RU2501850C2 - Штамм lactobacillus paracasei subspecies paracasei, обладающий антимикробными и иммуномодулирующими свойствами, и пищевой продукт на его основе - Google Patents

Штамм lactobacillus paracasei subspecies paracasei, обладающий антимикробными и иммуномодулирующими свойствами, и пищевой продукт на его основе Download PDF

Info

Publication number
RU2501850C2
RU2501850C2 RU2010146956/10A RU2010146956A RU2501850C2 RU 2501850 C2 RU2501850 C2 RU 2501850C2 RU 2010146956/10 A RU2010146956/10 A RU 2010146956/10A RU 2010146956 A RU2010146956 A RU 2010146956A RU 2501850 C2 RU2501850 C2 RU 2501850C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
strain
lactobacillus
paracasei
cncm
antimicrobial
Prior art date
Application number
RU2010146956/10A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2010146956A (ru
Inventor
Изабелль Шамбо
Артем ХЛЕБНИКОВ
Анн-Катрин ВИЛЛЕН
Джанфранко Громпоне
ДЕНИ Тьерри СЕН
Анн ДРЮЭН
Тамара Смоквина
Original Assignee
Компани Жервэ Данон
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Компани Жервэ Данон filed Critical Компани Жервэ Данон
Publication of RU2010146956A publication Critical patent/RU2010146956A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2501850C2 publication Critical patent/RU2501850C2/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/165—Paracasei
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C12R2001/245—Lactobacillus casei
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Abstract

Изобретение относится к штамму Lactobacillus paracasei subspecies paracasei, обладающему антимикробными и иммуномодулирующими свойствами, и к продукту, содержащему указанный штамм. Штамм депонирован в CNCM под номером I-3689. Штамм обладает способностью ингибировать рост патогенных микроорганизмов в культуре, в частности Escherichia coli, Salmonella enteritidis и Listeria monocytogenes. Штамм обладает противовоспалительными свойствами при соотношении IL-10/IL-12 равном 11,8. Пищевой продукт, содержащий живой указанный штамм в количестве по меньшей мере 105 КОЕ на грамм, обладает антимикробными и/или иммуномодулирующими свойствами. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 3 ил., 4 табл., 3 пр.

Description

Настоящее изобретение относится к новому штамму Lactobacillus paracasei subsp. Paracasei, обладающему антимикробными и иммуномодулирующими свойствами.
В множестве научных исследований сообщается о положительном воздействии на здоровье определенных микроорганизмов, присутствующих в ферментированных пищевых продуктах, а именно в молочных продуктах. Обычно эти микроорганизмы называют «пробиотиками». В соответствии с общепринятым в настоящее время определением, пробиотики представляют собой «живые микроорганизмы, которые при потреблении в соответствующих количествах оказывают благоприятное воздействие на здоровье хозяина» (доклад ФАО/ВОЗ по оценке оказывающих на здоровье свойств и питательных свойств пробиотиков в пищевых продуктах, включая сухое молоко, содержащее живые молочнокислые бактерии; Кордова, Аргентина; Октябрь 1-4, 2001 (FAO/WHO report on evaluation of health and nutritional properties of probiotics in food, including powder milk containing live lactic acid bacteria; Cordoba, Argentina; October 1-4, 2001)).
Было установлено, что потребление пищевых продуктов, содержащих пробиотические бактерии, может оказать благоприятное воздействие на здоровье, в частности, приведением в равновесие кишечной флоры, повышением резистентности к инфекциям и модулированием иммунного ответа.
Пробиотические микроорганизмы, используемые в пищевых продуктах, как правило, представляют собой молочнокислые кислые бактерии, главным образом, принадлежащие к роду Lactobacillus и Bifidobacterium и, в частности, к видам Lactobacillus paracasei subsp. paracasei (штамм, описанный в патентной заявке EP 0794707).
Однако оказание положительного воздействия на здоровье человека не является общим не только для всех бактерий одного и того же рода, но даже и для бактерий одного и того же вида. Как правило, это свойство встречается только у некоторых видов; дополнительно наблюдаемое воздействие может качественно меняться и/или количественно от одного штамма пробиотиков к другому, в пределах одного и того же вида.
Для того чтобы микроорганизм мог рассматриваться в качестве потенциально используемого как пробиотик, он должен отвечать, по меньшей мере, одному и, в идеале, нескольким из следующих критериев:
- наличие ингибирующей активности в отношении патогенных микроорганизмов, которые могут присутствовать в кишечной флоре, проявление этой активности возможно, как результат способности адгезироваться на клетках желудочно-кишечного тракта, следовательно, исключая или снижая адгезию патогенов или благодаря., способности продуцировать вещества, ингибирующие патогены, или же благодаря комбинации этих двух характеристик;
- наличие иммуномодулирующих свойств и, в частности, иммуностимулирующих и/или противовоспалительных свойств.
Дополнительно, если этот микроорганизм предназначен для добавления в молочный продукт, предпочтительным был бы его удовлетворительный рост в молоке.
Наконец, он должен сохранять хорошую жизнеспособность во время получения и хранения пищевого продукта, в который он добавлен, и также после потребления пищевого продукта потребителем для того, чтобы он был способен достичь кишечника и выжить в среде желудочно-кишечного тракта.
Однако следует отметить, что хотя жизнеспособность является важной для соответствия данному в настоящее время определению «пробиотик», было установлено, что некоторое положительное воздействие, связанное с пробиотическими штаммами может быть достигнуто/получено даже в отсутствие живых бактерий и связано с определенными фракциями бактерий или активными фракциями супернатантов их культур. Например, в заявке PCT WO 2004093898 описывается иммуномодулирующее лекарственное средство, полученное фракционированием супернатанта культуры штамма CNCM 10 I-2219.
Авторам настоящего изобретения удалось выделить новый штамм Lactobacillus paracasei subsp. paracasei, отвечающий указанным выше критериям.
Объект настоящего изобретения представляет собой штамм, депонированный согласно условиям Будапештского договора о признании депонирования микроорганизмов для целей патентной процедуры, в CNCM (Collection Nationale de Cultures de Microorganismes [National collection of microorganism cultures] (Национальная коллекция культур микроорганизмов), 25 rue du Docteur Roux, Paris), 9 ноября 2006, под номером I-3689.
Штамм CNCM I-3689 имеет следующие характеристики.
Морфологические признаки: Грамположительный микроорганизм, маленькие тонкие бациллы, изолированные или в виде маленьких цепочек.
Ферментирует следующие сахара (результаты получены на стрипе api 50 CH со средой API MRS при температуре 37°C в течение 48 часов): рибоза, галактоза, D-глюкоза, D-фруктоза, D-манноза, маннит, N-ацетилглюкозамин, арбутин, целлобиоза, мальтоза, лактоза, трегалоза, мелицитоза, D-тураноза, D-тагатоза, глюконат.
Присутствует единичный локус CRISPR последовательности SEQ ID NO:1, содержащий повторяющуюся последовательность, представленную нуклеозидной последовательностью SEQ ID NO:2.
Дополнительно его антимикробные свойства, являются результатом сильной способности ингибировать рост патогенных микроорганизмов в культуре, в частности Escherichia coli, Salmonella enteritidis и Listeria monocytogenes.
CNCM штамм I-3689 также обладает иммуномодулирующими и, в частности, противовоспалительными свойствами.
Также объектом настоящего изобретения являются штаммы Lactobacillus paracasei subsp. paracasei, которые могут быть получены мутагенезом или генетической трансформацией штамма CNCM I-3689. Предпочтительно эти штаммы сохраняют антимикробные или иммуномодулирующие свойства штамма CNCM I-3689. Они могут представлять собой штаммы, в которых один или несколько эндогенных генов штамма CNCM I-3689 подвергаются мутации, например, таким образом, чтобы модифицировать некоторые метаболические свойства (например, способность этого штамма стабилизировать сахара, его устойчивость при прохождении через желудочно-кишечный тракт, его устойчивость к кислоте, его постокисление или продуцирование метаболита). Также они могут представлять собой штаммы, полученные в результате генетической трансформации штамма CNCM I-3689 одного или нескольких интересующих генов, делая возможным, например, придание дополнительных физиологических характеристик указанному штамму или экспрессию интересующих терапевтических белков или белков для вакцины, являющиеся желательными для введения посредством указанного штамма.
Эти штаммы могут быть получены из штамма CNCM I-3689 при использовании традиционных технологий случайного или сайт-направленного мутагенеза и генетической трансформации молочнокислых бактерий, таких как описанные, например, Gury et al. (Arch Microbiol., 182, 337-45, 2004) или Velez et al. (Appl Environ Microbiol., 73, 3595-3604, 2007), или при использовании технологии, известной как «перетасовка генома» (Patnaik et al. Nat Biotechnol, 20, 707-12, 2002; Wang Y. et al., J Biotechnol., 129, 510-15, 2007). Эти штаммы, в частности, имеют локус CRISPR последовательности SEQ ID NO:1.
Также объектом настоящего изобретения является способ получения штамма Lactobacillus paracasei subsp. paracasei, обладающего антимикробными и/или иммуномодулирующими свойствами, включающий стадию мутагенеза или генетической трансформации штамма CNCM I-3689.
Также объектом настоящего изобретения является способ получения клеточной фракции, обладающей антимикробными и/или иммуномодулирующими свойствами из штамма Lactobacillus paracasei subsp. paracasei по настоящему изобретению. Указанные клеточные фракции представляют собой, в частности, препараты ДНК или препараты бактериальных клеток, полученные из культур указанных штаммов. Также они могут представлять собой супернатанты культур или фракции этих супернатантов.
Также объектом настоящего изобретения являются композиции, содержащие штамм Lactobacillus paracasei subsp. paracasei по настоящему изобретению или клеточную фракцию, полученную из указанного штамма.
Эти композиции, в частности, могут представлять собой ферменты молочнокислых бактерий, комбинации штамма Lactobacillus paracasei subsp. paracasei по настоящему изобретению с одним или несколькими другими, необязательно пробиотическими штаммами молочнокислых бактерий. В качестве примера штамма молочнокислых бактерий могут быть указаны штаммы Lactobacillus bulgaricus и Streptococcus thermophilus.
Также они могут представлять собой пищевые продукты и, в частности, молочные продукты или фармацевтические или косметические продукты, включающие штамм Lactobacillus paracasei subsp. paracasei по настоящему изобретению или клеточную фракцию, полученную из указанного штамма.
В случае, когда указанный штамм присутствует в форме живых бактерий, предпочтительно они присутствуют в количестве, по меньшей мере, 105 КОЕ на грамм, предпочтительно, по меньшей мере, 106 КОЕ на грамм продукта, более предпочтительно, по меньшей мере, 107 КОЕ на грамм и еще более предпочтительно, по меньшей мере, 108 КОЕ на грамм.
Настоящее изобретение будет более понятно из последующего описания со ссылкой на примеры, иллюстрирующие антимикробные, иммунномоделирующие и противоинфекционные свойства штамма CNCM I-3689 и также молекулярного типирования этого штамма.
ПРИМЕР 1: СРАВНЕНИЕ СВОЙСТВ ШТАММА CNCM I-3689 СО СВОЙСТВАМИ ИЗВЕСТНЫХ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ШТАММОВ
Свойства штамма CNCM I-3689 сравнивают со свойствами различных штаммов предшествующего уровня техники, известных своими пробиотическими свойствами.
Список этих штаммов приведен в Таблице I, ниже.
Таблица I
Род Вид Название(я) Номер публикации патентной заявки
Lactobacillus johnsonii NCC533=La1=
CNCM I-1225		 EP 0577903
Lactobacillus acidophilus NCFM WO2004032639
Lactobacillus acidophilus La-5  
Lactobacillus casei Shirota  
Lactobacillus paracasei CRL431=ATCC 55544  
Lactobacillus rhamnosus LGG=ATCC 53103 США 4839281
Lactobacillus rhamnosus HN001=NM97/09514 WO 9910476
Lactobacillus plantarum ATCC 14917=
DSMZ 20174=WCFS1		  
Lactobacillus plantarum Probi 299v=DSM 9843 WO 9391823
Lactobacillus reuteri DSMZ 20016  
Lactobacillus reuteri Biogaia SD 2112=
ATCC 55730		 WO2004034808
Bifidobacterium breve ATCC 15700  
Bifidobacterium breve BBC50=CNCM I-2219 EP 1189517
Bifidobacterium infantis ATCC 15697  
Bifidobacterium longum BB536  
Bifidobacterium longum NCC2705=
CNCM I-2618		  
Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB12=ATCC 27536  
Bifidobacterium animalis subsp. lactis HN019=NM97/01925 WO 9910476
1 - Антимикробная активность
Исследование антимикробной активности против патогенных бактерий: Escherichia coli E1392-75-2A, Salmonella enteritidis NIZO B1241 и Listeria monocytogenes 4B. Молочнокислые бактерии культивируют в чашках Петри в двух различных средах: среде Elliker и (Elliker et al., J. Dairy Sci.f 39, 1611-1612, 1956) и среде TGE (триптон-глюкоза-мясной экстракт).
Чашки инкубируют при температуре 37°C до появления колоний бактерий. Бифидобактерии культивируют в анаэробных условиях. Затем на поверхность чашек выливают слой агара, содержащий среду BHI (бульон с сердечно-мозговым экстрактом) и патоген.
Чашки снова инкубируют при температуре 37°C в течение 24 часов. Затем измеряют диаметры областей ингибирования патогенов вокруг каждой колонии молочнокислых бактерий. Оценка 1 соответствует диаметру в пределах от 1 до 3 мм. Оценка 2 соответствует диаметру в пределах от 4 до 6 мм. Оценка 3 соответствует диаметру более, чем 6 мм. Для каждого штамма каждый эксперимент проводят трижды независимо.
Оценки, полученные на целевых патогенах в каждом эксперименте, суммируют, получая, таким образом, для каждой молочнокислой бактерии общую оценку антимикробной активности.
Результаты приведены в Таблице II ниже.
Эти результаты, показывают, что среди тестируемых штаммов, штамм CNCM I-3689, штамм ATCC 55544 имеют наивысшую антимикробную активность.
Figure 00000001
2 - Иммуномодуляция
Оценивают иммуномодулирующие свойства различных молочнокислых бактерий измерением соотношения IL-10/IL-12.
Образцы человеческой крови, полученные от здоровых индивидуумов разводят в соотношении 1:2 с PBS-CA (Gibco) и очищают с использованием градиента Ficoll (Gibco). После центрифугирования при 400×g в течение 30 минут при температуре 20°C, собирают PBMC (монуклеарные клетки периферической крови человека). Затем проводят трехстадийное промывание и ресуспендируют PBMC в культуральной среде RPMI (Gibco) с добавлением 1% фетальной телячьей сыворотки, 1% L-глютамина (Gibco) и 150 μг/мг гентамицина (Gibco).
Под микроскопом подсчитывают PBMC и регулируют до концентрации 2×106 клетки/мл и затем разливают аликвоты по 1 мл в 24-луночную пластину для культивирования клеток (Corning, Inc.).
Штаммы молочнокислых бактерий культивируют в среде MRS (de Man et al.f J. Appl. Bacteriol. 23, 130-135, 1960) и штаммы бифидобактерий культивируют в среде MRS с добавлением 0,03% L-цистеина (Sigma) в анаэробных условиях. Все штаммы инкубируют при температуре 37°C. Рост бактерий останавливают в стационарной фазе и затем бактерии промывают и ресуспендируют в концентрации 3, измеряемой в единицах MacFarlan в PBS, содержащей 20% глицерина.
В каждую лунку пластины добавляют объем 10 μл бактериального препарата, содержащего PBMC (соотношение бактерии:клетки 10:1). Пластины инкубируют в течение 4 часов при температуре 37°C в атмосфере, содержащей 5% CO2. Затем супернатант, полученный в результате центрифугирования при 2000 оборотах в минуту, удаляют и хранят при температуре -20°C.
В тесте используют контрольные бактериальные штаммы с известными иммуномодулирующими свойствами, также в качестве отрицательного контроля используют PBS-20% глицерина, без бактерий. Эксперимент проводят для каждого штамма на PBMC, полученном от трех различных доноров.
Экспрессию цитокинов измеряют при использовании метода ELISA с использованием коммерческих наборов (Pharmingen, BD 10 Biosciences). Исследуют два цитокина: IL-10 и IL-12.
Для каждого тестируемого штамма рассчитывают среднее соотношение IL-10/IL-12. Результаты приведены в Таблице III ниже.
Таблица III
Род Вид Контроль Соотношение
IL-10/IL-12
Lactobacillus paracasei subsp, paracasei DN 114121=
CNCM I-3689		 11,8
Lactobacillus plantarum Probi 299v=
DSM 9843		 12,7
Lactobacillus acidophilus La-5 23,5
Lactobacillus acidophilus NCFM 23,6
Lactobacillus johnsonii NCC533=
La1=I-1225		 23,7
Lactobacillus plantarum АТСС 14917=
DSMZ 20174=WCFS1		 25,0
Lactobacillus reuteri Biogaia SD 2112 ATCC 55730 25,4
Bifidobacterium longum BB536 26,4
Bifidobacterium animalis subsp. lactis HN019=
NM97/01925		 28,7
Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB12=
ATCC 27536		 32,4
Lactobacillus rhamnosus LGG=АТСС 53013 34,5
Lactobacillus reuteri DSMZ 20016 42,0
Bifidobacterium infantis ATCC 15697 51,4
Bifidobacterium breve BBC50=I-2219 58,6
Lactobacillus casei Shirota 67,6
Bifidobacterium breve ATCC 15700 68,5
Bifidobacterium longum NCC2705=
CNCM I-2618		 72,6
Lactobacillus rhamnosus HN001=NM97/09514 92,1
Lactobacillus paracasei CRL431=ATCC 55544 164,0
Эти результаты показывают, что штамм CNCM I-3689 демонстрирует значительные противовоспалительные свойства на этой модели. Ни один из контрольных тестируемых штаммов не продемонстрировал таких хороших свойств.
На Фиг.1 представлено соотношение IL-10/IL-12 каждого бактериального штамма как функция его антипатогенной оценки (относительная единица), как указанно выше. Эта Фигура показывает насколько штамм CNCM I-3689 отличается от других тестируемых штаммов.
3 - Выживание при кишечном стрессе
Используют in vitro модель, отражающую условия кишечного стресса.
Культуры молочнокислых бактерий получают в молоке добавлением дрожжевого экстракта. Культуры инкубируют в течение от 24 до 48 часов в зависимости от вида (до момента наступления стационарной фазы культуры).
Получают искусственный желудочный сок, включающий соли желчной кислоты свиньи (3,3 г/л) и NaHCO3 карбонатный буфер (16,5 г/л). pH регулируют до 6,3. 1 мл этого желудочного сока добавляют в 100 μл бактериальной культуры. Затем культуры инкубируют в течение 5 часов.
Показатели выражают как следующее:
Кишечный стресс=log (КОЕ5ч/КОЕ0ч).
КОЕXмин является концентрацией бактерий, выраженной как колониеобразующие единицы (КОЕ) после X минут инкубации.
Для кишечного стресса является хорошей при показателе более чем -0,5, средней при показателе в пределах от -0,5 до -1,5, и плохой при показателе менее, чем -1,5.
Таблица IV
Род Вид Контроль Кишечный стресс
Lactobacillus paracasei subsp. paracasei DN 114121=
CNCM I-3689		 -0,40
Bifidobacterium animalis subsp. lactis HN019=
NM97/01925		 3,40
Bifidobacterium infantis ATCC 15697 2,79
Lactobacillus reuteri Biogaia SD 2112
ATCC 55730		 1,00
Lactobacillus johnsonii NCC533=La1=
I-1225		 0,69
Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB12=ATCC
27536		 0,07
Lactobacillus paracasei CRL431=ATCC 55544 0,04
Lactobacillus rhamnosus HN001=
NM97/09514		 0,00
Lactobacillus rhamnosus LGG=АТСС 53103 -0,07
Bifidobacterium breve ATCC 15700 -0,14
Bifidobacterium longum NCC2705=
CNCM I-2618		 -0,22
Lactobacillus acidophilus La-5 -0,23
Lactobacillus plantarum АТСС 14917=
DSMZ 20174=WCFS1		 -0,79
Bifidobacterium breve BBC50=I-2219 -0,91
Lactobacillus plantarum Probi 299v=
DSM 9843		 -1,04
Bifidobacterium longum BB536 -1,12
Lactobacillus acidophilus NCFM -1,45
Lactobacillus casei Shirota -1,50
Lactobacillus reuteri DSMZ 20016 -1,91
4 - Заключение
Результаты, приведенные выше в Таблицах II, III и IV, показывают, что среди различных тестируемых штаммов только один штамм CNCM I-3689 обладает как значительными антимикробными свойствами, так и значительными противовоспалительными свойствами, сопровождающимися дополнительно очень хорошей устойчивостью к кишечному стрессу.
ПРИМЕР 2: РОСТ ШТАММА CNCM I-3689 НА МОЛОКЕ
Рост на молоке штамма CNCM I-3689 тестируют с использованием следующего протокола:
- среду, полученную из обезжиренного восстановленного водой сухого молока, инокулируют штаммом CNCM I-3689 (5,6×106 КОЕ/г или 1,1×107 КОЕ/г);
- ферментативную активность этого штамма, которую связывают с его ростом, измеряют непрерывным мониторингом pH среды для роста.
Результаты приведены на графике на Фиг.2.
Эти результаты показывают, что штамм CNCM I-3689 способен к эффективному росту на молоке и что, следовательно, он может быть использован при производстве ферментированных молочных продуктов.
ПРИМЕР 3: МОЛЕКУЛЯРНОЕ ТИПИРОВАНИЕ ШТАММА CNCM I-3689
Многие прокариотические организмы, имеющие один или несколько локусов CRISPR - аббревиатура «Расположенные группами короткие палиндромные повторы» (Jansen et al., 2002, OMICS, Vol. 6, No, 1, 23-33), локус CRISPR характеризуется неконтигуальными повторяющимися последовательностями (или DR), как правило, в пределах от 21 до 37 пар оснований (п.о.), отделенные уникальными последовательностями, как правило, в пределах от 20 до 40 пар оснований, называемые вариабельными последовательностями («спейсеры»). От одного бактериального штамма к другому могут наблюдаться отличия по:
- числу локусов CRISPR,
- позиции локусов CRISPR в геноме,
- числу повторяющихся последовательностей и/или
- природе и/или размеру вариабельных последовательностей.
1 - Идентификация локуса CRISPR в штамме CNCM I-3689.
Штамм CNCM I-3689 секвинируют. Анализ его генома проводят с использованием программного обеспечения ERGO™, позволяющего идентифицировать единичный локус CRISPR в этом штамме. Этот локус представляет собой 3323 п.о. в длину, расположенный на 20 пар оснований ниже ORF RDBK00370. Последовательность геномной ДНК представлена последовательностью SEQ ID NO:1. Она состоит из повторяющихся единиц (GTTTTCCCCGCACATGCGGGGGTGATCC; SEQ ID NO:2), которые идентичны таковым локуса CRISPR штамма ATCC 334 (Lactobacillus casei) и 54 вариабельных последовательностей (спейсеров).
2 - Конструирование праймеров для PCR амплификации, специфичных к штамму CNCM I-3689.
Некоторые пары олигонуклеотидных праймеров определяют на базе вариабельных последовательностей локуса CRISPR штамма CNCM I-3689. Эти праймеры тестируют с использованием PCR амплификации на некоторых бактериальных штаммах для определения их специфичности к штамму CNCM I-3689.
Одна пара праймеров состоит из:
- праймера OFF2486 (CTCAACAGGATAAGTGCCAC; SEQ ID NO:3), расположенного в 33-й вариабельной последовательности локуса CRISPR, в позициях 2049-2068; TM=60°C;
- праймера OFF2488 (GGTTGGCTGGGTTTAACGC; SEQ ID NO:4), расположенного в 37-й вариабельной последовательности локуса CRISPR, в позициях 2093-2110; TM=60°C.
Фиксированые условия PCR представляют собой следующее:
Реакционная смесь:
ДНК: 1 μм
дНТФ: 4 μм
10X буфер: 5 μм
праймер OFF2486: 0,3 μм
праймер OFF2488: 0,3 μм
ДНК полимераза Ex taq™: 0,2 μм
Вода: 39,2 μм
Циклы:
95°C 5'   × 30
95°C 30”
61°C 30”
72°C 45”
72°C 10'
10°C  
Предполагаемый размер PCR продукта из штамма CNCM I-3689 составляет 263 п.о.
Пару праймеров OFF2486/OFF2488 тестируют на штамме CNCM I-3689 и 18 других отличающихся штаммах Lactobacillus casei, включая штаммы CNCM 1-1518 и ATCC 334. Штаммы CNCM 1-1518 и ATCC 334 являются негативным контролем, поскольку указанные праймеры не могут гибридизоваться с геномной последовательностью ДНК этих штаммов при указанных выше условиях PCR.
Результаты, проиллюстрированные при использовании электрофореза в агарозном геле продуктов PCR амплификации, представлены на Фиг.3, где «121» представляет штамм CNCM 15 I-3689, «001» представляет штамм CNCM I-1518, «S3» - «S18» представляют, соответственно, 16 различных штаммов Lactobacillus casei, и «SL» представляет маркер молекулярной массы (SmartLadder; Eurogentec).
Эти результаты показывают, что пара праймеров OFF2486/OFF2488 безусловно специфична к штамму CNCM I-3689, поскольку продукты PCR амплификации предполагаемого размера (то есть, около 260 п.о.) получают только для этого штамма.

Claims (6)

1. Штамм Lactobacillus paracasei subsp. paracasei, обладающий антимикробными и иммуномодулирующими свойствами, депонированный в CNCM под номером I-3689.
2. Штамм Lactobacillus paracasei subsp. paracasei по п.1 для применения в качестве лекарственного средства.
3. Штамм Lactobacillus paracasei subsp. paracasei по п.2, отличающийся тем, что указанное лекарственное средство предназначено для применения при лечении микробных инфекций.
4. Штамм Lactobacillus paracasei subsp. paracasei по п.2, отличающийся тем, что указанное лекарственное средство представляет собой противовоспалительное средство.
5. Пищевой продукт, имеющий антимикробные и/или иммуномодулирующие свойства, содержащий живой штамм Lactobacillus paracasei subsp. paracasei по п. 1 в количестве по меньшей мере 105 КОЕ на грамм.
6. Пищевой продукт по п. 5, отличающийся тем, что представляет собой молочный продукт.
RU2010146956/10A 2008-04-18 2009-04-16 Штамм lactobacillus paracasei subspecies paracasei, обладающий антимикробными и иммуномодулирующими свойствами, и пищевой продукт на его основе RU2501850C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR0802158A FR2930264B1 (fr) 2008-04-18 2008-04-18 Nouvelle souche de lactobacillus paracasei subsp. paracasei dotee de proprietes antimicrobiennes et immunomodulatrices.
FR0802158 2008-04-18
PCT/FR2009/000443 WO2009130423A2 (fr) 2008-04-18 2009-04-16 Nouvelle souche de lactobacillus paracasei subsp. paracasei dotee de proprietes antimicrobiennes et immunomodulatrices

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2010146956A RU2010146956A (ru) 2012-05-27
RU2501850C2 true RU2501850C2 (ru) 2013-12-20

Family

ID=39720249

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2010146956/10A RU2501850C2 (ru) 2008-04-18 2009-04-16 Штамм lactobacillus paracasei subspecies paracasei, обладающий антимикробными и иммуномодулирующими свойствами, и пищевой продукт на его основе

Country Status (16)

Country Link
US (1) US8557561B2 (ru)
EP (1) EP2271744B1 (ru)
JP (1) JP5649564B2 (ru)
KR (1) KR101609401B1 (ru)
CN (1) CN102066550B (ru)
AR (1) AR071330A1 (ru)
BR (1) BRPI0911420A8 (ru)
CA (1) CA2721704C (ru)
CL (1) CL2009000911A1 (ru)
ES (1) ES2410263T3 (ru)
FR (1) FR2930264B1 (ru)
MX (1) MX2010011465A (ru)
PL (1) PL2271744T3 (ru)
RU (1) RU2501850C2 (ru)
WO (1) WO2009130423A2 (ru)
ZA (1) ZA201007510B (ru)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2704133C2 (ru) * 2014-04-15 2019-10-24 Компани Жервэ Данон Применение lactobacillus paracasei для усиления восстановления разнообразия кишечной микрофлоры после дисбактериоза
RU2737537C2 (ru) * 2015-06-18 2020-12-01 Те Брод Инститьют Инк. Новые ферменты и системы crispr
US11091798B2 (en) 2015-06-18 2021-08-17 The Broad Institute, Inc. CRISPR enzymes and systems
US11286478B2 (en) 2016-04-19 2022-03-29 The Broad Institute, Inc. Cpf1 complexes with reduced indel activity
US11479761B2 (en) 2015-04-16 2022-10-25 Wageningen Universiteit Nuclease-mediated genome editing

Families Citing this family (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8372392B2 (en) * 2009-12-23 2013-02-12 Lytone Enterprise, Inc. Lactobacillus paracasei strain LT12 as immunity regulatory agent
WO2011141762A1 (en) 2010-05-12 2011-11-17 Compagnie Gervais Danone Synergistic fermentation of lactobacillus rhamnosus and lactobacillus paracasei subsp paracasei
US20130149415A1 (en) 2010-07-15 2013-06-13 Laurent Marchal Use of manganese for enhancing the growth of L.casei in mixed cultures.
CN103436461B (zh) * 2010-12-08 2015-03-11 益擎生技股份有限公司 新颖乳酸菌株及其调节免疫反应的用途
WO2012133827A1 (ja) * 2011-03-31 2012-10-04 森永乳業株式会社 新規乳酸菌、並びに新規乳酸菌を含有する医薬、飲食品、及び飼料
NO2693885T3 (ru) * 2011-04-08 2018-08-04
WO2013009945A1 (en) 2011-07-12 2013-01-17 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Lipid-containing psa compositions, methods of isolation and methods of use thereof
WO2013019896A1 (en) * 2011-08-01 2013-02-07 Symbiotix Biotherapies, Inc. Platform for identifying and/or characterizing immunomodulatory agents
ES2402014B1 (es) * 2011-09-07 2014-02-27 Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) Peptido secretado por lactobacillus plantarum con función inmunomoduladora
CA2855906A1 (en) * 2011-12-01 2013-06-06 Compagnie Gervais Danone Lactobacillus paracasei subsp. paracasei, as an agent for inhibiting listeria monocytogenes in vivo infection
NZ701895A (en) 2012-05-21 2016-07-29 Dupont Nutrition Biosci Aps Strains of lactobacillus with antifungal properties
US10760064B2 (en) 2013-03-15 2020-09-01 The General Hospital Corporation RNA-guided targeting of genetic and epigenomic regulatory proteins to specific genomic loci
WO2014204578A1 (en) 2013-06-21 2014-12-24 The General Hospital Corporation Using rna-guided foki nucleases (rfns) to increase specificity for rna-guided genome editing
US10119133B2 (en) 2013-03-15 2018-11-06 The General Hospital Corporation Using truncated guide RNAs (tru-gRNAs) to increase specificity for RNA-guided genome editing
WO2015004949A1 (ja) 2013-07-12 2015-01-15 森永乳業株式会社 新規乳酸菌、並びに新規乳酸菌を含有する医薬、飲食品、及び飼料
BR122022016606B1 (pt) 2013-07-12 2023-01-24 Morinaga Milk Industry Co., Ltd Lactobacillus paracasei mortos pelo aquecimento, medicamento, alimento ou bebida, ração, agente promotor da produção de il-12 e uso
CN104673700A (zh) * 2013-11-29 2015-06-03 晨晖生物科技股份有限公司 乳酸菌株及引物组
CN104862240A (zh) * 2013-12-28 2015-08-26 萧夏青 乳酸菌株及其引物组
CN104523762B (zh) * 2014-12-10 2019-01-22 中国农业大学 具有抗过敏作用的副干酪乳杆菌的应用和功能食品组合物及其制备方法
WO2017031431A1 (en) 2015-08-19 2017-02-23 President And Fellows Of Harvard College Lipidated psa compositions and methods
US9512446B1 (en) 2015-08-28 2016-12-06 The General Hospital Corporation Engineered CRISPR-Cas9 nucleases
US9926546B2 (en) 2015-08-28 2018-03-27 The General Hospital Corporation Engineered CRISPR-Cas9 nucleases
JP7316044B2 (ja) * 2016-01-21 2023-07-27 セーホーエル．ハンセン アクティーゼルスカブ ラクトバチルス・カゼイを用いて発酵乳製品を製造する方法
CN109195458B (zh) * 2016-05-11 2023-12-29 科·汉森有限公司 用于在环境温度下储存的热处理过的食物产品的乳酸菌
US11491181B2 (en) 2016-07-15 2022-11-08 President And Fellows Of Harvard College Glycolipid compositions and methods of use
US11207358B2 (en) * 2016-12-16 2021-12-28 Compagnie Gervais Danone Probiotic composition comprising Lactobacillus rhamnosus and Lactobacillus paracasei and methods thereof
JP6523579B2 (ja) * 2017-06-09 2019-06-05 旭興産株式会社 乳酸菌の菌体外多糖及びその用途
BR112019000069A2 (pt) * 2017-06-09 2019-12-17 Asahi Kohsan Corp bactérias de ácido lático e uso das mesmas
US20190233816A1 (en) 2018-01-26 2019-08-01 Massachusetts Institute Of Technology Structure-guided chemical modification of guide rna and its applications
KR102463809B1 (ko) * 2019-05-24 2022-11-04 한국식품연구원 클로스트리디오이데스 디피실레에 항균 활성을 갖는 락토바실러스 파라카세이 WiKim0110 균주 및 이를 포함하는 조성물
CN110878270B (zh) * 2019-12-21 2021-08-13 福建省农业科学院农业工程技术研究所 一株副干酪乳杆菌副干酪亚种及其应用
CN117070425B (zh) * 2023-10-10 2024-03-08 广东益可维生物技术有限公司 提高益生菌在机体内代谢稳定性的工艺方法及益生菌冻干粉

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0794707A1 (fr) * 1995-01-02 1997-09-17 Compagnie Gervais-Danone Ferment lactique, et son utilisation pour la preparation de produits anti-diarrheiques
WO2002053706A1 (en) * 2000-12-29 2002-07-11 Seong-Kun Cho Novel lactobacillus paracasei subsp. paracasei strain antibacterial against helicobacter pylori and escherichia coli 157:h7
RU2205871C2 (ru) * 1997-12-08 2003-06-10 Арла Фудз Аб Штамм lactobacillus paracasei subsp. paraсasei, пищевой продукт и натуропатический препарат, содержащие этот штамм

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2848115B1 (fr) * 2002-12-05 2005-03-25 Rhodia Chimie Sa Composition de bacteries et son utilisation
US7919277B2 (en) * 2004-04-28 2011-04-05 Danisco A/S Detection and typing of bacterial strains
SE529185C2 (sv) * 2005-10-07 2007-05-22 Arla Foods Amba Användning av probiotiska bakterier för tillverkning av livsmedel eller läkemedel för förhindrande av övervikt
WO2008047391A1 (en) * 2006-10-17 2008-04-24 S.I.F.Fr.A. Farmaceutici Srl Nutriceutic composition comprising lactoferrin and proteasic probiotics

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0794707A1 (fr) * 1995-01-02 1997-09-17 Compagnie Gervais-Danone Ferment lactique, et son utilisation pour la preparation de produits anti-diarrheiques
RU2205871C2 (ru) * 1997-12-08 2003-06-10 Арла Фудз Аб Штамм lactobacillus paracasei subsp. paraсasei, пищевой продукт и натуропатический препарат, содержащие этот штамм
WO2002053706A1 (en) * 2000-12-29 2002-07-11 Seong-Kun Cho Novel lactobacillus paracasei subsp. paracasei strain antibacterial against helicobacter pylori and escherichia coli 157:h7

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LJUNGH A. et al. Isolation, selection and characteristics of Lactobacillus paracasei subsp. paracasei F19 // Microbial Ecology in Health and Disease 2002; suppl 3: 4-6. Найдено в интернете: <http://www.microbecolhealthdis.net/index.php/mehd/article/view/8208/9582>. *

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2704133C2 (ru) * 2014-04-15 2019-10-24 Компани Жервэ Данон Применение lactobacillus paracasei для усиления восстановления разнообразия кишечной микрофлоры после дисбактериоза
US11479761B2 (en) 2015-04-16 2022-10-25 Wageningen Universiteit Nuclease-mediated genome editing
US11760985B2 (en) 2015-04-16 2023-09-19 Wageningen Universiteit CRISPR-Cas complex
RU2737537C2 (ru) * 2015-06-18 2020-12-01 Те Брод Инститьют Инк. Новые ферменты и системы crispr
US11091798B2 (en) 2015-06-18 2021-08-17 The Broad Institute, Inc. CRISPR enzymes and systems
US11634755B2 (en) 2015-06-18 2023-04-25 The Broad Institute, Inc. Crispr enzymes and systems
US11773432B2 (en) 2015-06-18 2023-10-03 The Broad Institute Inc. CRISPR enzymes and systems
US11781172B2 (en) 2015-06-18 2023-10-10 The Broad Institute, Inc. Crispr enzymes and systems
US11286478B2 (en) 2016-04-19 2022-03-29 The Broad Institute, Inc. Cpf1 complexes with reduced indel activity

Also Published As

Publication number Publication date
CA2721704C (fr) 2019-04-02
ZA201007510B (en) 2011-08-31
AR071330A1 (es) 2010-06-09
KR20110009152A (ko) 2011-01-27
BRPI0911420A8 (pt) 2016-06-28
JP5649564B2 (ja) 2015-01-07
WO2009130423A2 (fr) 2009-10-29
CA2721704A1 (fr) 2009-10-29
EP2271744A2 (fr) 2011-01-12
FR2930264A1 (fr) 2009-10-23
BRPI0911420A2 (pt) 2015-08-04
US8557561B2 (en) 2013-10-15
CN102066550B (zh) 2013-10-30
MX2010011465A (es) 2011-01-21
RU2010146956A (ru) 2012-05-27
PL2271744T3 (pl) 2013-08-30
FR2930264B1 (fr) 2013-02-22
ES2410263T3 (es) 2013-07-01
CN102066550A (zh) 2011-05-18
CL2009000911A1 (es) 2010-02-19
US20110150852A1 (en) 2011-06-23
KR101609401B1 (ko) 2016-04-05
EP2271744B1 (fr) 2013-03-20
JP2011517570A (ja) 2011-06-16
WO2009130423A3 (fr) 2009-12-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2501850C2 (ru) Штамм lactobacillus paracasei subspecies paracasei, обладающий антимикробными и иммуномодулирующими свойствами, и пищевой продукт на его основе
RU2549699C2 (ru) ШТАММ Lactobacillus rhamnosus, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОТИВОМИКРОБНЫМИ, ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИМИ И СПЕЦИФИЧНЫМИ В ОТНОШЕНИИ МАННОЗЫ АДГЕЗИОННЫМИ СВОЙСТВАМИ, А ТАКЖЕ ПРОДУКТ НА ЕГО ОСНОВЕ
Kumar et al. Characterization of Lactobacillus isolated from dairy samples for probiotic properties
Rönkä et al. Probiotic and milk technological properties of Lactobacillus brevis
Gueimonde et al. Viability and diversity of probiotic Lactobacillus and Bifidobacterium populations included in commercial fermented milks
EP2498789B1 (en) Probiotic bifidobacterium strain
Golowczyc et al. Characterization of homofermentative lactobacilli isolated from kefir grains: potential use as probiotic
EP2366017B1 (en) Blood-cholesterol-lowering strain of lactobacillus delbrueckii
JP5774517B2 (ja) ビフィドバクテリウム属細菌含有発酵食品の製造方法
US20080274085A1 (en) Probiotic Bifidobacterial Species
KR102036275B1 (ko) 항-염증 활성이 우수한 페디오코커스 악시딜락티시 ldtm 5201 신균주(kctc 13563bp)
US20230100778A1 (en) Method for promoting growth of probiotic microorganism
US20130189396A1 (en) Method for producing a fermented food containing bifidobacteria
JP2021164435A (ja) ビフィズス菌増殖促進剤
JP5351113B2 (ja) ビフィドバクテリウム属細菌含有発酵食品の製造方法
Tsuda et al. Original Report
PL214504B1 (pl) Nowy szczep bakterii mlekowych Lactobacillus brevis