JP6282598B2

JP6282598B2 - 免疫原性ｗｔ１ペプチド及びその使用方法

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Publication number: JP6282598B2
Application number: JP2014552368A
Authority: JP
Inventors: ジェイオライリー、リチャード; ダブロビナ、エカテリーナ; セルバクマール、アンナーマライ
Original assignee: メモリアルスローンケタリングキャンサーセンター
Priority date: 2012-01-13
Filing date: 2013-01-14
Publication date: 2018-02-21
Anticipated expiration: 2033-01-14
Also published as: US20190092813A1; EP3520810A2; US20150104413A1; CA2861206A1; AU2018201210A1; AU2013207669B9; US10100087B2; EP2802347A2; AU2013207669B2; CN104684577B; WO2013106834A3; CN108676069A; JP6995645B2; AU2018201210B2; EP3520810A3; CN104684577A; US10815274B2; HK1204261A1; EP2802347A4; US20170334951A1

Description

（政府支援）
本発明は、米国国立衛生研究所の認可番号ＣＡ２３７６６、ＣＡ５９３５０及びＣＡ０８７４８による支援を受けてなされたものである。米国政府は、本発明において一定の権利を有する。

（技術分野）
本発明は、ＷＴ１ペプチド、該ＷＴ１ペプチドを含む組成物、該ＷＴ１ペプチドを含むワクチン、及び、ＷＴ１発現癌を治療するか、ＷＴ１発現癌の発生率を減少させるかまたはＷＴ１発現癌細胞に対する免疫応答を誘導する方法であって、該ＷＴ１ペプチドを投与するステップを含む方法を提供する。

新生児１万人当たり１人に発生する小児腎芽細胞腫であるウィルムス腫瘍（Wilms tumor：ＷＴ）は、ここ数年間、精力的な臨床及び基礎研究の対象となってきた。この腫瘍は、胎児に発生し、通常は出生後５年以内に検出される。この腫瘍は、一側性または両側性であり得る。ＷＴは、発達中の腎臓の凝集した後腎間葉細胞が適切に分化しなかった場合に発生する。ＷＴの病因にウィルムス腫瘍１（ＷＴ１）腫瘍抑制遺伝子が関わっていることから、遺伝子変化が腫瘍成長及び腫瘍発生に対して大きく影響することが示された。

ウィルムス腫瘍タンパク質１（ＷＴ１）は、正常な個体発生時に、胎児の腎臓、睾丸及び卵巣などに発現するジンクフィンガー転写因子である。成人の場合は、ＷＴ１は、造血幹細胞、筋上皮前駆細胞、腎臓有足細胞、及び、睾丸及び卵巣内のある細胞において低レベルで発現する。最近では、ＷＴ１は、あるタイプの白血病において過剰発現することが実証されており、このことは、ＷＴ１は、様々な癌に対する免疫療法のための魅力的な標的であることを示唆している。

本発明は、免疫原性ペプチドを含む、ペプチド、組成物、免疫原性組成物、例えばワクチン、及び、ＷＴ１発現癌を治療するか、ＷＴ１発現癌の発生率を減少させるか、またはＷＴ１発現癌に対する免疫応答を誘導する方法であって、免疫原性ペプチドを投与するステップを含む方法を提供する。

一実施形態では、本発明は、単離されたＷＴ１ペプチドであって、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、及び１９３からなる群より選択されるアミノ酸（ＡＡ）配列を有するペプチドを提供する。一実施形態では、本発明は、ＨＬＡクラスＩ分子結合性の単離されたＷＴ１ペプチドであって、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１９０、１９１、及び１９３からなる群より選択されるアミノ酸（ＡＡ）配列を有するペプチドを提供する。一実施形態では、本発明は、ＨＬＡクラスＩＩ分子結合性の単離されたＷＴ１ペプチドであって、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９、１５６、１７３、１７４、及び１８０からなる群より選択されるアミノ酸（ＡＡ）配列を有するペプチドを提供する。

一実施形態では、本発明は、単離されたＷＴ１ペプチドであって、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、及び１９３からなる群より選択されるアミノ酸（ＡＡ）配列またはその断片を有するペプチドを提供する。一実施形態では、本発明は、ＨＬＡクラスＩ分子結合性の単離されたＷＴ１ペプチドであって、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１９０、１９１、及び１９３からなる群より選択されるアミノ酸（ＡＡ）配列を有するペプチドを提供する。一実施形態では、本発明は、ＨＬＡクラスＩＩ分子結合性の単離されたＷＴ１ペプチドであって、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９、１５６、１７３、１７４、及び１８０からなる群より選択されるアミノ酸（ＡＡ）配列を有するペプチドを提供する。

別の実施形態では、本発明は、組成物であって、（ａ）抗原提示細胞と、（ｂ）配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、及び１９３からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するペプチドとを含む組成物を提供する。別の実施形態では、本発明は、組成物であって、（ａ）抗原提示細胞と、（ｂ）配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、及び１８３からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＬＡクラスＩ結合性ペプチドとを含む組成物を提供する。別の実施形態では、本発明は、組成物であって、（ａ）抗原提示細胞と、（ｂ）配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９、１５６、１７３、１７４、及び１８０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＬＡクラスＩＩ結合性ペプチドとを含む組成物を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ワクチンであって、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、及び１９３からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する１以上のペプチドを含むワクチンを提供する。別の実施形態では、本発明は、ワクチンであって、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、及び１８３からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する１以上のＨＬＡクラスＩ結合性ペプチドを含むワクチンを提供する。別の実施形態では、本発明は、ワクチンであって、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９、１５６、１７３、１７４、及び１８０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する１以上のＨＬＡクラスＩＩ結合性ペプチドを含むワクチンを提供する。別の実施形態では、本発明は、ワクチンであって、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、及び１８３からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する１以上のＨＬＡクラスＩ結合性ペプチドと、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９、１５６、１７３、１７４、及び１８０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する１以上のＨＬＡクラスＩＩ結合性ペプチドとを含むワクチンを提供する。

別の実施形態では、本発明は、ＷＴ１発現癌細胞を有する対象を治療する方法であって、本発明のＷＴ１ペプチドまたはワクチンを前記対象に投与するステップを含み、それによって、ＷＴ１発現癌細胞を有する前記対象を治療するようにした方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、対象におけるＷＴ１発現癌細胞の発生率または再発率を減少させる方法であって、本発明のＷＴ１ペプチドまたはワクチンを前記対象に投与するステップを含み、それによって、前記対象におけるＷＴ１発現癌細胞の発生率または再発率を減少させるようにした方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ＷＴ１タンパク質に特異的なＣＴＬの形成及び増殖を誘導する方法であって、本発明のＷＴ１ペプチドまたは組成物をリンパ球集団に接触させるステップを含み、それよって、ＷＴ１タンパク質に特異的なＣＴＬの形成及び増殖を誘導するようにした方法を提供する。この方法は、インビトロ、エクスビボまたはインビボで実施することができる。インビトロまたはエクスビボで実施する場合、前記ＣＴＬはその後、治療効果をもたらすために患者に注入することができる。

別の実施形態では、本発明は、（ａ）ＷＴ１タンパク質に特異的なＣＤ８^＋リンパ球、（ｂ）ＷＴ１タンパク質に特異的なＣＤ４^＋リンパ球、またはそれらの組合せの形成及び増殖を誘導する方法であって、本発明のペプチドまたは組成物をリンパ球集団に接触させるステップを含み、それによって、（ａ）ＷＴ１タンパク質に特異的なＣＤ８^＋リンパ球、（ｂ）ＷＴ１タンパク質に特異的なＣＤ４^＋リンパ球、またはそれらの組合せの形成及び増殖を誘導するようにした方法を提供する。この方法は、インビトロ、エクスビボまたはインビボで実施することができる。インビトロまたはエクスビボで実施する場合、前記ＣＴＬはその後、治療効果をもたらすために患者に注入することができる。

別の実施形態では、本発明は、対象における抗癌免疫応答を誘導する方法であって、（ａ）ＷＴ１タンパク質、（ｂ）ＷＴタンパク質の断片、（ｃ）ＷＴ１タンパク質をコードするヌクレオチド分子、または（ｄ）ＷＴ１タンパク質の断片をコードするヌクレオチド分子を含む免疫原性組成物を前記対象に接触させるステップを含み、それによって、対象における抗中皮腫免疫応答を誘起するようにした方法を提供する。一実施形態では、前記ＷＴ１タンパク質の断片は、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、及び１９３からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するペプチドからなるかまたは該ペプチドを含む。別の実施形態では、前記ＷＴ１タンパク質の断片は、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、及び１８３、或いは配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９、１５６、１７３、１７４、及び１８０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するペプチドからなるかまたは該ペプチドを含む。

別の実施形態では、本発明は、癌を有する対象を治療する方法であって、（ａ）ＷＴ１タンパク質、（ｂ）ＷＴタンパク質の断片、（ｃ）ＷＴ１タンパク質をコードするヌクレオチド分子、または（ｄ）ＷＴ１タンパク質の断片をコードするヌクレオチド分子を含む免疫原性組成物を前記対象に接触させるステップを含み、それによって、中皮腫を有する対象を治療するようにした方法を提供する。一実施形態では、前記ＷＴ１タンパク質の断片は、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、及び１９３からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するペプチドからなるかまたは該ペプチドを含む。別の実施形態では、前記ＷＴ１タンパク質の断片は、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、及び１８３、或いは配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９、１５６、１７３、１７４、及び１８０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するペプチドからなるかまたは該ペプチドを含む。

別の実施形態では、本発明は、対象における癌の発生率または再発率を減少させる方法であって、（ａ）ＷＴ１タンパク質、（ｂ）ＷＴタンパク質の断片、（ｃ）ＷＴ１タンパク質をコードするヌクレオチド分子、または（ｄ）ＷＴ１タンパク質の断片をコードするヌクレオチド分子を含む免疫原性組成物を前記対象に接触させるステップを含み、それによって、対象における癌の発生率または再発率を減少させるようにした方法を提供する。一実施形態では、前記ＷＴ１タンパク質の断片は、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、及び１９３からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するペプチドからなるかまたは該ペプチドを含む。別の実施形態では、前記ＷＴ１タンパク質の断片は、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、及び１８３、或いは配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９、１５６、１７３、１７４、及び１８０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するペプチドからなるかまたは該ペプチドを含む。

別の実施形態では、前記癌は、ＷＴ１発現癌である。一実施形態では、ＷＴ１発現癌は、急性骨髄性白血病（acute myelogenous leukemia：ＡＭＬ）である。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、骨髄異形成症候群（myelodysplastic syndrome：ＭＤＳ）に関連するものである。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、ＭＤＳである。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer：ＮＳＣＬＣ）である。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、ウィルムス腫瘍である。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、白血病である。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、血液癌である。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、リンパ腫である。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、線維形成性小円形細胞腫瘍である。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、中皮腫である。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、悪性中皮腫である。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、胃癌である。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、結腸癌である。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、肺癌である。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、乳癌である。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、胚細胞腫瘍である。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、卵巣癌である。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、子宮癌である。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、甲状腺癌である。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、肝細胞癌である。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、甲状腺癌である。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、肝臓癌である。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、腎臓癌である。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、カポジ肉腫である。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、肉腫である。別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、その他の癌腫または肉腫である。

別の実施形態では、ＷＴ１発現癌は、固形癌である。別の実施形態では、固形癌は、ＷＴ１発現癌に関連するものである。別の実施形態では、固形癌は、骨髄異形成症候群（myelodysplastic syndrome：ＭＤＳ）に関連するものである。別の実施形態では、固形癌は、非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer：ＮＳＣＬＣ）に関連するものである。別の実施形態では、固形癌は、肺癌に関連するものである。別の実施形態では、固形癌は、乳癌に関連するものである。別の実施形態では、固形癌は、結腸直腸癌に関連するものである。別の実施形態では、固形癌は、前立腺癌に関連するものである。別の実施形態では、固形癌は、卵巣癌に関連するものである。別の実施形態では、固形癌は、腎臓癌に関連するものである。別の実施形態では、固形癌は、膵臓癌に関連するものである。別の実施形態では、固形癌は、脳腫瘍に関連するものである。別の実施形態では、固形癌は、消化管癌に関連するものである。別の実施形態では、固形癌は、皮膚癌に関連するものである。別の実施形態では、固形癌は、メラノーマに関連するものである。

別の実施形態では、本発明は、本発明の単離されたペプチドと、少なくとも１つの追加的なＷＴ１ペプチドとを含む組成物を提供する。特定の実施形態では、少なくとも２種類の本発明の単離されたペプチドを含む組成物が提供される。特定の実施形態では、少なくとも３種類または少なくとも４種類の本発明の単離されたペプチドを含む組成物が提供される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。特定の実施形態では、本発明の組成物は、ワクチンである。

別の実施形態では、本発明は、ＷＴ１発現癌を有する対象を治療する方法であって、本発明のペプチドまたは組成物を前記対象に投与するステップを含み、それによって、ＷＴ１発現癌を有する対象を治療するようにした方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、対象におけるＷＴ１発現癌の発生率または再発率を減少させる方法であって、本発明のペプチドまたは組成物を前記対象に投与するステップを含み、それによって、対象におけるＷＴ１発現癌の発生率またはその再発率を減少させるようにした方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ＷＴ１タンパク質に特異的なＣＴＬの形成及び増殖を誘導する方法であって、本発明のペプチドまたは組成物をリンパ球集団に接触させるステップを含み、それによって、ＷＴ１タンパク質に特異的なＣＴＬの形成及び増殖を誘導するようにした方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、（ａ）ＷＴ１タンパク質に特異的なＣＤ８^＋リンパ球、（ｂ）ＷＴ１タンパク質に特異的なＣＤ４^＋リンパ球、またはそれらの組合せの形成及び増殖を誘導する方法であって、本発明のペプチドまたは組成物をリンパ球集団に接触させるステップを含み、それによって、（ａ）ＷＴ１タンパク質に特異的なＣＤ８^＋リンパ球、（ｂ）ＷＴ１タンパク質に特異的なＣＤ４^＋リンパ球、またはそれらの組合せの形成及び増殖を誘導するようにした方法を提供する。

別の実施形態では、本発明のペプチドは、ＨＬＡ分子に結合するための親和力を増加させる少なくとも１つのアミノ酸変化を有するペプチドに関連するものである。

本出願は、２０１２年１月１３日に出願された米国仮出願第６１／５８６，１７７号及び２０１２年５月１５日に出願された米国仮出願第６１／６４７，２０７号に基づく優先権を主張するものであり、前記両出願の内容全体は参照により本明細書に援用されるものとする。

上記した本発明の特徴、利点及び目的、その他について明らかにし、かつ細部まで理解できるように、本発明のより詳細な説明を簡単に要約する。詳細については、本発明の特定の実施形態を参照されたい。それらは添付の図面に示されており、これらの図面は明細書の一部をなす。しかし、添付の図面は、本発明の好適実施形態を示しているものであり、したがって、本発明の範囲を限定するものを考えるべきではないことに留意されたい。

ペンタデカペプチド生成されたＷＴ１のトータルプールを搭載した自己ＡＰＣでの刺激による、健常ドナー（ｎ＝５６）のＰＢＭＣから生成したＣＴＬのＷＴ１に特異的な応答を示す。ペンタデカペプチド生成されたＷＴ１のトータルプールを搭載した自己ＡＰＣでの刺激による、健常ドナー（ｎ＝５６）のＰＢＭＣから生成したＣＴＬのＷＴ１に特異的な応答を示す。ペンタデカペプチド生成されたＷＴ１のトータルプールを搭載した自己ＡＰＣでの刺激による、健常ドナー（ｎ＝５６）のＰＢＭＣから生成したＣＴＬのＷＴ１に特異的な応答を示す。ペンタデカペプチド生成されたＷＴ１のトータルプールを搭載した自己ＡＰＣでの刺激による、健常ドナー（ｎ＝５６）のＰＢＭＣから生成したＣＴＬのＷＴ１に特異的な応答を示す。ＷＴ１タンパク質の配列全体に及ぶ重複したペンタデカペプチドのトータルプールの生成及びエピトープマッピングのための方法を示す。ＷＴ１タンパク質の配列全体に及ぶ重複したペンタデカペプチドのトータルプールの生成及びエピトープマッピングのための方法を示す。ＷＴ１タンパク質の配列全体に及ぶ重複したペンタデカペプチドのトータルプールの生成及びエピトープマッピングのための方法を示す。ＷＴ１タンパク質の配列全体に及ぶ重複したペンタデカペプチドのトータルプールの生成及びエピトープマッピングのための方法を示す。ＷＴ１タンパク質の配列全体に及ぶ重複したペンタデカペプチドのトータルプールの生成及びエピトープマッピングのための方法を示す。自己ＣＡＭに搭載された重複１５−ｍｅｒのＷＴ１トータルプールとの同時培養から４０日後の、ＷＴ１ＣＴＬにおけるＷＴ１タンパク質由来の同一免疫優性ペプチド配列に対する、ＨＬＡクラスＩ及びＩＩの両者に拘束されるＷＴ１特異的Ｔ細胞応答を示す。自己ＣＡＭに搭載された重複１５−ｍｅｒのＷＴ１トータルプールとの同時培養から４０日後の、ＷＴ１ＣＴＬにおけるＷＴ１タンパク質由来の同一免疫優性ペプチド配列に対する、ＨＬＡクラスＩ及びＩＩの両者に拘束されるＷＴ１特異的Ｔ細胞応答を示す。自己ＣＡＭに搭載された重複１５−ｍｅｒのＷＴ１トータルプールとの同時培養から４０日後の、ＷＴ１ＣＴＬにおけるＷＴ１タンパク質由来の同一免疫優性ペプチド配列に対する、ＨＬＡクラスＩ及びＩＩの両者に拘束されるＷＴ１特異的Ｔ細胞応答を示す。自己ＣＡＭに搭載された重複１５−ｍｅｒのＷＴ１トータルプールとの同時培養から４０日後の、ＷＴ１ＣＴＬにおけるＷＴ１タンパク質由来の同一免疫優性ペプチド配列に対する、ＨＬＡクラスＩ及びＩＩの両者に拘束されるＷＴ１特異的Ｔ細胞応答を示す。ＷＴ１の模式図を示す。ＷＴ１の模式図を示す。８人の健常Ａ０２０１＋ドナーにおいてＡ０２０１−ＡＡＰＣに搭載された混合Ａ０２０１エピトープを用いた結果を示す。

本発明は、免疫原性ペプチド、免疫原性ペプチドを含む組成物、及び免疫原性ペプチドを含むワクチンを提供する。また、本発明は、ＷＴ１発現癌を治療するか、ＷＴ１発現癌の発生率を減少させるか、またはＷＴ１発現癌細胞に対する免疫応答を誘導する方法であって、１以上の免疫原性ペプチドを投与するステップを含む方法を提供する。

本発明は、ＷＴ１ペプチドを提供する。また、本発明は、ＷＴ１発現癌を治療するか、ＷＴ１発現癌の発生率を減少させるか、またはＷＴ１発現癌細胞に対する免疫応答を誘導する方法であって、免疫原性ペプチドを投与するステップを含む方法を提供する。

本発明のペプチドが得られるＷＴ１分子は、別の実施形態では、下記の配列を有する。
１ＳＲＱＲＰＨＰＧＡＬＲＮＰＴＡＣＰＬＰＨＦＰＰＳＬＰＰＴＨＳＰＴＨＰＰＲＡＧＴＡＡＱＡＰＧＰＲＲＬＬ
５１ＡＡＩＬＤＦＬＬＬＱＤＰＡＳＴＣＶＰＥＰＡＳＱＨＴＬＲＳＧＰＧＣＬＱＱＰＥＱＱＧＶＲＤＰＧＧＩＷＡＫ
１０１ＬＧＡＡＥＡＳＡＥＲＬＱＧＲＲＳＲＧＡＳＧＳＥＰＱＱＭＧＳＤＶＲＤＬＮＡＬＬＰＡＶＰＳＬＧＧＧＧＧＣ
１５１ＡＬＰＶＳＧＡＡＱＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＧＧＰＡＰＰＰＡＰＰＰＰＰＰＰＰＰＨＳＦＩＫＱ
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２５１ＡＲＭＦＰＮＡＰＹＬＰＳＣＬＥＳＱＰＡＩＲＮＱＧＹＳＴＶＴＦＤＧＴＰＳＹＧＨＴＰＳＨＨＡＡＱＦＰＮＨ
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３５１ＮＬＹＱＭＴＳＱＬＥＣＭＴＷＮＱＭＮＬＧＡＴＬＫＧＶＡＡＧＳＳＳＳＶＫＷＴＥＧＱＳＮＨＳＴＧＹＥＳＤ
４０１ＮＨＴＴＰＩＬＣＧＡＱＹＲＩＨＴＨＧＶＦＲＧＩＱＤＶＲＲＶＰＧＶＡＰＴＬＶＲＳＡＳＥＴＳＥＫＲＰＦＭ
４５１ＣＡＹＰＧＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧＥＫＰＹＱＣＤＦＫＤＣＥＲＲＦＳＲＳＤＱＬＫＲＨＱ
５０１ＲＲＨＴＧＶＫＰＦＱＣＫＴＣＱＲＫＦＳＲＳＤＨＬＫＴＨＴＲＴＨＴＧＫＴＳＥＫＰＦＳＣＲＷＰＳＣＱＫＫ
５５１ＦＡＲＳＤＥＬＶＲＨＨＮＭＨＱＲＮＭＴＫＬＱＬＡＬ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１９４）

ＷＴ１タンパク質の上記の配列は、ゲスラーら（Gessler et al.）（３７）により公表された配列であり、５７５個のアミノ酸を含んでおり、かつ、ＷＴ１１６の（エクソン５＋，ＫＴＳ＋）アイソフォームでは欠損しているＮ末端における最初の１２６個のアミノ酸を含んでいる。

別の実施形態では、ＷＴ１の配列は、次のとおりである。
ＭＧＳＤＶＲＤＬＮＡＬＬＰＡＶＰＳＬＧＧＧＧＧＣＡＬＰＶＳＧＡＡＱＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＧＧＰＡＰＰＰＡＰＰ
ＰＰＰＰＰＰＰＨＳＦＩＫＱＥＰＳＷＧＧＡＥＰＨＥＥＱＣＬＳＡＦＴＶＨＦＳＧＱＦＴＧＴＡＧＡＣＲＹＧＰＦＧＰＰＰＰＳＱＡＳＳＧＱＡ
ＲＭＦＰＮＡＰＹＬＰＳＣＬＥＳＱＰＡＩＲＮＱＧＹＳＴＶＴＦＤＧＴＰＳＹＧＨＴＰＳＨＨＡＡＱＦＰＮＨＳＦＫＨＥＤＰＭＧＱＱＧＳ
ＬＧＥＱＱＹＳＶＰＰＰＶＹＧＣＨＴＰＴＤＳＣＴＧＳＱＡＬＬＬＲＴＰＹＳＳＤＮＬＹＱＭＴＳＱＬＥＣＭＴＷＮＱＭＮＬＧＡＴＬＫ
ＧＶＡＡＧＳＳＳＳＶＫＷＴＥＧＱＳＮＨＳＴＧＹＥＳＤＮＨＴＴＰＩＬＣＧＡＱＹＲＩＨＴＨＧＶＦＲＧＩＱＤＶＲＲＶＰＧＶＡＰＴＬ
ＶＲＳＡＳＥＴＳＥＫＲＰＦＭＣＡＹＰＧＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧＥＫＰＹＱＣＤＦＫＤＣＥＲＲＦＳＲＳＤＱＬＫ
ＲＨＱＲＲＨＴＧＶＫＰＦＱＣＫＴＣＱＲＫＦＳＲＳＤＨＬＫＴＨＴＲＴＨＴＧＫＴＳＥＫＰＦＳＣＲＷＰＳＣＱＫＫＦＡＲＳＤＥＬＶＲＨＨＮＭＨＱＲＮＭＴＫＬＱＬＡＬ（ＧｅｎＢａｎｋアクセス番号：ＡＹ２４５１０５；ＳＥＱＩＤＮＯ：１９５）。

別の実施形態では、ＷＴ１分子は、次の配列を有する。
ＡＡＥＡＳＡＥＲＬＱＧＲＲＳＲＧＡＳＧＳＥＰＱＱＭＧＳＤＶＲＤＬＮＡＬＬＰＡＶＰＳＬＧＧＧＧＧＣＡＬＰＶＳＧＡＡＱＷＡＰ
ＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＧＧＰＡＰＰＰＡＰＰＰＰＰＰＰＰＰＨＳＦＩＫＱＥＰＳＷＧＧＡＥＰＨＥＥＱＣＬＳＡＦＴＶＨＦＳＧＱＦ
ＴＧＴＡＧＡＣＲＹＧＰＦＧＰＰＰＰＳＱＡＳＳＧＱＡＲＭＦＰＮＡＰＹＬＰＳＣＬＥＳＱＰＡＩＲＮＱＧＹＳＴＶＴＦＤＧＴＰＳＹＧＨＴ
ＰＳＨＨＡＡＱＦＰＮＨＳＦＫＨＥＤＰＭＧＱＱＧＳＬＧＥＱＱＹＳＶＰＰＰＶＹＧＣＨＴＰＴＤＳＣＴＧＳＱＡＬＬＬＲＴＰＹＳＳＤＮ
ＬＹＱＭＴＳＱＬＥＣＭＴＷＮＱＭＮＬＧＡＴＬＫＧＨＳＴＧＹＥＳＤＮＨＴＴＰＩＬＣＧＡＱＹＲＩＨＴＨＧＶＦＲＧＩＱＤＶＲＲＶ
ＰＧＶＡＰＴＬＶＲＳＡＳＥＴＳＥＫＲＰＦＭＣＡＹＰＧＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧＥＫＰＹＱＣＤＦＫＤＣＥＲＲＦ
ＳＲＳＤＱＬＫＲＨＱＲＲＨＴＧＶＫＰＦＱＣＫＴＣＱＲＫＦＳＲＳＤＨＬＫＴＨＴＲＴＨＴＧＥＫＰＦＳＣＲＷＰＳＣＱＫＫＦＡＲＳＤＥＬＶＲＨＨＮＭＨＱＲＮＭＴＫＬＱＬＡＬ（ＧｅｎＢａｎｋアクセス番号：ＮＭ＿０００３７８；ＳＥＱＩＤＮＯ：１９６）。

別の実施形態では、ＷＴ１分子は、次の配列を有する。
ＭＱＤＰＡＳＴＣＶＰＥＰＡＳＱＨＴＬＲＳＧＰＧＣＬＱＱＰＥＱＱＧＶＲＤＰＧＧＩＷＡＫＬＧＡＡＥＡＳＡＥＲＬＱＧＲＲＳＲＧＡ
ＳＧＳＥＰＱＱＭＧＳＤＶＲＤＬＮＡＬＬＰＡＶＰＳＬＧＧＧＧＧＣＡＬＰＶＳＧＡＡＱＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＧＧＰ
ＡＰＰＰＡＰＰＰＰＰＰＰＰＰＨＳＦＩＫＱＥＰＳＷＧＧＡＥＰＨＥＥＱＣＬＳＡＦＴＶＨＦＳＧＱＦＴＧＴＡＧＡＣＲＹＧＰＦＧＰＰＰＰＳＱ
ＡＳＳＧＱＡＲＭＦＰＮＡＰＹＬＰＳＣＬＥＳＱＰＡＩＲＮＱＧＹＳＴＶＴＦＤＧＴＰＳＹＧＨＴＰＳＨＨＡＡＱＦＰＮＨＳＦＫＨＥＤＰ
ＭＧＱＱＧＳＬＧＥＱＱＹＳＶＰＰＰＶＹＧＣＨＴＰＴＤＳＣＴＧＳＱＡＬＬＬＲＴＰＹＳＳＤＮＬＹＱＭＴＳＱＬＥＣＭＴＷＮＱＭ
ＮＬＧＡＴＬＫＧＶＡＡＧＳＳＳＳＶＫＷＴＥＧＱＳＮＨＳＴＧＹＥＳＤＮＨＴＴＰＩＬＣＧＡＱＹＲＩＨＴＨＧＶＦＲＧＩＱＤＶＲＲＶ
ＰＧＶＡＰＴＬＶＲＳＡＳＥＴＳＥＫＲＰＦＭＣＡＹＰＧＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧＥＫＰＹＱＣＤＦＫＤＣＥＲＲＦ
ＳＲＳＤＱＬＫＲＨＱＲＲＨＴＧＶＫＰＦＱＣＫＴＣＱＲＫＦＳＲＳＤＨＬＫＴＨＴＲＴＨＴＧＥＫＰＦＳＣＲＷＰＳＣＱＫＫＦＡＲＳＤＥＬＶＲＨＨＮＭＨＱＲＮＭＴＫＬＱＬＡＬ（ＧｅｎＢａｎｋアクセス番号：ＮＰ＿０７７７４２；ＳＥＱＩＤＮｏ：１９７）。

別の実施形態では、ＷＴ１タンパク質は、ＧｅｎＢａｎｋアクセス番号：ＮＭ＿０２４４２６に記載されている配列を有する。別の実施形態では、ＷＴ１タンパク質は、ＧｅｎＢａｎｋアクセス番号：ＮＭ＿０２４４２５、ＮＭ＿０２４４２４、ＮＭ＿０００３７８、Ｓ９５５３０、Ｄｌ３６２４、Ｄ１２４９６、Ｄ１２４９７、またはＸ７７５４９の内の１つに記載されている配列を有するかまたは含む。別の実施形態では、ＷＴ１タンパク質は、当該技術分野で公知の他の任意のＷＴ１配列を有する。本発明は、免疫原性ペプチドを含む、ペプチド、組成物、免疫原性組成物、例えばワクチン、及び、ＷＴ１発現癌を治療するか、ＷＴ１発現癌の発生率を減少させるか、またはＷＴ１発現癌に対する免疫応答を誘導する方法であって、免疫原性ペプチドを投与するステップを含む方法を提供する。

一実施形態では、本発明は、単離されたＷＴ１ペプチドであって、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、及び１９３からなる群より選択されるアミノ酸（ＡＡ）配列を有するペプチドを提供する。一実施形態では、本発明は、ＨＬＡクラスＩ分子結合性の単離されたＷＴ１ペプチドであって、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１９０、１９１、及び１９３からなる群より選択されるアミノ酸（ＡＡ）配列を有するペプチドを提供する。一実施形態では、本発明は、ＨＬＡクラスＩＩ分子結合性の単離されたＷＴ１ペプチドであって、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９、１５６、１７３、１７４、及び１８０からなる群より選択されるアミノ酸（ＡＡ）配列を有するペプチドを提供する。別の実施形態では、前記ＨＬＡクラスＩペプチドは、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１５０、及び１５１からなる群より選択されるアミノ酸配列からなるかまたは該配列を有するペプチドであり、前記ＨＬＡクラスＩＩペプチドは、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９のアミノ酸配列からなるかまたは該配列を有するペプチドである。

一実施形態では、本発明は、単離されたＷＴ１ペプチドであって、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１〜５３または４３〜ＸＸＸからなる群より選択されるアミノ酸（ＡＡ）配列またはその断片を有するペプチドを提供する。一実施形態では、本発明は、ＨＬＡクラスＩ分子結合性の単離されたＷＴ１ペプチドであって、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、及び１８３からなる群より選択されるアミノ酸（ＡＡ）配列を有するペプチドを提供する。一実施形態では、本発明は、ＨＬＡクラスＩＩ分子結合性の単離されたＷＴ１ペプチドであって、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９、１５６、１７３、１７４、及び１８０からなる群より選択されるアミノ酸（ＡＡ）配列を有するペプチドを提供する。別の実施形態では、前記ＨＬＡクラスＩ結合性ペプチドは、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１５０、及び１５１からなる群より選択されるアミノ酸配列からなるかまたは該配列を有するペプチドであり、前記ＨＬＡクラスＩＩ結合性ペプチドは、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９のアミノ酸配列からなるかまたは該配列を有するペプチドである。

別の実施形態では、本発明は、組成物であって、（ａ）抗原提示細胞と、（ｂ）配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、及び１９３からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するペプチドとを含む組成物を提供する。別の実施形態では、本発明は、組成物であって、（ａ）抗原提示細胞と、（ｂ）配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、及び１８３からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＬＡクラスＩ結合性ペプチドとを含む組成物を提供する。別の実施形態では、本発明は、組成物であって、（ａ）抗原提示細胞と、（ｂ）配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９、１５６、１７３、１７４、及び１８０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＬＡクラスＩＩ結合性ペプチドとを含む組成物を提供する。別の実施形態では、前記ＨＬＡクラスＩ結合性ペプチドは、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１５０、及び１５１からなる群より選択されるアミノ酸配列からなるかまたは該配列を有するペプチドであり、前記ＨＬＡクラスＩＩ結合性ペプチドは、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９のアミノ酸配列からなるかまたは該配列を有するペプチドである。

別の実施形態では、本発明は、ワクチンであって、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、及び１９３からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する１以上のペプチドを含むワクチンを提供する。別の実施形態では、本発明は、ワクチンであって、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、及び１８３からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する１以上のＨＬＡクラスＩ結合性ペプチドを含むワクチンを提供する。別の実施形態では、本発明は、ワクチンであって、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９、１５６、１７３、１７４、及び１８０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する１以上のＨＬＡクラスＩＩ結合性ペプチドを含むワクチンを提供する。別の実施形態では、本発明は、ワクチンであって、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、及び１８３からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する１以上のＨＬＡクラスＩ結合性ペプチドと、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９、１５６、１７３、１７４、及び１８０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する１以上のＨＬＡクラスＩＩ結合性ペプチドとを含むワクチンを提供する。別の実施形態では、前記ＨＬＡクラスＩ結合性ペプチドは、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１５０、及び１５１からなる群より選択されるアミノ酸配列からなるかまたは該配列を有するペプチドであり、前記ＨＬＡクラスＩＩ結合性ペプチドは、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９のアミノ酸配列からなるかまたは該配列を有するペプチドである。

別の実施形態では、本発明は、癌を有する対象を治療する方法であって、（ａ）ＷＴ１タンパク質、（ｂ）ＷＴタンパク質の断片、（ｃ）ＷＴ１タンパク質をコードするヌクレオチド分子、または（ｄ）ＷＴ１タンパク質の断片をコードするヌクレオチド分子を含む免疫原性組成物を前記対象に接触させるステップを含み、それによって、中皮腫を有する対象を治療するようにした方法を提供する。一実施形態では、前記ＷＴ１タンパク質の断片は、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、及び１９３からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するペプチドである。別の実施形態では、前記ＷＴ１タンパク質の断片は、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、及び１８３、或いは配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９、１５６、１７３、１７４、及び１８０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するペプチドからなるかまたは該ペプチドを含む。別の実施形態では、前記ＨＬＡクラスＩ結合性ペプチドは、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１５０、及び１５１からなる群より選択されるアミノ酸配列からなるかまたは該配列を有するペプチドであり、前記ＨＬＡクラスＩＩ結合性ペプチドは、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９のアミノ酸配列からなるかまたは該配列を有するペプチドである。

別の実施形態では、本発明は、対象における癌の発生率または再発率を減少させる方法であって、（ａ）ＷＴ１タンパク質、（ｂ）ＷＴタンパク質の断片、（ｃ）ＷＴ１タンパク質をコードするヌクレオチド分子、または（ｄ）ＷＴ１タンパク質の断片をコードするヌクレオチド分子を含む免疫原性組成物を前記対象に接触させるステップを含み、それによって、対象における癌の発生率または再発率を減少させるようにした方法を提供する。一実施形態では、前記ＷＴ１タンパク質の断片は、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、及び１９３からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するペプチドである。別の実施形態では、前記ＷＴ１タンパク質の断片は、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、及び１８３、或いは配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９、１５６、１７３、１７４、及び１８０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するペプチドからなるかまたは該ペプチドを含む。別の実施形態では、前記ＨＬＡクラスＩ結合性ペプチドは、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１５０、及び１５１からなる群より選択されるアミノ酸配列からなるかまたは該配列を有するペプチドであり、前記ＨＬＡクラスＩＩ結合性ペプチドは、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９のアミノ酸配列からなるかまたは該配列を有するペプチドである。

別の実施形態では、本発明は、ＷＴ１発現癌を有する対象を治療する方法であって、本発明のペプチドまたはワクチンを前記対象に投与するステップを含み、それによって、ＷＴ１発現癌を有する対象を治療するようにした方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、対象におけるＷＴ１発現癌の発生率または再発率を減少させる方法であって、本発明のペプチドまたはワクチンを前記対象に投与するステップを含み、それによって、対象におけるＷＴ１発現癌の発生率またはその再発率を減少させるようにした方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、対象における抗癌免疫応答を誘導する方法であって、（ａ）ＷＴ１タンパク質、（ｂ）ＷＴタンパク質の断片、（ｃ）ＷＴ１タンパク質をコードするヌクレオチド分子、または（ｄ）ＷＴ１タンパク質の断片をコードするヌクレオチド分子を含む免疫原性組成物を対象に接触させるステップを含み、それにより、対象における抗中皮腫免疫応答を誘導するようにした方法を提供する。一実施形態では、前記ＷＴ１タンパク質の断片は、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、及び１９３からなる群より選択されるペプチドである。別の実施形態では、前記ＷＴ１タンパク質の断片は、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、及び１８３、或いは配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９、１５６、１７３、１７４及び１８０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するペプチドからなるかまたは該ペプチドを含む。別の実施形態では、前記ＨＬＡクラスＩ結合性ペプチドは、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１５０、及び１５１からなる群より選択されるアミノ酸配列からなるかまたは該配列を有するペプチドであり、前記ＨＬＡクラスＩＩ結合性ペプチドは、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９のアミノ酸配列からなるかまたは該配列を有するペプチドである。

別の実施形態では、本発明は、癌を有する対象を治療する方法であって、（ａ）ＷＴ１タンパク質、（ｂ）ＷＴタンパク質の断片、（ｃ）ＷＴ１タンパク質をコードするヌクレオチド分子、または（ｄ）ＷＴ１タンパク質の断片をコードするヌクレオチド分子を含む免疫原性組成物を対象に投与するステップを含み、それにより、中皮腫を有する対象を治療するようにした方法を提供する。一実施形態では、前記ＷＴ１タンパク質の断片は、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、及び１９３からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するペプチドである。

別の実施形態では、本発明は、対象における、癌の発生率または再発率を減少させる方法であって、（ａ）ＷＴ１タンパク質、（ｂ）ＷＴタンパク質の断片、（ｃ）ＷＴ１タンパク質をコードするヌクレオチド分子、または（ｄ）ＷＴ１タンパク質の断片をコードするヌクレオチド分子を含む免疫原性組成物を対象に投与するステップを含み、それにより、対象における中皮腫の発生率または再発率を減少させるようにした方法を提供する。一実施形態では、前記ＷＴ１タンパク質の断片は、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、及び１９３からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するペプチドである。

別の実施形態では、本発明は、対象におけるＷＴ１発現癌の発生率または再発率を減少させる方法であって、本発明のペプチドまたは組成物を対象に投与するステップを含み、それによって、対象におけるＷＴ１発現癌の発生率または再発率を減少させるようにした方法を提供する。

本発明の方法及び組成物の別の実施形態における「ペプチド」は、ＡＡサブユニットがペプチド結合によって連結された化合物を意味する。別の実施形態では、ペプチドは、ＡＡアナログを含む。別の実施形態では、ペプチドは、ペプチド模倣物質（peptidomimetric）を含む。本発明の方法及び組成物のペプチドに含まれ得る様々なＡＡアナログ及びペプチド模倣物質としては、下記に列挙するものがある。前記サブユニットは、別の実施形態では、ペプチド結合によって連結されている。別の実施形態では、前記サブユニットは、他の種類の結合（エステル結合、エーテル結合など）によって連結されている。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

本発明の未改変ペプチド（上記及び下記に記載のもの）は、本明細書では「ＷＴ１ペプチド」と総称する。「ＷＴ１ペプチド」に関して以下に列挙する各実施例は、本発明の未改変ＷＴ１ペプチド、ＨＬＡクラスＩヘテロクリティックペプチド、及びクラスＩＩヘテロクリティックペプチドに適用される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明のＷＴ１ペプチドは、ＨＬＡクラスＩ分子またはＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する。別の実施形態では、本発明のＷＴ１ペプチドは、ＨＬＡクラスＩ分子及びＨＬＡクラスＩＩ分子の両方に結合する。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ−ＤＲＢ分子である。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ−ＤＲＡ分子である。別の実施形態では、ＨＬＡ分子は、ＨＬＡ−ＤＱＡ１分子である。別の実施形態では、ＨＬＡ分子は、ＨＬＡ−ＤＱＢ１分子である。別の実施形態では、ＨＬＡ分子は、ＨＬＡ−ＤＰＡ１分子である。別の実施形態では、ＨＬＡ分子は、ＨＬＡ−ＤＰＢ１分子である。別の実施形態では、ＨＬＡ分子は、ＨＬＡ−ＤＭＡ分子である。別の実施形態では、ＨＬＡ分子は、ＨＬＡ−ＤＭＢ分子である。別の実施形態では、ＨＬＡ分子は、ＨＬＡ−ＤＯＡ分子である。別の実施形態では、ＨＬＡ分子は、ＨＬＡ−ＤＯＢ分子である。別の実施形態では、ＨＬＡ分子は、当該技術分野で公知の他の任意のＨＬＡクラスＩＩ分子である。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明のペプチド内にその結合モチーフが含まれるかまたは本発明のペプチドを含むＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ−Ａ分子である。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ−Ｂ分子である。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ−Ｃ分子である。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ−Ａ０２０１分子である。別の実施形態では、分子は、ＨＬＡＡ１である。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡＡ２である。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡＡ２．１である。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡＡ３である。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡＡ３．２である。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡＡ１１である。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡＡ２４である。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡＢ７である。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡＢ２７である。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡＢ８である。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明の方法及び組成物のＨＬＡクラスＩ分子結合性ＷＴ１ペプチドは、ＨＬＡクラスＩ分子のスーパーファミリーに結合する。別の実施形態では、前記スーパーファミリーは、Ａ２スーパーファミリーである。別の実施形態では、前記スーパーファミリーは、Ａ３スーパーファミリーである。別の実施形態では、前記スーパーファミリーは、Ａ２４スーパーファミリーである。別の実施形態では、前記スーパーファミリーは、Ｂ７スーパーファミリーである。別の実施形態では、前記スーパーファミリーは、Ｂ２７スーパーファミリーである。別の実施形態では、前記スーパーファミリーは、Ｂ４４スーパーファミリーである。別の実施形態では、前記スーパーファミリーは、Ｃ１スーパーファミリーである。別の実施形態では、前記スーパーファミリーは、Ｃ４スーパーファミリーである。別の実施形態では前記スーパーファミリーは、当該技術分野で公知の他の任意のスーパーファミリーである。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、ＨＬＡ分子は、Ａ０１０１、Ａ０２０１、Ａ０２０３、Ａ２４０２、Ａ６９０１、Ｂ０７０２、Ａ３１０１、Ｂ３５０１、Ｂ３５０３、Ｂ３５０８、Ｂ３８０２、Ｂ３８０１、Ｂ３９０１、Ｂ４００１、Ｂ４４０２、Ｂ４７０１、Ｂ５７０１、Ｃ０４０１、Ｃ１７０１、ＤＲＢ_１０１０１、ＤＲＢ_１０４０２、ＤＲＢ_１０４０２、ＤＲＢ_１０４０１、またはＤＲＢ_１１１０４分子である。別の実施形態では、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、及び１８３、或いは配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９、１５６、１７３、１７４、及び１８０のペプチドは、表１または表２において各ペプチドについて記載されているＨＬＡクラスＩまたはクラスＩＩ分子に結合する。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ結合性ペプチドは、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１５０、及び１５１からなる群より選択されるアミノ酸配列からなるかまたは該配列を有し、ＨＬＡクラスＩＩ結合性ペプチドは、配列番号ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９のアミノ酸配列からなるかまたは該配列を有し、前記両ペプチドは、表１または表２において各ペプチドについて記載されている１以上のＨＬＡ分子に結合する。一実施形態では、特定のペプチドは、１以上のＨＬＡ対立遺伝子（アレル）に結合することができる。

別の実施形態では、本発明のペプチドの修飾が提供される。一実施形態では、前記修飾は、少なくとも１つのヘテロクリティックアミノ酸変化（変異または突然変異とも呼ばれる）またはアンカー残基の変異を含む（下記参照）。本発明の修飾されたペプチドのＨＬＡクラスＩ分子結合モチーフは、ＨＬＡクラスＩ分子に対する親和力が、非変異対照ペプチドよりも大きい。別の実施形態では、点変異により、変異した単離されたＷＴ１ペプチドのＨＬＡクラスＩ分子に対する親和力が増大する。別の実施形態では、親和力の増大は、変異した単離されたＷＴ１ペプチドが由来する、非変異の単離されたＷＴ１ペプチドの（同一のＨＬＡクラスＩ分子に対する）親和力に対するものである。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明の方法及び組成物のＷＴ１ペプチドは、ＨＬＡ分子に対して親和力を示すように設計されている。別の実施形態では、本明細書に記載したように、前記親和力は高親和力である。

別の実施形態において主要組織適合複合体（major histocompatibility complex：ＭＨＣ）として知られるＨＬＡ分子は、ペプチドと結合してそれらを免疫細胞に提示する。したがって、別の実施形態では、ペプチドの免疫原性は、部分的には、ＨＬＡ分子に対する親和力によって決定される。ＨＬＡクラスＩ分子は、ＣＤ８分子（一般的に、細胞傷害性Ｔリンパ球（cytotoxic T lymphocyte：ＣＴＬ）に存在する）と相互作用する。ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＣＤ４分子（一般的に、ヘルパーＴリンパ球に存在する）と相互作用する。

別の実施形態では、本発明のペプチドは、免疫原性を有する。別の実施形態では、「免疫原性」は、免疫応答を促進若しくは誘起する能力、または免疫応答に関与する能力を意味する。別の実施形態では、誘起される免疫応答は、細胞性免疫応答である。別の実施形態では、前記免疫応答は、細胞性免疫応答及び体液性免疫応答の組み合わせである。

別の実施形態では、Ｔ細胞は、ＭＨＣ分子−ペプチド複合体と結合すると活性化され、増殖し、そのペプチドを含むタンパク質を発現する細胞を溶解するように誘導される。Ｔ細胞は、通常、最初は「プロフェッショナルな」抗原提示細胞（antigen presenting cell：ＡＰＣ、例えば樹枝細胞、単球、及びマクロファージ）によって活性化される。ＡＰＣは、アネルギーまたはアポトーシスとは対照的に、Ｔ細胞の活性化を促進する副刺激分子を提示する。別の実施形態では、前記応答はヘテロクリティックなので、ＣＴＬは、本発明のペプチドと相同的なＡＡ配列を有するタンパク質を発現する腫瘍細胞、またはＴ細胞を最初に刺激するのに使用されたペプチドとは異なるペプチドを溶解する。

別の実施形態では、Ｔ細胞は、本発明のペプチドと接触すると、エフェクター及び／または記憶Ｔ細胞に分化する。その後、エフェクターまたはＴ細胞が同じペプチドと接触すると、或いは別の実施形態において本発明のペプチドに関連するペプチドと接触すると、より速いかつ強力な免疫応答が誘導される。このような応答は、別の実施形態では、ペプチドに曝されたＴ細胞集団の増殖の程度を測定することによって評価することができる。別の実施形態では、前記応答は、以下に列挙する方法のいずれかにより測定することができる。

別の実施形態では、本発明の方法及び組成物のペプチドは、高い親和力でＨＬＡクラスＩＩ分子と結合する。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、本明細書で記載したＨＬＡクラスＩＩ分子のいずれかである。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明の方法及び組成物のペプチドの誘導体は、高親和力でＨＬＡクラスＩ分子と結合する。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子は、本明細書に列挙したＨＬＡクラスＩ分子のいずれかである。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明の方法及び組成物のペプチドは高親和力でＨＬＡクラスＩＩ分子と結合し、元のペプチドに由来する或るペプチドは高親和力でＨＬＡクラスＩ分子と結合する。

別の実施形態では、「親和力」は、ＭＨＣタンパク質への標準ペプチドの結合を５０％阻害するのに必要なペプチドの濃度を意味する。別の実施形態では、「高親和力」は、標準ペプチドの結合を５０％阻害するのに約５００ナノモル（ｎＭ）以下の濃度のペプチドが必要である親和力を意味する。別の実施形態では、約４００ｎＭ以下のペプチドが必要である。別の実施形態では、結合親和力は、３００ｎＭである。別の実施形態では、結合親和力は、２００ｎＭである。別の実施形態では、結合親和力は、１５０ｎＭである。別の実施形態では、結合親和力は、１００ｎＭである。別の実施形態では、結合親和力は、８０ｎＭである。別の実施形態では、結合親和力は、６０ｎＭである。別の実施形態では、結合親和力は、４０ｎＭである。別の実施形態では、結合親和力は、３０ｎＭである。別の実施形態では、結合親和力は、２０ｎＭである。別の実施形態では、結合親和力は、１５ｎＭである。別の実施形態では、結合親和力は、１０ｎＭである。別の実施形態では、結合親和力は、８ｎＭである。別の実施形態では、結合親和力は、６ｎＭである。別の実施形態では、結合親和力は、４ｎＭである。別の実施形態では、結合親和力は、３ｎＭである。別の実施形態では、結合親和力は、２ｎＭである。別の実施形態では、結合親和力は、１．５ｎＭである。別の実施形態では、結合親和力は、１ｎＭである。別の実施形態では、結合親和力は、０．８ｎＭである。別の実施形態では、結合親和力は、０．６ｎＭである。別の実施形態では、結合親和力は、０．５ｎＭである。別の実施形態では、結合親和力は、０．４ｎＭである。別の実施形態では、結合親和力は、０．３ｎＭである。別の実施形態では、結合親和力は、０．３ｎＭ未満である。

別の実施形態では、「親和力」は、ＭＨＣ分子への結合力の測定値を意味する。別の実施形態では、親和力は、競合結合親和力を測定する、当該技術分野で公知の方法によって測定される。別の実施形態では、相対的な結合親和力を測定する、当該技術分野で公知の方法によって、測定される。別の実施形態では、前記方法は、競合結合分析。別の実施形態では、前記方法は、放射免疫分析（Radioimmunoassay：ＲＩＡ）である。別の実施形態では、前記方法は、BiaCore分析である。別の実施形態では、前記方法は、当該技術分野で公知の他の任意の方法である。別の実施形態では、前記方法は、既知の親和力を有する標準タンパク質のＩＣ５０値に対するＩＣ５０値を算出する。

親和力の各種類及び親和力の各測定方法は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、「高親和力」は、０．５〜５００ｎＭのＩＣ５０値を意味する。別の実施形態では、ＩＣ５０値は、１〜３００ｎＭである。別の実施形態では、ＩＣ５０値は、１．５〜２００ｎＭである。別の実施形態では、ＩＣ５０値は、２〜１００ｎＭである。別の実施形態では、ＩＣ５０値は、３〜１００ｎＭである。別の実施形態では、ＩＣ５０値は、４〜１００ｎＭである。別の実施形態では、ＩＣ５０値は、６〜１００ｎＭである。別の実施形態では、ＩＣ５０値は、１０〜１００ｎＭである。別の実施形態では、ＩＣ５０値は、３０〜１００ｎＭである。別の実施形態では、ＩＣ５０値は、３〜８０ｎＭである。別の実施形態では、ＩＣ５０値は、４〜６０ｎＭである。別の実施形態では、ＩＣ５０値は、５〜５０ｎＭである。別の実施形態では、ＩＣ５０値は、６〜５０ｎＭである。別の実施形態では、ＩＣ５０値は、８〜５０ｎＭである。別の実施形態では、ＩＣ５０値は、１０〜５０ｎＭである。別の実施形態では、ＩＣ５０値は、２０〜５０ｎＭである。別の実施形態では、ＩＣ５０値は、６〜４０ｎＭである。別の実施形態では、ＩＣ５０値は、８〜３０ｎＭである。別の実施形態では、ＩＣ５０値は、１０〜２５ｎＭである。別の実施形態では、ＩＣ５０値は、１５〜２５ｎＭである。親和力の各値及び各範囲は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明の方法及び組成物のペプチドは、ＨＬＡ分子のスーパーファミリーに結合する。ＨＬＡ分子のスーパーファミリーは、非常に類似するまたは同一の結合モチーフを有する。別の実施形態では、前記スーパーファミリーは、ＨＬＡクラスＩスーパーファミリーである。別の実施形態では、前記スーパーファミリーは、ＨＬＡクラスＩＩスーパーファミリーである。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

「ＨＬＡ結合ペプチド」、「ＨＬＡクラスＩ分子結合ペプチド」、及び「ＨＬＡクラスＩＩ分子結合ペプチド」という用語は、別の実施形態では、測定可能な親和力でＨＬＡ分子と結合するペプチドを意味する。別の実施形態では、前記用語は、高親和力でＨＬＡ分子と結合するペプチドを意味する。別の実施形態では、前記用語は、Ｔ前駆細胞を活性化するのに十分な親和力でＨＬＡ分子に結合するペプチドを意味する。別の実施形態では、前記用語は、Ｔ細胞により認識されるのに十分な親和力でＨＬＡ分子と結合するペプチドを意味する。ＨＬＡ分子は、別の実施形態では、本明細書で列挙したＨＬＡ分子の任意のものである。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

「ヘテロクリティックペプチド」は、別の実施形態では、それが由来する元のペプチド（例えば、アンカー残基変異を含まないペプチド）を認識する免疫応答を生成するペプチドを意味する。別の実施形態では、「元のペプチド」は、本発明のペプチドを意味する。例えば、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（ＳＥＱＩＤＮｏ：６）は、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（ＳＥＱＩＤＮｏ：５）の１番目の残基をチロシンに変異させることによって作製される（実施例）。別の実施形態では、「ヘテロクリティック」ペプチドは、それが由来する元のペプチドを認識するペプチドを意味し、ヘテロクリティックペプチドのワクチン接種により生成される免疫応答の大きさは、元のペプチドのワクチン接種によって生成される免疫応答よりも大きい。別の実施形態では、「ヘテロクリティック」免疫応答は、改良されたペプチドが由来する元のペプチド（例えば、アンカー残基変異を含まないペプチド）を認識する免疫応答を意味する。別の実施形態では、「ヘテロクリティック」免疫応答は、ヘテロクリティックペプチドのワクチン接種によってヘテロクリティックペプチドが由来する元のペプチドを認識する免疫応答を意味し、ヘテロクリティックペプチドのワクチン接種により生成される免疫応答の大きさは、元のペプチドのワクチン接種によって生成される免疫応答よりも大きい。別の実施形態では、ヘテロクリティックペプチドのワクチン接種によって生成される免疫応答の大きさは、元のペプチドのワクチン接種によって生成される免疫応答と実質的に等しい。別の実施形態では、ヘテロクリティックペプチドのワクチン接種によって生成される免疫応答の大きさは、元のペプチドのワクチン接種によって生成される免疫応答よりも小さい。別の実施形態では、本発明のヘテロクリティックペプチドは、ＨＬＡクラスＩヘテロクリティックペプチドである。ＨＬＡクラスＩ及びクラスＩＩ残基を同定する方法、残基を変異させることによってＨＬＡ結合を改良する方法は、当該技術分野で公知であり、下記に列挙した。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態は、本発明のヘテロクリティックペプチドが誘導する免疫応答の大きさは、該ヘテロクリティックペプチドが由来するＷＴ１ペプチド（「天然ペプチド」）による免疫応答と比較して少なくとも２倍である。別の実施形態では、前記大きさは、天然ペプチドによる免疫応答と比較して３倍である。別の実施形態では、前記大きさは、天然ペプチドによる免疫応答と比較して５倍である。別の実施形態では、前記大きさは、天然ペプチドによる免疫応答と比較して７倍である。別の実施形態では、前記大きさは、天然ペプチドによる免疫応答と比較して１０倍である。別の実施形態では、前記大きさは、天然ペプチドによる免疫応答と比較して１５倍である。別の実施形態では、前記大きさは、天然ペプチドによる免疫応答と比較して２０倍である。別の実施形態では、前記大きさは、天然ペプチドによる免疫応答と比較して３０倍である。別の実施形態では、前記大きさは、天然ペプチドによる免疫応答と比較して５０倍である。別の実施形態では、前記大きさは、天然ペプチドによる免疫応答と比較して１００倍である。別の実施形態では、前記大きさは、天然ペプチドによる免疫応答と比較して１５０倍である。別の実施形態では、前記大きさは、天然ペプチドによる免疫応答と比較して２００倍である。別の実施形態では、前記大きさは、天然ペプチドによる免疫応答と比較して３００倍である。別の実施形態では、前記大きさは、天然ペプチドによる免疫応答と比較して５００倍である。別の実施形態では、前記大きさは、天然ペプチドによる免疫応答と比較して１０００倍である。別の実施形態では、前記大きさは、天然ペプチドによる免疫応答と比較して１０００倍以上である。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明は、本発明の単離されたＷＴ１ペプチドに由来するＨＬＡクラスＩＩヘテロクリティックペプチドを提供する。別の実施形態では、ＷＴ１ペプチドに由来するヘテロクリティックペプチドを作製する方法は、ＨＬＡクラスＩＩ分子に対するペプチドの結合力を高める変異を導入するステップを含む。別の実施形態では、ＷＴ１ペプチドに由来するヘテロクリティックペプチドを作製する方法は、ＨＬＡクラスＩ分子に対するペプチドの結合力を高める変異を導入するステップを含む。別の実施形態では、前記変異は、ＨＬＡクラスＩＩアンカー残基に存在する。別の実施形態では、本発明のヘテロクリティック・クラスＩＩペプチドは、本明細書で例示されているように、ＨＬＡクラスＩヘテロクリティックペプチドの同定及び検査に使用される方法と同じ方法で同定及び検査される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明のペプチドにおけるＨＬＡクラスＩＩ分子結合部位は、ＨＬＡクラスＩＩモチーフアンカー残基の変異により形成されるかまたは向上させられる。別の実施形態では、改変されるアンカー残基は、Ｐ１部位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、Ｐ２部位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、Ｐ６部位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、Ｐ９部位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ６、及びＰ９部位から選択される。別の実施形態では、前記アンカー残基は、Ｐ３部位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、Ｐ４部位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、Ｐ５部位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、Ｐ６部位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、Ｐ８部位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、Ｐ１０部位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、Ｐ１１部位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、Ｐ１２部位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、Ｐ１３部位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、ＨＬＡクラスＩＩ分子結合ペプチドにおける公知の他の任意のアンカー残基である。別の実施形態では、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ６、及びＰ９以外の残基は、第２のアンカー残基として機能する。したがって、それらを変異させると、ＨＬＡクラスＩＩ分子結合を向上させることができる。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、ヘテロクリティックペプチドは、アンカーモチーフを形成する変異を導入することによって作製される。「アンカーモチーフ」または「アンカー残基」は、別の実施形態では、ＨＬＡ結合配列における特定部位の好ましい１つの残基または残基のセットを意味する。

別の実施形態では、ＨＬＡ結合配列は、ＨＬＡクラスＩＩ結合配列である。別の実施形態では、ＨＬＡ結合配列は、ＨＬＡクラスＩ結合配列である。別の実施形態では、アンカーモチーフに相当する部位は、ＨＬＡ分子に結合するときに重要な役割を果たす部位である。別の実施形態では、アンカー残基は、第１のアンカーモチーフである。別の実施形態では、アンカー残基は、第２のアンカーモチーフである。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

ＭＨＣクラスＩＩのエピトープを予測する方法は、当該技術分野で公知である。別の実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩエピトープは、ＴＥＰＩＴＯＰＥ（(Meister GE, Roberts CG et al., Vaccine 1995 13: 581-91）を用いて予測される。別の実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩエピトープは、ＥｐｉＭａｔｒｉｘ（De Groot AS, Jesdale BM et al., AIDS Res Hum Retroviruses 1997 13: 529-3 1）を用いて予測される。別の実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩエピトープは、予測手法（Predict Method）（Yu K, Petrovsky Net al., Mol Med. 2002 8: 137- 48）を用いて予測される。別の実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩエピトープは、ＳＹＦＰＥＩＴＨＩエピトープ予測アルゴリズム（実施例）を用いて予測される。別の実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩエピトープは、Ｒａｎｋｐｅｐを用いて予測される。別の実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩエピトープは、当該技術分野で公知の他の任意の方法を用いて予測される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ結合ペプチド（例えば、ＨＬＡ−ＤＲ結合ペプチド）の場合は、改変されるアンカー残基は、Ｐ１位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、Ｐ２位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、Ｐ６位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、Ｐ９位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、Ｐ３位、Ｐ４位、Ｐ５位、Ｐ６位、Ｐ８位、Ｐ１０位、Ｐ１１位、Ｐ１２位、またはＰ１３位に存在する。別の実施形態では、アンカー残基は、ＨＬＡクラスＩＩ分子結合ペプチドの、当該技術分野で公知の他のアンカー残基である。別の実施形態では、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ６、及びＰ９以外の残基は、第２のアンカー残基として機能する。したがって、それらを変異させると、ＨＬＡクラスＩＩ分子との結合を向上させることができる。別の実施形態では、上記の残基の任意の組み合わせを変異させる。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明のＷＴ１ペプチドは、２つの別個のＨＬＡクラスＩＩ分子と結合する。別の実施形態では、前記ペプチドは、３つの別個のＨＬＡクラスＩＩ分子と結合する。別の実施形態では、前記ペプチドは、４つの別個のＨＬＡクラスＩＩ分子と結合する。別の実施形態では、前記ペプチドは、５つの別個のＨＬＡクラスＩＩ分子と結合する。別の実施形態では、前記ペプチドは、６つの別個のＨＬＡクラスＩＩ分子と結合する。別の実施形態では、前記ペプチドは、６つ以上の別個のＨＬＡクラスＩＩ分子と結合する。

別の実施形態では、本発明のＷＴ１ペプチドが結合するＨＬＡクラスＩＩ分子は、所定の１つのＨＬＡクラスＩＩ遺伝子座に存在する２つ以上の別個の対立遺伝子によってコードされる。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、１つの遺伝子座に存在する３つの別個の対立遺伝子によってコードされる。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、１つの遺伝子座に存在する４つの別個の対立遺伝子によってコードされる。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、１つの遺伝子座に存在する５つの別個の対立遺伝子によってコードされる。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、１つの遺伝子座に存在する６つの別個の対立遺伝子によってコードされる。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、１つの遺伝子座に存在する６つ以上の別個の対立遺伝子によってコードされる。

別の実施形態では、ＷＴ１ペプチドが結合するＨＬＡクラスＩＩ分子は、２つの別個の遺伝子座に存在するＨＬＡクラスＩＩ遺伝子によってコードされる。別の実施形態では、ＷＴ１ペプチドが結合するＨＬＡクラスＩＩ分子は、２つ以上の別個の遺伝子座に存在するＨＬＡクラスＩＩ遺伝子によってコードされる。別の実施形態では、ＷＴ１ペプチドが結合するＨＬＡクラスＩＩ分子は、３つの別個の遺伝子座に存在するＨＬＡクラスＩＩ遺伝子によってコードされる。別の実施形態では、ＷＴ１ペプチドが結合するＨＬＡクラスＩＩ分子は、３つ以上の別個の遺伝子座に存在するＨＬＡクラスＩＩ遺伝子によってコードされる。別の実施形態では、ＷＴ１ペプチドが結合するＨＬＡクラスＩＩ分子は、４つの別個の遺伝子座に存在するＨＬＡクラスＩＩ遺伝子によってコードされる。別の実施形態では、ＷＴ１ペプチドが結合するＨＬＡクラスＩＩ分子は、４つ以上の別個の遺伝子座に存在するＨＬＡクラスＩＩ遺伝子によってコードされる。別の実施形態では、前記遺伝子座は、ＨＬＡ−ＤＲＢの遺伝子座から選択される。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ結合ペプチドは、ＨＬＡ−ＤＲＡ結合ペプチドである。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ結合ペプチドは、ＨＬＡ−ＤＱＡ１結合ペプチドである。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ結合ペプチドは、ＨＬＡ−ＤＱＢ１結合ペプチドである。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ結合ペプチドは、ＨＬＡ−ＤＰＡ１結合ペプチドである。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ結合ペプチドは、ＨＬＡ−ＤＰＢ１結合ペプチドである。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ結合ペプチドは、ＨＬＡ−ＤＭＡ結合ペプチドである。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ結合ペプチドは、ＨＬＡ−ＤＭＢ結合ペプチドである。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ結合ペプチドは、ＨＬＡ−ＤＯＡ結合ペプチドである。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ結合ペプチドは、ＨＬＡ−ＤＯＢ結合ペプチドである。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ結合ペプチドは、当該技術分野で公知の他の任意のＨＬＡクラスＩＩ分子と結合する。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明のＷＴ１ペプチドは、２つの別個のＨＬＡ−ＤＲＢ分子に結合する。別の実施形態では、前記ペプチドは、３つの別個のＨＬＡ−ＤＲＢ分子に結合する。別の実施形態では、前記ペプチドは、４つの別個のＨＬＡ−ＤＲＢ分子に結合する。別の実施形態では、前記ペプチドは、５つの別個のＨＬＡ−ＤＲＢ分子に結合する。別の実施形態では、前記ペプチドは、６つの別個のＨＬＡ−ＤＲＢ分子に結合する。別の実施形態では、前記ペプチドは、６つ以上の別個のＨＬＡ−ＤＲＢ分子に結合する。

別の実施形態では、本発明のＷＴ１ペプチドは、２つの別個のＨＬＡ−ＤＲＢ対立遺伝子によってコードされるＨＬＡ−ＤＲＢ分子に結合する。別の実施形態では、ＨＬＡ−ＤＲＢ分子は、３つの別個のＨＬＡ−ＤＲＢ対立遺伝子によってコードされる。別の実施形態では、ＨＬＡ−ＤＲＢ分子は、４つの別個のＨＬＡ−ＤＲＢ対立遺伝子によってコードされる。別の実施形態では、ＨＬＡ−ＤＲＢ分子は、５つの別個のＨＬＡ−ＤＲＢ対立遺伝子によってコードされる。別の実施形態では、ＨＬＡ−ＤＲＢ分子は、６つの別個のＨＬＡ−ＤＲＢ対立遺伝子によってコードされる。別の実施形態では、ＨＬＡ−ＤＲＢ分子は、６つ以上の別個のＨＬＡ−ＤＲＢ対立遺伝子によってコードされる。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明のＷＴ１ペプチドは、ＤＲＢ１０１、ＤＲＢ３０１、ＤＲＢ４０１，ＤＲＢ７０１，ＤＲＢ１１０１、及びＤＲＢ１５０１から選択される２つの別個のＨＬＡ−ＤＲＢ対立遺伝子によってコードされるＨＬＡ−ＤＲＢ分子に結合する。別の実施形態では、ＷＴ１ペプチドは、ＤＲＢ１０１、ＤＲＢ３０１、ＤＲＢ４０１，ＤＲＢ７０１，ＤＲＢ１１０１、及びＤＲＢ１５０１から選択される３つの別個のＨＬＡ−ＤＲＢ対立遺伝子によってコードされるＨＬＡ−ＤＲＢ分子に結合する。別の実施形態では、ＷＴ１ペプチドは、ＤＲＢ１０１、ＤＲＢ３０１、ＤＲＢ４０１，ＤＲＢ７０１，ＤＲＢ１１０１、及びＤＲＢ１５０１から選択される４つの別個のＨＬＡ−ＤＲＢ対立遺伝子によってコードされるＨＬＡ−ＤＲＢ分子に結合する。別の実施形態では、ＷＴ１ペプチドは、ＤＲＢ１０１、ＤＲＢ３０１、ＤＲＢ４０１，ＤＲＢ７０１，ＤＲＢ１１０１、及びＤＲＢ１５０１から選択される５つの別個のＨＬＡ−ＤＲＢ対立遺伝子によってコードされるＨＬＡ−ＤＲＢ分子に結合する。別の実施形態では、ＷＴ１ペプチドは、ＤＲＢ１０１、ＤＲＢ３０１、ＤＲＢ４０１，ＤＲＢ７０１，ＤＲＢ１１０１、及びＤＲＢ１５０１の各ＨＬＡ−ＤＲＢ対立遺伝子によってコードされるＨＬＡ−ＤＲＢ分子に結合する。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明は、本発明の２つの別個のＷＴ１ペプチドを含む組成物を提供する。別の実施形態では、本発明の２つの別個のＷＴ１ペプチドは、両方とも改変されていない。別の実施形態では、一方のＷＴ１ペプチドは改変されておらず、他方のＷＴ１ペプチドはヘテロクリティックである。別の実施形態では、両方のＷＴ１ペプチドは、ヘテロクリティックである。

別の実施形態では、前記組成物は、本発明の３つの別個のＷＴ１ペプチドを含む。別の実施形態では、前記組成物は、本発明の４つの別個のＷＴ１ペプチドを含む。別の実施形態では、前記組成物は、本発明の５つの別個のＷＴ１ペプチドを含む。別の実施形態では、前記組成物は、本発明の５つ以上の別個のＷＴ１ペプチドを含む。

別の実施形態では、前記組成物における２つのＷＴ１ペプチドは、改変されていない。別の実施形態では、前記組成物における２つのＷＴ１ペプチドは、ヘテロクリティックである。別の実施形態では、前記組成物における２つのＷＴ１ペプチドは、改変されておらず、他の２つのＷＴ１ペプチドは、ヘテロクリティックである。別の実施形態では、前記組成物における２つ以上のＷＴ１ペプチドは、改変されていない。別の実施形態では、前記組成物における２つ以上のＷＴ１ペプチドは、ヘテロクリティックである。別の実施形態では、前記組成物における２つ以上のＷＴ１ペプチドは、改変されておらず、他の２つ以上のＷＴ１ペプチドは、ヘテロクリティックである。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明の組成物における別のＷＴ１ペプチドの１つは、配列番号ＳＥＱＩＤＮｏ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、または１９３に記載の配列セットから選択された配列を有する。別の実施形態では、前記別のＷＴ１ペプチドの２つは、配列番号ＳＥＱＩＤＮｏ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、または１９３に記載の配列セットから選択された配列を有する。別の実施形態では、前記別のＷＴ１ペプチドの３つは、配列番号ＳＥＱＩＤＮｏ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、または１９３に記載の配列セットから選択された配列を有する。

別の実施形態では、当該技術分野で公知の他の任意の免疫原性ＷＴ１ペプチドが、別のＷＴ１ペプチドとして使用される。別の実施形態では、当該技術分野で公知の免疫原性ＷＴ１ペプチドの任意の組み合わせが使用される。他のＷＴペプチドの非限定的なソースには、ＷＯ２００５０５３６１８、ＷＯ２００７０４７７６４、及びＷＯ２００７１２０６７３が含まれる。

別のＷＴ１ペプチドの各々及びそれらの組み合わせの各々は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明の組成物は、本発明の単離された同じＷＴ１ペプチドに由来する２つのＨＬＡクラスＩＩヘテロクリティックペプチドを含む。別の実施形態では、２つのＨＬＡクラスＩＩヘテロクリティックペプチドは、ＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する別個のアンカー残基に変異を有する。別の実施形態では、２つのＨＬＡクラスＩＩヘテロクリティックペプチドは、ＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する同一のアンカー残基に互いに異なる変異を有する。別の実施形態では、２つのＨＬＡクラスＩＩヘテロクリティックペプチドは、本発明の単離された別個のＷＴ１ペプチドに由来する。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明の２つのＷＴ１ペプチド、または本発明の２つのＨＬＡクラスＩＩヘテロクリティックペプチドに相当するＷＴ１ペプチドは、互いに重複する。別の実施形態では、前記ペプチドの重複部分は、少なくとも７アミノ酸（ＡＡ）である。別の実施形態では、前記重複部分は、８ＡＡである。別の実施形態では、前記重複部分は、９ＡＡである。別の実施形態では、前記重複部分は、１０ＡＡである。別の実施形態では、前記重複部分は、１１ＡＡである。別の実施形態では、前記重複部分は、１２ＡＡである。別の実施形態では、前記重複部分は、１３ＡＡである。別の実施形態では、前記重複部分は、１４ＡＡである。別の実施形態では、前記重複部分は、１５ＡＡである。別の実施形態では、前記重複部分は、１６ＡＡである。別の実施形態では、前記重複部分は、１６以上のＡＡである。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明の組成物におけるペプチドは、２つの別個のＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する。別の実施形態では、前記ペプチドは、３つの別個のＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する。別の実施形態では、前記ペプチドは、４つの別個のＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する。別の実施形態では、前記ペプチドは、５つの別個のＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する。別の実施形態では、前記ペプチドは、５つ以上の別個のＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する。別の実施形態では、本発明の組成物におけるペプチドは、同一のＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する。

別の実施形態では、本発明の組成物における各ＷＴ１ペプチドは、ＨＬＡクラスＩＩ分子セットに結合する。別の実施形態は、各ＷＴ１ペプチドは、別個のＨＬＡクラスＩＩ分子セットに結合する。別の実施形態は、本発明の組成物におけるＷＴ１ペプチドは、同一のＨＬＡクラスＩＩ分子セットに結合する。別の実施形態では、２つのＷＴ１ペプチドが、重複する別個のＨＬＡクラスＩＩ分子セットに結合する。別の実施形態では、２つ以上のＷＴ１ペプチドが同一のＨＬＡクラスＩＩ分子セットに結合し、別のＷＴ１ペプチドが別個のＨＬＡクラスＩＩ分子セットに結合する。別の実施形態では、２つ以上のＷＴ１ペプチドが重複するＨＬＡクラスＩＩ分子セットに結合し、別のＷＴ１ペプチドが別個のＨＬＡクラスＩＩ分子セットに結合する。

別の実施形態では、本発明の組成物における２つ以上のＷＴ１ペプチドのそれぞれが、１つ以上のＨＬＡ−ＤＲＢ分子に結合する。別の実施形態では、本発明の組成物におけるペプチドが結合する４つ以上のＨＬＡ−ＤＲＢは、互いに異なる。別の実施形態では、前記ＨＬＡ−ＤＲＢ分子は、別個のＨＬＡ−ＤＲＢ対立遺伝子によってコードされている。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明の組成物におけるＷＴ１ペプチドが結合する２つ以上のＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ−ＤＲＢ分子である。別の実施形態では、ＷＴ１ペプチドが結合する３つ以上のＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ−ＤＲＢ分子である。別の実施形態では、ＷＴ１ペプチドが結合するＨＬＡクラスＩＩ分子は、本明細書に記載の任意のＨＬＡクラスＩＩ分子であり得る。別の実施形態では、ＷＴ１ペプチドが結合するＨＬＡクラスＩＩ分子は、所定の１つの遺伝子座に存在する２つ以上の別個のＨＬＡクラスＩＩ対立遺伝子にコードされている。別の実施形態では、ＷＴ１ペプチドが結合するＨＬＡクラスＩＩ分子は、２つ以上の別個の遺伝子座に存在するＨＬＡクラスＩＩ遺伝子にコードされている。

上記の各組成物は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、「ＨＬＡクラスＩＩ分子セット」は、特定の遺伝子座に存在する別個の対立遺伝子によってコードされた複数のＨＬＡクラスＩＩ分子を意味する。別の実施形態では、この用語は、特定の結合特異性を有する複数のＨＬＡクラスＩＩ分子を意味する。別の実施形態では、この用語は、特定のペプチド共通配列を有する複数のＨＬＡクラスＩＩ分子を意味する。別の実施形態では、この用語は、複数のＨＬＡクラスＩＩ分子のスーパーファミリーを意味する。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明は、ＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する本発明の未改変のＷＴ１ペプチドと、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する第２のＷＴ１ペプチドとを含む組成物を提供する。別の実施形態では、前記組成物は、ＨＬＡクラスＩ分子に結合するＷＴ１ペプチドに加えて、ＨＬＡクラスＩＩ分子に結合する１つ以上の本発明のＷＴ１ペプチドを含む。別の実施形態では、前記組成物は、ＨＬＡクラスＩＩ分子に結合するＷＴ１ペプチドに加えて、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する１つ以上のＷＴ１ペプチドを含む。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子に結合するＷＴ１ペプチドのＡＡ配列は、配列番号ＳＥＱＩＤＮｏ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、または１９３から選択された配列を含む。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子に結合するＷＴ１ペプチドのＡＡ配列は、対立遺伝子にコードされたＳＥＱＩＤＮｏ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、または１９３から選択されたものである。各可能な実施形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子結合性ＷＴ１ペプチドは、ＨＬＡクラス１ヘテロクリティックペプチドである。別の実施形態では、本明細書中でさらに説明するように、ＨＬＡクラスＩ分子結合性ＷＴ１ペプチドは、それのＨＬＡクラスＩ分子に結合するアンカー残基に変異を有する。本明細書に記載するように、ＨＬＡ−Ａ０２０１及びＨＬＡ−Ａ０３０１との結合が増大すると予測されるヘテロクリティックペプチドを作製するために、ＷＴ１由来ペプチドのＨＬＡアンカー残基を改変した。結合が増大すると予測されるペプチドはまた、ＨＬＡクラスＩ分子との結合の強化、及び免疫原性の増大を示した。

別の実施形態では、ＭＨＣとの結合を高める変異は、ＨＬＡクラス１ヘテロクリティックペプチドの１位に存在する残基に導入される。別の実施形態では、前記残基は、チロシンに変換される。別の実施形態では、前記残基は、グリシンに変換される。別の実施形態では、前記残基は、スレオニンに変換される。別の実施形態では、前記残基は、フェニルアラニンに変換される。別の実施形態では、前記残基は、当該技術分野で公知の他の任意の残基に変換される。別の実施形態では、１位の残基を（例えば、チロシンに）置換することにより、２位に存在するアンカー残基の結合が安定化される。

別の実施形態では、変異は、ＨＬＡクラスＩヘテロクリティックペプチドの２位の残基に導入される。別の実施形態では、前記残基は、ロイシンに変換される。別の実施形態では、前記残基は、バリンに変換される。別の実施形態では、前記残基は、イソロイシンに変換される。別の実施形態では、前記残基は、メチオニンに変換される。別の実施形態では、前記残基は、当該技術分野で公知の他の任意の残基に変換される。

別の実施形態では、変異は、ＨＬＡクラスＩヘテロクリティックペプチドの６位の残基に導入される。別の実施形態では、前記残基は、バリンに変換される。別の実施形態では、前記残基は、システインに変換される。別の実施形態では、前記残基は、グルタミンに変換される。別の実施形態では、前記残基は、ヒスチジンに変換される。別の実施形態では、前記残基は、当該技術分野で公知の他の任意の残基に変換される。

別の実施形態では、変異は、ＨＬＡクラスＩヘテロクリティックペプチドの９位の残基に導入される。別の実施形態では、前記変異により、前記ペプチドのＣ末端の残基が変換される。別の実施形態では、前記残基は、バリンに変換される。別の実施形態では、前記残基は、スレオニンに変換される。別の実施形態では、前記残基は、イソロイシンに変換される。別の実施形態では、前記残基は、ロイシンに変換される。別の実施形態では、前記残基は、アラニンに変換される。別の実施形態では、前記残基は、システインに変換される。別の実施形態では、当該技術分野で公知の他の任意の残基に変換される。

別の実施形態では、点変異は、第１のアンカー残基に導入される。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する第１のアンカー残基は、２位及び９位に存在する。別の実施形態では、点変異は、第２のアンカー残基に存在する。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する第２のアンカー残基は、１位及び８位に存在する。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する第２のアンカー残基は、１位、３位、６位、７位、及び８位に存在する。別の実施形態では、点変異は、４位、５位、及び８位から選択された位置に導入される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、点変異は、ＨＬＡクラスＩ結合モチーフの１位、２位、８位、及び９位から選択された位置に存在する１つ以上の残基に導入される。別の実施形態では、点変異は、１位、３位、６位、及び９位から選択された位置に存在する１つ以上の残基に導入される。別の実施形態では、点変異は、１位、２位、６位、及び９位から選択された位置に存在する１つ以上の残基に導入される。別の実施形態では、点変異は、１位、６位、及び９位から選択された位置に存在する１つ以上の残基に導入される。別の実施形態では、点変異は、１位、２位、及び９位から選択された位置に存在する１つ以上の残基に導入される。別の実施形態では、点変異は、１位、３位、及び９位から選択された位置に存在する１つ以上の残基に導入される。別の実施形態では、点変異は、２位及び９位から選択された位置に存在する１つ以上の残基に導入される。別の実施形態では、点変異は、６位及び９位から選択された位置に存在する１つ以上の残基に導入される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

上記のアンカー残基及び置換の各々は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子に結合するＷＴ１ペプチドの長さは、９ＡＡである。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子に結合するＷＴ１ペプチドの長さは、１０ＡＡである。本明細書に記載したように、９〜１０ＡＡの天然ペプチド及びヘテロクリティックペプチドは、ＨＬＡクラスＩ分子と実質的に結合し、サイトカイン分泌及びＣＴＬによる細胞溶解を誘起する。

別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子結合性ＷＴ１ペプチドが結合するＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ−Ａ分子である。別の実施形態では、前記ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ−Ａ２分子である。別の実施形態では、前記ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ−Ａ３分子である。別の実施形態では、前記ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ−Ａ１１分子である。別の実施形態では、前記ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ−Ｂ８分子である。別の実施形態では、前記ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ−０２０１分子である。別の実施形態では、前記ＨＬＡクラスＩ分子は、当該技術分野で公知の他の任意のＨＬＡクラスＩ分子である。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明の方法及び組成物のＷＴ１ペプチドの長さは、８〜３０ＡＡである。別の実施形態では、前記ペプチドの長さは、９〜１１ＡＡである。別の実施形態では、前記ペプチドの長さは、７〜２５ＡＡである、または別の実施形態では８〜１１ＡＡである、または別の実施形態では８〜１５ＡＡである、または別の実施形態では９〜２０ＡＡである、または別の実施形態では９〜１８ＡＡである、または別の実施形態では９〜１５ＡＡである、または別の実施形態では８〜１２ＡＡである、または別の実施形態では９〜１１である。別の実施形態では、前記ペプチドの長さは、８ＡＡである、または別の実施形態では９ＡＡである、または別の実施形態では１０ＡＡである、または別の実施形態では１２ＡＡである、または別の実施形態では２５ＡＡである、または別の実施形態ではそれらの間の任意の長さである。別の実施形態では、前記ペプチドの長さは、さらに長く、例えば５０ＡＡまたは１００ＡＡ以上である。この実施形態では、細胞により、ペプチドを長さが７〜２５ＡＡになるように処理する。この実施形態では、細胞により、ペプチドを長さが９〜１１ＡＡになるように処理する。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、前記ペプチドの長さは、１５〜２３ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、１５〜２４ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、１５〜２５ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、１５〜２６ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、１５〜２７ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、１５〜２８ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、１４〜３０ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、１４〜２９ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、１４〜２８ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、１４〜２６ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、１４〜２４ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、１４〜２２ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、１４〜２０ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、１６〜３０ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、１６〜２８ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、１６〜２６ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、１６〜２４ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、１６〜２２ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、１８〜３０ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、１８〜２８ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、１８〜２６ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、１８〜２４ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、１８〜２２ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、１８〜２０ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、２０〜３０ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、２０〜２８ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、２０〜２６ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、２０〜２４ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、２２〜３０ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、２２〜２８ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、２２〜２６ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、２４〜３０ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、２４〜２８ＡＡである。別の実施形態では、前記長さは、２４〜２６ＡＡである。

上記のペプチド、ペプチドの長さ、及びペプチドの種類の各々は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明のペプチドには、ＨＬＡ分子に対する親和力及びＴＣＲ特異性を変化させることなく、当該技術分野で公知の方法で少しの改変がなされる。ＨＬＡクラスＩ結合ペプチドの場合、「少しの改変」は、別の実施形態では、例えば、１つのＡＡの挿入、削除、若しくは置換、または２位〜９位の残基間以外での１つ〜３つのＡＡの挿入、削除若しくは追加を意味する。本明細書に記載のコンピュータアルゴリズムがペプチドのＭＨＣクラスＩ分子への結合能力の予測に有用であるが、前記アルゴリズムの予測精度は６０〜８０％である。そのため、ＭＨＣクラスＩ分子結合親和力を最終的に求める前に、ペプチドを実験的に評価する必要がある。したがって、本発明のペプチドは、前記アルゴリズムによってＭＨＣクラスＩ分子に対する結合親和力が強いと予測されるペプチドに限定されない。各改変は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、実施例に列挙した本発明のペプチドは、アンカー残基を、ＭＨＣクラス１に好適なアンカー残基（別の実施形態では、本明細書に列記した任意のアンカー残基）に変異させることによって、さらに改変される。別の実施形態では、ＭＨＣクラス１に好適なアンカー残基を有する本発明のペプチドは、前記アンカー残基を、その位置において、別のＭＨＣクラス１に好適なアンカー残基に変異させることによって、さらに改変される。前記別の好ましい残基は、別の実施形態では、本明細書に列記した任意の好適な残基であり得る。

別の実施形態では、さらに改変されるアンカー残基は、１位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、２位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、３位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、４位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、５位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、６位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、７位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、８位に存在する。別の実施形態では、前記アンカー残基は、９位に存在する。ＨＬＡクラスＩ結合ペプチドの場合、２及び９位以外の残基が第２のアンカー残基として機能することができるので、それらを変異させることにより、ＭＨＣクラスＩ分子への結合を向上させることができる。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明の方法及び組成物のペプチドは、実施例に列記したペプチドに対して、長さが異なる変異体である。別の実施形態では、前記長さが異なる変異体は、実施例に記載のペプチドよりも１アミノ酸（ＡＡ）短い。別の実施形態では、前記長さが異なる変異体は、実施例に記載のペプチドよりも２ＡＡ短い。別の実施形態では、実施例に列記したペプチドよりも２ＡＡ以上短い。別の実施形態では、前記短いペプチドは、Ｎ末端で短縮されている。別の実施形態では、前記短いペプチドは、Ｃ末端で短縮されている。別の実施形態では、前記短縮ペプチドは、Ｎ末端及びＣ末端の両方で短縮されている。別の実施形態では、当該技術分野で公知のように、ＨＬＡ分子に対する親和力を変えることなく、ペプチドを短縮することができる。

上記の各短縮ペプチドは、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、前記長さが異なる変異体は、実施例に列記した本発明のペプチドよりも長い。別の実施形態では、前記長いペプチドは、Ｎ末端で延長されている。別の実施形態では、当該技術分野で公知のように、ＨＬＡ分子に対する親和力を変えることなく、ペプチドを延長することができる。このようなペプチドは、したがって、実施例に列記したペプチドの均等物である。別の実施形態では、Ｎ末端で延長したペプチドは、１残基分延長されている。別の実施形態では、Ｎ末端で延長したペプチドは、２残基分延長されている。別の実施形態では、Ｎ末端で延長したペプチドは、３残基分延長されている。別の実施形態では、Ｎ末端で延長したペプチドは、３残基分以上延長されている。

別の実施形態では、前記のより長いペプチドは、Ｃ末端で延長されている。別の実施形態では、当該技術分野で公知のように、ＨＬＡ分子に対する親和力を変えることなく、ペプチドをこのように延長することができる。このようなペプチドは、したがって、実施例に列記したペプチドの均等物である。別の実施形態では、Ｃ末端で延長したペプチドは、１残基分延長されている。別の実施形態では、Ｃ末端で延長したペプチドは、２残基分延長されている。別の実施形態では、Ｃ末端で延長したペプチドは、３残基分延長されている。別の実施形態では、Ｃ末端で延長したペプチドは、３残基分以上延長されている。

別の実施形態では、延長されたペプチドは、周囲のＷＴ１配列にしたがって、Ｎ末端及びＣ末端の両方で延長されている。

上記の延長されたペプチドの各々は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明の短縮ペプチドは、第２の残基及びＣ末端残基において、ＨＬＡアンカー残基（例えば、ＨＬＡクラスＩアンカー残基）を保持し、本発明の実施例に列挙したペプチドよりも介在残基の数が小さい（例えば、５）。別の実施形態では、ＨＬＡ分子に対する親和力を変えることなく、ペプチドにこのような変異を導入することができる。

別の実施形態では、このような短縮ペプチドは、上記の或る配列の介在残基を削除することによって設計される。別の実施形態では、ＨＬＡアンカー残基は、第２及び第８の残基に保持されている。別の実施形態では、ＨＬＡアンカー残基は、第１及び第８の残基に保持されている。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明の延長されたペプチドは、第２の残基及びＣ末端残基において、ＨＬＡアンカー残基（例えば、ＨＬＡクラスＩアンカー残基）を保持し、本発明の実施例に列挙したペプチドよりも介在残基の数が大きい（例えば、７または８）。別の実施形態では、このような延長ペプチドは、上記の或る配列の２つの介在残基間に１以上の残基を追加することによって設計される。ＨＬＡに対する親和力を変えることなく、ＨＬＡ結合ペプチドの介在配列から残基を除去したり、前記介在配列間に残基を追加したりできることは、当該技術分野で公知である。このようなペプチドは、したがって、実施例に列記したペプチドの均等物である。別の実施形態では、ＨＬＡアンカー残基は、第２及び第９の残基に保持される。別の実施形態では、ＨＬＡアンカー残基は、第１及び第８の残基に保持される。別の実施形態では、ＨＬＡアンカー残基は、６つの介在残基によって互いに分離された２つの残基に保持される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

「断片」は、別の実施形態では、１１ＡＡ以上の長さを有するペプチドを意味する。別の実施形態では、本発明のペプチド断片は、１２ＡＡ以上の長さを有する。別の実施形態では、本発明のペプチド断片は、１３ＡＡ以上の長さを有する。別の実施形態では、本発明のペプチド断片は、１４ＡＡ以上の長さを有する。別の実施形態では、本発明のペプチド断片は、１５ＡＡ以上の長さを有する。別の実施形態では、本発明のペプチド断片は、１７ＡＡ以上の長さを有する。別の実施形態では、本発明のペプチド断片は、１８ＡＡ以上の長さを有する。別の実施形態では、本発明のペプチド断片は、１９ＡＡ以上の長さを有する。別の実施形態では、本発明のペプチド断片は、２２ＡＡ以上の長さを有する。別の実施形態では、本発明のペプチド断片は、８〜１２ＡＡの長さを有する。別の実施形態では、本発明のペプチド断片は、約８〜１２ＡＡの長さを有する。別の実施形態では、本発明のペプチド断片は、１６〜１９ＡＡの長さを有する。別の実施形態では、本発明のペプチド断片は、約１６〜１９ＡＡの長さを有する。別の実施形態では、本発明のペプチド断片は、１０〜２５ＡＡの長さを有する。別の実施形態では、本発明のペプチド断片は、約１０〜２５ＡＡの長さを有する。別の実施形態では、本発明のペプチド断片は、他の任意の長さを有する。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

「ＷＴ１タンパク質の断片」は、別の実施形態では、本明細書に記載された「断片」の定義のいずれかを意味する。各可能な定義は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明のペプチドは、実施例に列挙したペプチドに対して相同である。「相同性」、「相同」などの用語は、任意のタンパク質またはペプチドを言及する場合において、候補配列のアミノ酸残基が、対応する天然型ペプチドのアミノ酸残基配列と一致する割合（パーセント）を意味する（必要に応じて、相同の最大パーセントを実現するために、配列のアライメントを行い、ギャップを導入した後の。なお、保存的置換は、配列同一性の一部とは考えない）。アライメントのための方法及びプログラムは、当該技術分野で公知である。

別の実施形態では、「相同性」という用語は、任意の核酸配列を言及する場合は、同様に、候補配列のヌクレオチドが、対応する天然型核酸配列のヌクレオチドと一致する割合（パーセント）を意味する。

相同性は、別の実施形態では、配列アライメントのためのコンピュータアルゴリズムや当該技術分野で公知の方法によって評価することができる。別の実施形態では、核酸配列の相同性に関するコンピュータアルゴリズム分析には、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＤＯＭＡＩＮ、ＢＥＡＵＴＹ（BLAST Enhanced Alignment Utility）、ＧＥＮＰＥＰＴ、及びＴＲＥＭＬパッケージが用いられる。

別の実施形態では、「相同性」は、配列番号ＳＥＱＩＤＮｏ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、または１９３から選択された１つの配列に対して７０％を超える同一性を有することを意味する。別の実施形態では、「相同性」は、配列番号ＳＥＱＩＤＮｏ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、または１９３から選択された１つの配列に対して７２％を超える同一性を有することを意味する。別の実施形態では、「相同性」は、配列番号ＳＥＱＩＤＮｏ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、または１９３から選択された１つの配列に対して７５％を超える同一性を有することを意味する。別の実施形態では、「相同性」は、配列番号ＳＥＱＩＤＮｏ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、または１９３から選択された１つの配列に対して７８％を超える同一性を有することを意味する。別の実施形態では、「相同性」は、配列番号ＳＥＱＩＤＮｏ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、または１９３から選択された１つの配列に対して８０％を超える同一性を有することを意味する。別の実施形態では、「相同性」は、配列番号ＳＥＱＩＤＮｏ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、または１９３から選択された１つの配列に対して８２％を超える同一性を有することを意味する。別の実施形態では、「相同性」は、配列番号ＳＥＱＩＤＮｏ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、または１９３から選択された１つの配列に対して８３％を超える同一性を有することを意味する。別の実施形態では、「相同性」は、配列番号ＳＥＱＩＤＮｏ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、または１９３から選択された１つの配列に対して８５％を超える同一性を有することを意味する。別の実施形態では、「相同性」は、配列番号ＳＥＱＩＤＮｏ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、または１９３から選択された１つの配列に対して８７％を超える同一性を有することを意味する。別の実施形態では、「相同性」は、配列番号ＳＥＱＩＤＮｏ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、または１９３から選択された１つの配列に対して８８％を超える同一性を有することを意味する。別の実施形態では、「相同性」は、配列番号ＳＥＱＩＤＮｏ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、または１９３から選択された１つの配列に対して９０％を超える同一性を有することを意味する。別の実施形態では、「相同性」は、配列番号ＳＥＱＩＤＮｏ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、または１９３から選択された１つの配列に対して９２％を超える同一性を有することを意味する。別の実施形態では、「相同性」は、配列番号ＳＥＱＩＤＮｏ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、または１９３から選択された１つの配列に対して９３％を超える同一性を有することを意味する。別の実施形態では、「相同性」は、配列番号ＳＥＱＩＤＮｏ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、または１９３から選択された１つの配列に対して９５％を超える同一性を有することを意味する。別の実施形態では、「相同性」は、配列番号ＳＥＱＩＤＮｏ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、または１９３から選択された１つの配列に対して９６％を超える同一性を有することを意味する。別の実施形態では、「相同性」は、配列番号ＳＥＱＩＤＮｏ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、または１９３から選択された１つの配列に対して９７％を超える同一性を有することを意味する。別の実施形態では、「相同性」は、配列番号ＳＥＱＩＤＮｏ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、または１９３から選択された１つの配列に対して９８％を超える同一性を有することを意味する。別の実施形態では、「相同性」は、配列番号ＳＥＱＩＤＮｏ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、または１９３から選択された１つの配列に対して９９％を超える同一性を有することを意味する。別の実施形態では、「相同性」は、配列番号ＳＥＱＩＤＮｏ：１〜１６０、１６２〜１８５、１９０、１９１、または１９３から選択された１つの配列に対して１００％である同一性を意味する。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態を意味する。別の実施形態では、相同性は、候補配列のハイブリダイゼーションにより決定される。ハイブリダイゼーションの方法は、当該技術分野で公知である（例えば、"Nucleic Acid Hybridization" Hames, B. D., and Higgins S. J., Eds. (1985)、Sambrook et al., 2001, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, N.Y.、及びAusubel et al., 1989, Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Yを参照）。別の実施形態では、ハイブリダイゼーションの方法は、緩やかな（moderate）または厳密な（stringent）な条件下で、天然型カスパーゼペプチドをコードするＤＮＡの相補配列に対して行われる。ハイブリダイゼーションの条件は、例えば、１０〜２０％のホルムアミドと、５倍のＳＳＣ（１５０ｍＭのＮａＣｌ、１５ｍＭのクエン酸三ナトリウム）と、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）と、５倍のデンハルト溶液と、１０％の硫酸デキストランと、２０μｇ／ｍｌの変性剪断サケ精子ＤＮＡとを溶解させた水溶液中で、４２℃で一晩インキュベートすることである。

実施例に列記されたペプチドの上記の相同物及び変異体の各々は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明は、本発明のペプチドを含む組成物を提供する。別の実施形態では、前記組成物は、医薬的に許容される担体をさらに含む。別の実施形態では、前記組成物は、アジュバントをさらに含む。別の実施形態では、前記組成物は、本発明の２つ以上のペプチドを含む。別の実施形態では、前記組成物は、下記に記載の任意の添加剤、化合物、または賦形剤を含む。別の実施形態では、前記アジュバントは、ＫＬＨ、ＱＳ２１、フロインド完全アジュバント、フロインド不完全アジュバント、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、ＢＣＧ、またはミョウバンである。別の実施形態では、前記担体は、本明細書に列挙した任意の担体である。別の実施形態では、前記アジュバントは、本明細書に列挙した任意のアジュバントである。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明は、本発明のペプチドを含むワクチンを提供する。別の実施形態では、本発明は、抗原提示細胞（antigen-presenting cell：ＡＰＣ）と、本発明のペプチドとを含むワクチンを提供する。別の実施形態では、前記ワクチンは、担体をさらに含む。別の実施形態では、前記ワクチンは、アジュバントをさらに含む。別の実施形態では、前記ワクチンは、ＡＰＣをさらに含む。別の実施形態では、前記ワクチンは、抗原、担体、及び／またはＡＰＣの１つ以上の組み合わせをさらに含む。別の実施形態では、前記ワクチンは、細胞ベースの組成物である。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、「ワクチン」という用語は、対象に導入したときに、特定の病気、疾患、またはそれらの症状に対して予防効果または治療効果を提供する物質または組成物を意味する。別の実施形態では、本発明は、ペプチドベースのワクチンを提供する。前記ペプチドは、サイトカインやアジュバントなどの免疫調節化合物を含む、本明細書に記載の任意の物質を含む。

別の実施形態では、本発明の方法及び組成物のワクチンは、アジュバントをさらに含む。別の実施形態では、前記アジュバントは、モンタニドＩＳＡ５１（Montanide ISA 51）である。モンタニドＩＳＡ５１は、天然の代謝可能油及び精製乳化剤を含む。別の実施形態では、前記アジュバントは、ＧＭ−ＣＳＦである。組み換え型ＧＭ−ＣＳＦは、ヒトのタンパク質であり、別の実施形態では、酵母（S. cerevisiae）ベクターである。ＧＭ−ＣＳＦは、造血前駆細胞、ＡＰＣ、樹枝状細胞、及びＴ細胞のクローン性増殖及び分化を促進する。

別の実施形態では、前記アジュバントは、サイトカインである。別の実施形態では、前記アジュバントは、成長因子である。別の実施形態では、前記アジュバントは、細胞集団である。別の実施形態では、前記アジュバントは、ＱＳ２１である。別の実施形態では、前記アジュバントは、フロインド不完全アジュバントである。別の実施形態では、前記アジュバントは、リン酸アルミニウムである。別の実施形態では、前記アジュバントは、水酸化アルミニウムである。別の実施形態では、前記アジュバントは、ＢＣＧである。別の実施形態では、前記アジュバントは、ミョウバンである。

別の実施形態では、前記アジュバントは、インターロイキンである。別の実施形態では、前記アジュバントは、ケモカインである。別の実施形態では、前記アジュバントは、当該技術分野で公知の任意の種類のアジュバントである。別の実施形態では、本発明のＷＴ１ワクチンは、上記のアジュバントのうちの２つを含む。別の実施形態では、本発明のＷＴ１ワクチンは、上記のアジュバントのうちの２つ以上を含む。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明のワクチンまたは組成物は、本発明のＷＴ１ペプチドの任意の実施形態及びその組み合わせを含むことができる。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

本発明のペプチド、ワクチン、及び組成物に関して本明細書に記載したあらゆる実施形態が本発明の任意の方法に使用できることを理解されたい。ペプチド、ワクチン、または組成物と、方法との組み合わせは、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明は、ＷＴ１発現癌を有する対象を治療する方法であって、本発明のＷＴ１ワクチンを前記対象に投与するステップを含み、それによって、ＷＴ１発現癌を有する対象を治療するようにした方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ＭＤＳを有する対象を治療する方法であって、本発明のＷＴ１ワクチンを前記対象に投与するステップを含み、それによって、ＭＤＳを有する対象を治療するようにした方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、対象におけるＷＴ１発現癌の進行を抑制または停止する方法であって、本発明のＷＴ１ワクチンを前記対象に投与するステップを含み、それによって、対象におけるＷＴ１発現癌の進行を抑制または停止するようにした方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、対象におけるＷＴ１発現癌の発生率を減少させる方法であって、本発明のＷＴ１ワクチンを前記対象に投与するステップを含み、それによって、対象におけるＷＴ１発現癌の発生率を減少させるようにした方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、対象における急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の発生率を減少させる方法であって、本発明のＷＴ１ワクチンを前記対象に投与するステップを含み、それによって、対象におけるＡＭＬの発生率を減少させるようにした方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、対象におけるＷＴ１発現癌の再発率を減少させる方法であって、本発明のＷＴ１ワクチンを前記対象に投与するステップを含み、それによって、対象におけるＷＴ１発現癌の再発率を減少させるようにした方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、対象におけるＡＭＬの再発率を減少させる方法であって、本発明のＷＴ１ワクチンを前記対象に投与するステップを含み、それによって、対象におけるＡＭＬの再発率を減少させるようにした方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ＷＴ１発現癌に対する、対象のＴ細胞寛容を破壊する方法であって、本発明のＷＴ１ワクチンを前記対象に投与するステップを含み、それによって、ＷＴ１発現癌に対する、対象のＴ細胞寛容を破壊するようにした方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ＷＴ１発現癌を有する対象を治療する方法であって、（ａ）本発明の方法によって、ドナーにおいて、悪性癌細胞を認識するヒト細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の形成及び増殖を誘導するステップと、（ｂ）前記ヒトＣＴＬを前記対象に注入するステップとを含み、それによって、癌を有する対象を治療するようにした方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ＷＴ１発現癌を有する対象を治療する方法であって、（ａ）本発明の方法によって、エクスビボで、悪性癌細胞を認識するヒト細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の形成及び増殖を誘導するステップと、（ｂ）前記ヒトＣＴＬを前記対象に注入するステップとを含み、それによって、癌を有する対象を治療するようにした方法を提供する。前記、ヒト免疫細胞は、ドナーから取得される。

エクスビボの免疫治療のための方法は、当該技術分野で公知であり、例えば、米国特許出願番号第２００６／００５７１３０号、同第２００５／０２２１４８１号、同第２００５／０２１４２６８号、同第２００３／０１７５２７２号、同第２００２／０１２７７１８号、及び米国特許第５，２２９,１１５号に記載されている（これらは、本明細書に援用されるものとする）。他の方法も当該技術分野で公知であり、例えば、「Blood dendritic cells generated with Flt3 ligand and CD40 ligand prime CD8+ T cells efficiently in cancer patients. J Immunother. 2006 Sep-Oct;29(5) :499-5 11」（Davis ID et al.）及び「The cytotoxic T cell response to peptide analogs of the HLA-A*0201-restricted MUC1 signal sequence epitope, Ml.2. Cancer Immunol Immunother. 2006 Jul 28」（Mitchell MS et al.）に記載されている。各方法は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明は、ＷＴ１発現癌細胞に特異的なＣＴＬの形成及び増殖を誘導する方法であって、本発明のワクチンをリンパ球の集団に接触させるステップを含む。別の実施形態では、前記ワクチンは、本発明のペプチドに結合したＡＰＣである。別の実施形態では、前記ワクチンは、本発明のペプチドの混合物に結合したＡＰＣである。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明は、対象における、ＷＴ１発現癌細胞に対するヘテロクリティック免疫応答を生成する方法であって、本発明のワクチンを前記対象に投与するステップを含み、それによって、ヘテロクリティック免疫応答を発生させるようにした方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、対象における抗中皮腫免疫応答を誘導する方法であって、（ａ）ＷＴ１タンパク質または（ｂ）ＷＴ１タンパク質の断片を含む免疫原性組成物を前記対象に接触させるステップを含み、それによって、対象における抗中皮腫免疫応答を誘導するようにした方法を提供する。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明は、対象における抗中皮腫免疫応答を誘導する方法であって、（ａ）ＷＴ１タンパク質または（ｂ）ＷＴ１タンパク質の断片をコードするヌクレオチド分子を含む免疫原性組成物を前記対象に接触させるステップを含み、それによって、対象における抗中皮腫免疫応答を誘導するようにした方法を提供する。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明は、中皮腫を有する対象を治療する方法であって、（ａ）ＷＴ１タンパク質または（ｂ）ＷＴ１タンパク質の断片を含む免疫原性組成物を前記対象に投与するステップを含み、それによって、中皮腫を有する対象を治療するようにした方法を提供する。別の実施形態では、中皮腫は、悪性中皮腫である。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、中皮腫を有する対象を治療する方法であって、（ａ）ＷＴ１タンパク質または（ｂ）ＷＴ１タンパク質の断片をコードするヌクレオチド分子を含む免疫原性組成物を前記対象に投与するステップを含み、それによって、中皮腫を有する対象を治療するようにした方法を提供する。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、対象における中皮腫の発生率または再発率を減少させる方法であって、（ａ）ＷＴ１タンパク質または（ｂ）ＷＴ１タンパク質の断片を含む免疫原性組成物を前記対象に投与するステップを含み、それによって、対象における中皮腫の発生率または再発率を減少させるようにした方法を提供する。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、対象における中皮腫の発生率または再発率を減少させる方法であって、（ａ）ＷＴ１タンパク質または（ｂ）ＷＴ１タンパク質の断片をコードするヌクレオチド分子を含む免疫原性組成物を前記対象に投与するステップを含み、それによって、対象における中皮腫の発生率または再発率を減少させるようにした方法を提供する。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明の方法によって誘起される免疫応答の標的細胞は、本発明のＷＴ１ペプチドまたはそれに対応するＷＴ１断片をＨＬＡ分子上に提示する。別の実施形態では、ＨＬＡ分子は、ＨＬＡクラスＩ分子である。別の実施形態では、ＨＬＡ分子は、当該技術分野で公知の任意のＨＬＡクラス１サブタイプまたはＨＬＡクラスＩ分子である。別の実施形態では、ＷＴ１ペプチドまたはその断片に対する免疫応答は、ヘテロクリティック免疫応答である。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、前記癌は、ＷＴ１発現癌である。一実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、急性骨髄性白血病（acute myelogenous leukemia：ＡＭＬ）である。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、骨髄異形成症候群（myelodysplastic syndrome：ＭＤＳ）に関連するものである。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、ＭＤＳである。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer：ＮＳＣＬＣ）である。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、ウィルムス腫瘍である。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、白血病である。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、血液癌である。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、リンパ腫である。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、線維形成性小円形細胞腫瘍である。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、中皮腫である。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、悪性中皮腫である。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、胃癌である。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、結腸癌である。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、肺癌である。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、乳癌である。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、胚細胞腫瘍である。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、卵巣癌である。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、子宮癌である。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、甲状腺癌である。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、肝細胞癌である。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、甲状腺癌である。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、肝臓癌である。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、腎臓癌である。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、カポジ肉腫である。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、肉腫である。別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、その他の癌腫または肉腫である。

別の実施形態では、前記ＷＴ１発現癌は、固形癌である。別の実施形態では、前記固形癌は、前記ＷＴ１発現癌に関連するものである。別の実施形態では、前記固形癌は、骨髄異形成症候群（myelodysplastic syndrome：ＭＤＳ）に関連するものである。別の実施形態では、前記固形癌は、非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer：ＮＳＣＬＣ）に関連するものである。別の実施形態では、前記固形癌は、肺癌に関連するものである。別の実施形態では、前記固形癌は、乳癌に関連するものである。別の実施形態では、前記固形癌は、結腸直腸癌に関連するものである。別の実施形態では、前記固形癌は、前立腺癌に関連するものである。別の実施形態では、前記固形癌は、卵巣癌に関連するものである。別の実施形態では、前記固形癌は、腎臓癌に関連するものである。別の実施形態では、前記固形癌は、膵臓癌に関連するものである。別の実施形態では、前記固形癌は、脳腫瘍に関連するものである。別の実施形態では、前記固形癌は、消化管癌に関連するものである。別の実施形態では、前記固形癌は、皮膚癌に関連するものである。別の実施形態では、前記固形癌は、メラノーマに関連するものである。

別の実施形態では、本発明の方法により治療される癌または腫瘍は、ＷＴ１を発現することが疑われる。別の実施形態では、ＷＴ１の発現は、実際の腫瘍サンプルの検査により確認されていていない。別の実施形態では、前記癌または腫瘍は、多くの場合にＷＴ１を発現すると知られている種類である。別の実施形態では、前記の種類のものは、大抵の場合に、ＷＴ１を発現する。

ＷＴ１を発現する癌または腫瘍の各々、及びＷＴ１を発現することが疑われる癌または腫瘍の各々は、本発明の別個の実施形態に相当する。

本発明のペプチド、ワクチン、及び組成物に関して本明細書に列記したあらゆる実施形態は、本発明の任意の方法に使用することができ、各々は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明の複数のペプチドは、本発明の方法において免疫応答を促進する。

本明細書に開示した方法によって、当業者は、別のＷＴ１由来ペプチドを設計することができる。また、本発明の方法によって、別のＨＬＡ分子に結合するペプチドの設計が可能となる。また、本発明の方法によって、本発明の複数のＷＴ１由来ペプチドを組み合わせたワクチンの設計が可能となる。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明のワクチンには、様々なＨＬＡクラスＩＩ対立遺伝子を有するＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化または誘起するという利点がある。別の実施形態では、ワクチンには、人口のかなり大きな割合において、ＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化または誘起するという利点がある（例えば、別個の実施形態では、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９５％よりも大きい割合で）。別の実施形態では、ワクチンには、特定の人口のかなり大きな割合（例えば、米国の白色人種）において、ＷＴ１特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞を活性化または誘起するという利点がある。

別の実施形態では、本発明の方法は、対象がすでに有している免疫応答を向上させる。別の実施形態では、本発明の方法は、ペプチド、組成物、またはワクチンを２回以上投与するステップを含む。別の実施形態では、ペプチドの組成、濃度、またはそれらの組み合わせは様々である。別の実施形態では、ペプチドは、関心のある抗原に対する免疫応答をまだ開始していない対象において、前記抗原に対する免疫応答を開始する。別の実施形態では、誘起されたＣＴＬは、ＡＰＣまたは癌細胞上のペプチドの提示に応答して増殖する。別の実施形態では、免疫応答の調節は、免疫機構の体液性部分及び細胞性部分（それぞれ、Ｔｈ２及びＴｈ１Ｔヘルパー細胞が関与する）の一方または両方を含む。

別の実施形態では、腫瘍の成長に影響を及ぼす本発明の方法によって、（１）腫瘍細胞の分化が直接抑制される、または（２）免疫細胞が腫瘍細胞溶解をもたらす、またはその両方が起き、その結果、腫瘍細胞の拡大が抑制される。

当業者は、公知の様々な方法に基づいて、これらの２つの機構の一方による腫瘍の成長の抑制を容易に評価することができる。別の実施形態では、腫瘍抑制は、腫瘍の実際の大きさを所定期間にわたって測定することで評価される。別の実施形態では、腫瘍の抑制は、当該技術分野で公知の方法を用いて腫瘍の大きさを（所定期間にわたって）推定することで評価される。より具体的には、腫瘍の大きさは、様々な放射線画像撮像方法（例えば、単光子陽電子放出コンピュータ断層撮影（「"Nuclear Medicine in Clinical Oncology," Winkler, C. (ed.) Springer-Verlag, New York, 1986」を参照））を用いて推定することができる。このような方法には、様々な造影剤（例えば、従来の造影剤（例えばクエン酸ガリウム−６７（６７Ｇａ））、並びに代謝画像、リセプター画像、または免疫画像用の特別な試薬（例えば、腫瘍マーカーに特異的な放射性標識モノクローナル抗体））が使用される。加えて、超音波法などの非放射性方法（「"Ultrasonic Differential Diagnosis of Tumors", Kossoff and Fukuda, (eds.), Igaku-Shoin, New York, 1984」を参照）を用いて、腫瘍の大きさを推定することもできる。

腫瘍抑制の評価のための上記したインビボ方法に加えて、様々なインビトロの方法を用いて、インビボでの腫瘍抑制を予測することができる。代表的な例として、例えば、^５１Ｃｒ放出アッセイ（実施例）、腫瘍依存性リンパ球増殖（loannides, et aL, J. Immunol. 146(5):1700- 1707, 1991）、腫瘍特異的抗体のインビトロでの生成（Herlyn, et al., J. Immunol. Meth. 73:157- 167, 1984）、インビトロでの細胞性（例えば、ＣＴＬ、ヘルパーＴ細胞）または体液性（例えば、抗体）の細胞増殖抑制（Gazit, et al., Cancer Immunol Irnn-iunother 35:135-144, 1992）、細胞前駆体の頻度の評価（Vose, mt. J. Cancer 30:135-142 (1982）などによる、リンパ球媒介性腫瘍細胞溶解活性の評価が挙げられる。

別の実施形態では、腫瘍の成長を抑制する方法を用いると、本発明のペプチドを接触させなかった場合、または本発明のペプチドに曝さなかった場合と比べると、腫瘍の成長は抑制される。腫瘍細胞の成長は、当該技術分野で公知の任意の方法で評価することができ、そのような方法としては、これに限定しないが、例えば、腫瘍の大きさの計測、^３Ｈチミジン組み込み分析を用いての腫瘍細胞の増殖の測定、または腫瘍細胞の数のカウントが挙げられる。腫瘍細胞の成長を「抑制する」とは、別の実施形態では、腫瘍の成長を遅らせる、遅延させる、若しくは停止する、または腫瘍を縮小させることを意味する。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

本発明の方法及び組成物の別の実施形態では、ＷＴ１発現が測定される。別の実施形態では、ＷＴ１の転写産物発現が測定される。別の実施形態では、腫瘍におけるＷＴ１タンパク質レベルが測定される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

免疫応答の存在及び大きさを評価する方法は、当該技術分野で公知である。別の実施形態では、リンパ球の増殖分析が用いられ、Ｔ細胞による放射性物質（例えば、^３Ｈチミジン）の取り込みを測定して、細胞の増殖を評価する。別の実施形態では、Ｔ細胞の増殖は、インターロイキン−２（ＩＬ−２）生成、Ｃａ^２＋流出、または染料（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニル−テトラゾリウムなど）の取り込みを測定することによって評価される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、ＣＴＬの活性化は、当該技術分野で公知の方法（例えば、細胞増殖、サイトカイン生成の検出など）によって評価される。リガンドでパルスされた標的細胞に接触したときにＴ細胞が分泌するサイトカインの種類及び量を分析することにより、Ｔ細胞の機能活性を評価することができる。ＥＬＩＳＡまたはＥＬＩＳＰＯＴ分析によって、サイトカイン生成の速度及び全量を求めることができる（Fujihashi K. et al. (1993) J. Immunol. Meth. 160:181; Tanguay S. and Killion J. J. (1994) Lymphokine Cytokine Res. 13:259）。

別の実施形態では、ＣＴＬ活性は、^５１Ｃｒ放出アッセイによって求めることができる。ペプチドでパルスした^５１Ｃｒ標識標的細胞の抗原特異的Ｔ細胞の溶解を、対照ペプチドでパルスした標的細胞と比較することができる。別の実施形態では、本発明のペプチドによってＴ細胞を刺激し、ＭＨＣにおいて天然ペプチドを発現する標的細胞の溶解を求めることができる。別の実施形態では、溶解の挙動、並びに特定の時点（例えば、４時間）における全ての標的の溶解を用いて、リガンドの性能を評価する（Ware C. F. et al. (1983) J Immunol 131: 1312）。

ＨＬＡ分子に対するペプチドの親和力を求める方法は、当該技術分野で公知である。別の実施形態では、親和力は、ＴＡＰ安定性分析により求められる。

別の実施形態では、親和力は、競合型ラジオイムノ分析によって求められる。別の実施形態では、次のプロトコルが使用される。標的細胞を１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、Fisher Chemicals, Fairlawn, NJ）含有ＰＢＳで２回洗浄する。細胞を氷上で１０^７／ｍｌになるように再懸濁する。３ｍｇ／ｍｌのベータ２マイクログロブリンを含むリン酸クエン酸塩緩衝液を用いて、細胞表面に結合している天然のペプチドを、０℃で２分間剥ぎ取る。沈殿物を、３ｍｇ／ｍｌのベータ２マイクログロブリン及び３０ｍｇ／ｍｌのデオキシリボヌクレアーゼを含有するＰＢＳ／１％ＢＳＡで５×１０^６細胞／ｍｌになるように再懸濁する。次に、２００ｍｌのアリコートを、ＨＬＡに特異的なペプチドの存在下または非存在下で、２０℃で１０分間インキュベートし、その後、^１２５Ｉ標識のペプチと共に３０分間、２０℃でインキュベートする。ＰＢＳ／２％ＢＳＡで２回洗浄し、ＰＢＳで１回洗浄した後に、結合した全^１２５Ｉ量を測定する。相対的親和力は、検査するペプチドの濃度を公知の結合ペプチドの濃度と比較することによって求める。

別の実施形態では、生細胞（例えば、ＳＫＬＹ−１６細胞）表面上のＨＬＡに対するペプチドの結合の特異性分析を行い、ペプチドが適切なＨＬＡ分子に結合することを確認し、さらに特異性を特徴付ける。この分析には、別の実施形態では、同種または異種のＨＬＡ分子に結合すると知られている過剰な非標識ペプチドとの競合分析が含まれ、同種または異種のＨＬＡを発現する標的細胞が使用される。この分析は、別の実施形態では、生きている新鮮な、または０．２５％のパラホルムアルデヒドで固定された、ヒトＰＢＭＣ、リンパ球細胞株、及び特定のＨＬＡタイプのＥＢＶ形質転換Ｔ細胞株に対して行われる。特定の細胞のＭＨＣ分子に結合することが分かったペプチドの相対的な親和力は、上述したように、関連するＨＬＡ分子に対して高親和力を示すことが分かっている^１２５Ｉ標識のペプチド（例えば、チロシナーゼ、またはＨＢＶペプチド配列）に対する競合分析を行うことによって分析される。別の実施形態では、本発明の方法及び組成物のＨＬＡクラスＩＩ結合ペプチドは、ＨＬＡクラスＩＩ分子の結合に必要な最低限の長さ（別の実施形態では、１２ＡＡ）よりも長い。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩＩ結合ペプチドの長さを増大させると、ペプチドは、１つ以上のＨＬＡクラスＩＩ分子と結合できるようになる。別の実施形態では、前記長さを増大させると、ペプチドは、結合モチーフが未知であるＨＬＡクラスＩＩ分子と結合できるようになる。別の実施形態では、前記長さを増大させると、ペプチドは、ＨＬＡクラスＩ分子と結合できるようになる。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子の結合モチーフは既知である。別の実施形態では、ＨＬＡクラスＩ分子の結合モチーフは既知ではない。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明の方法及び組成物に使用されるペプチドは、非古典的なアミノ酸を含む。この非古典的アミノ酸の例として、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸塩（Kazmierski et al. (1991) J. Am Chem. Soc. 113:2275-2283）、（２Ｓ、３Ｓ）−メチル−フェニルアラニン、（２Ｓ、３Ｒ）−メチルフェニルアラニン、（２Ｒ、３Ｓ）−メチルフェニルアラニン、及び（２Ｒ、３Ｒ）−メチルフェニルアラニン（Kazmierski and Hruby (1991) Tetrahedron Lett. 32(41): 5769- 5772）、２−アミノテトラヒドロナフタレン−２−カルボキシル酸（Landis (1989) Ph.D. Thesis, University of Arizona）、ヒドロキシ１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキシル酸塩（Miyake et al. (1984) J. TakedaRes. Labs. 43:53-76）、ヒスチジンイソキノリンカルボキシル酸（Zechel et al. (1991) Tnt. J. Pep. Protein Res. 38(2):131-138）、及びＨＩＣ（ヒツジン環状尿素）（（Dharanipragada et al.(1993) Tnt. J. Pep. Protein Res. 42(1):68-77)）及び（(1992) Acta. Crst., Crystal Struc. Conmi. 48(IV):1239-124））が挙げられる。

別の実施形態では、本発明のペプチドは、ＡＡ類似体またはペプチド模倣体（別の実施形態では、特定の二次構造を誘導または促進する）を含む。そのようなペプチドとして、ジペプチド類似体を誘導するβターンであるＬＬ−Ａｃｐ（ＬＬ−３−アミノ−２−ピペリドン−６−カルボキシル酸）、（Kemp et al. (1985) J. Org. Chem. 50:5834-5838）、類似体を誘導するβシート（Kemp et al. (1988) Tetrahedron Lett. 29:5081-5082）、類似体を誘導するβターン（Kemp et al. (1988) Tetrahedron Left. 29:5057-5060）、類似体を誘導するアルファへリックス（Kemp et al. (1988) Tetrahedron Left. 29:5057-5060）、類似体を誘導するガンマターン（Kemp et al. (1989) J. Org. Chem. 54:109:115）、参照文献「Nagai and Sato (1985) Tetrahedron Left. 26:647-650」及び「DiMaio et al. (1989) J. Chem. Soc. Perkin Trans. p. 1687」に記載の類似体、Ｇｌｙ−Ａｌａターン類似体（Kahn et al. (1989) Tetrahedron Lett. 30:2317）、アミド結合アイソスター（amide bond isostere）（Jones et al. (1988) Tetrahedron Left. 29(3 1):3853-3856）、テトラゾール（Zabrocki et al. (1988) J. Am. Chem. Soc. 110:5875-5880）、ＤＴＣ（Samanen et al. (1990) Tnt. J. Protein Pep. Res. 35:501:509）、及び「Olson et al.(1990) J. Am. Chem. Sci. 112:323-333 and Garveyet al. (1990) J. Org. Chem. 55(3) :936-940」に記載の類似体がある。ベータターン及びベータバルジ（beta bulge）の配座固定された模倣体、並びにそのそれらを含むペプチドは、１９９５年８月８日にKahnに付与された米国特許第５，４４０，０１３号に記載されている。

別の実施形態では、本発明のペプチドは、下記に記載の他の様々な分子に結合する（共有結合または非共有結合である（複合））。別の実施形態では、前記分子の種類は、目的に応じて異なる。別の実施形態では、ペプチドは、高分子担体（例えば、免疫原性担体）に共有結合または非共有結合している。前記高分子担体としては、これに限定されないが、例えば、天然及び合成ポリマー、タンパク質、多糖類、ポリペプチド（アミノ酸）、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、及び脂質がある。別の実施形態では、本発明のペプチドは、基質に結合している。別の実施形態では、リポソームに導入されるように、脂肪酸と結合している（米国特許第５，８３７，２４９号）。別の実施形態では、本発明のペプチドは、固体担体（solid support）（当該技術分野では、様々な種類のものが知られている）と結合している。別の実施形態では、担体、基質、脂肪酸、または固体担体へのペプチドの結合は、免疫応答の誘起を増大させる働きをする。

別の実施形態では、前記担体は、チログロブリン、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）、破傷風トキソイド、ポリアミノ酸（ポリリシン、ポリグルタミン酸など）、インフルエンザタンパク質、Ｂ型肝炎ウイルスのコアタンパク質、キーホールリンペットヘモシアニン、または別の担体タンパク質若しくは担体ペプチド、Ｂ型肝炎ウイルスの遺伝子組み換え型ワクチン、またはＡＰＣである。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、「アミノ酸」（ＡＡ）という用語は、天然型、または別の実施形態では、非天然型つまり合成ＡＡを意味し、別の実施形態では、グリシン、Ｄ光学異性体、Ｌ光学異性体、ＡＡ類似体、ペプチド模倣体、及びそれらの組み合わせが含まれ得る。

別の実施形態では、「癌」または「腫瘍」は、同じ意味で使用され、悪性形質転換を経て宿主の生物に対して病的細胞となった細胞を意味する。原発性癌細胞（悪性形質転換部位の付近から得られた細胞）は、確立された技術（とりわけ、組織学的検査）によって容易に非ガン性細胞から区別することができる。本明細書で使用される癌細胞の定義は、原発性癌細胞だけでなく、癌原細胞に由来するあらゆる細胞を含む。これには、転位癌細胞、並びに、癌細胞由来のインビトロ培養細胞及び細胞株が含まれる。別の実施形態では、腫瘍は、腫瘍塊に基づいて検出することができ（例えば、ＣＡＴスキャン、磁気共鳴映像法（magnetic resonance imaging：ＭＲＩ）、Ｘ線検査、超音波検査、または触診法などの手法を用いて）、別の実施形態では、生化学的または免疫学的検査によって同定される（後者は、別の実施形態と同様に癌細胞を検出するのに使用される）。

ペプチドを合成する方法は、当該技術分野で公知である。別の実施形態では、本発明のペプチドは、適切な固相合成法（solid-state synthetic procedure）を用いて合成される（例えば、「Steward and Young, Solid Phase Peptide Synthesis, Freemantle, San Francisco, Calif. (1968)」、「Merrifield (1967) Recent Progress in Hormone Res 23: 451」を参照）。これらのペプチドの活性は、別の実施形態では、本明細書に記載の分析方法を用いて検査される。

別の実施形態では、本発明のペプチドは、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、及びサイジングカラム（sizing column）クロマトグラフィー）、遠心分離法、溶解度差を利用した方法、またはタンパク質精製のための他の任意の標準的な方法を用いて精製される。別の実施形態では、免疫親和性クロマトグラフィーが用いられ、エピトープは、ペプチドまたは本発明の関連ペプチドに対して持ち上げられかつ固定支持体に固定された抗体を含む親和性カラムに結合させることで単離される。

別の実施形態では、ペプチドを適切な親和性カラムに通過させるだけで容易に精製できるようにするために、ヘキサＨｉｓ（Invitrogen）、マルトース結合ドメイン（New England Biolabs）、インフルエンザコート配列（Kolodziej et al. (1991) Meth. Enzymol. 194:508-509）、グラチオン−Ｓ−トランスフェラーゼなどの親和性タグを本発明のペプチドに結合させる。別の実施形態では、単離されたペプチドは、タンパク質分解、磁気共鳴、及びＸ線結晶学的技法を用いて、物理的に特徴付けることができる。

別の実施形態では、本発明のペプチドは、公知の方法（当業者ならば、理解できるであろう）を用いて、インビトロ翻訳によって作製される。別の実施形態では、ペプチドは、翻訳中または翻訳後に個別に修飾される（例えば、リン酸化、グリコシル化、架橋結合、アシル化、タンパク質分解的切断、または抗体分子、膜分子若しくは他のリガンドに結合させること（Ferguson et al. (1988) Ann. Rev. Biochem. 57:285-320）によって）。

別の実施形態では、本発明のペプチドは、検出可能な標識をさらに有する。前記標識は、別の実施形態では蛍光性であり、別の実施形態では発光性であり、別の実施形態では放射能性であり、別の実施形態では高電子密度性である。別の実施形態では、検出可能な標識には、例えば、緑色蛍光タンパク質（green fluorescent protein：ＧＦＰ）、ＤＳレッド（赤色蛍光タンパク質）、分泌型アルカリホスファターゼ（secreted alkaline phosphatase：ＳＥＡＰ）、ベータガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、^３２Ｐ、^１２５Ｉ及び^１４Ｃ、フルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル及びウンベリフェロン、ルシフェリン、または当業者に周知な他の標識が含まれる。前記標識は、用いられる免疫分析法の種類に応じて選択される。

別の実施形態では、本発明のペプチドは、別の実施形態では担体として働く基質に結合している。別の実施形態では、ペプチドを基質に結合させることにより、免疫応答の誘起を増大させることができる。

別の実施形態では、本発明のペプチドは、本明細書に記載されているように、カルボジイミドなどの架橋剤によって他の分子と結合している。カルボジイミドの例としては、１−シクロヘキシル−３−（２モルフォリニル−（４−エチル）カルボジイミド（ＣＭＣ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）、及び１−エチル−３−（４−アゾニア−４４−ジメチルペンチル）カルボジイミドがある。

別の実施形態では、前記架橋剤には、臭化シアン、グルタルアルデヒド、及び無水コハク酸が含まれる。一般的に、ホモ二官能性アルデヒド、ホモ二官能性エポキシド、ホモ二官能性イミドエステル、ホモ二官能性イミドエステル、ホモ二官能性ヒドロキシスクシンイミドエステル、ホモ二官能性マレイミド、ホモ二官能性ハロゲン化アルキル、ホモ二官能性ピリジルジスルフィド、ホモ二官能性ハロゲン化アリール、ホモ二官能性ヒドラジド、ホモ二官能性ジアゾニウム誘導体、及びホモ二官能性光反応性化合物などのホモ二官能性物質を使用することができる。別の実施形態では、ヘテロ二官能性化合物、例えば、アミン反応性基と反応性基とを有する化合物、アミン反応性基と光反応性基とを有する化合物、及びカルボニル反応性機とスルフヒドリル反応性基とを有する化合物などの使用も考えられる。

別の実施形態では、ホモ二官能性架橋剤として、二官能性Ｎ−ヒドロキシイミドエステル（ジチオビス（スクシンイミジルプロパネート）、ジスクシンイミジルスベレート、及び酒石酸ジスクシンイミジル）、二官能性イミドエステル（ジメチルアジピイミデート、ジメチルピメリミデート、及びジメチルスベリミデート）、二官能性スルフヒドリル反応性架橋剤（１，４−ジ−［３´−（２´−ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ブタン、ビスマレイミドヘキサン、及びビス−Ｎマレイミド１，８−オクタン）、ハロゲン化アリール（１，５ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン、及び４、４´ジフルオロ−３，３´ジニトロフェニルスルホン）、二官能性アルデヒド（ホルムアルデヒド、マロンジアルデヒド、グルタルアルデヒド、及びアジパルデヒド）、二官能性エポキシド（１，４ブタンジオールジグリシジルエーテルなど）、二官能性ヒドラジド（アジピン酸ヒドラジド、カルボヒドラジド、及びコハク酸ジヒドラジド）、二官能性ジアゾニウム（ｏ−トリジン、ジアゾ化及びビスジアゾ化ベンジジン）、二官能性ハロゲン化アルキル（Ｎ１Ｎ´エチレン−ヘキサメチレン−ビス（ヨードアセトアミド）、ウンデカメチレン−ビス（ヨードアセトアミド）、並びにハロゲン化ベンジル及びハロゲン化マスタード（halomustard）（それぞれａ１ａ´−ジヨード−ｐ−キシレンスルホン酸、及びトリス（２−クロロエチル）アミンなど）がある。

別の実施形態では、ペプチドを別の分子に連結するのに使用されるヘテロ二官能性架橋剤には、これに限定しないが、例えば、ＳＭＣＣ（スクシンイミジル−４−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート）、ＭＢＳ（ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）、ＳＩＡＢ（Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート、ＳＭＰＢ（スクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート、ＧＭＢＳ（Ｎ−（ガンマ−マレイミドブチリルオキシ）スクシンイミドエステル）、ＭＰＢＨ（４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド）、Ｍ２Ｃ２Ｈ（４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシル−ヒドラジド）、ＳＭＰＴ（スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α−（２−ピリジルジチオ）トルエン）、及びＳＰＤＰ（Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネートが含まれる。

別の実施形態では、本発明のペプチドは、イオン相互作用、吸着的相互作用、または生体特異性相互作用による、単量体の非共有結合として形成されている。大きな正電荷または負電荷で荷電した分子を有するペプチドの複合体は、別の実施形態では、低イオン強度の環境下（脱イオン水など）で塩橋を形成することにより実現することができる。別の実施形態では、ポリ−（Ｌ−グルタミン酸）またはポリ（Ｌ−リシン）（それぞれ大きな負電荷及び正電荷を有する）などの荷電したポリマーを使用することにより、大きな複合体を作製することができる。別の実施形態では、ペプチドを微粒子ラテックスビーズなどの表面または他の疎水性ポリマーに吸着させることにより、架橋したタンパク質または別の実施形態では化学的に重合したタンパク質を効果的に模倣する非共有的に結合したペプチド−超抗原複合体を形成することができる。別の実施形態では、ペプチドは、他の分子間の生体特異的な相互作用によって、非共有的に結合している。例えば、ビオチンの、アビジンまたはストレプトアビジン或いはその誘導体などのタンパク質に対する強力な親和力を利用することによって、ペプチド複合体を形成することができる。この態様または別の実施形態では、ペプチドは、一般的なビオチン化剤（Ｄ−ビオチン（ＮＨＳ−ビオチン）のＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルなど（アミン基と反応する））を使用することにより、ビオチン基を有するように修飾することができる。

別の実施形態では、本発明のペプチドは、担体に結合している。別の実施形態では、前記担体は、ＫＬＨである。別の実施形態では、前記担体は、当該技術分野で公知の他の任意の担体であり、例えば、例えばチログロブリン、ヒト血清アルブミンなどのアルブミン、破傷風トキソイド、ポリリシン及びポリグルタミン酸などのポリアミノ酸、インフルエンザ、Ｂ型肝炎ウイルスのコアタンパク質、Ｂ型肝炎の遺伝子組換え型ワクチンなどが挙げられる。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明のペプチドは、Ｐ３ＣＳＳなどの脂質に結合している。別の実施形態では、本発明のペプチドは、ビーズ（bead）に結合している。

別の実施形態では、本発明の組成物は、免疫調節化合物をさらに含む。別の実施形態では、前記免疫調節化合物は、サイトカイン、ケモカイン、免疫機構の補助要素若しくは接着分子の発現を促進する補完的な要素、それらの受容体、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、前記免疫調節化合物は、インターロイキン（例えば、インターロイキン１〜１５）、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ、腫瘍壊死因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（granulocyte-macrophage colony stimulating factor：ＧＭ−ＣＳＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（macrophage colony stimulating factor：Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（granulocyte colony stimulating factor：Ｇ−ＣＳＦ）、好中球活性化タンパク質（neutrophil activating protein：ＮＡＰ）などのケモカイン、マクロファージ化学誘因物質及び活性化因子（macrophage chemoattractant and activating factor：ＭＣＡＦ）、ＲＡＮＴＥＳ、マクロファージ炎症性ペプチドＭＩＰ−１ａ及びＭＩＰ−１ｂ、補体、またはそれらの組み合わせである。別の実施形態では、前記免疫調節化合物は、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ（ｇｐ３４）、リンフォタクチン、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、Ｂ７．１、Ｂ７．２、ＴＲＡＰ、ＩＣＡＭ−１、２若しくは３、サイトカイン受容体、またはそれらの組み合わせの発現を誘導または促進する。

別の実施形態では、前記免疫調節化合物は、免疫応答に関わる副刺激物質の発現を誘導または促進する。前記副刺激物質には、いくつかの実施形態では、ＣＤ４０若しくはそのリガンド、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４若しくはＢ７分子が含まれる。別の実施形態では、前記免疫調節化合物は、熱安定抗原（heat stable antigen：ＨＳＡ）（Liu Y. et al. (1992) J. Exp. Med. 175:437-445), chondroitin sulfate-modified MHC invariant chain (Ti- CS) (Naujokas M. F. et al. (1993) Cell 74:257-26）、コンドロイチン硫酸で修飾されたＭＨＣ不変鎖（Ｉｉ−ＣＳ）（Naujokas M. F. et al. (1993) Cell 74:257-268）、または細胞内接着分子１（ＩＣＡＭ−１）（Van R. H. (1992) Cell 71:1065-1068）（別の実施形態では、Ｔ細胞上の同種リガンドと相互作用することで副刺激を補助する）の発現を誘導または促進する。

別の実施形態では、本発明の組成物は、水、分散媒、細胞培養液、等張剤などの溶媒を含む。別の実施形態では、前記溶媒は、約７．０のｐＨを有する等張緩衝水溶液である。別の実施形態では、本発明の組成物は、水、リン酸緩衝生理食塩水、または生理食塩水などの希釈剤を含む。別の実施形態では、本発明の組成物は、プロピルエチレングリコール、ポリエチレングリコール、及び植物油などの非水性溶媒を含む。

別の実施形態では、本発明の組成物は、当業者に公知の様々な方法で投与することができるように製剤されている。例えば、本発明の組成物は、非経口投与、静脈投与、皮下投与、皮内投与、粘膜内投与、局所投与、経口投与、または吸入投与される。

別の実施形態では、本発明のペプチドを含むワクチンは、細胞集団をさらに含む。別の実施形態では、前記細胞集団は、リンパ球、単球、マクロファージ、樹枝状細胞、内皮細胞、幹細胞、またはそれらの組み合わせを含む。前記細胞は、別の実施形態では、互いに対する自己細胞、同系細胞、または同種異系細胞である。別の実施形態では、前記細胞集団は、本発明のペプチドを含む。別の実施形態では、前記細胞集団は、ペプチドを取り込む。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明の細胞集団は、例えば、末梢血、白血球血液製剤、アフェレーシス血液製剤、末梢リンパ節、腸管関連リンパ系組織、脾臓、胸腺、臍帯血、腸間膜リンパ節、肝臓、免疫傷害部位（sites of immunologic lesions）、関節液、膵臓、脳脊髄液、腫瘍標本、肉芽腫組織、またはそのような細胞が得られる他の細胞源などのインビボの細胞源から得られる。別の実施形態では、本発明の細胞集団は、ヒトから得られる。前記ヒトは、胎児、新生児、子供、または成人である。別の実施形態では、本発明の細胞集団は、例えば、ブタ若しくはサル、または関心のある他の動物などから得られる。別の実施形態では、本発明の細胞集団は、正常な対象から得られる。別の実施形態では、本発明の細胞集団は、疾患を有する対象から得られる。別の実施形態では、本発明の細胞集団は、関心のある疾患が疑われる対象から得られる。

別の実施形態では、本発明の細胞集団は、親和性ベースの分離方法によって分離される。親和性ベースの分離方法として、別の実施形態では、磁気分離（抗体で被覆された磁性ビーズを使用して）、親和性クロマトグラフィー、モノクローナル抗体に結合した若しくはモノクローナル抗体と共に使用される細胞毒性剤（例えば、補体及び細胞毒素）、プレートなどの固体マトリックスに結合した抗体による「パニング」（panning）、または従来の他の方法がある。別の実施形態では、分離方法には、蛍光活性化細胞分類の利用が含まれる。別の実施形態では、本発明の細胞集団の分離を可能にする如何なる方法を使用することができ、その方法は本発明の一部と見なされる。

別の実施形態では、前記樹枝状細胞は、様々なリンパ系組織及び非リンパ系組織で見られる形態的に同様の様々な細胞集団から得られる（Steinman (1991) Ann. Rev. Immunol. 9:271-296）。別の実施形態では、本発明に使用される樹枝状細胞は、骨髄から単離される。別の実施形態では、前記樹枝状細胞は、骨髄から単離される。別の実施形態では、前記樹枝状細胞は、骨髄前駆細胞に由来する。別の実施形態では、前記樹枝状細胞は、末梢血から単離される／由来する。別の実施形態では、前記樹枝状細胞は、細胞株に由来する、または細胞株である。

別の実施形態では、本明細書に記載されている細胞集団は、哺乳動物（マウス、サル、またはヒトなど）の白血球画分から単離される（例えば、国際公開公報第ＷＯ９６／２３０６０号を参照）。白血球画分は、別の実施形態では、哺乳動物の末梢血から単離される。

樹枝状細胞の単離方法は、当該技術分野で公知である。別の実施形態では、樹枝状細胞を単離する方法は、（ａ）ロイコフォレーシス（leukophoresis）などの当該技術分野で公知の方法で哺乳動物から白血球画分を得るステップと、（ｂ）対流遠心エルトリエーションによって、ステップ（ａ）の白血球画分を４つ以上の副画分に分離するステップと、（ｃ）ステップ（ｂ）の１つ以上の画分の単球をカルシウムイオノフォア、ＧＭ−ＣＳＦ、及びＩＬ−１３、またはＧＭ−ＣＳＦ、及びＩＬ−４に接触させることで前記単球が樹枝状細胞に変換するのを促進するステップと、（ｄ）ステップ（ｃ）の樹枝状細胞の濃縮画分を同定するステップと、（ｅ）ステップ（ｄ）の濃縮画分を回収する（好ましくは、約４℃で）ステップとを含む。

別の実施形態では、前記樹枝状細胞の濃縮画分は、蛍光活性化細胞分類によって同定され、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＱ、またはＢ７．２の内の少なくとも１つのマーカーの同定、及び、ＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ１６、５６、５７、及びＣＤ１９、２０が同時に欠失していることの確認がなされる。

別の実施形態では、前記細胞集団は、リンパ球（別の実施形態では、Ｔ細胞であり、別の実施形態では、Ｂ細胞である）を含む。Ｔ細胞には、別の実施形態では、ＮＫ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性細胞（ＣＴＬ）、ＴＩＬ、ナイーブＴ細胞、またはそれらの組み合わせが含まれる。初代細胞、細胞株、クローンなどであるＴ細胞は、本発明の一部と見なされることを理解されたい。別の実施形態では、前記Ｔ細胞は、ＣＴＬ若しくはＣＴＬ細胞株、ＣＴＬクローン、または腫瘍、炎症、若しくは他の浸潤物から単離されたＣＴＬである。

別の実施形態では、造血幹細胞または初期前駆細胞は、本発明に使用される細胞集団を含む。別の実施形態では、そのような細胞集団は、ロイコフォレーシスによって単離される。別の実施形態では、ロイコフォレーシスは、サイトカイン投与後に、骨髄、末梢血（ＰＢ）、または新生児の臍帯血に対して行われる。別の実施形態では、幹細胞または前駆細胞は、ＣＤ３４^＋として知られる表面抗原マーカーの表面発現が見られ、表面系統抗原マーカーであるＬｉｎの発現が見られないことを特徴とする。

別の実施形態では、対象には、本発明のペプチド、組成物、またはワクチンが、骨髄細胞と共に投与される。別の実施形態では、骨髄細胞と共の投与は、対象における癌を抑制、抑止または治療するために、治療の一部分として、放射線照射の後に実施される。

別の実施形態では、「細胞を接触させる」または「細胞集団を接触させる」という表現は、曝す方法を意味し、別の実施形態では、直接的または間接的に行われる。別の実施形態では、このような接触には、当該技術分野で公知の任意の方法による細胞の直接注入（例えばマイクロインジェクション）が含まれる。また、別の実施形態では、細胞への供給は、間接的であり、例えば、細胞を取り囲む培養液へ供給することにより行われるか、または当該技術分野で公知の任意の経路を介して対象に投与することにより行われる。

別の実施形態では、本発明の方法におけるＣＴＬ生成は、インビボにおいて実施され、インビトロで本発明のペプチドに接触させた抗原提示細胞を対象に導入することにより達成される（例えば、「Paglia et al. (1996) J. Exp. Med. 183:317- 322」を参照）。

別の実施形態では、本発明の方法及び組成物のペプチドは、ＡＰＣに送達される。別の実施形態では、免疫応答の誘起、腫瘍の治療、または腫瘍の成長若しくは再発抑制のために、ペプチドでパルスしたＡＰＣが対象に投与される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態を表す。

別の実施形態では、ペプチドは、該ペプチドをコードするｃＤＮＡの形態でＡＰＣに送達される。別の実施形態では、「抗原提示細胞」（ＡＰＣ）という用語は、必要なＭＨＣ／副刺激分子（Ｔ細胞に提示抗原を効果的に認識させる）を発現する樹枝状細胞（ＤＣ）、単球／マクロファージ、Ｂリンパ球、または他の種類の細胞を意味する。別の実施形態では、前記ＡＰＣは、癌細胞である。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態を表す。

別の実施形態では、前記ＣＴＬは、２つ以上のＡＰＣ集団に接触させられる。別の実施形態では、前記２つ以上のＡＰＣ集団は、互いに異なるペプチドを提示する。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態を表す。

別の実施形態では、ＡＰＣ（例えば、ＤＣ）のサイトゾルで抗原を発現させる方法によって、ＡＰＣにペプチドを送達する。ＡＰＣで抗原を発現させる方法は、当該技術分野で公知である。別の実施形態では、この方法には、（１）本発明のペプチドをコードする裸のＤＮＡをＡＰＣに導入する方法、（２）本発明のペプチドを発現する組み換え型ベクターをＡＰＣに感染させる方法、（３）リポソームを用いて本発明のペプチドをＡＰＣのサイトゾルに導入する方法が含まれる（「Boczkowski D. et al. (1996) J. Exp. Med. 184:465-472」、「Rouse et al. (1994) J. Virol. 68:5685-5689; and Nair et al. (1992) J. Bxp. Med. 175:609-612」を参照）。

別の実施形態では、本明細書に例示されているように、ヒト細胞株１７４×ＣＥＭ．Ｔ２（以下、Ｔ２と呼ぶ）に由来し、かつ内因性ペプチドが細胞表面のＭＨＣクラスＩ分子と結合することを制限する変異を抗原処理経路に有しているフォスターＡＰＣ（Zweerink et al. (1993) J. Immunol. 150:1763-1771）が使用される。

別の実施形態では、本明細書に記載されているように、対象は、発現される天然型タンパク質とは異なる本発明のペプチド、または前記ペプチドを含む組成物／細胞集団に曝される。その後、宿主において天然型のタンパク質／抗原との免疫交差反応が生じる。

別の実施形態では、本発明の方法及び実施形態における対象は、ヒトである。別の実施形態では、対象は、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター、モルモット、ウマ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ネコ、イヌ、サル、またはエープなどの動物である。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明のペプチド、ワクチン、及び組成物は、腫瘍細胞を溶解させる免疫応答を誘起する。

別の実施形態では、本明細書に記載の任意の方法が、インビトロでＣＴＬを誘起するのに使用される。別の実施形態では、ＣＴＬは、エクスビボで誘起される。別の実施形態では、ＣＴＬは、インビトロで誘起される。誘起されたＣＴＬは、別の実施形態では、対象に投与され、それによって、本発明のペプチド、ペプチドを含む発現産物、またはその相同体に関連する疾患が治療される。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明の方法は、本発明のペプチドをコードする遺伝子配列の導入を含み、それには、例えば１つ以上の核酸送達方法が使用される。本発明の核酸は、別の実施形態では、ＤＮＡ、ＲＮＡ、及びＤＮＡとＲＮＡとの混合物を含む、またはＤＮＡ、ＲＮＡ、及びＤＮＡを非核酸要素と共に含む。別の実施形態では、本発明の方法は、本発明のペプチドをコードする核酸を含むベクターを対象に投与するステップを含む（Tindle, R. W. et al. Virology (1994) 200:54）。別の実施形態では、本発明の方法は、ペプチドをコードする裸のＤＮＡを対象に投与するステップ、または別の実施形態では、本発明の２つ以上のペプチドを対象に投与するステップを含む（Nabel, et al. PNAS-USA (1990) 90: 11307）。別の実施形態では、複数のエピトープ、アナログベースの癌ワクチンが使用される（Fikes et al., Design of multi- epitope, analogue-based cancer vaccines. Expert Opin Biol Ther. 2003 Sep;3(6):985-93）。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

核酸は、当該技術分野で公知の任意の方法で対象に投与することができる。この投与方法には、非経口投与若しくは静脈内投与、または別の実施形態では、遺伝子銃による投与が含まれる。別の実施形態では、核酸は、組成物に含まれた状態で投与される。別の実施形態では、前記組成物は、本明細書に記載の任意の実施形態に相当する。

本発明の方法で使用されるベクターは、本発明のペプチドの発現を促進する、または可能にする任意のベクターである。ベクターとして、いくつかの実施形態では、ワクシニア若しくは鶏痘などの弱毒化ウイルス（米国特許第４，７２２，８４８号に記載（参照により、本明細書に含まれる））がある。別の実施形態では、ベクターとしてＢＣＧ（Bacille Calmette Guerin）（「Nature 351:456-460 (1991)」（Stover et al.）に記載されている）がある。本明細書の記載内容から、本発明のペプチドの治療用投与及び予防接種に有用な他の様々なベクター（例えば、チフス菌（Salmonella typhi）のベクターなど）が当業者に明らかになるであろう。

別の実施形態では、ベクターは、本明細書に記載のように、免疫調節因子をさらにコードする。別の実施形態では、本発明のペプチドをコードするベクターを対象に投与すると同時に、またはその前に、またはその後に、免疫調節因子をコードする他のベクターが対象に投与される。

別の実施形態では、本発明のペプチド、組成物、及びワクチンは、他の抗癌化合物及び化学療法薬（癌抗原代替（alternate cancer antigen）標的にするモノクローナル抗体、または別の実施形態では、本発明のペプチドが由来するペプチド若しくはその一部分に相当するＡＡ配列から成るエピトープを標的にするモノクローナル抗体など）と共に対象に投与される、または本発明の方法で使用される。

本発明では、様々な範囲の投与量の実施形態が考えられる。別の実施形態では、投与量は２０μｇペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は１０μｇペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は３０μｇペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は４０μｇペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は６０μｇペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は８０μｇペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は１００μｇペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は１５０μｇペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は２００μｇペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は３００μｇペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は４００μｇペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は６００μｇペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は８００μｇペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は１０００μｇペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は１５００μｇペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は２０００μｇペプチド／日である。

別の実施形態では、投与量は、１０μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、３０μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、４０μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、６０μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、８０μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、１００μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、１５０μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、２００μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、３００μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、４００μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、６００μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、８００μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、１０００μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、１５００μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、２０００μｇペプチド／投与である。

別の実施形態では、投与量は、１０〜２０μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、２０〜３０μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、３０〜６０μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、４０〜８０μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、５０〜１００μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、５０〜１５０μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、１００〜２００μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、２００〜３００μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、３００〜４００μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、４００〜６００μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、５００〜８００μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、８００〜１０００μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、１０００〜１５００μｇペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、１５００〜２０００μｇペプチド／投与である。

別の実施形態では、１回の投与当たりまたは１日当たりのペプチドの全量は、上記の量の１つである。別の実施形態では、１回の投与当たりの全ペプチド投与量は、上記の量の１つである。

各可能な形態は、本発明の別個の実施形態を示す。

本発明では、様々な範囲の投与量の実施形態が考えられる。別の実施形態では、投与量は２０ｍｇ／ペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は１０ｍｇ／ペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は３０ｍｇ／ペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は４０ｍｇ／ペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は６０ｍｇ／ペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は８０ｍｇ／ペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は１００ｍｇ／ペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は１５０ｍｇ／ペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は２００ｍｇ／ペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は３００ｍｇ／ペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は４００ｍｇ／ペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は６００ｍｇ／ペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は８００ｍｇ／ペプチド／日である。別の実施形態では、投与量は１０００ｍｇ／ペプチド／日である。

別の実施形態では、投与量は、１０ｍｇ／ペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、３０ｍｇ／ペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、４０ｍｇ／ペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、６０ｍｇ／ペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、８０ｍｇ／ペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、１００ｍｇ／ペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、１５０ｍｇ／ペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、２００ｍｇ／ペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、３００ｍｇ／ペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、４００ｍｇ／ペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、６００ｍｇ／ペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、８００ｍｇ／ペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、１０００ｍｇ／ペプチド／投与である。

別の実施形態では、投与量は、１０〜２０ｍｇ／ペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、２０〜３０ｍｇ／ペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、２０〜４０ｍｇ／ペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、３０〜６０ｍｇ／ペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、４０〜８０ｍｇ／ペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、５０〜１００ｍｇ／ペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、５０〜１５０ｍｇ／ペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、１００〜２００ｍｇ／ペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、２００〜３００ｍｇ／ペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、３００〜４００ｍｇ／ペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、４００〜６００ｍｇ／ペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、５００〜８００ｍｇ／ペプチド／投与である。別の実施形態では、投与量は、８００〜１０００ｍｇ／ペプチド／投与である。

上記の各投与量は、本発明の別個の実施形態に相当する。

別の実施形態では、本発明は、本発明のペプチド、組成物、またはワクチンを含むキットを提供する。別の実施形態では、前記キットは、ラベルまたは添付文書をさらに含む。別の実施形態では、前記キットは、遅延型過敏反応試験法を用いてＷＴ１特異的ＣＤ４応答を検出するために使用される。別の実施形態では、前記キットは、本明細書で列挙した他の任意の方法のために用いられる。別の実施形態では、前記キットは、当該分野で公知の他の任意の方法のために用いられる。各可能な形態は、本発明の別個の実施形態に相当する。

悪性細胞によってユニークにまたは特異的に発現する抗原の中で、ＷＴ１は、最も有望なものの１つと考えられている（４７）。しかしながら、既に特定され報告された免疫原性ＷＴ１ペプチド抗原の数は非常に限られており、その大部分は、ＨＬＡ対立遺伝子Ａ０２０１、Ａ２４０２及びＤＲＢ１０４０１により提示されるペプチドの組に限定されている。以下に示す例に見られるように、感作のために自家ＡＰＣ上にロードされるＷＴ１アミノ酸配列にわたってオーバーラップした１５量体ペプチドからなるプールを用いて、ＷＴ１ペプチド特異的ＩＦＮγ＋、ＣＤ４＋及びＣＤ８Ｔ細胞応答を４１／５６（７８％）の通常ドナーの血液から発生させ、その後、それらの応答を誘起するエピトープ及びそれらを提示するＨＬＡ対立遺伝子を特定した。上述した４２個のＷＴ１ペプチド抗原のうち、これまでは１つを除いて特定されていなかった。新たに特定された免疫原性ペプチドは、クラスＩのＨＬＡ対立遺伝子により提示される３６個のペプチドと、クラスＩＩのＨＬＡ対立遺伝子により提示される５個のペプチドを含む。クラスＩのＨＬＡ対立遺伝子により提示されたペプチドのうちの、２〜４個の別個のＨＬＡ対立遺伝子によって提示することができる１０個の９量体エピトープが特定された。また、識別可能なＣＤ４＋ＩＦＮγ＋及びＣＤ８＋ＩＦＮγ＋Ｔ細胞を共誘導する、オーバーラップした１１量体配列及び９量体配列が、４つのペンタデカペプチド内に特定された。オーバーラップ配列が同一の１５量体に含まれる場合に、提示ＨＬＡ対立遺伝子の両方またはクラスＩ及びクラスＩＩ提示ＨＬＡ対立遺伝子の両方が遺伝された個体（患者）において、２以上の対立遺伝子によって提示されるエピトープが、増強されたＷＴ１特異性応答を誘起できるか否か或いはどの程度の応答を誘起できるかは、容易に決定することができる。しかしながら、そのようなペプチドをＷＴ１ワクチンに含ませることにより、特にＨＬＡ−Ａ０２０１またはＡ２４０２が遺伝されていない患者たちにおける、ワクチンの適用性を著しく広げることができる。

実施例に示すように、クラスＩＨＬＡ対立遺伝子により提示されるペプチドは、ペプチドがロードされた自己ＡＰＣ及び同種ＡＰＣ（Ｔ細胞の拘束性ＨＬＡ対立遺伝子を、それぞれ試験された培養物中に５０／５１（９９％）及び４８／５１（９４％）の割合で共有する（表１、２））を溶解することができたＩＦＮγ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞を誘起した。さらに重要なことに、試験可能な３６個のＨＬＡ拘束性ＷＴ１ペプチド特異的Ｔ細胞株のうち、２９個のエピトープ（クラスＩＩ対立遺伝子により提示される２／４エピトープ及びクラスＩ対立遺伝子により提示される２７／３２エピトープを含む）に対して特異的なＴ細胞株もまた、Ｔ細胞の拘束ＨＬＡ対立遺伝子を共有するＷＴ＋１白血病芽細胞を溶解することができた。ＨＬＡ拘束型ＷＴ１エピトープに対して特異的なＴ細胞が、同一の白血病患者に由来する同種ＰＨＡ芽（表３Ａ）を溶解できないこと、そして、それに加えて、ＷＴ１ペプチドをロードした自己ＥＢＶＢＬＣＬによって感作したＴ細胞の白血病細胞破壊（leukemocidal）反応を自己ＥＢＶＢＬＣＬのみ（表３Ｂ）によって感作した同一のＴ細胞のアリコットと比較した場合の相違は、白血病細胞破壊（leukemocidal）活性がＷＴ１ペプチド特異的でありアロ反応性Ｔ細胞を混入した結果ではないことを示している。したがって、これらのデータは、特定されたＷＴ１免疫原性ペプチドの２９／３６（８０％）を、ＷＴ１＋白血病細胞によって、ＷＴ１エピトープ特異的Ｔ細胞の認識及び細胞溶解に適切な濃度で処理し提示できることを示す。

図４に、ＷＴ１タンパク質のマップを示す。図４Ｃに、ＨＬＡクラスＩ及びＩＩ対立遺伝子により提示された全ての以前に報告された抗原性エピトープの所在を示す。図４Ｄは、その報告において特定された免疫原性ペプチドの位置を示す。図から明らかなように、以前の報告で、クラスＩＨＬＡ対立遺伝子により提示されるとされた１１個のエピトープ、及びクラスＩＩＨＬＡ対立遺伝子により提示されるとされた１０個のエピトープは、主に、エクソン１、７及び１０によりコードされた配列に集まっており、ＷＴ１ペプチドプールにより感作された通常のＴ細胞によって認識されるエピトープは、主に、最初の５つのエクソンによりコードされた配列に集まっている。したがって、新しいエピトープのうちの２６個は、エクソン５における１７個のアミノ酸配列（ＡＡ配列２５０〜２６６）、またはジンクフィンガー３及び４間に３個のアミノ酸配列（４００−４１０ＫＴＳ）を含むかまたは含まないスプライス変異体から生成されたＷＴ１の４つの主要なアイソフォームの各々に含まれる。エピトープは広く分布しているが、エクソン１におけるＲＮＡ認識ドメイン及びエクソン５におけるスプライシングされた１７ａａセグメントに近位する活性化ドメイン（ＡＡ配列１８１〜２５０）（図４Ｆ）において、エピトープの集団が検出された。後者の領域は、複数のドナーによって最も頻繁に認識されたエピトープも含んでいた（図４Ｅ）。興味深いことに、９つの新しく特定されたエピトープは、ゲスラーら（３７）により最初に報告された、ＷＴ１の（エクソン５＋，ＫＴＳ＋）アイソフォームのエクソン１についてのセントロメアであり、エクソン１（１．５０）のＡＵＧイニシエータの上流に位置するＣＵＧコドンで開始されるＷＴ１の長いアイソフォームを含むＷＴ１遺伝子セグメントによってコードされる、１２６個のアミノ酸配列のＮ末端にマップされる。驚くべきことに、この配列において同定されたエピトープのそれぞれが、ＷＴ１及びＴ細胞の規制ＨＬＡ対立遺伝子を共発現する白血病性芽球に対して細胞溶解性であるＩＦＮγ＋Ｔ細胞を誘起する。

特定の腫瘍により特異的に発現されるＷＴ１、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＨＥＲ２／ｎｅｕ及びＭＡＧＥなどの複数の「自己」タンパク質のうちで、ＷＴ１及びＭＡＲＴ−１のみが健常ドナーにおいて応答を誘起することが分かっている（３１、３２、５１〜５４）。対照的に、これらのタンパク質の各々に特異的なＴ細胞が、これらを過剰発現させる腫瘍を有する患者の一定割合において記録されている（５５）。特に、白血病、骨髄腫、乳癌、前立腺癌及び他の固形癌を有する患者において、ＷＴ１のＲＭＦ、ＣＭＴペプチドに対して特異的なＴ細胞が検出されている（３１、３２、５６〜６１）。卵巣癌を有する患者の５０〜６０％における本研究で特定されたいくつかのＷＴ１エピトープに対する応答は文書にまとめられている。腫瘍を有するホストにおいて応答を誘起したＮＹ−ＥＳＯ−１及びＨＥＲ２／ｎｅｕなどのタンパク質における潜在的な免疫原性を有するエピトープの数が大きいことを考慮すると（６２）、特定される免疫原性ＷＴ１ペプチドの数は、健常ドナーにおけるＷＴ１応答の発生の違いの主要因となるほどの大幅な違いはない。さらに、Pospori et al（６３）は、ＨＬＡ−Ａ０２０１により提示されるＷＴ１ペプチドに特異的な形質導入されたＴＣＲを発現するＨＳＣが、ＨＬＡ−Ａ０２０１トランスジェニックマウスの胸腺で除去されておらず、機能的なメモリーＴ細胞を生成することを示した。しかしながら、この「自己」許容限度の欠如の根拠は不明ではあるが、レズバニら（Rezvani et al）（３１）の研究及び本明細書のデータ（図１Ａ）は、健康なドナーの血液中におけるＷＴ１特異的Ｔ細胞の頻度は低いことを示している。これは、一部には、通常の個体におけるＷＴ１発現のレベルが低く、ＷＴ１を発現する組織分布が限定されていることを反映しているのかもしれない（１８−２０）。最近、レズバニら（６４）は、ＷＴ１ペプチドで繰り返しワクチン接種を受けた患者においてＴ細胞のＷＴ１に対する応答が低下することも示し、これらの応答が高度に規制されることを示唆している。レヘら（Lehe et al）（６５）も、最近、高濃度のＩＬ−２の存在下でＴ細胞をＤＲＢ１０４０２により提示されるＷＴ１ペプチドで感作すると、ＣＤ８＋ＷＴ１特異的Ｔ細胞の応答を抑制することが可能なＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋ＧＩＴＲ＋ＣＤ１２７−制御性Ｔ細胞の生成を優先的に誘起することを示している。

ここで用いられた培養条件の下で、ＷＴ１ペプチドプールが加えられた自家ＤＣ及びＥＢＶＢＬＣＬは、４１／５６の健常ドナー（７３％）からＣＤ８＋及びＣＤ４＋ＩＦＮγ＋ＷＴ１ペプチド特異的Ｔ細胞の生成を優先的に誘導した。各ドナーは、ＷＴ１のうちの１〜３種のエピトープしか認識しなかったが、これらのエピトープの８０％に特異的なＴ細胞が、Ｔ細胞の提示ＨＬＡ対立遺伝子を共有しているＷＴ１＋白血病細胞を認識することができたという事実は、異常発現ＷＴ１の代謝回転及び処理は高く、これらの白血病細胞により発現したＨＬＡ対立遺伝子を抑制することにより複数の別個のＷＴ１エピトープの同時提示が可能となったということを示唆している。これらのエピトープの特定は、養子細胞療法のための強力な殺腫瘍ＷＴ１特異的Ｔ細胞のインビトロ生成のためにも、インビボでＷＴ１を発現するクローン原性腫瘍細胞の根絶のためにＴ細胞応答を刺激するためにより広く適用可能なワクチンの作製のためにも有用である。

一実施形態では、エクソン１より上流側のＷＴ１タンパク質の配列内の（ＳＥＱＩＤＮＯ：１９４の最初の１２６個のアミノ酸の中の）ペプチドは、これまで免疫原性エピトープの未解明部位であったため、本明細書における目的のために有用なペプチドである。

≪実施例１：ＷＴ１由来の合成ペプチドアナログによるＨＬＡ−Ａ０２０１及び−Ａ０３０１の結合≫

＜材料及び方法＞

米国カリフォルニア州のジーンメッド・シンセシス社（Genemed Synthesis Inc）にてペプチドをフルオレニルメチルオキシカルボニル基の化学反応及び固相合成で合成し、高圧液体クロマトグラフィー（high pressure liquid chromatography：ＨＰＬＣ）で精製した。ＨＰＬＣ分析でペプチドの性質を評価し、マトリックス支援レーザー脱離質量分析法で期待分子量を測定した。ペプチドは無菌状態にあり、その純度は＞９０％であった。ペプチドをＤＭＳＯに溶解し、ｐＨ７．４のＰＢＳまたは生理食塩水で希釈して、濃度が５ｍｇ／ｍｌになるようにした。このペプチド溶液を−８０℃で保存した。インビトロの実験には、無関係の対照ペプチドであるＨＬＡＡ２４コンセンサスを使用した。

ペプチド配列分析：

２つのデータベースを使用してペプチド配列分析を行った。第１のデータベースは、Bioinformatics & Molecular Analysis Section（米国ワシントンＤＣの国立衛生研究所）のソフトウエア（「Parker KC et al, Scheme for ranking potential HLA-A2 binding peptides based on independent binding of individual peptide side-chains. J Immunol 152: 163-175, 1994」を参照）であり、ＨＬＡクラスＩ分子からの予想解離半減期係数に基づいて９−ｍｅｒまたは１０-ｍｅｒペプチドにランク付けをする。第２のデータベースは、SYFPEITHI予想ソフトウエアであり、Ｈ．Ｇ．ラメンゼーら（Rammensee HG et al.）の論文（「SYFPEITHI: database for MHC ligands and peptide motifs. Immunogenetics 50: 213-219, 1999」）に記載されている。インビトロの実験のために使用された無関係の対照ペプチドは、クラスＩＩに対しては、ＲＡＳ（ＴＥＹＫＬＶＶＶＧＡＰＧＶＧＫＳＡＬＴＩＱ、ＳＥＱＩＤＮｏ：４９）またはＣＭＬｂ２ａ２（ＶＨＳＩＰＬＴＩＮＫＥＥＡＬＱＲＰＶＡＳＤＦＥ、ＳＥＱＩＤＮｏ：５０）であり、クラスＩに対しては、ＨＩＶｐｏｌ（ＩＬＫＥＰＶＨＧＶ、ＳＥＱＩＤＮｏ：５１）またはＣＭＬＦ（ＹＬＫＡＬＱＲＰＹ、ＳＥＱＩＤＮｏ：５２）であった。

細胞株：

細胞株は、ＲＰＭＩ１６４０培地に５％のウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、ペニシリン、ストレプトマイシン、２ｍＭのグルタミン、２−メルカプトエタノールを添加した培地で、３７℃、５％のＣＯ_２を含む加湿空気下で培養した。Ｔ２は、ＴＡＰ１及びＴＡＰ２を欠失したヒトの細胞株なので、サイトゾルタンパク質由来のペプチドを提示することができない。Ｒａｊｉ細胞は、高レベルのＴＡＰ発現を示すヒトのバーキットリンパ腫細胞である。

実験に使用したヒトの中皮腫細胞株には、肉腫細胞（ＶＡＭＴ、Ｈ２３７３、Ｈ２８）、類上皮細胞（Ｈ２４５２）、及び２相型中皮腫細胞（ＪＭＮ、ＭＳＴＯ及びＨ−ＭｅｓｏｌＡ）が含まれる。細胞株の入手先は、次のとおりである。Ｈ−ＭｅｓｏｌＡ：メリーランド州ベセスダの国立癌研究所（ＮＣＩ）、ＪＭＮ及びＶＡＭＴ：メモリアル・スローン・ケタリング癌センター（ＭＳＫＣＣ）のSirotnak医師、Ｈ−２４５２及びＨ２３７３：ミシガン州デトロイトのウェイン州立大学カルマノス癌研究所のPass医師、Ｈ２８及びＭＳＴＯ：バージニア州マナサスのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）。細胞株は、提供者が推薦した培地にて、５％のＣＯ_２を含む加湿インキュベータで培養した。

中皮腫細胞株であるＭｅｓｏ１１、Ｍｅｓｏ３４、Ｍｅｓｏ３７、Ｍｅｓｏ４７、及びＭｅｓｏ５６を、M Gregoire医師（フランス国ナントの生物学研究所（Institute of Biology））から取得し、ＲＰＭＩ１６４０（Life Technologies）に１０％のウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、１％のペニシリン−ストレプトマイシン、１％のＬ−グルタミンを添加した培地で培養した。全ての細胞は、ＭＳＫＣＣの細胞免疫部門（Department of Cellular Immunology）でＨＬＡタイピングを行った。メラノーマ細胞株であるＭｅｗｏ（ＷＴ１⁻、Ａ２０１^＋）は、ＡＴＣＣから取得した。ＳＫＲＣ−５２腎細胞癌は、ラドウィック癌研究所（Ludwig Institute）のL. Oldから取得した。白血病細胞株は、ＲＰＭＩ１６４０に１０％のＦＣＳ１、１％のペニシリン−ストレプトマイシン、２ｍＭのグルタミン、２−メルカプトエタノールを添加した培地で、３７℃、５％のＣＯ_２下で培養した。Ｐｈ^＋白血病であるＬＡＭＡ８１、ＢＶ１７３及び６９７は、全てＷＴ１^＋及びＡ０２０１^＋であり、HJ Stauss医師（ユニバーシティ・カレッジ・ロンドン）から提供された。ＳＫＬＹ−１６はヒトＢ細胞リンパ腫（ＷＴ１⁻、Ａ０２０１^＋）であり、Ｋ５６２、ＲｗＬｅｕ４、及びＨＬ６０（全てＷＴ１^＋）は、ＡＴＣＣから取得した。

ＨＬＡ−Ａ０２０１分子のペプチド結合及び安定性に関するＴ２アッセイ：

Ｔ２細胞（ＴＡＰ⁻、ＨＬＡ−Ａ０２０１^＋）を、細胞数１×１０^６ｃｅｌｌ／ｍｌの濃度で、ＦＣＳ不含ＲＰＭＩ培地に５μｇ／ｍｌのヒトβ_２ｍ（Sigma, St Louis, MO）を添加した培地で、陽性基準チロシナーゼペプチドまたは被験ペプチドのいずれかの存在下または非存在下（陰性対照）で、様々な最終濃度（５０、１０、１、及び０．１μｇ／ｍｌ）において、２７℃で１晩インキュベートした。Ｔ２細胞を、５μｇ／ｍｌのブレフェルジンＡ（シグマ社）と共に４時間インキュベートした後に、飽和濃度の抗ＨＬＡ−Ａ２．１（ＢＢ７．２）のモノクローナル抗体を用いて３０分間、４℃で標識し、その後２回洗浄した。次に細胞を、飽和濃度のＦＩＴＣ融合ヤギＩｇＧＦ（ａｂ´）２抗マウスＩｇ（Caltag, San Francisco, CA）を用いて３０分間、４℃でインキュベートし、その後２回洗浄し、１％のパラホルムアルデヒド含有ＰＢＳで固定し、FACS Calibur（登録商標）フローサイトメーター（Becton Dickinson, Immunocytometry Systems, San Jose, CA）で分析した。

それぞれのペプチドの濃度に関して観察された平均蛍光強度（mean intensity of fluorescence：ＭＩＦ）を（ペプチド非存在下でのＭＩＦで除算後）、ペプチド結合の指標として使用し、「蛍光インデックス」として表した。安定アッセイを同様に行った。時間０におけるペプチド結合の最初の評価を行った後に、細胞をＲＰＭＩ完全培地で洗浄することにより結合していないペプチドを除去し、０．５μｇ／ｍｌのブレフェルジンＡが常に存在する状態で２、４、６、または８時間インキュベートした。

安定なペプチド−ＨＬＡ−Ａ２．１複合体の数を、免疫蛍光法によって上記の如く推定した。複合体の半減期は、時間＝０でのＭＩＦ値が５０％減少するのに必要な時間の推定値である。

ＷＴ１ペプチド
本発明のペプチド配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：１；図２Ａ）をデザインするために、ゲスラーらの論文（３７）に記載のＷＴ１タンパク質の配列を用いた。この配列は、５７５アミノ酸を含み、Ｎ末端における最初の１２６アミノ酸を欠損しているＷＴ１１６の（エクソン５＋，ＫＴＳ＋）アイソフォームを含む。この配列全体に及ぶ１４１個のペンタデカペプチドは、各々が次のペプチドに１１ａａずつ重複（オーバラップ）しており、インビトロゲン社（Invitrogen）（Baltimore, MD）によって、有効な配列、純度９５％、無菌性、及び内毒素（エンドトキシン）の非存在からなる仕様に合わせて合成されたものである。これら１４１個の１５−ｍｅｒを等量ずつ混合し、各ペプチドが０．３５ｍｃｇ／ｍｌの濃度で含まれるペプチドのトータルプール（total pool）を作製した。このプールをＴ細胞感作に用いた。応答を誘発するペプチドを同定するために、１２個のペンタデカペプチド（４．１７ｍｃｇ／ｍｌ／ペプチド）を含むサブプールを確立して、各ペプチドが２つの互いに重複したサブプールにのみ含まれるようなマッピングマトリックス（mapping matrix）を作成した（図２Ｂ）。

ＷＴ１特異的Ｔ細胞の生成

メモリアル・スローン・ケタリング癌センター（New York, NY）の治験審査委員会により承認されたプロトコルに従って、５６人の同意した健常ドナーから末梢血を採取した。全てのドナーに対して、ＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃ、ＤＲ、ＤＱ座について標準的な方法により高解像度でタイピングを行った。

サイトカインにより活性化された単球（ＣＡＭ）を、抗原提示細胞（ＡＰＣ）として用い、既出（３２）の如く生成した。簡単に説明すると、末梢血単球をプラスチックへの付着によって分離し、１％の自己血清を含むＲＰＭＩ１６４０で培養した。０日目、２日目、４日目に、最終濃度がそれぞれ２０００Ｕ／ｍｌ及び１０００Ｕ／ｍｌになるように、ＧＭ−ＣＳＦ（Berlex, Montville, NJ）及びインターロイキン−４（ＩＬ−４）（R&D Systems, Minneapolis, MN）を加えた。５日目、これらの細胞を、同量のＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−４とともに、ＴＮＦα（１０ｎｇ／ｍｌ）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）（１０００ＩＵ／ｍｌ）、ＩＬ１β（４００ＩＵ／ｍｌ）、ＰＧＥ２（２５ｍＭ−３）（R&D Systems, Minneapolis, MN）でさらに処理した。培養７日目に収集したＣＡＭは、ＦＡＣＳ解析によるところの、ＣＤ８３、ＣＤ８０、ＣＤ８６並びにＨＬＡクラスＩ及びＩＩ対立遺伝子（アレル）を発現した。

本実験において、ＷＴ１ペプチド搭載ＡＰＣ及び対照ＡＰＣとして、または指定された標的として、ＥＢＶ−ＢＬＣＬも用いた。ＥＢＶ−ＢＬＣＬは、既出の如く、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）にＥＢＶ株Ｂ９５．８（３８，３９）を感染させることによって生成した。アシクロビルの存在下で、ＲＰＭＩ１６４０（Gemini）に１０％のウシ胎仔血清（Gemini）を加えた培地で、ＥＢＶ形質転換ＢＬＣＬ（ＥＢＶ−ＢＬＣＬ）を培養した。

ＷＴ１特異的Ｔ細胞の感作及び増殖

ＷＴ１特異的ＣＴＬを生成するために、フィコール・ハイパック（Ficoll-Hypaque）密度勾配遠心分離法によってＰＢＭＣを単離した。既出（３２）の如く、単球をプラスチックへの付着によって除去し、ＮＫ細胞を、免疫磁性ＣＤ５６事前コーティング済みマイクロビーズ（Miltenyi Biotech Inc, MA）への吸収によって除去した。濃縮されたＴ細胞分画を、血清不含培地内で、ＷＴ１ペンタデカペプチドのトータルプールを予め搭載した自己ＣＡＭまたはＥＢＶ−ＢＬＣＬでＲ／Ｓ比（レスポンダ：スティミュレータ）＝２０：１で３時間刺激し、３０００ｃＧｙを照射した。イッセル培地（Yssel's medium）に５％のＡＢヒト血清を添加した培地（ＹＨ５、Gemini）でＴ細胞を培養し、自己ＷＴ１トータルプールを搭載したＣＡＭまたはＥＢＶ−ＢＬＣＬで１週間に１回再刺激し、インターロイキン−２（ＩＬ−２）（Collaborative Biomedical Products, Bedford, MA）を２〜３日毎に１０〜５０Ｕ／ｍｌ与えた。

細胞標的-白血病細胞

２４個の原発性白血病細胞及び１個の白血病細胞株の特徴付けを、ＷＴ１の発現に関して、既出（３２，３８）の如くマウス坑ヒトＷＴ１モノクローナル抗体（Neomarkers, Fremont, CA）を用いた細胞内ＦＡＣＳ染色により行った。ＷＴ１＋白血病細胞には、１１個の初代ＡＭＬ、３つの初代ＡＬＬ及び１つのＢ細胞前駆体ＡＬＬ細胞株から得られた芽球細胞が含まれていた。１０個のＷＴ１白血病細胞を対照として用いた。１０個のうち、３つはＢ細胞前駆体、７つはＡＭＬであった。

全てのＥＢＶＢＬＣＬ及び白血病細胞に対して、ＨＬＡＡ、Ｂ、Ｃ、ＤＲ、ＤＱの各対立遺伝子について標準的な方法により高解像度でタイピングを行った。

Ｔ細胞応答の評価

ＷＴ１特異的Ｔ細胞によるＩＦＮγの産生

自己ＰＢＭＣに搭載されたＷＴ１トータルプール、ＷＴ１サブプールまたは単一ＷＴ１の１５−ｍｅｒまたは９−ｍｅｒＷＴ１ペプチドでの二次刺激に応答してＩＦＮγを産生するＴ細胞の割合及び表現型（ＣＤ４及びＣＤ８）を、既出（３８，４０）の如く、細胞内ＩＦＮγを含むＴ細胞のＦＡＣＳ解析によって測定した。

免疫原性エピトープのマッピング

ＷＴ１トータルプールで３５〜４２日間刺激したＴ細胞のアリコートを洗浄し、ＷＴ１ペンタデカペプチドの各サブプールのうちの１つを搭載した自己ＰＢＭＣで一晩再刺激した。各サブプールに対するＴ細胞応答を、既出（４１）の如く細胞内ＩＦＮγを有するＴ細胞のＦＡＣＳ解析によって定量した。次に、マッピンググリッド（mapping grid）（図２Ｂ）を用いて、Ｔ細胞応答を誘発する２つのサブプールにより唯一共有される特異的ＷＴ１１５−ｍｅｒを同定した。その後、これらの１５−ｍｅｒ、及び１５−ｍｅｒ内の９−ｍｅｒまたは１１−ｍｅｒ配列を、該配列の免疫原性を確認し、応答を誘発する１５−ｍｅｒ内の免疫原性エピトープを明らかにするための第２の単一ペプチドスティミュレータ（刺激因子）として分析した。

細胞傷害性

非修飾であるかまたはトータルプールを搭載しているかのいずれかであるＨＬＡマッチ及びミスマッチＣＡＭ標的のパネル、Ｔ細胞応答を誘発するＷＴ１の同定された１５−ｍｅｒ、あるいは９−ｍｅｒまたは１１−ｍｅｒエピトープに対して、感作Ｔ細胞のＷＴ１に特異的かつＨＬＡ拘束性の細胞傷害性を、既出（３２）の如く標準的なＣｒ５１放出アッセイにて測定した。それに加えて、既出（４１）の如く、ペプチドを予め搭載した同種異系ＣＡＭのパネル（各々が、応答性のＷＴ１特異的Ｔ細胞に発現した１つのＨＬＡ対立遺伝子を共有する）に対する感作Ｔ細胞の細胞傷害性を測定することによって、各免疫原性エピトープを提示する拘束性ＨＬＡ対立遺伝子を同定した。この細胞傷害性分析Ｃｒ５１アッセイにおいて、既出（３２）の如く、拘束性ＨＬＡ対立遺伝子を発現するＷＴ１−及びＷＴ１＋白血病細胞株または原発性白血病細胞に対するＷＴ１エピトープ特異的ＣＴＬの細胞傷害性も評価した。

同定された免疫優性ＷＴ１由来エピトープの免疫原性

互いに異なる個人において同定されたＷＴ１ペプチドエピトープの免疫原性を推定するために、新たに同定されるＷＴ１エピトープを提示するものとして前もって同定した一連のよく見られるＨＬＡ対立遺伝子（すなわち、ＨＬＡ−Ａ０２０１、Ａ０３０１、Ａ２４０２、Ｂ０７０２）のうちの１つを発現する健常ドナーのグループのＰＢＭＣから分離した濃縮Ｔ細胞を、インビトロで、当該ＨＬＡ対立遺伝子を発現しかつ予め同定したＷＴ１エピトープまたは無関係のペプチドを搭載した人工抗原提示細胞（ＡＡＰＣ）（４２）で感作した。ＡＡＰＣのパネルは、次の１つのＨＬＡ対立遺伝子、すなわち、ＨＬＡＡ０２０１、Ａ０１０１、Ａ０３０１、Ａ２４０２、Ｂ０７０２またはＢ０８０１のうちの１つを発現する複数のＡＡＰＣを含み、これらは、既出（４２）の如く生成されたものである。ＩＬ２の存在下でＴ細胞をペプチド搭載ＡＡＰＣとともに同時培養して３５日後に、ＣＴＬを、感作ペプチドまたは無関係のペプチドを搭載した自己ＰＢＭＣで一晩二次的に刺激し、それらのＩＦＮγ応答を調べた。これらの応答は、刺激性ＷＴ１由来ペプチドを搭載した自己ＰＢＭＣでの二次刺激に応答してＩＦＮγを産生するＴ細胞の割合が、ＰＢＭＣ単独でインキュベートされたＩＦＮγＴ細胞のバックグラウンド割合を２倍以上超えた場合に、陽性として記録した。

≪実施例２：ペンタデカペプチドのＷＴ１トータルプールに対する健常ドナーの応答≫

最初に、４１人の健常ドナーのＰＢＭＣにおけるＷＴ１特異的ＩＦＮγ＋Ｔ細胞の出現頻度を測定した。これらの頻度は、０．０１〜１．８２％の範囲内にあり、４１人の個人のうち１０人のみにおいて自己ＰＢＭＣ単独で刺激したＴ細胞で検出されたＩＦＮγ＋Ｔ細胞のバックグラウンドを超えていた（図１Ａ）。５６人の健常ドナーから得られたＴ細胞を、３５〜４２日間にわたり、ＷＴ１ペンタデカペプチドのトータルプールを搭載した自己ＣＡＭを用いてインビトロで感作すると、４１／５６の事例（７３％）で、ＩＦＮγ＋Ｔ細胞が著しく増殖した（図１Ａ）。ＷＴ１ペプチドプールでの二次刺激に応答してＩＦＮγを産生した４１人のドナーのうち３８人から得られたＴ細胞を含む３８／５６のドナーから生成されたＴ細胞は、ＷＴ１トータルプールを搭載した自己ＰＨＡ芽球に対する細胞傷害性も示した（図１Ｂ）。

ＨＬＡ−Ａ０２０１対立遺伝子への結合が予測される既に報告されているＷＴ１エピトープのうちの１つである_{１２６−１３４}ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（ＳＥＱＩＤＮＯ：２１；ＲＭＦ）（４３）の能力を、自己ＣＡＭに搭載された場合にＨＬＡ−Ａ０２０１＋健常ドナー（ｎ＝１４）におけるＷＴ１反応性Ｔ細胞を刺激するためのＷＴ１ペンタデカペプチドのトータルプールと比較した。ＲＭＦペプチドで最初に感作したＩＦＮγ＋Ｔ細胞の出現頻度の増加が９／１４のドナーにおいて検出され、そのうちの７人は、プールされたペプチドでの二次刺激にも応答した（図１Ｃ）。対照的に、ＲＭＦにも応答する６つのＣＴＬラインを含めて、ＷＴ１ペプチドプールで最初に感作した１２／１４のＣＴＬラインは、ＷＴ１トータルプールでの二次刺激後に、ＩＦＮγ＋Ｔ細胞の出現頻度が高かった。トータルプールで感作したＴ細胞によって認識されたＷＴ１のエピトープ（下記参照）をマッピングし、１２／１４のドナーにおけるＲＭＦ以外のエピトープを同定した。これらのエピトープに対する応答の大きさは、ＲＭＦペプチドに対するものよりもずっと大きかった（図１Ｃ）。ＲＭＦで最初に感作した４／１４のＣＴＬラインのみが、ＲＭＦ搭載自己ＰＨＡ芽球に対する細胞傷害性を示し、そのうちの３つは、ＷＴ１プールを搭載した自己ＰＨＡ芽球を溶解させることもできた（図１Ｄ）。対照的に、ＲＭＦペプチド搭載芽球を溶解させた３／１４を含む、ＷＴ１ペプチドのプールで感作した１０／１４のＣＴＬは、ＷＴ１トータルプールを搭載したＰＨＡ芽球に対する傷害性を示した（図１Ｄ）。このように、ＨＬＡＡ０２０１＋ドナーの高い割合において、ＷＴ１トータルプールでのＴ細胞の刺激は、ＲＭＦペプチドと結合する１つのＨＬＡＡ０２０１での刺激よりも、一貫してＷＴ１特異的Ｔ細胞の応答を誘発する。

図１の詳細な説明。ペンタデカペプチドから生成されたＷＴ１のトータルプールを搭載した自己ＡＰＣでの刺激による、健常ドナー（ｎ＝５６）のＰＢＭＣから生成したＣＴＬのＷＴ１に特異的な応答：
Ａ．ＰＢＭＣ単独（バックグラウンドとして）、ＷＴ１タンパク質の配列全体に及ぶペンタデカペプチドのトータルプールで一晩共インキュベートしたＰＢＭＣ（ＰＢＭＣ＋ＷＴ１プール）、及びＷＴ１ペプチド搭載ＰＢＭＣで一晩共インキュベートした予め生成しておいたＷＴ１特異的Ｔ細胞におけるＩＦＮγの産生；
Ｂ．ＷＴ１−（自己ＰＨＡ刺激芽球）標的及びＷＴ１＋（ＷＴ１ペンタデカペプチドのトータルプールを搭載した自己ＰＨＡ刺激芽球）標的に対する、ＷＴ１トータルプールでの、エフェクタ：スティミュレータ比＝５０：１での刺激によってインビトロで生成したＷＴ１特異的ＣＴＬの細胞傷害性；
Ｃ．異なるレスポンダ細胞（キラー細胞）集団（末梢血由来ＰＢＭＣ、自己ＣＡＭに搭載されたＲＭＦペプチドでインビトロで感作した予め生成したＣＴＬ、及びＷＴ１１５−ｍｅｒのトータルプールで感作した予め生成したＣＴＬ）において、非修飾であるかまたは下記のうちの１つ（ＲＭＦペプチド、ＷＴ１トータルプールで感作したＣＴＬにおいてエピトープマッピング法によって同定したＷＴ１の優性エピトープ、１４１個のペンタデカペプチドからなるＷＴ１トータルプール）を搭載した自己ＰＢＭＣで一晩二次刺激後に、ＦＡＣＳ染色によって測定されたＩＦＮγ応答；
Ｄ．ＲＭＦ９−ｍｅｒを搭載した自己ＣＡＭまたはＷＴ１１５−ｍｅｒのトータルプールでの感作によってインビトロで生成したＷＴ１特異的Ｔ細胞の細胞傷害性。自己ＷＴ１陰性標的（ＰＨＡ活性化芽球）に対して、及び同標的にＲＭＦペプチド、ＷＴ１１５−ｍｅｒのトータルプールまたは同Ｔ細胞株に関して同定された優性ＷＴ１エピトープを搭載したものに対して、Ｔ細胞の細胞傷害性を評価した。

≪実施例３：ＷＴ１反応性Ｔ細胞によって認識されるＷＴ１タンパク質の免疫原性エピトープの同定≫

プールされたペプチドでの感作によって生成されるＷＴ１ＣＴＬは、エピトープ特異的でありかつＨＬＡ拘束性を示す。

重複したＷＴ１ペンタデカペプチドのトータルプールでインビトロで感作したＴ細胞によって認識されたエピトープ（図２Ａ）を、任意の１つの１５−ｍｅｒが唯２つの互いに交差するサブプールによって共有されるように形成されたＷＴ１１５−ｍｅｒのサブプールのマッピンググリッドに応答するＩＦＮγ＋Ｔ細胞を定量することによって同定した（図２Ｂ）。図２Ｃの代表的な実施例に示すように、ペンタデカペプチド＃７５を共有するサブプール＃３及び＃１９に応答して、著しく増加した数のＩＦＮγ＋Ｔ細胞が選択的に生成される。その後、Ｔ細胞を、互いに隣接しかつ各々がペプチド＃７５に１１ａａ重複している１５−ｍｅｒで刺激した。図に示すように、ペプチド＃７５に応答してＩＦＮγ＋Ｔ細胞が選択的に生成される（図２Ｄ）。新たに同定された免疫原性ＷＴ１エピトープは、_{１７４−１８２}ＨＳＦＫＨＥＤＰＭである。その後、これらのＴ細胞の細胞傷害性を、非修飾であるかまたはこのペプチドを搭載した同種異系ＣＡＭ（各ＣＡＭは、複数の被験ＣＴＬにより発現された１つのＨＬＡ対立遺伝子を共有する）のパネルに対して評価した。図２Ｅに示すように、Ｔ細胞は、ペプチド搭載自己標的及びＨＬＡ−Ｂ３５０１対立遺伝子を発現する標的を選択的に溶解させたが、Ｔ細胞ドナーに受け継がれた他のＨＬＡ対立遺伝子を共有するペプチド搭載標的を溶解させなかった。これらのＴ細胞はまた、ＨＬＡ−Ｂ３５０１対立遺伝子を共発現するＷＴ１＋ＢＡＬＬ細胞を溶解させた。

図２の詳細な説明。ＷＴ１タンパク質の配列全体に及ぶ互いに重複したペンタデカペプチドのトータルプールの生成及びエピトープマッピングのための方法：
Ａ．５７５アミノ酸からなるＷＴ１タンパク質の配列及び１１アミノ酸が重複したペンタデカペプチドの原理を示している。タンパク質全体に及ぶように、全部で１４１個のペンタデカペプチドが必要である。ゲスラーら論文（３７）に記載の５７５アミノ酸の配列を用いた。この配列は、Ｎ末端に追加の１２６アミノ酸を含む。最長の、最も高頻度で記述されるＷＴ１アイソフォームＤとともに用いられるＷＴ１配列内におけるアミノ酸の配列番号をマッチさせるために、最長アイソフォームＤにおいて記述される最初の１２６アミノ酸に負の値を割り振り、次の４４９アミノ酸に正の値を割り振った；
Ｂ．各々が最大で１２個のＷＴ１由来ペンタデカペプチドを含む２４個のサブプールからなるマッピンググリッド。各ペプチドは、２つの互いに交差するサブプール内に唯一含まれる：例えば、ペプチド７５は、サブプール３及び１９により唯一共有されている；
Ｃ．自己ＰＢＭＣ搭載されたＷＴ１ペンタデカペプチドのサブプールでの一晩の二次刺激に応答してＷＴ１で感作したＣＴＬによるＩＦＮγの産生。１つの共通のペンタデカペプチド＃７５を含むサブプール＃３及び＃１９に対する優勢応答が観察される；
Ｄ．この図の２Ｃにおいて決定された分析により、最も高い応答を誘発するサブプール内に含まれる１つのペンタデカペプチドでの一晩の二次刺激に反応して、ＷＴ１ＣＴＬによりＩＦＮγが産生されることは、ペンタデカペプチド＃７５内に優性免疫原性配列が含まれていることの立証となる；
Ｅ．ＷＴ１ＣＴＬドナーによって発現された１つのＨＬＡ対立遺伝子にマッチする同種異系ＣＡＭまたはＰＨＡ芽球のパネルに対するＣｒ５１放出アッセイにより同定されたペプチド＃７５に応答するＷＴ１特異的Ｔ細胞のＨＬＡ拘束性。これらは、グラフのｘ軸に沿って示されている。上記アッセイに用いたＣＡＭまたはＰＨＡ芽球は、非修飾（灰色の棒グラフ）またはＷＴ１優性エピトープ搭載（黒色の棒グラフ）である。ＷＴ１ＣＴＬのＷＴ１に特異的な細胞傷害性は、Ｂ３５０１ＨＬＡ対立遺伝子によって拘束される。

Ｔ細胞応答を誘発するＷＴ１ペプチドのマッピングが、異なるクラスＩ及びＩＩＨＬＡ対立遺伝子によって提示される免疫原性エピトープの多様性を同定する。

他の４０人の応答する健常ドナーから得られたＴ細胞によって応答を誘発するＷＴ１エピトープをマッピングするため及び最終的には同定するために、同じ方法を用いた。これらのドナーのうち、８人（１９％）は排他的に１つのＷＴ１ペプチドのみに応答するが、１８人（４３％）は２つのペプチド、１６人（３９％）は３つのペプチドにそれぞれ応答する。１つ以上のＷＴ１ペプチドに対する応答を誘発する培養物においては、サブプールに対するＩＦＮγ＋Ｔ細胞応答のパターンは、潜在的免疫原性ペプチドの最初の分離を可能にするのに十分に特徴的であった。その後、Ｔ細胞応答を引き起こす特異的ペプチドを確認するべく、各候補ペプチドを個々に評価した。

同定したＷＴ１の免疫原性ペプチド及びそれらを提示するＨＬＡ対立遺伝子を表１に示す。Ｔ細胞応答を誘発するＷＴ１ペプチド４２個のうち、４１個が新たに同定されたものであり、これらのＷＴ１ペプチドのうちのただ１つ、すなわち、ＨＬＡ−Ａ０２０１により提示された_{１２６−１３４}ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ九量体だけは、既出でありかつこの対立遺伝子により提示されたときに免疫原性を示していた（４３）。ペプチド９１、_{２３５−２４９}ＣＭＴＷＮＱＭＮＬＧＡＴＬＫＧは、本治験においてＨＬＡＤＲＢ１０４０２拘束性ＣＤ４＋Ｔ細胞応答を誘発したエピトープを含むが、_{２３５−２４３}ＣＭＴ九量体も含み、該九量体は、ＨＬＡＡ０２０１及びＨＬＡＡ２４０２より提示されることが知られている（２９）。クラスＩＨＬＡ対立遺伝子により提示されるペプチドのうちの２６個に関しては、１つの提示ＨＬＡ対立遺伝子が、最初に治験を行ったドナーにおいて同定された。しかし、これらのペプチドに応答するＴ細胞のＨＬＡ拘束性を別のドナーで調べたところ、これらのペプチドのうちの１０個は、２つまたは３つの異なるクラスＩＨＬＡ対立遺伝子により提示された場合にＴ細胞応答を誘発することができることが分かった。１つの配列（_{２３８−２４６}ＷＮＱＭＮＬＧＡＴペプチド）は、異なるドナーにおいて４つの特徴的なＨＬＡクラスＩ対立遺伝子のうちの任意の１つによって提示されたときに、強いＩＦＮγ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘発した。

表１．ＷＴ１タンパク質の配列全体に及ぶ互いに重複したペンタデカペプチドのプールを用いて、Ｔ細胞応答についてのＩＦＮγ産生アッセイによって同定されたＷＴ１由来免疫原性エピトープ。影付きの行は、２つ以上のＨＬＡ対立遺伝子によって提示され得るペプチドを表している。太字のペプチド配列は、実施例５で検証されるものを表しており、その結果は表３に示す。

*-コンピュータアルゴリズムによって前もって予測されたかまたは文献に記載されているエピトープ
**-自己ＷＴ１ペプチド搭載ＡＰＣに対して細胞毒性を示すが白血病細胞に対しては細胞毒性を示さないＴ細胞
***-一方の対立遺伝子を他方の対立遺伝子なしに受け継いでいる標的がないため、どちらかの対立遺伝子にＨＬＡ拘束性を与えることができない。

このエピトープマッピング方法を用いて、ＨＬＡクラスＩＩ対立遺伝子によって拘束されるＣＤ４＋Ｔ細胞応答を刺激する５つの新たな１１−ｍｅｒペプチドを同定した。これらの各エピトープに応答して生成されたＣＤ４＋Ｔ細胞は、高レベルのＩＦＮγ＋Ｔ細胞を発現した。これら５つのペプチドエピトープのうちの３つに応答するＣＤ４＋Ｔ細胞は、ペプチド搭載ＰＨＡ芽球及び、拘束性クラスＩＩＨＬＡ対立遺伝子を選択的に共有する非修飾ＷＴ１＋白血病芽球に対する特異的細胞傷害性も示した。

５６人の被験ドナーのうち４人において、ＷＴ１１５−ｍｅｒの全プールで感作したＴ細胞のエピトープマッピングが、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔの両方の細胞応答を誘発する特異的１５−ｍｅｒ（１５−ｍｅｒペプチド＃２０、４１、９１、１１２）を同定した。これらの応答を誘発する配列の微細マッピングが、配列内にＨＬＡクラスＩ拘束性ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘発する９−ｍｅｒも含まれるようなＨＬＡクラスＩＩ拘束性ＣＤ４＋Ｔ細胞応答を刺激する４つの１１−ｍｅｒを同定した。これらの二重刺激ペプチドの一方の代表例を図３に示す。この場合、ペプチド４１は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋の両方のＩＦＮγ＋Ｔ細胞応答を誘発することが分かった（図３Ａ）。ＣＤ４＋ＩＦＮγ＋Ｔ細胞応答を誘発するペプチド４１内での１１−ｍｅｒの精細マッピング（図３Ａ）は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋の両方のＩＦＮγ＋Ｔ細胞応答を引き起こす最も免疫原性が高い配列として_{３８−４８}ＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹペプチドを示唆する。著しく、ペプチド４１感作Ｔ細胞は、９ａａ配列（_{３８−４６}ＬＤＦＡＰＰＧＡＳ）または１１ａａ配列（_{３８−４８}ＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹ）のいずれかで感作したＰＨＡ芽球を溶解させたが、_{３６−４６}ＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳまたは_{３７−４７}ＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡ１１−ｍｅｒを搭載したＰＨＡ芽球を溶解させなかった。それに続いて、培養物におけるＴ細胞のＨＬＡ拘束性（図３Ｄ）を調べて明らかになったことは、クラスＩＩＨＬＡ拘束性Ｔ細胞は、ＬＤＦ１１−ｍｅｒを搭載している場合にのみ対立遺伝子ＤＲＢ１０４０２及びＤＱＢ１０３０２を共有する複数の標的に対して選択的に細胞傷害性を示すが、ＨＬＡＡ０２０１によって拘束されるＴ細胞は、１１−ｍｅｒまたは９−ｍｅｒのいずれかのＬＤＦペプチドを搭載した標的を溶解させることができるということである。この場合、ＤＲＢ１０４０２またはＤＱＢ１０３０２が拘束性のクラスＩＩＨＬＡ対立遺伝子であるか否かを確認することはできなかった。その理由は、他の対立遺伝子を発現せずに１つの対立遺伝子を発現する細胞がパネルにおいて得られなかったためである。

図３の詳細な説明。ＨＬＡクラスＩ及びＩＩ拘束性のＷＴ１特異的Ｔ細胞は、自己ＣＡＭに搭載された互いに重複した１５−ｍｅｒのＷＴ１トータルプールで感作したＷＴ１ＣＴＬにおいて、ＷＴ１タンパク質に由来する同じ免疫優性ペプチドの１５−ｍｅｒに応答する。
Ａ．同一優性ＷＴ１由来１５−ｍｅｒ＃４１での一晩の二次刺激に応答して、ＣＤ８＋及びＣＤ４＋ＷＴ１特異的Ｔ細胞によるＩＦＮｇの産生；
Ｂ．ペプチド＃４１（ＬＤＦ−ＬＤＦＡＡＰＧＡＳ）に特有であるかまたは、互いに隣接しかつ重複する１５−ｍｅｒ＃４０（ＰＶＬ-ＰＶＬＤＦＡＰＰＧ、ＶＬＤ-ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ）及び＃４２（ＤＦＡ-ＤＦＡＰＰＧＡＳＡ）内に含まれるかのいずれかである９−ｍｅｒのパネルを搭載した自己ＰＢＭＣでの一晩の二次刺激の後の、ＩＦＮｇの産生による、ペンタデカペプチド＃４１内でのアミノ酸の免疫原性配列の同定。１５−ｍｅｒ＃４１，ＬＤＦ内で唯一提示される９−ｍｅｒのみがＩＦＮｇ応答を誘発する；
Ｃ．標準的なＣｒ５１放出アッセイにてＥ：Ｔ比＝２５：１で決定された１１−ｍｅｒＬＤＦ及び１１−ｍｅｒＬＤＦ内に含まれる９−ｍｅｒＬＤＦの両方に対して、ペプチド＃４１内に含まれかつ自己ＰＨＡ刺激芽球に搭載された９−ｍｅｒ及び１１−ｍｅｒのパネルに対するＷＴ１ＣＴＬのペプチドに特異的な細胞傷害性が観察される；
Ｄ．ＷＴ１ＣＴＬの細胞傷害性のＨＬＡ拘束性：ＨＬＡ−Ａ０２０１拘束性Ｔ細胞は、１１−ｍｅｒまたは９−ｍｅｒのいずれかが搭載されている標的を溶解させるが、ＨＬＡＤＲＢ１０４０２拘束性Ｔ細胞は、１１−ｍｅｒが搭載されている標的のみを溶解させる。

≪実施例４：新たに同定したＷＴ１エピトープに対して生成されたＴ細胞は、ＷＴ１＋白血病に対する細胞傷害性を示す≫

ＷＴ１ペプチド特異性を確立し、ＷＴ１ペプチドのプールに応答するＩＦＮγ＋Ｔ細胞のＨＬＡ拘束性を調べた時点で、非修飾及びペプチド搭載の自己ＰＨＡ芽球、同定したペプチドを搭載した一連の同種異系ＰＨＡ芽球、及びＷＴ１に特異的なＴ細胞の拘束性ＨＬＡ対立遺伝子を共発現するＷＴ１タンパク質を発現する原発性急性白血病細胞芽球に対する上記Ｔ細胞の細胞傷害性を調べた。後者の検査に関しては、拘束性対立遺伝子を発現しないＷＴ１＋白血病細胞及び拘束性対立遺伝子を共有するＷＴ１−細胞が対照として機能した。結果を表１及び表２にまとめる。

表１に見られるように、同定したペプチド搭載自己ＡＰＣでの二次刺激の後にＩＦＮγ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する５１個の培養物のうち、５０個は、標的とされたペプチドが搭載されている自己ＰＨＡ芽球に対する有意な特異的細胞傷害性も示した。これらのうち、４８個の培養物はまた、応答性Ｔ細胞の拘束性ＨＬＡ対立遺伝子を共有する同種異系ペプチド搭載ＰＨＡ芽球またはＤＣを溶解させた。クラスＩＩＨＬＡ対立遺伝子により提示される３／５の同定した１１−ｍｅｒペプチドに応答するＣＤ４＋ＩＦＮγ＋Ｔ細胞は、ペプチド搭載自己及びＨＬＡ共有同種異系クラスＩＩ＋標的も溶解させた。

ペプチド搭載標的に対してエピトープ特異的細胞傷害性を示すＴ細胞培養物のうち、３６個について、Ｔ細胞の拘束性ＨＬＡ対立遺伝子を共発現するＷＴ１＋白血病細胞に対する細胞傷害性を調べることができた。これら３６個のうちの２７個が、ＷＴ１＋白血病細胞に対するＨＬＡ拘束性細胞傷害性を示した（表２）。５つのペプチド、すなわち、_６−１５ＲＤＬ、_{４６−５４}ＳＡＹ、_{５８−６６}ＰＡＰ、_{２２５−２３３}ＮＬＹ、及び_{４３６−４４５}ＮＭＨ（ＨＬＡＡ０２０１により提示される）に特異的なＴ細胞は、ＨＬＡ−Ａ０２０１^＋ＷＴ１＋白血病細胞を溶解させることができなかった。しかし、_{４６−５４}ＳＡＹペプチドに特異的なＨＬＡＢ４００１拘束性Ｔ細胞は、このＨＬＡ対立遺伝子を共発現するＷＴ１＋白血病細胞を溶解させることができた。同様に、ＨＬＡＡ０２０１、Ｂ４００１またはＡ２４０２を共発現するＮＭＨペプチドが搭載されている標的を溶解させるＮＭＨペプチドに特異的なＨＬＡ拘束性Ｔ細胞株は、ＨＬＡＢ４００１対立遺伝子を発現させるＷＴ１＋白血病細胞のみを溶解させることができた。

表２．ＷＴ１タンパク質の配列全体に及ぶ重複したペンタデカペプチドのプールを用いて、Ｔ細胞応答についてのＩＦＮγ産生アッセイにより同定されたＷＴ１由来免疫原性エピトープ。太字の配列は、実施例５で説明する被験ペプチドを示しており、結果を表３に示す。

*-既に報告されているエピトープ；
**-自己ＷＴ１ペプチド搭載ＡＰＣに対して細胞毒性を示すが白血病細胞に対しては細胞毒性を示さないＴ細胞。

Ｔ細胞を拘束する対立遺伝子を共有する同種異系ＷＴ１＋白血病細胞に対して観察されるＷＴ１ペプチド特異的Ｔ細胞の細胞傷害性は、Ｔ細胞株に同種反応性Ｔ細胞が存在することを示すものではないということを確認するために、これらのＨＬＡ拘束性ＷＴ１ペプチド特異的Ｔ細胞株のうちの１３個について、同一の白血病患者から培養したＷＴ１＋白血病細胞及びＷＴ１−ＰＨＡ芽球に対する細胞傷害性を調べた。表３ａに示すように、ＷＴ１特異的Ｔ細胞は、ＷＴ１＋白血病細胞を溶解させたが、同じ患者のＰＨＡ芽球を溶解させなかった。

表３ａ．ＷＴ１タンパク質の配列全体に及ぶ重複したペンタデカペプチドのプールを用いて、Ｔ細胞応答についてのＩＦＮγ産生アッセイにより同定し、かつＷＴ１陽性原発性白血病細胞及び同じ起源のＰＨＡ芽球に対して調べた、ＷＴ１由来免疫原性エピトープ特異的Ｔ細胞の細胞傷害性

*-コンピュータアルゴリズムによって前もって予測されたかまたは文献に記載されているエピトープ
**-白血病サンプルは、不死化白血病細胞株によって、またはＷＴ１＋白血病患者から得られた原発性白血病細胞によって提示された。
***-ＰＨＡ芽球は、ＷＴ１⁺原発性白血病と同じ患者に由来するＰＢＭＣから生成された。

本治験のために白血病芽球を提供した全ての患者からＰＨＡ芽球を入手できたわけではない。それでもなお、これらの結果は、ＷＴ１特異的Ｔ細胞の細胞傷害性が、コンタミネーションがある同種反応性に起因するものではないという証拠を提供する。第２の、より包括的であるがより直接的ではない一連の証拠は、ＷＴ１ペプチドプール搭載または非修飾のいずれかの自己ＥＢＶＢＬＣＬに対する、これらの原発性白血病に対する、インビトロで同時期に感作された３５人のドナーに由来するＴ細胞の応答の一対比較によって得られる。表３ｂに示すように、ＷＴ１ペプチドプールで感作したＴ細胞を搭載したＥＢＶＢＬＣＬは、３５の事例のうちの２５の事例において、Ｔ細胞を拘束するＨＬＡ対立遺伝子を共有するＷＴ１＋白血病細胞を溶解させた。対照的に、自己ＥＢＶＢＬＣＬ単独で感作したＴ細胞は常に、同じＷＴ１＋白血病標的を溶解させることができなかった。

表３ｂ．自己ＥＢＶＢＬＣＬ、またはプールされたＷＴ１ペプチドを搭載したＥＢＶＢＬＣＬのいずれかで感作された健常ドナーから得られた、明らかになったエピトープに特異的でありかつＨＬＡ拘束性を示すＴ細胞の、Ｔ細胞を拘束するＨＬＡ対立遺伝子を共有する原発性ＷＴ１＋白血病に対する白血病活性（Leukemocidal activity）

*-コンピュータアルゴリズムによって前もって予測されたかまたは文献に記載されているエピトープ

≪実施例５：新たに同定されたＷＴ１エピトープの免疫原性≫

１人のドナーにおける応答のマッピングにより同定されたペプチドが、同じ提示ＨＬＡ対立遺伝子を有する個人の高い割合において免疫原性も示すことを確認するために、これらのエピトープが、ＨＬＡ対立遺伝子を発現する６〜１２人の個人からなる群において、適切に拘束されたＴ細胞応答を誘発することができるか否かを判定した。この目的のために、各ドナーから得られたＴ細胞を、人工抗原提示細胞（ＡＡＰＣ）のパネルであって各々が１つのＨＬＡ対立遺伝子、具体的には、Ａ０２０１、Ａ０３０１、Ａ２４０２またはＢ０７０２を発現するＡＡＰＣのパネル（４２）に搭載した同定したエピトープで感作した。表４に示すように、ＨＬＡ−Ａ０２０１によって提示される同定された９つのペプチドの全てが、ＨＬＡ−Ａ０２０１＋個人の或る割合で、ＷＴ１に特異的なＩＦＮγ＋Ｔ細胞応答を刺激することができた。既に報告されている、ＨＬＡ−Ａ０２０１対立遺伝子によって提示される_{１２６−１３４}ＲＭＦＰＮＡＰＹＬペプチドは、被験ＨＬＡ−Ａ０２０１＋健常ドナーの５／１２（４２％）において応答を誘発した。比較すると、他の８つの被験ペプチドのうちの５つが、同じＨＬＡ−Ａ０２０１＋ドナーの５０〜７５％においてＷＴ１ペプチドに特異的な応答を誘発した。ＨＬＡ−Ｂ０７０２対立遺伝子によって提示される２つのＷＴ１エピトープもまた、被験個人のそれぞれ５０％及び６３％において、ＷＴ１に特異的なＴ細胞応答を誘発した（表４）。被験ペプチドの全てが、それらのペプチドを提示するＨＬＡ対立遺伝子を有する少なくとも２人の追加ドナーにおいて、特異的な応答を誘発した。

表４．１つのＨＬＡ対立遺伝子を発現するＡＡＰＣに搭載された同定済みのＷＴ１ペプチドに応答する健常ドナーの割合

≪実施例６：プールされたＷＴ１１５−ｍｅｒに対する応答をマッピングすることにより同定したペプチドに対する応答と、結合アルゴリズムによって免疫原性を示すことが予測される既に報告されているＷＴ１ペプチドに対する応答との比較≫

マッピング方法によって同定される個々のＷＴ１ペプチドに対する健常ドナーのＴ細胞による一次応答を、既出（４４，４５）の結合アルゴリズムを用いて、提示ＨＬＡ対立遺伝子への結合指数がより高いと予想されるフランキング配列を含む他のＷＴ１ペプチドに対する応答と比較した。上表４に示したように、８／１２のマッピング済みエピトープの予測結合指数は、ＨＬＡＡ０２０１により提示された、最も研究されたＷＴ１ペプチドであるＲＭＦの予測結合指数よりも幾分低いだけであった。しかし、それらの解離時間は著しく低下していた。それにもかかわらず、健常ドナーの高い割合において、これらのペプチドの各々に対するＴ細胞応答が誘発された。

５つの例において、マッピングされたペプチド特異性（すなわち、_{（−９９）−（−９１）}ＴＨＳ、_{（−２２）−（−１９）}ＫＬＧ、_{２２−３１}ＧＧＣ、_{１２６−１３４}ＲＭＦ及び_{（−１２５）−（−１１７）}ＲＱＲ）は、刺激１５−ｍｅｒ内で結合アルゴリズムによって予測される提示ＨＬＡ対立遺伝子について最も高い親和性を有するペプチドと同じであった。最も高い結合指数を有すると予想された配列とマッピングされた配列とが異なっていた例では、個々のマッピングされたペプチドに応答したドナーの割合は、より高い親和性を有すると予想される隣接エピトープに応答して生成されたものと同じかまたはそれより大きかった。例えば、被験ＨＬＡＡ０２０１ドナーのうちの８／１２（６７％）において_{３８−４６}ＬＤＦペプチドに対するＩＦＮγ＋Ｔ細胞応答が生じたが、予想され既に報告（４６）されているエピトープ_37-45ＶＬＤＦＡＰＰＧＡに対する応答はなかった。同様に、ＨＬＡＡ２４０２＋ドナーのうち、４／６のドナー（６０％）が_{２３９−２４８}ＮＱＭＮＬＧＡＴＬペプチドに応答したが、この対立遺伝子により提示されることが既に報告（２９）されている_{２３５−２４３}ＣＭＴＷＮＱＭＮＬペプチドに応答したのは１／６のドナーのみであった。

マトリックスマッピングにより同定されたＨＬＡＡ０２０１によって提示されたペプチドを、より高い予想結合指数を有するフランキングペプチドと直接比較するために、等濃度で混合したペプチドを、ＨＬＡＡ０２０１＋ＡＡＰＣに搭載し、ＨＬＡＡ０２０１＋健常ドナーのうちの８人から得られたＴ細胞を感作するのに使用した。感作の３５日後、Ｔ細胞を洗浄し、個々のペプチドを搭載した放射線照射自己ＰＢＭＣのアリコートで２４時間二次的に再刺激した。その後、応答するＩＦＮγ＋Ｔ細胞をＦＡＣＳによって定量した。その結果（図５に示す）から、２２〜３１ＧＧＣペプチドは、最も低い結合指数及び最も短い予測解離時間を有しているが、７／８のドナーにおいて強いＩＦＮγ＋Ｔ細胞応答を誘発したことが明らかになった。さらに、３／８のドナーが_６−１５ＲＤＬ、_{１０−１８}ＡＬＬ及び_７−１５ＤＬＮペプチドに応答したが、応答マッピングによって同定された_６−１５ＲＤＬペプチドは、より多くの数のＩＦＮγ＋Ｔ細胞を生じさせた。_{（−７５）−（−６７）}ＡＩＬＤＦＬＬＬＱとフランキング_{（−７８）−（−７０）}ＬＬＡＡＩＬＤＦＬ配列との比較において、ＡＩＬペプチドは、より優れた応答を、より高い割合のドナー（６／８ｖｓ．３／８のドナー）において誘発した。同様に、マッピングした_{３８−４６}ＬＤＦＡＰＰＧＡＳペプチドと既に報告されている_{３７−４５}ＶＬＤＦＡＰＰＧＡペプチド（４６）との比較において、ＬＤＦペプチドは８人のドナーのうちの５人において強い応答を誘発したが、ＶＬＤペプチドはこれらのドナーのうちの２人のみにおいて低い応答を誘発した。

図５の詳細な説明。インビトロ応答のエピトープマッピングによって同定された９−ｍｅｒペプチドと、同一１５−ｍｅｒ内のペプチドまたは互いに隣接する重複１５−ｍｅｒペプチド（より高い結合親和性及び免疫原性を有すると予想される）との等モル混合物に対するＩＦＮγ+Ｔ細胞応答。
Ａ．エピトープマッピングスタディにおいてＨＬＡＡ０２０１＋ドナーが応答した_６−１５ＲＤＬ及び_{２２−３１}ＧＧＣペプチドを含むアミノ酸＋２から＋３１に及ぶ九量体の混合物に対する応答。
Ｂ．インビトロでマッピングされた_{（−７５）−（−６７）}ＡＩＬＤＦＬＬＬＱエピトープ及びより高い結合親和性を有すると予測されるフランキングペプチド_{（−７８）−（−７０）}ＬＬＡＡＩＬＤＦＬに対する応答。
Ｃ．インビトロでマッピングされた_{３８−４６}ＬＤＦＡＰＰＧＡＳエピトープ及びより高い結合親和性を有すると予測される重複_{３７−４５}ＶＬＤＦＡＰＰＧＡに対する応答。

図５は、ＷＴ１タンパク質のマップを示している。図５Ｃは、ＨＬＡクラスＩ及びＩＩ対立遺伝子によって提示される全ての既に報告されている抗原性エピトープの局在性を明確にし、図５Ｄは、本報告において同定された免疫原性ペプチドの位置を示している。図に示すように、クラスＩにより提示されることが既に報告されている１１個のエピトープ及びクラスＩＩＨＬＡ対立遺伝子により提示される１０個のエピトープは、主としてエクソン１、７及び１０によってコードされる配列においてクラスタ化されるが、ＷＴ１ペプチドプールで感作した正常なＴ細胞によって認識されたエピトープは、主として最初の５つのエクソンによってコードされる配列においてクラスタ化される。よって、新たなエピトープのうちの２６個が、ジンクフィンガー３、４間でエクソン５または３つのアミノ酸配列（_{４００−４１０}ＫＴＳ）において１７アミノ酸配列（ａａ２５０〜２６６）を含むかまたは含まないスプライスバリアントから得られたＷＴ１の４つの主要なアイソフォームの各々に含まれる。エピトープは広く分散されているが、エピトープのクラスタは、エクソン１のＲＮＡ認識ドメイン及びエクソン５のスプライシングされた１７ａａセグメントの近位にある活性化ドメイン（ａａ１８１〜２５０）において検出された（図５Ｆ）。後者の領域には、複数のドナーによって最も高頻度で認識されたエピトープも含まれていた（図５Ｅ）。新たに同定された９つのエピトープは、ＷＴ１の（エクソン５^＋，ＫＴＳ^＋）アイソフォームのエクソン１のセントロメア側に位置しかつエクソン１に関してＡＵＧ開始コドンの上流にあるＷＴ１のＣＵＧコドンから開始する長いアイソフォームを含むような、ゲスラーらの論文³⁷に最初に掲載されたＷＴ１遺伝子の或るセグメントによってコードされるＮ末端における１２６アミノ酸配列に位置する⁵⁰。著しく、この配列において同定されたエピトープの各々は、ＷＴ１及びＴ細胞の拘束性ＨＬＡ対立遺伝子を共発現する白血病芽球に対して細胞傷害性を示すＩＦＮγ^＋Ｔ細胞を生じさせる。

≪実施例７：卵巣癌におけるペプチドの阻害効果≫

卵巣癌の治療における本明細書に記載のペプチドの有用性を２つの治験で評価した。第１の治験では、Ｔ細胞を、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスに注入する前に、様々な投与量でＳＫＯＶ３−Ａ２卵巣癌細胞とともにプレインキュベートすることによって、異なるＷＴ１ペプチドに特異的なＴ細胞の卵巣腫瘍の生着への阻害効果を評価した。以下の免疫優性エピトープに特異的なＴ細胞培養液を、上記した方法を用いて作製した。Ａ０２０１拘束性ＷＴ１ペプチドＬＫＴＨＴＴＲＴＨＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８２）に特異的なＴ細胞；Ａ０３０１拘束性ＷＴ１ペプチドＲＱＲＰＨＰＧＡＬ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２）に特異的なＴ細胞及びＡ０２０１拘束性ＷＴ１ペプチドＨＦＰＰＳＬＰＰＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４５）Ｔ細胞。調べたＴ細胞と腫瘍細胞との比率は、５０：１、１０：１、５：１及び対照（Ｔ細胞なし）であった。腫瘍の注入に続いて、腫瘍量を生物発光イメージングによってモニタリングした。各投与量において３つ全てのＴ細胞株に関して、対照と比較して、時間とともに腫瘍量の顕著な減少が見られた。さらに、腫瘍細胞をＷＴ１ペプチド特異的Ｔ細胞とともにプレインキュベートすることで、マウスの生存期間が延びた。対照群では、腫瘍注入後７０日目までに全マウスが死亡した。生存期間の増加（生存率の上昇）は、Ｔ細胞：腫瘍細胞の投与量（用量）と用量反応関係があることを示しており、全てのＴ細胞株では５０：１の投与量で９６日目に何匹かの動物が尚も生存しており、ＬＫＴＨＴＴＲＴＨＴ特異的Ｔ細胞株では１０：１の投与量で同様であった。

第２の実験では、予め確立しておいた卵巣癌ＳＫＯＶ３−Ａ２異種移植片を有するＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスに対して、ＷＴ１ペプチドに特異的なＴ細胞を静脈内投与した。評価したＴ細胞株は、Ａ０２０１拘束性ＷＴ１ペプチドＬＫＴＨＴＴＲＴＨＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８２）に特異的なＴ細胞及びＡ０３０１拘束性ＷＴ１ペプチドＲＱＲＰＨＰＧＡＬ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２）に特異的なＴ細胞であった。腫瘍量を生物発光法によってモニタリングし、腫瘍浸潤をヒトＣＤ３＋細胞によって評価し、生存期間を記録した。どちらの場合も、ＷＴ１特異的Ｔ細胞は、対照と比べて腫瘍量を減少させ、ヒトＣＤ３＋細胞による腫瘍浸潤を増加させ、かつ生存期間を増加させた。

≪実施例８：白血病患者のＴ細胞によるエピトープの認識≫

血縁者または非血縁者である健常ドナーからの同種骨髄移植後に再発した患者の養子療法において、上記したＷＴ１由来ペンタデカペプチドの全プールで感作した移植ドナー由来Ｔ細胞を用いて第１相（フェーズＩ）臨床試験を行った。ＨＬＡ拘束性対立遺伝子及び対応する免疫優性ＷＴ１エピトープは、次のとおりである。Ａ０２０１，ＳＥＱＩＤＮＯ：１４７；Ａ０２０３，ＳＥＱＩＤＮＯ：１７６及び１８３；Ｂ３５０３及びＣ０４０１，ＳＥＱＩＤＮＯ：１６１及び１６９；Ａ６９０１，ＳＥＱＩＤＮＯ：１７７；Ａ０２０１，ＳＥＱＩＤＮＯ：１８２；Ｂ４７０１及びＤＲＢ_１０１０２，ＳＥＱＩＤＮＯ：１４８及び１４９；Ａ３１０１，ＳＥＱＩＤＮＯ：１４５；Ｂ４４０２，ＳＥＱＩＤＮＯ：１５８及び１６６；Ｂ３５０３，ＳＥＱＩＤＮＯ：１４６及び１６２；ＤＲＢ_１１１０４，ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９。用いたＷＴ１に特異的なＴ細胞を生じさせる免疫優性エピトープの幾つかは、エクソン１より上流の遺伝子のＮ末端領域内のエピトープ、すなわち、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４５、１４７、１４８及び１４９に向けられていたことに留意されたい。ドナーのうちの２人がＰＧＣＬＱＱＰＥＱＱＧ，ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９に応答し、２人の治療患者はともに養子移植後にＷＴ１＋白血病細胞が一時的に排除されていた。

≪実施例９：ペンタデカペプチド≫

以下のペンタデカペプチドを合成した。Ｈ２ＮはペプチドのＮ末端、−ＣＯＯＨはＣ末端を指す。

表５．ペンタデカペプチドの配列
ＳＥＱＩＤＮＯ：１．Ｈ２Ｎ−ＳＲＱＲＰＨＰＧＡＬＲＮＰＴＡ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：２．Ｈ２Ｎ−ＰＨＰＧＡＬＲＮＰＴＡＣＰＬＰ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：３．Ｈ２Ｎ−ＡＬＲＮＰＴＡＣＰＬＰＨＦＰＰ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：４．Ｈ２Ｎ−ＰＴＡＣＰＬＰＨＦＰＰＳＬＰＰ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：５．Ｈ２Ｎ−ＰＬＰＨＦＰＰＳＬＰＰＴＨＳＰ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：６．Ｈ２Ｎ−ＦＰＰＳＬＰＰＴＨＳＰＴＨＰＰ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：７．Ｈ２Ｎ−ＬＰＰＴＨＳＰＴＨＰＰＲＡＧＴ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：８．Ｈ２Ｎ−ＨＳＰＴＨＰＰＲＡＧＴＡＡＱＡ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：９．Ｈ２Ｎ−ＨＰＰＲＡＧＴＡＡＱＡＰＧＰＲ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１０．Ｈ２Ｎ−ＡＧＴＡＡＱＡＰＧＰＲＲＬＬＡ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１１．Ｈ２Ｎ−ＡＱＡＰＧＰＲＲＬＬＡＡＩＬＤ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１２．Ｈ２Ｎ−ＧＰＲＲＬＬＡＡＩＬＤＦＬＬＬ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１３．Ｈ２Ｎ−ＬＬＡＡＩＬＤＦＬＬＬＱＤＰＡ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１４．Ｈ２Ｎ−ＩＬＤＦＬＬＬＱＤＰＡＳＴＣＶ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１５．Ｈ２Ｎ−ＬＬＬＱＤＰＡＳＴＣＶＰＥＰＡ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１６．Ｈ２Ｎ−ＤＰＡＳＴＣＶＰＥＰＡＳＱＨＴ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１７．Ｈ２Ｎ−ＴＣＶＰＥＰＡＳＱＨＴＬＲＳＧ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１８．Ｈ２Ｎ−ＥＰＡＳＱＨＴＬＲＳＧＰＧＣＬ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１９．Ｈ２Ｎ−ＱＨＴＬＲＳＧＰＧＣＬＱＱＰＥ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：２０．Ｈ２Ｎ−ＲＳＧＰＧＣＬＱＱＰＥＱＱＧＶ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：２１．Ｈ２Ｎ−ＧＣＬＱＱＰＥＱＱＧＶＲＤＰＧ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：２２．Ｈ２Ｎ−ＱＰＥＱＱＧＶＲＤＰＧＧＩＷＡ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：２３．Ｈ２Ｎ−ＱＧＶＲＤＰＧＧＩＷＡＫＬＧＡ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：２４．Ｈ２Ｎ−ＤＰＧＧＩＷＡＫＬＧＡＡＥＡＳ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：２５．Ｈ２Ｎ−ＩＷＡＫＬＧＡＡＥＡＳＡＥＲＬ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：２６．Ｈ２Ｎ−ＬＧＡＡＥＡＳＡＥＲＬＱＧＲＲ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：２７．Ｈ２Ｎ−ＥＡＳＡＥＲＬＱＧＲＲＳＲＧＡ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：２８．Ｈ２Ｎ−ＥＲＬＱＧＲＲＳＲＧＡＳＧＳＥ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：２９．Ｈ２Ｎ−ＧＲＲＳＲＧＡＳＧＳＥＰＱＱＭ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：３０．Ｈ２Ｎ−ＲＧＡＳＧＳＥＰＱＱＭＧＳＤＶ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：３１．Ｈ２Ｎ−ＧＳＥＰＱＱＭＧＳＤＶＲＤＬＮ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：３２．Ｈ２Ｎ−ＱＱＭＧＳＤＶＲＤＬＮＡＬＬＰ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：３３．Ｈ２Ｎ−ＳＤＶＲＤＬＮＡＬＬＰＡＶＰＳ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：３４．Ｈ２Ｎ−ＤＬＮＡＬＬＰＡＶＰＳＬＧＧＧ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：３５．Ｈ２Ｎ−ＬＬＰＡＶＰＳＬＧＧＧＧＧＣＡ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：３６．Ｈ２Ｎ−ＶＰＳＬＧＧＧＧＧＣＡＬＰＶＳ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：３７．Ｈ２Ｎ−ＧＧＧＧＧＣＡＬＰＶＳＧＡＡＱ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：３８．Ｈ２Ｎ−ＧＣＡＬＰＶＳＧＡＡＱＷＡＰＶ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：３９．Ｈ２Ｎ−ＰＶＳＧＡＡＱＷＡＰＶＬＤＦＡ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：４０．Ｈ２Ｎ−ＡＡＱＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：４１．Ｈ２Ｎ−ＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：４２．Ｈ２Ｎ−ＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＧＧ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：４３．Ｈ２Ｎ−ＰＧＡＳＡＹＧＳＬＧＧＰＡＰＰ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：４４．Ｈ２Ｎ−ＡＹＧＳＬＧＧＰＡＰＰＰＡＰＰ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：４５．Ｈ２Ｎ−ＬＧＧＰＡＰＰＰＡＰＰＰＰＰＰ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：４６．Ｈ２Ｎ−ＡＰＰＰＡＰＰＰＰＰＰＰＰＰＨ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：４７．Ｈ２Ｎ−ＡＰＰＰＰＰＰＰＰＰＨＳＦＩＫ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：４８．Ｈ２Ｎ−ＰＰＰＰＰＰＨＳＦＩＫＱＥＰＳ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：４９．Ｈ２Ｎ−ＰＰＨＳＦＩＫＱＥＰＳＷＧＧＡ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：５０．Ｈ２Ｎ−ＦＩＫＱＥＰＳＷＧＧＡＥＰＨＥ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：５１．Ｈ２Ｎ−ＥＰＳＷＧＧＡＥＰＨＥＥＱＣＬ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：５２．Ｈ２Ｎ−ＧＧＡＥＰＨＥＥＱＣＬＳＡＦＴ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：５３．Ｈ２Ｎ−ＰＨＥＥＱＣＬＳＡＦＴＶＨＦＳ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：５４．Ｈ２Ｎ−ＱＣＬＳＡＦＴＶＨＦＳＧＱＦＴ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：５５．Ｈ２Ｎ−ＡＦＴＶＨＦＳＧＱＦＴＧＴＡＧ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：５６．Ｈ２Ｎ−ＨＦＳＧＱＦＴＧＴＡＧＡＣＲＹ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：５７．Ｈ２Ｎ−ＱＦＴＧＴＡＧＡＣＲＹＧＰＦＧ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：５８．Ｈ２Ｎ−ＴＡＧＡＣＲＹＧＰＦＧＰＰＰＰ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：５９．Ｈ２Ｎ−ＣＲＹＧＰＦＧＰＰＰＰＳＱＡＳ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：６０．Ｈ２Ｎ−ＰＦＧＰＰＰＰＳＱＡＳＳＧＱＡ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：６１．Ｈ２Ｎ−ＰＰＰＳＱＡＳＳＧＱＡＲＭＦＰ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：６２．Ｈ２Ｎ−ＱＡＳＳＧＱＡＲＭＦＰＮＡＰＹ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：６３．Ｈ２Ｎ−ＧＱＡＲＭＦＰＮＡＰＹＬＰＳＣ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：６４．Ｈ２Ｎ−ＭＦＰＮＡＰＹＬＰＳＣＬＥＳＱ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：６５．Ｈ２Ｎ−ＡＰＹＬＰＳＣＬＥＳＱＰＡＩＲ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：６６．Ｈ２Ｎ−ＰＳＣＬＥＳＱＰＡＩＲＮＱＧＹ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：６７．Ｈ２Ｎ−ＥＳＱＰＡＩＲＮＱＧＹＳＴＶＴ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：６８．Ｈ２Ｎ−ＡＩＲＮＱＧＹＳＴＶＴＦＤＧＴ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：６９．Ｈ２Ｎ−ＱＧＹＳＴＶＴＦＤＧＴＰＳＹＧ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：７０．Ｈ２Ｎ−ＴＶＴＦＤＧＴＰＳＹＧＨＴＰＳ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：７１．Ｈ２Ｎ−ＤＧＴＰＳＹＧＨＴＰＳＨＨＡＡ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：７２．Ｈ２Ｎ−ＳＹＧＨＴＰＳＨＨＡＡＱＦＰＮ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：７３．Ｈ２Ｎ−ＴＰＳＨＨＡＡＱＦＰＮＨＳＦＫ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：７４．Ｈ２Ｎ−ＨＡＡＱＦＰＮＨＳＦＫＨＥＤＰ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：７５．Ｈ２Ｎ−ＦＰＮＨＳＦＫＨＥＤＰＭＧＱＱ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：７６．Ｈ２Ｎ−ＳＦＫＨＥＤＰＭＧＱＱＧＳＬＧ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：７７．Ｈ２Ｎ−ＥＤＰＭＧＱＱＧＳＬＧＥＱＱＹ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：７８．Ｈ２Ｎ−ＧＱＱＧＳＬＧＥＱＱＹＳＶＰＰ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：７９．Ｈ２Ｎ−ＳＬＧＥＱＱＹＳＶＰＰＰＶＹＧ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：８０．Ｈ２Ｎ−ＱＱＹＳＶＰＰＰＶＹＧＣＨＴＰ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：８１．Ｈ２Ｎ−ＶＰＰＰＶＹＧＣＨＴＰＴＤＳＣ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：８２．Ｈ２Ｎ−ＶＹＧＣＨＴＰＴＤＳＣＴＧＳＱ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：８３．Ｈ２Ｎ−ＨＴＰＴＤＳＣＴＧＳＱＡＬＬＬ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：８４．Ｈ２Ｎ−ＤＳＣＴＧＳＱＡＬＬＬＲＴＰＹ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：８５．Ｈ２Ｎ−ＧＳＱＡＬＬＬＲＴＰＹＳＳＤＮ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：８６．Ｈ２Ｎ−ＬＬＬＲＴＰＹＳＳＤＮＬＹＱＭ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：８７．Ｈ２Ｎ−ＴＰＹＳＳＤＮＬＹＱＭＴＳＱＬ−ＣＯＯＨ
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ＳＥＱＩＤＮＯ：８９．Ｈ２Ｎ−ＹＱＭＴＳＱＬＥＣＭＴＷＮＱＭ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：９０．Ｈ２Ｎ−ＳＱＬＥＣＭＴＷＮＱＭＮＬＧＡ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：９１．Ｈ２Ｎ−ＣＭＴＷＮＱＭＮＬＧＡＴＬＫＧ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：９２．Ｈ２Ｎ−ＮＱＭＮＬＧＡＴＬＫＧＶＡＡＧ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：９３．Ｈ２Ｎ−ＬＧＡＴＬＫＧＶＡＡＧＳＳＳＳ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：９４．Ｈ２Ｎ−ＬＫＧＶＡＡＧＳＳＳＳＶＫＷＴ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：９５．Ｈ２Ｎ−ＡＡＧＳＳＳＳＶＫＷＴＥＧＱＳ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：９６．Ｈ２Ｎ−ＳＳＳＶＫＷＴＥＧＱＳＮＨＳＴ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：９７．Ｈ２Ｎ−ＫＷＴＥＧＱＳＮＨＳＴＧＹＥＳ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：９８．Ｈ２Ｎ−ＧＱＳＮＨＳＴＧＹＥＳＤＮＨＴ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：９９．Ｈ２Ｎ−ＨＳＴＧＹＥＳＤＮＨＴＴＰＩＬ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１００．Ｈ２Ｎ−ＹＥＳＤＮＨＴＴＰＩＬＣＧＡＱ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１０１．Ｈ２Ｎ−ＮＨＴＴＰＩＬＣＧＡＱＹＲＩＨ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１０２．Ｈ２Ｎ−ＰＩＬＣＧＡＱＹＲＩＨＴＨＧＶ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１０３．Ｈ２Ｎ−ＧＡＱＹＲＩＨＴＨＧＶＦＲＧＩ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１０４．Ｈ２Ｎ−ＲＩＨＴＨＧＶＦＲＧＩＱＤＶＲ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１０５．Ｈ２Ｎ−ＨＧＶＦＲＧＩＱＤＶＲＲＶＰＧ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１０６．Ｈ２Ｎ−ＲＧＩＱＤＶＲＲＶＰＧＶＡＰＴ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１０７．Ｈ２Ｎ−ＤＶＲＲＶＰＧＶＡＰＴＬＶＲＳ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１０８．Ｈ２Ｎ−ＶＰＧＶＡＰＴＬＶＲＳＡＳＥＴ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１０９．Ｈ２Ｎ−ＡＰＴＬＶＲＳＡＳＥＴＳＥＫＲ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１１０．Ｈ２Ｎ−ＶＲＳＡＳＥＴＳＥＫＲＰＦＭＣ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１１１．Ｈ２Ｎ−ＳＥＴＳＥＫＲＰＦＭＣＡＹＰＧ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１１２．Ｈ２Ｎ−ＥＫＲＰＦＭＣＡＹＰＧＣＮＫＲ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１１３．Ｈ２Ｎ−ＦＭＣＡＹＰＧＣＮＫＲＹＦＫＬ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１１４．Ｈ２Ｎ−ＹＰＧＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１１５．Ｈ２Ｎ−ＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１１６．Ｈ２Ｎ−ＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１１７．Ｈ２Ｎ−ＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧＥＫＰＹ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１１８．Ｈ２Ｎ−ＨＳＲＫＨＴＧＥＫＰＹＱＣＤＦ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１１９．Ｈ２Ｎ−ＨＴＧＥＫＰＹＱＣＤＦＫＤＣＥ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１２０．Ｈ２Ｎ−ＫＰＹＱＣＤＦＫＤＣＥＲＲＦＳ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１２１．Ｈ２Ｎ−ＣＤＦＫＤＣＥＲＲＦＳＲＳＤＱ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１２２．Ｈ２Ｎ−ＤＣＥＲＲＦＳＲＳＤＱＬＫＲＨ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１２３．Ｈ２Ｎ−ＲＦＳＲＳＤＱＬＫＲＨＱＲＲＨ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１２４．Ｈ２Ｎ−ＳＤＱＬＫＲＨＱＲＲＨＴＧＶＫ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１２５．Ｈ２Ｎ−ＫＲＨＱＲＲＨＴＧＶＫＰＦＱＣ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１２６．Ｈ２Ｎ−ＲＲＨＴＧＶＫＰＦＱＣＫＴＣＱ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１２７．Ｈ２Ｎ−ＧＶＫＰＦＱＣＫＴＣＱＲＫＦＳ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１２８．Ｈ２Ｎ−ＦＱＣＫＴＣＱＲＫＦＳＲＳＤＨ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１２９．Ｈ２Ｎ−ＴＣＱＲＫＦＳＲＳＤＨＬＫＴＨ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１３０．Ｈ２Ｎ−ＫＦＳＲＳＤＨＬＫＴＨＴＲＴＨ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１３１．Ｈ２Ｎ−ＳＤＨＬＫＴＨＴＲＴＨＴＧＫＴ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１３２．Ｈ２Ｎ−ＫＴＨＴＲＴＨＴＧＫＴＳＥＫＰ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１３３．Ｈ２Ｎ−ＲＴＨＴＧＫＴＳＥＫＰＦＳＣＲ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１３４．Ｈ２Ｎ−ＧＫＴＳＥＫＰＦＳＣＲＷＰＳＣ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１３５．Ｈ２Ｎ−ＥＫＰＦＳＣＲＷＰＳＣＱＫＫＦ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１３６．Ｈ２Ｎ−ＳＣＲＷＰＳＣＱＫＫＦＡＲＳＤ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１３７．Ｈ２Ｎ−ＰＳＣＱＫＫＦＡＲＳＤＥＬＶＲ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１３８．Ｈ２Ｎ−ＫＫＦＡＲＳＤＥＬＶＲＨＨＮＭ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１３９．Ｈ２Ｎ−ＲＳＤＥＬＶＲＨＨＮＭＨＱＲＮ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１４０．Ｈ２Ｎ−ＬＶＲＨＨＮＭＨＱＲＮＭＴＫＬ−ＣＯＯＨ
ＳＥＱＩＤＮＯ：１４１．Ｈ２Ｎ−ＨＮＭＨＱＲＮＭＴＫＬＱＬＡＬ−ＣＯＯＨ

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Claims

単離されたＷＴ１ペプチドであって、
前記ＷＴ１ペプチドは、ＷＴ１タンパク質のエクソン１より上流側の最初の１２６個のアミノ酸からなる配列内のペプチドであり、前記最初の１２６個のアミノ酸からなる配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９４の１番目から１２６番目までのアミノ酸からなる配列であり、前記ＷＴ１ペプチドは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９４の１番目から６０番目までのアミノ酸からなる配列内か、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１９４の８０番目から９０番目までのアミノ酸からなる配列内に位置し、
前記ＷＴ１ペプチドは、
ＡＩＬＤＦＬＬＬＱ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４７）、ＲＱＲＰＨＰＧＡＬ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２）、ＧＡＬＲＮＰＴＡＣ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４３）、ＴＨＳＰＴＨＰＰＲ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４６）、ＰＧＣＬＱＱＰＥＱＱＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９）、ＰＬＰＨＦＰＰＳＬ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４４）、ＨＦＰＰＳＬＰＰＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４５）、ＬＬＡＡＩＬＤＦＬ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８４）、及びＡＬＲＮＰＴＡＣＰＬ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１９１）からなる群より選択されるアミノ酸配列からなることを特徴とするペプチド。
医薬組成物であって、
請求項１に記載の単離されたＷＴ１ペプチドと、
薬学的に許容される担体、媒体または賦形剤とを含むことを特徴とする医薬組成物。
ワクチンであって、
（ａ）請求項１に記載の１以上の単離されたＷＴ１ペプチドと、
（ｂ）アジュバントまたは担体とを含むことを特徴とするワクチン。
請求項３に記載のワクチンであって、
前記アジュバントが、ＱＳ２１、フロインド不完全アジュバント、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、ＢＣＧ、ミョウバン、成長因子、サイトカイン、ケモカイン、インターロイキン、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ、またはＧＭ−ＳＦであることを特徴とするワクチン。
ワクチンであって、
（ａ）請求項１に記載の単離されたＷＴ１ペプチドと、
（ｂ）抗原提示細胞とを含むことを特徴とするワクチン。
請求項５に記載のワクチンであって、
前記抗原提示細胞が、樹枝状細胞、単球、マクロファージ、サイトカインにより活性化された単球、またはＥＢＶ形質転換Ｂリンパ芽球様細胞（ＥＢＶ−ＢＬＣＬ）であることを特徴とするワクチン。
請求項６に記載のワクチンであって、
前記抗原提示細胞が、細胞株に由来する前記樹枝状細胞であることを特徴とするワクチン。
請求項３〜６のいずれかに記載のワクチンであって、
リンパ球、単球、マクロファージ、樹枝状細胞、内皮細胞、幹細胞、またはそれらの組み合わせを含む細胞集団を更に含み、
前記細胞集団は、自己細胞、同系細胞、または同種異系細胞であることを特徴とするワクチン。
請求項８に記載のワクチンであって、
前記細胞集団は、末梢血、白血球血液製剤、アフェレーシス血液製剤、末梢リンパ節、腸管関連リンパ系組織、脾臓、胸腺、臍帯血、腸間膜リンパ節、肝臓、免疫傷害部位、膵臓、脳脊髄液、腫瘍標本、または肉芽腫組織から得られたものであること特徴とするワクチン。
インビトロまたはエクスビボでＷＴ１に特異的な細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ＷＴ１に特異的なＣＤ８＋リンパ球、ＷＴ１に特異的なＣＤ４＋リンパ球、またはそれらの組み合わせの形成及び増殖を誘導する方法であって、
１以上のペプチドでリンパ球細胞集団を刺激するステップを含み、
それによって、ＷＴ１に特異的なリンパ球の形成及び増殖を誘導するようにしたことを特徴とし、
前記１以上のペプチドは、ＷＴ１タンパク質のエクソン１より上流側の最初の１２６個のアミノ酸からなる配列内のＷＴ１ペプチドから選択され、前記最初の１２６個のアミノ酸からなる配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９４の１番目から１２６番目までのアミノ酸からなる配列であり、前記ＷＴ１ペプチドは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９４の１番目から６０番目までのアミノ酸からなる配列内か、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１９４の８０番目から９０番目までのアミノ酸からなる配列内に位置し、
前記ＷＴ１ペプチドは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４７、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４９、１８４、及び１９１から選択されたアミノ酸配列からなることを特徴とする方法。
請求項１０に記載の方法であって、
前記刺激するステップが、
前記１以上のペプチドと、アジュバント、担体、または抗原提示細胞を組み合わせてリンパ球細胞集団を刺激するステップを含むことを特徴とする方法。
請求項８または９に記載のワクチンであって、
前記細胞集団が、ヒトまたはドナーから得られたものであることを特徴とするワクチン。
請求項１０または１１に記載の方法であって、
前記細胞集団が、ヒトまたはドナーから得られたものであることを特徴とする方法。
請求項３〜９及び１２のいずれかに記載のワクチンであって、
ＷＴ１発現癌を有する対象を治療するために使用されるか、または前記対象におけるＷＴ１発現癌の発生率若しくは再発率を減少させるために使用されることを特徴とするワクチン。
ＷＴ１発現癌を有する対象を治療するための医薬、または前記対象におけるＷＴ１発現癌の発生率若しくは再発率を減少させるための医薬を製造するための、請求項１０または１１に記載の方法によって得られるＷＴ１に特異的な細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ＷＴ１に特異的なＣＤ８＋リンパ球、またはＷＴ１に特異的なＣＤ４＋リンパ球の使用。
請求項１４に記載のワクチンであって、
前記ＷＴ１発現癌が、白血病、線維形成性小円形細胞腫瘍、胃癌、結腸癌、肺癌、乳癌、胚細胞腫瘍、卵巣癌、子宮癌、甲状腺癌、肝臓癌、腎臓癌、カポジ肉腫、肉腫、肝細胞癌、ウィルムス腫瘍、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、または中皮腫であることを特徴とするワクチン。
請求項１５に記載のリンパ球の使用であって、
前記ＷＴ１発現癌が、白血病、線維形成性小円形細胞腫瘍、胃癌、結腸癌、肺癌、乳癌、胚細胞腫瘍、卵巣癌、子宮癌、甲状腺癌、肝臓癌、腎臓癌、カポジ肉腫、肉腫、肝細胞癌、ウィルムス腫瘍、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、または中皮腫であることを特徴とする使用。
請求項１１に記載の方法であって、
前記アジュバントが用いられ、
前記アジュバントが、ＱＳ２１、フロインド不完全アジュバント、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、ＢＣＧ、ミョウバン、成長因子、サイトカイン、ケモカイン、インターロイキン、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ、またはＧＭ−ＳＦであることを特徴とする方法。
請求項１１に記載の方法であって、
前記抗原提示細胞が用いられ、
前記抗原提示細胞が、樹枝状細胞、単球、マクロファージ、サイトカインにより活性化された単球、またはＥＢＶ形質転換Ｂリンパ芽球様細胞（ＥＢＶ−ＢＬＣＬ）であることを特徴とする方法。