RU2642269C2 - Среда для культуры клеток, не содержащая олигопептидов - Google Patents

Среда для культуры клеток, не содержащая олигопептидов Download PDF

Info

Publication number
RU2642269C2
RU2642269C2 RU2013112019A RU2013112019A RU2642269C2 RU 2642269 C2 RU2642269 C2 RU 2642269C2 RU 2013112019 A RU2013112019 A RU 2013112019A RU 2013112019 A RU2013112019 A RU 2013112019A RU 2642269 C2 RU2642269 C2 RU 2642269C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
cells
medium
cell
virus
oligopeptides
Prior art date
Application number
RU2013112019A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2642269C9 (ru
RU2013112019A (ru
Inventor
Леопольд Грилльбергер
Манфред Райтер
Вольфганг Мундт
Артур Миттерер
Original Assignee
Баксалта Инкорпорейтид, (US)
Баксалта ГмбХ, (СН)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=37942126&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RU2642269(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Баксалта Инкорпорейтид, (US), Баксалта ГмбХ, (СН) filed Critical Баксалта Инкорпорейтид, (US)
Publication of RU2013112019A publication Critical patent/RU2013112019A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2642269C2 publication Critical patent/RU2642269C2/ru
Publication of RU2642269C9 publication Critical patent/RU2642269C9/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
    • C12N5/005—Protein-free medium
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/05—Inorganic components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/05—Inorganic components
    • C12N2500/10—Metals; Metal chelators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/05—Inorganic components
    • C12N2500/10—Metals; Metal chelators
    • C12N2500/20—Transition metals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/05—Inorganic components
    • C12N2500/10—Metals; Metal chelators
    • C12N2500/20—Transition metals
    • C12N2500/24—Iron; Fe chelators; Transferrin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/32—Amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/38—Vitamins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/46—Amines, e.g. putrescine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/50—Soluble polymers, e.g. polyethyleneglycol [PEG]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/24011—Poxviridae
    • C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
    • C12N2710/24151—Methods of production or purification of viral material
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Изобретения касаются безбелковой среды и способа ее использования. Охарактеризована безбелковая среда для культивирования клеток СНО. Среда не содержит олигопептиды, содержит аминокислоты, витамины, органические и неорганические соли и источники углеводов и дополнена по меньшей мере 2 мг/л путресцина ⋅ 2HCl. Изобретения способствуют росту клеток, их удельной продуктивности и плотности. 2 н. и 3 з.п. ф-лы, 7 ил., 11 пр.

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее изобретение относится к среде для культуры клеток, не содержащей олигопептидов, содержащей по меньшей мере 0,5 мг/л полиамина, и к способу культивирования клеток в упомянутой среде для культуры клеток, не содержащей олигопептидов, содержащей по меньшей мере 0,5 мг/л полиамина. Настоящее изобретение также относится к способам экспрессии по меньшей мере одного белка в среде, содержащей по меньшей мере 0,5 мг/л полиамина, и к способам продукции по меньшей мере одного вируса в среде, содержащей по меньшей мере 0,5 мг/л полиамина.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Для культивирования клеток, в особенности эукариотических клеток, а более конкретно клеток млекопитающих, существует постоянная необходимость в использовании специальных культуральных сред, предоставляющих питательные вещества, которые требуются для эффективного роста клеток и для производства биологических продуктов, в особенности биофармацевтических препаратов, таких как, например, рекомбинантные белки, антитела, вирусы, вирусные антигены и вирусоподобные частицы. Для эффективного производства упомянутых биологических продуктов важно достичь оптимальной плотности клеток, а также повысить экспрессию самого белка для получения максимального выхода продукта.
Состав сред для культуры клеток дополняют целым рядом добавок, которые включают в себя неопределенные компоненты, такие как фетальная сыворотка теленка (FCS), несколько белков животного происхождения и/или гидролизаты белков быка, а также гидролизаты белка растительного происхождения или полученные из дрожжей.
Как правило, сыворотка или вещества, полученные из нее, такие как, например, альбумин, трансферрин или инсулин, могут содержать нежелательные агенты, которые могут загрязнять культуры клеток и полученные из нее биологические продукты. Кроме того, добавки, полученные из сыворотки человека, должны быть проверены на все известные вирусы, включая вирусы гепатита и вирус иммунодефицита человека (HIV), которые могут передаваться через сыворотку. Кроме того, бычья сыворотка и продукты, полученные из нее, несут риск заражения губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота (BSE). Кроме того, все полученные из сыворотки продукты могут быть загрязнены неизвестными веществами. При использовании в культуре клеток сывороточных или белковых добавок, полученных от человека и из животных источников, возникают многочисленные трудности (например, изменение качества композиции из различных партий и риск заражения микоплазмой, вирусами или BSE), особенно, если клетки используются в производстве лекарств или вакцин для введения человеку.
Поэтому было предпринято множество попыток создания эффективных систем клеток-хозяев и условий культивирования, для которых не требуются сыворотка или иные соединения животного белка.
Такие бессывороточные среды были разработаны на основе белковых экстрактов, полученных из растений или дрожжей. Например, известно, что гидролизаты сои могут использоваться для процессов ферментации и могут улучшать рост многих требовательных к среде организмов, дрожжей и грибов. В документе W0 96/26266 описан продукт соевой муки, обработанный папаином, который является источником углеводов и азота, а также многих компонентов, которые могут быть использованы в культуре ткани. Franek et al. (Biotechnology Progress (2000) 16, 688-692) описали эффекты на рост и улучшение продуктивности определенных пептидных фракций гидролизатов сои и пшеницы.
В документе WO 96/15231 описана бессывороточная среда, состоящая из синтетической минимальной поддерживающей среды и экстракта дрожжей, для размножения клеток позвоночных и процесса получения вируса. Композиция среды, составленная из основной среды для культуры клеток и содержащей пептид риса и экстракт дрожжей, и их продукт ферментативной обработки, и/или растительные липиды для роста клеток животных, описана в документе WO 98/15614. Среда, содержащая очищенный гидролизат сои, для культивирования рекомбинантных клеток описана в документе WO 01/23527. В WO 00/03000 описана среда, которая содержит гидролизат сои и экстракт дрожжей, но также требует присутствия рекомбинантных форм белка животных, таких как факторы роста.
В документе ЕР-А-0 481 791 описана биохимически определенная культуральная среда для культивирования сконструированных методами генной инженерии клеток яичника китайского хомячка (СНО), которая лишена белков, липидов и углеводов, полученных из животных источников, содержащая также рекомбинантный инсулин или аналог инсулина, 1%-0,025% (вес/объем) соевого пептона, обработанного папаином, и путресцин. В документе W0 98/08934 описана бессывороточная культура эукариотических клеток, содержащая гидролизованные пептиды сои (1-1000 мг/л), 0,01-1 мг/л путресцина и разнообразные компоненты животного происхождения, включая альбумин, фетуин, различные гормоны и другие белки. В этом контексте следует отметить, что известно, что путресцин вводят в состав стандартных сред, таких как DMEM/Ham F12 в концентрации 0,08 мг/л.
Растительные гидролизаты и/или гидролизаты дрожжей, однако, являются смесями олигопептидов и других неизвестных компонентов и загрязнений неопределенного состава. Более того, качество коммерчески доступных партий гидролизатов значительно варьирует. В результате существуют значительные вариации в производстве рекомбинантных белков или вирусных продуктов (до трехкратных) в зависимости от использованных партий гидролизатов («вариации от партии к партии»). Этот недостаток влияет на пролиферацию клеток, а также экспрессию белка в каждой клетке.
Суммируя, в среды, известные в данной области техники, добавляют белки или пептидные экстракты, полученные из животных, растений или дрожжей; или рекомбинантные версии белков, таких как, например, инсулин, инсулиноподобный фактор роста или другие факторы роста.
Таким образом, существует необходимость в среде для культуры клеток, свободной от животных, растительных и грибных белков и/или олигопептидов, для решения упомянутых выше трудностей. Кроме того, в настоящее время существует потребность в повышении выхода экспрессируемых рекомбинантных белков или каких-либо иных продуктов экспрессии в получении оптимальной среды для культуры клеток для получения биологических продуктов, таких как используемые в фармацевтических препаратах или вакцинах для человека.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Объектом настоящего изобретения является среда для культуры клеток, не содержащая олигопептиды. Еще одним объектом настоящего изобретения являются способы культивирования клеток в упомянутых средах, а также способы эффективной экспрессии рекомбинантных белков и/или способы эффективной продукции вирусов.
Еще одним объектом настоящего изобретения является устранение из среды гидролизатов животного или растительного происхождения или полученных из дрожжей, и получение среды, которая не содержит каких-либо дополнительных белков или олигопептидов.
Неожиданно было обнаружено, что добавление по меньшей мере 0,5 мг/л полиамина к средам для клеточных культур дает благоприятный эффект, который не только способствует клеточному росту, но также повышает экспрессию белка и/или вируса в расчете на клетку. Упомянутый неожиданный благоприятный эффект может быть достигнут даже в среде, не содержащей олигопептидов.
Кроме того, среда, не содержащая олигопептидов, по настоящему изобретению обеспечивает согласованный рост клеток и повышение выхода желаемых продуктов, в частности белков, представляющих интерес, таких как рекомбинантные белки и/или вирусы, независимо от качества и изменений между партиями каких-либо белковых гидролизатов. Специфическое дополнение среды для клеточных культур специфической концентрацией полиаминов действует так, что повышает рост клеток, удельную продуктивность клетки, окончательную плотность клеток.
Следовательно, среды по настоящему изобретению более пригодны для экспрессии рекомбинантного белка, продукции вируса и повышения скорости роста клеток по сравнению со средами, известными в данной области. Кроме того, среда, не содержащая олигопептидов, по настоящему изобретению устраняет необходимость добавления гидролизата белка к среде для культуры клеток.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На фиг. 1 показан график, который описывает эффект добавления 2,0 мг/л путресцина⋅2НС1 на объемную продуктивность FVIII-CoA, выраженную в [единицах на литр в день], клеток GD8/6, культивируемых в среде BAV, в зависимости от времени культивирования, выраженного в [днях]. Стрелка = 11-й день: Добавление путресцина⋅2НС1 (2,0 мг/л).
На фиг. 2 показана таблица, в которой сравниваются эффекты добавления путресцина необязательно в комбинации с дополнительной добавкой Fe (II) и Cu (II) на объемную и удельную продуктивность клетки (QP, выраженную в [единицах (U) на литр в день], qp, выраженную в [миллиU на 106 клеток в день]) и на удельный темп роста μ, выраженный как удельный темп роста в день [d-1] клеток GD8/6, культивируемых в среде BAV.
На фиг. 3 показана таблица, в которой сравниваются эффекты путресцина и/или орнитина на удельный темп роста (μ абсолютный, μ относительный) и удельную продуктивность клеток (qp абсолютная, выраженная в [миллиU на 106 клеток в день], qp относительная, выраженная в %) клеток GD8/6, культивируемых в среде BAV.
На фиг. 4 показана таблица, в которой сравниваются эффекты путресцина и спермина на удельный темп роста (μ абсолютный, μ относительный) и удельную продуктивность клеток (qp абсолютная, qp относительная) клеток GD8/6, культивируемых в среде BAV.
На фиг. 5 показана таблица, в которой сравниваются эффекты путресцина и этаноламина на удельный рост (μ абсолютный, μ относительный) и удельную продуктивность (qp абсолютная, qp относительная) клеток GD8/6, культивируемых в среде BAV.
На фиг. 6 показан график, который описывает эффект добавления 3,6 мг/л путресцина⋅2НС1 на средний титр вируса MVA, выраженный в [инфицирующая доза культуры ткани (ТС1П50)/мл * 108].
-: без добавления путресцина, Putr.: с добавлением 3,6 мг/л путресцина⋅2НС1.
На фиг. 7 показан график, который описывает эффект добавления путресцина⋅2НС1 в различных концентрациях, выраженных в [мг/л], на средний титр вируса MVA, выраженный в [ТСЮ50/мл * 108].
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Одним из объектов настоящего изобретения является среда для культуры клеток, не содержащая олигопептидов и содержащая по меньшей мере 0,5 мг/л полиамина.
Если не указано иное, значения концентрации, указываемые в данном документе, относятся к форме свободного основания компонента (компонентов).
Термин «полиамин» обозначает какую-либо группу биогенных полиаминов, которые являются органическими поликатионами, производными от ароматических или катионных аминокислот. Полиамины состоят из углерода, азота и водорода и включают две или более аминогрупп. Полиамины имеют один или несколько положительных зарядов и гидрофобный скелет. Термин охватывает, например, молекулы, выбранные из группы, состоящей из кадаверина, путресцина, спермидина, спермина, агматина, орнитина и их комбинаций. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения культуральная среда, не содержащая олигопептидов, содержит орнитин, или путресцин, или спермин, или их комбинацию.
В еще одном варианте осуществления полиамин культуральной среды по настоящему изобретению, не содержащей олигопептидов, происходит из источника, отличного от гидролизата белка. В одном из вариантов осуществления полиамин получен синтетическим путем.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения концентрация полиамина составляет по меньшей мере около 0,5 мг/л, в еще одном варианте осуществления по меньшей мере около 1 мг/л, еще в одном варианте осуществления по меньшей мере около 2 мг/л, еще в одном варианте осуществления по меньшей мере 5 мг/л и еще в одном варианте осуществления по меньшей мере 8 мг/л, а еще в одном варианте осуществления по меньшей мере 10 мг/л.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения концентрация полиамина находится в диапазоне от около 0,5 мг/л до около 30 мг/л, в еще одном варианте осуществления - от около 0,5 мг/л до около 20 мг/л. В еще одном варианте осуществления - от около 1,0 мг/л до около 20 мг/л, в еще одном варианте осуществления - от около 2,0 мг/л до около 20 мг/л, в еще одном варианте осуществления - от около 2 мг/л до около 10 мг/л, в альтернативном варианте осуществления - от около 2 мг/л до около 8 мг/л, а еще в одном варианте осуществления - от около 2 мг/л до около 5 мг/л в среде.
Концентрации, указанные выше, соответствуют концентрациям чистого полиамина. Если используется производное полиамина или соединение, содержащее полиамин, концентрация группы полиамина находится в вышеупомянутых диапазонах. Например, 2 мг/л путресцина⋅2НС1 эквивалентны концентрации путресцина около 1,095 мг/л (без⋅2НС1).
Термин «среда, не содержащая олигопептидов» по настоящему изобретению относится к безбелковой среде, которая не содержит олигопептидов, таких как, например, олигопептиды, происходящие из гидролизата белка. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения среда не содержит олигопептидов размером двадцать или более аминокислот. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения среда не содержит олигопептидов размером пятнадцать или более аминокислот. В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения среда не содержит олигопептидов размером десять или более аминокислот. В одном из вариантов осуществления среда не содержит олигопептидов размером семь или более аминокислот, в еще одном варианте осуществления олигопептиды не содержат олигопептидов размером пять или более аминокислот, в еще одном варианте осуществления олигопептиды не содержат олигопептидов размером три или более аминокислоты. В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения среда не содержит олигопептидов размером две или более аминокислоты.
Среда по настоящему изобретению может необязательно содержать глютатион и/или по меньшей мере одну стабильную форму глютамина, такую как, например, L-аланил-L-глютамин. Термин «глютатион», как он используется в данном документе, относится к трипептиду, состоящему из аминокислот: глютамата, цистеина и глицина, включая окисленную форму глютатиона, т.е. дисульфид глютатиона, димер глютатиона, образуемый дисульфидной связью между сульфгидрильными боковыми цепями цистеина при окислении.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения среда для культуры клеток, не содержащая олигопептидов, не содержит олигопептидов размером три или более аминокислот, но может необязательно содержать глютатион.
В еще одном варианте осуществления среда для культуры клеток, не содержащая олигопептидов, не содержит олигопептидов размером две или более аминокислоты, но может необязательно содержать глютатион и/или по меньшей мере одну стабильную форму глютамина.
Характерными белками и/или олигопептидами, которых избегают использовать в среде по настоящему изобретению, являются белки и/или олигопептиды, присутствующие в сыворотке и в веществах сывороточного происхождения, таких как, например, альбумин, трансферрин, инсулин или другие факторы роста, а также их рекомбинантные формы, или олигопептиды из растительных или дрожжевых гидролизатов или их нефильтрованных форм.
Культуральная среда, не содержащая олигопептидов, по настоящему изобретению может быть основана на какой-либо основной среде, такой как DMEM, Ham's F12, среда 199, McCoy или RPMI, хорошо известных специалистам в данной области. Основная среда может содержать множество ингредиентов, включая аминокислоты, витамины, органические и неорганические соли, а также источники углеводов, каждый ингредиент присутствует в количестве, которое поддерживает культивирование клеток, указанные количества хорошо известны специалистам в данной области. Среда может содержать дополнительные вещества, такие как буферные вещества, например бикарбонат натрия, антиоксиданты, стабилизаторы для противодействия механическому воздействию или ингибиторы протеаз. Если требуется, могут быть добавлены неионные детергенты, такие как сополимеры и/или смеси полиэтиленгликолей и полипропиленгликолей (например, Pluronic F68, фирма SERVA).
В одном из вариантов осуществления культуральной среды по настоящему изобретению полиамин контролирует синтез ДНК и РНК, и/или клеточную пролиферацию, и/или клеточную дифференцировку, и/или стабилизацию мембраны, и/или противоокислительную защиту ДНК.
В одном из вариантов осуществления добавление по меньшей мере 0,5 мг/л полиамина к культуральной среде, не содержащей олигопептидов, повышает экспрессию белка и/или вируса в культивируемых клетках. В еще одном варианте воплощения экспрессия белка или титр вируса в культивируемых клетках могут быть повышены по меньшей мере на 50% путем добавления по меньшей мере 0,5 мг/л полиамина к среде для культуры клеток, не содержащей олигопептидов. В еще одном варианте осуществления указанное повышение составляет по меньшей мере 60%. В еще одном варианте осуществления удельная продуктивность клеток повышается по меньшей мере в два раза при добавлении по меньшей мере 0,5 мг/л полиамина к среде для культуры клеток, не содержащей олигопептидов; в еще одном варианте осуществления удельная продуктивность клеток повышается по меньшей мере в три раза. В еще одном варианте осуществления добавление по меньшей мере 0,5 мг/л полиамина приводит к повышению экспрессии белка или титра вируса по меньшей мере до 400%; в другом варианте осуществления по меньшей мере до 500%; в другом варианте осуществления по меньшей мере до 600%; в другом вариант осуществления по меньшей мере до 700%.
В одном из вариантов осуществления удельный темп роста культивируемых клеток может быть повышен путем добавления по меньшей мере 0,5 мг/л полиамина к культуральной среде, не содержащей олигопептидов. В еще одном варианте осуществления упомянутый удельный темп роста может быть повышен на 10%. В еще одном варианте осуществления упомянутый удельный темп роста может быть повышен на 20%. В еще одном варианте осуществления упомянутый удельный темп роста может быть повышен на 50%. В другом варианте осуществления упомянутый удельный темп роста может быть повышен на 70%. В еще одном варианте осуществления упомянутый удельный темп роста может быть повышен на 80%. В еще одном варианте осуществления упомянутый удельный темп роста может быть повышен на 90%. В еще одном варианте осуществления упомянутый удельный темп роста может быть повышен на 100%.
В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения среда имеет определенный химический состав. Термин «имеет определенный химический состав», как он используется в настоящем документе, означает, что среда не содержит каких-либо неопределенных дополнений, таких как экстракты из частей животных, органов, желез, растений или дрожжей. Соответственно, каждый компонент такой среды точно определен.
Настоящее изобретение также относится к способу культивирования клеток, включающему стадии:
(a) получения среды для культивирования клеток, не содержащей олигопептидов, по настоящему изобретению, и
(b) размножения клеток в среде с образованием культуры клеток.
Настоящее изобретение не ограничено каким-либо типом клеток. Примеры типов клеток включают в себя клетки млекопитающих, клетки насекомых, клетки птиц, бактериальные клетки и клетки дрожжей. Клетки могут, например, представлять собой стволовые клетки или рекомбинантные клетки, трансформированные вектором для экспрессии рекомбинантного гена, или клетки, трансфецированные вирусом для продуцирования вирусных продуктов. Клетки также могут быть, например, клетками, представляющими интерес, без рекомбинантной трансформации, например В-клетки, продуцирующие антитела, которые могут быть трансформированы в иммортализованное состояние, например, путем вирусной инфекции, подобной инфицированию вирусом Эпштейна-Барр. Клетки могут быть также, например, эмбриональными, например клетками куриного эмбриона, или представлять собой эмбриональные клеточные линии. Пригодными являются клетки, которые применяются для производства вирусов in vitro. Конкретные примеры подходящих клеток включают клетки BSC, клетки LLC-MK, клетки CV-1, клетки COS, клетки VERO, клетки MDBK, клетки MDCK, клетки CRFK, клетки RAF, клетки RK, клетки ТСМК-1, клетки LLCPK, клетки РК15, клетки LLC-RK, клетки MDOK, клетки ВНК-21, клетки СНО, клетки NS-1, клетки MRC-5, клетки WI-38, клетки ВНК, клетки 293, клетки RK, клетки Per.С6 и клетки куриного эмбриона.
Клетки, используемые по настоящему изобретению, могут культивироваться, например, способом, выбранным из группы, состоящей из периодического культивирования, периодического культивирования с подпиткой, перфузионного культивирования и хемостатического культивирования, которые хорошо известны в данной области.
Настоящее изобретение также относится к способу экспрессии по меньшей мере одного белка, такого как, например, гетерологический или аутологический белок или рекомбинантный белок, который включает стадии:
(a) получения культуры клеток;
(b) введения по меньшей мере одной последовательности нуклеиновой кислоты, содержащей кодирующую последовательность по меньшей мере одного белка в клетки;
(c) отбора клеток, несущих последовательность нуклеиновой кислоты; и
(d) экспрессирования белка в клетках, находящихся в среде, содержащей по меньшей мере 0,5 мг/л полиамина.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения среда на стадии d) представляет собой среду, не содержащую олигопептидов, по настоящему изобретению. В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения клетки культуры на стадии а) выращивают в культуральной среде, не содержащей олигопептидов, по настоящему изобретению. В еще одном варианте осуществления стадии a)-d) проводились в среде культуры клеток, не содержащей олигопептидов, по настоящему изобретению.
Последовательность нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность, кодирующую по меньшей мере один белок, может представлять собой вектор. Вектор может доставляться вирусом или может представлять собой плазмиду. Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая белок, может представлять собой специфический ген или быть его биологически функциональной частью. В одном из вариантов осуществления белок представляет собой по меньшей мере биологически активную часть фактора свертывания крови, такого как фактор VIII, или по меньшей мере биологически активную часть белка, участвующего в формировании красных кровяных клеток и ангиогенезе, такого как эритропоэтин, или моноклональное антитело.
В варианте осуществления последовательность нуклеиновой кислоты включает последовательность, кодирующую по меньшей мере один белок, выбранный из группы, состоящей из фактора свертывания крови VII, фактора свертывания крови VIII, фактора свертывания крови IX, vWF, ADAMTS13 и фурина.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения нуклеиновая кислота также включает другие последовательности, подходящие для контролируемой экспрессии белка, такие как промоторная последовательность, энхансеры, ТАТА-боксы (боксы Хогнесса), сайты, инициирующие транскрипцию, полилинкеры, сайты рестрикции, поли-А-последовательности, последовательности процессинга белка, селекционные маркеры и им подобное, что широко известно специалистам в данной области техники.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения клетки выбирают из группы, состоящей из клеток СНО, клеток 293 и клеток ВНК.
В соответствии с еще одним вариантом осуществления настоящего изобретения следующие клеточные линии могут быть трансформированы с помощью рекомбинантного вектора для экспрессии соответствующих продуктов: клетки СНО - для продукции рекомбинантных факторов свертывания крови, например фактора VII и/или фактора VIII, и/или моноклональных антител, клетки ВНК - для продукции рекомбинантного эритропоэтина, трансформированные вирусом Эпштейна-Барра, иммортализованные В-клетки человека - для продукции человеческих антител. Подходящими комбинациями клетка/белок являются, например, клетки СНО/фактор свертывания крови VIII, клетки СНО/фактор свертывания крови VII, клетки CHO/ADAMTS13, клетки СНО/фурин и клетки 293/фактор свертывания крови IX.
В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения экспрессия по меньшей мере одного белка клетками, культивируемыми в среде по данному изобретению, повышена по сравнению с экспрессией белка клетками, не культивируемыми в среде по настоящему изобретению. В еще одном варианте осуществления указанная экспрессия повышена по меньшей мере на 10%, по еще одному варианту осуществления по меньшей мере на 50%.
Настоящее изобретение относится к способу продукции по меньшей мере одного вируса или по меньшей мере одной части вируса, включающему стадии:
a) получения культуры клеток;
b) инфицирования клеток по меньшей мере одним вирусом;
c) отбора клеток, инфицированных вирусом; и
d) размножения по меньшей мере одного вируса в клетках в среде, содержащей по меньшей мере 0,5 мг/л полиамина.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения, среда на стадии d) представляет собой среду, не содержащую олигопептидов, по настоящему изобретению. В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения клетки культуры на стадии а) выращивались в среде, не содержащей олигопептидов, по настоящему изобретению. В еще одном варианте осуществления стадии a)-d) проводятся в среде для культуры клеток, не содержащей олигопептидов, по настоящему изобретению.
Вирус, используемый в способе по настоящему изобретению, может быть любым вирусом, таким как, например, поксвирусы, например вирусами коровьей оспы или ослабленными вирусами коровьей оспы (оспенной вакцины); коронавирусами, например вирусами SARS (атипичная пневмония); ортомиксовирусами, например вирусами гриппа А или В; парамиксовирусами; ретровирусами, например лентивирусом; тогавирусами, например вирусом Росс-Ривер; флавивирусами, например западно-нильским вирусом, вирусом желтой лихорадки или вирусом FSME (т.е. клещевой вирусный энцефалит); энтеровирусами, например вирусом гепатита А; пикорнавирусами; аренавирусами; вирусами герпеса или аденовирусами. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения вирус представляет собой модифицированный вирус коровьей оспы (MVA). Вирус может быть размножен по настоящему изобретению для продукции соответствующей вакцины.
Вирус может быть вирусом дикого типа, ослабленным вирусом, химерным вирусом, или рекомбинантным вирусом, или их комбинацией, например, ослабленным и рекомбинантным. Кроме того, вместо истинных вирионов, используемых для инфицирования клеток вирусом, может быть использован клон инфицирующей нуклеиновой кислоты. Также могут быть использованы расщепленные вирионы.
Способ продукции вируса может быть использован для продукции иммуногенных композиций, включающих вирус, вирусный антиген или вирусоподобную частицу.
Клетки, используемые в способе продукции вируса по настоящему изобретению, могут быть выбраны из группы, включающей в себя клетки млекопитающих, клетки насекомых, клетки птиц, бактериальные клетки и клетки дрожжей. В одном из вариантов осуществления клетки, используемые в способе продукции вируса по настоящему изобретению, выбраны из группы, включающей клетки Vero (линия клеток почки африканской зеленой мартышки) и клетки куриного эмбриона.
Подходящими для продукции вируса или части вируса комбинациями клеток и вирусов являются, например, клетка Vero/ослабленный вирус коровьей оспы, клетка Vero/вирус коровьей оспы, клетка Vero/гепатит А, клетка Vero/вирус гриппа, клетка Vero/западно-нильский вирус, клетка Vero/вирус SARS, клетка Vero/вирус желтой лихорадки и клетки куриного эмбриона/вирус FSME. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения комбинация клетка/вирус представляет собой клетки куриного эмбриона/модифицированный вирус коровьей оспы Ankara (MVA).
Подходящие способы культивирования включают в себя периодическое культивирование, периодическое культивирование с подпиткой, перфузионное культивирование и хемостатическое культивирование.
Настоящее изобретение далее будет проиллюстрировано нижеследующими примерами, не является ограниченным ими.
ПРИМЕРЫ
Пример 1: Получение среды BAV
Среду, не содержащую олигопептидов (среда BAV), получали из основной среды DMEM/HAM's F12 (1:1), содержащей неорганические соли, аминокислоты, витамины и другие компоненты (фирма Life technologies, 32500 Powder). Также добавлены L-глютамин (600 мг/л), аскорбиновая кислота (20 мкМ), этаноламин (25 мкМ), Synperonic ® (фирма SERVA) (0,25 г/л), селенит натрия (50 нМ). Дополнительно к среде для культуры клеток были добавлены незаменимые аминокислоты: L-аспарагин⋅Н2О 20 мг/л, L-цистеин⋅НС1⋅Н20 15 мг/л, L-цистин⋅2 HCl 20 мг/л, L-пролин 35 мг/л, L-триптофан 20 мг/л.
Пример 2: Определение количества клеток
Количество клеток из суспензии клеток или иммобилизованных клеток определяли либо подсчетом с помощью счетчика клеток CASY® cell counter, как описано Scharfe et al., Biotechnologie in LaborPraxis 10: 1096-1103 (1988), или экстракцией лимонной кислотой и флуоресцентным окрашиванием ядер с последующим подсчетом с помощью NucleoCounter® (фирма Chemometec, Дания). Удельный темп роста (μ) рассчитывали по повышению плотности клеток (Xt) и/или скорости разбавления (D) стационарного состояния хемостатических культур суспензий клеток в течение определенного интервала времени (t):
μ=D+ln (Xt/X0)/t
Пример 3: Определение активности FVIII
Активность фактора VIII (FVIII) (ср. Фиг. 1-5) измеряли с помощью хромогенного анализа (фирма Chromogenic, Швеция).
Пример 4: Расчет объемной (QP) и клеточно специфической продуктивности (qp)
Объемную продуктивность (QP) рассчитывали из количества единиц активности выхода на литр объема реактора в день (U/L/d) в системе продукции.
Удельная продуктивность клетки (qp) определяется как количество продуцированного белка (U или мкг) на количество клеток в день.
Пример 5: Условия крупномасштабной культуры клеток
Клеточные культуры рекомбинантных клеток млекопитающих (например, клетки СНО, стабильно экспрессирующие фактор VIII, такие как клетки GD8/6) выращивали в суспензии в хемостатической культуре в 10-литровых биореакторах. Условия культуры: 37°С, насыщение кислородом 20% и рН 7,0-7,1 поддерживали постоянно. Культуры снабжали постоянной подпиткой средой BAV.
Пример 6: Эффект добавления полиамина на экспрессию FVIII
Клетки GD8/6 выращивали в хемостатической культуре в биореакторе объемом 10 л, как описано в Примере 5 с постоянной подачей среды BAV в течение 11 дней, что приводило к пониженной продуктивности <100U/L/d. Путем добавления путресцина⋅2НС1 (2 мг/л) объемная экспрессия FVIII повышалась на 800% (ср. Фиг. 1). Соответственно, путресцин мог быть ясно идентифицирован как движущий фактор клеточно-специфической экспрессии в клеточной линии GD8/6.
Пример 7: Эффект добавления полиамина, а также Fe (II) и Си (II) на экспрессию FVIII
Клетки GD8/6 выращивали в хемостатической культуре в биореакторе объемом 10 л, как описано в Примере 5, что приводило к средней продуктивности 271 U/L/D, с малыми удельной клеточной продуктивностью и удельным темпом клеточного роста. Путем добавления путресцина⋅2НС1 (2 мг/л) экспрессия FVIII повышалась до 870 U/L/D, главным образом благодаря повышению удельной клеточной продуктивности. Дополнительные добавки Fe (II) и Cu (II) в концентрации, которая обычно содержится в гидролизатах сои, приводили к повышению удельного темпа клеточного роста приблизительно 0,60 d-1, и может быть достигнуто повышение удельной продуктивности клеток до более чем 1700 миллиU/106 клеток/день. В таких условиях достигается объемная продуктивность более 2685 U/L/D. Дальнейшее повышение плотности клеток приводит к объемной продуктивности более 3000 U/L/D. Максимальная объемная продуктивность среды, содержащей гидролизат сои, в сравнимых условиях ферментации составляла 2000-2500 U/L/D, показывая, что химически определенная среда, содержащая только путресцин и 2 дополнительных иона металлов, превосходит какую-либо среду с гидролизатом сои с композицией, исследованной в данном процессе ранее (ср. Фиг. 2).
Пример 8: Условия культуры клеток малого объема
Эксперименты с малым объемом клеток GD8/6 в суспензионной культуре выполняли в роллерных колбах [фирмы] Techne с рабочим объемом 200 мл в периодической подпитываемой культуре при 37°С, без контроля рН и рО2. Культуры снабжали средой BAV, как это определено выше, с дополнительными добавками путресцина⋅2HCl, орнитина⋅HCl, спермина⋅4HCl или этаноламина, или их комбинациями в диапазоне 0-18 мг/л (эквивалентном 0-10 мг/л биогенного амина без⋅HCl (ср. Фиг. 3-5).
Пример 9: Эффект добавления нескольких полиаминов и комбинаций полиаминов на экспрессию FVIII
Клетки GD8/6 из культуры в среде BAV, как описано в Примере 8, центрифугировали и переносили в роллерные колбы фирмы Techne с рабочим объемом 200 мл и инкубировали при плотности клеток около 1-26 клеток/мл в определенной среде с добавлением этаноламина, путресцина, орнитина и/или спермина, как показано на Фиг. 3, 4 и 5. Орнитин, который является предшественником путресцина в [метаболическом] пути биогенных аминов, может частично заменять путресцин концентрационно-зависимым образом. Добавление орнитина в различных концентрациях к среде, содержащей путресцин⋅2HCl, приводило к дополнительному повышению удельных продуктивности FVIII и темпа роста (ср. Фиг. 3). Однако этаноламин, который не является полиамином по данному изобретению, не мог заменить путресцин в какой-либо исследованной концентрации, а повышение концентрации этаноламина в среде, содержащей путресцин, не приводило к существенному повышению объемных продуктивностей или удельных темпов роста (ср. Фиг. 5). Еще один эксперимент в сходных условиях показал, что спермин, еще один промежуточный продукт пути [метаболизма] биогенных аминов, может заместить путресцин концентрационно-зависимым образом (ср. Фиг. 4).
Пример 10: Эффект добавления полиамина на продукцию вируса MVA
Первичные культуры клеток куриного эмбриона культивировали в роллерных колбах фирмы Techne (рабочий объем 200 мл) с использованием среды, не содержащей пептидов (среда FM) без добавления и с добавлением 3,6 мг/л путресцина⋅2 HCl.
Среду FM приготавливали из основной среды M199, содержащей неорганические соли, аминокислоты, витамины и другие компоненты (фирма Life technologies, 31150 Powder). Также добавляли NaHCO3 (до 4,4 г/л), гентамицин⋅SO4 (50 мкг/л) и неомицин⋅SO4 (50 мкг/л).
Культуры клеток были инфицированы вирусом MVA и супернатанты исследовали на титр вируса анализом TCID50. Путем добавления путресцина средний титр вируса (n=16 образцов каждый) может быть повышен приблизительно на 50% (ср. Фиг. 6).
Пример 11: Эффект добавления нескольких доз полиамина на продукцию вируса MVA
Первичные культуры клеток куриного эмбриона культивировали в роллерных колбах фирмы Techne (рабочий объем 200 мл) с использованием среды, не содержащей пептидов (среда СЕМ) без добавления или с добавлением 3,6 и 9 мг/л путресцина⋅2 HCl.
Среду СЕМ готовили из основной среды DMEM/HAM's F12 (1:1), содержащей неорганические соли, аминокислоты, витамины и другие компоненты (фирма Life technologies, 32500 Powder). Также добавляли NaCO3 (2 г/л), L-глютамин (600 мг/л), аскорбиновую кислоту (20 мкМ), этаноламин (25 мкМ), Synperonic ® (фирма SERVA) (0,25 г/л), селенит натрия (50 нМ), FeSO4⋅7H2O (600 мкг/л), гентамицин⋅SO4 (50 мкг/л) и неомицин⋅SO4 (50 мкг/л). Дополнительно к среде культуры клеток добавляли незаменимые аминокислоты: L-аспарагин⋅Н2О 20 мг/л, L-цистеин⋅HCl⋅Н2О 15 мг/л, L-цистин⋅2 НС1 20 мг/л, L-пролин 35 мг/л, L-триптофан 20 мг/л.
Культуры клеток инфицировали вирусом MVA, и супернатанты исследовали на титр вируса анализом TCID50. Путем добавления путресцина 9 мг/л средний титр вируса (n=4 образцов каждый) может быть повышен приблизительно на 60% (ср. Фиг. 7).

Claims (7)

1. Безбелковая среда для культивирования клеток СНО, не содержащая олигопептидов, содержащая аминокислоты, витамины, органические и неорганические соли и источники углеводов и дополненная по меньшей мере 2 мг/л путресцина⋅2HCl.
2. Среда, не содержащая олигопептидов по п. 1, дополнительно содержащая один или более из группы, состоящей из кадаверина, спермидина, спермина, агматина и орнитина.
3. Среда, не содержащая олигопептидов по п. 1, причем среда химически определена.
4. Способ культивирования клеток СНО, включающий стадии:
a) получения среды для культуры клеток, не содержащей олигопептидов в соответствии с п. 1; и
b) размножения клеток в среде с получением клеточной культуры.
5. Способ по п. 4, в котором клетки СНО трансформированы рекомбинантным вектором для экспрессии фактора VII, и/или фактора VIII, и/или моноклонального антитела.
RU2013112019A 2006-01-04 2013-03-18 Среда для культуры клеток, не содержащая олигопептидов RU2642269C9 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US75641906P 2006-01-04 2006-01-04
US60/756,419 2006-01-04

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2008131953/10A Division RU2486236C2 (ru) 2006-01-04 2007-01-03 Способ экспрессии белка

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017144220A Division RU2758802C2 (ru) 2006-01-04 2017-12-18 Среда для культуры клеток, не содержащая олигопептидов

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2013112019A RU2013112019A (ru) 2014-09-27
RU2642269C2 true RU2642269C2 (ru) 2018-01-24
RU2642269C9 RU2642269C9 (ru) 2018-10-31

Family

ID=37942126

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2008131953/10A RU2486236C2 (ru) 2006-01-04 2007-01-03 Способ экспрессии белка
RU2013112019A RU2642269C9 (ru) 2006-01-04 2013-03-18 Среда для культуры клеток, не содержащая олигопептидов
RU2017144220A RU2758802C2 (ru) 2006-01-04 2017-12-18 Среда для культуры клеток, не содержащая олигопептидов

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2008131953/10A RU2486236C2 (ru) 2006-01-04 2007-01-03 Способ экспрессии белка

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017144220A RU2758802C2 (ru) 2006-01-04 2017-12-18 Среда для культуры клеток, не содержащая олигопептидов

Country Status (18)

Country Link
US (4) US20070212770A1 (ru)
EP (4) EP1974014B1 (ru)
JP (6) JP5259418B2 (ru)
KR (2) KR101423344B1 (ru)
CN (2) CN101360820A (ru)
AU (1) AU2007204044B2 (ru)
CA (1) CA2633306A1 (ru)
CY (1) CY1119046T1 (ru)
DK (3) DK2522717T3 (ru)
ES (3) ES2790887T3 (ru)
HK (1) HK1177950A1 (ru)
HU (1) HUE032744T2 (ru)
LT (1) LT1974014T (ru)
PL (3) PL3121266T3 (ru)
PT (3) PT3121266T (ru)
RU (3) RU2486236C2 (ru)
SI (1) SI2522717T1 (ru)
WO (1) WO2007077217A2 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2778325C1 (ru) * 2019-12-06 2022-08-17 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Белковые композиции против vegf и способы их получения

Families Citing this family (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101423344B1 (ko) 2006-01-04 2014-07-30 백스터 인터내셔널 인코포레이티드 올리고펩티드-무함유 세포 배양 배지를 이용하여 단백질을 발현시키는 방법
PT2235197T (pt) * 2007-12-27 2017-10-11 Baxalta Inc Processos para cultura de células
US20090181423A1 (en) * 2007-12-31 2009-07-16 Baxter International Inc. Substantially animal protein-free recombinant furin and methods for producing same
US8637312B2 (en) 2008-01-09 2014-01-28 Cellca Gmbh Mammalian culture media with polyamine and iron
US8865450B2 (en) * 2008-02-25 2014-10-21 Baxter International Inc. Method for producing continuous cell lines
HUE026210T2 (en) * 2008-11-12 2016-05-30 Baxalta Inc Procedure for serum-free, insulin-free VII. factor
BR122021005965B1 (pt) 2009-07-31 2022-01-25 Baxalta Incorporated Método para produzir uma composição de desintegrina e metaloproteinase com motivo trombospondina (adamts)
US8580554B2 (en) * 2009-07-31 2013-11-12 Baxter International Inc. Method of producing a polypeptide or virus of interest in a continuous cell culture
US8623352B2 (en) 2009-09-21 2014-01-07 Baxter International Inc. Stabilized liquid and lyophilized ADAMTS13 formulations
CN102858953B (zh) 2010-04-26 2015-09-09 诺瓦提斯公司 改进的细胞培养基
IL286298B (en) 2010-07-08 2022-08-01 Baxalta Inc A method to generate high molecular weight substituted vwf in cell culture
CN103282042B (zh) 2010-09-17 2014-12-10 巴克斯特国际公司 通过具有组氨酸的水性制剂在弱酸性至中性pH稳定的免疫球蛋白
EA034494B1 (ru) 2010-10-27 2020-02-13 Баксалта Инкорпорейтид Пептид фактора viii для индуцирования иммунной толерантности и иммунодиагностики
US9062106B2 (en) 2011-04-27 2015-06-23 Abbvie Inc. Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
EP3858375B1 (en) 2011-06-10 2024-03-20 Takeda Pharmaceutical Company Limited Treatment of coagulation disease by administration of recombinant vwf
WO2013158279A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Protein purification methods to reduce acidic species
WO2013158273A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Methods to modulate c-terminal lysine variant distribution
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
EP2906683B1 (en) 2012-10-15 2017-05-31 Bristol-Myers Squibb Company Mammalian cell culture processes for protein production
AU2013381687A1 (en) 2013-03-12 2015-09-24 Abbvie Inc. Human antibodies that bind human TNF-alpha and methods of preparing the same
WO2014151878A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides
US9217168B2 (en) 2013-03-14 2015-12-22 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Methods of cell culture
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
AR095196A1 (es) * 2013-03-15 2015-09-30 Regeneron Pharma Medio de cultivo celular libre de suero
WO2015051293A2 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Abbvie, Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
KR101641655B1 (ko) * 2014-01-08 2016-07-21 서울대학교산학협력단 스퍼미딘 또는 스퍼민을 이용함으로써 생육 저해제에 대한 내성이 증진된 효모의 배양방법
KR20170129808A (ko) * 2015-03-17 2017-11-27 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. 다이아미노부탄의 제조 방법
TW202330904A (zh) 2015-08-04 2023-08-01 美商再生元醫藥公司 補充牛磺酸之細胞培養基及用法
US20180362952A1 (en) 2015-12-02 2018-12-20 Csl Behring Recombinant Facility Ag Improved media for the expression of recombinant vitamin k-dependent proteins
CN106635953B (zh) * 2016-12-13 2021-02-19 昆明润什生物科技有限公司 无血清无蛋白细胞培养基
CN114075269A (zh) * 2017-07-06 2022-02-22 菲仕兰坎皮纳荷兰私人有限公司 用于制备糖蛋白的细胞培养工艺
BR112020000322A2 (pt) 2017-07-07 2020-07-14 Baxalta Incorporated uso de fator de von willebrand recombinante (rvwf)
PT3648788T (pt) 2017-07-07 2024-08-23 Takeda Pharmaceuticals Co Tratamento de hemorragia gastrointestinal em pacientes com doença de von willebrand grave por administração de fvw recombinante
AU2019240135B2 (en) 2018-03-21 2024-10-03 Takeda Pharmaceutical Company Limited Separation of VWF and VWF propeptide by chromatographic methods
PL3781943T3 (pl) 2018-04-20 2022-08-01 Janssen Biotech, Inc Kwalifikacja kolumny chromatograficznej w sposobach produkcji w celu wytwarzania kompozycji przeciwciał anty-il12/il23
CN108872758B (zh) * 2018-05-10 2019-06-28 江苏大学 一种电子元器件寿命检测装置
CN113015805A (zh) 2018-11-13 2021-06-22 詹森生物科技公司 抗cd38抗体产生期间的痕量金属的控制
SG11202108325YA (en) 2019-02-01 2021-08-30 Takeda Pharmaceuticals Co Methods of prophylactic treatment using recombinant vwf (rvwf)
KR20210141990A (ko) 2019-03-14 2021-11-23 얀센 바이오테크 인코포레이티드 항-il12/il23 항체 조성물을 생성하기 위한 제조 방법
KR20210142002A (ko) 2019-03-14 2021-11-23 얀센 바이오테크 인코포레이티드 항-tnf 항체 조성물을 생성하기 위한 제조 방법
WO2020201296A1 (en) 2019-04-01 2020-10-08 The Automation Partnership (Cambridge) Ltd. Operation process for a cell cultivation system
JP2022547556A (ja) 2019-09-11 2022-11-14 武田薬品工業株式会社 フォン・ヴィレブランド因子と補体ｃ１ｑの複合体に関連する治療法
KR20220097421A (ko) 2019-11-05 2022-07-07 아지노모토 가부시키가이샤 단백질의 제조 방법
IL302538A (en) 2019-12-06 2023-07-01 Regeneron Pharma Anti-VEGF protein preparations and methods for their production
JP2023514541A (ja) 2020-02-04 2023-04-06 武田薬品工業株式会社 組換えｖｗｆの投与による重症のフォンヴィレブランド病患者における過多月経の治療
WO2021198781A2 (en) 2020-04-02 2021-10-07 Takeda Pharmaceutical Company Limited Adamts13 variant, compositions, and uses thereof
MX2022013812A (es) 2020-05-08 2022-12-15 Regeneron Pharma Trampas y mini-trampas de vegf y metodos para el tratamiento de trastornos oculares y cancer.
US12031151B2 (en) 2021-01-20 2024-07-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of improving protein titer in cell culture
CN113151183A (zh) * 2021-04-21 2021-07-23 赵峻岭 一种促进蛋白表达的培养基添加物及其应用
CN117916260A (zh) 2021-07-09 2024-04-19 詹森生物科技公司 用于制备抗il12/il23抗体组合物的制造方法
JP2024526315A (ja) 2021-07-09 2024-07-17 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｔｎｆ抗体組成物を製造するための製造方法
WO2023167863A1 (en) 2022-03-02 2023-09-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Manufacturing process for high titer antibody

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0659880B1 (en) * 1993-12-24 2001-02-21 Eiken Chemical Co., Ltd. Medium for culturing animal cells or antibody-producing cells
RU2383616C2 (ru) * 2004-10-29 2010-03-10 Бакстер Интернэшнл Инк. Не содержащая животных белков среда для культивирования клеток

Family Cites Families (86)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AT165999B (de) 1947-06-26 1950-05-25 Delle Atel Const Electr Einirchtung zum Schutz von Drehstrommotoren gegen Überstrom
US4443540A (en) * 1980-05-09 1984-04-17 University Of Illinois Foundation Protein hydrolysis
DK207980A (da) * 1980-05-13 1981-11-14 Novo Industri As Fremgangsmaade til fremstilling af et skumnings- eller emulgeringsmiddel paa sojaproteinbasis
US4657866A (en) 1982-12-21 1987-04-14 Sudhir Kumar Serum-free, synthetic, completely chemically defined tissue culture media
FR2543158B1 (fr) 1983-03-24 1985-11-15 Inst Nat Sante Rech Med Milieu de culture de cellules animales sans serum, sans hormones et sans facteurs de croissance et procedes de culture primaire et d'obtention de lignees cellulaires utilisant ce milieu
US4767704A (en) 1983-10-07 1988-08-30 Columbia University In The City Of New York Protein-free culture medium
NZ210501A (en) 1983-12-13 1991-08-27 Kirin Amgen Inc Erythropoietin produced by procaryotic or eucaryotic expression of an exogenous dna sequence
IL74909A (en) 1984-04-20 1992-01-15 Genentech Inc Preparation of functional human factor viii and dna sequences,expression vectors,transformed microorganisms and cell lines used therein
ATE89314T1 (de) 1985-02-13 1993-05-15 Scios Nova Inc Menschlicher metallothionein ii-promotor in saeugetierexpressionssystemen.
US4978616A (en) * 1985-02-28 1990-12-18 Verax Corporation Fluidized cell cultivation process
DE3787805T2 (de) 1986-08-04 1994-02-10 Garvan Inst Med Res Serumfreies gewebekulturmedium, das ein polymerzellenschutzmittel enthält.
US5045468A (en) 1986-12-12 1991-09-03 Cell Enterprises, Inc. Protein-free culture medium which promotes hybridoma growth
WO1989000192A1 (en) 1987-06-30 1989-01-12 Amgen Inc. Production of kallikrein
JP2507882B2 (ja) 1988-02-17 1996-06-19 工業技術院長 外部増殖因子非依存性増殖良好細胞株の製造法
US6048728A (en) * 1988-09-23 2000-04-11 Chiron Corporation Cell culture medium for enhanced cell growth, culture longevity, and product expression
US5573937A (en) * 1989-12-07 1996-11-12 Snow Brand Milk Products Co., Ltd. Serum free culture medium
SE465222C5 (sv) 1989-12-15 1998-02-10 Pharmacia & Upjohn Ab Ett rekombinant, humant faktor VIII-derivat och förfarande för dess framställning
CA2074363C (en) 1990-01-22 2004-11-09 David Thomas Vistica Co2-independent growth medium for maintenance and propagation of cells
JP2844484B2 (ja) 1990-02-22 1999-01-06 味の素株式会社 組換え蛋白質の生産方法
JP2859679B2 (ja) 1990-03-01 1999-02-17 協和醗酵工業株式会社 新規細胞株
US5378612A (en) * 1990-05-11 1995-01-03 Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute Culture medium for production of recombinant protein
JP2696001B2 (ja) 1991-04-15 1998-01-14 財団法人化学及血清療法研究所 組換え蛋白質産生用培地
US5122469A (en) 1990-10-03 1992-06-16 Genentech, Inc. Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins
GB9022545D0 (en) 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Culture medium
CA2053433C (en) 1990-10-19 1997-03-25 Michael Joseph Garvey Detergent compositions
JPH04228066A (ja) 1990-10-23 1992-08-18 Rikagaku Kenkyusho 外来遺伝子発現用培養細胞
EP0531562A1 (de) * 1991-09-11 1993-03-17 Doerr, Hans-Wilhelm, Prof. Dr. med. Kultivierung von Säugetierzellen
CA2078721A1 (en) 1991-09-24 1993-03-25 Hiroshi Yonemura Process for preparing human coagulation factor viii protein complex
JPH05123178A (ja) 1991-11-01 1993-05-21 Ajinomoto Co Inc Ｌ−フエニルアラニンの製造法
DE4313620A1 (de) 1993-04-26 1994-10-27 Biotechnolog Forschung Gmbh Hamsterzellinien und Verfahren zur Glykoproteingewinnung
AU7895898A (en) 1993-04-26 1998-10-08 Hans Wolf Mammal cell lines and method of obtaining glycoproteins
GB9311132D0 (en) * 1993-05-28 1993-07-14 Eisai London Res Lab Ltd Control of cell death
US5405637A (en) 1993-06-30 1995-04-11 Bristol-Myers Squibb Company Milk protein partial hydrolysate and infant formula containing same
JP2766165B2 (ja) 1993-08-02 1998-06-18 株式会社バイオポリマー・リサーチ バクテリアセルロースの製造方法
US5445956A (en) * 1993-08-13 1995-08-29 The Regents Of The University Of California Recombinant soluble epoxide hydrolase
EP0653487A1 (de) 1993-11-07 1995-05-17 Ferruccio Dr. Messi Serum- und proteinfrei wachsende Zellen
US5498599A (en) * 1994-01-21 1996-03-12 Amgen Inc. Methods for stimulating platelet production
EP0666312A1 (en) * 1994-02-08 1995-08-09 Wolfgang A. Renner Process for the improvement of mammalian cell growth
US5856179A (en) 1994-03-10 1999-01-05 Genentech, Inc. Polypeptide production in animal cell culture
US5789247A (en) * 1994-04-01 1998-08-04 Ballay; Annick Expression in non-tumoral human lymphoblastoid lines with an integrative vector
EP0733100A1 (de) 1994-09-09 1996-09-25 Wolfgang A. Renner Chemisches verfahren zur förderung der proliferation von tierischen zellen
DE69535940D1 (de) 1994-11-10 2009-06-04 Baxter Healthcare Sa Verfahren zur Herstellung von biologischen Produkten in Protein-freiem Kultur
AT403167B (de) 1994-11-14 1997-11-25 Immuno Ag Selektion und expression von fremdproteinen mittels eines selektions-amplifikations-systems
WO1996018734A1 (en) 1994-12-16 1996-06-20 Novartis Ag Production of recombinant secretory component
AU703484B2 (en) 1995-02-23 1999-03-25 Quest International Services B.V. Peptides for tissue and cell culture media
US5741705A (en) * 1995-02-23 1998-04-21 Quest International Flavors & Food Ingredients Company, Division Of Indopco, Inc. Method for in vitro cell growth of eucaryotic cells using low molecular weight peptides
WO1996040866A1 (en) 1995-06-07 1996-12-19 Novartis Ag Serum-free media for primitive hematopoietic cells and methods of use thereof
AUPN442295A0 (en) 1995-07-26 1995-08-17 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Regulated autocrine growth of mammalian cells
US5851800A (en) * 1996-05-14 1998-12-22 Pharmacia & Upjohn Ab Process for producing a protein
WO1998008935A1 (en) 1996-08-30 1998-03-05 The University Of North Carolina At Chapel Hill Immortalized human hepatic cell line
WO1998008934A1 (en) 1996-08-30 1998-03-05 Life Technologies, Inc. Serum-free mammalian cell culture medium, and uses thereof
AU4751697A (en) 1996-10-10 1998-05-05 Douglas Danner Animal cell culture media comprising plant-derived nutrients
US5804420A (en) * 1997-04-18 1998-09-08 Bayer Corporation Preparation of recombinant Factor VIII in a protein free medium
WO1998054296A1 (en) 1997-05-28 1998-12-03 Chiron S.P.A. Culture medium with yeast or soy bean extract as aminoacid source and no protein complexes of animal origin
US6475725B1 (en) * 1997-06-20 2002-11-05 Baxter Aktiengesellschaft Recombinant cell clones having increased stability and methods of making and using the same
AT407255B (de) * 1997-06-20 2001-02-26 Immuno Ag Rekombinanter zellklon mit erhöhter stabilität in serum- und proteinfreiem medium und verfahren zur gewinnung des stabilen zellklons
EP0986644B1 (de) 1997-07-23 2006-10-04 Boehringer Mannheim GmbH Herstellung von erythropoietin durch endogene genaktivierung mit viralen promotoren
CA2309258C (en) 1997-11-20 2012-05-01 Weyerhaeuser Company Nutritive media and manufactured seeds comprising same
EP1045898A2 (en) 1998-01-12 2000-10-25 Betagene, Inc. Compositions and methods for regulated secretion from neuroendocrine cell lines
FR2775983B1 (fr) 1998-03-13 2000-11-10 Pasteur Merieux Serums Vacc Milieu et procede de propagation et de multiplication virales
WO1999057246A1 (en) 1998-05-01 1999-11-11 Life Technologies, Inc. Animal cell culture media comprising non-animal or plant-derived nutrients
US6537782B1 (en) * 1998-06-01 2003-03-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Media for culturing animal cells and process for producing protein by using the same
US6406909B1 (en) 1998-07-10 2002-06-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Serum-free medium for culturing animal cells
JP4266055B2 (ja) 1999-03-04 2009-05-20 雪印乳業株式会社 ポリアミン組成物の製造法
AT409379B (de) 1999-06-02 2002-07-25 Baxter Ag Medium zur protein- und serumfreien kultivierung von zellen
DE59913565D1 (de) 1999-08-05 2006-07-27 Baxter Ag Rekombinanter stabiler zellklon, seine herstellung und verwendung
PT1210411E (pt) 1999-08-25 2006-12-29 Immunex Corp Composições e métodos para cultura celular melhorada
US6596526B1 (en) * 2000-06-09 2003-07-22 Baxter Aktiengesellschaft Furin polypeptides with improved characteristics
AU2356002A (en) 2000-09-25 2002-04-02 Polymun Scient Immunbio Forsch Live vaccine and method of manufacture
EP1208966A1 (en) 2000-11-27 2002-05-29 Cheng-Kun Liao Manufacturing process of patio tabletop glass with broken protection
DE10059175A1 (de) 2000-11-29 2002-06-20 Siemens Ag Verfahren und Vorrichtung zur Anrufumleitung mittels eines Stellvertreters in einem Kommunikationssystem
US20030096414A1 (en) 2001-03-27 2003-05-22 Invitrogen Corporation Culture medium for cell growth and transfection
US6734289B2 (en) * 2001-03-29 2004-05-11 The University Of Chicago Gastrokines and derived peptides including inhibitors
CA2447791A1 (en) 2001-06-13 2002-12-19 Neslihan Delacruz Methods of culturing animal cells and polypeptide production in animal cells
AU2002336367A1 (en) * 2001-08-16 2003-03-03 The Regents Of The University Of Michigan Adamts13 genes and proteins and variants, and uses thereof
EP1434857B1 (en) 2001-10-02 2007-08-01 Novo Nordisk Health Care AG Method for production of recombinant proteins in eukaryote cells
US20030104527A1 (en) * 2001-12-03 2003-06-05 National Research Council Of Canada Methylotrophic bacterium for the production of recombinant proteins and other products
DE10161412A1 (de) 2001-12-13 2003-07-03 Aventis Pharma Gmbh Verfahren zur Bestimmung der Aktivität der Ornithin-Decarboxylase sowie zur Identifizierung von Effektoren der Ornithin-Decarboxylase-Aktivität
CN101058800B (zh) 2002-07-09 2013-03-13 巴克斯特国际有限公司 用于细胞培养的无动物蛋白质培养基
FR2846004B1 (fr) 2002-10-16 2006-06-23 Maco Pharma Sa Composition pour culture de cellules notamment animales ou de tissus, comprenant du polyethylene glycol
FR2846005B1 (fr) 2002-10-16 2006-06-23 Maco Pharma Sa Composition pour milieu biologique comprenant de l'erythorbate de sodium
DE10333675A1 (de) 2003-07-24 2005-03-03 Aventis Pharma Deutschland Gmbh Perfusionsverfahren für die Produktion von Erythropoietin
ES2565077T3 (es) 2003-10-10 2016-03-31 Novo Nordisk Health Care Ag Método para producción en gran escala de un polipéptido en células eucariotas
TWI384069B (zh) 2004-08-27 2013-02-01 Pfizer Ireland Pharmaceuticals 多胜肽之製法
EP1812557A4 (en) 2004-10-29 2009-11-04 Centocor Ortho Biotech Inc COMPOSITIONS OF CHEMICALLY DEFINED MEDIA
KR101423344B1 (ko) 2006-01-04 2014-07-30 백스터 인터내셔널 인코포레이티드 올리고펩티드-무함유 세포 배양 배지를 이용하여 단백질을 발현시키는 방법

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0659880B1 (en) * 1993-12-24 2001-02-21 Eiken Chemical Co., Ltd. Medium for culturing animal cells or antibody-producing cells
RU2383616C2 (ru) * 2004-10-29 2010-03-10 Бакстер Интернэшнл Инк. Не содержащая животных белков среда для культивирования клеток

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
RAINA A et al. Roles of polyamines in the replication of animal viruses, Med Biol. 1981 Dec, Vol.59, No.5-6, pp.428-32, abstr. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2778325C1 (ru) * 2019-12-06 2022-08-17 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Белковые композиции против vegf и способы их получения

Also Published As

Publication number Publication date
DK2522717T3 (da) 2014-04-22
PL3121266T3 (pl) 2020-07-13
KR20080083197A (ko) 2008-09-16
WO2007077217A3 (en) 2007-11-08
US20160068587A1 (en) 2016-03-10
RU2642269C9 (ru) 2018-10-31
RU2008131953A (ru) 2010-02-10
US9758568B2 (en) 2017-09-12
AU2007204044B2 (en) 2012-09-27
DK3121266T3 (da) 2020-05-11
EP3653699A1 (en) 2020-05-20
EP3121266B1 (en) 2020-02-26
PT3121266T (pt) 2020-05-19
CN101360820A (zh) 2009-02-04
HK1177950A1 (en) 2013-08-30
EP3121266A1 (en) 2017-01-25
WO2007077217A2 (en) 2007-07-12
ES2474573T3 (es) 2014-07-09
RU2486236C2 (ru) 2013-06-27
JP6567490B2 (ja) 2019-08-28
JP2009521941A (ja) 2009-06-11
JP5259418B2 (ja) 2013-08-07
EP1974014B1 (en) 2017-04-19
PT2522717E (pt) 2014-05-15
EP2522717A1 (en) 2012-11-14
RU2017144220A3 (ru) 2021-03-01
AU2007204044A1 (en) 2007-07-12
RU2017144220A (ru) 2019-06-18
JP2013106616A (ja) 2013-06-06
DK1974014T3 (en) 2017-06-19
US20170362300A1 (en) 2017-12-21
EP2522717B1 (en) 2014-04-02
KR20130100224A (ko) 2013-09-09
ES2790887T3 (es) 2020-10-29
CY1119046T1 (el) 2018-01-10
CA2633306A1 (en) 2007-07-12
JP2018075032A (ja) 2018-05-17
US20110151512A1 (en) 2011-06-23
JP7134157B2 (ja) 2022-09-09
CN102643777A (zh) 2012-08-22
KR101422435B1 (ko) 2014-07-22
JP2020028307A (ja) 2020-02-27
EP3121266B8 (en) 2020-04-22
KR101423344B1 (ko) 2014-07-30
JP2015006209A (ja) 2015-01-15
PL1974014T3 (pl) 2017-09-29
SI2522717T1 (sl) 2014-05-30
US10696731B2 (en) 2020-06-30
US20070212770A1 (en) 2007-09-13
HUE032744T2 (en) 2017-10-30
LT1974014T (lt) 2017-11-27
PL2522717T3 (pl) 2014-08-29
EP1974014A2 (en) 2008-10-01
ES2629304T3 (es) 2017-08-08
RU2758802C2 (ru) 2021-11-02
JP2017055770A (ja) 2017-03-23
PT1974014T (pt) 2017-05-26
RU2013112019A (ru) 2014-09-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2758802C2 (ru) Среда для культуры клеток, не содержащая олигопептидов
JP4847962B2 (ja) 動物タンパク質を含まない細胞培養培地

Legal Events

Date Code Title Description
HZ9A Changing address for correspondence with an applicant
TH4A Reissue of patent specification
TK49 Information related to patent modified

Free format text: CORRECTION TO CHAPTER -FG4A- IN JOURNAL 3-2018 FOR INID CODE(S) (54)

TH4A Reissue of patent specification
TK49 Information related to patent modified

Free format text: CORRECTION TO CHAPTER -FG4A- IN JOURNAL 3-2018 FOR INID CODE(S) (73)

PC41 Official registration of the transfer of exclusive right

Effective date: 20211028