PL214504B1 - Nowy szczep bakterii mlekowych Lactobacillus brevis - Google Patents

Nowy szczep bakterii mlekowych Lactobacillus brevis

Info

Publication number
PL214504B1
PL214504B1 PL391623A PL39162310A PL214504B1 PL 214504 B1 PL214504 B1 PL 214504B1 PL 391623 A PL391623 A PL 391623A PL 39162310 A PL39162310 A PL 39162310A PL 214504 B1 PL214504 B1 PL 214504B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
strain
lactic acid
bacteria
new strain
lactobacillus brevis
Prior art date
Application number
PL391623A
Other languages
English (en)
Other versions
PL391623A1 (pl
Inventor
Elzbieta Klewicka
Zdzisława Libudzisz
Katarzyna Śliżewska
Anna Otlewska
Original Assignee
Politechnika Lodzka
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Politechnika Lodzka filed Critical Politechnika Lodzka
Priority to PL391623A priority Critical patent/PL214504B1/pl
Publication of PL391623A1 publication Critical patent/PL391623A1/pl
Publication of PL214504B1 publication Critical patent/PL214504B1/pl

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Przedmiotem wynalazku jest nowy szczep bakterii mlekowych Lactobacillus brevis o właściwościach probiotycznych.
Specyficzna i kontrolowana pozytywna regulacja składu mikroflory jelitowej może być osiągnięta na drodze probiozy czyli spożywania preparatów lub produktów żywnościowych zawierających żywe bakterie głównie z rodzaju Lactobacillus i Bifidobacterium. Dlatego też producenci żywności, a w szczególności żywności funkcjonalnej, oraz przemysł farmaceutyczny zainteresowani są pozyskiwaniem nowych szczepów tych bakterii o udokumentowanych właściwościach probiotycznych.
Środowiskiem naturalnym bytowania bakterii z rodzaju Lactobacillus są produkty mleczne, napoje fermentowane, kiszonki warzywne, mięso a w szczególności wędliny fermentowane. Bakterie te zasiedlają również błony śluzowe przewodu pokarmowego człowieka i zwierząt.
Dotychczas znane są szczepy bakterii Lactobacillus o właściwościach probiotycznych, jak L. acidophilus NCFM, L. acidophilus DDS-1, L. acidophilus SBT-2062, L. acidophilus R0011, L. rhamnosus R0052, L. acidophilus LA-1, L. paracasei CRL-431, L. casei Shirota, L. casei DN-114001, L. fermentum RC-14, L. rhamnosus GR-1, L. johnsonii La1, L. plantarum 299V, L. rhamnosus 271, L. reuteri SD2112, L. rhamnosus GG, L. rhamnosus LB21, L. salivarius UCC118, L. acidophilus LB, L. paracasei F19, L. casei ŁOCK 0900, L. casei ŁOCK 0908, L. paracasei ŁOCK 0919.
Najczęściej stosowanym nośnikiem dla probiotycznych bakterii Lactobacillus sp. jest mleko i jego przetwory. Obecnie wzrasta na świecie procent ludności, która ze względu na alergię pokarmową, w szczególności na nietolerancję białek mleka krowiego, nie może spożywać probiotycznych produktów na bazie mleka. Zatem istotne jest poszukiwanie szczepów bakterii mlekowych zdolnych do ukwaszania środowisk innych niż mleko, na przykład warzyw. W klimacie umiarkowanym fermentacji mlekowej najczęściej poddawane są ogórki, kapusta, buraki. W drodze fermentacji mlekowej uzyskuje się także zakwasy piekarnicze i żur.
W wyniku poszukiwań szczepów bakterii mlekowych o cechach probiotycznych, zdolnych do zasiedlania środowisk roślinnych wyizolowano nowy szczep Lactobacillus brevis, stanowiący przedmiot wynalazku, który oznaczono symbolem ŁOCK 0944 i zdeponowano w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów Instytutu Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN z siedzibą we Wrocławiu pod numerem akcesyjnym B/00035.
Szczep wyizolowano ze spontanicznej kiszonki korzenia buraka ćwikłowego stosując podłoże Rogosa (zawierające w 1 I: 10,0 g peptonu kazeinowego, 5,0 g ekstraktu drożdżowego, 20,0 g D(+) glukozy, 6,0 g fosforanu potasu, 2,0 g cytrynianu amonu, 1,0 g Tweenu 80, 15,0 g octanu sodu, 0,575 g siarczanu magnezu, 0,034 g siarczanu żelaza II, 0,12 g siarczanu manganu i 15 g agaru), stanowiące wybiórcze medium przeznaczone do wykrywania bakterii z rodzaju Lactobacillus sp. ze złożonego mikrobiologicznie materiału.
Na podstawie przeprowadzonych testów fermentacyjnych API 50 CHL stwierdzono 99.9% homologii nowego szczepu do gatunku Lactobacillus brevis.
Sekwencję nukleotydową regionu DNA kodującego gen 16S rRNa nowego szczepu, którego sekwencja określa przynależność gatunkową bakterii, przedstawiono na końcu opisu.
Komputerowa analiza opublikowanych sekwencji genów 16S rRNA bakterii z gatunku Lactobacillus brevis, dostępnych w bazie NCBI oraz wyników sekwencjonowania nowego szczepu potwierdziła podobieństwo nowego szczepu bakterii do gatunku Lactobacillus brevis z prawdopodobieństwem 99%.
Nowy szczep otrzymuje się w drodze hodowli na płynnym modyfikowanym podłożu Rogosa, o nazwie handlowej MRS, zawierającym w 1 I: 10,0 g peptonu kazeinowego, 4,0 g ekstraktu drożdżowego, 8 g ekstraktu mięsnego, 20,0 g glukozy, 2,0 g fosforanu dwupotasowego, 2,0 g wodorocytrynianu amonu, 5,0 g octanu sodu, 0,20 g siarczanu magnezu 7-wodnego, 0,05 g siarczanu magnezu 4-wodnego, w temperaturze 30-35°C w czasie 48 h.
Cechy morfologiczne nowego szczepu
Na modyfikowanym podłożu Rogosa szczep rośnie w postaci kremowych, owalnych kolonii, o gładkiej powierzchni i regularnych brzegach, o średnicy około 1 mm.
W podłożu płynnym MRS szczep bakterii rośnie tworząc jednorodne zmętnienie pożywki.
W obrazie mikroskopowym bakterie mają kształt długich nieruchliwych pałeczek występujących pojedynczo lub w krótkich łańcuszkach. Wybarwiają się Gram-dodatnio.
PL 214 504 B1
Cechy fizjologiczne i biochemiczne nowego szczepu
Szczep charakteryzuje się metabolizmem bezwzględnie heterofermentatywnym. Zdolny jest do fermentacji następujących sacharydów i ich pochodnych: D i L-arabinozy, rybozy, adonitolu, β-metylo-D-ksylozydu, galaktozy, glukozy, N-acetylo-glukozydu, maltozy, melibiozy, glukonianu, 5-ketoglukonianu, co stwierdzono stosując test API 50 CHL. Stosując testy API Zym stwierdzono aktywność następujących enzymów komórkowych: akrylamidaza leucyny, akrylamidaza waliny, kwaśna fosfataza, a-galaktozydaza, β-galaktozydaza, a-glukozydaza, β-glukozydaza.
Optymalna temperatura wzrostu szczepu wynosi 30-35°C, natomiast w temperaturze powyżej 45°C stwierdzono słaby wzrost szczepu.
Szczep nie wytwarza katalazy.
Jest zdolny do syntezy nadtlenku wodoru.
Cechy biotechnologiczne nowego szczepu
Szczep fermentuje glukozę z wytworzeniem kwasu mlekowego w ilości 12,30 g/l, (udział kwasu L(+) mlekowego wynosi 69,9%) oraz kwasu octowego w ilości 4,25 g/l.
Szczep ukwasza:
- kapustę z wytworzeniem kwasu mlekowego w ilości 3,75 g/l (udział kwasu L(+) mlekowego stanowi 99%) oraz kwasu octowego w ilości 7,01 g/l.
- rozdrobniony korzeń buraka ćwikłowego z wytworzeniem kwasu mlekowego w ilości 6,36 g/l (udział kwasu L(+) mlekowego wynosi 99,6%) oraz kwasu octowego w ilości 6,32 g/l.
- 10% roztwór mąki żytniej z wytworzeniem kwasu mlekowego w ilości 3,56 g/l (66% stanowi udział kwasu L(+) mlekowego wynosi 66%) oraz kwasu octowego w ilości 2,39 g/l.
Charakteryzuje się słabą zdolnością ukwaszania mleka krowiego. Zawartość kwasu mlekowego po 48 godzinnej fermentacji z udziałem szczepu wynosi 1,70 g/l (przy udziale kwasu L(+) mlekowego 54%), zaś zawartość kwasu octowego wynosi 1,69 g/l.
Cechy probiotyczne nowego szczepu
Szczep spełnia kryteria stawiane bakteriom probiotycznym, co stwierdzono w wyniku badań in vitro wykonanych według procedur zalecanych przez FAO/WHO Wykazuje odporność na niskie pH (kwasowość soku żołądkowego) w pH 3,0 przez 180 minut oraz na sole żółci w stężeniach 2%, 3% w czasie 240 minut.
Wykazuje oporność w stosunku do następujących antybiotyków i chemioterapeutyków o działaniu przeciwbakteryjnym: wankomycyny, kanamycyny, aztreonamu, metronidazolu.
Charakteryzuje się dobrym przyleganiem do linii komórkowych Caco-2 oznaczonym jako (++), przy czym adherencję określano półilościowo przyjmując, iż (-) oznacza brak przylegania, (+) - pojedyncze komórki bakterii w całym preparacie, (++) - pojedyncze komórki bakterii w poszczególnych polach widzenia, liczne w preparacie, (+++) - liczne bakterie w poszczególnych polach widzenia.
Wykazuje aktywność antagonistyczną w stosunku do bakterii patogennych przenoszonych drogą pokarmową jak Escherichia coli DSM 682, Escherichia coli ATCC 8739, Escherichia coli ATCC
10536, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442, Pseudomonas aeruginosa ATCC 24755, Enterococcus hire DSM 2150, Listeria monocytogenes (szczep wyizolowany z żywności).
Przedmiot wynalazku ilustrują poniższe przykłady.
P r z y k ł a d I
Nowy szczep bakterii ŁOCK 0944 hodowano na podłożu płynnym MRS zawierającym w 1 I: 4,0 g ekstraktu drożdżowego, 8,0 g ekstraktu mięsnego, 10,0 g peptonu K, 20,0 g glukozy, 2,0 g wodorocytrynianu amonu, 2,0 g fosforanu dwupotasowego, 5,0 g octanu sodu, 0,2 g siarczanu magnezu 7-wodnego oraz 0,05 g siarczanu magnezu 4-wodnego, w temperaturze 30°C. Po 24 godzinach hodowli wyhodowane komórki oddzielono od podłoża na wstrząsarce uzyskując gęstość 2,27 x 109 komórek/ml. Tak otrzymaną zawiesinę bakterii umieszczono w środowisku o pH 3.0 i w temperaturze 37°C. Po 180 minutach przeżyło 94,8% komórek (7,35 x 108).
P r z y k ł a d II
Zawiesinę bakterii otrzymaną jak w przykładzie I, o gęstości 5x109 komórek/ml, poddano działaniu soli żółci o stężeniach 2% i 3% w czasie 6 godzin.
W wyniku działania soli żółci o stężeniu 2% po 6 godzinach przeżyło 4,47 x 109 jtk/ml (99,4%). Pod wpływem działania soli żółci o stężeniu 3% po 6 godzinach przeżyło 4,42 x 109 jtk/m) (99,2%).
PL 214 504 B1
P r z y k ł a d III
Przygotowano liofilizaty nowego szczepu ŁOCK 0944 w 10% mleku odtłuszczonym oraz w nośniku węglowodanowym o składzie: hydrolizat skrobiowy MD 12,5 g/l, hydrolizat kazeiny 20 g/l, laktitol 0,4 g/l, sacharoza 2 g/l i oceniano trwałość tych preparatów przechowywanych w czasie 15 tygodni, w warunkach chłodniczych (4-5°C) oraz w temperaturze pokojowej (25°C).
Na wykresie 1 zilustrowano przeżywalność liofilizatów nowego szczepu bakterii w mleku i w nośniku węglowodanowym, przechowywanych w temperaturze chłodniczej 4°C, zaś na wykresie 2 przeżywalność liofilizatów nowego szczepu w mleku i w nośniku węglowodanowym, przechowywanych
Okazało się, iż temperatura chłodnicza zapewnia większą stabilność i trwałość liofilizowanych preparatów nowego szczepu bakterii niezależnie od czynnika ochronnego. Przechowywanie preparatu nowego szczepu bakterii suszonego sublimacyjnie z mlekiem jako medium ochronnym w czasie 15 tygodni w temperaturze chłodniczej spowodowało obniżenie liczby żywych komórek szczepu o 16%, zaś w temperaturze pokojowej o 24%.
W czasie 15 tygodni przechowywania liofilizatu mieszaniny komórek nowego szczepu bakterii z nośnikiem węglowodanowym stopień redukcji liczby żywych komórek szczepu wynosił 15% w temperaturze chłodniczej i 26% w temperaturze pokojowej.
Wykaz sekwencji nukleotydowej regionu DNA kodującego gen 16S rRNa nowego szczepu bakterii Lactobacillus brevis ŁOCK 0944, którego sekwencja określa przynależność gatunkową bakterii:
PL 214 504 B1 agtcgaacga gcttccgttg aatgacgtgc ttgcactgat ttcaacaatg aagcgagtgg cgaactggtg agtaacacgt gggaaatctg cccagaagca ggggataaca cttggaaaca
121 ggtgctaata ccgtataaca acaaaatccg catggatttt gtttgaaagg tggcttcggc
181 tatcacttct ggatgatccc gcggcgtatt agttagttgt ggtgaggtaa aggcccacca
241 agacgatgat acgtagccga cctgagaggg taatcggcca cattgggact gagacacggc
301 ccaaactcct acgggaggca gcagtaggga atcttccaca atggacgaaa gtctgatgga
361 gcaatgccgc gtgagtgaag aagggtttcg gctcgtaaaa ctctgttgtt aaagaagaac
421 acctttgaga gtaactgttc aagggttgac ggtatttaac cagaaagcca cggctaacta
481 cgtgccagca gccgcggtaa tacgtaggtg gcaagcgttg tccggattta ttgggcgtaa
541 agcgagcgca ggcggttttt taagtctgat gtgaaagcct tcggcttaac cggagaagtg
601 catcggaaac tgggagactt gagtgcagaa gaggacagtg gaactccatg tgtagcggtg
661 gaatgcgtag atatatggaa gaacaccagt ggcgaaggcg gctgtctagt ctgtaactga
721 cgctgaggct cgaaagcatg ggtagcgaac aggattagat accctggtag tccatgccgt
781 aaacgatgag tgctaagtgt tggagggttt ccgcccttca gtgctgcagc taacgcatta
841 agcactccgc ctggggagta cgaccgcaag gttgaaactc aaaggaattg acgggggccc
901 gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc gaagctacgc gaagaacctt accaggtctt
961 gacatcttct gccaatctta gagataagac gttcccttcg gggacagaat gacaggtggt
1021 gcatggttgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac
1081 ccttattatc agttgccagc attcagttgg gcactctggt gagactgccg gtgacaaacc
1141 ggaggaaggt ggggatgacg tcaaatcatc atgcccctta tgacctgggc tacacacgtg
1201 ctacaatgga cggtacaacg agtcgcgaag tcgtgaggct aagctaatct cttaaagccg
1261 ttctcagttc ggattgtagg ctgcaactcg cctacatgaa gttggaatcg ctagtaatcg
1321 cggatcagca tgccgcggtg aatacgttcc cgggccttgt acacaccgcc cgtcacacca
1381 tgagagtttg taacacccaa agccggtgag ataaccttcg ggagtcagcc gtctaaggtg
1441 ggacagatga ttagggtgaa gtcgtaacaa ggtagcc w której a oznacza nukleotyd zawierający adeninę jako zasadę azotową, g - nukleotyd zawierający guaninę jako zasadę azotową, c - nukleotyd zawierający cytozynę jako zasadę azotową, zaś t nukleotyd zawierający tyminę jako zasadę azotową.

Claims (1)

  1. Nowy szczep bakterii mlekowych Lactobacillus brevis ŁOCK 0944 - B/00035.
PL391623A 2010-06-25 2010-06-25 Nowy szczep bakterii mlekowych Lactobacillus brevis PL214504B1 (pl)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL391623A PL214504B1 (pl) 2010-06-25 2010-06-25 Nowy szczep bakterii mlekowych Lactobacillus brevis

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL391623A PL214504B1 (pl) 2010-06-25 2010-06-25 Nowy szczep bakterii mlekowych Lactobacillus brevis

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL391623A1 PL391623A1 (pl) 2012-01-02
PL214504B1 true PL214504B1 (pl) 2013-08-30

Family

ID=45510025

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL391623A PL214504B1 (pl) 2010-06-25 2010-06-25 Nowy szczep bakterii mlekowych Lactobacillus brevis

Country Status (1)

Country Link
PL (1) PL214504B1 (pl)

Also Published As

Publication number Publication date
PL391623A1 (pl) 2012-01-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Wu et al. Isolation and preliminary probiotic selection of lactobacilli from koumiss in Inner Mongolia
Lee et al. Isolation of lactic acid bacteria with probiotic potentials from kimchi, traditional Korean fermented vegetable
Nath et al. In vitro screening of probiotic properties of Lactobacillus plantarum isolated from fermented milk product
Rönkä et al. Probiotic and milk technological properties of Lactobacillus brevis
RU2501850C2 (ru) Штамм lactobacillus paracasei subspecies paracasei, обладающий антимикробными и иммуномодулирующими свойствами, и пищевой продукт на его основе
CN103189499B (zh) 乳酸菌和/或双歧杆菌的存活能力提高剂
EP1743042B1 (en) Lactic acid bacteria strains exhibiting probiotic properties and compositions comprising the same
Darsanaki et al. Antimicrobial activities of Lactobacillus strains isolated from fresh vegetables
Sakai et al. M-RTLV agar, a novel selective medium to distinguish Lactobacillus casei and Lactobacillus paracasei from Lactobacillus rhamnosus
CN102686112A (zh) 制造益生菌制剂的乳酸细菌的新颖菌株和其组合
Barakat et al. Identification and probiotic characteristics of Lactobacillus strains isolated from traditional Domiati cheese
Kask et al. Physiological properties of Lactobacillus paracasei, L. danicus and L. curvatus strains isolated from Estonian semi-hard cheese
Negm Classification, antimicrobial potential, industrial applications and probiotic capability of lactic acid bacteria: A review article
RU2579907C2 (ru) Применение устойчивых к низину мутантов для снижения пост-окисления пищевых продуктов
KR101696670B1 (ko) 내산성, 내담즙성 및 세포 부착능이 우수한 락토바실러스 플랜타럼 llp5193, 및 이를 유효성분으로 포함하는 제품
PL214504B1 (pl) Nowy szczep bakterii mlekowych Lactobacillus brevis
Nnawuihe et al. Characterization and probiotic potentials of lactic acid bacteria isolated from ingesta of selected ruminants
TW201947034A (zh) 高存活性微生物乾燥菌體之製造方法
Khaleel et al. Isolation and Identification of Enterococcus Faecium from Locally (Mukra) and Study some of their Morphological and Biochemical Properties
Mokhbi et al. Selection of Lactobacillus plantarum strains for their use as starter cultures in Algerian olive fermentations
PL233263B1 (pl) Szczep bakterii mlekowych Lactobacillus reuteri
Temirova Antibiotic resistance and probiotic properties of lactic acid bacteria isolated from camel milk and shubat
Ayad et al. Stimulating the Viability of Bifidobacterium spp. in Synbiotic Fermented Milk by Co-culturing with Lactobacillus paracasei 441 and Inulin
Khan et al. Probiotic Potential and Stress Tolerance in Lactobacillus MU1008 Isolated from Chilled Yogurt Samples of Majmaah
Nataraj et al. Scheme of Isolation and Characterization of Pure Lactic Acid Bacteria and Probiotics with Their In-Vitro Safety Assessment Protocols