RU2680588C2 - Гены рецепторов антигенспецифичных хелперных т-клеток - Google Patents
Гены рецепторов антигенспецифичных хелперных т-клеток Download PDFInfo
- Publication number
- RU2680588C2 RU2680588C2 RU2015113172A RU2015113172A RU2680588C2 RU 2680588 C2 RU2680588 C2 RU 2680588C2 RU 2015113172 A RU2015113172 A RU 2015113172A RU 2015113172 A RU2015113172 A RU 2015113172A RU 2680588 C2 RU2680588 C2 RU 2680588C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- seq
- cells
- helper
- hla
- peptide
- Prior art date
Links
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 98
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title description 7
- 108700042075 T-Cell Receptor Genes Proteins 0.000 title 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 138
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 116
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 111
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 111
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 111
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 49
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 24
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims abstract 3
- 230000026683 transduction Effects 0.000 claims abstract 3
- 238000010361 transduction Methods 0.000 claims abstract 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 38
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 37
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 35
- 102100040485 HLA class II histocompatibility antigen, DRB1 beta chain Human genes 0.000 claims description 24
- 108010039343 HLA-DRB1 Chains Proteins 0.000 claims description 24
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 16
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 14
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 13
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 claims description 11
- 102210059845 HLA-DRB1*15:01 Human genes 0.000 claims description 9
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 8
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 6
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 16
- 101800000324 Immunoglobulin A1 protease translocator Proteins 0.000 abstract description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 abstract 1
- 102000040856 WT1 Human genes 0.000 description 212
- 108700020467 WT1 Proteins 0.000 description 212
- 101150084041 WT1 gene Proteins 0.000 description 209
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 157
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 111
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 85
- 102100031618 HLA class II histocompatibility antigen, DP beta 1 chain Human genes 0.000 description 40
- 108010045483 HLA-DPB1 antigen Proteins 0.000 description 40
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 37
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 29
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 25
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 20
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 19
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 15
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 15
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 14
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 14
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 12
- 101100005713 Homo sapiens CD4 gene Proteins 0.000 description 11
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 11
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 10
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 10
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 10
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 10
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 9
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 9
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 9
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 8
- 102100028972 HLA class I histocompatibility antigen, A alpha chain Human genes 0.000 description 7
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 description 7
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 7
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 7
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 description 6
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 description 6
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 6
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 102000004503 Perforin Human genes 0.000 description 5
- 108010056995 Perforin Proteins 0.000 description 5
- KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N Perforine Natural products COC1=C2CCC(O)C(CCC(C)(C)O)(OC)C2=NC2=C1C=CO2 KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 229930192851 perforin Natural products 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 4
- 101150008942 J gene Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 4
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 3
- 101150117115 V gene Proteins 0.000 description 3
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N adenyl group Chemical group N1=CN=C2N=CNC2=C1N GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012197 amplification kit Methods 0.000 description 3
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 2
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 2
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 2
- 101001023379 Homo sapiens Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Proteins 0.000 description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 102100035133 Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Human genes 0.000 description 2
- 238000012181 QIAquick gel extraction kit Methods 0.000 description 2
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 208000008383 Wilms tumor Diseases 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 201000008026 nephroblastoma Diseases 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 2
- PFBPIHUEFUNOIS-DVQPEGLTSA-N (2S)-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-carbamimidamido-2-[[(2S)-2,6-diaminohexanoyl]amino]pentanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]hexanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](Cc1c[nH]cn1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)[C@H](Cc1ccc(O)cc1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]cn1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]cn1)C(O)=O PFBPIHUEFUNOIS-DVQPEGLTSA-N 0.000 description 1
- WURBVZBTWMNKQT-UHFFFAOYSA-N 1-(4-chlorophenoxy)-3,3-dimethyl-1-(1,2,4-triazol-1-yl)butan-2-one Chemical compound C1=NC=NN1C(C(=O)C(C)(C)C)OC1=CC=C(Cl)C=C1 WURBVZBTWMNKQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- YXHLJMWYDTXDHS-IRFLANFNSA-N 7-aminoactinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=C(N)C=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 YXHLJMWYDTXDHS-IRFLANFNSA-N 0.000 description 1
- 108700012813 7-aminoactinomycin D Proteins 0.000 description 1
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010004593 Bile duct cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 101150097493 D gene Proteins 0.000 description 1
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 208000001976 Endocrine Gland Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 208000006168 Ewing Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000000527 Germinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 108010029657 HLA-DRB1*04:01 antigen Proteins 0.000 description 1
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 description 1
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 1
- 101000994375 Homo sapiens Integrin alpha-4 Proteins 0.000 description 1
- 101000658378 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 13-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000645345 Homo sapiens T cell receptor beta joining 1-5 Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 102100032818 Integrin alpha-4 Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 208000000172 Medulloblastoma Diseases 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 201000003793 Myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000009565 Pharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 208000004337 Salivary Gland Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010061934 Salivary gland cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102100034848 T cell receptor alpha variable 13-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100026273 T cell receptor beta joining 1-5 Human genes 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 208000000728 Thymus Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010062129 Tongue neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108700025700 Wilms Tumor Genes Proteins 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000026900 bile duct neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000025188 carcinoma of pharynx Diseases 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 201000011523 endocrine gland cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 201000007028 gastrointestinal neuroendocrine tumor Diseases 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000010359 gene isolation Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 201000003115 germ cell cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000029824 high grade glioma Diseases 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000005917 in vivo anti-tumor Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 238000010212 intracellular staining Methods 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 206010023841 laryngeal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 201000011614 malignant glioma Diseases 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 230000031942 natural killer cell mediated cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- VYNDHICBIRRPFP-UHFFFAOYSA-N pacific blue Chemical compound FC1=C(O)C(F)=C2OC(=O)C(C(=O)O)=CC2=C1 VYNDHICBIRRPFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 210000005000 reproductive tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000002314 small intestine cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 201000003957 thoracic cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 201000009377 thymus cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000009258 tissue cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 206010044412 transitional cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 210000001635 urinary tract Anatomy 0.000 description 1
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000037965 uterine sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
- A61K39/4632—T-cell receptors [TCR]; antibody T-cell receptor constructs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464452—Transcription factors, e.g. SOX or c-MYC
- A61K39/464453—Wilms tumor 1 [WT1]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6881—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for tissue or cell typing, e.g. human leukocyte antigen [HLA] probes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56966—Animal cells
- G01N33/56972—White blood cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
- A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
- G01N2333/4701—Details
- G01N2333/4703—Regulators; Modulating activity
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
- G01N2333/70514—CD4
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Virology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к полинуклеотидам, которые кодируют CDR3 в генах TCR-[альфа] и TCR-[бета] цепей CD4хелперных Т-клеток, которые специфичны к хелперному пептиду WT1, и может быть использовано в медицине для индукции иммунного ответа против WT1-экспрессирующей злокачественной опухоли. Гены TCR, содержащие полинуклеотид αCDR3 и полинуклеотид βCDR3, используют для получения CD4+ хелперной клетки, специфичной в отношении пептида WT1, путем трансдукции CD4+ T-клетки вектором экспрессии, содержащим указанные гены TCR, выбранные из 33 комбинаций пар цепей αCDR3 и βCDR3. Изобретение позволяет эффективно индуцировать WT1-специфичные противоопухолевые цитотоксические T-лимфоциты (CTL). 13 н. и 2 з.п. ф-лы, 5 ил., 3 табл., 5 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к полинуклеотидам, содержащимся в генах T-клеточных рецепторов (TCR) хелперных T-клеток, специфичных к раковым антигенам. В частности, настоящее изобретение относится к полинуклеотидам, кодирующим определяющую комплементарность область 3 (CDR3) каждой α-цепи и β-цепи TCR CD4+ хелперных T-клеток, специфичных к хелперному пептиду WT1, имеющему аминокислотную последовательность SEQ ID NO:123. Настоящее изобретение также относится к полипептидам, кодируемым указанными полинуклеотидами. Кроме того, настоящее изобретение относится к CD4+ T-клеткам, в которые введены гены TCR, содержащие указанные полинуклеотиды, к индукции и стимуляции WT1-специфичных цитотоксических T-клеток (WT1-специфичных CTL) с их применением, а также к лечению злокачественных опухолей с их применением и так далее.
Уровень техники
Ген WT1 (ген 1 опухоли Вильмса) представляет собой ген, который был идентифицирован как ген, ответственный за развитие опухоли Вильмса, которая является раком почки у детей (непатентные документы 1 и 2). WT1 является фактором транскрипции, имеющим структуру цинковых пальцев. Первоначально ген WT1, как предполагали, был геном-супрессором опухоли. Однако последующие исследования (непатентные документы 3, 4, 5 и 6) показали, что ген WT1 скорее функционирует как онкоген в гемопоэтических опухолях и солидных злокачественных опухолях.
Было показано, что пептидспецифические цитотоксические T-клетки (CTL) были индуцированы при стимуляции периферических мононуклеарных клеток in vitro с использованием пептида WT1, и что эти CTL повреждают опухоль и злокачественные клетки в гемопоэтических опухолях и солидных злокачественных опухолях, которые экспрессируют WT1 эндогенно. Поскольку CTL распознают пептид WT1 в форме комплекса, в котором пептид WT1 связан с молекулой MHC класса I, такой пептид WT1 отличается в соответствии с подтипом MHC класса I (патентный документ 1, непатентный документ 7, патентные документы 2, 3 и 4).
Существование хелперных Т-клеток, специфичных к раковому антигену, важно для эффективной индукции CTL (непатентный документ 8). Хелперные Т-клетки индуцируются и активируются при распознавании комплекса молекулы MHC класса II и антигенного пептида на антигенпрезентирующих клетках. Активированные хелперные Т-клетки вырабатывают цитокины, такие как IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, или интерфероны, и способствуют пролиферации, дифференцировке и созреванию B-клеток. Активированные хелперные Т-клетки также имеют функцию стимуляции пролиферации, дифференцировки и созревания другого подтипа T-клеток (таких как Tc-клетки). Таким образом, поскольку активированные хелперные Т-клетки имеют функцию активации иммунной системы посредством стимуляции пролиферации и активации B-клеток и T-клеток, предполагается, что усиление функции хелперных Т-клеток через MHC класса II-связывающий антигенный пептид (хелперный пептид) для усиления действия противораковой вакцины может применяться в иммунотерапии рака (непатентный документ 9).
Примерами хелперных пептидов, относящихся к WT1, которые известны на настоящий момент, являются пептид, связывающийся с молекулой HLA-DRB1*04:01 (непатентный документ 10), пептид, связывающийся с молекулой HLA-DRB1*04:05, пептид, связывающийся с молекулой HLA-DRB1*15:02 (патентный документ 5), пептид, связывающийся с молекулой HLA-DRB1*04:05, молекулой HLA-DRB1*15:02, молекулой HLA-DRB1*15:01, молекулой HLA-DPB1*09:01 и молекулой HLA-DPB1*05:01 (патентный документ 6).
Однако последовательности генов T-клеточных рецепторов (TCR) антигенспецифичных CD4+ хелперных T-клеток, которые распознают хелперный пептид, до настоящего времени не были известны.
Документы из уровня техники
Патентные документы
Патентный документ 1: WO2003/106682
Патентный документ 2: WO2005/095598
Патентный документ 3: WO2007/097358
Патентный документ 4: PCT/JP2007/074146
Патентный документ 5: WO2005/045027
Патентный документ 6: WO2008/105462
Непатентные документы
Непатентный документ 1: Daniel A. Haber et al., Cell. 1990 Jun 29; 61(7):1257-69.
Непатентный документ 2: Call KM et al., Cell. 1990 Feb 9; 60(3):509-20.
Непатентный документ 3: Обзор Menke AL et al., Int Rev Cytol. 1998; 181:151-212.
Непатентный документ 4: Yamagami T et al., Blood. 1996 Apr 1; 87 (7) :2878-84.
Непатентный документ 5: Inoue K et al., Blood. 1998 Apr 15; 91(8):2969-76.
Непатентный документ 6: Tsuboi A et al., Leuk Res. 1999 May; 23(5):499-505.
Непатентный документ 7: Oka Y et al., Immunogenetics. 2000 Feb; 51(2):99-107.
Непатентный документ 8: Gao FG et al., Cancer Res. 2002 Nov 15; 62(22):6438-41.
Непатентный документ 9: Zeng G, J Immunother. 2001 May; 24(3):195-204.
Непатентный документ 10: Knights AJ et al., Cancer Immunol Immunother. 2002 Jul; 51(5):271-81.
Сущность изобретения
Задача, решаемая изобретением
Задачи, решаемые изобретением, состояли в определении последовательностей TCR генов CD4+ хелперных T-клеток, специфичных к хелперному пептиду WT1, в получении CD4+ T-клеток, в которые эти гены TCR были введены, в усилении индукции WT1- специфичных CTL с применением таких клеток, а также в лечении или профилактики развития злокачественных опухолей, и так далее.
Способы решения задачи
Авторы изобретения усиленно трудились над решением вышеуказанных задач и успешно выделили гены α-цепи и гены β-цепи TCR CD4+ хелперных Т-клеток, специфичных к хелперному пептиду WT1, и определили каждую последовательность CDR3. Кроме того, авторы изобретения ввели TCR гены, содержащие определенные таким образом последовательности, в CD4+ T-клетки и успешно повысили индукцию WT1-специфичных CTL, и вызвали повреждение WT1-экспрессирующих злокачественных клеток при использовании CD4+ T-клеток. Таким образом, авторы изобретения осуществили настоящее изобретение.
Таким образом, в настоящем изобретении предложены:
(1) Полинуклеотид (обозначенный как "полинуклеотид αCDR3"), имеющий нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:1, 3, 5, 8, 10, 11, 13, 14, 16, 18, 20, 22, 23, 25, 27, 28, 30, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 56 и 58, где указанный полинуклеотид кодирует CDR3 α-цепи TCR CD4+ хелперной T-клетки, специфичной к хелперному пептиду WT1 (пептид WT1332), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:123, или вариант этой последовательности.
(2) Полинуклеотид (обозначенный как "полинуклеотид βCDR3"), имеющий нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:2, 4, 6, 7, 9, 12, 15, 17, 19, 21, 24, 26, 29, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 57 и 59, где указанный полинуклеотид кодирует CDR3 β-цепи TCR CD4+ хелперной T-клетки, специфичной к пептиду WT1332.
(3) Пара полинуклеотида αCDR3 и полинуклеотида βCDR3, где каждый полинуклеотид имеет следующую нуклеотидную последовательность:
| полинуклеотид αCDR3 | полинуклеотид βCDR3 |
| SEQ ID NO:1 | SEQ ID NO:2 |
| SEQ ID NO:3 | SEQ ID NO:4 |
| SEQ ID NO:5 | SEQ ID NO:6 |
| SEQ ID NO:3 | SEQ ID NO:7 |
| SEQ ID NO:8 | SEQ ID NO:9 |
| SEQ ID NO:10 | SEQ ID NO:12 |
| SEQ ID NO:11 | SEQ ID NO:12 |
| SEQ ID NO:13 | SEQ ID NO:15 |
| SEQ ID NO:14 | SEQ ID NO:15 |
| SEQ ID NO:16 | SEQ ID NO:17 |
| SEQ ID NO:18 | SEQ ID NO:19 |
| SEQ ID NO:20 | SEQ ID NO:21 |
| SEQ ID NO:22 | SEQ ID NO:24 |
| SEQ ID NO:23 | SEQ ID NO:24 |
| SEQ ID NO:25 | SEQ ID NO:26 |
| SEQ ID NO:27 | SEQ ID NO:4 |
| SEQ ID NO:28 | SEQ ID NO:29 |
| SEQ ID NO:30 | SEQ ID NO:32 |
| SEQ ID NO:31 | SEQ ID NO:32 |
| SEQ ID NO:33 | SEQ ID NO:34 |
| SEQ ID NO:35 | SEQ ID NO:36 |
| SEQ ID NO:37 | SEQ ID NO:38 |
| SEQ ID NO:39 | SEQ ID NO:40 |
| SEQ ID NO:41 | SEQ ID NO:42 |
| SEQ ID NO:43 | SEQ ID NO:44 |
| SEQ ID NO:45 | SEQ ID NO:46 |
| SEQ ID NO:47 | SEQ ID NO:48 |
| SEQ ID NO:49 | SEQ ID NO:50 |
| SEQ ID NO:51 | SEQ ID NO:52 |
| SEQ ID NO:53 | SEQ ID NO:54 |
| SEQ ID NO:55 | SEQ ID NO:57 |
| SEQ ID NO:56 | SEQ ID NO:57 |
| SEQ ID NO:58 | SEQ ID NO:59 |
при условии, что указанная последовательность может быть соответствующей комплементарной последовательностью или вырожденной последовательностью.
(4) Ген TCR, содержащий полинуклеотид αCDR3 и полинуклеотид βCDR3 в любой из пар (3).
(5) Ген TCR (4), получаемый из CD4+ T-клетки, специфичной к пептиду WT1332.
(6) Способ получения CD4+ хелперной клетки, специфичной к пептиду WT1332, включающий введение гена TCR (4) в CD4+ T-клетку.
(7) CD4+ хелперная T-клетка, получаемая способом (5).
(8) Вектор, содержащий ген TCR, который содержит полинуклеотид αCDR3 и полинуклеотид βCDR3 в любой из пар (3).
(9) Способ (6), где указанное введение выполняют с применением вектора (8).
(10) Способ усиления индукции WT1-специфичных CTL, включающий совместное культивирование CD4+ хелперной T-клетки (7) и периферической мононуклеарной клетки.
(11) WT1-специфичный CTL, получаемый способом (10).
(12) Способ лечения или профилактики злокачественной опухоли у индивида, включающий введение CD4+ хелперной T-клетки (7) индивиду.
(13) Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики злокачественной опухоли, содержащая CD4+ хелперную T-клетку (7).
(14) Применение CD4+ хелперной T-клетки (7) для получения лекарственного средства для лечения или профилактики злокачественной опухоли.
(15) ДНК-чип, содержащий полинуклеотид αCDR3 (1), полинуклеотид βCDR3 (2) или и полинуклеотид αCDR3 (1), и полинуклеотид βCDR3 (2).
(16) Способ измерения частоты CD4+ хелперной T-клетки, специфичной к пептиду WT1332, в образце, включающий применение ДНК-чипа (15).
(17) Пептид αCDR3, кодируемый любым из полинуклеотидов αCDR3 из (1).
(18) Пептид βCDR3, кодируемый любым из полинуклеотидов βCDR3 из (2).
(19) Пара пептидов, кодируемых любой из пар полинуклеотидов из (3).
(20) Чип, содержащий пептид (17) или (18), или пару пептидов (19).
(21) Антитело против любого из пептидов из любого из (17)-(19).
(22) Способ измерения частоты CD4+ хелперной T-клетки, специфичной к пептиду WT1332, в образце, включающий применение антитела (21).
Технический результат изобретения
Согласно настоящему изобретению получена CD4+ хелперная T-клетка, в которую был введен ген TCR, имеющий нуклеотидную последовательность CDR3, определенную согласно настоящему изобретению. WT1-специфичный CTL можно индуцировать с применением указанной CD4+ хелперной T-клетки, и злокачественную опухоль можно эффективно лечить или предотвращать. Кроме того, ДНК-чип получают, используя TCR последовательности, при этом может быть измерена частота WT1332-специфичных CD4+ хелперных Т-клеток в образце.
Краткое описание фигур
[Фигура 1A] На Фигуре 1A показаны нуклеотидные последовательности CDR3 α-цепей и β-цепей TCR CD4+ хелперных Т-клеток, полученных согласно настоящему изобретению, и кодируемые ими аминокислотные последовательности CDR3. Номер в круглых скобках, помещенный на правом конце каждой последовательности, представляет собой номер SEQ ID NO в Списке последовательностей. V-ген, J-ген и J-ген описывают V область, J область и D область в индивидуальных генах, соответственно.
[Фигура 1B] На Фигуре 1B показаны нуклеотидные последовательности CDR3 α-цепей и β-цепей TCR CD4+ хелперных Т-клеток, полученных согласно настоящему изобретению, и кодируемые ими аминокислотные последовательности CDR3. Номер в круглых скобках, помещенный на правом конце каждой последовательности, представляет собой номер SEQ ID NO в Списке последовательностей. V-ген, J-ген и J-ген описывают V область, J область и D область в индивидуальных генах, соответственно.
[Фигура 2A] На Фигуре 2A показана продукция интерферона-γ WT1332-специфичными CD4+ хелперными Т-клетками, в которые были введены гены TCR, показанные в Таблице 3.
[Фигура 2B] На Фигуре 2B показана продукция IL-2 WT1332-специфичными CD4+ хелперными Т-клетками, в которые были введены гены TCR, показанные в Таблице 3.
[Фигура 2C] На Фигуре 2C показан ответ с выработкой TNF-α WT1332-специфичными CD4+ хелперными Т-клетками, в которые были введены гены TCR, в зависимости от концентрации пептида WT1332.
[Фигура 2D] На Фигуре 2D показана способность к пролиферации WT1332-специфичных CD4+ хелперных Т-клеток, в которые были введены гены TCR, в системах, в которые были добавлены несколько типов веществ. WT1332 обозначает культуру в присутствии пептида WT1332. α-DP обозначает культуру в присутствии антитела против HLA-DP. α-DQ обозначает культуру в присутствии антитела против HLA-DQ. α-DR обозначает культуру в присутствии антитела против HLA-DR. HLA класса I обозначает культуру в присутствии антитела против HLA класса I. HIV обозначает культуру в присутствии пептида ВИЧ (FRKQNPDIVIYQYMDDLYVG) (SEQ ID NO:124).
[Фигура 2E] На Фигуре 2E показана пролиферация WT1332-специфичных CD4+ хелперных Т-клеток, в которые были введены гены TCR, в присутствии PBMC с добавкой нескольких типов веществ. WT1332 обозначает стимуляцию аутологичной PBMC, активируемой пептидом WT1332. HWT1 обозначает стимуляцию аутологичных PBMC, активируемых полноразмерным белком WT1. HWT3 обозначает стимуляцию аутологичных PBMC, активируемых усеченным белком WT1 (не содержащим последовательности WT1332). PHA-blast обозначает стимуляцию PBMC, активируемых лизатом PHA-blast. TF1 обозначает стимуляцию PBMC, активируемых лизатом лейкозных клеток линии TF-1, экспрессирующих WT1. K562 обозначает стимуляцию PBMC, активируемых лизатом лейкозных клеток линии K562, экспрессирующих WT1.
[Фигура 2F] На Фигуре 2F показана продукция IFN-γ WT1332-специфичными CD4+ хелперными Т-клетками, в которые были введены гены TCR, в присутствии PBMC, активируемых несколькими типами веществ. WT1332 обозначает стимуляцию аутологичных PBMC, активируемых пептидом WT1332. HWT1 обозначает стимуляцию аутологичных PBMC, активируемых полноразмерным белком WT1. HWT3 обозначает стимуляцию аутологичных PBMC, активируемых усеченным белком WT1 (не содержащим последовательности WT1332). PHA-blast обозначает стимуляцию PBMC, активируемых лизатом PHA-blast. TF1 обозначает стимуляцию PBMC, активируемых лизатом лейкозных клеток линии TF-1, экспрессирующих WT1. K562 обозначает стимуляцию PBMC, активируемых лизатом лейкозных клеток линии K562, экспрессирующих WT1.
[Фигура 2G] На Фигуре 2G показан средний уровень продукции нескольких видов цитокинов в ответ на пептид WT1332 WT1332-специфичными линиями CD4+ хелперных Т-клеток трех здоровых индивидов (HLA-DPB1*05:01-положительных), в которые были введены гены TCR. Черные столбики обозначают стимуляцию пептидом WT1332. Белые столбики обозначают отсутствие стимуляции.
[Фигура 3A] На Фигуре 3A показана частота CD3+CD8+T-клеток в случае cокультивирования PBMC и WT1332-специфичных CD4+ хелперных Т-клеток, в которые были введены гены TCR, в отношении, показанном на фигуре.
[Фигура 3B] На Фигуре 3B показана частота модифицированный WT1235/HLA-A*24:02 тетрамер-положительных CD8+T-клеток в случае cокультивирования PBMC и WT1332-специфичных CD4+ хелперных Т-клеток, в которые были введены гены TCR, в отношении, показанном на фигуре.
[Фигура 3C] На Фигуре 3C показано количество WT1-специфичных CTL в случае cокультивирования PBMC и WT1332-специфичных CD4+ хелперных Т-клеток, в которые были введены гены TCR, в отношении, показанном на фигуре.
[Фигура 3D] На Фигуре 3D показана частота CD8+T-клеток, экспрессирующих интерферон-γ в ответ на стимуляцию модифицированным WT1235 в случае cокультивирования PBMC и WT1332-специфичных CD4+ хелперных Т-клеток, в которые были введены гены TCR, в отношении, показанном на фигуре.
[Фигура 4A] На Фигуре 4A показано повреждение в форме лизиса (%) HLA-DPB1*05:01-положительных лейкозных клеток линии TF-1, экспрессирующих WT1, и HLA-DPB1*05:01-отрицательных лейкозных клеток линии TF-1, экспрессирующих WT1, WT1332-специфичными CD4+ хелперными Т-клетками, в которые были введены гены TCR, в отношении E:T, как показано на фигуре.
[Фигура 4B] На Фигуре 4B показано повреждение в форме лизиса (%) HLA-DPB1*05:01-положительных клеток B-LCL, которые были индуцированы для экспрессии WT1, и HLA-DPB1*05:01-положительных клеток B-LCL, которые не экспрессируют WT1, WT1332-специфичными CD4+ хелперными Т-клетками, в которые были введены гены TCR, в отношении E:T, как показано на фигуре.
[Фигура 4C] На Фигуре 4C показано повреждение в форме лизиса (%) линии клеток K562 и HLA-DPB1*05:01-положительных лейкозных клеток линии C2F8, экспрессирующих WT1, WT1332-специфичными CD4+ хелперными Т-клетками, в которые были введены гены TCR, в отношении E:T, как показано на фигуре.
[Фигура 4D] На Фигуре 4D показаны результаты проточной цитометрии в отношении экспрессии гранзима B (слева) и перфорина (справа) в WT1332-специфичных CD4+ хелперных Т-клетках, в которые были введены гены TCR.
[Фигура 4E] На Фигуре 4E показаны результаты проточной цитометрии в отношении частоты CD107a продуцирующих клеток и IFN-γ продуцирующих клеток WT1332-специфичных CD4+ хелперных Т-клеток, в которые были введены гены TCR, культивируемых согласно способу, описанному в Примере 4.
[Фигура 4F] Фигура 4F является диаграммой, на которой показаны результаты для сравнения цитолитической активности WT1332-специфичных CD4+ хелперных Т-клеток, в которые были введены гены TCR, против HLA-CPB1*05:01-положительных клеток TF-1, предварительно обработанных Ac-IETD-Cho, с цитолитической активностью WT1332-специфичных CD4+ хелперных Т-клеток, в которые были введены гены TCR, против клеток TF-1, предварительно обработанных ДМСО. Высота столбиков соответствует среднему значению планками стандартного отклонения. Звездочка обозначает p<0,05.
[Фигура 5] На Фигуре 5 показаны кривые выживаемости, на которых показана противоопухолевая активность у мышей NOG (зарегистрированное торговое наименование) CD4+ T-клеток человека, в которые были введены гены TCR из WT1332-специфичных CD4+ T-клеток. Сплошная линия представляет собой кривую выживаемости мышей, которым перенесли CD4+ T-клетки человека, в которые были введены HLA-DPB1*05:01-рестриктированные WT1332-специфичные TCR. Прерывистая линия представляет собой кривую выживаемости мышей, которым перенесли CD4+ T-клетки человека, в которые был введен контрольный вектор.
Описание вариантов осуществления
Настоящее изобретение основано на определении полинуклеотидов, кодирующих α-цепь, содержащую CDR3 (в дальнейшем именуемую как "полинуклеотид αCDR3"), и полинуклеотидов, кодирующих β-цепь, содержащую CDR3 (в дальнейшем именуемую как "полинуклеотид βCDR3"), TCR клонов CD4+ хелперных T-клеток, специфичных к хелперному пептиду WT1. Таким образом, в одном аспекте настоящего изобретения предложены полинуклеотиды αCDR3, имеющие нуклеотидные последовательности, которые показаны на фигуре 1 (нуклеотидные последовательности, выбранные из группы, состоящей из SEQ ID NO:1, 3, 5, 8, 10, 11, 13, 14, 16, 18, 20, 22, 23, 25, 27, 28, 30, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 56, 58), и полинуклеотиды βCDR3, имеющие нуклеотидные последовательности, которые показаны на фигуре 1 (нуклеотидные последовательности, выбранные из группы, состоящей из SEQ ID NO:2, 4, 6, 7, 9, 12, 15, 17, 19, 21, 24, 26, 29, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 57, 59).
Предпочтительно, в отношении экспрессии функционального рецептора, полинуклеотид αCDR3 и полинуклеотид βCDR3, содержащиеся в каждом клоне, содержатся в одном TCR. Таким образом, предпочтительно, что полинуклеотид αCDR3 и полинуклеотид βCDR3, соответствующие каждому клону, формируют пару, как показано на фигуре 1. Таким образом, в другом аспекте настоящего изобретения предложена пара полинуклеотида αCDR3 и полинуклеотида βCDR3, где каждый полинуклеотид, составляющий пару, имеет нуклеотидную последовательность, которая показана на фигуре 1. Комбинация полинуклеотида αCDR3 и полинуклеотида βCDR3 отличается в зависимости от клона. Нуклеотидная последовательность пары полинуклеотида αCDR3 и полинуклеотида βCDR3 в каждом клоне является такой, как показано на фигуре 1.
Полинуклеотид, имеющий нуклеотидную последовательность, комплементарную полинуклеотиду αCDR3 или полинуклеотиду βCDR3, также включен в полинуклеотид αCDR3 или полинуклеотид βCDR3. Кроме того, вырожденная последовательность полинуклеотида αCDR3 или полинуклеотида βCDR3 также включена в полинуклеотид αCDR3 или полинуклеотид βCDR3 при условии, что она кодирует пептид, показанный на фигуре 1.
Полинуклеотид, обладающий идентичностью нуклеотидной последовательности 70% или больше, например, 75% или больше, 80% или больше, 85% или больше, или 90% или больше, например, 92% или больше, 94% или больше, 96% или больше, или 98% или больше, с последовательностью полинуклеотида αCDR3, также включен в полинуклеотид αCDR3. Полинуклеотид, обладающий идентичностью нуклеотидной последовательности 70% или больше, например, 75% или больше, 80% или больше, 85% или больше, или 90% или больше, например, 92% или больше, 94% или больше, 96% или больше, или 98% или больше, с последовательностью полинуклеотида βCDR3, также включен в полинуклеотид βCDR3.
Полинуклеотид, нуклеотидная последовательность которого гибридизуется с нуклеотидной последовательностью полинуклеотида αCDR3 в жестких условиях, также включен в полинуклеотид αCDR3. Полинуклеотид, нуклеотидная последовательность которого гибридизуется с нуклеотидной последовательностью полинуклеотида βCDR3 в жестких условиях, также включен в полинуклеотид βCDR3.
Примеры жестких условий гибридизации включают условия, при которых гибридизацию проводят в растворе, содержащем 5×SSC, 7% (в/об) ДСН, 100 мкг/мл денатурированной ДНК спермы лосося и 5× раствор Денхардта, при 48-52°C, и затем выполняют промывку в 0,1×SSC, 0,5×SSC, 1×SSC или 2×SSC; или условия, при которых гибридизацию проводят в растворе, содержащем 250 мМ NaCl, 25 мМ цитрата тринатрия, 1% ДСН, 50% формамида и 200 мкг/мл денатурированной ДНК спермы лосося, при 42°C, и затем выполняют промывку в растворе, содержащем 15 мМ NaCl, 1,5 мМ цитрата тринатрия и 0,1% ДСН.
В другом аспекте настоящего изобретения предложены пептиды, кодируемые полинуклеотидами αCDR3 и полинуклеотидами βCDR3 (называемые "пептид αCDR3" и "пептид βCDR3", соответственно). Эти пептиды имеют аминокислотные последовательности, показанные на фигуре 1. Предпочтительно, эти пептиды формируют пару пептида αCDR3 и пептида βCDR3, соответствующую каждому клону, как показано на фигуре 1.
В настоящем описании аминокислотная последовательность пептида представлена обычной однобуквенной системой или трехбуквенной системой.
Пептид, кодируемый вариантами полинуклеотида αCDR3 или полинуклеотида βCDR3, также включен в пептид αCDR3 или пептид βCDR3. Пептид, обладающий идентичностью аминокислотной последовательности 70% или больше, например, 75% или больше, 80% или больше, 85% или больше, или 90% или больше, например, 92% или больше, или 94% или больше, с последовательностью пептида αCDR3, также включен в пептид αCDR3. Пептид, обладающий идентичностью аминокислотной последовательности 70% или больше, например, 75% или больше, 80% или больше, 85% или больше, или 90% или больше, например, 92% или больше, или 94% или больше, с последовательностью пептида βCDR3, также включен в пептид βCDR3. Кроме того, пептид, имеющий аминокислотную последовательность пептида αCDR3, в которой от одной до нескольких (например, одна, две, три, четыре или пять) аминокислот заменены, удалены или добавлены, также включен в пептид αCDR3; и пептид, имеющий аминокислотную последовательность пептида βCDR3, в которой от одной до нескольких (например, одна, две, три, четыре или пять) аминокислот заменены, удалены или добавлены, также включен в пептид βCDR3. Следует отметить, что эти варианты пептидов обладают свойствами, аналогичными свойствам исходных пептидов αCDR3 или пептидов βCDR3.
Эти полинуклеотиды и полипептиды могут быть получены при использовании химических методов и/или биологических методов, известных в данной области.
В настоящем изобретении хелперный пептид WT1 представляет собой пептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:123 (Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His), или вариант этой аминокислотной последовательности. (Эти пептиды именуются "пептид WT1332"). Пептид WT1332 может иметь частичную последовательность или вариант последовательности полипептида WT1. Пептид, состоящий из аминокислотной последовательности, показанной в SEQ ID NO:123, или варианта этой последовательности, является примером такого пептида.
Известно, что пептид WT1332 обладает способностью связываться с молекулой HLA-DRB1*15:01, молекулой HLA-DPB1*09:01, молекулой HLA-DPB1*05:01, молекулой HLA-DRB1*04:05 или молекулой HLA-DRB1*15:02.
Вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO:123, как указано выше, относится к аминокислотной последовательности SEQ ID NO:123, в которой от одной до нескольких (например, одна, две, три, четыре или пять) аминокислот заменены, удалены или добавлены. Или же вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO:123, как указано выше, относится к аминокислотной последовательности, обладающей идентичностью 70% или больше, например, 75% или больше, 80% или больше, 85% или больше, или 90% или больше, с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:123. Предпочтительно пептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:123, или вариант этой последовательности, имеет длину 25 аминокислот или меньше. Пептид, имеющий вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO:123, обладает свойствами, аналогичными свойствам пептида, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:123.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к гену TCR, содержащему полинуклеотид αCDR3 и полинуклеотид βCDR3, относящийся к любой паре, показанной на фигуре 1. Такой ген TCR может быть выделен из CD4+ T-клетки, специфичной к пептиду WT1332, или может быть получен известными методами генной инженерии.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к CD4+ хелперной T-клетке (называемой "CD4+ хелперной T-клеткой с введенным геном TCR"), полученной при введении гена TCR, содержащего полинуклеотид αCDR3 и полинуклеотид βCDR3, относящиеся к любой паре, показанной на фигуре 1, в CD4+ T-клетку. CD4+ хелперная T-клетка с введенным геном TCR демонстрирует WT1332-специфичную и HLA класса II-рестриктированную пролиферацию и продукцию цитокинов.
Квалифицированный специалист в данной области сумеет легко ввести ген TCR, содержащий полинуклеотид αCDR3 и полинуклеотид βCDR3, относящиеся к любой из пар, показанных на фигуре 1, в CD4+ T-клетку. Например, введение гена TCR может быть выполнено при использовании различных типов векторов, электропорации или генной пушки и т.д. Вводимый ген TCR может быть модифицирован с такой целью, как повышение эффективности экспрессии TCR.
Таким образом, в другом аспекте настоящего изобретения предложен вектор, содержащий ген TCR, содержащий полинуклеотид αCDR3 и полинуклеотид βCDR3, относящиеся к любой паре, показанной на фигуре 1.
Введение гена TCR может быть выполнено посредством введения гена α-цепи, содержащего полинуклеотид αCDR3, и гена β-цепи, содержащего полинуклеотид βCDR3, в отдельные векторы, и введения указанных векторов в CD4+ T-клетку.
Примеры CD4+ T-клеток, в которые введен ген TCR, содержащий полинуклеотид αCDR3 и полинуклеотид βCDR3, включают CD4+ T-клетки, полученные от HLA-DRB1*15:01-положительного индивида, HLA-DPB1*09:01-положительного индивида, HLA-DPB1*05:01-положительного индивида, HLA-DRBl*04:05-положительного индивида или HLA-DRB1*15:02-положительного индивида, но не ограничены ими. Кроме того, CD4+ T-клетки могут быть получены от индивида, имеющего злокачественную опухоль, могут быть получены от индивида, не имеющего злокачественную опухоль (здорового индивида), или могут быть получены от донора для пересадки костного мозга.
В другом аспекте настоящее изобретение также относится к WT1332-специфичной CD4+ хелперной T-клетке, содержащей ген TCR, содержащий полинуклеотид αCDR3 и полинуклеотид βCDR3, относящиеся к любой паре, показанной на фигуре 1.
Индукция WT1-специфичных CTL может быть усилена при использовании CD4+ хелперной T-клетки с введенным геном TCR. В частности, индукция WT1-специфичных CTL может быть усилена путем сокультивирования CD4+ хелперной T-клетки с введенным геном TCR и периферической мононуклеарной клетки. Таким образом, в другом аспекте настоящего изобретения предложен способ усиления индукции WT1-специфичных CTL, включающий сокультивирование CD4+ хелперной T-клетки с введенным геном TCR и периферической мононуклеарной клетки. В другом аспекте настоящее изобретение относится к WT1-специфичным CTL, получаемым указанным способом.
Методы и условия сокультивирования CD4+ хелперной T-клетки с введенным геном TCR и периферической мононуклеарной клетки известны в уровне техники. Такие методы могут быть применяться in vivo или in vitro. Один тип CD4+ хелперной T-клетки с введенным геном TCR может применяться для усиления индукции WT1-специфичных CTL. Однако, предпочтительно, используют два или более типов CD4+ хелперных Т-клеток с введенным геном TCR.
Примеры периферических мононуклеарных клеток, используемых в способе усиления индукции WT1-специфичных CTL согласно настоящему изобретению, включают периферические мононуклеарные клетки, полученные от HLA-DRB1*15:01-положительного индивида, HLA-DPB1*09:01-положительного индивида, HLA-DPB1*05:01-положительного индивида, HLA-DRB1*04:05-положительного индивида или HLA-DRB1*15:02-положительного индивида, но не ограничены ими. Предпочтительно, периферические мононуклеарные клетки и CD4+ T-клетки являются клетками, которые были получены от индивида, который нуждается в лечении или профилактики злокачественной опухоли.
При сокультивировании пептид WT1332 и/или другие пептиды WT1, предпочтительно, существуют в комбинации. Примеры других пептидов WT1 включают пептиды, которые обладают способностью связываться с молекулой HLA-DRB1*15:01, молекулой HLA-DPB1*09:01, молекулой HLA-DPB1*05:01, молекулой HLA-DRB1*04:05 или молекулой HLA-DRB1*15:02, но не ограничиваются ими.
В случае необходимости WT1-специфичные CTL, полученные с помощью указанного выше способа, можно продолжить культивировать с целью увеличения количества клеток, а затем ввести их индивиду для лечения или профилактики злокачественной опухоли у индивида. При таком лечении или профилактике злокачественной опухоли пептид WT1332 и/или другие пептиды WT1 предпочтительно вводить совместно. Под действием WT1-специфичных CTL, также могут индуцироваться CTL, специфичные к другим раковым антигенам.
CD4+ хелперная T-клетка с введенным геном TCR может повреждать злокачественные клетки, экспрессирующие WT1. Таким образом, в другом аспекте настоящего изобретения предложен способ лечения или профилактики злокачественной опухоли у индивида, включающий введение индивиду CD4+ хелперной T-клетки с введенным геном TCR.
В другом аспекте настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая CD4+ хелперную T-клетку с введенным геном TCR, для лечения или профилактики злокачественной опухоли, применение CD4+ хелперной T-клетки с введенным геном TCR для получения лекарственного средства для лечения или профилактики злокачественной опухоли и применение CD4+ хелперной T-клетки с введенным геном TCR для лечения или профилактики злокачественной опухоли.
Как используется в настоящем описании, "лечение" злокачественной опухоли относится не только к лечению злокачественной опухоли, например, замедлению прогрессирования злокачественной опухоли, уменьшению злокачественной опухоли и разрушению злокачественной опухоли, но также и к предотвращению рецидива злокачественной опухоли.
Примеры индивидов, у которых лечат или предотвращают злокачественную опухоль, включают HLA-DRB1*15:01-положительного индивида, HLA-DPB1*09:01-положительного индивида, HLA-DPB1*05:01-положительного индивида, HLA-DRB1*04:05-положительного индивида или HLA-DRB1*15:02-положительного индивида, но не ограничиваются ими. Вышеуказанный индивид не ограничен больным раком и может быть лицом, не имеющим рак (включая здоровое лицо), или может быть донором для пересадки костного мозга.
Варианты осуществления способа лечения или профидактики, фармацевтической композиции и применения, указанных выше, описаны ниже. Впрочем, варианты осуществления не ограничиваются ими. Сначала CD4+ T-клетки забирают из периферической крови больного раком, который нуждается в лечении, и вводят в CD4+ T-клетки ген TCR, содержащий полинуклеотид αCDR3 и полинуклеотид βCDR3, с получением CD4+ хелперных Т-клеток с введенным геном TCR. CD4+ хелперные Т-клетки с введенным геном TCR, полученные таким образом, вводят больному раком. Перед введением CD4+ хелперные Т-клетки с введенным геном TCR можно культивировать и размножать в подходящих условиях для получения достаточного количества клеток, а затем их можно вводить больному раком.
Можно вводить один тип CD4+ хелперной T-клетки с введенным геном TCR, либо два или более типов CD4+ хелперных Т-клеток с введенным геном TCR. С позиции улучшения эффекта лечения или профилактики, предпочтительно, чтобы индивиду вводили два или более типов CD4+ хелперных Т-клеток с введенным геном TCR.
В случае, если такие CD4+ хелперные Т-клетки с введенным геном TCR вводят индивиду, врач может соответственно подобрать такие параметры, как количество вводимых клеток, частота введения, интервал введения. Например, CD4+ хелперные Т-клетки с введенным геном TCR можно вводить только один раз или вводить раздельно несколько раз. Как правило, в случае взрослого индивида, количество CD4+ хелперных Т-клеток с введенным геном TCR в дозе находится в пределах от приблизительно 109 до приблизительно 1011, но не ограничено указанными значениями.
В способе лечения или профилактики, фармацевтической композиции и применении, описанных выше, предпочтительно, чтобы пептид WT1332 и/или другие пептиды WT1 вводили совместно. Врач может соответственно подобрать количество и частоту введения пептида WT1332 и/или других пептидов WT1. Кроме того, другие способы противораковой терапии или профилактики можно комбинировать.
Способ лечения или профилактики, фармацевтическая композиция и применение, описанные выше, можно применять к различным видам злокачественных опухолей, не ограничивающимся, например, гематологическими злокачественными новообразованиями, такими как острый миелоцитарный лейкоз, острый лимфоцитарный лейкоз, злокачественная лимфома, множественная миелома, хронический миелоцитарный лейкоз, миелодиспластический синдром и рецидивы после пересадки гемопоэтических стволовых клеток такого же типа; солидные злокачественные опухоли, такие как рак языка, рак десен, рак дна полости рта, рак глотки, рак гортани, рак слюнной железы и рак щитовидной железы; торакальные раковые опухоли, такие как рак молочной железы, рак легкого и рак тимуса; желудочно-кишечные раковые опухоли, такие как рак толстой кишки, рак тонкой кишки, рак желудка, рак поджелудочной железы, рак печени, рак желчных протоков, желудочно-кишечная эндокринная опухоль и желудочно-кишечная нейроэндокринная опухоль; раковые опухоли мочевого и полового тракта, такие как рак почки, уротелиальный рак, герминома, опухоль Вильмса, рак предстательной железы, рак тела матки, рак шейки матки, саркома матки и злокачественное новообразование яичника; мышечно-скелетные злокачественные опухоли, такие как первичное злокачественное новообразование костной ткани (например, остеосаркома и саркома Юинга) и саркомы мягких тканей; и другие раковые опухоли, такие как рак кожи, нейробластома, злокачественная глиома (глиобластома), первичная злокачественная лимфома центральной нервной системы, медуллобластома и ПНЭО.
Области CDR3 являются наиболее разнообразными частями и наиболее важными частями, отвечающими за специфичность распознавания антигена. Таким образом, последовательности полинуклеотидов αCDR3, полинуклеотидов βCDR3, пептидов αCDR3 и пептидов βCDR3 настоящего изобретения считаются характерными для CD4+ хелперных Т-клеток, специфичных к пептиду WT1332. Таким образом, в том случае, если полинуклеотид, кодирующий CDR-область α-цепи и β-цепи, или пептид, соответствующий CDR-области, имеют последовательность полинуклеотида или пептида согласно настоящему изобретению, CD4+ хелперная T-клетка считается специфичной к пептиду WT1332.
Например, (i) ДНК-чип, содержащий один или более типов полинуклеотидов αCDR3, (ii) ДНК-чип, содержащий один или более типов полинуклеотидов βCDR3, или (iii) ДНК-чип, содержащий один или более типов полинуклеотидов αCDR3 и один или более типов полинуклеотидов βCDR3, могут применяться для измерения частоты CD4+ хелперных Т-клеток, специфичных к пептиду WT1332, в образце. В частности, образец получают, проводя лизис клеток в образце, полученном от индивида, и выделение нуклеиновых кислоты, после чего образец подвергают контакту с ДНК-чипом.
Например, в том случае, если образец подвергают контакту с чипом (i), и обнаруживают гибридизацию в каком-либо положении, тот же образец подвергают контакту с чипом (ii), чтобы подтвердить, обнаружена ли гибридизация, или нет. Затем, в том случае, если какая-либо гибридизация на чипе (i) и какая-либо гибридизация на чипе (ii) происходит с каким-либо полинуклеотидом αCDR3 и каким-либо полинуклеотидом βCDR3, которые составляют какую-либо пару, показанную на Фигуре 1, можно сделать вывод, что в образце существует CD4+ хелперная T-клетка, специфичная к пептиду WT1332, имеющая функциональный TCR. С применением чипа (III), вышеуказанный процесс можно выполнить в одну стадию.
ДНК-чип может находиться в любой форме, такой как микрочип и микроматрица. Указанные чипы могут быть получены известным методом. Например, полинуклеотиды αCDR3 и полинуклеотиды βCDR3 могут быть иммобилизованы на стеклянной подложке известным методом. Предпочтительно, к ДНК в образце или последовательностям ДНК на чипе присоединяют метку, которая может указывать наличие или отсутствие гибридизации и количество гибридизации.
Не только ДНК-чип, но также и такие методы, как Саузерн-блоттинг, Нозерн-блоттинг, гибридизазия колоний, могут использоваться для измерения частоты CD4+ хелперных Т-клеток, специфичных к пептиду WT1332, в образце.
Кроме того, пептид αCDR3 и пептид βCDR3 могут использоваться для получения антитела к CD4+ хелперной T-клетке, специфичной к пептиду WT1332. CD4+ хелперная T-клетка, специфичная к пептиду WT1332, может быть обнаружена при использовании такого антитела. Рецептор CD4+ хелперной T-клетки, специфичной к пептиду WT1332, можно также стимулировать при использовании такого антитела. Такая стимуляция может быть выполнена in vivo или in vitro.
Чип, содержащий пептиды αCDR3, чип, содержащий пептиды βCDR3, или чип, содержащий пептиды αCDR3 и пептиды βCDR3, также может применяться для обнаружения антитела к CD4+ хелперной T-клетке, специфичной к пептиду WT1332.
Чип, содержащий указанные пептиды, может быть получен при использовании известного метода. Предпочтительно добавить метку, которая может позволить определить присутствие или отсутствие специфичного связывания с пептидами в образце или с пептидами на чипе.
Чип, содержащий антитела к пептидам αCDR3 и/или пептидам βCDR3, также может применяться для определения типа и количества пептидов αCDR3 и/или пептидов βCDR3 в образце или для определения типа и количества CD4+ хелперных Т-клеток, специфичных к пептиду WT1332, в образце.
Чип, на котором иммобилизованы такие антитела, может быть получен с использованием известного метода. Предпочтительно добавить метку, которая может позволить определить присутствие или отсутствие специфичного связывания с пептидами в образце или с антителами на чипе.
Описание последовательностей
SEQ ID NO:1-59 - нуклеотидные последовательности, кодирующие CDR3, содержащийся в TCR клонов CD4+ хелперных Т-клеток.
SEQ ID NO:60-118 - аминокислотные последовательности CDR3, содержащегося в TCR клонов CD4+ хелперных Т-клеток.
SEQ ID NO:119 - обратный праймер для амплификации α-цепи TCR.
SEQ ID NO:120 - обратный праймер для амплификации β-цепи TCR.
SEQ ID NO:121 - обратный праймер для амплификации β-цепи TCR.
SEQ ID NO:122 - праймер для определения нуклеотидных последовательностей CDR3.
SEQ ID NO:123 - аминокислотная последовательность пептида WT1332.
SEQ ID NO:124 - аминокислотная последовательность пептида ВИЧ.
SEQ ID NO:125 - аминокислотная последовательность варианта природного пептида WT1.
Настоящее изобретение более подробно и более конкретно описано посредством примеров, представленных ниже. Однако не следует считать, что примеры ограничивают объем настоящего изобретения.
Пример 1
Пример 1 Получение WT1332-специфичных клонов CD4+ T-клеток и выделение и секвенирование генов T-клеточного рецептора (TCR)
Методика эксперимента являлась следующей.
(1) Способ получения WT1332-специфичных клонов CD4+ T-клеток
(i) Мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC), полученные от здорового индивида, собирали и сеяли в 24-луночные планшеты в количестве 3×106 клеток/лунка. В качестве среды использовали среду X-VIVO 15 с добавкой 10% AB сыворотки и 40 МЕ/мл IL-2.
(ii) Пептид WT1332 добавляли в вышеуказанный i в конечной концентрации 20 мкг/мл и культивировали клетки в течение 7 дней.
(iii) Через 7 дней клетки собирали и подготавливали в среде X-VIVO 15 с добавкой 10% AB сыворотки так, чтобы плотность клеток составила 1×107 клеток/мл, а затем сеяли по 100 мкл в 96-луночный планшет с круглодонными лунками.
(iv) Пептид WT1332, BD GolgiStopTM (BD Bioscience) и костимулирующий реактив CD28/CD49d (BD Bioscience) добавляли в среду X-VIVO 15 с добавкой 10% AB сыворотки в конечных концентрациях 40 мкг/мл, 4 мкг/мл и 4 мкг/мл, соответственно.
(v) Вышеуказанный iv добавляли по 100 мкл в вышеуказанный iii.
(vi) Антитело против CD154 человека, меченное АФЦ (BD Bioscience), добавляли по 10 мкл в вышеуказанный v и инкубировали планшеты в инкубаторе с 5% CO2 в течение 6 часов при 37°C.
(vii) После инкубирования, клетки собирали и окрашивали антителом против CD4 человека, меченным АФЦ-H7 (BD Bioscience), и антителом против CD3 человека, меченным красителем Pacific Blue (BD Bioscience), а также 7-AAD (eBioscience) для удаления мертвых клеток.
(viii) PBMC забирали у 3 здоровых индивидов, смешивали, обрабатывали γ-излучением 30 Гр и подготавливали в среде X-VIVO 15 с добавкой 10% AB сыворотки в конечной концентрации 10%, IL-2 в конечной концентрации 100 МЕ/мл и ФГА в конечной концентрации 3 мкг/мл так, чтобы плотность клеток составила 1×106 клеток/мл. Эти полученные клетки сеяли по 100 мкл в 96-луночные планшеты с круглодонными лунками.
(ix) Фракцию клеток 7-ADD-CD3+CD4+CD154+, то есть фракцию, содержащую WT1332-специфичные CD4+ T-клетки, сортировали по одной клетке в каждую лунку вышеуказанного viii при использовании клеточного сортера FACSAria.
(x) После культивирования в течение 10-14 дней подросшие клетки в каждой лунке использовали в качестве независимых клонов CD4+ T-клеток.
(2) Скрининг WT1332-специфичных клонов CD4+ T-клеток
(i) Каждый клон CD4+ T-клеток из вышеуказанного (1)-x подготавливали в среде X-VIVO 15 с добавкой 1% AB сыворотки так, чтобы плотность клеток составила 3×105 клеток/мл.
(ii) Аутологичные PBMC, стимулированные WT1332 или не стимулированные никакими пептидами, обрабатывали γ-излучением 30 Гр и подготавливали в среде X-VIVO 15 с добавкой 1% AB сыворотки так, чтобы плотность клеток составила 1×106 клеток/мл.
(iii) Вышеуказанные (2)-i и ii сеяли по 100 мкл в 96-луночные планшеты с круглодонными лунками.
(iv) После культивирования в течение 2 дней в каждую лунку добавляли 3H-тимидин в количестве 1 мкКи/лунка.
(v) Через 18 часов 3H-тимидин, включенный в каждый клон CD4+ T-клеток, измеряли и отбирали клоны CD4+ T-клеток, демонстрировавшие WT1332-специфичный пролиферативный ответ. Эти отобранные клоны использовали в качестве WT1332-специфичных клонов CD4+ T-клеток.
(vi) Культуру WT1332-специфичных клонов CD4+ T-клеток подготавливали со стимуляцией WT1332-специфичных клонов CD4+ T-клеток путем сокультивирования с PBMC, которые были получены при облучении аутологичных PBMC, стимулированных WT1332, с частотой один раз за приблизительно 1-2 недели, γ-излучением 30 Гр.
(3) Выделение генов TCR с использованием метода 5'-RACE (Быстрой амплификации концов кДНК)
(i) WT1332-специфичные клоны CD4+ T-клеток культивировали в течение 10 дней или больше от последней стимуляции. Это было нужно для предотвращения контаминации T-клетками, содержащимися в аутологичных PBMC, которые использовали для стимуляции.
(ii) WT1332-специфичные клоны CD4+ T-клеток центрифугировали, добавляли к ним реактив TRIzol (Invitrogen) и выделяли РНК согласно инструкции.
(iii) кДНК синтезировали с РНК, выделенной в вышеуказанном (3)-ii с использованием набора SMARTerTM RACE cDNA Amplification Kit (Clontech).
(iv) гены α-цепи и β-цепи TCR амплифицировали при использовании кДНК, синтезированных в вышеуказанном (3)-iii, в качестве матриц. В отношении используемых праймеров, праймер UPM, входящий в набор SMARTerTM RACE cDNA Amplification Kit, использовали в качестве прямого праймера, а следующие TCR-специфичные праймеры использовали в качестве обратных праймеров:
праймер Cα3'UTR: 5'-CAC AGG CTG TCT TAC AAT CTT GCA GAT C-3' (SEQ ID NO:119)
праймер Cβ1-3'UTR: 5'-CTC CAC TTC CAG GGC TGC CTT CA-3' (SEQ ID NO:120)
праймер Cβ2-3'UTR: 5'-TGA CCT GGG ATG GTT TTG GAG CTA-3' (SEQ ID NO:121).
(v) Амплификацию генов TCR проводили с использованием KOD FX производства ToYoBo при следующих условиях: 94°C, 3 мин -> (98°C, 10 сек -> 68°C, 1 мин) ×35 циклов.
(vi) Размер ПЦР-продуктов подтверждали при использовании электрофореза в агарозном геле, и полосы размером приблизительно 1 тпн вырезали из геля и очищали.
(vii) После добавления аденинов к ПЦР-продуктам, очищенным в вышеуказанном (3)-vi, при использовании Taq-полимеразы, полученные фрагменты лигировали в вектор pCR 2.1.
(viii) Компетентные клетки HST02 трансформировали вышеуказанным (3)-vii, плазмиды выделяли из одиночных колоний и затем секвенировали.
(ix) Анализ последовательности проводили при использовании Международной информационной системы иммуногенетики (http://www.imgt.org/IMGT_vquest/vquest?livret=0&Option=humanTcR) и идентифицировали каждый ген TCR.
В отношении вышеуказанного (3) "Выделение генов TCR с использованием метода 5'-RACE (Быстрой амплификации концов кДНК)", подробная методика эксперимента приведена ниже.
(3-1) Выделение РНК
Выделение РНК из клонов T-клеток выполняли при использовании реактива TRIzol (Invitrogen). Что касается используемых клонов T-клеток, клоны, которые культивировали без стимуляции антигеном в присутствии IL-2 в течение 3 недель, получали с целью предотвращения контаминации питающими клетками.
(3-2) Клонирование полноразмерной кДНК TCR (T-клеточного рецептора) с использованием метода 5'-RACE (Быстрой амплификации концов кДНК)
Для клонирования TCR α/β использовали набор SMARTerTM RACE cDNA Amplification Kit (Clontech). Сначала проводили реакцию 5'-RACE согласно руководству и синтезировали таким образом 1-ю цепь кДНК. Затем для получения полноразмерных кДНК α-цепи и β-цепи TCR реакцию ПЦР проводили с использованием обратных праймеров, специфичных к каждой 3'UTR (нетранслируемой области), и универсального праймера (UPM), который входит в набор, и при использовании синтезированной 1-й цепи кДНК в качестве матрицы. Используемые праймеры являлись следующими.
праймер Cα 3'UTR-RACE: CACAGGCTGTCTTACAATCTTGCAGATC (SEQ ID NО:119)
праймер Cβ1 3'UTR-RACE: CTCCACTTCCAGGGCTGCCTTCA (SEQ ID NО:120)
праймер Cβ2 3'UTR-RACE: TGACCTGGGATGGTTTTGGAGCTA (SEQ ID NО:121)
Затем реакцию ПЦР проводили в реакционном растворе следующего состава, используя KOD FX (TOYOBO).
| [Таблица 1] | |
| 2× ПЦР буфер для KOD FX | 12,5 мкл |
| 2 мМ dNTP | 5,0 мкл |
| 10× UPM | 2,5 мкл |
| 10 мкМ обратного праймера | 1,0 мкл |
| ДНК матрица | 1,0 мкл |
| KOD FX (1,0 Ед/мкл) | 0,5 мкл |
| дистиллированная вода | до 25 мкл |
| Объем реакционного раствора: | 25 мкл |
| Цикл ПЦР: | |
| 94°C, 2 мин -> (98°C, 10 сек -> 68°C, 1 мин)×35 циклов -> 15°C, выдержка | |
После реакции ПЦР проводили электрофорез в 1,0% агарозном геле, вырезали одиночные полосы размером приблизительно 900-1000 пн и очищали продукты ПЦР 50 мкл дистиллированной воды при использовании набора QIAquick Gel Extraction Kit (QIAGEN). Для TA-клонирования требовалось добавить аденин на оба конца продуктов ПЦР. Добавление аденина выполняли при использовании ДНК-полимеразы Taq Platinum (Invitrogen) следующим образом.
(1) Получали 2× реакционный раствор, показанный в Таблице ниже.
| [Таблица 2] | |
| 10× ПЦР буфер | 10 мкл |
| 2 мМ dNTP | 10 мкл |
| 25 мМ MgCl2 | 8,0 мкл |
| Полимераза Taq Platinum | 1,0 мкл |
| добавляли 21 мкл дистиллированной воды до получения общего объема 50 мкл. | |
(2) 2× реакционный раствор инкубировали при 95°C в течение 5 минут.
(3) В раствор добавляли очищенные продукты ПЦР.
(4) Полученные смеси инкубировали при 72°C в течение 10 минут.
Продукты ПЦР с присоединенными аденинами очищали и концентрировали с помощью осаждения этанолом, а затем встраивали в векторы pCR 2.1 (Invitrogen), используя набор для лигирования ДНК Mighty Mix> (TaKaRa). Векторы pCR 2.1, содержащие продукты ПЦР, вводили в компетентные клетки HST02 с помощью трансформации и клонировали.
(3-3) Очистка плазмид, содержащих полноразмерные кДНК α-цепи и β-цепи TCR
Трансформированные компетентные клетки HST02 сеяли на чашки LB/ампициллин и инкубировали при 37°C. Затем одиночные колонии переносили в жидкую среду LB/ампициллин и инкубировали при 37°C с перемешиванием при 200 об/мин. Затем плазмиды выделяли из раствора Escherichia coli, используя автоматизированную систему для выделения ДНК PI-50 (KURABO).
(3-4) Определение CDR3 последовательности TCR при помощи секвенирования
Для секвенирования выделенных плазмид использовали набор BigDye® Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems). Кроме того, использовали обратный праймер M13: caggaaacagctatgac (SEQ ID NO:122). Для анализа TCR и CD3 использовали IMGT/V-QUEST (http://www.imgt.org/IMGT_ vquest/share/textes/).
Определенные нуклеотидные и аминокислотные последовательности CDR3 показаны на Фиг. 1. В некоторых клонах было 2 типа α-цепи и 2 типа последовательностей CDR 3.
Пример 2
Пример 2 Введение генов T-клеточного рецептора (TCR), полученных из WT1332-специфичных CD4+ T-клеток, в CD4+ T-клетки человека
Было подтверждено, что CD4+ T-клетка человека, в которую введены гены T-клеточного рецептора (TCR), полученные из WT1332-специфичной CD4+ T-клетки, показывала WT1332-специфичный и HLA класса II-рестриктированный пролиферативный ответ и продукцию цитокинов.
Гены TCR, показанные в Таблице 3, были выделены из клона 9, который является клоном CD4+ T-клетки, который специфично распознает WT1332 HLA-DPB1*05:01-рестриктированным образом. Эти гены TCR вводили в CD4+ T-клетки, полученные из периферической крови здоровых индивидов, при использовании лентивирусных векторов и исследовали ответ на WT1332 при использовании продукции цитокинов (интерферона-γ и IL-2) в качестве индикатора (фиг. 2A и B). Кроме того, CD4+ T-клетки, трансдуцированные лентивирусными векторами, не несущими гены TCR (обозначенные как пустые), использовали в качестве контроля. CD4+ T-клетки, трансдуцированные WT1332-специфичными генами TCR (обозначенные как "WT1332-TCR-трансдуцированные CD4+ T-клетки" в разделе Примеры), продуцировали IFN-γ и IL-2 только в ответ на WT1332, то есть WT1332-специфично. С другой стороны, контрольно трансдуцированные CD4+ T-клетки не показали WT1332-специфичной продукции цитокинов.
Исследовали влияние концентрации пептида WT1332 на экспрессию цитокина WT1332-TCR-трансдуцированными CD4+ T-клетками. WT1332-TCR-трансдуцированные CD4+ T-клетки в течение 4 часов стимулировали пептидом WT1332 при различных концентрациях и проводили анализ с внутриклеточным окрашиванием цитокинов с целью исследования отношения TNF-α-продуцирующих CD4+ T-клеток к CD4+ T-клеткам. Результаты представлены на фиг. 2C. Продукция цитокина зависела от концентрации пептида WT1332, причем ED50 составила 4,85 мкМ.
При проверке пролиферативной активности WT1332-TCR-трансдуцированных CD4+ T-клеток обнаружили сильную WT1332-специфичную пролиферативную активность, причем пролиферативный ответ был в заметной степени ингибирован антителом к HLA-DP (фиг. 2D).
Затем исследовали пролиферативный ответ и продукцию IFN-γ WT1332-TCR-трансдуцированных CD4+ T-клеток на аутологичные PBMC, стимулированные пептидом WT1332, аутологичные PBMC, стимулированные полноразмерным белком WT1, аутологичные PBMC, стимулированные усеченным белком WT1 (не содержащим последовательность WT1332), PBMC, стимулированные лизатом PHA-blast, PBMC, стимулированные лизатом линии лейкозных клеток TF-1, экспрессирующих WT1, и PBMC, стимулированные лизатом линии лейкозных клеток K562, экспрессирующих WT1. Пролиферацию клеток измеряли путем включения [3H]-тимидина, и IFN-γ измеряли с помощью ELISA. Результаты показаны на Фиг. 2E и Фиг. 2F, соответственно. Было обнаружено, что пролиферацию и продукцию IFN-γ WT1332-TCR-трансдуцированными CD4+ T-клетками существенно повышали PBMC, стимулированные лизатом линий лейкозных клеток (TF-1 и K562), экспрессирующих WT1, а также повышали аутологичные PBMC, стимулированные пептидом WT1332, и аутологичные PBMC, стимулированные полноразмерным белком WT1.
Кроме того, также исследовали продукцию различных цитокинов, которые отвечали на пептиды WT1332, в линиях WT1332-TCR-трансдуцированных CD4+ T-клеток, полученных аналогично линиям CD4+ T-клеток в Примере 2, которые были получены от 3 здоровых (HLA-DPB1*05:01 положительных) доноров (то есть три типа линий клеток). Средние значения цитокин-продуцирующей способности трех типов линий клеток показаны на Фиг. 2G. Цитокины Th1-типа, такие как IL-2, IFN-γ, TNF-α и GM-GSF, вырабатывались в большом количестве.
| [Таблица 3] Гены TCR, выделенные из клона 9 |
|||||
| V ген | J сегмент | D ген | последовательность CDR3 | ||
| Va 8.2 | TRAV13-2*01 | TRAJ53*01 | - | CAENSGGSNYKLTF | (SEQ ID NO:73) |
| Vb 13.3 | TRAB6-1*01 | TRBJ1-5*01 | TRBD01*01 | CASTAGASDQPQHF | (SEQ ID NО:74) |
Пример 3
Пример 3 Усиленная индукция WT1-специфичных CTL CD4+ T-клетками человека, трансдуцированными генами TCR, полученными из WT1332-специфичных CD4+ T-клеток
В общих чертах известно, что CD4+ T-клетка служит в качестве хелперной T-клетки и важна для задействования и поддержания CD8+ T-клеток (CTL), которые являются основными эффекторными клетками, атакующими злокачественные клетки. Таким образом, было исследовано, усиливают ли WT1332-TCR-трансдуцированные CD4+ T-клетки индукцию WT1-специфичных CTL.
PBMC HLA-A*24:02 и HLA-DPB1*05:01-положительных здоровых индивидов смешивали с WT1332-TCR-трансдуцированными CD4+ T-клетками, полученными от тех же здоровых индивидов, в отношении 10:1 и 5:1 (обозначены 1:0,1 и 1:0,2 на Фиг. 3) и инкубировали в течение 1 недели в присутствии измененного пептида WT1235 (в котором M, вторая аминокислота природного пептида WT1, связывающаяся с молекулой HLA-A*24:02, был изменена на Y (CYTWNQMNL) (SEQ ID NO:125)), который является эпитопом HLA-A*24:02-рестриктированных CTL, полученным из WT1 и WT1332. Затем полученные клетки снова стимулировали измененным пептидом WT1235 (с повышенной способностью связываться с молекулой HLA-A*24:02), после чего инкубировали в течение 1 недели. В ряд культур не добавляли IL-2, чтобы правильно оценить хелперную активность CD4+ T-клеток. После культивирования в общей сложности в течение 2 недель, проверяли, усиливалась ли индукция WT1-специфичных CTL WT1332-TCR-трансдуцированными CD4+ T-клетками, при использовании частот CD8+ T-клеток, модифицированных WT1235/HLA-A*24:02 тетрамер-положительных CD8+ T-клеток и модифицированных WT1235-специфичных, интерферон-γ (IFN-γ)-экспрессирующих CD8+ T-клеток в качестве индикаторов. В результате частота CD8+ T-клеток была значительно выше при совместном культивировании с WT1332-TCR-трансдуцированными CD4+ T-клетками по сравнению с культивированием с ложно трансдуцированными CD4+ T-клетками в качестве контроля (фиг.3A). Кроме того, в отношении модифицированных WT1235/HLA-A*24:02 тетрамер-положительных CD8+ T-клеток, которые являются WT1-специфичными CTL, четко положительную популяцию обнаружили при совместном культивировании с WT1332-TCR-трансдуцированными CD4+ T-клетками, однако это не обнаружили в контроле (фиг. 3B). При вычислении количества клеток WT1-специфичных CTL, присутствующих на 100000 лимфоцитов, на основе этих результатов, количество клетки было приблизительно в 28 раз выше при совместном культивировании с WT1332-TCR-трансдуцированными CD4+ T-клетками по сравнению с контролем (фиг. 3C). Аналогично, частота CD8+ T-клеток, экспрессирующих IFN-γ при стимуляции измененным WT1235, также была значительно выше при совместном культивировании с WT1332-TCR-трансдуцированными CD4+ T-клетками (фиг. 3D). На основе приведенного выше было показано, что WT1332-TCR-трансдуцированные CD4+ T-клетки усиливали индукцию WT1-специфичных CTL.
Пример 4
Пример 4 HLA-DPB1*05:01-рестриктированное повреждение WT1-экспрессирующих лейкозных клеток CD4+ T-клетками человека, трансдуцированными генами TCR, полученными из WT1332-специфичных CD4+ T-клеток.
Следующим шагом оценивали цитотоксическую активность, то есть киллерную активность, WT1332-TCR-трансдуцированных CD4+ T-клеток.
Во-первых, HLA-DPB1*05:01 ген выделили и трансфицировали в линию лейкозных клеток TF-1, экспрессирующих WT1, для получения HLA-DPB1*05:01-положительных клеток TF-1. Как показано на фиг.4A, WT1332-TCR-трансдуцированные CD4+ T-клетки сильно повреждали HLA-DPB1*05:01-положительные клетки TF-1, однако они не проявляли цитотоксическую активность в отношении HLA-DPB1*05:01-отрицательных клеток TF-1. Затем для подтверждения, является ли эта цитотоксическая активность WT1-специфичной, получали клетки B-LCL(+) путем сверхэкспрессии гена WT1 в HLA-DPB1*05:01-положительных клетках B-LCL, не экспрессирующих WT1 (обозначены как B-LCL(-)), и использовали эти клетки в качестве клеток-мишеней для оценки цитотоксической активности WT1332-TCR-трансдуцированных CD4+ T-клеток. Как показано на фиг. 4B, B-LCL(+) сильно повреждались WT1332-TCR-трансдуцированными CD4+ T-клетками, однако B-LCL(-) не были повреждены. На основе этих результатов было показано, что WT1332-TCR-трансдуцированные CD4+ T-клетки обладали HLA-DPB1*05:01-рестриктированной и WT1-специфичной цитотоксической активностью. Кроме того, цитотоксическая активность WT1332-TCR-трансдуцированных CD4+ T-клеток подтверждалась при использовании линии лейкозных клеток C2F8, которые были HLA-DPB1*05:01-положительными и экспрессировали WT1 (фиг. 4C).
Следующим шагом исследовали, проявляли ли WT1332-TCR-трансдуцированные CD4+ T-клетки цитотоксическую активность посредством гранзима B и перфорина. В WT1332-TCR-трансдуцированных CD4+ T-клетках были обнаружены высокие уровни экспрессии гранзима B и перфорина (фиг. 4D).
WT1332-TCR-трансдуцированные CD4+ T-клетки и CD4+ T-клетки, так же трансдуцированные пустым вектором (контрольно трансдуцированные CD4+ T-клетки), культивировали с HLA-DPB1*05:01-положительными клетками TF-1, стимулированными пептидом WT1332, или HLA-DPB1*05:01-положительными клетками TF-1, не стимулированными пептидом WT1332, в течение 5 часов в присутствии моноклонального антитела против CD107a, меченного АФЦ. Затем проводили IFN-γ окрашивание и подвергали окрашенные клетки проточной цитометрии. Коэкспрессию IFN-γ и CD107a обнаружили в WT1332-TCR-трансдуцированных CD4+ T-клетках только в том случае, когда WT1332-TCR-трансдуцированные CD4+ T-клетки инкубировали с HLA-DPB1*05:01-положительными клетками TF-1, стимулированными пептидом WT1332 (фиг. 4E). Это показывает, что в WT1332-TCR-трансдуцированных CD4+ T-клетках происходит дегрануляция.
Для подтверждения зависимости цитотоксической активности WT1332-TCR-трансдуцированных CD4+ T-клеток от пути гранзима B/перфорина, HLA-DPB1*05:01-положительные клетки TF-1, которые предварительно обрабатывали 100 мкМ ингибитора гранзима, Ac-IETD-Cho, использовали в качестве клеток-мишеней. HLA-DPB1*05:01-положительные клетки TF-1 предварительно обрабатывали 100 мкМ Ac-IETD-Cho или ДМСО (контроль) в течение 2 часов, затем метили 51Cr, инкубировали с WT1332-TCR-трансдуцированными CD4+ T-клетками и проводили анализ высвобождения 51Cr. Цитотоксическая активность WT1332-TCR-трансдуцированных CD4+ T-клеток в отношении HLA-DPB1*05:01-положительных клеток TF-1, которые предварительно обрабатывали Ac-IETD-Cho, была заметно ниже по сравнению с цитотоксической активностью в отношении клеток TF-1, которые предварительно обрабатывали ДМСО (Фиг. 4F).
При рассмотрении этих результатов в совокупности, было подтверждено, что WT1332-TCR-трансдуцированные CD4+ T-клетки, полученные согласно настоящему изобретению, непосредственно распознавали HLA-DPB1*05:01-положительные лейкозные клетки, экспрессирующие WT1, и повреждали их через путь гранзима B/перфорина.
Пример 5
Пример 5 Противоопухолевое действие в мышах NOG® CD4+ T-клеток человека, трансдуцированных генами TCR, полученными из WT1332-специфичных CD4+ T-клеток
WT1-экспрессирующие человеческие HLA-DPB1*05:01-положительные лейкозные клетки C2F8 (5×104 клеток) вводили мышам NOG® (7 мышей) в хвостовую вену. На следующий день, в качестве экспериментальной группы, CD4+ T-клетки человека, трансдуцированные HLA-DPB1*05:01-рестриктированными WT1332-специфичными генами TCR (SEQ ID NO:14 и 15) (5×106 клеток) и человеческие мононуклеарные клетки периферической крови без T-клеток (2×106 клеток), полученные от того же индивида, в качестве антигенпрезентирующих клеток, вводили вышеуказанным мышам NOG® (3 мыши). В качестве контроля, CD4+ T-клетки человека, трансдуцированные контрольным вектором (5×106 клеток) и человеческие мононуклеарные клетки периферической крови без T-клеток (2×106 клеток), полученные от того же индивида, в качестве антигенпрезентирующих клеток, вводили вышеуказанным мышам NOG® (4 мыши).
Через 1 и 2 недели CD4+ T-клетки человека, трансдуцированные HLA-DPB1*05:01-рестриктированными WT1332-специфичными генами TCR (5×106 клеток), вводили мышам экспериментальной группы в хвостовую вену. CD4+ T-клетки человека, трансдуцированные контрольным вектором (5×106 клеток), вводили контрольным мышам в хвостовую вену. Затем исследовали выживаемость мышей.
Результаты показаны на фиг.5. Поскольку уровень выживаемости мышей экспериментальной группы превысил уровень выживаемости контрольных мышей, было показано, что HLA-DPB1*05:01-рестриктированные WT1332-специфичные TCR- трансдуцированные CD4+ T-клетки человека оказывали противоопухолевое действие in vivo.
Промышленная применимость
Настоящее изобретение может применяться в областях фармацевтических средств для лечения или профилактики злокачественной опухоли, реактивов для исследования злокачественной опухоли, а также тест-систем или наборов реактивов для анализа злокачественной опухоли и т.п.
Claims (26)
1. Пара из полинуклеотида αCDR3 и полинуклеотида βCDR3 для получения антитела против CD4+ хелперной Т-клетки, специфичной в отношении пептида WT1322,
где пара выбрана из 33 комбинаций полинуклеотида αCDR3 и полинуклеотида βCDR3, как показано ниже:
при условии, что указанная последовательность может быть комплементарной последовательностью или вырожденной последовательностью.
2. Ген TCR, содержащий полинуклеотид αCDR3 и полинуклеотид βCDR3 любой пары по п.1.
3. Ген TCR по п.2, получаемый из CD4+ T-клетки, специфичной в отношении пептида WT1332.
4. Способ получения CD4+ хелперной клетки, специфичной в отношении пептида WT1332, включающий
трансдукцию CD4+ T-клетки вектором экспрессии, содержащим ген TCR по п.2, и
получение WT1332-специфичной TCR-трансдуцированной CD4+ T-клетки.
5. WT1332-специфичная TCR-трансдуцированная CD4+ хелперная T-клетка, получаемая способом по п.4.
6. Вектор экспрессии, содержащий ген TCR, который содержит полинуклеотид αCDR3 и полинуклеотид βCDR3 любой пары по п.1.
7. Способ по п.4, где указанную трансдукцию проводят с помощью вектора по п.6.
8. Способ усиления индукции WT1322-специфичных CTL, включающий совместное культивирование CD4+ хелперной T-клетки по п.5 и мононуклеарной клетки периферической крови.
9. Способ лечения или профилактики WT1322-экспрессирующей злокачественной опухоли у индивида, включающий введение CD4+ хелперной T-клетки, полученной способом по п.4, индивиду,
где индивид является HLA-DRB1*15:01-положительным, HLA-DRB1*09:01-положительным, HLA-DRB1*05:01-положительным, HLA-DRB1*04:05-положительным или HLA-DRB1*15:02-положительным,
где CD4+ хелперная Т-клетка получена из CD4+ Т-клеток индивида.
10. Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики WT1322-экспрессирующей злокачественной опухоли, содержащая CD4+ хелперную T-клетку, полученную способом по п.4,
где индивид является HLA-DRB1*15:01-положительным, HLA-DRB1*09:01-положительным, HLA-DRB1*05:01-положительным, HLA-DRB1*04:05-положительным или HLA-DRB1*15:02-положительным,
где CD4+ хелперная Т-клетка получена из CD4+ Т-клетки индивида.
11. Применение CD4+ хелперной T-клетки, полученной способом по п.4, для производства лекарственного средства для лечения или профилактики WT1332-экспрессирующей злокачественной опухоли у индивида,
где индивид является HLA-DRB1*15:01-положительным, HLA-DRB1*09:01-положительным, HLA-DRB1*05:01-положительным, HLA-DRB1*04:05-положительным или HLA-DRB1*15:02-положительным,
где CD4+ хелперная Т-клетка получена из CD4+ Т-клетки индивида.
12. ДНК-чип для измерения количества CD4+ хелперной Т-клетки, специфичной в отношении пептида WT1332, содержащий по крайней мере одну пару олигонуклеотидов по п.1.
13. Применение ДНК-чипа по п.12 для измерения количества CD4+ хелперной Т-клетки, специфичной в отношении пептида WT1332, в образце.
14. Пара пептидов для получения антитела против CD4+ Т-хелперных клеток, специфичных в отношении пептида WT1332, где указанная пара кодируется любой парой полинуклеотидов по п.1.
15. Чип для детекции антитела против CD4+ Т-хелперных клеток, специфичных в отношении пептида WT1332, содержащий пару пептидов по п.14.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2012-200480 | 2012-09-12 | ||
| JP2012200480 | 2012-09-12 | ||
| PCT/JP2013/074748 WO2014042226A1 (ja) | 2012-09-12 | 2013-09-12 | 抗原特異的ヘルパーｔ細胞レセプター遺伝子 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2015113172A RU2015113172A (ru) | 2016-11-10 |
| RU2680588C2 true RU2680588C2 (ru) | 2019-02-22 |
Family
ID=50278334
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015113172A RU2680588C2 (ru) | 2012-09-12 | 2013-09-12 | Гены рецепторов антигенспецифичных хелперных т-клеток |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US10815288B2 (ru) |
| EP (2) | EP3495483A1 (ru) |
| JP (2) | JP6535463B2 (ru) |
| KR (1) | KR20150046346A (ru) |
| CN (1) | CN104797711B (ru) |
| CA (1) | CA2884366A1 (ru) |
| RU (1) | RU2680588C2 (ru) |
| WO (1) | WO2014042226A1 (ru) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104797711B (zh) * | 2012-09-12 | 2018-09-21 | 株式会社癌免疫研究所 | 抗原特异性辅助性t细胞受体基因 |
| JP6202339B2 (ja) * | 2013-12-19 | 2017-09-27 | 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター | ＧＭ−ＣＳＦ産生Ｔ細胞制御剤、及びＴｈ１／Ｔｈ２免疫バランス調節剤 |
| US11390921B2 (en) | 2014-04-01 | 2022-07-19 | Adaptive Biotechnologies Corporation | Determining WT-1 specific T cells and WT-1 specific T cell receptors (TCRs) |
| EP3868388A1 (en) * | 2014-10-03 | 2021-08-25 | Oxford University Innovation Limited | Analysis of t-cell monotypia |
| WO2018231958A1 (en) * | 2017-06-13 | 2018-12-20 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Determining wt-1 specific t cells and wt-1 specific t cell receptors (tcrs) |
| WO2022098750A1 (en) * | 2020-11-03 | 2022-05-12 | La Jolla Institute For Immunology | Hla class ii-restricted tcrs against the kras g12>v activating mutation |
| CN114480399A (zh) * | 2022-03-17 | 2022-05-13 | 江苏医药职业学院 | 降低CPB1基因表达的siRNA、重组载体及其应用 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002079253A1 (fr) * | 2001-03-22 | 2002-10-10 | Haruo Sugiyama | Peptide modifie wt1 |
| WO2005056595A2 (en) * | 2003-12-06 | 2005-06-23 | Imperial Innovations Limited | T cell receptor specific for wilms tumor antigen |
| WO2008105462A1 (ja) * | 2007-02-27 | 2008-09-04 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | ヘルパーｔ細胞の活性化方法およびそのための組成物 |
| RU2010127298A (ru) * | 2007-12-05 | 2012-01-10 | Интернешнл Инститьют Оф Кэнсер Иммунолоджи, Инк. (Jp) | Вакцинная композиция против злокачественной опухоли |
| WO2012046730A1 (ja) * | 2010-10-05 | 2012-04-12 | 国立大学法人大阪大学 | ヘルパーｔ細胞の活性化方法 |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2489227C (en) | 2002-06-12 | 2012-03-13 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Hla-a24-restricted cancer antigen peptides |
| KR101213015B1 (ko) | 2003-11-05 | 2012-12-26 | 인터내셔널 인스티튜트 오브 캔서 이무놀로지 인코퍼레이티드 | Ｗｔ１ 로부터 유도된 ｈｌａ-ｄｒ 결합성 항원 펩티드 |
| JP4111394B2 (ja) | 2003-12-22 | 2008-07-02 | 北海道ティー・エル・オー株式会社 | 改変標的化ｔ細胞の製造方法及び医薬 |
| DK2186896T3 (en) | 2004-03-31 | 2015-12-21 | Int Inst Cancer Immunology Inc | Cancer antigen peptides derived from WT1 |
| ES2558330T3 (es) | 2006-02-22 | 2016-02-03 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | Péptido WT1 restringido por HLA-A*3303 y composición farmacéutica que comprende el mismo |
| RU2481398C2 (ru) | 2006-12-28 | 2013-05-10 | Интернешнл Инститьют Оф Кэнсер Иммунолоджи, Инк. | Hla-a*1101-ограниченный пептид wt1 и содержащая его фармацевтическая композиция |
| KR101773690B1 (ko) * | 2007-03-05 | 2017-08-31 | 인터내셔널 인스티튜트 오브 캔서 이무놀로지 인코퍼레이티드 | 암 항원 특이적 ｔ 세포의 수용체 유전자 및 그것에 따라 코드되는 펩티드 및 이들의 사용 |
| JP5292550B2 (ja) | 2007-03-23 | 2013-09-18 | 静岡県 | Ｔ細胞レセプターβ鎖遺伝子及びα鎖遺伝子 |
| JP2009011236A (ja) | 2007-07-04 | 2009-01-22 | Shizuoka Prefecture | １細胞レベルでのｔ細胞抗原レセプター遺伝子の解析・同定方法 |
| US8497071B2 (en) | 2009-06-29 | 2013-07-30 | California Institute Of Technology | Isolation of unknown rearranged T-cell receptors from single cells |
| GB0917090D0 (en) | 2009-09-29 | 2009-11-11 | Ucl Biomedica Plc | T-cell receptor |
| CN104797711B (zh) * | 2012-09-12 | 2018-09-21 | 株式会社癌免疫研究所 | 抗原特异性辅助性t细胞受体基因 |
-
2013
- 2013-09-12 CN CN201380058833.7A patent/CN104797711B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2013-09-12 US US14/427,465 patent/US10815288B2/en active Active
- 2013-09-12 JP JP2014535597A patent/JP6535463B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2013-09-12 CA CA2884366A patent/CA2884366A1/en not_active Abandoned
- 2013-09-12 EP EP18215510.1A patent/EP3495483A1/en not_active Withdrawn
- 2013-09-12 RU RU2015113172A patent/RU2680588C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2013-09-12 WO PCT/JP2013/074748 patent/WO2014042226A1/ja active Application Filing
- 2013-09-12 EP EP13837129.9A patent/EP2896693A4/en not_active Withdrawn
- 2013-09-12 KR KR1020157008614A patent/KR20150046346A/ko not_active Application Discontinuation
-
2018
- 2018-05-07 JP JP2018089177A patent/JP2018143247A/ja active Pending
- 2018-10-17 US US16/163,448 patent/US11091531B2/en active Active
-
2020
- 2020-10-22 US US17/076,842 patent/US20210070832A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002079253A1 (fr) * | 2001-03-22 | 2002-10-10 | Haruo Sugiyama | Peptide modifie wt1 |
| WO2005056595A2 (en) * | 2003-12-06 | 2005-06-23 | Imperial Innovations Limited | T cell receptor specific for wilms tumor antigen |
| WO2008105462A1 (ja) * | 2007-02-27 | 2008-09-04 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | ヘルパーｔ細胞の活性化方法およびそのための組成物 |
| RU2010127298A (ru) * | 2007-12-05 | 2012-01-10 | Интернешнл Инститьют Оф Кэнсер Иммунолоджи, Инк. (Jp) | Вакцинная композиция против злокачественной опухоли |
| WO2012046730A1 (ja) * | 2010-10-05 | 2012-04-12 | 国立大学法人大阪大学 | ヘルパーｔ細胞の活性化方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| База данных EMBL/EBI последовательность под номером U55105, размещена 18.07.1996. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2014042226A1 (ja) | 2014-03-20 |
| JP6535463B2 (ja) | 2019-06-26 |
| JP2018143247A (ja) | 2018-09-20 |
| RU2015113172A (ru) | 2016-11-10 |
| CA2884366A1 (en) | 2014-03-20 |
| CN104797711A (zh) | 2015-07-22 |
| KR20150046346A (ko) | 2015-04-29 |
| EP2896693A4 (en) | 2016-10-12 |
| US20160009781A1 (en) | 2016-01-14 |
| EP3495483A1 (en) | 2019-06-12 |
| JPWO2014042226A1 (ja) | 2016-08-18 |
| EP2896693A1 (en) | 2015-07-22 |
| US10815288B2 (en) | 2020-10-27 |
| US20190135893A1 (en) | 2019-05-09 |
| US11091531B2 (en) | 2021-08-17 |
| CN104797711B (zh) | 2018-09-21 |
| US20210070832A1 (en) | 2021-03-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11155595B2 (en) | Compositions and methods for use of recombinant T cell receptors for direct recognition of tumor antigen | |
| AU2021202223B2 (en) | Methods of isolating T cells having antigenic specificity for a cancer-specific mutation | |
| US20210070832A1 (en) | Antigen-specific helper t-cell receptor genes | |
| CN105255834B (zh) | 抗原特异性t细胞受体和t细胞表位 | |
| KR102171794B1 (ko) | 헬퍼 ｔ 세포의 활성화 방법 | |
| US20170218042A1 (en) | Methods of isolating t cell receptors having antigenic specificity for a cancer-specific mutation | |
| EP3399985B1 (en) | Compositions and libraries comprising recombinant t-cell receptors and methods of using recombinant t-cell receptors | |
| KR20200065026A (ko) | P53 암-특이적 돌연변이에 대한 항원 특이성을 갖는 t 세포를 단리하는 방법 | |
| CN107074970A (zh) | 特异性针对wt‑1的t细胞免疫疗法 | |
| JP2020517308A (ja) | Ｔｃｒ及びペプチド | |
| JP2022513390A (ja) | Ｔｃｒ及びペプチド |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20200913 |