной опухоли.
Вакцинная композиция 3 против злокачественной опухоли
Пептид WT1187 0,001 мг
Монтанид ISA-51 400 мг
5% глюкоза в воде 400 мг
Указанные выше ингредиенты смешивали, и смесь назвали вакцинная композиция 3 против злокачественной опухоли.
Вакцинная композиция 4 против злокачественной опухоли
Пептид WT1187 10 мг
Монтанид ISA-51 400 мг
5% глюкоза в воде 400 мг
Указанные выше ингредиенты смешивали, и смесь назвали вакцинная композиция 4 против злокачественной опухоли.
Вакцинные композиции 5-8 против злокачественной опухоли
Вакцинной композиции 5-8 против злокачественной опухоли получали таким же образом, как и указанные выше вакцинной композиции 1-4 против злокачественной опухоли за исключением того, что вместо пептида WT1187 использовали пептид WT1126.
Пример 7 (аффинность модифицированных пептидов к молекулам HLA-A*0206)
В случае пептида WT1187, пептида WT1126 и модифицированных пептидов с заменами аминокислотного остатка в положении 1, 2, 3 или 9 от N-конца пептида WT1187 или пептида WT1126 с использованием программы прогнозирования NetMHC2.0 Server анализировали аффинность к молекулам HLA-A*0206. Результаты анализа модифицированных пептидов WT1187 и модифицированных пептидов WT1126 приведены в таблицах 1 и 2, соответственно. Меньшие значения (пептид способен к связыванию при меньшей концентрации) указывают на большую аффинность.
Таблица 1 | |||||
Пептид | Аминокислотная последовательность | SEQ ID NO | Предсказанный показатель | Аффинность (нМ) | Сила связывания |
WT1187 | SLGEQQYSV | 2 | 0,776 | 11 | Сильное связывание (SB) |
WT1187P1G | GLGEQQYSV | 4 | 0,756 | 13 | SB |
WT1187P1A | ALGEQQYSV | 5 | 0,812 | 7 | SB |
WT1187P1V | VLGEQQYSV | 6 | 0,755 | 14 | SB |
WT1187P1L | LLGEQQYSV | 7 | 0,810 | 7 | SB |
WT1187P1I | ILGEQQYSV | 8 | 0,782 | 10 | SB |
WT1187P1M | MLGEQQYSV | 9 | 0,877 | 3 | SB |
WT1187P1W | WLGEQQYSV | 10 | 0,876 | 3 | SB |
WT1187P1F | FLGEQQYSV | 11 | 0,926 | 2 | SB |
WT1187P1Y | YLGEQQYSV | 12 | 0,896 | 3 | SB |
WT1187P2V | SVGEQQYSV | 13 | 0,722 | 20 | SB |
WT1187P2Q | SQGEQQYSV | 14 | 0,824 | 6 | SB |
WT1187P2I | SIGEQQYSV | 15 | 0,734 | 17 | SB |
WT1187P2M | SMGEQQYSV | 16 | 0,798 | 8 | SB |
WT1187P3L | SLLEQQYSV | 17 | 0,865 | 4 | SB |
WT1187P3A | SLAEQQYSV | 18 | 0,844 | 5 | SB |
WT1187P3V | SLVEQQYSV | 19 | 0,869 | 4 | SB |
WT1187P3M | SLMEQQYSV | 20 | 0,896 | 3 | SB |
WT1187P3P | SLPEQQYSV | 21 | 0,791 | 9 | SB |
WT1187P3W | SLWEQQYSV | 22 | 0,883 | 3 | SB |
WT1187P3F | SLFEQQYSV | 23 | 0,864 | 4 | SB |
WT1187P3Y | SLYEQQYSV | 24 | 0,857 | 4 | SB |
WT1187P3S | SLSEQQYSV | 25 | 0,801 | 8 | SB |
WT1187P3I | SLIEQQYSV | 26 | 0,880 | 3 | SB |
WT1187P9L | SLGEQQYSL | 53 | 0,586 | 88 | слабое связывание |
Таблица 2 | |||||
Пептид | Аминокислотная последовательность | SEQ ID NO | Предсказанный показатель | Аффинность (нМ) | Сила связывания |
WT1126 | RMFPNAPYL | 3 | 0,83 | 6 | SB |
WT1126P1G | GMFPNAPYL | 27 | 0,76 | 14 | SB |
WT1126P1A | AMFPNAPYL | 28 | 0,80 | 8 | SB |
WT1126P1V | VMFPNAPYL | 29 | 0,75 | 15 | SB |
WT1126P1L | LMFPNAPYL | 30 | 0,80 | 8 | SB |
WT1126P1I | IMFPNAPYL | 31 | 0,77 | 11 | SB |
WT1126P1M | MMFPNAPYL | 32 | 0,86 | 4 | SB |
WT1126P1W | WMFPNAPYL | 33 | 0,88 | 3 | SB |
WT1126P1F | FMFPNAPYL | 34 | 0,91 | 2 | SB |
WT1126P1Y | YMFPNAPYL | 35 | 0,88 | 3 | SB |
WT1126P2V | RVFPNAPYL | 36 | 0,78 | 11 | SB |
WT1126P2Q | RQFPNAPYL | 37 | 0,85 | 4 | SB |
WT1126P2A | RAFPNAPYL | 38 | 0,67 | 35 | SB |
WT1126P2L | RLFPNAPYL | 39 | 0,80 | 8 | SB |
WT1126P2I | RIFPNAPYL | 40 | 0,78 | 10 | SB |
WT1126P3I | RMIPNAPYL | 41 | 0,84 | 5 | SB |
WT1126P3L | RMLPNAPYL | 42 | 0,83 | 6 | SB |
WT1126P3G | RMGPNAPYL | 43 | 0,71 | 23 | SB |
WT1126P3A | RMAPNAPYL | 44 | 0,79 | 9 | SB |
WT1126P3V | RMVPNAPYL | 45 | 0,82 | 6 | SB |
WT1126P3M | RMMPNAPYL | 46 | 0,86 | 4 | SB |
WT1126P3P | RMPPNAPYL | 47 | 0,72 | 21 | SB |
WT1126P3W | RMWPNAPYL | 48 | 0,85 | 5 | SB |
WT1126P9V | RMFPNAPYV | 49 | 0,91 | 2 | SB |
WT1126P9A | RMFPNAPYA | 50 | 0,77 | 12 | SB |
WT1126P9I | RMFPNAPYI | 51 | 0,81 | 7 | SB |
WT1126P9M | RMFPNAPYM | 52 | 0,65 | 42 | SB |
Пример 8 (аффинность модифицированных пептидов к молекулам HLA-A*0201)
В случае пептида WT1187, пептида WT1126 и модифицированных пептидов, содержащих замену аминокислотного остатка в положении 1, 2, 3 или 9 от N-конца пептида WT1187 или пептида WT1126 с использованием программы прогнозирования NetMHC2.0 Server анализировали аффинность к молекулам HLA-A*0201. Результаты анализа модифицированных пептидов WT1187 и модифицированных пептидов WT1126 приведены в таблицах 3 и 4, соответственно. Меньшие значения указывают на большую аффинность.
Таблица 3 | |||||
Пептид | Аминокислотная последовательность | SEQ ID NO | Предсказанный показатель | Аффинность (нМ) | Сила связывания |
WT1187 | SLGEQQYSV | 2 | 0,721 | 20 | SB |
WT1187P1G | GLGEQQYSV | 4 | 0,672 | 34 | SB |
WT1187P1A | ALGEQQYSV | 5 | 0,648 | 44 | SB |
WT1187P1V | VLGEQQYSV | 6 | 0,705 | 24 | SB |
WT1187P1L | LLGEQQYSV | 7 | 0,658 | 40 | SB |
WT1187P1I | ILGEQQYSV | 8 | 0,698 | 26 | SB |
WT1187P1M | MLGEQQYSV | 9 | 0,717 | 21 | SB |
WT1187P1W | WLGEQQYSV | 10 | 0,628 | 55 | SB |
WT1187P1F | FLGEQQYSV | 11 | 0,824 | 6 | SB |
WT1187P1Y | YLGEQQYSV | 12 | 0,809 | 7 | SB |
WT1187P2I | SIGEQQYSV | 15 | 0,556 | 121 | SB |
WT1187P2M | SMGEQQYSV | 16 | 0,740 | 16 | SB |
WT1187P3A | SLAEQQYSV | 18 | 0,811 | 7 | SB |
WT1187P3V | SLVEQQYSV | 19 | 0,766 | 12 | SB |
WT1187P3M | SLMEQQYSV | 20 | 0,876 | 3 | SB |
WT1187P3W | SLWEQQYSV | 22 | 0,863 | 4 | SB |
WT1187P3F | SLFEQQYSV | 23 | 0,852 | 4 | SB |
WT1187P3Y | SLYEQQYSV | 24 | 0,854 | 4 | SB |
WT1187P3S | SLSEQQYSV | 25 | 0,793 | 9 | SB |
WT1187P9L | SLGEQQYSL | 53 | 0,640 | 49 | SB |
Таблица 4 | |||||
Пептид | Аминокислотная последовательность | SEQ ID NO | Предсказанный показатель | Аффинность (нМ) | Сила связывания |
WT1126P1G | GMFPNAPYL | 27 | 0,80 | 9 | SB |
WT1126P1A | AMFPNAPYL | 28 | 0,81 | 7 | SB |
WT1126P1V | VMFPNAPYL | 29 | 0,81 | 8 | SB |
WT1126P1L | LMFPNAPYL | 30 | 0,82 | 7 | SB |
WT1126P1I | IMFPNAPYL | 31 | 0,81 | 8 | SB |
WT1126P1M | MMFPNAPYL | 32 | 0,85 | 4 | SB |
WT1126P1W | WMFPNAPYL | 33 | 0,80 | 8 | SB |
WT1126P1F | FMFPNAPYL | 34 | 0,91 | 2 | SB |
WT1126P1Y | YMFPNAPYL | 35 | 0,90 | 2 | SB |
WT1126P2V | RVFPNAPYL | 36 | 0,55 | 127 | SB |
WT1126P2Q | RQFPNAPYL | 37 | 0,49 | 262 | SB |
WT1126P2L | RLFPNAPYL | 39 | 0,78 | 10 | SB |
WT1126P2I | RIFPNAPYL | 40 | 0,64 | 48 | SB |
WT1126P3I | RMIPNAPYL | 41 | 0,74 | 16 | SB |
WT1126P3L | RMLPNAPYL | 42 | 0,78 | 10 | SB |
WT1126P3G | RMGPNAPYL | 43 | 0,60 | 73 | SB |
WT1126P3A | RMAPNAPYL | 44 | 0,73 | 17 | SB |
WT1126P3V | RMVPNAPYL | 45 | 0,68 | 31 | SB |
WT1126P3M | RMMPNAPYL | 46 | 0,83 | 6 | SB |
WT1126P3P | RMPPNAPYL | 47 | 0,61 | 66 | SB |
WT1126P3W | RMWPNAPYL | 48 | 0,83 | 6 | SB |
WT1126P9V | RMFPNAPYV | 49 | 0,84 | 5 | SB |
WT1126P9A | RMFPNAPYA | 50 | 0,73 | 18 | SB |
WT1126P9I | RMFPNAPYI | 51 | 0,79 | 9 | SB |
WT1126P9M | RMFPNAPYM | 52 | 0,69 | 29 | SB |
Пример 9 (сравнение рестриктированных по HLA-A*0201 CTL, индуцированных различными модифицированными пептидами WT1126)
(1) Цель
Принимая во внимание результаты примера 8, в качестве модифицированных пептидов WT1126 для тестирования выбрали пептид WT1126P1F (SEQ ID NO: 34), пептид WT1126P2L (SEQ ID NO: 39), пептид WT1126P3M (SEQ ID NO: 46) и пептид WT1126P9V (SEQ ID NO: 49), и для скрининга на модифицированные пептиды WT1126, способные индуцировать CTL с высокой цитотоксической активностью, проводили приведенные ниже эксперименты. Если не указано иначе, используемые в примерах с 9 до 12 реагенты, среды, экспериментальные способы и т.д. являлись такими же, как в примере 1. Если не указано иначе, в примерах с 9 по 12 культивирование проводили при 37°C.
(2) Материалы и методы
У здорового человека-донора с выявленной экспрессией молекул HLA-A*0201 (положительный по HLA-A*0201 здоровый донор крови) выделяли PBMC, и из PBMC выделяли CD14-позитивные клетки с применением магнитных частиц-DM с антителами к CD14 человека. Среду для культивирования получали посредством добавления 800 МЕ/мл GM-CSF и 1000 МЕ/мл IL-4 к среде X-VIV015, дополненной 1 об./об.% сывороточным AB человека, а CD14-позитивные клетки культивировали в среде для культивирования в течение 1 суток.
К указанной выше культуре добавляли смесь цитокинов для созревания, содержащую 10 нг/мл TNFα, 10 нг/мл IL-β, 1000 МЕ/мл IL-6 и 1 мкг/мл PGE2. После дополнительных одних суток культивирования получали аутологичные зрелые DC.
Аутологичные зрелые DC примировали 10 мкг/мл модифицированного пептида WT1126, полученного в примере 13 (пептид WT1126P1F, пептид WT1126P2L, пептид WT1126P3M или пептид WT1126P9V), культивировали в течение 4 часов, и облучали 35 Гр радиоактивного излучения. Полученные таким образом клетки использовали как стимулирующие клетки для индукции CTL.
PBMC (2×106 клеток/лунку), служащие в качестве иммунореактивных клеток, и указанные выше DC (2×105 клеток/лунку) совместно культивировали в 24-луночном планшете. Через одну неделю проводили повторную стимуляцию, добавляя клетки T2, которые примировали пептидом и облучали 75 Гр радиоактивного излучения. Через трое суток после повторной стимуляции добавляли 20 МЕ/мл IL-2. Такую же повторную стимуляцию повторяли еще 3 раза, добавляя примированные пептидом облученные клетки T2, а затем иммунореактивные клетки обогащались CD8-позитивными клетками.
В отношении CD8-позитивных T-клеток на проточном цитометре анализировали реакцию на тетрамер HLA-A*0201, связанный с пептидом WT1126, и тестировали цитотоксическую активность против различных клеток-мишеней.
Используемые клетки-мишени представляли собой клетки K562, клетки 0206K562, клетки JY, KH88OF8 клетки, клетки TF-1 и клетки THP-1, которые представлены в таблице 5. Свойства этих клеток представлены в таблице 5. В качестве клеток-мишеней также использовали B-лимфобластную клеточную линию (B-LCL), полученную посредством вирусной инфекции EB из крови положительного по HLA-A*0201 донора.
Таблица 5 | |||
Клетка-мишень | HLA-A*0201 | HLA-A*0206 | WT1 |
K562 | негативная | негативная | экспрессирует |
0206K562 | негативная | позитивная | экспрессирует |
JY | позитивная | негативная | не экспрессирует |
KH88OF8 | негативная | негативная | экспрессирует |
TF-1 | позитивная | негативная | экспрессирует |
THP-1 | позитивная | негативная | экспрессирует |
(3) Результаты
На фиг. 7 приведены результаты проточного цитометрического анализа PBMC от положительного по HLA-A*0201 донора 1, которые стимулировали различными модифицированными пептидами WT1126, а затем окрашивали меченным PE (фикоэритрином) тетрамером HLA-A*0201, связанным с пептидом WT1126 (Medical & Biological Laboratories, Co., Ltd.), и меченным APC-Cy7 антителом к CD8 (APC-Cy7: аллофикоцианин-цианин-7). Когда PBMC окрашивают указанным выше тетрамером и антителом к CD8, индуцированные стимуляцией модифицированным пептидом CTL связываются с тетрамером и антителом к CD8, и, таким образом, можно детектировать испускаемую тетрамером флуоресценцию и испускаемую антителом к CD8 флуоресценцию, соответственно. На фиг. 7a-7e вертикальная ось соответствует интенсивности флуоресценции, испускаемой тетрамером HLA-A*0201, а горизонтальная ось соответствует интенсивности флуоресценции, испускаемой антителом к CD8. Каждый блок на фиг. 7a-7e демонстрирует частоту (%) индуцированных, рестриктированных по HLA-A*0201 CTL, способных распознавать пептид WT1126. На фиг. 7a показан результат анализа PBMC, которые не стимулировали никаким модифицированным пептидом WT1126 и окрашивали указанным выше тетрамером и антителом к CD8 (фон). На фиг. 7b показан результат анализа PBMC, стимулированных пептидом WT1126P1F и окрашенных. На фиг. 7c показан результат анализа PBMC, стимулированных пептидом WT1126P2L и окрашенных. На фиг. 7d показан результат анализа PBMC, стимулированных пептидом WT1126P3M и окрашенных. На фиг. 7e показан результат анализа PBMC, стимулированных пептидом WT1126P9V и окрашенных.
Частота указанных выше CTL, индуцированных стимуляцией PBMC пептидом WT1126P1F, составляла 0,14% (фиг. 7b). Частота указанных выше CTL, индуцированных стимуляцией PBMC пептидом WT1126P2L, составляла 0,37% (фиг. 7c). CTL, индуцируемые этими пептидами раздельно, являлись позитивными по тетрамеру HLA, CD8-позитивными и способными к связыванию с тетрамером HLA-A*0201, связанным с пептидом WT1126. Эти результаты показывают, что стимуляция PBMC модифицированным пептидом WT1126 индуцировала CTL, которые могут распознавать пептид дикого типа (пептид WT1126).
На фиг. 8 приведены результаты измерения цитотоксической активности CTL, индуцированных посредством стимуляции PBMC от донора 1 пептидом WT1126P1F. На фиг. 8 вертикальная ось соответствует цитотоксической активности, а горизонтальная ось соответствует отношению CD8-позитивных T-клеток, полученных посредством стимуляции пептидом (эффектор: E), к клеткам-мишеням (мишень: T) (соотношение E/T). Закрашенный ромб соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали клетки JY, а закрашенный квадрат соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали примированные пептидом WT1126P1F клетки JY.
Клетки JY положительны по HLA-A*0201 и негативны по WT1. The CTL продемонстрировали более сильную цитотоксическую активность против примированных пептидом WT1126P1F клеток JY, чем против не примированных пептидом WT1126P1F клеток JY. Этот результат показывает, что индуцированы CTL, специфичны к использованному для указанной выше стимуляции пептиду и рестриктированы по HLA-A*0201.
На фиг. 9 приведены результаты измерения цитотоксической активности CTL, индуцированных посредством стимуляции PBMC от донора 1 пептидом WT1126P2L. На фиг. 9 вертикальная ось соответствует цитотоксической активности, а горизонтальная ось соответствует отношению CD8-позитивных T-клеток, полученных посредством стимуляции пептидом (эффектор: E), к клеткам-мишеням (мишень: T) (соотношение E/T). На фиг. 9a закрашенный ромб соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали клетки JY, а закрашенный квадрат соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали примированные пептидом WT1126P2L клетки JY. На фиг. 9b закрашенный ромб соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали клетки TF-1, закрашенный квадрат соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали клетки THP-1, закрашенный треугольник соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали клетки KH88OF8, и крест соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали клетки B-LCL.
Индуцированные CTL показали более сильную цитотоксическую активность против примированных пептидом WT1126P2L клеток JY, чем против не примированных пептидом WT1126P2L клеток JY (фиг. 9a). Индуцированные CTL показали более сильную цитотоксическую активность против клеток TF-1 и клеток THP-1, которые являются положительными по HLA-A*0201 и WT1-позитивными, чем против клеток KH88OF8, которые отрицательны по HLA-A*0201 и WT1-позитивны, и клеток B-LCL, которые положительны по HLA-A*0201 и WT1-негативны (фиг. 9b). Как очевидно из результатов, индуцированные стимуляцией пептидом WT1126P2L CTL рестриктированы по HLA-A*0201 и способны разрушать злокачественные клетки, эндогенно экспрессирующие WT1.
На фиг. 10 приведены результаты проточного цитометрического анализа PBMC от положительного по HLA-A*0201 донора 2, стимулированных пептидом WT1126P2L, а затем окрашенных меченным PE тетрамером HLA-A*0201, связанным с пептидом WT1126, и меченным APC-Cy7 антителом к CD8. То есть, на фиг. 10 приведены результаты проточного цитометрического анализа индуцированных CTL, окрашенных тетрамером HLA, связанным с пептидом WT1126, и антителом к CD8. Вертикальная ось соответствует интенсивности флуоресценции, испускаемой тетрамером HLA-A*0201, а горизонтальная ось соответствует интенсивности флуоресценции, испускаемой антителом к CD8.
Клетки в верхней правой области на фиг. 10 представляют собой индуцированные CTL, которые рестриктированы по HLA-A*0201 и могут распознавать пептид WT1126. 5,43% лимфоцитов PBMC, стимулированных пептидом WT1126P2L являются положительными по тетрамеру HLA, CD8-позитивными CTL, которые способны связываться с тетрамером HLA-A*0201, связанным с пептидом WT1126. Этот результат показывает, что стимуляция PBMC модифицированным пептидом индуцировала CD8-позитивные CTL, которые могут распознавать пептид дикого типа.
На фиг. 11 приведены результаты измерения цитотоксической активности CTL, индуцированных стимуляцией PBMC от донора 2 пептидом WT1126P2L. На фиг. 11a и 11b вертикальная ось соответствует цитотоксической активности, а горизонтальная ось соответствует отношению CD8-позитивных T-клеток, полученных посредством стимуляции пептидом (эффектор: E), к клеткам-мишеням (мишень: T) (соотношение E/T). На фиг. 11a закрашенный ромб соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали клетки JY, а закрашенный квадрат соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали примированные пептидом WT1126 клетки JY. На фиг. 11b закрашенный ромб соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали клетки JY, а закрашенный квадрат соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали примированные пептидом WT1126P2L клетки JY.
Индуцированные CTL показали более сильную цитотоксическую активность против примированных пептидом WT1126 клеток JY, чем против не примированных пептидом WT1126 клеток JY (фиг. 11a). Индуцированные CTL также показали более сильную цитотоксическую активность против примированных пептидом WT1126P2L клеток JY, чем против не примированных пептидом WT1126P2L клеток JY (фиг. 11b). Как очевидно из результатов, CTL, индуцированные стимуляцией пептидом WT1126P2L, могут распознавать пептид WT1126P2L и пептид дикого типа WT1126.
Пример 10 (сравнение рестриктированных по HLA-A*0206 CTL, индуцированных различными модифицированными пептидами WT1126)
(1) Цель
Принимая во внимание результаты примера 7, для тестирования в качестве модифицированных пептидов WT1126 выбраны пептид WT1126P1F, пептид WT1126P2L, пептид WT1126P3M и пептид WT1126P9V, и для скрининга на модифицированные пептиды WT1126, способные индуцировать CTL с высокой цитотоксической активностью, проводили приведенные ниже эксперименты.
(2) Материалы и методы
У здорового человека-донора с выявленной экспрессией молекул HLA-A*0206 (положительный по HLA-A*0206 здоровый донор крови), выделяли PBMC, и из PBMC выделяли CD14-позитивные клетки с применением магнитных частиц-DM с антителами к CD14 человека. Среду для культивирования получали посредством добавления 800 МЕ/мл GM-CSF и 1000 МЕ/мл IL-4 к среде X-VIV015, дополненной 1 об./об.% сывороточным AB человека, а CD14-позитивные клетки культивировали в среде для культивирования в течение 1 суток.
К указанной выше культуре добавляли смесь цитокинов для созревания, содержащую 10 нг/мл TNFα, 10 нг/мл IL-β, 1000 МЕ/мл IL-6 и 1 мкг/мл PGE2. После дополнительных одних суток культивирования получали аутологичные зрелые DC.
Аутологичные зрелые DC примировали 10 мкг/мл модифицированного пептида WT1126, полученного в примере 13 (пептид WT1126P1F, пептид WT1126P2L, пептид WT1126P3M или пептид WT1126P9V), культивировали в течение 4 часов и облучали 35 Гр радиоактивного излучения. Полученные таким образом клетки использовали в качестве стимулирующих клеток для индукции CTL.
Обогащенные CD8-позитивными T-клетками PBMC (2×106 клеток/лунку) и указанные выше DC (1×105 клеток/лунку) совместно культивировали в 24-луночном планшете. Через десять суток проводили повторную стимуляцию, добавляя PBMC, которые примировали пептидом и облучали 35 Гр радиоактивного излучения. Через двое суток после повторной стимуляции добавляли 10 МЕ/мл IL-2 и 10 нг/мл IL-7. После повторения такой же стимуляции еще 4 раза, происходило обогащение CD8-позитивными T-клетками. CD8-позитивные T-клетки тестировали на цитотоксическую активность против различных клеток-мишеней.
Используемые клетки-мишени представляли собой B-LCL, полученные посредством вирусной инфекции EB из крови положительного по HLA-A*0206 донора, клетки K562 и клетки 0206K562.
(3) Результаты
На фиг. 12 приведены результаты измерения цитотоксической активности CTL, индуцированных стимуляцией PBMC от положительного по HLA-A*0206 донора 3 различными пептидами. На фиг. 12a показана цитотоксическая активность CTL, индуцированных стимуляцией пептидом WT1126P2L. На фиг. 12b показана цитотоксическая активность CTL, индуцированных стимуляцией пептидом WT1126P3M. На фиг. 12c показана цитотоксическая активность CTL, индуцированных стимуляцией пептидом WT1126P9V. На фиг. 12a-12c вертикальная ось соответствует цитотоксической активности, а горизонтальная ось соответствует отношению CD8-позитивных T-клеток, полученных посредством стимуляции пептидом (эффектор: E), к клеткам-мишеням (мишень: T) (соотношение E/T). Закрашенный ромб соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали аутологичные клетки B-LCL, а закрашенный квадрат соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали аутологичные клетки B-LCL, примированные таким же модифицированным пептидом WT1126, как использовался для указанной выше стимуляции.
CTL, индуцированные стимуляцией пептидом WT1126P2L, показали более сильную цитотоксическую активность против примированных пептидом WT1126P2L аутологичных клеток B-LCL, которые положительны по HLA-A*0206 и негативны по WT1, чем против не примированных пептидом WT1126P2L аутологичных клеток B-LCL (фиг. 12a). CTL, индуцированные стимуляцией пептидом WT1126P3M, показали более сильную цитотоксическую активность против примированных пептидом WT1126P3M аутологичных клеток B-LCL, которые положительны по HLA-A*0206 и негативны по WT1, чем против не примированных пептидом WT1126P3M аутологичных клеток B-LCL (фиг. 12b). CTL, индуцированные стимуляцией пептидом WT1126P9V, показали более сильную цитотоксическую активность против примированных пептидом WT1126P9V аутологичных клеток B-LCL, которые положительны по HLA-A*0206 и негативны по WT1, чем против не примированных пептидом WT1126P9V аутологичных клеток B-LCL (фиг. 12c).
Эти результаты показывают, что индуцированы CTL, специфичные к пептиду, используемому для указанной выше стимуляции, и рестриктированные по HLA-A*0206.
На фиг. 13 приведены результаты измерения цитотоксической активности CTL, индуцированных посредством стимуляции PBMC от положительного по HLA-A*0206 донора 3 пептидом WT1126P9V. На фиг. 13 вертикальная ось соответствует цитотоксической активности, а горизонтальная ось соответствует отношению CD8-позитивных T-клеток, полученных посредством стимуляции пептидом (эффектор: E), к клеткам-мишеням (мишень: T) (соотношение E/T). Закрашенный ромб соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали аутологичные клетки B-LCL, а закрашенный квадрат соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали аутологичные клетки B-LCL с трансфицированным геном WT1.
На фиг. 13 CTL, индуцированные стимуляцией пептидом WT1126P9V, показали более сильную цитотоксическую активность против аутологичных клеток B-LCL, исходно положительных по HLA-A*0206 и негативных по WT1, которые делали положительными по WT1 посредством трансфекции гена WT1 в клетки B-LCL, чем против не трансфицированных геном WT1 аутологичных клеток B-LCL (фиг. 12c). Как очевидно из результата, CTL, индуцированные стимуляцией пептидом WT1126P9V, рестриктированы по HLA-A*0206 и демонстрируют цитотоксическую активность, распознавая присутствующий эндогенно пептид WT1126 дикого типа.
На фиг. 14 приведены результаты измерения цитотоксической активности CTL, индуцированных стимуляцией PBMC от положительного по HLA-A*0206 донора 4 различными пептидами. На фиг. 14a показана цитотоксическая активность CTL, индуцированных стимуляцией пептидом WT1126P2L. На фиг. 14b показана цитотоксическая активность CTL, индуцированных стимуляцией пептидом WT1126P3M. На фиг. 14c показана цитотоксическая активность CTL, индуцированных стимуляцией пептидом WT1126P9V. На фиг. 14a-14c вертикальная ось соответствует цитотоксической активности, а горизонтальная ось соответствует отношению CD8-позитивных T-клеток, полученных посредством стимуляции пептидом (эффектор: E), к клеткам-мишеням (мишень: T) (соотношение E/T). Закрашенный ромб соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали аутологичные клетки B-LCL, а закрашенный квадрат соответствует группе, в которой аутологичные клетки B-LCL примировали тем же модифицированным пептидом WT1126, который использовали в качестве клеток-мишеней для указанной выше стимуляции.
CTL, индуцированные стимуляцией пептидом WT1126P2L, показали более сильную цитотоксическую активность против примированных пептидом WT1126P2L аутологичных клеток B-LCL, которые положительны по HLA-A*0206 и негативны по WT1, чем против не примированных пептидом WT1126P2L аутологичных клеток B-LCL (фиг. 14a). CTL, индуцированные стимуляцией пептидом WT1126P3M, показали более сильную цитотоксическую активность против примированных пептидом WT1126P3M аутологичных клеток B-LCL, которые положительны по HLA-A*0206 и негативны по WT1, чем против не примированных пептидом WT1126P3M аутологичных клеток B-LCL (фиг. 14b). CTL, индуцированные стимуляцией пептидом WT1126P9V, показали более сильную цитотоксическую активность против примированных пептидом WT1126P9V аутологичных клеток B-LCL, которые положительны по HLA-A*0206 и негативны по WT1, чем против не примированных пептидом WT1126P9V аутологичных клеток B-LCL (фиг. 14c). Эти результаты показывают, что индуцированы CTL, специфичные к пептиду, используемому для указанной выше стимуляции, и рестриктированные по HLA-A*0206.
На фиг. 15 приведены результаты измерения цитотоксической активности CTL, индуцированных посредством стимуляции PBMC от положительного по HLA-A*0206 донора 4 различными пептидами. Используемые клетки-мишени были отрицательными по HLA-A*0206, положительными по WT1 клетками K562, и клетки K562 делали эндогенно презентирующими антигенные пептиды WT1 посредством трансфекции в них гена HLA-A*0206 (клетки 0206K562). На фиг. 15a показана цитотоксическая активность CTL, индуцированных стимуляцией пептидом WT1126P2L. На фиг. 15b показана цитотоксическая активность CTL, индуцированных стимуляцией пептидом WT1126P3M. На фиг. 15c показана цитотоксическая активность CTL, индуцированных стимуляцией пептидом WT1126P9V. На фиг. 15a-15c вертикальная ось соответствует цитотоксической активности, а горизонтальная ось соответствует отношению CD8-позитивных T-клеток, полученных посредством стимуляции пептидом (эффектор: E), к клеткам-мишеням (мишень: T) (соотношение E/T). Закрашенный ромб соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали клетки K562, а закрашенный квадрат соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали клетки 0206K562, т.е. клетки K562, сделанные эндогенно презентирующими антигенные пептиды WT1 посредством трансфекции в них гена HLA-A*0206.
На фиг. 15a-15c CTL, индуцированные стимуляцией пептидом WT1126P2L, пептидом WT1126P3M или пептидом WT1126P9V, в каждом случае показали более сильную цитотоксическую активность против клеток 0206K562, чем против клеток K562. Как очевидно из результатов, CTL, индуцированные стимуляцией любым из этих модифицированных пептидов, рестриктированы по HLA-A*0206 и демонстрируют цитотоксическую активность, распознавая присутствующий эндогенно пептид WT1126 дикого типа.
Пример 11 (сравнение рестриктированных по HLA-A*0201 CTL, индуцированных различными модифицированными пептидами WT1187)
(1) Цель
Принимая во внимание результаты примера 8, для тестирования в качестве модифицированных пептидов WT1187 выбраны пептид WT1187P1F (SEQ ID NO: 11), пептид WT1187P2M (SEQ ID NO: 16) и пептид WT1187P3M (SEQ ID NO: 20), и для скрининга на модифицированные пептиды WT1187, способные индуцировать CTL с высокой цитотоксической активностью, проводили приведенные ниже эксперименты.
(2) Материалы и методы
У здорового человека-донора с выявленной экспрессией молекул HLA-A*0201 (положительный по HLA-A*0201 здоровый донор крови) выделяли PBMC, и из PBMC выделяли CD14-позитивные клетки с применением магнитных частиц-DM с антителами к CD14 человека. Среду для культивирования получали посредством добавления 800 МЕ/мл GM-CSF и 1000 МЕ/мл IL-4 к среде X-VIVO15, дополненной 1 об./об.% сывороточным AB человека, а CD14-позитивные клетки культивировали в среде для культивирования в течение 1 суток.
К указанной выше культуре добавляли смесь цитокинов для созревания, содержащую 10 нг/мл TNFα, 10 нг/мл IL-β, 1000 МЕ/мл IL-6 и 1 мкг/мл PGE2. После дополнительных одних суток культивирования получали аутологичные зрелые DC.
Аутологичные зрелые DC примировали 10 мкг/мл модифицированного пептида WT1187, полученного в примере 13 (пептид WT1187P1F, пептид WT1187P2M или пептид WT1187P3M), культивировали в течение 4 часов и облучали 35 Гр радиоактивного излучения. Полученные таким образом клетки использовали в качестве стимулирующих клеток для индукции CTL.
PBMC (2×106 клеток/лунку), служащие в качестве иммунореактивных клеток, и указанные выше DC (2×105 клеток/лунку) совместно культивировали в 24-луночном планшете. Через одну неделю проводили повторную стимуляцию, добавляя клетки T2, которые примировали пептидом и облучали 75 Гр радиоактивного излучения. Через трое суток после повторной стимуляции добавляли 20 МЕ/мл IL-2. Такую же повторную стимуляцию повторяли еще 3 раза, добавляя примированные пептидом облученные клетки T2, а затем иммунореактивные клетки обогащались CD8-позитивными клетками. CD8-позитивные T-клетки тестировали на цитотоксическую активность против клеток-мишеней, т.е., в данном случае, клеток JY.
(3) Результаты
На фиг. 16 приведены результаты измерения цитотоксической активности CTL, индуцированных посредством стимуляции PBMC от положительного по HLA-A*0201 донора пептидом WT1187P1F (фиг. 16a) или пептидом WT1187P2M (фиг. 16b). На фиг. 16a и 16b вертикальная ось соответствует цитотоксической активности, а горизонтальная ось соответствует отношению CD8-позитивных T-клеток, полученных посредством стимуляции пептидом (эффектор: E), к клеткам-мишеням (мишень: T) (соотношение E/T). Закрашенный ромб соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали клетки JY, закрашенный треугольник соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали примированные пептидом WT1187 клетки JY, а закрашенный квадрат соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали клетки JY, примированные модифицированным пептидом WT1187 (пептид WT1187P1F), который использовали для указанной выше стимуляции. Клетки JY положительны по HLA-A*0201 и негативны по WT1.
CTL, индуцированные стимуляцией пептидом WT1187P1F, продемонстрировали одинаковую цитотоксическую активность против примированных пептидом WT1187 клеток JY и примированных пептидом WT1187P1F клеток JY, и активность была сильнее, чем активность против не примированных пептидом клеток JY (фиг. 16a). CTL, индуцированные стимуляцией пептидом WT1187P2M, продемонстрировали одинаковую цитотоксическую активность против примированных пептидом WT1187 клеток JY и примированных пептидом WT1187P2M клеток JY, и активность была сильнее, чем активность против не примированных пептидом клеток JY (фиг. 16b). Как очевидно из результатов, CTL, индуцированные стимуляцией модифицированным пептидом, могут распознавать модифицированный пептид WT1187 и пептид WT1187 дикого типа.
Пример 12 (сравнение рестриктированных по HLA-A*0206 CTL, индуцированных различными модифицированными пептидами WT1187)
(1) Цель
Принимая во внимание результаты примера 7, в качестве модифицированных пептидов WT1187 для тестирования выбраны пептид WT1187P1F, пептид WT1187P2M и пептид WT1187P3M, и для скрининга на модифицированные пептиды WT1187, способные индуцировать CTL с высокой цитотоксической активностью, проводили приведенные ниже эксперименты.
(2) Материалы и методы
У здорового человека-донора с выявленной экспрессией молекул HLA-A*0206 (положительный по HLA-A*0206 здоровый донор крови) выделяли PBMC, и из PBMC выделяли CD14-позитивные клетки с применением магнитных частиц-DM с антителами к CD14 человека. Среду для культивирования получали посредством добавления 800 МЕ/мл GM-CSF и 1000 МЕ/мл IL-4 к среде X-VIVO15, дополненной 1 об./об.% сывороточным AB человека, а CD14-позитивные клетки культивировали в среде для культивирования в течение 1 суток.
К указанной выше культуре добавляли смесь цитокинов для созревания, содержащую 10 нг/мл TNFα, 10 нг/мл IL-β, 1000 МЕ/мл IL-6 и 1 мкг/мл PGE2. После дополнительных одних суток культивирования получали аутологичные зрелые DC.
Аутологичные зрелые DC примировали модифицированным пептидом WT1187, полученным в примере 13 (пептид WT1187P1F, пептид WT1187P2M или пептид WT1187P3M), культивировали в течение 4 часов и облучали 35 Гр радиоактивного излучения. Полученные таким образом клетки использовали в качестве стимулирующих клеток для индукции CTL.
Обогащенные CD8-позитивными T-клетками PBMC (2×106 клеток/лунку) и указанные выше DC (1×105 клеток/лунку) совместно культивировали в 24-луночном планшете. Через десять суток проводили повторную стимуляцию, добавляя PBMC, которые примировали пептидом и облучали 35 Гр радиоактивного излучения. Через двое суток после повторной стимуляции добавляли 10 МЕ/мл IL-2 и 10 нг/мл IL-7. После повторения такой же стимуляции еще 4 раза, происходило обогащение CD8-позитивными T-клетками. CD8-позитивные T-клетки тестировали на цитотоксическую активность против различных клеток-мишеней.
Используемые клетки-мишени представляли собой B-LCL, полученные посредством вирусной инфекции EB из крови положительного по HLA-A*0206 донора, клетки K562 и клетки 0206K562.
(3) Результаты
На фиг. 17 приведены результаты измерения цитотоксической активности CTL, индуцированных посредством стимуляции PBMC от положительного по HLA-A*0206 донора пептидом WT1187P1F. На фиг. 17 вертикальная ось соответствует цитотоксической активности, а горизонтальная ось соответствует отношению CD8-позитивных T-клеток, полученных посредством стимуляции пептидом (эффектор: E), к клеткам-мишеням (мишень: T) (соотношение E/T). На фиг. 17a закрашенный ромб соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали клетки B-LCL, закрашенный квадрат соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали примированные пептидом WT1187 клетки B-LCL, а закрашенный треугольник соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали примированные пептидом WT1187P1F клетки B-LCL. На фиг. 17b закрашенный ромб соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали клетки K562, а закрашенный квадрат соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали клетки 0206K562, т.е. клетки K562, сделанные эндогенно презентирующими антигенные пептиды WT1 посредством трансфекции в них гена HLA-A*0206.
CTL, индуцированные стимуляцией пептидом WT1187P1F, продемонстрировали одинаковую цитотоксическую активность против примированных пептидом WT1187 клеток B-LCL и примированных пептидом WT1187P1F клеток B-LCL, и активность была сильнее, чем активность против не примированных пептидом клеток B-LCL (фиг. 17a). Когда в качестве клеток-мишеней использовали отрицательные по HLA-A*0206, положительные по WT1 клетки K562, и клетки K562, сделанные эндогенно презентирующими антигенные пептиды WT1 посредством трансфекции в них гена HLA-A*0206 (клетки 0206K562), CTL, индуцированные стимуляцией пептидом WT1187P1F, показали более сильную цитотоксическую активность против клеток 0206K562, чем против клеток K562 (фиг. 17b). Как очевидно из результатов, CTL, индуцированные стимуляцией пептидом WT1187P1F, могут распознавать пептид WT1187P1F и пептид дикого типа WT1187. Подобным образом обнаружено, что CTL рестриктированы по HLA-A*0206 и демонстрируют цитотоксическую активность, распознавая присутствующий эндогенно пептид WT1187 дикого типа.
На фиг. 18 приведены результаты измерения цитотоксической активности CTL, индуцированных посредством стимуляции PBMC от положительного по HLA-A*0206 донора пептидом WT1187P2M. На фиг. 18 вертикальная ось соответствует цитотоксической активности, а горизонтальная ось соответствует отношению CD8-позитивных T-клеток, полученных посредством стимуляции пептидом (эффектор: E), к клеткам-мишеням (мишень: T) (соотношение E/T). На фиг. 18a закрашенный ромб соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали клетки B-LCL, закрашенный квадрат соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали примированные пептидом WT1187 клетки B-LCL, а закрашенный треугольник соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали примированные пептидом WT1187P2M клетки B-LCL. На фиг. 18b закрашенный ромб соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали клетки K562, а закрашенный квадрат соответствует группе, в которой в качестве клеток-мишеней использовали клетки 0206K562, т.е. клетки K562, сделанные эндогенно презентирующими антигенные пептиды WT1 посредством трансфекции в них гена HLA-A*0206.
CTL, индуцированные стимуляцией пептидом WT1187P2M, продемонстрировали одинаковую цитотоксическую активность против примированных пептидом WT1187 клеток B-LCL и примированных пептидом WT1187P2M клеток B-LCL, и активность была сильнее, чем активность против не примированных пептидом клеток B-LCL (фиг. 18a). Когда в качестве клеток-мишеней использовали отрицательные по HLA-A*0206, положительные по WT1 клетки K562, и клетки K562, сделанные эндогенно презентирующими антигенные пептиды WT1 посредством трансфекции в них гена HLA-A*0206 (клетки 0206K562), CTL, индуцированные стимуляцией пептидом WT1187P2M, показали более сильную цитотоксическую активность против клеток 0206K562, чем против клеток K562 (фиг. 18b). Как очевидно из результатов, CTL, индуцированные стимуляцией пептидом WT1187P2M, могут распознавать пептид WT1187P2M и пептид дикого типа WT1187. Подобным образом обнаружено, что CTL рестриктированы по HLA-A*0206 и демонстрируют цитотоксическую активность, распознавая присутствующий эндогенно пептид WT1187 дикого типа.
Как очевидно из результатов примеров 9-12, CTL, индуцированные стимуляцией модифицированным пептидом WT1126, т.е. пептидом WT1126P1F, пептидом WT1126P2L, пептидом WT1126P3M или пептидом WT1126P9V, рестриктированы по HLA-A*0206 и демонстрируют цитотоксическую активность, распознавая присутствующий эндогенно пептид WT1126 дикого типа. Кроме того, пептид WT1126P9V, пептид WT1126P2L и пептид WT1126P3M были высокоэффективными.
Как очевидно из приведенных выше результатов, CTL, индуцированные стимуляцией модифицированным пептидом WT1187, т.е. пептидом WT1187P1F, пептидом WT1187P2M или пептидом WT1187P3M, рестриктированы по HLA-A*0206 и демонстрируют цитотоксическую активность, распознавая присутствующий эндогенно пептид WT1187 дикого типа. Кроме того, пептид WT1187P2M и пептид WT1187P1F были высокоэффективными.
Таким образом, показано, что эти модифицированные пептиды являются эффективными при лечении и профилактике злокачественных опухолей, сопровождающихся увеличенной экспрессией гена WT1 у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов.
Как очевидно из приведенных выше результатов, CTL, индуцированные стимуляцией модифицированным пептидом WT1126, т.е. пептидом WT1126P1F, пептидом WT1126P2L, пептидом WT1126P3M или пептидом WT1126P9V, рестриктированы по HLA-A*0201 и демонстрируют цитотоксическую активность, распознавая присутствующий эндогенно пептид WT1126 дикого типа. Кроме того, пептид WT1126P1F и пептид WT1126P2L были высокоэффективными.
Как очевидно из приведенных выше результатов, CTL, индуцированные стимуляцией модифицированным пептидом WT1187, т.е. пептидом WT1187P1F, пептидом WT1187P2M или пептидом WT1187P3M, рестриктированы по HLA-A*0201 и демонстрируют цитотоксическую активность, распознавая присутствующий эндогенно пептид WT1187 дикого типа. Кроме того, пептид WT1187P2M и пептид WT1187P1F были высокоэффективными. Таким образом, показано, что эти модифицированные пептиды эффективны при лечении и профилактике злокачественных опухолей, сопровождающихся увеличенной экспрессией гена WT1 у положительных по HLA-A*0201 индивидуумов.
Пример 13
Синтез пептида WT1187P2V (SVGEQQYSV; SEQ ID NO: 13; H-Ser-Val-Gly-Glu-Gln-Gln-Tyr-Ser-Val-OH)
1. Синтез смолы с защищенным пептидом (H-Ser(tBu)-Val-Gly-Glu(OtBu)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Tyr(tBu)-Ser(tBu)-Val-Alko-смола)
0,4 г Fmoc-Val-Alko-смолы (Alko представляет собой п-алкоксибензиловый спирт) (произведенный WATANABE CHEMICAL INDUSTRIES, LTD; 0,80 ммоль/г) помещали в реакционный сосуд твердофазного синтезатора ACT496, произведенного Advanced ChemTech, отмывали DMF (N,N’-диметилформамидом) (этап 1), обрабатывали 25% раствором пиперидина в DMF (5 минут × 1 раз, и 30 минут × 1 раз) с удалением группы Fmoc (этап 2), и снова отмывали DMF (этап 3) с получением H-Val-Alko-смолы. В этот реакционный сосуд добавляли 0,7 мл NMP (N-метилпирролидинона) и раствор 121 мг (0,96 ммоль) DIPCI (N,N’-диизопропилкарбодиимида) в 0,9 мл NMP, а затем раствор 368 мг (0,96 ммоль) Fmoc-Ser(tBu)-OH и 147 мг (0,96 ммоль) моногидрата HOBT (1-гидроксибензотриазола) в 1,8 мл NMP. Реакцию присоединения проводили при комнатной температуре в течение 60 минут (этап 4). Проводили дополнительную реакцию присоединения с использованием тех же количеств Fmoc-Ser(tBu)-OH, моногидрата HOBT и DIPCI, как указано выше (этап 5). Полученную смолу отмывали DMF (этап 6), снимали защиту (этап 7) и снова отмывали (этап 8) с получением H-Ser(tBu)-Val-Alko-смолы. Затем последовательно проводили присоединения, повторяя этапы 4-8 с применением Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Val-OH и Fmoc-Ser(tBu)-OH. Полученную смолу с пептидом извлекали из реакционного сосуда, отмывали простым эфиром, а затем сушили в вакууме с получением 980 мг H-Ser(tBu)-Val-Gly-Glu(OtBu)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Tyr(tBu)-Ser(tBu)-Val-Alko-смолы. Схема процесса синтеза, указанного выше, приведена в таблице 6.
Таблица 6 Процесс синтеза |
|||
Этап | Реагент | Повтор (раз) | Длительность (мин) |
1) отмывка | DMF 3 мл | 5 | 0,3 |
2) снятие защиты | 25% пиперидин/DMF 3 мл | 1 1 |
5 30 |
3) отмывка | DMF 3 мл | 5 | 0,3 |
4) присоединение | Каждая Fmoc-аминокислота (3 экв.), HOBT (3 экв.), DIPCI (3 экв.)/NMP 3,4 мл | 1 | 60 |
5) присоединение | Каждая Fmoc-аминокислота (3 экв.), HOBT (3 экв.), DIPCI (3 экв.)/NMP 3,4 мл | 1 | 60 |
6) отмывка | DMF 3 мл | 5 | 0,3 |
7) снятие защиты | 25% пиперидин/DMF 3 мл | 1 1 |
5 30 |
8) отмывка | DMF 3 мл | 5 | 0,3 |
2. Удаление защитной группы у защищенного пептида на смоле
К 980 мг H-Ser(tBu)-Val-Gly-Glu(OtBu)-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Tyr(tBu)-Ser(tBu)-Val-Alko-смолы добавляли 5 мл смешанного раствора трифторуксусная кислота/вода/триизопропилсилан (95/2,5/2,5 (объемное соотношение)). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2,5 часов. Смолу отфильтровывали, а полученный фильтрат добавляли к ледяному диэтиловому эфиру. Полученный осадок собирали стеклянным фильтром. Остаток промывали диэтиловым эфиром и сушили в вакууме с получением 268 мг неочищенного пептида.
3. Очистка неочищенного пептида
268 мг полученного неочищенного пептида растворяли в 20% водном растворе уксусной кислоты и очищали посредством жидкостной хроматографии с обращенной фазой.
Насос: Shimadzu LC-8A
Колонка: YMC-Pack Pro C18 AS12S11-2530WT 3смΦ×25см
Элюент 1: H2O/0,1% TFA
Элюент 2 (второй элюент): CH3CN/0,1% TFA
Скорость потока: 10 мл/мин
Детекция: УФ 220 нм
После уравновешивания вторым элюентом в концентрации 1% в колонку вносили раствор неочищенного пептида. После этого позволяли расти концентрации второго элюента до 8% в течение 30 минут, а затем до 14% в течение 120 минут. Содержащие требуемое соединение фракции собирали, в вакууме испаряли ацетонитрил, а затем осадок лиофилизировали. Таким образом, получали 105 мг требуемого пептида WT1187P2V (SVGEQQYSV; SEQ ID NO: 13; H-Ser-Val-Gly-Glu-Gln-Gln-Tyr-Ser-Val-OH).
Условия, используемые для анализа ВЭЖХ и масс-спектрометрии очищенного пептида, являлись такими, как указано ниже.
Анализ ВЭЖХ (Shimadzu LC-10Avp)
Колонка: YMC-Pack Pro C18 AS-302 4,6 ммΦ×150 мм
Элюент 1: H2O/0,1% TFA
Элюент 2: CH3CN/0,1% TFA
Градиент: концентрации элюента 2 позволяли расти с увеличением от 10% до 40% в течение 30 минут.
Скорость потока: 1 мл/мин
Детекция: УФ 220 нм
Чистота: 97,4%, время удержания: 11,22 минут
Аминокислотный анализ (анализатор аминокислот Hitachi L-8500)
Гидролиз: 1% фенол/6Н водный раствор соляной кислоты, 110°C, 24 часа
Способ анализа: нингидриновый способ
Ser:1,78(2) Glx:3,26(3) *Gly: (1) Val:2,04(2) Tyr:1,06(1)
*) Gly = стандартная аминокислота, значение в скобках представляет собой теоретическое значение.
Масс-спектрометрия (масс-спектрометр Applied Biosystems API 150EX)
m/z = 996,9 [M+1]+ (теоретическое значение = 996,5)
Анализ аминокислотной последовательности (белковый секвенатор Applied Biosystems 491)
Аминокислотную последовательность проверяли последовательно от N-концевого Ser до C-концевого Val.
Пептиды, представленные в таблицах 7 и 8, синтезировали таким же способом, как указано выше.
Таблица 7 | |||||||
Пептид | Аминокислотная посл-ность | SEQ ID NO | Полученное количество неочищенного пептида (мг) | Полученное количество очищенного пептида (мг) | Чистота при ВЭЖХ (%) | Время удержания при ВЭЖХ (мин) | Масс-спектрометрия (m/z) |
WT1187P2Q | SQGEQQYSV | 14 | 251 | 88 | 98,2 | 9,21 | 1026,0 |
WT1187P2I | SIGEQQYSV | 15 | 244 | 91 | 97,6 | 12,98 | 1010,7 |
WT1187P2M | SMGEQQYSV | 16 | 260 | 22 | 96,9 | 11,91 | 1029,1 |
WT1187P3L | SLLEQQYSV | 17 | 238 | 176 | 96,8 | 18,24 | 1066,9 |
WT1187P3A | SLAEQQYSV | 18 | 268 | 172 | 99,1 | 13,67 | 1024,8 |
WT1187P3V | SLVEQQYSV | 19 | 267 | 182 | 98,7 | 15,26 | 1052,8 |
WT1187P3M | SLMEQQYSV | 20 | 280 | 63 | 94,8 | 16,12 | 1084,8 |
WT1187P3P | SLPEQQYSV | 21 | 227 | 132 | 98,1 | 14,02 | 1050,8 |
WT1187P3W | SLWEQQYSV | 22 | 248 | 40 (из 100 мг неочищенного пептида) | 99,4 | 20,00 | 1139,5 |
WT1187P3F | SLFEQQYSV | 23 | 224 | 110 | 98,3 | 19,44 | 1100,8 |
WT1187P3Y | SLYEQQYSV | 24 | 236 | 114 | 98,5 | 15,76 | 1116,7 |
WT1187P3S | SLSEQQYSV | 25 | 261 | 130 | 99,1 | 13,33 | 1040,8 |
WT1187P3I | SLIEQQYSV | 26 | 270 | 162 | 97,3 | 17,51 | 1066,9 |
Таблица 8 | |||||||
Пептид | Аминокислотная посл-ность | SEQ ID NO | Полученное количество неочищенного пептида (мг) | Полученное количество очищенного пептида (мг) | Чистота при ВЭЖХ (%) | Время удержания при ВЭЖХ (мин) | Масс-спектрометрия (m/z) |
WT1126P2V | RVFPNAPYL | 36 | 253 | 130 | 96,5 | 20,65 | 1077,1 |
WT1126P2Q | RQFPNAPYL | 37 | 274 | 87 | 98,7 | 18,43 | 1106,1 |
WT1126P2A | RAFPNAPYL | 38 | 240 | 63 | 99,0 | 19,03 | 1049,1 |
WT1126P9A | RMFPNAPYA | 50 | 262 | 139 | 94,3 | 16,59 | 1066,8 |
WT1126P9M | RMFPNAPYM | 52 | 295 | 167 | 95,7 | 19,75 | 1126,8 |
Пептиды, представленные в таблицах 9-12, синтезировали сходным образом, но используемые для анализа ВЭЖХ и масс-спектрометрии очищенных пептидов условия являлись такими, как указано ниже.
Анализ ВЭЖХ (Agilent HP1100 или Thermo Fisher Scientific Surveyor)
Колонка: Thermo Fischer Scientific BioBasic-18 3 ммΦ×250 мм
Элюент 1: H2O/0,1% TFA
Элюент 2: CH3CN/0,1% TFA
Градиент: концентрации элюента 2 позволяли изменяться до концентрации, представленной в таблице в течение 20 минут.
Скорость потока: 0,4 мл/мин
Детекция: 215 нм
Масс-спектрометрия
Масс-спектрометр Thermo Bioanalysis Dynamo (MALDI-TOF)
Таблица 9 | ||||||
Пептид | Аминокислотная последовательность | SEQ ID NO | Чистота при ВЭЖХ (%) | Время удержания при ВЭЖХ (мин) | Градиент ВЭЖХ | Масс-спектрометрия (m/z) |
WT1187P1G | GLGEQQYSV | 4 | 100 | 12,72 | 5-60% | 980,7 |
WT1187P1A | ALGEQQYSV | 5 | 98,9 | 12,00 | 10-50% | 993,0 |
WT1187P1V | VLGEQQYSV | 6 | 98,9 | 14,98 | 5-50% | 1022,3 |
WT1187P1L | LLGEQQYSV | 7 | 97,6 | 12,75 | 10-65% | 1037,6 |
WT1187P1I | ILGEQQYSV | 8 | 98,8 | 13,46 | 5-60% | 1037,2 |
WT1187P1M | MLGEQQYSV | 9 | 95,5 | 14,15 | 5-60% | 1054,0 |
WT1187P1W | WLGEQQYSV | 10 | 98,9 | 15,60 | 5-60% | 1109,9 |
WT1187P1F | FLGEQQYSV | 11 | 95,8 | 13,14 | 10-65% | 1070,8 |
WT1187P9L | SLGEQQYSL | 53 | 95,4 | 12,49 | 10-55% | 1024,6 |
Таблица 10 | ||||||
Пептид | Аминокислотная последовательность | SEQ ID NO | Чистота при ВЭЖХ (%) | Время удержания при ВЭЖХ (мин) | Градиент ВЭЖХ | Масс-спектрометрия (m/z) |
WT1126P1G | GMFPNAPYL | 27 | 99,6 | 15,39 | 10-70% | 1009,5 |
WT1126P1A | AMFPNAPYL | 28 | 98,8 | 13,79 | 10-85% | 1023,3 |
WT1126P1V | VMFPNAPYL | 29 | 98,4 | 14,00 | 10-85% | 1052,2 |
WT1126P1L | LMFPNAPYL | 30 | 98,9 | 14,91 | 10-80% | 1066,3 |
WT1126P1I | IMFPNAPYL | 31 | 99,2 | 13,93 | 10-80% | 1065,4 |
WT1126P1M | MMFPNAPYL | 32 | 100 | 13,77 | 10-80% | 1083,5 |
WT1126P1W | WMFPNAPYL | 33 | 97,5 | 15,64 | 10-80% | 1139,3 |
WT1126P1F | FMFPNAPYL | 34 | 98,8 | 14,78 | 10-85% | 1099,7 |
WT1126P2L | RLFPNAPYL | 39 | 98,6 | 13,11 | 10-80% | 1090,9 |
WT1126P2I | RIFPNAPYL | 40 | 100 | 13,74 | 10-70% | 1090,1 |
WT1126P3I | RMIPNAPYL | 41 | 97,4 | 14,17 | 10-70% | 1076,7 |
WT1126P3L | RMLPNAPYL | 42 | 100 | 13,88 | 10-65% | 1076,4 |
WT1126P3G | RMGPNAPYL | 43 | 96,7 | 12,63 | 10-65% | 1020,9 |
WT1126P3A | RMAPNAPYL | 44 | 95,2 | 13,95 | 10-60% | 1034,9 |
WT1126P3V | RMVPNAPYL | 45 | 92,9 | 14,67 | 10-60% | 1062,7 |
WT1126P3M | RMMPNAPYL | 46 | 91,8 | 14,87 | 10-60% | 1094,8 |
WT1126P3P | RMPPNAPYL | 47 | 95,8 | 13,56 | 10-65% | 1058,8 |
WT1126P3W | RMWPNAPYL | 48 | 99,6 | 15,21 | 10-70% | 1149,7 |
WT1126P9V | RMFPNAPYV | 49 | 99,2 | 13,86 | 10-60% | 1096,5 |
WT1126P9I | RMFPNAPYI | 51 | 99,4 | 14,00 | 10-65% | 1110,7 |
Таблица 11 | ||||||
Пептид | Аминокислотная последовательность | SEQ ID NO | Чистота при ВЭЖХ (%) | Время удержания при ВЭЖХ (мин) | Градиент ВЭЖХ | Масс-спектрометрия (m/z) |
WT1187P1D | DLGEQQYSV | 54 | 96,6 | 13,43 | 5-60% | 1038,2 |
WT1187P1E | ELGEQQYSV | 55 | 96,4 | 11,83 | 10-60% | 1052,2 |
WT1187P1H | HLGEQQYSV | 56 | 98,0 | 15,79 | 5-40% | 1060,2 |
WT1187P1K | KLGEQQYSV | 57 | 99,0 | 13,77 | 5-45% | 1052,2 |
WT1187P1N | NLGEQQYSV | 58 | 95,8 | 14,34 | 5-50% | 1037,0 |
WT1187P1P | PLGEQQYSV | 59 | 95,9 | 14,68 | 5-50% | 1020,0 |
WT1187P1Q | QLGEQQYSV | 60 | 96,8 | 13,28 | 5-60% | 1051,3 |
WT1187P1R | RLGEQQYSV | 61 | 100 | 13,27 | 5-60% | 1079,6 |
WT1187P1T | TLGEQQYSV | 62 | 96,7 | 14,40 | 5-50% | 1025,0 |
Таблица 12 | ||||||
Пептид | Аминокислотная последовательность | SEQ ID NO | Чистота при ВЭЖХ (%) | Время удержания при ВЭЖХ (мин) | Градиент ВЭЖХ | Масс-спектрометрия (m/z) |
WT1126P1D | DMFPNAPYL | 63 | 99,2 | 14,72 | 10-75% | 1067,3 |
WT1126P1E | EMFPNAPYL | 64 | 99,1 | 15,20 | 5-70% | 1082,1 |
WT1126P1H | HMFPNAPYL | 65 | 96,7 | 14,52 | 10-70% | 1089,9 |
WT1126P1K | KMFPNAPYL | 66 | 95,9 | 13,96 | 10-75% | 1080,0 |
WT1126P1N | NMFPNAPYL | 67 | 99,8 | 14,69 | 10-75% | 1066,3 |
WT1126P1P | PMFPNAPYL | 68 | 96,9 | 14,26 | 10-80% | 1049,3 |
WT1126P1Q | QMFPNAPYL | 69 | 95,1 | 14,94 | 10-70% | 1080,3 |
WT1126P1S | SMFPNAPYL | 70 | 99,8 | 14,28 | 10-80% | 1040,8 |
WT1126P1T | TMFPNAPYL | 71 | 98,8 | 13,72 | 10-85% | 1053,5 |
WT1126P2I&P9I | RIFPNAPYI | 72 | 97,0 | 14,23 | 10-65% | 1089,5 |
WT1126P2I&P9V | RIFPNAPYV | 73 | 100 | 12,23 | 10-80% | 1077,0 |
WT1126P2L&P9I | RLFPNAPYI | 74 | 97,7 | 13,43 | 10-75% | 1090,8 |
WT1126P2L&P9V | RLFPNAPYV | 75 | 97,0 | 12,83 | 10-75% | 1076,9 |
Пример 14
(Оценка модифицированных пептидов на активность индуцирования специфических иммунных клеток с использованием экспрессирующих HLA-A*0201 трансгенных мышей, и подтверждение перекрестной реактивности индуцированных специфических иммунных клеток к пептиду дикого типа)
<Способы>
(1) Модифицированные пептиды-кандидаты
В отношении пептида WT1187, пептида WT1126 и их модифицированных пептидов (пептиды, содержащие замену одного или двух аминокислотных остатков в положении 1, 2, 3 и/или 9 от N-конца пептида WT1187 или пептида WT1126) известным в данной области техники способом анализировали аффинность к молекулам HLA-A*0201, т.е. способом, с применением следующих четырех компьютерных баз данных:
BIMAS (http://www.mpiib-berlin.mpg.de/MAPPP/binding.html),
SYFPEITHI (http://www.mpiib-berlin.mpg.de/MAPPP/binding.html),
RANLPEP (http://immunax.dfci.harvard.edu/Tools/rankpep.html), и
NetMHC3.0 (http://www.cbs.dtu.dk/services/NetMHC/).
Результаты анализа пептида WT1187 и его модифицированных пептидов приведены в таблицах 13-16 и 21. Результаты анализа пептида WT1126 и его модифицированных пептидов приведены в таблицах 17-20 и 22-23. Прогнозируемая аффинность приведена в баллах.
Таблица 13 | ||||||
Пептид | Аминокислотная последовательность | SEQ ID NO | Показатель связывания HLA-A*0201 | |||
BIMAS | SYFPEITHI | RANKPEP | NetMHC3.0 | |||
WT1187 | SLGEQQYSV | 2 | 285 | 27 | 96/64,43% | 0,721 |
WT1187P1A | ALGEQQYSV | 5 | 285 | 27 | 95/63,76% | 0,720 |
WT1187P1F | FLGEQQYSV | 11 | 1312 | 26 | 82/55,03% | 0,862 |
WT1187P1G | GLGEQQYSV | 4 | 285 | 26 | 86/57,72% | 0,672 |
WT1187P1I | ILGEQQYSV | 8 | 485 | 27 | 90/60,40% | 0,698 |
WT1187P1L | LLGEQQYSV | 7 | 485 | 27 | 89/59,73% | 0,719 |
WT1187P1M | MLGEQQYSV | 9 | 485 | 25 | 92/61,74% | 0,770 |
WT1187P1V | VLGEQQYSV | 6 | 485 | 26 | 92/61,74% | 0,705 |
WT1187P1W | WLGEQQYSV | 10 | 1312 | 25 | 71/47,65% | 0,693 |
Таблица 14 | ||||||
Пептид | Аминокислотная последовательность | SEQ ID NO | Показатель связывания HLA-A*0201 | |||
BIMAS | SYFPEITHI | RANKPEP | NetMHC3.0 | |||
WT1187 | SLGEQQYSV | 2 | 285 | 27 | 96/64,43% | 0,721 |
WT1187P2I | SIGEQQYSV | 15 | 39 | 25 | 85/57,05% | 0,556 |
WT1187P2M | SMGEQQYSV | 16 | 206 | 25 | 84/56,38% | 0,740 |
WT1187P2Q | SQGEQQYSV | 14 | 29 | 17 | 52/34,90% | 0,455 |
WT1187P2V | SVGEQQYSV | 13 | 25 | 21 | 78/52,35% | 0,461 |
Таблица 15 | ||||||
Пептид | Аминокислотная последовательность | SEQ ID NO | Показатель связывания HLA-A*0201 | |||
BIMAS | SYFPEITHI | RANKPEP | NetMHC3.0 | |||
WT1187 | SLGEQQYSV | 2 | 285 | 27 | 96/64,43% | 0,721 |
WT1187P3A | SLAEQQYSV | 18 | 285 | 29 | 110/73,83% | 0,811 |
WT1187P3F | SLFEQQYSV | 23 | 1055 | 28 | 114/76,51% | 0,852 |
WT1187P3I | SLIEQQYSV | 26 | 285 | 29 | 115/77,18% | 0,817 |
WT1187P3L | SLLEQQYSV | 17 | 1055 | 29 | 116/77,85% | 0,839 |
WT1187P3M | SLMEQQYSV | 20 | 1055 | 28 | 114/76,51% | 0,876 |
WT1187P3P | SLPEQQYSV | 21 | 285 | 27 | 95/63,76% | 0,748 |
WT1187P3S | SLSEQQYSV | 25 | 285 | 27 | 110/73,83% | 0,793 |
WT1187P3V | SLVEQQYSV | 19 | 285 | 27 | 113/75,84% | 0,766 |
WT1187P3W | SLWEQQYSV | 22 | 2367 | 28 | 98/65,77% | 0,863 |
WT1187P3Y | SLYEQQYSV | 24 | 913 | 28 | 111/74,50% | 0,854 |
Таблица 16 | ||||||
Пептид | Аминокислотная последовательность | SEQ ID NO | Показатель связывания HLA-A*0201 | |||
BIMAS | SYFPEITHI | RANKPEP | NetMHC3.0 | |||
WT1187 | SLGEQQYSV | 2 | 285 | 27 | 96/64,43% | 0,721 |
WT1187P9L | SLGEQQYSL | 53 | 88 | 27 | 89/59,73% | 0,640 |
Таблица 17 | ||||||
Пептид | Аминокислотная последовательность | SEQ ID NO | Показатель связывания HLA-A*0201 | |||
BIMAS | SYFPEITHI | RANKPEP | NetMHC3.0 | |||
WT1126 | RMFPNAPYL | 3 | 314 | 22 | 70/46,98% | 0,802 |
WT1126P1A | AMFPNAPYL | 28 | 314 | 24 | 77/51,68% | 0,808 |
WT1126P1F | FMFPNAPYL | 34 | 1444 | 23 | 64/42,95% | 0,909 |
WT1126P1G | GMFPNAPYL | 27 | 314 | 23 | 68/45,64% | 0,795 |
WT1126P1I | IMFPNAPYL | 31 | 534 | 24 | 72/48,32% | 0,802 |
WT1126P1L | LMFPNAPYL | 30 | 534 | 24 | 71/47,65% | 0,819 |
WT1126P1M | MMFPNAPYL | 32 | 534 | 22 | 74/49,66% | 0,852 |
WT1126P1V | VMFPNAPYL | 29 | 534 | 23 | 74/49,66% | 0,804 |
WT1126P1W | WMFPNAPYL | 33 | 1444 | 22 | 53/35,57% | 0,799 |
Таблица 18 | ||||||
Пептид | Аминокислотная последовательность | SEQ ID NO | Показатель связывания HLA-A*0201 | |||
BIMAS | SYFPEITHI | RANKPEP | NetMHC3.0 | |||
WT1126 | RMFPNAPYL | 3 | 314 | 22 | 70/46,98% | 0,802 |
WT1126P2A | RAFPNAPYL | 38 | 6 | 18 | 47/31,54% | 0,376 |
WT1126P2I | RIFPNAPYL | 40 | 60 | 22 | 71/47,65% | 0,640 |
WT1126P2L | RLFPNAPYL | 39 | 435 | 24 | 82/55,03% | 0,784 |
WT1126P2Q | RQFPNAPYL | 37 | 44 | 14 | 38/25,50% | 0,485 |
WT1126P2V | RVFPNAPYL | 36 | 38 | 18 | 64/42,95% | 0,552 |
Таблица 19 | ||||||
Пептид | Аминокислотная последовательность | SEQ ID NO | Показатель связывания HLA-A*0201 | |||
BIMAS | SYFPEITHI | RANKPEP | NetMHC3.0 | |||
WT1126 | RMFPNAPYL | 3 | 314 | 22 | 70/46,98% | 0,802 |
WT1126P3A | RMAPNAPYL | 44 | 85 | 23 | 66/44,30% | 0,734 |
WT1126P3G | RMGPNAPYL | 43 | 85 | 21 | 52/34,90% | 0,602 |
WT1126P3I | RMIPNAPYL | 41 | 85 | 23 | 71/47,65% | 0,741 |
WT1126P3L | RMLPNAPYL | 42 | 314 | 23 | 72/48,32% | 0,781 |
WT1126P3M | RMMPNAPYL | 46 | 314 | 22 | 70/46,98% | 0,834 |
WT1126P3P | RMPPNAPYL | 47 | 85 | 21 | 51/34,23% | 0,613 |
WT1126P3V | RMVPNAPYL | 45 | 85 | 21 | 69/46,31% | 0,680 |
WT1126P3W | RMWPNAPYL | 48 | 2293 | 22 | 61/40,94% | 0,867 |
Таблица 20 | ||||||
Пептид | Аминокислотная последовательность | SEQ ID NO | Показатель связывания HLA-A*0201 | |||
BIMAS | SYFPEITHI | RANKPEP | NetMHC3.0 | |||
WT1126 | RMFPNAPYL | 3 | 314 | 22 | 70/46,98% | 0,802 |
WT1126P9A | RMFPNAPYA | 50 | 73 | 16 | 53/35,57% | 0,731 |
WT1126P9I | RMFPNAPYI | 51 | 153 | 20 | 74/49,66% | 0,790 |
WT1126P9M | RMFPNAPYM | 52 | 73 | 16 | 65/43,62% | 0,686 |
WT1126P9V | RMFPNAPYV | 49 | 1022 | 22 | 77/51,68% | 0,838 |
Таблица 21 | ||||||
Пептид | Аминокислотная последовательность | SEQ ID NO | Показатель связывания HLA-A*0201 | |||
BIMAS | SYFPEITHI | RANKPEP | NetMHC3.0 | |||
WT1187 | SLGEQQYSV | 2 | 285 | 27 | 96/64,43% | 0,721 |
WT1187P1D | DLGEQQYSV | 54 | 21 | 24 | 81/54,36% | 0,252 |
WT1187P1E | ELGEQQYSV | 55 | 21 | 22 | 85/57,05% | 0,366 |
WT1187P1H | HLGEQQYSV | 56 | 10 | 25 | 83/55,70% | 0,610 |
WT1187P1K | KLGEQQYSV | 57 | 998 | 26 | 89/59,73% | 0,745 |
WT1187P1N | NLGEQQYSV | 58 | 285 | 25 | 90/60,40% | 0,613 |
WT1187P1P | PLGEQQYSV | 59 | 6 | 22 | 78/52,35% | 0,287 |
WT1187P1Q | QLGEQQYSV | 60 | 285 | 25 | 87/58,39% | 0,630 |
WT1187P1R | RLGEQQYSV | 61 | 285 | 25 | 88/59,06% | 0,690 |
WT1187P1T | TLGEQQYSV | 62 | 285 | 25 | 93/62,42% | 0,669 |
Таблица 22 | ||||||
Пептид | Аминокислотная последовательность | SEQ ID NO | Показатель связывания HLA-A*0201 | |||
BIMAS | SYFPEITHI | RANKPEP | NetMHC3.0 | |||
WT1126 | RMFPNAPYL | 3 | 314 | 22 | 70/46,98% | 0,802 |
WT1126P1D | DMFPNAPYL | 63 | 24 | 21 | 63/42,28% | 0,353 |
WT1126P1E | EMFPNAPYL | 64 | 24 | 19 | 67/44,97% | 0,501 |
WT1126P1H | HMFPNAPYL | 65 | 11 | 22 | 65/43,62% | 0,747 |
WT1126P1K | KMFPNAPYL | 66 | 1099 | 23 | 71/47,65% | 0,841 |
WT1126P1N | NMFPNAPYL | 67 | 314 | 22 | 72/48,32% | 0,734 |
WT1126P1P | PMFPNAPYL | 68 | 7 | 19 | 60/40,27% | 0,802 |
WT1126P1Q | QMFPNAPYL | 69 | 314 | 22 | 69/46,31% | 0,757 |
WT1126P1S | SMFPNAPYL | 70 | 314 | 24 | 78/52,35% | 0,819 |
WT1126P1T | TMFPNAPYL | 71 | 314 | 22 | 75/50,34% | 0,779 |
Таблица 23 | ||||||
Пептид | Аминокислотная последователь-ность | SEQ ID NO | Показатель связывания HLA-A*0201 | |||
BIMAS | SYFPEITHI | RANKPEP | NetMHC3.0 | |||
WT1126 | RMFPNAPYL | 3 | 314 | 22 | 70/46,98% | 0,802 |
WT1126P2I&P9I | RIFPNAPYI | 72 | 29 | 20 | 75/50,34% | 0,617 |
WT1126P2I&P9V | RIFPNAPYV | 73 | 195 | 22 | 78/52,35% | 0,722 |
WT1126P2L&P9I | RLFPNAPYI | 74 | 212 | 22 | 86/57,72% | 0,780 |
WT1126P2L&P9V | RLFPNAPYV | 75 | 1415 | 24 | 89/59,73% | 0,818 |
Модифицированный пептид, для которого предсказана равная или большая аффинность по сравнению с пептидом дикого типа (пептид WT1187 или пептид WT1126), по меньшей мере, в одной из баз данных выбирали в дополнение к пептидам дикого типа в качестве образца для тестирования в следующих пунктах (2)-(4).
(2) Получение и введение пептидных препаратов
Получали пептид, синтезированный и лиофилизированный в примере 13, в концентрации 40 мг/мл в DMSO (произведенном Nacalai Tesque, Inc.). После этого, 32,5 мкл полученного раствора пептида в DMSO смешивали с 540 мкл дистиллированной воды для инъекций (произведенной Otsuka Pharmaceutical Factory, Inc.). Затем 550 мкл смеси смешивали с 700 мкл неполного адъюванта Фрейнда (монтанид ISA-51) с применением стеклянного шприца с получением эмульсии вода-в-масле. Экспрессирующую HLA-A*0201 трансгенную мышь (название линии: HLA-A2+HLA-DR1+/Iaβ° β2m, EMMA ID number EM: 01783) иммунизировали посредством подкожного введения 300 мкл препарата (эмульсия вода-в-масле) в основание хвоста. Оценку каждого пептида проводили с использованием 2 или 3 мышей.
(3) Получение клеток селезенки
Через 7 суток после иммунизации выделяли селезенку. Селезенку разрушали растиранием о пористую часть покровного стекла, а затем подвергали гемолитической обработке лизирующим буфером ACK (произведенным Lonza Co.) с получением клеток селезенки. В этом эксперименте в качестве среды для клеток селезенки использовали CTM (полная среда для T-клеток: среда RPMI-1640 (произведенная Invitrogen Corporation), дополненная 10% ЭТС, 10 мМ HEPES, 20 мМ L-глутамином, 1 мМ пируватом натрия, 1 мМ MEM с заменимыми аминокислотами, 1% MEM с витаминами и 55 мкМ 2-меркаптоэтанолом с условием, что эти концентрации являлись конечными концентрациями), а клеточную суспензию получали при концентрации 5×106 клеток/мл.
(4) Способ ELISPOT
Обладает ли вводимый пептид активностью индукции специфичных к WT1 иммунных клеток, проверяли способом ELISPOT, способ с применением в качестве показателя IFNγ. Способ проводили в соответствии с приложенным руководством. После добавления CTM в объеме 50 мкл/лунку в планшеты для ELISPOT (произведенные BD Japan, каталожный No. 551083), в них вносили суспензию клеток селезенки в объеме 100 мкл (5×105 клеток/лунку). Кроме того, в них добавляли вводимый пептид или пептид дикого типа в объеме 50 мкл/лунку (конечная концентрация пептида: 2 мкг/мл). Данный способ анализа известен как один из способов замещения, которые позволяют предсказывать цитотоксическую активность (J. Immunological Methods, 1995, 181, 45-54).
<Результаты>
Результаты оценки активности индукции специфического клеточного иммунитета показаны на фиг. 19-22 и 28-29 для модифицированных пептидов WT1187, и на фиг. 23-27 и 30-32 для модифицированных пептидов WT1126. На каждой из фиг. 19-32 вертикальная ось соответствует количеству специфичных к антигенному пептиду отвечающих клеток на 5×105 клеток селезенки (точек/5×105 клеток), а горизонтальная ось соответствует конкретным мышам (2 или 3 мыши), используемым для оценки. Белый столбец соответствует количеству специфических иммунных клеток, отвечающих при отсутствии стимуляции антигенными пептидами. Серый столбец соответствует количеству специфических иммунных клеток, отвечающих на стимуляцию пептидом дикого типа. Черный столбец соответствует количеству специфических иммунных клеток, отвечающих на стимуляцию вводимым (модифицированным) пептидом.
На фиг. 19-32 показана соответствующая активность индукции специфического клеточного иммунитета в отношении указанных далее пептидов.
Фиг. 19a: пептид WT1187P1A, b: пептид WT1187P1F, c: пептид WT1187P1G, d: пептид WT1187P1I, e: пептид WT1187P1L, f: пептид WT1187P1M.
Фиг. 20a: пептид WT1187P1V, b: пептид WT1187P1W, c: пептид WT1187P2I, d: пептид WT1187P2M, e: пептид WT1187P2Q, f: пептид WT1187P2V.
Фиг. 21a: пептид WT1187P3A, b: пептид WT1187P3F, c: пептид WT1187P3I, d: пептид WT1187P3L, e: пептид WT1187P3M, f: пептид WT1187P3P.
Фиг. 22a: пептид WT1187P3S, b: пептид WT1187P3V, c: пептид WT1187P3W, d: пептид WT1187P3Y, e: пептид WT1187P9L.
Фиг. 23a: пептид WT1126P1A, b: пептид WT1126P1F, c: пептид WT1126P1G, d: пептид WT1126P1I, e: пептид WT1126P1L, f: пептид WT1126P1M.
Фиг. 24a: пептид WT1126P1V, b: пептид WT1126P1W, c: пептид WT1126P2A, d: пептид WT1126P2I, e: пептид WT1126P2L, f: пептид WT1126P2Q.
Фиг. 25a: пептид WT1126P2V, b: пептид WT1126P3A, c: пептид WT1126P3G, d: пептид WT1126P3I, e: пептид WT1126P3L, f: пептид WT1126P3M.
Фиг. 26a: пептид WT1126P3P, b: пептид WT1126P3V, c: пептид WT1126P3W, d: пептид WT1126P9A, e: пептид WT1126P9I, f: пептид WT1126P9M.
Фиг. 27: пептид WT1126P9V.
Фиг. 28a: пептид WT1187P1D, b: пептид WT1187P1E, c: пептид WT1187P1H, d: пептид WT1187P1K.
Фиг. 29a: пептид WT1187P1N, b: пептид WT1187P1P, c: пептид WT1187P1Q, d: пептид WT1187P1R, e: пептид WT1187P1T.
Фиг. 30a: пептид WT1126P1D, b: пептид WT1126P1E, c: пептид WT1126P1H, d: пептид WT1126P1K, e: пептид WT1126P1N, f: пептид WT1126P1P.
Фиг. 31a: пептид WT1126P1Q, b: пептид WT1126P1S, c: пептид WT1126P1T, d: пептид WT1126P2I&P9I, e: пептид WT1126P2I&P9V, f: пептид WT1126P2L&P9I.
Фиг. 32: пептид WT1126P2L&P9V.
Как показано в этих результатах, когда модифицированные пептиды, за исключением пептида WT1187P1D, пептида WT1187P1E, пептида WT1187P1H, пептида WT1187P1P и пептида WT1187P2Q; пептида WT1126P1D, пептида WT1126P1E, пептида WT1126P1P, пептида WT1126P2A и пептида WT1126P2Q, вводили мышам, происходила индукция специфических иммунных клеток с исключительной эффективностью.
Затем специфические иммунные клетки, индуцированные стимуляцией модифицированных пептидов, анализировали на перекрестную реактивность с пептидом дикого типа (таблицы 24-25). Результаты показывают, что конкретно пептид WT1187P1A, пептид WT1187P1I, пептид WT1187P1L, пептид WT1187P1M, пептид WT1187P1N, пептид WT1187P1Q, пептид WT1187P1T, пептид WT1187P1V, пептид WT1187P2V, пептид WT1187P2M, пептид WT1187P2I, пептид WT1187P3A, пептид WT1187P3F, пептид WT1187P3P, пептид WT1187P3S, пептид WT1187P3V и пептид WT1187P9L из числа модифицированных пептидов WT1187; и пептид WT1126P1S, пептид WT1126P2I, пептид WT1126P2L, пептид WT1126P2V, пептид WT1126P3W, пептид WT1126P9I, пептид WT1126P9M и пептид WT1126P9V из числа модифицированных пептидов WT1126 могут индуцировать специфические иммунные клетки, которые эффективно распознают модифицированный пептид и пептид дикого типа.
Таблица 24 | ||||
Перекрестная реактивность (%) | Модифицированный пептид WT1187 | |||
Модифицированный в положении 1 | Модифицированный в положении 2 | Модифицированный в положении 3 | Модифицированный в положении 9 | |
80-100 | WT1187P1A | WT1187P2V | WT1187P3A | WT1187P9L |
WT1187P1N | WT1187P2M | WT1187P3P | ||
WT1187P1Q | WT1187P2I | WT1187P3S | ||
WT1187P1T | ||||
WT1187P1V | ||||
60-80 | WT1187P1I | WT1187P3F | ||
WT1187P1L | WT1187P3V | |||
WT1187P1M | ||||
40-60 | WT1187P1R | WT1187P3Y | ||
20-40 | WT1187P1F | WT1187P3L | ||
WT1187P1W | ||||
0-20 | WT1187P1G | WT1187P3I | ||
WT1187P1K | WT1187P3M | |||
WT1187P3W | ||||
н.з.* | WT1187P1D | WT1187P2Q | ||
WT1187P1E | ||||
WT1187P1H | ||||
WT1187P1P |
Таблица 25 | |||||
Перекрестная реактивность (%) | Модифицированный пептид WT1126 | ||||
Модифицированный в положении 1 | Модифицированный в положении 2 | Модифицированный в положении 3 | Модифицированный в положении 9 | Модифицированный в положениях 2&9 | |
80-100 | WT1126P2L | WT1126P3W | WT1126P9M | ||
WT1126P2V | WT1126P9I | ||||
60-80 | WT1126P1S | WT1126P2I | WT1126P9V | ||
40-60 | WT1126P1A | ||||
WT1126P1H | |||||
WT1126P1K | |||||
WT1126P1M | |||||
WT1126P1N |
20-40 | WT1126P1G | WT1126P9A | |||
WT1126P1I | |||||
WT1126P1Q | |||||
WT1126P1W | |||||
0-20 | WT1126P1F | WT1126P3A | WT1126P2I&P9I | ||
WT1126P1L | WT1126P3G | WT1126P2I&P9V | |||
WT1126P1T | WT1126P3I | WT1126P2L&P9I | |||
WT1126P1V | WT1126P3L | WT1126P2L&P9V | |||
WT1126P3M | |||||
WT1126P3P | |||||
WT1126P3V | |||||
н.з.* | WT1126P1D | WT1126P2Q | |||
WT1126P1E | WT1126P2A | ||||
WT1126P1P | |||||
н.з.*: неизмеримо вследствие отсутствия активности |
ПРОМЫШЛЕННАЯ ПРИМЕНИМОСТЬ
Вакцинная композиция против злокачественной опухоли по настоящему изобретению пригодна в качестве лекарственного средства, применяемого для лечения и профилактики экспрессирующих WT1 злокачественных опухолей у положительных по HLA-A*0206 индивидуумов. Вакцинная композиция против злокачественной опухоли по настоящему изобретению также пригодна в качестве лекарственного средства, применяемого для лечения и профилактики экспрессирующих WT1 злокачественных опухолей у положительных по HLA-A*0201 индивидуумов.
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> International Institute of Cancer Immunology, Inc.
<120> ВАКЦИННАЯ КОМПОЗИЦИЯ ПРОТИВ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОЙ ОПУХОЛИ
<130> G06F2975
<150> JP2007-314552
<151> 2007-12-05
<160> 75
<170> PatentIn version 3.1
<210> 1
<211> 449
<212> Белок
<213> Человек
<400> 1
Met Gly Ser Asp Val Arg Asp Leu Asn Ala Leu Leu Pro Ala Val Pro
1 5 10 15
Ser Leu Gly Gly Gly Gly Gly Cys Ala Leu Pro Val Ser Gly Ala Ala
20 25 30
Gln Trp Ala Pro Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Gly Ala Ser Ala Tyr
35 40 45
Gly Ser Leu Gly Gly Pro Ala Pro Pro Pro Ala Pro Pro Pro Pro Pro
50 55 60
Pro Pro Pro Pro His Ser Phe Ile Lys Gln Glu Pro Ser Trp Gly Gly
65 70 75 80
Ala Glu Pro His Glu Glu Gln Cys Leu Ser Ala Phe Thr Val His Phe
85 90 95
Ser Gly Gln Phe Thr Gly Thr Ala Gly Ala Cys Arg Tyr Gly Pro Phe
100 105 110
Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gln Ala Ser Ser Gly Gln Ala Arg Met Phe
115 120 125
Pro Asn Ala Pro Tyr Leu Pro Ser Cys Leu Glu Ser Gln Pro Ala Ile
130 135 140
Arg Asn Gln Gly Tyr Ser Thr Val Thr Phe Asp Gly Thr Pro Ser Tyr
145 150 155 160
Gly His Thr Pro Ser His His Ala Ala Gln Phe Pro Asn His Ser Phe
165 170 175
Lys His Glu Asp Pro Met Gly Gln Gln Gly Ser Leu Gly Glu Gln Gln
180 185 190
Tyr Ser Val Pro Pro Pro Val Tyr Gly Cys His Thr Pro Thr Asp Ser
195 200 205
Cys Thr Gly Ser Gln Ala Leu Leu Leu Arg Thr Pro Tyr Ser Ser Asp
210 215 220
Asn Leu Tyr Gln Met Thr Ser Gln Leu Glu Cys Met Thr Trp Asn Gln
225 230 235 240
Met Asn Leu Gly Ala Thr Leu Lys Gly Val Ala Ala Gly Ser Ser Ser
245 250 255
Ser Val Lys Trp Thr Glu Gly Gln Ser Asn His Ser Thr Gly Tyr Glu
260 265 270
Ser Asp Asn His Thr Thr Pro Ile Leu Cys Gly Ala Gln Tyr Arg Ile
275 280 285
His Thr His Gly Val Phe Arg Gly Ile Gln Asp Val Arg Arg Val Pro
290 295 300
Gly Val Ala Pro Thr Leu Val Arg Ser Ala Ser Glu Thr Ser Glu Lys
305 310 315 320
Arg Pro Phe Met Cys Ala Tyr Pro Gly Cys Asn Lys Arg Tyr Phe Lys
325 330 335
Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His Thr Gly Glu Lys Pro
340 345 350
Tyr Gln Cys Asp Phe Lys Asp Cys Glu Arg Arg Phe Ser Arg Ser Asp
355 360 365
Gln Leu Lys Arg His Gln Arg Arg His Thr Gly Val Lys Pro Phe Gln
370 375 380
Cys Lys Thr Cys Gln Arg Lys Phe Ser Arg Ser Asp His Leu Lys Thr
385 390 395 400
His Thr Arg Thr His Thr Gly Lys Thr Ser Glu Lys Pro Phe Ser Cys
405 410 415
Arg Trp Pro Ser Cys Gln Lys Lys Phe Ala Arg Ser Asp Glu Leu Val
420 425 430
Arg His His Asn Met His Gln Arg Asn Met Thr Lys Leu Gln Leu Ala
435 440 445
Leu
<210> 2
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 2
Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 3
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 3
Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 4
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 4
Gly Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 5
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 5
Ala Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 6
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 6
Val Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 7
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 7
Leu Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 8
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 8
Ile Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 9
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 9
Met Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 10
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 10
Trp Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 11
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 11
Phe Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 12
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 12
Tyr Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 13
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 13
Ser Val Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 14
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 14
Ser Gln Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 15
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 15
Ser Ile Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 16
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 16
Ser Met Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 17
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 17
Ser Leu Leu Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 18
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 18
Ser Leu Ala Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 19
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 19
Ser Leu Val Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 20
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 20
Ser Leu Met Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 21
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 21
Ser Leu Pro Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 22
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 22
Ser Leu Trp Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 23
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 23
Ser Leu Phe Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 24
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 24
Ser Leu Tyr Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 25
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 25
Ser Leu Ser Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 26
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 26
Ser Leu Ile Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 27
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 27
Gly Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 28
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 28
Ala Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 29
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 29
Val Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 30
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 30
Leu Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 31
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 31
Ile Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 32
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 32
Met Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 33
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 33
Trp Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 34
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 34
Phe Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 35
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 35
Tyr Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 36
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 36
Arg Val Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 37
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 37
Arg Gln Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 38
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 38
Arg Ala Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 39
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 39
Arg Leu Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 40
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 40
Arg Ile Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 41
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 41
Arg Met Ile Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 42
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 42
Arg Met Leu Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 43
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 43
Arg Met Gly Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 44
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 44
Arg Met Ala Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 45
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 45
Arg Met Val Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 46
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 46
Arg Met Met Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 47
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 47
Arg Met Pro Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 48
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 48
Arg Met Trp Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 49
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 49
Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Val
1 5
<210> 50
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 50
Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Ala
1 5
<210> 51
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 51
Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Ile
1 5
<210> 52
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 52
Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Met
1 5
<210> 53
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 53
Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Leu
1 5
<210> 54
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 54
Asp Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 55
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 55
Glu Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 56
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 56
His Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 57
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 57
Lys Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 58
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 58
Asn Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 59
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 59
Pro Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 60
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 60
Gln Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 61
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 61
Arg Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 62
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 62
Thr Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val
1 5
<210> 63
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 63
Asp Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 64
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 64
Glu Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 65
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 65
His Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 66
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 66
Lys Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 67
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 67
Asn Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 68
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 68
Pro Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 69
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 69
Gln Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 70
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 70
Ser Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 71
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 71
Thr Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu
1 5
<210> 72
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 72
Arg Ile Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Ile
1 5
<210> 73
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 73
Arg Ile Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Val
1 5
<210> 74
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 74
Arg Leu Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Ile
1 5
<210> 75
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственный
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 75
Arg Leu Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Val
1 5
<---
Claims (369)
1. Вакцинная композиция против рака для лечения или профилактики злокачественных опухолей, сопровождающихся увеличенной экспрессией гена WT1, у положительных по HLA-A*0201 индивидуумов, содержащая эффективное количество следующего пептида:
1) модифицированного пептида на основе пептида WT1187: Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 2), содержащего замену одного аминокислотного остатка в аминокислотной последовательности пептида WT1187 и те же аминокислотные остатки в положениях 4-8 от N-конца, которые пептид WT1187 имеет в соответствующем положении, или
2) модифицированного пептида на основе WT1126: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 3), содержащего замену одного аминокислотного остатка в аминокислотной последовательности пептида WT1126 и те же аминокислотные остатки в положениях 4-8 от N-конца, которые пептид WT1126 имеет в соответствующем положении,
и необязательно содержащая адъювант.
2. Композиция по п. 1, где модифицированный пептид представляет собой
пептид WT1187P1G: Gly Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 4),
пептид WT1187P1A: Ala Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 5),
пептид WT1187P1V: Val Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 6),
пептид WT1187P1L: Leu Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 7),
пептид WT1187P1I: Ile Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 8),
пептид WT1187P1M: Met Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 9),
пептид WT1187P1W: Trp Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 10),
пептид WT1187P1F: Phe Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 11),
пептид WT1187P1Y: Tyr Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 12),
пептид WT1187P2V: Ser Val Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 13),
пептид WT1187P2I: Ser Ile Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 15),
пептид WT1187P2M: Ser Met Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 16),
пептид WT1187P3L: Ser Leu Leu Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 17),
пептид WT1187P3A: Ser Leu Ala Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 18),
пептид WT1187P3V: Ser Leu Val Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 19),
пептид WT1187P3M: Ser Leu Met Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 20),
пептид WT1187P3P: Ser Leu Pro Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 21),
пептид WT1187P3W: Ser Leu Trp Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 22),
пептид WT1187P3F: Ser Leu Phe Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 23),
пептид WT1187P3Y: Ser Leu Tyr Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 24),
пептид WT1187P3S: Ser Leu Ser Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 25),
пептид WT1187P3I: Ser Leu Ile Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 26),
пептид WT1126P1G: Gly Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 27),
пептид WT1126P1A: Ala Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 28),
пептид WT1126P1V: Val Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 29),
пептид WT1126P1L: Leu Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 30),
пептид WT1126P1I: Ile Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 31),
пептид WT1126P1M: Met Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 32),
пептид WT1126P1W: Trp Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 33),
пептид WT1126P1F: Phe Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 34),
пептид WT1126P1Y: Tyr Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 35),
пептид WT1126P2V: Arg Val Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 36),
пептид WT1126P2L: Arg Leu Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 39),
пептид WT1126P2I: Arg Ile Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 40),
пептид WT1126P3I: Arg Met Ile Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 41),
пептид WT1126P3L: Arg Met Leu Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 42),
пептид WT1126P3G: Arg Met Gly Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 43),
пептид WT1126P3A: Arg Met Ala Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 44),
пептид WT1126P3V: Arg Met Val Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 45),
пептид WT1126P3M: Arg Met Met Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 46),
пептид WT1126P3P: Arg Met Pro Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 47),
пептид WT1126P3W: Arg Met Trp Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 48),
пептид WT1126P9V: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Val (SEQ ID NO: 49),
пептид WT1126P9A: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Ala (SEQ ID NO: 50),
пептид WT1126P9I: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Ile (SEQ ID NO: 51),
пептид WT1126P9M: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Met (SEQ ID NO: 52),
пептид WT1187P9L: Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Leu (SEQ ID NO: 53),
пептид WT1187P1K: Lys Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 57),
пептид WT1187P1N: Asn Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 58),
пептид WT1187P1Q: Gln Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 60),
пептид WT1187P1R: Arg Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 61),
пептид WT1187P1T: Thr Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 62),
пептид WT1126P1H: His Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 65),
пептид WT1126P1K: Lys Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 66),
пептид WT1126P1N: Asn Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 67),
пептид WT1126P1Q: Gln Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 69),
пептид WT1126P1S: Ser Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 70) или
пептид WT1126P1T: Thr Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 71).
3. Композиция по п. 2, где модифицированным пептидом не является пептид с последовательностью SEQ ID NO: 52.
4. Композиция по п. 1, где модифицированный пептид представляет собой
пептид WT1187P1A: Ala Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 5),
пептид WT1187P1V: Val Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 6),
пептид WT1187P1L: Leu Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 7),
пептид WT1187P1I: Ile Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 8),
пептид WT1187P1M: Met Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 9),
пептид WT1187P1F: Phe Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 11),
пептид WT1187P2V: Ser Val Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 13),
пептид WT1187P2I: Ser Ile Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 15),
пептид WT1187P2M: Ser Met Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 16),
пептид WT1187P3A: Ser Leu Ala Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 18),
пептид WT1187P3V: Ser Leu Val Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 19),
пептид WT1187P3P: Ser Leu Pro Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 21),
пептид WT1187P3F: Ser Leu Phe Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 23),
пептид WT1187P3S: Ser Leu Ser Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 25),
пептид WT1126P1F: Phe Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 34),
пептид WT1126P2V: Arg Val Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 36),
пептид WT1126P2I: Arg Ile Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 40),
пептид WT1126P3W: Arg Met Trp Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 48),
пептид WT1126P9V: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Val (SEQ ID NO: 49),
пептид WT1126P9I: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Ile (SEQ ID NO: 51),
пептид WT1126P9M: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Met (SEQ ID NO: 52),
пептид WT1187P9L: Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Leu (SEQ ID NO: 53),
пептид WT1187P1N: Asn Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 58),
пептид WT1187P1Q: Gln Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 60),
пептид WT1187P1T: Thr Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 62) или
пептид WT1126P1S: Ser Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 70).
5. Композиция по п. 4, где модифицированным пептидом не является пептид с последовательностью SEQ ID NO: 52.
6. Композиция по любому из пп. 1-5, дополнительно содержащая адъювант.
7. Способ лечения или профилактики злокачественных опухолей, сопровождающихся увеличенной экспрессией гена WT1, включающий введение положительному по HLA-A*0201 индивидууму композиции, содержащей эффективное количество следующего пептида:
1) модифицированного пептида на основе пептида WT1187: Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 2), содержащего замену одного аминокислотного остатка в аминокислотной последовательности пептида WT1187 и те же аминокислотные остатки в положениях 4-8 от N-конца, которые пептид WT1187 имеет в соответствующем положении, или
2) модифицированного пептида на основе WT1126: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 3), содержащего замену одного аминокислотного остатка в аминокислотной последовательности пептида WT1126 и те же аминокислотные остатки в положениях 4-8 от N-конца, которые пептид WT1126 имеет в соответствующем положении.
8. Способ по п. 7, где модифицированный пептид представляет собой
пептид WT1187P1G: Gly Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 4),
пептид WT1187P1A: Ala Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 5),
пептид WT1187P1V: Val Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 6),
пептид WT1187P1L: Leu Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 7),
пептид WT1187P1I: Ile Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 8),
пептид WT1187P1M: Met Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 9),
пептид WT1187P1W: Trp Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 10),
пептид WT1187P1F: Phe Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 11),
пептид WT1187P1Y: Tyr Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 12),
пептид WT1187P2V: Ser Val Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 13),
пептид WT1187P2I: Ser Ile Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 15),
пептид WT1187P2M: Ser Met Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 16),
пептид WT1187P3L: Ser Leu Leu Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 17),
пептид WT1187P3A: Ser Leu Ala Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 18),
пептид WT1187P3V: Ser Leu Val Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 19),
пептид WT1187P3M: Ser Leu Met Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 20),
пептид WT1187P3P: Ser Leu Pro Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 21),
пептид WT1187P3W: Ser Leu Trp Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 22),
пептид WT1187P3F: Ser Leu Phe Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 23),
пептид WT1187P3Y: Ser Leu Tyr Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 24),
пептид WT1187P3S: Ser Leu Ser Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 25),
пептид WT1187P3I: Ser Leu Ile Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 26),
пептид WT1126P1G: Gly Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 27),
пептид WT1126P1A: Ala Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 28),
пептид WT1126P1V: Val Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 29),
пептид WT1126P1L: Leu Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 30),
пептид WT1126P1I: Ile Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 31),
пептид WT1126P1M: Met Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 32),
пептид WT1126P1W: Trp Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 33),
пептид WT1126P1F: Phe Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 34),
пептид WT1126P1Y: Tyr Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 35),
пептид WT1126P2V: Arg Val Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 36),
пептид WT1126P2L: Arg Leu Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 39),
пептид WT1126P2I: Arg Ile Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 40),
пептид WT1126P3I: Arg Met Ile Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 41),
пептид WT1126P3L: Arg Met Leu Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 42),
пептид WT1126P3G: Arg Met Gly Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 43),
пептид WT1126P3A: Arg Met Ala Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 44),
пептид WT1126P3V: Arg Met Val Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 45),
пептид WT1126P3M: Arg Met Met Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 46),
пептид WT1126P3P: Arg Met Pro Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 47),
пептид WT1126P3W: Arg Met Trp Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 48),
пептид WT1126P9V: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Val (SEQ ID NO: 49),
пептид WT1126P9A: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Ala (SEQ ID NO: 50),
пептид WT1126P9I: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Ile (SEQ ID NO: 51),
пептид WT1126P9M: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Met (SEQ ID NO: 52),
пептид WT1187P9L: Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Leu (SEQ ID NO: 53),
пептид WT1187P1K: Lys Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 57),
пептид WT1187P1N: Asn Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 58),
пептид WT1187P1Q: Gln Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 60),
пептид WT1187P1R: Arg Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 61),
пептид WT1187P1T: Thr Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 62),
пептид WT1126P1H: His Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 65),
пептид WT1126P1K: Lys Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 66),
пептид WT1126P1N: Asn Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 67),
пептид WT1126P1Q: Gln Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 69),
пептид WT1126P1S: Ser Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 70)
или
пептид WT1126P1T: Thr Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 71).
9. Способ по п. 8, где модифицированным пептидом не является пептид с последовательностью SEQ ID NO: 12, 35, 39 или 52.
10. Способ по п. 7, где модифицированный пептид представляет собой
пептид WT1187P1A: Ala Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 5),
пептид WT1187P1V: Val Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 6),
пептид WT1187P1L: Leu Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 7),
пептид WT1187P1I: Ile Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 8),
пептид WT1187P1M: Met Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 9),
пептид WT1187P1F: Phe Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 11),
пептид WT1187P2V: Ser Val Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 13),
пептид WT1187P2I: Ser Ile Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 15),
пептид WT1187P2M: Ser Met Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 16),
пептид WT1187P3A: Ser Leu Ala Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 18),
пептид WT1187P3V: Ser Leu Val Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 19),
пептид WT1187P3P: Ser Leu Pro Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 21),
пептид WT1187P3F: Ser Leu Phe Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 23),
пептид WT1187P3S: Ser Leu Ser Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 25),
пептид WT1126P1F: Phe Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 34),
пептид WT1126P2V: Arg Val Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 36),
пептид WT1126P2I: Arg Ile Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 40),
пептид WT1126P3W: Arg Met Trp Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 48),
пептид WT1126P9V: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Val (SEQ ID NO: 49),
пептид WT1126P9I: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Ile (SEQ ID NO: 51),
пептид WT1126P9M: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Met (SEQ ID NO: 52),
пептид WT1187P9L: Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Leu (SEQ ID NO: 53),
пептид WT1187P1N: Asn Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 58),
пептид WT1187P1Q: Gln Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 60),
пептид WT1187P1T: Thr Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 62) или
пептид WT1126P1S: Ser Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 70).
11. Способ по п. 10, где модифицированным пептидом не является пептид с последовательностью SEQ ID NO: 52.
12. Пептид для лечения или профилактики злокачественных опухолей, сопровождающихся увеличенной экспрессией гена WT1, у положительных по HLA-A*0201 индивидуумов:
1) модифицированный пептид на основе пептида WT1187: Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 2), содержащий замену одного аминокислотного остатка в аминокислотной последовательности пептида WT1187 и те же аминокислотные остатки в положениях 4-8 от N-конца, которые пептид WT1187 имеет в соответствующем положении, или
2) модифицированный пептид на основе WT1126: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 3), содержащий замену одного аминокислотного остатка в аминокислотной последовательности пептида WT1126 и те же аминокислотные остатки в положениях 4-8 от N-конца, которые пептид WT1126 имеет в соответствующем положении.
13. Пептид по п. 12, где модифицированный пептид представляет собой
пептид WT1187P1G: Gly Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 4),
пептид WT1187P1A: Ala Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 5),
пептид WT1187P1V: Val Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 6),
пептид WT1187P1L: Leu Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 7),
пептид WT1187P1I: Ile Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 8),
пептид WT1187P1M: Met Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 9),
пептид WT1187P1W: Trp Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 10),
пептид WT1187P1F: Phe Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 11),
пептид WT1187P1Y: Tyr Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 12),
пептид WT1187P2V: Ser Val Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 13),
пептид WT1187P2I: Ser Ile Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 15),
пептид WT1187P2M: Ser Met Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 16),
пептид WT1187P3L: Ser Leu Leu Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 17),
пептид WT1187P3A: Ser Leu Ala Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 18),
пептид WT1187P3V: Ser Leu Val Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 19),
пептид WT1187P3M: Ser Leu Met Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 20),
пептид WT1187P3P: Ser Leu Pro Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 21),
пептид WT1187P3W: Ser Leu Trp Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 22),
пептид WT1187P3F: Ser Leu Phe Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 23),
пептид WT1187P3Y: Ser Leu Tyr Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 24),
пептид WT1187P3S: Ser Leu Ser Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 25),
пептид WT1187P3I: Ser Leu Ile Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 26),
пептид WT1126P1G: Gly Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 27),
пептид WT1126P1A: Ala Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 28),
пептид WT1126P1V: Val Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 29),
пептид WT1126P1L: Leu Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 30),
пептид WT1126P1I: Ile Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 31),
пептид WT1126P1M: Met Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 32),
пептид WT1126P1W: Trp Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 33),
пептид WT1126P1F: Phe Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 34),
пептид WT1126P1Y: Tyr Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 35),
пептид WT1126P2V: Arg Val Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 36),
пептид WT1126P2L: Arg Leu Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 39),
пептид WT1126P2I: Arg Ile Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 40),
пептид WT1126P3I: Arg Met Ile Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 41),
пептид WT1126P3L: Arg Met Leu Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 42),
пептид WT1126P3G: Arg Met Gly Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 43),
пептид WT1126P3A: Arg Met Ala Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 44),
пептид WT1126P3V: Arg Met Val Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 45),
пептид WT1126P3M: Arg Met Met Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 46),
пептид WT1126P3P: Arg Met Pro Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 47),
пептид WT1126P3W: Arg Met Trp Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 48),
пептид WT1126P9V: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Val (SEQ ID NO: 49),
пептид WT1126P9A: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Ala (SEQ ID NO: 50),
пептид WT1126P9I: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Ile (SEQ ID NO: 51),
пептид WT1126P9M: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Met (SEQ ID NO: 52),
пептид WT1187P9L: Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Leu (SEQ ID NO: 53),
пептид WT1187P1K: Lys Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 57),
пептид WT1187P1N: Asn Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 58),
пептид WT1187P1Q: Gln Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 60),
пептид WT1187P1R: Arg Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 61),
пептид WT1187P1T: Thr Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 62),
пептид WT1126P1H: His Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 65),
пептид WT1126P1K: Lys Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 66),
пептид WT1126P1N: Asn Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 67),
пептид WT1126P1Q: Gln Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 69),
пептид WT1126P1S: Ser Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 70) или
пептид WT1126P1T: Thr Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 71).
14. Пептид по п. 13, где модифицированным пептидом не является пептид с последовательностью SEQ ID NO: 12, 35, 39 или 52.
15. Пептид по п. 12, где модифицированный пептид представляет собой
пептид WT1187P1A: Ala Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 5),
пептид WT1187P1V: Val Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 6),
пептид WT1187P1L: Leu Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 7),
пептид WT1187P1I: Ile Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 8),
пептид WT1187P1M: Met Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 9),
пептид WT1187P1F: Phe Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 11),
пептид WT1187P2V: Ser Val Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 13),
пептид WT1187P2I: Ser Ile Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 15),
пептид WT1187P2M: Ser Met Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 16),
пептид WT1187P3A: Ser Leu Ala Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 18),
пептид WT1187P3V: Ser Leu Val Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 19),
пептид WT1187P3P: Ser Leu Pro Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 21),
пептид WT1187P3F: Ser Leu Phe Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 23),
пептид WT1187P3S: Ser Leu Ser Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 25),
пептид WT1126P1F: Phe Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 34),
пептид WT1126P2V: Arg Val Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 36),
пептид WT1126P2I: Arg Ile Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 40),
пептид WT1126P3W: Arg Met Trp Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 48),
пептид WT1126P9V: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Val (SEQ ID NO: 49),
пептид WT1126P9I: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Ile (SEQ ID NO: 51),
пептид WT1126P9M: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Met (SEQ ID NO: 52),
пептид WT1187P9L: Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Leu (SEQ ID NO: 53),
пептид WT1187P1N: Asn Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 58),
пептид WT1187P1Q: Gln Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 60),
пептид WT1187P1T: Thr Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 62) или
пептид WT1126P1S: Ser Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 70).
16. Пептид по п. 15, где модифицированным пептидом не является пептид с последовательностью SEQ ID NO: 52.
17. Цитотоксический Т-лимфоцит (CTL), специфический к WT1, для лечения или профилактики злокачественных опухолей, сопровождающихся увеличенной экспрессией гена WT1 у положительных по HLA-A*0201 индивидуумов, индуцированный ex vivo из PBMC, полученных из положительного по HLA-A*0201 индивидуума, путем культивирования PBMC в присутствии эффективного количества следующего пептида:
1) модифицированного пептида на основе пептида WT1187: Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 2), содержащего замену одного аминокислотного остатка в аминокислотной последовательности пептида WT1187 и те же аминокислотные остатки в положениях 4-8 от N-конца, которые пептид WT1187 имеет в соответствующем положении, или
2) модифицированного пептида на основе WT1126: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 3), содержащего замену одного аминокислотного остатка в аминокислотной последовательности пептида WT1126 и те же аминокислотные остатки в положениях 4-8 от N-конца, которые пептид WT1126 имеет в соответствующем положении.
18. CTL, специфический к WT1, по п. 17, где модифицированный пептид представляет собой
пептид WT1187P1G: Gly Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 4),
пептид WT1187P1A: Ala Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 5),
пептид WT1187P1V: Val Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 6),
пептид WT1187P1L: Leu Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 7),
пептид WT1187P1I: Ile Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 8),
пептид WT1187P1M: Met Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 9),
пептид WT1187P1W: Trp Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 10),
пептид WT1187P1F: Phe Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 11),
пептид WT1187P1Y: Tyr Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 12),
пептид WT1187P2V: Ser Val Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 13),
пептид WT1187P2I: Ser Ile Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 15),
пептид WT1187P2M: Ser Met Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 16),
пептид WT1187P3L: Ser Leu Leu Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 17),
пептид WT1187P3A: Ser Leu Ala Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 18),
пептид WT1187P3V: Ser Leu Val Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 19),
пептид WT1187P3M: Ser Leu Met Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 20),
пептид WT1187P3P: Ser Leu Pro Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 21),
пептид WT1187P3W: Ser Leu Trp Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 22),
пептид WT1187P3F: Ser Leu Phe Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 23),
пептид WT1187P3Y: Ser Leu Tyr Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 24),
пептид WT1187P3S: Ser Leu Ser Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 25),
пептид WT1187P3I: Ser Leu Ile Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 26),
пептид WT1126P1G: Gly Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 27),
пептид WT1126P1A: Ala Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 28),
пептид WT1126P1V: Val Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 29),
пептид WT1126P1L: Leu Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 30),
пептид WT1126P1I: Ile Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 31),
пептид WT1126P1M: Met Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 32),
пептид WT1126P1W: Trp Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 33),
пептид WT1126P1F: Phe Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 34),
пептид WT1126P1Y: Tyr Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 35),
пептид WT1126P2V: Arg Val Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 36),
пептид WT1126P2L: Arg Leu Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 39),
пептид WT1126P2I: Arg Ile Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 40),
пептид WT1126P3I: Arg Met Ile Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 41),
пептид WT1126P3L: Arg Met Leu Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 42),
пептид WT1126P3G: Arg Met Gly Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 43),
пептид WT1126P3A: Arg Met Ala Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 44),
пептид WT1126P3V: Arg Met Val Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 45),
пептид WT1126P3M: Arg Met Met Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 46),
пептид WT1126P3P: Arg Met Pro Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 47),
пептид WT1126P3W: Arg Met Trp Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 48),
пептид WT1126P9V: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Val (SEQ ID NO: 49),
пептид WT1126P9A: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Ala (SEQ ID NO: 50),
пептид WT1126P9I: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Ile (SEQ ID NO: 51),
пептид WT1126P9M: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Met (SEQ ID NO: 52),
пептид WT1187P9L: Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Leu (SEQ ID NO: 53),
пептид WT1187P1K: Lys Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 57),
пептид WT1187P1N: Asn Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 58),
пептид WT1187P1Q: Gln Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 60),
пептид WT1187P1R: Arg Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 61),
пептид WT1187P1T: Thr Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 62),
пептид WT1126P1H: His Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 65),
пептид WT1126P1K: Lys Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 66),
пептид WT1126P1N: Asn Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 67),
пептид WT1126P1Q: Gln Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 69),
пептид WT1126P1S: Ser Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 70) или
пептид WT1126P1T: Thr Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 71).
19. CTL, специфический к WT1, по п. 18, где модифицированным пептидом не является пептид с последовательностью SEQ ID NO: 12, 35, 39 или 52.
20. CTL, специфический к WT1, по п. 18, где модифицированный пептид представляет собой
пептид WT1187P1A: Ala Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 5),
пептид WT1187P1V: Val Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 6),
пептид WT1187P1L: Leu Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 7),
пептид WT1187P1I: Ile Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 8),
пептид WT1187P1M: Met Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 9),
пептид WT1187P1F: Phe Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 11),
пептид WT1187P2V: Ser Val Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 13),
пептид WT1187P2I: Ser Ile Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 15),
пептид WT1187P2M: Ser Met Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 16),
пептид WT1187P3A: Ser Leu Ala Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 18),
пептид WT1187P3V: Ser Leu Val Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 19),
пептид WT1187P3P: Ser Leu Pro Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 21),
пептид WT1187P3F: Ser Leu Phe Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 23),
пептид WT1187P3S: Ser Leu Ser Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 25),
пептид WT1126P1F: Phe Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 34),
пептид WT1126P2V: Arg Val Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 36),
пептид WT1126P2I: Arg Ile Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 40),
пептид WT1126P3W: Arg Met Trp Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 48),
пептид WT1126P9V: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Val (SEQ ID NO: 49),
пептид WT1126P9I: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Ile (SEQ ID NO: 51),
пептид WT1126P9M: Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Met (SEQ ID NO: 52),
пептид WT1187P9L: Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Leu (SEQ ID NO: 53),
пептид WT1187P1N: Asn Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 58),
пептид WT1187P1Q: Gln Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 60),
пептид WT1187P1T: Thr Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val (SEQ ID NO: 62) или
пептид WT1126P1S: Ser Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu (SEQ ID NO: 70).
21. CTL, специфический к WT1, по п. 20, где модифицированным пептидом не является пептид с последовательностью SEQ ID NO: 52.
22. Способ индукции ex vivo CTL, специфичных к WT1, включающий культивирование мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC), полученных у положительного по HLA-A*0201 индивидуума, в присутствии пептида по любому из пп. 12-16 с получением индуцированных из них CTL, специфичных к WT1.
23. Способ индукции ex vivo дендритных клеток, презентирующих пептид по любому из пп. 12-16, включающий культивирование незрелых дендритных клеток, полученных у положительного по HLA-A*0201 индивидуума, в присутствии пептида по любому из пп. 12-16 с получением индуцированных из них дендритных клеток, которые презентируют пептид по любому из пп. 12-16.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2007314552 | 2007-12-05 | ||
JP2007-314552 | 2007-12-05 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2010127298/15A Division RU2010127298A (ru) | 2007-12-05 | 2008-12-05 | Вакцинная композиция против злокачественной опухоли |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2013141920A RU2013141920A (ru) | 2015-03-20 |
RU2721574C2 true RU2721574C2 (ru) | 2020-05-20 |
Family
ID=40717788
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2013141923A RU2682726C9 (ru) | 2007-12-05 | 2008-12-05 | Вакцинная композиция против злокачественной опухоли |
RU2010127298/15A RU2010127298A (ru) | 2007-12-05 | 2008-12-05 | Вакцинная композиция против злокачественной опухоли |
RU2013141920A RU2721574C2 (ru) | 2007-12-05 | 2013-09-12 | Вакцинная композиция против злокачественной опухоли |
Family Applications Before (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2013141923A RU2682726C9 (ru) | 2007-12-05 | 2008-12-05 | Вакцинная композиция против злокачественной опухоли |
RU2010127298/15A RU2010127298A (ru) | 2007-12-05 | 2008-12-05 | Вакцинная композиция против злокачественной опухоли |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US8557779B2 (ru) |
EP (2) | EP3384926A1 (ru) |
JP (3) | JP5478260B2 (ru) |
KR (2) | KR101610664B1 (ru) |
CN (3) | CN101888852B (ru) |
AU (1) | AU2008332278C1 (ru) |
CA (3) | CA2940962C (ru) |
ES (1) | ES2679127T3 (ru) |
MX (1) | MX2010006070A (ru) |
RU (3) | RU2682726C9 (ru) |
TW (2) | TWI504407B (ru) |
WO (1) | WO2009072610A1 (ru) |
Families Citing this family (40)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006034334A2 (en) | 2004-09-21 | 2006-03-30 | University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education | Peptide analogs capable of enhancing stimulation of a glioma-specific ctl response |
WO2007047764A2 (en) | 2005-10-17 | 2007-04-26 | Sloan Kettering Institute For Cancer Research | Wt1 hla class ii-binding peptides and compositions and methods comprising same |
US9265816B2 (en) | 2006-04-10 | 2016-02-23 | Sloan Kettering Institute For Cancer Research | Immunogenic WT-1 peptides and methods of use thereof |
CN101888852B (zh) * | 2007-12-05 | 2017-02-08 | 株式会社癌免疫研究所 | 癌症疫苗组合物 |
ES2722799T3 (es) * | 2010-08-24 | 2019-08-16 | Univ Pittsburgh Commonwealth Sys Higher Education | Vacunas contra el cáncer de cerebro basadas en el péptido alfa 2 del receptor de interleuquina-13 |
EA201401134A1 (ru) * | 2011-02-11 | 2015-05-29 | Мемориал Слоан-Кеттеринг Кэнсер Сентер | Hla-рестиктированные пептидоспецифические антигенсвязывающие белки |
WO2013002086A1 (ja) * | 2011-06-28 | 2013-01-03 | 株式会社癌免疫研究所 | ペプチド癌抗原特異的t細胞のレセプター遺伝子 |
CA2846479A1 (en) * | 2011-09-14 | 2013-03-21 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | Method for measuring anti-wt1 antibody |
IN2014CN03922A (ru) * | 2011-10-28 | 2015-09-04 | Oncotherapy Science Inc | |
JP6282598B2 (ja) | 2012-01-13 | 2018-02-21 | メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター | 免疫原性wt1ペプチド及びその使用方法 |
WO2014007266A1 (ja) | 2012-07-02 | 2014-01-09 | 大日本住友製薬株式会社 | 癌抗原ペプチド経皮剤 |
RU2680588C2 (ru) * | 2012-09-12 | 2019-02-22 | Интернешнл Инститьют Оф Кэнсер Иммунолоджи, Инк. | Гены рецепторов антигенспецифичных хелперных т-клеток |
CN104812401B (zh) * | 2012-12-13 | 2017-10-13 | 宾夕法尼亚大学理事会 | Wt1疫苗 |
US10815273B2 (en) | 2013-01-15 | 2020-10-27 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Immunogenic WT-1 peptides and methods of use thereof |
CA2898099A1 (en) * | 2013-01-15 | 2014-07-24 | David A. Scheinberg | Immunogenic wt-1 peptides and methods of use thereof |
CA2841016A1 (en) * | 2013-02-05 | 2014-08-05 | Nitto Denko Corporation | Wt1 peptide cancer vaccine composition for transdermal administration |
EP2762156A1 (en) * | 2013-02-05 | 2014-08-06 | Nitto Denko Corporation | Tape preparation of WT1 peptide cancer vaccine for transdermal administration |
EP2762160A1 (en) * | 2013-02-05 | 2014-08-06 | Nitto Denko Corporation | Wt1 peptide cancer vaccine composition for mucosal administration |
JP6512567B2 (ja) * | 2013-02-05 | 2019-05-15 | 日東電工株式会社 | 経皮投与用wt1ペプチド癌ワクチン組成物 |
ES2694328T3 (es) * | 2013-03-12 | 2018-12-19 | Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. | Composición acuosa líquida |
AU2014244860B2 (en) * | 2013-03-29 | 2018-07-26 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | WT1-antigen peptide conjugate vaccine |
US10588952B2 (en) | 2013-03-29 | 2020-03-17 | Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. | Conjugate vaccine using trimming function of ERAP1 |
JP6634287B2 (ja) * | 2013-05-13 | 2020-01-22 | 株式会社癌免疫研究所 | 免疫療法の臨床効果の予測法 |
WO2015077717A1 (en) | 2013-11-25 | 2015-05-28 | The Broad Institute Inc. | Compositions and methods for diagnosing, evaluating and treating cancer by means of the dna methylation status |
WO2015085147A1 (en) | 2013-12-05 | 2015-06-11 | The Broad Institute Inc. | Polymorphic gene typing and somatic change detection using sequencing data |
AU2014368898B2 (en) | 2013-12-20 | 2020-06-11 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Combination therapy with neoantigen vaccine |
CN106029699B (zh) | 2014-02-26 | 2019-07-19 | 泰来有限公司 | Wt1抗原性多肽和含有该多肽的抗肿瘤剂 |
KR20230141904A (ko) * | 2014-12-11 | 2023-10-10 | 인터내셔널 인스티튜트 오브 캔서 이무놀로지 인코퍼레이티드 | 혈관 신생병의 면역 요법 |
WO2016100977A1 (en) | 2014-12-19 | 2016-06-23 | The Broad Institute Inc. | Methods for profiling the t-cel- receptor repertoire |
US10975442B2 (en) | 2014-12-19 | 2021-04-13 | Massachusetts Institute Of Technology | Molecular biomarkers for cancer immunotherapy |
JP6028253B2 (ja) * | 2015-01-28 | 2016-11-16 | 学校法人北里研究所 | 癌細胞の検出方法及び癌細胞検出キット |
CA2987247A1 (en) | 2015-03-20 | 2016-09-29 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Isg15 and its use as an adjuvant |
HRP20220994T1 (hr) | 2015-11-20 | 2022-11-11 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Sastav za liječenje raka |
WO2017122131A1 (en) | 2016-01-11 | 2017-07-20 | Dixon Janette | Methods for determining tumour phenotypes |
JP7209963B2 (ja) | 2016-11-30 | 2023-01-23 | 住友ファーマ株式会社 | Wt1ヘルパーペプチド及びこれと癌抗原ペプチドコンジュゲート体との組合せ |
JP7393752B2 (ja) | 2018-10-05 | 2023-12-07 | 株式会社癌免疫研究所 | 良性腫瘍の予防または治療薬 |
TW202045528A (zh) | 2019-02-28 | 2020-12-16 | 日商大日本住友製藥股份有限公司 | 選擇可期待用於治療或預防癌之醫藥組合物之效果之對象之方法 |
KR102215578B1 (ko) * | 2019-03-28 | 2021-02-15 | 한국과학기술연구원 | 인간 백혈구 항원에 특이적으로 결합하는 펩타이드 및 이의 용도 |
WO2021138447A1 (en) | 2019-12-31 | 2021-07-08 | Elixirgen Therapeutics, Inc. | Temperature-based transient delivery of nucleic acids and proteins to cells and tissues |
US20230183316A1 (en) | 2020-05-12 | 2023-06-15 | Sumitomo Pharma Co., Ltd. | Pharmaceutical composition for treating cancer |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000006602A1 (fr) * | 1998-07-31 | 2000-02-10 | Haruo Sugiyama | Antigenes contre le cancer a base d'un produit du gene suppresseur de tumeur wt1 |
RU2237674C2 (ru) * | 1998-09-30 | 2004-10-10 | Корикса Корпорейшн | Композиции и способы wt1-специфичной иммунотерапии |
WO2005087797A1 (en) * | 2004-03-09 | 2005-09-22 | Microbia, Inc. | Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders |
US7115272B1 (en) * | 1998-09-30 | 2006-10-03 | Corixa Corporation | Compositions and methods for WT1 specific immunotherapy |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3904260B2 (ja) | 1995-06-01 | 2007-04-11 | 岸本 忠三 | ウイルムス腫瘍遺伝子(wt1)に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド誘導体を含んで成る白血病細胞増殖阻害剤 |
JP4789095B2 (ja) | 1997-07-16 | 2011-10-05 | 治夫 杉山 | ウイルムス腫瘍遺伝子(wt1)に対する発現阻害物質を含んで成る固形腫瘍治療剤 |
ATE323719T1 (de) * | 1998-07-28 | 2006-05-15 | Greenpeptide Co Ltd | Hla-a2 beschränktes tumorantigen-peptid, das von sart-1 abstammt |
GB9823897D0 (en) | 1998-11-02 | 1998-12-30 | Imp College Innovations Ltd | Immunotherapeutic methods and molecules |
KR100863853B1 (ko) | 2001-03-22 | 2008-10-15 | 인터내셔널 인스티튜트 오브 캔서 이무놀로지 인코퍼레이티드 | 더블유티1 개변 펩티드 |
AU2003242305A1 (en) * | 2002-06-12 | 2003-12-31 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Hla-a24-restricted cancer antigen peptide |
JP4566912B2 (ja) | 2003-06-27 | 2010-10-20 | 株式会社癌免疫研究所 | Wt1ワクチン適応患者の選択方法 |
CA2548135C (en) | 2003-12-01 | 2014-04-22 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Synthetic hla binding peptide analogues and uses thereof |
JP2006045287A (ja) | 2004-08-02 | 2006-02-16 | Inax Corp | 弾性接着剤及びタイル張り壁面 |
WO2007016466A2 (en) | 2005-07-29 | 2007-02-08 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Single wall nanotube constructs and uses therefor |
CN101888852B (zh) * | 2007-12-05 | 2017-02-08 | 株式会社癌免疫研究所 | 癌症疫苗组合物 |
-
2008
- 2008-12-05 CN CN200880119136.7A patent/CN101888852B/zh active Active
- 2008-12-05 CA CA2940962A patent/CA2940962C/en active Active
- 2008-12-05 TW TW102139047A patent/TWI504407B/zh active
- 2008-12-05 CA CA2881594A patent/CA2881594C/en active Active
- 2008-12-05 ES ES08857437.1T patent/ES2679127T3/es active Active
- 2008-12-05 CN CN201610202421.1A patent/CN105903006A/zh active Pending
- 2008-12-05 KR KR1020157011229A patent/KR101610664B1/ko active IP Right Grant
- 2008-12-05 EP EP18156472.5A patent/EP3384926A1/en active Pending
- 2008-12-05 WO PCT/JP2008/072160 patent/WO2009072610A1/ja active Application Filing
- 2008-12-05 AU AU2008332278A patent/AU2008332278C1/en active Active
- 2008-12-05 EP EP08857437.1A patent/EP2228072B1/en active Active
- 2008-12-05 RU RU2013141923A patent/RU2682726C9/ru active
- 2008-12-05 RU RU2010127298/15A patent/RU2010127298A/ru not_active Application Discontinuation
- 2008-12-05 CA CA2706907A patent/CA2706907C/en active Active
- 2008-12-05 CN CN201310241647.9A patent/CN103394079B/zh active Active
- 2008-12-05 TW TW97147299A patent/TWI455721B/zh active
- 2008-12-05 MX MX2010006070A patent/MX2010006070A/es active IP Right Grant
- 2008-12-05 KR KR1020107013987A patent/KR101592855B1/ko active IP Right Grant
- 2008-12-05 JP JP2009544741A patent/JP5478260B2/ja active Active
- 2008-12-05 US US12/746,257 patent/US8557779B2/en active Active
-
2013
- 2013-06-18 US US13/920,757 patent/US9119801B2/en active Active
- 2013-06-24 JP JP2013131438A patent/JP5921494B2/ja active Active
- 2013-09-12 RU RU2013141920A patent/RU2721574C2/ru active
-
2015
- 2015-02-25 US US14/631,336 patent/US20160367649A1/en not_active Abandoned
-
2016
- 2016-04-12 JP JP2016079557A patent/JP6435286B2/ja active Active
- 2016-12-16 US US15/530,247 patent/US10426822B2/en active Active
-
2019
- 2019-08-13 US US16/539,613 patent/US11707512B2/en active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000006602A1 (fr) * | 1998-07-31 | 2000-02-10 | Haruo Sugiyama | Antigenes contre le cancer a base d'un produit du gene suppresseur de tumeur wt1 |
RU2237674C2 (ru) * | 1998-09-30 | 2004-10-10 | Корикса Корпорейшн | Композиции и способы wt1-специфичной иммунотерапии |
US7115272B1 (en) * | 1998-09-30 | 2006-10-03 | Corixa Corporation | Compositions and methods for WT1 specific immunotherapy |
WO2005087797A1 (en) * | 2004-03-09 | 2005-09-22 | Microbia, Inc. | Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
BURKS et al., Modification of a Major Peanut Allergen Leads to Loss of IgE Binding, Int. Arch. Allergy Immunol., 1999, v.118, p.313-314. * |
FRANKEL A.E. et al., Characterization of diphtheria fusion proteins targeted to the human interleukin-3 receptor, Protein Engineering, 2000, v. 13, n. 8, p. 575-581. * |
FRANKEL A.E. et al., Characterization of diphtheria fusion proteins targeted to the human interleukin-3 receptor, Protein Engineering, 2000, v. 13, n. 8, p. 575-581. BURKS et al., Modification of a Major Peanut Allergen Leads to Loss of IgE Binding, Int. Arch. Allergy Immunol., 1999, v.118, p.313-314. TAKAI et al., Effects of proline mutations in the major house dust mite allergen Der f 2 on IgE-binding and histamine-releasing activity, Eur. J. Biochem., 2000, v.267, n.22, p.6650-6656. * |
OKA Y. et al., Induction of WT1 (Wilms' tumor gene)-specific cytotoxic T lymphocytes by WT1 peptide vaccine and the resultant cancer regression, Proc. Natl. Acad. Sci. U S A, 2004, v.101, n.38, p.13885-13890. * |
TAKAI et al., Effects of proline mutations in the major house dust mite allergen Der f 2 on IgE-binding and histamine-releasing activity, Eur. J. Biochem., 2000, v.267, n.22, p.6650-6656. * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11707512B2 (en) | Cancer vaccine composition | |
JP6853842B2 (ja) | 免疫原性wt−1ペプチドおよびその使用法 | |
DK2186889T3 (en) | CDCA1 PEPTID AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION, INCLUDING THIS | |
WO2022070496A1 (ja) | SARS-CoV-2蛋白由来ペプチドおよびそれを含むワクチン | |
JP6255593B2 (ja) | Th1細胞のCDCA1エピトープペプチドおよびこれを含有するワクチン | |
WO2022149549A1 (ja) | SARS-CoV-2蛋白由来ペプチドおよびそれを含むワクチン | |
WO2022149295A1 (ja) | SARS-CoV-2蛋白由来ペプチドおよびそれを含むワクチン | |
WO2022071435A1 (ja) | SARS-CoV-2蛋白由来ペプチドおよびそれを含むワクチン |